SK280137B6

SK280137B6 - Deriváty 11-benzaldoxím-4,9-estradiénu, spôsob ich

Info

Publication number: SK280137B6
Application number: SK957-94A
Authority: SK
Inventors: Gerd Schubert; G�Nther Kaufmann; Lothar Sobeck; Michael Oettel; Walter Elger; Anatoli Kurischko
Original assignee: Jenapharm Gmbh & Co. Kg
Priority date: 1993-09-20
Filing date: 1994-08-10
Publication date: 1999-08-06
Also published as: NO942953L; US5693628A; HU9402694D0; HUT68029A; CZ197094A3; CA2130516A1; NO942953D0; EP0648778A3; EP0648778B1; JPH07149789A; ES2108371T3; HU223339B1; NZ264229A; CA2130516C; NO304989B1; ATE156835T1; DK0648778T3; PL305092A1; AU7035094A; FI943687A

Description

Vynález sa týka nových 11-benzaldoxímestradiénových derivátov, spôsobu ich prípravy a liečiv obsahujúcich tieto zlúčeniny.

Doterajší stav techniky

Ιΐβ-Substituované fenylestratriény sú už známe. Príprava 1 ip-aryl-17P-propinyl-4,9-estradiénov už je opísaná napr. v patentovom spise EP 057 115, reakcia 1 lf>-(4-tormylfenyl)-4,9-estradien-3-ónov s hydroxylamínmi je opísaná v patentovom spise DE 3504421. Podľa uvedených postupov vznikne oxím tak z Ιΐβ-fonnylfenylskupiny, ako aj z 3-ketoskupiny. Okrem toho vzniknú na C-3 syn- a anti- izoméry. O účinku opísaných zlúčenín nie je doteraz nič známe.

Progesterónje počas cyklu a počas gravidity vylučovaný vo veľkých množstvách vaječníkmi a placentou. Jeho regulačný význam pravdepodobne nie je vo všetkých aspektoch objasnený.

Isté je, že progesterón ovplyvňuje v spoluúčinkovaní s estrogénmi cyklické zmeny sliznice maternice v menštruačnom cykle a gravidite. Pod vplyvom zvýšenej hladiny progesterónu po ovulácii je sliznica maternice v takom stave, že umožní zahniezdenie embrya (blastocysty). Zachovanie tkanív, v ktorých sa rozširuje rastúce embryo, je tiež závislé od progesterónu.

Počas gravidity nastáva dramatická zmena svalovej funkcie maternice. Sval gravidnej maternice reaguje veľmi slabo alebo nereaguje vôbec na hormonálne alebo mechanické podráždenia, ktoré mimo gravidity spôsobujú bolesti. Nie je pochýb, že pritom hrá kľúčovú úlohu progesterón, aj keď v niektorých fázach gravidity, napr. bezprostredne pred pôrodom, sa prejavuje pri extrémne vysokých hladinách progesterónu v krvi jeho vysoká reakčná schopnosť.

Iné typické prejavy tehotenstva sú rovnako výrazom veľmi vysokej hladiny progesterónu. Zväčšovanie mliečnych žliaz a pevné uzavretie krčku maternice až do blízkosti termínu pôrodu sú príkladom tohto efektu.

Progesterón sa v malej miere zúčastňuje na riadení ovulačných orgánov. Je známe, že progesterón má vo veľkých dávkach antiovulačné vlastnosti. Tieto vlastnosti vyplývajú zo zábrany hypofýznej sekrccic gonadotropínu, ktorá je predpokladom pre dozretie folikula a jeho ovuláciu. Na druhej strane je zrejmé, že porovnateľne nižšia sekrécia progesterónu v dozrievajúcom folikule hrá aktívnu úlohu pri príprave a spustení ovulácie. Pritom hrajú viditeľne dôležitú rolu hypofýzne mechanizmy (časovo obmedzená, dokonca pozitívna odozva progesterónu na sekréciu gonadotropínu) (Loutradie D., Human Reproduction 6, 1991,1238-1240).

Menej podrobne sú analyzované funkcie progesterónu v dozrievajúcom folikule a vlastnom žltom teliesku, o existencii ktorých nie sú pochybnosti. Koniec koncov sa aj tu predpokladajú stimulujúce a brzdiace efekty na endokrinné folikuly a funkciu žltého telieska.

Dôležitá úloha progesterónu a progesterónových receptorov sa predpokladá aj v patopsychologických procesoch. Progesterónové receptory sú dokázateľné v endometrióznych ohniskách, ale aj v tumoroch maternice, prsníka a centrálneho nervového systému (meningeómy). Úloha týchto receptorov pri raste týchto patologicky relevantných tkanív nie je nevyhnutne viazaná na prítomnosť hladiny progesterónu v krvi. Je dokázané, že substancie, ktoré sú charakterizované ako progesterónové antagonisty, RU 486 = Mifepriston (EP-0 057 115) a ZK 98299 = Onapriston (DE-OS-35 04 421), vyvolávajú aj neskôr hlboko siahajúce funkčné zmeny v týchto tkanivách, keď je v krvi prítomná zanedbateľné nízka hladina progesterónu. Zdá sa b\ť možné, že pritom hrajú dôležitú úlohu zmeny transkripčných účinkov progesterónom neobsadeného progesterónového receptora antagonistami (ChwaliszK. etal., Endocrinology, 129, 317-322, 1991).

Účinky progesterónu v tkanivách genitálnych orgánov a ostatných tkanivách nastávajú interakciou s progesterónovým receptorom. V bunke sa naviaže progesterón s vysokou afinitou na svoj receptor. Zmeny receptorového proteínu sú ovplyvnené týmito faktormi: zmeny konformácie, dimerizácia 2 receptorových jednotiek do jedného komplexu, uvoľnenie väzbového miesta v receptore DNA po disociácii jedného proteínu (HSP 90) a naviazaní na hormonálne zodpovedajúcu časť DNA. Nakoniec je transkripcia určitých génov regulovaná (Gronemeyer H. et al., J. Steroid Biochem. Molec. Biol. 41, 3-8, 1992).

Účinok progesterónu alebo progesterónových antagonistov nie je závislý iba od ich koncentrácie v krvi. Koncentrácia receptorov v bunke je rovnako veľmi regulovaná. Estrogény stimulujú syntézu progesterónových receptorov vo väčšine tkanív. Progesterón brzdí syntézu estrogénových receptorov a syntézu jeho vlastného receptora. Pravdepodobne sú to tieto a iné interaktívne vzťahy medzi estrogénmi a gestagénmi, ktoré môžu vysvetliť, prečo môžu gestagény a antigestagény ovplyvniť estrogénovo závislé prejavy bez toho, aby boli naviazané estrogénovým receptorom. Tieto vzťahy majú prirodzene veľký- význam pri terapeutickom použití antígestagénov. Tieto substancie sa zdajú byť vhodné, aby mohli cielene zasiahnuť do reprodukčných dejov ženy, napr. poovulačných, na zabránenie nidácie, v neskorej gravidite, na zvýšenie reakčnej pohotovosti maternice na prostaglandín a oxytocin, alebo aby sa dosiahlo otvorenie a zmäknutie („dozrievanie“) cervixu.

Antigestagény brzdia pri rôznych subhumánnych druhoch primátov ovuláciu. Mechanizmus tohto účinku nie je jednoznačne objasnený. Diskutované sú okrem zábran sekrécie gonadotropínu aj ovariálne mechanizmy kvôli poruche para- a autokrinných funkcii progesterónu vo vaječníkoch.

Antigestagény majú schopnosť modulovať alebo oslabovať efekty estrogénov, aj keď samotné prevažne nemajú žiadnu afinitu k estrogénnym receptorom v cytoplazmatickej rovine a aj keď môžu ovplyvňovať koncentráciu estrogénových receptorov. Od príslušných efektov v endometrióznych ohniskách, prípadne v tenorových tkanivách, ktoré boli vybavené estrogénovými a progesterónovými receptormi, sa dá očakávať priaznivé ovplyvnenie zdravotného stavu. Mimoriadne prednosti priaznivého ovplyvnenia zdravotného stavu ako endometriózy by mohli byť dané, keby sa k brzdiacim efektom antigestagénu pôsobením v tkanive pripojilo brzdenie ovulácie. S brzdením ovulácie by odpadla aj časť ovariálnej hormonálnej produkcie a tým aj stimulačný efekt na patologicky zmenené tkanivo. Pri prítomnosti ťažkej endometriózy by bolo želateľné brzdiť ovuláciu a uviesť stále sa prestavujúce tkanivá genitálneho traktu reverzibilne do pokojového stavu.

Diskutuje sa aj o postupe pri antikoncepcii, pri ktorom antigestagénna liečba potláča ovuláciu a následnou gestagénnou liečbou sa indukuje sekretorická transformácia endometria tak, aby z liečebných krokov s antigestagénmi a gestagénmi a liečebnej pauzy rezultoval cca 28-denný cyklus s pravidelnými krvácaniami (Baulieu, E. E., Advances in Contraception 7, 345-351,1991).

Antigestagény môžu mať rôzne hormonálne a antihormonálne vlastnosti. Mimoriadnym terapeutickým efektom sú zároveň aj antiglukokortikoidné vlastnosti. Tieto sú

SK 280137 Β6 vhodné na terapeutické použitia, pri ktorých je v popredí terapie blokovanie nepriaznivých progesterónových receptorov, ktoré spôsobujú v terapeuticky potrebných množstvách nepriaznivé vedľajšie účinky, ktoré znemožňujú aplikáciu terapeuticky zmyselného množstva, alebo môžu viesť k ukončeniu liečby. Čiastočná alebo úplná redukcia antiglukokortikoidných vlastností je dôležitým predpokladom terapie s antigestagénmi, najmä pri tých indikáciách, ktoré vyžadujú viactýždňovú alebo mesačnú liečbu.

Podstata vynálezu

Úlohou predloženého vynálezu je poskytnúť nové 11β-benzaldoxím-4,9-estradiénové deriváty všeobecného vzorca©

a ich farmaceutický prijateľné soli, ako aj spôsob ich prípravy.

Vynález sa ďalej týka liečiv, ktoré obsahujú zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ.

Vo všeobecnom vzorci (I)

R¹ znamená atóm vodíka alebo alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka,

R² predstavuje atóm vodíka, alkylovú, arylovú, aralkylovú alebo alkylarylovú skupinu s 1 -10 atómami uhlíka, acylový' zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo zvyšok -CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ predstavuje atóm vodíka, alkylový, arylový, aralkylový alebo alkylarylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka,

R³ predstavuje atóm vodíka, alkylovú. arylovú, aralkylovú alebo alkylarylovú skupinu s 1 -10 atómami uhlíka, zvyšok -(CH₂)_n-CH₂X, pričom n = 0, 1 alebo 2, X predstavuje atóm fluóru, chlóru, brómu alebo jódu, kyanovú, azidovú alebo rodanidovú skupinu, zvyšok OR⁵ alebo SR⁵, pričom R⁵ je atóm vodíka, alkylový, arylový, aralkylový alebo alkylarylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, zvyšok OR⁵, pričom R⁵ má uvedený význam, zvyšok -(CH₂)_O-CH=CH(CH₂)_P-R⁶, pričom o = 0, 1,2 alebo 3 a p = 0, 1 alebo 2 a R⁶ predstavuje atóm vodíka, alkylovú, arylovú, aralkylovú alebo alkylarylovú skupinu s 1 - 10 atómami uhlíka, hydroxylovú skupinu, alkoxylovú skupinu alebo acyloxylovú skupinu s 1 -10 atómami uhlíka, zvyšok -(CH₂)_qC=CR⁷, pričom q = 0, 1 alebo 2 a R⁷ je atóm vodíka, atóm fluóru, chlóru, brómu alebo jódu, alkylový, arylový', aralkylový alebo alkylarylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, alebo v prípade, ak

Zje vodík, R¹ je -CH3 a R² je vodík alebo -CH3, predstavuje zvyšok -C=C-CH₂OH,

Z predstavuje atóm vodíka, alkylový, arylový, aralkylový alebo alkylarylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, alkylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka, zvyšok -CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ má už uvedený význam, alebo predstavuje atóm alkalického kovu alebo atóm kovu alkalickej zeminy, s výnimkou zlúčenín, v ktorých R¹ je -CHj, R² je -CH3, R³ je -CH2-O-CH₃ a Z predstavuje -CO-CHj, -CO-O-C₂H₅, -CO-NH-fenyl, -CO-NH-C₂H₃, -CO-C₂H₅ alebo -CO-fenyl.

Uprednostňujú sa zlúčeniny, v ktorých

R¹ je metyl- alebo etylskupina,

R² predstavuj e atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 - 10 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo zvyšok -CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ je atóm vodíka, alkylový alebo arylový zvyšok s 1-10 atómami uhlíka,

R³ predstavuje atóm vodíka, alkylovú, arylovú, aralkylovú alebo alkylarylovú skupinu s 1 -10 atómami uhlíka, alebo R³predstavuje zvyšok -(CH₂)_n-CH₂X, pričom n = 0, 1 alebo 2, X predstavuje atóm fluóru, chlóru, brómu alebo jódu, kyano-, azido- alebo rodanidoskupinu, zvyšok OR³ alebo SR⁵, pričom R⁵je alkylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka, zvyšok OR⁵, pričom R⁵ je atóm vodíka, alkylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, zvyšok -(CH₂)₀-CH=CH(CH₂)_p-R¹⁵, pričom o = 0, 1, 2 alebo 3 a p = 0, 1 alebo 2 a R⁶ predstavuje atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 -10 atómami uhlíka, hydroxylovú skupinu, alkoxylovú skupinu alebo acyloxylovú skupinu s 1 -10 atómami uhlíka, alebo zvyšok -(CH₂)_qCsCR⁷, pričom q = 0, 1 alebo 2 a R⁷ je atóm vodíka, atóm fluóru, chlóru, brómu alebo jódu, alkylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, a Z predstavuje atóm vodíka, alkylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka, zvyšok -CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ predstavuje atóm vodíka alebo alkylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, alebo predstavuje atóm alkalického kovu alebo atóm kovu alkalickej zeminy.

Obzvlášť sa uprednostňujú zlúčeniny, v ktorých

R² predstavuj e alkylovú skupinu s 1 - 6 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka alebo zvyšok -CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ predstavuje atóm vodíka, alkylový alebo arylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka,

R³ predstavuje atóm vodíka alebo alkylovú skupinu s 1 - fi atómami uhlíka, zvyšok -(CH₂)_n-CH₂X, pričom n = 0, 1 alebo 2, X predstavuje atóm fluóru, chlóru, brómu alebo jódu, kyanovú, azidovú alebo rodanidovú skupinu, zvyšok OR⁵ alebo SR⁵, pričom R⁵ je alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka, alebo R³ je zvyšok OR⁵, pričom R⁵ je alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka,

R³ ďalej predstavuje zvyšok -(CH₂)_O-CH=CH(CH₂)_P-R^<’, pričom o = 0, 1,2 alebo 3 a p = 0, 1 alebo 2 a R¹’predstavuje alkylovú skupinu s 1 - 6 atómami uhlíka, alkoxylovú skupinu alebo acyloxylovú skupinu s 1 - 6 atómami uhlíka,

SK 280137 Β6 alebo R³ predstavuje zvyšok -(CH₂)_qC=CR⁷, pričom q = 0,1 alebo 2 a R⁷je alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka, a Z predstavuje alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka, zvvšok -CONHR⁴alebo -COOR⁴, pričom R⁴predstavuje atóm vodíka alebo alkylový zvyšok s 1-6 atómami uhlíka.

Najvýhodnejšie sú:

ip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-hydroxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ón, lip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-hydroxy-17a-etoxymetyl-4,9-estradien-3-ón,

I ip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-hydroxy-l 7-n-propoxymetyl-4,9-cstradien-3-ón,

II P- [4-(hydroxy iminomety 1 jfenyl] -17 p -hydroxy-17a-i-propoxymetyM. 9-estradien-3-ón,

HP-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17P-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-cstradien-3-ón, p-[4-(hy droxyiminometyljienyl] -17p -metoxy-17a-etoxymetyl-4,9-estradien-3-ón,

P-[4-(hydroxyiminometyl)ténylJ-17p-hydroxy-17a-(3-hydroxy-l-propinyl)-4,9-estradicn-3-ón,

11P -[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17 β-metoxy-17a-( 3 -hydroxy-l-propinyl)-4,9-estradien-3-ón,

P-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-l 7p-hydroxy-l 7a-Z-(3-hydroxypropenyl)-4,9-estradien-3-ón, β -[4-(hydroxyiminometyl)fenyl] -17p-metoxy-17<x-Z-( 3 -hydroxypropeny 1 )-4,9-estradien-3 -ón,

17a-chlónnetyl-lip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17P-hydroxy4,9-estradien-3-ón,

17a-chlórmetyl-lip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-metoxy-4,9-estradien-3-ón,

17a-kyanometyl-11 p-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17β-hydroxy-4,9-estradien-3-ón,

17a-kyanometyl-lip-[4-(hydroxyiimnometyl)fenyl]-17p-metoxy-4,9 -e stradien-3 -ón,

17«-azidometyl-l 1 P-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17P-metoxy-4,9-estradien-3-ón, lip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-metoxy-17a-metyltiometyl-4,9-estradien-3-ón,

P-[4-(metyloxyiminometyl)fenyl] -17p-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ón,

P-[4-(metyloxyiminometyl)fenyl] -17p-hydroxy-l 7a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ón, a

lip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-etoxy-17a-etoxymetyl-4,9-estradien-3-ón.

Vynález sa ďalej týka spôsobu prípravy zlúčenín všeobecného vzorca (I) a ich farmaceutický prijateľných solí, ktorý spočíva v tom, že zlúčenina všeobecného vzorca (II)

kde Y je atóm vodíka, alkylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo zvyšok -CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ má už uvedený význam, a pričom zlúčenina všeobecného vzorca (Ha) je prítomná, ak je to žiaduce, vo forme takejto zlúčeniny alebo vo forme zlúčeniny, z ktorej sa uvoľní zlúčenina všeobecného vzorca (Ha) vo vhodných reakčných podmienkach, v prípade, ak je prítomná hydroxylamínová skupina, táto sa esterifikuje alebo éterifikuje kvôli získaniu zlúčenín vzorca (I), v ktorom Z nie je vodík, a získaná zlúčenina sa prípadne prevedie na farmaceutický prijateľnú soľ.

Reakcia zlúčenín všeobecného vzorca (II) a všeobecného vzorca (Ila) sa uskutoční výhodne vtedy, keď sa použijú ekvimolové množstvá oboch zlúčenín.

Podľa potreby sa esterifíkácia, éterifikácia alebo tvorba uretánovej väzby v zlúčeninách všeobecného vzorca (I), v ktorých R² alebo Z-substituent predstavuje hydroxylovú skupinu, môže vykonať známymi spôsobmi. Esterifíkácia sa môže uskutočniť známymi acylačnými prostriedkami, ako sú anhydridy alebo chloridy kyselín, za prítomnosti bázy, výhodne pyridínu. Éterifikácia sa môže uskutočniť metyljodidom za prítomnosti bázy, výhodne za prítomnosti terc.butanolátu draselného. Tvorba uretánovej väzby sa vykoná reakciou s alkyl- alebo arylizokyanátmi v inertných rozpúšťadlách, výhodne v toluéne, alebo reakciou karbamoylchloridov za prítomnosti bázy, výhodne trietylamínu.

Príprava východiskovej zlúčeniny všeobecného vzorca (H) je založená na 5a,I0a-epoxide všeobecného vzorca (ΙΠ)

[napr. Nédélec, Bull. Soc. chim. France (1970), 2548],

Zavedenie fenylového zvyšku do Ιΐβ-polohy za vzniku 9(10),5a-hydroxy štruktúry IV sa dosiahne Cu(I)-soľou katalyzovaňou Grignardovou reakciou (Tetrahedron Letters 1979, 2051) s ketálom p-brómbenzaldehydu, výhodne s dimetylketálom p-brómbenzaldehydu, pri teplotách medzi 0 °C a 30 °C.

Zavedenie skupiny -(CH₂)_nCH₂X sa urobí známym spôsobom cez spiroepoxid V, reakciou s trimetylsulfóniumjodidom a terc.butanolátom draselným v dimetylsulfoxide [Hubner et. al.; J. Prakt. Chem. 314, 667 (1972); Arzneim. Forsch. 30, 401 (1973)] kde R¹, R² a R³ majú uvedený význam, reaguje so zlúčeninou všeobecného vzorca (Ila)

H₂N-O-Y (Ila), <v>

a nasledovným otvorením kruhu s nukleofilmi, ako sú halogenidy a pseudohalogenidy, alkoholáty a merkaptidy

SK 280137 Β6 [Ponsold et. al.; Z. Chem. 11, 106 (1971)]. Takto pripravené 17a-CH₂X zlúčeniny VI

sa dajú štiepiť buď kyslou hydrolýzou, výhodne s kyselinou p-toluolsulfónovou v acetóne (Teutsch et. al., DE 2801416), na aldehydy všeobecného vzorca (H), kde R²predstavuje atóm vodíka, alebo po éterifikácii voľnej hydroxylovej skupiny s alkylhalogenidmi za prítomnosti terc.butanolátu draselného sa prevedú najprv na 5α,17β-diétery (Kasch et. al., DD 290893), ktoré sa potom kyslou hydrolýzou, výhodne s kyselinou p-toluolsulfónovou v acetóne, prevedú na aldehydy všeobecného vzorca (II), kde R² predstavuje alkylové zvyšky, výhodne metylové zvyšky.

Zavedenie skupín -(CH2)₀CH=CH(CH₂)pR⁶ sa urobí reakciou ketónov IV s propín-l-ol-tetrahydropyranyléterom za prítomnosti terc.butanolátu draselného za vzniku 17a-(3-hydroxy-l-propinyl)-!7f-hydroxy zlúčenín VII,

ktoré môžu byť hydrolyzované kyslo katalyzovanou hydrolýzou pri uvedených podmienkach na aldehydy typu II, kde R² predstavuje atóm vodíka, alebo po vytvorení 5a,17p-diéteru podľa uvedeného spôsobu a nasledujúcej kyslej hydrolýze sú hydrolyzované na aldehydy typu II, kde R² predstavuje alkylové zvyšky, alebo môžu byť hydrogenované známou reakciou s dezaktivovanými katalyzátormi, ako je 10 % paládium na sírane bámatom, za prítomnosti aminu, na 17a-(3-hydroxypropenyl)-17P-hydroxy zlúčeniny, ktoré sa po kyslej hydrolýze prevedú na aldehydy typu II.

Zavedenie zvyškov -(CH₂)_[1ChCR⁷ pokračuje známym spôsobom, reakciou ketónu TV s acetylénom, propinom alebo ich vyššími homológmi, za prítomnosti alkalických kovov, ako je lítium, sodík alebo draslík, ktoré sú vo forme zlúčeniny s alkoholom alebo amoniakom, alebo tiež s butyllítiom v éteroch, ako je tetrahydrofúrán. Kyslá hydrolýza týchto zlúčenín vedie ku vzniku 17oc-C^CR⁷ substituovaných aldehydov typu II.

Získaná zlúčenina všeobecného vzorca (I), ktorá je predmetom vynálezu, sa môže prípadne previesť na adičnú soľ anorganickej alebo organickej kyseliny, výhodne na takú soľ, ktorá je fyziologicky nezávadná. Obvyklými, fyziologicky nezávadnými anorganickými a organickými kyselinami sú napríklad kyselina chlorovodíková, kyselina bromovodíková, kyselina fosforečná, kyselina sírová, kyselina oxálová, kyselina maleínová, kyselina fúmarová, kyselina mliečna, kyselina vínna, kyselina jablčná, kyselina citrónová, kyselina salicylová, kyselina adipová a kyselina benzoová. Ďalšie použiteľné kyseliny sú opísané napríklad v „Fortschritte der Arzneimittelforschung“, zväzok 10, strany 224 - 225, Birkhäuser Verlag, Basel a Stuttgart, 1966, a v Joumal of Pharmaceutical Sciences, zväzok 66, strany 1 - 5 (1977).

Adičné soli anorganických alebo organických kyselín sa spravidla pripravia známym spôsobom, zmiešaním voľ ných báz alebo ich roztokov s príslušnou kyselinou, alebo zmiešaním ich roztokov v organickom rozpúšťadle, napríklad v nižšom alkohole, ako je metanol, etanol, n-propanol alebo izopropanol, alebo v nižšom ketóne, ako je acetón, metyletylketón alebo metylizobutylketón, alebo v étere, ako je dietyléter, tetrahydrofúrán alebo dioxán. Lepšie vylučovanie kryštálov sa získa pri použití zmesi uvedených rozpúšťadiel. Takýmto spôsobom sa môžu fyziologicky neškodné vodné roztoky adičných solí anorganických alebo organických kyselín pripravovať zo zlúčenín všeobecného vzorca (I) a vodných roztokov kyselín.

Adičné soli anorganických alebo organických kyselín všeobecného vzorca (I) môžu známym spôsobom reagovať napr. so zásadami alebo ionomeničmi, pričom sa uvoľnia voľné bázy. Z voľnej bázy sa reakciou s anorganickými alebo organickými kyselinami, hlavne takými, ktoré sú vhodné na vytvorenie terapeutických solí, dajú získať ďalšie soli. Tieto soli, alebo aj iné soli novej zlúčeniny, ako napr. pikrát, sa môžu použiť aj na čistenie voľnej bázy tak, že voľná báza sa prevedie na soľ, ktorá sa oddelí a zo soli sa znova uvoľní báza.

Predmetom predloženého vynálezu sú aj liečivá na orálnu, rektálnu, subkutánnu, intravenóznu alebo intramuskulámu aplikáciu, ktoré okrem obvyklých nosičov a riedidiel obsahujú ako účinnú látku zlúčeninu všeobecného vzorca (I) alebo jej adičnú soľ s anorganickou alebo organickou kyselinou. Liečivá podľa tohto vynálezu sa pripravujú známym spôsobom s použitím bežných, tuhých alebo kvapalných nosičov alebo riedidiel a bežne používaných farmaceutických pomocných látok, primerane aplikačnému spôsobu a primerane k dávkovaniu. Uprednostňuje sa príprava takých aplikačných foriem, ktoré sú vhodné na orálnu aplikáciu. Takýmito aplikačnými formami sú napríklad tablety, poťahované tablety, dražé, kapsuly, pilulky, prášky, roztoky, suspenzie alebo depotné formy.

Samozrejme, do úvahy prichádzajú aj parenterálne prípravky, ako sú injekčné roztoky. Okrem toho, napríklad, aj čapíky.

Príslušné tablety sa môžu získať napríklad zmiešaním účinnej látky so známymi pomocnými látkami, napríklad s inertnými zrieďovadlami, ako sú dextróza, cukor, sorbitol, manitol, polyvinylpyrolidún, rozvoľňovadlami ako sú kukuričný škrob alebo kyselina alginová, spojivami ako sú škrob alebo želatína, klznými látkami (mastivami) ako sú stearan horečnatý alebo talok a/alebo s prostriedkami na dosiahnutie depotného efektu ako sú karboxypolymetylén, karboxymetylcelulóza, acetátfialát celulózy alebo polyvinylacetát. Tablety môžu pozostávať aj z viacerých vrstiev.

Príslušné dražé môžu byť vyrobené obalením jadier, ktoré sa vyrobia analogickým spôsobom ako tablety, s obvykle používanými obaľovacími prostriedkami, napr. polyvinylpyrolidónom alebo šelakom, arabskou gumou, talkom, titándioxidom alebo cukrom. Pritom môže aj obal dražé pozostávať z viacerých vrstiev, pričom môžu byť použité pomocné látky, ktoré boli spomenuté pri výrobe tabliet.

Roztoky alebo suspenzie s účinnou látkou podľa vynálezu môžu dodatočne obsahovať chuť zlepšujúce prostriedky ako sacharín, cyklamát alebo cukor, ako aj napr. aromatické látky, ako sú vanilín alebo pomarančový extrakt. Okrem toho môžu obsahovať suspenzné činidlá, ako je nátriumkarboxymetylcelulóza alebo konzervačné látky, ako sú estery kyseliny p-hydroxybenzoovej. Kapsuly, ktoré obsahujú účinnú látku, sa môžu vyrobiť napríklad tak, že prísada sa zmieša s inertným nosičom, ako je mliečny cukor alebo sorbitol a zapuzdrí sa do želatínových kapsúl.

Vhodné čapíky sa dajú vyrobiť napríklad zmiešaním s vhodnými nosičmi, ako sú neutrálne tuky alebo polyetylénglykol, prípadne s ich derivátmi.

Ιΐβ-Substituované benzaldoxím-4,9-estradiény pripravené podľa predloženého vynálezu sú antigestagénne pôsobiace substancie, ktoré pri rovnakej aktivite ako RU 486 (mifepristóny) na progesterónovom receptore (porov. tab. 1) príp. pri prevažujúcom účinku in vivo (porov. obr. 1 a tab. 2) majú v porovnaní s RU 486 jasne zredukovanú antiglukokortikoidnú aktivitu, ktorá bola dokázaná zmenšenou glukokortikoidnou receptorovou väzbou (porov. tab. 1), ako aj desaťnásobne zníženú enzýmovú indukciu v bunkových líniách (porov. obr. 2 a 3).

Podľa vynálezu vybraný antigestagén (J 867) spôsobuje morským prasatám v cykle štatisticky signiíikantné zredukovanie hmotnosti maternice pri dávkach, pri. ktorý ch RU 486 v porovnaní s kontrolnou vzorkou zvyšuj e hmotnosť maternice.

Pri tejto kombinácii vlastností sa dá od antigestagénov podľa predmetného vynálezu očakávať prevažujúce tlmenie účinku progesterónu pri súčasne redukovanej antiglukokortikoidnej aktivite. Táto výhoda je obzvlášť relevantná najmä vzhľadom na indikácie, pri ktorých doba použitia lieku vyžaduje mimoriadne dobrú znášanlivosť. Hmotnosť maternice v cykle je rozhodujúco určená cirkulujúcimi estragónmi. Zníženie hmotnosti maternice je výsledkom tlmenia týchto funkcií estrogénov. Zistené prevažujúce zníženie hmotnosti maternice v cykle morského prasaťa pôsobením RU 486 poukazuje na (nepriame) antiestrogénne vlastnosti zlúčenín podľa tohto vynálezu. Od príslušných efektov sa dá očakávať mimoriadne výhodné ovplyvnenie patologicky zmenených tkanív, v ktorých estrogény dávajú rastové impulzy (zdroje endometriózy, myómy, karcinómy prsníka a genitálií, benígne hypertrofie prostaty).

Prehľad obrázkov na výkresoch

Obrázok 1 zobrazuje porovnanie vplyvu účinku antigestagénnej liečby na hmotnosť maternice morských prasiatok v cykle pre zlúčeniny J 867 a RU 486.

Vysoké dávky RU 486 (6mg/24 hodín) redukujú hmotnosť maternice liečených zvierat. Nízke dávky tejto substancie spôsobujú oproti tomu mierne zvýšenie hmotnosti maternice. Oproti tomu všetky vyskúšané dávky J 867 (1, 3, príp. 6 mg/24 hodín) znižovali štatisticky signifikantne hmotnosť maternice.

Obrázok 2 predstavuje antiglukokortikoidný účinok J 867 v ľudskej prsnej bunkovej línii ZR 75/AGP-763 v porovnaní s RU 486.

Dexametazón indukuje v tejto bunkovej línii chloramfenikolacetyltransferázu-Gen (CAT). Táto indukcia je tlmená antiglukokortikoidnými substanciami. J 867 prekvapujúco tlmi CAT v širokej koncentračnej škále slabšie ako RU 486 (Mifepristóny).

Obrázok 3 znázorňuje antiglukokortikoidný účinok J 867 v TAT modele v potkaních hepatálnych bunkách v porovnaní s RU 486.

V hepatálnych bunkách potkana stimuluje dexametazón enzým tyrozm-aminotransferázu (TAT). Tento účinok je tlmený antiglukokortikoidnou aktivitou. J 867 tu pôsobí antiglukokortikoidne jasne slabšie ako RU 486.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

434 mg lip-(4-Formylfenyl)-17p-metoxy-17a-metoxymetyM,9-estradien-3-ónu sa rozpustí pri izbovej teplote v 8 ml pyridínu a zmieša sa so 65 mg hydroxylamín hydrochloridu. Reakčná zmes sa mieša pri teplote 25 °C a po 2 hodinách sa pridá ďalších 5 mg hydroxylamín hydrochloridu. Po 15 minútach sa reakčná zmes zriedi s vodou, pridá sa IN vodný roztok HC1 a extrahuje sa chloroformom. Organická fáza sa premyje zriedenou HC1 a vodou, vysuší nad síranom sodným a uhličitanom draselným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Získa sa 420 mg surového produktu. Po pridaní acetónu sa vypadnuté kryštály odsajú a prekryštalizujú zo zmesi izopropanol-dichlóimetán.

Získa sa 305 mg lip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17P-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ónu. Teplota topenia: 118 °C (rozkl.) a_D = + 197° (CHClj)

IČ spektrum vCHC1₃ (cín¹): 3575, 3300 (OH); 1705 (C=NOH); 1649 (C=C-C=C-C=O); 1599 (fenyl)

UV spektrum v MeOH: lambda_Ili;L<= 264 nm epsilon = 20 366 lambda_max= 299 nm epsilon = 20 228 'H-NMR spektrum v CDC1₃[8,ppm]: 0,533 (s, 1H, H-18); 3,252 (s, 3H, 17P-OCH₃); 3,393 (s, 3H, 17d-CH₂OCH₃); 3,441-3,598 (m, 2H, ABX-systém z CH₂OR); 4,381 (d, 1H, J=6,9 Hz, H-lla); 5,788 (s, 1H, H-4); 7,187-7,487 (m, 4H, AA'BB'-systém aromatických protónov); 8,05 (s, 1H, OH); 8,097 (s, 1H,CH=NOH). ’

MS m/e: 449,25509 ε₂₉Η₃₅ΝΟ₄Μ*

Príprava východiskovej zlúčeniny: Stupeň A g 4-Brómbenzaldehydu a 30 ml trietylortoesteru kyseliny mravčej sa mieša 5 hodín v 60 ml metanolu s 0,8 ml tionylchloridu pri izbovej teplote. Potom sa pridá ešte 0,2 ml tionylchloridu a po 30 minútach sa reakčná zmes vleje do vodného roztoku hydrouhličitanu sodného a extrahuje sa chloroformom. Organická vrstva sa premyje vodným roztokom hydrouhličitanu sodného, vysuší sa nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Získa sa 68 g dimetylketálu 4-brómbenzaldehydu vo forme bezfarebného oleja.

K 2,3 g horčíka v 20 ml bezvodého THF sa pridá v atmosfére argónu 0,2 ml dibrómetánu a po nabehnutí reakcie sa prikvapká 21,96 g dimetylketálu 4-brómbenzaldehydu v 70 ml bezradného THF takou rýchlosťou, aby sa neprekročila teplota 40 °C. Po pridaní všetkých zložiek sa reakčná zmes mieša 2 hodiny pri 30 °C, potom sa ochladí na -10 °C a pridá sa 511 mg CuCl. Reakčná zmes sa ďalej mieša 15 minút pri -30 °C a potom sa prikvapká roztok 6 g 3,3-dimetoxy-5a,10a-epoxy-9(ll)-estren-17-ónu v 30 ml bezvodného THF. Po vyhriatí na izbovú teplotu sa rozloží Grignardov roztok vodným roztokom chloridu amónneho. Produkt sa izoluje extrakciou s octanom etylnatým, organická fáza sa premýva do neutrálnej reakcie a vysuší nad síranom sodným. Po oddestilovaní rozpúšťadla za zníženého tlaku sa izoluje 19,7 g surového produktu.

Chromatografia na 300 g silikagélu a 20 g oxidu hlinitého s gradientom rozpúšťadiel toluén/octan etylnatý poskytla 7,38 g 3,3-dimetoxy-lip-[4-(dimetoxymetyl)fenyl]-5a-hydroxy-9-estren-17-ónu vo forme žltej peny.

Stupeň B

7,38 g 3,3-Dimetoxy-lip-(4-(dimetoxymetyl)fenyl|-5a-hydroxy-9-estren-17-ónu sa rozpusti v 85 ml dimetylsulfoxidu v argónovej atmosfére a zmieša sa s 10,38 g trimetylsulfómum-jodidu a po častiach sa pridá 7,64 g terc.butanolátu draselného. Po 1,5 hodine sa reakčná zmes ochladí na 0-5 °C a pridá sa vodný roztok chloridu amónneho. Lepkavo vyzerajúci produkt sa extrahuje s CH₂C1₂, premyje sa do neutrálnej reakcie, vysuší nad síranom sodným a po odparení rozpúšťadla sa izoluje ako hnedá živica.

SK 280137 Β6

Výťažok: 8,63 g 3,3-dimetoxy-l ip-[4-(dimetoxymetyl)fenyl] -17p-spiro-1 ',2'-oxirán-9-estrén-5a-olu.

Stupeň C

8,63 g 3,3-Dimetoxy-lip-[4-(dirnetoxymetyl)fenyl]-173-spiro-l',2'-oxirán-9-estrén-5a-olu sa rozpustí v 20 ml metanolu a zmieša sa s 20 ml 3N roztoku metylátu sodného a reakčná zmes sa zahrieva 2-3 hodiny pri teplote spätného toku. Rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku, zvyšok sa rozpustí v CH₂C1₂ a premyje sa do neutrálnej reakcie. Roztok sa vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Získa sa 8,74 g surového produktu vo forme hnedej peny. Chromatografia na 260 g silikagélu a 90 g oxidu hlinitého s gradientom rozpúšťadiel toluén/octan etylnatý poskytne 1,92 g 3,3-dimetoxy-l ip-[4-(dimetoxymetyl)fcnyl]-17 a-metoxymetyl-9-estrén-5 a, 17β -diolu.

Stupeň D

K 1,92 g 3,3-dimetoxy-l ip-[4-(dimetoxymetyl)fenyl]-17a-metoxymetyl-9-estrén-5a,17p-diolu v 120 ml toluénu sa pod inertnou atmosférou pridá 8,65 g terc.butanolátu draselného. Suspenzia sa mieša 5 minút pri izbovej teplote a potom sa prikvapká 6,35 ml metyljodidu v 6 ml toluénu takou rýchlosťou, aby teplota neprekročila 40 °C. Po 1 hodine sa pridá 20 ml vody a 20 ml octanu etylnatého, vrstvy sa oddelia a vodná vrstva sa vyextrahuje s octanom etylnatým. Organická vrstva sa premyje do neutrálnej reakcie, vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Získa sa 1,55 g 3,3-dimetoxy-l 1β-[4-(3,3-dimetoxymetyljfenyl] -17a-metoxymetyl-9-estrén-5a, 17P-dimetyléteru vo forme žltej peny.

Stupeň E

1,55 g 3_;3-Dimetoxy-lip-|443,3-dimetoxymetvl)fenyl]-17a-metoxymetyl-9-estrén-5a,^-dimetyléteru sa rozpusti v 12,6 ml acetónu a zmieša sa s 1,3 ml vody. V inertnej atmosfére sa pridá 158 mg kyseliny 4-toluénsulfónovej. Reakčná zmes sa mieša 40 minút pri izbovej teplote. Kryštály sa odsajú, premyjú sa acetónom a prekryštalizujú sa zo zmesi CH₂Cl₂/acetón.

Výťažok: 0,55 g bezfarebných kryštálov.

Ďalšia rekryštalizácia zo zmesi C1 fClýacetón poskytne 440 mg 1 iP-(4-formvlfenyh-17P-metoxy-I7a-metoxymetyl-4,9-estradién-3-ónu.

Teplota topenia: 233-240 °C a_D=+ 189°(CHC1₃)

IČ spektrum v CHC1₃ (cm¹): 1710 (CHO); 1660 (C=C-C=C=O); 1610 (fenyl)

UV spektrum v MeOH: lambda,_nM = 262 nm epsilon = = 10775 lambda_raax= 299 nm epsilon = 13999 'H-NMR spektrum v CDC1₃ [ô, ppm]: 0,48 (s, 3 H, H-l8); 3,25 (s, 3H, 17[i-OCII₃); 3,38 (s, 3H, 17a-CH₂OCH₃); 4,40 (d, 1H, J=7,2 Hz, H-llet); 5,78 (s, 1H, H-4); 7,28-7,93 (m, 4H, AA'BB'-systém aromatických protónov); 9,95 (s, 1H, CHO).

MS m/e: 434,24771 C^H^OX

Príklad 2 mg l^-(4-Formylfenyl)-^-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ónu sa mieša pri izbovej teplote v 4 ml pyridínu so 40 mg metoxyamín hydrochloridu. Po 1 hodine sa pridá ďalších 5,2 mg metoxyamín hydrochloridu. Pridá sa 10 ml vody a 10 ml octanu etylnatého a vrstvy sa oddelia. Vodná vrstva sa vyextrahuje a spojené organické vrstvy sa premyjú s 10 ml zriedeného HC1 a do neutrálnej reakcie sa premývajú destilovanou vodou. Vysušia sa a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Získa sa 241 mg surového produktu vo forme živice. Preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF₂₅4_+3SS so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (4:1) sa získa 188 g produktu vo forme peny.

Rekryštalizácia zo zmesi acetón/hexán poskytne 11β-[4-(metoxyiminometyl)fenyl]-173-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ón vo forme bezfarebných kryštálikov. Teplota topenia: 83 - 89 °C a_D= + 197°(CHCl₃)

IČ spektrum v CHCI, [cm’¹]: 1700 (C=NOCH₃), 1649 (C=C-C=C-C=O),

1590 (fenyl)

UV spektrum v MeOH: lambda_max= 275 nm epsilon = 23 098 lambda_max= 30011m epsilon = 22 872 ‘H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,529 (s, 3H, H-l8); 3,247 (s, 3H, 173-OCH₃); 3,408 (s, 3H, 17d-CH₂OCH₃); 3,39-3,598 (m, 2H, ABX-systém, 17a-CH₃O-CH₃): 4,381 (d, 1H, J=7,5 Hz, H-l la); 5,773 (s, 1H, H-4); 7,173, 7,201, 7,463, 7,491 (m, 4H, AA'BB'-systém aromatických protónov); 8,023 (s, 1H, CH-fenyl).

MS m/e: 463,26950 C₂₉H₃₇NOX

Príklad 3

180 mg 113-[4-(Hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ónu sa acetyluje v priebehu 12 hodín v 5 ml zmesi acetanhydrid/pyridín (1 : 1). Po pridaní vody sa reakčná zmes 3-krát extrahuje s octanom etylnatým, organická vrstva sa premyje do neutrálnej reakcie zriedenou HC1 a vodou a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Získa sa 172 mg surového produktu, ktorý sa prečistí preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu ΡΓ 254+366^so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (4 : 1). Výťažok: 115 mg llp-[4-(acetyloxyiminometyl)fenyl]-17p-metoxy-17a-mctoxymetyl-4,9-estradien-3-ónu. Vyčistený produkt kryštalizuje z octanu etylnatého.

Teplota topenia: 115 -120 °C (octan etylnatý) a_D = + 218°(CHCl₃)

UV spektrum v MeOH: lambda_r;íĽ< = 271 nm epsilon = 28 157 lambda_nlm= 297 mn epsilon = 26 369 'H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,511 (s, 3H, H-18); 2,227 (s, 3H, OCCHj); 3,247 (s, 3H, 17β-ΟΟΗ₃); 3,408 (s, 3H, 17a-CH₂OCH₃); 3,386, 3,431, 3,544, 3,580 (m, 211 CH₂OCH₃): 4,399 (d, 1H, J=7,2 Hz, H-l la); 5,785 (s, 1H, H-4); 7,242, 7,266, 7,618, 7,647 (m, 4H, AA'BB'-systém aromatiekveh protónov); 8,315 (s, 1H, CH=NOAc).

MS m/e: 491,26971 C_ľ<!l l_j;NOJvf

Príklad 4

K 210 mg l^-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-^-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ónu v 5 ml pyridínu sa za chladenia vodou prikvapká 0,3 ml etylesteru kyseliny chlórmravčej. Vznikne biela zrazenina. Po 30 minútach sa k reakčnej zmesi pridá voda. Vznikne roztok, z ktorého potom vypadne biela zrazenina, ktorá sa odsaje a premyje vodou. Výťažok po vysušení je 133 mg. Vodná vrstva sa extrahuje chloroformom, ktorý sa premyje zriedeným HC1 a vodou, vysuší a rozpúšťadlo sa za zníženého tlaku odparí. Získa sa ďalších 66 mg. Obidva podiely sa spoja a vyčistia preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF₂₅4+3í6 so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (4:1).

Získa sa 150 mg lip-{4-[(etoxykarbonyl)oxyiminometyl]fenyl}-17P-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ónu, ktorý' sa prekryštalizoval zo zmesi acetón/hexán.

Teplota topenia: 137 - 148 °C (rozklad) a_D= + 204° (CHCj)

UV spektrum v MeOH: lambda_max= 270 nm epsilon = 27 094 lambda_max = 297 nm epsilon = 25 604 'H-NMR spektrum v CDC1, [5, ppm]: 0,507 (s, 3H, H-18); 1,383 (t, 3H, J=7,0 Hz, OCH₂CH₃); 3,246 (s, 3H, 17β-OCHj); 3,410 (s, 3H, 17a-CH₂OCH3); 3,39 - 3,56 (m, 2H, CH₂OCH₃); 4,35 (d, 1H, J=7,0 Hz, H-lla); 5,784 (s, 1H, H-4): 7,23 , 7,26, 7,61, 7,64 (m, 4H, AA'BB'-systém aromatických protónov); 8,303 (s, 1H, CH=NR) MS m/e: 431,24701 C₂₈H₃₃NO₃M - C₂H₅OCOOH

Príklad 5

244 mg 1 ip-(4-Formyltényl)-17p-hydroxy-17a-chlórmetyl-4,9-estradién-3-ónu v 4 ml pyridinu sa mieša pri izbovej teplote s 32,2 mg hydroxylamín hydrochloridu. Po jednej hodine sa pridá ďalších 6,9 mg hydroxylamín hydrochloridu. Potom sa pridá 10 ml vody a 10 ml octanu etylnatého, vrstvy sa oddelia, vodná vrstva sa vyextrahuje, organická vrstva sa premyje 10 ml zriedenej HC1 a potom vodou do neutrálnej reakcie, vysuší a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Získa sa 183 mg surového produktu vo forme žltej živice. Preparatívna chromatografia na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF₂54₊₃₆₆ so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (4 : 1) poskytne 87,7 mg 17a-chlórmetyl-lip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-170-hydroxy-4,9-estradien-3-ónu vo forme peny. a_D= + 185° (CHClj)

UV spektrum v MeOH: lambda_mK= 264 nm epsilon = 20 797 larnbda_max= 299 nm epsilon = 20 439 ’H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,607 (s, 3H, H-18); 3,628, 3,664, 3,824, 3,861 (m, 2H, ABX-systém, 17a-CHjCl); 4,428 (d, 1H, J=6,9 Hz, H-lla); 5,807 (s, 1H, H-4); 7,185, 7,212, 7,482, 7,509 (m, 4H, AA'BB'-systém aromatických protónov); 8,05 (s, 1H, OH); 8,104 (s, 1H, CH-fenyl)

MS m/e: 439,19070 C₂,,l [_3riClNO₃M'

Príprava východiskovej zlúčeniny

Stupeň F

K 4,12 g 3,3-dimctoxy-lip-[4-(dimetoxymetyl)fenyl]-17p-spiro-l',2'-oxirán-9-estrén-5a-olu (pripravený podľa príkladu 1, stupňa B) v 84 ml dimetylformamidu sa pri 0 °C pomaly prikvapká 16,6 ml koncentrovanej HC1. Po 1 hodine sa reakčná zmes vyleje do 420 ml vody, pričom vznikne vločkovitá zrazenina. S vodným roztokom hydrouhličitanu sodného sa pH nastaví na hodnotu 6, zrazenina sa odsaje a vysuší.

Výťažok surového produktu: 3,38 g okrovo sfarbených kryštálov, ktoré sa vyčistia stĺpcovou chromatografiou na 90 g Kieselgelu 60 s gradientom rozpúšťadiel toluén/octan etylnatý.

Výťažok: 1,16 g 17a-chlórmetyl-lip-(4-formylfenyl)-17p-hydroxy-4,9-estradien-3-ónu vo forme kryštálov.

Teplota topenia: 205 - 208 °C (acetón/hexán) a_D= + 161°(CHC₃)

IČ spektrum v CHC1₃ [cm¹]: 3600 (OH); 1695 (CHO); 1650 (C=C-C=C-C=C); 1590 (fenyl)

UV spektrum v MeOH: lambda_nHX= 262 nm epsilon = 19 993 lambda_max= 297 nm epsilon = 22 755 'H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,583 (s, 3H, H-l 8); 3,30 (s, 1H, OH); 3,63-3,85 (m, 2H, ABX-systém zCH₂C1); 4,45 (d, 1H, J=7,0 Hz, H-lla); 5,809 (s, 1H, H-4); 7,355, 7,382, 7,799, 7,826 (m, 4H, AA'BB'-systém aromatických protónov); 9,977 (s, 1H, CHO).

MS m/e: 424,18280 C₂₆H₂₉C1O₃ M

Príklad 6

136 mg 1 ip-(4-Formylfenyl)-17P-hyciroxy-17a-inetoxymetyl-4,9-estradien-3-ónu sa pri izbovej teplote rozpusti v 2,2 ml pyridinu, pridá sa 18 mg hydroxylamín hydrochloridu a reakčná zmes sa mieša pri 25 °C. Po 90 minútach sa pridajú ďalšie 4 mg hydroxylamín hydrochloridu a roztok sa po 15 minútach zriedi s vodou, zmieša s IN vodnou HC1 a extrahuje s chloroformom. Organická vrstva sa premyje zriedenou HC1 a vodou, vysuší nad síranom sodným a uhličitanom draselným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Získa sa 146 mg surového produktu, ktorý· sa vyčistí preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF₂54₊₃₆₆ so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (4:1).

Získa sa 110 mg 11 [5-[4-íhydroxyiminometyl)lenyl]-17p-hydroxy-17a-metoxymetyM,9-estradien-3-ónu. Teplota topenia: 104 °C s rozkladom (izopropanol) a_D= + 195° (CHC1₃)

UV spektrum v MeOH: lambda_nlax= 263 nm epsilon = 21 170 lanibda_max= 299 nm epsilon = 20 188 'H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,517 (s, 1H, H-18); 3,418 (s, 3H, la-CH₂OCH₃); 3,206, 3,237, 3,552, 3,582 (m, 2H, ABX-systém z CH₂OCH₃); 4,384 (α, 1H, J=7,2 Hz, H-l la); 5,784 (s, 1H, H-4); 7,179, 7,206, 7,456, 7,483 (m, 4H, AA'BB'- systém aromatických protónov); 7,9 (s, 1H, OH); 8,088 (s, 1H, CH=NOH).

MS m/e: 435,24289 ϋ₂₇Η₃₃ΝΟ₄ΐνΓ

Príprava východiskovej zlúčeniny Stupeň G

860 mg 3,3-Dimetoxy-l 1 [>-[4-(dimetoxymetyl)iényl]-17a-metoxyinetyl-9-estrén-5a,17p-diolu (pripravený podľa príkladu 1, stupňa C) sa rozpustí v 80 ml acetónu. Po pridaní 7,7 ml vody a 430 mg kyseliny 4-toluénsulfónovej sa reakčná zmes ešte 90 minút zahrieva pri teplote spätného toku, rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku a ku zvyšku sa pridá chloroform. S 8 ml zriedeného amoniaku sa vytvorí pH 8 a vrstvy sa oddelia. Organická vrstva sa premýva do neutrálnej reakcie, vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Získa sa 590 mg lip-(4-fonnyltényl)-17p-hydroxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ónu-l ako surový produkt, ktorý sa rekryštalizuje z octanu etylnatého. Teplota topenia: 195 - 205 °C (octan etylnatý) a_D= + 209° (Chloroform)

IČ spektrum v CHC1₃ [cm’¹]: 3590 (OH); 1710 (CHO); 1660 (C=C-C=C-C=O); 1605 (fenyl)

UV spektrum v MeOH: lambda,_níK= 263 nm epsilon = 20 683 lambda_max= 298 nm epsilon = 20 749 'H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,509 (s, 3H, H-18); 2,666 (s, 1H, OH); 3,196, 3,226, 3,550, 3,580 (m, 2H, ABX-systém z CH₂OCH₃); 3,417 (s, 3H, OCH₃); 4,446 (d, 1H, J=6,9 Hz, H-lla); 5,797 (s, 1H, H-4); 7,360, 7,386, 7,786, 7,813 (m, 4FL AA'BB'-systém aromatických protónov); 9,970 (s, 1H, CHO)

MS m/e: 420,23300 CVH₃₃O.,M‘

Príklad 7

480 mg 17a-Etoxymetyl-lip-(4-formylfenyl)-17p-me -toxy-4,9-estradien-3-ónu sa rozpustí pri izbovej teplote v 6 ml pyridinu, pridá sa 74 mg hydroxylamín hydrochloridu a reakčná zmes sa mieša pri 25 °C. Po 30 minútach sa pridá ďalších 8,5 mg hydroxylamín hydrochloridu a roztok sa po 15 minútach zriedi s vodou. Pridá sa IN vodný roztok HC1 a extrahuje sa s CH₂C1₂. Organická vrstva sa premyje zrie denou HC1 a vodou, vysuší nad síranom sodným a uhličitanom draselným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Získa sa 410 mg surového produktu, ktorý po preparatívnej chromatografii na tenkej vrstve Kicselgelu 60 PF 254*366poskytne 17oc-etoxymetyl-ll|3-[4-(hydroxyiminometyl)-ťenyl]-173-metoxy-4,9-estradien-3-ón vo forme žltej peny. a_D= + 200°(CHC₃)

UV spektrum v MeOH: lambda_max= 264 nm epsilon = 20 366 lambda_max= 299 nm epsilon = 20 228 ^lH-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppmj: 0,533 (s, 1H, H-18); 1,267 (t, 3H, J=6,9 Hz, 17a-CH₂OCH₂CH₃); 3,252 (s, 3H, 17P-OCH₃); 3,423 - 3,623 (m, 2H, ABX-systém, 17a-CH₂OCH₂CH₃); 4,355 (d, 1H, J=7,2 Hz, H-lla); 5,783 (s, 1H, H-4); 7,191, 7,219, 7,460, 7,488 (m, 4H, AA'BB'-systém aromatických protónov); 8,097 (s, 1H, CH=NOH) MS m/e: 463,27069 Ο₂₉Η₃₇ΝΟ₄Μ⁺

Príprava východiskovej zlúčeniny Stupeň H

5,33 g 3,3-Dimetoxy-l 1 p-[4-(dimetoxymetyl)tcnyl]-17p-spiro-ľ,2'-oxirán-9-estrén-5a-olu (pripravený podľa príkladu 1, stupeň B) sa rozpustí v 5 ml etanolu a zmieša sa s 25 ml roztoku 1,5 N etylátu sodného a 1 hodinu sa zohrieva pri teplote spätného toku. Za zníženého tlaku sa rozpúšťadlo odparí, zvyšok sa rozpustí v CH₂C1₂, premyje sa do neutrálnej reakcie, roztok sa vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Získa sa 5,85 g surového produktu vo forme hnedej peny. Chromatografia na Kieselgeli s gradientom rozpúšťadiel toluén/octan etylnatý poskytne 1,14 g 3,3-dimetoxy-lip-[4-(dimetoxymetyl)fenyl]-l 7a-etoxymetyl-9-estrén-5a, 17[3-diolu.

Stupeň I

K 1,14 g 3,3-dimetoxy-l 1 p-[4-(dimetoxymetyl)ťenyl]-17a-etoxymetyl-9-estrén-5a,17P-diolu v 70 ml toluénu sa pridá v inertnej atmosfére argónu 5,14 g tere.-butanolátu draselného. Po 15 minútach sa prikvapká zmes 3,8 ml metyljodidu v 4 ml toluénu. Po 2 hodinách sa pridaním 20 ml vody a 20 ml octanu etylnatého reakcia ukončí. Organická vrstva sa dvakrát premyje vodou, vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Výťažok surového produktu: 1,14 g 3,3-dimetoxy-l 1β-(4-(3,3 -dimet oxymety l)ťeny 1] -17a-etoxymetyl-l 7 β -metoxy-9-estrén-5d-olu.

Stupeň J

K 1,14 g 3,3-dimetoxy-l ip-[4-(dimetoxymetyl)ťenyl(-17a-etoxymetyl-173-metoxy-9-estrén-5a-olu v 10 ml acetónu sa v inertnej atmosfére pridá 1 ml vody a 116 mg kyseliny 4-toluénsulfónovej. Po 30 minútach sa reakčná zmes zriedi s vodou a dvakrát sa extrahuje s octanom etylnatým. Organická vrstva sa premyje a vysuší nad síranom sodným. Po odparení rozpúšťadla sa získa 900 mg 17a-ctoxymetyl-11 P-(4-formyl-fenyl)-l 7p-metoxy^l,9-estradién-3-ónu vo forme žltej peny. Chromatografia na Kieselgeli 60 s gradientom rozpúšťadiel toluén/octan etylnatý poskytne 480 mg žltých kryštálov.

Príklad 8

244 mg lip-(4-Formylfenyl)-17p-hydroxy-17a-(3-hydroxypropin-l-yl)-4,9-estradien-3-ónu sa rozpustí pri izbovej teplote v 4,5 ml pyridinu, pridá sa 35,5 mg hydroxylamín hydrochloridu a reakčná zmes sa mieša pri teplote 25 °C. Po 30 minútach sa pridá ďalších 4,8 mg hydroxylamín hydrochloridu a roztok sa po 15 minútach zriedi s vodou a pridá sa octan etylnatý. Organická vrstva sa premyje s 1 N vodnou HC1, potom sa premyje s vodou, vysuší nad síranom sodným a uhličitanom draselným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Získa sa 216 mg surového produktu, ktorý po preparativnej chromatografii na tenkej vrstve kieselgelu 60 PF₂j4+₃66 so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (4:1) poskytne 192 mg 1 Y(4-(hydroxynninometyl)fenyl]-17p-hydroxy-17a-(3 -hydroxypropin-1 - yl)-4,9-estradien-3 -ónu vo forme bezfarebnej peny.

Teplota topenia: 171 -179 °C (éter) a_D= + 82° (Dioxán)

UV spektrum v MeOH: lambda_max= 264 nm epsilon = 21 495 lambda_max= 299 nm epsilon = 20 236

MS m/e: 445,22369

Príprava východiskovej zlúčeniny Stupeň K

K 3 ml 3-hydroxypropin-l-yl-tetrahydropyranyléteru v 27 ml bezvodného THF sa pri teplote -5 °C prikvapká 12 ml 15 % n-butyllítia v hexáne. Po 15 minútach sa k tomuto roztoku prikvapká roztok 1,2 g 3,3-dimetoxy-l 1β-[4-(dimetoxymetyl)fenyl]-5a-hydroxy-9-estren-17-ónu (pripravený podľa príkladu 1, stupeň B) v 16 ml bezvodného THF. Reakčná zmes sa mieša 30 minút pri izbovej teplote, potom sa vleje do 150 ml ľadovej vody a extrahuje s octanom etylnatým. Organická vrstva sa premyje do neutrálnej reakcie, vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Získa sa 4,23 g hnedého oleja, ktorý sa vyčistí chromatografiou na Kieselgeli 60 s gradientom rozpúšťadiel toluén/octan etylnatý. Získa sa 422 mg 3,3-dimetoxy-l 1β-(4-(dimetoxymetyl)-fenyl]-17a-(3-tetrahydropyranyloxypropm-l-yl)-9-estrén-5«,17(i-diolu vo forme peny.

Stupeň L

540 mg 3,3-Dimetoxy-l l(l-[4-ŕdimetoxymetyl)fenyl|-17a-(3-tetrahydropyranyloxy-prop-l-inyl)-9-estren-5a,^-diolu sa mieša 2 hodiny v 40 ml acetónu so 100 mg kyseliny 4-toluénsulfónovej pri izbovej teplote. Potom sa objem rozpúšťadla zníži odparením na 10 ml, roztok sa zmieša s vodným roztokom uhličitanu sodného a extrahuje s octanom etylnatým. Organická vrstva sa premyje do neutrálnej reakcie, vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Výťažok surového produktu: 330 mg. Produkt sa čistí preparatívnou tenkovrstvovou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu 60 Pl/vinsc, čím sa získa 310 mg 11β-(4-formylfenyl)-l 7β -hydroxy-17cc-(3 -hydroxyprop-1 -inyl)-4,9-estradien-3-ónu. Rekryštalizácia z acetónu poskytne biele kryštály.

Teplota topenia: 225 -231 °C a_D = + 59° (chloroform) UV spektrum v MeOH: lambda_raH= 302 nm epsilon = 23 608 ll-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,496 (s, 3H, H-18); 4,375 (s, 2H, C-CH₂OH); 4,497 (d, 1H, J=7,2 Hz, H-lla); 5,810 (s, 1H, H-4); 7,353, 7,380, 7,797, 7,824 (m, 4H, AA'BB'systém aromatických protónov); 9,974 (s, 1H, CHO)

MS m/e: 430,21460 Ο₂₈Η₃₀Ο₄Μ*

Príklad 9

190 mg l i3-|4-(Hydroxyimniometyl)feriyl]-17P-rnetoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ónu sa suspenduje v 10 ml toluénu. Postupne sa pridá 0,5 ml fenylizokyanátu a 1 ml trietylamínu. Reakčná zmes sa mieša 3 hodiny pri izbovej teplote a potom sa zahrieva 2 hodiny pri teplote spätného toku. Biela zrazenina sa odsaje a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku. Získa sa 310 mg bledohnedej tuhej látky, ktorá sa vyčistí preparatívnou chromatografiou na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF₂₃₄<<<,, so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (9:1).

Izoluje sa 65 mg 17|j-iíiĽtoxy-17a-metoxymetyl-l 1β-{4-[(fenylaminokarbonyl)-oxyimmometyl]fenyl}-4,9-estradien-3-ónu.

Teplota topenia: 241 - 246 °C (acetón) oi_D= + 178° (CDClj)

UV spektrum v MeOH: lambda,,,^ = 238 nm epsilon = 29 444 lambda_max= 300 nm epsilon = 29 649 'H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,474 (s, 3H, H-18); 3,245 (s, 311, 17β-ΟΟΗ₃); 3,405 (s, 3H, 17a-CH₂OCH₃); 3,406-3,545 (m, 2H, ABX-systém, 17a-CH₂OCH₃); 4,413 (d, J=6,8 Hz, 1H, H-lla); 5,797 (s, 1H, H-4); 7,264 (m, 5H, aromat); 7,272, 7,293, 7,548, 7,575 (m, 4H, AA'BB'-systém aromatických protónov); 8.0 (s, 1H, CH=N-) MS m/e: 431,24249 C₂₈H₃₃NO₃ M³ - C₆H₅CNO + H₂O

Príklad 10

125 mg 17a-Etoxymetyl-llp-(4-fbnnyH'enyl)-17[i-hydroxy-4,9-estradien-3-ónu sa pri izbovej teplote rozpustí v 2 ml pyridínu, pridá sa 20,2 mg hydroxylamín hydrochloridu a reakčná zmes sa mieša pri 25 °C. Po 50 minútach sa roztok zriedi s vodou, pridá sa octan etylnatý a vrstvy sa oddelia. Organická vrstva sa premyje zriedenou HC1 a vodou, vysuší nad síranom sodným a rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku.

Získa sa 127 mg surového produktu vo forme bledohnedej peny, ktorá po preparatívnej chromatografii na tenkej vrstve Kieselgelu 60 PF_254+366 poskytne 62 mg 17a-etoxymetyl-11 β-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17β-hydroxy-4,9-estradien-3-ónu vo forme bezfarebnej peny. a_D= + 226’ (CHC1₃)

UV spektrum v MeOH: lambda.,^ = 265 nm epsilon = 22 696 lambda_raax= 299 nm epsilon = 21 960 ‘H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,520 (s, 1H, H-18); 1,249 (t, 3H, J=7,2 Hz, 17a-CH₂OCH₂CH₃); 3,228-3,609 (m, 4H, 2x CH₂); 4,381 (d, 1H, J=7,2 Hz, H-lla); 5,781 (s, 1H, H-4); 7,181, 7,209, 7,459, 7,486 (m, 4H, AABB'-systém aromatických protónov); 8,098 (s, 1H, CH=NOH). MS m/e: 449,25540 C_2SH₃₅NO₄M⁺

Príprava východiskovej zlúčeniny Stupeň M

340 mg 3,3-Dimetoxy-l ^-[4-(dimetoxymetyl)fenyl]-17a-ctoxytrietvl-9-esLién-5a,17[i-diolu (pripravený podľa príkladu 7, stupeň H) sa rozpustí v 2,5 ml acetónu a pridá sa 0,25 ml vody a 35 mg kyseliny 4-toluénsulfónovej. Po 1 hodine sa reakčná zmes zriedi s 10 ml vody a pridá sa 10 ml octanu etylnatého. Vrstvy sa oddelia, vodná vrstva sa dvakrát vyextrahuje, spojené organické vrstvy sa premyjú a vysušia nad síranom sodným. Po odparení rozpúšťadla zostane 300 mg žltkastých kryštálov.

Po preparatívnej chromatografii na tenkej vrstve Kieselgelu 60 so zmesou rozpúšťadiel toluén/acetón (9 : 1) sa získa 200 mg 17a-etoxymetyl-l 1β-(4-ίόπην1fenyl)-^-hydroxy-4,9-estradien-3-ónu ako žltkasté kryštály.

Teplota topenia: 144 -150 °C (acetón/hexán) a_D= + 171°(CHC1₃)

UV spektrum v MeOH: lambda_mÍK= 263 nm epsilon =17 842 lambda_max= 299 nm epsilon = 20 083 ‘H-NMR spektrum v CDC1₃ [δ, ppm]: 0,512 (s, 1H, H-18); 1,249 (t, 3H, J=4,6 Hz, 17a-CH₂OCH₂CH₃); 3,221 - 3,613 (m, 4H,2xCH₂): 4,447 (d, 1H, J=6,9 Hz, H-lla); 5,799 (s, 1H, H-4); 7,361, 7,388, 7,788, 7,816 (m, 4H, AA’BB-systém aromatických protónov); 9,972 (s, 1H, CH=0).

Príklad 11

Meranie receptorovej väzbovej afinity

Receptorová väzbová afinita bola stanovená kompetitívnou väzbou špecificky viazaného ³H-značkovaného hormónu (Tracer) a zlúčeniny testovanej na receptoroch v cytosole zo zvieracích cieľových orgánov. Pritom dochádza k nasýteniu receptorov a k reakčnej rovnováhe. Zvolili sa nasledujúce inkubačné podmienky :

Progesterónový receptor: cytosol uteru králika, ktorému bol podaný estradiol, skladovaný pri -30 °C, v TED-tlmivom roztoku (20 mM Tris/HCl, pH 7,4; 1 mM etyléndiainíntetraacetát, 2 mM ditiotreitol) s 250 mM sacharózy. Tracer: ’H-ORG 2058, 5 nM; Referenčná látka: progesterón.

Glukokortikoidový receptor: cytosol týmu adrenalektomovaného potkana, týmus skladovaný pri -30 °C: Tlmivý roztok: TED. Tracer: ³H-dexametazón, 20 nM; Referenčná látka: dexametazón.

Estrogénový receptor: cytosol uteru nezrelého králika, skladovaný pri -30 °C v TED-tlmivom roztoku s 250 mM sacharózy. Tracer: ³II-etinylestradiol, 3 nM; Referenčná látka: 17p-estradiol

Po 18 hodinovej inkubačnej dobe pri teplote 0 - 4 °C nasledovalo oddelenie viazaných a voľných steroidov pridaním aktívneho uhlia a dextránu (1 %/0,l %), odcentrifugovanie a meranie viazanej ³H-aktivity v prebytku.

Z meraní koncentračných radov sa stanovili IC₅₀ pre testovanú zlúčeninu a pre referenčnú látku a tiež kvocient oboch hodnôt (x 100%) relatívnej molovej väzbovej afinity.

Príklad 12

Tlmenie skorej gravidity potkana

Samičky potkanov sa spária v prooestruse. Po potvrdení, že spermie boli vo vaginálnom stere sa druhý deň počíta ako prvý· deň (=dl) gravidity. Liečba s testovacími substanciami alebo vehikulom nasleduje od d5 - d7, autopsia nasleduje v d9. Substancie sa subkutánne injikujú v 0,2 ml vehikula (benzylbenzoát/ricínový olej 1 + 4). Počet úplne zabránených gravidít v rôznych skupinách uvádza tabuľka

1. Pre J 867 bolo pri RU 486 stanovené zabránenie nidácie o faktor 3.

Tabuľka 1

Receptorová väzba vybratých zlúčenín, pripravených podľa príkladov 1 až 5

Zlúčenina podľa príkladu	Relatívna molová väzbová afinita (RMVA) [%] k
progesterónovému receptoru (progesterón = 100 %)	glukokortikoidnému receptoru (dexametazon = 100 %)	estrogénovému receptoru (estradiol =100 %)
1 (J867)	302	78	<0,1
2	136	82	<0,1
3	236	73	<0,1
4	294	66	<0,1
5	90	32	<0,1
na porovnanie
RU 486 (Mifepristone)	506	685
ZK 98299 (Onapristone)	22	39

Príklad 13

Antigestagénna liečba samičích morských prasiat

Liečba dospelých samičích morských prasiat od 10 dňa po 18 deň cyklu (autopsia). Aplikácia udaných dávok prostredníctvom subkutánnych osmotických púmp (ALZET typ 2 ML1), vehikulum: 2,0 ml propylénglykolu/24 hodín.

Príklad 14

Antiglukokortikoidný účinok J 867 v ľudských prsných rakovinových bunkových líniách ZR75/AGP-763

Experimenty s bunkovými kultúrami boli vykonané v RPMI 1640, zmiešané s 10 % fetálnym teľacím sérom (FTS) v klimatizátore s 95 % vzduchu a 5 % CO₂. Na experimenty sa bunky naočkovali do 60 mm Petriho misiek. Médium koníluentných buniek bolo nahradené médiom s 5 % FTS (spracované s dextránom pokrytým aktívnym uhlím, DCC). Ku CAT-indukcii sa pridal dexametazon v koncentrácii 10'⁷v etanole (0,2 %; obj/obj). Odobratie stimulovaných buniek sa uskutočnilo po 16 hodinách prípravou bunkového extraktu so zellysis tlmivým roztokom. CAT-stanovenie sa uskutočnilo pomocou ELISA testu firmy Boehringer zodpovedajúco opisu na kvantitívne CAT-stanovenie prenesených buniek.

Tabuľka 2

Urýchlenie abortívneho účinku RU 486 a J 867 (príklad 1) pri potkanovi po subkutánnej aplikácii od 5. - 7. dňa gravidity (aplikácia 0,2 ml/zviera/deň v zmesi benzylbenzoát/ricínový olej [1+4 obj/obj])

Skupina, zlúčenina	dávka (mg/zviera/deň)	kompletné tlmenie gravidity⁴n7n %	ED 50++ (mg/zviera/deň)
vehikulum	-	0/13	0	-

RU 486	3,0	5/5	100
	1,0	2/5	40	1,3
	0,3	0/5	0

J 867	3,0	5/5	100
	1,0	5/5	100	0,6
	0,3	0/5	0
	0,1	0/5	0

+ - prázdna maternica; N - počet všetkých samíc;

N* - počet negravidných samíc; ++ - grafické stanovenie

Príklad 15

Antiglukokortikoidný účinok J 867 v TAT-modele v potkaních bunkách hepatómu

Kultivácia buniek sa vykonala v DMEM za rovnakých podmienok ako v príklade 14. Naočkovanie buniek sa uskutočnilo na 24 platniach. Pridanie substancie ku konfluentným bunkám hepatómu sa urobilo v 0,2 % (obj/obj) etanole počas 16 hodín. Po starostlivom odobratí buniek bunkovou škrabkou a získaní bunkového extraktu pomocou ultrazvuku sa uskutočnilo TAT-stanovenie enzýmu na diamondstone.

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

l. Deriváty 11 β -benzaldoxítn-4,9-estradiénu všeobecného vzorca (I) kde

Π

SK280137 Β6

R¹ znamená atóm vodíka alebo alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka,

R² predstavuje atóm vodíka, alkylovú, arylovú, aralkylovú alebo alkylarylovú skupinu s 1 - 10 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka alebo zvyšok -CONHR⁴alebo -COOR⁴, pričom R⁴ predstavuje atóm vodíka, alkylový, arylový, aralkylový alebo alkylarylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka, R³ predstavuje atóm vodíka, alkylovú, arylovú, aralkylovú alebo alkylarylovú skupinu s 1 - 10 atómami uhlíka, zvyšok -(CH₂)_n-CH₂X, pričom n = 0,1 alebo 2, X predstavuje atóm fluóru, chlóru, brómu alebo jódu, kyanovú, azidovú alebo rodanidovú skupinu, zvyšok OR⁵ alebo SR⁵, pričom R⁵ je atóm vodíka, alkylový, arylový, aralkylový alebo alkylarylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, zvyšok OR⁵, pričom R⁵ má uvedený význam, zvyšok -(CH₂)_O-CH=CH(CH₂)_P-R⁶, pričom o = 0, 1,2 alebo 3 a p = 0, 1 alebo 2 a R⁶ predstavuje atóm vodíka, alkylovú, arylovú, aralkylovú alebo alkylarylovú skupinu s 1 - 10 atómami uhlíka, hydroxylovú skupinu, alkoxylovú skupinu alebo acyloxylovú skupinu s 1 -10 atómami uhlíka, zvyšok -('CH₂)_:|C=CR⁷, pričom g = 0, 1 alebo 2 a R⁷ je atóm vodíka, atóm íluóru, chlóru, brómu alebo jódu, alkylový, arylový, aralkylový alebo alkylarylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka, alebo, v prípade ak Zje vodík, R¹ je -CH3 a R² je vodík alebo -CH3, predstavuje zvyšok -C^C-CH-OI I,

Z predstavuje atóm vodíka, alkylový', arylový, aralkylový alebo alkylarylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, alkylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka, zvyšok -CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ má už uvedený význam, alebo predstavuje atóm alkalického kovu alebo atóm kovu alkalickej zeminy a ich farmaceutický prijateľné soli, s výnimkou zlúčenín, v ktorých R¹ je -CH3, R² je -CH3, R³je -CH₂-O-CH₃ a Z predstavuje -CO-CH₃, -CO-O-C₂H₅, -CO-NH-fenyl, -CO-NH-C₂H5, -CO-C₂H₅ alebo -CO-fenyl.
2. Zlúčeniny podľa nároku 1, vyznačujúce sa tým, že R¹ znamená metyl- alebo ctylskupinu.
3. Zlúčeniny podľa aspoň jedného z nárokov 1 a 2, vyznačujúce sa tým, že R² predstavuje atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 - 10 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo zvyšok -CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ predstavuje atóm vodíka, alkylový alebo arylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka.
4. Zlúčeniny podľa nároku 3, vyznačujúce sa tým, že R² predstavuje alkylovú skupinu s 1 - 6 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka alebo zvyšok -CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ predstavuje atóm vodíka, alkylový alebo arylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka.
5. Zlúčeniny podľa aspoň jedného z nárokov 1 až 4, vyznačujúce sa tým, že R³ znamená atóm vodíka.
6. Zlúčeniny podľa aspoň jedného z nárokov 1 až 4, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje alkylovú, arylovú, aralkylovú alebo alkylarylovú skupinu s 1-10 atómami uhlíka.
7. Zlúčeniny podľa nároku 6, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje alkylovú skupinu s 1-10 atómami uhlíka.
8. Zlúčeniny podľa nároku 6, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje alkylovú skupinu s 1 - 6 atómami uhlíka.
9. Zlúčeniny podľa aspoň jedného z nárokov 1 až 4, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje zvyšok -(CH₂)_n-CH₂X, pričom n = 0, 1 alebo 2, X predstavuje atóm fluóru, chlóru, brómu alebo jódu, kyanovú, azidovú alebo rodanidovú skupinu, zvyšok OR⁵ alebo SR⁵, pričom R⁵ j e atóm vodíka, alkylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka.
10. Zlúčeniny podľa nároku 9, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje zvyšok -(CH₂)_n-CH₂X, pričom n - 0,1 alebo 2, X predstavuje atóm fluóru, chlóru, brómu alebo jódu, kyanovú, azidovú alebo rodanidovú skupinu, zvyšok OR⁵ alebo SR³, pričom R³ je alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka.
11. Zlúčeniny podľa aspoň jedného z nárokov 1 až 4, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje zvyšok OR⁵, pričom R⁵ je atóm vodíka, alkylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 -10 atómami uhlíka.
12. Zlúčeniny podľa nároku 11, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje zvyšok OR⁵, pričom R³ j e alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka.
13. Zlúčeniny podľa aspoň jedného z nárokov 1 až 4, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje zvyšok -(CH₂)o-CH=CH(CH₂)_p-Ŕ⁶, pričom g = 0,1, 2 alebo 3 a p = 0, 1 alebo 2 a R⁶ predstavuje atóm vodíka, alkylovú skupinu s 1 - 10 atómami uhlíka, hydroxyskupinu, alkoxyskupinu alebo acyloxyskupinu s 1-10 atómami uhlíka.
14. Zlúčeniny podľa nároku 13, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje zvyšok -(CH₂)„-CH^HCCHjjp-R⁶, pričom o = 0, 1,2 alebo 3 a p = 0, 1 alebo 2 a R⁶ predstavuje alkylovú skupinu s 1 - 6 atómami uhlíka, alkoxyskupinu alebo acyloxyskupinu s 1 - 6 atómami uhlíka.
15. Zlúčeniny podľa aspoň jedného z nárokov 1 až 4, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje zvyšok -(CH₂)_qC=CR⁷, pričom g = 0, 1 alebo 2 a R⁷ je atóm vodíka, atóm fluóru, chlóru, brómu alebo jódu, alkylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka.
16. Zlúčeniny podľa nároku 15, vyznačujúce sa tým, že R³ predstavuje zvyšok-(CH₂)₄C=CR⁷, pričom g_= 0,1 alebo 2 a R⁷je alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka alebo acylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka.
17. Zlúčeniny podľa aspoň jedného z nárokov 1 až 16, vyznačujúce sa tým, že Z predstavuje atóm vodíka, alkylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlika, acylový· zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, zvyšok -CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ predstavuje atóm vodíka alebo alkylový zvyšok s 1-10 atómami uhlíka.
18. Zlúčeniny podľa nároku 17, vyznačujúce sa tým, že Z predstavuje alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka alebo zvyšok -CONHR⁴, alebo -COOR⁴, pričom R⁴predstavuje atóm vodíka alebo alkylový zvyšok s 1 - 6 atómami uhlíka.
19. Zlúčeniny podľa aspoň jedného z nárokov 1 až 16, vyznačujúce sa tým, že Z predstavuje atóm alkalického kovu alebo atóm kovu alkalickej zeminy.
20. Zlúčeniny podľa aspoň jedného z nárokov 1 až 16, vybrané zo skupiny zahŕňajúcej

1 ip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17P-hydroxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ón,

I ip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-hydroxy-17a-etoxymetyl-4,9-estradien-3-ón,

11P - [4-(hydroxyiminometyl)fenyl] -17β -hydroxy-17a-n-propoxymetyl-4, 9-estradi en-3 -ón, lip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17p-hydroxy-17a-i-propoxymetyl-4.9-estradien-3-ón,

II p-[4-(hydroxyiminometyľ)lenyl ]-l 7P-metoxv-17cc-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ón,

11 P-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-l 7p-metoxy-l7cc-etoxymetyM,9-estradien-3-ón, lip-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17P-hydroxy-17a-(3-hydroxy-l-propinyl)-4,9-estradien-3-ón,

11 p44-(hydroxyiminometyľ)fenyl]-^i-mctoxy-l 7a-(3-hydroxy-l-propinyl)A,9-estradien-3-ón,

I lp-[4-(hydroxyiminometyl)feny]]-17p4iYdroxy-17a-Z-(3-hydroxypropenyl)-4,9-estradien-3-ón,

II β - [4-(hydroxyirnmometyl)fcnyl]-l 7 β -metoxy-17a-Z-( 3 -hydroxypropenyl)-4,9-estradien-3 -ón,

17a-chlórmetyl-l 1 p-[4-íliydroxyimmometyľ)fenyl]-17P-hydroxy-4,9-estradien-3-ón,

17a-chlórmetyl-l 1 P-|4-('hydroxyiminotnĽtyl)ľcnyl]-l7β-metoxy-4,9-estradien-3-ón,

17a-kyanometyl-l 1 P-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17P-hydroxy-4,9-estradien-3-ón,

17cc-kyanometyl-l 1 P-[4-(hydroxyiminomctyl)fenyl]-l 7β-metoxy-4,9-estradien-3 -ón,

17a-azidometyl-l 1 P-[4-(hydroxyiminometyl)fenyl]-17P-metoxy-4,9-estradien-3 -ón,

1 ip-[4-(hydroxyiminomctyl)fcnyl]-l 7p-metoxy-l 7cc-metyltiometyl-4,9-estradien-3-ón,

HP-[4-(metyloxyiminometyl)fenyl]-17P-metoxy-17a-metoxymetyl-4,9-estradien-3-ón, lip-[4-(metyloxyiminomctyl)fcnyl]-17p-hydroxy-17a-metoxytnetyl-4,9-estradien-3-ón a

11P -[4-(hydroxyiminometyl)fenylj-17 P -etoxy-17 a-etoxymetyl-4,9-estradien-3-ón.
21. Spôsob prípravy zlúčenín podľa nároku 1 a ich farmaceutický prijateľných solí, vyznačuj úci sa tým, že zlúčenina všeobecného vzorca (11), v prípade, ak je prítomná hydroxylamínová skupina, táto sa esterifikuje alebo éterifikuje kvôli získaniu zlúčenín vzorca (I), v ktorom Z nie je vodík, a získaná zlúčenina sa prípadne prevedie na farmaceutický prijateľnú soľ.
22. Spôsob prípravy podľa nároku 21, vyznačujúci sa tým, že zlúčenina všeobecného vzorca (Π) reaguje so zlúčeninou všeobecného vzorca (Ila) v ekvimólových množstvách.
23. Farmaceutické kompozície, vyznačujúce sa tým, že obsahujú aspoň jednu zlúčeninu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 20.

3 výkresy kde R¹, R² a R³ majú význam uvedený v nároku 1, reaguje so zlúčeninou všeobecného vzorca (Ila),

H₂N-O-Y (Ila), kde Y je atóm vodíka, alkylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka, acylový zvyšok s 1 - 10 atómami uhlíka alebo zvyšok

-CONHR⁴ alebo -COOR⁴, pričom R⁴ má význam uvedený v nároku 1, a pričom zlúčenina všeobecného vzorca (Ha) je prítomná, ak je to žiaduce, vo forme takejto zlúčeniny alebo vo forme zlúčeniny, z ktorej sa uvoľní zlúčenina všeobecného vzorca (Ila) za vhodných reakčných podmienok,

SK 280137 Β6

Hmotnost maternice (pomer: pokus/kontrola)