SK279691B6 - Použitie nematód phasmorhabditis na hubenie mäkkýš - Google Patents
Použitie nematód phasmorhabditis na hubenie mäkkýš Download PDFInfo
- Publication number
- SK279691B6 SK279691B6 SK22-94A SK2294A SK279691B6 SK 279691 B6 SK279691 B6 SK 279691B6 SK 2294 A SK2294 A SK 2294A SK 279691 B6 SK279691 B6 SK 279691B6
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- nematodes
- growth
- bacteria
- slugs
- use according
- Prior art date
Links
- 241000244206 Nematoda Species 0.000 title claims abstract description 206
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 title claims abstract description 77
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 35
- 241000237852 Mollusca Species 0.000 title claims abstract description 25
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 6
- 230000008569 process Effects 0.000 title abstract description 3
- 230000012010 growth Effects 0.000 claims abstract description 30
- 241001148186 Psychrobacter phenylpyruvicus Species 0.000 claims abstract description 21
- 241000607479 Yersinia pestis Species 0.000 claims abstract description 21
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 claims abstract description 15
- 241000836459 Phasmarhabditis neopapillosa Species 0.000 claims abstract description 13
- 241000589540 Pseudomonas fluorescens Species 0.000 claims abstract description 13
- 241001133383 Phasmarhabditis hermaphrodita Species 0.000 claims abstract description 12
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 9
- 230000036541 health Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000003898 horticulture Methods 0.000 claims abstract description 4
- 241000237858 Gastropoda Species 0.000 claims description 103
- 241001133384 Phasmarhabditis Species 0.000 claims description 34
- 241000894007 species Species 0.000 claims description 34
- 241001300076 Deroceras reticulatum Species 0.000 claims description 25
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 20
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 11
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 claims description 11
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 claims description 10
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 claims description 10
- 239000004927 clay Substances 0.000 claims description 8
- 241000482272 Deroceras panormitanum Species 0.000 claims description 7
- 241000237518 Arion Species 0.000 claims description 6
- 241000588777 Providencia rettgeri Species 0.000 claims description 5
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 5
- 241000089862 Monacha cantiana Species 0.000 claims description 4
- 241000638111 Tandonia sowerbyi Species 0.000 claims description 4
- 239000000843 powder Substances 0.000 claims description 4
- 241000692821 Arion intermedius Species 0.000 claims description 3
- 241000193755 Bacillus cereus Species 0.000 claims description 3
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 241000607720 Serratia Species 0.000 claims description 3
- 239000002285 corn oil Substances 0.000 claims description 3
- 235000005687 corn oil Nutrition 0.000 claims description 3
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 3
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 3
- 235000015170 shellfish Nutrition 0.000 claims description 3
- 241000607525 Aeromonas salmonicida Species 0.000 claims description 2
- 241000237526 Arionidae Species 0.000 claims description 2
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 241000589586 Empedobacter brevis Species 0.000 claims description 2
- 241000237365 Helicidae Species 0.000 claims description 2
- 241001523586 Limacidae Species 0.000 claims description 2
- 241000589588 Myroides odoratus Species 0.000 claims description 2
- 239000011575 calcium Substances 0.000 claims description 2
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 claims description 2
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 2
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 2
- 241000607534 Aeromonas Species 0.000 claims 1
- 241001599626 Milacidae Species 0.000 claims 1
- 239000008393 encapsulating agent Substances 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 239000011707 mineral Substances 0.000 claims 1
- 150000003626 triacylglycerols Chemical class 0.000 claims 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 claims 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 claims 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 claims 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 claims 1
- 101150047834 SNAI2 gene Proteins 0.000 description 29
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 22
- 238000011282 treatment Methods 0.000 description 18
- 239000005951 Methiocarb Substances 0.000 description 16
- YFBPRJGDJKVWAH-UHFFFAOYSA-N methiocarb Chemical compound CNC(=O)OC1=CC(C)=C(SC)C(C)=C1 YFBPRJGDJKVWAH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 16
- 239000006260 foam Substances 0.000 description 15
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 13
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 9
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 8
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 8
- 235000021186 dishes Nutrition 0.000 description 8
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 8
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 8
- 239000008399 tap water Substances 0.000 description 8
- 235000020679 tap water Nutrition 0.000 description 8
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 7
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 7
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 7
- 235000010149 Brassica rapa subsp chinensis Nutrition 0.000 description 6
- 235000000536 Brassica rapa subsp pekinensis Nutrition 0.000 description 6
- 241000499436 Brassica rapa subsp. pekinensis Species 0.000 description 6
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 6
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 6
- 238000009630 liquid culture Methods 0.000 description 6
- 241000137592 Boettgerilla pallens Species 0.000 description 5
- 244000182751 Bothriochloa bladhii Species 0.000 description 5
- 241000209140 Triticum Species 0.000 description 5
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 5
- 241001298365 Arion ater Species 0.000 description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 4
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 4
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 4
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 4
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 4
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 3
- 241000238631 Hexapoda Species 0.000 description 3
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 241000482273 Tandonia Species 0.000 description 3
- 235000021307 Triticum Nutrition 0.000 description 3
- 239000007900 aqueous suspension Substances 0.000 description 3
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 3
- 239000006916 nutrient agar Substances 0.000 description 3
- 244000045947 parasite Species 0.000 description 3
- 230000008654 plant damage Effects 0.000 description 3
- 239000004033 plastic Substances 0.000 description 3
- 229920003023 plastic Polymers 0.000 description 3
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 3
- 238000011160 research Methods 0.000 description 3
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 3
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 3
- 229940033663 thimerosal Drugs 0.000 description 3
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 2
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016938 Catalase Human genes 0.000 description 2
- 108010053835 Catalase Proteins 0.000 description 2
- 241000237357 Lymnaea stagnalis Species 0.000 description 2
- 241000237355 Lymnaeidae Species 0.000 description 2
- 241001300083 Milax Species 0.000 description 2
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 2
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 241000244173 Rhabditis Species 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000000721 bacterilogical effect Effects 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 2
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 2
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 2
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 2
- 230000010196 hermaphroditism Effects 0.000 description 2
- 230000007062 hydrolysis Effects 0.000 description 2
- 238000006460 hydrolysis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002054 inoculum Substances 0.000 description 2
- 238000003973 irrigation Methods 0.000 description 2
- 230000002262 irrigation Effects 0.000 description 2
- 230000000366 juvenile effect Effects 0.000 description 2
- 230000001418 larval effect Effects 0.000 description 2
- 231100000518 lethal Toxicity 0.000 description 2
- 230000001665 lethal effect Effects 0.000 description 2
- 239000000463 material Substances 0.000 description 2
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 2
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 2
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 2
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000003415 peat Substances 0.000 description 2
- 235000015277 pork Nutrition 0.000 description 2
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 2
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 2
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 2
- 238000007619 statistical method Methods 0.000 description 2
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 2
- DYBGHJXBSWWBSY-UHFFFAOYSA-N (3,4,5-trimethylthiophen-2-yl)methylcarbamic acid Chemical compound CC1=C(SC(=C1C)CNC(=O)O)C DYBGHJXBSWWBSY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 6-{[2-carboxy-4,5-dihydroxy-6-(phosphanyloxy)oxan-3-yl]oxy}-4,5-dihydroxy-3-phosphanyloxane-2-carboxylic acid Chemical compound O1C(C(O)=O)C(P)C(O)C(O)C1OC1C(C(O)=O)OC(OP)C(O)C1O FHVDTGUDJYJELY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N Aesculin Natural products OC[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H]1Oc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O PLXMOAALOJOTIY-FPTXNFDTSA-N 0.000 description 1
- 108010082340 Arginine deiminase Proteins 0.000 description 1
- 241001458848 Arion subfuscus Species 0.000 description 1
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 1
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 description 1
- 241000137583 Boettgerilla Species 0.000 description 1
- 240000002791 Brassica napus Species 0.000 description 1
- 235000006008 Brassica napus var napus Nutrition 0.000 description 1
- 241000041029 Bulinus Species 0.000 description 1
- 241001260012 Bursa Species 0.000 description 1
- WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N Cichoriin Natural products O([C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O1)c1c(O)cc2c(OC(=O)C=C2)c1 WNBCMONIPIJTSB-BGNCJLHMSA-N 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 241001300085 Deroceras Species 0.000 description 1
- 241000242711 Fasciola hepatica Species 0.000 description 1
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 1
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 1
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 1
- 241000584390 Limax cinereoniger Species 0.000 description 1
- 241000237354 Lymnaea Species 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 1
- 206010027476 Metastases Diseases 0.000 description 1
- 241001364998 Milax gagates Species 0.000 description 1
- 241000588621 Moraxella Species 0.000 description 1
- 208000000291 Nematode infections Diseases 0.000 description 1
- 241000133504 Opisthorchis sinensis Species 0.000 description 1
- 241000935974 Paralichthys dentatus Species 0.000 description 1
- 239000004721 Polyphenylene oxide Substances 0.000 description 1
- 229920005830 Polyurethane Foam Polymers 0.000 description 1
- 241000243142 Porifera Species 0.000 description 1
- 241000589516 Pseudomonas Species 0.000 description 1
- 244000061456 Solanum tuberosum Species 0.000 description 1
- 235000002595 Solanum tuberosum Nutrition 0.000 description 1
- 239000004809 Teflon Substances 0.000 description 1
- 229920006362 Teflon® Polymers 0.000 description 1
- 108010046334 Urease Proteins 0.000 description 1
- IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N acetic acid phenyl ester Natural products CC(=O)OC1=CC=CC=C1 IPBVNPXQWQGGJP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000008186 active pharmaceutical agent Substances 0.000 description 1
- 230000006978 adaptation Effects 0.000 description 1
- WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N adipic acid Chemical compound OC(=O)CCCCC(O)=O WNLRTRBMVRJNCN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000002411 adverse Effects 0.000 description 1
- 229940072056 alginate Drugs 0.000 description 1
- 235000010443 alginic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229920000615 alginic acid Polymers 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 1
- 230000003816 axenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000004888 barrier function Effects 0.000 description 1
- SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N benzopyrrole Natural products C1=CC=C2NC=CC2=C1 SIKJAQJRHWYJAI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 1
- 239000012876 carrier material Substances 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000001311 chemical methods and process Methods 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 230000027326 copulation Effects 0.000 description 1
- 230000034994 death Effects 0.000 description 1
- GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N decanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCC(O)=O GHVNFZFCNZKVNT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 235000005911 diet Nutrition 0.000 description 1
- 230000037213 diet Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 235000013601 eggs Nutrition 0.000 description 1
- 238000001493 electron microscopy Methods 0.000 description 1
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 1
- 229940093496 esculin Drugs 0.000 description 1
- XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N esculin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC(C(=C1)O)=CC2=C1OC(=O)C=C2 XHCADAYNFIFUHF-TVKJYDDYSA-N 0.000 description 1
- AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N esculin Natural products OC1OC(COc2cc3C=CC(=O)Oc3cc2O)C(O)C(O)C1O AWRMZKLXZLNBBK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000003203 everyday effect Effects 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 210000005002 female reproductive tract Anatomy 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 238000011010 flushing procedure Methods 0.000 description 1
- 238000009472 formulation Methods 0.000 description 1
- 239000013505 freshwater Substances 0.000 description 1
- 235000021189 garnishes Nutrition 0.000 description 1
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 1
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 1
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 1
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 230000012447 hatching Effects 0.000 description 1
- 238000007654 immersion Methods 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N indole Natural products CC1=CC=CC2=C1C=CN2 PZOUSPYUWWUPPK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N indolenine Natural products C1=CC=C2CC=NC2=C1 RKJUIXBNRJVNHR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000936 intestine Anatomy 0.000 description 1
- 238000001155 isoelectric focusing Methods 0.000 description 1
- 238000009533 lab test Methods 0.000 description 1
- 238000011031 large-scale manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 230000002045 lasting effect Effects 0.000 description 1
- 231100001231 less toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000033001 locomotion Effects 0.000 description 1
- 229940049920 malate Drugs 0.000 description 1
- BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N malic acid Chemical compound OC(=O)C(O)CC(O)=O BJEPYKJPYRNKOW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 230000009401 metastasis Effects 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 238000009629 microbiological culture Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000003071 parasitic effect Effects 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 230000000361 pesticidal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000575 pesticide Substances 0.000 description 1
- 229940049953 phenylacetate Drugs 0.000 description 1
- WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N phenylacetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC=C1 WLJVXDMOQOGPHL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000000053 physical method Methods 0.000 description 1
- 238000005554 pickling Methods 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920002401 polyacrylamide Polymers 0.000 description 1
- 229920000570 polyether Polymers 0.000 description 1
- 229920002635 polyurethane Polymers 0.000 description 1
- 239000004814 polyurethane Substances 0.000 description 1
- 239000011496 polyurethane foam Substances 0.000 description 1
- 235000012015 potatoes Nutrition 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 230000003252 repetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 238000012552 review Methods 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 1
- 238000013207 serial dilution Methods 0.000 description 1
- 230000001568 sexual effect Effects 0.000 description 1
- 238000012807 shake-flask culturing Methods 0.000 description 1
- 238000007873 sieving Methods 0.000 description 1
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 1
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000001228 spectrum Methods 0.000 description 1
- 239000007921 spray Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 230000008961 swelling Effects 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 231100000331 toxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000002588 toxic effect Effects 0.000 description 1
- 238000010361 transduction Methods 0.000 description 1
- 230000026683 transduction Effects 0.000 description 1
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 210000002700 urine Anatomy 0.000 description 1
- 235000019354 vermiculite Nutrition 0.000 description 1
- 229910052902 vermiculite Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010455 vermiculite Substances 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01K—ANIMAL HUSBANDRY; AVICULTURE; APICULTURE; PISCICULTURE; FISHING; REARING OR BREEDING ANIMALS, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; NEW BREEDS OF ANIMALS
- A01K67/00—Rearing or breeding animals, not otherwise provided for; New or modified breeds of animals
- A01K67/033—Rearing or breeding invertebrates; New breeds of invertebrates
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A01—AGRICULTURE; FORESTRY; ANIMAL HUSBANDRY; HUNTING; TRAPPING; FISHING
- A01N—PRESERVATION OF BODIES OF HUMANS OR ANIMALS OR PLANTS OR PARTS THEREOF; BIOCIDES, e.g. AS DISINFECTANTS, AS PESTICIDES OR AS HERBICIDES; PEST REPELLANTS OR ATTRACTANTS; PLANT GROWTH REGULATORS
- A01N63/00—Biocides, pest repellants or attractants, or plant growth regulators containing microorganisms, viruses, microbial fungi, animals or substances produced by, or obtained from, microorganisms, viruses, microbial fungi or animals, e.g. enzymes or fermentates
- A01N63/10—Animals; Substances produced thereby or obtained therefrom
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/8215—Microorganisms
- Y10S435/822—Microorganisms using bacteria or actinomycetales
Landscapes
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Environmental Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Pest Control & Pesticides (AREA)
- Dentistry (AREA)
- Agronomy & Crop Science (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biodiversity & Conservation Biology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Virology (AREA)
- Animal Husbandry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Agricultural Chemicals And Associated Chemicals (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Farming Of Fish And Shellfish (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Catching Or Destruction (AREA)
- Measuring Pulse, Heart Rate, Blood Pressure Or Blood Flow (AREA)
Description
Oblasť techniky
Vynález sa týka potláčania poľnohospodárskych a záhradníckych škodcov a predovšetkým hubenia mäkkýšov vrátane slimákov, ako je napríklad slimáčik poľný (Deroceras reticulatum) a slimákov, ako je napríklad Monacha cantiana. Z dôvodu účelnosti je vynález ďalej opisovaný predovšetkým vo vzťahu k hubeniu slimákov, ale je samozrejmé, že je ho možné využiť tiež pri hubení iných mäkkýšov, ktoré škodia rastlinám na poli a v skleníku alebo ktoré prednášajú parazity, škodlivé pre človeka alebo zvieratá.
Doterajší stav techniky
Slimáky sú rozšírení škodcovia niekoľkých dôležitých poľnohospodárskych plodín, ako je predovšetkým ozimná pšenica, repka olejka a zemiaky. Títo škodcovia spôsobujú veľké škody vo všetkých krajinách sveta, ako sú Veľká Británia a iné európske krajiny, krajiny severnej a strednej Ameriky, ázijské štáty a Austrália. Spôsobujú tiež problémy v záhradníctve záhradkárom. Z ekonomického hľadiska pôsobí najväčšie škody slimáčik poľný (Deroceras reticulatum, čeľaď Limacidae), napriek tomu, že i iné slimáky z tejto čeľade ako i slimák Arion (čeľaď Arionidae), Tandonia, Milax (čeľaď Milaqidae) a Boettgerilla, môžu tiež spôsobovať podstatné škody. Tiež ďalšie slimáky sa môžu stať nepríjemnými škodcami v záhradníctve a poľnohospodárstve. Ako jeden príklad slimákov je možné uviesť slimáka Monacha cantiana (čeľaď Helicidae). Ďalšie príklady škodcov zo skupiny mäkkýšov sú uvedené v publikácii Godan, „Pest Slugs and Snails“ 1983, Springer-Verlag, Berlín, Nemecko, Mäkkýše môžu tiež nosiť škodcov, ktorí predstavujú riziko pre zdravie človeka alebo zvierat. Ako príklady je možné uviesť druh Lymnaea (čeľaď Lymnaeidae), ktorý je nositeľom motolice pečeňovej ((Fasciola hepatica) a druh Bulinus (čeľaď Bulinidae), ktorý' je nositeľom Opisthorchis sinensis. Čeľade Limacidace, Arionidae, Milacidae a Helicidae patria do radu Stylommatophora. Čeľaď Bulinidae a Lymnaeidae patria do radu Basommatophora.
Súčasné spôsoby hubenia týchto škodcov sú len sčasti účinné a dostupné chemikálie sú vysoko toxické pre vtáky a cicavce. Z toho dôvodu jasne existuje potreba nájsť účinnejšie, trvalejšie a menej toxické spôsoby potlačovania mäkkýšov.
Podstata vynálezu
Teraz sa s prekvapením zistilo, že Nematoda rodu Phasmarhabditis predstavujú účinný prostriedok na hubenie širokej palety druhov mäkkýšov. Z druhov, ktoré patria do rodu Phasmarhabditis sú obzvlášť účinné príbuzné organizmy P. neopapillosa a P. hermaphrodita, ktoré budú podrobnejšie opísané ďalej. Tieto druhy sú známe mnoho rokov a sú opísané v literatúre a charakterizované hlavne v publikácii Andrassy, ,A Taxonomic Review of the Sub-Order Rhabditina (Nematoda: Secernentma/' (1983, Orstom, Paríž, Francúzsko). Biologická účinnosť týchto organizmov proti škodcom zo skupiny slimákov však dosiaľ známa nebola.
Predmetom vynálezu je teda použitie druhu Phasmarhabditis na hubenie poľnohospodárskych a záhradníckych škodcov, poškodzujúcich zdravie človeka a zvierat, predovšetkým škodcov zo skupiny mäkkýšov. Tieto organizmy je možné získať zo slimákov na poli a pestovať ďalej opísanými spôsobmi tak, aby sme ich získali v dostatočnom množstve na spracovanie na vhodné prostriedky, ktoré by bolo možné aplikovať na poli alebo v skleníku. Z typických prostriedkov na praktické použitie sa používajú vhodné nosičové materiály, ako je rašelina, íl a iné pevné alebo polopevné nosiče, ako sú gélovité materiály. Vonkajšie testy vykonávané v malej mierke i v poľnej mierke ukázali, že nematódy môžu usmrcovať slimáky a chrániť semenáčiky čínskej kapusty a osivo alebo semenáčiky pšenice pred poškodením slimákmi prinajmenšom rovnako dobre alebo lepšie, ako to zabezpečuje 3,5-dimetyl-4-metyltiofenylmetylkarbamát, čo je najlepšia chemikália, ktorá je na tento účel v súčasnosti k dispozícii.
Biológia organizmu
Nematódy boli izolované zo slimákov nazbieraných vo výskumnej stanici Long Ashton Research Station vo Veľkej Británii. Bolo zistené, že tieto nematódy spôsobujú smrteľnú chorobu slimákov, ktorá sa prejavuje určitými charakteristickými symptómami, z ktorých je najnápadnejší opuch plášťa slimáka. Bolo zistené, že tieto nematódy patria do podradu Rhabditina a na ich ďalšiu identifikáciu bol použitý kľúč (Andrassy, 1983). Dve hlavné taxonomické charakteristiky tejto skupiny sú časť ústna a samčie reprodukčné štruktúry. Nematódy izolované na stanici Long Ashton majú charakteristické krátke ústa (storna) s izomorfným metastomom a samci, pokiaľ sú prítomni, majú peladeranové bursy, čo sú charakteristické znaky rodu Phasmarhabditis. Andrassy (1983) zaznamenal dva druhy, ktoré sú morfologicky totožné s týmito nematódami, ale vzájomne sa od seba líšia počtom samcov, prítomných v týchto populáciách. V druhu Phasmarhabditis neopapillosa sú samci a samice rovnako početní, zatiaľ čo v Phasmarhabditis hermaphrodita sú samci extrémne vzácni. Doteraz nie je známe, či P. hermaphrodita predstavuje zvláštny druh alebo len biologický variant P. neopapillosa (Andrassy 1983). P. hermaphrodita bol prvýkrát opísaný Maupasom v Archives de Zoologie (1900), zv. 8, m str. 464 až 624, ktorý túto nematódu nazval Rhabditis caussaneli. Maupas našiel v črevách slimáka Arion ater, ktorého nazbieral v Normandii, rezistentné larválne formy tejto nematódy. Choval kultúry tejto nematódy na zhnitom mäse počas dvoch rokov. Zistil, že dospelé červy sú prevažne protandrické autogamné hermafrodity. Ďalej zistil, že samci sú prítomní len vo veľmi malých počtoch (1 samec na 13 000 samíc) a že počet samcov v kultúrach nie je ovplyvňovaný nutričnými podmienkami. Maupas nikdy nezaznamenal kopuláciu samcov so samicami, z čoho bolo zrejmé, že za prítomnosti samcov nedošlo k žiadnej zmene fekundity nematód ani sexuálneho pomeru v potomstve. Maupas nepovažoval túto nematódu za parazita slimáka.
Phasmarhabditis neopapillosa bol opísaný Mengertom, ktorý na7.val túto nematódu Rhabditis neopapillosa, v časopise Zeitschrift fúr Morpholgie und Oekologie Tiere (1953), zv. 41, str. 311 až 349, vo svojej štúdii, týkajúcej sa vzťahu medzi nematódami a zemnými mäkkýšmi. Našiel túto nematódu vo forme rezistentných larválnych štádií, (ktoré označil názvom „dauer larvae“) v zadnej časti tráviaceho ústrojenstva slimáka Limax cinereoniger. Mengert považoval nematódu P. neopapillosa za saprofyt, ktorý prosperuje na hnijúcom materiáli mnoho generácií, ale keď nastanú nepriaznivé podmienky, mladí jedinci nedospejú a vytvoria rezistentné formy dauer larvae, ktoré neprijímajú potravu. Mengert sa domnieval, že P. neopapillosa žije rovnakým spôsobom ako dva iné druhy Phasmarhabditis papiilosa a P. hermaphrodita. Domnieval sa ďalej, že dauer larvae týchto troch druhov vstúpi, keď nastane príležitosť do tela slimákov, kde zostanú v podobe dauer larvae tak dlho, dokiaľ slimák neuhynie. Až potom pokračujú vo vývoji a reprodukujú sa, pričom sa živia mŕtvym telom slimáka. Mengert sa domnieval, že pobyt v slimákovi nie je nutnou súčasťou životného cyklu nematódy, ale predpokladal, že dauer larvae týchto druhov skutočne majú určitý stupeň adaptácie na život v slimákovi. Tvrdil však, že tieto nematódy na slimákoch neparazitujú.
Nematódu je možné izolovať zo slimákov zobraných na poli s použitím pascí s návnadou z drvených otrúb, ktoré sa rozmetú na trávnatej ploche. Po rozrezaní slimákov je možné nematódu izolovať z tráviaceho ústrojenstva slimáka alebo dutiny plášťa. V slimákoch žije mnoho druhov nematód (Mengert, 1953) a identifikáciu P. hermaphrodita a P. neopapillosa je treba potvrdiť s použitím taxonomického kľúča (Andrassy, 1983). Pokiaľ sa v slimákovi nájdu iba infekčné štádiá nematód (dauer larvae), je potrebné nematódu pestovať, aby ich bolo možné identifikovať.
Nematódy Phasmarhabditis boli izolované vo výskumnej stanici Long Ashton pri mnohých príležitostiach. V niektorých prípadoch sa populácia nematód skladala zo samcov a samíc, zatiaľ čo v iných prípadoch sa populácie skladali len z hermafroditov. Nematódy z populácií oboch typov boli vyšetrované svetelnou mikroskopiou a elektrónovou mikroskopiu (SEM). Tiež boli zisťované proteínové profily v rôznych populáciách po separácii proteinov izoelektrickou fokuzáciou. Neboli zistené žiadne rozdiely medzi populáciami s použitím ktorejkoľvek z uvedených metód. Izolované nematódy zodpovedajú dostupnému opisu P. neopapillosa a P. hermaphrodita.
Nematódu Phasmarhabditis je možné pestovať spôsobmi, ktoré sú uvedené v tomto opise. V tomto odbore je už známe, že nematódy, ktoré parazitujú na hmyze je možné pestovať vo veľkej mierke na obchodné využitie v kvapalných kultúrach s použitím miešaných nádrží alebo tzv. „airlift“ podnosoch s kúskami peny. Podobné techniky sa môžu používať pri produkcii P. hermaphrodita alebo P. neopapillosa vo veľkej mierke. Nematódy, ktoré sa používajú podľa tohto vynálezu, je teda možné ľahko pestovať na ľadvinovom médiu vo forme kúskov peny alebo vo forme kvapalnej kultúry, s použitím podobných techník, aké sa používajú pri produkcii nematód, ktoré parazitujú na hmyze. Na účely tohto vynálezu sa odporúča, aby bola kultúra nematód zbieraná v stave dauer larvae.
Požiadavky na pripojené baktérie
Nematódy Phasmarhabditis sa živia baktériami. Po izolácii z uhynutých slimákov bolo zistené, že nematódy Phasmarhabditis sú spojené s mnohými bakteriálnymi izolátmi. V súvislosti s vynálezom bol študovaný vzťah medzi týmito nematódami a pripojenými baktériami, aby sa zistilo, ktoré baktérie sú schopné podporovať dobrý rast nematód a na porovnanie patogenity nematód chovaných na rôznych druhoch baktérií.
S cieľom konzistentnej produkcie vo veľkej mierke nematód Phasmarhabditis, ktoré sú patogenické proti slimákom, sa nematódy prednostne pestujú v kultúrach s jednou známou pripojenou baktériou (monoxénické kultúry) a z toho dôvodu je potrebné vyvinúť spôsob selekcie jednotlivých druhov baktérií, ktoré sú schopné podporovať rast nematód. Baktérie, ktoré sú schopné podporovať rast nematód, môžu byť izolované z nematód, z kultúry nematód, rastúcich na zmesovej mikrobiálnej populácii, zo slimákov infikovaných baktériami z mŕtvych tiel slimákov, zamorených nematódami. Nematódy je možné zbaviť všetkých kontaminujúcich baktérií a previesť do kultúr s odlišným jediným druhom baktérie. Inkubácia týchto kultúr s odlišným jediným druhom baktérie. Inkubácia týchto kultúr u možňuje selekciu bakteriálnych izolátov, ktoré sú schopné podporovať rast nematód.
Z nematód, slimákov infikovaných nematódami a mŕtvych slimákov zamorených nematódami bolo získaných približne 100 bakteriálnych izolátov, z ktorých 15 bolo skúšaných na schopnosť podporovať rast nematód. Bolo zistené, že z týchto 15 izolátov, celkove 9 izolátov, ktoré predstavujú 8 druhov, podporuje dobrý rast na agare. 8 druhov baktérií, o ktorých sa zistilo, že podporujú dobrý rast nematód je uvedených ďalej:
Pseudomonas fluorescens Providencia rettgeri
Serratia proteomaculans Aeromonas salmonicida Moraxella phenylpyruvica Bacillus cereus
Flavobacterium odoratum Flavobacterium brevi
Schopnosť nematód pestovaných na rôznych druhoch baktérií usmrcovať slimáky, je možné zistiť biologickým pokusom. Pri takomto biologickom pokuse sú slimáky exponované rôznemu počtu nematód a zaznamenáva sa výsledná mortalita slimákov. Pomocou tejto metódy je možné kvantitatívne vyhodnotiť patogenitu (napríklad hodnotu LD50) nematód proti slimákom a použiť túto hodnotu na porovnanie patogenity nematód pestovaných na rôznych druhoch baktérií. Je dôležité, aby boli nematódy dodávané v spojení so špecifickými baktériami, pretože baktérie sú dôležité nielen pre rast nematód (tak in vitro, ako in vivo), ale tiež pre ich schopnosť usmrcovať slimáky. Nematódy si nesú pripojené baktérie pri vstupe do slimáka, čo umožňuje rýchle zabývanie sa a rýchlu reprodukciu nematód, ktorá vedie k smrti slimáka.
Ako príklady vhodných bakteriálnych kmeňov je možné uviesť Moraxella phenylpyruvica kmeň 48 a Pseudomonas fluorescens kmeň 141, vzorky ktorých boli uložené v súlade s Budapeštianskou dohodou v národnej zbierke priemyslových a morských baktérií (National Collection of Industrial an Marine Bacteria, 23 St. Machar Drive, Aberdeen, AB2 IRY, Veľká Británia) pod prírastkovými číslami NCIMB 40508 a NCIMB 40509 dňa 9. júna 1992. Kmeň Pseudomonas fluorescens 141 je gram negatívny, oxidáza pozitívna, kataláza pozitívna baktéria, ktorá je nemotilná a má negatívny výsledok pri skúške O/F (Hugh and Leifson) pri aeróbnom alebo anaeróbnom štiepení glukózy. Kmeň Moraxella phenylpyruvica 48 jc gram negatívna, oxidáza pozitívna, kataláza pozitívna baktéria, ktorá je nemotilná a má negatívny výsledok pri skúške O/F (Hugh and Laifson). Biochemické profily oboch týchto kmeňov na štandardných substrátoch (skúšobný prúžok API ZÓNE) sú uvedené ďalej.
| Reakcia Moraxella | Pseudomonas |
| phenylpyruvica 48 | fluorescens 141 |
| NOj-NOj + | - |
| NOrN2 * | - |
| indol | |
| kyselina z glukózy | - |
| arginín dihydroláza | + |
| ureáza | - |
| hydrolýza eskulínu | - |
| hydrolýza želatíny | + |
| β-galaktozidáza | - |
| Asimilácia | |
| glukózy | + |
| arabinózy | + |
| maniózy | + |
| N-acetylgluko- | + |
zamínu maltózy glukonátu -+ kaprátu -+ adipátu malátu -+ citrátu ++ fenylacetátu * = neskúšané
Užitočné varianty kmeňa M. phenylpyruvica 48 a kmeňa P. fluorescens 141 je možné získať opakovaným prenášaním čistých kultúr týchto kmeňov do subkultúr. Varianty je možné tiež získať reizoláciou baktérií z nematód Phasmorhabditis, ktoré boli predtým pestované v spojení s ktorýmkoľvek z týchto kmeňov alebo reizoláciou baktérií zo slimákov, infikovaných nematódami. Takéto varianty môžu mať zakotvené genotypické alebo fenotypické zmeny v dôsledku vplyvu okolia alebo selektívneho tlaku. Užitočné deriváty kmeňa M. phenylpyruvica 48 a kmeňa P. fluorescens 141 je možné skonštruovať zavedením DNA z iného organizmu, ktorá kóduje požadované atribúty. Spôsoby zavádzania cudzej DNA do baktérií sú odborníkom v tomto odbore dobre známe a zahŕňajú také techniky, ako je prenos plazmidu, transdukcia a transfekcia. Užitočné mutanty kmeňa M. phenylpyruvica 48 a kmeňa P. fluorescens 141 je možné získať mutagenézou s použitím metód, ktoré sú odborníkom v tomto odbore dobre známe, ako sú chemické techniky (napríklad s použitím nitrosuguanidínu), fyzikálne techniky (napríklad s použitím ultrafialového svetla) a genetické metódy (napríklad mutagenéza transpozónu). Takéto varianty, deriváty a mutanty týchto kmeňov je možné meniť, pokiaľ sa týka takých vlastností, ako je rýchlosť rastu alebo schopnosť rásť na určitých zdrojoch potravy, ale zachovávajú si hlavne vlastnosti, ktoré sú dôležité pre tento vynález, t. j. schopnosť podporovať rast nematód Phasmarhabditis a indukovať týmto nematódam patogenicitu proti mäkkýšom.
Na použitie na ničenie poľnohospodárskych škodcov sa nematódy zbierajú z fermentorov odstreďovaním, filtráciou alebo odstránením zložiek vyčerpaného média a buď sa priamo spracujú na pesticídny prostriedok alebo sa skladajú vo forme chladených prevzdušňovaných vodných suspenzií pred tým, ako sa spracujú na tento prostriedok. Na poľnohospodárske použitie je možné nematódy spracovať na vodné suspenzie na tuhých nosičoch, ako je aktívne uhlie, íl, rašelina, vermikulit alebo polyéter-polyuretánová huba alebo je možné ich zapuzdriť do gélov, napríklad do alginátového alebo polyakrylamidového gélu. Mimoriadne vhodným prostriedkom je prostriedok, obsahujúci vysušené alebo sčasti vysušené nematódy. Nematódový prostriedok sa môže aplikovať pri ničení škodcov vo forme vodnej suspenzie, ktorá sa z neho vyrobí a ktorá sa aplikuje na ošetrovanú plochu napríklad postrekom, zavodnením alebo morením.
Vynález je bližšie objasnený v nasledujúcich príkladoch realizácie. Tieto príklady majú výhradne ilustratívny charakter a rozsah vynálezu v žiadnom ohľade neobmedzujú.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Spôsob izolácie nematód Phasmarhabditis
Živé nematódy získané zo slimákov pozbieraných na poli použitím pascí s drvenými otrubami ako návnadou, sa umiestni na ľadvinové agarové médium, vyrobené zmiešaním 10 % homogenizovaných bravčových ľadvín, 3,5 % kukuričného oleja, 2 % agaru a 84,5 % vody (% hmotnos ti), ktoré bolo sterilizované v autokláve a naliate do Petriho misiek. Toto médium povzbudzuje rast baktérií spojených s nematódami. Nematóda sa týmito baktériami živia a na miskách rastú a reprodukujú sa.
Príklad 2
Izolácia baktérií spojených s nematódami alebo so slimákmi infikovanými nematódami
Baktérie spojené s nematódami alebo so slimákmi infikovanými nematódami sa môžu izolovať ktoiýmkoľvek z nasledujúcich spôsobov:
i Izolácia baktérií z nematód
Nematódy sa povrchovo sterilizujú ponorením do roztoku etylmerkuritiosalicylátu sodného (Thimerosal) s koncentráciou 1 g/1 na 1 hodinu a potom sa prenesú do čerstvého roztoku Thimerosalu na ďalšie 3 hodiny. Baktérie je možné uvoľniť z nematód nasledujúcimi 2 sterilnými mikrobiologickými technikami:
a) Jednotlivé larvy nematód sa prenesú do kvapky sterilného roztoku chloridu sodného, ktorá je umiestnená na mikroskopickom sklíčku, ktoré bolo sterilizované plameňom. Nematódy sa potom rozrežú na niekoľkých miestach po dĺžke svojho tela. Kvapka roztoku kuchynskej soli obsahujúca mŕtve telá nematód sa potom pomocou sterilnej Pasteurovej pipety prenesie do Petriho misky so živnou agarovou pôdou s priemerom 9 cm a rozprestrie sa na povrchu pomocou stierky, ktorá bola sterilizovaná v plameni alkoholového horáku.
b) Veľké množstvo povrchovo sterilizovaných nematód sa suspenduje v 1 ml sterilného Ringerovho roztoku a vzniknutá suspenzia sa prenesie do 5 ml homogenizátora tkanív z teflonu. Suspenzia nematód sa rozdrví a potom sa prenesie do 9 ml sterilnej živnej pôdy. Živná pôda sa intenzívne pretrepáva a urobí sa sériové riadenia. 0,1 ml alikvotnej vzorky každej zriedenej pôdy sa umiestni na misku so živým agarom, rozprestrie sa po povrchu pomocou sklenej stierky a inkubuje sa. Po 49 hodinách inkubácie pri 25 °C je možné na základe morfológie kolónií vybrať rôzne bakteriálne izoláty a preniesť ich do subkultúr štandardnými mikrobiologickými postupmi.
ii Izolácia baktérií z xénických kultúr s kúskami peny
Z prosperujúcich xénických kultúr sa pomocou chemických klieští, ktoré boli sterilizované v plameni alkoholového horáka odoberú kúsky peny, obsahujúcej nematódy a baktérie. Každý kúsok sa umiestni do skúmavky obsahujúcej 10 ml sterilnej živnej pôdy a obsah skúmavky sa premieša. Urobí sa sériové riedenie vzniknutej suspenzie baktérií a nematód a 0,1 ml alikvotnej vzorky rôzne zriedenej pôdy sa rozprestrie na miske so živným agarom, potom sa inkubuje.
iii Izolácia baktérií zo živých slimákov infikovaných metódami
P. hermaphrodita/p. neopapillosa infikuje plášťovú oblasť slimáka, kde dochádza tiež k jeho reprodukcii. Práve z tejto oblasti je možné izolovať baktérie. Plášť sa najprv utrie suchým chumáčikom vaty, aby sa v čo najväčšej miere odstránil sliz. Potom sa povrch plášťa utrie 70 % (objemovo) etanolom, z dôvodu povrchovej sterilizácie plášťa. V plameni sterilizovanou ihlou sa prepichne plášť a potom sa kvapky tekutiny na konci ihly priamo prenesú na misky so živným agarom, kde sa rozprestrú pomocou sklenenej stierky a inkubujú.
iv Izolácia baktérií z mŕtvych slimákov
Tkanivové stery z mŕtveho tela slimáka, ktorý uhynul po infekcii nematódami a je nematódami pokrytý, sa suspendujú v živnej pôde s použitím bakteriologického očka.
Urobí sa sériové riadenie vzniknutej suspenzie a 0,1 ml a4 likvotnej vzorky sa rozprestrie na miskách so živným agarom a inkubuje sa.
Príklad 3
Spôsob selekcie baktérií, ktoré podporujú rast nematód
Predtým, ako je možné urobiť screening rôznych baktérii, čo sa týka ich schopnosti podporovať rast nematód, je najprv nutné získať nematódy, ktoré by boli bez baktérií. Samičí reprodukčný trakt nematód je obvykle sterilný (Poinar a Hnsen, Helminthological Abstracts, Šerie B, (1986) zv. 55, č. 3, str. 61 až 81), a preto sú juvenily (Jl) ihneď po vyliahnutí sterilné. Jednotlivé gravidné dospelé nematódy, vybraté z kultúr nematód alebo slimákov sa prenesú na sterilné hodinové sklíčko obsahujúce roztok Thimerosalu koncentrácie 0,2 g/1, kde sa ponechajú cez noc pri 10 °C. V priebehu tohto času sa z vajíčok dospelých vyliahnu a uvoľnia juvenily (Jl). Nasledujúci deň sa juvenily prenesú pipetou do centrifugačných skúmaviek naplnených 10 ml Ringerovho roztoku so štvrtinovou silou, ktorý obsahuje 500 U/ml penicilínu G a streptomycinusulfátu. Juvenílie sa v tomto roztoku ponechajú ďalších 24 hodín pri 10 °C. Potom sa skoncentrujú jemným odstredením (50 x g, počas 10 minút), zoberú sa z dna skúmavky a resuspendujú v čerstvom sterilnom Ringerovom roztoku so štvrtinovou koncentráciou a znovu sa odstredia. Resuspendovanie a centrifugácia sa ešte jedenkrát opakuje, aby sa odstránili všetky stopy antibiotika. Potom sa larvy umiestnia na sterilné hodinové sklíčko. Potom je možné s nematódami manipulovať jednotlivo pomocou mikropipety, ktorá je zhotovená natiahnutím kvapkacej pipety v Bunsenovom horáku, až do šírky približne 0,1 mm. Nematódové kultúry sa pestujú na ľadvinovom agare (opísanom v príklade 1) v Petriho miskách s priemerom 3 cm. Dávka jedného bakteriologického očka 18 hodín starej kultúry živnej pôdy so skúšanými baktériami sa nanesie čiarovito cez polovicu 30 mm misiek s ľadvinovým agarom. Na kraj Petriho misky v tej jej polovici, ktorá neobsahuje baktérie sa umiestni 10 xénických juvenilných nematód, získaných spôsobom opísaným v príklade 8 tak, aby nematódy museli prekonať aspoň 15 mm vzdialenosť cez povrch bez baktérií predtým, ako sa dostanú ku skúšanej baktérii. Misky sa inkubujú pri 15 °C. Akákoľvek baktéria, ktorá je prítomná na nematódach a ktorá nebola usmrtená v priebehu axenizačného procesu, vytvára viditeľné kolónie v tejto polovici misky a takéto misky je možné potom vyradiť. Po 1 týždni sa misky majúce bakteriálnu kontamináciu v „čistej“ polovici zlikvidujú. Po 2 týždňoch sa môže spočítať počet nematód prítomných na miske priamym mikroskopickým pozorovaním; viečko Petriho misky sa odstráni a nahradí iným viečkom, na ktorom bola vopred vyznačená počítacia mriežka. Po 3 týždňoch je možné nematódy spočítať znova tak, že sa nematódy spláchnu z agaru do známeho objemu vody a nematódy sa vo výslednej suspenzii spočítajú v Petrovej jednomilimetrovej počítacej komôrke.
Deväť rôznych druhov baktérií, ktoré boli izolované opísanými spôsobmi, sa podrobia skúšaniu na schopnosť podporovať rast nematód. Výsledky sú zhrnuté v tabuľke 1.
Tabuľka 1
Počet nematód Phasmarhabditis v Petriho miske po 2 a 3 týždňoch rastu v monoxénickej kultúre s rôznymi baktériami. Na štatistickú analýzu sú údaje prevedené na logaritmy
| Baktérie 17 | 0 | 0,04 | 0 | 0,00 |
| Baktérie 34 | 1 | 0,13 | 890 | 1,00 |
| Baktérie 48 | 60 | 1,70 | 54060 | 4,73 |
| Baktérie 54 | 80 | 1,53 | 25950 | 4,39 |
| Baktérie 77 | 1160 | 3,06 | 86340 | 4,93 |
| Baktérie 83 | 520 | 2,46 | 67000 | 4,78 |
| Baktérie 141 | 690 | 2,77 | 75220 | 4,85 |
| Baktérie 156 | 250 | 2,26 | 83630 | 4,89 |
Smerodajná odchýlka na porovnávanie logaritmov počtu nematód je 0,204, 128 D. F.
Po 3 týždňoch vznikli vysoko signifikantné (P < 0,001) rozdiely v schopnosti baktérií podporovať rast nematód.
Príklad 4
Spôsob masovej kultivácie nematód Phasmarhabditis v kultúre s kúskami peny
Nematódy je možné masovo pestovať na kúskoch polyéter-polyuretánovej peny s použitím podobných techník, aké boli vyvinuté na masovú produkciu nematód parazitujúcich ha hmyze (Bedding, v Nematologica (191), zv. 27, str. 109 až 114 a Annals od Applied Biology (1984), zv. 104, str. 117 až 120). Toto médium sa skladá zo 65 % bravčovej ľadvinky, 15 % hovädzieho vypečeného tuku a 25 % vody (% hmotnostné). Ľadvina sa rozseká na malé kúsky, pridá sa voda a zmes sa rozdrví v miešači Waring. Hovädzí vypečený tuk sa roztaví v širokej panvici nad kruhovým plynovým horákom, potom sa k nemu pridá ľadvinový homogenát, ktorý sa dôkladne zmieša s tukom a varí tak dlho, dokiaľ nezhnedne. Zmes sa potom vráti do miešača Waring, kde sa znova rozomelie. Vzniknutá zmes sa potom zmieša s kúskami peny, pričom k jednému hmotnostnému dielu kúska peny sa pridá 12 dielov hmotnostných média. Vzniknuté médium sa môže uložiť do kónických baniek alebo autoklávovacích vriec, opísaných Beddingom (1984). Kultúry s kúskami peny sa súčasne zaočkujú tak nematódami, ako i baktériami. V každom vreci sa v homej časti prereže štrbina a pridá sa 75 ml cez noc narastenej baktérie. Kultúra baktérií môže byť v podobe zmesovej mikrobiálnej kultúry, získanej spôsobom opísaným v príklad 2, alebo vo forme čistej kultúry bakteriálneho kmeňa, vybraného na základe schopnosti podporovať rast nematód, ako je to opísané v príklade 3. Pridajú sa nematódy na agare z Petriho misiek alebo na kúskoch peny z predchádzajúcich vrecových kultúr. Vrecové kultúry sa inkubujú pri 15 °C počas 3 týždňov. Po tomto čase je možné vnútri vriec vidieť mnoho infekčných juvenilov, ktoré vo vreciach zanechajú upotrebené médium. Nematódy sa zbierajú z kúskov peny modifikovaným postupom extrakcie v nálevke, ktorý sa podobá postupu používanému na izoláciu nematód zo zemných vzoriek. Medené sito na zeminu s priemerom 17,5 cm filtrom na mlieko a umiestni sa na 50 cm misku pod kvetináč. Kúsky peny z vriec sa umiestnia v sitách do hĺbky približne 2 cm a potom sa kvetináčové misky naplnia vodou tak, že sa vodná hladina práve dotýka spodnej vrstvy kúskov peny. Sitá sa potom v tomto stave uchovávajú cez noc. V priebehu tohto času živé nematódy preplávajú filtrom na mlieko a zhromaždia sa vo vode pod filtrom. Suspenzia nematód sa prečistí od vypotrebovaného média a baktérií niekoľkonásobnou výmenou vody a potom sa nematódy skladajú v prevzdušňovanej vode pri 10 °C až do času použitia.
Príklad 5
Kvapalná kultúra monoxenických nematód Phasmarhabditis
Axenizované nematódy sa pestujú na pevnom médiu s obsahom ľadviny s príslušnými baktériami. Po troch týždňoch sa nematódy prenesú do kvapalnej kultúry.
| Baktérie | Po 2 týždňoch | Po 3 týždňoch | ||
| Počet | Log | Počet | Log | |
| Axenické | 2 | 0,41 | 0 | 0,00 |
| Baktérie Al | 170 | 2,18 | 18090 | 4,22 |
Nematódy sa pestujú v kultúre umiestnenej v trepacej fľaši pri nasledujúcich podmienkach:
Médium: 10 % ľadvín, 1 % kvasinkového extraktu, 3,5 % kukuričného oleja
Nádoba: 250 ml kónická banka s 50 ml média Teplota: 15 °C
Frekvencia otáčania trepačky: 200 min1 2 * *.
Nádoby sa zaočkujú 1 ml druhu baktérie pestovaného v živnej pôde. Po 24 hodinách sa nematódy spláchnu do baniek pomocou sterilnej vodovodnej vody a nasleduje trojtýždenná inkubácia.
Nematódy sa 2 x opláchnu sterilnou vodou a spočítajú. Potom sa tieto nematódy použijú ako inokulum pre experimentálne kultúry. Nematódy sa pridajú do baniek vopred inokulovaných baktériami v množstve 3000 nematód na 1 ml obsahu banky.
Nematódy sa pestujú v spojení so 4 rôznymi druhmi baktérií. V priebehu kultivácie sa v rôznom čase zisťujú počty nematód. Dauer larvae (štádium, ktoré je rovnako známe pod označením infekčné juvenílie), sa považujú za nematódy so zachovaným druhým stupňom cuticula.
Nematódy sa spočítajú po 20 dňoch inkubácie a zistené výsledky sú uvedené v tabuľke 2.
Tabuľka 2
Kvapalná kultúra monoxénických nematód
Baktérie Počet Stredný počet nematód v 1 ml replikácii Dauer Larvae Iné štádiá
| P. fluorescens | 6 | 1220 | 110 |
| S. proteomaculans | 6 | 11400 | 7400 |
| P. rettgeri | 6 | 99900 | 189000 |
| M. phenylpyruvica | 3 | 72000 | 223000 |
Odborníci v tomto odbore môžu na základe podmienok opísaných v tomto príklade ľahko vyriešiť masovú produkciu nematód v kvapalnej kultúre vo veľkopriestorových fermentoroch.
Príklad 6
Spôsob selekcie baktérií udeľujúcim patogenitu proti slimákom
Nematódy pestované v monoxénickej kultúre s 2 druhmi baktérií, Providencia rettgeri a Moraxella phenylpyruvica (pozri príklad 5) sa skúšajú na patogenitu proti slimáčikovi poľnému Deroceras reticulatum. Škatuľa z plastu (rozmery 135 x 75 x 50 mm) sa naplní 440 g na vzduchu sušených zemných agregátov s priemerom 12,5 až 25 mm, ktoré boli získané spracovaním na sitách. Zemné agregáty z každej škatule sa vyberú a namočia 80 ml vody.
Používajú sa jednak neošetrené škatule, do ktorých sa nepridajú nematódy a škatule, do ktorých sa pridajú nematódy v 5 rôznych dávkach 15000, 23000, 35000, 55000 a 75000 nematód na škatuľu z plastu. Pre všetkých 6 pokusov s oboma várkami monoxénických nematód sa použijú vždy škatule (dvojnásobná replikácia).
Nematódy sa spočítajú a ich príslušný počet sa suspenduje v 50 ml vodovodnej vody. Agregáty sa znovu umiestnia do škatule a suspenzia nematód sa rovnomerne rozdelí na povrch agregátov, vrstva po vrstve. Medzi prostredné vrstvy v každej škatuli sa umiestni 10 jedincov D. reticulatum. Na agregátoch v každej škatuli sa rovnomerne rozdelí 50 ml vodovodnej vody bez toho, aby sa pridávali ďalšie nematódy tak, aby výsledný obsah vlhkosti v každej škatuli bol približne 30 % hmotnostných.
Slimáky sa pestujú v pôde v priebehu infekčnej periódy v dĺžke 5 dní pri 10 °C a potom sa vyberú a prenesú do Petriho misiek, kde sa pestujú jednotlivo a kŕmia kotúčikmi, odobratými z listov čínskej kapusty. Po ďalších 9 dňoch pri 10 °C (po 14 dňoch od začiatočnej expozície nematódam) sa zaznamenaný počet mŕtvych a živých slimákov. Údaje mortality sa opravia vzhľadom na mortalitu pozadia, ktorá je zrejmá z neošetrených škatúľ. Opravené údaje mortality sa vynesú do grafu, ako závislosť od dávky nematód, t. j. nematód, pestovaných v monoxénickej kultúre s oboma baktériami.
Pri tomto experimente sú nematódy pestované c M. phenylpyruvica a Pr. rettgeri patogénne proti D. reticulatum. Túto metódu je možné použiť na selekciu iných kmeňov baktérii, napríklad kmeňa U. fluorescenc 141, ktorý udeľuje patogenitu proti slimákom.
Príklad 7
Spracovanie nematód Phasmarhabditis na pesticídny prostriedok
Monoxénické nematódy Phasmarhabditis, ktoré boli pestované v spojení s kmeňom 48 M. phenylpyruvica (pozri príklad 5) sa zoberú odstredenim a premytím vodou pri použití opakovaného cyklu usadzovania a resuspendácie v čerstvej vode, ktorý sa robí tak dlho, pokiaľ sa nematódy nezbavia reziduálneho rastového média. Premyté nematódy sa skoncentrujú odstreďovaním na vodnú pastu tvorenú nematódami, v ktorej je obsiahnuté 0,1 x 106 až 2,0 x 106 nematód v jednom grame. Nematódová pasta sa zmieša s ílom na báze montomorillonitu vápenatého, so vznikom vo vode dispergovateľnej práškovitej zmesi, obsahujúcej 0,05 x 106 až 1,8 x 106 nematód v jednom grame (hmotnosť za vlhka).
Príklad 8
Schopnosť nematód Phasmarhabditis, produkovaných v kultúre z kúskov peny, usmrcovať rôzne druhy slimákov
Nematódy Phasmarhabditis, ktoré boli pestované na zmesovej bakteriálnej Πότε spôsobmi opísanými v príklade 4 boli skúšané v biologickom pokuse proti šiestim škodlivým druhom slimákov. Týmito druhmi sú Derocereas recitulatum, D. caruanae, Arion ater, A. intermedius, A. distinetus a Tandonia (Milax) sowerbyi. Slimáky boli nazbierané do pascí s návnadou z rozomletých otrúb vo výskumnej stanici Long Ashton Research Station v novembri 1990. Všetky slimáky boli dospelé, s výnimkou A. ater, čo boli juvenilné formy (stredná hmotnosť 770 mg). Nematódy boli pestované v xénických vrecových kultúrach s kúskami peny spôsobom opísaným v príklade 4. Do plastových škatúľ s rozmermi 135 x 75 x 50 mm bolo umiestnených 440 g na vzduchu sušených zemných hrubozmných agregátov s priemerom 12,5 až 25 mm, ktoré boli získané spracovaním na sitách. Do každej zo škatúľ ošetrovaných nematódami, bolo pridaných približne 1,9 x 105 infekčných lariev Phasmarhabditis, suspendovaných v 130 ml vodovodnej vody. Do neošetrených škatúľ bolo pridaných 130 ml vodovodnej vody bez nematód. Do každej zo škatúľ bolo vložených 10 slimákov, s výnimkou väčších druhov T. sowerbyi a A. ater, ktorých bolo pridaných vždy 5. 17 slimákov A. distinetus bolo ošetrených nematódami a 18 slimákov bolo chovaných bez ošetrenia ako kontrolné zvieratá. U všetkých ostatných druhov bolo vždy 20 slimákov ošetrených a 20 slimákov bolo ponechaných bez ošetrenia ako kontrolné zvieratá. Slimáky boli ponechané v pôde na päťdennú infekčnú periódu, po ktorej boli škatule so zeminou rozobraté a bol zaznamenaný počet mŕtvych slimákov. Slimáky, ktoré prežili, boli prenesené do 9 cm Petriho misiek obložených zvnútra filtračným papierom, kde boli uchovávané jednotlivo a kŕmené listovými kotúčikmi čínskej kapusty. Škatule so zeminou a Petriho misky boli po celý čas trvania biologického pokusu uchovávané pri 10 °C. Po čet mŕtvych slimákov bol zaznamenaný ešte 2 x v trojdenných intervaloch. Mortalita jednotlivých druhov slimákov v ošetrených a neošetrených škatuliach v každom momente, keď bolo robené zaznamenávanie, bola porovnávaná pomocou chĺ2 testu. Výsledky sú uvedené v tabuľke 3.
Tabuľka 3
Percentuálna mortalita rôznych druhov slimákov po 5, 8 a 11 dňoch od ošetrenia nematódami alebo bez ošetrenia
| Druh slimáka | Po 5 dňoch | Po 8 dňoch | Po 11 dňoch | |||
| ošetrený | neošetrený | ošetrený | neošetrený | ošetrený | neošetrený | |
| Deroceras reticulatum | 100 | 10 | 100 | 25 | 100 | 40 |
| Deroceras caruanae | 70 | 10 | 100 | 15 | 100 | 20 |
| Aion ater | 5 | 0 | 40 | 0 | 100 | 0 |
| Arion intermedius | 100 | 40 | 10 | 60 | 100 | 70 |
| Arion distinetus | 6 | 6 | 88 | 11 | 100 | 28 |
| Tandonia sowerbyi | 20 | 15 | 80 | 15 | 100 | 25 |
Po päťdennej infekčnej perióde boli rozdiely v mortalite medzi slimákmi ošetrenými nematódami a neošetrenými slimákmi vysoko signifikantné (P < 0,001), v prípade D. reticulatum, D. caruanae a A. intermedius. Rozdiely v mortalite medzi ošetrenými a neošetrenými slimákmi pri ostatných troch druhoch neboli v tomto štádiu signifikantné. Po ôsmich dňoch boli rozdiely v mortalite medzi ošetrenými a neošetrenými slimákmi signifikantné pri všetkých druhoch (P < 0,001) pre D. reticulatum. D. caruanae, T. soweberyi a A. distinetus a P < 0,01 pre A. ater a A. intermedius. Do jedenásteho dňa všetky slimáky, na ktorých boli aplikované nematódy, uhynuli. Rozdiely v mortalite medzi ošetrenými a neošetrenými slimákmi boli signifikantné pre všetky druhy (P < 0,01) pre A. intermedius a P < 0,01, pre všetky ostatné druhy). Rozdiel v prípade A. intermedius nebol taký veľký, pretože mnoho neošetrených slimákov uhynulo.
Z týchto výsledkov je zrejmé, že nematódy Phasmarhabditis sú schopné usmrcovať všetky skúšané druhy slimákov.
Príklad 9
Schopnosť nematód Phasmarhabditis pestovaných v kultúrach s kúskami peny znižovať poškodenie rastlín, spôsobené slimáčikom poľným Deroceras reticulatum za poľných podmienok
Bol urobený pokus na minipolíčkach, ktorého účelom bolo porovnať poškodenie semenáčikov čínskej kapusty slimákmi na neošetrených políčkach, políčkach ošetrených peletami methiocarbu (táto látka je považovaná za najlepšiu dostupnú chemikáliu potláčajúcu slimáky) a políčkach ošetrených jedinou vysokou dávkou nematód, produkovaných v kultúre s kúskami peny, na zmesovej bakteriálnej flóre, spôsobom opísaným v príklade 3. Pri pokuse sa používa séria 40 mikropolíčok obsahujúcich hlinitú zem na podloží z hrubého štrku. Rozmery políčok boli 70 x 70 a ich hĺbka bola 30 cm. Políčka boli od seba oddelené drevenými alebo betónovými obrubníkmi, na ktorých bol upevnený 10 cm vysoký plot z medeného drôteného pletiva s priemerom 0,8 mm, ktorý predstavoval zábranu pre pohyb slimáka medzi jednotlivými políčkami.
V rozmedzí marec až jún 1989 bolo 36 týchto políčok osídlených slimákmi. Do zostávajúcich štyroch políčok neboli pridané žiadne slimáky a tieto políčka slúžili ako mierka rezidentnej slimačej populácie. Do každého z osídlených políčok bolo vložených 5 na poli zobraných dospelých D. reticulatum. Tieto slimáky boli držané aspoň dva týždne v karanténnych škatuliach, aby sa zaručilo, že nenesú žiadne parazity. Na každé políčko bolo v priebehu trojmesačnej periódy vložených 34 v laboratóriu chovaných novovyliahnutých jedincov D. reticulatum, takže na začiatku pokusu boli na políčkach prítomné slimáky v mnohých štádiách vývoja.
Experiment bol koncipovaný tak, že sa robilo 9 replikách 4 randomizovaných blokov, pričom každý blok zahŕňal 2 neošetrené políčka, 1 políčko ošetrené nematódami a 1 políčko ošetrené peletami methiocarbu.
V 900 ml vodovodnej vody bolo suspendovaných 1,05 x 106 nematód a vzniknutá suspenzia bola použitá na zálievku políčok pomocou kropiacej kanvičky. Ďalších 100 ml vodovodnej vody bolo použité na vypláchnutie kanvičky a i táto voda bola naliata na políčka. Na neošetrené políčka a na políčka ošetrené methiocarbom bol tiež naliaty 1 1 vodovodnej vody. Pelety methiocarbu boli pridané v odporučenej dávke na poľné ošetrenie (5,5 kg/ha 0,275 g /políčko). Pelety boli navážené a ručne rovnomerne rozdelené po políčkach. V priebehu celého pokusu boli políčka zavlažované zvrchu pomocou zavlažovacieho potrubia tak, aby sa zaistili priaznivé podmienky na aktivitu slimákov.
Na začiatku pokusu bolo na každé políčko vysadených 9 semenáčikov (štvorec 3x3) čínskej kapusty, pestovaných v skleníku. Rastliny boli kontrolované 2 x týždenne a odhadom (s presnosťou 5 %) bolo zisťované poškodenie rastlín slimákmi.
Dva týždne po vysadení boli semenáčiky na niektorých neošetrených políčkach úplne zničené, takže zvyšky starých semenáčikov boli zo všetkých týchto políčok odstránené a boli vysadené nové. To sa opakovalo po ďalších 2 týždňoch. Po ďalších 2 týždňoch bol pokus ukončený (celkový čas trvania pokusu bol 6 týždňov). Poškodenie semenáčikov v priebehu pokusu bolo zaznamenávané 2 x týždenne. Plôtiky z medeného drôteného pletiva medzi políčkami sa v jednom z blokov (blok č. 9) uvoľnili po prvých 4 týždňoch, čo umožnilo slimákom pohyb medzi týmito políčkami. Tieto políčka boli preto ignorované a zaznamenané výsledky po 5 a 6 týždňoch sa vzťahujú len na 8 blokov.
Na konci každého pokusu boli z každého políčka zo zostávajúcich 8 blokov odobraté 2 vzorky zeminy (25 x 25 x 10 cm), pričom 1 vzorka bolo odobratá z prostriedku a 1 z juhovýchodného rohu každého políčka. Vzorky boli postupne zavodňované počas 9 dní v extrakčnej jednotke pre slimáky LARS (Glen & Wiltshire, Proceedings 1986 British Crop Protection conference (1986), zv. 1, str. 139 až 144), a z povrchu boli každý deň odstraňované slimáky.
Rozsah poškodenia semenáčikov slimákmi pri každom ošetrení v priebehu pokusu je zrejmý z obr. 1.
Analýza variancie po uhlovej transformácii, s cieľom stabilizácie variancie ukazuje, že tak pelety methiocarbu, ako i nematódy signifíkantne (P <0,01) znížili rozsah škody spôsobené semenáčikom. Pri prvom odčítaní (4 týždne po ošetrení) bola zistená signifíkantne (P < 0,05) rozsiahlejšia škoda na políčkach ošetrených nematódami, v porovnaní s políčkami ošetrenými methiocarbom, ale keď semenáčiky rastom prekonali začiatočné poškodenie, rozdiel medzi políčkami ošetrenými nematódami a políčkami ošetrenými methiocarbom sa znížil. Koncom prvého týždňa mali polička ošetrené nematódami menšie poškodenie ako políčka ošetrené methiocarbom, ale tento rozdiel nebol signifikantný. Po 17 dňoch (prvé vyšetrenie druhej dávky semenáčikov) mali políčka ošetrené nematódami signifíkantne (P < 0,05) nižšie poškodenie, v porovnaní s políčkami ošet7 renými methiocarbom a tento stav (P <0,01) zostal zachovaný až do konca pokusu.
V zemných vzorkách boli nájdené 3 druhy slimákov, Deroceras reticulatum, Deroceras caruanee a Boetgerilla pallens. Na všetkých políčkach boli nájdené len 2 slimáky D. caruanae, ale 39 slimákov B. pallens, v porovnaní s 55 slimákmi D. reticulatum. Slimáky B. pallens boli na polička pravdepodobne zavlečené niekedy predtým a medzi tým sa reprodukovali a políčka osídlili. Strava, ktorej tieto slimáky dávajú prednosť, nie je známa, ale pri laboratórnych skúškach nepoškodzovali listy čínskej kapusty v priebehu trojtýždennej expozície, pri ktorej im nebol ponúknutý žiadny alternatívny zdroj potravy. Je teda nepravdepodobné, že by tieto slimáky spôsobili poškodenie semenáčikov pri opisovanom pokuse.
V zemných vzorkách zo 4 políčok, na ktoré neboli pridané žiadne slimáky D. reticulatum, neboli ani žiadne tieto slimáky nájdené. To naznačuje, že na rozdiel od B. pallens neboli pred začiatkom pokusu na políčkach žiadne slimáky D. reticulatum alebo ich tam bolo iba málo.
Celkové počty slimákov a hodnoty biomasy extrahovanej zo vzoriek s rôznym ošetrením boli prevedené na druhú odmocninu z dôvodu štatistickej analýzy. Tieto výsledky sú zrejmé z obr. 2.
Signifikantne menej slimákov bolo extrahovaných z políčok ošetrených nematódami ako z neošetrených políčok (P <0,01) pre všetky druhy slimákov a pre samotný druh D. reticulatum) a tiež bolo extrahovaných menej slimákov z políčok ošetrených methiocarbom ako z neošetrených políčok (P 0,05 pre všetky druhy slimákov a pre samotný druh D. reticulatum). I napriek tomu, že bolo extrahovaných menej slimákov z políčok ošetrených nematódami ako z políčok ošetrených methiocarbom, tento rozdiel nebol signifikantný. Z políčok ošetrených metódami nebol extrahovaný žiadny slimák D. reticulatum, čo ukazuje, že tento druh bol na políčkach takmer vyhubený. Počty slimákov B. pallens neboli podstatne ovplyvnené nematódami, ani methiocarbom, napriek tomu, že na políčkach ošetrených nematódami bolo zistených menej slimákov B. pallens ako na políčkach, ktoré ošetrené neboli.
Príklad 10
Schopnosť monoxénických nematód Phasmarhabditis usmrcovať rôzne druhy škodcov zo skupiny mäkkýšov
Monoxénické nematódy Phasmarhabditis, ktoré boli pestované v spojení s kmeňom 48 M. phenylpyruvica spôsobom opísaným v príklade 5, boli použité pri biologickom pokuse proti rôznym druhom škodcov zo skupiny mäkkýšov vrátane Monacha cantiana, spôsobom opísaným v príklade 8. Výsledky sú uvedené v tabuľke 4.
Tabuľka 4
Percentuálna mortalita rôznych druhov škodlivých mäkkýšov po ošetrení monoxénickými nematódami alebo bez ošetrenia
Druh Trvanie biológie- Po ošetrení Bez ošetrenia mäkkýša kého pokusu (dni)
| Deroceras | |||
| reticulatum | 11 | 100 | 15 |
| Deroceras | |||
| caruanae | 11 | 100 | 10 |
| Monacha cantiana | 5 | 100 | 0 |
| Arion intermedius | 5 | 100 | 0 |
| Arion distinetus | 11 | 100 | 0 |
| Tandonia sowerbyi | 11 | 70 | 5 |
Rozdiely v mortalite medzi ošetrenými a neošetrenými mäkkýšmi boli signifikantné (P < 0,001) pri všetkých skúšaných druhoch, čo ukazuje, že všetky skúšané druhy škodcov zo skupiny mäkkýšov boli susceptibilné proti nematódam Phasmarhabditis sp., monoxenizovaným pomocou kmeňa 48 M. phenylpyruvica. Spektrum aktivity monoxénických nematód nebolo zmenené v porovnaní s xénickými nematódami.
Monoxénické nematódy Phasmarhabditis boli pestované v spojení s M. phenylpyruvica alebo P. rettgery spôsobom opísaným v príklade 5 a boli použité v rôznej dávke pri biologickom pokuse proti slimákom druhu D. reticulatum spôsobom, opísaným v príklad 8. Výsledky sú zhrnuté na obr. 3. Oba typy monoxénických nematód boli účinné proti D. reticulatum.
Príklad 11
Schopnosť monoxénických nematód Phasmarhabditis potlačovať poškodenie rastlín spôsobené slimáčikom poľným Deroceras reticulatum za poľných podmienok
Bol urobený poľný pokus s cieľom porovnať škody na ozimnej pšenici (odroda Mercia) spôsobenej slimákmi, na neošetrených políčkach, na poličkách ošetrených peletami methiocarbu a políčkach ošetrených rôznymi dávkami nematód. Monoxénické nematódy boli vypestované v spojení s kmeňom 48 M. phenylpyruvica, spôsobom opísaným v príklade 5 a spôsobom opísaným v príklade 7 spracované s použitím ílu na vo vode dispergovateľný prášok, obsahujúci 0,36 x 106 nematód v grame výsledného prostriedku (vlhká hmotnosť). Nematódy boli aplikované ihneď po osiatí políčok vo forme vodného postreku s objemom ekvivalentným 1100 1/ha. Methiocarbové pelety boli aplikované ručne v odporúčanej poľnej dávke 5,5 kg/ha.
Na monitorovanie slimačej populácie na pokusných políčkach boli použité povrchové pasce a zemné vzorky. Na políčkach bolo nájdených mnoho rôznych druhov slimákov vrátane Deroceras reticulatum, Arion silvatieus, Arion subfuscus, Arion ater, Tandonia soweberyi a Milax gagates, ale D. reticulatum jasne prevažoval.
Šesť týždňov po siatí boli políčka skontrolované na vzídené semenáčiky. Táto kontrola predstavuje odhad letálneho poškodenia slimákmi, (t. j. zníženie počtu vzídených rastlín). Zároveň bol urobený odhad sub-letálneho poškodenia slimákmi, (t. j. ožerú rastlín slimákmi), na základe vizuálneho odhadu na náhodne zvolených rastlinách. Stredný počet vzídených pšeničných rastlín, vztiahnutý na 0,5 m dĺžky brázdy pri rôznych ošetreniach je uvedený v tabuľke 5.
Tabuľka 5
Stredný počet vzídených rastlín pšenice, vztiahnutý na dĺžku brázdy pri rôznom ošetrení pri poľnom pokuse (hodnotenie robené 6 týždňov po siatí)
Ošetrenie Stredný počet vzídených rastlín
| bez ošetrenia | 12,93 | |
| dávka nematód | 1 x 108/ha | 12,78 |
| dávka nematód | 3 x 108/ha | 13,95 |
| dávka nematód | 1 x 109/ha | 13,25 |
| dávka nematód | 3 y 109/ha | 14,88 |
| dávka nematód | 1 x 10'°/ha | 16,50 |
| methiocarb | 14,57 |
smerodajná odchýlka = 1,314 (399 d. f.)
So zvyšujúcou sa dávkou nematód jasne stúpa počet vzídených rastlín, čo je dôkaz, že ošetrenie nematódami znížilo letálne poškodenie slimákmi.
Údaje vzťahujúce sa k strednej percentuálnej ploche listu, poškodenej slimákmi, bola pred analýzou prevedená na uhly. Výsledky sú uvedené v tabuľke 6.
Tabuľka 6
Stredná uhlová percentuálna plocha listov poškodená slimákmi, vztiahnutá na rastlinu pri rôznych ošetreniach pri poľnom pokuse (hodnotenie sa robí 6 týždňov po siatí)
| Ošetrenie | Stredná uhlová percentuálna plocha listov poškodená na jednej rastline | |
| bez ošetrenia | 31,82 | |
| dávka nematód | 1 x 10s/ha | 29,15 |
| dávka nematód | 3 x 10s/ha | 28,87 |
| dávka nematód | 1 x 105/ha | 22,11 |
| dávka nematód | 3 x 105/ha | 18,63 |
| dávka nematód | 1 x 1010/ha | 16,49 |
| methiocarb | 25,17 |
smerodajná odchýlka = 3,395, (24. f.)
Boli zistené podstatné rozdiely v ploche listu poškodenej slimákmi medzi jednotlivými ošetreniami (P < 0,001), pričom rastliny ošetrené troma najvyššími dávkami nematód vykazovali signifikantne (P < 0,01) nižšie poškodenie slimákmi ako rastliny z neošetrených políčok. Rastliny z políčok ošetrených najvyššou dávkou nematód mali podstatne (P < 0,05) nižšie poškodenie slimákmi, v porovnaní s rastlinami z políčok ošetrených methiocarbom. Je teda zrejmé, že nematódy sú schopné poskytnúť dobrú úroveň potlačenia sub-letálnych škôd spôsobených slimákmi.
Príklad 12
Schopnosť monoxcnických nematód Phasmarhabditis usmrcovať vodné slimáky Lymnaea stagnalis
Monoxénické nematódy boli napestované v spojení s kmeňom 48 M. phenylpyruvica, spôsobom opísaným v príklade 5 a spôsobom opísaným v príklade 7, spracované s použitím ílu na vo vode dispergovateľný prášok, obsahujúci 0,36 x 106 nematód v grame výsledného prostriedku (vlhká hmotnosť). 10 exemplárov vodného slimáka Lymnaea stagnalis bolo pridané do každej z piatich čistých nádrží na ryby, ktoré boli z polovice naplnené rybničnou vodou, obsahujúcou niektoré vodné rastliny ako zdroj potravy pre slimáky. Nádrže boli prevdzušňované malým vzduchovým čerpadlom a udržované pri teplote 15 °C.
Do každej zo štyroch nádrží bolo pridaných približne 6 x 106 nematód vo forme vo vode dispergovateľného prostriedku. Do piatej nádrže, ktorá slúžila ako kontrolná, neboli pridané žiadne nematódy. Po 3 dňoch inkubácie bola priemerná hodnota mortality slimákov v nádržiach ošetrených nematódami 45 % a po 6 dňoch vzrástla na 100 %. Po 6 dňoch inkubácie nebola zaznamenaná žiadna mortalita v neošetrenej kontrolnej nádrži.
Claims (28)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Použitie nematód rodu Phasmarhabditis na hubenie poľnohospodárskych a záhradníckych škodcov a škodcov ohrozujúcich zdravie človeka a zvierat.
- 2. Použitie podľa nároku 1, kde nematódy sú zvolené zo súboru zahŕňajúceho druhy P. neopapillosa a P. hermaphrodita.
- 3. Použitie podľa nároku 1 alebo 2 v spojení s vhodnou baktériou podporujúcou rast.
- 4. Použitie podľa nároku 1 alebo 2 v spojení s vhodným spoločenstvom baktérií podporujúcich rast.
- 5. Použitie podľa nároku 1, 2, 3 alebo 4 na hubenie škodcov zo skupiny mäkkýšov v poľnohospodárstve a záhradníctve.
- 6. Použitie podľa nároku 5 na hubenie škodlivých slimákov z čeľade Limacidae, predovšetkým Deroceras reticulatum a Deroceras caruanae.
- 7. Použitie podľa nároku 5 na hubenie škodlivých slimákov z čeľade Arionidae, predovšetkým Arion ater, Arion intermedius a Arion distinetus.
- 8. Použitie podľa nároku 5 na hubenie škodlivých slimákov z čeľade Milacidae, predovšetkým Tandonia sowerbyi.
- 9. Použitie podľa nároku 5 na hubenie škodlivých slimákov z čeľade Helicidae, predovšetkým Monacha cantiana.
- 10. Použitie podľa nároku 1, 2, 3 alebo 4 na potláčanie mäkkýšovitých škodcov ohrozujúcich zdravie človeka a zvierat.
- 11. Použitie podľa nároku 10 na hubenie slimačích škodcov rodu Lymnea.
- 12. Použitie podľa ktoréhokoľvek z prechádzajúcich nárokov, pri ktorom sa nematódy aplikujú v podobe dauer larvae.
- 13. Použitie podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, pri ktorom sa nematódy aplikujú v spojení s baktériami podporujúcimi rast týchto nematód.
- 14. Kmeň Moraxella phenylpyruvica 48, ktorého vzorka bola uložená pod prírastkovým číslom NCIMB 40508, alebo jeho variant, derivát alebo mutant, majúci schopnosť podporovať rast a indukovať patogenitu nematód Phasmarhabditis voči mäkkýšom.
- 15. Kmeň Pseudomonas fluorescens 141, ktorého vzorka bola uložená pod prírastkovým číslom NCIMB 40509, alebo jeho variant, derivát alebo mutant, majúci schopnosť podporovať rast a indukovať patogenitu nematód Phasmarhabditis voči mäkkýšom.
- 16. Prostriedok na hubenie škodcov zo skupiny mäkkýšov v poľnohospodárstve a záhradníctve a mäkkýšovitých škodcov ohrozujúcich zdravie človeka a zvierat, vyznačujúci sa tým, že obsahuje druh nematódy rodu Phasmarhabditis, v spojení s vhodnou baktériou alebo bakteriálnou komunitou, podporujúcou rast týchto nematód a vhodný nosič alebo zapuzdrovacie činidlo.
- 17. Prostriedok podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že nematódy sú v ňom prítomné vo forme dauer larvae.
- 18. Prostriedok podľa nároku 15, vyznačujúci sa tým, že obsahuje druh nematód P. neopapillosa alebo P. hermaphrodita.
- 19. Prostriedok podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že baktérie podporujúce rast sú zvolené zo súboru zahŕňajúceho druhy:Pseudomonas fluorescensProvidencia rettgeriSerratia proteomaculansAeromonas salmonicidaMoraxella phenylpyruvicaBacillus cereusFlavobacterium odoratumFlavobacterium brevi.
- 20. Prostriedok poľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že ako baktériu podporujúcu rast obsahuje kmeň Moraxella phenylpyruvica NCIMB 40508 alebo Pseudomonas fluorescens NCIMB 40509.
- 21. Prostriedok podľa nároku 16, vyznačujúci sa tým, že ako nosič obsahuje íl.
- 22. Vo vode dispergovateľný práškovitý prostriedok podľa niektorého z nárokov 16až21, vyznačujúci sa tým, že obsahuje íl tvorený montomorillonitom vápenatým, vodu a nematódy, pričom koncentrácia nematód je v rozmedzí od 0,1 x 106 do 2,0 x 106, prednostne od 0,3 x 106 do 0,8 x 106 na gram vlhkej hmotnosti.
- 23. Spôsob produkcie nematód na hubenie mäkkýšov, vyznačujúci sa tým, žcsa nematódy rodu Phasmarhabditis pestujú v kvapalnom médiu, pričom rastové médium sa preinokuluje aspoň jednou baktériou podporujúcou ich rast a indukujúcou patogenitu nematód a potom sa nematódy zbierajú vo forme dauer larvae.
- 24. Spôsob podľa nároku 23, vyznačujúci sa tým, že sa baktérie podporujúce rast volia zo súboru zahŕňajúceho druhy.Pseudomonas fluorescensProvidencia rettgeriSerratia proteomaculansAeromonas salmononicidaMoraxella phenylpyruvicaBacillus cereusFlavobacíerium odoratumFla vobaclerium brevi.
- 25. Spôsob podľa nároku 24, vyznačujúci sa tým, že baktériou podporujúcou rast je buď Moraxella phenylpyruvica alebo Pseudomonas fluorescens.
- 26. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 23 až 25, vyznačujúci sa tým, že rastové médium obsahuje zdroj vitamínov a minerálov, zdroj triglyceridov a zdroj proteínu.
- 27. Spôsob podľa ktoréhokoľvek z nárokov 23 až 26, vyznačujúci sa tým, že rastové médium obsahuje ľadvinu, kvasinkový extrakt a kukuričný olej.
- 28. Spôsob hubenia mäkkýšov, vyznačujúci sa tým, že sa na plochu, ktorá je mäkkýšmi zamorená, aplikujú moluscocidné nematódy rodu Phasmarhabditis, v spojení s baktériami podporujúcimi ich rast.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| GB919115011A GB9115011D0 (en) | 1991-07-11 | 1991-07-11 | Biological control of slugs |
| PCT/GB1992/001248 WO1993000816A1 (en) | 1991-07-11 | 1992-07-09 | Biological control of molluscs |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK2294A3 SK2294A3 (en) | 1994-09-07 |
| SK279691B6 true SK279691B6 (sk) | 1999-02-11 |
Family
ID=10698220
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK22-94A SK279691B6 (sk) | 1991-07-11 | 1992-07-09 | Použitie nematód phasmorhabditis na hubenie mäkkýš |
Country Status (21)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US5527525A (sk) |
| EP (1) | EP0598746B1 (sk) |
| JP (1) | JP2927960B2 (sk) |
| AT (1) | ATE142845T1 (sk) |
| AU (1) | AU659199B2 (sk) |
| CA (1) | CA2113173C (sk) |
| CZ (1) | CZ285283B6 (sk) |
| DE (1) | DE69213947T2 (sk) |
| DK (1) | DK0598746T3 (sk) |
| ES (1) | ES2094362T3 (sk) |
| GB (1) | GB9115011D0 (sk) |
| GR (1) | GR3021953T3 (sk) |
| HU (1) | HU219857B (sk) |
| IE (1) | IE922218A1 (sk) |
| IL (1) | IL102451A (sk) |
| NZ (1) | NZ243533A (sk) |
| PL (1) | PL168777B1 (sk) |
| PT (1) | PT100669B (sk) |
| SK (1) | SK279691B6 (sk) |
| TR (1) | TR26297A (sk) |
| WO (1) | WO1993000816A1 (sk) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1994019940A1 (en) * | 1993-03-04 | 1994-09-15 | Commonwealth Scientific And Industrial Research Organisation | Method for packaging entomopathogenic nematodes for storage and transport |
| US5965149A (en) * | 1993-08-13 | 1999-10-12 | Thermo Trilogy Corporation | Granular formulation of biological entities with improved storage stability |
| GB9400271D0 (en) * | 1994-01-07 | 1994-03-02 | Agricultural Genetics Co | Novel feeds for use in aquaculture |
| CA2450241A1 (en) | 2001-06-15 | 2002-12-27 | Grain Processing Corporation | Biodegradable sorbents |
| US6691454B1 (en) * | 2002-08-09 | 2004-02-17 | John E. Conroy | System for repelling garden slugs |
| US7566461B2 (en) | 2004-06-18 | 2009-07-28 | Sci Protek, Inc. | Methods for controlling molluscs |
| US7846463B2 (en) | 2005-05-11 | 2010-12-07 | Grain Processing Corporation | Pest control composition and method |
| NL1033726C2 (nl) * | 2007-04-20 | 2008-10-21 | Cooeperatie Horticoop U A | Gewasbeschermingssysteem. |
| US8313828B2 (en) | 2008-08-20 | 2012-11-20 | Johnson & Johnson Vision Care, Inc. | Ophthalmic lens precursor and lens |
| US8317505B2 (en) | 2007-08-21 | 2012-11-27 | Johnson & Johnson Vision Care, Inc. | Apparatus for formation of an ophthalmic lens precursor and lens |
| US9417464B2 (en) | 2008-08-20 | 2016-08-16 | Johnson & Johnson Vision Care, Inc. | Method and apparatus of forming a translating multifocal contact lens having a lower-lid contact surface |
| GB2463501A (en) * | 2008-09-16 | 2010-03-17 | Anthony Barker | The application of the slug parasitic nematode Phasmarhabditis hermaphrodita through rain-gun irrigation systems for the control of slugs |
| US9414590B2 (en) | 2009-03-16 | 2016-08-16 | Marrone Bio Innovations, Inc. | Chemical and biological agents for the control of molluscs |
| PT2601840T (pt) | 2009-04-20 | 2017-04-03 | Marrone Bio Innovations Inc | Agentes químicos e biológicos para controlo de moluscos |
| DE102009053902B4 (de) * | 2009-11-20 | 2013-11-07 | E-Nema Gesellschaft für Biotechnologie und biologischen Pflanzenschutz mbH | Vorrichtung zur Bekämpfung von Käfern mit entomopathogenen Nematoden |
| GB201008877D0 (en) | 2010-05-27 | 2010-07-14 | Becker Underwood Ltd | Biolgical control of molluscs |
| AR083811A1 (es) * | 2010-11-13 | 2013-03-27 | Marrone Bio Innovations Inc | Agentes para el control de limnoperna sp. |
| EP2820140B1 (en) | 2012-02-28 | 2018-01-10 | Marrone Bio Innovations, Inc. | Control of phytopathogenic microorganisms with pseudomonas sp. and substances and compositions derived therefrom |
| US8728754B1 (en) | 2013-01-23 | 2014-05-20 | Marrone Bio Innovations, Inc. | Use of proteins isolated from Pseudomonas to control molluscs |
| US9645412B2 (en) | 2014-11-05 | 2017-05-09 | Johnson & Johnson Vision Care Inc. | Customized lens device and method |
| WO2016191430A1 (en) * | 2015-05-28 | 2016-12-01 | Marrone Bio Innovations, Inc. | Use of proteins to control molluscs |
| US10772333B2 (en) | 2015-10-02 | 2020-09-15 | The Regents Of The University Of California | Mollusk-killing biopesticide |
| US10359643B2 (en) | 2015-12-18 | 2019-07-23 | Johnson & Johnson Vision Care, Inc. | Methods for incorporating lens features and lenses having such features |
| US11364696B2 (en) | 2020-09-18 | 2022-06-21 | Johnson & Johnson Vision Care, Inc | Apparatus for forming an ophthalmic lens |
| CN113475529B (zh) * | 2021-06-15 | 2022-04-19 | 四川省农业科学院植物保护研究所 | 一种防治花卉蛞蝓的线虫制剂及其制备方法和应用 |
Family Cites Families (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1991000012A1 (en) * | 1989-06-28 | 1991-01-10 | Imperial Chemical Industries Plc | Microbes for controlling pests |
-
1991
- 1991-07-11 GB GB919115011A patent/GB9115011D0/en active Pending
-
1992
- 1992-07-07 IE IE221892A patent/IE922218A1/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-09 US US08/178,294 patent/US5527525A/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-09 JP JP5502109A patent/JP2927960B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1992-07-09 IL IL102451A patent/IL102451A/en not_active IP Right Cessation
- 1992-07-09 EP EP92915023A patent/EP0598746B1/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-09 SK SK22-94A patent/SK279691B6/sk not_active IP Right Cessation
- 1992-07-09 CZ CS9410A patent/CZ285283B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1992-07-09 AT AT92915023T patent/ATE142845T1/de active
- 1992-07-09 HU HU9400060A patent/HU219857B/hu not_active IP Right Cessation
- 1992-07-09 DE DE69213947T patent/DE69213947T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-09 DK DK92915023.3T patent/DK0598746T3/da active
- 1992-07-09 CA CA002113173A patent/CA2113173C/en not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-09 PT PT100669A patent/PT100669B/pt not_active IP Right Cessation
- 1992-07-09 AU AU22556/92A patent/AU659199B2/en not_active Ceased
- 1992-07-09 ES ES92915023T patent/ES2094362T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1992-07-09 PL PL92302033A patent/PL168777B1/pl unknown
- 1992-07-09 WO PCT/GB1992/001248 patent/WO1993000816A1/en active IP Right Grant
- 1992-07-13 NZ NZ243533A patent/NZ243533A/xx not_active IP Right Cessation
- 1992-07-13 TR TR92/0643A patent/TR26297A/xx unknown
-
1996
- 1996-03-29 US US08/625,018 patent/US5849284A/en not_active Expired - Lifetime
- 1996-12-10 GR GR960403370T patent/GR3021953T3/el unknown
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| EP0598746A1 (en) | 1994-06-01 |
| SK2294A3 (en) | 1994-09-07 |
| CA2113173A1 (en) | 1993-01-21 |
| NZ243533A (en) | 1993-10-26 |
| CZ285283B6 (cs) | 1999-06-16 |
| CA2113173C (en) | 1999-12-21 |
| ATE142845T1 (de) | 1996-10-15 |
| DK0598746T3 (sk) | 1997-03-24 |
| DE69213947T2 (de) | 1997-02-20 |
| HU219857B (hu) | 2001-08-28 |
| ES2094362T3 (es) | 1997-01-16 |
| WO1993000816A1 (en) | 1993-01-21 |
| TR26297A (tr) | 1995-03-15 |
| EP0598746B1 (en) | 1996-09-18 |
| PT100669B (pt) | 1999-06-30 |
| US5527525A (en) | 1996-06-18 |
| GR3021953T3 (en) | 1997-03-31 |
| PL168777B1 (pl) | 1996-04-30 |
| HU9400060D0 (en) | 1994-05-30 |
| JP2927960B2 (ja) | 1999-07-28 |
| CZ1094A3 (en) | 1994-07-13 |
| AU2255692A (en) | 1993-02-11 |
| PT100669A (pt) | 1994-01-31 |
| GB9115011D0 (en) | 1991-08-28 |
| US5849284A (en) | 1998-12-15 |
| DE69213947D1 (de) | 1996-10-24 |
| IE922218A1 (en) | 1993-01-13 |
| IL102451A (en) | 1998-01-04 |
| AU659199B2 (en) | 1995-05-11 |
| IL102451A0 (en) | 1993-01-14 |
| HUT69629A (en) | 1995-09-28 |
| JPH06509091A (ja) | 1994-10-13 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| US5849284A (en) | Biological control of molluscs with dauer larvae of Phasmarhabditis nematodes | |
| Wilson et al. | The rhabditid nematode Phasmarhabditis hermaphrodita as a potential biological control agent for slugs | |
| JPH05505591A (ja) | 殺線虫菌剤 | |
| JP2949218B2 (ja) | 菌食性線虫アフェレンクス・アベネの大量生産法 | |
| AU636623B2 (en) | Acaricidal compositions and process for preparing same | |
| EP0774906B1 (en) | Nematicidic agent and method for the bio-control of nematodes | |
| Wilson | A nematode parasite for biological control of slugs | |
| JPH11266769A (ja) | 菌食性線虫アフェレンクス・アベネによる土壌病害虫の予防法 | |
| JPH11266740A (ja) | 菌食性線虫アフェレンクス・アベネの長期保存法 | |
| LEATHERJACKET | in the Department | |
| Lam | Effect of some nematodes and microorganisms on the leatherjacket, Tipula paludosa Meig. larvae, and their potential use as biological control agents.- | |
| Bonner | Ecology and physiology of the aphid pathogenic fungus erynia neoaphidis | |
| Taylor | Bioassay systems for evaluating effectiveness of pesticides and biological control agents against Bradysia impatiens (Johan.)(Diptera: Sciaridae) larvae with emphasis on age, sex, and generation effects | |
| Mramba | Ecological and public health aspects of stable flies (Diptera: muscidae): microbial interactions | |
| Barker et al. | A laboratory rearing procedure for a sunflower stem weevil, Cylindrocopturus adspersus LeConte (Coleoptera: Curculionidae) | |
| Summerlin et al. | Laboratory observations on the life cycle of Hister nomas (Coleoptera: Histeridae) | |
| GAUR et al. | DIVISION OF ANIMAL GENETICS IVRI, IZATNAGAR 243 122 (UP) | |
| Poinar | Techniques for studying entomogenous nematodes | |
| Sloaa | Maittt of^ l) ilosl09^ p | |
| Kariuki | The laboratory and field efficacy of Bacilus thuringiensis (Berliner) against tropical cereal stem borers (chilo partilis swinhoe) and Busseola fusca (fuller) and legume pod borer (Maruca testulalis)(Geyer) | |
| Williams | An artificial larval medium for colonized Culicoides guttipennis (coguillett)(Diptera: Ceratopogonidae) | |
| Diouf | Approaches to the Control of Ditylenchus Dipsaci (KHUN) Filipjev on Alfalfa (Medicago Sativa L.) |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| MM4A | Patent lapsed due to non-payment of maintenance fees |
Effective date: 20110709 |