SK280286B6

SK280286B6 - Analógy 15-deoxyspergualínu, spôsob ich prípravy,

Info

Publication number: SK280286B6
Application number: SK1357-93A
Authority: SK
Inventors: Patrice Renaut; Luc Lebreton; Patrick Dutartre; Philippe Derrepas; Soth Samreth
Original assignee: Fournier Industrie Et Sante
Priority date: 1992-12-02
Filing date: 1993-12-02
Publication date: 1999-11-08
Also published as: HK1000467A1; NO180483B; DE69303583T2; CN1095709A; HUT65782A; DK0600762T3; TW311132B; FR2698628B1; JP2945261B2; ZA938821B; AU664124B2; NO934338D0; FI112211B; UA39920C2; KR100187328B1; FI935318A; CA2110437A1; DE69303583D1; CN1045431C; KR940014435A

Description

Oblasť techniky

Vynález sa týka nových zlúčenín so štruktúrou, blízkou 15-deoxyspergualínu. Týka sa takisto spôsobu ich prípravy a ich použitia v terapii ako imunosupresívnych prostriedkov.

Doterajší stav techniky

Je známe, že 15-deoxyspergualín je derivátom spergualínu, čo je antibiotikum izolované z kultúry Bacilus laterosporus. Prvé výskumy 15-deoxyspergualínu preukázali protinádorovú účinnosť a neskoršie prevládol výskum jeho účinnosti v oblasti imunosupresie.

K tejto téme je možno citovať najmä tieto publikácie: G. Dickneite, 15-Deoxyspergualin: From Cytostasis to Immunosuppression, Behring Inst. Mitt., č. 82, 231-239 (1988), G. Dickneite, The Influence of (+)-15-Deoxyspergualin on Experimental Transplantation and its Immunopharmacological Móde of Action, Behring Inst. Mitt., č. 80, 93-102 (1986) a K. Nemoto Deoxyspergualin in lethal murine graft-versus-host disease, Transplantation zv. 51,712-715, č. 3, marec 1991.

Napriek reálnej účinnosti v oblasti imunosupresie nemá 15-deoxyspergualín uspokojivú chemickú stabilitu. Preto sa hľadali stabilnejšie deriváty, najmä náhradou u-hydroxyglycínového zvyšku v deoxyspergualíne rôznymi a- alebo -aminokyselinami.

Na túto tému je možné odkázať najmä na R. Nishizawa, Synthesis and biological activity of spergualin analogues.

J. Antibiotics 1988, 42(11), 1629-1643 a na EP-A-0 105 193.

Podstata vynálezu

Sú navrhované nové analógy 15-deoxyspergualínu, ktoré sú štruktúrne odlišné od produktov, navrhovaných v EP-A-0 105 193, sú chemický stabilné a majú v oblasti imunosupresie účinnosť vyššiu než známe produkty. Produkty podľa vynálezu sa z hľadiska chemickej štruktúry odlišujú od známych produktov najmä inverziou väzby CO-NH, spájajúcou guanidínhexylový alebo guanidínoktylový zvyšok s centrálnou aminokyselinou. Zlúčeniny analogické 15-deoxyspergualínu podľa vynálezu sú charakterizované tým, že sú volené zo súboru zahrnujúceho (i) zlúčeniny vzorca (I)

NH OO

H ,11ir ‘íl jI

H H I!» (1), kde n sa rovná 6 alebo 8,

A predstavuje jednoduchú väzbu, skupinu CH2, skupinu CH(OH), skupinu CHF, skupinu CHjOCHj), skupinu CH2NH alebo skupinu CH2O, (ii) ich adičné soli.

Vynález takisto zahŕňa spôsob prípravy zlúčenín vzorca (I) a ich adičných soli, ktorý spočíva v odstránení chrániacich skupín zo zlúčeniny vzorca (VII) [VI r >, kde n a A majú uvedený význam a

R[ predstavuje chrániacu skupinu aminoskupiny, najmä pomocou silnej kyseliny, náhradou R] atómom H.

Vynález sa taktiež týka použitia imunodepresívnej látky, zvolenej zo súboru, tvoreného zlúčeninami vzorca I a ich netoxickými adičnými soľami, na získanie liečiva, určeného na použitie v terapii proti imunitným poruchám.

Vynález ďalej zahŕňa použitie látky, zvolenej zo súboru, tvoreného zlúčeninami vzorca (I) a ich netoxickými adičnými soľami, na získanie liečiv na liečbu malárie. V takýchto aplikáciách je účinná látka samozrejme prítomná v terapeuticky účinnom množstve.

Adičnými soľami sa rozumejú soli s kyselinami, získané reakciou minerálnej alebo organickej kyseliny so zlúčeninou vzorca (I). Výhodné minerálne kyseliny na vysolenie sú kyselina chlorovodíková, bromovodíková, sírová a fosforečná. Organické kyseliny, prednostne používané na vysolenie, sú kyselina mravčia, maleínová, metánsulfónová, šťavelová, citrónová a trifluóroctová.

Zlúčeniny vzorca (I) je možné pripraviť osebe známymi metódami s použitím klasických reakčných mechanizmov, ako je tvorba amidickej väzby a najmä s použitím metód, známych z chémie peptidov.

Spôsob prípravy, odporúčaný podľa vynálezu, zahŕňa, ako je uvedené, odstránenie chrániacich skupín zo zlúčeniny vzorca (VII). V praxi je každá chrániaca skupina R], ktorá bude nahradená atómom vodíka oxykarbonylového typu, známeho v oblasti syntézy peptidov na dočasné blokovanie funkčných aminoskupín, ktoré nie sú celkom substituované. Medzi chrániacimi skupinami, ktoré vyhovujú tomuto účelu, je možné uviesť tieto zvyšky s ich klasickými skratkami:

Adoc adamantyloxykarbonyl

Aoc terc.amyloxykarbonyl

Boe terc.butyloxykarbonyl (iný názov:

(1,1 -dimetyletoxyjkarbonyl) Fmoc 9-fluórenylmetyloxykarbonyl

Foc furfuryloxykarbonyl

Iboc izobomyloxykarbonyl

Z benzyloxykarbonyl

Z(p-Cl) p-chlórbenzyloxykarbonyl

Z(p-OMe) p-metoxybenzyloxykarbonyl

Podľa vynálezu sú najvýhodnejšie z týchto skupín Rj, ktoré sú v ďalšom texte nazývané amino-chrániace skupiny, skupina Boe.

V praxi sa spôsob prípravy zlúčeniny vzorca (I) alebo jej adičnej soli vykonáva postupom, zvoleným zo súboru, zahrnujúceho:

- variant A, zahrnujúci stupne:

(i) reakciu zlúčeniny vzorca (II)

R ’ NH (n>, kde n sa rovná 6 alebo 8 a

Rj predstavuje aminochrániacu skupinu, najmä (1,1-dimetyletoxyjkarbonylovú skupinu, s kyselinou alebo chloridom kyseliny vzorca (ITI)

O O

(III), kde

X predstavuje atóm chlóru alebo skupinu OH,

A predstavuje jednoduchú väzbu, skupinu CHj. skupinu CHF, skupinu CHtOCl-tyC^H^) alebo skupinu CH(OCH₃) a

Rj predstavuje lineárnu alebo rozvetvenú Cj-C₃ alkylovú skupinu alebo fenylmetylovú skupinu, v organickom rozpúšťadle (najmä chlórovanom rozpúšťadle, ako je napríklad dichlórmetán alebo chloroform) v prítomnosti aktivátora karboxylovej skupiny (najmä karbodiimidu, ako je napríklad 1,3-dicyklohexylkarbodiimid) a v prítomnosti nukleofilného činidla (najmä 1-hydroxybenzotriazolu) pri teplote v rozmedzí 0 až asi 40 °C pri pomere asi 1 mol zlúčeniny (II) k asi 1 mol zlúčeniny (III) za vzniku zlúčeniny vzorca (IV) *NH O O ^,α12 ’ za rovnakých podmienok ako v stupni (i) za vzniku zlúčeniny vzorca (VII)

(VII),

R] a n majú uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, CHj, CHF, CH(OCH₂C₆H₆) alebo CH(OCH₃), (iv) ak je to nutné, odstránenie chrániacich skupín zo zlúčeniny vzorca (VII), kde A predstavuje skupinu

CHjOCHjCgHg), katalytickou hydrogenáciou za vzniku zlúčeniny vzorca (VII), kde A predstavuje skupinu

CH(OH), (v) odstránenie chrániacich skupín zo zlúčeniny (VII), získanej v stupni (iii) alebo (iv), kde A predstavuje jednoduchú väzbu CH₂, CHF, CH(OH) alebo CH(OCH₃), za odštiepenia chrániacej skupiny R,. najmä pôsobením silnej kyseliny, ako je napríklad kyselina trifluóroctová, a za vzniku adičnej soli zlúčeniny vzorca (I), kde A je jednoduchá väzba, CH₂, CHF, CH(OH) alebo CH(OCH₃) a (vi) ak je to nutné, pôsobením silnej bázy získanie zlúčeniny vzorca (I) vo forme voľnej bázy a potom z tejto voľnej bázy ďalšie adičné soli;

- variant B, zahrnujúci stupne:

(i) reakciu zlúčeniny vzorca (VI) <:v>, kde

R j, Rj a n majú uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, CH₂, CHF, CII(OCH₂C₆H₆) alebo CH(OCH₃), (ii) zmydelnenie takto získanej zlúčeniny vzorca (IV) v organickom rozpúšťadle v prítomnosti silnej bázy za vzniku zlúčeniny vzorca (V) *’«« o ° ’’ .«Xsh/ (V), kde

Rj a n majú uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, CH₂, CHF, CH(OCH₂C₆H₆) alebo CH(OCH₃), (iii) kondenzáciu takto získanej zlúčeniny vzorca (V) s amínom vzorca (VI)

<vi|, kde

RI má uvedený význam,

(Vili kde

Rj predstavuje uvedenú aminochrániacu skupinu, (najmä (1,1 -dimetyletoxy)karbonyl), s kyselinou alebo chloridom kyseliny vzorca (III) o o

kde

X predstavuje atóm chlóru alebo skupinu OH,

A predstavuje jednoduchú väzbu, skupinu CH₂, skupinu CH(OCH₂C₆H₆), skupinu CH(OCH₃) alebo skupinu CHF a

R₂ predstavuje lineárnu alebo rozvetvenú C|-C₃ alkylovú skupinu alebo fenylmetylovú skupinu, v organickom rozpúšťadle (najmä chlórovanom rozpúšťadle, ako je napríklad dichlórmetán alebo chloroform) v prítomnosti aktivátora karboxylovej skupiny (najmä karbodiimidu, ako je napríklad 1,3-dicyklohexylkarbodiimid) a v prítomnosti nukleofilného činidla (najmä 1-hydroxybenzotriazolu) pri teplote v rozmedzí 0 až asi 40 °C pri pomere asi 1 mol zlúčeniny (VI) k asi 1 mol zlúčeniny (III) za vzniku zlúčeniny vzorca (VIII) o o

(vi) ak je to nutné, pôsobením silnej bázy získanie zlúčeniny vzorca I vo forme voľnej bázy a potom z tejto voľnej bázy ďalšie adičné soli;

- variant C, zahrnujúci stupne:

(i) acyláciu koncovej skupiny NH₂ bázy vzorca (X) (vni), kde

R] a R2 majú uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, Cl H- skupinu CH(OCH₂CgHg), skupinu Cl [(OCH+) alebo skupinu CHF, (ii) zmydelnenie takto získanej zlúčeniny vzorca (VIII) v organickom rozpúšťadle v prítomnosti silnej bázy za vzniku zlúčeniny vzorca (IX)

kde

R j má uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, CH2, skupinu CII(OCII₂Cgllg). skupinu CH(OCHj) alebo skupinu CHF, (iii) kondenzáciu takto získanej zlúčeniny vzorca (IX) s amínom vzorca (II)

(CH_;)

(II), kde n sa rovná 6 alebo 8 a

R| má uvedený význam, za rovnakých podmienok ako v stupni (i) za vzniku zlúčeniny vzorca (VII) r'' ^C ^! ’ ^{1 Ľ}”l^{1 1} “i' 1

I ,

(VIII,

R j a n majú uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, CHo. skupinu

CH(OCH₂C₆H₆), skupinu CH(OCH₃) alebo skupinu CHF, (iv) ak je to nutné, odstránenie chrániacich skupín zo zlúčeniny vzorca (VII), kde A predstavuje skupinu

CH(OCH₂CgHg), katalytickou hydrogenáciou za vzniku zlúčeniny vzorca (VII), kde A predstavuje skupinu

CH(OH), (v) odstránenie chrániacich skupín z takto získanej zlúčeniny (VII), pôsobením silnej kyseliny (najmä kyseliny trifluóroctovej) za vzniku adičnej soli zlúčeniny vzorca (I), kde A je jednoduchá väzba, CH₂, CH(OH), CH(OCH₃) alebo CHF,

NH q » MH— -f,;., '

W, kde

Rj predstavuje uvedenú aminochrániacu skupinu, (najmä (l,l-dimetyletoxy)karbonyl) a n jc rovné 6 alebo 8 chlórformiátom alebo symetrickým karbonátom (najmä bis(4-nitrofenyl)karbonátom) v inertnom rozpúšťadle pri teplote miestnosti (15 až 25 °C), (ii) aminolvzy takto získanej zlúčeniny amínom vzorca (VI) «J H '«H <VI)| kde

Rj má uvedený význam za vzniku zlúčeniny vzorca (VII) ,

™ 00

I (VII), kde

Rj a n majú uvedený význam a

A predstavuje skupinu CH₂NH, (iii) odstránenie chrániacich skupín z takto získanej zlúčeniny vzorca (VII) pôsobením silnej kyseliny (najmä kyseliny trifluóroctovej) , za vzniku adičnej soli zlúčeniny vzorca (I), kde A je CH₂NH a (vi) ak jc to nutné, pôsobením silnej bázy získanie zlúčeniny vzorca (I) vo forme voľnej bázy a potom z tejto voľnej bázy ďalšie adičné soli; a

- variant D, zahrnujúci stupne:

(i) reakciu zlúčeniny vzorca (VI) <VI>| kde

Rj predstavuje uvedenú aminochrániacu skupinu, (najmä (1,1 -dimety letoxy )karbonyl), s karbonátom vzorca (III¹)

kde

R-2 predstavuje lineárnu alebo rozvetvenú Cj-Cj alkylovú skupinu alebo fenylmetylovú skupinu, v inertnom rozpúšťadle (najmä aromatickom rozpúšťadle, ako je napríklad toluén) pri teplote refluxu reakčného prostredia pri pomere asi 1 mol zlúčeniny (VI) k asi 1 mol zlúčeniny (Ilľ) za vzniku zlúčeniny vzorca (VIII) o o l

^R1 (viii), kde

R] a R₂ majú uvedený význam a

A predstavuje skupinu CH2O, (ii) zmydelnenie takto získanej zlúčeniny vzorca (VIII) v organickom rozpúšťadle v prítomnosti silnej bázy za vzniku zlúčeniny vzorca (IX) o o «>

Cix>t kde

Rj má uvedený význam a

A CH₂O, (iii) kondenzáciu takto získanej zlúčeniny vzorca (IX) s amínom vzorca (II) s,.

’ NH <ii>, ' kde

R| má uvedený význam a n je rovné 6 alebo 8, v organickom rozpúšťadle (najmä chlórovanom rozpúšťadle, ako je napríklad dichlórmetán alebo chloroform) v prítomnosti aktivátora karboxylovej skupiny (najmä karbodiimidu, ako je napríklad 1,3-dicyklohexylkarbodiimid) a v prítomnosti nukleofilného činidla (najmä 1-hydroxybenzotriazolu) pri teplote v rozmedzí 0 až asi 40 °C pri pomere asi 1 mol zlúčeniny (IX) k asi 1 mol zlúčeniny (II) za vzniku zlúčeniny vzorca (VII)

B 'NH o O

I

R[ a n majú uvedený význam a

A predstavuje CH₂O, (iv) odstránenie chrániacich skupín z takto získanej zlúčeniny vzorca (VII), pôsobením silnej kyseliny (najmä kyseliny trifluóroctovej) za vzniku adičnej soli zlúčeniny vzorca (I), kde A je CH₂O a (v) ak je to nutné, pôsobením silnej bázy získanie zlúčeniny vzorca (I) vo forme voľnej bázy a potom z tejto voľnej bázy ďalšie adičné soli.

Zlúčeninu (VI), kde R] je (l,l-dimetyletoxy)karbonylová skupina, je možné pripraviť metódou podľa Raymonda J. Bergerona, Total Synthesis of (+)-15-Deoxyspergualin, J. Org. Chem. 1987, 52, 1700-1703.

Rovnako je možné získať zlúčeniny vzorca (IV) vytvorením a potom aminolýzou zmiešaného anhydridu: kyselina vzorca (III) sa nechá reagovať s chlórformiátom, najmä izobutylchlórformiátom, v prítomnosti ekvivalentu terciárnej bázy, najmä N-metylmorfolínu, v nereaktívnom rozpúšťadle pri teplote asi -30 °C počas asi 5 h a potom sa k reakčnému prostrediu pridá báza II.

Tvorbu amidickej väzby je možné takisto uskutočniť metódami známymi odborníkom, najmä acyláciou príslušného amínu chloridom kyseliny v nereaktívnom rozpúšťadle v prítomnosti silnej organickej bázy.

Medziprodukty vzorca (VII), kde Rj predstavuje aminochrániacu skupinu, najmä oxykarbonylového typu, n sa rovná 6 alebo 8 a A predstavuje jednoduchú väzbu, skupinu CH₂, skupinu CH(OH), skupinu CfhOCHj). skupinu CH₂NH, skupinu CH₂O, skupinu CH(OCH₂C₆H₆) alebo skupinu CHF, sú nové zlúčeniny a tvoria ďalší predmet vynálezu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Vynález je bližšie vysvetlený ďalej uvedenými príkladmi a výsledkami farmakologických testov, získanými pri zlúčeninách podľa vynálezu, v porovnaní s výsledkami, získanými pri známych produktoch podľa doterajšieho stavu techniky. Ďalej používaná nomenklatúra sa riadi odporúčaním Chemical Abstracts; podľa tejto nomenklatúry je tu diester typu alkándicatu terc.butylu a etylu nazývaný (1,1-dimetyletyl)etylester kyseliny alkándiovej.

Príprava I

Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny [[(6-aminohexyl)imino]metylénjbiskarbamovej

Za miešania sa pri teplote miestnosti pridá 17,23 g (0,148 mol) 1,6-hexándiaminu k roztoku 43 g (0,148 mol) N,N'-bis(terc.-butoxykarbonyl-S-metylmočoviny v 300 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa mieša 16 hodín. Po odparení rozpúšťadla sa získaný zvyšok chromatografuje na silikagéli s elúciou zmesou CHCl₂/etanol 3 : 1 (v/v) a potom zmesou etylacetát/metanol/amoniak 6 : 3 : 0,1 (v/v/v) s koncentráciou 32 % vo vode. Získa sa tak 19,7 g (výťažok 37 %) žltého oleja.

'H NMR (CDCI3): 1,25 - 1,60 (m, 28H), 2,7 (ζ 2H), 3,5 (q, 2H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Analogickým postupom sa získa: bis(l,l-dimctylctyl)ester kyseliny [[(8-aminooktyl)imino]metylénjbiskarbamovej, (VII),

SK 280286 Β6 ^!H NMR (CDC1₃): 1,3 - 1,7 (m, 32H), 2,7 (t, 2H), 3,4 (q, 2H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príprava II l-(l,l-Dimetyletyl)-14-etylester kyseliny 6-((1,1-dimetyletoxy)-karbony 1] -12-oxo-2,6,11 -triazatetradekándio vej

0,82 g (4.103 mol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu sa pridá k roztoku 0,53 g (4.10'3) etylmalonátu v 20 ml bezvodého chloroformu, chladenému na 0 °C. Po 0,5 h miešania sa po kvapkách pri 0 °C pridá 1,04 g (3.10'3 _mo]) jj. -dimetyletylesteru kyseliny 10-amino-6-[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]-2,6-diazadekánovej v roztoku v 5 ml bezvodého chloroformu. Zmes sa mieša 5 h pri teplote miestnosti a pridá sa 1,06 g (8.10'3 _mo|) etylmalonátu a 1,64 g (8.10'3 _m0|) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu. Zmes sa mieša 1 h, a potom sa za zníženého tlaku odparí rozpúšťadlo. Získaný pastovitý zvyšok sa chromatografuje na silikagéli s elúciou zmesou etylacetát/hexán 1 : 1 (v/v) a potom etylacetátom. Získa sa 0,95 g (výťažok 69 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

^!H NMR (CDC1₃): 1,25 (t, 3H), 1,40 - 1,70 (m, 24H), 3,10-3,35 (m, 10H), 4,2 (q, 2H).

Príprava III

1-(1,1-Dimetyletyl)ester kyseliny 6-[(1,1-dimety letoxy)-karbonyl] -12-oxo-2,6,11 -triazatetradekándio vej

0,95 g (2,07.10'3 _mojj produktu, získaného podľa prípravy II, sa rozpustí v zmesi 20 ml 1 N hydroxidu sodného a 20 ml dimetoxyetánu 1 : 1 (v/v). Zmes sa mieša 15 min. pri teplote miestnosti a objem reakčnej zmesi sa zníži o tretinu, zmes sa potom okyslí IN kyselinou chlorovodíkovou na pH medzi 2 a 3. Potom sa zmes extrahuje dvakrát 50 ml chloroformu. Po odparení organických fáz za zníženého tlaku sa získaný zvyšok chromatografuje na silikagéli s elúciou zmesou etylacetát/metanol 3 : 1 (v/v) a potom metanolom. Získa sa tak 0,75 g (výťažok 84 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

’h NMR (dimetylsulfoxid-d6): 1.40 (s, 18H), 1,55 (m, 6H), 2,90 (m, 4H), 3,15 (m, 6H).

Príprava IV

Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]amino]-20-[(l, 1 -dimetyletoxy)karbonyl]-12,14-dioxo-2,4,11,15,20,24-hexaazapentakos-2-endiovej

K roztoku 0,5 g (1,16.10'3 mol) produktu, získaného podľa prípravy III, v 30 ml bezvodého chloroformu s teplotou 0 °C sa za miešania pridá 0,46 g (2,32.10'3 mol) 1,3-dicyklohexylkarbodiimidu a 0,0155 g (0,1.10'3 mol) hydrátu 1-hydroxybenzotriazolu. Reakčná zmes sa mieša 0,5 h, a potom sa po kvapkách pridá pri 0 °C 0,42 g (1,16.10'3 mol) bis(l,l-dimetyletyl)esteru kyseliny [[(6-aminohexyl)imino]metylén]biskarbamovej (získaného postupom podľa prípravy I). Reakčná zmes sa znova mieša 1,5 h pri 0 °C, a potom sa pridá 0,23 g (1,16.10'3 _mo[j i^.dicyklohexylkarbodiimidu a pokračuje sa v miešaní 24 h pri teplote miestnosti.

Za zníženého tlaku sa odparí rozpúšťadlo a získaný zvyšok sa chromatografuje na silikagéli s elúciou zmesou etylacetát/hexán 1 : 1 (v/v), potom etylacetátom a nakoniec zmesou etylacetát/metanol 9 : 1 (v/v). Získa sa tak 0,7 g (výťažok 73 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

Hl NMR (CDCľj): 1,3 - 1,7 (m, 50H), 3,1 - 3,3 (m, 12H),

3,4 (q, 2H), 4,8 a 5,3 (široký s, 1H), 6,8 a 7,15 (široký s, 2H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príklad 1

Tris(trifluóracetát) N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyll-N'-[6-[(aminoiminometyl)amino]hexyl]propándiamidu

0,7 g (0,9.10'3 mol) produktu, získaného podľa prípravy IV, sa rozpustí v 10 ml kyseliny trifluóroctovej a 10 ml bezvodého dichlórmetánu. Reakčná zmes sa mieša 24 h pri teplote miestnosti, potom sa rozpúšťadlo odparí za zníženého tlaku. Získaný zvyšok sa vyberie do 150 ml destilovanej vody a potom lyofilizuje. Zvyšok sa prečistí pomocou MPLC (stredotlaková kvapalinová chromatografia) na inverznej fáze (silikagél RP 18) s elúciou zmesou voda/acetonitril/kyselina trifluóroctová 7.2:1 (v/v/v). Získa sa 0,43 g (výťažok 66 %) veľmi hygroskopickej pevnej látky.

^!H NMR (dimetylsulfoxid-d6): 1,2 - 1,6 (m, 12H), 1,9 (m, 2H), 2,9 - 3,1 (m, 14H), 7,2 (široký s, 4H), 7,7 (t, 1H), 8 (m, 5H), 8,7 (široký s, 2H).

¹³C NMR (dimetylsulfoxid-d6): 22,5, 23,4, 25,4, 25,6,

25,7, 28,0, 28,5, 35,8, 37,6, 38,2, 40,3, 43,0, 43,5, 46,1, 156,6, 166,9 (2C).

Príprava V l-(l,l-Dimetyletyl)-16-etylester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]aminoj-14-oxo-2,4,13-triazahexadec-2-endiovej

Z 1,32 g (10.10'3 _mo]) etylmalonátu a 2 g (5,18.10'3 mol) bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny [[(8-aminooktyl)iminoj-metylénjbiskarbamovej sa analogicky ako v príprave IV získa 1,96 g (výťažok 75 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

*H NMR (CDC1₃): 1,25 - 1,70 (m, 33H), 3,25 (q, 2H), 3,30 (s, 2H), 3,40 (q, 2H), 4,2 (q, 2H), 7,25 (s, 1H), 8,3 (s, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príprava VI

1-(1,1 -Dimetyletyljester kyseliny 3 - [[(1,1 -dimetyletoxy)-karbonyljaminoj-14-oxo-2,4,13-triazadec-2-endiovcj

Analogicky ako v príprave III sa z 1,96 g (3,92.10'3 mol) produktu, získaného podľa prípravy V, získa 1,92 g (výťažok 100 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

NMR (CDCI3): 1,25 - 1,70 (m, 30H), 3,27 - 3,39 (m, 611),7,25 (s, 1H), 8,40 (s, 1H).

Príprava VII

B i s( 1,1 -dimetyletyljester kyseliny 3-[[( 1,1 -dimetyletoxy)-karbonyl] amino]-22-[( 1,1 -dimety letoxyjkarbonyl]-14,16-dioxo-2,4,13,17,22,26-hexaazaheptakos-2-endiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 1,85 g (3,92.10'3 mol) produktu, získaného podľa prípravy VI a 1,35 g (3,92.10'3 mol) l-( 1,1 -dimetyletyljester kyseliny 10-amino-6-[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]-2,6-diazadekánovej získa 0,41 g (výťažok 13%) očakávaného produktu vo forme oleja.

'H NMR (CDC1₃): 1,30 - 1,70 (m, 54H), 3,1 - 3,5 (m, 14H), 4,8 a 5,3 (široký s, 1H), 6,7 a 7,1 (široký s, 2H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príklad 2

Tris(trifluóracetát) N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-N'-[8-[(aminoiminometyl)amino]oktyl]propándiamidu

Analogicky ako v príklade 1 sa z 0,41 g (0,51.10'3 mol) produktu, získaného podľa prípravy VII, získa 0,24 g (výťažok 65 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

NMR (dimetylsulfoxid-d6): 1,2 - 1,6 (m, 16H), 1,9 (m, 2H), 2,9 - 3,1 (m, 14H), 7,2 (široký s, 4H), 7,7 (t, 1H), 8 (m, 5H), 8,7 (široký s, 2H).

¹³C NMR (dimetylsulfoxid-d6): 22,9, 23,7 26,0, 26,1,

26,3. 28,4, 28,5, 35,6, 28,9, 36,2, 37,9, 38,6, 40,7, 43,3,

43,8.

Príprava VIII l-(l,l-Dimetyletyl)-14-metylester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)karbonyl]amino]-l 3-metoxy-12-oxo-2,4,11-triazatetradec-2-endiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 1,8 g (12.10^-3 mol) mctylesteru kyseliny 2-metoxypropándiovej a 4 g (11.10'³mol) bis(l,l-dimetyletyl)esteru kyseliny [[(6-aminohexyl)imino]-metylén Ibiskarbamovej s náhradou chloroformu dichlórmetánom získa 4,8 g (výťažok 87 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

’H NMR (CDCl₃): 1,35 - 1,65 (m, 26H), 3,2 (m, 2H), 3,35 (q, 211), 3,45 (s, 3H), 3,8 (s, 3H), 4,3 (s, 1H), 6,7 (t. 1H),

8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príprava IX

1-(1,1-Dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl] amino] -13 -metoxy-12-oxo-2,4,11 -triazadec-2-endiovej

Analogicky ako v príprave III sa z 4,6 g (9,4.10'³ mol) produktu, získaného podľa prípravy VIII, získa 4 g (výťažok 89 %) očakávaného produktu vo forme oleja. ’H NMR (CDC1₃): 1,3 - 1,65 (m, 26H), 3,1 - 3,5 (m, 4H),

3,6 (s, 3H), 4,3 (s, 1H), 6,7 (t, 1H), 8,4 (t, 1H), 11,5 (široký s, 1H).

Príprava X

Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)karbonyl] amino]-20-[( 1,1 -dimetyletoxy )karbonylj-13 -metoxy-12,14-dioxo-2,4,11,15,20,24-hexaazapentakos-2-endiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 3,77 g (8.10'³ mol) produktu, získaného podľa prípravy IX a 2,7 g (8.10'³ mol) l,l-(dimetyletyl)esteru kyseliny 10-amino-6-[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]-2,6-diazadekánovej s náhradou chloroformu dichlórme- tánom získa 4 g (výťažok 63 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

'H NMR (CDC1₃): 1,3 -1,8 (m, 50H), 3,0 - 3,45 (m, 12H),

3,6 (s, 3H), 4,1 (m, 1H), 4,8 a 5,3 (široký s, 1H), 6,9 (široký s, 2H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príklad 3

Tris(trifluóracetát) N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-N'-[6-[(aminoiminometyl)amino]hcxyl]-2-metoxypropándiamidu

Analogicky ako v príklade 1 sa z 3,47 g (4,3.10^-3 mol) produktu, získaného podľa prípravy X, získa 2,86 g (výťažok 89 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

NMR (dimetylsulfoxid-d6): 1,25 - 1,70 (m, 12H), 1,9 (m, 2H), 2,85 - 3,2 (m, 12H), 3,25 (s, 1H), 4,1 (s, 1H), 6,8 - 8,7 (m, 12H).

¹³C NMR (CD₃OD): 24,2, 25,3 27,36, 27,37, 29,9, 30,2,

37,9, 39,2, 40,2, 42,5, 45,7, 58,6, 158,7, 169,4, 169,8.

Príprava XI

1-(l,l-Dimetyletyl)-14-metylester kyseliny 6-[(l,l-dimetyletoxy)karbonyl]-13-metoxy-12-oxo-2,6,11-triazatetradekándiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 2,62 g (17,7.10'³mol) metylesteru kyseliny 2-metoxypropándiovej a 3,45 g (10.10^-3 mol) l,l-(dimetyletyl)csteru kyseliny 10-amino-6-[(1,1 -dimetyletoxy)-karbonyl]-2,6-diazadekánovej získa

1.5 g (výťažok 18 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

ÍH NMR (CDC1₃): 1,4 - 1,8 (m, 24H), 3,1 - 3,4 (m, 8H),

3.5 (s, 3H), 3,8 (s, 3H), 4,3 (s, 1H), 4,8 a 5,3 (široký s, 1H), 6,7 (s, 1H).

Príprava XII

1-(1,1-Dimetyletyl)ester kyseliny 6-[(1,1-dimetyletoxy)karbonyl]-13-metoxy-12-oxo-2,6,11-triazatetradekándiovej

Analogicky ako v príprave III sa z 1,5 g (3,16.10^-3mol) produktu, získaného podľa prípravy XI, získa 1,18 g (výťažok 81 %) očakávaného produktu vo forme oleja. ’HNMR (CDCI3): 1,4 -1,8 (m, 24H), 3,15 - 3,35 (m, 8H),

3,5 (s, 3H), 4,3 (s, 1H), 5,2 - 5,7 (dvojitý s, 1H), 6,3 - 6,9 (dvojitý s, 1H).

Príprava XIII

Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]amino]-22-[( 1,1 -dimetyletoxy jkarbonyl] -15-metoxy-14,16-dioxo-2,4,13,17,22,26-hexaazaheptakos-2-endiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 1,18 g (2,56.10^-3mol) produktu, získaného podľa prípravy XII, získa 1,4 g (výťažok 65 %) očakávaného produktu vo forme oleja. ^!H NMR (CDCI3): 1,3 - 1,8 (m, 54H), 3,1 - 3,7 (m, 15H),

4,1 (s, 1H), 4,8 a 5,3 (široký s, 1H), 6,9 (široký s, 2H) 8,3 (t, 1 H) 11,5 (s, 1H).

Príklad 4 Tris(trifluóracetát)N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-2-metoxy-N'-[8-[(aminoiminometyl)amino]oktyl]propándiamidu

Analogickým postupom ako v príklade 1 sa z 1,37 g (1,65.10^-3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XIII, získa 0,89 g (výťažok 70 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

'H NMR (dimetylsulfoxid-d6): 1,2 - 1,7 (m, 16H), 1,9 (m, 2H), 2,9 - 3,1 (m, 12H), 3,3 (s, 3H), 4,1 (s, 1H), 6,8 - 8,7 (m, 12H).

¹³C NMR (D₂O): 23,8, 25,0 26,5, 27,0, 27,3, 28,5, 29,1 (2C), 37,5, 39,8, 40,2, 42,5, 45,1, 48,2, 58,4, 63.9, 82,5,157,8, 169,8, 170,2.

Príprava XIV l-(l,l-Dimetyletyl)-15-metylester kyseliny 6-[(l,l-dimetyletoxy)karbonyl]-13-oxa-12-oxo-2,6,11 -triazapentadekándiovej

K roztoku 4,5 g (21,4.10^-3 mol) metylesteru kyseliny [(fenoxykarbonyl)oxy]octovej v 100 ml toluénu sa za miešania pridá 7,4 g 1,1 -(dimetyletyl)esteru kyseliny 10-ami

SK 280286 Β6 no-6-[( 1,1 -dimetyletoxy)karbonyl]-2,6-diazadekánovej v roztoku v 20 ml toluénu. Reakčná zmes sa udržuje 15 h na refluxe. Rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku a vzniknutý zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli s elúciou zmesou metylcyklohexán/etylacetát 7 : 3 (v/v) a potom etylacetátom. Získa sa tak 8,4 g (výťažok 85 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

NMR (CDClj): 1,45 - 1,65 (m, 24H), 3,05 - 3,25 (m, 8H), 3,8 (s, 3H), 4,7 (s, 2H), 4,9 a 5,3 (široký s, 1H).

Príprava XV 1-(1,1-Dimetyletyl)ester kyseliny 6-[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl] -13-oxa-12-oxo-2,6,11 -pentadekándio vej

Analogicky ako v príprave III sa z 8,45 g (18,3.10'3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XIV, získa 6,7 g (výťažok 81 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

NMR (CDClj): 1,3 - 1,8 (m, 24H), 3,10 - 3,25 (m, 8H),

4,7 (s, 2H), 5,0 (t, 1H), 6,8(s, 1H).

Príprava XVI

Bis( 1,1 -dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]amino]-21 -[(1,1 -dimetyletoxy)karbonylj-14-oxa-12,15-dioxo-2,4,11,16,21,25-hexaazahexakos-2-endiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 3 g (6,7.10'3 mol) -Ί produktu, získaného podľa prípravy XV, a 2,4 g (6,7.1ο·'¹mol)bis(l,l-dimetyletyl)esteru kyseliny [[(6-aminohexyl)imino]-metylén]biskarbamovej získa 3,85 g (výťažok 73 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

^!H NMR (CDClj, D₂O): 1,35 - 1,65 (m, 50H), 3,10 - 3,30 (m, 12H), 4,55 (s, 2H), 5,2 - 5,5 (široký s, 1H), 6,4 (široký s, 1H).

Príprava XV11

B is( 1,1 -dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(1,1 -dimetyletoxy)-karbonyl] amino]-23 - [(1,1 -dimetyletoxy)karbonyl]-16-oxa-14,17-dioxo-2,4,13,18,23,27-hexaazaoktakos-2-endio vej

Analogicky ako v príprave IV sa z 1,5 g (3,35.10’3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XV a 1,3 g (3,35.10'3 _nl0[j bis(l,l-dimctyletyl)csteru kyseliny [[(8-aminooktyl)imino]-metylén]biskarbamovej získa 1,56 g (výťažok 57 %) očakávaného produktu vo forme oleja. ^!H NMR (CDClj): 1,40 - 1,60 (m, 54H), 3,10 - 3,40 (m, 12H), 4,5 (s, 2H), 5,1 - 5,4 (široký s, 1H), 6,3 (široký s, 1H), 8,3 (t, 1 H), 11,5 (Široký s, 1 H).

Príklad 5

Tris(trifluóracetát) 2-[[[4-[[3-(amino)propyl]ami-no]butyljamino]-karbonyloxy]-N-[6-[(aminoiminometyl)aminojhexyljacetamidu

Analogickým postupom podľa príkladu 1 sa z 3,85 g (4,9.10'3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XVI, získa 2,61 g (výťažok 72 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

*H NMR (dimetylsulfoxid-d6): 1,25 - 1,55 (m, 12H), 1,9 (m, 2H), 2,80 - 3,10 (m, 12H), 4,35 (s, 2H), 5,5 - 8,6 (m, 12H).

¹³C NMR (D₂O): 23,6, 24,5, 26,2, 26,3, 26,7, 28,6, 29,0,

37,3, 39,8, 40,6, 41,9, 45,2, 48,2, 63,7, 157,5. 158,2,

171,4.

Príklad 6

Tris(trifluóracetát) 2-[[[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]amino]-karbonyloxy]-N-[8-[(aminoiminometyl)amino]oktyljacetamidu

Analogickým postupom podľa príkladu 1 sa z 1,56 g (1,9.10'3 _mol) p_roduktu, získaného podľa prípravy XVII, získa 0,96 g (výťažok 66 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

*Η NMR (dimctylsulfoxid-d6): 1,2 - 1,6 (m, 16H), 1,9 (m, 2H), 2,8 - 3,2 (m, 12H), 4,35 (s, 2H), 6,8 - 8,6 (m, 12H). ¹³C NMR (D₂O): 23,6, 24,5, 26,5, 26,6, 26,7, 28,6, 28,9 (2C), 29,0, 37,9, 40,0, 40,6, 41,9, 45,2, 48,2, 64,7,

158,0, 159,0, 172,1.

Príprava XVIII l-(l,l-Dimetyletyl)-14-etylester kyseliny 3-[[(l, 1-dimetyletoxy)-karbonyljamino]-13-fenylmetoxy-12-oxo-2,4,l 1-triazatetradec-2-endiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 1,3 g (5,46.10'3 mol) etylesteru kyseliny 2-fenylmetoxypropándiovej a 1,95 g (5,46.10'3 mol) bis(l,l-dimetyletyl)esteru kyseliny [[(6-aminohexyl)imino]metylén]biskarbamovej získa 1,57 g (výťažok 50 %) očakávaného produktu vo forme 0leja.

’h NMR (CDClj): 1,2 - 1,8 (m, 29H), 3,25 (q, 2H), 4,2 (q, 2H), 4,4 (s, 1H), 4,5 - 4,8 (dvojitý d, 2H), 6,7 (s, 1H),

7.3 (s, 5H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príprava XIX

1-(1,1-Dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbony Ijamino] -13-feny Imetoxy-12-oxo-2,4,11 -triazatetradec-2-endiovej

Analogicky ako v príprave III sa z 1,57 g (2,72.10'3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XVIII, získa 1,4 g (výťažok 94 %) očakávaného produktu vo forme nažltlého oleja.

^lH NMR (CDCI3): 1,2 - 1,8 (m, 26H), 3,2 - 3,5 (m, 4H),

4.4 (s, 1H), 4,6 - 5,0 (dvojitý’ d, 2H), 6,8 (s, 1H), 7,3 (s, 5H), 8,3 (t, 1H).

Príprava XX

Bis( 1,1 -dimetyletyljester kyseliny 3-[[( 1,1-dimetyletoxy)-karbonyl] amino]-20-[( 1,1 -dimety letoxyjkarbony 1]-12,14-dioxo-13 -fenylmetoxy-2,4,11,15,20,24-hexaazapentakos-2-endiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 1,4 g (2,54.10'3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XIX a 0,88 g (2,54.10'3 _η10η i j.(dimetyletyl)esteru kyseliny 10-amino-6-[( 1,1 -dimetyletoxy)-karbonyl]-2,6-diazadekánovej získa

2,1 g (výťažok 94 %) očakávaného produktu vo forme oleja- ’H NMR (CDClj): 1,3 - 1,8 (m, 50H), 3,1 - 3,5 (m, 12H),

4,3 (s, 1H), 4,8 (s, 2H), 6,8 - 7,0 (m, 2H), 7,3 (s, 5H), 8,3 (t, III), 11,5 (s, 1H).

Príprava XXI

Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]amino]-20-[( 1,1 -dimetyletoxy)karbonyl] -13-hydroxy-12,14-dioxo-2,4,11,15,20,24-hexaazapentakos-2-endiovej

K roztoku 1,27 g (1,45.10'3 _mol) produktu, získaného podľa prípravy XX, v 120 ml etanolu sa pridá 0,1 g uhlia s 10 % paládia. Zmes sa 2 h mieša pri teplote miestnosti a za atmosférického tlaku v atmosfére vodíka. Katalyzátor sa potom oddelí filtráciou a organická fáza sa odparí. Získa sa tak 1 g (výťažok 88 %) olejovitcho zvyšku, ktorý sa použije bez ďalšieho čistenia na prípravu produktu 7.

^!H NMR (CDClj): 1,2 - 1,8 (m, 50H), 3,1 - 3,6 (m, 12H),

4.3 (s, 1H), 4,6 - 5,3 (široký s, 3H), 8,3 (s, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príklad 7 Tris(trifluóracetát)N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-2-hydroxy-N'-[6-[(aminoiminometyl)amino]hexyl]propándiaminu

Analogickým postupom ako v príklade 1 sa z 1 g (1,27.I0'³ mol) produktu, získaného podľa prípravy XXI, získa 0,6 g (výťažok 65 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

IffNMR (dimetylsulfoxid-d6): 1,2 - 1,6 (m. 12H), 1,85 (m, 2H), 2,7 - 3,2 (m, 12H), 4,3 (s, 1H), 6,8 - 8,6 (m, 12H). ¹³C NMR (D₂O): 23,5, 24,4, 26,0, 26,1, 26,2, 28,4, 28,8, 37,2, 39,1, 39,9, 41,7, 45,1,48,0, 73,0, 154,8, 171,1,

171,4.

Príprava XXII l-(l,l-Dimetyletyl)-15-fenylmetylester kyseliny 3-[[(l,1-dimetyletoxy jkarbony 1] amino] -12-oxo-2,4,11,14-tetraazapentadec-2-endiovej

K roztoku 3 g (14.10‘³ mol) karbobenzyloxyglycínu a

2,8 g (28.10'³ mol) N-metylmorfolínu v 50 ml tetrahydrofuránu, chladenému na -30 °C, sa po kvapkách pridá 1,6 g (14.10'³ mol) izobutylchlórformiátu v roztoku v 5 ml tetrahydrofuránu. Reakčná zmes sa mieša 0,5 h a pridá sa 5,4 g bis(l,l-dimetyletyl)esteru kyseliny [[(6-aminohexyl)imino]metylén]biskarbamovej v roztoku v 20 ml tetrahydrofuránu. Mieša sa ešte 2 h pri -30 °C a potom 24 h pri teplote miestnosti. Zvyšok, získaný po prefiltrovaní reakčnej zmesi a odparení filtrátu za zníženého tlaku, sa prečistí chromatografiou na silikagéli s elúciou zmesou etylacetát/metylcyklohexán 1 : 1 (v/v). Získa sa tak 7,16 g (výťažok 91 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

!h NMR (CDClj): 1,3 - 1,7 (m, 26H), 3,2 (q, 2H), 3,4 (q, 2H), 3,8 (d, 2H), 5,15 (s, 2H), 5,5 (široký s, 1H), 6,0 (široký s, 1H), 7,3 (s, 5H).

Príprava XXIII

1,1-Dimetyletylester kyseliny 13-amino-3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]amino]-12-oxo-2,4,l l-triazatridec-2-enovej

Analogicky ako v príprave XXI sa zo 7,1 g (13.10'³mol) produktu, získaného podľa prípravy XXII, získa 5,3 g (výťažok 98 %) očakávaného produktu vo forme oleja. h NMR (CDClj): 1,3 - 1,6 (m, 28H), 3,2 - 3,45 (m, 6H),

7.3 (s, 1H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príprava XXIV

Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]amino]-21 -[(1,1 -dimety letoxy)karbonyl]-l 2,15-dioxo-2,4,11,14,16,21,25-heptaazahexakos-2-endiovej

K roztoku 5,3 g (12.10³ mol) produktu, získaného podľa prípravy XXVIII, v 50 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa pridá po malých častiach 4,3 g (13.10'³ mol) bis(4-nitrofenyljkarbonátu. Reakčná zmes sa mieša 1 h pri teplote miestnosti a po kvapkách sa pridá 4,5 g (13.10'³ mol)

1.1- (dimetyletyl)esteru kyseliny 10-amino-6-[(l,l-dimetyletoxy)karbonyl]-2,6-diazadekánovcj v roztoku v 50 ml bezvodého tetrahydrofuránu. Zmes sa znova mieša 24 h pri teplote miestnosti a za zníženého tlaku sa odparí rozpúšťadlo. Vzniknutý' zvyšok sa prečistí chromatografiou na silikagéli s elúciou etylacetátom. Získa sa tak 6,01 g (výťažok 64 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

’H NMR (CDClj): 1,3 - 1,7 (m, 50H), 3,1 - 3,35 (m, 12H),

3,8 (d, 2H), 4,8 a 5,8 (široký s. 3H), 6.9 (t, 1H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príklad 8

Tris(trifluóracetát)N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-N'-[[[[6-[(aminoiminometyl)amino]hexyl]amino]karbonyljmetylj-močoviny

Analogickým postupom ako v príklade 1 sa zo 6 g (7,6.10^--³ mol) produktu, získaného podľa prípravy XXIV, získa 4,75 g (výťažok 86 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

NMR (dimetylsulfoxid-d6): 1,2 - 1,65 (m, 12H), 1,9 (m, 2H), 2,9 - 3,15 (m, 12H), 3,6 (d, 2H), 6,1 (t, 1H), 6,3 (t, 1H), 6,8-9 (m, 11 H).

^³C NMR (dimetylsulfoxid-d6): 22,8, 23,7, 25,6, 25,8, 27,0, 28,3, 28,9, 36,1, 38, 5, 40.5, 42,7, 43,7' 46,5, 156,7,

157,9, 169,6.

Príprava XXV l-(l,l-dimetyletyl)-17-ľenylmetylester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyl-etoxy)karbonyl]amino]- 14-0X0-2,4,13,16-tetraazaheptadec-2-endiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 1,35 g (6,47.10 mol) karbobenzyloxyglycínu a 2 g (5,18.10‘³ mol) bis(l,l-dimetyletyl)-esteru získa 2,33 g (výťažok 74 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

hl NMR (CDClj): 1.25 - 1,70 (m, 30H), 3,25 (q, 2H), 3,4 (q, 2H). 3,8 (d, 2H), 5,15 (s, 2H), 5,5 (široký s, 1H), 6,0 (široký s, 1H), 7,3 (s, 5H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príprava XXVI

1.1- Dimetyletylester kyseliny 15-amino-3-[[(l,l-dimetyletoxyj-karbony ljamino]-14-oxo-2,4,13-triazapentadec-2-enovej

Analogicky ako v príprave XXI sa z 2,33 g (4,04.10‘³mol) produktu, získaného podľa prípravy XXV, získa 2,16 g (výťažok 100 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

¹11 NMR (CDClj): 1,3 - 1,8 (m, 32H), 3,25 - 3,45 (m, 6H),

7,3 (s, 1H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príprava XXVII

Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]amino]-23-[( 1,1 -dimetyletoxyjkarbonyl]-14,17-dioxo-2,4,13,16,18,23,27-heptaazaoktakos-2-endiovej

Analogicky ako v príprave XXIV sa z 1,79 g (4,04.10³mol) produktu, získaného podľa prípravy XXVI, získa 1,5 (výťažok 45 %) očakávaného produktu vo forme oleja. ^!H NMR (CDClj): 1,3 - 1,7 (m, 54H), 3,1 - 3,4 (m, 12H),

3,8 (d, 2H), 4,8, 5,2 a 5,7 (široký s, 2H), 6,0 a 6,7 (široký s, 1H), 8,3 (t, 1 H), 11,5 (s, 1H).

Príklad 9

Tris(trifluóracetát)N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-N'-[[[[8-[(aminoiminometyl)amino]oktyl]amino]karbonyl]metyl]-močoviny

Analogickým postupom ako v príklade 1 sa zo 1,5 g (1,84.10^-3 _mo]j produktu, získaného podľa prípravy XXVII, získa 1,14 g (výťažok 82 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

NMR (dimctylsulfoxid-d6): 1,25 - 1,55 (m, 16H), 1,9 (m, 2H), 2,9-3,10 (m, 12H), 3,6 (s, 2H), 6,0 - 6,3 (široký s, 2H), 6,8-8,6 (m, 11 H).

¹³C NMR (dimetylsulfoxid-d6): 22,9, 23,8, 26,0, 26,3, 27,1, 28,4, 28,5, 28,6, 29,1, 36,2, 38,4, 38,7, 40,7, 42,7, 43,8, 46,6, 156,7, 158,0,169,6.

Príprava XXVIII

1-(1,1-Dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl] amino] -12-oxo-2,4,11 -triazatridec-2-endio vej

K roztoku 1,6 g (4,5.10^-3 mol) bis(l,l-dimetyletyljesteru kyseliny [[(6-aminohexyl)imino]metylén]biskarbamovej a 0,6 g (6.10'³ mol) trietylamínu v 10 ml bezvodého dichlórmetánu sa po kvapkách pridá 0,67 g (5.1O^-3mol) chloridu kyseliny etyloxalátu v roztoku v 5 ml dichlórmetánu. Zmes sa mieša 1 h pri teplote miestnosti, potom sa za zníženého tlaku odparí rozpúšťadlo a získaný zvyšok sa chromatografujc na silikagéli s elúciou zmesou hexán/etylacetát 2 : 1 (v/v). Získa sa tak 1,68 g (výťažok 82 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

^]H NMR (CDC1₃): 1,3 - 1,7 (m, 29H), 3,3 - 3,4 (m, 4H),

4.4 (q, 2H), 7,1 (t, 1H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príprava XXIX

1-(1,1 -Dimetyletyljester kyseliny 3-[[( 1,1 -dimetyletoxy )-karbonyl Jaminoj-12-oxo-2,4,11 -triazatridec-2-endiovej

Analogicky ako v príprave III sa z 1,67 g (3,7.10^-3mol) produktu, získaného podľa prípravy XXVIII, získa 1,2 g (výťažok 75 %) očakávaného produktu vo forme oleja. *H NMR (CDC1₃): 1,25 - 1,7 (m, 26H), 3,3 - 3,5 (m, 4H),

7.4 (t, 1H), 8,5 (t, 1H), 11,5 (široký s, 1H).

Príprava XXX Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbony 1] amino]-19-[( 1,1 -dimetyletoxy jkarbonyl] -12,13-dioxo-2,4,11,14,19,23 -hexaazatetrakos-2-endio vej

Analogicky ako v príprave XXII sa z 1,4 g (3,5.10^-3mol) produktu, získaného podľa prípravy XXIX a 1,05 g (3.1O^-3 mol) l,l-(dimetyletyl)esteru kyseliny 10-amino-6-[(1,1 -dimetyletoxy)-karbonyl]-2,6-diazadekánovej získa

1,2 g (výťažok 53 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

*H NMR (CDCI3): 1,3 - 1,7 (m, 50H), 3,1 - 3,4 (m, 12H),

4,8 a 5,3 (široký s, 1H), 7,5 (m, 2H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príklad 10

Tris(trifluóracetáť) N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-N'-[6-[(aminoiminometyl)amino]hexyl]etándiamidu

Analogickým postupom ako v príklade 1 sa z 1,2 g (1,6.10^-3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XXX, získa 1,05 g (výťažok 95 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

*HNMR(dimetylsulfoxid-d6): 1,3 -1,65 (m, 12H). 1,9 (m, 2H), 2,8 - 3,3 (m, 2H), 6,8 - 9,9 (m, 12H).

¹³C NMR (dimetylsulfoxid-d6, D2O): 23,9, 24,7, 26,3,

26,4, 26,5, 28,7, 29,0, 37,5, 39,7, 40,4, 42,0, 45,4, 48,1, 157,7, 161,8, 162,1.

Príprava XXXI l-(l,l-Dimetyletyl)-13-etylester kyseliny 6-[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]-12-oxo-2,6,11-triazatridekándiovej

Analogicky ako v príprave XXVIII sa 2 g (5,8.10^-3mol) l,l-(dimetyletyl)esteru kyseliny 10-amino-6-[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]-2,6-diazadekánovej a 1,03 g (7,54.10^-3 mol) chloridu kyseliny etyloxalátu získa 2,31 g (výťažok 89 %) očakávaného produktu vo forme oleja. '11 NMR (CDCI3): 1,25 - 1,65 (m, 27H), 3,1 - 3,35 (m, 8H), 4,35 (q, 2H), 4,75 a 5,25 (široký s, III), 7,2 (s, 1H).

Príprava XXXII

-(1,1 -dimetyletyl)ester kyseliny 6-[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]-12-oxo-2,6,11-triazatridekándiovej

Analogicky ako v príprave III sa z 2,31 g (5,19.10^-3mol produktu, získaného podľa prípravy XXXI, získa 2,16 g (výťažok 100 %) očakávaného produktu vo forme oleja. *H NMR (CDCI3): 1,25 - 1,70 (m, 24H), 3,1 - 3,4 (m, 8H),

4,8 - 5,25 (dvojitý s, 1H), 7,5 (široký s, 1H).

Príprava XXXIII

Bis( 1,1 -dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[( 1,1 -dimetyletoxy)-karbonyl] amino]-21 -[(1,1 -dimety letoxyjkarbony I]-14,15-dioxo-2,4,13,16,21,25-hcxaazahexakos-2-endiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 1 g (2,4.10^-3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XXXII a 0,92 g (2,4.10^-3 mol) bis(l,l-dimetyletyl)esteru kyseliny [[(8-aminooktyl)imino]-metylén]biskarbamovej získa 0,9 g (výťažok 48 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

!h NMR (CDCI3): 1,3 (t, 3H), 1,4 - 1,7 (m, 24H), 3,0 - 3,4 (m, 8H), 4,25 (q, 2H), 4,4 (s, 1H), 4,5 - 4,7 (2d, 2H), 5,0 (s, 1H), 6,7 (s, 1H), 7,3 (m, 5H).

Príklad 11

Tris(trifluóracetát) N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-N'-[8-[(aminoiminometyl)amino]oktyl]ctándiamidu

Analogickým postupom ako v príklade 1 sa z 0,9 g (1,15.10^-3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XXXIII, získa 0,15 g (výťažok 18 %) očakávaného produktu vo forme oleja.

^!H NMR (dimetylsulfoxid-d6): 1,25 - 1,50 (m, 16H), 1,9 (m, 2H), 2,9 - 3,15 (m, 12H), 6,9 - 8,8 (m, 12H).

¹³C NMR (D₂O): 23,8, 24,5, 26,1, 26,5, 26,7, 28,6, 28,92, 28,95, 29,0, 37,3, 39,5, 40,4,42,0,45,2, 48,1.

Príprava XXXIV l-(l,l-Dimetyletyl)-14-etylester kyseliny 6-[( 1,1 -dimetyletoxy)-karbonyl]-12-oxo-13-fenylmetoxy-2,6,ll-triazatetradekándiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 3 g (12,6.10^-3 mol) etylesteru kyseliny 2-(fenylmetoxy)propándiovej a 4,4 g (12,6.10^-3 mol) 1,1-dimetyletylesteru kyseliny 10-amino-6-](l,l-dimetyletoxy)karbonyl]-2,6-diazadekánovej získa po prečistení chromatografiou na silikagéli (eluent:metylcyklohexán/etylacetát 8 : 2) očakávaný produkt s výťažkom 35 %.

>H NMR (CDCI3): 1,3 (t, 3H), 1,4 - 1,7 (m, 24H), 3,0 - 3,4 (m, 8H), 4,25 (q, 2H), 4,4 (s, 1H), 4,5 - 4,7 (2d, 2H), 5,0 (s, 1H),6,7(S, 1H), 7,3 (m, 5H).

SK 280286 Β6

Príprava XXXV

1-(1,1 -Dimetyletyljester kyseliny 6-[( 1,1 -dimetyletoxy)-karbony 1]-12-oxo-13-feny lmetoxy-2,6,11 -triazatetradekándiovej

2,46 g (4,3.10'5 mol) produktu, získaného podľa prípravy XXXIV, sa rozpustí v zmesi etanol/voda (1 : 1 objemovo) a pridá sa 258 mg hydroxidu sodného. Reakčná zmes sa mieša 25 h pri teplote miestnosti, a potom sa pridá 10 ml vody a 20 ml chloroformu a zmes sa okyslí pomocou IN kyseliny chlorovodíkovej na pH 2. Zmes sa extrahuje chloroformom a po vysušení nad síranom horečnatým sa organická fáza zahustí za zníženého tlaku. Získa sa tak očakávaný produkt s výťažkom 76 %.

¹11 NMR (CDC1₃): 1,4 - 1,7 (m, 24H), 3,0 - 3,4 (m, 8H),

4,4 - 4,5 (m, 1H), 4,7 - 5,1 (2d, 2H), 5,0 (s, 1H), 6,65 (s, 1H), 7,4 (m, 5H).

Príprava XXXVI Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)-karbonyl]amino]-22-[(1,1 -dimetyletoxyjkarbonyl]-14,16-dioxo-15-fenylmetoxy-2,4,13,17,22,26-hexaazaheptakos-2-endiovej

Analogicky ako v príprave IV sa z 1,67 g (3,11.10'5 mol) produktu, získaného podľa prípravy XXXV, a 1,20 g (3,11.10'5 mol) bis(l,l-dimetyletyl)esteru kyseliny [[(8-aminooktyl)imino]-metylén]biskarbamovej získa po prečistení chromatografíou na silikagéli (eluent: metylcyklohexán/etylacetát 7 : 3) očakávaný produkt vo forme oleja s výťažkom 59 %.

*H NMR (CDC1₃): 1,2 - 1,8 (m, 54H), 3,0 - 3,5 (m, 12H),

4.3 (s, 1H), 4,8 (m, 2H), 5,1 (s, 1H), 6,9 - 7,1 (m, 2H), 7,4 (m, 5H), 8,3 (t, 1 H), 11,5 (s, 1H).

Príprava XXXVII

Bis( 1,1 -dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[( 1,1 -dimetyletoxy)-karbony 1] amino]-22-[( 1,1 -dimetyletoxyjkarbonyl] -14,16-dioxo-15-hydroxy-2,4,13,17,22,26-hexaazaheptakos-2-endiovej

Analogicky ako v príprave XXI sa z 1,64 g produktu, získaného podľa prípravy XXXVI, získa očakávaný produkt s výťažkom 55 %.

^!H NMR (CDC1₃): 1,3 - 1,7 (m, 54H), 3,0 - 3,4 (m, 12H),

4.4 (s, 1H), 5,0 (s, 1H), 7,2 (s, 1H), 7,35 (s, 1H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príklad 12

Tris(trifluóracetát) N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-2-hydroxy-N'-[8-[(aminoiminometyl)amino]oktyl]propándiamidu

Analogickým postupom ako v príklade 1 sa z 0,81 g produktu, získaného podľa prípravy XXXVII, získa po prečistení chromatografíou MPLC na vrúbľovanom silikagéli RP 18 (eluent: voda/acetonitril/kyselina trifluóroctová

7.5 : 1,5 : 1) očakávaný produkt vo forme oleja s výťažkom 67 %.

¹H NMR (DMSO-d6): 1,1 - 1,7 (m, 16H), 1,9 (m, 2H), 2,8- 3,2 (m, 1211), 4,3 (s, 1H), 6,9 - 8,7 (m, 12H).

¹³C NMR (DMSO-d6):14,8, 20,9. 22,2, 23,1, 25,3, 25,9,

25,5, 28,7, 28,9, 36,8, 38,1, 43,8, 46,2, 60,1, 71,8, 157,3, 166,2, 166,5.

Príprava XXXVIII l-(l,l-Dimetyletyl)-14-etylester kyseliny 6-[(l,l-dimetyletoxyj-karbonyl]-13-fluór-12-oxo-2,6,11 -triazatetradekándiovej

Pripraví sa roztok 1,7 g (11.10^-3 mol) etylesteru kyseliny 2-fluórpropándiovej a 2,22 g (22.10'5 _mo|^ X-jnetylmorfolínu v 50 ml tetrahydrofuránu (THF) a 5 ml bezvodého dimetylformamidu. Zmes sa potom ochladí na -20 °C, potom sa pridá 1,6 ml (12.10'5 mol) izobutylchlórformiátu v roztoku v 5 ml THF. Zmes sa mieša 30 minút pri -20 potom sa pridá 3,9 g (11.10'³ mol) 1,1-dimetyl-etylesteru kyseliny 10-amino-6-[(l,l-dimetyletoxy)karbonyl]-2,6-diazadekánovej v roztoku v 30 ml THF. Zmes sa udržuje 2 h za miešania pri -20 C a potom 12 h pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa prefiltruje a filtrát sa zahustí za zníženého tlaku. Získaný zvyšok sa prečistí chromatografíou na silikagéli (eluent: metylcyklohexán/etylacetát 7 : 3). Získa sa očakávaný produkt vo forme oleja s výťažkom 34 %.

'H NMR (CDClj): 1,34 (t, 3H), 1,4 - 1,7 (m, 24H), 3,0 - 3,4 (m, 8H), 4,3 (m, 2H), 5,0 (s, IH), 5,25 (d, 1H), 6,55 (s, 1H).

Príprava XXXIX

1-(1,1-Dimetyletyl)ester kyseliny 6-[(1,1-dimetyletoxyjkarbonyl]-1 3 -fluór-12-oxo-2,6,11 -triazatetradekándio vej

Pripraví sa roztok 1,8 g (3,8.10'³ mol) produktu, získaného podľa prípravy XXXVIII, v 6 ml vodného IN hydroxidu sodného a 20 ml dimetoxyetánu. Po 1 h miešania pri teplote miestnosti sa pridá 10 ml vody a 20 ml dichlórmetánu a zmes sa pomocou IN kyseliny chlorovodíkovej okyslí na pH 2. Vykoná sa extrakcia dvakrát 20 ml dichlórmetánu, organická fáza sa vysuší nad síranom horečnatým a zahustí za zníženého tlaku. Získa sa tak 1,55 g očakávaného produktu vo forme oleja (výťažok 91 %).

¹11 NMR (CDC1₃): 1,4 - 1,7 (m, 24H), 3,0 - 3,35 (m, 8H), 5,0 (d, 1H), 5,3 (d, 1H), 6,5 (s, 1H).

Príprava XL

Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)karbonyl]amino]-20-[( 1,1 -dimetyletoxyjkarbonyl]-12,14-dioxo-13 - íl uór-2,4,11,15,20,24-hexaazapentakos-2-endiovej

K roztoku 1 g (2,2.10^-3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XXXIX, a 4,5 g (4,4.10'5 _moi) N-metylmorfolínu v 30 ml bezvodého THF, chladenému na -20 °C, sa po kvapkách pridá 0,29 ml (2,2.10'5 _mo|) izobutylchlórformiátu v roztoku v 5 ml THF. Mieša sa 30 minút pri -20° C, potom sa pridá 0,876 g (2,2.10^-3 mol) bis(l, 1-dimetyletyljesteru kyseliny [[(6-aminohexyl)imino]-tnetylénjbiskarbamovej a 0,34 ml (2,2.10^-3 mol) trietylamínu v roztoku v 5 ml THF. Teplota sa udržuje 2 h na -20 °C, potom sa zmes nechá ohriať na teplotu miestnosti a pokračuje sa v miešaní ešte 12 h. Reakčná zmes sa prefiltruje a potom sa zahustí za zníženého tlaku. Zvyšok sa potom prečistí chromatografíou na silikagéli (eluent: etylacetát/cyklohexán 7 : 3) a získa sa 1,43 g očakávaného produktu vo forme oleja (výťažok 81 %).

Hl NMR (CDClj): 1,3 - 1,7 (m, 50H), 3,0 - 3,45 (m, 12H), 5,0 (s, 1H). 5,2 (d, 1H), 6,8 - 7,1 (m, 2H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H).

Príklad 13

Tris(trifluóracetát) N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-N'-[6-[(aminoiminometyl)amino]hexyl]-2-fluórpropándiamidu

Analogickým postupom ako v príklade 1 sa z 0,4 g (0,5.10^-3 mol) produktu, získaného podľa prípravy XL, získa po prečistení chromatografiou MPLC na vrúbľovanom silikagéli RP 18 (eluent: voda/acetonitril/kyselina trifluóroctová 7,5 : 2 : 0,5) 263 mg očakávaného produktu vo forme oleja (výťažok 71 %).

’H NMR (DMSO-d6): 1,25 - 1,55 (m, 12H), 1,9 (m, 2H), 2,7 - 3,15 (m, 12H), 5,2 (d, 1H), 6,9 - 8,7 (m, 12H).

¹³C NMR (D₂O/dioxán-d6): 23,6, 24,53, 26,17, 26,25, 28,55, 28,79, 37,34, 39,32, 40,08, 45,22, 48,09, 87,00, 89,66,157,0, 166,2, 166,7.

Príprava XLI Bis(l,l-dimetyletyl)ester kyseliny 3-[[(l,l-dimetyletoxy)karbonyl]amino]-22-[(l,l-dimetyletoxy)karbonyl]-15-fluór-14,16-dioxo-2,4,13,17,22,26-hexaaza-heptakos-2-endiovej

Analogicky ako v príprave XXII sa z 0,460 g (1,02.1 O*³ mol) produktu, získaného podľa prípravy XXXIX, a 0,395 g (1,02.10^-3 mol) bis(l, 1-dimetyletyl)esteru kyseliny [[(8-aminooktyl)imino]-metylén]biskarbamovej získa po prečistení chromatografiou na silikagéli (eluent: etylacetát/cyklohexán 6 : 4) 0,513 g očakávaného produktu vo forme oleja (výťažok 61 %).

>11 NMR (CDC1₃): 1,2 - 1,7 (m, 5411), 3,0 - 3,4 (m, 12H), 5,0 (s, 1H), 5,2 (d, 1H), 6,8 - 7,1 (m, 2H), 8,3 (t, 1H), 11,5 (s, 1H)

Príklad 14

Tris(trifluóracetát) N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyľ|-2-fluór-N'-[8-[(aminoiminometyl)amino]oktyl]propándiamidu

Analogickým postupom ako v príprave XXII sa z 0,460 g (1, 02.10³ mol) produktu, získaného podľa prípravy XLI, získa po prečistení chromatografiou MPLC na vrúbľovanom silikagéli RP 18 očakávaný produkt vo forme 0leja.

!h NMR (DMSO-d6): 1,25 - 1,50 (m, 1H), 1,84 (m, 2H), 2,7 - 3,15 (m, 12H), 5,2 (d, III), 6,9 - 8,7 (m, 12H).

¹³C NMR (D₂O/dioxán-d8): 23,66, 24,55, 26,18, 26,28, 26,57, 27,48, 28,86, 37,35, 39,31, 40,21, 40,33, 45,23, 48,10, 87,26 - 89,86, 157,0, 166,2, 166,7.

Príklad 15

Tris-chlórhydrát N-[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]-N'-[6-[(ammoiminometyl)amino]hexyl]propándiamidu

Metóda A q

g (1,4.10^-3 mol) produktu, získaného podľa príkladu 1, sa rozpustí v zmesi 7 ml 10M kyseliny chlorovodíkovej a 50 ml destilovanej vody, a potom sa získaný roztok lyofilizuje. Táto operácia sa dvakrát opakuje. Zvyšok z lyofilizácie sa vyberie do zmesi 9 ml etanolu a 1 ml metanolu. Kryštály, získané po 24 h pri teplote miestnosti, sa odfiltrujú, premyjú izopropyléterom a vysušia vo vákuu. Získa sa tak očakávaný produkt vo forme bielych kryštálov s výťažkom 68 %.

Teplota topenia 130 °C.

Metóda B

2,5 g (3,28.10^-3 mol) produktu, získaného podľa prípravy IV, sa rozpustí v 25 ml metanolu, nasýteného chlorovodíkom. Potom, čo sa zmes mieša cez noc pri teplote miestnosti, zahustí sa roztok za zníženého tlaku a zvyšok sa vyberie do roztoku v 10 ml vody a potom sa lyofilizuje. Takto získaná zlúčenina sa prekryštalizuje zo zmesi etanolmetanol (9 : 1). Získa sa tak kryštalický produkt s výťažkom 52 %.

Príklad 16

Trishydrochlorid 2-[[[4-[[3-(amino)propyl]amino]butylJamino]karbonyloxy]-N-[6-[(aminoiminometyl)amino]hexyljacetamidu

Analogicky ako v príklade 15 (metóda B) sa z produktu, získaného podľa prípravy XVI, získa očakávaný produkt vo forme kryštálov s výťažkom 58%.

Teplota topenia 148° C.

Imunosupresívna činnosť produktov podľa vynálezu bola preukázaná testom reakcie transplantátu proti hostiteľovi. Samce myší B6D2F1 (prvogeneračné hybridy C57B1/6 x DBA/2) sú imunodeprimované intraperitoneálnou injekciou (i.p.) cyklofosfamidu. Po troch dňoch (deň 0 pokusu, DO) je im intravenóznou cestou aplikované 4.10³ splenocytov myší C57B1/6. Zvieratá sa potom rozdelia do skupín po najmenej 8 a dostávajú i.p. cestou denného ošetrenia Dl až D5 a D7 až D10. Kontrolná skupina dostáva samotné vehikulum. Mortalita sa sleduje až do D60. Výsledky, vyjadrené strednou hodnotou prežitia v dňoch pri uvedenej dávke, sú zhrnuté v tabuľke I, kde uvedené hodnoty sú signifikantné podľa Logrankovho testu (pravdepodobnosť je nižšia alebo sa rovná 5 %). Na konci porovnania boli v tabuľke I taktiež uvedené hodnoty, získané pri produktoch podľa dosiaľ známeho stavu: 15-deoxyspergualínu (DSG), cyklosporínu A, ktorý je v súčasnosti terapeuticky používaným referenčným imunosupresivnym, a produktu príkladu 1, opísaného v EP-A-0 105 193. Z tohto porovnania vyplýva, že produkty podľa vynálezu sú až 250-krát účinnejšie než známe produkty podľa doterajšieho stavu. Najmä produkt podľa príkladu 1 podľa vynálezu má signifikantnú účinnosť už od 0,1 mg/kg, zatiaľ čo porovnávací produkt príkladu 1 EP-A-0 105 193 má signifikantnú účinnosť až od 1 mg/kg, 15deoxyspergualín až od 0,3 mg/kg a cyklosporín A až od 25 mg/kg.

Zlúčeniny podľa vynálezu majú navyše stabilitu v roztoku zreteľne vyššiu než známe produkty podľa doterajšieho stavu, najmä 15-deoxyspergualin.

Produkty podľa vynálezu sú vhodné na terapeutické použitie ako kuratívne alebo preventívne imunosupresivne prostriedky, najmä pri prevencii odmietania alogénnych alebo xenogénnych vaskularizovaných alebo nevaskularizovaných orgánov, reakcie transplantátu na hostiteľa pri vaskularizovanom alebo nevaskularizovanom transplantáte, pri liečbe genetických definovaných alebo získaných autoimunitných chorôb, chronických zápalových chorôb a ďalej všetkých patologických stavov, kde sa príčinou alebo faktorom, zodpovedným za trvanie klinického stavu oslabenia, prejavuje imunitná porucha.

Produkty podľa vynálezu môžu byť takisto podávané ako doplnok cytotoxických antikanceróznych liečiv na obmedzenie sekundárnych účinkov a ako doplnok podávania produktov, vzniknutých biotechnológiou, najmä rekombinantných cytokínov, mono- a polyklonálnych protilátok, na zníženie výskytu ochranných protilátok produkovaných pacientom.

Produkty podľa vynálezu môžu byť používané pri kuratívnej liečbe parazitov, najmä v prípade malárie.

Produkty podľa vynálezu môžu byť podávané orálnou alebo injekčnou, najmä intramuskulárnou alebo intravenóznou cestou, formou topickej aplikácie, najmä vo forme mastí na miestnu aplikáciu, formou očných kvapiek, transdermálnou cestou, formou čapíkov alebo inhalačné.

8. Spôsob prípravy zlúčeniny vzorca (I) alebo jej adičnej soli, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje odstránenie chrániacich skupín zo zlúčeniny vzorca (VII)

TABUĽKA I

Príklady *		A	iáinnoet
dúvka	prežitie
3	6	CH;	0,1	27,6
2		CH.	0.3 3	45.5 47.0
3	6	CHlOCHji	3	55,3
A		CHlCCHjí	3	27,6
S	€	Cfi,0	3	57,M
	6	CHIOMi	3	53.0
	6	CHjNH	0,3	39.B
to	6	Jednoduchí väjba		57,9
11	8	jednoduchí		59.4
		vázba
12	8	CHiOH)	1	55,6
13	6	CHF	3	oQ,0
15-deoxyípersualín cyklo*porín A pf. 1 F.P-A-0 1.05 193			0.3 25 1	43.1 32.1 36,0 32.0

» vo forme tTie(trifXuwkB*tätu) pe· pzcdukt.y podf* vyniletu (VII), kde n a A majú uvedený význam a

Rj predstavuje chrániacu skupinu alkoxykarbonylového typu, reakciou so silnou kyselinou s cieľom náhrady R| atómom H.

9. Spôsob výroby zlúčeniny všeobecného vzorca (I) alebo jej adičnej soli podľa nároku 8, vyznačujúci sa t ý m , že je zvolený zo súboru, zahrnujúceho: - variant A, zahrnujúci stupne:

(i) reakciu zlúčeniny vzorca (II) ^R>

(CKJ n

(Xi),' kde n sa rovná 6 alebo 8 a

R] predstavuje aminochrániacu skupinu, s kyselinou alebo chloridom kyseliny vzorca (III)

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

1. Analógy 15-deoxyspergualínu zahrnujúce (i) zlúčeniny všeobecného vzorca (I)

NH o 0 (i) kde n sa rovná 6 alebo 8,

A predstavuje jednoduchú väzbu, skupinu CH2, skupinu CH(OH), skupinu CHF, skupinu CH(OCHj), skupinu CH2NH alebo skupinu CH2O a (ii) ich adičné soli.
2. Zlúčenina podľa nároku 1 .všeobecného vzorca (I), kde n sa rovná 6.
3. Zlúčenina podľa nároku 1, všeobecného vzorca (I), kde n sa rovná 8.
4. Zlúčenina podľa nároku 1, všeobecného vzorca (I), kde A predstavuje skupinu CH2O.
5. Zlúčenina podľa nároku 1, všeobecného vzorca (I), kde A predstavuje skupinu CH2.
6. Zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je 2-[[[4-[[3-(amino)propyl]amino]butyl]amino]karbonyloxy]-N-[6-[(aminoiminometyl)amino]-hexyl]acetamid a jeho adičné soli s minerálnou alebo organickou kyselinou.
7. Zlúčenina podľa nároku 1, ktorou je N-[4-[[3-(amino)propy 1] amino] butyl] -N'- [6-[(aminoimino-metyl)amino]hexyl]propándiamid a jeho adičné soli s minerálnou alebo organickou kyselinou.

O o (HI)₍ kde

X predstavuje atóm chlóru alebo skupinu OH,

A predstavuje jednoduchú väzbu, skupinu CH2, skupinu CHF, skupinu CH(OCH₂C₆H₆) alebo skupinu CH(OCH₃) a

R2 predstavuje lineárnu alebo rozvetvenú C]-C₃ alkylovú skupinu alebo fenylmetylovú skupinu, v organickom rozpúšťadle v prítomnosti aktivátora karboxylovej skupiny a nukleofilného činidla pri teplote v rozmedzí 0 až 40 °C pri pomere 1 mol zlúčeniny II k 1 mol zlúčeniny III za vzniku zlúčeniny vzorca (IV)

R, ¹ ‘NM O O (IV>, kde

Rp R2 a n majú uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, CH2, CHF, CH(OCH₂C₆H₆) alebo CH(OCH₃), (ii) zmydelnenie takto získanej zlúčeniny vzorca (IV) v organickom rozpúšťadle v prítomnosti silnej bázy za vzniku zlúčeniny vzorca (V) o O

«.Ah/'^'^AA m, kde

Rj a n majú uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, CH₂, CHF, CH(OCH₂C₆H₆) alebo CH(OCH₃), (iii) kondenzáciu takto získanej zlúčeniny vzorca (V) s amínom vzorca (VI) «I (VI )| kde

R] má uvedený význam, za rovnakých podmienok ako v stupni (i) za vzniku zlúčeniny vzorca (VII)

IVII)| (iv) ak je to nutné, odstránenie chrániacich skupín zo zlúčeniny vzorca (VII), kde A predstavuje skupinu

CH(OCH₂CgIIg). katalytickou hydrogenáciou za vzniku zlúčeniny vzorca (VII), kde A predstavuje skupinu

CH(OH), (v) odstránenie chrániacich skupín zo zlúčeniny (VII), získanej v stupni (iii) alebo (iv), kde A predstavuje jednoduchú väzbu CH₂, CHF, CH(OH) alebo CH(OCH₃), za odštiepenia chrániacej skupiny R, pôsobením silnej kyseliny a za vzniku adičnej soli zlúčeniny vzorca (I), kde A je jednoduchá väzba, CH₂, CHF, CH(OH) alebo CH(OCH₃) a (vi) ak je to nutné, pôsobením silnej bázy získanie zlúčeniny vzorca (I) vo forme voľnej bázy a potom z tejto voľnej bázy ďalšie adičné soli;

- variant B, zahrnujúci stupne:

(i) reakciu zlúčeniny vzorca (VI) «I <VI>, kde

R] predstavuje uvedenú chrániacu skupinu, s kyselinou alebo chloridom kyseliny vzorca (III)

X predstavuje atóm chlóru alebo skupinu OH,

A predstavuje jednoduchú väzbu, skupinu CH₂, skupinu CHF, skupinu CH(OCH₂CgHg) alebo skupinu CH(OCH₃) a

R₂ lineárnu alebo rozvetvenú C]-C₃ alkylovú skupinu alebo fenylmetylovú skupinu, v organickom rozpúšťadle v prítomnosti aktivátora karboxylovej skupiny a nukleofilného činidla pri teplote v rozmedzí 0 až 40 °C pri pomere 1 mol zlúčeniny (VI) k 1 mol zlúčeniny (III) za vzniku zlúčeniny vzorca (VIII) o o ivril), kde

Rj a R₂ majú uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, CH₂, CHF, CH(OCH₃) alebo CH(OCH₂C₆H₆), (ii) zmydelnenie takto získanej zlúčeniny vzorca (VIII) v organickom rozpúšťadle v prítomnosti silnej bázy za vzniku zlúčeniny vzorca (IX)

O o

I

R, (ix>_t kde

Rj má uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, CH₂, CHF, CH(OCH₃) alebo CH(OCH₂C₆H₆), (iii) kondenzáciu takto získanej zlúčeniny vzorca (IX) s amínom vzorca (II)

R,, ¹ NH (II), kde n sa rovná 6 alebo 8 a

Rj má uvedený význam, za rovnakých podmienok ako v stupni (i) za vzniku zlúčeniny vzorca (VII) ,

™ o o ^R' -ih'Xť nX Á JL W ÍÍH- ^Γ, ΗΗ Λ XH * *Χϊ----- ² ’

I «1 (Vil),

Rj a n majú uvedený význam a

A predstavuje jednoduchú väzbu, CH₂, CHF, CH(OCH₃) alebo CH(OCH₂C₆H₆), (iv) ak je to nutné, odstránenie chrániacich skupín zo zlúčeniny vzorca (VII), kde A predstavuje skupinu CH(OCH₂C^Hg), katalytickou hydrogenáciou za vzniku zlúčeniny vzorca (VII), kde A predstavuje skupinu CH(OH), (v) odstránenie chrániacich skupín z takto získanej zlúčeniny (VII), pôsobením silnej kyseliny za vzniku adičnej soli zlúčeniny vzorca (1), kde A je jednoduchá väzba, CHj, CHF, CH(OCH₃) alebo CH(OH), (vi) ak je to nutné, pôsobením silnej bázy získanie zlúčeniny vzorca (I) vo forme voľnej bázy a potom z tejto voľnej bázy ďalšie adičné soli;

- variant C, zahrnujúci stupne:

(i) reakciu koncovej skupiny NH2 bázy vzorca (X) ’γι w, kde

R] predstavuje uvedenú aminochrániacu skupinu a n sa rovná 6 alebo 8 s alkylchlórformiátom alebo symetrickým karbonátom v inertnom rozpúšťadle pri teplote miestnosti (15 až 25 °C), (ii) aminolvzy takto získanej zlúčeniny amínom vzorca (VI) o o

AHit · I, kde

R2 predstavuje lineárnu alebo rozvetvenú Cj-Cj alkylovú skupinu alebo fenylmetylovú skupinu, v inertnom rozpúšťadle pri teplote refluxu reakčného prostredia pri pomere 1 mol zlúčeniny (VI) k 1 mol zlúčeniny 111' za vzniku zlúčeniny vzorca (VIII) o o

R.

(VIII)I kde

Rj a R2 majú uvedený význam a

A predstavuje skupinu CF^O, (ii) odstránenie chrániacich skupín z takto získanej zlúčeniny vzorca (VIII) v organickom rozpúšťadle v prítomnosti silnej bázy alebo katalytickou hydrogenáciou za vzniku zlúčeniny vzorca (IX) (VI i, kde

R j má uvedený význam, za vzniku zlúčeniny vzorca (VII) ^R1 {VII), kde

R] an majú uvedený význam a

A predstavuje skupinu CHjNH, (iii) odstránenie chrániacich skupín z takto získanej zlúčeniny vzorca (VII) pôsobením silnej kyseliny za vzniku adičnej soli zlúčeniny vzorca (I), kde A je CHjNH a (iv) ak je to nutné, pôsobením silnej bázy získanie zlúčeniny vzorca (I) vo forme voľnej bázy a potom z tejto voľnej bázy ďalšie adičné soli; a

- variant D, zahrnujúci stupne:

(i) reakciu zlúčeniny vzorca (VI) <VI l| kde

R[ predstavuje uvedenú chrániacu skupinu, s karbonátom vzorca (III') kde

R] má uvedený význam a

A predstavuje CHjO.

(iii) kondenzáciu takto získanej zlúčeniny vzorca (IX) s amínom vzorca (II) (cn,) (ID,' kde

R j má uvedený význam a n sa rovná 6 alebo 8, v organickom rozpúšťadle v prítomnosti aktivátora karboxylovej skupiny a v prítomnosti nuklcofilnčho činidla pri teplote v rozmedzí 0 až 40 °C pri pomere 1 mol zlúčeniny (IX) k 1 mol zlúčeniny (II) za vzniku zlúčeniny vzorca (VII) (VII)

R] an majú uvedený význam a

A predstavuje CHjO, (iv) odstránenie chrániacich skupín z takto získanej zlúčeniny vzorca (VII), pôsobením silnej kyseliny za vzniku adičnej soli zlúčeniny vzorca (I), kde A je CH2O a (v) ak j c to nutné, pôsobením silnej bázy získanie zlúčeniny vzorca (I) vo forme voľnej bázy a potom z tejto voľnej bázy ďalšie adičné soli.
10. Terapeutický prostriedok, vyznačujúci sa t ý m , že v spojení s fyziologicky prijateľným základom obsahuje aspoň jednu zlúčeninu, zvolenú zo súboru, zahrnujúceho zlúčeniny vzorca (I) a ich adičné soli podľa nároku 1.
11. Medziprodukt, zúčastňujúci sa syntézy zlúčenín vzorca (I) podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že je zvolený zo súboru, zahrnujúceho zlúčeniny vzorca (VII)

R₍ (CH₂) (vnii kde

R] predstavuje chrániacu skupinu, n sa rovná 6 alebo 8 a

A predstavuje jednoduchú väzbu, skupinu Cľfy, skupinu CH(OH), skupinu CHF, skupinu CH(OCiIj), skupinu CH2NH, skupinu CH2O alebo skupinu CHĺOC^CgHg).
12. Použitie imunodepresívnej látky, zvolenej zo súboru, tvoreného zlúčeninami vzorca (I) a ich netoxickými adičnými soľami podľa nároku 1, na prípravu liečiva na použitie v terapii imunitných porúch.
13. Použitie látky, zvolenej zo súboru, zahrnujúceho zlúčeniny vzorca (I) a ich netoxické adičné soli podľa nároku 1, na prípravu liečiva na použitie v terapii malárie.