SK281433B6 - 5-heterocyklo-1,5-benzodiazepínové deriváty, spôsob ich výroby, farmaceutický prostriedok s ich obsahom a ich použitie - Google Patents

Abstract

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorom X znamená H, -CF3, alkyl, alkyltioskupinu, -O-alkyl alebo atóm halogénu, R1 znamená skupinu všeobecného vzorca (II) alebo -NR4R5, R2 znamená heterocyklický zvyšok viazaný v polohe 2, fenyl, prípadne mono- alebo disubstituovaný, pyridín alebo pyridinyl, prípadne mono- alebo disubstituovaný, NHR11, R3 znamená heterocyklickú skupinu viazanú na zvyšok molekuly cez atóm uhlíka v kruhu a ich fyziologicky prijateľné soli a solváty, ktoré majú agonistickú účinnosť na receptoroch CCK-A a je možné nimi dosiahnuť moduláciu účinku gastrínu a cholecystokinínu u cicavcov. Ďalej sú opísané farmaceutické prostriedky s ich obsahom a ich použitie na prípravu farmaceutických prostriedkov na liečenie stavov, pri ktorých je potrebné dosiahnuť moduláciu účinkov gastrínu alebo CCK.ŕ

Description

Vynález sa týka 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínových derivátov, ktoré majú agonistickú účinnosť na CCK-A receptoroch a umožňujú moduláciu účinku gastrínu a cholecystokinínu CCK u cicavcov. Vynález sa týka aj spôsobu výroby týchto látok a farmaceutických prostriedkov, ktoré tieto látky obsahujú.

Doterajší stav techniky

Cholecystokiníny CCK a gastrín sú štruktúrne príbuzné peptidy, ktoré sa vyskytujú v tkanive žalúdka, čriev a tiež centrálneho nervového systému. Cholecystokiníny zahŕňajú CCK-33, neuropeptid s obsahom 33 zvyškov aminokyselín v jeho pôvodne izolovanej forme, ktorou je karboxyterminálny oktapeptid CCK-8, ktorý je okrem toho tiež prirodzene sa vyskytujúcim neuropeptidom, a ďalej uvedené formy s obsahom 39 a 12 aminokyselín. Gastrín sa vyskytuje vo forme s obsahom 34, 17 a 14 zvyškov aminokyselín, pričom najkratším účinným reťazcom je C-terminálny tetrapeptid, Trp-Met-Asp-Phe-NH₂, CCK-4, ide o štruktúru, ktorá je prítomná tak v CCK, ako aj v gastríne.

CCK a gastrín sú gastrointestinálne hormóny a nervové prenášače v centrálnom a periférnom systéme, svoju biologickú úlohu uskutočňujú väzbou na príslušné receptory uložené na rôznych miestach celého organizmu. Existujú aspoň dva podtypy receptorov pre cholecystokiníny, ktoré sú označované CCK-A a CCK-B a oba tieto typy je možné nájsť v periférnom a centrálnom nervovom systéme.

Receptor CCK-A, bežne označovaný ako receptor periférneho typu, sa primáme nachádza v podžalúdkovej žľaze, žlčníku, tenkom čreve, vo zvieračoch pylora a v aferentných nervových vláknach vagu. Tento typ receptora je však možné nájsť aj v určitých definovaných oblastiach mozgu, kde slúži na produkciu rôznych typických účinkov centrálneho nervového systému. Vzhľadom na schopnosť CCK-8 a selektívnych antagonistov receptorov A potlačiť príjem potravy u niektorých živočíšnych druhov, boli vyvíjané veľké snahy pripraviť nové látky pôsobiace agonisticky uvedeným spôsobom v nádeji, že tieto látky bude možné použiť ako anorektiká.

Receptory CCK-B alebo gastrínu je možné nájsť v periférnych neurónoch, v hladkých svaloch a v sliznici tráviacej sústavy, najmä v bunkách stien tráviacej sústavy a v bunkách ECL, Dav riadiacich bunkách. Receptory typu CCK-B tiež prevažujú v mozgovom tkanive a všeobecne sa uznáva ich úloha pri riadení vzniku a potlačení úzkostných stavov, pri prebudení a tiež ako reakcia na pôsobenie neuroleptických látok.

V US patentovom spise č. 4 988 692 (Gasc a ďalší) sa opisuje skupina 3-acylamino-l-alkyl-5-fenyl-l,5-benzodiazepínových derivátov, ktoré pôsobia ako látky antagonizujúce cholecystokinín a sú schopné zvrátiť alebo blokovať účinky uvedených endogénnych hormónov na ich receptoroch.

US 4 490 304 a PCT patentové prihlášky WO 90/06937 a WO 91/19733 opisujú peptidové deriváty s agonistickým účinkom na CCK-A. Tieto látky sú uvádzané ako vhodné na riadenie chuti do jedla a na liečenie a/alebo prevenciu porúch tráviaceho systému alebo centrálneho nervového systému u rôznych živočíchov a zvlášť u ľudí.

US 5 187 154 opisuje použitie neuropeptidu cholecystokinínu CCK na riadenie vyprázdňovania žalúdka u chorých so začínajúcou cukrovkou, nezávislou od inzulínu, u ktorých sa žalúdok rýchlo vyprázdni. Okrem toho sa v tomto patentovom spise uvádza, že zlúčeniny, ktoré spomaľujú vyprázdnenie žalúdka, je možné použiť na zmiernenie alebo potlačenie príznakov tohto typu cukrovky. Tieto príznaky zahrnujú zvýšenú koncentráciu glukózy a inzulínu v krvi, zníženú vnímavosť tkanív na inzulín, malú odolnosť proti infekcii a straty cukru v moči, uvedené látky môžu tiež udržať vyprázdnenie žalúdka na normálnych hodnotách.

Teraz bolo zistené, že nová skupina 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínových derivátov s agonistickým účinkom na receptor CCK-A môže upravovať pôsobenie hormónu gastrínu a cholecystokinínu u cicavcov. Niektoré z týchto látok majú aj antagonistický účinok na receptory CCK-B.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoria 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca (I)

a ich fyziologicky prijateľné soli a solváty, v ktorých X znamená atóm vodíka, trifluórmetyl, alkyl, alkyltioskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo atóm halogénu,

R¹ znamená skupinu všeobecného vzorca (II) alebo -NR⁴R^S

R² znamená

1. heterocyklický zvyšok viazaný v polohe 2, ktorý sa volí zo skupiny: pyrolový, tetrahydropyrolový, indolový, benzofuránový, tiofénový, benzotiofénový, indolínový, chinolínový alebo 4-oxobenzopyránový zvyšok, pričom pyrolový, tetrahydropyrolový, indolový alebo indolínový zvyšok sú prípadne substituované na dusíkovom atóme kruhu skupinou R⁸ v ďalej uvedenom význame a indolový, indolínový, chinolínový, benzofuránový, benzotiofénový alebo 4-oxobenzopyránový zvyšok sú prípadne substituované na benzénovom kruhu skupinou R⁹ v ďalej uvedenom význame alebo

2. fenyl, prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi nezávisle volenými zo skupiny atóm halogénu, hydroxyskupina, kyanoskupina, karboxyskupina, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -O-(CH₂C₆H₅), -COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, aminoskupina, dimetylaminoskupina, -NHR¹⁰, 1-pyrolidinyl alebo tetrazolyl, alebo

3. pyridín alebo pyridinyl, prípadne nezávisle monoalebo disubstituovaný substituentmi zo skupiny atóm halogénu, metyl, hydroxyskupina, nitroskupina, kyanoskupina, karboxyskupina, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -O(CH₂C₆H₅), -COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, aminoskupina alebo dimetylaminoskupina, alebo

4. NHR¹¹, kde R¹¹ má ďalej uvedený význam alebo znamená 7-indazolyl, obsahujúci na dusíkovom atóme v polohe 1 skupinu R¹⁰,

R³ znamená heterocyklickú skupinu viazanú na zvyšok molekuly cez atóm uhlíka v kruhu a volenú zo skupiny pyridyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, pyrazinyl, furanyl, tiofenyl, pyrolyl, oxazolyl, tiazolyl, imidazolyl. pyrazolyl, izoxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiazolyl, tiadiazolyl, pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl alebo tiomorfolinyl, tieto heterocyklické skupiny sú prípadne substituované až troma rovnakými alebo rôznymi substituentmi zo skupiny atóm halogénu, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, nitroskupina, karboxyskupina, alkoxykarbonyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, alkoxyskupina alebo alkyltioskupina vždy s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoskupina, alkylaminoskupina alebo dialkylaminoskupina vždy s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylových častiach,

R⁴ nezávisle znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 6 atómami uhlíka, fenyl, -(CH₂)_PCN alebo -(CH₂)_pCOO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti a

R⁵ nezávisle znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 6 atómami uhlíka, benzyl, fenyl, pripadne nezávisle substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi zo skupiny alkyl s 1 až 3 atómami uhlíka, prípadne substituovaným jedným alebo väčším počtom atómov fluóru, kyanoskupinou, hydroxyskupinou, dimetylaminoskupinou, O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -O(CH₂C6H₅), -NH-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -N(alkyl)₂ s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrolidinyl, morfolinyl alebo atóm halogénu alebo

R⁴ znamená alkyl s 1 až 2 atómami uhlíka a

R⁵ znamená fenyl substituovaný v polohe 2 alebo 4 atómom chlóru, metylovou skupinou, metoxyskupinou alebo metoxykarbonylovou skupinou,

R⁶ znamená atóm vodíka alebo metyl,

R⁷ znamená atóm vodíka, hydroxyskupinu, atóm fluóru, dimetylaminoskupinu, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo skupinu -O(CH₂C₆H₅),

R⁸ znamená skupinu -(CH₂)_bCOOH,

R⁹ znamená metyl, atóm chlóru, nitroskupinu, hydroxyskupinu, metoxyskupinu alebo skupinu -NHR¹⁰,

R¹⁰ znamená atóm vodíka, acetyl, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -SO₃H, -SO₂CH₃, -SO₂CF₃ alebo -SO₂C₆H_s, alebo alkoxykarbonyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti,

R¹¹ znamená fenyl, prípadne nezávisle mono- alebo disubstituovaný substituentmi zo skupiny atóm fluóru, trifluórmetoxyskupina, alkyltioskupina s 1 až 4 atómami uhlíka, -(CH2)cCOOH, -(CH2)cCOO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH2)cSCH3, -(CH2)cSOCH3, -(CH2)cSO2CH3, -(CH2)cCONH2, -SCH2COOH, -CONH(SO2CH3), -CONH(SO2CF3), -(CH2)cN(alkyl)2 s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH2)cNH(SO2CF3), -(CH2)cN-(SO2CF3)-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH2)cSO2NHCO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH2)cSO2N-alkyl-CO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v každej alkylovej časti, -(CH2)cCONHSO2-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH2)cC0N-alkyl-S02-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v každej alkylovej časti, -(CH2)cOR¹²-(CH2)_cNHR¹⁰ alebo fenyl, monosubstituovaný substituentom zo skupiny -(CH₂)_c-tetrazolyl, -(CH₂)_c-karboxamidotetrazolyl alebo -(CH₂)_c-pyrolidinyl, alebo znamená R¹¹ pyridín alebo pyridinyl, prípadne nezávisle mono- alebo disubstituované substituentmi zo skupiny atóm halogénu, metyl, hydroxyskupina, nitroskupina, kyanoskupina, karboxyskupina, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoskupina, dimetylaminoskupina alebo -NHR¹⁰,

R¹² znamená atóm vodíka, alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, -CH₂C₆H₅, -CH₂COOH, -CH₂CONH₂, -CH₂CONH-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -CH₂CON(alkyl)₂ s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo niektorou zo skupín /-Λ „

-(CH.) CO-N O alebo -(Ciy.CO-N N-R z znamená celé číslo 1 alebo 2, n znamená celé číslo 1 alebo 2, p znamená celé číslo 1 až 4, b znamená celé číslo 0 až 3 a c znamená celé číslo 0 alebo 1.

V prípade, že R¹ znamená skupinu všeobecného vzorca (II), zahŕňajú príklady týchto skupín skupiny, v ktorých R⁶ znamená atóm vodíka a zvlášť metyl, R⁷ znamená atóm vodíka, hydroxyskupinu, metoxyskupinu alebo atóm fluóru an= 1.

V prípade, že R¹ znamená skupinu -NR⁴R⁵, zahŕňajú príklady týchto skupín také skupiny, v ktorých R⁴ znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, ako propyl alebo izopropyl, ďalej cyklohexyl alebo fenyl a R⁵ znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, benzyl alebo fenyl, prípadne substituovaný v polohe para- hydroxyskupinou, dimetylaminoskupinou, metoxyskupinou, trifluórmetylovou skupinou, atómom fluóru, pyrolidínovou alebo morfolínovou skupinou. Zvlášť výhodné skupiny vo význame R¹ sú skupiny, v ktorých R⁴ znamená propyl a zvlášť izopropyl a R⁵ znamená fenyl alebo fenyl substituovaný v polohe para hydroxyskupinou, metoxyskupinou, dimetylaminoskupinou, atómom fluóru alebo morfolínovou skupinou.

Príkladom zvlášť výhodných skupín R¹ môžu byť také skupiny, v ktorých R¹ znamená skupiny všeobecného vzorca (II), v ktorom R⁶ znamená metyl, n = 1 a R⁷ znamená atóm vodíka, hydroxyskupinu, atóm fluóru alebo metoxyskupinu, alebo R¹ znamená skupinu -NR⁴R⁵, v ktorej R⁴ znamená propyl alebo izopropyl, a R⁵ znamená fenyl, prípadne substituovaný v polohe para hydroxyskupinou, metoxyskupinou, atómom fluóru, dimetylaminoskupinou, pyrolidínovou skupinou alebo morfolínovou skupinou. V zvlášť výhodnom prípade R⁴ znamená izopropyl a R⁵ znamená 4-metoxyfenyl.

V prípade, že R² znamená indolovú, indolínovú, benzofuránovú, benzotiofénovú, chinolínovú alebo 4-oxobenzopyránovú skupinu, je prípadným substituentom R’ výhodne skupina, ktorá sa volí zo skupiny vodík, metyl, metoxyskupina, hydroxyskupina, nitroskupina alebo aminoskupina, a prípadným substituentom R⁸ na atóme dusíka môže byť skupina -CH₂CO₂H.

V prípade, že R² znamená prípadne substituovanú fenylovú skupinu, môže ísť o fenyl, prípadne substituovaný jednou alebo dvoma rovnakými substituentmi zo skupiny atóm chlóru alebo fluóru, aminoskupina, hydroxyskupina alebo karboxylová skupina.

V prípade, že R² znamená skupinu -NHR¹¹, môže R¹¹ znamenať fenyl (prípadne substituovaný atómom fluóru, hydroxyskupinou, aminoskupinou, dimetylaminoskupinou, trifluórmetylsulfonylaminoskupinou, alkoxykarbonylovou skupinou s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, 1H-tetrazolyl-5-ylovou skupinou, acetylaminoskupinou alebo skupinou -OR¹², kde R¹² znamená vodík, metyl, benzyl,

SK 281433 Β6

-ch₂co₂h, -ch₂conh₂, -ch₂coonhch₃, -CH_zCON(CH₃)₂, alebo niektorú zo skupín

CHjCON r~\

CH/tON' ^NH alebo

alebo 7-indazolylovú skupinu, v ktorej substituentom R¹⁰ na dusíkovom atóme v polohe 1 je vodík.

V prípade, že R¹¹ znamená monosubstituovanú fenylovú skupinu, nachádza sa substituent výhodne v polohe metá.

Príkladom zvlášť výhodných skupín R² sú indolová, benzoíúránová, tiofénová, benzotiofénová, indolínová, chinolínová, 4-oxobenzopyránová skupina a prípadne substituovaná fenylová skupina alebo skupina NHR¹¹. R² sa výhodne volí zo skupiny indolínová, indolová, benzofúránová skupina, prípadne substituovaná fenylová skupina alebo skupina -NHR¹¹, zvlášť výhodným významom pre R² je indolová skupina, prípadne substituovaný fenyl alebo skupina-NHR¹¹.

V prípade, že R³ znamená pyridyl, sú vhodnými skupinami napríklad 2-pyridyl, 3-pyridyl a 4-pyridyl.

V prípade, že R³ znamená pyrimidinyl, sú vhodnými skupinami napríklad 2-pyrimidinyl alebo 5-pyrimidinyl.

V prípade, že R³ znamená pyrazolylovú skupinu, je vhodnou skupinou napríklad l,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yL

Ako príklady vhodných skupín R je možné uviesť pyridyl, ako 2-pyridyl, 3-pyridyl a 4-pyridyl, pyrimidinyl, ako 2-pyrimidinyl alebo 5-pyrimidinyl a tiež 1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl.

Zvlášť výhodnú skupinu zlúčenín podľa vynálezu tvoria zlúčeniny, v ktorých R¹ znamená skupinu -NH⁴R⁵, v ktorej R⁴ znamená propyl alebo izopropyl a R⁵ je fenyl, prípadne substituovaný v polohe para hydroxyskupinou, metoxyskupinou, fluórom, dimetylaminoskupinou alebo morfolínovou skupinou, R² znamená fenyl, prípadne nezávisle substituovaný jednou alebo dvoma skupinami zo skupiny chlór, fluór, hydroxyskupina, aminoskupina alebo karboxyskupina, ďalej skupinu -NHR¹¹, v ktorej R¹¹ znamená fenyl (prípadne substituovaný aminoskupinou, dimetylaminoskupinou, trifluórmetylovou skupinou, sulfonylaminoskupinou, karboxyskupinou, lH-tetrazol-5-ylovou skupinou, acetylaminoskupinou alebo skupinou -OR¹², v ktorej R¹² znamená atóm vodíka, metyl, benzyl, -CH₂CO₂H, -CH₂CONH₂, -CH₂CONHCH₃, -CH₂CON(CH₃)_2j alebo niektorú zo skupín

CHjCON O

CH.CON NH alebo

CH^CON^ pričom substituent sa výhodne nachádza v polohe metal alebo indolovú skupinu, v ktorej je atóm dusíka, prípadne substituovaný skupinou -CH₂CO₂H a benzénový kruh je prípadne substituovaný atómom chlóru, metylovou skupi nou, metoxyskupinou, nitroskupinou, hydroxyskupinou alebo aminoskupinou, R³ znamená pyridyl, napríklad 2-pyridyl, 3-pyridyl a 4-pyridyl, pyrimidinyl, ako 2-pyrimidinyl alebo 5-pyrimidinyl alebo l,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl a X znamená atóm fluóru alebo atóm vodíka.

Zvlášť zaujímavú skupinu zlúčenín podľa vynálezu tvoria látky s vysokou a selektívnou účinnosťou na receptor CCK-A, k takejto výnimočnej účinnosti dochádza v prípade, že R² znamená indolovú skupinu. Výhodnou skupinou látok v tomto zmysle sú také zlúčeniny, v ktorých je indolová skupina substituovaná na atóme dusíka skupinou -CH₂CO₂H alebo ešte výhodnejšie nie je atóm dusíka substituovaný a benzénový kruh indolovej skupiny je prípadne substituovaný atómom chlóru, metylovou skupinou, metoxyskupinou, nitroskupinou, hydroxyskupinou alebo aminoskupinou. V tejto skupine látok sú zvlášť vhodné tie zlúčeniny, v ktorých R⁴ znamená izopropyl, R⁵ znamená p-metoxyfenyl a R³ znamená pyridyl, pyrimidinyl alebo l,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl a zvlášť 3-pyridyl a X znamená atóm vodíka.

Výhodné sú najmä nasledujúce zlúčeniny:

(1 -[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl)amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej, (1 -[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyI]-2,4-dioxo-5-pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl)amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovcj, 2-[2,4-dioxo-3-(3-fenylureido)-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid, ako aj enantioméry týchto zlúčenín.

Zvlášť výhodnou zlúčeninou podľa vynálezu je (l-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl)amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej a jeho enantioméry.

Pod pojmom „alkyl“ sa zvyčajne rozumejú alkylové reťazce s priamym alebo rozvetveným reťazcom, napríklad alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka zahŕňa metyl, etyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl, terc.butyl, n-pentyl atď.

Cykloalkyl znamená všetky alicyklické izoméry zodpovedajúcej alkylovej skupiny. Napríklad alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka zahŕňa eyklopropyl, cyklopentyl a cyklohexyl.

Pod pojmom „atóm halogénu“ sa rozumejú atómy fluóru, chlóru, brómu alebo jódu.

Tetrazolová skupina alebo časť takejto skupiny znamená (lH)-tetrazol-5-ylovú skupinu a jej tautoméry.

Je zrejmé, že zlúčeniny všeobecného vzorca (I) obsahujú stredy priestorovej izometrie. Vynález preto zahŕňa všetky existujúce stereoizoméry a geometrické izoméry zlúčenín všeobecného vzorca (I) a to nielen racemické zlúčeniny, ale aj jednotlivé opticky aktívne izoméry. V prípade, že má byť získaná zlúčenina všeobecného vzorca (I) vo forme jediného enantioméru, je možné rozdeliť výsledný produkt alebo je možné uskutočniť stereošpecifickú syntézu s použitím čistého izoméru východiskovej látky alebo akéhokoľvek vhodného medziproduktu. Delenie výsledného produktu, medziproduktu alebo východiskovej látky je možné uskutočniť akýmkoľvek vhodným spôsobom, napríklad podľa publikácie Stereochemistry of Carbon Compounds, E. L. Eliel, McGraw Hill, 1962 alebo Tablets of Resolving Agents, S. H. Wilen. V tých prípadoch, keď vznikajú alebo môžu vzniknúť tautoméry zlúčenín všeobecného

SK 281433 Β6 vzorca (I), zahŕňa vynález všetky tautoméme formy týchto látok.

Je zrejmé, že zlúčeniny podľa vynálezu je možné na liečebné účely použiť vo forme farmaceutický prijateľných soli alebo solvátov. Fyziologicky prijateľné soli zlúčenín všeobecného vzorca (I) zahŕňa bežné soli vytvorené s farmaceutický prijateľnými anorganickými alebo organickými kyselinami a tiež kvartéme amóniové soli. Ako špecifické príklady výhodných solí je možné uviesť soli s kyselinou chlorovodíkovou, bromovodíkovou, sírovou, fosforečnou, dusičnou, chloristou, fúmarovou, octovou, propiónovou, jantárovou, glykolovou, mravčou, mliečnou, maleínovou, vínnou, citrónovou, pamoovou, jablčnou, hydroxymaleínovou, fenyloctovou, glutámovou, benzoovou, salicylovou, fumarovou, toluénsulfónovou, metánsulfónovou, naftalén-2-sulfónovou, benzénsulfónovou a podobne. Ďalšie kyseliny, ako kyselinu šťaveľovú, aj keď nie sú prijateľné z farmaceutického hľadiska, je možné použiť na prípravu solí, ktoré sú vhodné ako medziprodukty na výrobu zlúčenín podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľných solí. Všetky prípady, v ktorých sa uvádza zlúčenina podľa vynálezu, zahŕňajú, v ďalšom priebehu prihlášky, vždy voľné látky, ako aj farmaceutický prijateľné soli a solváty zlúčenín všeobecného vzorca (I).

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) majú agonistický účinok na receptory CCK-A a je možné ich považovať za účinné alebo čiastočne účinné agonisty cholecystokinínu v tom zmysle, že sú to látky schopné sa viazať na receptory CCK-A a buď úplne alebo čiastočne stimulovať sťahy žlčníka a/alebo znížiť príjem potravy u živočíchov.

Pokiaľ ide o agonistický účinok na receptory CCK-A, je možné zlúčeniny podľa vynálezu považovať za užitočné anorektické látky, ktoré sú vhodné na liečenie obezity a príbuzných alebo súvisiacich patologických stavov, ako sú cukrovka alebo zvýšený krvný tlak. Okrem toho znamenajú zlúčeniny podľa vynálezu nový prístup pri vyvolávaní pocitu nasýtenia, pri regulácii chuti do jedla a úprave množstva prijímanej potravy u cicavcov, zvlášť u ľudí pri liečení obezity, kde môžu počas dlhšieho času zaistiť udržanie úbytku hmotnosti. Zlúčeniny je možné použiť aj pri cukrovke nezávislej od inzulínu, ktorá je spojená s rýchlym vyprázdnením žalúdka po požití potravy.

Okrem toho niektoré zlúčeniny podľa vynálezu môžu mať antagonistický a špecifický účinok na receptoroch CCK-B a receptoroch pre gastrín, ako je možné dokázať inhibíciou kontrakcie izolovaného pozdĺžneho svalu ilea morčaťa po stimulácii CCK-4 a tiež inhibíciou pentagastrinom stimulovanej sekrécie kyseliny na izolovanom prúžku žalúdočnej sliznice potkana spôsobom podľa publikácie M. Patel a C. F. Spraggs, Br. J. Pharmac., 1992, 106, 275 až 282 a J. J. Reeves a R. Stables, Br. J. Pharmac., 1985, 86, 677 až 684.

Relatívnu afinitu zlúčenín podľa vynálezu pre receptory CCK-A a CCK-B je možné určiť použitím známych postupov, napríklad podľa publikácie Fornos a ďalší, J. Pharmacol, Exp. Ther., 1992, 261, 1056 až 1063.

Schopnosť zlúčenín podľa vynálezu spôsobiť inhibíciu sekrécie žalúdočnej kyseliny, napríklad po stimulácii tejto sekrécie pentagastrínom je možné dokázať na bdelých potkanoch so zavedenou žalúdočnou píšťalou použitím postupu podľa Hedges a Parsons, Joumal of Physiology, 1977, 267,191 až 194.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) spôsobujú inhibíciu alebo oneskorenie vyprázdňovania žalúdka, čo je možné dokázať štandardnými skúškami. Postupuje sa napríklad tak, že sa potkanom, ktoré boli chované nalačno 18 hodín, vopred podá intraperitoneálne skúmaná látka, napríklad minút pred podaním metylcelulózy žalúdočnou sondou. Potrava obsahuje označenie, napríklad fenolovú červeň. Po vopred určenom čase sa v rôznych intervaloch potkany usmrtia a stanoví sa množstvo potravy v žalúdku podľa koncentrácie látky použitej na označenie. Stanovená hodnota sa potom porovnáva s hodnotou u kontrolných zvierat, ktorým nebola podaná žiadna účinná látka.

Bolo dokázané, že zlúčeniny podľa vynálezu majú zvlášť výhodný profil účinnosti, to znamená dobrú biologickú dostupnosť pri perorálnom podaní a dobrú rozpustnosť vo vode.

Podstatu vynálezu tvoria teda aj zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo solváty na použitie na liečebné účely, zvlášť v ľudskom lekárstve.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) a ich farmaceutický prijateľné soli alebo solváty je možné zvlášť použiť na výrobu farmaceutických prostriedkov určených na liečenie stavov, pri ktorých je možné predpokladať priaznivý účinok pri modifikácii účinku CCK a/alebo účinku gastrínu.

Tieto ťarmaceutické prostriedky je teda možné použiť na liečenie cicavcov v uvedených prípadoch, podáva sa liečebne účinné množstvo zlúčenín všeobecného vzorca (I) alebo ich farmaceutický prijateľných solí alebo solvátov.

Je zrejmé, že pokiaľ sa uvádza použiteľnosť zlúčenín na liečebné účely, je tieto látky možné rovnako dobre použiť na prevenciu a na liečenie už vyvinutých stavov. Množstvo zlúčenín podľa vynálezu, ktoré je potrebné použiť pri liečení, bude závisieť od povahy chorobného stavu, od veku a od stavu chorého, konečné množstvo vždy určí ošetrujúci lekár alebo veterinárny lekár. V typických prípadoch sa budú dávky pre dospelého človeka pohybovať v rozmedzí 0,02 až 5000, napríklad 1 až 1500 mg denne. Túto dávkuje možné podať vo forme jedinej dávky alebo rozdelene, vo vhodných intervaloch, napríklad vo forme dvoch, troch, štyroch alebo ešte väčšieho počtu čiastkových dávok v priebehu dňa.

Zlúčeniny podľa vynálezu je síce možné podávať v čistej forme, je však výhodné ich použiť ako účinné zložky farmaceutických prostriedkov. Podstatu vynálezu tvoria aj farmaceutické prostriedky, ktoré obsahujú zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ spolu s farmaceutický prijateľným nosičom a prípadne s ďalšou účinnou zložkou. Nosič musí byť prijateľný v tom zmysle, že je kompatibilný s ostatnými zložkami farmaceutického prostriedku a súčasne je celkom neškodný pre chorého.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu zahŕňajú prostriedky špecificky upravené na podanie perorálne, na podanie ústnou sliznicou, na parenterálne podanie, podanie vo forme implantátu alebo na rektálne podanie, výhodne sa prostriedky podľa vynálezu podávajú perorálne. Na podanie ústnou sliznicou môžu mať prostriedky podľa vynálezu formu tabliet alebo kosoštvorčekových tabliet vyrobených zvyčajným spôsobom. Tablety a kapsuly, ktoré sú určené na perorálne podanie, môžu obsahovať zvyčajné pomocné látky, ako napríklad spojivá, ako sirup, akáciovú gumu, želatínu, sorbitol, tragakant, povarený škrob alebo polyvinylpyrolidón, ďalej plnidlá, ako sú laktóza, sacharóza, mikrokryštalická celulóza, kukuričný škrob, fosforečnan vápenatý alebo sorbitol, klzné látky, napríklad stearan horečnatý, kyselinu stearovú, mastenec, polyetylénglykol alebo oxid kremičitý, dezintegračné látky, ako zemiakový škrob alebo sodnú soľ glykolátu škrobu alebo zmáčadlá, ako laurylsíran sodný. Tablety môžu byť tiež vybavené povlakom s použitím známych postupov.

Podľa ďalšieho všeobecného postupu B je možné pripraviť zlúčeninu všeobecného vzorca (I) reakciou medziproduktu všeobecného vzorca (V)

kde

Y znamená skupinu -NCO, -NHCOC1 alebo -NHCOR, kde R znamená fenoxyskupinu substituovanú nitroskupinou alebo 1-imidazolovú skupinu a s amínom všeobecného vzorca (VI) h₂n-r^!1 (VI) a prípadne v prítomnosti bázy, napríklad terciámeho aminu, ako trietylamínu.

Reakcia dobre prebieha vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad v halogénovanom uhľovodíku, ako dichlórmetáne alebo v éteri, ako tetrahydroforáne alebo tiež v amide, ako Ν,Ν-dimetylformamide, prípadne pri teplote miestnosti až teplote varu použitého rozpúšťadla pod spätným chladičom.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (V) sa výhodne pripravujú in situ z aminu všeobecného vzorca (III).

V jednom zo zvláštnych uskutočnení postupu B, v ktorom Y znamená skupinu -NHCOR, kde R’ znamená 1-imidazolovú skupinu, je možné imidazolid vzorca (V) vytvoriť in situ. V tomto prípade sa amín všeobecného vzorca (VI) nechá reagovať so zlúčeninou všeobecného vzorca (III)

v prítomnosti karbonylimidazolu za uvedených podmienok.

V prípade postupu B, v ktorom Y znamená skupinu -NHCOR a R znamená fenoxyskupinu substituovanú nitroskupinou sa reakcia s primárnym amínom vzorca (VI) výhodne vykonáva v prítomnosti bázy, napríklad terciámeho aminu, ako trietylamínu.

V prípade postupu B, v ktorom Y znamená izokyanátovú skupinu -N=C=O sa reakcia s primárnym amínom všeobecného vzorca (VI) výhodne vykonáva v aprotickom rozpúšťadle, napríklad v halogénovanom uhľovodíku, ako metylénchloride. Izokyanát sa výhodne vytvára in situ pred pridaním primárneho aminu všeobecného vzorca (VI).

Zlúčeniny všeobecného vzorca (V), v ktorých R“ znamená prípadne substituovanú fenoxyskupinu, je možné pripraviť z primárneho aminu všeobecného vzorca (III) reakciou so zodpovedajúcim nitrosubstituovaným fenylchlórmravčanom v prítomnosti bázy, napríklad pyridínu. Reakciu je možné uskutočniť v rozpúšťadle, napríklad halogé novanom uhľovodíku, ako dichlórmetáne pri teplote v rozmedzí 0 až 50 °C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (V), v ktorom R znamená 1-imidazolovú skupinu, je možné pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (III) s karbonylimidazolom v prítomnosti vhodného rozpúšťadla, napríklad halogénovaného uhľovodíka, ako dichlórmetánu alebo éteru, ako tetrahydrofuránu pri teplote 0 až 80 °C, bežne pri teplote miestnosti.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (V), v ktorom Y znamená izokyanátovú skupinu vzorca -N=C=O alebo karbamoylchlorid -NHCOC1 je možné pripraviť z primárneho amínu vzorca (III) reakciou s fosgénom COC1₂ alebo trifosgénom vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad v metylénchloride.

Podľa ďalšieho všeobecného postupu C je možné získať zlúčeniny všeobecného vzorca (I) tiež reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (VII)

s halogénacetamidom všeobecného vzorca (VIII)

R'COCH₂hal (VIII), kde hal znamená atóm chlóru alebo brómu.

Reakcia ľahko prebieha tak, že sa na zlúčeninu všeobecného vzorca (VII) pôsobí silnou bázou, napríklad hydridom sodíka v polárnom aprotickom rozpúšťadle, napríklad Ν,Ν-dimetylformamide s následnou reakciou s acetylhalogenidom vzorca (VIII).

Acetylhalogenid vzorca (VIII) je možné pripraviť reakciou aminu všeobecného vzorca R‘-H so zodpovedajúcim halogénacetylbromidom v dichlórmetáne pri teplote 0 °C s použitím vhodnej bázy, napríklad trietylamínu.

Amíny všeobecného vzorca R’-H, v ktorých R¹ znamená skupinu -NR⁴R⁵ je možné pripraviť redukčnou alkyláciou aminu vzorca H₂N-R⁵ pôsobením príslušného aldehydu alebo ketónu.

Podľa všeobecného postupu D je možné pripraviť zlúčeniny všeobecného vzorca (I) tiež reakciou medziproduktu všeobecného vzorca (III) v uvedenom význame s kyselinou všeobecného vzorca (IX)

HOOC - R² (IX).

Reakcia medziproduktov všeobecného vzorca (III) s kyselinou všeobecného vzorca (IX) môže byť vykonávaná v prítomnosti vhodného dehydratačného činidla, napríklad dicyklohexylkarbodimidu DCC, l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridu EDC alebo 4-benzotriazol-1 -yloxytris(dimetylamino)fosfóniumhexafluórfosfátu BOP, zvlášť v prítomnosti vhodného alkoholu N-hydroxysukcínimidu alebo N-hydroxybenztriazolu.

Je tiež možné pripraviť zlúčeniny všeobecného vzorca (I) reakciou medziproduktu vzorca (III) s aktivovaným derivátom kyseliny vzorca (IX), napríklad s chloridom alebo anhydridom kyseliny vrátane zmesových anhydridov.

Výhodným rozpúšťadlom na všeobecný postup D je napríklad Ν,Ν-dimetylformamid alebo dichlórmetán. Výhodné teploty sú v rozmedzí 0 až 60 °C. Výhodné bázy na

SK 281433 Β6 túto reakciu zahŕňajú trietylamín alebo N,N-dimetylaminopyridín, DAMP.

Podľa ďalšieho všeobecného postupu E je možné zlúčeniny podľa vynálezu všeobecného vzorca (I) pripraviť reakciou zlúčenín zodpovedajúcich zlúčeninám všeobecného vzorca (I), v ktorých R³ znamená atóm vodíka s halogenidom R’hal, kde hal je atóm chlóru alebo brómu a R³ znamená skupiny uvedené vo vzorci (I), zvlášť heteroarylovú skupinu, ako pyridyl, pyrimidinyl a podobne. Reakcia sa bežne uskutočňuje v prítomnosti kovovej medi a octanu draselného v rozpúšťadle, napríklad v dimetylsulfoxide alebo Ν,Ν-dimetylformamide a výhodne pri teplote v rozmedzí 25 až 100 °C.

Podľa ďalšieho všeobecného postupu F je možné zlúčeniny podľa vynálezu meniť na iné zlúčeniny podľa vynálezu. Napríklad zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorých R⁸ znamená skupinu (CH2)bCO2H je možné pripraviť reakciou zlúčeniny vzorca (I), v ktorom R⁸ znamená atóm vodíka so zlúčeninou všeobecného vzorca Br(CH2)_bCOOR*, kde R’ je alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v prítomnosti silnej bázy, ako hydridu sodíka s následným odstránením ochrannej skupiny na karboxylovej skupine bežným spôsobom, ako hydrolýzou v kyslom alebo bázickom prostredí.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I), v ktorých R¹¹ znamená fenyl, substituovaný alkoxykarbonylovou skupinou, je možné hydrolyzovať bežným spôsobom, napríklad v kyslom prostredí za vzniku zlúčenín vzorca (I), v ktorých R¹¹ znamená fenyl substituovaný karboxylovou skupinou.

Zlúčeniny vzorca (III) je možné pripraviť redukciou zlúčenín vzorca (X)

COR¹

kde W znamená CH-N₃ alebo C=N-NHPh.

Zlúčeniny vzorca (X), v ktorom W znamená CH-N₃ je možné redukovať na zlúčeniny všeobecného vzorca (111) hydrogenáciou v prítomnosti vhodného katalyzátora, ako 5 až 10 % paládia na nosiči, napríklad na uhlíku alebo uhličitane vápenatom alebo pôsobením oxidu platiničitého. Reakcia ľahko prebieha v prítomnosti rozpúšťadla, napríklad alkanolu ako etanolu, esteru, ako etylacetátu alebo kyseliny octovej.

Zlúčeniny vzorca (X), v ktorom W znamená C=N-NHPh je možné redukovať na zlúčeninu vzorca (III) reakciou so zinkom a kyselinou octovou. Túto reakciu je možné uskutočniť pri teplote v rozmedzí 0 až 50 ’C.

Zlúčeniny vzorca (X), v ktorom W znamená skupinu CHNj je možné pripraviť so zlúčenín všeobecného vzorca (X), v ktorom W znamená CH₂ pôsobením silnej bázy, ako hydridu sodíka, hexametyldisilazidu draselného alebo terc.butoxidu draslíka s následným pôsobením triizopropylbenzénsulfonylazidu alebo di-terc.butoxyaziddikarboxylátu. Reakcia dobre prebieha v rozpúšťadle, napríklad éteri, ako tetrahydrofúráne pri teplote v rozmedzí -78 až 20 ’C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (X), v ktorých W znamená C=N-NHPh alebo CH₂, je možné pripraviť reakciou ortofenyldiamínu vzorca (XI) s chloridom dikyseliny vzorca (XII), kde Q znamená skupinu CH₂ alebo C=NNHPh vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad éteri ako tetrahydrofúráne.

cor¹

CICO^ cico (XII)

Zlúčeniny všeobecného vzorca (XII), v ktorom Q znamená C=NNHPh, je možné pripraviť reakciou kyseliny ketomalónovej s fenylhydrazónom s následnou reakciou s chloridom fosforečným.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (XI) sú známe látky alebo je možné ich pripraviť analogickými postupmi. Napríklad zlúčeniny všeobecného vzorca (XI) je možné pripraviť

Amín všeobecného vzorca (XIII) je možné nechať reagovať so zlúčeninou všeobecného vzorca R'COCH₂hal, kde hal znamená atóm chlóru alebo brómu, prípadne v prítomnosti jodidu sodného v rozpúšťadle, ako N,N-dimetylformamide v prítomnosti bázy, napríklad uhličitanu draselného.

Medziprodukt vzorca (III) je možné pripraviť tiež tak, že sa na medziprodukt vzorca (XIV) pôsobí hydridom sodíka s následnou adíciou acetylhalogenidu vzorca (VIII) vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad Ν,Ν-dimetylformamide pri teplote 0 ’C za vzniku chráneného medziproduktu vzor-

Medziprodukt vzorca (XVI) je možné premeniť na amín vzorca (III) pôsobením bromovodíka v metylénchloride.

Medziprodukt vzorca (XIV) je možné pripraviť z medziproduktu vzorca (XVI) reakciou s benzyloxychlórmravčanom v dichlórmetáne s použitím trietylamínu ako bázy.

Táto reakcia dobre prebieha pri teplote miestnosti.

SK 281433 Β6

NHj (XVI)

Medziprodukt všeobecného vzorca (XVI) je možné pripraviť z fenyléndiamínu vzorca (XIII) nasledujúcim spôsobom.

Reakciou diamínu vzorca (XIII) s p-metoxybenzoylchloridom s následnou redukciou takto vzniknutého amidu pôsobením lítiumalumíniumhydridu sa získa N-chránený

OCH, (XVII)

Reakciou diamínu vzorca (XVII) s chloridom dikyseliny vzorca (XII), v ktorom Q je C=NNHPh s následnou redukciou pôsobením zinku a kyseliny octovej sa získa amín vzorca (XVIII).

Zlúčeniny vzorca (XVIII) je potom možné premeniť na požadovanú zlúčeniny vzorca (XVI) reakciou so zlúčeninou vzorca Ce(NO₂)₆NH4.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (VII) je možné pripraviť zo zlúčenín (XVI) s použitím opísaných všeobecných postupov A, B alebo C.

Zlúčeniny zodpovedajúce zlúčeninám vzorca (I), v ktorých však R³ znamená atóm vodíka, je možné pripraviť zo zodpovedajúceho aminu vzorca (III), v ktorom R³ znamená atóm vodíka s použitím všeobecných postupov A, B a C. Zlúčeniny všeobecného vzorca (III), v ktorom R³ znamená atóm vodíka, je možné pripraviť s použitím uvedených postupov na prípravu zlúčenín všeobecného vzorca (III), v ktoiých R³ znamená heterocyklickú skupinu, ale s použitím medziproduktov, v ktorých R³ znamená p-metoxybenzyl, ktorý je možné odstrániť bežným spôsobom.

To znamená, že reakciou diamínu vzorca (XIX)

s halogénacetamidom vzorca (VIII) sa získa disubstituovaný diamín všeobecného vzorca (XX).

COR¹

Reakciou zlúčeniny vzorca (XX) s chloridom dikarboxylovej kyseliny vzorca (XII), v ktorom Q znamená C=NNHPh s následnou redukciou pôsobením zinku a kyseliny octovej sa získa benzodiazepín všeobecného vzorca (XXI).

COR¹

(XXI)

Reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (XXI) s dusičnanom ceroamónnym sa získa zlúčenina zodpovedajúca zlúčenine vzorca (III), v ktorej R³ je atóm vodíka.

Diamín všeobecného vzorca (XIX) je možné pripraviť reakciou nitrovaného a fluorovaného derivátu vzorca (XXII)

s p-metoxybenzylamínom s následnou redukciou nitroskupiny.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (X), v ktorom W znamená metylénovú skupinu, je možné pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca (XXIII), v ktorom X, z a R¹ majú význam uvedený vo všeobecnom vzorci (I)

(XXIII) s bromidom všeobecného vzorca R³Br, kde R³ má uvedený význam, v prítomnosti práškovej medi a octanu draselného. Reakcia sa výhodne uskutočňuje v polárnom rozpúšťadle, napríklad dimetylformamide za súčasného zahriatia.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (XXIII) je možné pripraviť reakciou diamínu vzorca (XXIV), v ktorom X, z a R¹ majú uvedený význam

SK 281433 Β6

s malonylchloridom podobným spôsobom, aký bol opísaný na prípravu zlúčeniny vzorca (X), v ktorej W znamená CH₂.

Zlúčeniny všeobecného vzorca (I) obsahujú aspoň jeden asymetrický atóm uhlíka, najmä atóm uhlíka diazepínového kruhu, na ktorý je viazaná skupina substituovanej močoviny. Špecifické enantioméry zlúčenín všeobecného vzorca (I) je možné pripraviť delením racemických zlúčenín s použitím bežných postupov, napríklad chirálnej HPLC. Požadovaný enantiomér je tiež možné pripraviť zo zodpovedajúceho enantioméru amínu vzorca (III) s použitím niektorého z uvedených postupov na výrobu zlúčenín vzorca (I) z amínu všeobecného vzorca (III). Enantioméry amínu všeobecného vzorca (III) je možné pripraviť z racemického amínu všeobecného vzorca (II) s použitím bežných postupov, ako sú tvorba soli s vhodnou opticky aktívnou kyselinou alebo preparatívnou chirálnou HPLC.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nasledujúce príklady opisujú výrobu niektorých zlúčenín podľa vynálezu a vysvetľujú využitie postupov A až E. Príklady uskutočnenia vynálezu však nemajú slúžiť na obmedzenie rozsahu vynálezu.

Znaky, skratky a iné všeobecne známe vyjadrenia uvedené v schémach a príkladoch sú v zhode so všeobecne používanými v súčasnej vedeckej literatúre, ako napríklad v „The Joumal of Američan Chemical Society“.

Východiskový materiál je bežne na trhu dostupný, pokiaľ nie je uvedené inak, a používa sa bez ďalšieho čistenia. V príkladoch a v opise vynálezu sú používané tieto skratky: TLC - chromatografia na tenkej vrstve, MeOH - metanol, TFA - kyselina trifluóroctová, THF - tetrahydrofurán, DMSO - dimetylsulfoxid, EtOAC - etylacetát, DCM - dichlórmetán, DMF - dimetylformamid, CDI - 1,1-kaibonyldiimidazol, iBuCF - izobutylchlórmravčan, HOSu - N-hydroxysukcínimid, HOBT - N-hydroxybenzotriazol, EDC - l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid-hydrochlorid,

BOP - chlorid kyseliny bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)-fosfmovej,

BOC - terc.butyloxykarbonyl, DCC - dicyklohexylkarbodiimid, Cbz - benzyloxykarbonyl, DAMP - 4-dimetylaminopyridín.

Teplota je vyjadrená v stupňoch Celzia. Všetky reakcie sa vykonávajú pri teplotách miestnosti, pokiaľ nie je uvedené inak.

'H-NMR spektrum bolo zaznamenané na zariadení Varian VXR-300 alebo Varian Unity-300. Chemické posuny sa vyjadrujú v častiach na milión (ppm, d). Väzbové konštanty sú uvedené v Hz. Štiepenie je označované ako s - singlet, d - dublet, t - triplet, q - kvartet, m - multiplet, b - široký.

Hmotnostné spektrum MS s nízkou rozlišovacou schopnosťou bolo zaznamenané na spektrometroch JOEL JMS-AX5O5HA, JOEL SX-I02 alebo SCIEX-APIiii. Všetky hmotnostné spektrá boli zaznamenané vo forme pozitívnych iónov za súčasnej ionizácie - ESI, chemickej ionizácie - Cl pri náraze elektrónov - EI alebo pri bombardovaní rýchlymi atómami - FAB. Spektrum v infračervenom svetle, IR-spektrum bolo zaznamenané na spektrometri Nicolet 510 FT-IR s použitím kyvety so stenou hrubou 1 mm. Optické otáčanie bolo zaznamenávané s použitím polarimetra Perkin-Elmer 241.

Priebeh všetkých reakcií bol sledovaný chromatografiou na tenkej vrstve s použitím silikónových dosiek 60F-254 s hrúbkou 0,25 mm (E. Merck), na zviditeľnenie výsledku bolo použité ultrafialové svetlo, 7 % roztok p-anizaldehydu kyseliny etanolfosfomolybdénovej. Rýchla chromatografia na stĺpci bola vykonávaná na silikagéli (Merck) s veľkosťou častíc v rozmedzí 230 až 400 mesh.

Produkty boli čistené vysokotlakovou kvapalinovou preparatívnou chromatografiou v reverznej fáze RP-HPLC s použitím zariadenia Waters Model 3000 Delta Prep so stĺpcom C₁₈, 300 A, 15 m, 47 x 300 mm (Delta-pak). Systém rozpúšťadiel:

A: vodný roztok 0,1 % kyseliny trifluóroctovej,

B: 60 % roztok acetonitrilu a 40 % vodný roztok 0,1 % kyseliny trifluóroctovej,

C: acetonitril.

Všetky rozpúšťadlá obsahovali 0,1 % kyselinu trifluóroctovú. Vo všetkých prípadoch sa použijú lineárne gradienty a rýchlosť prietoku je 100 ml/min. (to = 5,0 min). Analytická čistota bola stanovená pomocou RP-HPLC s použitím zariadenia Waters 600E so spektrometrom Waters 990, vybaveným diódou (rozmedzie I bolo 200 až 400 nM). Ako stacionárna fáza bol použitý stĺpec Vydac C₁₈ (5 m,

4,6 x 250 mm). Rýchlosť prietoku bola 1,0 až 1,5 ml/min. (to=2,8 až 3,0 minút). Systém rozpúšťadiel bol opísaný vyššie. Skratka fr označuje čas retencie v minútach (% acetonitrilu za čas).

Príklad 1

2-[2,4-Dioxo-3-(3-fenylureido)-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do roztoku 100 mg 2-(3-amino-2,4-dioxo-5-pyridín-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [ 1,4]-diazepin-1 -yl)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 1 ml metylénchloridu sa pridá roztok 25,6 mg fenylizokyanátu v 1 ml metylénchloridu. Vzniknutá reakčná zmes sa 4 hodiny mieša pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa nechá kryštalizovať z etylacetátu za vzniku 44 mg špinavobielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

'H NMR (300 MHz, CDClj): 1,03 (2 x d, J = 1 Hz, 6H), 3,81 (s, 3H), 4,17 (d, J = 16 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 16 Hz, 1H), 5,0 (sept, J = 7,1 Hz, 1H), 5,40 (d, J = 6,3 Hz, 1H), 6,40 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 6,8 - 7,3 (m, 17H), 7,80 (br, 1H),

8,42 (d, J = 3,9 Hz, 1H).

TLC (10 % MeOH, CH₂C1₂), R_f = 0,53, nvz [MH]⁺ = 593.

Príklad 2 {l-[Izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-benzo[b] [ 1,4]diazepin-3-yl)amid lH-indol-2-karboxylovej kyseliny

SK 281433 Β6

Roztok 276 mg 2-(3-amino-2,4-dioxo-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu, 244 mg BOP, 78 mg N-hydroxybenzotriazolu, 69 mg DMAP a 98 mg kyseliny indol-2-karboxylovej v 1 ml dimetylformamidu sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zriedi 15 ml etylacetátu, dvakrát 15 ml IM vodného roztoku hydroxidu sodného, 20 ml vody a 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad uhličitanom draselným sa vzniknutý zvyšok zahustí vo vákuu za vzniku surového produktu. Čistením RP-HPLC pri elúcii lineárnym gradientom 20 % A, 80 % B až 90 % C (čas retencie 30 minút) vznikne

26,6 mg výslednej zlúčeniny ako bieleho lyofilizovaného materiálu. Čas retencie výslednej zlúčeniny je 21,3 minút. Ή NMR (300 MHz, CDClj): 0,98 (2 x d, J = 7 Hz, 6H), 3,68 (s, 3H), 4,17 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 4,37 (d, J = 16,8 Hz, 1H), 4,87 (sept, J = 6,8 Hz, 1H), 5,40 (d, J = 6,8 Hz, 1H), 6,40 (d, J = 5,3 Hz, 1H), 6,75 - 6,84 (m, 5H), 6,92 - 6,99 (m, 2H), 7,07 (t, J = 7,3 Hz, 1H), 7,09 - 7,2 (m, 4H), 7,24 (t, J = 9,2 Hz, 1H), 7,4 (t, J = 9,1 Hz, 2H), 7,52 (d, J = 7,9 Hz, 1H), 7,72 (m, 2H), 8,38 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 9,19 (s, 1H). m/z [MH⁺] = 617.

Príklad 3 a 4 (+) alebo (-) {l-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Jednotlivé výsledné enantioméry sa získajú absorpciou 100 mg výslednej zlúčeniny príkladu 2 na semipreparatívny Pirkle D-leucín stĺpec a elúciou izokratickým systémom rozpúšťadiel, obsahujúceho 77 % hexánu, 20 % izopropylalkoholu a 3 % acetonitrilu, kde každé rozpúšťadlo obsahuje 0,3 % dietylamínu. Zodpovedajúce frakcie sa oddelia vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozotrie s vodou. Vzniknutá zrazenina sa oddelí filtráciou a suší vo vákuu.

Príklad 3:

chirálne analytický stĺpec Pirkle D-leucín, rýchlosť prietoku 2 ml/min., q = 19,62 min. (100 %), m/z [MH]⁺ = 617.

Príklad 4:

chirálne analytický stĺpec Pirkle D-leucín, rýchlosť prietoku 2 ml/min., tj = 22,797 min. (98 %), m/z [MH]⁺ = 617.

Príklad 5 {1 -[Izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Do roztoku 933 mg (1,97 mmol) 2-(3-amino-2,4-dioxo-5-pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]-diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 20 ml dimetylformamidu sa pri teplote miestnosti a za stáleho miešania postupne pridá 333 mg (2,07 mmol) kyseliny indol-2-karboxylovej, 266 mg (1,97 mmol) N-hydroxybenzotriazolu a 415 mg (2,16 mmol) 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridu. Vzniknutá reakčná zmes sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Rozpúš ťadlo sa odstráni za zníženého tlaku za vzniku žltého oleja, ktorý sa rozpustí v 100 ml etylacetátu, premyje sa dvakrát 30 ml vody a suší sa nad síranom horečnatým. Po filtrácii a zahustení za zníženého tlaku vznikne žltohnedá pena ako surový produkt, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou po absorpcii na 30 g stĺpec silikagélu a pri elúcii 600 ml etylacetátu. Zodpovedajúce frakcie sa zlúčia a zahustia vo vákuu za vzniku 902 mg (1, 46 mmol) bielej peny výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (CDClj, 400 MHz): 9,44 (s, 1H), 8,75 (d, 2H, J = 4,4 Hz), 7,64 - 6,88 (m, 15H), 5,60 (d, 1H, J = 6,8 Hz), 5,03 (m, 1H), 4,45 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 3,99 (d, 1H, J = 16,6 Hz), 3,81 (s, 3H), 1,07 (m, 6H).

TLC (CH₂C1₂OCHjOH (19 : 1)), R_f = 0,63, MS (FAB) m/z = 618,2 [MH]⁺.

Príklad 6 {1 -[Izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5 -(1,3,5 -trimety 1-1 H-pyrazol-4-yl)-2,3,4,5-tetrahydro-1H-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Do roztoku 385 mg (0,76 mmol) 2-(3-amino-2,4-dioxo-5-( 1,3,5-trimetyl-1 H-pyrazol-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]-diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-acetamidu v 5 ml dichlórmetánu sa pridá 148 mg (0,92 mmol) kyseliny indol-2-karboxylovej, 125 mg (0,92 mmol) N-hydroxybenzotriazolu, 176 mg (0,92 mmol) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid hydrochloridu a TEA (2d). Vzniknutý reakčný roztok sa 48 hodín mieša pri teplote miestnosti a potom sa vleje do 100 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa dvakrát extrahuje nasýteným roztokom uhličitanu sodného, nasýteným roztokom chloridu sodného a potom sa suší nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu. Vzniknutý zvyšok ako tuhá látka sa rozotrie s etanolom za vzniku 159 mg výslednej zlúčeniny. Čas retencie výslednej zlúčeniny je 18,3 minút na stĺpci 30 až 55 % C po čase dlhšom než 30 minút.

'H NMR (d₆-DMSO, 300 MHz): delta 11,8 (s, 1H), 8,45 (s, 1H), 7,7 - 6,9 (m, 12H), 5,36 (m, 1H), 4,78 (m, 1H), 4,23 (m, 2H), 3,79 (s, 3H), 3,64 (d, 3H, J = 26,6), 2,11 (d, 3H, J = 31 Hz), 1,5 (d, 3H, J = 72).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 648 (MIČ).

Príklad Ί {l-[Izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Do roztoku 0,14 g (0,26 mmol) {l-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo-[b][l,4]diazepin-3-yl}amidu kyseliny ÍH-indol-2-karboxylovej a 40 μΐ (0,42 mmol) 3-brómpyridínu v 1 ml dimetylformamidu sa pridá 46 mg (0,73 mmol) práškovej medi a 38 mg (0,73 mmol) octanu draselného. Vzniknutý heterogénny roztok sa 15 hodín mieša pri teplote 100 °C a potom sa horúci roztok filtruje cez celit a premyje sa metanolom. Vzniknutá zrazenina sa filtruje a čistí RP-HPLC (stĺpec 40 až 60 % C po čase dlhšom než 30 minút) za vzniku 19 mg bieleho lyofilizovaného materiálu. Čas retencie výslednej zlúčeniny je 8,7 minút na stĺpci 40 až 60 % C po čase díhšom než 30 minút.

’H NMR (d₆-acetón, 300 MHz): delta 10,98 (s, 1H), 9,02 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 7,85 (d, 1H, J = 8,8 Hz), 7,5 (m, 15H),

5,68 (d, IH, J = 7,6 Hz), 5,02 (m, IH), 4,65 (Abq, 2H, J = 16,8, 135 Hz), 4,02 (s, 3H), 2,19 (d, 3H, J = 2,0 Hz), 2,18 (d, 3H, J = 2,0 Hz).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 617 (MH⁺).

Príklad 8

2-[2,4-Dioxo-3-(3-fenylureido)-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Roztok 36,6 mg (0,295 mmol) fenylizokyanátu v 1 ml metylénchloridu sa pridá do roztoku 140 mg (0,295 mmol)

2- (3-amino-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [ 1,4]diazepin-1 -y l)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 1 ml metylénchloridu. Vzniknutý reakčný roztok sa 16 hodín mieša pri teplote miestnosti, rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa kryštalizuje z 5 % roztoku metanolu v etylacetáte za vzniku 49 mg bieleho prášku výslednej zlúčeniny.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃). s 8,72 (s, IH), 8,56 (d, IH, J = 8,0 Hz), 7,92 (d, IH, J = 8,0 Hz), 6, 91 - 7,43 (m, 16H),

6,43 (d, IH, J = 8,3 Hz), 5,43 (d, IH, J = 8,3 Hz), 4,95 (sept., IH, J = 6,8 Hz), 4,6 (d, IH, J = 11,8 Hz), 4,18 (d, IH, J = 11,8 Hz), 3,88 (s, 3H), 1,06 (m, 6H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 593 (m⁺).

Príklad 9 terc.Butylester kyseliny 3-(3-{l-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}ureido)benzoovej

Do roztoku 43,3 mg (0,224 mmol) terc.butyl m-aminobenzoátu v 5 ml tetrahydrofuránu s teplotou 0 ’C a 0,068 ml trietylamínu sa pridá 22,1 ml trifosgénu a vzniknutá reakčná zmes sa 1 hodinu mieša pri teplote 0 °C. Po pridaní 106 mg (0,224 mmol) 2-(3-amino-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu sa vzniknutá reakčná zmes mieša cez noc pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylacetátu, premyje sa dvakrát 30 ml 0, 5 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej, 30 ml vody a 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým a zahustení vo vákuu vznikne 115 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (300 MHz, CDClj). s 8,62 (s, IH), 8,59 (d, IH, J = 8,0 Hz), 7,92 (d, IH, J = 8,0 Hz), 6,91 - 7,83 (m, 15H),

6,43 (d, IH, J = 8,1 Hz), 5,43 (d, IH, J = 8,1 Hz), 4,91 (sept., IH, J = 6,8 Hz), 4,6 (d, 1 H, J = 11,8 Hz), 4,18 (d, IH, J = 11,8 Hz), 3,86 (s, 3H), 1,66 (s, 9H), 1,06 (m, 6H).

Príklad 10

3- (3-{l-[Izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}ureido)benzoová kyselina

Zmes 115 mg (0,224 mmol) terc.butylesteru kyseliny 3-(3-{l-[izopropyl-(4-metoxyfcnyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}ureido)benzoovej a 1 ml 4 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne sa 1,75 hodín mieša pri teplote miestnosti. Po pridaní 1 ml 4 M roztoku kyseliny chlorovo díkovej v dioxáne sa reakčná zmes cez hoc mieša pri teplote miestnosti. Pridá sa 20 ml dietyléteru a vzniknutá zrazenina sa trikrát rozotrie s 30 ml dietyléteru za vzniku bieleho prášku výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (300 MHz, CDC1,). s 'H NMR (300 MHz, CDClj). s 8,61 (s, IH), 8,56 (d, IH, J = 8,2 Hz), 7,91 (d, IH, J = 8,2 Hz), 6,91 - 7,83 (m, 16H), 6,41 (d, IH, J = 7,9 Hz), 5,43 (d, IH, J = 7,9 Hz), 4, 91 (sept, IH, J = 6,8 Hz),

4,6 (d, IH, J = 11,8 Hz), 4,18 (d, IH, J = 11,8 Hz), 3,86 (s, 3H), 1,06 (m, 6H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 637 (m⁺).

Príklad 11 {l-[Izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-indoldioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5,5a,9a-hexahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Do roztoku 23,3 mg (0,049 mmol) 2-(3-amino-2,4-dioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5,5a,9a-hexahydrobenzo[b][l,4]diazepin-1 -yl)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acctamidu v 0,5 ml dimetylformamidu sa za stáleho miešania a pri teplote miestnosti postupne pridá 8,5 g (0,052 mmol, 1,05 ekv.) kyseliny indol-2-karboxylovej, 6,7 mg (0,49 mmol, 1 ekv.) N-hydroxybenzotriazolu a 10,4 mg (0,054 mmol, 1,1 ekv.) l-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridu. Vzniknutá reakčná zmes sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku za vzniku žltého oleja, ktorý sa vleje do 30 ml dichlórmetánu, premyje sa nasýteným roztokom hydrogenuhličitanu sodného a suší sa nad síranom horečnatým. Po filtrácii a zahustení za zníženého tlaku vznikne žltohnedá pena ako surový produkt, ktorý sa po absorpcii na 4 g stĺpec silikagélu čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii postupne 100 ml zmesi etylacetátu a zmesi hexánov v pomere 4:1a 100 ml etylacetátu. Zodpovedajúce frakcie sa zlúčia a zahustia vo vákuu za vzniku 10,2 mg (0,017 mmol) bielej peny výslednej zlúčeniny.

'H NMR (Acetón-d₆, 300 MHz): delta 10,83 (s, IH), 8,63 (s, IH), 7,69 (m, 2H), 7,61 (d, IH, J = 8,2 Hz), 7,53 (m, 3H), 7,45 (m, IH), 7,38 - 7,28 (m, 4H), 7,23 (t, IH), 7,09 (m, 4H), 5,50 (d, IH, J = 7,6 Hz), 4,85 (m, IH), 4,65 (d, IH, J = 16,6 Hz), 4,28 (d, IH, J = 16,7 Hz), 3,86 (s, 3H), 1,01 (m, 6H).

Chromatografia na tenkej vrstve (etylacetát): Rf = 0,36, hmotnostné spektrum (FAB): m/z 617,3 (MFT).

Príklad 12 terc.Butylester kyseliny 3-(3-{7-fluór-l-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}ureido)benzoovej

Roztok 84 mg (0,165 mmol) 2-(3-amino-7-íluór-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 4 ml acetonitrilu sa zlúči s 59 mg (0,165 mmol, 1 ekv.) tere.-butylesteru kyseliny 3-[(4-nitrofenyl)oxykarbonyl]aminobenzoovej a vzniknutá reakčná zmes sa 3 hodiny refluxuje pod dusíkom. Vzniknutá suspenzia sa 30 minút chladí na teplotu 5 °C, filtruje sa a suší vo vysokom vákuu za vzniku 93 mg kryštalickej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

'H NMR (300 MHz, d₆-DMSO): delta 9,41 (s, IH), 8,74 (d,

IH, J = 2,3 Hz), 8,61 (dd, IH, J = 1, 5, 4,9 Hz), 7,99 (m,

SK 281433 Β6

1H), 7,95 (m, 1H), 7,67 (dd, 1H, J = 5,6, 9,3 Hz), 7,57 (m, 2H), 7,48 (m, 1H), 7,31 (m, 4H), 7,10 (d, 2H, J = 8,9 Hz), 6,97 (d, 1H, J = Ί,Ί Hz), 6,87 (dd, 1H, J = 8,9 Hz), 5,16 (1H, J = 7,6 Hz), 4,78 (m, 1H), 4,56 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 4,19 (d, 1H, J = 16,5 Hz), 3,84 (s, 3H), 1,54 (s, 9H), 0,98 (m, 6H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 710 (MH^F).

Príklad 13

-(3 - {7-Fluór-1 -[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}ureido)benzoová kyselina

Zmes 84 mg (0,118 mmol terc.butylesteru kyseliny 3-(3 - {7-fluór- 1 -[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoy lmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-1 H-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}ureido)benzoovej a 4 ml kyseliny trifluóroctovej sa 1,5 hodiny mieša pod dusíkom. Kyselina trifluóroctová sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozotrie s dietyléterom. Suspenzia sa filtruje, premyje sa dietyléterom a suší vo vysokom vákuu za vzniku 85 mg bielej kryštalickej látky výslednej zlúčeniny ako soli kyseliny trifluóroctovej.

'H NMR (300 MHz, d₆-DMSO): delta 9,33 (s, 1H), 8,70 (b, 1H), 8,57 (d, 1H, J = 4,7 Hz), 8,0 (m, 1H), 7, 97 (d, 1H, J = 8,6 Hz), 7,61 (dd, 1H, J = 5,5, 9,1 Hz), 7,55 (dd, 1H, J = 4,88, 8,2 Hz), 7,47 (m, 2H), 7,26 (m, 4H), 7,05 (d, 2H, J = 9,0 Hz), 6,92 (d, 1H, J = 7,8 Hz), 6,82 (dd, 1H, J = 2,8,9,6 Hz), 5,1 (d, 1H, J = 7,6 Hz), 4,72 (m, 1H), 4,51 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 4,14 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 3,78 (s, 3H), 0,92 (m, 6H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 655 (Mď).

Príklad 14 a 15 (+) alebo (-) (l-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Enantioméry výslednej zlúčeniny z príkladu 7 sa získajú oddelením (>99,9 % ee) preparatívnou vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) na systéme Waters Model 4000 Delta Prep vybavenom preparatívnym stĺpcom Daicel Chemical Industries Chiralpak-AD s veľkosťou 5 cm x 50 cm, s veľkosťou ôk 20 mikrónov ako stacionárnej fázy. Mobilnou fázou je zmes 72 % hexánu, 21 % izopropylalkoholu a 7 % chloroformu. Chromatografia prebiehala za izokratických podmienok, kde rýchlosť prietoku bola 50 ml/min. (to = 16 min.). Zodpovedajúce frakcie sa zlúčia, zahustia sa vo vákuu a lyofilizujú sa z vody a acetonitrilu za vzniku požadovaných zlúčenín. Chemická analýza sa vykonávala s použitím HPLC na systéme Hewlett Packard 1050 vybaveného diódovým spektrometrom Hewlet Packard (vlnová dĺžka v rozmedzí 200 až 400 nm). Stacionárnou fázou bol stĺpec Daicel Chemical Industries Chiralpak-AD s veľkosťou 0,46 x 25 cm a s veľkosťou ôk 10 mikrónov. Mobilnou fázou bol uvedený systém rozpúšťadiel a rýchlosť prietoku je 1,0 ml/min. (to = 3 minúty). Retenčný čas v minútach: enantiomér 1 (príklad 14): čas retencie = 25,06 minút, enantiomér 1 (príklad 15): čas retencie = 81,39 minút.

Medziprodukt 1

Izopropyl-(4-metoxyfenyl)amín

Do miešaného roztoku 1,24 g 4-metoxyfenylamínu v 15 ml metanolu sa postupne pridá pri teplote miestnosti 415 mg ľadovej kyseliny octovej, 669 mg acetónu a

12,7 ml 1 M roztoku kyanobórhydridu sodného v tetrahydrofuráne. Reakčná zmes sa cez noc mieša pri teplote miestnosti a po pridaní 6 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej na pH 2 sa zmes mieša 30 minút. Po odstránení prebytku kyanobórhydridu sodného sa pridaním 1 M roztoku hydroxidu sodného zmení pH zmesi na pH 8,5 a vzniknutý reakčný roztok sa dvakrát extrahuje 50 ml dietyléteru a 50 ml etylacetátu. Organické extrakty sa zlúčia, sušia sa nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia sa za zníženého tlaku za vzniku 1,42 g žltého oleja výslednej zlúčeniny.

’H NMR (300 MHz, CDClj): delta 6,78 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 6,57 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 3,75 (s, 3H), 3,55 (m, 1H), 2,92 (br s, 1H), 1,18 (d, J = 6,1 Hz, 6H).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a hexánu v pomere 2 : 3): R_f = 0,72.

Medziprodukt 2

2-Bróm-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do roztoku 25,11 g izopropyl-(4-metoxyfenyl)aminu v 250 ml dichlórmetánu sa pridá za stáleho miešania pri teplote miestnosti 15,38 g trietylamínu. Vzniknutý roztok sa ochladí v ľadovom kúpeli s teplotou nižšou než 3 °C a potom sa do neho po kvapkách počas 45 minút za stáleho miešania a ochladzovania v ľadovom kúpeli pridá roztok 30,68 g brómacetylbromidu v 100 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa cez noc mieša pri teplote miestnosti, premyje sa 300 ml 0,3 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej» a 300 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, súši sa, filtruje a odparuje za zníženého tlaku za vzniku tmavohnedého oleja. Olej sa filtruje cez vrstvu 150 g oxidu kremičitého, ktorá sa eluuje 900 ml zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 1:1. Filtrát sa odparuje za zníženého tlaku za vzniku 41,05 g (143 mmol) hnedého oleja výslednej zlúčeniny, ktorý státím kryštalizuje.

Ή NMR (300 MHz, CDClj): delta 1,04 (d, J = 6,8 Hz, 6H), 3,53 (s, 2H), 3,84 (s, 3H), 4,93 (m, 1H), 6,93 (d, J = 9,1 Hz, 2H), 7,10 (d, J = 9,1 Hz, 3H).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a hexánu v pomere 3 : 17): R_f = 0,18.

Medziprodukt 3

Kyselina 2-(fenylhydrazón)malónová

Do energicky miešaného roztoku 29,33 g monohydrátu kyseliny ketomalónovej v 140 ml etanolu a 300 ml vody sa pri teplote miestnosti po kvapkách počas 40 minút pridá

23,3 g fenylhydrazínu. Vzniknutá suspenzia sa cez noc mieša pri teplote miestnosti, tuhý podiel sa oddelí filtráciou, premyje sa postupne 100 ml vody a 25 ml etanolu a suší sa vzduchom. Ďalšie sušenie sa vykoná cez noc vo vákuovej peci pri teplote 75 °C. Vznikne 42,38 g žltej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 155 až 157 °C (za rozkladu).

'HNMR (300 MHz, DMSO-d₆): delta 7,12 (t, 1H), 7, 35 - 7,48 (m, 411).

SK 281433 Β6

Medziprodukt 4

2-(Fenylhydrazóm)propándioldichlorid

Do miešanej suspenzie 14,73 g medziproduktu 1 v 90 ml chloroformu sa pri teplote 5 °C počas 20 minút po častiach pridá 36,84 g chloridu fosforečného. Po skončení reakcie sa vzniknutý roztok za stáleho miešania počas 1 hodiny zohreje na teplotu miestnosti a následne sa 3 hodiny zohrieva pod refluxom. Roztok sa ochladí v ľadovom kúpeli a vzniknutá zrazenina sa oddelí filtráciou, premyje sa 50 ml studeného hexánu a suší sa cez noc vo vákuu za vzniku 13,4 g svetložltej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 135 až 138 °C (za rozkladu).

'H NMR (300 MHz, DMSO-d₆): delta 7,12 (t, IH), 7,20 - 7,56 (m, 4H).

Medziprodukt 5

2-(2-Aminopyridyl)nitrobenzén

Do roztoku 2,0 g 2-aminopyridínu v 10 ml tetrahydrofúránu s teplotou 0 °C sa pridá 1,26 g 60 % roztoku hydridu sodného v oleji a vzniknutá zmes sa 1 hodinu mieša pri teplote 0 °C. Po kvapkách sa pridá roztok 2,21 ml 2-fluómitrobenzénu V 8 ml tetrahydrofuránu. Vzniknutá zmes sa nechá cez noc zohriať na teplotu miestnosti. Pridá sa 10 ml nasýteného vodného roztoku uhličitanu sodného a oddelený vodný podiel sa trikrát extrahuje 10 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické extrakty sa premyjú 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu. Po čistení rýchlou chromatografiou na stĺpci pri elúcii zmesi cyklohexánu a etylacetátu v pomere 3 : 1 vznikne 2,23 g oranžovočervenej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 71 °C.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 6,83 (m, 3H), 7,42 (dt, J = 1,7 Hz, IH), 7,4 (dt, J = 1,7 Hz, IH), 8,08 (dd, J = 1,7 Hz, IH), 8,21 (d, J = 1, 1,5 Hz, IH), 8,61 (dt, J = 1,7 Hz, IH), 10,0 (s, IH).

Medziprodukt 6

N-(2-Pyridyl)fenyléndiamín

V 45 ml ľadovej kyseliny octovej sa rozpustí 2,14 g 2-(2-aminopyridyl)nitrobenzénu a pridá sa 5,57 g železných pilín. Vzniknutá reakčná zmes sa 72 hodín mieša pri teplote miestnosti, potom sa tuhý podiel oddelí filtráciou cez celit a rozpúšťadlo sa odstráni zahustením vo vákuu. Pridá sa 2 M roztok uhličitanu sodného na dosiahnutie pH 8 a zmes sa extrahuje trikrát 30 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické podiely sa premyjú 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu. Vznikne 1,68 g béžovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 6,12 (br, 2H), 6,42 (d, J = 6 Hz, IH), 6,68 (m, IH), 6,78 (m, 3H), 7,008 (dt, J = 1, 6,0 Hz, IH), 7,15 (dd, J = 1, 5,8 Hz, IH), 7,42 (m, IH), 8,15 (br, IH).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes cyklohexánu a etylacetátu v pomere 1 : 1): R_f= 0,2.

Medziprodukt 7

N-Izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-2-[2-(pyridin-2-yl-aminofenylamín)]acetamid

Pri teplote miestnosti sa 22 hodín mieša zmes 2,0 g N-(2-pyridyl)fenyléndiamínu, 3,08 g izopropyl-(4-metoxyfenyl)amínu a 1,50 g uhličitanu draselného v 30 ml dimetylformamidu. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozdelí do 50 ml etylacetátu a trikrát 30 ml vody. Organický podiel sa premyje 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu za vzniku hnedej tuhej látky surovej výslednej zlúčeniny. Po kryštalizácii zo zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 1 : 1 vznikne svetlohnedá tuhá látka výslednej zlúčeniny.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 1,01 (d, J = 7 Hz, 6H), 3,4 (s, 2H), 3,83 (s, 3H), 4,98 (sept, J = 7 Hz), 6,08 (s, IH), 6,31 (d, J = 8,5 Hz, IH), 6,42 (d, J = 8,0 Hz, IH), 6,66 (m, 2H), 6,9 - 7,1 (m, 6H), 7,22 (d, J = 8,0 Hz, IH), 7,4 (t, J = 6,5 Hz, IH), 8,18 (d, J = 3,5 Hz, IH).

Chromatografia na tenkej vrstve (10 % roztok metanolu v metylénchloride): R_f = 0,42.

Medziprodukt 8

2-[2,4-Dioxo-3-(fenylhydrazón)-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo [b] [ 1,4] diazepin-1 -y 1] -N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyljacetamid

Zmes 500 mg N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-2-[2-(pyridin-2-yl-aminofenylamín)]acetamidu v 20 ml tetrahydrofuránu a 317 mg 2-(fenylhydrazón)propándioyldichloridu v 20 ml tetrahydrofuránu sa súčasne pridá do 20 ml tetrahydrofuránu s teplotou 0 °C. Vzniknutá reakčná zmes sa nechá cez noc zohriať na teplotu miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylacetátu a dvakrát sa premyje 30 ml 2 N vodného roztoku uhličitanu sodného, 30 ml vody a 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým a zahustení vo vákuu vznikne surový produkt. Čistením chromatografiou na stĺpci silikagélu pri elúcii 10 % roztokom metanolu v metylénchloride vznikne 460 mg zmesi hydrazónov výslednej zlúčeniny v pomere 3:2. Pretože ide o zmes diastereomérov, nie sú výsledky ’H NMR diagnostické.

Chromatografia na tenkej vrstve (10 % roztok metanolu v metylénchloride): R_f = 0,62.

Medziprodukt 9

2-(3-Amino-2,4-dioxo-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [ 1,4]diazepin-1 -yl)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyljacetamid

Zmes 460 mg 2-[2,4-dioxo-3-(fenylhydrazón)-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [ 1,4]diazepin-1 -yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu, 430 mg práškového zinku a 5,6 ml kyseliny octovej sa pri teplote miestnosti mieša 3 hodiny. Tuhý podiel sa odstráni filtráciou cez celit, filtrát sa zahustí vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa čistí azeotropickou destiláciou s hexánom. Zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylacetátu a dvakrát sa premyje 30 ml 2 N vodného roztoku uhličitanu sodného, 30 ml vody a 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým a zahustení vo vákuu vznikne 270 mg surového produktu, ktorý sa bez ďalšieho čistenia použije v ďalšej časti príkladu.

’H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 1,03 (d, J = 7 Hz, 6H),

3,79 (s, 3H), 4,02 (d, J = 10 Hz, IH), 4,4 (s, IH), 4,42 (d,

J = 10 Hz, IH), 5,0 (sept, J = 7,1 Hz, IH), 6,8 - 7,3 (m,

10H), 7,44 (d, J = 8,0 Hz, IH), 7,68 (d, J = 8,0 Hz, IH),

7,8 (m, IH), 8,42 (d, J = 3,9 Hz, IH). Chromatografia na tenkej vrstve (10 % roztok metanolu v metylénchloride): R_f = 0,23.

Medziprodukt 10 (2-N itrofenyl)pyrimidin-2-y lamín

Do chladeného roztoku 10 g (105 mmol) roztoku 2-aminopyrimidínu v 100 ml dimetylformamidu s teplotou 5 °C sa pridá 5,47 g (137 mmol) 60 % roztoku hydridu sodného v minerálnom oleji a vzniknutá zmes sa za stáleho chladenia 1 hodinu mieša. Do miešaného a chladeného roztoku sa po kvapkách počas 20 minút pridá 14,83 g (105 mmol) l-fluór-2-nitrobenzénu v 30 ml dimetylformamidu. Vzniknutý reakčný roztok sa pomaly nechá zohriať na teplotu miestnosti a 3 hodiny sa mieša. Po pridaní 300 ml vody sa vytvorí zrazenina, ktorá sa oddelí filtráciou a po sušení vznikne 13,39 g (61,9 mmol) oranžovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

'H NMR (Acetón-d₆, 400 MHz): delta 10,34 (br s, IH), 9,0 (d, IH, J = 8,6 Hz), 8,6 (d, 2H, J = 4,8 Hz), 8,23 (d, IH, J = 8,4 Hz), 7,74 (t, IH), 7,17 (t, IH), 7,06 (t, IH).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a hexánov v pomere 3 : 17): R_f = 0,27.

Medziprodukt 11

N-Pyrimidin-2-ylbenzén-1,2-diamín

Do 13,2 g (61,1 mmol) roztoku (2-mtrofenyl)pyrimidin-2-ylamínu v zmesi 450 ml etylacetátu a 350 ml metanolu sa pridá 16 g Raneyho niklu zvlhčeného vodou a vzniknutá reakčná zmes sa hydrogenuje 3 hodiny v atmosfére vodíka pri tlaku 0,1 MPa a pri teplote miestnosti. Katalyzátor sa oddelí filtráciou, filtrát sa zahustí vo vákuu a vzniknutá červenohnedá tuhá látka sa rozotrie s 250 ml studeného metanolu. Vznikne 8,21 g (44,1 mmol) sivej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

'H NMR (CDClj, 400 MHz) delta 8,38 (d, 2H, J = 4,9 Hz),

7.37 (d, IH, J = 7,9 Hz), 7,08 (t, IH), 7,0 (br s, IH), 6,83 (m, 2H), 6,67 (t, IH), 3,6 (br s, 2H).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a hexánov v pomere 2:1): R_f = 0,33.

Medziprodukt 12

N-Izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-2-[2-(pyrimidin-2-ylamino)feny 1 amino] acetamid

Do roztoku 82 mg (0,441 mmol) N-pyrimidin-2-ylbenzén-l,2-diamínu v 2 ml dimetylformamidu sa pridá 61 mg (0,441 mmol) uhličitanu draselného, 7 mg (0,044 mmol) jodidu draselného a 126 mg (0,441 mmol) 2-bróm-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu. Vzniknutá reakčná zmes sa cez noc mieša pri teplote 60 °C. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozdelí do 35 ml metylénchloridu a 15 ml vody. Organický podiel sa oddelí, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí za vzniku žltého oleja, ktorý sa rozotrie so 6 ml etanolu. Filtráciou vznikne 96,7 mg (0,247 mmol) žltých kryštálov výslednej zlúčeniny.

'H NMR (CDClj, 300 MHz) delta 8,36 (d, 2H, J = 4,9 Hz),

7.38 (dd, IH, J = 1,2, 7,8 Hz), 7,06 - 6,9 (m, 6H), 6,75 (t, IH), 6,66 (t, IH), 6,36 (dd, IH, J = 1,2, 7,8 Hz), 4,97 (m, IH), 3,87 (s, 3H), 3,43 (s, 2H), 1,04 (d, 6H, J = 6,8 Hz).

Chromatografia na tenkej vrstve (etylacetát): R_f = 0,62, hmotnostné spektrum (FAB) m/z 392,0 (MFT).

Medziprodukt 13

2-[2,4-Dioxo-3-(fenylhydrazón)-5-pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

V ľadovom kúpeli sa chladí suspenzia 500 mg (1,28 mmol) N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-2-[2-(pyrimidin-2-ylammo)-fenylamino]acetamidu v 12 ml tetrahydrofúránu, do ktorej sa po kvapkách počas 5 minút pridá 344 mg (0,141 mmol) 2-(fenylhydrazón)propándioyldichloridu v 6 ml tetrahydrofuránu. Po dokončení pridávania sa roztok nechá zohriať na teplotu miestnosti a reakčná zmes sa cez noc mieša. Rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku a vzniknutý zvyšok ako olej sa rozpustí v 80 ml etylacetátu, premyje sa nasýteným roztokom uhličitanu sodného a suší sa nad síranom horečnatým. Po filtrácii a zahustení za zníženého tlaku vznikne žltý olej ako surový produkt, ktorý sa po absorpcii na 15 g silikagélu čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii 250 ml zmesi etylacetátu a hexánov v pomere 2:1. Vzniknú zodpovedajúce podiely, ktoré sa zlúčia a zahustia za vzniku 500 mg (0,886 mmol) žltej peny výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (CDClj, 300 MHz): delta 11,22 (s, IH), 8,58 (m, 2H), 7,7 - 6,9 (m, 14H), 5,05 (m, IH), 4,46 (m, IH), 3,82 (m,4H), 1,12 (m, 6H).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a zmesi hexánov v pomere 2 : 1): R_f = 0,21, hmotnostné spektrum (FAB) m/z 564,1 (MH⁺).

Medziprodukt 14

2-(3-Amino-2,4-dioxo-5-pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [ 1,4]diazepin-l -yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do miešaného roztoku 500 mg (0,886 mmol) 2-(2,4-dioxo-3-(fenylhydrazón)-5-pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 12 ml kyseliny octovej sa pri teplote miestnosti pridá 530 mg práškového zinku a vzniknutá reakčná zmes sa 1 hodinu mieša. Zinok sa odstráni filtráciou, filtrát sa zahustí vo vákuu a vzniknutý olej sa rozdelí do 30 ml vody a 80 ml etylacetátu. Po pridaní 6 M roztoku hydroxidu sodného na pH 8 sa podiely oddelia. Vodný podiel sa dvakrát extrahuje 35 ml etylacetátu. Organické podiely sa zlúčia, sušia sa nad síranom horečnatým a po filtrácii a zahustení vo vákuu vznikne žltá pena. Tento surový produkt sa po absorpcii na 15 g silikagélu čisti rýchlou chromatografiou pri elúcii 250 mi zmesi metylénchloridu a metanolu v pomere 19:1. Vzniknuté zodpovedajúce frakcie sa zlúčia a zahustia za vzniku 255 mg (0,537 mmol) bieleho sklovitého materiálu výslednej zlúčeniny.

Ή NMR (CDClj, 400 MHz): delta 8,78 (d, 2H, 4,9 Hz), 7,59 (dd, IH, J = 1,1, 8,3 Hz),7,33 - 7,25 (m, 3H), 7,16 (t, IH), 7,05 (dd, IH, J = 1,4, 8,3 Hz), 6,96 (dd, IH, J = 2,7,

8,7 Hz), 6,89 (dd, IH, J = 2,7, 8,5 Hz), 6,86 (dd, IH, J = 1,2, 8,2 Hz), 5,06 (m, IH), 4,52 (d, IH, J = 16,6 Hz),

4,43 (s, IH), 3,85 (d, IH, J = 16,6 Hz), 3,82 (s, 3H), 2,60 (br s, 2H), 1,11 (d, 6H, J =1,0 Hz).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes metylénchloridu a metanolu v pomere 9 : 1): R_f - 0,48, hmotnostné spektrum (FAB) m/z 475,3 (MH*).

SK 281433 Β6

Medziprodukt 15 (2-Nitrofenyl)-( 1,3,5-trimetyl-1 H-pyrazol-4-yl)amín

Do roztoku 7,47 ml (70,9 mmol) 1-fluór-2-nitrobenzénu v 35 ml etanolu a 105 ml vody sa pridá 8,8 g (70,9 mmol) 4-amino-l,3,5-trimetylpyrazolu. Roztok sa 15 hodín zahrieva pod refluxom, ochladí sa na teplotu miestnosti a vzniknutá zrazenina sa oddelí filtráciou a premyje sa 25 % vodným roztokom etanolu. Vznikne 8,6 g výslednej zlúčeniny.

'H NMR (CDClj, 300 MHz): delta 8,81 (s, 1H), 8,18 (dd, 2H, J = 1,6, 8,7 Hz), 6,69 (m, 1H), 6,61 (dd, 1H, J = 1,2,

8,7 Hz), 3,77 (s, 3H), 2,1 (s, 3H), 2,06 (s, 3H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 247 (MlT).

Medziprodukt 16

N-( 1,3,5-Trimetyl-1 H-pyrazol-4-yl)benzén-1,2-diamín

Do roztoku 8,6 g (35 mmol) (2-nitrofenyl)-(l,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl)amínu v 175 ml etylacetátu sa pridá 1 g 10 % roztoku paládia na aktívnom uhlí. Roztok sa mieša 15 hodín v atmosfére vodíka pri tlaku 0,35 MPa. Následne sa filtruje cez celit, premyje sa etylacetátom a zahustí sa vo vákuu za vzniku 7,56 g výslednej zlúčeniny. ’H NMR (CDClj, 300 MHz): delta 6,74 (m, 3H), 6,32 (d, 1H, J = 1,9, 7,2 Hz), 4,6 (s, 1H), 3,75 (s, 3H), 3,1 (s, 2H), 2,05 (m, 6H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 217 (MH⁺).

Medziprodukt 17

N-Izopropyl-N-(4-metoxyfeny l)-2-[2-( 1,3,5-trimetyl-1H-pyrazol-4-ylamino)fenylamino]acetamid

Do roztoku 7,56 g (35,0 mmol) N-(l,3,5-trimetyl-ÍH-pyrazol-4-yl)benzén-l,2-diamínu a 7,18 g (38,5 mmol) 2-bróm-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 70 ml dimetylformamidu sa pridá 14,5 g (105 mmol) uhličitanu draselného a 581 mg (3,5 mmol) jodidu draselného. Roztok sa 15 hodín zahrieva pri teplote 80 °C a následne sa vleje do 100 ml dichlórmetánu. Zmes sa štyrikrát extrahuje vodou, dvakrát 1 M roztokom kyseliny chlorovodíkovej a nasýteným roztokom chloridu sodného. Suší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu. Vzniknutá pena sa čistí rozotrením s etyléterom za vzniku 11,9 g výslednej zlúčeniny.

’H NMR (CDClj, 300 MHz): delta 8,08 (s, 1H), 7,07 (dd, 4H, J = 2,2, 6,6 Hz), 6,63 (m, 2H), 6,31 (m, 2H), 5,03 (m, 1H), 4,76 (s, 1H), 3,87 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,46 (s, 2H), 2,02 (m, 6H), 1,07 (d, 6H, J = 6,8 Hz).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 422 (MH⁺).

Medziprodukt 18

2-[2,4-Dioxo-3-(fenylhydrazón)-5-(l,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do 35 ml tetrahydrofuránu chladeného na teplotu °C sa súčasne pridá roztok 3,0 g (7,1 mmol) N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-2-[2-(l,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-ylamino)fenylamino]acetamidu v 70 ml tetrahydrofuránu a roztok

1,75 g (7,1 mmol) 2-(fenylhydrazón)propándioyldichloridu v 70 ml tetrahydrofuránu. Roztok sa 15 hodín mieša pri teplote miestnosti a potom sa zahustí vo vákuu za vzniku 8,1 g výslednej zlúčeniny, ktorá sa v nasledujúcej syntéze použije bez ďalšieho čistenia.

Medziprodukt 19

2-[3-Amino-2,4-dioxo-5-(l,3,5-trimctyl-lH-pyrazol-4-yl)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do roztoku 4,6 g (7,74 mmol 2-[2,4-dioxo-3-(fenylhydrazón)-5-( 1,3,5-trimetyl- lH-pyrazol-4-yl)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo [b] [ 1,4]-diazepin-1 -y 1] -N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyljacetamidu v 45 ml ľadovej kyseliny octovej sa pridá 4,6 g práškového zinku. Vzniknutý heterogénny roztok sa 15 hodín mieša pri teplote miestnosti, následne sa filtruje cez celit, premyje sa etylacetátom a zahustí sa do sucha. Vzniknutý olej sa rozpustí v 200 ml etylacetátu a extrahuje sa trikrát nasýteným roztokom uhličitanu sodného a nasýteným roztokom chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým a zahustení vo vákuu vznikne olej, ktorý sa po absorpcii na silikagél čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii 5 % roztokom metanolu v dichlórmetáne. Vznikne 385 mg výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (CDClj, 300 MHz): delta 7,06 - 6,8 (m, 10H), 5,05 (m, 1H), 4,4 (m, 1H), 3,82 (s, 3H), 3,74 (s, 3H), 3,62 (s, 2H), 2,24 (s, 3H), 1,20 (s, 3H), 1,09 (m, 6H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 505 (MH⁺).

Medziprodukt 20 (4-Metoxybenzyl)-(2-nitrofenyl)amín

Do 80,65 ml (0,77 mmol) 2-fluómitrobenzénu rozpusteného v 200 ml etanolu a 600 ml vody sa pridá 100 ml (0,77 mmol) 4 metoxybenzylamínu. Reakčná zmes sa zahrieva 15 hodín na teplotu 92 °C. Po ochladení na teplotu miestnosti sa oranžová zrazenina oddelí filtráciou a nechá sa kryštalizovať zo zmesi etanolu a vody v pomere 1 : 3. Po rozpustení v etylacetáte, sušení nad síranom horečnatým a zahustením vo vákuu vznikne 117,88 g výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (300 MHz, CDClj): delta 8,35 (bs, 1H), 8,18 (d, J = 8,5 Hz, 1H), 7,38 (dd, J = 7,3, 7,8 Hz, 1H), 7,27 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,85 (m, 3H), 6,66 (dd, J = 7,3, 7,8 Hz, 1H), 4,47 (zrútený Abq, J = 4,9 Hz, 2H), 3,81 (s, 3H). Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 258,99 (MH⁺).

Medziprodukt 21

N-(4-Metoxybenzyl)benzén-1,2-diamín

V banke s tromi hrdlami, okrúhlym dnom a vybavenej miešadlom sa chladí na teplotu 15 °C roztok 50 g (4-metoxybenzyl)-(2-nitrofenyl)amínu v 500 ml ľadovej kyseliny octovej, do ktorého sa pridá 50 g práškového zinku. Reakčná zmes sa zahreje na teplotu miestnosti a 15 hodín sa mieša. Po filtrácii cez celit sa filtrát zahustí do sucha a vzniknutý olej sa rozpustí v zmesi etylacetátu a vody. Po dosiahnutí pH vodného podielu 8 pridaním uhličitanu sodného sa vodný podiel extrahuje štyrikrát etylacetátom a suší sa nad síranom horečnatým. Zahustením vo vákuu vznikne surový produkt, ktorý sa po absorpcii na silikagéli čistí

SK 281433 Β6 rýchlou chromatografiou pri elúcii 50 % roztokom hexánu v dichlórmetáne. Vznikne 33,34 g výslednej zlúčeniny.

'H NMR (300 MHz, CDClj) delta 7,32 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,88 (d, J = 8,5 Hz, 2H), 6,97 (m, 4H), 4,25 (s, 2H), 3,81 (s, 3H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 476 (MH⁴).

Medziprodukt 22

N-Izopropyl-2-[2-(4-metoxybenzylamín)fenylamín]-N-(4-metoxyfenyljacetamid

Do roztoku 2,42 g (10,6 mmol) N-(4-metoxybenzyl)benzén-l,2-diamínu v 40 ml dichlórformamidu sa pridá 1,47 g (10,6 mmol) uhličitanu draselného, 176 mg (1,06 mmol) jodidu draselného a 3,03 (10,6 mmol) 2-brómN-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu. Vzniknutá reakčná zmes sa cez noc mieša pri teplote 60 °C. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surový produkt sa rozpustí v 150 ml etylacetátu, premyje sa dvakrát 50 ml vody a 50 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí za vzniku hnedého oleja. Pridaním 70 ml dietyléteru sa vytvorí zrazenina, ktorá sa oddelí filtráciou za vzniku 1,39 g (3,21 mmol) žltej tuhej látky výslednej zlúčeniny. Filtrát sa zahustí za zníženého tlaku, za vzniku zvyšku ako hnedého oleja, ktorý sa po absorpcii na 40 g silikagélu čistí 900 ml zmesi etylacetátu a hexánov v pomere 1 : 4. Požadované podiely sa zlúčia a zahustia za zníženého tlaku za vzniku 1,86 g (4,29 mmol) hnedého oleja výslednej zlúčeniny.

Ή NMR (300 MHz, CDClj): delta 7,30 (m, 2H), 7,05 (m, 2H), 6,95 (m, 2H), 6,88 (m, 2H), 6,73 - 6,61 (m, 3H), 6,28 (m, 1H), 5,01 (m, 1H), 4,23 (s, 2H), 3,87 (s, 3H), 3,8 (s, 3H), 3,4 (s, 2H), 1,07 (m, 6H).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a zmesi hexánov v pomere 1 : 4): R_f = 0,14.

Medziprodukt 23

N-Izopropyl-2-[5-(4-metoxybenzyl)-2,4-dioxo-3-(fenylhydrazón)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

V ľadovom kúpeli s teplotou nižšou než 5 °C sa chladí roztok 3,25 g (7,51 mmol) N-izopropyl-2-[2-(4-metoxybenzylamino)fenylamino]-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 50 ml tetrahydrofuránu, do ktorého sa počas 20 minút po kvapkách pridá 1,84 g (7,51 mmol) 2-(fenylhydrazón)propándioyldichloridu v 50 ml tetrahydrofuránu. Po ukončení pridávania sa reakčný roztok nechá zohriať na teplotu miestnosti a cez noc sa mieša. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vzniknutý zvyšok ako olej sa rozpustí v 300 ml etylacetátu, premyje sa 100 ml nasýteného roztoku uhličitanu sodného a 50 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí za zníženého tlaku. Vznikne 4,55 g (7,51 mmol) žltého oleja výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (300 MHz, CDClj): delta 11,46 (s, 0,5H), 10,69 (s, 0,5H), 7,56 - 6,95 (m, 15H), 6,77 - 6,66 (m, 2H), 5,34 (m, 1H), 5,05 (m, 1H), 4,79 (m, 1H), 4,34 - 4,08 (m, 2H), 3,86 (s, 2H), 3,74 (s, 3H), 3,72 (s, 3H), 1,11 (m, 6H).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a zmesi hexánov v pomere 2 : 3): Rf = 0,30.

Medziprodukt 24

2-[3-Amino-5-(4-metoxybenzyl)-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do miešaného roztoku 4,55 g (7,51 mmol) N-izopropyl-2-[5-(4-metoxybenzyl)-2,4-dioxo-3-(fenylhydrazón)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo|b][l,4]diazepin-l-yl]-N-(4-metoxyfenyljacetamidu v 50 ml kyseliny octovej sa pridá 4,50 g práškového zinku a vzniknutá reakčná zmes sa 4 hodiny mieša pri teplote miestnosti. Zinok sa odstráni filtráciou, filtrát sa zahustí vo vákuu a vzniknutý olej sa rozdelí do 150 ml vody a 250 ml etylacetátu. Po pridaní 6 M hydroxidu sodného na pH 8 sa podiely oddelia. Vodný podiel sa dvakrát extrahuje 80 ml etylacetátu, organické podiely sa zlúčia a sušia sa nad síranom horečnatým. Po filtrácii a zahustení vo vákuu vznikne hnedý olej ako surový produkt, ktorý sa po absorpcii na 70 g silikagélu čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii 500 ml zmesi etylacetátu a hexánov v pomere 2:1a 500 ml metylénchloridu a metanolu v pomere 19 : 1. Vzniknuté zodpovedajúce frakcie sa zlúčia a zahustia za vzniku 2,85 mg (5,52 mmol) hnedého oleja výslednej zlúčeniny.

’H NMR (300 MHz, CDClj): delta 7,43 (d, J = 7,3 Hz, 1H), 7,3 - 7,19 (m, 4H), 7,05 - 6,9 (m, 5H), 6,59 (d, J = 8,8 Hz, 2H), 5,13 (d, J = 15,1 Hz, 1H), 5,0 (m, 1H), 4,86 (d, J - 15,1 Hz, 1H), 4,25 (s, 1H), 4,21 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 3,85 (s, 3H), 3,69 (s, 3H), 3,48 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 1,09 (m, 6H).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes metylénchloridu a metanolu v pomere 29 : 1): R_f = 0,11.

Medziprodukt 25

2-[3-Amino-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]dia-. zepin-1 -yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do miešaného roztoku 2,63 g (5,09 mmol) 2-[3-amino-5-(4-metoxybenzyl)-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo- . [b] [ 1,4]diazepin-1 -yl]-N-izopropy l-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 70 ml zmesi acetonitrilu a vody v pomere 9 : 1 sa pri teplote miestnosti pridá po častiach počas 1 hodiny 10,05 g (18,3 mmol) dusičnanu cematoamónneho. Vzniknutý reakčný roztok sa cez noc mieša pri teplote miestnosti. Roztok sa zahustí vo vákuu, dvakrát sa premyje 50 ml toluénu a zvyšok sa extrahuje trikrát 50 ml metylénchloridu. Po filtrácii a zahustení vznikne zvyšok ako oranžová sklovitá látka. Tento surový produkt sa po absorpcii na 100 g silikagélu čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii najskôr 1,5 ml zmesi metylénchloridu a metanolu v pomere 15 : 1, a potom 1,3 1 zmesi metylén chloridu a metanolu v pomere 10: 1. Požadované frakcie sa zlúčia a zahustia za zníženého tlaku. Vznikne 1,97 g (4,97 mmol) hnedej peny výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (300 MHz, DMSO-d₆): delta 10,68 (br s, 1H),

7,39 - 6,98 (m, 8H), 5,75 (s, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,16 - 3,92 (m, 4H), 3,77 (s, 3H), 3,15 (m, 2H), 0,97 (m, 6H).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes metylénchloridu a metanolu v pomere 13 : 1): R_f= 0,21.

Medziprodukt 26 {l-[Izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Do roztoku 350 mg (0,883 mmol) 2-[3-amino-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yI]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 10 ml dimetylformamidu sa za stáleho miešania postupne pridá 142 mg (0,883 mmol) kyseliny indol-2-karboxylovej, 119 mg (0,883 mmol) N-hydroxybenztriazolu a 169 mg (0,883 mmol) 1 -(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridu. Vzniknutá reakčná zmes sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni odparovaním za zníženého tlaku za vzniku žltého oleja, ktorý sa rozpustí v 60 ml etylacetátu, premyje sa 20 ml vody a 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného a suší sa nad síranom horečnatým. Po filtrácii a zahustení za zníženého tlaku vznikne žltý olej, ktorý státím tuhne. Surový produkt sa rozotrie s 20 ml vriaceho etanolu, ochladí sa, filtruje sa a suší za vzniku 169 mg (0,313 mmol) žltej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

'H NMR (300 MHz, Acetón-d₆): delta 10,85 (br s, 1H), 9,83 (br s, 1H), 7,67 (m, 2H), 7,53 (m, 2H), 7,37 - 7,2 (m, 7H), 7, 04 (m, 3H), 5,28 (d, J = 7,5 Hz, 1H), 4,87 (m, 1H), 4,31 (d, J = 16,3 Hz, 1H), 4,13 (d, J = 16,6 Hz, 1H), 3,83 (s, 3H), 1,02 (m, 6H).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes metylénchloridu a metanolu v pomere 19 : 1): R_r= 0,24.

Hmotnostné spektrum (FAB): m/z 540 (MR).

Medziprodukt 27

N-Izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-2-fenylaminoacetamid

Zmes 257,6 g (924 mmol) N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)brúmacetamidu, 100 g (924 mmol), 1,2-fenyléndiamínu a 128 g (924 mmol) uhličitanu draselného v 1200 ml dimetylformamidu sa 2 hodiny mieša pri teplote 0 °C a potom sa nechá miešať 20 hodín pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa filtruje cez celit a filtrát sa zahustí vo vákuu. Vzniknutý zvyšok sa rozpustí v 1200 ml etylacetátu, trikrát sa premyje 200 ml vody a raz 200 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým a zahustení vo vákuu sa odstráni asi 70 % rozpúšťadla. Vznikne zrazenina, ktorá sa oddelí filtráciou, premyje sa studeným etylacetátom a suší sa za vzniku 67,1 g výslednej zlúčeniny ako béžovej tuhej látky. Zlúčené filtráty sa zahustia vo vákuu za vzniku 88 g oleja. Kryštalizáciou z etanolu vznikne druhá porcia výslednej zlúčeniny ako 29,6 g béžovej tuhej látky.

‘H NMR (300 MHz, DMSO-d₆): delta 7,22 (m, 2H), 7,05 (m, 2H), 6,47 (m, 1H), 6,34 (m, 2H), 5,95 (m, 1H), 4,81 (sept, 1H, J = 6,8 Hz), 4,59 (dt, 1H, J = 27,2, 6,1 Hz), 4,4 (s, 2H), 3,77 (s, 3H), 3,3 (s, 2H), 0,96 (d, 6H, J = 6,8 Hz).

Medziprodukt 28

2-(2,4-Dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do 100 ml tetrahydrofuránu sa počas 10 minút súčasne pridajú roztoky 20 g (63,8 mmol) N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-2-fenylaminoacetamidu v 500 ml tetrahydrofuránu a 6,2 ml (63,8 mmol) malonyldichloridu v 500 ml tetrahydrofuránu. Vzniknutý reakčný roztok sa mieša 72 hodín pri teplote miestnosti a následne sa pridá 3,0 ml malonyldichloridu. Po ďalších 5 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozpusti v 300 ml metylénchloridu a dvakrát sa premyje 200 ml 1 N vodného roztoku uhličitanu sodného. Zlúčené organické podiely sa dvakrát premyjú 200 ml vody a 200 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a filtrujú sa vo vákuu. Vznikne 23,8 g surového produktu, ktorý sa dokonale rozotrie s dietyléterom. Vzniknutá tuhá látka sa čisti rýchlou chromatografiou na stĺpci pri elúcii 5 % roztokom metanolu v metylénchloride za vzniku 8,85 g béžovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (300 MHz, CDClj): delta 7,7 (s, 1H), 7,4 (m, 1H), 6, 9 - 7,3 (m, 7H), 4,97 (sept., 1H, J = 6,8 Hz), 4,4 (m, 1H),

3,81 (s, 3H), 3,78 (m, 1H), 3,4 (s, 2H), 1,06 (d, 6H, J = 6,8 Hz).

Medziprodukt 29

2- (2,4-Dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Zmes 3,5 g (9,48 mmol) 2-(2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]-diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyljacetamidu, 1,09 g (17,06 mmol) práškovej medi, 0,91 ml (9,48 mmol) 3-brómpyridínu a 1,11 g (11,37 mmol) octanu draselného v 80 ml dimetylformamidu sa 7 hodín zahrieva na teplotu 100 °C. Po pridaní ďalších 0,4 ml 3-brómpyridínu sa vzniknutá reakčná zmes mieša pri teplote 100 °C ďalších 14 hodín. Následne sa pridá 1,09 g (17,06 mmol) práškovej medi, 0,91 ml (9,48 mmol)

3- brómpyridínu a 1,11 g (11,37 mmol) octanu draselného a reakčná zmes sa 6 hodín zahrieva na teplotu 110 °C. Tuhý podiel sa oddelí filtráciou, filtrát sa zahustí vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozdelí do 150 ml etylacetátu a 150 ml 10 % vodného roztoku hydroxidu amónneho. Zlúčené organické podiely sa dvakrát premyjú 100 ml vody, 50 ml nasýteného roztoku chloridu sodného a sušia sa nad síranom horečnatým. Po zahustení vo vákuu vznikne surový produkt, ktorý sa dokonale rozotrie s dietyléterom za vzniku 2,56 g smotanovožltej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

’H NMR (300 MHz, CDClj) delta 7,86 (d, 1H, J = 8,1 Hz), 7,01 - 7,43 (m, 10H), 6,92 (d, 1H, J = 8,3 Hz), 5,05 (sept, 1H, J = 6,8 Hz), 4,22 (m, 2H), 3,88 (s, 3H), 3,58 (dd, 2H, J = 32,2,12,0 Hz), 1,06 (m, 6H).

Medziprodukt 30

2-(3-Azido-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyljacetamid

Do roztoku 750 mg (1,64 mmol) 2-(2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]-diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 15 ml tetrahydrofuránu s teplotou -78 °C sa po kvapkách počas 7 minút pridá 4,59 ml (2,29 mmol) 0,5 M roztoku hexametyldisilazidu draselného v toluéne. Vzniknutý roztok sa 17 minút mieša pri teplote -78 °C, pridá sa 632 mg (2,05 mmol) 2,4,6-triizopropylbenzénsulfonylazidu a reakčná zmes sa 4 minúty mieša pri teplote -78 °C. Po pridaní 0,235 ml kyseliny octovej sa reakčná zmes nechá zohriať na teplotu miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku surového produktu, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou na stĺpci pri elúcii 5 % roztokom metanolu v metylénchloride za vzniku 530 mg bezfarebnej peny výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (300 MHz, CDClj) delta 7,96 (d, 1H, J = 8,0 Hz),

6,91 - 7,43 (m, 11H), 5,05 (sept, 1H, J = 6,8 Hz), 4,42 (d,

1H, J = 12,1 Hz), 4,38 (s, 1H), 4,22 (d, 1H, J = 12,1 Hz),

3,88 (s, 3H), 1,06 (m, 6H).

SK 281433 Β6

Medziprodukt 31

2-(3 - Amino-2,4-dioxo-5 -pyridin-3 -y 1-2,3,4,5 -tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Zmes 530 mg (1,06 mmol) 2-(3-azido-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu a 53 mg 10 % paládia na aktívnom uhlí sa v atmosfére vodíka mieša v 50 ml etanolu 9 hodín. Po pridaní ďalších 53 mg 10 % roztoku paládia na aktívnom uhlí sa vzniknutá zmes 16 hodín mieša. Tuhý podiel sa odstráni filtráciou cez celit a filtrát sa zahusti vo vákuu za vzniku 520 mg výslednej zlúčeniny, ktorá sa v nasledujúcej syntéze použije bez ďalšieho čistenia.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 8,52 (m, 2H), 7,92 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 6,91 - 7,43 (m, 11H), 5,05 (sept, 1H, J = 6,8 Hz), 4,42 - 4,22 (m, 3H), 3,88 (s, 3H), 1,06 (m, 6H).

Medziprodukt 32

2-(2,4-Dioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do miešaného roztoku 400 mg (1,08 mmol) l-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)amino]-1,5-dihydrobenzo[b] [ 1,4]diazepín-2,4-diónu v 20 ml dimetylformamidu sa pridá 212 mg (2,16 mmol, 2,0 ekv.) octanu draselného, 206 mg (3,25 mmol, 3,0 ekv.) práškovej medi a 245 mg (2,62 mmol, 2 ekv.) 4-brómpyridínu. Vzniknutý roztok sa 7 hodín zahrieva pri teplote 122 °C, horúca reakčná zmes sa filtruje cez celit, filtračné sito sa premyje 10 ml metanolu a filtrát sa zahustí vo vákuu. Vzniknutý zvyšok sa zriedi 100 ml etylacetátu a päťkrát sa premyje 25 ml 5 % vodného roztoku hydroxidu amónneho. Organický podiel sa oddelí, suší sa nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Čistením produktu rýchlou chromatografiou na silikagéli pri elúcii zmesou etylacetátu, hexánov a hydroxidu amónneho v pomere 80 : 20 : 1 a následnou kryštalizáciou z etanolu vznikne 80 mg výslednej zlúčeniny s výťažkom 16 %.

'H NMR (Acctón-dý, 300 MHz): delta 8,57 (d, 1H, J = 4,6 Hz), 7,46 (m, 3H), 7,31 (m, 4H), 6,97 (m, 3H), 4,86 (sept, 1H), 4,48 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 4,21 (d, 1H, J = 16,8 Hz), 3,86 (s, 3H), 3,67 (d, 1H, J = 12,2 Hz), 3,22 (d, 1H, J = 12,2 Hz), 1,02 (m, 6H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/z 459,2 (MH⁺).

Medziprodukt 33

2-(3-Amino-2,4-dioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5,5a,9a-hexahydrobenzo[b] [1,4]diazepin-1 -yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do miešaného roztoku 80 mg (0,175 mmol) 2-(2,4-dioxo-5-pyridin-4-y 1-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [ 1,4] diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 3 ml dimetylformamidu sa pri teplote 0 °C pridá 0,210 ml (0,209 mmol, 1,2 ekv.) 1 N roztoku bis(trimetylsilyl)amidu sodného v tetrahydrofuráne. Po 0,5 hodine miešania sa pridá 62 mg (0,262 mmol, 1,5 ekv.) O-(difenylfosfinyl)hydroxylamínu (Harger, J. C. S. Perkin I, 3284 až 3288 (1981)) a reakčná zmes sa 16 hodín mieša pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa filtruje a filtrát sa zahustí vo vákuu. Surový produkt sa čistí po absorpcii na 5 g silikagélu rýchlou chromatografiou pri dokonalej elúcii 100 ml etylacetátu a 100 ml zmesi dichlórmetánu a metanolu v pomere 19:1. Zodpovedajúce frakcie sa zlúčia a zahustia vo vákuu za vzniku číreho skla výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/z 474,2 (MH⁺).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes dichlórmetánu a metanolu v pomere 19: 1): R_F = 0,31.

Medziprodukt 34

2-Amino-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Roztok 2,86 g (10 mmol) 2-bróm-N-izopropyl-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 100 ml metanolu sa nasýti amoniakom pri teplote 0 °C a nechá sa 3 dni pri teplote miestnosti v uzavretej nádobe. Metanol a amoniak sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozpustí v 100 ml chloroformu a dvakrát sa premyje 50 ml vody. Organický podiel sa suší nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a zahustí vo vákuu. Po sušení vo vysokom vákuu vznikne 2,7 g oleja výslednej zlúčeniny.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 6,96 (m, 4H), 4,99 (m, 1H), 3,84 (s, 3H), 2,97 (s, 2H), 1,58 (s, 2H), 1,05 (d, 6H, J = 6,6 Hz).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (ESI): m/e 223 (MH⁺).

Medziprodukt 35

2-(4-Fluór-2-nitrofenylamino)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Zmes 9,06 g (60 mmol) 2,5-difluómitrobenzénu. a 12,64 g (60 mmol, 1,0 ekv.) 2-amino-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu sa pridá do 225 ml zmesi etanolu a vody v pomere 2:1. Vzniknutá reakčná zmes sa refluxtrje pod dusíkom a energicky sa cez noc asi 16 hodín mieša. Vzniknutá suspenzia sa ochladí na teplotu miestnosti, filtruje sa a premyje zmesou vody a etanolu v pomere 2 : 1. Mokrá tuhá látka sa rozpustí v metylénchloride, suší sa nad bezvodým síranom sodným a odparuje sa vo vákuu. Zvyšok sa rozotrie s hexánom, filtruje sa a premyje hexánom. Produkt sa suší pod vysokým vákuom za vzniku 9,32 g oranžovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (300 MHz, CDC1₃) delta 7,89 (dd, 1H, J = 3,1,

9,3 Hz), 7,12 (m, 3H), 6,99 (m, 2H), 6,35 (dd, 1H, J = 4,8, 9,2 Hz), 5,03 (m, 1H), 3,89 (s, 3H), 3,57 (s, 2H), 1,09 (d, 6H, J = 6,8 Hz).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (ESI): m/e 362 (MH⁺).

Medziprodukt 36

2-(2-Amino-4-fluórfenylamino)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Roztok 30 ml etylacetátu, 175 ml etanolu a 2,50 g (6,92 mmol) 2-(4-fluór-2-nitrofenylamino)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu sa zlúči s 0,25 g 10 % vodného roztoku paládia na aktívnom uhli a hydrogenuje sa 16 hodín v atmosfére vodíka. Reakčná zmes sa filtruje a odparí vo vákuu za vzniku 1,91 g tuhej látky výslednej zlúčeniny. 'H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 7,03 (m, 2H), 6,94 (m, 2H), 6,36 (m, 3H), 4,99 (m, 1H), 4,37 (b, 3H), 3,86 (s, 3H), 3,39 (s, 2H), 1,07 (d, 6H, J = 6,8 Hz).

SK 281433 Β6

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (ESI): m/e 332 (MH⁺).

Medziprodukt 37

2-(7-Fluór-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-1 -yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Roztok 1,724 g (5,20 mmol) 2-(2-amino-4-fluórfenylamino)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 15 ml tetrahydrofuránu sa vloží do pridávacieho lievika. Do ďalšieho pridávacieho lievika sa pridá roztok 0,506 ml (5,20 mmol, 1,0 ekv.) malonyl dichloridu v 15 ml tetrahydrofuránu. Tieto roztoky sa súčasne počas 30 minút po kvapkách pri teplote miestnosti pridávajú pod dusíkom počas energického miešania do 100 ml tetrahydrofuránu. Po 20 minútach miešania sa pri teplote miestnosti naraz pridá ďalších 0,506 ml (5,20 mmol, 0,1 ekv.) malonyldichloridu. Vzniknutá reakčná zmes sa nechá 2,5 hodiny miešať, potom sa odparí vo vákuu za vzniku zvyšku, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli pri elúcii zmesou etylacetátu a hexánu v pomere 1:3a následne 3:1. Zodpovedajúce frakcie sa zlúčia, odparia vo vákuu a vzniknutá tuhá látka sa suší vo vysokom vákuu za vzniku 1,061 g žltohnedej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

'H NMR (300 MHz, CDC1₃): delta 8,14 (b, 1H), 7,45 (dd, 1H, J = 5,5, 9,2 Hz), 7,29 (m, 1H), 7,05 (m, 1H), 6,94 (m, 3H), 6,78 (m, 1H), 4,99 (m, 1H), 4,37 (d, 1H, J = 16,4 Hz),

3,82 (s, 3H), 3,69 (d, 1H, J = 16,0 Hz), 3,4 (m, 2H), 1,09 (d, 6H, J = 6,8 Hz).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 400 (MH⁺).

Medziprodukt 38

2-(7-Fluór-2,4-dioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [ 1,4]diazepin-3-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Zmes 0,880 g (2,20 mmol) 2-(7-fluór-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu, 420 mg (6,61 mmol, 3 ekv.) medi, 476 mg (4,85 mmol, 2,2 ekv.) octanu draselného a 0,290 ml (4,85 mmol, 2,2 ekv.) 3-brómpyridínu v 10 ml dimetylformamidu sa pri teplote 100 °C zahrieva pod dusíkom 3 hodiny. Po pridaní 0,132 ml (2,43 mmol, 1,1 ekv.) 3-brómpyridínu sa reakčná zmes nechá stáť ďalšie dve hodiny. Po ochladení na teplotu miestnosti a filtrácii v sklenenom lieviku so sintrom sa odparuje za vzniku zvyšku, ktorý sa rozdelí do etylacetátu a 100 ml 5 % vodného roztoku hydroxidu amónneho. Podiely sa oddelia a organický podiel sa premyje 100 ml 5 % vodného roztoku hydroxidu amónneho a potom nasýteným vodným roztokom chloridu sodného. Organický podiel sa extrahuje trikrát 1 M roztokom kyseliny chlorovodíkovej. Kyslé podiely sa zlúčia a neutralizujú sa pridaním 1 M vodného roztoku hydroxidu sodného. Zmes sa dvakrát extrahuje metylénchloridom. Metylénchloridové podiely sa zlúčia, sušia sa nad bezvodým síranom sodným, filtrujú sa a zahustia odparovaním vo vákuu. Vzniknutý zvyšok sa rozotrie s hexánom a potom sa zahustí vo vákuu za vzniku 0,705 g žltohnedej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

‘H NMR (300 MHz, CDClj): delta 8,60 (m, 2H), 8,08 (b, 1H), 7,54 (b, 1H), 7,39 (m, 1H), 7,15 (m, 2H), 7,0 (m, 3H), 6,57 (dd, 1H, J = 2,7, 9,2 Hz), 4,95 (m, 1H), 4,32 (d, 1H, J = 17,9 Hz), 4,14 (d, 1H, J = 17,8 Hz), 3,85 (s, 3H), 3,61 (d, 1H, J = 12,1 Hz), 3,52 (d, 1H, J = 12,1 Hz), 1,06 (d, 6H, J = 6,8 Hz).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 477 (MH*).

Medziprodukt 39 terc.Butylester kyseliny 3-nitrobenzoovej

Do roztoku 5,00 g (26,94 mmol) 3-nitrobenzoylchloridu v 70 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa pridá

3,82 g (32,30 mmol) terc.butoxidu draselného ako tuhej látky. Vzniknutá reakčná zmes sa pod dusíkom 2 hodiny mieša, zahustí sa vo vákuu a rozdelí do dichlórmetánu a vody. Po oddelení podielov sa vodný podiel extrahuje etylacetátom. Organické podiely sa zlúčia, sušia sa nad bezvodým síranom horečnatým, filtrujú sa a zahustia sa vo vákuu. Surový produkt sa čistí po absorpcii na silikagéli rýchlou chromatografiou pri elúcii gradientom koncentrácií od 0 do 5 % roztoku etylacetátu v n-hexáne. Podiely obsahujúce požadovanú zlúčeninu sa zlúčia, zahustia sa vo vákuu a sušia sa vo vysokom vákuu za vzniku 3,82 g oleja výslednej zlúčeniny.

’H NMR (300 MHz, CDClj): delta 8,79 (m, 1H), 8,35 (m, 2H), 7,62 (m, 1H), 1,63 (s, 9H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (Cl): m/e 224 (MH⁺).

Medziprodukt 40 terc.Butylester kyseliny 3-aminobenzoovej

Roztok 3,77 g (16,9 mmol) terc.butylesteru kyseliny 3-nitrobenzoovej v 50 ml absolútneho etanolu sa zlúči s 0,30 g 10 % vodného roztoku paládia na aktívnom uhlí a hydrogenuje sa v atmosfére plynného vodíka asi 3 hodiny. Reakčná zmes sa filtruje cez infuziórovú hlinku a zahustí sa vo vákuu za vzniku oleja, ktorý sušením vo vysokom vákuu kryštalizuje za vzniku 3,28 g žltohnedej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

*H NMR (300 MHz, CDClj) delta 7,38 (d, 1H, J = 8,0 Hz), 7,29 (m, 1H), 7,19 (m, 1H), 6,83 (m, 1H), 1,58 (s, 9H). Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (Cl): m/e 194 (MH⁺).

Medziprodukt 41 terc.Butylester kyseliny 3-[(4-nitrofenyl)oxykarbonyl]aminobenzoovej

Do roztoku 3,15 g (16,24 mmol) terc.butylesteru kyseliny 3-aminobenzoovej a 1,379 ml (17,05 mmol) bezvodého pyridínu v 25 ml bezvodého dichlórmetánu sa pod dusíkom pri teplote 0 °C až 5 °C pridá po kvapkách počas 20 minút 25 ml roztoku 4-nitrofenylchlórformátu v bezvodom dichlórmetáne. Reakčná zmes sa zohreje na teplotu miestnosti a cez noc sa mieša. Po premytí 1 M vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej sa reakčný roztok suší nad bezvodým síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu za vzniku tuhej látky. Surový produkt sa uvedie počas 30 minút do suspenzie v n-hexáne, filtruje sa a suší vo vysokom vákuu za vzniku 4,460 g bielej kryštalickej látky výslednej zlúčeniny.

’H NMR (300 MHz, CDClj): delta 8,30 (m, 2H), 7,92 (m,

1H), 7,78 (d, 2H, J = 7,5 Hz), 7,43 (m, 3H), 7,11 (bs, 1H),

1,69 (s, 9H).

SK 281433 Β6

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (L-SIMS): m/e 358 (M⁺).

Medziprodukt 42

2-(3-Azido-7-fluór-2,4-dioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5-tctrahydrobenzo[b] [1,4] diazepin-3 -y lJ-N-izopropy l-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Na roztok 262 mg (0,550 mmol) 2-(7-fluór-2,4-dioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]-diazepin-3-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 5 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa pri teplote -78 °C a pod dusíkom pôsobí 0,5 M roztokom 1,54 ml (0,770 mmol, 1,4 ekv.) bis(trimetylsilyl)amidu draselného v toluéne. Po 15 minútach miešania sa pridá 212 mg (0,687 mmol, 1,25 ekv.) 2,4,6-triizopropylbenzénsulfonylazidu (J. Org. Chem. 1984, 49, 1430 až 1434). Po 4 minútach miešania sa reakcia skončí pridaním 78,6 ml (1,38 mmol, 2,5 ekv.) ľadovej kyseliny octovej a zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti. Po odparovaní vo vákuu sa vzniknutý zvyšok čistí na silikagéli rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a hexánu v pomere 1:1. Zodpovedajúce podiely sa zlúčia, odparia sa vo vákuu a sušia vo vysokom vákuu za vzniku 170 mg výslednej zlúčeniny ako amorfnej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 518 (MH⁺).

Chromatografia na tenkej vrstve oxidu kremičitého (zmes etylacetátu a hexánu v pomere 3 : 1): Rf = 0,68.

Medziprodukt 43

2-(3-Amino-7-fluór-2,4-dioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]diazepin-3-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyljacetamid

Roztok 152 mg 2-(3-azido-7-fluór-2,4-dioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][l,4]-diazepin-3-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 10 ml etylacetátu sa zlúči so 60 mg 10 % vodného roztoku paládia na aktívnom uhlí. Po 16 hodinách hydrogenácie v atmosfére plynného vodíka sa zmes filtruje, odparuje vo vákuu a čistí na silikagéli rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou metanolu a etylacetátu v pomere 3 : 7. Zodpovedajúce podiely sa zlúčia, odparia vo vákuu a sušia vo vysokom vákuu za vzniku 82 mg peny výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 492 (MH⁴).

Chromatografia na tenkej vrstve oxidu kremičitého (zmes dichlórmetánu a metanolu v pomere 95 : 5): R_f = 0,30.

Farmakologické skúšky

Tableta:

účinná látka 50mg bezvodá laktóza USP 163mg mikrokryštalická celulóza NF69 mg želatínový škrob Ph Eur. 15mg stearát horečnatý USP____________3mg celková hmotnosť 300mg vhodných razniciach a potom sa potiahnu povlakom acetátftalátu celulózy.

Skúška väzby na receptory CCK-A

Príprava tkaniva

Pripraví sa 0,3 M roztok sacharózy a 2,0 M roztok sacharózy a cez noc sa ochladí na teplotu 4 °C. Nasledujúci deň sa pridajú inhibítory. Výsledná koncentrácia trypsínového inhibítora zo sójových bôbov je 0,01 % (50 mg/500 ml sacharózy) a fenylmetylsulfonylfluoridu je 100 mM (8,5 mg/500 ml sacharózy).

Laboratórne potkany sa usmrtia dekapitáciou gilotínou. Vonkajšia brušná stena sa zvlhčí metanolom a kožušina a koža sa odstránia. Brucho sa otvorí, opatrne sa oddelí pankreas, ktorý sa umiestni do 50 ml kadičky, obsahujúcej 0,3 M roztok sacharózy. Po zobratí všetkých pankeasov sa odstráni tuk a lymfatické uzliny. Pankreatické tkanivo sa rozdelí na asi 4,0 g podiely do 30 ml kadičiek obsahujúcich 1,0 ml 0,3 M roztoku sacharózy.

Pri teplote 4 °C sa pankreatické tkanivo rozdelí nožnicami na malé časti a zriedi sa v pomere hmotnosti a objemu 1 : 110 0,3 M roztokom sacharózy. Jednotlivé diely tkaniva sa homogenizujú v chladenom homogenizačnom zariadení Wheaton 4 pohybmi piesta (hore a dolu) „B“ a následne 4 pohybmi piesta (hore a dolu) „A“. Homogenát sa filtruje cez 2 vrstvy mulu do chladenej 500 ml kadičky a potom sa za stáleho miešania zriedi 2,0 M roztokom sacharózy pri dosiahnutí výslednej koncentrácie 1,3 M roztoku homogenátu v sacharóze. Vzniknutý 1,3 M roztok homogenátu sa rozdelí do 18 tenkostenných polyalomérových skúmaviek s objemom 36 ml umiestnených v ľadovom kúpeli (približne 30 ml homogenátu v jednej skúmavke). Do každej skúmavky sa pridá 0,3 M roztok sacharózy tak, aby hladina kvapaliny bola asi 0,5 cm pod horným okrajom skúmavky. Vzorky sa 3 hodiny centrifugujú pri teplote 4 °C v ultracentrifugačnom zariadení Sorvall RC70 pri otáčkach 27 500 otáčok za minútu (100 000 g). Vrstva tvoriaca rozhranie sa zoberie do chladeného odmemého valca, zriedi sa a zmieša so studenou destilovanou vodou na výsledný objem 312 ml. Tento roztok sa odstreďuje pri teplote 4 °C (100 000 g) 50 minút. Usadenina sa znova uvedie do suspenzie v pufri KRH, suspenzia sa homogenizuje v homogenizačnom zariadení Wheaton s objemom 15 ml štyrmi pohybmi hore a dolu piesta „A“ (tesnejšie). Homogenát sa vloží do polykarbonátových baniek s objemom 2 až 27 ml a pri teplote 4 °C sa centrifuguje 30 minút (100 000 g). Usadenina sa uvedie znova do suspenzie (1 ml pufra KRH/g pôvodného tkaniva). Suspenzia sa vloží do homogenizačného zariadenia zodpovedajúcej veľkosti a suspenzia sa homogenizuje štyrmi pohybmi hore a dolu piesta „A“. Vzniknutý homogenát sa uloží rozdelený do mikrocentrifugačných skúmaviek v 1 ml podieloch pri teplote -70 °C.

PuferKRH:

pH 7,4 pri teplote 4 °C

Cez sito s veľkosťou ôk 500 mikrónov sa preoseje účinná látka, mikrokryštalická celulóza, laktóza a škrob. Po zmiešaní vo vhodnom miešacom zariadení sa stearát horečnatý preoseje cez sito s veľkosťou ôk 250 mikrónov a zmieša sa s aktívnou látkou. Zo zmesi sa lisujú tablety vo

Zložka «jole	.lculová hmotnosť	3/1
25 nM HEPES	260,3	6,51
104 mM chlorid sodný	58,44	6,08
5 nM chlorid draselný	74,56	0,37
1 tnM fosforečnan draselný	136,09	0,14
1,2 mM síran horečnatý	246,48	0,30
2 mM chlorid vápenatý	110,99	0,22
2,5 mM gliikóza	180,16	0,45
0,2% BSA	-	2,00
0,1 mM PUSE*	174,2	0,017
0,01% STľ	-	0,10

’čerstvé inhibítory pridané v deň pokusu

Skúška

Skúmané látky sa desaťkrát zriedia v pufri pre väzbu (assay binding buffer) z koncentrácie zásobného roztoku na výslednú koncentráciu pri skúške.

Zmes 50 ml zlúčeniny podľa súčasného vynálezu + 400 ml pufra + 25 ml [¹²⁸I] sulfátového CCK-8 označeného Boltonovým a Hunterovým reakčným činidlom (Amersham, 2000 Cl/mmol) + 25 ml pripravených pankreatických membrán potkana sa 30 minút inkubuje pri teplote 5 °C a za stáleho jemného prctrepávania počas celej inkubácie.

Na určenie nešpecifických väzieb sa použije 1 mM roztok L-364718 (výsledná koncentrácia).

Reakcia sa zastaví použitím prístroja Brandell Celí Harvester, ktorý sa premyje trikrát vždy 3 ml ľadovo studeného (4 °C) pufra pre väzbu (assay binding buffer).

Tkanivo sa uloží na filtračný papier Whatman GF/B, ktorý sa vopred navlhčí pufrom pre väzbu a impulzy z filtračného papiera sa merajú pomocou počítača gama žiarenia.

Skúška väzby na receptory CCK-B

Príprava tkaniva

Morčatá mužského pohlavia s hmotnosťou 250 až 300 g (Hartley, Charles River) sa usmrtia dekapitáciou. Mozgové tkanivo sa uloží do pufra pre väzbu pri teplote 4 °C (pufer = % 50 mM roztok Tris v kyseline chlorovodíkovej s pH 7,4). Mozgová kôra sa oddelí a uloží do pufra s teplotou 4 °C. Určí sa celková vlhká hmotnosť mozgovej kôry a tkanivo sa zriedi v pomere hmotnosti tkaniva a objemu pufra 1 : 10.

Mozgová kôra sa rozdelí na malé časti v zariadení Tekmar Tissuemizer. S použitím motorového skleneno-teflônového homogenizačného zariadenia sa pri piatich pohyboch piesta hore a dolu vyrobí homogenát tkaniva s pufrom. Táto príprava prebieha pri teplote 4 °C.

Membrány sa oddelia centriftigáciou v zariadení Sorvall RC5C pri teplote 4 °C s použitím SA 600 rotora s rýchlosťou otáčok 16 000 otáčok za minútu (maximálne 47 800 g). Vrstva membrán sa uloží a supematant sa odstráni. Usadeniny sa zlúčia a uvedú sa do suspenzie v pufri pri teplote 4 °C tak, ako je už uvedené pri rovnakom postupe prípravy homogenátu v skleneno-teflónovom homogenizačnom zariadení. Vzniknuté homogenáty sa 15 minút odstreďujú pri rýchlosti 16 000 otáčok za minútu (47 800 g maximálne, 36 592 g priemerne a pri teplote 4 °C. Supematant sa odloží a usadeniny sa uložia, zlúčia sa s pufrom do výsledného objemu 300 ml a rozdrvia sa v zariadení Tekmar Tissuemizer. Počiatočný obsah bielkoviny sa určí skúškou na bielkovinu (Biorad). Pridávaním pufra sa objem suspenzie upraví tak, aby výsledná koncentrácia, určená pomocou skúšky na bielkovinu (Biorad) bola približne 4,0 mg/ml. Výsledná suspenzia sa uloží v 4,0 ml podieloch do skúmaviek z plastu pri teplote -70 °C.

Skúška

Pufer s pH 7,4 obsahuje:

20mMHEPES mM EGTA

118 mMNaCl 5mMKCl 5 mM MgCl₂ 0,05% BSA

Filtre Skatron sa 1 hodinu pred uskutočnením skúšky nechajú nasiaknuť pufrom obsahujúcim 0,1 % roztok albumínu hovädzieho séra (BAS).

Pripravia sa čerstvé roztoky 100 mM Bestatínu a 3 mM Fosforamidonu. Výsledná koncentrácia pri skúške bude 10 mM.

Skúmané látky sa desaťkrát zriedia v pufri pre väzbu (assay binding buffer) z koncentrácie zásobného roztoku na výslednú koncentráciu pri skúške. Zriedi sa [^l28I]-sulfátový CCK-8 označený Boltonovým-Hunterovým činidlom.

Pri teplote miestnosti sa 150 minút inkubuje 25 ml 100 mM roztoku Bestatinu, 25 ml 3 mM roztoku Fosforamidonu, 25 ml zlúčeniny podľa súčasného vynálezu, 50 ml rádioligandu, 25 ml pufra a 100 ml bunkových membrán z morčacej mozgovej kôry.

Na uskutočnenie slepej skúšky a určenie hodnoty B_o sa zlúčenina podľa súčasného vynálezu nahradí pufrom pre väzbu.

Na určenie veľkosti väzby na filter sa zlúčenina podľa súčasného vynálezu a bunkové membrány z morčacej mozgovej kôry nahradia pufrom pre väzbu.

Na určenie nešpecifických väzieb sa zlúčenina podľa súčasného vynálezu nahradí 1 mM roztokom sulfátového CCK-8 (Sigma).

Reakcia sa zastaví filtráciou automatickým zariadením Skatron Celí Harvester. Filtre sa premyjú pufrom s teplotou 4 °C. Umiestnia sa do skúmaviek a impulzy sa odčítajú použitím počítača gama žiarenia.

Skúšky s izolovaným žlčníkom morčaťa

Príprava tkaniva

Z morčiat usmrtených zlomením väzu boli vybraté žlčníky. Izolované žlčníky boli očistené od lipnúceho spojivového tkaniva a rozrezané na dva prstence z každého zvieraťa, prstenec mal dĺžku 2 až 4 mm. Prstence sa uložia do fyziologického roztoku s nasledujúcim zložením:

chlorid sodný	118,4 mM,
chlorid draselný	4,7 mM,
vodný síran horečnatý	1,2 mM,
vodný chlorid vápenatý	2,5 mM,
dihydrogénfosforečnan
draselný	1,2 mM,
hydrogénuhličitan sodný	25 mM,
dextróza	11,1 mM

Roztok sa udržuje na teplote 37 °C za prevzdušňovania zmesou 95 % kyslíka a 5 % oxidu uhličitého. Tkanivá boli spojené zlatými mostíkmi a na koncoch napojené drôtikmi z nehrdzavejúcej ocele na prevodníky, izometricky zaznamenávajúce silu sťahu (Grass, Model FT03 D). Odpovede potom boli zaznamenávané na polygraf (Grass, Model 7E).

Jedna vzorka tkaniva od každého morčaťa slúžila ako kontrolná vzorka v rovnakom rozpúšťadle a počas rovnakého času, ale bez použitia skúmaných účinných látok.

Skúška

Prstence boli postupne v priebehu 120 minút zaťažené na základné napätie 1 g a toto napätie bolo udržované v priebehu celej skúšky. V priebehu úpravy tohto napätia boli prstence vystavené pôsobeniu acetylcholínu (ACH, 10‘⁶M), acetylcholín bol pridaný celkom štyrikrát na overenie kontraktility tkaniva. Potom boli preparáty vystavené pôsobeniu submaximálnej dávky sulfátu CCK-8 (Sigma, 3 x x 10'⁹ M). Po dosiahnutí stálej odpovede boli preparáty rýchle trikrát premyté a potom premývané každých 5 až 10 minút počas 1 hodiny tak, aby bola znova dosiahnutá stála základná línia pri uvedenom zaťažení.

Skúmané účinné látky boli rozpustené v dimetylsulfoxide DMSO a roztok bol zriedený vodou. Každá zlúčenina sa podrobí trom meraniam. Potom bola vykonaná skúška pomocou kumulatívnej krivky závislosti účinku od koncentráciei pre každú zo skúmaných látok (10 ⁿ až 3 x x 10‘⁶ M), potom bola zaznamenaná krivka závislosti účinku od koncentrácie pre sulfát CCK-8 (1O¹⁰ až 10’⁶ M) v prítomnosti najvyššej dávky skúmanej látky. Nakoniec bolo pridaných 10 mM ACH na vyvolanie maximálnej kontrakcie.

Koncentrácia zlúčenín podľa súčasného vynálezu počas pokusov je 1 μΜ a výsledky sú uvedené ako % z maximálnej odpovede na sulfátový CCK-8.

Príklad č. Veíkosť kontrakcie &

Paradigma vyvolaná 18 hodinovým hladom

Skúšky na potkanoch po odobratí krmiva na 18 hodín

Potkanie samce Long-Evans s hmotnosťou 300 až 375 g boli aklimatizované počas aspoň jedného týždňa v zavesených klietkach z pletiva z nehrdzavejúcej ocele s podlahovou plochou 17,8 x 25,4 cm a s výškou 17,8 cm a zvieratám bola podávaná voda podľa ľubovôle a krmivo (Lab Vlox, Purina Rodent Laboratory Chow šarža 5001), samce boli chované pri cykle 12 hodín svetlo a 12 hodín tma, svetlo trvalo od 6.00 do 18.00 hodín, teplota bola približne 22,8 °C. Pred vykonaním skúšky bolo prerušené podávanie tuhého krmiva o 16.00 hodine poobede, ale voda bola ďalej podávaná podľa ľubovôle. Ďalšie ráno sa o 9.00 hodine potkany zvážia. O 9 hodine 45 minútach im bola podaná skúmaná látka alebo nosné prostredie (2 ml/kg) intraperitoneálnou injekciou, perorálne alebo zavedenou dvanástnikovou sondou. Potom boli potkany vrátené do svojich klietok. Krmivo bolo opäť podávané od 10.00 hodiny dopoludnia. O 10 hodine 30 minúte bolo zvážené zvyšné krmivo a trus.

Zlúčeniny podľa súčasného vynálezu sú v terapeutických dávkach netoxické. Pri aplikácii terapeutických dávok laboratórnym potkanom sa nezistili žiadne vedľajšie účinky.

Claims (13)

1. 5-Heterocyklo-l,5-benzodiazepinové deriváty všeobecného vzorca (I) a ich fyziologicky prijateľné soli a solváty, v ktorých

X znamená atóm vodíka, trifluórmetyl, alkyl, alkyltioskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo atóm halogénu,

R¹ znamená skupinu všeobecného vzorca (II) alebo -NR^{1 2 3 4}R^{5 6 7}

1. heterocyklický zvyšok viazaný v polohe 2, ktorý sa volí zo skupiny pyrolový, tetrahydropyrolový, indolový, benzofuránový, tiofénový, benzotiofénový, indolínový, chinolínový alebo 4-oxobenzopyránový zvyšok, pričom pyrolový, tetrahydropyrolový, indolový alebo indolínový zvyšok sú prípadne substituované na dusíkovom atóme kruhu skupinou R⁸ v ďalej uvedenom význame a indolový, indolinový, chinolínový, benzofuránový, benzotiofénový alebo 4-oxobenzopyránový zvyšok sú prípadne substituované na benzénovom kruhu skupinou R⁹ v ďalej uvedenom význame alebo

2. fenyl, prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi nezávisle volenými zo skupiny atóm halogénu, hydroxyskupina, kyanoskupina, karboxyskupina, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -O-(CH₂C₆H₅), -COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, aminoskupina, dimetylamino skupina, -NHR¹⁰, 1-pyrolidinyl alebo tetrazolyl, alebo

3. pyridín alebo pyridinyl, prípadne nezávisle monoalebo disubstituovaný substituentmi zo skupiny atóm halogénu, metyl, hydroxyskupina, nitroskupina, kyanoskupina, karboxyskupina, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -O(CH₂C₆H₅), -COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, aminoskupina alebo dimetylaminoskupina, alebo

4. NHR¹¹, kde R¹¹ má ďalej uvedený význam alebo znamená 7-indazolyl, obsahujúci na dusíkovom atóme v polohe 1 skupinu R¹⁰,

SK 281433 Β6

R³ znamená heterocyklická skupinu viazanú na zvyšok molekuly cez atóm uhlíka v kruhu a volenú zo skupiny pyridyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, pyrazinyl, fúranyl, tiofenyl, pyrolyl, oxazolyl, tiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, izoxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiazolyl, tiadiazolyl, pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl alebo tiomorfolinyl, tieto heterocyklické skupiny sú pripadne substituované až troma rovnakými alebo rôznymi substituentmi zo skupiny atóm halogénu, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, nitroskupina, karboxyskupina, alkoxykarbonyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, alkoxyskupina alebo alkyltioskupina vždy s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoskupina, alkylaminoskupina alebo dialkylaminoskupina vždy s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylových častiach,

R⁴ nezávisle znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 6 atómami uhlíka, fenyl, -(CH₂)_p CN alebo -(CH₂)_pCOO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti a

R⁵ nezávisle znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 6 atómami uhlíka, benzyl, fenyl, prípadne nezávisle substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi zo skupiny alkyl s 1 až 3 atómami uhlíka, prípadne substituovaným jedným alebo väčším počtom atómov fluóru, kyanoskupinou, hydroxyskupinou, dimetylaminoskupinou, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -O(CH₂C₆H₅), -NH-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka,

-COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -N(alkyl)₂ s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrolidinyl, morfolinyl alebo atóm halogénu, alebo

R⁴ znamená alkyl s 1 až 2 atómami uhlíka a

R^s znamená fenyl substituovaný v polohe 2 alebo 4 atómom chlóru, metylovou skupinou, metoxyskupinou alebo metoxykarbonylovou skupinou,

R^s znamená atóm vodíka alebo metyl,

R⁷ znamená atóm vodíka, hydroxyskupinu, atóm fluóru, dimetylaminoskupinu, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo skupinu -O(CH₂C₆H₅),

R⁸ znamená skupinu -(CH₂)_bCOOH,

R⁹ znamená metyl, atóm chlóru, nitroskupinu, hydroxyskupinu, metoxyskupinu alebo skupinu -NHR¹⁰,

R¹⁰ znamená atóm vodíka, acetyl, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -SO₃H, -SO₂CH₃, -SO₂CF₃ alebo -SO₂C₆H_s, alebo alkoxykarbonyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti,

R¹¹ znamená fenyl, prípadne nezávisle mono- alebo disubstituovaný substituentmi zo skupiny atóm fluóru, trifluórmetoxyskupina, alkyltioskupina s 1 až 4 atómami uhlíka, -(CH2)cCOOH, -(CH2)cCOO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH2)tSCH3, -(CH2)cSOCH3, -(CH2)cSO2CH3, -(CH2)cCONH2, -sch2cooii, -CONH(SO2CH3), -CONH(SO2CF3), -(CH2)cN(alkyl)2 s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH2)cNH(SO2CF3), -(CH2)cN-(SO2CF3)-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH2)cSO2NHCO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH2)cSO2N-alkyl-CO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v každej alkylovej časti, -(CH2)cCONHSO2-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH2)cCON-alkyl-SO2-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v každej alkylovej časti, -(CH2)cOR^l2-(CH2)_cNHR¹⁰ alebo fenyl, monosubstituovaný substituentom zo skupiny -(CH₂)_c-tetrazolyl, -(CH2)_c-karboxamidotetrazolyl alebo -(CH₂)_c-pyrolidinyl, alebo znamená R¹¹ pyridin alebo pyridinyl, prípadne nezávisle mono- alebo disubstituované substituentmi zo skupiny atóm halogénu, metyl, hydroxyskupina, nitroskupina, kyanoskupina, karboxyskupina, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoskupina, dimetylaminoskupina alebo -NHR¹⁰,

R¹² znamená atóm vodíka, alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, -CH₂C₆H_S, -CH₂COOH, -CH₂CONH₂, -CH₂CONH-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej Časti, -CH₂CON(alkyl)₂ s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo niektorou zo skupín /—\ ! 10

-(CH^CO-N^O alebo -(Ciy.CCMí^N-R z znamená celé číslo 1 alebo 2, n znamená celé číslo 1 alebo 2, p znamená celé číslo 1 až 4, b znamená celé číslo 0 až 3 a c znamená celé číslo 0 alebo 1.

2. 5-Heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty podľa nároku 1, v ktorých R³ znamená pyridyl, pyrimidinyl alebo l,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-ylovú skupinu.

3. 5-Heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1 alebo 2, v ktorých R³ znamená 3-pyridylovú skupinu.

4. 5-Heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca (I) podľa niektorého z nárokov 1 až 3, v ktorých R⁴ znamená propyl alebo izopropyl a R⁵ znamená fenyl prípadne substituovaný v polohe para hydroxyskupinou, metoxyskupinou, atómom fluóru, dimetylaminoskupinou, pyrolidínovou skupinou alebo morfolínovou skupinou.

5. 5-Heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca (I) podľa niektorého z nárokov 1 až 4, v ktorých R⁴ znamená izopropyl a R⁵ znamená 4-metoxyfenyl.

6. 5-Heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca (I) podľa niektorého z nárokov 1 až 5, v ktorých R² znamená indolovú skupinu, prípadne substituovaný fenyl alebo skupinu NHR”.

7. 5-Heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca (I) podľa niektorého z nárokov 1 až 6, v ktorých R² znamená indolovú skupinu alebo skupinu NHR¹¹, v ktorej R¹¹ znamená fenyl alebo 3-karboxyfenyl.

8. 5-Heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca (I) podľa niektorého z nárokov 1 až 7, v ktorých X znamená atóm vodíka alebo fluóru.

9. 5-Heterocyklo-l,5-benzodiazepínový derivát všeobecného vzorca (I), podľa nároku 1, ktorým je (l-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)-karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][l,4]diazepin-3-yljamid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej a jeho enantioméry.

10. 5-Heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca (I), podľa niektorého z nárokov 1 až 9 na použitie na liečebné účely.

11. Použitie 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínových derivátov všeobecného vzorca (I), podľa niektorého z nárokov 1 až 9 na výrobu farmaceutických prostriedkov na liečenie stavov, pri ktorých je potrebné dosiahnuť moduláciu účinkov gastrínu alebo CCK.

12. Farmaceutický prostriedok, vyznačujúci sa t ý m , že ako účinnú zložku obsahuje 5-heterocyklo-1,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca (I) podľa niektorého z nárokov 1 až 9 v zmesi s aspoň jedným fyziologicky prijateľným nosičom alebo pomocnou látkou.

13. Spôsob výroby 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínových derivátov všeobecného vzorca (I) podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že sa

a) nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca (III)

SK 281433 Β6 kde R¹, R³, X a z majú význam uvedený vo vzorci (I), so zlúčeninou všeobecného vzorca (IV)

R*'Y (IV), kde

Y znamená skupinu -NCO, -NHCOC1 alebo -NHCOR“, kde R“ znamená fenoxyskupinu, substituovanú nitroskupinu alebo 1-imidazolovú skupinu a

R¹¹ má význam uvedený vo vzorci (I) alebo znamená skupinu, ktorú je možné na túto skupinu premeniť,

b) nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca (V) kde

R¹, R³, X a z majú význam uvedený vo vzorci (I), s kyselinou vzorca (IX) alebo jej aktivovaným derivátom

HOOC - R² (IX), kde

R² má význam uvedený vo vzorci (I) alebo znamená skupinu, ktorú je možné na túto skupinu premeniť, potom sa prípadne výsledná zlúčenina premení na inú zlúčeninu podľa vynálezu.

Koniec dokumentu kde

R¹, R³, X a z majú uvedený význam a

Y znamená skupinu -NCO, -NHC0C1 alebo -NHCOR“, kde R“ znamená fenoxyskupinu substituovanú nitroskupinou alebo 1-imidazolovú skupinu, s amínom všeobecného vzorca ^(VI)

H₂N-R (VI), kde R¹¹ má význam uvedený vo vzorci (I) alebo znamená skupinu, ktorú je možné na túto skupinu premeniť,

c) nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca (VII) a u

R (VII) kde

R₃, R¹¹ a X majú význam uvedený vo vzorci (I) so zlúčeninou všeobecného vzorca (VIII)

R'COCH₂hal (VIII), kde

R¹ má význam uvedený vo vzorci (I), alebo

c) sa nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca (III)