SK13922002A3 - Karbamátové inhibítory kaspázy a ich použitie - Google Patents

Karbamátové inhibítory kaspázy a ich použitie Download PDF

Info

Publication number
SK13922002A3
SK13922002A3 SK1392-2002A SK13922002A SK13922002A3 SK 13922002 A3 SK13922002 A3 SK 13922002A3 SK 13922002 A SK13922002 A SK 13922002A SK 13922002 A3 SK13922002 A3 SK 13922002A3
Authority
SK
Slovakia
Prior art keywords
compound
ring
disease
group
oxygen
Prior art date
Application number
SK1392-2002A
Other languages
English (en)
Inventor
David Bebbington
Jean-Damien Charrier
David Kay
Ronald Knegtel
Julian Golec
Michael Mortimore
John Studley
Original Assignee
Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Vertex Pharmaceuticals Incorporated filed Critical Vertex Pharmaceuticals Incorporated
Publication of SK13922002A3 publication Critical patent/SK13922002A3/sk

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K31/00—Medicinal preparations containing organic active ingredients
    • A61K31/33—Heterocyclic compounds
    • A61K31/395—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins
    • A61K31/55—Heterocyclic compounds having nitrogen as a ring hetero atom, e.g. guanethidine or rifamycins having seven-membered rings, e.g. azelastine, pentylenetetrazole
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D403/00—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00
    • C07D403/02—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings
    • C07D403/12—Heterocyclic compounds containing two or more hetero rings, having nitrogen atoms as the only ring hetero atoms, not provided for by group C07D401/00 containing two hetero rings linked by a chain containing hetero atoms as chain links
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/04—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for ulcers, gastritis or reflux esophagitis, e.g. antacids, inhibitors of acid secretion, mucosal protectants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/16—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for liver or gallbladder disorders, e.g. hepatoprotective agents, cholagogues, litholytics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P1/00—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system
    • A61P1/18—Drugs for disorders of the alimentary tract or the digestive system for pancreatic disorders, e.g. pancreatic enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P11/00—Drugs for disorders of the respiratory system
    • A61P11/06—Antiasthmatics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P13/00—Drugs for disorders of the urinary system
    • A61P13/12—Drugs for disorders of the urinary system of the kidneys
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P17/00—Drugs for dermatological disorders
    • A61P17/14—Drugs for dermatological disorders for baldness or alopecia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/02—Drugs for skeletal disorders for joint disorders, e.g. arthritis, arthrosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/04—Drugs for skeletal disorders for non-specific disorders of the connective tissue
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00—Drugs for skeletal disorders
    • A61P19/08—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease
    • A61P19/10—Drugs for skeletal disorders for bone diseases, e.g. rachitism, Paget's disease for osteoporosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/08—Antiepileptics; Anticonvulsants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/14—Drugs for disorders of the nervous system for treating abnormal movements, e.g. chorea, dyskinesia
    • A61P25/16—Anti-Parkinson drugs
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/28—Drugs for disorders of the nervous system for treating neurodegenerative disorders of the central nervous system, e.g. nootropic agents, cognition enhancers, drugs for treating Alzheimer's disease or other forms of dementia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P25/00—Drugs for disorders of the nervous system
    • A61P25/30—Drugs for disorders of the nervous system for treating abuse or dependence
    • A61P25/32—Alcohol-abuse
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P27/00—Drugs for disorders of the senses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P3/00—Drugs for disorders of the metabolism
    • A61P3/08—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis
    • A61P3/10—Drugs for disorders of the metabolism for glucose homeostasis for hyperglycaemia, e.g. antidiabetics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A61P31/06—Antibacterial agents for tuberculosis
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
    • A61P31/18—Antivirals for RNA viruses for HIV
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/12—Antivirals
    • A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A61P35/02—Antineoplastic agents specific for leukemia
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/06—Immunosuppressants, e.g. drugs for graft rejection
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P43/00—Drugs for specific purposes, not provided for in groups A61P1/00-A61P41/00
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
    • A61P7/06—Antianaemics
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P9/00—Drugs for disorders of the cardiovascular system
    • A61P9/10—Drugs for disorders of the cardiovascular system for treating ischaemic or atherosclerotic diseases, e.g. antianginal drugs, coronary vasodilators, drugs for myocardial infarction, retinopathy, cerebrovascula insufficiency, renal arteriosclerosis
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/02—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with one carbocyclic ring
    • C07D209/04—Indoles; Hydrogenated indoles
    • C07D209/08—Indoles; Hydrogenated indoles with only hydrogen atoms or radicals containing only hydrogen and carbon atoms, directly attached to carbon atoms of the hetero ring
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D209/00—Heterocyclic compounds containing five-membered rings, condensed with other rings, with one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D209/56—Ring systems containing three or more rings
    • C07D209/80—[b, c]- or [b, d]-condensed
    • C07D209/82—Carbazoles; Hydrogenated carbazoles
    • C07D209/86—Carbazoles; Hydrogenated carbazoles with only hydrogen atoms, hydrocarbon or substituted hydrocarbon radicals, directly attached to carbon atoms of the ring system
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D221/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom, not provided for by groups C07D211/00 - C07D219/00
    • C07D221/02—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom, not provided for by groups C07D211/00 - C07D219/00 condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D221/04—Ortho- or peri-condensed ring systems
    • C07D221/06—Ring systems of three rings
    • C07D221/10—Aza-phenanthrenes
    • C07D221/12—Phenanthridines
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D223/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D223/14—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D223/18—Dibenzazepines; Hydrogenated dibenzazepines
    • C07D223/22—Dibenz [b, f] azepines; Hydrogenated dibenz [b, f] azepines
    • C07D223/24—Dibenz [b, f] azepines; Hydrogenated dibenz [b, f] azepines with hydrocarbon radicals, substituted by nitrogen atoms, attached to the ring nitrogen atom
    • C07D223/26—Dibenz [b, f] azepines; Hydrogenated dibenz [b, f] azepines with hydrocarbon radicals, substituted by nitrogen atoms, attached to the ring nitrogen atom having a double bond between positions 10 and 11
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D223/00—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom
    • C07D223/14—Heterocyclic compounds containing seven-membered rings having one nitrogen atom as the only ring hetero atom condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D223/18—Dibenzazepines; Hydrogenated dibenzazepines
    • C07D223/22—Dibenz [b, f] azepines; Hydrogenated dibenz [b, f] azepines
    • C07D223/24—Dibenz [b, f] azepines; Hydrogenated dibenz [b, f] azepines with hydrocarbon radicals, substituted by nitrogen atoms, attached to the ring nitrogen atom
    • C07D223/28—Dibenz [b, f] azepines; Hydrogenated dibenz [b, f] azepines with hydrocarbon radicals, substituted by nitrogen atoms, attached to the ring nitrogen atom having a single bond between positions 10 and 11
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07D—HETEROCYCLIC COMPOUNDS
    • C07D279/00—Heterocyclic compounds containing six-membered rings having one nitrogen atom and one sulfur atom as the only ring hetero atoms
    • C07D279/10—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines
    • C07D279/14—1,4-Thiazines; Hydrogenated 1,4-thiazines condensed with carbocyclic rings or ring systems
    • C07D279/18—[b, e]-condensed with two six-membered rings
    • C07D279/22—[b, e]-condensed with two six-membered rings with carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom
    • C07D279/30—[b, e]-condensed with two six-membered rings with carbon atoms directly attached to the ring nitrogen atom with acyl radicals attached to the ring nitrogen atom

Description

Oblasť techniky
Vynález je z oblasti lekárskej chémie a týka sa nových zlúčenín a ich farmaceutických kompozícií, ktoré inhibujú kaspázu, ktorá sprostredkováva bunkovú apoptózu a zápaly. Vynález sa týka tiež spôsobov použitia zlúčenín a farmaceutických kompozícií podlá tohto vynálezu na liečenie ochorení, v ktorých je zahrnutá kaspázová aktivita.
Doterajší stav techniky
Táto prihláška nárokuje prioritu na US provizórnu patentovú prihlášku 60/192 826, podanú 29, marca 2000.
Apoptóza, alebo inak programovaná bunková smrť, je základným mechanizmom, ktorým organizmus eliminuje nežiaduce bunky. Deregulácia apoptózy, a to ako prehnaná apoptóza alebo jej zlyhanie, sú zahrnuté v mnohých ochoreniach, ako je napríklad rakovina, akútne zápaly a poruchy autoimunity, ischemické ochorenia a niektoré neurodegeneratívne poruchy (pozri všeobecne Science, 1998, 281, 1283-1312; Ellis a kol., Ann. Rev. Celí. Biol., 1991, 7,
663) .
Kaspázy sú triedou cysteínových proteázových enzýmov, ktoré sú kľúčovými mediátormi v signálnych cestách apoptózy a bunkového rozkladu (Thornberry, Chem. Biol., 1998, 5, R97-R103). Tieto signálne cesty sa líšia v závislosti od druhu bunky a stimulov, ale všetky cesty apoptózy sa javia že konvergujú ku spoločne] efektorovej reakčnej ceste vedúcej k proteolýze kľúčových proteínov. Kaspázy sú zahrnuté ako v efektorovej fáze signálneho mechanizmu, tak aj v ďalšom šírení proti prúdu a jeho iniciácii. Protiprúdové kaspázy zahrnuté v iniciačných udalostiach sa aktivujú a potom aktivujú ďalšie kaspázy, ktoré sú zahrnuté v neskorších fázach apoptózy.
Kaspáza-1, prvá identifikovaná kaspáza, je tiež známa ako enzým konvertujúci interleukín alebo ICE. Kaspáza-1 prevádza prekurzor interleukín-ΐβ (pIL-Ιβ) na prozápalovo aktívnu formu pomocou špecifického štiepenia pIL-Ιβ medzi Asp-116 a Aia-117. Okrem kaspázy-1 je tu tiež jedenásť ďalších známych ľudských kaspáz, ktoré sa všetky špecificky štiepia na aspartylových zvyškoch. Pozorovalo sa, že majú výrazné požiadavky na najmenej štyri amínokyselinové zvyšky na N-terminálnom konci štiepeného miesta.
Kaspázy sa klasifikujú do troch skupín v závislosti cd aminokyselinovej sekvencie, ktorá je preferovaná alebo sa primárne rozpoznáva. Ukázalo sa, že skupina kaspáz, zahŕňajúca kaspázy 1, 4 a 5, preferuje hydrofóbne aromatické aminokyseliny v polohe 4 N-terminálneho reťazca štiepeného miesta. Ďalšia skupina, zahŕňajúca kaspázy 2, 3 a 7, rozoznáva aspartylové zvyšky v obidvoch polohách 1 a 4 terminálneho reťazca štiepeného miesta, a výhodne sekvenciu Asp-Glu-X-Asp. Tretia skupina, zahŕňajúca kaspázy 6, 8, 9 a 10, toleruje mnohé aminokyseliny v primárne rozpoznávanej sekvencii, ale sa zdá, že preferuje zvyšky s rozvetvenými alifatickými postrannými reťazcami ako sú valín a leucín v pciche 4.
Kaspázy sa tiež delia podlá ich funkcie vnímania. Prvá podskupina sa skladá z kaspázy 1 (ICE), 4 a 5. Ukázalo sa, že tieto kaspázy sú zahrnuté v pro-zápalovom cytokínovom pôsobení a hrajú teda dôležitú úlohu pri zápaloch. Kaspáza-1, najštudovanejší enzým tejto skupiny, proteolytickým štiepením aktivuje’ IL-Ιβ prekurzor. Tento enzým hrá preto kľúčovú úlohu v zápalovej odozve. Kaspáza 1 je tiež zahrnutá v pôsobení faktora indukujúceho interferon gama (IGIF alebo IL-Ιβ) , ktorý stimuluje produkciu interferónu gama, kľúčového imunoregulátora, ktorý moduluje spôsob prezentácie antigénu, T-bunkovú aktiváciu a bunkovú adhéziu.
Zostávajúce kaspázy tvoria druhú a tretiu podskupinu. Tieto enzýmy majú ústrednú dôležitosť v intracelulárnej signálnej re3 akčnej ceste vedúcej k apoptóze. Jedna podskupina sa skladá z enzýmov, zahrnutých v iniciačných udalostiach apoptózovej reakčnej cesty, vrátane transdukcie signálov z plazmatickej membrány. Členmi tejto podskupiny enzýmov sú kaspázy 2, 8, 9a 10. Iná podskupina obsahuje efektorové kaspázy 3, 6 a 7, ktoré sa zúčastňujú na výslednom štiepení v smere („downstream), ktoré vedie k systematickému rozpadu a smrti buniek apoptózou. Kaspázy, ktoré sa zúčastňujú transdukcie signálov proti smeru („upstream) aktivujú „downstream kaspázy, ktoré potom vyradia mechanizmy opravy DNA, fragmentujú DNA, rozoberú bunkový cytoskelet a nakoniec fragmentujú bunku.
U enzýmových substrátov sa určila sekvencia štyroch aminokyselín primárne rozpoznávaných kaspázami. Talanian a kel., J. Biol. Chem. 272, 9677-9682 (1997); Thornberry a kol., J. Biol. Chem. 272, 17907-17911 (1997). Znalosť sekvencie štyroch aminokyselín primárne rozpoznávaných kaspázami sa využila pre design kaspázových inhibítorov. Pripravili sa reverzibilné tezrapeptidové inhibítory, ktoré majú štruktúru CH3CO-[P4]-[?3;- [ P2] -CH (R) CH2CO2H, kde P2 až P4 predstavujú optimálnu rozpoznávanú aminokyselinovú sekvenciu a R je aldehyd, nitril alebc ketón, schopný viazania ku kaspázovému cysteínovému sulfhydrylu. Ráno a Thornberry, Chem. Biol., 4, 149-155 (1997); Mjalli, a kol., Bioorg. Med. Chem. Lett. 3, 2689-2692 (1993); Nicholson a kol., Náture 376, 37-43 (1995). Pripravili sa ireverzibilné inhibítory založené na analogických tetrapeptidových rozpoznávacích sekvenciách, kde R je acyloxymetylketón -COCH2OCOR'. R' je napríklad prípadne substituovaný fenyl ako je 2,6-dichlórbenzyloxy a kde R je COCH2X, kde X je odstupujúca skupina ako je F alebo Cl. Thornberry a kol., Biochemistry 33, 3934 (1994); Dolle a kol., J. Med. Chem. 37, 563-564 (1994).
Význam kaspázových inhibítorov na liečenie mnohých cicavčích ochorení, spojených so zvýšenou bunkovou apoptózou je demonštrovaný s použitím peptidických kaspázových inhibítorov. Napríklad, na hlodavcom modeli sa ukázalo, že kaspázové inhibí4 tory redukujú veľkosť infarktu a inhibujú kardiomyocytovú apoptózu po infarkte myokardu, redukujú objem lézie a znižujú neurologický deficit, ktorý vznikne po infarkte, redukujú post-traumatickú apoptózu a neurologický deficit pri traumatických poraneniach mozgu, sú efektívne pri liečení fulminantnej deštrukcie pečene a zlepšujú prežitie po endotoxickom šoku. Yaoita a kol., Circulation, 97, 276 (1998); Endres a kol·., J. Cerebral Blood Flow and Metabolism, 18, 238, (1998); Cheng a kol., J. Clin. Invest., 101, 1992, (1998); Yakovlev a kol., J. Neuroscience, 17, 7415 (1997); Rodriquez a kol., J. Exp. Med., 184, 2067, (1996); Grobmyer a kol., Mol. Med., 5, 585, (1999).
Všeobecne, už opísané peptidické inhibítory sú velmi účinné proti niektorým kaspázovým enzýmom. Ale táto účinnosť sa nie vždy odráža v bunkových modeloch apoptózy. Okrem toho sú peptidové inhibítory typicky charakteristické nežiaducimi farmakologickými vlastnosťami ako je slabá orálna absorpcia, slabá stabilita a rýchly metabolizmus. Plattner a Norbeck, v Drug Discovery Technologies, Clark a Moos, Eds. (Ellis Horwood, Chichester, Anglicko, 1990).
Opísané sú modifikované peptidové inhibítory. WO 91/15577 a WO 93/05071 opisujú peptidové ICE inhibítory všeobecného vzorZ-Q2-Asp-Qi kde Z je N-terminálna ochranná skupina; Q2 je 0 až 4 aminokyseliny a Qi je elektronegativna odstupujúca skupina.
WO 99/18781 opisuje dipeptidové kaspázové inhibítory všeobecného vzorca:
kde R1 je N-terminálna ochranná skupina, AA je zvyšok prírodnej α-aminokyseliny alebo β-aminokyseliny; R2 je vodík alebc CH2R4, kde R4 je elektronegatívna odstupujúca skupina a R3 je alkyl alebo vodík.
WO 99/47154 opisuje dipeptidové kaspázové inhibítory všeobecného vzorca:
JDO2R2
R-|—AA—N H kde R1 je terminálna ochranná skupina; AA je zvyšok neprírodnej α-aminokyseliny alebo β-aminokyseliny a R2 je prípadne substituovaný alkyl alebo vodík.
WO 00/023421 opisuje (substituované)acyldipeptidové apoptózové inhibítory, ktoré majú všeobecný vzorec:
kde n je 0, 1 alebo 2, q je 1 alebo 2, A je zvyšok určitej prírodnej alebo neprírodnej aminokyseliny, B je vodíkový atóm, deutériový atóm, Cko alkyl s priamym alebo rozvetveným reťazcom, cykloalkyl, fenyl, substituovaný fenyl, naftyl, substituovaný naftyl, 2-benzoxazolyl, substituovaný 2-oxazolyl, (CH2) ^cykloalkyl, (CH2) mfenyl, (CH2) m (substituovaný fenyl), (C K 2) m (1 — alebo 2-naftyl), (CH2)mheteroaryl, halometyl, CO2R13, CONR14R1:), CH2ZRl6,
CH2OCOaryl, CH2OCO(substituovaný aryl), CK2OCO(heteroaryl), CH;OCO ( subst ituovaný heteroaryl) alebo CH2OPO ( R1') R13, kde R'3, R'4, R, Rl6, R17 a RlS sú definované v prihláške vynálezu; R^ je vybraný zo skupiny obsahujúcej vodík, alkyl, cykloalkyl, fenyl, substituovaný fenyl, (CH2)mNH2; R3 je vodík, alkyl, cykloalkyl, (cykloalkyl)alkyl·, fenylalkyl alebo substituovaný fenylalkyl; X je CH2, C=0, 0, S, NH, C=ONH alebo CH2OCONH; a Z je atóm kyslíka alebo síry.
WO 97/24339 opisuje inhibítory enzýmu konvertujúceho interleukín-ΐβ všeobecného vzorca:
O ,A
ΆΑ,-ΑΑζ-Ν-Υ H kde R1 predstavuje H, alkyl, alkoxy, karbocyklickú skupinu, heterocyklickú skupinu a rôzne ďalšie skupiny; AA1 a AA2 sú jednoduché väzby alebo aminokyseliny a Y predstavuje skupinu vzorca:
Tet kde Tet kruh predstavuje tetrazolový kruh a Z predstavuje okrem iného alkylén, alkenylén, 0, S, SO a S02.
EP 618223 opisuje ICE inhibítory všeobecného vzorca:
R-A1-A2-X-A3 kde R je vodík, ochranná skupina alebo prípadne kruhom substituovaný PhCHO; a-hydroxy- alebo α-aminokyselinový zvyšek; AA je α-hydroxykyselinový zvyšok alebo α-aminokyselina alebc .¾1 a A? tvoria spolu pseudodipeptid alebo dipeptidmimetický zvyšok; X je zvyšok odvodený od Asp, kde A3 je CH2XiCOYi, CH2OY2, CH2Sí3 alebo CH2(CO)mY6, kde Xx je 0 alebo S, m je 0 alebo 1 a Yi, Y?, Y2 a Ys sú prípadne substituované cyklické alifatické alebo arylové skupiny.
vzorca:
WO 98/16502 opisuje okrem iného ICE inhibítory všeobecného
Ί
kde R1 a R2 sú podlá opisu v prihláške a pyrolidínový kruh je substituovaný rôznymi skupinami.
Zatiaľ čo sa opísalo množstvo kaspázových inhibítorov, nie je zrejmé, či všetky vykazujú zodpovedajúce farmakologické vlastnosti, ktoré by boli terapeuticky zaujímavé. Je teda pokračujúci záujem o malé molekuly kaspázových inhibítorov, ktoré sú účinné, stabilné a priepustné pre membrány, na zabezpečenie účinnej inhibície apoptózy in vivo. Také zlúčeniny by boli extrémne užitočné pri liečení už uvedených ochorení, kde hrajú úlohu kaspázové enzýmy.
Podstata vynálezu
Zistilo sa, že zlúčeniny podľa tohto vynálezu a ich farmaceutické kompozície sú účinné ako inhibítory kaspáz a bunkovej apoptózy. Tieto zlúčeniny majú všeobecný vzorec I:
O
R2 (I) kde
Z je kyslík alebo síra,
R1 je vodík,, -CHN2, -R, -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y,
R je Ci-i2alifatický zvyšok, aryl, aralkyl, heterocyklyl alebo heterocyklylalkyl,
Y je elektronegatívna odstupujúca skupina,
R2 je CO2H, CH2CO2H alebo estery, amidy alebo ich izostéry,
R3 je skupina schopná vmestiť sa do S2 submiesta kaspázy,
R4 a R5 tvoria spolu s intervenujúcim dusíkom mono-, bi- alebo tricyklický heterokruhový systém, ktorý má 1 až 6 heteroatómov, vybraných zo skupiny obsahujúcej dusík, kyslík alebo sí ru.
Zlúčeniny podľa tohto vynálezu majú inhibičné vlastnosti k spektru kaspázových cieľov s dobrou účinnosťou u bunkových modelov apoptózy. Okrem toho, tieto zlúčeniny majú dobrú bunkovú penetráciu a farmakokinetické vlastnosti, a ako následok ich vlastností, vykazujú dobrú účinnosť voči ochoreniam, v ktorých sú zahrnuté kaspázy.
Detailný opis vynálezu
Tento vynález poskytuje nové zlúčeniny a ich farmaceutický prijateľné deriváty, ktoré sú užitočné ako kaspázové inhibítory. Vynález tiež poskytuje spôsoby použitia zlúčenín na inhibovanie kaspázovej aktivity a na liečenie ochorení vyvolaných kaspázami. Tieto zlúčeniny majú všeobecný vzorec I:
kde:
Z je kyslik alebo síra,
R1 je vodík, -CHN:, -R, -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y,
R je Ci-i2alif atický zvyšok, aryl, aralkyl, heterocy kly í alebo heterocyklylalkyl,
Y je elektronegatívna odstupujúca skupina,
R2 je CO2H, CH2CO2H alebo estery, amidy alebo ich izostéry,
R3 je skupina schopná vmestiť sa do S2 submiesta kaspázy,
R4 a R5 tvoria spolu s intervenujúcim dusíkom mono-, bi- alebo tricyklický heterokruhový systém, ktorý má 1 až 6 heteroatómov, vybraných zo skupiny obsahujúcej dusík, kyslík alebo si ru.
V tomto vynáleze sa používajú nasledujúce definície, ak nie je uvedené inak. Termín „alifatický zvyšok označuje v tomto vynáleze C1-C12 uhľovodík s priamym alebo rozvetveným reťazcom, ktorý je úplne nasýtený alebo ktorý obsahuje jednu alebo viac nenasýtených jednotiek. Napríklad, vhodné alifatické skupiny zahŕňajú substituovanú alebo nesubstituovanú lineárnu, rozvetvenú alebo cyklickú alkylovú, alkenylovú alebo alkinylovú skupinu a ich hybridy ako sú (cykloalkyl)alkyl, (cykloalkenyl)alkyl alebo (cykloalkyl)alkenyl. Termín „alkyl použitý samotný alebo ako časť väčšej skupiny označuje ako priame, tak aj rozvetvené reťazce obsahujúce jeden až dvanásť uhlíkových atómov. Keď je termín alkyl použitý ako časť väčšej skupiny, ako napríklad aralkyl alebo heteroaralkyl, bude alkylová časť výhodne obsahovať jeden až šesť uhlíkov. Termín „halogén označuje F, Cl, Br alebo I. Termín „aryl označuje monocyklickú alebo polycyklickú aromatickú kruhovú skupinu, ktorá má päť až štrnásť atómov, ako napríklad fenylová, naftylová alebo antrylová skupina. Termín „heterocyklická skupina označuje nasýtený alebo nenasýtený monocyklický alebo poiycyklický kruhový systém, obsahujúci jeden alebo viac heteroatómov a s veľkosťou kruhu od troch do deviatich atómov ako sú napr. furanyl, tienyl, pyrolyi, pyroiinyl, pyrolidinyl, dioxolanyl, oxazolyl, tiazolyl, imidazolyl, imidazolinyi, imidazolidinyl, pyrazolyl, pyrazolinyl, pyrazolidinyi, izoxazolyl, ízotiazolyl, oxadiazolyl, triazoly1, tiadiazolyl, pyranyl, pyridinyl, piperidinyl, dioxanyl, morfolinyl, ditianyl, tiomorfoliny1, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, piperazinyl, triazinyl, tritianyl, indolizinyl, indolyl, izoindolyl, indolinyl, benzofuranyi, benzotiofenyl, indazolyi, benzimidazolyl, benzotiazolyl, purinyl, chinolizinyl, chinolinyl, izochinoiinyl, cinolinyl, ftalazinyl, chinazolinyl, chinoxalinyl, 1,8-naftyridinyl, pteridinyl, chinuklidinyl, karbazolyl, akridínyl, fenazinyl, fenotiazinyl alebo fenoxazinyl. „Heteroaryl označuje heterocyklický kruh, ktorý je aromatický. Rozumie sa, že zlúčeniny podľa tohto vynálezu sú obmedzené na tie, ktoré existujú v prírode ako stabilné chemické zlúčeniny.
Termín „karbocyklická skupina označuje nasýtený mcnocyklický alebo polycyklický uhľovodíkový kruhový systém, ktorý obsahuje tri až štrnásť uhlíkových atómov, ktorý môže byť kondenzovaný k arylovej alebo heterocyklickej skupine. Príklady zahŕňajú cyklohexyl, cyklopentyl, indanyl, tetrahydronaftyl a podobne.
cyklobutyl, cyklopropyl,
Alifatický zvyšok, alkyl, aryl, heteroaryl, heterocyklyl alebo karbocyklyl, použité samotné alebo ako časť väčšej skupiny, označujú nesubstituované alebo substituované skupiny. Ak sú substituované, môžu tieto skupiny obsahovať jeden alebo viac substituentov. Príklady vhodných substituentov zahŕňajú halogén, -R, -OR, -OH, -SH, -SR, chránený OH (ako napríklad acyloxy), fenyl (Ph), substituovaný Ph, -OPh, substituovaný OPh, -NO2, -CN, -NH2, -NHR, -N(R)2, -NHCOR, -NHCONHR, -NHCON(R)2, -NRCOR, -NHCO2R, -CO2R, -CO2H, -COR, -CONHR, -CON(R)2, -S(O)2R,
-SONH2, -S (O) R, -SO2NHR, -NHS(O)2R, =0, =S, =NNHR, =NNR2, =N-OR, =NNHCOR, =NNHC02R, =NNHSO2R alebo =NR, kde R je alifatická skupina alebo substituovaná alifatická skupina.
Substituovatelný dusík na heterocyklickom kruhu .môže byť prípadne substituovaný. Vhodné substituenty na dusíku zahŕňajú R, COR, S(0)2R a CO2R, kde R je alifatická skupina alebo substituovaná alifatická skupina.
Dusík a síra môžu byť v ich oxidovanej forme a dusík môže byť v kvarternizovanej forme.
Termín „elektronegatívna odstupujúca skupina má definíciu známu odborníkom v odbore (pozri March, Advanced Organio Chemis11 try, 4. vydanie, John Wiley & Sons, 1992). Príklady elektronegatívnych odstupujúcich skupín zahŕňajú halogény ako sú F, Cl, Br, I, aryl a alkylsulfonyloxy skupiny, trifluórmetánsulfonyloxyskupina, OR, SR, -OC=O(R), -0P0 (R6) (R7) , kde R je alifatická skupina, arylová skupina, aralkylová skupina, karbocyklická skupina, alkylkarbocyklická skupina a R6 a R7 sú nezávisle vybrané z R alebo OR.
Keď je R2 skupina vo forme esteru alebo amidu, podliehajú zlúčeniny podlá tohto vynálezu metabolickému štiepeniu na zodpovedajúce karboxylové kyseliny, ktoré sú aktívnymi kaspázovými inhibítormi. Pretože podliehajú metabolickému štiepeniu, nie je konkrétny druh esterovej alebo amidickej skupiny kritický pre uskutočnenie tohto vynálezu. Štruktúra skupiny R2 sa môže pohybovať od relatívne jednoduchého dietylamidu až ku steroidnému esteru. Príklady esterov R2 karboxylovej kyseliny zahŕňajú, ale výpočet nie je obmedzený, Ci-i2alifatický zvyšok, ako je alkyl, ktorý má jeden až šesť atómov uhlíka alebo Cj-i0cykloalkyl, aryl, ako je fenyl, aralkyl ako je napríklad benzyl alebo fenetyl, heterocyklyl alebo heterocyklylalkyl. Príklady vhodných R2 heterocyklických kruhov zahŕňajú, ale výpočet nie je obmedzený, 5- až 6-členné heterocyklické kruhy, ktoré majú jeden alebo dva heteroatómy ako je piperidyl, piperazinyl alebo morfolinyl.
Amidy Rŕ karboxylových kyselín môžu byť primárne, sekundárne alebo terciálne. Vhodné substituenty na amidovom dusíku zahŕňajú (výpočet nie je úplný) jednu alebo viac skupín nezávisle vybraných z alifatických, arylových, aralkylových, heterocyklyiových alebo heterocyklylalkylových skupín opísaných skôr pre R' esterového alkoholu. Podobne sú do pôsobnosti tohto vynálezu zahrnuté ďalšie proliečivá. Pozri Bradley D. Ariderson, „Prodrugs for Improved CNS Delivery v Advanced Drug Delivery Reviews (1996), 19, 171-202.
Izostéry alebo bioizostéry R2 karboxylových kyselín, esterov a amidov vyplývajú z nahradenia atómu alebo skupiny atómov, pričom vzniká nová zlúčenina s podobnými biologickými vlastnosťami ako má materská karboxylová kyselina alebo ester. Bioizostérna náhrada sa môže uskutočniť fyzikálno-chemicky alebo topologicky. Príklad izostérnej náhrady karboxylovej kyseliny je CONHSO?(alkyl) ako napríklad CONHSC>2Me.
R3 môže byť akákoľvek skupina schopná vmestiť sa do S2 submiesta kaspázy. Tieto skupiny sú známe z mnohých kaspázových inhibítorov, ktoré sa opísali (pozri WO 91/15577, WO 93/05071, WO 99/18781, WO 99/47154, WO 00/023421, WO 9724339, EP 618223, WO 9816502, všetky sa opísali v predchádzajúcej časti). Okrem toho sú tiež známe štruktúry niekoľkých kaspázových enzýmov vrátane S-2 submiesta. Referencie kaspázových štruktúr zahŕňajú nasledujúce: Blanchard H. a kol., J. Mol. Biol. 302 (1), 9-16 (2000); Wei Y. a kol., Chem. Biol. 7 (6): 423-32 (2000); Lee D. a kol., J. Biol. Chem. 275(21): 16007-14 (2000); Blanchard H. a kol., Structure Fold Des. 7(9): 1125-33 (1999); Okamoto Y. a kol., Chem. Pharm. Bull. (Tokyo) 47(1): 11-21 (1999); Margolin N. a kol., J. Biol. Chem. 272(11): 7223-8 (1997); Walker NP. a kol. Celí 78(2): 343-52 (1994) a Wilson KP. a kol., Náture 370 (6487): 270-5 (1994).
Či sa skupina vmestí do S2 submiesta bude závisieť od konkrétnej uvažovanej kaspázy. Veľkosť submiesta sa bude pohybovať od malého S-2 submiesta kaspázy-3, ktoré dovolí vmestiť sa skupinám až do veľkosti Cí alifatickej skupiny, až do relatívne veľkého submiesta, ktoré dovolí vmestiť sa skupine, ktorá má molekulárnu hmotnosť až asi 140 Daltonov, ako je napríklad naftylová skupina. Veľkosť, spolu s elektrónovým typom R3 skupiny, budú mať vplyv na kaspázovú selektivitu inhibítora. Zo skôr uvedených referencií môže odborník v odbore lahko zistiť, či je skupina schopná výhodne sa vmestiť do S-2 submiesta kaspázy, napr. s použitím štandardných programov pre molekulárne modelovanie ako je Quanta alebo Macromodel.
R3 skupina zahŕňa také, ktoré sú vybrané zo skupiny obsahujúcej vodík, postranný reťazec prírodnej α-aminokyseliny alebo substituovanú alebo nesubstituovaná skupinu, ktorá má molekulovú hmotnosť až do 140 Daltonov, vybranú z alifatických, arylových, aralkylových, heterocyklylových a heterocyklylalkylových skupín. Príklady R3 alifatických skupín zahŕňajú metyl, etyl, propyl, izopropyl, cyklopropyl, butyl, izobutyl, sek-butyl, terc-butyl, cyklobutyl, pentyl, cyklopentyl, hexyl a cyklohexyl. Príklady R3 arylových skupín zahŕňajú fenyl, indenyl a naftyl. Príklady R3 heterocyklických skupín zahŕňajú pyrolidinyl, pyrolinyl, imidazolidinyl, imidazolinyl, pyrazolinyl, pyrazolidinyl, piperidyl, morfolinyl, tiomorfolinyl, piperazinyl, homopiperidyl a chinuklidinyl. Príklady R3 heteroarylových skupín zahŕňajú furanyl, tienyl, pyrolyl, oxazolyl, tiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, izoxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, furazanyl, triazolyl, tiadiazolyl, pyridyl, pyridazinyl, pyrimidinyl, pyrazinyl, triazinyl, indolyl, izoindolyl, indolinyl, benzofuranyl, benzoticfenyl, indazolyl, benzimidazolyl, benzotiazolyl, purinyl, chinclinyl, izochinolinyl, chinolizinyl, cinolinyl, ftalazinyl, chinazolinyl, chinoxalinyl, naftyridinyl, pteridinyl, chromanyl a izochromanyl. Každá skupina môže obsahovať jeden alebo viac substituentov podľa skôr uvedeného opisu.
R4 a RJ tvoria spolu s intervenujúcim dusíkom mono-, bialebo tricyklický heterokruhový systém, ktorý má 1 až 6 heteroatómov, výhodne 1 až 4 heteroatómy. Takéto kruhy zahŕňajú substituovaný alebo nesubstituovaný indol, izoindol, indolín, indazol, purín, dihydropyridín, benzimidazol, imidazol, imidazolín, pyrol, pyrolidín, pyrolín, pyrazol, pyrazolín, pyrazclidín; triazol, piperidín, morfolín, tiomorfolín, piperazín, karbazol, fenotiazin, fenoxazín, dihydrofenazín, dihydrocinolín, dihydrochinoxalín, tetrahydrochinolín, tetrahydroizochinolín, dinydronaftyridín, tetrahydronaftyridín, dihydroakridín, 5H-dibenzo[b,f]azepín, 10, 1l-dihydro-5tf-dibenzo[b,ŕ]azepín, β-karbolín, pyrido[4,3-b]indol, 2,3,9-triazafluorén, 9-tia-2,10-diazaantra14 cén, 3,6,9-triazafluorén, tieno[3,2-b]pyrol alebo dihydrofenantridín. Vhodné substituenty na R4 alebo R5 zahŕňajú jeden alebo viac substituentov nezávisle vybraných zo skupiny obsahujúcej halogén, -R, -OR, -OH, -SH, -SR, chránený OH (ako je acyloxy) , fenyl (Ph), substituovaný Ph, -OPh, substituovaný -OPh, -N02, -CN, -NH2, -NHR, -N(R)2, -NHCOR, -NHCONHR, -NHCON(R)2, -NRCOR, -NHCO2R, -CO2R, -CO2H, -COR, -CONHR, -CON(R)2, -S(O)2R, -sonh2,
-S(O)R, -SO2NHR alebo -NHS(O)2R, kde každý R je nezávisle vybraný z alifatickej skupiny alebo substituovanej alifatickej skupiny.
Zlúčeniny podľa tohto vynálezu, kde R2 je COOH, sú gamaketokyseliny, ktoré môžu existovať v roztoku buď ako otvorená forma 1 alebo ako cyklický hemiketál 2. V tomto vynáleze zahŕňa reprezentácia jednej izomérnej formy zároveň aj formu druhú. Podobne môže dochádzať k cyklizácii, keď R2 je CH2COOH a rozumie sa, že takto cyklizované izoméry sú zahrnuté keď je tu prezentovaná forma s otvoreným kruhom.
Podobne bude odborníkovi v odbore zrejmé, že určité zlúčeniny podľa tohto vynálezu môžu existovať v tautomérnych formách alebo hydrátovaných formách, pričom všetky takéto zlúčeniny sú zahrnuté v rozsahu tohto vynálezu. Ak nie je uvedené inak, štruktúry tu uvedené zahŕňajú tiež všetky stereochemické formy štruktúry, to znamená R a S konfigurácie každého asymetrického centra. Preto do rozsahu platnosti tohto vynálezu spadajú jednotlivé stereochemické izoméry, rovnako ako enantiomérne a diastereomérne zmesi zlúčenín podľa tohto vynálezu. Ak nie je uvedené inak, štruktúry uvedené v tomto vynáleze tiež zahŕňajú zlúčeniny, ktoré sa líšia v prítomnosti jedného alebo viacerých izotopovo obohatených atómov. Napríklad, do rozsahu platnosti vynálezu patria zlúčeniny, ktoré majú štruktúry podľa tohto vynálezu s tou výhradou, že je vodík nahradený deutériom alebo tríciom, alebo je uhlík nahradený uhlíkom 13C alebo 14C uhlíkom.
Jedno uskutočnenie tohto vynálezu sa týka zlúčenín, ktoré majú jeden alebo viac, výhodne všetky nasledujúce znaky:
(i) Z je kyslík.
(ii) R1 je vodík, -R, -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y. Výhodnejšie R1 je -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y. Ešte výhodnejšie R1 je -CH2Y. Najvýhodnejšie R1 je -CH2F.
(iii) R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér.
(iv) R3 je skupina, ktorá má molekulárnu hmotnosť až do asi 140 Daltonov, ako sú alifatická alebo aralkylová skupina. Výhodnejšie, R3 je Ci-C4 alkyl, ktorý je skupinou, ktorá sa vojde do S2 submiesta mnohých kaspáz.
(v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria monocyklický, bicyklický alebo tricyklický heterocyklický alebo heteroarylový kruhový systém, kde každý kruh systému má 5 až 7 atómov v kruhu.
Kľúčovým znakom zlúčenín podľa tohto vynálezu je heterokruhový systém tvorený R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom. Bicyklické alebo tricyklické heterocyklická alebo heteroarylové kruhy sa zvýhodňujú pred monocyklickými kruhmi. Výhodné uskutočnenie sa teda týka zlúčenín, ktoré majú jeden alebo viac, a výhodne všetky nasledujúce znaky: (i) Z je kyslík, (ii) R1 je vodík, -R, -CH2OR, -CK2SR alebo -CH-Y, výhodnejšie R* je -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y, ešte výhodnejšie R1 je -CH2Y a najvýhodnejšie R1 je -CH2F. (iii) R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostéry. (iv) R3 je skupina, ktorá má molekulárnu hmotnosť až do asi 140 Daltonov, ako sú alifatická alebo aralkylová skupina, výhodnejšie, R3 je C1-C4 alkyl a/alebo (v) R-1 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria bicyklický alebo tricyklický heterocyklický alebo heteroarylový kruhový systém, kde každý kruh systému má 5 až 7 atómov v kruhu.
Príklady výhodných monocyklických kruhov zahŕňajú triazol, piperidln, morfolín, tiomorfolín, imidazol, pyrolidín, pyrazol a piperazín. Príklady výhodných bicyklických kruhov zahŕňajú indol, izoindol, indolín, indazol, benzimidazol, tieno[3,2-b]pyrol, dihydrochinoxalín, dihydrocinolín, dihydronaftyridín, tetrahydronaftyridín, tetrahydrochinolín a tetrahydroizochinolín, najvýhodnejšie indol alebo indolín. Príklady výhodných tricyklických kruhov zahŕňa karbazol, fenotiazín, β-karbolín, pyrido[4,3-b]indol, 2,3,9-triazafluorén, 9-tia-2,10-diazaantracén,
3,6,9-triazafluorén, fenoxazín, dibenzo-azepín, dihydrodibenzoazepín, dihydrofenazín, dihydroakridín alebo dihydrofenantridín, najvýhodnejšie sú karbazol, fenotiazín alebo dihydrofenantridín.
Konkrétne príklady zlúčenín všeobecného vzorca I sú uvedené v Tabulke 1.
Tabuľka 1. Príklady zlúčenín vzorca I (Z je kyslík)
R4 i
.R2 ss^N,
Ŕ3
Ή'
číslo ✓ z Štruktúra
5 a Y 1 í? .cqH
U 'ΎΥί ° /\ •Ύ^ o
6 ^^CF» Y .cqH
fS
0 Λ 0
7 XQjH
0 VA· 0 S\ 0
a 0 ^CQjH .
ó Hí \ [Y^F O
9 0 XQjH
(M [YF
‘ 0 4/ O
10 ^r“
U1 0 .CG.H
A ’iľX^'F
M a \
číslo Štruktúra
35 JU JU 0 fj ťx h*
36 Ap o Α°*Η NT> 0 Λ H 0
37
38 sJp 0 ίγγΑγγ O H 0
39 <% s-y o 0 U\ H 0
40 Λ j? An ° a°H θ' 0 h3cA:h3H 0
41 J0 ? ΗΝ^γ 0 AjH ií^nV°>A*n-xv,vf 0 H3<Ách3 h 0
číslo Štruktúra
42 H3%XP o Ah 0 h3Ack3 H 0
43 2\ jQ X 0 <XH <SxN'I<0>zZ^N^X*'F ° H3crAľH3 H 0
44 ιΓ^ι ° W 0 Ah 0 H3c/SľK3 °
45 “γΥ o Ah iíAn'it>:iA'nAí^'f °H^W 0
46 |ΑΜγ“ %cV ä
47 %-9 0 Ah θκ,Λ,ν °
43 s jO s h3can>Y 0 Λκ ií^'nY^Az^“N-^v>‘f ° HaC^l^n °
Po vyhodnotení mnohých R4-N-R5 heterocyklických kruhov sa zistilo, že tricyklické zlúčeniny, kde koncové kruhy sú v podstate koplanárne, vykazujú prekvapujúco širokú kaspázovú aktivitu v porovnaní s acyklickými analógmi alebo inými tricyklickými kruhovými systémami, ktoré nie sú prakticky koplanárne. Táto významná koplanarita sa môže dosiahnuť, keď stredný kruh tricyklického kruhového systému je 5- alebo 6- členný kruh, ako je karbazolový alebo fenotiazínový kruh.
Okrem toho, tieto v podstate koplanárne tricyklické kruhové systémy, rovnako ako bicyklické kruhové systémy ako je indol a indolín, vykazujú lepšiu kaspázovú aktivitu ako zodpovedajúce zlúčeniny, kde R4-N-R5 heterocyklický kruh je monocyklický kruh ako je piperidín, piperazín alebo morfolín.
Výhodné uskutočnenie tohto vynálezu sa týka zlúčenín všeobecného vzorca I, kde R4-N-R5 je tricyklický kruhový systém, ktoré majú 1 až 6 heteroatómov, výhodne 1 až 4 heteroatómy, vybraných zo skupiny obsahujúcej dusík, kyslík alebo síru, kde koncové kruhy kruhového systému majú 5 až 7 kruhových atómov a stredový kruh má 5 až 6 kruhových atómov.
Jeden z aspektov tohto vynálezu sa týka zlúčenín všeobecného vzorca II:
R
II kde X je väzba, -S-, -0-, -CH2- alebo -NH- a Z, R1, R“ a R3 sa opísali skôr. Keď X je -CH2-, každý z metylénových vodíkov sa môže prípadne nahradiť skupinou -OR, -OH, -SR, chránenou OH (ako je acyloxy) -CN, -NH2, -NHR, -N(R)2, -NHCOR, -NHCONHR,
-NHCON(R)2, -NRCOR, -NHCO2R, -CO2R, -CO2H, -COR, -CONHR, -CON(R)2, -S(O)2R, -SONH2, -s (O) R, -SO2NHR, -NHS(O)2R, =0, =S, =NNHR, =NNR2, =N-OR, =NNHCOR, =NNHCO2R, =NNHSO2R alebo =NR, kde R je C.-4 alifatická skupina. Keď X je -NH-, vodík skupiny NH môže byť nahradený alkylom, skupinou CO(alkyl), skupinou C02 (alkyl) alebo skupinou SO2(alkyl). Výhodné skupiny pre R1, R2 a R3 sa opísali skôr.
Zlúčeniny podlá tohto vynálezu sa môžu všeobecne pripraviť metódami známymi odborníkom v odbore na prípravu analogických zlúčenín, ako sa ilustruje pomocou ďalej uvedenej reakčnej schémy a pomocou nasledujúcich preparatívnych príkladov.
Schéma 1 ho^co2r
R3
R5
I * N •^χΟ^^/COoR
Π X
Z R3 pS-N^O^COsH
R2
OH
H2N 5
Reakčné činidlá: (a) R5-N=C=Z (2), (b) NaOH/THF/H;O, (c)
EDC/DMAP/HOEt, (d) i. Dess-Martinov jodistan, (ii) TFA/DCN.
Predchádzajúca uvedená schéma I ukazuje syntetickú cestu, ktorá vedie k získaniu zlúčenín, kde R4 je vodík. Reakcia izokyanátu alebo izotiokyanátu 2 s derivátom kyseliny mliečnej vedie k vzniku karbamátu 3. Esterová skupina 3 sa hydrolyzuje s použitím zásady alebo ak je esterom terc-butylová skupina s použitím trifluóroctovej kyseliny, pričom vzniká kyselina 4, ktorá sa potom kondenzuje s aminoalkoholom 5. V závislosti od druhu R1 a R2 môže sa použiť aminoketón namiesto aminoalkoholu, čím sa obchádza nasledujúci oxidačný krok. V prípade fluórmetylketónov, kde R1 je CH2F, môže sa aminoalkohol 5 získať podľa metódy opísanej v Revesz a kol., Tetrahedron Lett., 1994, 35, 9693. Na záver sa hydroxylová skupina v zlúčenine 6 oxiduje a vzniknutá zlúčenina sa nechá reagovať zodpovedajúcim spôsobom podľa druhu substituenta R2. Napríklad, keď produkt I vyžaduje, aby R2 bola karboxylová kyselina, potom R2 v zlúčenine 6 je výhodne ester a posledný krok v schéme je hydrolýza.
Východiskové izokyanáty alebo izotiokyanáty 1 sú komerčne dostupné alebo sa môžu pripraviť reakciami amínu s fosgénom alebo fosgénovým ekvivalentom (alebo tiofosgénom na prípravu tioizokyanátov) v prítomnosti zásady ako je trietylamín. Laktátové deriváty sú komerčne dostupné alebo sa môžu pripraviť reakciou aminokyseliny s diazotačným činidlom ako je NaNO2.
Schéma II ho^co2r
Nst,
O b, c
O R3
R1 5,Ň^o co2h
T T
Z R3
Reakčné činidlá: (a) CDI/THľ, (8)/THF.
(b) MeOTf/CH2C12, (c) R4R5NH
Predchádzajúca schéma 2 ukazuje syntetickú cestu na získanie zlúčenín všeobecného vzorca I podľa tohto vynálezu, kde R15 je alkylová skupina alebo kde R4 a R5 tvoria spolu kruh. Reakcia laktátového derivátu 2 s 1, ľ-karbonyldiimidazolom (CDI) poskytuje imidazolát 7. Metylácia zlúčeniny 7 pomocou metyltriflátu, nasledovaná reakciou s amínom 8 (pozri J. Med. Chem., (1996), 39, 982) poskytuje intermediát 3. Predchádzajúca schéma I uka28 žuje ako sa môže zlúčenina 3 previesť na zlúčeninu I
Schéma III r4r5nh
R 3s.Ň^0^C02R
Reakčné činidlá: (a) COCI2/CH2CI2, (b) 1/THF.
Alternatívnou syntetickou cestou na prípravu zlúčenín I podľa tohto vynálezu, kde R4 je alkylová skupina alebo kde R4 a R5 spolu tvoria kruh, sa zobrazuje na uvedenej Schéme III. Reakcia amínu 8 s fosgénom vedie ku karbamoylchloridovému intermediátu 9. Reakcia 9 s laktátovým derivátom 1 poskytuje intermediát 3.
Schéma IV
HO^CO2R
R3
CI^ ^.C02R
Reakčné činidlá: Bu4NBr.
ΪΪ
O R3 10 (a) C13COC(O)C1/THF, (b) R4R'NH (8) , NaOH,
Schéma IV ukazuje syntetickú cestu, ktorá vedie k získaniu zlúčenín podľa tohto vynálezu, kde R4 je vodík alebo alkylová skupina, alebo kde R4 a R5 spolu tvoria kruh. Reakcia hydroxyesteru 1 s fosgénom alebo fosgénovým ekvivalentom ako je difosgén alebo trifosgén vedie k chlórformiátovému intermediátu 10. Reakcia zlúčeniny 10 s amínom 8 poskytuje intermediát 3.
Zlúčeniny podía tohto vynálezu sú navrhnuté na inhibovanie kaspázy. Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sa teda môžu stanoviť ak ide o ich schopnosť inhibovať apoptózu, uvoľňovať IL-Ιβ alebo priamo ovplyvňovať kaspázovú aktivitu. Stanovenia každej z uvedených aktivít sú uvedené ďalej v odseku Testovanie a sú tiež známe odborníkom v odbore.
Jedno z uskutočnení tohto vynálezu sa týka kompozícií obsahujúcich zlúčeninu všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnú sol a farmaceutický akceptovateľný nosič.
Ak sa v týchto kompozíciách použije farmaceutický prijateľná sol zlúčeniny podľa tohto vynálezu, sú tieto soli výhodne odvodené od anorganických alebo organických kyselín a zásad. Medzi takéto soli kyselín patrí: acetát, adipát, alginát, aspartát, benzoát, benzénsulfonát, bisulfát, butyrát, citrát, gáforát, gáforsulfonát, cyklopentánpropionát, diglukonát, dodecylsulfát, etánsulfonát, fumarát, glukoheptanoát, glycercfosfát, hemisulfát, heptanoát, hexanoát, hydrochlorid, hydrobromid, hydrojodid, 2-hydroxyetánsulfonát, laktát, maleát, metánsulfonát, 2-naftalénsulfonát, nikotinát, oxalát, pamoát, pektinát, persulfát, 3-fenylpropionát, pikrát, pivalát, propionát, sukcinát, tartarát, tiokyanát, tosylát a undekanoát. Zásadité soli zahŕňajú amónne soli, soli alkalických kovov, ako sú sodné alebo draselné soli, soli kovov alkalických zemín ako sú vápenaté alebo horečnaté soli, soli s organickými zásadami ako sú dicyklohexylamínové soli, N-metyl-D-glukamid a soli s aminokyselinami ako je arginín, lyzín a podobne.
Tiež skupiny obsahujúce zásaditý dusík môžu byť kvarrernizované pomocou takých činidiel ako sú halogenidy s krátkymi alkylmi, ako sú metyl, etyl, propyl a butylchlorid, bromidy a jodidy; dialkylsulfáty ako sú dimetylsulfát, dietylsulfát a diamylsulfát, halogenidy s dlhšími reťazcami ako sú decyl, lauryl, myristyl a stearylchlorid, bromidy a jodidy, aralkylhalidy ako je benzyl a fenetylbromid alebo iné. Takto sa získavajú vo vode alebo v oleji rozpustné alebo dispergovateľné produkty.
Zlúčeniny použité v kompozíciách a spôsoboch podľa tohto vynálezu sa môžu modifikovať pridaním vhodných funkčných skupín s cielom zvýšiť selektívne biologické vlastnosti. Tieto modifikácie sú známe v odbore a zahŕňajú také, ktoré zvyšujú biologickú penetráciu do daného biologického systému (napr. do krvi, lymfatického systému, centrálnej nervovej sústavy), zvyšujú dostupnosť orálnym podávaním, zvyšujú rozpustnosť, čím umožňujú podávanie pomocou injekcií, menia metabolizmus a menia rýchlosť vylučovania.
Farmaceutický akceptovateľné nosiče, ktoré sa môžu použiť v kompozíciách podľa tohto vynálezu, zahŕňajú (výpočet nie je úplný): iónomeniče, alumínu, stearát hlinitý, lecitín, sérové proteíny, ako sú ľudský sérový albumín, pufrovacie zlúčeniny ako sú fosfáty, glycín, kyselina sorbová, sorbát draselný, parciálne glyceridové zmesi nasýtených rastlinných mastných kyselín, voda, soli alebo elektrolyty ako je protamínsulfát, hydrogenfosforečnan sodný, hydrogenfosforečnan draselný, chlorid sodný, zinočnaté soli, koloidná silika, kremičitan horečnatý, polyvinylpyrolidón, látky na báze celulózy, polyetylénglykol, nátriumkarboxymetylcelulóza, polyakryláty, vosky, polyetylén-polypropylén blokové polyméry, polyetylénglykol a lanolín.
Podľa výhodného uskutočnenia sa kompozícia podľa tohto vynálezu formuluje pre farmaceutickú aplikáciu cicavcom, výhodne ľuďom.
Farmaceutické kompozície podľa tohto vynálezu sa môžu podávať orálne, parenterálne, inhalačnými sprejmi, miestne, rektálne, nazálne, bukálne, vaginálne alebo pomocou implantovaných rezervoárov. Termín „parenterálne sa tu používa pre subkutánne, intravenózne, intramuskulárne, intraartikulárne, intrasynoviálne, intrasternálne, intratekálne, intrahepatické, intralezionálne a intrakraniálne injekčné alebo infúzne techniky. Výhodne sa kompozície podávajú orálne alebo intravenózne.
Sterilné injikovateľné formy kompozícií podľa tohto vynálezu môžu byť vodné alebo olejové suspenzie. Tieto suspenzie sa môžu formulovať technikami známymi v odbore s použitím vhodných dispergačných alebo zmáčacích činidiel a suspendačných činidiel. Sterilné injikovateľné prípravky môžu byť tiež sterilné injikovatelné roztoky alebo suspenzie v netoxických parenterálne prijateľných riedidlách alebo rozpúšťadlách, napr. ako roztoky 1,3-butándiolu. Medzi akceptovateľné pomocné látky a rozpúšťadlá, ktoré sa môžu použiť podľa tohto vynálezu, patrí voda, Ringerov roztok a izotonický roztok chloridu sodného. Okrem toho sa bežne používajú sterilné fixované oleje ako rozpúšťadlá alebo suspenzné médium. Na tieto ciele sa môže použiť ľubovoľný nedráždivý fixovaný tuk vrátane syntetických mono- alebo diglyceridov. Pri príprave injikovateľných prípravkov sú užitočné mastné kyseliny, ako je kyselina olejová a jej glyceridové deriváty, ako sú prírodné farmaceutický akceptovateľné oleje ako je olivový olej alebo ricínový olej, zvlášť v ich polyoxyetylovaných verziách. Tieto olejové roztoky alebo suspenzie môžu tiež obsahovať riedidlá alebo dispergátory na báze alkoholov s dlhými reťazcami, ako je karboxy-metylcelulóza alebo podobné dispergačné činidlá, ktoré sú bežne používané vo formuláciách farmaceutický prijateľných dávkových foriem vrátane emulzií a suspenzií. Pre potreby formulácií podľa tohto vynálezu sa môžu použiť aj ďalšie bežne používané povrchovoaktívne činidlá ako je Tweens, Spans a ďalšie emulgačné činidlá alebo zosilňovače biokompatibility, ktoré sa bežne využívajú pri výrobe farmaceutický prijateľných tuhých, kvapalných alebo iných dávkovacích foriem.
Farmaceutické kompozície podľa tohto vynálezu sa môžu podávať v ľubovoľnej orálne akceptovateľnej dávkovej forme vrátane (výpočet nie je vyčerpávajúci) kapsúl, tabliet, vodných suspenzií alebo roztokov. V prípadne tabliet pre orálne podávanie sa tiež môžu pridať bežne používané nosiče ako sú laktóza a kukuričný škrob, lubrikačné činidlá ako je magnéziumstearát. Pre orálne podávanie vo forme kapsúl zahŕňajú používané riedidlá laktózu a sušený kukuričný škrob. Ak sú pre orálne podávanie požadované vodné suspenzie, kombinuje sa aktívna zložka s emulgačnými a suspendačnými činidlami. Ak sa to požaduje, môžu sa tiež pridať niektoré sladidlá, ochucovadlá alebo farbivá.
Alternatívne sa môžu farmaceutické kompozície podľa tohto vynálezu podávať vo forme čapikov pre rektálne podávanie. Tieto sa môžu pripraviť zmiešaním činidla s vhodným nedráždivým excipientom, ktorý je tuhý pri laboratórnej teploty ale prechádza na kvapalinu pri rektálnej teplote a teda sa bude v konečníku topiť za uvoľňovania aktívnej látky. Tieto materiály zahŕňajú kakaové maslo, včelí vosk a polyetylénglykoly.
Farmaceutické kompozície podlá tohto vynálezu sa môžu tiež podávať miestne, zvlášť, keď cieľové miesto liečenia zahŕňa oblasti alebo orgány lahko dostupné pre miestnu aplikáciu, vrátane ochorení očí, kože alebo spodného tráviaceho traktu. Vhodné formulácie pre miestne podávanie sa ľahko pripravia pre každú z týchto uvedených oblastí alebo pre každý orgán.
Miestna aplikácia na liečenie spodného tráviaceho traktu sa môže uskutočniť vo forme rektálnych čapíkových formulácií (pozri skôr) alebo vo vhodných klystírových formuláciách. Môžu sa tiež použiť miestne transdermálne náplasti.
Pre miestne aplikácie sa môžu farmaceutické kompozície formulovať vo forme vhodných mastí obsahujúcich aktívnu zložku suspendovanú alebo rozpustenú v jednom alebo viacerých nosičoch. Nosiče pre miestne podávanie zlúčenín podľa tohto vynálezu zahŕňajú, ale bez obmedzenia, minerálny olej, kvapalnú vazelínu, bielu vazelínu, propylénglykol, polyoxyetyíén, polyoxypropylén, emulgovatelné vosky a vodu. Alternatívne, farmaceutické kompozície sa môžu formulovať vo forme vhodnej suspenzie, emulzie alebo krému, obsahujúcich aktívnu zlúčeninu suspendovanú alebo rozpustenú v jednom alebo viacerých farmaceutických nosičoch. Vhodné nosiče zahŕňajú (výpočet nie je úplný) minerálny olej, sorbitan monostearát, polysorbát 60, cetyl-esterový vosk, cetaryla ikohol, 2-oktyldodekanol, benzylalkohol a vodu.
Pre očné použitie sa môžu farmaceutické kompozície formulovať ako mikronizované suspenzie v izotonickom, pH adjustovanom sterilnom fyziologickom roztoku, alebo výhodne, ako roztoky v izotonickom, pH adjustovanom sterilnom fyziologickom roztoku, a to buď bez prídavku alebo s prídavom konzervačných činidiel, ako je benzylalkóniumchlorid. Alternatívne sa môžu farmaceutické kompozície pre očné použitie formulovať do mastí ako je vazelína.
Farmaceutické kompozície podlá tohto vynálezu sa môžu podávať tiež nazálnym aerosólom alebo inhaláciou. Tieto kompozície sa pripravujú podľa techník dobre známych v odbore farmaceutických formulácií a môžu sa vyrobiť ako roztoky vo fyziologickom roztoku, s použitím benzylalkoholu alebo iného vhodného konzervačného činidla, látok podporujúcich absorpciu na zvýšenie biologickej využiteľnosti, fluórovaných uhľovodíkov a/alebo ďalších konvenčných rozpúšťacích alebo dispergačných činidiel.
V predchádzajúcom texte opísané kompozície sú užitočné najmä v terapeutických aplikáciách pri liečení ochorení vyvolaných IL-1, ochorení vyvolaných apoptózou, zápalových ochorení, autoimmúnnych ochorení, deštruktívnej poruchy kostí, proliferatívnych poruchách, infekčných ochoreniach, degeneratívnom ochorení, ochoreniach spojených s bunkovou smrťou, ochorenia spojeného s nadmerným konzumovaním alkoholu, ochorení prenášených vírusmi, uveitídy, zápalovej peritonitidy, osteoartritídy, pankreatitídy, astmy, syndrómu respiračnej nedostatočnosti u dospelých, glomerulonefritídy, reumatoidnej artritídy, systémového lupus erythematosus, sklerodermie, chronickej tyroiditídy, Graveovej choroby, autoimmúnnej gastritídy, diabetu, autoimmúnnej hemolytickej anémie, autoimmúnnej neutropénie, trombocytopénie, chronickej aktívnej hepatitídy, myasténie gravis, zápalového ochorenia čriev, Crohnovej choroby, psoriázy, atopickej dermatitídy, zjazvenia, odmietnutia štepu u hostiteľa, odmietnutia transplantovaných orgánov, osteoporózy, leukémie a príbuzných porúch, myelodysplastického syndrómu, poruchy kostí vyvolanej mnohonásobným myelómom, akútnej myelogénnej leukémie, chronickej myelogénnej leukémie, metastatického melanómu, Kaposiho sarkómu, mnohonásobného myelómu, hemoragického šoku, sepsy, septického šoku, popálenín, Shigellosis, Alzheimerovej choroby, Parkinsonovej choroby, Huntingtonovej choroby, Kenedyho choroby, priónovej choroby, cerebrálnej ischémie, epilepsie, myokardiálnej ischémie, akútneho a chronického ochorenia srdca, myokardiálneho infarktu, kongestívneho srdcového zlyhania, aterosklerózy, náhrady koronárnych tepien, spinálnej muskulárnej atrofie, amyotrofickej laterálnej sklerózy, sklerózy multiplex, HlV-vyvolanej encefalitídy, stárnutia, alopecie, neurologického poškodenia vyvolaného mŕtvicou, ulceratívnej kolitídy, traumatického mozgového poškodenia, zranenia miechy, hepatitídy-B, hepatitídy-C, hepatitídy-G, žitej horúčky, horúčky dengue alebo japonskej encefalitídy, rôznych foriem pečeňových ochorení, renálneho ochorenia, polyapticej choroby obličiek, gastrického ochorenia vyvolaného H. pylori a ochorenia spôsobeného dvanástnikovým vredom, HIV infekcie, tuberkulózy a meningitídy. Zlúčeniny a kompozície podľa tohto vynálezu sú tiež užitočné pri liečení komplikácií spojených s bypassom koronárnych tepien a ako súčasť imunoterapie na liečenie rôznych foriem rakoviny.
Množstvo zlúčeniny prítomnej v skôr opísaných kompozíciách by malo byť dostatočne veľké na vyvolanie detegovatelného zníženia závažnosti ochorenia alebo kaspázovej aktivity a/alebo bunkovej apoptózy podľa merania ľubovoľnou metódou stanovenia opísanou v príkladoch.
Zlúčeniny podľa tohto vynálezu sú tiež užitočné v spôsoboch chránenia buniek, ako sa napríklad požaduje pri transplantácii orgánov alebo pri konzervovaní krvných produktov. Podobné využitia kaspázových inhibítorov sa opísali (Schierle a kol., Náture Medicíne, 1999, 5, 97). Spôsob zahŕňa ošetrenie buniek alebo tkanív, ktoré sa majú chrániť, s roztokom obsahujúcim kaspázový inhibítor. Potrebné množstvo kaspázového inhibítora závisí od účinnosti inhibítora pre daný bunkový typ a od požadovaného časového intervalu na ochranu buniek pred apoptickou bunkovou smrťou.
Podlá ďalšieho uskutočnenia môže kompozícia podľa tohto vynálezu ďalej obsahovať ďalšie terapeutické činidlo. Tieto činidlá zahŕňajú (výpočet nie je úplný) trombolytické činidlá ako je tkanivový plazminogénny aktivátor a streptokináza. V prípade použitia ďalšieho činidla, môže sa druhé činidlo podávať buď ako oddelená dávková forma alebo ako súčasť jedinej dávkovej formy so zlúčeninami alebo kompozíciami podľa tohto vynálezu.
Malo by sa chápať, že konkrétne dávkovanie a liečebný režim pre konkrétneho pacienta budú závisieť od mnohých faktorov, vrátane aktivity konkrétnej použitej zlúčeniny, veku, telesnej hmotnosti, celkového zdravia, pohlavia, diéty, času podávania, rýchlosti vylučovania, kombinácii liekov a rozhodnutia ošetrujúceho lekára a od závažnosti konkrétneho liečeného ochorenia. Množstvo aktívnych zložiek bude tiež závisieť od konkrétnej zlúčeniny a ďalších terapeutických činidiel, ak sú prítomné v kompozícii.
Vo výhodnom uskutočnení poskytuje vynález spôsob liečenia cicavcov, ktorí majú jedno zo skôr uvedených ochorení, ktorý zahŕňa krok podávania už uvedenej farmaceutický prijatelnej kompozície uvedeným cicavcom. V tomto uskutočnení, ak sa pokusne pacientovi podáva ďalšie terapeutické činidlo alebo kaspázový inhibítor, toto sa môže podávať spolu so zlúčeninou podlá tohto vynálezu v jedinej dávkovej forme alebo oddelene v oddelenej dávkovej forme. Ak sa podáva ako oddelená dávková forma, ďalší kaspázový inhibítor alebo činidlo sa môže podávať pred, v rovnakom čase, alebo až následne po podaní farmaceuticky prijatelnej kompozície obsahujúcej zlúčeninu podľa tohto vynálezu.
S cieľom lepšie pochopiť tento vynález sa ďalej uvádzajú preparátívne príklady a príklady testovania zlúčenín podľa tohto vynálezu. Tieto príklady sú uvedené len na ilustráciu a nie sú chápané ako obmedzujúce rozsah tohto vynálezu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Nasledujúce príklady opisujú syntetické postupy na prípravu vybraných zlúčenín podľa tohto vynálezu.
Príklad 1 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(karbazolkarbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Metóda A:
terc-Butylester kyseliny ( S)-2-(chlórkarbamoyloxy)-3-metylbutánove j
K roztoku difosgénu (4,55 g) v THF (34 ml) sa pri 0cC prikvapkal roztok terc-butylesteru kyseliny (S)-2-hydroxy-3-metylbutánovej (prípravu pozri Tetrahedron Lett., (1993), 7409) (4,0 g) a pyridínu (1,82 g) v 34 ml THF v priebehu 25 minút. Vzniknutá zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu v priebehu 4 hodín. Zmes sa potom filtrovala cez vrstvu celinu a filtrát sa koncentroval pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustil v 200 ml dietyléteru a znova sa filtroval cez vrstvu celitu. Filtrát sa koncentroval pri zníženom tlaku, pričom vznikol svetložltý olej (5,27 g): LH NMR (400 MHz, CDCI3) δ 0,98-1,10 (6H, m), 1,55 (9H, s), 2,30 (IH, m), 4,83 (IH, m).
Metóda B:
terc-Butylester (S)-3-metyl-2-(karbazolkarbamoyloxy)butánovej kyseliny
K roztoku karbazolu (15,15 g) v dichlórmetáne (180 ml) a THF (142 ml) sa pri 0°C pridal granulovaný hydroxid sodný (5,45 g) a následne tetrabutylamónium bromid (2,93 g). Vzniknutá zmes sa miešala 30 minút a potom sa prikvapkal roztok chlórformiátu (21,41 g) v THF (81 ml) v priebehu 55 minút. Zmes sa potom nechala zahriať na laboratórnu teplotu cez noc. Potom sa pridal dichlórmetán (1 1) a voda (350 ml) a organická fáza sa odstránila. Vodná fáza sa extrahovala s dichlórmetánom (2 x 250 ml) a spojené organické extrakty sa premyli vodou (200 ml) a potom soľankou (200 ml), sušili nad síranom horečnatým, filtrovali a koncentrovali. Zvyšok sa čistil pomocou flash chromatografie (0-5% etylacetát/hexán) , čím vznikla výsledná zlúčenina vo forme bezfarebného oleja (29,3 g): 3H NMR (400 MHz,
CDC13) δ 1,15-1,23 (6H, m), 1,55 (9H, s), 2,52 (1H, m), 5,27 (1H,
d), 7,36-7,57 (4H, m), 8,03 (2H, d), 8,47 (2H, d).
Metóda C:
(S)-3-Metyl-2-(karbazolkarbamoyloxy)butánová kyselina
O
OH
Trifluóroctová kyselina (84 ml) sa prikvapkala k ľadom chladenému roztoku terc-butylesteru (S)-3-metyl-2-(karbazolkarbamoyloxy)butánovej kyseliny (4,11 g) v bezvodom dichlormetáne (300 ml) . Zmes sa miešala pri 0°C počas 2 hodín a potom 1 hodinu pri laboratórnej teplote. Zmes sa koncentrovala pri zníženom tlaku a zvyšok sa potom rozpustil v suchom dichlormetáne a rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku. Tento proces sa niekoľkokrát opakoval s cieľom odstrániť prebytočnú trifluóroctovú kyselinu pričom vznikla kyselina vo forme svetlozelenej gumy (3,30 g): XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 1,12-1,37 (6H, m), 2,70 (1H, m), 5,47 (1H, m), 7,32-7,56 (4H, m), 8,00 (2H, d), 8,37 (2H, d).
Metóda D terc-Butylester kyseliny [3S/R, 4S/R]-5-fluór-4-hydroxy-3-((S)-3-metyl-2-(karbazol)-karbamoyloxybutyrylamido)pentánovej
Miešaný roztok kyseliny (S)-3-metyl-2-(karbazolkarbamoyloxy)butánovej (3,30 g), terc-butylesteru 3-amino-5-fluór-4-hydroxypentánovej kyseliny (2,42 g), HOBt (1,58 g), DMAP (1,49 g) a THF (80 ml) sa ochladil na 0°C a potom sa pridalo EDC (2,42 g). Zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu v priebehu 16 hodín a potom sa koncentrovala pri zníženom tlaku. Zvyšok sa čistil pomocou flash chromatografie (15-45% etylacetát/hexán), pričom vznikla výsledná zlúčenina vo forme bielej
peny (4,60 g): NMR (400 MHz, CDC13) δ 1,09-1,50 (15H, m) ,
2,49-2,80 (3H, m) 3,20-3 , 62 ( 1H, m( ), 3,92-4,58 (4H, m) ,
5,32-5,42 ( 1H, d) , 6, 86 (1H, brm) , 7, 40- •7,55 (4H, m) , 8,02 (2H,
d) , 8,35 (2H, m) ; 19F NMR (376 MHz, CDCI3) -229, 6, -229,7,
-230,8, -231,4.
Metóda E terc-Butylester kyseliny [3S/F]-5-fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(karbazolkarbamoyloxybutyrylamino]pentánovej
O
O
Miešaný roztok terc-butylesteru [3S/R, 4S/í?]-5-f luór-4-hydroxy-3-((S)-3-metyl-2-(karbazol)-karbamoyloxybutyrylamido)pentánovej kyseliny (4,60 g) v bezvodom dichlórmetáne (100 ml) sa nechal reagovať s 1,1,1-triacetoxy-l,1-dihydro-l, 2-benzjodoxol-3(lH)-ónom (4,68 g) pri 0°C. Vzniknutá zmes sa miešala 2 hodiny pri 0°C, zriedila sa s etylacetátom a potom naliala do 1:1 zmesi nasýteného vodného roztoku hydrogenuhličitanu sodného a nasýteného vodného roztoku tiosíranu sodného. Organická vrstva sa odstránila a vodná vrstva sa znova extrahovala s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa sušili nad síranom horečnatým a koncentrovali. Zvyšok sa čistil pomocou flash chromatografie (10-40% etylacetát/hexán), pričom vznikla výsledná zlúčenina vo forme bielej tuhej látky (3,96 g): :Η NMR (400 MHz, CDCÍ3) δ 1,85 (4,5H, s), 1,94-1,31 (6H, m), 1,36 (4,5H, s), 2,59 (1H, m),
2,70-3,11 (2H, m), 4,91-5,31 (3H, m), 5,40-5,49 (1H, m), 7,25 (1H, brs), 7,42 (2H, m), 7,53 (2H, m), 8,04 (2H, m), 8,35 (2H,
m); i9F NMR (376 MHz, CDC13) -232,0, -232,1.
Príklad IA [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-((S)-3-mety1-2-(karbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa už opísalo pre Metódu C. Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (88% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1721,2, 1695,6, 1664,9, 1449,8,
1378,1, 1198,9, 1040,1, 758,5 cm'1; NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ
1,10 (6H, brm), 2,41 (1H, m), 2,54-3,04 (2H, m), 4,31-4,82 (1,6H, m, CH2F) , 5,10.-5,41 (2,4H, m), 7,45 (2H, m), 7,57 (2H, m),
8,22 (2H, m), 8,30 (2H, m), 8,51-8,99 (1H, brm), 12,60 (1H, brs); 13C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 19,0, 19,1, 19,3, 30,4, 30, 5, 30,6, 32,9, 34,5, 34,7, 47,3, 47,4, 52,0, 52,3, 80,4, 80,8,
83,2, 83,4, 83,4, 85,1, 85,2, 116,2, 116,3, 124,1, 125,7, 125,9,
137,9, 151,7, 151,9, 152,0, 168,8, 169,0, 169,2, 172,0, 172,1,
173, 1, 173,2, 202,2, 202,4, 202,5, 202,6; 19F NMR (376 MHz, d6-DMSO) -226,6 (t), -226,8 (t), -230,5 (t), -230,9 (t), -232,9 (t), -233,0 (t); MS (ESI +ve) 443(M+H).
Príklad 2 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S) - 3-metyl-2-(3-chlórkarbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa už opísalo v Metódach A-E posledný krok)
Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (99% IČ (tuhá fáza) 1721,2, 1690,5, 1664,9, 1444,7,
1367,9, 1209,1, 1040,1 cm'1; 3H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1,02-1,13 (6H, m), 2,40 (1H, m), 2,50-2,99 (2H, m), 4,30-4,85 (1,6H, m),
5,09-5,48 (2,4H, m), 7,48 (1H, m), 7,56-7,66 (2H, m), 8,20-8,32 (3H, m), 8,39 (1H, m), 8,55-8,99 (1H, brm) , 12,5 (1H, br), 13C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 18, 1, 18, 9, 19, 1, 30,4, 30,5, 33,0,
34,5, 34,7, 47,4, 52,0, 52,3, 80,6, 80,9, 81,1, 83,4, 83,43,
85,1, 85,2, 103,8, 104,0, 117,0, 119,3, 121,3, 122,3, 124,3,
124.7, 127,2, 127,4, 127,9, 128,5, 136,5, 138,4, 151,5, 151,6,
151.7, 168,7, 168,9, 169,0, 169,1, 172,0, 172,1, 173,1, 173,2,
202,2, 202,4, 202,44, 202,8 (C); 19F NMR (376 MHz, d6-DMSO) 226,6 (t), -226,8 (t), -230,4 (t), -230,9 (t), -231,0 (t),
-232,8 (t), -232,84 (t), -232,9 (t); MS (ESI +ve) 477 (M+H).
Príklad 3 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-mety1-2-(3, 6-dichlcrkarbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa už opísalo v Metódach A-E. Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (99% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1721,2, 1659,7, 1470,3 1434,4,
1367,9, 1209,1, 1075,9, 1045,2 cm'1; 3H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0,98-1,14 (6H, m), 2,30-2,50 (1H, m), 2,50-3,01 (2H, m), 4,29-4,84 (1,5H, m), 5,09-5,41 (2,5H, m), 7,66 (2H, m), 8,19-8,29 (2H, m), 8,45 (2H, m), 8, 57-8,99 (1H, brm), 12,60 (1H, br, OH);
13C NMR (100 MHz, ds-DMSO) δ 15,5, 19,1, 19,2, 30,4 , 30,45, 30,6,
33,0, 34,5, 34,7, 47,3, 47,5, 52,0, 52,3, 80,8, 81,1, 81,2,
83,4, 84,43, 85,1, 85,2, 117,8, 121,1, 126,3, 128,4, 128,7,
136,9, 151,2, 151,4, 168,6, 168,8, 168,9, 168,95, 172,0, 172,04,
173,1, 173, 14, 202,2, 202,3, 202,4, 202,6; 19FNMR (376 MHz, d6-DMSO) -226,6 (t), -226,8 (t), -230,4 (t), -230,8 (t), -232,8 (t), -232,9 (t); MS (ESI +ve) 511/513 (M+H).
Príklad 4 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(2-chlórkarbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Metóda F:
4'-Chlór-2-nitrobif enyl
K roztoku 2-brómnitrobenzénu (646 mg) v 17 ml THF sa pod dusíkovou atmosférou pridal tetrakis(trifenylfosfin)paládium (0) (900 mg) . Vzniknutá zmes sa miešala 20 minút pri laboratórnej teplote a potom sa pridal roztok 4-chlórfenylborónovej kyseliny (1,0 g) v 17 ml etanolu a vzniknutá zmes sa miešala pri laboratórnej teplote 1 hodinu. Potom sa pridal 2M roztok uhličitanu sodného (17 ml) a reakčná zmes sa zahrievala 2 hodiny na teplotu varu pod spätným chladičom. Zmes sa potom nechala ochladiť a koncentrovala sa pri zníženom tlaku. Zvyšok sa rozpustil v 100 ml etylacetátu a vodná vrstva sa odstránila. Organická fáza sa premyla so solankou (20 ml) , sušila nad síranom horečnatým, filtrovala a koncentrovala. Zvyšok sa čistil flash chromatografiou na silikágéli (0-10% etylacetát/hexán), pričom vznikla výsledná zlúčenina vo forme žltej tuhej látky (646 mg): :H NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,24-7,31 (2H, m), 7,41-7,47 (3H, m),
7,52 (1H, m), 7,65 (1H, m), 7,90 (1H, d).
Metóda G
2-Chlórkarbazol
Cl
Zmes 4'-chlór-2-nitrobifenylu (640 mg) a trietylfosfitu (1,9 ml) sa zahrievala 3 hodiny na teplotu 150°C. Zmes sa potom nechala ochladiť a čistila sa pomocou flash chromatografie (5-10% etylacetát/hexán), pričom vznikla výsledná zlúčenina vo forme bielej tuhej látky (382 mg); NMR (400 MHz, dg-DMSO) δ 7,12-7,23 (2H, m), 2,40 (1H, m), 7,46-7,54 (2H, m), 8,12 (2H,
d) .
Príklad 4 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-mety1-2-(2-chlórkarbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa už opísalo v Metódach A-E
Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (99% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1731,4, 1695,6, 1664,9, 1424,2,
1367,9, 1326, 9, 1193,7, 1045,2 cm'1; NMR (400 MHz, d5-DMSO) δ
1,58-1,70 (6H, m),
-5,39 (1,4H, m),
8,73-8,90 (4H, m),
2,85-3,10 5,65-5,98 9,10-9,56 (IH, m), 3,10-3,54 (2H, m), (2,6H, m), 7,94-8,20 (3H (IH, brm) , 13,2 (IH, br) ;
4,85m) ,
C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 17,7, 17,9, 19,0, 19,1, 19,2, 30,4, 30,5,
33,0, 34,5, 34,7, 52,0, 52,3, 80, 6, 80, 9, 81,1, 83,4, 33,43,
85,1, 85,2, 104,0, 117,1, 121,0, 122,1, 124,2, 124,4, 124,6,
124,8, 129,0, 132,0, 138,2, 138,4, 151,6, 151,61, 168,7, 168,9,
169,0, 172,0, 172,05, 202,4, 202,42, 202,6; 19F NMR (376 MHz, d6-DMSO) -225,99 (t), -226,2 (t), -229,8 (t), -230,3 (t), -232,3 (t), -232,4 (t); MS (ESI + ve) 477 (M+H).
Príklad 5 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-mety1-2-(2,3-dichlórkarbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa už opísalo v Metódach A-E. 2,3-Dichlórkarbazol sa pripravil podobným spôsobom ako sa opísalo v metódach F a G. Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (98% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1721,2,
1659,7, 1434,4, 1367,9, 1204,0, 1188, 6, 1045,2 cm'1; *H NMR (400 MHz, de-DMSO) δ 1,04-1,14 (6H, m), 2,29-2,48 (1H, m), 2,53-3,00 (2H, m), 4,30-4,84 (1,7H, m), 5,09-5,41 (2,3H, m), 7,49 (1H, m), 7,63 (1H, m), 8,20-8,33 (2H, m), 8,42-8,49 (1H, m),
8,62 (1H, m), 8,80-9,00 (1H, brm), 12, 5 (1H, br) ; 13C NMR
(100 MHz, d6-DMSO) δ 17,7, 17,9, 19,0, 19, 1, 30,5, 33,0, 34,5,
34,7, 47,5, 52,0, 52,3, 80,8, 81,0, 81,2, 83, 4, 85, 1, 85,2,
116,3, 117,9, 121,5, 122,4, 124,1, 124,6, 126,1, 126,6, 129,0,
129,7, 136,8, 138,5, 151,4, 151,45, 168,6, 168,9, 172,0, 172,03,
173,1, 202,2, 202,3, 202,4, 202,5; 19F NMR (376 MHz, d6-DMSO)
226,6 (t), -226,8 (t), -230,3 (t), -230,8 (t), -232,8 (t),
-232,9 (t); MS (ESI +ve) 513 (M+H).
Príklad 6 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(2-trifluórmetyl)karbazolkarbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach A-E. 2-Trifluórmetylkarbazol sa pripravil podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach F a G. Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (85% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1731,4, 1695, 6, 1695,7, 1434,4, 1321,8, 1198,9, 1122,1, 1065,7 cm’1;
ľH NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1,06-1,15 (6H, m), 2,42 (1H, m),
2,50-3,01 (2H, m), 4,29-4,83 (1,6H, m), 5,08-5,42 (2,4H, m),
7,53 (1H, m), 7,68 (1H, m), 7,83 (1H, m), 8,29-8,40 (2H, m),
8,48 (1Η, m), 8,64 (1H, m), 8,80-9,01 (1H, m), 12,60 (1H, brs);
13C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 17,4, 17,6, 19,0, 19,1, 30,4, 31,0,
32,9, 34,5, 34,7, 52,0, 52,3, 80,7, 80,9, 81,1, 81,1, 83,4,
85,1, 113,3, 116,3, 120,7, 120,9, 123, 6, 124,4, 126,2, 127,2,
127,5, 127,8, 128,1, 128,9, 137,2, 138,9, 151,6, 168,6, 169,0,
172,0, 202,2, 202,3, 202,4, 202, 6; 19F NMR (376 MHz, dg-DMSO)
(t) ,
-60,4 (s),
-231,0 (t),
-226, 6 (t), -226, 8 (t),
-232,9 (t), -233,0 (t); MS
-229,9 (t), -230,4 (ESI +ve) 511 (M-H).
Príklad 7 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(2-metylkarbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach A-E. Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (90%
posledný krok) : IČ (tuhá fáza) 1726,3, 1700,7, 1664,9, 1552,2,
1460,0, 1552,2, 1460,0, 1367,9, 1332,0, 1209,1, 1193,7,
1040,1 cm _1; 'H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1,01-1,19 (6H, z 2,30-
-3,00 ( 6 H, m), 4,29-4,85 (1,5 H, m), 5,11-5,52 (2,5H, f.. , 7,29
(1H, m), 7,45 (1H, m), 7,55 (1H, rrf ) , 8,05-8, 18 (3H, 8,27
(1H, m) , 8,50-9,10 (1H, brm), 12,50 (1H, brs), 13C NMR (100 MHz,
d6-DMSO) δ 17,7, 18,0, 19,0, 19,1, 19,2, 22,2, 30,4, 30,5, 30,6,
30, 6, 33,0, 34,5, 34 ,7, 47,4, 52,i 0, 52, 3, 52,7, 8 ľ 1 t r 80, 6,
80,7, 80,8, S 53,2, 83, 4, £ i 3, 5, 85,2, 85,2, 103,8, 104, - t 116,2,
116,3, 116, 6, 120, 3, 120, 4, 123,4, 124,0, 125,2, 125, 5 , 127,3,
137,5, 137, 9, 138, 2, 151, 7, 151,9, 151,9, 168,8, 169, 0, 169,2,
169,2, 172, o, 172, 1, 173, 1, 173,2, 202,3, 202,4, 202, 5, 202,6;
19F NMR (376 MHz, d6-DMSO) -226,55 (t), -226,76 (t), -230,43 (t),
4Ί
-230,89 (t), -232,84 (t), -232,97 (t).
Príklad 8 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-2-(karbazolkarbamoyloxy)butyrylamino] pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach A-E. Chlórformiát sa pripravil z terc-butylesteru (S)-2-hydroxybutánovej kyseliny ako sa opísalo v Metóde A. Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (90% posledný krok) : IČ (tuhá fáza) 1716,1, 1654,6, 1449,8, 1372,9, 1326,9, 1204,0,
1050.4, 1029,9 cm'1; 3H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1,03-1,12 (3H,
m), 1,96-2,15 (2H, m), 2,50-3,01 (2H, m), 4,31-4,82 (1,8H, m),
5,11-5,43 (2,2H, m), 7,45 (2H, m), 7,59 (2H, m), 8,18-8,32 (4H,
m), 8,58-9,05 (1H, brm) , 12,60 (1H, brs); 13C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 9,8, 9,9, 9,94, 24, 9, 25, 1, 25,2, 33,0, 34,6, 34,7,
47.4, 52,0, 52,3, 77,1, 77,3, 77,4, 77,45, 83,4, 83,5, 85,2,
85,22, 116,3, 120,6, 124,0, 125,7, 127,9, 137,9, 151,5, 151,7,
169,5, 169,8, 172,0, 172,1, 173,1, 202,3, 202,4, 202,5, 202,6;
1SF NMR (376 MHz, d6-DMSO) -226,6 (t), -226,8 (t), -230,4 (t), -231,0 (t) , -232,9 (t), -233,0 (t) .
Príklad 9 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S) - 3, 3-dimetyl-2-(karbazolkarbamoyloxy) butyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach A-E. Chlórformiát sa pripravil z terc-butylesteru (S)-2-hydroxy-3,3-dimetylbutánovej kyseliny (prípravu pozri Tetrahedron Lett., (1993), 7409) ako sa opísalo v metóde A. Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (94% posledný krok) : IČ (tuhá fáza) 1782,7, 1721,2, 1526,6, 1444,7, 1373,0, 1332,0, 1301,3,
1198.9, 1117,0, 1040, 1, 753,3 cm'1; NMR (400 MHz, dg-DMSO) δ
1,15 (9H, s), 2,50-2,98 (2H, m), 4,29-4,88 (1,5H, m), 4,97-5,45 (2,5H, m), 7,45 (2H, m), 7,59 (2H, m), 8,23 (2H, m), 8,33 (2H,
m), 8,50-8,97 (IH, brm) , 12,50 (IH, brs); 13C NMR (100 MHz, dg-DMSO) δ 27,3, 33,4, 34,5, 34,6, 34,7, 34,8, 35,1, 52,5, 52,9,
83,5, 83,9, 84,0, 84,1, 84,3, 85,7, 85,73, 116,7, 116,8, 121,2,
124.6, 124,64, 126,2, 128,4, 138,4, 152,2, 152,4, 152,5, 168,4,
168.7, 168,8, 168,9, 172,6, 172,65, 173,6, 5 202,6, 202,8,
202.9, 203,0; 19F NMR (376 MHz, dg-DMSO) -226, 5 (t), -226,6 (t), -230,9 (t), -231,5 (t), -232,9 (t), -233,0 (t); MS (ESI +ve) 457 (M + H) .
Príklad 10 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-2-(2-chlórkarbazolkarbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach A-E. Chlórformiát sa pripravil z terc-butylesteru (S)-2-hydroxybutánovej kyseliny podľa opisu v Metóde A. 2-Chlórkarbazol sa pripravil podľa opisu v Metóde F-G. Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (77% posledný krok) : ľC (tuhá fáza) 1733,03, 1699,89, 1662,97, 1448,18, 1423,38, 1369,84,
1332,48, 1215,16, 1199,62, 1052,26, 1033,17, 764,57, 747,53, 720,08, 651,85 cm1; NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1,06-1,10 <3H, m), 2,01-2,09 (2H, m), 2,53-2,98 (2H, m), 4,34-4,78 (1,6H, m), 5,14-5,39 (2,4H, m), 7,45-7,61 (3H, m), 8,24-8,31 (4H, m), 8,63-8,99 (1H, brm) , 12,50 (1H, brs); 13C NMR (100 MHz, d — DMSO) δ
9,7, 23,7, 25,0, 31,3, 34,6, 34,8, 52,0, 52,3, 77,4, 77,6, 83,4,
85,2, 110,9, 111,6, 116,2, 116,3, 119,0, 119,4, 120,7 , 120,9,
121,9, 122,1, 124,2, 124,3, 124,6, 124,8, 126,3, 128,3 , 130,2,
132,0, 138,1, 138,4 , 151,3, 169, 6, 172, 1; 19F NMR : 276 MHz,
dg-DMSO) -226,60 (t), -226,83 (t), -230,34 (t), -231,88 (t),
-232,84 (t), -232,99.
Príklad 11 [ 3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3- [(S) - 3-metyl-2-(indol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
F
,51-8, 63 (1H, m), 8,91-9,45
MHz, d6-DMSO) δ 15,5, 17,3,
34, 7, 47,4 , 52,0, 52,3,
85, 1, 85,2, 104,02, 108,7,
125,0, 126,3, 130,5, 135,0,
172,0, 172,1, 173,1, 202,2,
MHz, d6-DMSO) -226,1 (t),
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo skôr v Metódach A-E. Produkt sa izoloval ako biela tuhá látka (92% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1731,4, 1664,9, 1536,8,
1454,9, 1393,5, 1326,9, 1239,8, 1035,0 cm'1; XH NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 1, 30-1, 62 (6H, m), 2,79 (1H, m), 3, 00-3, 48 (2H, m), 4,77-5,04 (1, 6H, m), 5,42-5,88 (2,4H, m), 7,29 (1H, m), 7,70-7,90 (2H, m), 8,10-8,31 (2H, m), (1H, m), 13,0 (1H, brs); 13C NMR (1 17, 6, 18,9, 19,2, 30,6, 32, 9, 3'
65,3, 80,0, 80,3, 80,5, 83,4, 83,^
108,71, 108,8, 114,9, 122,0, 123,5
150.4, 168,8, 169,0, 169,1, 169,14
202.4, 202,5, 202,6; 19F NMR (3'
-226,3 (t), -230,0 (t), -230,5 (t), -232,3 (t), -232,4 (t),
-232,5 (t), -232,6 (t); MS (ESI +ve) 393 (M+H).
Príklad 12 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(fenotiazín)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Metóda H:
terc-butylester (S)-3-metyl-2-(fenotiazín)karbamoyloxybutánovej kyseliny
O
K miešanému roztoku terc-butylesteru (S)-2-hydroxy-3-metylbutánovej kyseliny (príprava pozri Tetrahedron Lett., (1993), 7409) (300 mg) v 5 ml THF sa pri 0°C pridal hydrid sodný (60% suspenzia v minerálnom oleji, 72 mg). Vzniknutá zmes sa miešala 30 minút a potom sa pridal fenotiazín-10-karbonylchlorid (450 mg) a zmes sa nechala zahriať na laboratórnu teplotu v priebehu 12 hodín. Reakčná zmes sa zriedila s etylacetátom (15 ml) a vodou (3 ml). Organická fáza sa oddelila, vodná fáza sa extrahovala s 2 x 5 ml etylacetátu. Spojené organické vrstvy sa potom premyli solankou (5 ml), sušili nad síranom horečnatým, filtrovali a koncentrovali. Zvyšok sa čistil pomocou flash chromatografie (0-10% etylacetát/hexán) , pričom vznikla výsledná zlúčenina vo forme bezfarebného oleja (528 mg): ľH NMR (400 MHz, CDCI3) δ 0,75-0,96 (6H, m), 1,58 (9H, s), 2,20 (IH, m), 4,86 (IH, d), 7,12-7,45 (6H, m), 7,70 (2H, m).
(S)-3-metyl-2-(fenotiazín)karbamoyloxybutánová kyselina
Deprotekcia terc-butylesteru (S)-3-metyl-2-(fenotiazín)karbamoyloxybutánovej kyseliny (528 mg) s použitím trifluóroctovej kyseliny podľa opisu v metóde C poskytla kyselinu vo forme tuhej bielej látky (440 mg): ľH NMR (400 MHz, CDC13) δ 0,77-1,00 (6H, m), 2,29 (IH, m), 5,02 (IH, d), 7,15-7,48 (6H, m), 7,70 (2H, m).
Príklad 12 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(fenotiazín)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach C-E. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky (98% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1782,7, 1710,9, 1521,5, 1465,2, 1260,3, 1219,4, 1168,1, 1045,2, 758,5 cm’1; 3H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0,64-0,87 (6H, m), 1,96-2,16 (1H, m), 2,40-2,98 (2H, m), 4,50-5,42 (4H, m), 7,28 (2H, m), 7,39 (2H, m), 7,49 (2H, m), 7,68 (2H, brm) , 7,88-8,91 (1H, brm) , 12,61 (1H, brs); 13C NMR (100 MHz, d6~DMSO) δ 16,8, 17,1, 19,0, 19,2, 30,3,
30,5, 33,0, 33,2, 34,5, 34,8, 47,3, 52,0, 52, 4, 79,3, 79, 6,
79,7, 83,4, 83,5, 85,1, 85,2, 103,8, 127,1, 127,2, 127,3, 127,4,
131,4, 138,0, 138,1, 152,6, 152,8, 158,82, 169,3, 169,5, 169,7,
172,0, 172,1, 172,13, 202,3, 202,4, 202,6, 202,8; :9E NMR (376MHz, d6-DMSO) -226,6 (t), -226,8 (t), -230,3 (t), -231,3 (t), -232,9 (t), -233,0 (t); MS (ESI +ve) 475 (M+H).
Príklad 13 [3S/.R] - 5-Fluór-4-oxo-3 - [ (S) -3-metyl-2- (2-chlórfenotiazín) karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Metóda I:
2-Chlórfenotiazín karbamoylchlorid
K suspenzii 2-chlórfenotiazínu (2 g) v xyléne (20 ml) sa pridal difosgén (3,4 g). Zmes sa zahrievala 18 hodín na teplotu 140°C. Zmes sa potom ochladila a xylén sa odstránil pri zníženom tlaku. Zvyšok sa čistil pomocou flash chromatografie (2-5% etylacetát/hexán) , pričom vznikla výsledná zlúčenina vo forme hnedej tuhej látky (2,04 g): XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 7,26-7,43 (4H, m), 7,45-7,51 (1H, m), 7,59-7,68 (2H, m).
Príklad 13 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-2-[(S)-3-metyl-2-(2-chlórfenotiazín)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach H a C-E. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky pomocou reverznej fázy HPLC (61% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1732, 1460, 1365, 1207 cm’1; ΧΗ NMR (400 MHz, dg-DMSO) δ
0,70-0,87 (6H, m), 2,02-2,10 (1H, m), 2,58-2,90 (2H, m),
4,34-5,37 (4H, m), 7,27-7,88 (7H, m), 8,31-8,81 (1H, m);
C NMR (100 MHz, ds-DMSO) δ 16,7/16,9, 18,9/19,1, 30,3/30,3, 34,5/34,8,
52,0/52,4, 79,6/80,0, 84,2/84,3, 127,0, 127,3, 127,3, 127,6,
128,0, 129,0, 130,5, 130,9, 131,7, 137,5/137,5, 139,1/139,1,
152,3/152,5, 169,6/169,7, 172,0/172,1, 202,3/202,7 (2d, J
14,1/14,0); 19F NMR (376 MHz, d6-DMSO) -226,6 (t), -226,8 (t),
-233,0 (t), -233,1 (t).
Príklad 14 [35/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(3-chlórfenotiazín)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach H, la C-E. Fenotiazín sa pripravil podlá postupu opísaného v J, Chem. Soc. (1970), 2437-2441. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky (89% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1717, 1527, 1469, 1350, 1322, 1217, 1042 cm'1; :Η NMP (400 MHz, dg-DMSO) δ 0,67-0,85 (6H, m), 2,00-2,06 (1H, m), 2,58-2,87 (2H,
m), 4,33-4,86 (2,6H, m), 5,12-5,36 (1,4H, m), 7,27-7,30 (1H, m), 7,38-7,51 (3H, m), 7,63-7,68 (3H, m), 8,24-8,82 (1H, m); 13C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 17,3/17,6 (CH3) , 19,4/19,5 (CH3) , 30,8/30,8,
35,0/35,3, 52,5/52,9, 80,0/80,1, 84,7/84,8, 127,2, 127,3, 127,6,
127,9, 128,6, 130,7, 131,2, 133,7, 136,9/137,0, 137,8/137,8,
153,0/153,2, 170,1/170,2, 172,5/172,6, 202,9/203,2; ;;F NMR (376MHz, dg-DMSO) -226,7 (br), -226,9 (br), -233,0 (t); MS (ESI + ve) 509/511 (M+H).
Príklad 15 [3S/P]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(3,7-dichlórfenotiazín)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Cl
Zlúčenina v Metódach H, opísaného v J.
vo forme bielej sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo I a C-E. Fenotiazín sa pripravil podlá postupu Chem. Soc. (1970), 2437-2441. Produkt sa izoloval tuhej látky pomocou reverznej fázy HPLC (76% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1793, 1214, 1086, 1044 cm'1; 3Η NMR (400 MHz,
m), 0,84-0,88 (3H, m), 2,05-2,12 (1H,
4,31-4,87 (2,5H, m), 5,09-5,36 (1,5H,
1721, 1521, 1465, 1317, d6-DMSO) δ 0,71-0,76 (3H, m), 2,58-2,92 (2H, m),
m) , 7,47-7,56 (2H, m) ,
7,67-7,71 (2H, m), 7,72-7,81 (1H, m), 8,39-8, 87 (1H, m); 13C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 16,7/16,7/17,0, 19,0/19,1/19,2/19,3, 30,3/30,3/30,4, 34,5/34,8, 52,0/52,4, 79,8/80,1, 84,2/84,3, 127,3, 127,4, 127,7, 128,5, 129,2, 129,7, 131,4/131,4, 132,0, 133,1/133,2, 136,4/136,5, 138,8/138,9, 152,2/152,3, 169,5/169,6, 172,0/172,1, 202,4/202,5; 19F NMR (376 MHz, d6-DMSO) -226,5 (br), -226,8 (t), -232,9 (t), -233,0 (br).
Príklad 16 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(3, 4-dichlórfenotiazín) karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
co2h
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach H, la C-E. Fenotiazín sa pripravil podlá postupu opísaného v J. Chem. Soc. (1970), 2437-2441. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky pomocou reverznej fázy HPLC (58% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1736, 1436, 1365, 1222, 1050 cm'1; ľH NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0,66-0,85 (6H, m), 2,00-2,08 (IH, m), 2,57-2,93 (2H, m), 4,30-5,35 (4H, m), 7,31-7,71 (6H, m), 8,27-8,83 (IH, m); 13C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 16,8/17,1, 19,0/19,1,
30,3, 34,5/34,8, 52,0/52,4, 79,7/80,0, 84,2/84,3, 179,2/178,6,
127,1, 127,3, 127,5, 128,2, 128,5, 128,5, 129,6, 130,0, 133,7,
137,3/137,3, 137,6/137,6, 152,5, 169,5/169,5, 172,0/172,1,
202,3; 19F NMR (376 MHz, d6-DMSO) -226,6 (t), -226, 8 (t), -232,9.
Príklad 17 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S) -3-metyl-2-(9, 10-dihydrofenantridín)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach H, I a C-E. 9,10-Dihydrofenantridín sa pripravil podľa postupu opísaného v J. Chem. Soc. (1951), 3207-3211. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky pomocou reverznej fázy
HPLC (56% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1732, 1365, 1226, 1212,
1203 cm'1; 3H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0,84 (6H, m), 2,05 (IH, m),
2,55-2,90 (2H, m), 4,28-5,36 (6H, m), 7,26-7,43 (5H, m), 7,75-7,77 (IH, m), 7,89-7,91 (2H, m), 8,24-8,81 (IH, m); !3C NMR (100 MHz, dg-DMSO) δ 17,1/17,4, 18,9/19,0, 30,3/30,4, 34,4/34,8,
46,9, 51,9/52,4, 79,0/79,4, 84,2/84,3, 123,8, 124,3, 125,1,
125,7, 126,2, 128,0, 128,2, 128,3, 128,5, 131,5, 134,1, 136,9,
153,1, 170,0/170,1, 172,0/172,1, 202,4/202,8; 19FNMR (376 MHz, de-DMSO) -226,7 (br), -226,9 (br), -233,1 (t); MS (ESI -ve) 455 (M-H) .
Príklad 18
1-(l-karboxymetyl-3-fluór-2-oxo-propy1karbamoyl)-2-metylpropylester dibenzo[b,ŕ]azepín-5-karboxylovej kyseliny
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach H, I a C-E. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky (100% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1791,2, 1714,9,
1683,4, 1525,6, 1492,6, 1370,1, 1325,6, 1229,3, 1212,5, 1053,4,
1032,7, 798,4 cm'1; XH NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 0,50 + 0, 68 (6H,2 x
m), 1,90 (1H, m), 2,54-2,93 (2H, m), 4,20-5,44 (4H, m), 7,02 (2H, s), 7,30-7,80 (8H, m); 13C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 18,73, 19,17, 30,34, 34,56, 52,18, 84,37, 127,92, 128,61, 128,69,
129.63, 130,83, 134,40, 153,90, 169,64, 172,23, 202,29, 202,43,
202.63, 202,76; 19F NMR (376 MHz, d6-DMSO) -226,83 (t), -226,87 (t), -232,93 (t), -233,07 (t), -233,10 (t), -233,32 (t); MS (ESI + ve) 469 (M+H).
Príklad 19
1-(l-Karboxymetyl-3-fluór-2-oxopropylkarbamoyl)-2-metylpropylester 10,11-dihydrodibenzo[b,f]azepín-5-karboxylovej kyseliny
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach H, I a C-E. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky (100% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1796,9, 1683,9,
1521,8, 1491,5, 1368,3, 1324,8, 1278,6, 1213,4, 1201,9, 1108,0,
1056, 4, 931, 1, 776, 5, 746, 7 cm-1; ľH NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ
0,50-0,95 (6H, m), 1,90 (IH, m), 2,55-3,00 (2H, m), 4,20-5,30 (8H, m), 7,10-7,50 (8H, m); 13C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 15,24,
16,79, 39,44, 52,43, 78,36, 84,34, 126,80, 127,89, 128,43,
130,29, 136,29, 154,09, 169,58, 170,03, 172,19, 173,12, 202,28,
202,42; 19F NMR (376 MHz, d6-DMSO) -226,76 (t) , -233,01 (t),
-233,11 (t), -233,38 (t) ; MS (ESI +ve) 471 (M+H).
Príklad 20
[3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-((S)-2,3-dihydroindol-l-karbamoyloxy-3-metylbutyrylamino)pentánová kyselina
Metóda J:
Benzylester kyseliny (S) -2-(imidazolkarbamoyloxy)-3-metylbutánove j
K miešanému roztoku benzylesteru (S) -2-hydroxy-3-metylbutánovej kyseliny (prípravu pozri J. Med. Chem., (1996), 39, 982,
1,5 g) v 20 ml THF sa pridal karbonyldiimidazol (1,17 g) a vzniknutá zmes sa miešala 12 hodín pri laboratórnej teplote. Reakčná zmes sa koncentrovala pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpustil v 30 ml etylacetátu. Roztok sa premyl 1% roztokom kyseliny fosforečnej (2 x 10 ml), potom soľanky (10 ml), sušil sa nad síranom horečnatým, filtroval a koncentroval pri zníženom tlaku, pričom vznikla výsledná zlúčenina vo forme bezfarebného
7,18-7,60 (6H, m), 8,20 (1H, m).
Metóda K:
Benzylester kyseliny (S)-(2,3-dihydroindol-l-karbamoyloxy)-3-metylbutánovej
K miešanému roztoku benzylesteru kyseliny (S)-2-(imidazolkarbamoyloxy)-3-metylbutánovej (355 mg) v 7 ml THF sa pri 0°C pridal metyltrifluórmetánsulfonát (0,13 ml). Vzniknutý roztok sa nechal miešať počas 30 minút. Potom sa pridal indolín (280 mg) a zmes sa nechala zahrievať na laboratórnu teplotu 12 hodín. Reakčná zmes sa koncentrovala pri zníženom tlaku a zvyšok sa rozpustil v 30 ml etylacetátu. Roztok sa premyl nasýteným vodným roztokom hydrogenuhličitanu sodného (5 ml), potom IM roztokom chlorovodíkovej kyseliny (2x5 ml), potom solankou (5 ml), sušil sa nad síranom horečnatým, filtroval a koncentroval. Zvyšok sa čistil pomocou flash chromatografie (5-7% etylacetát/hexán), pričom vznikla výsledná zlúčenina vo forme bezfarebného oleja (342 mg): 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 0,86-1,18 (6H, m), 2,35 (1H, m), 3,08-3,25 (2H, m), 4,05-4,25 (2H, m),
4,95-5,32 (3H, m), 6,95-7,91 (9H, m).
Metóda L:
(S)-(2,3-dihydroindol-l-karbamoyloxy)-3-metylbutánová kyselina
K miešanému roztoku benzylesteru (S)-(2,3-dihydroindol-l-karbamoyloxy)-3-metylbutánovej kyseliny (342 mg) v 25 ml metanolu sa pridalo 10% paládium na uhlíku (80 mg). Zmes sa hydrogenizovala pri laboratórnej teplote počas 2 hodín. Zmes sa filtrovala cez celit a filtrát sa koncentroval, pričom vznikla výsledná zlúčenina vo forme bezfarebného oleja (255 mg) : XH NMR (400 MHz, CDC13) δ 0,95-1,21 (6H, m), 2,40 (1H, m), 3,20 (2H, m), 4,01-4,25 (2H, m), 4,95-5,15 (1H, m), 6,97-7,99 15 (4H, m).
Príklad 20 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-((S)-2,3-dihydroindol-l-karbamoyloxy-3-metylbutyrylamino)pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metódach C-E. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky (94% posledný krok): IČ (tuhá fáza) 1680,2, 1485,6, 1413,9,
1137,4, 1050,4, 758,5 cm'1; XH NMR (400 MHz, d5-DMSO) δ 0, (6H, brm) , 2,17 (1H, brm), 2,50-2,94 (2H, m), 3,12 (2H, brm) , 3,84 —
-4,23 (2H, brm), 4,27-5,39 (4H, m), 6,98 (1H, m), 7,22 (2H, m),
7,67 (1H, brm), 7,78-8,30 (1H, brm), 12,50 (1H, brs); :3C NMR (100 MHz, d6-DMSO) δ 17,2, 19,0, 19,2, 27,3, 30,4, 30,6, 32,9,
34,5, 34,6, 47,3, 47,35, 52,0, 52,2, 78,3, 83,4, 85,1, 104,0,
114,2, 123,0, 125,4, 127,5, 131,7, 170,0, 172,07, 172,1, 173,2,
173,25, 202,3, 202,5, 202,6; 19F NMR (376 MHz, d6-DMSO) -226,7 (t), -226,8 (t), -233,1 (t), -233,3 (t); MS (ESI + ve) 395 (M+H).
Príklad 21
Dietylamid [3S/R]-5-fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(karbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánovej kyseliny
Metóda M:
K miešanému roztoku kyseliny (Príklad 1, pripravená podľa opisu v Metódach A-E) (100 mg) v 2 ml THF sa pri 0°C pridal dietylamín (16 mg) v 0,5 ml THF, a následný prídavok l-(3-dimetylaminopropyl)-3-(etylkarbodiimid)hydrochloridu, EDC (48 mg). Zmes sa potom zahriala v priebehu 12 hodín na laboratórnu teplotu. Rozpúšťadlo sa odstránilo pri zníženom tlaku a zvyšok sa čistil pomocou flash chromatografie (50-60% etylacetát/hexán), pričom vznikol amid vo forme bielej tuhej látky (54 mg); 1H NMR (400 MHz, CDC13) δ 0,69-1,38 (12H, m), 2,42-3,37 (7H, m), 4,85-4,92 (1H, m), 5,01-5,55 (3H, m), 7,31-7,70 (5H, m), 7,90-8,05 (2H, m), 8,25-8,42 (2H, m); 19F NMR (376 MHz, CDC13) -232,6 (t), -232,8 (t); MS (ESI +ve) 498 (M+H).
Príklad 22
Etylamid [3S/R]-5-fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(karbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo
v Metóde M. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky
(62% ) : XH NMR (400 MHZ, CDCI3 ) δ 0, 96- 1, 31 (9H, m), 2,21-2,45
(1H, m) , 2,48-2,80 (2H, m) , 3, 15- 3,48 (2H, m), 4,23-4,76 (3H,
m) , 5,05- 5,42 (1H, m) , 6, 42-6,84 (1H, m) , 7 , 38-7,60 (4H, m) ,
7,95-8,09 (2H, m), 8,20 -8,41 (2H, m) ; 19f NMR (376 MHz, CDCI3)
-223,8 (t), -224,5 (t), -226,5 (t), -227,1 (t), -231,9 (t), -232 (t); MS (ESI +ve) 452 (M+H2O) .
Príklad 23
Piperazínamid [3S/R]-5-fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(karbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánová kyselina
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metóde M. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky (78%) : NMR (400 MHz, CDC13) δ 1,10-1,35 (6H, m), 1,80-3,55 (14H, m), 4,82-4,98 (1H, m), 5,00-5,45 5 (3H, m), 7,38-7,60 (5H, m), 7, 95-8,08 (2H, m), 8,27-8, 45 (2H, m); 19E NMR (376 MHz,
CDCI3) -232,5 (t), -232,7 (t); MS (ESI +ve) 525 (M+H).
Príklad 24
N, ΛΖ-dimetylaminoet ylamid kyseliny [3S/R] -5-f luór-4-oxo-3- [ (S) -3-metyl-2-(karbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánovej
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metóde M. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky (49%) : 3Η NMR (400 MHz, CDC13) δ 1,14-1,31 (6H, m), 1,88-3,04 (13H, m), 3,88-4,41 (3H, m), 4,57-4,74 (1H, m), 5,33-5,61 (1H,
m), 6,86-7,12 (1H, m), 7,33-7,56 (4H, m), 8,01-8,05 (2H, m),
8,27-8,41 (2H, m); 19F NMR (376 MHz, CDC13) -222,4 (t), -222,5 (t); MS (ESI + ve) 513 (M+H).
Príklad 25 [3S/R]-5-Fluór-4-oxo-3-[(S)-3-mety1-2-(karbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánamid
Metóda N:
K miešanému roztoku [3S/R]-5-fluór-4-oxo-3-metyl-2-(karbazol karbamoyloxybutyrylamino ] pentánove j kyseliny z Príkladu 1 (150 mg) v 1,5 ml dichlórmetánu a dimetylformamidu (0,075 ml) sa pridal karbonyldiimidazol (66 mg) . Zmes sa miešala 2 hodiny pri 0°C, pričom sa v priebehu toho času prebublával amoniak. Zmes sa zriedila s etylacetátom/10% vodným roztokom hydrogensíranu draselného. Organická fáza sa odstránila a vodná fáza sa extrahovala s etylacetátom. Spojené organické vrstvy sa sušili nad síranom horečnatým, filtrovali a koncentrovali. Zvyšok sa čistil pomocou flash chromatografie (5% metanol/dichlórmetán), pričom vznikol amid vo forme bielej tuhej látky (80 mg); 'H NMR
(400 MHz, CDC13 ) 1,10-1,28 ( 6H, m), 2,12-2,75 (3H, m), 4,10- 4,85
(4H, m) , 5,29 (1H, m), 6,36, 6, 55, 6, 78, 6, 98 (1H, 4 x s) , 7,17
(1H, m), 7,42 (2H, m), 7,50 (2H, m), 7,99 (2H, m) , 8,29 (2H, m) ;
19F NMR (376 MHz, CDC13) -225,47 (t), 226,00 (t), -227,33 (t),
-227,50 (t), -228,43 (t); MS (ESI +ve) 424 (M-H2O+H).
Príklad 26
Cyklohexylester kyseliny [3S/R]-5-fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(karbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánovej
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metóde M. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky (37%) : 2H NMR (400 MHz, CDC13) δ 0,90-1,80 (16H, m), 2,59 (IH,
m), 2,75-3,15 (2H, m), 4,40 (0,5H, m), 4,64 (0,5H, m), 4,95-5,45 (4H, m), 7,25 (IH, m), 7,42 (2H, m), 7,52 (2H, m), 8,05 (2H, m) 8,36 (2H, m); 19ľ NMR (376 MHz, CDC13) -231, 95 (t), -232,08 (t).
Príklad 27 n-Propylester kyseliny [3S/R]-5-fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2- (karbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánovej
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo
v Metóde M. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky
(82%) : ςΗ NMR (400 MHz, CDCI3) 5 0,80 (3H, m) , 1,13-1,36 (6H, m) ,
1, 42 (IH, m) , 1,58 (IH, m), 2,60 (IH, m), 2,80-3,08 (2H, m),
3, 70 (IH, m) , 3,98 (IH, m), 4,92-5, 50 (4H, m) 7,21 (IH, m), 7,40
(2Η, m), 7,50 (2H, m), 8,00 (2H, m), 8,32 (2H, m); 19F NMR (376 MHz, CDC13) -232,00 (t), -232,01 (t); MS (ESI +ve) 485 (M+H).
Príklad 28
Izopropylester kyseliny [3S/R]-5-fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(karbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánovej
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metóde M. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky (7%) : ľH NMR (400 MHz, CDC13) δ 0, 90-1,33 (12H, m), 2,55 (1H, m), 2,78-3,15 (2H, m), 4,80-5,50 (5H, m), 7,25 (1H, brs), 7,43 (2H, m), 7,55 (2H, m), 8,05 (2H, m), 8,36 (2H, m); 19ľ NMR (376 MHz, CDCI3) -232,00 (t), -232,03 (t).
Príklad 29
Metylester kyseliny [3S/R]-5-fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(karbazol) karbamoyloxybutyrylamino]pentánovej
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metóde M. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhe} látky (81%) : *H NMR (400 MHz, CDCI3) δ 1,20 (6H, m), 2,58 (1H, m),
2,80- 3, 05 (2H, m) , 3,42, 3,61 (3H, 2 x s) , 4,98- 5,26 (3H, m),
5,41 (1H, m) , 7 ,20 (1H, brs) , 7,45 (2H, m) , 7,55 (2H, m) , 8,04
(2H, m) , 8, 35 (2H, m) ; 19F NMR (376 MHz, CDC13) -2 31 ,99 (t),
-232, 00 (t); MS (ESI +ve) 457 (M+H).
Príklad 30
Cholesterolester kyseliny [3S/F]-5-fluór-4-oxo-3-[(S)-3-metyl-2-(karbazol)karbamoyloxybutyrylamino]pentánovej
Zlúčenina sa pripravila podobným spôsobom ako sa opísalo v Metóde N, s použitím karbonyldiimidazolu ako kondenzačr.ého činidla.. Produkt sa izoloval vo forme bielej tuhej látky (12%) : ľH NMR (400 MHz, CDCl3) δ 0,65-2,35 (47H, m), 2,58 (1H, m·, 2,75-3,15 (2H, m), 4,25 (0,5H, m), 4,48 (0,5H, m), 4,97-5,4 6 (5H,
m), 7,30 (1H, m), 7,44 (2H, m), 7,58 (2H, m), 8,05 (2H, m), 8,33 (1H, m); 19F NMR (376 MHz, CDC13) -231,91 (t), -232,03 (t). Taktiež sa izoloval zodpovedajúci ketál vo forme bielej tuhej látky (21%) : ľH NMR (400 MHz, CDC13) δ 0, 65-2,10 (48H, m.., 2,35-3,15 (2H, 3 x m), 3,42-3,69 (1H, m), 4,10-4,96 (4K, m),
5,15-5,65 (2H, m), 6,78 (1H, m), 7,45 (2H, m), 7,57 (2H, m),
8,05 (2H, m), 8,34 (2H, m); 19E NMR (376 MHz, CDC13) -230 , 57 (t),
-230,67 (t) .
Metódy testovania
Stanovenie enzýmu
Stanovenie inhibície kaspázy je založené na štiepení fluorogénneho substrátu rekcmbinantnými čistenými ľudskými kaspázami 1, -3, -7 alebo -8. Stanovenie sa uskutočňuje v podstate rovnakým spôsobom ako sa opísalo v Garcia-Calvo a kol., (J. Biol. Chem., 273 (1998), 32608-32613), s použitím substrátov špecifických pre každý enzým. Substrát pre kaspázu-1 je Acetyl-Tyr-Val-Ala-Asp-amino-4-metylkumarín. Substrát pre kaspázy-3, -7 a -8 je Acetyl-Asp-Glu-Val-Asp-amino-4-metylkumarín.
Pozorovaná zmena inaktivácie enzýmu pri určitej koncentrácii inhibítora, kObS, sa vypočítala priamym dosadením dát do rovnice odvodenej v Thornberry a kol·., (Biochemistry 33 (1994), 3943-3939) s použitím počítačového programu pre nelineárnu analýzu najmenších štvorcov (Prism 2.0, GraphPad Software). Na získanie rýchlostných konštánt druhého rádu, kinact, hodnoty kobs sa vyniesli proti ich zodpovedajúcim inhibičným koncentráciám a kinact hodnoty sa následne vypočítali pomocou počítačovej lineárnej regresie. Mnoho zlúčenín podľa tohto vynálezu, testovaných proti kaspáze-1, vykazuje kinacC hodnoty v rozsahu 25 000 a 1 500 000 M1s'1, proti kaspáze-3 vykazuje kinact hodnoty v rozsahu 9 000 a 1 500 000 M‘1s'1, proti kaspáze-8, vykazuje kinac- hodnoty v rozsahu 10 000 a 700 000 M_1s_1.
Inhibícia vylučovania IL-Ιβ zo zmesovej populácie mononukleárnych buniek periférnej krvi (PBMC)
Spracovanie pre-IL-Ιβ kaspázou-1 sa môže merať v bunkovej kultúre s použitím mnohých bunkových zdrojov. Ľudské PBMC získané zo zdravých donorov poskytujú zmiešanú populáciu lymfocytov a mononukleárnych buniek, ktoré produkujú spektrum interleukínov cytokínov ako odozvu na mnoho tried fyziologických stimulátorov.
Experimentálny postup
Testovaná zlúčenina sa rozpustila v dimetylsulfoxide (DMSO, Sigma #D-2650) a vzniklo 100 mM zásobného roztoku. Ten sa zriedil v kompletnom médiu obsahujúcom RPMI obsahujúce 10% tepelne aktivovaného FCS (Gibco BRL #10099-141), 2 mM L-glutamínu (Sigma, #G-7513), 100 U penicilínu a 100 μρ/ml streptomycínu (Sigma, #P-7539). Výsledná koncentrácia testovanej zlúčeniny sa pohybuje od 100 μΜ až do 6 nM v rozsahu ôsmich riediacich stupňov. Najvyššia koncentrácia testovanej zlúčeniny je ekvivalentná 0,1% DMSO u stanovenia.
Ľudské PBMC sa izolovali z Buffy Coats získaných z krvnej banky s použitím centrifugácie na Ficoll-Paque leukocyt separačnom médiu (Amersham, #17-1440-02) a bunkové stanovenie sa uskutočnilo v sterilnej 96 jamkovej doske s plochým dnom (Nunc). Každá jamka obsahuje 100 μΐ bunkovej suspenzie, 1 x 105 buniek, 50 μΐ roztokov zlúčeniny a 50 μΐ LPS (Sigma #L-3012) pri výslednej koncentrácii 50 ng/ml. Kontrola pozostáva z buniek +/- LPS stimulácie a série zriedení s DMSO rovnakým spôsobom ako u zlúčeniny. Dosky sa inkubovali 16 až 18' hodín pri 37°C v 5% atmosfére CO2 a 95% vlhkosti vzduchu.
Po 16 až 18 hodinách sa kvapalina zobrala po centrifugácii dosiek pri 100 x g pri 18°C počas 15 minút a stanovil sa obsah IL-Ιβ. Meranie zrelého IL-Ιβ v kvapaline sa uskutočnilo s použitím sady Quantikine (R&D Systems) podlá inštrukcií výrobcu. Koncentrácia zrelého IL-Ιβ od 600 do 1500 pg/ml sa pozorovala u PBMC v pozitívnych kontrolných jamkách.
Inhibičná schopnosť zlúčenín sa môže vyjadriť ako hodnota IC50, čo je koncentrácia inhibítora, pri ktorej 50% zrelého IL-Ιβ sa deteguje v kvapaline v porovnaní s pozitívnou kontrolnou vzorkou. Tabuľka 5 ukazuje inhibíciu vylučovania IL-Ιβ z mononukleárnych buniek periférnej krvi pre vybrané zlúčeniny podľa tohto vynálezu, získaných pred týmto opísanou metódou.
Vybrané zlúčeniny sa testovali týmto stanovením a vykázali schopnosť inhĺbicie vylučovania IL-Ιβ pomocou hodnôt IC50 v rozsahu 0,04 μΜ a 20 μΜ.
Stanovenie Anti-Fas indukovanej apoptózy
Bunková apoptóza sa môže indukovať viazaním Fas ligandu (Fasl) k jeho receptoru, CD95 (Fas). CD95 je jeden z rodiny zodpovedajúcich receptorov známych ako smrtiace receptory, ktoré môžu spúšťať apoptózu v bunkách prostredníctvom aktivácie kaspázovej enzýmovej kaskády. Proces sa iniciuje viazaním adaptérovej molekuly FADD/MORT-1 k cytoplazmatickej doméne CD-95 komplexu receptor-ligand. Kaspáza-8 potom viaže FADD a aktivuje sa, iniciuje kaskádu udalostí, zahŕňajúcich aktiváciu poprúdovej kaspázy a následnej bunkovej apoptózy. Apoptóza môže byť tiež indukovaná v bunkovej expresii CD95 eg Jurkat E6.1 T buniek bunkovej línie lymfómu, s použitím protilátky, už uvedenej ako FasL, na zosieťovanie bunkového povrchu CD95. Anti-Fas-indukovaná apoptóza sa tiež spúšťa prostredníctvom aktivácie kaspázy-8. To poskytuje základy bunkového stanovenia na hľadanie zlúčenín schopných inhĺbicie apoptózy sprostredkovanej kaspázou-8.
Experimentálny postup
Jurkat E6.1 bunky sa kultivovali v kompletnom médiu obsahujúcom RPMI-1640 (Sigma) + 10% séra teľacieho plodu (Gibco BRL č. 10099-141) + 2 mM L-glutamínu (Sigma č. G-7513). Bunky sa zobrali v log fáze rastu. 100 ml buniek pri koncentrácii 5-8 x 105 buniek/ml sa previedli do sterilných 50 ml Ealcon centrifugačných skúmaviek a centrifugovali sa počas 5 minút pri 100 x g pri laboratórnej teplote. Kvapalina sa odstránila a spojené pelety buniek sa znova suspendovali v 25 ml kompletného média. Bunky sa spočítali a hustota sa adjustovala pomocou kompletného média na hodnotu 2 x 10s buniek/ml.
Testovaná zlúčenina sa rozpustila v dimetylsulfoxide (DMSO)
ΊΟ (Sigma č. D-2650), pričom vzniklo 100 mM zásobného roztoku. Ten sa zriedil na 400 μΜ v kompletnom médiu, potom sa sériovo zriedil v 96 jamkovej doske pred pridaním na dosku pre bunkové stanovenie .
100 μΐ bunkovej suspenzie (2 x 106 buniek) sa pridalo do každej jamky sterilnej 96 jamkovej dosky s gulatým dnom (Costar č. 3790) . Potom sa na dosku pridalo 50 μΐ roztoku zlúčeniny pri konkrétnom zriedení a 50 μΐ anti-Fas protilátky, klenu CH-11 (Kamiya č. MC-060) s výslednou koncentráciou 10 ng/ml. Zaviedli sa kontrolné jamky bez protilátky a bez zlúčeniny, ale so sterilným roztokom DMSO ako kontrolné vehikulum. Dosky sa inkubovali 16 až 18 hodín pri 37°C v 5% atmosfére CO2 a 95% vlhkosti vzduchu.
Apoptóza buniek sa meria pomocou kvantifikácie DNA fragmentácie s použitím sady Celí Death Detection Assay od Boehringer-Mannheim, č. 1544 675. Po inkubácii počas 16 až 18 hodín sa dosky centrifúgovali pri 100 x g pri laboratórnej teplune počas 5 minút. 150 μΐ kvapaliny sa odstránilo a nahradilo sa 150 μΐ čerstvého kompletného média. Bunky sa potom zobrali a ds každej jamky sa pridalo 200 μΐ lýzneho pufra dodávaného so šedou pre stanovenie. Bunky sa triturovali s cieľom zaistiť kompletné lýzy a inkubovali 30 minút pri 4°C. Dosky sa potom 10 minút centrifugovali pri 1900 x g a kvapalina zriedená 1:20 v dodávanom inkubačnom pufre. 100 μΐ tohto roztoku sa potom stanovilo podľa pokynov výrobcu dodávaných spolu so sadou. OD^nm sa meraie 20 minút po pridaní výsledného substrátu v čítačke dosiek SPDCTRAmax Plus (Molecular Devices). OD^nm sa vynáša proti koncentrácii zlúčeniny a hodnoty IC50 pre zlúčeninu sa vypočítajú s použitím programu pre „fitting kriviek SOFTmax Pro (Molecular Devices) a s použitím štvorparametrického dosadenia (fit).
Vybrané zlúčeniny sa testovali týmto stanovením a vykazujú inhibíciu Fas-indukovanej apoptózy Jurkatových buniek s hodno71 tami IC50 v rozsahu 0,001 μΜ a 0,15 μΜ.
Zatial čo sa opísali mnohé uskutočnenia tohto vynálezu, je zrejmé, že nami uvedené základné príklady sa môžu pozmeniť, čím sa získajú ďalšie uskutočnenia, ktoré využívajú zlúčeniny a spôsoby podlá tohto vynálezu. Je preto vhodné definovať rozsah tohto vynálezu pomocou nasledujúcich nárokov, ako pomocou konkrétnych uskutočnení, ktoré sa znázornili pomocou príkladov.

Claims (36)

  1. PATENTOVÉ NÁROKY
    1. Použitie zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľného derivátu, kde:
    Z je kyslík alebo síra;
    R1 je vodík,, -CHN2, -R, -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    R je Ci-i2alifatický zvyšok, aryl, aralkyl, heterocyklyl alebo heterocyklylalkyl ;
    Y je elektronegatívna odstupujúca skupina;
    R2 je CO2H, CH2CO2H alebo estery, amidy alebo ich izostéry;
    R3 je skupina schopná vmestiť sa do S2 submiesta kaspázy;
    R4 a R5 tvoria spolu s intervenujúcim dusíkom mono-, bi- alebo tricyklický heterokruhový systém, ktorý má 1 až 6 heteroatómov, vybraných zo skupiny obsahujúcej dusík, kyslík alebo síru;
    na prípravu liečiva.
  2. 2. Použitie podľa nároku 1, z nasledujúcich znakov:
    (i) Z je kyslík;
    (ii) R1 je vodík, -R, -CH2OR, (iii) R2 je CO2H alebo ester, (iv) R3 je skupina, ktorá kde zlúčenina má jeden alebo viac
    -CH2SR alebo -CH2Y;
    amid alebo ich izostér;
    má molekulárnu hmotnosť až do
    140 Daltonov, alebo (v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria monocyklický, bicyklický alebo tricyklický kruhový systém, kde každý kruh systému má 5 až 7 kruhových atómov.
  3. 3. Použitie podľa nároku 2, kde zlúčenina má nasledujúce znaky:
    (i) Z je kyslík;
    (ii) R1 je vodík, -R, -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    (iii) R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér;
    (iv) R3 je skupina, ktorá má molekulárnu hmotnosť až do 140 Daltonov, alebo (v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria monocyklický, bicyklický alebo tricyklický heterocyklický alebo heteroarylový kruhový systém, kde každý kruh systému má 5 až 7 kruhových atómov.
  4. 4. Použitie podľa nároku 3, kde R1 je -CH2Y.
  5. 5. Použitie podľa nároku 4, kde R1 je -CH2F a R3 je Ci-4alkylová s kupina.
  6. 6. Použitie podľa nároku 5, kde R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria bicyklický alebo tricyklický heterocyklický alebo heteroarylový kruhový systém, kde každý kruh systému má 5 až 7 kruhových atómov.
  7. 7. Použitie podľa nároku 6, kde R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria tricyklický heterocyklický alebo heteroarylový kruhový systém, kde každý kruh systému má 5 až 7 kruhových atómov.
  8. 8. Použitie podľa nároku 7, kde stredový kruh tricyklického kruhového systému je 5- až 6-členný kruh.
  9. 9. Použitie podľa nároku 1, kde zlúčenina má jeden alebo viac z nasledujúcich znakov:
    (i) Z je kyslík;
    (ii) R1 je -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    (iii) R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér;
    (iv) R3 je alkyl, ktorý má 1 až 4 atómy uhlíka, alebo (v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria kruh vybraný zo skupiny obsahujúcej indol, izoindol, indolín, indazol, purín, dihydropyridín, benzimidazol, imidazol, imidazolín, pyrol, pyrolidín, pyrolín, pyrazol, pyrazolín, pyrazolidín, triazol, piperidín, morfolín, tiomorfolín, piperazín, karbazol, fenotiazín, fenoxazín, dihydrofenazín, dihydrocinolín, dihydrochinoxalín, tetrahydrochinolín, tetrahydroizochinolín, dihydronaftyridín, tetrahydronaftyridín, dihydroakridín, β-karbolín, pyrido[4,3-b]indol, 2,3,9-triazafluorén,
    9-tia-2,10-diazaantracén, 3,6,9-triazafluorén, tieno[3,2-b]pyrol alebo dihydrofenantridín.
  10. 10. Použitie podľa nároku 9, kde zlúčenina má jeden alebo viac z nasledujúcich znakov:
    (i) Z je kyslík;
    (ii) R1 je -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    (iii) R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér;
    (iv) R3 je alkyl, ktorý má 1 až 4 atómy uhlíka, alebo (v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria kruh vybraný zo skupiny obsahujúcej indol, izoindol, indolín, indazol, benzimidazol, imidazol, pyrolidín, pyrazol, triazol, piperidín, morfolín, tiomorfolín, piperazín, karbazol, fenotiazín, fenoxazín, dibenzoazepín, dihydrodibenzoazepín, dihydro75 fenazín, dihydrocinolín, dihydrochinoxalín, tetrahydrochinolín, tetrahydroizochinolín dihydronaftyridín, tetrahydronaftyridín, dihydroakridín, β-karbolín, pyrido[4,3-b]indol, 2,3,9-triazafluorén, 9-tia-2,10-diazaantracén, 3,6,9-triazafluorén, tieno[3,2-b]pyrol alebo dihydrofenantridín.
  11. 11. Použitie podľa nároku 10, kde zlúčenina má jeden alebo viac z nasledujúcich znakov:
    (i) Z je kyslík;
    (ii) R1 je -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    (iii) R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér;
    (iv) R3 je alkyl, ktorý má 1 až 4 atómy uhlíka, alebo (v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný kruhový systém vybraný zo skupiny obsahujúcej karbazol, fenotiazín, indol, indolín, 5H-dibenzo [b, f] azepín, 10, ll-dihydro-5/í-dibenzo [b, f] azepín, β-karbolín, pyrido[4,3-b]indol, 2,3,9-triazafluorén, 9-tia-2,10-diazaantracén, 3,6,9-triazafluorén, tieno[3,2-b]pyrol alebo dihydrofenantridín.
  12. 12. Použitie podľa nároku 11, kde Z je kyslík; R1 je -CH2OR,
    -CH2SR alebo -CH2Y; R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér; R3 je alkyl, ktorý má 1 až 4 atómy uhlíka a R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný kruhový systém vybraný zo skupiny obsahujúcej karbazol, fenotiazín, indol, indolín, 5H-dibenzo[b,f]azepín, 10,1l-dihydro-5H-dibenzo[b,f]azepín, β-karbolín, pyrido[4,3-b]indol, 2,3,9-triazafluorén, 9-tia-2,10-diazaantracén, 3,6,9-triazafluorén, tieno[3,2-b]pyrol alebo dihydrofenantridín.
  13. 13. Použitie podľa nároku 12, kde R1 je -CH2Y.
  14. 14. Použitie podlá nároku 11, kde R1 je -CH2F.
  15. 15. Použitie podlá nároku 1, kde zlúčenina je vybraná zo zlúčenín uvedených v Tabulke 1.
  16. 16. Použitie podlá nároku 1, kde zlúčenina je vybraná z nasledujúcich:
  17. 17. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 16, pričom uvedené liečivo sa používa na liečenie alebo prevenciu ochorenia, ktoré je vybrané zo skupiny obsahujúcej ochorenia vyvolané IL-1, ochorenia vyvolané apoptózou, zápalové ochorenie, autoimúnne ochorenie, deštruktívnu poruchu kostí, proliferatívnu poruchu, infekčné ochorenie, degeneratívne ochorenie, ochorenie spojené s bunkovou smrťou, ochorenie spojené s nadmerným konzumovaním alkoholu, ochorenia prenášané vírusmi, uveitídu, zápalovú peritonitídu, osteoartritídu, pankreatitídu, astmu, syndróm respiračnej nedostatočnosti u dospelých, glomerulonefritídu, reumatoidnú artritídu, systémový lupus erythematosus, sklerodermiu, chronickú tyroiditídu, Graveovu chorobu, autoimúnnu gastritídu, diabetes, autoimúnnu hemolytickú anémiu, autoimúnnu neutropéniu, trombocytopéniu, chronickú aktívnu hepatitídu, myasténiu gravis, zápalové ochorenie čriev, Crohnovu chorobu, psoriázu, atopickú dermatitídu, zjazvenie, odmietnutie štepu u hostiteľa, odmietnutie transplantovaných orgánov, osteoporózu, leukémiu a príbuzné poruchy, myelodysplastický syndróm, poruchy kostí vyvolané mnohonásobným myelómom, akútnu myelogénnu leukémiu, chronickú myelogénnu leukémiu, metastatický melanóm, Kaposiho sarkóm, mnohonásobný myelóm, hemoragický šok, sepsu, septický šok, popáleniny, Shigellosis, Alzheimerovu chorobu, Parkinsonovu chorobu, Huntingtonovu chorobu, Kenedyho chorobu, priónové choroby, cerebrálnu ischémiu, epilepsiu, myokardiálnu ischémiu, akútne a chronické ochorenie srdca, myokardiálny infarkt, kongestívne srdcové zlyhanie, aterosklerózu, náhradu koronárnych tepien, spinálnu muskulárnu atrofiu, amyotrofickú laterálnu sklerózu, sklerózu multiplex, HlV-vyvolanú encefalitídu, stárnutie, alopéciu, neurologické poškodenie vyvolané mŕtvicou, ulceratívnu kolitídu, traumatické poškodenie mozgu, poranenie miechy, hepatitídu-B, hepatitídu-C, hepatitídu-G, žltú horúčku, horúčku dengue alebo japonskú encefalitídu, rôzne formy ochorení pečene, renálne ochorenie, polyaptické ochorenie obličiek, gastrické ochorenie vyvolané H. pyroli a ochorenie spôsobené dvanástnikovým vredom, HIV infekciu, tuberkulózu a meningitídu, liečenie komplikácií spojených s bypassom koronárnych tepien alebo imunoterapiu na liečenie rôznych foriem rakoviny.
  18. 18. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 16, pričom uvedené liečivo sa používa na liečenie komplikácií spojených so zavedením bypassu koronárnych tepien.
  19. 19. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 16, pričom uvedené liečivo sa používa na prezerváciu buniek, pričom uvedená metóda zahŕňa krok vykúpania buniek v roztoku zlúčeniny alebo jej farmaceuticky prijateľného derivátu.
  20. 20. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 16, pričom uvedené liečivo sa používa pre orgánový transplantát alebo konzervovanie krvných produktov.
  21. 21. Použitie podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 16, pričom uvedené liečivo sa používa ako zložka imunoterapie na liečenie rakoviny.
  22. 22. Zlúčenina všeobecného vzorca I:
    alebo jej farmaceutický prijatelný derivát, kde:
    Z je kyslík alebo síra;
    j e vodík,,
    -CHN2, -R, -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    Ί9
    R je Ci-i2alifatický zvyšok, aryl, aralkyl, heterocyklyl alebo heterocyklylalkyl;
    Y je elektronegatívna odstupujúca skupina;
    R2 je CO2H, CH2CO2H alebo estery, amidy alebo ich izostéry;
    R3 je skupina schopná vmestiť sa do S2 submiesta kaspázy;
    R4 a R5 tvoria spolu s intervenujúcim dusíkom mono-, bi- alebo tricyklický heterokruhový systém, ktorý má 1 až 6 heteroatómov, vybraných zo skupiny obsahujúcej dusík, kyslík alebo si ru.
  23. 23. Zlúčenina podľa nároku 22, kde zlúčenina má jeden alebo viac z nasledujúcich znakov:
    (i) Z je kyslík;
    (ii) R1 je vodík, -R, -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    (iii) R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér;
    (iv) R3 je skupina, ktorá má molekulárnu hmotnosť až do 140 Daltonov, alebo (v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria monocyklický, bicyklický alebo tricyklický kruhový systém, kde každý kruh systému má 5 až 7 kruhových atómov.
  24. 24. Zlúčenina podľa nároku 23, kde zlúčenina má nasledujúce znaky:
    (i) Z je kyslík;
    (ii) R1 je vodík, -R, -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    (iii) R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér;
    (iv) R3 je skupina, ktorá má molekulárnu hmotnosť až do 140 Daltonov, alebo (v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria monocyklický, bicyklický alebo tricyklický heterocyklický alebo hetero80 arylový kruhový systém, kde každý kruh systému má 5 až 7 kruhových atómov.
  25. 25. Zlúčenina podľa nároku 24, kde R1 je -CH2Y.
  26. 26. Zlúčenina podlá nároku 25, kde R1 je -CH2F a R3 je alkylová skupina, ktorá má 1 až 4 atómy uhlíka.
  27. 27. Zlúčenina podlá nároku 26, kde R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria bicyklický alebo tricyklický heterocyklický alebo heteroarylový kruhový systém, kde každý kruh systému má 5 až 7 kruhových atómov.
  28. 28. Zlúčenina podľa nároku 27, kde R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria tricyklický heterocyklický alebo heteroarylový kruhový systém, kde každý kruh systému má 5 až 7 kruhových atómov .
  29. 29. Zlúčenina podľa nároku 28, kde stredový kruh tricykiického kruhového systému je 5- alebo 6-členný kruh.
  30. 30. Zlúčenina podľa nároku 22, kde zlúčenina má jeden alebo viac z nasledujúcich znakov:
    (i) Z je kyslík;
    (ii) R1 je -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    (iii) R4 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér;
    (iv) R3 je alkyl, ktorý má 1 až 4 atómy uhlíka, alebo (v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria kruh vybraný zo skupiny obsahujúcej indol, i zoindol·, indolín, indazol, purín, dihydropyridín, benzimidazol, imidazol, imidazciín, pyrol, pyrolidín, pyrolín, pyrazol, pyrazolin, pyrazclidín, triazol, piperidín, morfolín, tiomorfolín, piperazín, karba81 zol, fenotiazín, fenoxazín, dihydrofenazín, dihydrocinolín, dihydrochinoxalín, tetrahydrochinolín, tetrahydroizochinolín, dihydronaftyridín, tetrahydronaftyridin, dihydroakridín, β-karbolín, pyrido[4,3-b]indol, 2,3,9-triazafluorén,
    9-tia-2,10-diazaantracén, 3,6,9-triazafluorén, tieno[3,2-b]pyrol alebo dihydrofenantridín.
  31. 31. Zlúčenina podľa nároku 30, kde zlúčenina má jeden alebo viac z nasledujúcich znakov:
    (i) Z je kyslík;
    (ii) R1 je -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    (iii) R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér;
    (iv) R3 je alkyl, ktorý má 1 až 4 atómy uhlíka, alebo (v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria kruh vybraný zo skupiny obsahujúcej indol, izoindol, indolín, indazol, benzimidazol, imidazol, pyrolidín, pyrazol, triazol, piperidín, morfolín, tiomorfolín, piperazín, karbazol, fenotiazín, fenoxazín, dibenzoazepín, dihydrodibenzoazepín, dihydrofenazín, dihydrocinolín, dihydrochinoxalín, tetrahydrochinolin, tetrahydroizochinolín, dihydronaftyridín, tetrahydronaftyridín, dihydroakridín, β-karbolín, pyrido[4,3-b]indol, 2,3,9-triazafluorén, 9-tia-2,10-diazaantracén, 3,6,9-triazafluorén, tieno[3,2-b]pyrol alebo dihydrofenantridín.
  32. 32. Spôsob podľa nároku 31, kde zlúčenina má jeden alebo viac z nasledujúcich znakov:
    (i) Z je kyslík;
    (ii) R1 je -CH2OR, -CH2SR alebo -CH2Y;
    (iii) R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér;
    (iv) R3 je alkyl, ktorý má 1 až 4 atómy uhlíka, alebo (v) R4 a R5 spolu s intervenujúcim dusíkom tvoria substituovaný alebo nesubstituovaný kruhový systém vybraný zo skúpi sahujúcej karbazol, fenotiazín, indol, indolín, 5Hzo [b, f] azepín, 10, 1 l-dihydro-5ŕŕ-dibenzo [b, ň] azepín, βlín, pyrido[4,3—b]indol, 2,3,9-triazafluorén, 9-tia-2, azaantracén, 3,6,9-triazafluorén, tieno[3,2-b]pyrol· dihydrofenantridín.
  33. 33. Spôsob podlá nároku 32, kde Z je kyslík; R1 je -CH2OR, alebo -CH2Y; R2 je CO2H alebo ester, amid alebo ich izostér alkyl, ktorý má 1 až 4 atómy uhlíka a R4 a Rľ s intervenujúcim dusíkom tvoria substituovaný nesubstituovaný kruhový systém vybraný zo skupiny obsah karbazol, fenotiazín, indol, indolín, 5H-dibenzo[b,fj í 10, ll-dihydro-5H-dibenzo[b,f]azepín, β-ka;
    pyrido[4,3-b]indol, 2,3,9-triazafluorén, 9-tia-2, 10-d:
    tracén, 3,6,9-triazafluorén, tieno[3,2-b]pyrol alebo rofenantridín.
    .ny ob-diben-karbo10-dialebo
    -CH2SR ; R3 je spolu alebo '.u j úce j =zepín, cbolín, 'azaandihyd34
    Zlúčenina podlá nároku 33,
    Zlúčenina podľa nároku 34, kde R1 je -CH2Y.
    kde R1 je -CH2F.
  34. 36. Zlúčenina podlá nároku 22, zlúčenín uvedených v Tabuľke 1.
    kde zlúčenina je vybr
    a.ná zo
  35. 37. Zlúčenina podľa nároku 22, kde zlúčenina je vybra sleduj úcich:
    z na- alebo
  36. 38. Farmaceutická kompozícia, vyznačujúca sa tým, že obsahuje zlúčeninu podľa nárokov 22 až 37 a farmaceutický prijateľný nosič.
SK1392-2002A 2000-03-29 2001-03-29 Karbamátové inhibítory kaspázy a ich použitie SK13922002A3 (sk)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US19282600P 2000-03-29 2000-03-29
PCT/US2001/010182 WO2001072707A2 (en) 2000-03-29 2001-03-29 Carbamate caspase inhibitors and uses thereof

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SK13922002A3 true SK13922002A3 (sk) 2003-09-11

Family

ID=22711181

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SK1392-2002A SK13922002A3 (sk) 2000-03-29 2001-03-29 Karbamátové inhibítory kaspázy a ich použitie

Country Status (32)

Country Link
US (2) US6689784B2 (sk)
EP (1) EP1268425B1 (sk)
JP (2) JP4298200B2 (sk)
KR (1) KR100858640B1 (sk)
CN (2) CN1994298A (sk)
AR (1) AR027993A1 (sk)
AT (1) ATE384695T1 (sk)
AU (2) AU2001249619B2 (sk)
BG (1) BG107136A (sk)
BR (1) BR0109588A (sk)
CA (1) CA2403959A1 (sk)
CZ (1) CZ20023227A3 (sk)
DE (1) DE60132567T2 (sk)
DK (1) DK1268425T3 (sk)
EA (1) EA005740B1 (sk)
EE (1) EE200200550A (sk)
ES (1) ES2296742T3 (sk)
HK (1) HK1052355B (sk)
HR (1) HRP20020782A2 (sk)
HU (1) HUP0301472A3 (sk)
IL (2) IL151829A0 (sk)
MX (1) MXPA02009633A (sk)
NO (1) NO325062B1 (sk)
NZ (1) NZ521639A (sk)
PE (1) PE20011267A1 (sk)
PL (1) PL201081B1 (sk)
PT (1) PT1268425E (sk)
SK (1) SK13922002A3 (sk)
TW (1) TWI318207B (sk)
WO (1) WO2001072707A2 (sk)
YU (1) YU73702A (sk)
ZA (1) ZA200207483B (sk)

Families Citing this family (40)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
MXPA01010127A (es) 1999-04-09 2002-08-20 Cytovia Inc Inhibidores de la caspasa y el uso de los mismos.
BR0013666A (pt) 1999-08-27 2002-05-14 Cytovia Inc "alfa"-hidróxi-ácidos substituìdos inibidores de caspases e o seu uso
CN1994298A (zh) * 2000-03-29 2007-07-11 沃泰克斯药物股份有限公司 氨基甲酸酯天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶抑制剂及其用途
PE20011350A1 (es) 2000-05-19 2002-01-15 Vertex Pharma PROFARMACO DE UN INHIBIDOR DE ENZIMA CONVERTIDORA DE INTERLEUCINA-1ß (ICE)
US20040192889A1 (en) * 2001-03-30 2004-09-30 Dale Bredesen Cytotoxic peptides and peptidomimetics based thereon, and methods for use thereof
US7351702B2 (en) * 2001-05-23 2008-04-01 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitors and uses thereof
EP1485107A1 (en) 2002-02-11 2004-12-15 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Phospholipids as caspase inhibitor prodrugs
EP1499898A2 (en) * 2002-04-19 2005-01-26 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Regulation of tnf-alpha
EP1447093A1 (en) * 2003-02-14 2004-08-18 Deutsches Krebsforschungszentrum Stiftung des öffentlichen Rechts Inhibition of the CD95 ligand/receptor system for the treatment of neurological disorders and injuries
US20060217299A1 (en) * 2003-02-24 2006-09-28 Hirofumi Doi Degradation inhibitor for hepatitis b virus x interacting protein
AU2003902704A0 (en) * 2003-05-29 2003-06-19 Crc For Waste Management And Pollution Control Limited Of Unsw Process for producing a nanoscale zero-valent metal
KR101135765B1 (ko) 2004-03-12 2012-04-23 버텍스 파마슈티칼스 인코포레이티드 아스파르트산 아세탈 카스파아제 억제제의 제조를 위한방법 및 중간체
US7544855B2 (en) * 2004-04-23 2009-06-09 Buck Institute Transgenic mouse whose genome comprises an APP having a mutation at amino acid 664
JP4848367B2 (ja) * 2004-05-15 2011-12-28 バーテックス ファーマシューティカルズ インコーポレイテッド Ｉｃｅインヒビターを使用した発作の処置
KR100619440B1 (ko) 2004-05-20 2006-09-08 한기종 포름아마이드 유도체 제조방법
EP2295054A1 (en) 2004-05-27 2011-03-16 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Ice inhibitors for the treatment of autoinflammatory diseases
KR100619439B1 (ko) 2004-05-27 2006-09-08 한기종 포밀기 도입된 아민유도체의 제조방법
US8012751B2 (en) * 2005-03-31 2011-09-06 Wisconsin Alumni Research Foundation Differentiation of pluripotent embryonic stem cells
CA2616337A1 (en) * 2005-07-28 2007-02-08 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Caspase inhibitor prodrugs
US8073703B2 (en) 2005-10-07 2011-12-06 Panasonic Corporation Acoustic signal processing apparatus and acoustic signal processing method
EP1956898A2 (en) 2005-11-30 2008-08-20 Massachusetts Institute of Technology Pathogen-detecting cell preservation systems
CA2649877A1 (en) * 2006-04-24 2007-12-21 Gloucester Pharmaceuticals Gemcitabine combination therapy
CA2656487A1 (en) * 2006-07-07 2008-01-17 The Board Of Trustees Of The Leland Stanford Junior University Selective caspase inhibitors
WO2008021745A2 (en) * 2006-08-16 2008-02-21 Itherx Pharmaceuticals, Inc. Hepatitis c virus entry inhibitors
WO2008063727A2 (en) * 2006-08-21 2008-05-29 United Therapeutics Corporation Combination therapy for treatment of viral infections
WO2008106167A1 (en) * 2007-02-28 2008-09-04 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Combination therapy comprising matrix metalloproteinase inhibitors and caspase inhibitors for the treatment of liver diseases
WO2008137567A1 (en) * 2007-05-01 2008-11-13 Cedars-Sinai Medical Center Caspase inhibitors in the treatment of infection-associated preterm delivery
KR101009588B1 (ko) * 2008-06-04 2011-01-20 거진산업주식회사 미세여과막을 이용한 부유고형물 처리장치
JP2012051804A (ja) * 2008-12-26 2012-03-15 Kyoto Univ Ｅｇ５阻害剤
KR101010350B1 (ko) * 2009-03-26 2011-01-25 삼성중공업 주식회사 역세척 여과장치
US20140309172A1 (en) 2010-11-05 2014-10-16 Dagmar Ringe Ice inhibiting compounds and uses thereof
TW201236239A (en) * 2010-11-16 2012-09-01 Solvay Rechargeable metal or metal-ion cell
EP2490021A1 (en) 2011-02-18 2012-08-22 Biotempt B.V. Modulators of PRR and GPCR signalling
US9956260B1 (en) 2011-07-22 2018-05-01 The J. David Gladstone Institutes Treatment of HIV-1 infection and AIDS
WO2015175381A1 (en) 2014-05-12 2015-11-19 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Treatment of the complications of chronic liver disease with caspase inhibitors
WO2017079566A1 (en) 2015-11-05 2017-05-11 Conatus Pharmaceuticals, Inc. Caspase inhibitors for use in the treatment of liver cancer
KR20180101418A (ko) 2015-12-31 2018-09-12 코나터스 파마슈티칼스, 인크. 간 질환의 치료에서의 카스파제 억제제의 사용 방법
CA3039283A1 (en) 2016-10-05 2018-04-12 Novartis Ag Combination compositions comprising fxr agonists for treating or preventing a fibrotic,cirrhotic disease or disorder
CN110944985B (zh) * 2017-05-24 2022-12-13 特拉维夫大学拉玛特有限公司 用于蛋白酶的成像/检测的化学发光探针
WO2022123062A1 (en) 2020-12-11 2022-06-16 INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) Blocking caspase and/or fasl for preventing fatal outcome in covid-19 patients

Family Cites Families (16)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO1991015577A1 (en) 1990-04-04 1991-10-17 Black, Roy, A. INTERLEUKIN 1'beta' PROTEASE
HU220098B (hu) 1991-08-30 2001-10-28 Vertex Pharmaceuticals Incorporated Interleukin-1 béta proteáz enzim, és interleukin-1 béta proteáz inhibitorok
EP0618223A3 (en) 1993-03-08 1996-06-12 Sandoz Ltd Peptides, the release of Interleukin 1-Bêta, useful as anti-inflammatory agents.
WO1996030395A2 (en) 1995-03-31 1996-10-03 Takeda Chemical Industries, Ltd. Cysteine protease inhibitor
WO1997024339A1 (fr) 1995-12-27 1997-07-10 Ono Pharmaceutical Co., Ltd. Derives de tetrazole et medicaments les contenant a titre d'ingredients actifs
JP3492703B2 (ja) 1996-09-12 2004-02-03 アイドゥン ファーマシューティカルズ，インコーポレイテッド システインプロテアーゼのＩＣＥ／ｃｅｄ―３ファミリーの阻害剤としてのＣ―末端変性（Ｎ―置換）―２―インドリルジペプチド
BR9712987A (pt) * 1996-10-11 2000-04-18 Warner Lambert Co Inibidores de enzima de conversão de interleucina-1beta de sulfonamida
WO1998016502A1 (en) 1996-10-11 1998-04-23 Warner-Lambert Company ASPARTATE ESTER INHIBITORS OF INTERLEUKIN-1β CONVERTING ENZYME
US6184210B1 (en) 1997-10-10 2001-02-06 Cytovia, Inc. Dipeptide apoptosis inhibitors and the use thereof
CN1138472C (zh) 1997-10-10 2004-02-18 西托维亚公司 二肽型编程性细胞死亡抑制剂及其用途
JP2002506829A (ja) 1998-03-16 2002-03-05 サイトビア インコーポレイテッド ジペプチドのアポトーシスインヒビターおよびそれらの使用
US6242422B1 (en) 1998-10-22 2001-06-05 Idun Pharmacueticals, Inc. (Substituted)Acyl dipeptidyl inhibitors of the ice/ced-3 family of cysteine proteases
DE60030097T2 (de) 1999-03-16 2007-03-08 Cytovia, Inc., San Diego Substituierte 2-aminobenzamin caspase inhibitoren und ihre verwendung
MXPA01010127A (es) 1999-04-09 2002-08-20 Cytovia Inc Inhibidores de la caspasa y el uso de los mismos.
BR0013666A (pt) * 1999-08-27 2002-05-14 Cytovia Inc "alfa"-hidróxi-ácidos substituìdos inibidores de caspases e o seu uso
CN1994298A (zh) * 2000-03-29 2007-07-11 沃泰克斯药物股份有限公司 氨基甲酸酯天冬氨酸特异性半胱氨酸蛋白酶抑制剂及其用途

Also Published As

Publication number Publication date
PT1268425E (pt) 2008-04-01
JP2008266348A (ja) 2008-11-06
DE60132567T2 (de) 2009-01-22
PL358430A1 (en) 2004-08-09
WO2001072707A3 (en) 2002-05-23
AU4961901A (en) 2001-10-08
WO2001072707A2 (en) 2001-10-04
US20040053920A1 (en) 2004-03-18
KR20020086711A (ko) 2002-11-18
EA200201030A1 (ru) 2003-02-27
PL201081B1 (pl) 2009-03-31
DE60132567D1 (de) 2008-03-13
HRP20020782A2 (en) 2004-12-31
CA2403959A1 (en) 2001-10-04
NO325062B1 (no) 2008-01-28
EA005740B1 (ru) 2005-06-30
MXPA02009633A (es) 2003-03-10
ATE384695T1 (de) 2008-02-15
CZ20023227A3 (cs) 2003-01-15
HK1052355A1 (en) 2003-09-11
PE20011267A1 (es) 2001-12-15
NZ521639A (en) 2004-05-28
IL151829A0 (en) 2003-04-10
JP2003528855A (ja) 2003-09-30
BR0109588A (pt) 2003-02-04
ZA200207483B (en) 2003-09-18
AR027993A1 (es) 2003-04-23
KR100858640B1 (ko) 2008-09-17
EP1268425B1 (en) 2008-01-23
CN1422253A (zh) 2003-06-04
NO20024661D0 (no) 2002-09-27
TWI318207B (en) 2009-12-11
BG107136A (bg) 2003-05-30
US6689784B2 (en) 2004-02-10
HUP0301472A2 (hu) 2003-08-28
DK1268425T3 (da) 2008-05-05
HUP0301472A3 (en) 2005-04-28
YU73702A (sh) 2006-03-03
CN1994298A (zh) 2007-07-11
NO20024661L (no) 2002-11-26
EP1268425A2 (en) 2003-01-02
ES2296742T3 (es) 2008-05-01
CN100358869C (zh) 2008-01-02
AU2001249619B2 (en) 2006-08-17
JP4298200B2 (ja) 2009-07-15
EE200200550A (et) 2004-02-16
HK1052355B (zh) 2008-06-27
IL151829A (en) 2012-03-29
US20020028803A1 (en) 2002-03-07
US7074782B2 (en) 2006-07-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SK13922002A3 (sk) Karbamátové inhibítory kaspázy a ich použitie
AU2001249619A1 (en) Carbamate caspase inhibitors and uses thereof
US7442790B2 (en) Caspase inhibitors and uses thereof
US7807659B2 (en) Caspase inhibitors and uses thereof
US7968716B2 (en) Caspase inhibitors and uses thereof
US7053057B2 (en) Caspase inhibitors and uses thereof
JP2004509120A (ja) カスパーゼ阻害剤およびそれらの用途
IL213397A (en) Protection module with buffer zone and method for creating it
EP1923386A2 (en) Carbamate caspase inhibitors and uses thereof

Legal Events

Date Code Title Description
FB9A Suspension of patent application procedure