SK130096A3 - 5-heterocyclic-1,5-benzodiazepine derivatives, a method of producing, pharmaceutical composition containing them and their use - Google Patents

Description

(57) Anotácia:

5-HeterocykIo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca (I), v ktorom jednotlivé symboly majú význam uvedený v hlavnom nároku, majú agonistickú účinnosť na receptoroch CCK-A a je možné nimi dosiahnuť moduláciu účinku gastrínu a cholecystokinínu u cicavcov. Tieto látky sa podávajú vo forme farmaceutického prostriedku.

?D

- 1 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty, spôsob výroby, farmaceutický prostriedok s ich obsahomja ich použitie Oblasť techniky

Vynález sa týka 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepinových derivátov, ktoré majú agonistickú účinnosť na CCK-A receptoroch a umožňujú moduláciu účinku gastrinu a cholecystokininu CCK u cicavcov. Vynález sa týka aj spôsobu výroby týchto látok a farmaceutických prostriedkov, ktoré tieto látky obsahuj ú.

Doterajší stav techniky

Cholecystokiníny CCK a gastrín sú štruktúrne príbuzné peptidy, ktoré sa vyskytujú v tkanive žalúdka, čriev a tiež centrálneho nervového systému. Cholecystokiníny zahrňujú CCK-33, neuropeptid s obsahom 33 zvyškov aminokyselín v jeho pôvodne izolovanej forme, ktorou je karboxyterminálny oktapeptid CCK-8, ktorý je okrem toho tiež prirodzene sa vyskytujúcim neuropeptidom, a ďalej uvedené formy s obsahom 39 a 12 aminokyselín. Gastrín sa vyskytuje vo forme s obsahom 34, 17 a 14 zvyškov aminokyselín, pričom najkratším účinným reťazcom je C-terminálny tetrapeptid, Trp-Met-Asp-Phe-Nl·^ , CCK-4, ide o štruktúru, ktorá je prítomná tak v CCK ako aj v gastríne.

CCK a gastrín sú gastrointestinálne hormóny a nervové prenášače v centrálnom a periférnom systéme, svoju biologickú úlohu uskutočňujú väzbou na príslušné receptory, uložené na rôznych miestach celého organizmu. Existujú aspoň dva podtypy receptorov pre cholecystokiníny, ktoré sú označované CCK-A a CCK-B a oba tieto typy je možné nájsť v periférnom a centrálnom nervovom systéme.

Receptor CCK-A, bežne označovaný za receptor periférneho typu sa primárne nachádza v slinívke brušnej, žlčníku, tenkom čreve, vo zveračoch pyloru a v aferentných nervových vláknach vagu. Tento typ receptora je však možné nájsť aj

- 2 v určitých definovaných oblastiach mozgu, kde slúži na produkciu rôznych typických účinkov centrálneho nervového systému. Vzhľadom na schopnosť CCK-8 a selektívnych antagonistov receptorov A potlačiť príjem potravy u niektorých živočíšnych druhov, boli vyvíjané veľké snahy pripraviť nové látky, pôsobiace agoništicky uvedeným spôsobom v nádeji, že tieto látky bude možné použiť ako anorektiká.

Receptory CCK-B alebo gastrínu je možné nájsť v periférnych neurónoch, v hladkých svaloch a v sliznici tráviacej sústavy, najmä v bunkách stien tráviacej sústavy a v bunkách ECL, D a v riadiacich bunkách. Receptory typu CCK-B tiež prevažujú v mozgovom tkanive a všeobecne sa uznáva ich úloha pri riadení vzniku a potlačení úzkostných stavov, pri prebudení a tiež ako reakcia na pôsobenie neuroleptických látok.

V US patentovom spise č. 4 988 692 (Gasc a ďalší) sa opisuje skupina 3-acylamino-l-alkyl-5-fenyl-l,5-benzodiazepínových derivátov, ktoré pôsobia ako látky, antagonizujúce cholecystokinín a sú schopné zvrátiť alebo blokovať účinky uvedených endogénnych hormónov na ich receptoroch.

US 4 490 304 a PCT patentové prihlášky V090/06937 a VO91/19733 opisujú peptidové deriváty s agonistickým účinkom na CCK-A. Tieto látky sú uvádzané ako vhodné na riadenie chuti k jedlu a na liečenie a/alebo prevenciu porúch tráviaceho systému alebo centrálneho nervového systému u rôznych živočíchov a zvlášť u ľudí.

US 5 187 154 opisuje použitie neuropeptidu choleoystokinínu CCK na- riadenie vyprázdňovania žalúdka u chorých so začínajúcou cukrovkou, nezávislou na inzulíne, u ktorých sa žalúdok rýchlo vyprázdni. Okrem toho sa v tomto patentovom spise uvádza, že zlúčeniny, ktoré spomalujú vyprázdnenie žalúdka, je možné použiť na zmiernenie alebo potlačenie príznakov tohoto typu cukrovky. Tieto príznaky zahrnujú zvýšenú koncentráciu glukózy a inzulínu v krvi, zníženú vnímavosť tkanív na inzulín, malú odolnosť proti infekcii a straty cukru v moči, uvedené látky môžu tiež udržať vyprázdnenie žalúdka na normálnych hodnotách.

Teraz bolo zistené, že nová skupina 5-heterocyklo-l,53 benzodiazepínových derivátov s agonistickým účinkom na receptor CCK-A môže upravovať pôsobenie hormónu gastrínu a cholecystokinínu u cicavcov. Niektoré z týchto látok majú aj antagonistický účinok na receptory CCK.-B.

Podstata vynálezu

Podstatu vynálezu tvoria 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca I

(I) a ich fyziologicky prijateľné soli a solváty, v ktorých X znamená atóm vodíka, trifluórmetyl, alkyl, alkyltioskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo atóm halogénu,

R¹“ znamená skupinu všeobecného vzorca II alebo -NR^R^

R² znamená

1) heterocyklický zvyšok, viazaný v polohe 2, ktorý sa volí zo skupiny pyrolový, tetrahydropyrolový, indolový, benzofuránový, tiofénový, benzotiofénový, indolínový, chinolínový alebo 4-oxobenzo4 pyránový zvyšok, pričom pyrolový, tetrahydropyrolový, indolový alebo indolínový zvyšok sú prípadne substituované na dusíkovom atóme kruhu skupinou R® v ďalej uvedenom význame a indolový, indolínový, chinolínový, benzofuránový, benzotiofénový alebo 4-oxobenzopyránový zvyšok sú prípadne substituované na benzénovom kruhu skupinou v ďalej uvedenom význame alebo

2) fenyl, prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi, nezávisle volenými zo skupiny atóm halogénu, hydroxyskupina, kyanoskupina, karbot xyskupina, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka,

-0-(Cl^CgHg), -COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, aminoskupina, dimetylaminoskupina, -NHR¹®, 1-pyrolidinyl alebo tetrazolyl alebo

3) pyridín alebo pyridinyl, prípadne nezávisle mono- alebo disubstituovaný substituentmi zo skupiny atóm halogénu, metyl, hydroxyskupina, ⁵ nitroskupina, kyanoskupina, karboxyskupina,

-O-alkyl s 1 až 4 atómoch uhlíka, -OCCF^CgH^), -COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, aminoskupina alebo dimetylaminoskupina alebo

4) NHR¹¹, kde R¹¹ má ďalej uvedený význam alebo znamená 7-indazolyl, obsahujúci na dusíkovom atóme v polohe 1 skupinu R¹®, a

R znamená heterocyklickú skupinu, viazanú na zvyšok molekuly cez atóm uhlíka v kruhu a volenú zo skupiny pyridyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, pyrazinyl, furány1, tiofenyl, pyrolyl, oxazolyl, tiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, izoxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiazolyl, tiadiazolyl, pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl alebo tiomorfolinyl, tieto heterocyklické skupiny sú prípadne substituované až troma rovnakými alebo rôznymi substituentmi zo skupiny atóm halogénu, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, nitroskupina, karboxyskupina, al5

RR

R~

R^c

RR^c

R' koxykarbonyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, alkoxyskupina alebo alkyltioskupina vždy s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoskupina, alkylaminoskupina alebo dialkylaminoskupina vždy s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylových častiach, nezávisle znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 6 atómami uhlíka, fenyl, -(CH₂)pCN alebo -(CH₂)pCOO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti a nezávisle znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 6 atómami uhlíka, benzyl, fenyl, prípadne nezávisle substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi zo skupiny alkyl s 1 až 3 atómami uhlíka, prípadne substituovaným jedným alebo väčším počtom atómov fluóru, kyanoskupinou, hydroxyskupinou, dimetylaminoskupinou, O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -0(CH₂CgH^), -NH-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -N(alkyl)₂ s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrolidinyl, morfolinyl alebo atóm halogénu alebo znamená alkyl s 1 až 2 atómami uhlíka a znamená fenyl, substituovaný v polohe 2 alebo 4 atómom chlóru, metylovou skupinou, metoxyskupinou alebo metoxykarbonylovou skupinou, znamená atóm vodíka alebo metyl, znamená atóm vodíka, hydroxyskupinu, atóm fluóru, dimetylaminoskupinu, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo skupinu -O(CH₂CgHg), znamená skupinu -(CH₂)^ΟΟΟΗ, znamená metyl, atóm chlóru, nitroskupinu, hydroxyskupinu, metoxyskupinu alebo skupinu -NHR¹®, znamená atóm vodíka, acetyl, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -SO-jH, -SO₂CH₃, -SO₂CF₃ alebo -SO₂CgHg alebo alkoxykarbonyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, znamená fenyl, prípadne nezávisle mono- alebo disubs6 tituovaný substituentmi zo skupiny atóm fluóru, trifluórmetoxyskupina, alkyltioskupina s 1 až 4 atómami uhlíka, -(CH₂)_cC00H, -(CH₂)_cC00-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH₂)_cSCH₃, -(CH₂)_cSOCH₃, -(ch₂)_cso₂ch₃, -(ch₂)_cconh₂, -sch₂cooh, -conh(so₂ch₃), -CONH(SO₂CF₃) , -(CH₂)_cN(alkyl)₂ s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH₂)_CNH(SO₂CF₃), -(CH₂)_cN-(SO₂CF₃)-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH₂)_cSO₂NHCO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH₂)_cS0₂N-alkyl-C0-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v každej alkylovej časti, -(CH₂)_cCONHSO₂-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH₂)_cCON-alkyl-SO₂-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v každej alkylovej časti, -(CH₂)_cOR -(CH₂)_cNHR¹⁰ alebo fenyl, monosubstituovaný substituentom zo skupiny -(CH₂)θ-tetrazolyl, -(CH₂)_c-karboxamidotetrazolyl alebo -(CH₂)θ-pyrolidinyl alebo znamená rH pyridín alebo pyridinyl, prípadne nezávisle mono- alebo disubstituované substituentmi zo skupiny atóm halogénu, metyl, hydroxyskupina, nitroskupina, kyanoskupina, karboxyskupina, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoskupina, dimetylaminoskupina alebo -NHR¹⁰, ίο

R znamená atóm vodíka, alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, -CH₂CgH₃, -CH₂COOH, -CH₂C0NH₂, -CH₂CONH-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -CH₂CON(alkyl)₂ s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo niektorou zo skupín

-(CHj)_cCO-N

alebo

.10

-(CH₂) CO-N N-R znamená celé znamená celé znamená celé číslo 1 číslo 1 číslo 1 alebo 2, alebo 2, až 4, b znamená celé číslo 0 až 3 a c znamená celé číslo 0 alebo 1.

V prípade, že znamená skupinu všeobecného vzorca II, zahrňujú príklady týchto skupín skupiny, v ktorých R^ známená atóm vodíka a zvlášť metyl, R znamená atóm vodíka, hýdroxyskupinu, metoxyskupinu alebo atóm fluóru a n = 1.

V prípade, že R^· znamená skupinu -NR^R^, zahrňujú príklady týchto skupín také skupiny, v ktorých znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, ako propyl alebo izopropyl, ďalej cyklohexyl alebo fenyl a znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, benzyl alebo fenyl, prípadne substituovaný v polohe para- hydroxyskupinou, dimetylaminoskupinou, metoxyskupinou, trifluórmetylovou skupinou, atómom fluóru, pyrolidínovou alebo morfolínovou skupinou. Zvlášť výhodné skupiny vo význame r! sú skupiny, v ktorých znamená propyl a zvlášť izopropyl a R^ znamená fenyl alebo fenyl, substituovaný v polohe para hydroxyskupinou, metoxyskupinou, dimetylaminoskupinou, atómom fluóru alebo morfolínovou skupinou.

Príkladom zvlášť výhodných skupín môžu byť také skupiny, v ktorých R^ znamená skupiny všeobecného vzorca II, x *7 v ktorom R° znamená metyl, n = 1 a R znamená atóm vodíka, hydroxyskupinu, atóm fluóru alebo metoxyskupinu alebo R^ znamená skupinu -NR^R^, v ktorej R^ znamená propyl alebo .izopropyl a R^ znamená fenyl, prípadne substituovaný v polohe para hydroxyskupinou, metoxyskupinou, atómom fluóru, dimetylaminoskupinou, pyrolidínovou skupinou alebo morfolínovou skupinou. V zvlášť výhodnom prípade znamená izopropyl a r5 znamená 4-metoxyfenyl.

V prípade, že R znamená indolovú, indolínovú, benzofuránovú, benzotiofénovú, chinolínovú alebo 4-oxobenzopyránovú skupinu, je prípadným substituentom R^ s výhodou skupina, ktorá sa volí zo skupiny vodík, metyl, metoxyskupina, hydroxyskupina, nitroskupina alebo aminoskupina a prípadným subso tituentom R na atóme dusíka môže byť skupina -CH2CO2H.

V prípade, že R znamená prípadne substituovanú fenylovú skupinu, môže ísť o fenyl, prípadne substituovaný jednou alebo dvoma rovnakými substituentmi zo skupiny atóm chlóru alebo fluóru, aminoskupina, hydroxyskupina alebo karboxylová skupina.

V prípade, že R² znamená skupinu -NHR¹¹, môže R¹¹ znamenať fenyl (prípadne substituovaný atómom fluóru, hydroxyskupinou, aminoskupinou, dimetylaminoskupinou, trifluórmetylsulfonylaminoskupinôu, alkoxykarbonylovou skupinou s 1 až 4 arómami uhlíka v alkoxylovej časti, lH-tetrazolyl-5-ylovou

-i o -i 9 skupinou, acetylaminoskupinou alebo skupinou -OR , kde R znamená vodík, metyl, benzyl, -CH2CONH2,

-CH2COONHCH3, -ΟΗ2θΟΝ(ΟΗβ)2, alebo niektorú zo skupín

CH^CON^ \> ’ CH^CON^ \íH alebo CH,CON^_/NCO₂C(CH₃)₃ alebo 7-indazolylovú skupinu, v kxorej substituentom R¹^ na dusíkovom atóme v polohe 1 je vodík.

V prípade, že R¹¹ znamená monosubstituovanú fenylovú skupinu, nachádza sa substituent s výhodou v polohe metá.

Príkladom zvlášť výhodných skupín R sú indolová, benzofuránová, tiofénová, benzotiofénová, indolínová, chinolínová, 4-oxobenzopyránová skupina a prípadne substituovaná fenylová skupina alebo skupina NHR . R sa s výhodou volí zo skupiny indolínová, indolová, benzofuránová skupina, prípadne substituovaná fenylová skupina alebo skupina -NHR¹¹, zvlášť výhodným významom pre R je indolová skupina, prípadne substituovaný fenyl alebo skupina -NHR¹¹.

a

V prípade, že R znamená pyridyl, sú vhodnými skupinami napríklad 2-pyridyl, 3-pyridyl a 4-pyridyl. a

V prípade, že R znamená pyrimidinyl, sú vhodnými skupinami napríklad 2-pyrimidinyl alebo 5-pyrimidinyl.

V prípade, že R znamená pyrazolylovu skupinu, je vhodnou skupinou napríklad 1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl.

Q

Ako príklady vhodných skupín R je možné uviesť pyridyl, ako 2-pyridyl, 3-pyridyl a 4-pyridyl, pyrimidinyl, ako 2-pyrimidinyl alebo 5-pyrimidinyl a tiež 1,3,5-trimetyl9 lH-pyrazol-4-yl.

Zvlášť výhodnú skupinu zlúčenín podľa vynálezu tvoria zlúčeniny, v ktorých znamená skupinu -NH^R^, v ktorej R^ znamená propyl alebo izopropyl a R$ je fenyl, prípadne substituovaný v polohe para hydroxyskupinou, metoxyskupinou, fluórom, dimetylaminoškupinou alebo morfolínovou skupinou,

O

R znamená fenyl, prípadne nezávisle substituovaný jednou alebo dvoma skupinami zo skupiny chlór, fluór, hydroxyskupina, aminoskupina alebo karboxyskupina, ďalej skupinu -NHR¹·!, v ktorej R¹¹ znamená fenyl (prípadne substituovaný aminoskupinou, dimetylaminoškupinou, trifluórmetylovou skupinou, sulfonylaminoskupinou, karboxyskupinou, lH-tetrazol5-ylovou skupinou, acetylaminoskupinou alebo skupinou i 2 12

-OR , v ktorej R znamená atóm vodíka, metyl, benzyl, -CH₂CO₂H, -CH₂CONH₂, -CH₂CONHCH₃, -CH₂CON(CH₃)₂, alebo niektorú zo skupín

CH₂CON

CHLjCON

alebo ch₂con

NCO₂C(CH.)₃ pričom substituent sa s výhodou nachádza v polohe metá) alebo indolovú skupinu, v ktorej je atóm dusíka, prípadne substituovaný skupinou -CH₂C0₂H a benzénový kruh je prípadne substituovaný atómom chlóru, metylovou skupinou, metoxyskupinou, nitroskupinou, hydroxyskupinou alebo aminoskupinou,

Q

R znamená pyridyl, napríklad 2-pyridyl, 3-pyridyl a 4-pyridyl, pyrimidinyl, ako 2-pyrimidinyl alebo 5-pyrimidinyl alebo 1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl a X znamená atóm fluóru alebo atóm vodíka.

Zvlášť zaujímavú skupinu zlúčenín podľa vynálezu tvoria látky s vysokou a selektívnou účinnosťou na receptor CCK-A, k takejto výnimočnej účinnosti dochádza v prípade, že R² znamená indolovú skupinu. Výhodnou skupinou látok v tomto zmysle sú také zlúčeniny, v ktorých je indolová skupina substituovaná na atóme dusíka skupinou -CH₂CO₂H alebo ešte výhodnejšie nie je atóm dusíka substituovaný a benzénový kruh indolovej skupiny je prípadne substituovaný atómom chlóru, metylovou skupinou, metoxyskupinou, nitroskupinou, hydroxyskupinou alebo aminoskupinou. V tejto skupine látok sú zvlášť vhodné tie zlúčeniny, v ktorých znamená izopropyl, R znamená p-metoxyfenyl a R znamená pyridyl, pyrimidinyl alebo 1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl a zvlášť 3-pyridyl a X znamená atóm vodíka.

Výhodné sú najmä nasledujúce zlúčeniny:

(1- [ izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5pyridin-2-yl-2,3,4,5 -tetrahydro-ΙΗ-benzo[b][1,4]diazepin3-yl)amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej, (1- [ izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][1,4]diazepin3-yl)amid kyseliny 1H-indol-2-karboxylovej,

2-[2,4-dioxo-3-(3- fenylureido)-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4metoxyfenyl)acetamid, ako aj enantioméry týchto zlúčenín.

Zvlášť výhodnou zlúčeninou podľa vynálezu je (1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-ΙΗ-benzo[b][1,4]diazepin-3yl)amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej a jeho enantioméry.

Pod pojmom alkyl sa zvyčajne rozumejú alkylové reťazce s priamym alebo rozvetveným reťazcom, napríklad alkyl s 1 až 6 atómami uhlíka zahrňuje metyl, etyl, n-propyl, izopropyl, n-butyl, izobutyl, terc.butyl, n-pentyl, atď.

Cykloalkyl znamená všetky alicyklické izoméry zodpovedajúcej alkylovéj skupiny. Napríklad alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka zahrňuje cyklopropyl, cyklopentyl a cyklohexyl.

Pod pojmom atóm halogénu sa rozumejú atómy fluóru, chlóru, brómu alebo jódu.

Tetrazolová skupina alebo časť takejto skupiny znamená (1H)-tetrazol-5-ylovú skupinu a jej tautoméry.

Je zrejmé, že zlúčeniny všeobecného vzorca I obsahujú stredy priestorovej izometrie. Vynález preto zahrňuje všetky existujúce stereoizoméry a geometrické izoméry zlúčenín všeobecného vzorca I a to nielen racemické zlúčeniny, ale aj jednotlivé opticky aktívne izoméry. V prípade, že má byť získaná zlúčenina všeobecného vzorca I vo forme jediného enantioméru, je možné rozdeliť výsledný produkt alebo je možné uskutočniť stereošpecifickú syntézu za použitia čistého izoméru východiskovej látky alebo akéhokoľvek vhodného medziproduktu. Delenie výsledného produktu, medziproduktu alebo východiskovej látky je možné uskutočniť akýmkoľvek vhodným spôsobom, napríklad podľa publikácie Stereochemistry of Carbon Compounds, E. L. Eliel, McGraw Hill, 1962 alebo Tablets of Resolving Agents, S. H. Vilen. V tých prípadoch, keď vznikajú alebo môžu vzniknúť tautoméry zlúčenín všeobecného vzorca I, zahrňuje vynález všetky tautomérne formy týchto látok.

Je zrejmé, že zlúčeniny podľa vynálezu je možné na liečebné účely použiť vo forme farmaceutický prijateľných solí alebo solvátov. Fyziologicky prijateľné soli zlúčenín všeobecného vzorca I zahrňujú bežné soli, vytvorené s farmaceutický prijateľnými anorganickými alebo organickými kyselinami a tiež kvartérne amóniové soli. Ako špecifické príklady výhodných solí je možné uviesť soli s kyselinou chlorovodíkovou, bromovodíkovou, sírovou, fosforečnou, dusičnou, chlóristou, fumarovou, octovou, propiónovou, jantárovou, glykolovou, mravčou, mliečnou, maleínovou, vínnou, citrónovou, pamoovou, jablčnou, hydroxymaleínovou, fenyloctovou, glutamovou, benzoovou, salicylovou, fumarovou, toluénsulfónovou, metánsulfónovou, naftalén-2-sulfónovou, benzénsulfónovou a podobne. Ďalšie kyseliny, ako kyselinu šťavelovú, aj keď nie sú prijateľné z farmaceutického hľadiska, je možné použiť na prípravu solí, ktoré sú vhodné ako medziprodukty na výrobu zlúčenín podľa vynálezu a ich farmaceutický prijateľných solí. Všetky prípady, v ktorých sa uvádza zlúčenina podľa vynálezu, zahrňujú, v ďalšom priebehu prihlášky, vždy volné látky, ako aj farmaceutický prijateľné soli a solváty zlúčenín všeobecného vzorca I.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I majú agonistický účinok na receptory CCK-A a je možné ich považovať za účinné alebo čiastočne účinné agonisty cholecystokinínu v tom zmysle, že sú to látky, schopné sa viazať na receptory CCK-A a buď úplne alebo čiastočne stimulovať sťahy žlčníka a/alebo znížiť príjem potravy u živočíchov.

Pokiaľ ide o agonistický účinok na receptory CCK-A, je možné zlúčeniny podľa vynálezu považovať za užitočné anorektické látky, ktoré sú vhodné na liečenie obezity a príbuzných alebo súvisiacich patologických stavov, ako sú cukrovka alebo zvýšený krvný tlak. Okrem toho znamenajú zlúčeniny podľa vynálezu nový prístup pri vyvolávaní pocitu nasýtenia, pri regulácii chuti do jedla a úprave množstva prijímanej potravy u cicavcov, zvlášť u ľudí pri liečení obezity, kde môžu počas dlhšej doby zaistiť udržanie úbytku hmotnosti. Zlúčeniny je možné použiť aj u cukrovky, nezávislej na inzulíne, ktorá je spojená s rýchlym vyprázdnením žalúdka po požití potravy.

Okrem tohó niektoré zlúčeniny podľa vynálezu môžu mať antagonistický a špecifický účinok na receptoroch CCK-B a receptoroch pre gastrín, ako je možné dokázať inhibíciou kontrakcie izolovaného pozdĺžneho svalu ilea morčaťa po stimulácii CCK-4 a tiež inhibíciou pentagastrínom stimulovanej sekrécie kyseliny na izolovanom prúžku žalúdočnej sliznice potkana spôsobom podľa publikácie M. Patel a C. F. Spraggs, Br. J. Pharmac., 1992, 106, 275 až 282 a J. J. Reeves a R. Stables, Br. J. Pharmac., 1985, 86, 677 až 684.

Relatívnu afinitu zlúčenín podľa vynálezu pre receptory CCK-A a CCK-B je možné určiť použitím známych postupov, napríklad podlá publikácie Fornos a ďalší, J. Pharmacol, Exp. Ther., 1992, 261, 1056 až 1063.

Schopnosť zlúčenín podľa vynálezu spôsobiť inhibíciu sekrécie žalúdočnej kyseliny, napríklad po stimulácii tejto sekrécie pentagastrínom je možné dokázať u bdiacich potkanov so zavedenou žalúdočnou píšťalou použitím postupu podľa Hedges a Parsons, Journal of Physiology, 1977, 267, 191 až 194.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I spôsobujú inhibíciu alebo oneskorenie vyprázdňovania žalúdka, čo je možné dokázať štandardnými skúškami. Postupuje sa napríklad tak, že sa potkanom, ktoré boli chované na lačno 18 hodín, vopred podá intraperitoneálne skúmaná látka, napríklad 20 minút pred podaním metylcelulózy žalúdočnou sondou. Potrava obsahuje označenie, napríklad fenolovú červeň. Po určitej vopred určenej dobe sa v rôznych intervaloch potkany usmrtia a stanoví sa množstvo potravy v žalúdku podľa koncentrácie látky, použitej na označenie. Stanovená hodnota sa potom porovnáva s hodnotou u kontrolných zvierat, ktorým nebola podaná žiadna účinná látka.

Bolo dokázané, že zlúčeniny podlá vynálezu majú zvlášť výhodný profil účinnosti, to znamená dobrú biologickú dostupnosť pri perorálnom podaní a dobrú rozpustnosť vo vode.

Podstatu vynálezu tvoria teda aj zlúčeniny všeobecného vzorca I alebo ich farmaceutický prijateľné soli alebo solváty na použitie na liečebné účely, zvlášť v ľudskom lekárstve .

Zlúčeniny všeobecného vzorca I a ich farmaceutický prijateľné soli alebo solváty je možné zvlášť použiť na výrobu farmaceutických prostriedkov, určených na liečenie stavov, pri ktorých je možné predpokladať priaznivý účinok pri modifikácii účinku CCK a/alebo účinku gastrínu.

Tieto farmaceutické prostriedky je teda možné použiť na liečenie cicavcov v uvedených prípadoch, podáva sa liečebne účinné množstvo zlúčenín všeobecného vzorca I alebo ich farmaceutický prijateľných solí alebo solvátov.

Je zrejmé, že pokial sa uvádza použiteľnosť zlúčenín na liečebné účely, je tieto látky možné rovnako dobre použiť na prevenciu a na liečenie už vyvinutých stavov. Množstvo zlú14 čenín podľa vynálezu, ktoré je potrebné použiť pri liečení, bude závisieť na povahe chorobného stavu, na veku a na stave chorého, konečné množstvo vždy určí ošetrujúci lekár alebo veterinárny lekár. V typických prípadoch sa budú dávky pre dospelého človeka pohybovať v rozmedzí 0,02 až 5000, napríklad 1 až 1500 mg denne. Túto dávku je možné podať vo forme jedinej dávky alebo rozdelene vo vhodných intervaloch, napríklad vo forme dvoch, troch, štyroch alebo ešte väčšieho počtu čiastkových dávok v priebehu dňa.

Zlúčeniny podľa vynálezu je síce možné podávať v čistej forme, je však výhodné ich použiť ako účinné zložky farmaceutických prostriedkov. Podstatu vynálezu tvoria aj farmaceutické prostriedky, ktoré obsahujú zlúčeninu všeobecného vzorca I alebo jej farmaceutický prijateľnú soľ spolu s farmaceutický prijateľným nosičom a prípadne s ďalšou účinnou zložkou. Nosič musí byť prijatelný v tom zmysle, že je kompatibilný s ostatnými zložkami farmaceutického* prostriedku a súčasne je celkom neškodný pre chorého.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu zahrňujú prostriedky, špecificky upravené na podanie perorálne, na podanie ústnou sliznicou, na parenterálne podanie, podanie vo forme implantátu alebo na rektálne podanie, s výhodou sa prostriedky podľa vynálezu podávajú perorálne. Na podanie ústnou sliznicou môžu mať prostriedky podľa vynálezu formu tabliet alebo kosoštvorčekových tabliet, vyrobených zvyčajným spôsobom. Tablety a kapsuly, ktoré sú určené na perorálne podanie môžu obsahovať zvyčajné pomocné látky, ako napríklad spojivá, ako sirup, akáciovú gumu, želatínu, sorbitol, tragakant, povarený škrob alebo polyvinylpyrolidón, ďalej plnidlá, ako sú laktóza, sacharóza, mikrokryštalická celulóza, kukuričný škrob, fosforečnan vápenatý alebo sorbitol, klzné látky, napríklad stearan horečnatý, kyselinu stearovú, mastenec, polyetylénglykol alebo oxid kremičitý, dezintegračné látky, ako zemiakový škrob alebo sodnú soľ glykolátu škrobu alebo zmáčadlá, ako laurylsíran sodný. Tablety môžu byť tiež opatrené povlakom za použitia známych postupov.

Zlúčeniny podľa vynálezu je možné spracovať aj na prostriedky, určené na perorálne podanie v kvapalnej forme, ako sú suspenzie, roztoky alebo emulzie v oleji alebo vo vode, sirupy alebo elixíry. Okrem toho môžu byť účinné látky na tvorbu týchto prostriedkov dodávané v suchej forme, určenej na zmiešanie s vodou alebo iným vhodným prostredím tesne pred použitím. Tieto kvapalné prostriedky môžu obsahovať bežné prísady, ako sú činidlá, napomáhajúce vzniku suspenzie, napríklad sorbitolový sirup, metylcelulóza a sirup z glukózy a sacharózy, želatína, hydroxyetylcelulóza, karboxymetylcelulóza, gél stearanu hlinitého alebo hydrogenované jedlé tuky, ďalej môže ísť o emulgačné činidlá, ako lecitín, sorbitanmonooleát alebo akáciovú gumu, použiť je možné aj prostredie nevodné vrátane jedlých olejov, ako sú mandľový olej, frakcionovaný kokosový olej, estery typu olejov, propylénglykol alebo etylalkohol a konzervačné činidlá, ako metyl- alebo propyl-p-hydroxybenzoát alebo kyselinu sorbovú. Farmaceutické prostriedky môžu byť tiež spracované na formu čapíkov, ktoré môžu obsahovať bežné bázy na výrobu čapíkov, ako kakaové maslo alebo iné glyceridy.

Na perorálne podanie sa zlúčeniny podľa vynálezu často spracovávajú na tablety alebo kapsuly, vybavené enterosolventným povlakom, kapsuly môžu byť priamo vyrobené z enterosolventného materiálu.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu môžu byť tiež spracované na formy, vhodné na parenterálne podanie vo forme injekcie alebo kontinuálnej infúzie. Prostriedky na injekčné podanie môžu mať formu suspenzie, roztoku alebo emulzie v olejovom alebo vodnom prostredí, tieto prostriedky môžu obsahovať pomocné látky ako činidlá na tvorbu suspenzie, stabilizačné činidlá a/alebo dispergačné činidlá. Aj v tomto prípade môže byť účinná zložka dodávaná vo forme prášku na zmiešanie s vhodným nosným prostredím, napríklad sterilnou bezpyrogénnou vodou tesne pred použitím.

Farmaceutické prostriedky podlá vynálezu môžu byť spracované ako depotné prostriedky. Takéto prostriedky s dlhodobým účinkom sú napríklad implantáty, ako podkožné alebo vnútrosvalové implantáty alebo môže tiež ísť o vnútrosvalové injekcie. Zlúčeniny podľa vynálezu môžu byť na toto použitie spracované spoločne s vhodným polymérnym alebo hydrofóbnym materiálom, ako je napríklad emulzia vo vhodnom oleji, s ionomeničovou živicou alebo s derivátom, málo rozpustným vo vode, napríklad s ťažko rozpustnou soľou.

Farmaceutické prostriedky podľa vynálezu môžu obsahovať 0,1 až 99 % hmotnostných, zvyčajne 30 až 95 % hmotnostných účinnej zložky v prípade tabliet a kapsúl a 3 až 50 % v prípade kvapalných prostriedkov.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I a ich soli je možné pripraviť všeobecnými postupmi, ktoré budú ďalej podrobnej šie uvedené. V priebehu týchto postupov majú symboly R¹ až R a X význam, uvedený vo všeobecnom vzorci I, ak nie je výslovne uvedené inak, ale môže ísť o skupiny, ktoré je možné na uvedené významy premeniť.

V ktoromkoľvek z týchto postupov môže byť nevyhnutné a/alebo žiadúce chrániť citlivé alebo reakčné skupiny. Na tento účel sa používajú ochranné skupiny podľa štandardných postupov organickej syntézy, tak ako boli opísané v publikácii T. V. Green a P. G. M. Vatts, 1991, Protecting Groups in Organic Synthesis, John Viley and Sons. Tieto skupiny je potom možné odstrániť vo vhodnom stupni bežnými postupmi. Napríklad aminoskupiny je možné chrániť arylmetylovou, napríklad benzylovou skupinou, acylovou skupinou, sulfonylovou, napríklad alylsulfonylovou skupinou, ftalimidazol alebo tosylovou skupinou, tieto skupiny je možné odstrániť hydrolýzou alebo hydrogenolýzou za použitia bežných podmienok. Hydroxylové a karboxylové skupiny je možné chrániť bežnými ochrannými skupinami, ako sú alkyl, napríklad metyl, terc.butyl alebo metoxymetyl, arylmetyl, ako benzén, difenylmetyl, alebo trifenylmetyl, heterocyklické skupiny, ako tetrahydropyranyl, acyl, napríklad acetyl alebo benzoyl a silylové skupiny, napríklad trialkylsilyl, napríklad terc.butyldimetylsilyl. Ochranné skupiny na hydroxylovej skupine je možné odstrániť bežným spôsobom. Napríklad alkyl, silyl, acyl a heterocyklickú skupinu je možné odstrániť hyd17 rolýzou v kyslom alebo zásaditom prostredí. Arylmetylové skupiny, ako trifenylmetyl, je možné odstrániť hydrolýzou v kyslom alebo zásaditom prostredí. Arylmetylové skupiny, ako benzyl, je možné odštiepiť hydrogenolýzou v prítomnosti katalyzátora na báze ušľachtilého kovu, ako paládia na aktívnom uhlí. Silylové skupiny je možné ľahko odstrániť za použitia zdroja fluoridových iónov, napríklad tetra-n-butylamóniumfluoridu.

Podľa prvého všeobecného postupu A je možné pripraviť zlúčeniny všeobecného vzorca I tak, že sa nechá reagovať amín všeobecného vzorca III

Q kde R , R , X a z majú význam, uvedený vo vzorci I, so zlúčeninou všeobecného vzorca IV

R^1:LY (IV) kde

Y znamená skupinu -NCO, -NHCOC1 alebo -NHCOR^a, kde R^a znamená fenoxyskupinu, substituovanú nitroskupinu alebo 1-imidazolovú skupinu.

Reakcia dobre prebieha v prítomnosti vhodného rozpúšťadla, napríklad halogenovaného uhľovodíka, ako dichlórmetánu, éteru, ako tetrahydrofuránu alebo nitrilu, ako acetonitrilu alebo v zmesi týchto rozpúšťadiel pri teplote v rozmedzí 0 až 80 °C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca IV, v ktorom Y znamená skupinu -NCO, je možné bežne získať alebo pripraviť reakciou amínov všeobecného vzorca H2N-R¹¹ s fosgénom alebo trifosgénom vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad v metylénchloride. Zlúčeniny všeobecného vzorca IV, v ktorom Y znamená skupinu -NHCOC1, je tiež možné pripraviť reakciou amínov vzorca H2NR¹¹ s fosgénom alebo trifosgénom vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad v metylénchloride. Zlúčeniny všeobecného vzorca IV, v ktorom Y znamená skupinu -NHCOR^a, kde R^a znamená 1-imidazolovú skupinu, je možné pripraviť pôsobením amínov všeobecného vzorca H2N-R¹¹ na karbonyldiimidazol vo vhodnom rozpúšťadle, ako dichlórmetáne, éteri alebo tetrahydrofuráne pri teplote 0 až 80 C, zvyčajne pri teplote miestnosti. Zlúčeniny všeobecného vzorca IV, v ktorom Y znamená skupinu -HNCOR^a, kde R^a znamená fenoxyskupinu, substituovanú nitroskupinou je možné pripraviť reakciou amínov všeobecného vzorca I^NR¹¹ s príslušným chlórmravčanom všeobecného vzorca R^aCOCl v prítomnosti bázy, ako pyridínu alebo trietylamínu vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad dichlórmetáne pri teplote v rozmedzí 0 až 50 °C.

Podľa ďalšieho všeobecného postupu B je možné pripraviť zlúčeninu všeobecného vzorca I reakciou medziproduktu všeobecného vzorca V

kde

Y znamená skupinu -NCO, -NHCOC1 alebo -NHCOR^a, kde R^a znamená fenoxyskupinu, substituovanú nitroskupinou alebo 1-imidazolovú skupinu a s amínom všeobecného vzorca VI

H₂N - R¹¹ (VI) a prípadne v prítomnosti bázy, napríklad terciárneho amínu, ako trietylamínu.

Reakcia dobre prebieha vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad v halogenovanom uhľovodíku ako dichlórmetáne alebo v éteri, ako tetrahydrofuráne alebo tiež v amide, ako N,Ndimetylformamide, prípadne pri teplote miestnosti až teplote varu použitého rozpúšťadla pod spätným chladičom.

Zlúčeniny všeobecného vzorca V sa s výhodou pripravujú in situ z amínu všeobecného vzorca III.

V jednom zo zvláštnych uskutočnení postupu B, v ktorom Y znamená skupinu -NHCOR^a, kde R^a znamená 1-imidazolovú skupinu, je možné imidazolid vzorca V vytvoriť in situ. V tomto prípade sa amín všeobecného vzorca VI nechá reagovať so zlúčeninou všeobecného vzorca III

(III) v prítomnosti karbonylimidazolu za vyššie uvedených podmienok .

V prípade postupu B, v ktorom Y znamená skupinu -NHCOR^a a R^a znamená fenoxyskupinu, substituovanú nitroskupinou sa reakcia s primárnym amínom vzorca VI s výhodou vykonáva v prítomnosti bázy, napríklad terciárneho amínu, ako trietylamínu .

V prípade postupu B, v ktorom Y znamená izokyanátovú skupinu -N=C=O sa reakcia s primárnym amínom všeobecného vzorca VI s výhodou vykonáva v aprotickom rozpúšťadle, na20 príklad v halogenovanom uhľovodíku, ako metylénchloride. Izokyanát sa s výhodou vytvára in situ pred pridaním primárneho amínu všeobecného vzorca VI.

Zlúčeniny všeobecného vzorca V, v ktorých R^a znamená prípadne substituovanú fenoxyskupinu, je možné pripraviť z primárneho amínu všeobecného vzorca III reakciou so zodpovedajúcim nitrosubstituovaným fenylchlórmravčanom v prítomnosti bázy, napríklad pyridínu. Reakciu je možné uskutočniť v rozpúšťadle, napríklad halogenovanom uhľovodíku, ako dichlórmetáne pri teplote v rozmedzí 0 až 50 °C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca V, v ktorom R^a znamená 1-imidazolovú skupinu, je možné pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca III s karbonylimidazolom v prítomnosti vhodného rozpúšťadla, napríklad halogenovaného uhľovodíka ako dichlórmetánu alebo éteru, ako tetrahydrofuránu pri teplote 0 až 80 °C, bežne pri teplote miestnosti.

Zlúčeniny všeobecného vzorca V, v ktorom Y znamená izokyanátovú skupinu vzorca -N=C=O alebo karbamoylchlorid -NHCOC1 je možné pripraviť z primárneho amínu vzorca III reakciou s fosgénom COC1₂ alebo trifosgénom vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad v metylénchloride.

Podľa ďalšieho všeobecného postupu C je možné získať zlúčeniny všeobecného vzorca I tiež reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca VII

R' s halogénacetamidom všeobecného vzorca VIII

R¹C0CH₂hal (VIII) kde hal znamená atóm chlóru alebo brómu.

Reakcia ľahko prebieha rak, že sa na zlúčeninu všeobecného vzorca VII pôsobí silnou bázou, napríklad hydridom sodíka v polárnom aprotickom rozpúšťadle, napríklad N,Ndimetylformamide s následnou reakciou s acetylhalogenidom vzorca VIII.

Acetylhalogenid vzorca VIII je možné pripraviť reakciou aminu všeobecného vzorca R^1--H so zodpovedajúcim halogénacerylbromidom v dichlórmetáne pri teplote 0 C za použitia vhodnej bázy, napríklad trietylamínu.

Amíny všeobecného vzorca R^1--H, v ktorých R¹· znamená skupinu -NR^rS j_e možné pripraviť redukčnou alkyláciou aminu vzorca H₂N-R^ pôsobením príslušného aldehydu alebo ketónu.

Podľa všeobecného postupu D je možné pripraviť zlúčeniny všeobecného vzorca I tiež reakciou medziproduktu všeobecného vzorca III vo vyššie uvedenom význame s kyselinou všeobecného vzorca IX

HOOC - R² (IX)

Reakcia medziproduktov všeobecného vzorca III s kyselinou všeobecného vzorca IX môže byť vykonávaná v prítomnosti vhodného dehydratačného činidla, napríklad dicyklohexylkarbodimidu DCC, 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridu EDC alebo 4-benzotriazol-l-yloxytris(dimetylamino) fosfóniumhexafluórfosfátu BOP, zvlášť v prítomnosti vhodného alkoholu N-hydroxysukcínimidu alebo N-hydroxybenztriazolu.

Je tiež možné pripraviť zlúčeniny všeobecného vzorca I reakciou medziproduktu vzorca III s aktivovaným derivátom kyseliny vzorca IX, napríklad s chloridom alebo anhydridom kyseliny vrátane zmesných anhydridov.

Výhodným rozpúšťadlom pre všeobecný postup D je napríklad N, N-dimetylformamid alebo dichlórmetán. Výhodné teploty sú v rozmedzí 0 až 60 C. Výhodné bázy pre túto reakciu zahrňujú trietylamín alebo N,N-dimetylaminopyridín, DAMP.

Podľa ďalšieho všeobecného postupu E je možné zlúčeniny podlá vynálezu všeobecného vzorca I pripraviť reakciou zlúčenín, zodpovedajúcich zlúčeninám všeobecného vzorca I, v ktorých znamená atóm vodíka s halogenidom R hal, kde hal je atóm chlóru alebo brómu a R znamená skupiny, uvedené vo vzorci I, zvlášť heteroarylovú skupinu, ako pyridyl, pyrimidinyl a podobne. Reakcia sa bežne uskutočňuje v prítomnosti kovovej medi a octanu draselného v rozpúšťadle, napríklad v dimetylsulfoxide alebo N,N-dimetylformamide a s výhodou pri teplote v rozmedzí 25 až 100 ’C.

Podľa ďalšieho všeobecného postupu F je možné zlúčeniny podľa vynálezu meniť na iné zlúčeniny podľa vynálezu. NaQ príklad zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorých R znamená skupinu (CI^^CC^H je možné pripraviť reakciou zlúčeniny

O vzorca I, v ktorom R znamená atóm vodíka so zlúčeninou všeobecného vzorca Br(CH₂)^COOR*, kde R* je alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v prítomnosti silnej bázy, ako hydridu sodíka s následným odstránením ochrannej skupiny na karboxylovej skupine bežným spôsobom, ako hydrolýzou v kyslom alebo bázickom prostredí.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I, v ktorých R¹¹ znamená fenyl, substituovaný alkoxykarbonylovou skupinou, je možné hydrolyzovať bežným spôsobom, napríklad v kyslom prostredí za vzniku zlúčenín vzorca I, v ktorých R¹¹ znamená fenyl, substituovaný karboxylovou skupinou.

Zlúčeniny vzorca III je možné pripraviť redukciou zlúčenín vzorca X

COR¹

kde V znamená CH-N^ alebo C=N-NHPh.

Zlúčeniny vzorca X, v ktorom V znamená CH-N^ je možné redukovať na zlúčeniny všeobecného vzorca III hydrogenáciou v prítomnosti vhodného katalyzátora, ako 5 až 10% paládia na nosiči, napríklad na uhlíku alebo uhličitane vápenatom alebo pôsobením oxidu platiničitého. Reakcia ľahko prebieha v prítomnosti rozpúšťadla, napríklad alkanolu ako etanolu, esteru, ako etylacetátu alebo kyseliny octovej.

Zlúčeniny vzorca X, v ktorom V znamená C=N-NHPh je možné redukovať na zlúčeninu vzorca III reakciou so zinkom a kyselinou octovou. Túto reakciu je možné uskutočniť pri teplote v rozmedzí 0 až 50 C.

Zlúčeniny vzorca X, v ktorom

V znamená skupinu CHN^ je možné pripraviť so zlúčenín všeobecného vzorca X, v ktorom V znamená CH2 pôsobením silnej bázy, ako hydridu sodíka, hexametyldisilazidu draselného alebo terc.butoxidu draslíka s následným pôsobením triizopropylbenzénsulfonylazidu alebo di-terc.butoxyaziddikarboxylátu. Reakcia dobre prebieha v rozpúšťadle, napríklad éteri, ako tetrahydrofuráne pri teplote v rozmedzí -78 až 20 °C.

Zlúčeniny všeobecného vzorca X, v ktorých V znamená C=N-NHPh alebo Cl·^, je možné pripraviť reakciou ortofenyldiamínu vzorca XI s chloridom dikyseliny vzorca XII, kde Q znamená skupinu CH2 alebo C=NNHPh vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad éteri ako tetrahydrofuráne.

COR¹

I ľ¹’

C1CO

C1CO (XII)

Zlúčeniny všeobecného vzorca XII, v ktorom Q znamená C=NNHPh, je možné pripraviť reakciou kyseliny ketomalónovej s fenylhydrazónom s následnou reakciou s chloridom fosforečným .

Zlúčeniny všeobecného vzorca XI sú známe látky alebo je možné ich pripraviť analogickými postupmi. Napríklad zlúčeniny všeobecného vzorca XI je možné pripraviť alkyláciou amínu všeobecného vzorca XIII

Amín všeobecného vzorca XIII je možné nechať reagovať so zlúčeninou všeobecného vzorca R^COCl^hal, kde bal znamená atóm chlóru alebo brómu, prípadne v prítomnosti jodidu sodného v rozpúšťadle, ako N,N-dimetylformamide v prítomnosti bázy, napríklad uhličitanu draselného.

Medziprodukt vzorca III je možné pripraviť tiež tak, že sa na medziprodukt vzorca XIV pôsobí hydridom sodíka s následnou adíciou acetylhalogenidu vzorca VIII vo vhodnom rozpúšťadle, napríklad Ν,Ν-dimetylformamide pri teplote 0 °C za vzniku chráneného medziproduktu vzorca XV

(xiv) (xv)

Medziprodukt vzorca XVI je možné premeniť na amín vzorca III pôsobením bromovodíka v metylénchloride.

Medziprodukt vzorca XIV je možné pripraviť z medziproduktu vzorca XVI reakciou s benzyloxychlórmravčanom v dichlórmetáne za použitia trietylamínu ako bázy. Táto reakcia dobre prebieha pri teplote miestnosti.

(XVI)

Medziprodukt všeobecného vzorca XVI je možné pripraviť z fenyléndiamínu vzorca XIII nasledujúcim spôsobom.

Reakciou diamínu vzorca XIII s p-metoxybenzoylchloridom s následnou redukciou takto vzniknutého amidu pôsobením lítiumalumíniumhydridu sa získa N-chránený diamín vzorca XVII

Reakciou diamínu vzorca XVII s chloridom dikyseliny vzorca XII, v ktorom Q je C=NNHPh s následnou redukciou pôsobením zinku a kyseliny octovej sa získa amín vzorca XVIII

(XVIII)

Zlúčeniny vzorca XVIII je potom možné premeniť na požadovanú zlúčeniny vzorca XVI reakciou so zlúčeninou vzorca Ce(NO₂)₆NH₄.

Zlúčeniny všeobecného vzorca VII je možné pripraviť zo zlúčenín XVI za použitia vyššie opísaných všeobecných postupov A, B alebo C.

Zlúčeniny, zodpovedajúce zlúčeninám vzorca I, v ktorých a však R znamená atóm vodíka, je možné pripraviť zo zodpove*3 dajúceho amínu vzorca III, v ktorom R znamená atóm vodíka za použitia všeobecných postupov A, B a C. Zlúčeniny vše*3 obecného vzorca III, v ktorom R znamená atóm vodíka, je možné pripraviť za použitia vyššie uvedených postupov na a prípravu zlúčenín všeobecného vzorca III, v ktorých R znamená heterocyklickú skupinu, avšak za použitia medziproduk*3 tov, v ktorých R znamena p-metoxybenzyl, ktorý je možné odstrániť bežným spôsobom.

To znamená, že reakciou diamínu vzorca XIX m, nh₂

Γ ch,-? T-OCH, (xix) s halogénacetamidom vzorca VIII sa získa disubstituovaný diamín všeobecného vzorca XX

COR¹

CH,

I

(XX) (XX)

OCH,

Reakciou zlúčeniny vzorca XX s chloridom dikarboxylovej kyseliny vzorca XII, v ktorom Q znamená C=NNHPh s následnou redukciou pôsobením zinku a kyseliny octovej sa získa benzodiazepín všeobecného vzorca XXI

COR¹

Reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca XXI s dusičnanom ceroamónnym sa získa zlúčenina, zodpovedajúca zlúčenine

Q vzorca III, v ktorej R je atóm vodíka.

Diamín všeobecného vzorca XIX je možné pripraviť reakciou nitrovaného a fluorovaného derivátu vzorca XXII (X),

(XXII) s p-metoxybenzylamínom s následnou redukciou nitroskupiny.

Zlúčeniny všeobecného vzorca X, v ktorom V znamená metylénovú skupinu, je možné pripraviť reakciou zlúčeniny všeobecného vzorca XXIII, v ktorom X, z a R¹ majú význam, uvedený vo všeobecnom vzorci I,

COR¹

3 s bromidom všeobecného vzorca R Br, kde R ma vyššie uvedený význam, v prítomnosti práškovej medi a octanu draselného. Reakcia sa s výhodou uskutočňuje v polárnom rozpúšťadle, napríklad dimetylformamide za súčasného zahriatia.

Zlúčeniny všeobecného vzorca XXIII je možné pripraviť reakciou diamínu vzorca XXIV, v ktorom X, z a R³· majú vyššie uvedený význam a^,NHCH₂COR’ (XXIV)

NH₂ s rnalonylchloridom podobným spôsobom, aký bol opísaný na prípravu zlúčeniny vzorca X, v ktorej V znamená CH₂.

Zlúčeniny všeobecného vzorca I obsahujú aspoň jeden asymetrický atóm uhlíka, najmä atóm uhlíka diazepínového kruhu, na ktorý je viazaná skupina substituovanej močoviny. Špecifické enantioméry zlúčenín všeobecného vzorca I je možné pripraviť delením racemických zlúčenín za použitia bežných postupov, napríklad chirálnej HPLC. Požadovaný enantiomér je tiež možné pripraviť zo zodpovedajúceho enantioméru amínu vzorca III za použitia niektorého z vyššie uvedených postupov na výrobu zlúčenín vzorca I z amínu všeobecného vzorca III. Enantioméry amínu všeobecného vzorca III je možné pripraviť z racemického amínu všeobecného vzorca II za použitia bežných postupov, ako sú tvorba soli s vhodnou opticky aktívnou kyselinou alebo preparatívnou chirálnou HPLC.

Príklady uskutočnenia vynálezu

Nasledujúce príklady opisujú výrobu niektorých zlúčenín podlá vynálezu a vysvetľujú využitie postupov A až E. Príklady uskutočnenia vynálezu však nemajú slúžiť na obmedzenie rozsahu vynálezu.

Znaky, skratky a iné všeobecne známe vyjadrenia uvedené v schémach a príkladoch sú v zhode so všeobecne používanými v súčasnej vedeckej literatúre, ako napríklad v The Journal of American Chemical Society. Východiskový materiál je bežne na trhu dostupný, pokiaľ nie je uvedené inak a používa sa bez ďalšieho čistenia. V príkladoch a v opise vynálezu sú používané tieto skratky:

TLC - chromatografia na tenkej vrstve,

MeOH - metanol,

TFA - kyselina trifluóroctová,

THF - tetrahydrofurán,

DMSO - dimetylsulfoxid,

EtOAC - etylacetát,

DCM - dichlórmetán,

DMF - dimetylformamid,

CDI - 1,1-karbonyldiimidazol, iBuCF - izobutylchlórmravčan,

HOSu - N-hydroxysukcínimid,

HOBT - N-hydroxybenzotriazol,

EDC - 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochlorid,

BOP - chlorid kyseliny bis(2-oxo-3-oxazolidinyl)fosfínovej,

BOC - terc.butyloxykarbonyl,

DCC - dicyklohexylkarbodiimid,

Cbz - benzyloxykarbonyl,

DAMP - 4-dimetylaminopyridín.

Teplota je vyjadrená v stupňoch Celzia. Všetky reakcie sa vykonávajú pri teplotách miestnosti, pokial nie je uvedené inak.

^H-NMR spektrum bolo zaznamenané na zariadení Varian VXR-300 alebo Varian Unity-300. Chemické posuny sa vyjadrujú v častiach na milión (ppm, d). Väzbové konštanty sú uvedené v Hz. Štiepenie je označované ako s - singlet, d - dublet, t - triplet, q - kvartet, m - multiplet, b - široký.

Hmotnostné spektrum MS s nízkou rozlišovacou schopnos30 ťou bolo zaznamenané na spektrometroch JOEL JMS-AX505HA, JOEL SX-102 alebo SCIEX-APIiii. Všetky hmotnostné spektrá boli zaznamenané vo forme pozitívnych iónov za súčasnej ionizácie - ESI, chemickej ionizácie - Cl pri náraze elektrónov - EI alebo pri bombardovaní rýchlymi atómami - FAB. Spektrum v infračervenom svetle, IR-spektrum bolo zaznamenané na spektrometri Nicolet 510 FT-IR za použitia kyvety so stenou s hrúbkou 1 mm. Optické otáčanie bolo zaznamenávané za použitia polarimetra Perkin-Elmer 241.

Priebeh všetkých reakcií bol sledovaný chromatografiou na tenkej vrstve za použitia silikónových dosiek 60F-254 s hrúbkou 0,25 mm (E. Merck), na zviditeľnenie výsledku bolo použité ultrafialové svetlo, 7% roztok p-anizaldehydu kyseliny etanolfosfomolybdénovej. Rýchla chromatografia na stĺpci bola vykonávaná na silikagéli (Merck) s veľkosťou častíc v rozmedzí 230 až 400 mesh.

Produkty boli čistené vysokotlakovou kvapalinovou preparatívnou chromatografiou v reverznej fáze RP-HPLC za použitia zariadenia Vaters Model 3000 Delta Prep so stĺpcom C^g, 300 A, 15 m, 47 x 300 mm (Delta-pak).

Systém rozpúšťadiel:

A: vodný roztok 0,1% kyseliny trifluóroctovej,

B: 60% roztok acetonitrilu a 40% vodný roztok 0,1% kyseliny trifluóroctovej,

C: acetonitril.

Všetky rozpúšťadlá obsahovali 0,1% kyselinu trifluóroctovú. Vo všetkých prípadoch sa použijú lineárne gradienty a rýchlosť prietoku je 100 ml/min (ΐθ = 5,0 min). Analytická čistota bola stanovená pomocou RP-HPLC za použitia zariadenia Vaters 600E so spektrometrom Vaters 990, opatreným diódou (rozmedzie I bolo 200 až 400 nM). Ako stacionárna fáza bol použitý stĺpec Vydac C^g (5m, 4,6 x 250 mm). Rýchlosť prietoku bola 1,0 až 1,5 ml/min (ΐθ=2,8 až 3,0 minút). Systém rozpúšťadiel bol opísaný vyššie. Skratka tj označuje dobu retencie v minútach (% acetonitrilu za čas).

Príklad 1

- [ 2,4-dioxo-3-(3-fenylureido)-5-pyridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] (1,4]diazepin-1-yl]-N-izopropyl-N- (4-metoxyfenyl)acetamid

Do roztoku 100 mg 2-(3-amino-2,4-dioxo-5-pyridín-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]-diazepin-1-yl)-N-izopropylN-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 1 ml metylénchloridu sa pridá roztok 25,6 mg fenylizokyanátu v 1 ml metylénchloridu. Vzniknutá reakčná zmes sa 4 hodiny mieša pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa nechá kryštalizovať z etylacetátu za vzniku 44 mg špinavobielej tuhej látky výslednej zlúčeniny. H NMR (300 MHz, CDCI3); 1.03 (2 x d, J = 7Hz, 6H), 3.81 (s, 3H), 4.17 (d J = 16Hz, 1H), 4.37 (d, J 16 HŽ.1H), 5.0 (sept, J = 7.1 Hz, 1H), 5.40 (d, J = 6.3 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 5.3 Hz, 1H), 6.8-7.3 (m, 17H), 7.80 (br, 1H), 8.42 (d, J = 3.9Hz, 1H).

TLC (10% MeOH, CH₂C1₂) , R_f = 0,53, m/z [MH] ⁺ = 593.

Príklad 2 {1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5py.ridin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b] [ 1,4]diazepin3-yl}amid lH-indol-2-karboxylovej kyseliny

Roztok 276 mg 2-(3-amino-2,4-dioxo-5-pyridin-2-yl2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-1-yl]-N-izopropyl-N(4-metoxyfenyl)acetamidu, 244 mg BOP, 78 mg N-hydroxybenzotriazolu, 69 mg DMAP a 98 mg kyseliny indol-2-karboxylovej v 1 ml dimetylformamidu sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa zriedi 15 ml etylacetátu, dvakrát 15 ml IM vodného roztoku hydroxidu sodného, 20 ml vody a 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad uhličitanom draselným sa vzniknutý zvyšok zahustí vo vákuu za vzniku surového produktu. Čistením RP-HPLC pri elúcii lineárnym gradientom 20 % A, 80 % B až 90 % C (doba retencie 30 minút) vznikne 26,6 mg výslednej zlúčeniny ako bieleho lyofilizova32 ného materiálu. Doba retencie výslednej zlúčeniny je 21,3 minút. ¹H NMR (300 MHz, CDCI3); 0.98 (2 x d, J = 7Hz, 6H), 3.68 (s, 3H), 4.17 (d J = 16.6Hz, 1 H). 4.37 (d, J = 16.8 Hz, 1 H), 4.87 (sept, J = 6.8 Hz, 1H), 5.40 (d, J = 6.8 Hz, 1H), 6.40 (d, J = 5.3 Hz, 1 H), 6.75-6.84 (m, 5H), 6.92-6.99 (m, 2H), 7.07 (t, J = 7.3 Hz, 1H), 7.09-7.2 (m, 4H), 7.24 (t, J = 9.2 Hz,.1H), 7.40 (t, J = 9.1 Hz, 2H), 7.52 (d J = 7.9 Hz, 1H), 7.72 (m, 2H), 8.38 (d, J = 4.4Hz, 1H), 9.19 (s, 1H).

m/z [MH⁺] = 617.

Príklad 3 a4 (+) alebo (-) {1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]2,4-dioxo-5-pyridín-2-y1-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][ 1,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Jednotlivé výsledné enantioméry sa získajú absorpciou

100 mg výslednej zlúčeniny príkladu 2 na semipreparatívny Pirkle D-leucín stĺpec a elúciou izokratickým systémom rozpúšťadiel, obsahujúceho 77 % hexánu, 20 % izopropylalkoholu a 3 % acetonitrilu, kde každé rozpúšťadlo obsahuje 0,3 % diéty lamínu. Zodpovedajúce frakcie sa oddelia vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozotrie s vodou. Vzniknutá zrazenina sa oddelí filtráciou a suší vo vákuu.

Príklad 3: chirálne analytický stĺpec Pirkle D-leucín, rýchlosť prietoku 2 ml/min, tj = 19,62 min (100%), m/z [MH]⁺ =617.

Príklad 4: chirálne analytický stĺpec Pirkle D-leucín, rýchlosť prietoku 2 ml/min, tj = 22,797 min (98%), m/z [MH]⁺ = 617.

Príklad {1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][1,4]diazepin3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Do roztoku 933 mg (1,97 mmol) 2-(3-amino-2,4-dioxo33

5-pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]-diazepin-lyl ] -N- izopropyl-N- (4-metoxyf enyl) acetamidu v 20 ml dimetylformamidu sa pri teplote miestnosti a za stáleho miešania postupne pridá 333 mg (2,07 mmol) kyseliny indol-2-karboxylovej, 266 mg (1,97 mmol) N-hydroxybenzotriazolu a 415 mg (2,16 mmol) 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridu. Vzniknutá reakčná zmes sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku za vzniku žltého oleja, ktorý sa rozpustí v 100 ml etylacetátu, premyje sa dvakrát 30 ml vody a suší sa nad síranom horečnatým. Po filtrácii a zahustení za zníženého tlaku vznikne žltohnedá pena ako surový produkt, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou po absorpcii na 30 g stĺpec silikagélu a pri elúcii 600 ml etylacetátu. Zodpovedajúce frakcie sa zlúčia a zahustia vo vákuu za vzniku 902 mg (1,46 mmol) bielej peny výslednej zlúčeniny.

NMR (CDCI3, 400MHz): 9.44 (s 1H), 8.75 (d, 2H, J=4.4Hz), 7.64-6.88 (m,15H), 5.60 (d, 1 H. J=6.8Hz), 5.03 (m, 1 H), 4.45 (d, 1 H, J=16.6Hz), 3.99 (d. 1H J=16.6Hz), 3.81 (s, 3H), 1.07 (m, 6H);

TLC (CH₂C1₂OCH₃OH (19:1)), R_f = 0,63,

MS (FAB) m/z = 618,2 [MH]⁺.

Príklad 6 {1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5(1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl)-2,3,4,5-tetrahydro-lHbenzo[b][1,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny lH-indol-2karboxylovej

Do roztoku 385 mg (0,76 mmol) 2-(3-amino-2,4-dioxo-5-(1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4] -diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-acetamidu v 5 ml dichlórmetánu sa pridá 148 mg (0,92 mmol) kyseliny indol-2-karboxylovej, 125 mg (0,92 mmol) N-hydroxybenzotriazolu, 176 mg (0,92 mmol) 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimid hydrochloridu a TEA (2d). Vzniknutý reakčný roztok sa 48 hodín mieša pri teplote miestnosti a potom sa vie34 je do 100 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa dvakrát extrahuje nasýteným roztokom uhličitanu sodného, nasýteným roztokom chloridu sodného a potom sa suší nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu. Vzniknutý zvyšok ako tuhá látka sa rozotrie s etanolom za vzniku 159 mg výslednej zlúčeniny. Doba retencie výslednej zlúčeniny je 18,3 minút na stĺpci 30 až 55% C po dobe dlhšej než 30 minút. HNMR (dg-DMSO,

300 MHz) δ 11.8 (s, 1H), 8.45(s, 1H), 7.7-6.9 (m, 12H), 5.36 (m, 1H), 4.78 (m, 1H), 4.23 (m, 2H), 3.79 (s, 3H), 3.64 (d, 3H, J= 26.6), 2.11 (d, 3H, J= 31), 1.5 (d, 3H, J= 72);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 648 (MH⁺).

Príklad 7 {1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]- 2,4-dioxo-5pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-ΙΗ-benzo[b][1,4]diazepin3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Do roztoku 0,14 g (0,26 mmol) {1-[izopropyl-(4-metoxyf enyl) karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b] [1,4]diazepin-3-yl}amidu kyseliny lH-indol-2-karboxylovej a 40 gl (0,42 mmol) 3-brómpyridínu v 1 ml dimetylformamidu sa pridá 46 mg (0,73 mmol) práškovej medi a 38 mg (0,73 mmol) octanu draselného. Vzniknutý heterogénny roztok sa 15 hodín mieša pri teplote 100 °C a potom sa horúci roztok filtruje cez celit a premyje sa metanolom. Vzniknutá zrazenina sa filtruje a čistí RP-HPLC (stĺpec 40 až 60% C po dobe dlhšej než 30 minút) za vzniku 19 mg bieleho lyofilizovaného materiálu. Doba retencie výslednej zlúčeniny je 8,7 minút na stĺpci 40 až 60% C po dobe dlhšej než 30 minút.

¹HNMR (d6-Aceton-, 300 MHz) δ 10.98 (s, 1H), 9.02 (s, 1H), 8.76 (s,1 H), 7.85 (d,

H, J= 8.8), 7.5 (m, 15H), 5.68 (d, 1H, J= 7.6), 5.02 (m, 1 H), 4.65 (ABq, 2H, J= 16.8 135), 4.02 (s, 3H), 2.19 (d, 3H, J= 2.0), 2.18 (d, 3H, J= 2.0);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 617 (MH⁺).

Príklad 8

2- [2,4-dioxo-3-(3-fenylureido)-5-pyridín-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [1,4 ] diazepin-l-yl ] -N-izopropyl-N- (4-metoxyfenyl)acetamid

Roztok 36,6 mg (0,295 mmol) fenylizokyanátu v 1 ml metylénchloridu sa pridá do roztoku 140 mg (0,295 mmol) 2- (3-amino-2,4-dioxo-5-pyridín-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [1,4]diazepin-l-yl)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 1 ml metylénchloridu. Vzniknutý reakčný roztok sa 16 hodín mieša pri teplote miestnosti, rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa kryštalizuje z 5% roztoku metanolu v etylacetáte za vzniku 49 mg bieleho prášku výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300 MHz, CDCI-3). s 8.72 (s, 1 H), 8.56 (d,.1H, J = 8.0), 7.92 (d, 1H, J = 8.0), 6.91-7.43 (m, 16H), 6.43 (d, 1H, J = 8.3), 5.43 (d, 1H, J = 8.3), 4.95 (sept, 1H, J = 6.8), 4.60 (d, 1H, J = 11.8), 4.18 (d, 1H, J = 11.8), 3.88 (s, 3H), 1.06 (m, 6H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 593 (m⁺).

Príklad 9 terc.butylester kyseliny 3-(3-{1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrolH-benzo[b] [1,4]diazepin-3-yl}ureido)benzoovej

Do roztoku 43,3 mg (0,224 mmol) terc.butyl m-aminobenzoátu v 5 ml tetrahydrof uránu s teplotou 0 °C a 0,068 ml trietylamínu sa pridá 22,1 ml trifosgénu a vzniknutá reakčná zmes sa 1 hodinu mieša pri teplote 0 °C. Po pridaní 106 mg (0,224 mmol) 2-(3-amino-2,4-dioxo-5-pyridín-3-yl-2,3,4,5tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl)-N-izopropyl-N-(4-metoxyf enyl)acetamidu sa vzniknutá reakčná zmes mieša cez noc pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylacetátu, premyje sa dvakrát 30 ml O,5 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej, 30 ml vody a 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým a zahustení vo vákuu vznikne 115 mg bielej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

H .NMR (300 MHz, CDCH3). s 8.62 (s, 1 H), 8.59 (d, 1 H, J = 8.0), 7.92 (d, 1H, J = 8.0), 6.91-7.83 (m, 15H), 6.43 (d, 1H, J = 8.1), 5.43 (d, 1H, J = 8.1), 4.91 (sept, 1H, J = 6.8), 4.60 (d, 1H, J = 11.8), 4.18 (d, 1H, J = 11.8), 3.86 (s, 3H), 1.66 (s, 9H), 1.06 (m, 6H).

Príklad 10

- (3-{1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][1,4]diazepin3-yl}ureido)benzoová kyselina

Zmes 115 mg (0,224 mmol) terc.butylesteru kyseliny 3(3-{1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][1,4]diazepin-3yljureido)benzoovej a 1 ml 4 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne sa 1,75 hodín mieša pri teplote miestnosti.

Po pridaní 1 ml 4 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej v dioxáne sa reakčná zmes cez noc mieša pri teplote miestnosti. Pridá sa 20 ml dietyléteru a vzniknutá zrazenina sa trikrát rozotrie s 30 ml dietyléteru za vzniku bieleho prášku výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300 MHz, CDCI3).s 1H NMR (300 MHz, CDCI-3). s 8.61 (s,

1H), 8.56 (d, 1H, J = 8.2), 7.91 (d, 1H, J = 8.2), 6.91-7.83 (m, 16H), 6.41 (d, 1 H, J = 7.9), 5.43 (d, 1H, J = 7.9), 4.91 (sept, 1H, J = 6.8), 4.60 (d, 1H, J = 11.8), 4.18 (d, 1H, J = 11.8), 3.86 (s, 3H), 1.06 (m, 6H).

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 637 (m⁺).

Príklad 11 {1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-indoldioxo5-pyridin-4-yl-2,3,4,5,5a,9a-hexahydro-lH-benzo[b][1,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny 1H-indol-2-karboxylovej

Do roztoku 23,3 mg (0,049 mmol) 2-(3-amino-2,4-dioxo-5pyridín-4-yl-2,3,4,5,5a,9a-hexahydrobenzo[b][1,4]diazepin-lyl)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 0,5 ml dimetylformamidu sa za stáleho miešania a pri teplote miestnosti postupne pridá 8,5 g (0,052 mmol, 1,05 ekv.) kyseliny, indol-2-karboxylovej, 6,7 mg (0,49 mmol, 1 ekv.) N-hydroxybenzotriazolu a 10,4 mg (0,054 mmol, 1,1 ekv.) 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridu. Vzniknutá reakčná zmes sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku za vzniku žltého oleja, ktorý sa vleje do 30 ml dichlórmetánu, premyje sa nasýteným roztokom hydrogénuhličitanu sodného a suší sa nad síranom horečnatým. Po filtrácii a zahustení za zníženého tlaku vznikne žltohnedá pena ako surový produkt, ktorý sa po absorpcii na 4 g stĺpec silikagélu čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii postupne 100 ml zmesi etylacetátu a zmesi hexánov v pomere 4:1 a 100 ml etylacetátu. Zodpovedajúce frakcie sa zlúčia a zahustia vo vákuu za vzniku 10,2 mg (0,017 mmol) bielej peny výslednej zlúčeniny.

1H NMR (Acetone-d6, 300MHz) d 10.83 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 7.69 (m, 2H), 7.61 (d, 1 H. J = 8.2), 7.53 (m, 3H), 7.45 (m, 1H), 7.38-7.28 (m, 4H), 7.23 (t, 1 H), 7.09 (m, 4H), 5.50 (d, 1H, J = 7.6), 4.85 (m, 1 H), 4.65 (d, 1H, J = 16.6), 4.28 (d, 1H, J = 16.7), 3.86 (s, 3H), 1.01 (m, 6H);

Chromatografia na tenkej vrstve (etylacetát): R^ = 0,36, hmotnostné spektrum (FAB): m/z 617,3 (MH⁺).

Príklad 12 terc.butylester kyseliny 3-(3-{7-fluór-1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoyImety1]- 2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5tetrahydro-lH-benzo[b][1,4]diazepin-3-yl}ureido)benzoovej

Roztok 84 mg (0,165 mmol) 2-(3-amino-7-.f luór-2,4-di-oxo-5-pyridín-3-y1-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin1-yl)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 4 ml acetonitrilu sa zlúči s 59 mg (0,165 mmol, 1 ekv.) terc.-butylesteru kyseliny 3-[(4-nitrofenyl)oxykarbonyl]aminobenzoovej a vzniknutá reakčná zmes sa 3 hodiny refluxuje pod dusíkom. Vzniknuxá suspenzia sa 30 minúx chladí na xeploxu 5 °C, filtruje sa a suší vo vysokom vákuu za vzniku 93 mg kryštalickej tuhej láxky výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300 MHz, d6-DMSO) d 9.41 (s, 1H), 8.74 (d, 1 H, J = 2.3), 8.61 (dd, 1 H, J = 1.5, 4.9), 7.99 (m, 1 H), 7.95 (m, 1 H), 7.67 (dd, 1 H,

J = 5.6, 9.3), 7.57 (m, 2H), 7.48 (m, 1H), 7.31 (m, 4H), 7.10 (d, 2H, J = 8.9), 6.97 (d, 1H, J = 7.7), 6.87 (dd, 1H, J = 8.9), 5.16 (, 1H, J = 7.6), 4.78 (m, 1H), 4.56 (d, 1 H, J = 16.5), 4.19 (d, 1 H, J = 16.5), 3.84 (s, 3H), 1.54 (s,.9H), 0.98 (m, 6H);

HmoXnosXné spekxrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 710 (MH⁺).

Príklad 13

-(3 -{7-fluór-1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmexyl]2, 4-dioxo-5-pyr.idin-3-yl-2,3,4,5-xetrahydro-lH-benzo[b] [1,4]diazepin-3-yl}ureido)benzoová kyselina

Zmes 84 mg (0,118 mmol terc.butylesteru kyseliny 3-(3{7-fluór-1-[izopropyl-(4-mexoxyfenyl)karbamoylmeXyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-Xetrahydro-ΙΗ-benzo[b][1,4]diažepin-3-yl}ureido)benzoovej a 4 ml kyseliny trifluóroctovej sa

1,5 hodiny mieša pod dusíkom. Kyselina xrifluórocxová sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozotrie s dietyléterom. Suspenzia sa filtruje, premyje sa diétyléterom a suší vo vysokom vákuu za vzniku 85 mg bielej kryštalickej látky výslednej zlúčeniny ako soli kyseliny trifluóroctovej.

1H NMR (300 MHz, d6-DMS0) d 9.33 (s^ 1H), 8.70 (b, 1H), 8.57 (d, 1 H, J = 4.7), 8.00 (m, 1H), 7.97 (d, 1H, J = 8.6), 7.61 (dd, 1H, J = 5.5, 9.1), 7.55 (dd, 1H, J = 4.88,

8.2), 7.47 (m, 2H), 7.26 (m, 4H), 7.05 (d, 2H, J = 9.0), 6.92 (d, 1 H, J = 7.8), 6.82 (dd, 1H, J = 2.8, 9.6), 5.10 (d, 1H, J = 7.6), 4.72 (m, 1H), 4.51(d, 1 H, J = 16.8), 4.14 (d,

H, J = 16.8), 3.78 (s, 3H), 0.92 (m, 6H);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 655 (MH⁺).

Príklad 14 a 15 (+) alebo (-) {1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]2,4-dioxo-5-pyridín-3-y1-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][1,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny lH-indol-2-karboxylovej

Enantioméry výslednej zlúčeniny z príkladu 7 sa získajú oddelením (>99,9 % ee) preparatívnou vysokotlakovou kvapalinovou chromatografiou (HPLC) na systéme Vaters Model 4000 Delta Prep vybavenom preparatívnym stĺpcom Daicel Chemical Industries Chiralpak-AD s veľkosťou 5 cm x 50 cm, s veľkosťou ôk 20 mikrónov ako stacionárnej fázy. Mobilnou fázou je zmes 72 % hexánu, 21 % izopropylalkoholu a 7 % chloroformu.

Chromatografia prebiehala za izokratických podmienok, kde rýchlosť prietoku bola 50 ml/min (χθ = 16 min). Zodpovedajúce frakcie sa zlúčia, zahustia sa vo vákuu a lyofilizujú sa z vody a acetonitrilu za vzniku požadovaných zlúčenín. Chemická analýza sa vykonávala za použitia HPLC na systéme Hewlett Packard 1050 vybaveného diódovým spektrometrom Hewlet Packard (vlnová dĺžka v rozmedzí 200 až 400 nm). Stacionárnou fázou bol stĺpec Daicel Chemical Industries Chiralpak-AD s veľkosťou 0,46 x 25 cm a s veľkosťou ôk 10 mikrónov. Mobilnou fázou bol vyššie uvedený systém rozpúšťadiel a rýchlosť prietoku je 1,0 ml/min (χθ - 3 minúty). Retenčná doba v minútach;

enantiomér 1 (príklad 14): doba retencie = 25,06 minút, enantiomér 1 (príklad 15): doba retencie = 81,39 minút.

Medziprodukt 1 izopropyl-(4-metoxyfenyl)amín

Do miešaného roztoku 1,24 g 4-metoxyfenylamínu v 15 ml metanolu sa postupne pridá pri teplote miestnosti 415 mg ľadovej kyseliny octovej, 669 mg acetónu a 12,7 ml 1 M roztoku kyanobórhydridu sodného v tetrahydrofuráne. Reakčná zmes sa cez noc mieša pri teplote miestnosti a po pridaní 6 M rozto40 ku kyseliny chlorovodíkovej na pH 2 sa zmes mieša 30 minút. Po odstránení prebytku kyanobórhydridu sodného sa pridaním 1 M roztoku hydroxidu sodného zmení pH zmesi na pH 8,5 a vzniknutý reakčný roztok sa dvakrát extrahuje 50 ml dietyléteru a 50 ml etylacetátu. Organické extrakty sa zlúčia, sušia sa nad síranom sodným, filtrujú sa a zahustia sa za zníženého tlaku za vzniku 1,42 g žltého oleja výslednej zlúčeniny .

1η NMR (300MHz, CDCI₃); δ 6.78(d, J= 8.8Hz, 2H), 6.57(d, J= 9.1Hz, 2H), 3.75(s, 3H), 3.55(m, 1 H), 2.92(br s, 1H), 1.18(d, J= 6.1Hz, 6H);

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a hexánu v pomere 2:3); = 0,72.

Medziprodukt 2

2-bróm-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do roztoku 25,11 g izopropyl-(4-metoxyfenyl)amínu v 250 ml dichlórmetánu sa pridá za stáleho miešania pri teplote miestnosti 15,38 g trietylamínu. Vzniknutý roztok sa ochladí v ľadovom kúpeli s teplotou menšou než 3 °C a potom sa do neho po kvapkách počas 45 minút za stáleho miešania a ochladzovania v ľadovom kúpeli pridá roztok 30,68 g brómacetylbromidu v 100 ml dichlórmetánu. Reakčná zmes sa cez noc mieša pri teplote miestnosti, premyje sa 300 ml 0,3 M roztoku kyseliny chlorovodíkovej a 300 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa, filtruje a odparuje za zníženého tlaku za vzniku tmavohnedého oleja. Olej sa filtruje cez vrstvu 150 g oxidu kremičitého, ktorá sa eluuje 900 ml zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 1:1. Filtrát sa odparuje za zníženého tlaku za vzniku 41,05 g (143 mmol) hnedého oleja výslednej zlúčeniny, ktorý státím kryštalizuje.

1h NMR (300MHz, CDCI3): d 1.04(d, J= 6.8Hz, 6H), 3.53(s, 2H), 3.84(s, 3H), 4.93(m, 1 H), 6.93(d, J= 9.1Hz, 2H), 7.10(d, J= 9.1Hz, 3H)

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a hexánu v pomere 3:17): = 0,18.

Medziprodukt 3 kyselina 2-(fenylhydrazón)malónová

Do energicky miešaného roztoku 29,33 g monohydrátu kyseliny ketomalónovej v 140 ml etanolu a 300 ml vody sa pri teplote miestnosti po kvapkách počas 40 minút pridá 23,3 g fenylhydrazínu. Vzniknutá suspenzia sa cez noc mieša pri teplote miestnosti, tuhý podiel sa oddelí filtráciou, premyje sa postupne 100 ml vody a 25 ml etanolu a suší sa vzduchom. Ďalšie sušenie sa vykoná cez noc vo vákuovej peci pri teplote 75 C. Vznikne 42,38 g žltej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 155 až 157 °C (za rozkladu).

1H (300MHz, DMSO-d6): d 7.12(t, 1H), 7.35-7.48(m, 4H);

Medziprodukt 4

2-(fenylhydrazóm)propándioldichlorid

Do miešanej suspenzie 14,73 g medziproduktu 1 v 90 ml chloroformu sa pri teplote 5 °C počas 20 minút po častiach pridá 36,84 g chloridu fosforečného. Po skončení reakcie sa vzniknutý roztok za stáleho miešania počas 1 hodiny zohreje na teplotu miestnosti a následne sa 3 hodiny zohrieva pod refluxom. Roztok sa ochladí v ľadovom kúpeli a vzniknutá zrazenina sa oddelí filtráciou, premyje sa 50 ml studeného hexánu a suší sa cez noc vo vákuu za vzniku 13,4 g svetložltej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 135 až 138 °C (za rozkladu).

1H (300MHz, DMSO-d6): d 7.12(t, 1 H), 7.20-7.56(m, 4H);

Medziprodukt 5

2-(2-aminopyridyl)nitrobenzén

Do roztoku 2,0 g 2-aminopyridínu v 10 ml tetrahydrofu42 ránu s teplotou 0 °C sa pridá 1,26 g 60% roztoku hydridu sodného v oleji a vzniknutá zmes sa 1 hodinu mieša pri teplote 0 ’C. Po kvapkách sa pridá roztok 2,21 ml 2-fluórnitrobenzénu v 8 ml tetrahydrofuránu. Vzniknutá zmes sa nechá cez noc zohriať na teplotu miestnosti. Pridá sa 10 ml nasýteného vodného roztoku uhličitanu sodného a oddelený vodný podiel sa trikrát extrahuje 10 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické extrakty sa premyjú 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu.

Po čistení rýchlou chromatografiou na stĺpci pri elúcii zmesi cyklohexánu a etylacetátu v pomere 3:1 vznikne 2,23 g oranžovočervenej tuhej látky výslednej zlúčeniny s teplotou topenia 71 °C.

1η NMR (300 MHz, CDCI3); 6.83 (m, 3H), 7.42 (dt, J = 1,7 Hz, 1H),

7.40 (dt, J = 1,7 Hz, 1 H), 8.08 (dd, J = 1,7 Hz, 1 H), 8.21 (d, J = 1,1.5 Hz, 1 H), 8.61 (dt, J = 1,7 Hz, 1H), 10.0 (s,1H).

Medziprodukt 6

N-(2-pyridyl)fenyléndiamín

V 45 ml ľadovej kyseliny octovej sa rozpustí 2,14 g 2-(2-aminopyridyl)nitrobenzénu a pridá sa 5,57 g železných pilín. Vzniknutá reakčná zmes sa 72 hodín mieša pri teplote miestnosti, potom sa tuhý podiel oddelí filtráciou cez celit a rozpúšťadlo sa odstráni zahustením vo vákuu. Pridá sa 2 M roztok uhličitanu sodného na dosiahnutie pH 8 a zmes sa extrahuje trikrát 30 ml dichlórmetánu. Zlúčené organické podiely sa premyjú 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a zahustia sa vo vákuu. Vznikne 1,68 g béžovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300 MHz, CDCI3); 6.12 (br, 2H), 6.42 (d, J = 6 Hz, 1H),

6.68 (m, 1H), 6.78 (m, 3H), 7.008 (dt, J = 1, 6.0 Hz, 1H), 7.15 (dd, J = 1,5.8 Hz, 1H), 7.42 (m, 1H), 8.15 (br, 1H).

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes cyklohexánu a etylacetátu pomere 1:1): = 0,2.

Medziprodukt 7

N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-2-[2-(pyridin-2-yl-aminofenylamín)]acetamid

Pri teplote miestnosti sa 22 hodín mieša zmes 2,0 g N(2-pyridyl)fenyléndiamínu, 3,08 g izopropyl-(4-metoxyfenyl)amínu a 1,50 g uhličitanu draselného v 30 ml dimetylformamidu . Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozdelí do 50 ml etylacetátu a trikrát 30 ml vody. Organický podiel sa premyje 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu za vzniku hnedej tuhej látky surovej výslednej zlúčeniny. Po kryštalizácii zo zmesi etylacetátu a hexánu v pomere 1:1 vznikne svetlohnedá tuhá látka výslednej zlúčeniny.

1η NMR (300 MHz, CDCI3);

1.01 (d, J = 7Hz, 6H), 3.4 (s, 2H), 3.83 (s, 3H), 4.98 (sept, J = 7Hz), 6.08 (s 1 H), 6.31 (d, J = 8.5Hz, 1 H), 6.42 (d, J = 8.0 Hz, 1 H), 6.66 (m, 2H), 6.9-7.1 (m, 6H), 7.22 (d, J = 8.0Hz 1H), 7.40 (t, J = 6.5Hz, 1H), 8.18 (d, J = 3.5Hz, 1Ή).

Chromatografia na tenkej vrstve (10% roztok metanolu v metylénchloride): R^ = 0,42.

Medziprodukt 8

- [2,4-d i oxo-3 - (f enylhydrazón) - 5-pyridin - 2-yl-2,3,4,5-tet.rahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Zmes 500 mg N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-2-[2-(pyridin2-yl-amino.fenylamín) ]acetamidu v 20 ml tetrahydrofuránu a 317 mg 2-(fenylhydrazón)propándioyldichloridu v 20 ml tetrahydrofuránu sa súčasne pridá do 20 ml tetrahydrofuránu s teplotou 0 °C. Vzniknutá reakčná zmes sa nechá cez noc zohriať na teplotu miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylacetátu a dvakrát sa premyje 30 m'l 2 N vodného roztoku uhličitanu sodného, 30 ml vody a 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým a zahustení vo vákuu vznikne surový produkt. Čistením chromatografiou na stĺpci silikagélu pri elúcii 10% roztokom metanolu v metylénchloride vznikne 460 mg zmesi hydrazónov výslednej zlúčeniny v pomere 3:2. Pretože ide o zmes diastereomérov, nie sú výsledky

NMR diagnostické.

Chromatografia na tenkej vrstve (10% roztok metanolu v metylénchloride) : = 0,62.

Medziprodukt 9

2-(3-amino-2,4-dioxo-5-pyridin-2-y1-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Zmes 460 mg 2-[2,4-dioxo-3-(fenylhydrazón)-5-pyridin-2yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropylN-(4-metoxyfenyl)acetamidu, 430 mg práškového zinku a 5,6 ml kyseliny octovej sa pri teplote miestnosti mieša 3 hodiny. Tuhý podiel sa odstráni filtráciou cez celit, filtrát sa zahustí vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa čistí azeotropickou destiláciou s hexánom. Zvyšok sa rozpustí v 50 ml etylacetátu a dvakrát sa premyje 30 ml 2 N vodného roztoku uhličitanu sodného, 30 ml vody a 30 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým a zahustení vo vákuu vznikne 270 mg surového produktu, ktorý sa bez ďalšieho čistenia použije v ďalšej časti príkladu. ¹HNMR (300 MHz, CDCI3); 1.03 (d, J = 7Hz, 6H), 3.79 (s, 3H), 4.02 (d J = 10Hz, 1H), 4.40 (s, 1H), 4.42 (d, J = 10 Hz,1H), 5.0 (sept, J = 7.1 Hz, 1H), 6.8-7.3 (m, 10H), 7.44 (d, J = 8.0Hz 1 H), 7.68 (d J = 8.0Hz, 1.H), 7.80 (m, 1 H), 8.42 (d, J = 3.9Hz, 1 H).

Chromatografia na tenkej vrstve (10% roztok metanolu v metylénchloride) : Rf = 0,23.

Medziprodukt 10 (2-nitrofenyl)pyrimidin-2-ylamín

Do chladeného roztoku 10 g (105 mmol) roztoku 2-aminopyrimidínu v 100 ml dimetylformamidu s teplotou 5 °C sa pridá 5,47 g (137 mmol) 60% roztoku hydridu sodného v minerálnom oleji a vzniknutá zmes sa za stáleho chladenia 1 hodinu mieša. Do miešaného a chladeného roztoku sa po kvapkách počas 20 minút pridá 14,83 g (105 mmol) 1-fluór-2-nitrobenzénu v 30 ml dimetylformamidu. Vzniknutý reakčný roztok sa pomaly nechá zohriať na teplotu miestnosti a 3 hodiny sa mieša. Po pridaní 300 ml vody sa vytvorí zrazenina, ktorá sa oddelí filtráciou a po sušení vznikne 13,39 g (61,9 mmol) oranžovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

¹H NMR (Acetón -de, 400MHz): 10.34 (br s, 1 H),

9.00 (d, 1H, J=8.6Hz), 8.60 (d, 2H, J=4.8Hz), 8.23 (d, 1H, J=8.4Hz), 7.74 (t, 1H), 7.17 (t, 1H), 7.06 (t, 1H);

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a hexánov v pomere 3:17): = 0,27.

Medziprodukt 11

N-pyrimidin-2-ylbenzén-l,2-diamín

Do 13,2 g (61,1 mmol) roztoku (2-nitrofenyl)pyrimidin2-ylamínu v zmesi 450 ml etylacetátu a 350 ml metanolu sa pridá 16 g Raneyho niklu zvlhčeného vodou a vzniknutá reakčná zmes sa hydrogenuje 3 hodiny v atmosfére vodíka pri tlaku 0,1 MPa a oddelí filtráciou, červenohnedá tuhá metanolu. Vznikne pri teplote miestnosti. Katalyzátor sa filtrát sa zahustí vo vákuu a vzniknutá látka sa rozotrie s 250 ml studeného

8,21 g (44,1 mmol) šedej tuhej látky výslednej zlúčeniny. ^HNMR (CDCI3, 400MHz): 8.38 (d, 2H, J=4.9Hz), 7.37 (d, 1 H, J=7.9Hz), 7.08 (t, 1H), 7.00 (br s, 1 H). 6.83 (m, 2H), 6.67 (t, 1H), 3.60 (br s, 2H);

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a hexánov v pomere 2:1): =0,33.

Medziprodukt 12

N-izopropyl-N - (4-metoxyfenyl) -2 - [ 2 - (pyrimidin-2-ylamino) fenylamino]acetamid

Do roztoku 82 mg (0,441 mmol) N-pyrimidin-2-ylbenzén1,2-diamínu v 2 ml dimetylformamidu sa pridá 61 mg (0,441 mmol) uhličitanu draselného, 7 mg (0,044 mmol) jodidu draselného a 126 mg (0,441 mmol) 2-bróm-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu. Vzniknutá reakčná zmes sa cez noc mieša pri teplote 60 °C. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozdelí do 35 ml metylénchloridu a 15 ml vody. Organický podiel sa oddelí, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí za vzniku žltého oleja, ktorý sa rozotrie so 6 ml etanolu. Filtráciou vznikne 96,7 mg (0,247 mmol) žltých kryštálov výslednej zlúčeniny. ^HNMR (CDCI3, 300MHz): 8.36 (d, 2H, J=4.9Hz), 7.38 (dd, 1H, J=1.2, 7.8Hz), 7.06-6.90 (m 6H), 6.75 (t, 1 H), 6.66 (t, 1H), 6.36 (dd, 1 H, J= 1.2, 7.8Hz), 4.97 (m, 1H), 3.87 (s, 3H), 3.43 (s, 2H), 1.04 (d, 6H, J=6.8Hz);

Chromatografia ná tenkej vrstve (etylacetát): Rf = 0,62, hmotnostné spektrum (FAB) m/z 392,0 (MH⁺).

Medziprodukt 13

2-[2,4-dioxo-3-(fenylhydrazón)-5-pyrimidin-2-yl-2,3,4,5tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4metoxyfenyl)acetamid

V ľadovom kúpeli sa chladí suspenzia 500 mg (1,28 mmol) N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)-2-[2-(pyrimidin-2-ylamino)-fenylamino]acetamidu v 12 ml tetrahydrofuránu, do ktorej sa po kvapkách počas 5 minút pridá 344 mg (0,141 mmol) 2-(fenylhydrazón) propándioyldichloridu v 6 ml tetrahydrofuránu. Po dokončení pridávania sa roztok nechá zohriať na teplotu miestnosti a reakčná zmes sa cez noc mieša. Rozpúšťadlo sa odparí za zníženého tlaku a vzniknutý zvyšok ako olej sa rozpustí v 80 ml etylacetátu, premyje sa nasýteným roztokom uhličitanu sodného a suší sa nad síranom horečnatým. Po filtrácii a zahustení za zníženého tlaku vznikne žltý olej ako surový produkt, ktorý sa po absorpcii na 15 g silikagélu čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii 250 ml zmesi etylacetátu a hexánov v pomere 2:1. Vzniknú zodpovedajúce podiely, ktoré sa zlúčia a zahustia za vzniku 500 mg (0,886 mmol) žltej peny výslednej zlúčeniny.

¹H NMR (CDCI3, 300MHz): 11.22 (s, 1 H), 8.58 (m, 2H), 7.70-6.90 (m, 14H),

5.05 (m, 1H), 4.46 (m, 1 H), 3.82 (m, 4H), 1.12 (m, 6H);

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a zmesi hexánov v pomere 2:1): R£ =0,21, hmotnostné spektrum (FAB) m/z 564,1 (MH⁺).

Medziprodukt 14

2- (3-amino-2,4-dioxo-5-pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo [ b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do miešaného roztoku 500 mg (0,886 mmol) 2-[2,4-dioxo-. -3-(fenylhydrazón)-5-pyrimidin-2-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 12 ml kyseliny octovej sa pri teplote miestnosti pridá 530 mg práškového zinku a vzniknutá reakčná zmes sa 1 hodinu mieša. Zinok sa odstráni filtráciou, filtrát sa zahustí vo vákuu a vzniknutý olej sa rozdelí do 30 ml vody a 80 ml etylacetátu. Po pridaní 6 M roztoku hydroxidu sodného na pH 8 sa podiely oddelia. Vodný podiel sa dvakrát extrahuje 35 ml etylacetátu. Organické podiely sa zlúčia, sušia sa nad síranom horečnatým a po filtrácii a zahustení vo vákuu vznikne žltá pena. tento surový produkt sa po absorpcii na 15 g silikagélu čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii 250 ml zmesi metylénchloridu a metanolu v pomere 19:1. Vzniknuté zodpovedajúce frakcie sa zlúčia a zahustia za vzniku 255 mg (0,537 mmol) bieleho sklovitého materiálu výslednej zlúčeniny.

1_H NMR (CDCI3, 400MHz): 8.78 (d, 2H, 4.9Hz), 7.59 (dd, 1 h, J= 1.1,8.3Hz), 7.337.25 (m, 3H), 7.16 (t, 1H), 7.05 (dd, 1H, J= 1.4,8.3Hz). 6.96 (dd, 1H, J= 2.7,8.7Hz), 6.89 (dd, 1 H, J= 2.7, 8.5Hz), 6.86 (dd, 1 H, J= 1,2,8.2Hz), 5.06 (m, 1 H), 4.52 (d, 1 H, J= 16.6Hz), 4.43 (s, 1H), 3.85 (d, 1H, J= 16.6Hz), 3.82 (s, 3H), 2.60 (brs, 2H), 1.11 (d, 6H, J=1.0Hz);

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes metylénchloridu a metanolu v pomere 9:1): Rjc = 0,48, hmotnostné spektrum (FAB) m/z 475,3 (MH⁺).

Medziprodukt 15 (2-nitrofenyl)-(1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl)amín

Do roztoku 7,47 ml (70,9 mmol) 1-fluór-2-nitrobenzénu v 35 ml etanolu a 105 ml vody sa pridá 8,8 g (70,9 mmol)

4-amino-l,3,5-trimetylpyrazolu. Roztok sa 15 hodín zahrieva pod refluxom, ochladí sa na teplotu miestnosti a vzniknutá zrazenina sa oddelí filtráciou a premyje sa 25% vodným roztokom etanolu. Vznikne 8,6 g výslednej zlúčeniny.

¹HNMR (CDCI3, 300 MHz) δ 8.81 (s,1 H), 8.18 (dd, 2H, J=1.6,

8.7), 6.69(m, 1H) 6.61 (dd, 1H, J= 1.2, 8.7), 3.77 (s, 3H), 2.10 (s, 3H), 2.06 (s, 3H); Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 247 (MH⁺).

Medziprodukt 16

N- (1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl)benzén-l,2-diamín

Do roztoku 8,6 g (35 mmol) (2-nitrofenyl)-(1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl)amínu v 175 ml etylacetátu sa pridá 1 g 10% roztoku paládia na aktívnom uhlí. Roztok sa mieša 15 hodín v atmosfére vodíka pri tlaku 0,35 MPa. následne sa filtruje cez celit, premyje sa etylacetátom a zahustí sa vo vákuu za vzniku 7,56 g výslednej zlúčeniny. HNMR (CDCI3, 300 MHz) δ 6.74 (m, 3H), 6.32 (d, 1 H, J= 1.9, 7.2), 4.6 (s, 1 H), 3.75 (s, 3H), 3.1 (s, 2H), 2.05 (m, 6H);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 217 (MH⁺).

Medziprodukt 17

N-izopropyl-N- (4-metoxyf enyl) - 2-(2-(1,3,5-trimetyl-lHpyrazol-4-ylamino) fenylamino]acetamid

Do roztoku 7,56 g (35,0 mmol) N-(1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl)benzén-1,2-diamínu a 7,18 g (38,5 mmol) 2-bróm-Nizopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 70 ml dimetylformamidu sa pridá 14,5 g (105 mmol) uhličitanu draselného a 581 mg (3,5 mmol) jodidu draselného. Roztok sa 15 hodín zahrieva pri teplote 80 °C a následne sa vleje do 100 ml dichlórmetánu. Zmes sá štyrikrát extrahuje vodou, dvakrát 1 M roztokom kyseliny chlorovodíkovej a nasýteným roztokom chloridu sodného. Suší sa nad síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu. Vzniknutá pena sa čistí rozotrením s etyléterom za vzniku

11,9 g výslednej zlúčeniny.

1HNMR (CDCI3, 300 MHz) δ 8.08 (s, 1 H), 7.07 (dd, 4H, J= 2.2, 6.6), 6.63 (m, 2H), 6.31 (m, 2H), 5.03 (m, 1 H), 4.76 (s, 1 H), 3.87 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.46 (s, 2H), 2.02 (m, 6H), 1.07 (d, 6H, J= 6.8);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 422 (MH⁺).

Medziprodukt 18

2- [2,4-dioxo-3-(fenylhydrazón)-5-(1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol4-yl )-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do 35 ml tetrahydrofuránu chladeného na teplotu °C sa súčasne pridá roztok 3,0 g (7,1 mmol) N-izopropyl-N-(4-metoxyf enyl)-2-(2-(1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-ylamino)fenylaminojacetamidu v 70 ml tetrahydrofuránu a roztok 1,75 g (7,1 mmol) 2-(fenylhydrazón)propándioyldichloridu v 70 ml tetrahydrof uránu. Roztok sa 15 hodín mieša pri teplote miestnosti a potom sa zahustí vo vákuu za vzniku 8,1 g výslednej zlúčeniny, ktorá sa v nasledujúcej syntéze použije bez ďalšieho čistenia.

Medziprodukt 19

2-[3-amino-2,4-dioxo-5-(l,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl)2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-1-yl]-N-izopropylN-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do roztoku 4,6 g (7,74 mmol 2-[2,4-dioxo-3-(fenylhydra-zón) - 5- (1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-yl)-2,3,4,5-tetrahydro-benzo[b][1,4]-diazepin-1-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 45 ml ľadovej kyseliny octovej sa pridá 4,6 g práškového zinku. Vzniknutý heterogénny roztok sa 15 hodín mieša pri teplote miestnosti, následne sa filtruje cez celit, premyje sa etylacetátom a zahustí sa do sucha. Vzniknutý olej sa rozpustí v 200 ml etylacetátu a extrahuje sa trikrát nasýteným roztokom uhličitanu sodného a nasýteným roztokom chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým a zahustení vo vákuu vznikne olej, ktorý sa po absorpcii na silikagél čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii 5% roztokom metanolu v dichlórmetáne. Vznikne 385 mg výslednej zlúčeniny. ¹HNMR (CDCI3, 300 MHz) δ

7.60-6.80 (m, 10H), 5.05 (m, 1H), 4.4(m, 1 H), 3.82 (s, 3H), 3.74 (s, 3H), 3.62 (s, 2H), 2.24 (s, 3H), 1.20 (s, 3H), 1.09 (m, 6H);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 505 (MH⁺).

Medziprodukt 20 (4-metoxybenzyl)-(2-nitrofenyl)amín

Do 80,65 ml (0,77 mmol) 2-fluórnitrobenzénu rozpusteného v 200 ml etanolu a 600 ml vody sa pridá 100 ml (0,77 mmol) 4 metoxybenzylamínu. Reakčná zmes sa zahrieva 15 hodín na teplotu 92 ’C. Po ochladení na teplotu miestnosti sa oranžová zrazenina oddelí filtráciou a nechá sa kryštalizovať zo zmesi etanolu a vody v pomere 1:3. Po rozpustení v etylacetáte, sušení nad síranom horečnatým a zahustením vo vákuu vznikne 117,88 g výslednej zlúčeniny. , 1HNMR (300 MHz, CDCI3) d 8.35 (bs, 1H), 8.18 (d, J= 8.5 Hz, 1H), 7.38 (dd, J= 7.3, 7.8 Hz, 1 H), 7.27 (d, j= 8.5 Hz, 2H), 6.85 (m, 3H), 6.66 (dd, J= 7.3, 7.8 Hz, 1H), 4.47 (collapsed ABq, J= 4.9 Hz, 2H), 3.81 (s, 3H);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 258,99 (MH⁺).

Medziprodukt 21

N-(4-metoxybenzyl)benzén-1,2-diamín

V. banke s tromi hrdlami, okrúhlym dnom a vybavenej miešadlom sa chladí na teplotu 15 ’C roztok 50 g (4-metoxybenzyl) -(2-nitrofenyl)amínu v 500 ml ľadovej kyseliny octovej , do ktorého sa pridá 50 g práškového zinku. Reakčná zmes sa zahreje na teplotu miestnosti a 15 hodín sa mieša. Po filtrácii cez celit sa filtrát zahustí do sucha a vzniknutý olej sa rozpustí v zmesi etylacetátu a vody. Po dosiahnutí pH vodného podielu 8 pridaním uhličitanu sodného sa vodný podiel extrahuje štyrikrát etylacetátom a suší sa nad síranom horečnatým. Zahustením vo vákuu vznikne surový produkt, ktorý sa po absorpcii na silikagéli čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii 50% roztokom hexánu v dichlórmetáne. Vznikne 33,34 g výslednej zlúčeniny.

1HNMR (300 MHz, CDCI3) d 7.32 (d, J=8.5 Hz, 2H), 6.88 (d, J= 8.5 Hz, 2H), 6.97 (m, 4H), 4.25 (s, 2H), 3.81 (s, 3H);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB) m/z 476 (MH⁺).

Medziprodukt 22

N-izopropyl-2-[2-(4-metoxybenzylamín)fenylamín]-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do roztoku 2,42 g (10,6 mmol) N-(4-metoxybenzyl)benzén1,2-diamínu v 40 ml dichlórformamidu sa pridá 1,47 g (10,6 mmol) uhličitanu draselného, 176 mg (1,06 mmol) jodidu draselného a 3,03 (10,6 mmol) 2-bróm-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu. Vzniknutá reakčná zmes sa cez noc mieša pri teplote 60 °C. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu a surový produkt sa rozpustí v 150 ml etylacetátu, premyje sa dvakrát 50 ml vody a 50 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí za vzniku hnedého oleja. Pridaním 70 ml dietyléteru sa vytvorí zrazenina, ktorá sa oddelí filtráciou za vzniku 1,39 g (3,21 mmol) žltej tuhej látky výslednej zlúčeniny. Filtrát sa zahustí za zníženého tlaku, za vzniku zvyšku ako hnedého oleja, ktorý sa po absorpcii na 40 g silikagélu čistí 900 ml zmesi etylacetátu a hexánov v pomere 1:4. Požadované podiely sa zlúčia a zahustia za zníženého tlaku za vzniku 1,86 g (4,29 mmol) hnedého oleja výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300MHz, CDCI3): d 7.30 (m, 2H), 7.05 (m, 2H), 6.95 (m, 2H), 6.88 (m, 2H), 6.73-6.61 (m, 3H), 6.28 (m, 1 H), 5.01 (m, 1 H), 4.23 (s, 2H), 3.87 (s,

3H), 3.80 (s, 3H), 3.40 (s, 2H), 1.07 (m, 6H);

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a zmesi hexánov v pomere 1:4): = 0,14.

Medziprodukt 23

N-izop.ropyl-2- [5- (4-metoxybenzyl) -2,4-dioxo-3- (fenylhydrazón)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]N-(4-metoxyfenyl)acetamid

V ľadovom kúpeli s teplotou menšou než 5 °C sa chladí roztok 3,25 g (7,51 mmol) N-izopropyl-2-[2-(4-metoxybenzylamino)fenylamino]-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 50 ml tetrahydrofuránu, do ktorého sa počas 20 minút po kvapkách pridá 1,84 g (7,51 mmol) 2-(fenylhyfrazón)propándioyldichloridu v 50 ml tetrahydrofuránu. Po ukončení pridávania sa reakčný roztok nechá zohriať na teplotu miestnosti a cez noc sa mieša. Rozpúšťadlo sa odstráni za zníženého tlaku a vzniknutý zvyšok ako olej sa rozpustí v 300 ml etylacetátu, premyje sa 100 ml nasýteného roztoku uhličitanu sodného a 50 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, suší sa nad síranom horečnatým, filtruje sa a zahustí za zníženého tlaku. Vznikne 4,55 g (7,51 mmol) žltého oleja výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300MHz, CDCI3): ď 11.46 (s, 0.5H), 10.69 (s, 0.5H), 7.56-6.95 (m, 15H), 6.77-6.66 (m, 2H), 5.34 (m, 1H), 5.05 (m, 1H),

4.79 (m, 1H), 4.34-4.08 (m, 2H), 3.86 (s, 2H), 3.74 (s, 3H), 3.72 (s, 3H), 1.11 (m, 6H); Chromatografia na tenkej vrstve (zmes etylacetátu a zmesi hexánov v pomere 2:3): = 0,30.

Medziprodukt 24

2-[3-amino-5-(4-metoxybenzyl)-2,4-dioxo-2,3,4,5 -tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do miešaného roztoku 4,55 g (7,51 mmol) N-izopropyl-2[5-(4-metoxybenzylj-2,4-dioxo-3-(fenylhydrazón)-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 50 ml kyseliny octovej sa pridá 4,50 g práškového zinku a vzniknutá reakčná zmes sa 4 hodiny mieša pri teplote miestnosti. Zinok sa odstráni filtráciou, filtrát sa zahustí vo vákuu a vzniknutý olej sa rozdelí do 150 ml vody a 250 ml etylacetátu. Po pridaní 6 M hydroxidu sodného na pH 8 sa podiely oddelia. Vodný podiel sa dvakrát extrahuje 80 ml etylacetátu, organické podiely sa zlúčia a sušia sa nad síranom horečnatým. Po filtrácii a zahustení vo vákuu vznikne hnedý olej ako surový produkt, ktorý sa po absorpcii na 70 g silikagélu čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii 500 ml zmesi etylacetátu a hexánov v pomere 2:1 a 500 ml metylénchloridu a metanolu v pomere 19:1. Vzniknuté zodpovedajúce frakcie sa zlúčia a zahustia za vzniku 2,85 mg (5,52 mmol) hnedého oleja výslednej zlúčeniny. ¹H NMR (300MHz, CDCI3): d 7.43 (d, J=7.3Hz, 1H), 7.30-7.19 (m, 4H), 7.05-6.90 (m, 5H), 6.59 (d, J=8.8Hz, 2H), 5.13 (d, J=15.1Hz,

H), 5.00 (m, 1H), 4.86 (d, J=15.1Hz, 1H), 4.25 (s, 1 H). 4.21 (d, J=16.6Hz, 1H),

3.85 (s, 3H), 3.69 (s, 3H), 3.48 (d, J=16.6Hz, 1H), 1.09 (m, 6H);

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes metylénchloridu a metanolu v pomere 29:1): Rf = 0,11.

Medziprodukt 25

2-[3-amino-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do miešaného roztoku 2,63 g (5,09 mmol) 2-[3-amino-5-(4-metoxybenzyl)-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 70 ml zmesi acetonitrilu a vody v pomere 9:1 sa pri teplote miestnosti pridá po častiach počas 1 hodiny 10,05 g (18,3 mmol) dusičnanu cernatoamónneho. Vzniknutý reakčný roztok sa cez noc mieša pri teplote miestnosti. Roztok sa zahustí vo vákuu, dvakrát sa premyje 50 ml toluénu a zvyšok sa extrahuje trikrát 50 ml metylénchloridu. Po filtrácii a zahustení vznikne zvyšok ako oranžová sklovitá látka. Tento surový produkt sa po absorpcii na 100 g silikagélu čistí rýchlou chromatografiou pri elúcii najskôr 1,5 ml zmesi metylénchloridu a metanolu v pomere 15:1, a potom 1,3 1 zmesi metylénchloridu a metanolu v pomere 10:1. Požadované frakcie sa zlúčia a zahustia za zníženého tlaku. Vznikne 1,97 g (4,97 mmol) hnedej peny výslednej zlúčeniny. H NMR (300MHz, DMSO-d6); d 10.68 (brs, 1H), 7.39-6.98 (m, 8H), 5.75 (s, 1 H), 4.76 (m, 1H), 4.16-3.92 (m, 4H) 3.77 (s, 3H), 3.15 (m, 2H), 0.97 (m, 6H);

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes metylénchloridu a metanolu v pomere 13:1): Rf = 0,21.

Medziprodukt 26 {1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)karbamoylmetyl]-2,4-dioxo2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][1,4]diazepin-3-yl}amid kyseliny 1H-indol-2-karboxylovej

Do roztoku 350 mg (0,883 mmol) 2-[3-amino-2,4-dioxo55

2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-1-yl]-N-izopropyl-N(4-metoxyfenyl)acetamidu v 10 ml dimetylformamidu sa za stáleho miešania postupne pridá 142 mg (0,883 mmol) kyseliny indol-2-karboxylovej, 119 mg (0,883 mmol) N-hydroxybenztriazolu a 169 mg (0,883 mmol) 1-(3-dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochloridu. Vzniknutá reakčná zmes sa 18 hodín mieša pri teplote miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni odparovaním za zníženého tlaku za vzniku žltého oleja, ktorý sa rozpustí v 60 ml etylacetátu, premyje sa 20 ml vody a 20 ml nasýteného roztoku chloridu sodného a suší sa nad síranom horečnatým. Po filtrácii a zahustení za zníženého tlaku vznikne žltý olej, ktorý státím tuhne. Surový produkt sa rozotrie s 20 ml vriaceho etanolu, ochladí sa, filtruje sa a suší za vzniku 169 mg (0,313 mmol) žltej tuhej látky výslednej zlúčeniny. 1H NMR (300MHz, Acetón--d6): d

10.85 (br s, 1 H), 9.83 (br s, 1 H), 7.67 (m, 2H), 7.53 (m, 2H), 7.37-7.20 (m, 7H), 7.04 (m, 3H), 5.28 (d, J=7.5Hz, 1 H), 4.87 (m, 1 H), 4.31 (d, J=16.3Hz, 1H), 4.13 (d, J=16.6Hz, 1 H), 3.83 (s, 3H), 1.02 (m, 6H);

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes metylénchloridu a metanolu v pomere 19:1): R£ = 0,24.

Hmotnostná spektrum (FAB): m/z 540 (MH⁺).

Medziprodukt 27

N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)- 2-fenylaminoacetamid

Zmes 257,6 g (924 mmol) N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)brómacetamidu, 100 g (924 mmol), 1,2-fenyléndiamínu a 128 g (924 mmol) uhličitanu draselného v 1200 ml dimetylformamidu sa 2 hodiny mieša pri teplote 0 °C a potom sa nechá miešať 20 hodín pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa filtruje cez celit a filtrát sa zahustí vo vákuu. Vzniknutý zvyšok sa rozpustí v 1200 ml etylacetátu, trikrát sa premyje 200 ml vody a raz 200 ml nasýteného roztoku chloridu sodného. Po sušení nad síranom horečnatým a zahustení vo vákuu sa odstráni asi 70% rozpúšťadla. Vznikne zrazenina, ktorá sa oddelí filtráciou, premyje sa studeným etylacetátom a suší sa

v^í^íí^ŕrVxr·-¹^'^:·:

-56 za vzniku 67,1 g výslednej zlúčeniny ako béžovej tuhej látky. Zlúčené .filtráty sa zahustia vo vákuu za vzniku 88 g oleja. Kryštalizáciou z etanolu vznikne druhá porcia výslednej zlúčeniny ako 29,6 g béžovej tuhej látky.·

1H NMR (300 MHz, DMSO-Ó6). s 7.22 (m, 2H), ,7.05(m, 2H), 6.47 (m, 1 H), 6.34 (m. 2H), 5.S5 (m, 1H), 4.81 (sept., 1H, J = 6.8), 4.59 (dt, ÍH, J = 27.2, 6.1), 4.4 (s, 2H), 3.77 (s, 3H), 3.30 (s, 2H), 0.96 (d, 6H, J = 6.8). Medziprodukt 28

2-(2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do 100 ml tetrahydrofuránu sa počas 10 minút súčasne pridajú roztoky 20 g (63,8 mmol) N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl) -2-fenylaminoacetamidu v 500 ml tetrahydrofuránu a 6,2 ml (63,8 mmol) malonyldichloridu v 500 ml tetrahydrofuránu. Vzniknutý reakčný roztok sa mieša 72 hodín pri teplote miestnosti a následne sa pridá 3,0 ml malonyldichloridu. Po ďalších 5 hodinách sa rozpúšťadlo odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozpustí v 300 ml metylénchloridu a dvakrát sa premyje 200 ml 1 N vodného roztoku uhličitanu sodného. Zlúčené organické podiely sa dvakrát premyjú 200 ml vody a 200 ml nasýteného roztoku chloridu sodného, sušia sa nad síranom horečnatým a filtrujú sa vo vákuu. Vznikne 23,8 g surového produktu, ktorý sa dokonale rozotrie s dietyléterom. Vzniknutá tuhá látka sa čistí rýchlou chromatografiou na stĺpci pri elúcii 5% roztokom metanolu v metylénchloride za vzniku 8,85 g béžovej tuhej látky výslednej zlúčeniny .1H NMR (300 MHz, CDCI-3). s 7.7 (s, 1H), 7.4 (m, 1H), 6.90 - 7.3 (m, 7H), 4.97 (sept., 1 H, J = 6.8), 4.4 (m, 1H), 3.81 (s, 3H), 3.78 (m, 1H), 3.40 (s, 2H), 1.06 (d, 6H, J = 6.8).

Medziprodukt 29

2-(2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Zmes 3,5 g (9,48 mmol) 2-(2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydro-benzo[b][1,4]-diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu, 1,09 g (17,06 mmol) práškovej medi, 0,91 ml (9,48 mmol) 3-brómpyridínu a 1,11 g (11,37 mmol) octanu draselného v 80 ml dimetylformamidu sa 7 hodín zahrieva na teplotu 100 °C. Po pridaní ďalších 0,4 ml 3-brómpyridínu sa vzniknutá reakčná zmes mieša pri teplote 100 °C ďalších 14 hodín. Následne sa pridá 1,09 g (17,06 mmol) práškovej medi, 0,91 ml (9,48 mmol) 3-brómpyridínu a 1,11 g (11,37 mmol) octanu draselného a reakčná zmes sa 6 hodín zahrieva na teplotu 110 ’C. Tuhý podiel sa oddelí filtráciou, filtrát sa zahustí vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozdelí do 150 ml etylacetátu a 150 ml 10% vodného roztoku hydroxidu amónneho. Zlúčené organické podiely sa dvakrát premyjú 100 ml vody, ml nasýteného roztoku chloridu sodného a sušia sa nad síranom horečnatým. Po zahustení vo vákuu vznikne surový produkt, ktorý sa dokonale rozotrie s dietyléterom za vzniku

2,56 g smotanovožltej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300 MHz, CDCI-3). s 7.86 (d, 1 H, J =

8.1), 7.01-7.43 (m, 10H), 6.92 (d, 1 H, J = 8.3), 5.05 (sept, 1H, J = 6.8), 4.22 (m, 2H) 3.88 (s, 3H), 3.58 (dd, 2H, J = 32.2, 12.0), 1.06 (m, 6H).

Medziprodukt 30

2-(3-azido-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do roztoku 750 mg (1,64 mmol) 2-(2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]-diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N- (4-metoxyf enyl) acetamidu v 15 ml tetrahydrofuránu s teplotou -78 °C sa po kvapkách počas 7 minút pridá 4,59 ml (2,29 mmol) 0,5 M roztoku hexametyldisilazidu draselného v toluéne. Vzniknutý roztok sa 17 minút mieša pri teplote -78 ’C, pridá sa 632 mg (2,05 mmol) 2,4,6-triizopropylbenzénsulfonylazidu a reakčná zmes sa 4 minúty mieša pri teplote -78 ’C. Po pridaní 0,235 ml kyseliny octovej sa reakčná zmes nechá zohriať na teplotu miestnosti. Rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu za vzniku surového produktu, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou na stĺpci pri elúcii 5% roztokom metanolu v metylénchloride za vzniku 530 mg bezfarebnej peny výslednej zlúčeniny. 1H NMR (300 MHz, CDCI-3). S 7.96 (d,

H, J = 8.0), 6.91-7.43 (m, 11 H), 5.05 (sept, 1H, J = 6.8), 4.42 (d, 1H, J = 12.1) 4.38 (s, 1H), 4.22 (d, 1H, J = 12.1), 3.88 (s, 3H), 1.06 (m, 6H).

Medziprodukt 31

2- (3-amino-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Zmes 530 mg (1,06 mmol) 2-(3-azido-2,4-dioxo-5-pyridin3- yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu a 53 mg 10% paládia na aktívnom uhlí sa v atmosfére vodíka mieša v 50 ml etanolu 9 hodín. Po pridaní ďalších 53 mg 10% roztoku paládia na aktívnom uhlí sa vzniknutá zmes 16 hodín mieša. Tuhý podiel sa odstráni filtráciou cez celit a filtrát sa zahustí vo vákuu za vzniku 520, mg výslednej zlúčeniny, ktorá sa v nasledujúcej syntéze použije bez ďalšieho čistenia.

1H NMR (300 MHz, CDCI-3). s 8.52 (m, 2H), 7.92 (d, 1H, J = 8.0), 6.91 7.43 (m, 11 H), 5.05 (sept, 1H, J = 6.8), 4.42-4.22 (m, 3H,), 3.88 (s, 3H). 1.06 (m,

Medziprodukt 32

2-(2,4-dioxo-5-pyridin-4-yl~2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do miešaného roztoku 400 mg (1,08 mmol) 1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl)amino]-1,5-dihydrobenzo[b][1,4]diazepin-2,4diónu v 20 ml dimetylformarnidu sa pridá 212 mg (2,16 mmol, 2,0 ekv.) octanu draselného, 206 mg (3,25 mmol, 3,0 ekv.) práškovej medi a 245 mg (2,62 mmol, 2 ekv.) 4-brómpyridínu. Vzniknutý roztok sa 7 hodín zahrieva pri teplote 122 ’C, horúca reakčná zmes sa filtruje cez celit, filtračné sito sa premyje 10 ml metanolu a filtrát sa zahustí vo vákuu. Vzniknutý zvyšok sa zriedi 100 ml etylacetátu a päťkrát sa premyje 25 ml 5% vodného roztoku hydroxidu amónneho. Organický podiel sa oddelí, suší sa nad síranom horečnatým a rozpúšťadlo sa odstráni vo vákuu. Čistením produktu rýchlou chromatografiou na silikagéli pri elúcii zmesou etylacetátu, hexánov a hydroxidu amónneho v pomere 80:20:1 a následnou kryštalizáciou z etanolu vznikne 80 mg výslednej zlúčeniny s výťažkom 16 %.

1H NMR (Acetón .-d6, 300 MHz) d 8.57 (d, 1 H, J = 4.6), 7.46 (m, 3H), 7.31 (m, 4H), 6.97 (m, 3H), 4.86 (sept, 1 H), 4.48 (d, 1H, J = 16.8 ), 4.21 (d, 1 H, J = 16.8), 3.86 (s, 3H), 3.67 (d, 1H, J = 12.2), 3.22 (d, 1 H. J = 12.2), 1.02 (m, 6H);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/z 459,2 (MH⁺).

Medziprodukt 33

2-(3-amino-2,4-dioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5,5a,9a-hexahydrobenzo[b][1,4]diazepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Do miešaného roztoku 80 mg (0,175 mmol) 2-(2,4-dioxo-5-py.ridin-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b] [1,4]diazepin-l-yl] N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 3 ml dimetylformamidu sa pri teplote 0 ’C pridá 0,210 ml (0,209 mmol, 1,2 ekv.) 1 N roztoku bis(trimetylsilyl)amidu sodného v tetrahydrof uráne . Po 0,5 hodine miešania sa pridtí. 62 mg (0,262 mmol, 1,5 ekv.) O-(difenylfosfinyl)hydroxylamínu (Harger, J.

C. S. Perkin I, 3284 až 3288 (1981)) a reakčná zmes sa 16 hodín mieša pri teplote miestnosti. Reakčná zmes sa filtruje a filtrát sa zahustí vo vákuu. Surový produkt sa čistí po absorpcii na 5 g silikagélu rýchlou chromatografiou pri dokonalej elúcii 100 ml etylacetátu a 100 ml zmesi dichlórmetánu a metanolu v pomere 19:1. Zodpovedajúce frakcie sa zlúčia a zahustia vo vákuu za vzniku číreho skla výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/z 474,2 (MH⁺),

Chromatografia na tenkej vrstve (zmes dichlórmetánu a metanolu v pomere 19:1): R^ = 0,31.

Medziprodukt 34

2-amino-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Roztok 2,86 g (10 mmol) 2-bróm-N-izopropyl-(4-metoxyfenyl) acetamidu v 100 ml metanolu sa nasýti amoniakom pri teplote 0 ’C a nechá sa 3 dni pri teplote miestnosti v uzavretej nádobe. Metanol a amoniak sa odstráni vo vákuu a vzniknutý zvyšok sa rozpustí v 100 ml chloroformu a dvakrát sa premyje 50 ml vody. Organický podiel sa suší nad bezvodým síranom sodným, filtruje sa a zahustí vo vákuu. Po sušení vo vysokom vákuu vznikne 2,7 g oleja výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300 MHz, CDCI3) d 6.96 (m, 4H), 4.99 (m, 1H), 3.84 (s, 3H), 2.97 (s, 2H), 1.58 (s, 2H), 1.05 (d, 6H, J = 6.6);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (ESI): m/e 223 (MH⁺).

Medziprodukt 35

2-(4-fluór-2-nitrofenylamino)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Zmes 9,06 g (60 mmol) 2,5-difluórnitrobenzénu a 12,64 g (60 mmol, 1,0 ekv.) 2-amino-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu sa pridá do 225 ml zmesi etanolu a vody v pomere 2:1. Vzniknutá reakčná zmes sa refluxuje pod dusíkom a energicky sa cez noc, asi 16 hodín mieša. Vzniknutá suspenzia sa ochladí na teplotu miestnosti, filtruje sa a premyje zmesou vody a etanolu v pomere 2:1. Mokrá tuhá látka sa rozpustí v metylénchloride, suší sa nad bezvodým síranom sodným a odparuje sa vo vákuu. Zvyšok sa rozotrie s hexánom, filtruje sa a premyje hexánom. Produkt sa suší pod vysokým vákuom za vzniku 9,32 g oranžovej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300 MHz, CDCI3) d 7.89 (dd, 1H, J = 3.1,9.3), 7.12 (m, 3H), 6.99 (m, 2H), 6.35 (dd, 1 H, J = 4.8, 9.2), 5.03 (m, 1 H), 3.89 (s, 3H), 3.57 (s, 2H), 1.09 (d, 6H, J = 6.8); Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (ESI): m/e 362 (MH⁺).

Medziprodukt 36

2- (2-amino-4-fluórfenylamino)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Roztok 30 ml etylacetátu, 175 ml etanolu a 2,50 g (6,92 mmol) 2-(4-fluór-2-nitrofenylamino)-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl) acetamidu sa zlúči s 0,25 g 10% vodného roztoku paládia na aktívnom uhlí a hydrogenuje sa 16 hodín v atmosfére vodíka. Reakčná zmes sa filtruje a odparí vo vákuu za vzniku

1,91 g tuhej látky výslednej zlúčeniny. 1H NMR (300 MHz, CDCI3) d 7.03 (m, 2H), 6.94 (m, 2H), 6.36 (m, 3H), 4.99 (m, 1H), 4.37 (b, 3H), 3.86 (s, 3H), 3.39 (s, 2H), 1.07 (d, 6H, J = 6.8);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (ESI): m/e 332 (MH⁺).

Medziprodukt 37

2-(7-fluór-2,4-dioxo-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]di azepin-l-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Roztok 1,724 g (5,20 mmol) 2-(2-amino-4-fluórfenylamino) -N-izopropyl-N- (4-metoxyfenyl)acetamidu v 15 ml tetrahydrofuránu sa vloží do pridávacieho lievika. Do ďalšieho pridávacieho lievika sa pridá roztok 0,506 ml (5,20 mmol, 1,0 ekv.) malonyl dichloridu v 15 ml tetrahydrofuránu. Tieto roztoky sa súčasne počas 30 minút po kvapkách pri teplote miestnosti pridávajú pod dusíkom počas energického miešania do 100 ml tetrahydrofuránu. Po 20 minútach miešania sa pri teplote miestnosti naraz pridá ďalších 0,506 ml (5,20 mmol, 0,1 ekv.) malonyldichloridu. Vzniknutá reakčná zmes sa nechá

2,5 hodiny miešať, potom sa odparí vo vákuu za vzniku zvyšku, ktorý sa čistí rýchlou chromatografiou na silikagéli pri elúcii zmesou etylacetátu a hexánu v pomere 1:3 a následne 3:1. Zodpovedajúce frakcie sa zlúčia, odparia vo vákuu a vzniknutá tuhá látka sa suší vo vysokom vákuu za vzniku 1,061 g žltohnedej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300 MHz, CDCI3) d 8.14 (b, 1 H), 7.45 (dd, 1 H, J = 5.5. 9.2), 7.29 (m, 1 H), 7.05 (m, 1 H), 6.94 (m, 3H), 6.78 (m, 1H), 4.99 (m, 1H), 4.37 (d, 1H, J = 16.4), 3.82 (s, 3H), 3.69 (d, 1 H, J = 16.0), 3.40 (m, 2H), 1.09 (d, 6H, J = 6.8);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 400 (MH⁺).

Medziprodukt 38

2-(7-fluór-2,4-dioxo-5-pyridín-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-3-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Zmes 0,880 g (2,20 mmol) 2-(7-fluór-2,4-dioxo-2,3,4,5tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-1-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu, 420 mg (6,61 mmol, 3 ekv.) medi, 476 mg (4,85 mmol, 2,2 ekv.) octanu draselného a 0,290 ml (4,85 mmol, 2,2 ekv.) 3-brómpyridínu v 10 ml dimetylformamidu sa pri teplote 100 °C zahrieva pod dusíkom 3 hodiny. Po pridaní 0,132 ml (2,43 mmol, 1,1 ekv.) 3-brómpyridínu sa reakčná zmes nechá stáť ďalšie dve hodiny. Po ochladení na teplotu miestnosti a filtrácii v sklenenom lieviku so sintrom sa odparuje za vzniku zvyšku, ktorý sa rozdelí do etylacetátu a 100 ml 5% vodného roztoku hydroxidu amónneho. Podiely sa oddelia a organický podiel sa premyje 100 ml 5% vodného roztoku hydroxidu amónneho a potom nasýteným vodným roztokom chloridu sodného. Organický podiel sa extrahuje trikrát 1 M roztokom kyseliny chlorovodíkovej. Kyslé podiely sa zlúčia a neutralizujú sa pridaním 1 M vodného roztoku hydroxidu sodného. Zmes sa dvakrát extrahuje metylénchloridom. Metylénchloridové podiely sa zlúčia, sušia sa nad bezvodým síranom sodným, filtrujú sa a zahustia odparovaním vo vákuu. Vzniknutý zvyšok sa rozotrie s hexánom a potom sa zahustí vo vákuu za vzniku 0,705 g žltohnedej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

H NMR (300 MHz, CDCI3) d 8.60 (m, 2H), 8.08 (b, 1 H), 7.54 (b, 1H), 7.39 (m, 1H), 7.15 (m, 2H), 7.00 (m, 3H), 6.57 (dd, 1H, J = 2.7, 9.2), 4Ό5 (m, 1H), 4.32 (d, 1H, J = 17.9), 4.14 (d, 1 H, J = 17.8), 3.85 (s, 3H), 3.61 (d, 1H, J = 12.1), 3.52 (d, 1H, J = 12.1), 1.06 (d, 6H, J = 6.8);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 477 (MH⁺).

Medziprodukt 39 terc.butylester kyseliny 3-nitrobenzoovej

Do roztoku 5,00 g (26,94 mmol) 3-nitrobenzoylchloridu v 70 ml bezvodého tetrahydrofuránu sa pridá 3,82 g (32,30 mmol) terc.butoxidu draselného ako tuhej látky. Vzniknutá reakčná zmes sa pod dusíkom 2 hodiny mieša, zahustí sa vo vákuu a rozdelí do dichlórmetánu a vody. Po oddelení podielov sa vodný podiel extrahuje etylacetátom. Organické podiely sa zlúčia, sušia sa nad bezvodým síranom horečnatým, filtrujú sa a zahustia sa vo vákuu. Surový produkt sa čistí po absorpcii na silikagéli rýchlou chromatografiou pri elúcii gradientom koncentrácií od 0 do 5% roztoku etylacetátu v n-hexáne. Podiely, obsahujúce požadovanú zlúčeninu sa zlúčia, zahustia sa vo vákuu a sušia sa vo vysokom vákuu za vzniku 3,82 g oleja výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300 MHz, CDCI3) d 8.79 (m, 1H), 8.35 (m, 2H), 7.62 (m, 1H), 1.63 (s, 9H) Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (CI): m/e 224 (MH⁺).

Medziprodukt 40 terc.butylester kyseliny 3-aminobenzoovej

Roztok 3,77 g (16,9 mmol) terc.butylesteru kyseliny 3nitrobenzoovej v 50 ml absolútneho etanolu sa zlúči s 0,30 g 10% vodného roztoku paládia na aktívnom uhlí a hydrogenuje sa v atmosfére plynného vodíka asi 3 hodiny. Reakčná zmes sa filtruje cez infuziórovú hlinku a zahustí sa vo vákuu za vzniku oleja, ktorý sušením vo vysokom vákuu kryštalizuje za vzniku 3,28 g žltohnedej tuhej látky výslednej zlúčeniny.

1H NMR (300 MHz, CDCI3) d 7.38 (d, 1H, J = 8.0 Hz), 7.29 (m, 1H), 7.19 (m, 1H), 6.83 (m, 1 H), 1.58 (s, 9H);

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (CI): m/e 194 (MH⁺).

Medziprodukt 41 terc.butylester kyseliny 3-[(4-nitrofenyl)oxykarbonyl]aminobenzoovej

Do roztoku 3,15 g (16,24 mmol) terc.butylesteru kyseliny 3-aminobenzoovej a 1,379 ml (17,05 mmol) bezvodého pyridínu v 25 ml bezvodého dichlórmetánu sa pod dusíkom pri teplote 0 °C až 5 °C pridá po kvapkách počas 20 minút 25 ml roztoku 4-nitrofenylchlórformátu v bezvodom dichlórmetáne. Reakčná zmes sa zohreje na teplotu miestnosti a cez noc sa mieša. Po premytí 1 M vodným roztokom kyseliny chlorovodíkovej sa reakčný roztok suší nad bezvodým síranom horečnatým a zahustí sa vo vákuu za vzniku tuhej látky. Surový produkt sa uvedie počas 30 minút do suspenzie v n-hexáne, filtruje sa a suší vo vysokom vákuu za vzniku 4,460 g bielej kryštalickej látky výslednej zlúčeniny .1H NMR (300 MHz, CDCI3) d 8.30 (m,

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (L-SIMS): m/e 358 (M⁺).

Medziprodukt 42

2- (3 - azi do - 7-.fluór - 2,4-dioxo- 5 - pyridín-4-yl - 2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-3-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Na roztok 262 mg (0,550 mmol) 2-(7-.f luór-2,4-dioxo-5pyridin-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]-diazepin-3-yl]N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamidu v 5 ml bezvodého tetrahydrof uránu sa pri teplote -78 °C a pod dusíkom pôsobí 0,5 M roztokom 1,54 ml (0,770 mmol, 1,4 ekv.) bis(trimetylsilyl)amidu draselného v toluéne. Po 15 minútach miešania sa pridá 212 mg (0,687 mmol, 1,25 ekv.) 2,4,6-triizopropylbenzénsulfonylazidu (J. Org. Chem. 1984, 49, 1430 až 1434). Po minútach miešania sa reakcia skončí pridaním 78,6 ml (1,38 mmol, 2,5 ekv.) ľadovej kyseliny octovej a zmes sa nechá zohriať na teplotu miestnosti. Po odparovaní vo vákuu sa vzniknutý zvyšok čistí na silikagéli rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou etylacetátu a hexánu v pomere 1:1. Zodpovedajúce podiely sa zlúčia, odparia sa vo vákuu a sušia vo vysokom vákuu za vzniku 170 mg výslednej zlúčeniny ako amorfnej tuhej látky.

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 518 (MH⁺).

Chromatografia na tenkej vrstve oxidu kremičitého (zmes etylacetátu a hexánu v pomere 3:1): = 0,68.

Medziprodukt 43

2-(3-amino-7-fluór-2,4-dioxo-5-pyridín-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]diazepin-3-yl]-N-izopropyl-N-(4-metoxyfenyl)acetamid

Roztok 152 mg 2-(3-azido-7-fluór-2,4-dioxo-5-pyridin-4-yl-2,3,4,5-tetrahydrobenzo[b][1,4]-diazepin-3-yl]-N-izopropyl-N- (4-metoxyfenyl)acetamidu v 10 ml etylacetátu sa zlúči so 60 mg 10% vodného roztoku paládia na aktívnom uhlí. Po 16 hodinách hydrogenácie v atmosfére plynného vodíka sa zmes filtruje, odparuje vo vákuu a čistí na silikagéli rýchlou chromatografiou pri elúcii zmesou metanolu a etylacetátu v pomere 3:7. Zodpovedajúce podiely sa zlúčia, odparia vo vákuu a sušia vo vysokom vákuu za vzniku 82 mg peny výslednej zlúčeniny.

Hmotnostné spektrum s nízkou rozlišovacou schopnosťou (FAB): m/e 492 (MH⁺).

Chromatografia na tenkej vrstve oxidu kremičitého (zmes dichlórmetánu a metanolu v pomere 95:5): R^ = 0,30.

Farmakologické príklady

Tableta:

účinná látka bezvodá laktóza USP mikrokryštalická celulóza NF želatínový škrob Ph Eur. stearát horečnatý USP mg

163 mg 69 mg 15 mg mg celková hmotnosť

300 mg

Cez sito s veľkosťou ôk 500 mikrónov sa preoseje účinná látka, mikrokryštalická celulóza, laktóza a škrob. Po zmiešaní vo vhodnom miešacom zariadení sa stearát horečnatý preoseje cez sito s veľkosťou ôk 250 mikrónov a zmieša sa s aktívnou látkou. Zo zmesi sa lisujú tablety vo vhodných ražniciach a potom sa potiahnu povlakom acetátftalátu celulózy.

Skúška väzby na receptory CCK-A

Príprava tkaniva:

Pripraví sa 0,3 M roztok sacharózy a 2,0 M roztok sacharózy a cez noc sa ochladí na teplotu 4 ’C. Nasledujúci deň sa pridajú inhibítory. Výsledná koncentrácia trypsínového inhibítora zo sójových bôbov je 0,01% (50 mg/500 ml sacharózy) a fenylmetylsulfonylfluoridu je 100 mM (8,5 mg/500 ml sacharózy).

Laboratórne potkany sa usmrtia dekapitáciou gilotínou. Vonkajšia brušná stena sa zvlhčí metanolom a kožušina a koža sa odstránia. Brucho sa otvorí, opatrne sa oddelí pankreas, ktorý sa umiestni do 50 ml kadičky, obsahujúcej 0,3 M roztok sacharózy. Po zobratí všetkých pankeasov sa odstráni tuk a lymfatické uzliny. Pankreatické tkanivo sa rozdelí na asi 4,0 g podiely do 30 ml kadičiek, obsahujúcich 1,0 ml 0,3 M roztoku sacharózy.

- 67 Pri teplote 4 °C sa pankreatické tkanivo rozdelí nožnicami na malé časti a zriedi sa v pomere hmotnosti a objemu 1:110 0,3 M roztokom sacharózy. Jednotlivé diely tkaniva sa homogenizujú v chladenom homogenizačnom zariadení Vheaton 4 pohybmi piesta (hore a dolu) B a následne 4 pohybmi piesta (hore a dolu) A. Homogenát sa filtruje cez 2 vrstvy mulu do chladenej 500 ml kadičky a potom sa za stáleho miešania zriedi 2,0 M roztokom sacharózy pri dosiahnutí výslednej koncentrácie 1,3 M roztoku homogenátu v sacharóze. Vzniknutý 1,3 M roztok homogenátu sa rozdelí do 18 tenkostenných polyalomérových skúmaviek s objemom 36 ml umiestnených v ľadovom kúpeli (približne 30 ml homogenátu v jednej skúmavke). Do každej skúmavky sa pridá 0,3 M roztok sacharózy tak, aby hladina kvapaliny bola asi 0,5 cm pod horným okrajom skúmavky. Vzorky sa 3 hodiny centrifugujú pri teplote 4 °C v ultracentrifugačnom zariadení Sorvall RC70 pri otáčkach 27 500 otáčok za minútu (100 000 g). Vrstva tvoriaca rozhranie sa zoberie do chladeného odmerného valca, zriedi sa a zmieša so studenou destilovanou vodou na výsledný objem 312 ml. Tento roztok sa odstred’uje pri teplote 4 °C (100 000 g) 50 minút. Usadenina sa znova uvedie do suspenzie v pufri KRH, suspenzia sa homogenizuje v homogenizačnom zariadení Vheaton s objemom 15 ml štyrmi pohybmi hore a dolu piesta A (tesnejšie). Homogenát sa vloží do polykarbonátových baniek s objemom 2 až 27 ml a pri teplote 4 °C sa centrifuguje 30 minút (100 000 g). Usadenina sa uvedie znova do suspenzie (1 ml pufra KRH/g pôvodného tkaniva). Suspenzia sa vloží do homogenizačného zariadenia zodpovedajúcej veľkosti a suspenzia sa homogenizuje štyrmi pohybmi hore a dolu piesta A. Vzniknutý homogenát sa uloží rozdelený do mikrocentrifugačných skúmaviek v 1 ml podieloch pri teplote -70 °C.

Pufer KRH:

pH 7,4 pri teplote 4 °C

Zložka molekulová hmotnosť g/l

25 mM HEPES	260,3	6,51
104 mM chlorid sodný	58,44	6,08
5 mM chlorid draselný	74,56	0,37
1 mM fosforečnan draselný	136,09	0,14
1,2 mM síran horečnatý	246,48	0,30
2 mM chlorid vápenatý	110,99	0,22
2,5 mM glukóza	180,16	0,45
0,2% BSA	-	2,00
0,1 mM PMSE*	174,2	0,017
0,01% STI*	-	0,10

* čerstvé inhibítory pridané v deň pokusu

Skúška:

Skúmané látky sa desaťkrát zriedia v pufri pre väzbu (assay binding buffer) z koncentrácie zásobného roztoku na výslednú koncentráciu pri skúške.

Zmes 50 ml zlúčeniny podľa súčasného vynálezu + 400 ml pufra + 25 ml sulfátového CCK-8 označeného Boltonovým a Hunterovým reakčným činidlom (Amersham, 2000 Cl/mmol) + 25 ml pripravených pankreatických membrán potkana sa 30 minút inkubuje pri teplote 5 ’C a za stáleho jemného pretrepávania počas celej inkubácie.

Na určenie nešpecifických väzieb sa použije 1 mM roztok L-364718 (výsledná koncentrácia).

Reakcia sa zastaví použitím prístroja Brandell Celí Harvester, ktorý sa premyje trikrát vždy 3 ml ľadovo studeného (4 ’C) pufra pre väzbu (assay binding buffer).

Tkanivo sa uloží na filtračný papier Vhatman GF/B, ktorý sa vopred navlhčí pufrom pre väzbu a impulzy z filtračného papiera sa merajú pomocou počítača gama žiarenia.

Skúška väzby na receptory CCK-B

Príprava tkaniva

Morčatá mužského pohlavia s hmotnosťou 250 až 300 g (Hartley, Charles River) sa usmrtia dekapitáciou. Mozgové tkanivo sa uloží do pufra pre väzbu pri teplote 4 °C (pufer = % 50 mM roztok Tris v kyseline chlorovodíkovej s pH 7,4). Mozgová kôra sa oddelí a uloží do pufra s teplotou 4 °C. Určí sa celková vlhká hmotnosť mozgovej kôry a tkanivo sa zriedi v pomere hmotnosti tkaniva a objemu pufra 1:10.

Mozgová kôra sa rozdelí na malé časti v zariadení Tekmar Tissuemizer. Za použitia motorového skleneno-tefIónového homogenizačného zariadenia sa pri piatich pohyboch piesta hore a dolu vyrobí homogenát tkaniva s pufrom. Táto príprava prebieha pri teplote 4 ’C.

Membrány sa oddelia centrifugáciou v zariadení Sorvall RC5C pri teplote 4 ’C za použitia SA 600 rotora s rýchlosťou otáčok 16000 otáčok za minútu (maximálne 47800 g). Vrstva membrán sa uloží a supernatant sa odstráni. Usadeniny sa zlúčia a uvedú sa do suspenzie v pufri pri teplote 4 ’C tak, ako je uvedené vyššie pri rovnakom postupe prípravy homogenátu v skleneno-tefIónovom homogenizačnom zariadení. Vzniknuté homogenáty sa 15 minút odstred’ujú pri rýchlosti 16000 otáčok za minútu (47800 g maximálne, 36592 g priemerne a pri teplote 4 ’C. Supernatant sa odloží a usadeniny sa uložia, zlúčia sa s pufrom do výsledného objemu 300 ml a rozdrvia sa v zariadení Tekmar Tissuemizer. Počiatočný obsah bielkoviny sa určí skúškou na bielkovinu (Biorad). Pridávaním pufra sa objem suspenzie upraví tak, aby výsledná koncentrácia, určená pomocou skúšky na bielkovinu (Biorad) bola približne 4,0 mg/ml. Výsledná suspenzia sa uloží v 4,0 ml podieloch do skúmaviek z umelej hmoty pri teplote -70 ’C.

Skúška:

Pufer s pH 7,4 obsahuje: 20 mM HEPES mM EGTA

118 mM NaCl 5 mM KC1 5 mM MgCl₂ 0,05 % BSA

Filtre Skatron sa 1 hodinu pred uskutočnením skúšky nechajú nasiaknuf pufrom, obsahujúcim 0,1% roztok albumínu hovädzieho séra (BAS).

Pripravia sa čerstvé roztoky 100 mM Bestatínu a 3 mM Fosforamidonu. Výsledná koncentrácia pri skúške bude 10 mM.

Skúmané látky sa desaťkrát zriedia v pufri pre väzbu (assay binding buffer) z koncentrácie zásobného roztoku na “I O Q výslednú koncentráciu pri skúške. Zriedi sa [ I)-sulfátový CCK-8 označený Bolton-Hunterovým činidlom.

Pri teplote miestnosti sa 150 minút inkubuje 25 ml 100 mM roztoku Bestatinu, 25 ml 3 mM roztoku Fosforamidonu, 25 ml zlúčeniny podľa súčasného vynálezu, 50 ml rádioligandu, 25 ml pufra a 100 ml bunkových membrán z morčacej mozgovej kôry.

Na uskutočnenie slepej skúšky a určenie hodnoty Βθ sa zlúčenina podľa súčasného vynálezu nahradí pufrom pre väzbu.

Na určenie veľkosti väzby na filter sa zlúčenina podľa súčasného vynálezu a bunkové membrány z morčacej mozgovej kôry nahradia pufrom pre väzbu.

Na určenie nešpecifických väzieb sa zlúčenina podľa súčasného vynálezu nahradí 1 mM roztokom sulfátového CCK-8 (Sigma).

Reakcia sa zastaví filtráciou automatickým zariadením Skatron Celí Harvester. Filtre sa premyjú pufrom s teplotou 4 ’C. Umiestnia sa do skúmaviek a impulzy sa odčítajú použitím počítača gama žiarenia.

Skúšky s izolovaným žlčníkom morčaťa

Príprava tkaniva:

Z morčiat, usmrtených zlomením väzu boli vybraté žlčníky. Izolované žlčníky boli očistené od ľnúceho spojivového tkaniva a rozrezané na dva prstence z každého zvieraťa, prstenec mal dĺžku 2 až 4 mm. Prstence sa uložia do fyziologického roztoku s nasledujúcim zložením:

chlorid sodný	118,4	mM,
chlorid draselný	4,7	mM,
vodný síran horečnatý	1,2	mM,
vodný chlorid vápenatý	2,5	mM,
dihydrogénfosforečnan
draselný	1,2	mM,
hydrogénuhličitan sodný	25	mM,
dextróza	11,1	mM

Roztok sa udržuje na teplote 37 °C za prevzdušňovania zmesou 95 % kyslíka a 5 % oxidu uhličitého. Tkanivá boli spojené zlatými mostíkmi a na koncoch napojené drôtikmi z nerezovej ocele na prevodníky, izometricky zazanamenávajúce silu sťahu (Grass, Model FT03 D). Odpovede potom boli zaznamenávané na polygraf (Grass, Model 7E). Jedna vzorka tkaniva od každého morčaťa slúžila ako kontrolná vzorka v rovnakom rozpúšťadle a počas rovnakého času, avšak bez použitia skúmaných účinných látok.

Skúška:

Prstence boli postupne v priebehu 120 minút zaťažené na základné napätie 1 g a toto napätie bolo udržované v priebehu celej skúšky. V priebehu úpravy tohto napätia boli prstence vystavené pôsobeniu acetylcholínu (ACH, 10“^M), acetylcholín bol pridaný celkom štyrikrát na overenie kontraktility tkaniva. Potom boli preparáty vystavené pôsobeniu submaximálnej dávky sulfátu CCK-8 (Sigma, 3 x 10^ M). Po dosiahnutí stálej odpovede boli preparáty rýchle trikrát premyté a potom premývané každých 5 až 10 minút počas 1 hodiny tak, aby bola znova dosiahnutá stála základná línia pri vyššie uvedenom zaťažení.

Skúmané účinné látky boli rozpustené v dimetylsulfoxide DMSO a roztok bol zriedený vodou. Každá zlúčenina sa podrobí trom meraniam. Potom bola vykonaná skúška pomocou kumulatívnej krivky závislosti účinku na koncentrácii pre každú zo skúmaných látok (10 až 3 x 1O'°M), potom bola zaznamenaná krivka závislosti účinku na koncentráciu pre sulfát CCK-8 (10~-i-u 20 ° M) v prítomnosti najvyššej dávky skúmanej látky. Nakoniec bolo pridaných 10 mM ACH na vyvolanie maximálnej kontrakcie.

Koncentrácia zlúčenín podľa súčasného vynálezu počas pokusov je 1 μΜ a výsledky sú uvedené ako % z maximálnej odpovede na sulfátový CCK-8.

Príklad č. Veľkosť kontrakcie

1	91
2	64
3	83
4	67
5	51
6	32
7	77
8	81
10	83
11	67
13	96
14	84
15	93

Paradigma vyvolané 18 hodinovým hladom

Skúšky na potkanoch po odobratí krmiva na 18 hodín

Potkaní samci Long-Evans s hmotnosťou 300 až 375 g boli

Ί3 aklimatizovaní po dobu aspoň jedného týždňa v zavesených klietkach z pletiva z nerezovej ocele s podlahovou plochou 17,8 x 25,4 cm a s výškou 17,8 cm a zvieratám bola podávaná voda podľa ľubovôle a krmivo (Lab Vlox,· Purina Rodent Laboratory Chow šarža 5001) , sanici boli chovaní pri cykle 12 hodín svetlo a 12 hodín tma, svetlo trvalo od 6,00 do 18, 00 hodín, teplota bola približne 22,8 ’C. Pred vykonaním skúšky bolo prerušené podávanie tuhého krmiva o 16,00 hodine poobede, avšak voda bola ďalej podávaná podľa ľubovôle. Ďalšie ráno sa o 9,00 hodine potkany zvážia. 0 9 hodine 45 minútach im bola podaná skúmaná látka alebo nosné prostredie (2 ml/kg) intraperitoneálnou injekciou, perorálne alebo zavedenou dvanástnikovou sondou. Potom boli potkany vrátené do svojich klietok. Krmivo bolo opäť podávané od 10,00 hodiny dopoludnia. 0 10 hodine 30 minúte bolo zvážené zvyšné krmivo a trus.

Zlúčeniny podľa súčasného vynálezu sú v terapeutických dávkach netoxické. Pri aplikácii terapeutických dávok laboratórnym potkanom sa nezistili žiadne vedľajšie účinky.

>

Claims (14)

1,3,5-trimetyl-lH-pyrazol-4-ylovú skupinu.

1) heterocyklický zvyšok, viazaný v polohe 2, ktorý sa volí zo skupiny pyrolový, tetrahydropyrolový, indolový, benzofuránový, tiofénový, benzotiofénový, indolínový, chinolínový alebo 4-oxobenzopyránový zvyšok, pričom pyrolový, tetrahydropyrolový, indolový alebo indolínový zvyšok sú prípadne substituované na dusíkovom atóme kruhu

O skupinou R° v ďalej uvedenom význame a indolový, indolínový, chinolínový, benzofuránový, benzotiofénový alebo 4-oxobenzopyránový zvyšok sú prípadne substituované na benzénovom kruhu skupinou v ďalej uvedenom význame alebo

1. 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca I a ich fyziologicky prijateľné soli a solváty, v ktorých X znamená atóm vodíka, trifluórmetyl, alkyl, alkyltioskupinu s 1 až 4 atómami uhlíka, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo atóm halogénu,

R^ znamená skupinu všeobecného vzorca II alebo -NR^R^

R² znamená

2. 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty podľa nároku 1, v ktorých R znamená pyridyl, pyrimidinyl alebo

2) fenyl, prípadne mono- alebo disubstituovaný substituentmi, nezávisle volenými zo skupiny atóm halogénu, hydroxyskupina, kyanoskupina, karboxyskupina, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -0-(CF^CgH^), -COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, aminoskupina, dimetylaminoskupina, -ΝΗΡ^θ, 1-pyrolidinyl alebo tetrazolyl alebo

3-pyridylovú skupinu.

3. 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobec-1 ného vzorca I podľa nároku 1 alebo 2, v ktorých R znamená

3) pyridín alebo pyridinyl, prípadne nezávisle mono- alebo disubstituovaný substituentmi zo skupiny atóm halogénu, metyl, hydroxyskupina, nitroskupina, kyanoskupina, karboxyskupina,

-O-alkyl s 1 až 4 atómoch uhlíka, -OÍCI^CgH^), -COO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, aminoskupina alebo dimetylaminoskupina alebo

4 S

R znamená izopropyl a R znamená 4-metoxyfenyl.

4. 5-heterocyklo-l,5-benžodiazepínové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 3, v ktorých R^ znamená propyl alebo izopropyl a R^ znamená fenyl, prípadne substituovaný v polohe para hydroxyskupinou, metoxyskupinou, atómom fluóru, dimetylaminoskupinou, pyrolidínovou skupinou alebo morfolínovou skupinou.

4 atómami uhlíka v alkylovej časti, pyrolidinyl, morfolinyl alebo atóm halogénu alebo

R^ znamená alkyl s 1 až 2 atómami uhlíka a r5 znamená fenyl, substituovaný v polohe 2 alebo 4 atómom chlóru, metylovou skupinou, metoxyskupinou alebo metoxykarbonylovou skupinou, r6 znamená atóm vodíka alebo metyl,

R znamená atóm vodíka, hydroxyskupinu, atóm fluóru, dimetylaminoskupinu, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka alebo skupinu -O(CH₂CgH₃),

R® znamená skupinu -(CH₂)^COOH, znamená metyl, atóm chlóru, nitroskupinu, hydroxyskupinu, metoxyskupinu alebo skupinu -NHR¹⁰,

R¹⁰ znamená atóm vodíka, acetyl, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -SO₃H, -SO₂CH₃, -SO₂CF₃ alebo -SO₂C₆H₅ alebo alkoxykarbonyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti,

R¹¹ znamená fenyl, prípadne nezávisle mono- alebo disubstituovaný substituentmi zo skupiny atóm fluóru, trifluórmetoxyskupina, alkyltioskupina s 1 až 4 atómami uhlíka, -(CH₂)_cC00H, -(CH₂)_cCOO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH₂)_cSCH₃, -(CH₂)_cSOCH₃, -(ch₂)_cso₂ch₃, -(ch₂)_cconh₂, -sch₂cooh, -conh(so₂ch₃), -CONH(SO₂CF₃), -(CH₂)_CN(alkyl)₂ s 1 až 4 atómami uhlí77 ka v alkylovej časti, -(CH₂)_CNH(SO₂CF₃), -(CH₂)_cN-(SO₂CF₃)-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH₂)_cSO₂NHCO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH₂)_cSO₂N-alkyl-CO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v každej alkylovej časti, -(CH₂)_cCONHSO₂-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -(CH₂)_cC0N-alkyl-S0₂-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v každej alkylovej časti, -(CH₂)_cOR -(CH₂)_cNHR¹⁰ alebo fenyl, monosubstituovaný substituentom zo skupiny -(CH₂)_c-tetrazolyl, -(CH₂)_c-karboxamidotetrazolyl alebo -(CH₂)_c-pyrolidinyl alebo znamená R-¹·¹ pyridín alebo pyridinyl, prípadne nezávisle mono- alebo disubstituované substituentmi zo skupiny atóm halogénu, metyl, hydroxyskupina, nitroskupina, kyanoskupina, karboxyskupina, -O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoskupina, dimetylaminoskupina alebo

-NHR¹⁰,

R znamená atóm vodíka, alkyl s 1 az 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, -CH₂CgH^, -CH₂C00H, -CH₂C0NH₂, -CH₂CONH-álkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -CH₂CON(alkyl)₂ s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti alebo niektorou zo skupín / \ f \ 10

-(CHj)_eCO-N 0 alebo -(CH₂)_cCO-N N-R

z znamená celé číslo 1 alebo 2, n znamená celé číslo 1 alebo 2, P znamená celé číslo 1 až 4, b znamená celé číslo 0 až 3 a c znamená celé číslo 0 alebo 1.

4 atómami uhlíka v alkylovej časti, -N(alkyl)₂ s 1 až

4) NHR·*·^, kde má ďalej uvedený význam alebo znamená 7-indazolyl, obsahujúci na dusíkovom atóme v polohe 1 skupinu R^-θ,

R znamená heterocyklickú skupinu, viazanú na zvyšok molekuly cez atóm uhlíka v kruhu a volenú zo skupiny pyridyl, pyrimidinyl, pyridazinyl, pyrazinyl, furanyl, tiofenyl, pyrolyl, oxazolyl, tiazolyl, imidazolyl, pyrazolyl, izoxazolyl, izotiazolyl, oxadiazolyl, tiazolyl, tiadiazolyl, pyrolidinyl, piperidinyl, morfolinyl alebo tiomorfolinyl_; tieto heterocyklické skupiny sú prípadne substituované až troma rovnakými alebo rôznymi substituentmi zo skupiny atóm halogénu, alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, nitroskupina, karboxyskupina, alkoxykarbonyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkoxylovej časti, alkoxyskupina alebo alkyltioskupina vždy s 1 až 4 atómami uhlíka, aminoskupina, alkylaminoskupina alebo dialkylaminoskupina vždy s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylových častiach,

R⁴ nezávisle znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, cyk76 loalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 6 atómami uhlíka, fenyl, -(CH₂)pCN alebo -(CH₂)pCOO-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka v alkylovej časti a nezávisle znamená alkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, cykloalkyl s 3 až 6 atómami uhlíka, alkenyl s 3 až 6 atómami uhlíka, benzyl, fenyl, prípadne nezávisle substituovaný jedným alebo dvoma substituentmi zo skupiny alkyl s 1 až 3 atómami uhlíka, prípadne substituovaným jedným alebo väčším počtom atómov fluóru, _t kyanoskupinou, hydroxyskupinou, dimetylaminoskupinou,

-O-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -O(CH₂CgH₃), • -NH-alkyl s 1 až 4 atómami uhlíka, -COO-alkyl s 1 až

5. 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 4, v ktorých

6. 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 5, v ktorých

R znamená indolovú skupinu, prípadne substituovaný fenyl alebo skupinu NHRU.

7. 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 6, v ktorých

8. 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 7, v ktorých X znamená atóm vodíka alebo fluóru.

9. 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínový derivát všeobecného vzorca I, podľa nároku 1, (1-[izopropyl-(4-metoxyfenyl) -karbamoylmetyl]-2,4-dioxo-5-pyridin-3-yl-2,3,4,5-tetrahydro-lH-benzo[b][1,4]diazepin-3-yl)amid kyseliny lH-indol2-karboxylovej a jeho enantioinéry.

9 1 Ί

R znamená indolovú skupinu alebo skupinu NHR ^x, v ktorej R^{10 11} znamená fenyl alebo 3-karboxyfenyl.

10. 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca I, podľa niektorého z nárokov 1 až 9 na pou79 žitie na liečebné účely.

11. Použitie 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínových derivátov všeobecného vzorca I, podľa niektorého z nárokov 1 až 9 na výrobu farmaceutických prostriedkov na liečenie stavov, u ktorých je potrebné dosiahnuť moduláciu účinkov gastrínu alebo CCK.

12. Spôsob liečenia cicavcov vrátane človeka v prípadoch, u ktorých je potrebné dosiahnuť moduláciu účinkov gastrínu a/alebo CCK, vyznačujúci sa tým, že sa podáva účinné množstvo derivátov podľa niektorého z nárokov 1 až 9.

13. Farmaceutický prostriedok, vyznačuj úci sa t ý m, že ako svoju účinnú zložku obsahuje 5-heterocyklo-l , 5-benzodiazepínové deriváty všeobecného vzorca I podľa niektorého z nárokov 1 až 9 v zmesi s aspoň jedným fyziologicky prijateľným nosičom alebo pomocnou látkou.

14. Spôsob výroby 5-heterocyklo-l,5-benzodiazepínových derivátov všeobecného vzorca I podľa nároku 1, vyznáčujúcisatým, že sa

a) nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca III kde R¹,

R'

X a z majú význam, uvedený vo vzorci I, so zlúčeninou všeobecného vzorca IV

R^1íLY (IV) kde

Y znamená skupinu -NCO, -NHCOC1 alebo -NHCOR^a, kde R^a znamená fenoxyskupinu, substituovanú nitroskupinu alebo 1-imidazolovú skupinu a

R^AJ má význam, uvedený vo vzorci I alebo znamená skupinu, ktorú je možné na túto skupinu premeniť,

b) nechá reagovať zlúčenina všeobecného vzorca V