SK14032000A3

SK14032000A3 - Derivát kyseliny barbiturovej a prípravok na prevenciu a liečbu ochorení kostí a chrupiek, ktorý ho obsahuje

Info

Publication number: SK14032000A3
Application number: SK1403-2000A
Authority: SK
Inventors: Kunikazu Sakai; Yusuke Satoh
Original assignee: Hoechst Marion Roussel
Priority date: 1998-03-27
Filing date: 1999-03-23
Publication date: 2001-03-12
Also published as: HUP0101505A2; YU57800A; NO20004798D0; BR9909139A; EP1064269A1; AU3726099A; NZ506616A; ZA200004473B; TR200002785T2; IL138433A0; US6498164B1; CA2324584A1; NO20004798L; WO1999050252A3; AU759249B2; WO1999050252A2; JPH11279157A; PL343433A1; KR20010042182A; EA200000992A1

Description

Derivát kyseliny barbiturovej a prípravok na prevenciu a liečbu ochorení kostí a chrupiek, ktorý ho obsahuje

I

Oblast techniky

Predkladaný vynález sa týka nového derivátu kyseliny barbiturovej a jeho použitia v spôsobe prevencie a liečby malígne j hyperkalcémie, osteolytických ochorení ako je Pagetova choroba kostí a osteoporóza, ochorení spojených s denaturáciou a nekrózou chrupky, ako je osteoartritída, nekróza hlavy femuru a kĺbový reumatizmus vyskytujúci sa v kolennom, ramennom a bedrovom kĺbe.

Doterajší stav techniky

Spoločnosť v Japonsku postupne starne, a preto sa ochorenia spojené s resorpciou kosti, ako je osteoporóza, stávajú veíkým sociálnym problémom. Ochorenia spojené s resorpciou kosti sú ochorenia kosí spôsobené abnormálne zvýšenou resorpciou kosti, príkladom je malígna hyperkalcémia vyvolaná lokálnou resorpciou kostí pri myelome a lymfome, Pagetovej chorobe kostí a osteoporóza spôsobená veía faktormi, napríklad starnutím a menopauzou. I keď sa v súčasnosti v liečbe používajú ženské hormóny, kalcitonin, aktivovaný vitamín D3, parathormon, bifosfonáty a ipriflavon apod., majú tieto prípravky určité nedostatky, takže zostávajú iba symptomatickou terapiou. Na druhej strane, osteoartritída, nekróza hlavy femuru a kĺbový reumatizmus sú choroby, pri ktorých sa objavuje poškodenie chrupky a kosti vyvolané denaturáciou a nekrózou kĺbovej chrupky a kosti pod chrupkou, ktoré je spôsobené rôznymi faktormi, ako sú mechanický stres, starnutie a zápal. Poškodenie kosti do značnej miery znižuje kvalitu života vďaka deformácii a bolestiam v kĺboch. V podstate neexistuje žiadny prípravok, ktorý inhibuje alebo účinne napravuje poškodenie chrupky pri týchto chorobách.

Deriváty kyseliny barbiturovej sú skupinou zlúčenín, ktorá je používaná ako liečivá, polnohospodárske chemikálie a na vela ďalších účelov, a je známych vela derivátov.

Napríklad existuje protinádorový liek (pozri WO9116315), fotosenzitívne látky pre elektronické fotografie (pozri prerokúvanú japonskú patentovú prihlášku č. 179361/91 a 111852/91), antihelmintikum (pozri EP 192180), insekticídy (EP 455300,

DE 3903404 a GB 1339748), herbicídy (US 4797147 a prerokúvaná japonská patentová prihláška č. 154275/75) a baktericíd (EP 517660).

Podstata vynálezu

Pôvodcovia predkladaného vynálezu najskôr objasnili štruktúru a silné inhibičné pôsobenie radu zlúčenín, ktorých sa predkladaný vynález týka, na resorpciu kosti, ktoré nebolo doposial známe.

Pôvodcovia predkladaného vynálezu skôr objavili látky, ktoré vykazujú silné inhibičné pôsobenie na resorpciu kosti, medzi derivátmi polyhydroxyfenolu (japonská patentová prihláška č. 137991/97). Ako výsledok ďalšieho výskumu a analýzy vzťahu štruktúra-aktivita týchto zlúčenín, objavili pôvodcovia vynálezu silnú aktivitu nového derivátu kyseliny barbiturovej a nakoniec doplnili predkladaný vynález.

Účelom predkladaného vynálezu je preto poskytnúť nový a použiteľný derivát kyseliny barbiturovej, jeho soľ a solvát, a spôsob prevencie a liečby rôznych chorôb postihujúcich kosti a chrupky použitím týchto zlúčenín.

Predmetom vynálezu je derivát kyseliny barbiturovej predstavovaný nasledujúcim všeobecným vzorcom (I), jeho sol alebo jeho solvát:

kde každý z R alebo R¹ nezávisle predstavujú vodíkový atóm, substituovanú alebo nesubstituovanú alkylovú skupinu alebo alkenylovú skupinu s jedným až 15 atómami uhlíka, substituovanú alebo nesubstituovanú arylmetylovú skupinu a substituovanú alebo nesubstituovanú arylovú skupinu, a R² predstavuje substituovanú alebo nesubstituovanú alkylovú skupinu alebo alkenylovú skupinu s 1 až 15 atómami uhlíka, substituovanú alebo nesubstituovanú arylmetylovú skupinu a substituovanú alebo nesubstituovanú arylovú skupinu.

Predkladaný vynález sa týka derivátu kyseliny barbiturovej s všeobecným vzorcom (I), jeho soli alebo jeho solvátu, obsahujúceho jednu alebo viac zlúčenín, a liečivého prípravku obsahujúceho nosič, ktorý je prijateiný, na výrobu liekov, výhodne liečivého prípravku, ktorý je preventívny a terapeutický prípravok pre choroby postihujúce kosti a chrupky.

Ďalej sa predkladaný vynález týka použitia derivátu kyseliny barbiturovej s všeobecným vzorcom (I), jeho soli alebo jeho solvátu, obsahujúceho jednu alebo viac zlúčenín na výrobu liečivého prípravku na prevenciu a terapiu chorôb postihujúcich kosti a chrupky.

Ďalej sa predkladaný vynález týka prevencie a terapie chorôb postihujúcich kosti a chrupky podávaním účinného množ4 stva derivátu kyseliny barbiturovej s všeobecným vzorcom (I), jeho soli alebo jeho solvátu, obsahujúceho jednu alebo viac zlúčenín na prevenciu a terapiu chorôb postihujúcich kosti a chrupky.

V zlúčenine s všeobecným vzorcom (I) podlá predkladaného vynálezu sú alkylové skupiny s rovne prebiehajúcim reťazcom alebo rozvetvené alkylové skupiny s 1 až 15 atómami uhlíka, výhodne 2 až 10, výhodnejšie 4 až 10, a alkenylové skupiny sú s rovne prebiehajúcim reťazcom alebo rozvetvené nenasýtené uhlovodíkové skupiny s 2 až 15 atómami uhlíka, výhodne 3 až 10, výhodnejšie 4 až 10, výhodne nenasýtené uhlovodíkové skupiny s jedným alebo viacerými uhlíkami - uhlíkové dvojné väzby

V zlúčenine s všeobecným vzorcom (I) podlá predkladaného vynálezu arylové skupiny sú monocyklické, polycyklické alebo arylové skupiny s kondenzovaným kruhom s 6 až 30 atómami uhlíka, výhodne 6 až 20 atómami uhlíka, výhodnejšie 6 až 10 atómami uhlíka, arylové skupiny podlá predkladaného vynálezu sú monocyklické, polycyklické alebo heterocyklické aromatické skupiny s kondenzovaným kruhom s aspoň jedným alebo viacerými atómami dusíka, atómami kyslíka alebo atómami síry v aromatickom kruhu, pričom velkost jedného kruhu je 5 až 20 členov, výhodne 5 až 10 členov, výhodnejšie 5 až 7 členov a môže byť kondenzovaná s kruhom skladajúcim sa zo saturovaných alebo nesaturovaných uhľovodíkových skupín.

V zlúčenine s všeobecným vzorcom (I) podlá predkladaného vynálezu sú ako príklad arylmetylových skupín uvedené metylové skupiny vytvorené substitúciou uvedených arylových skupín.

V uvedenom všeobecnom vzorci (I) podlá predkladaného vynálezu môžu byt alkylové skupiny, alkenylové skupiny arylmetylové skupiny alebo arylové skupiny substituované substi5 tučnou skupinou, ktorá neinhibuje aktivitu pre liečebné účely podlá predkladaného vynálezu.

I

Zlúčenina s všeobecným vzorcom (I) podlá predkladaného vynálezu môže byt chránená pomocou ochrannej skupiny umožňujúcej vytvorenie aktívnej zložky v živom organizmu tak, aby sa v živom organizmu prejavila jej fyziologická aktivita.

Substitúcia skupín uvedených alkylových skupín, alkenylových skupín, aryImetylových skupín alebo arylových skupín v uvedenom všeobecnom vzorci (I) podlá predkladaného vynálezu môže byt tvorená substitúciou týchto skupín navzájom, keď je vzájomná substitúcia týchto skupín možná. Príkladom sú arylové skupiny substituované alkylovou skupinou, arylmetylové skupiny substituované alkylovou skupinou, alkylové skupiny substituované arylovou skupinou a alkenylové skupiny substituované arylovou skupinou.

Príkladmi ďalších substitučných skupín sú hydroxylová skupina, aminoskupina, alkoxyskupina majúca uvedené alkylové skupiny, alkytioskupina, mono- alebo dialkylaminoskupina, halogénové atómy ako je chlór, bróm a fluór, alkyléndioxyskup'iny ako metyléndioxyskupina a 2,2-dimetylmetyléndioxyskupina, kyanoskupina a nitroskupina.

Príkladmi výhodných substitučných skupín sú nižšie alkylové skupiny, ako je metylová skupina, etylová skupina, npropylová skupina, izopropylová skupina, n-butylová skupina, a t-butylová skupina, arylové skupiny ako je fenylová skupina a naftylová skupina, nižšie alkoxyskupiny ako je metoxyskupina, etoxyskupina, a n-propoxyskupina, dvojité nižšie alkylaminoskupiny ako je dimetylaminoskupina, dietylaminoskupina a dipropylaminoskupina, halogénové atómy ako je jód, bróm, chlór a fluór, alkyléndioxyskupiny ako je metyléndioxyskupina,

2,2-dimetylmetyléndioxyskupina, hydroxylová skupina, aminoskupina, kyanoskupina a nitroskupina apod.

Arylové skupiny v zlúčeninách s všeobecným vzorcom (I) podlá predkladaného vynálezu sú doložené príkladom fenylovej skupiny, naftylovej skupiny, antracenylovej skupiny, pyridylovej skupiny, chinolylovej skupiny, tienylovej skupiny a pyrolylovej skupiny.

Substitučné skupiny substituovaných alkylových skupín alebo substituovaných alkenylových skupín sú výhodne špecifikované atómovou skupinou vnesenou v náhradu vodíkového atómu pri príprave derivátu substitúciou atómu vodíka týchto skupín inou atómovou skupinou. Substitučné skupiny môžu byt hydroxylová skupina, alkoxyskupina, jód, bróm, chlór a fluór, aminoskupina, kyanoskupina a nitroskupina. Substitučné skupiny substituované arylmetylovej skupiny sú výhodne atómové skupiny vnesené v náhradu atómu vodíka, kedf derivát je pripravený substitúciou inej atómovej skupiny zvyšku, vytvoreného odstránením jedného atómu vodíka benzénového kruhu aromatickej zlúčeniny, za atóm vodíka zlúčeniny, pri ktorej bol atóm vodíka substituovaný metylovou skupinou. Príkladom týchto substitučných skupín je hydroxylová skupina, alkoxyskupina, jód, bróm, chlór, fluór, aminoskupina, kyanoskupina a nitroskupina. Substitučné skupiny pre substitúciu arylovej skupiny sú výhodne napríklad tie, v ktorých skupina zvyšku pripraveného odstránením jedného atómu vodíka z benzénového kruhu aromatickej zlúčeniny bola substituovaná hydroxylovou skupinou, alkoxyskupinou, jódom, brómom, chlórom, fluórom, aminoskupinou, kyanoskupinou a nitroskupinou apod.

Alkylové skupiny substituované alebo nesubstituovaná všeobecného vzorca (I) substitučných skupín R a R¹ derivátu kyseliny barbiturovej sú výhodne napríklad metylová skupina, etylová skupina, propylová skupina, butylová skupina, pentylová

Ί skupina, hexylová skupina, heptylová skupina, oktylová skupina, nonylová skupina, dekanylová skupina, undekanylová skupina, dodecylová skupina, tridecylová skupina, tetradecylová skupina alebo pentadecylová skupina, apod., okrem ich izomérov, tie, ktoré sú substituované alebo nesubstituované týmito skupinami uvedenými substitučnými skupinami sú výhodné.

Alkenylové skupiny substituované alebo nesubstituované všeobecného vzorce (I) substitučných skupín R a derivátu kyseliny barbiturovej sú výhodné napríklad etenylová skupina, propenylová skupina, butenylová skupina, pentenylová skupina, hexenylová skupina, heptenylová skupina, oktenylová skupina, nonenylová skupina, decenylová skupina, undecenylová skupina, dodecenylová skupina, tridecenylová skupina, tetradecenylová skupina alebo pentadecenylová skupina, apod., okrem ich izomérov, tie, ktoré sú substituované alebo nesubstituované týmito skupinami uvedenými substitučnými skupinami sú výhodné.

Arylmetylové skupiny substituované alebo nesubstituované všeobecného vzorce (1) substitučných skupín R a R¹ derivátu kyseliny barbiturovej sú výhodne napríklad fenylmetylová skupina, naftylmetylová skupina, antracénylmetylová skupina, pyridylmetylová skupina, chinolylmetylová skupina, tienylmetylová skupina alebo pyrolylmetylová skupina, apod., okrem toho tie, ktoré sú substituované v týchto skupinách uvedenými substitučnými skupinami a výhodne napríklad tie, ktoré sú substi tuované alebo nesubstituované v týchto skupinách uvedenými substitučnými skupinami ako hydroxylová skupina, alkoxyskupina, jód, bróm, chlór, fluór, aminoskupina, kyanoskupina, alebo nitroskupina, apod.

Alkylové skupiny substituované alebo nesubstituované vše obecného vzorca (I) substitučných skupín R² derivátu kyseliny barbiturovej sú výhodne napríklad metylová skupina, etylová skupina, propylová skupina, butylová skupina, pentylová skupina, hexylová skupina, heptylová skupina, oktylová skupina, nonylová skupina, dekanylová skupina, undekanylová skupina, dodecylová skupina, tridecylová skupina, tetradecylová skupina alebo pentadecylová skupina, apod., okrem ich izomérov, tie, ktoré sú substituované alebo nesubstituované v týchto skupinách uvedenými substitučnými skupinami sú výhodné.

Alkenylové skupiny substituované alebo nesubstituované všeobecného vzorca (I) substitučných skupín R² derivátu kyseliny barbiturovej sú výhodne napríklad etenylová skupina, propenylová skupina, butenylová skupina, pentenylová skupina, hexenylová skupina, heptenylová skupina, oktenylová skupina, nonenylová skupina, decenylová skupina, undecenylová skupina, dodecenylová skupina, tridecenylová skupina, tetradecenylová skupina alebo pentadecenylová skupina, apod., okrem ich izomérov, tie, ktoré sú substituované alebo nesubstituované v týchto skupinách uvedenými substitučnými skupinami sú výhodné.

Arylmetylové skupiny substituované alebo nesubstituované všeobecného vzorca (I) substitučných skupín R² derivátu kyseliny barbiturovej sú výhodne napríklad fenylmetylová skupina, nafťylmetylová skupina, antracénylmetylová skupina, pyridylmetylová skupina, chinolylmetylová skupina, tienylmetylová skupina alebo pyrolylmetylová skupina, apod., okrem toho tie, ktoré sú substituované v týchto skupinách uvedenými substitučnými skupinami a výhodne napríklad tie, ktoré sú substituované alebo nesubstituované v týchto skupinách uvedenými substitučnými skupinami ako hydroxylová skupina, alkoxyskupina, jód, bróm, chlór, fluór, aminoskupina, kyanoskupina, alebo nitroskupina, apod.

Arylové skupiny substituované alebo nesubstituované všeobecného vzorca (I) substitučných skupín R² derivátu kyseliny barbiturovej sú výhodne napríklad fenylová skupina, naftylová skupina, antracenylová skupina, pyridylová skupina, chinolylová skupina, tienylová skupina a pyrolylová skupina, apod., okrem toho sú výhodné tie, ktoré sú substituované alebo nesubstituované v týchto skupinách uvedenými substitučnými skupinami .

Nasledujú špecifické príklady výhodných zlúčenín pódia zlúčeniny s všeobecným vzorcom (I) pódia predkladaného vynálezu:

1.3- dibenzyl-5-(3-metyl-l-oxobutyl)barbiturová kyselina (zlúčenina č. 1)

1.3- dibenzyl-5-(fenylacetyl)barbiturová kyselina (zlúčenina č. 2)

1.3- dibenzyl-5-(2-tienylacetyl)barbiturová kyselina (zlúčenina č. 3)

1.3- bis (3-metylbutyl )-5-( 3-metyl-l-oxobutyl)barbiturová kyselina (zlúčenina č. 4) l-benzyl-3- (3-metylbutyl)-5- (3-metyl-l-oxobutyl) barbiturová kyselina l-benzyl-3- (3-metylbutyl) -5- (fenylacetyl)barbiturová kyselina l-benzyl-3-(3-metylbutyl)-5-(2-tienylacetyl)barbiturová kyselina

1,3-bis (3-metyl-2-butenyl )-5-( 3-metyl-l-oxybutyl) barbiturová kyselina

1,3-bis (3-metyl-2-butenyl) -5- (f enylacetyl) barbiturová kyselina

1,3-bis (3-metyl-2-butenyl) -5- (2-tienylacetyl) barbiturová kyselina l-benzyl-3- (3-metyl-2-butenyl) -5- (3-metyl-l-oxobutyl) barbiturová kyselina l-benzyl-3-(3-metyl-2-butenyl)-5-(fenylacetyl)barbiturová kyselina l-benzyl-3-(3-metyl-2-butenyl)-5-(2-tienylacetyl)barbiturová kyselina

1- (3-metyl-2-butenyl )-3-( 3-metylbutyl )-5-( 3-metyl-l-oxobutyl) barbiturová kyselina

1- (3-metyl-2-butenyl )-3-( 3-metylbutyl) -5 (f enylacetyl) barbiturová kyselina l-( 3-metyl-2-butenyl )-3-( 3-metylbutyl )-5-( 2-tienylacetyl)barbiturová kyselina.

Zlúčenina s všeobecným vzorcom (I) podľa predkladaného vynálezu môže byť syntetizovaná obvyklými metódami syntézy. Napríklad v reakcii opísanej nasledujúcou rovnicou, môže byť syntéza ľahko dosiahnutá kondenzačnou reakciou derivátu kyseliny barbiturovej znázornenej nasledujúcim vzorcom (II) a acylačným činidlom znázorneným nasledujúcim vzorcom (III) (pozri nasledujúcu rovnicu):

Ŕ' (III) P.' (») C)

Príkladmi použitých acylačných činidiel sú acylhalidy, anhydridy kyselín alebo karboxylové kyseliny, apod. Odborníkovi je dobre známe, že kondenzačné činidlá použité na tieto reakcie sú vyberané jednotlivo podľa použitej reakcie. Keď je acylačné činidlo (III) acylhalid alebo anhydrid kyseliny, je ako kondenzačné činidlo použitá báza bez nukleofilnej reakcie, výhodne terciárny amín. Príkladom sú aromatické amíny ako pyridín a chinolín, apod., terciárny amíny ako trietylamín, diizopropyletylamín, a N-metyl-pyrolidín, apod., a aralkylamíny ako Ν,Ν-dimetylanilín apod. V reakcii je použité rozpúšťadlo, ale jeho použitie nie je obmedzujúce, iba použiteľné pre anilín apod. V reakcii je použité rozpúšťadlo, avšak jeho použitie nie je obmedzujúce, ale použiteľné sú rozpúšťadlá, ktoré sú inaktívne ako pre acylačné činidlo, tak pre terciárny amín. V kombinácii s rozpúšťadlom sú niekedy použité ako kondenzačné činidlo pyridín a trietylamín, apod. (pozri J. Org. Chem., 45, 4606, 1980, EP 455300, prerokúvaná japonská patentová prihláška č. 102358/91 a prerokúvaná japonská patentová prihláška č. 111852/91).

Keď je acylačné činidlo (III) volná karboxylová kyselina, je ako kondenzačné činidlo použitý napríklad oxychlorid fosforečný (pozri GB 1339748).

Existuje niekoiko spôsobov prípravy derivátu kyseliny barbiturovej (II) na acyláciu v uvedenej reakčnej rovnici. Tieto metódy sú odborníkom lahko realizované. Napríklad výroba sa môže vykonávať pomocou rovnice predloženej ďalej (pozri nasledujúce vzorce):

Príkladom je kondenzácia derivátu močoviny (IV) a derivátu kyseliny malónovej (V) (Y a Z sú halogénové atómy ako je chlór alebo bróm, apod. alebo hydroxylová skupina, alebo tvoria esterovú skupinu spolu s karbonylovou skupinou) a kondenzácia derivátu karbodiimidu (VI) a kyseliny malónovej (V) (pozri EP 455300).

Derivát močoviny (IV) a derivát karbodiimidu (VI) apod., sú zlúčeniny všeobecne známe ako materiály a ich príprava bola detailne opísaná v nasledujúcich odkazoch (Sandler, S.

R., Káro, W., kapitola 6/močoviny, kapitola 9/karbodiimidy, Academic Press, 1986).

Inhibičná aktivita na resorpciu kosti derivátu kyseliny barbiturovej pripraveného podlá hore uvedenej metódy bola testovaná pomocou testu tvorby otvorov. Výsledkom bolo, že zlúčenina podía predkladaného vynálezu preukazovala vynikajúcu inhibíciu na resorpciu kosti v koncentrácii 1 x 10”⁵ M.

Tieto zlúčeniny majú teda silnú inhibičnú aktivitu na resorpciu kosti. Derivát kyseliny barbiturovej, jeho sol alebo jeho solváty, s všeobecným vzorcom (I) podlá predkladaného vynálezu, je použitelný ako účinná zložka liečiva na prevenciu a liečebné ošetrenie ochorenia kosti a chrupky. Predkladaný vynález poskytuje liečivý prípravok obsahujúci jednu alebo viac zlúčenín ako účinnú zložku, spôsob použitia prípravku na prevenciu a liečbu rôznych chorôb so vzťahom k inhibícii resorpcie kosti a použitie týchto zlúčenín na výrobu liečivého prípravku.

Predkladaný vynález sa týka liečivého prípravku obsahujúceho jednu alebo viac zlúčenín s všeobecným vzorcom (I), jej soli alebo jej solvátu, alebo látky takto chránené (napríklad prekurzor lieku, predliek sa v živom organizmu premení na aktívny liek), ktoré sú prijatelné na výrobu liečiv, ako účinné zložky. Liečivý prípravok podlá predkladaného vynálezu sa týka liečivého prípravku obsahujúceho rôzne nosiče, ktoré sú prijatelné pri výrobe liečiv. Liečivý prípravok podlá predkladaného vynálezu má aktivitu inhibujúcu resorpciu kosti a je použitelný ako preventívny alebo liečivý prípravok pri ochoreniach postihujúcich kosti a chrupky.

Choroby postihujúce kosti a chrupky podlá predkladaného vynálezu zahŕňajú choroby spojené s resorpciou kosti ako je malígna hyperkalcémia, Pagetova choroba kostí a osteoporóza, a ochorenia sprevádzané denaturáciou a nekrózou chrupky, ako je osteoartritída, nekróza hlavy femuru a kĺbový reumatizmus vyskytujúci sa v kolennom, ramennom a bedrovom kĺbe.

Dávka účinnej zložky podía predkladaného vynálezu na klinické podávanie sa všeobecne pohybuje v rozmedzí 0, 01 g až 2 g denne (približne 0,15 mg až 30 mg/kg/deň) pre dospelú osobu, dávka zlúčeniny podía predkladaného vynálezu je výhodne 0,1 až 2 g denne (približne 1, 5 mg až 30 mg/kg/deň) pre dospelú osobu a výhodnejšie 0,1 až 1 g denne (približne 1,5 mg až 15 mg/kg/deň) pre dospelú osobu, čo je premenlivé podía spôsobu podávania, štádia choroby a stavu pacienta.

Možný spôsob podávania liečivého prípravku podía predkladaného vynálezu zahŕňa intravenózne, intramuskulárne, perorálne a rektálne podávanie, pri intravenóznom podávaní sa môže použiť intravenózna infúzia okrem obvyklej intravenóznej injekcie.

Príkladom spôsobu výroby liečivého prípravku obsahujúceho zlúčeninu podía predkladaného vynálezu je obvyklý spôsob používajúci konvenčný excipient a konvenčné aditivum.

Injekčný prípravok môže byt napríklad práškový prípravok pre injekcie. V tomto prípade je liek pripravený pridaním jedného alebo viacerých príslušných vo vode rozpustných excipientov, ako je manit, sacharóza, laktóza, maltóza, glukóza, fruktóza apod. do vody, aby sa rozpustili a rozdelili do fíaštičiek alebo ampúl, po ktorom nasleduje lyofilizácia a hermetické balenie konečného prípravku. Ako prípravok na perorálne podávanie môže byt pripravený enterosolventný prostriedok okrem obvyklej tablety, tobolky, granulátu, jemného granulátu a prášku.

Pri výrobe enterosolventného prípravku, môžu byt pripravené tableta, granulát alebo jemný granulát pridaním aditiv, napr. lubrikantov, ako je manit, sacharóza, laktóza, maltóza, škrob, silikagél, fosfát vápenatý, apod., spojív, ako je karboxymetylcelulóza, metylcelulóza, želatína, arabská guma apod., a rozvolňovadiel, ako je karboxymetylcelulóza vápenatá, a potom nasleduje potiahnutie jedným alebo viacerými enterosolventnými činidlami, ako je acetoftalát celulózy, ftalát hydroxypropylmetylcelulózy, acetosukcinát hydroxypropylmetylcelulózy, polyvinylalkoholftalát, styrén, kopolymér anhydridu kyseliny maleínovej, metylakrylát a kopolymér metylakrylátu, a kedf je to nutné, pridanie farbiva, ako je oxid titaničitý. Prípravok vo forme toboliek môže byt vytvorený naplnením enterosolventného granulátu alebo jemného granulátu z nej pripraveného do toboliek. Na druhej strane je možné, že tobolka pripravená obvyklým spôsobom je potiahnutá uvedeným enterosolventným činidlom, aby sa premenila na enterosolventný a vytvorila sa enterosolventná tobolka pri použití tobolky pripravenej použitím uvedeného enterosolventného činidla samotného alebo zmiešaného s želatínou.

Pokial ide o čapík, môže byt pripravený pridaním semisyntetického základného činidla, ktoré je rozpustené po príprave zmiešaním monoglyceridu mastnej kyseliny a diglyceridu mastnej kyseliny v rôznych pomeroch s kakaovým maslom alebo triglyceridom mastnej kyseliny, nasledovanej miernym miesením a odliatím do formy čapíka.

Predkladaný vynález bude teraz opísaný detailne s odkazmi na nasledujúce referenčné príklady, príklady a testovací príklad, ktoré žiadnym spôsobom neobmedzujú rozsah vynálezu.

Príklady uskutočnenia vynálezu

I

Referenčný príklad 1

Príprava N,N'-dibenzylmočoviny

Za chladenia vzduchom bola zmes 5,84 g (9,72 mmol) močoviny a 25,0 g (23,3 mmol, 2,4 ekvivalenty) benzylamínu zahrievaná v 150 - 155’C 5 hodín. Počas zahrievania bolo pozorované uvoľňovanie plynného čpavku z bezfarbej tekutej reakčnej zmesi. Pri ochladzovaní sa približne pri teplote miestnosti zmes zmenila na pevnú látku. Reakčný produkt bol purifikovaný rekryštalizáciou z etanol-benzénu (zmes 1 : 1) za vzniku 14,0 g N,N'-dibenzylmočoviny vo forme bielych jemných ihličiek (výťažok 59,9 %).

NMR (DMSO-CDC1₃) δ 4,33 (2H, d, J = 5,8 Hz), 6,02 (1H, bt), 7,19-7,32 (5H, m).

Referenčný príklad 2

Príprava N,N'-bis(3-metylbutyl)močoviny

Pod spätným chladičom bola zmes 0,601 g (10,0 mmol) močoviny a 5,0 ml (približne 6 ekvivalentov) 3-metylbutylamínu zahrievaná v 150’C 24 hodín, počas tohto času boli pridané ďalšie 2,5 ml 3-metylbutylamínu. Prebytok amínu bol odstránený pri zníženom tlaku a zmes bola ponechaná vychladnúť na teplotu miestnosti za vzniku bezfarbej pevnej látky. Purifikácia rekryštalizáciou z etyléteru poskytla 1,29 g N,N'-bis(3-metylbutyl ) močoviny vo forme bielych plátkov (výťažok 64,5 %).

NMR (CDC1₃) δ 0,91 (6H, d, J = 6,9 Hz), 1,38 (2H, q, J = 7,2 Hz), 1,63 (1H, m), 3,15 (2H, t, J = 7,3 Hz).

Referenčný príklad 3

Príprava 1,3-dibenzylbarbiturovej kyseliny

V dusíkovej atmosfére bola zahrievaná zmes 12,02 g (50,0 mmol) Ν,Ν'-dibenzylmočoviny a 5,20 g (50,0 mmol) kyseliny malónovej v 50,0 ml (530 nmol, 10,6 ekvivalentov) acetanhydridu v 70’C - 75’C počas 14 hodín. Potom boli pri zníženom tlaku odstránené prchavé látky, zvyšok bol nanesený medzi vrstvy 250 ml 2M hydroxidu sodného a 200 ml éteru. Alkalická vodná vrstva bola oddelená a po premytí éterom bola neutralizovaná koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou pri chladení v ľadovom vodnom kúpeli (pH 2 až 3). Neutrálizovaný vodný roztok bol extrahovaný chloroformom, premytý vodou a sušený cez sulfát sodný. Odstránenie rozpúštadla pri zníženom tlaku dalo 14,7 g

1,3-dibenzylbarbiturovej kyseliny vo forme svetložltého kryštalického prášku (výtažok 95,6 %).

NMR (CDC1₃) δ 3,60 (IH, s), 5,00 (2H, s), 7,22 - 7,45 (5H, m).

Referenčný príklad 4

Príprava l,3-bis(3-metylbutyl)barbiturovej kyseliny

V dusíkovej atmosfére bola zahrievaná zmes 1,28 g (6,39 nmol) N,N'-bis(3-metylbutyl)močoviny a 665 mg (50,0 mmol) kyseliny malónovej v 6,4 ml (68 mmol, 11 ekvivalentov) acetanhydridu v 70’C - 75’C počas 4 hodín. Pri zníženom tlaku boli odstránené prchavé látky a zvyšok bol nanesený medzi vrstvy 50 ml 2M hydroxidu sodného a 60 ml éteru. Alkalická vodná vrstva bola oddelená a po premytí éterom bol vodný roztok neutrálizovaný koncentrovanou kyselinou chlorovodíkovou (pH až 3). Neutrálizovaný vodný roztok bol extrahovaný dichlórmetánom, premytý vodou a sušený cez sulfát sodný. Odstránenie rozpúštadla pri zníženom tlaku dalo 1,22 g pevnej látky oranžovej farby. Produkt bol purifikovaný na chromatografickej kolóne (silikagél, elúcia éterom) za vzniku 954 mg 1,3-bis(3-metylbutyl)barbiturovej kyseliny vo forme svetložltých kryštálov (výťažok 95,6 %).

NMR (CDC1₃) δ 0,95 (6H, d, J = 6,6 Hz), 1,48 (2H, q, J = 7,8 Hz), 1,62 (IH, m), 3,65 (IH, s), 3,87 (2H, t, J = 7,8 Hz).

Príklad 1

Syntéza 1,3-dibenzyl-5-(3-metyl-l-oxobutyl)barbiturovej kyseliny (zlúčenina č. 1)

V dusíkovej atmosfére bol k roztoku 265 mg (0,859 mmol)

1,3-dibenzylbarbiturovej kyseliny v 2 ml suchého dichlórmetánu pridaný 1,0 ml pyridínu (12 mmol) a roztok bol miešaný v 0°C.

K roztoku bolo pomaly počas 20 minút pridaných 104 mg (0,858 mmol, 1 ekvivalent) izovalerylchloridu v 1,0 ml dichlórmetánu, potom bol roztok miešaný 3 hodiny pri teplote miestnosti. Bolo pridaných 50 ml dichlórmetánu a organická vrstva bola premytá 2M kyselinou chlorovodíkovou a nasýteným solným roztokom a usu šená cez sulfát sodný. 351 mg hrubého produktu bolo purifikovaných po odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku na chromatograf icke j kolóne (silikagél, elúcia dichlórmetánom). Bolo získaných 299 mg l,3-dibenzyl-5-(3-metyl-l-oxobutylJbarbiturovej kyseliny najskôr vo forme bezfarbého viskózneho oleja, ktorý sa počas dvoch dní zmenil na biele plátky (výťažok 88,7 %).

NNR (CDC1₃) S 1,01 ( 6H, d, J = 6,6 Hz), 2,2 (IH, m, 3,04 (2H, d, J - 6,8 Hz), 5,10 (2H, s), 5,11 (2H, s), 7,23 7,47 (10H, m).

Príklad 2

Syntéza l,3-dibenzyl-5-(fenylacetyl)barbiturovej kyseliny (zlúčenina č. 2)

V dusíkovej atmosfére bol k roztoku 192 mg (0,623 mmol)

1,3-dibenzylbarbiturovej kyseliny v 2 ml suchého dichlórmetánu pridaný 1,0 ml pyridínu (12 mmol) a roztok bol miešaný v O’C.

K roztoku bolo pomaly počas 20 minút pridaných 96 mg (0,623 mmol, 1 ekvivalent) fenylacetylchloridu v 1,0 ml dichlórmetánu, potom bol roztok miešaný 3 hodiny pri teplote miestnosti. Bolo pridaných 40 ml dichlórmetánu a organická vrstva bola premytá 2M kyselinou chlorovodíkovou a nasýteným solným roztokom a usušená cez sulfát sodný. 273 mg hrubého produktu bolo purifikovaných po odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku na chromatografickej kolóne (silikagél, elúcia dichlórmetánom). Bolo získaných 236 mg l,3-dibenzyl-5-(fenylacetyl)barbiturovej kyseliny najskôr vo forme bezfarbého viskózneho oleja, ktorý sa postupne zmenil na biele plátky (výťažok

88,7 %).

NMR (CDC1₃) δ 4,51 (2H, s), 5,09 (2H, s), 5,12 (2H, s),

7,25 - 7, 60 (15H, m).

Príklad 3

Syntéza l,3-dibenzyl-5-(2-tienylacetyl)barbiturovej kyseliny (zlúčenina č. 3)

V dusíkovej atmosfére bol k roztoku 154 mg (0,500 mmol)

1,3-dibenzylbarbiturovej kyseliny v 2 ml suchého dichlórmetánu pridaný 1,0 ml pyridínu (12 mmol) a roztok bol miešaný v 0’C.

K roztoku bolo pomaly počas 20 minút pridaných 80 mg (0,50 mmol, 1 ekvivalent) 2-tienylacetylchloridu v 1,0 ml dichlórmetánu, potom bol roztok miešaný 3 hodiny pri teplote miestnosti. Bolo pridaných 50 ml éteru a organická vrstva bola premytá 2M kyselinou chlorovodíkovou a nasýteným solným roztokom a usušená cez sulfát sodný. 216 mg hrubého produktu bolo purifikovaných po odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku na chromatografickej kolóne (silikagél, elúcia dichlórmetánom). Bolo získaných 153 mg l,3-dibenzyl-5-(2-tienylacetyl)barbi19 turovej kyseliny vo forme žltého viskózneho oleja (výťažok 56,9 %).

NMR (CDC1₃) δ 4,68 (2H, s), 5,09 (2H, s), 5,13 (2H, s), 6,94 (IH, dd, J = 3,5, 5,3 Hz), 7,03 (IH, dd, J = 1,1, 3,5 Hz),

7,20 (IH, dd, J = 1,1, 5,3 Hz), 7,23 - 7,50 (10H, m).

Príklad 4

Syntéza 1,3-bis(3-metylbutyl)-5-(3-metyl-l-oxobutyl)barbiturovej kyseliny (zlúčenina č. 4)

V dusíkovej atmosfére bol k roztoku 268 mg (1,00 mmol) l,3-bis(3-metylbutyl)barbiturovej kyseliny v 3 ml suchého dichlórmetánu pridananých 0,81 ml pyridínu (0,79 g, 10 mmol, ekvivalentov) a roztok bol miešaný v 0’C. K roztoku bolo pomaly počas 20 minút pridaných 121 mg (1,00 mmol, 1 ekvivalent) izovalerylchloridu v 1,5 ml dichlórmetánu, potom bol roztok miešaný 4 hodiny pri teplote miestnosti. Bolo pridaných 40 ml dichlórmetánu a organická vrstva bola premytá 2M kyselinou chlorovodíkovou a nasýteným solným roztokom a usušená cez sulfát sodný. 383 mg hrubého produktu bolo purifikovaných po odstránení rozpúšťadla pri zníženom tlaku na chromatografickej kolóne (silikagél, elúcia dichlórmetánom). Bolo získaných 278 mg l,3-bis(3-metylbutyl)-5-(3-metyl-l-oxybutyl)barbiturovej kyseliny vo forme bielych plátkov (výťažok 79,0 %). NMR (CDC1₃) δ 0,97 (6H, d, J = 6,6 Hz), 1,02 (12H, d, J =

6,6 Hz), 1,52 (2H, m), 1,64 (2H, m), 2,20 (IH, m), 3,04 (2H, d, J = 7,1 Hz), 3,91 (4H, m).

Testovací príklad 1

1) Príprava buniek

Myši ICR staré 11 až 12 dní (Charles River) boli podrobené eutanázii prostredníctvom éterovej anestézy a dezinfiko20 vané okamžitým ponorením do 70% etanolu. Potom boli myšiam odobrané femur a holenná kosť, nasekané v kultivačnom médie -MEM (Floskupin Labs. Corp.) obsahujúcom 5% FBS (Irving Scientific Corp.), 100 U/ml penicilínu a 100 mg/ml streptomycínu. Zozbieraný supernatant získaný pipetovaním bol premytý roztokom kultivačného média, suspendovaný v roztoku obsahujúcom 5 % FBS a kultivačné médium -MEM a boli získané osteocyty zahŕňajúce osteoklasty. Supernatant z roztoku s resuspendovanými osteocytmi bol odobraný po 3 minútach státia v pokoji a prefiltrovaný (Celí Strainer, 70 m, Falcon Corp.). Koncentrácia buniek vo filtráte bola upravená na 1 x 10⁷ buniek/ml na použitie v teste tvorby otvorov.

2) Skúška testom tvorby otvorov

Kus slonovej kosti bol narezaný na plátky silné 150 μηι pri použití presnej rezačky s pomalou rýchlosťou (Buehler Corp.) a prederavený tak, aby sa vytvorili valcovité otvory s priemerom 6 mm. Kus slonovej kosti bol ponorený do 70% etanolu, ošetrený sonikáciou dvakrát 5 minút a bol trikrát premytý sterilizovaným PBS a dvakrát kultivačným médiom. Potom bol kus slonovej kosti položený na jamky 96-jamkovej kultivačnej platne (Falcon Corp.), do každej jamky bolo pridaných 100 μΐ kultivačného média, ktoré obsahovalo chemickú zlúčeninu podlá predkladaného vynálezu nastavenú na koncentráciu 2 x 10^_5M a do každej jamky bolo pridaných 100 μΐ kultivačného média, ktoré obsahovalo 1 x 10⁷ osteocytov/ml vopred pripravených (konečná koncentrácia zlúčeniny bola 1 x 1O⁵M), a nakoniec sa uskutočnila kultivácia v inkubátore pri teplote 37’C a 10% CO₂ počas 3 dní. Potom boli bunky zo slonovej kosti odstránené roztokom 2M hydroxidu sodného, kosť bola omytá vodou a metanolom a resorpčné dutiny boli ofarbené briliantovou modrosťou Coomasie a ich počet bol počítaný pod mikroskopom. Stupeň inhibície resorpcie kosti bol vyrátaný na základe toho, že v prípade, ked do roztoku nebola pridaná zlúčenina podlá vynálezu v prítomnosti rPTH (1 x 10”⁸M) sa rovnal 0 %, a v prípade, že sa nevyskytla žiadna resorpčná dutina, sa stupeň inhibície resorpcie kosti rovnal 100 %. V rovnakom pokuse bol dosiahnutý dobrý výsledok s variáciami počtu resorpčných dutín medzi experimentálnymi skupinami vďaka rozdielu medzi podielom rôznych buniek v roztoku, v ktorom boli suspendované osteocyty, a tiež medzi skupinami použitých zvierat.

Tabulka 1 ukazuje výsledky. Ako výsledky jasne dokazujú, zlúčenina podlá predkladaného vynálezu vykazuje zretelný stupeň inhibície resorpcie kosti a je použitelná ako látka, ktorá má inhibičné pôsobenie na resorpciu kosti.

Tabulka 1

Pridaná zlúčenina č.	Koncentrácia zlúčeniny	Počet resorpčných dutín (priemer + SD)	Počet resorpčných dutín bez pridania zlúčeniny (priemer ± SD)	Stupeň inhibície (%)
1	1 x IO^-5	1,0 + 0,5	224,0 i 20,0	99,2
2	1 x IO^-5	2,2 + 0,6	224,0 í 20,0	99,0
3	1 x 10⁵	7,0 + 1,7	179,6 + 34,4	96,7
4	1 x IO”⁵	21,1 + 4,3	224,0 ± 20,0	90,6

Claims

PATENTOVÉ NÁROKY

I

1. Derivát kyseliny barbiturovej predstavovaný nasledujúcim všeobecným vzorcom (I), jeho sol alebo jeho solvát:

(I) substituovanú alebo nesubstituovanú alkylovú skupinu alebo alkenylovú skupinu s jedným až 15 atómami uhlíka, substituovanú alebo nesubstituovanú arylmetylovú skupinu a alebo substituovanú alebo nesubstituovanú arylovú skupinu, a R² predstavuje substituovanú alebo nesubstituovanú alkylovú skupinu alebo alkenylovú skupinu s 1 až 15 atómami uhlíka, substituovanú alebo nesubstituovanú arylmetylovú skupinu a/alebo substituovanú alebo nesubstituovanú arylovú skupinu.
2. Zlúčenina, jej sol alebo jej solvát podlá nároku 1, kde každý z R a R¹ je benzylová skupina.
3. Zlúčenina, jej sol alebo jej solvát podlá nároku 1, kde každý z R a R¹ je 3-metylbutylová skupina.
4. Zlúčenina, jej sol alebo jej solvát podlá ktoréhokolvek z nárokov 1 až 3, kde R² je 2-metylpropylová skupina.
5. Zlúčenina, jej sol alebo jej solvát podlá nároku 1 alebo 2, kde R² je benzylová skupina.
6. Zlúčenina, jej sol alebo jej solvát podlá nároku 1 alebo 2, kde R² je 2-tienyImetylová skupina.
7. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje jeden alebo viac derivátov kyseliny barbiturovej, jeho sol alebo jeho solvát podlá ktoréhokolvek z nárokov 1 až 6, a farmaceutický prijatelný nosič.
8. Farmaceutický prípravok podlá nároku 7, v y z n a čujúci sa tým, že ide o prípravok na prevenciu alebo liečbu choroby postihujúcej kosti a chrupky.
9. Použitie jedného alebo viacerých derivátov kyseliny barbiturovej, jeho soli alebo jeho solvátu podlá ktoréhokolvek z nárokov 1 až 6 na výrobu farmaceutického prípravku na prevenciu alebo liečbu choroby postihujúcej kosti a chrupky.