SK122199A3 - Methods and compositions for modulating responsiveness to corticosteroids - Google Patents

Description

Prípravky na moduláciu reakcie na kortikosteroidy

Doterajší stav techniky

Štandardná terapia na rôzne poruchy imunity a zápalové ochorenia zahrnuje aplikáciu kortikosteroidov, které majú schopnosť potlačiť imunologické a zápalové reakcie. Kortikosteroidy sú používané pri liečbe takých ochorení ako astma, poruchy autoimunity, (napríklad reumatická artritída, systematický lupus erythematosus) a rejekcie transplantátu (podľa recenzie na kortikosteroidy uvedenej napríklad, Truhan, A. P. et al. (1989) Annals of Allergy 62:375-391; Baxter, J. D. (1992) Hospital Practice 27:111134; Kimberly, R. P. (1992) Curr. Opin. Rheumatol. 4\ 325-331; Weisman, M.

H.) 1995) Curr. Opin. Rheumatol. 7: 183-190). Kortikosteroidy sú tiež aktuálne používané pri liečbe rôznych dermatologických ochorení takých ako kontaktná dermatitída, všeobecná psoriáza, plochý lišaj, keloidy a urticaria pigmentosa (prehľad je uvedený v Sterry, W. (1992) Árch. Dermatol. Res. 284 (suppl.): S27-S29).

Zatiaľ čo sú kortikosteroidy terapeuticky prospešné, ich použitie je spojené s množstvom vedľajších účinkov, ktoré sa pohybujú v rozmedzí od miernych až do možného ohrozenia života. Komplikácie spojené s predĺženým a/alebo vysokým používaním steroidných dávok zahrnujú muskuloskeletárne účinky (napríklad osteoporóza, myopatia, aseptická nekróza kosti,), oftalmické účinky (napríklad zadné subkapsulárne katarakty), gastrointestinálne účinky (napríklad ulkusy, pankreatitída, pocit nevoľnosti, zvracania), kardiovaskulárne účinky (napríklad hypertenzia, ateroskleróza), účinky na centrálnu nervovú sústavu (napríklad pseudotumor cerebri, psychiatrické reakcie), dermatologické účinky (napríklad hirsutizmus, redistribúcia podkožného tuku, zhoršené liečenie zranení, stenčovanie kože) a supresia hypotalamovej hypofýznej adrenálnej osi (je uvedené napríklad v Truhan, A. P. et al. (1989) Annals of Allergy 62:375-391). Pri používaní kortikosteroidov sa môžu dostaviť viaceré vedľajšie účinky v závislosti na dávke (Kimberly, R. P.

(1992) Curr. Opin. Rheumatol. 4:325-331).

Teda spôsoby a prípravky, ktoré umožňujú použitie nižšieho účinného dávkovania kortikosteroidov (označované ako „obmedzený účinok steroidov“) môžu byť žiaduce, aby sa vyhlo nechceným vedľajším účinkom.

Ďalší problém, ktorý limituje užitočnosť kortikosteroidov, je fenomén rezistencie voči steroidom. Určité zápalové alebo imunologické ochorenia prejavujú odolnosť na liečenie steroidmi. Napríklad pokusy na použitie terapie kortikosteroidmi na liečbu septického šoku u ľudí sa stretli so sklamaním vo výsledkoch a tak nie sú kortikosteroidy všeobecne doporučované ako adjunktívna terapia pri tažkej sepse alebo septickom šoku (k nahliadnutiu napríklad Putterman, C. (1989ý Israel J. Med. Sci. 25:332-338; Bone, R. C. a Brown, R. C. (1990) in Vincent, J. L. (vydanie) „Update in Intensive Čare and Emergency Medicíne 10,„ Heidelberg.Springer Verlag, p. 121). Iné ochorenia, ktoré často prejavujú rezistenciu na liečbu kortikosteroidmi zahrnujú zápalové črevné ochorenie (k nahliadnutiu napríklad, Hĺbi, T. et al. (1995) J. Gastroenterol. 30:121-123) a štep versus hostiteľ (,,graft-versus-host„) ochorenie (Antin, J. H. et al. (1994) Blood 84:1342-1348; Racadot, E. et al. (1995) Bone Mar r ow Transplantation 15:669-677). Preto spôsoby a prípravky, ktoré môžu byť používané na prekonanie alebo zmenenie rezistencie kortikosteroidov pri zápalových a imunologických ochoreniach, sú stále potrebné.

Ešte ďalší nedostatok terapie kortikosteroidov je výskyt „spontánnej reakcie na steroidy („steroid rebound effect,,) a to vtedy, keď je aplikácia kortikosteroidov prerušovaná. Spontánna reakcia na steroidy je charakterizovaná zhoršujúcimi sa zápalovým stavom(mi), ktoré sú liečené po prerušení terapie steroidmi. Spôsoby a prípravky, ktoré môžu byť používané na zlepšovanie spontánnej reakcie na steroidy, sú stále potrebné.

Podstata vynálezu

Tento vynález poskytuje spôsoby a prípravky na moduláciu reakcie na kortikosteroidy u subjektu. Napríklad spôsoby a prípravky vynálezu môžu byť používané na reverzovanie rezistencie voči steroidom („reverzia steroid rezistancie,,) u subjektu, na umožnenie liečenia subjektu kortikosteroidmi. Spôsoby a prípravky vynálezu môžu byť používané na zvýšenie senzitivity voči steroidom u subjektu a tým na dosiahnutie terapeutickej účinnosti liečenia kortikosteroidom pri nižších dávkach (napríklad, aby sa vyhlo škodlivým vedľajším účinkom vysokých dávok kortikosteroidov alebo na umožnenie liečenia ochorení prejavujúcich sa závislosťou na steroide pri nižších dávkach). Ďalej ešte spôsoby a prípravky vynálezu môžu byť používané na zlepšenie spontánnej reakcie na steroidy, pokiaľ subjekt podstupuje liečenie sú mu odobrané kortikosteroidy.

V modulatorných spôsoboch vynálezu je prostriedok, ktorý antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu IFN-γ u subjektu, aplikovaný subjektu v kombinácii s kortikosteroidom tak, že reakcia subjektu na kortikosteroid je modulované v porovnaní s tým, kedy je subjektu aplikovaný samotný kortikosteroid. Objekt, ktorý je antagonizovaný môže byť napríklad cytokín alebo enzým, ktorý reguluje produkciu IFN-γ alebo bunka, ktorá reguluje produkciu IFN-γ. Prostriedok je aplikovaný v dávkach a spôsobom podania dostatočným na inhibíciu produkcie IFN-γ u subjektu. Pri rôznych uskutočneniach sú prostriedky a kortikosteroid aplikované v rovnakom čase, prostriedok je aplikovaný ako prvý a potom až kortikosteroid alebo opačne. Spôsoby môžu byť aplikované na profylaktikum a na terapeutický režim ošetrenia kortikosteroidmi.

V rámci uskutočnenia, spôsob zahrnuje aplikáciu prostriedku, ktorý je antagonista IL-18. Antagonista IL-18 je aplikovaný v dávkach a spôsobom podania dostatočným na inhibíciu aktivity IL-18 u subjektu. Antagonista IL-18 môže pôsobiť na úroveň syntézy IL-18, aktivity cytokínu IL-18 alebo na interakciu IL-18 s receptorom IL-18. V rámci výhodného uskutočnenia je antagonista IL-18 inhibítor proteázy z rodiny kaspasy, výhodne inhibítor

Interleukin-β konvertujúceho enzýmu (ICE) („Interleukin-β Converting Enzýme (ICE) inhibítor,,). V ďalšom uskutočnení je antagonista IL-18 protilátka, fragment protilátky alebo vystavený väzbový proteín, ktorý sa viaže na IL-18 alebo na receptor IL-18.

V rámci ďalšieho uskutočnenia, spôsob zahrnuje aplikáciu prostriedku, ktorý je antagonista Interleukin-12 (IL-12). Antagonista IL-12 môže pôsobiť napríklad na úroveň syntézy IL-12, aktivity cytokinu IL-12 alebo na interakciu IL-12 s receptorom IL-12. V rámci výhodného uskutočnenia je antagonista IL12 protilátka, fragment protilátky alebo vystavaný väzbový proteín, ktorý sa viaže na IL-12 alebo na receptor IL-12. V ďalšom uskutočnení je antagonista IL-12 prostriedok, ktorý stimuluje produkciu cyklickej AMP (cAMP) v bunkách, čo produkuje IL-12. Príklady prostriedku, ktorý môže byť používaný na stimulovanie cAMP, zahrnujú inhibítory fosfodiesterázy IV a antagonisty beta-2. V ešte ďalšom uskutočnení je antagonista IL-12 inhibítor STAT4.

V ešte ďalšom uskutočnení, spôsob zahrnuje aplikáciu prostriedku, ktorý zbavuje alebo eliminuje zo subjektu bunky NK a bunky podobné NK („NK-like cells,,) (označené tu ako „antagonisty buniek NK„). Antagonista buniek NK je aplikovaný v dávkach a spôsobom podania dostatočným na inhibíciu produkcie IFN-γ u subjektu. Výhodnými antagonistami buniek NK sú protilátky špecifické pre bunky NK/podobné NK, ktoré vyprázdňujú tieto bunky in vivo. Príklady výhodných protilátok na použitie ako antagonistov buniek NK sú protilátky proti asialo-GMl a protilátky NK1.1.

Ďalší aspekt vynálezu sa týka spôsobu na moduláciu reakcie na kortikosteroidy u subjektu, v ktorom inhibítor proteázy z rodiny kaspasy, výhodne ICE, je aplikovaný subjektu dohromady s kortikosteroidom tak, že reakcia subjektu na kortikosteroid je modulovaná v porovnaní s tým, keď je subjektu aplikovaný samotný kortikosteroid.

Ešte ďalší aspekt vynálezu sa týka spôsobu na moduláciu reakcie na kortikosteroidy u subjektu, v ktorom antagonista IL-12 je aplikovaný subjektu dohromady s kortikosteroidom tak, že reakcia subjektu na kortikosteroid je modulovaná v porovnaní s tým, keď je subjektu aplikovaný samotný kortikosteroid.

Ešte ďalší aspekt vynálezu sa týka spôsobu na moduláciu reakcie na kortikosteroidy u subjektu, v ktorom antagonista buniek NK (napríklad protilátka proti bunkám NK/ podobným NK) je aplikovaná subjektu dohromady s kortikosteroidom tak, že reakcia subjektu na kortikosteroid je modulovaná v porovnaní s tým, keď je subjektu aplikovaný samotný kortikosteroid.

Ešte ďalší aspekt vynálezu sa týka spôsobu na moduláciu reakcie na kortikosteroidy u subjektu, v ktorom je vybraný subjekt pri potrebe modulácie reakcie na kortikosteroid a prostriedok, ktorý antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu IFN-γ u subjektu, je aplikovaný subjektu tak, že reakcia subjektu na kortikosteroid je v porovnaní s tým, keď je subjektu aplikovaný samotný kortikosteroid. Prostriedok je aplikovaný v dávkach a spôsobom podania dostatočným na inhibíciu produkcie IFN-γ u subjektu. Vybraný subjekt môže byť napríklad subjekt, ktorý bol pred liečením rezistentný voči steroidu, subjekt vnímavý na steroidy, u ktorého senzitivita voči steroidom bude rásť alebo subjekt, ktorému budú odobrané steroidy, u ktorého spontánna reakcia na steroidy je zlepšená.

Vynález tiež poskytuje farmaceutické prípravky na moduláciu reakcie na kortikosteroidy u subjektu. V rámci uskutočnenia prípravok vynálezu obsahuje prostriedok, ktorý antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu IFN-γ u subjektu, kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič. V ďalšom uskutočnení prípravok vynálezu obsahuje antagonista IL-18 (takého ako inhibítor proteázy z rodiny kaspasy, výhodne inhibítor ICE alebo proti IL-18 alebo monoklonálnu protilátku proti receptoru IL-18(„anti-IL-12 receptor monoclonal antibody,,), kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič. V ešte ďalšom uskutočnení prípravok vynálezu obsahuje antagonista IL-12 (napríklad proti IL-12 alebo monoklonálnu protilátku proti receptoru IL-12, inhibítor fosfodiesterázy IV, agonista beta-2, inhibítor STAT4), kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič. V ďalšom uskutočnení prípravok vynálezu obsahuje antagonistu buniek NK (napríklad protilátku proti bunkám NK/podobným NK), kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič. Farmaceutické prípravky vynálezu môžu byť formulované pre aplikáciu výhodným spôsobom podania lieku na dosiahnutie požadovaného terapeutického účinku. V rámci výhodného uskutočnenia je farmaceutický prípravok formulovaný pre lokálnu aplikáciu. V ďalšom výhodnom uskutočnení je farmaceutický prípravok formulovaný pre aplikáciu inhaláciou. Iné výhodné spôsoby podania lieku zahrnujú perorálnu a intravenóznu aplikáciu.

Spôsoby a prípravky vynálezu môžu byť používané pri liečení akéhokoľvek ochorenia alebo poruchy, v ktorom je požadované modulovať reakciu na steroidy. V rámci výhodných uskutočnení sú spôsoby a prípravky vynálezu používané na liečenie subjektu, ktorý utrpel septický šok. V ďalšom uskutočnení spôsoby a prípravky vynálezu sú používané na liečenie subjektu trpiaceho Crohnovou chorobou. V ďalšom uskutočnení spôsoby a prípravky vynálezu sú používané na liečenie subjektu trpiaceho astmou. V ďalšom uskutočnení spôsoby a prípravky vynálezu sú používané na liečenie subjektu trpiaceho autoimunitným ochorením alebo poruchou. V ďalšom uskutočnení spôsoby a prípravky vynálezu sú používané na liečenie subjektu trpiaceho ochoreniami štepu proti hostiteľovi alebo rejekciou transplantátu. V ďalšom uskutočnení spôsoby a prípravky vynálezu sú používané na liečenie subjektu trpiaceho akútnou zápalovou poruchou. V ďalšom uskutočnení spôsoby a prípravky vynálezu sú používané na liečenie subjektu trpiaceho chronickou zápalovou poruchou.

Prehľad obrázkov na výkresoch s

Obrázok 1 je stĺpcový graf ukazujúci sérové hladiny TNFa (v ng/ml) u štandardného typu a myší chudých na ICE (ICE KO) ošetrovaných samotným vehikulom alebo dexametazonom (4 mg/kg) 30 minút po LPS pri LPS/P. acnes model septického šoku demonštrujúci to, že myši chudé na ICE, ale nie štandardný typ myší, prejavujú supresiu produkcie TNFa a preto sú citlivé na steroidy.

Obrázok 2 je stĺpcový graf ukazujúci sérové hladiny TNFa (v ng/ml) u štandardného typu (plné stĺpce) a myší chudých na ICE (šrafované stĺpce) predbežne ošetrených samotným vehikulom alebo zmenšujúcim sa množstvom dexametazónu (0.05, 0.005 alebo 0.0005 mg/kg) u LPS/P. acnes modelu septického šoku demonštrujúci to, že myši chudé na ICE udržujú reakciu steroidu tak, aby znižovala dávky steroidu v porovnaní k štandardnému typu myší.

Obrázok 3 je stĺpcový graf ukazujúci LPS-navodené sérum IL-12 (v pg/ml) u myší B6 ošetrovaných samotným vehikulom alebo inhibítorom fosfodiesterázy IV, rolipramom, demonštrujúci to, že ošetrovanie inhibítorom fosfodiesterázy IV inhibuje produkciu IL-12.

Obrázok 4 je stĺpcový graf ukazujúci sérové hladiny TNFa (v ng/ml) u myší B6 ošetrovaných samotným vehikulom (fyziologický roztok) alebo inhibítorom ICE (Ac-YVAD-CHO) v kombinácii s ošetrovaním dexametazónom u LPS/P.acnes modelu septického šoku.

Obrázok 5 je stĺpcový graf ukazujúci sérové hladiny IL-6 (v ng/ml) u myší B6 ošetrovaných samotným vehikulom (fyziologický roztok) alebo inhibítorom ICE (Ac-YVAD-CHO) v kombinácii s ošetrovaním dexametazónom u LPS/P.acnes modelu septického šoku.

Obrázok 6 je stĺpcový graf ukazujúci sérové hladiny IL-Iβ (v ng/ml) u myší B6 ošetrovaných samotným vehikulom (fyziologický roztok) alebo inhibítorom ICE (Ac-YVAD-CHO) v kombinácii s liečením dexametazónom u LPS/P acnes modelu septického šoku.

Tento vynález je založený, aspoň v častiach, na objavení toho, že myši chudé na ICE v porovnaní s myšami štandardne upravenými, sú citlivé na kortikosteroidy po vyvolaní odozvy LPS u modelu septického šoku (k nahliadnutiu príklad 1). Navyše myši chudé na ICE prejavujú zvýšenú senzitivitu na nízke dávky kortikosteroidov porovnávané s myšami štandardne upravenými, pokiaľ liečenie kortikosteroidmi je realizované pred vyvolaním odozvy LPS u modelu septického šoku (k nahliadnutiu príklad 2). Vynález je ďalej založený, aspoň v častiach, na objavení toho, že deplecia buniek NK/podobných NK pri vyvolaní odozvy LPS u myší štandardného typu vedie k podstatne zvýšenej miere prežitia.

Skôr bolo opísané, že aplikácia interferónu-γ (IFN-γ) môže prekonať supresiu kortikosteroidov biosyntézy TNFa myších makrofágov (Leudke, C. E. a Cerami, A. (1990) J. Clin. Invest. 86,,1234-1240). Navyše ICE a ďalšie proteázy z rodiny kaspasy môžu štiepiť prekurzórne formy IL-18 na ich zrelé, aktívne formy (k nahliadnutiu príklad 4). Aj keď nie je v úmysle, aby limitoval mechanizmus, schopnosť dodania reakcie kortikosteroidu inhibíciou aktivity ICE u subjektu, v súhlase s predloženým vynálezom, je myslená tak, aby bola výsledkom inhibície IL-18 spracovania ICE tak, že produkcia zrelých IL-18 je inhibovaná, čo vedie k zníženiu produkcie IFN-γ u subjektu. Takto je myslené, aby bunky NK/podobné NK formovali pozitívne spätné väzby pri produkcii IFN-γ, ktorá môže byť zostupne modulovaná depleciou alebo elimináciou buniek NK/podobných NK.

Z pohľadu predchádzajúceho, vynález široko poskytuje spôsoby a prípravky na moduláciu reakcie na kortikosteroidy, u ktorých objekt, ktorý reguluje produkciu IFN-γ je antagonizovaná u subjektu. Tento objekt, ktorý reguluje produkciu IFN-γ, a ktorý je antagonizovaný, môže byť IL-18 (ktorý môže byť antagonizovaný napríklad nepriamo inhibíciou aktivity ICE alebo priamo použitím protilátky proti IL-18). Alternatívne ďalší faktor, ktorý reguluje produkciu IFN-γ tak ako IL-12 môže byť antagonizovaný k tomu, že moduluje reakciu kortikosteroidov u subjektu. Ďalej prostriedok, ktorý zbavuje alebo eliminuje bunky NK/podobné NK tým, že inhibuje produkciu IFN-γ, môže byť používaný na modulovanie reakcie kortikosteroidov u subjektu.

Vynález bude lepšie pochopený s pomocou nasledujúceho opisu. Ako prvé sú definované termíny.

Termín „kortikosteroid,,, tak ako je používaný tu, označuje triedu terapeutických prostriedkov užitočných pri liečení zápalových stavov vrátane tých, ktoré sú výsledkom infekcie, rejekcie transplantátu a porúch autoimunity. Kortikosteroidy zahrnujú tie, ktoré sa vyskytujú v prírode, sú syntetické alebo semi-syntetické v pôvode a sú charakterizované prítomnosťou steroidných jadier, ktoré majú štvorčlenné kondenzované kruhy napríklad ako bolo nájdené u štruktúr cholesterolu, dihydroxycholesterolu, stigmasterolu a lanosterolu. Kortikosteroidné lieky zahrnujú kortizón, kortizol, hydrokortizón (11β17dihydroxy-21-(fosfonooxy)-pregn-4-én3,20-dión disodný), dihydroxykortizón, dexymetazón (21 -(acetyloxy)-9-fluór-11 β, 17-dihydroxy-16a-metylpregna-1,4dién-3,20-dión) a vysoko derivatizované steroidné lieky také ako bekonáza (beklometazón dipropionát, ktorý je 9-chlór-l 1β,17,21,ίπΙ^Γθχγ-16βmetylpregna-l,4-dién-3,20-dión-17,21-dipropionát). Iné príklady kortikosteroidov zahrnujú flunizolid, prednizón, prednizolón, metylprednizolón, triamcinolón, deflazakort a betametazón.

Termín „objekt, ktorý reguluje produkciu IFN-γ,, je zamýšľaný, aby zahrnoval chemické faktory (napríklad cytokíny, enzýmy apod.) a bunky, ktoré priamo alebo nepriamo riadia syntézy IFN-γ u subjektu. Príklady faktorov, ktoré regulujú produkciu IFN-γ zahrnujú IL-18 (k nahliadnutiu Okamura, H. et al. (1995) Náture 378.88-91; Ushio, S. et al. (1996) J. Immunol. 156:42744279) a interleukin-12 (IL-12)(k nahliadnutiu Schoenhaut, D. et al. (1992ý J. Immunol. 148:3433; patentová prihláška PCT číslo WO 951059; európska patentová prihláška číslo EP 433 827 A2). Príklady buniek, ktoré regulujú produkciu IFN-γ zahrnujú bunky NK a bunky podobné NK.

Prostriedky tak, ako sú používané tu, ktoré „antagonizujú“ faktor sú zamýšľané, aby zahrnovali prostriedky, ktoré inhibujú aktivitu faktoru a prostriedok, ktorý znižuje reguláciu (menovite inhibuje) syntézu alebo produkciu faktoru.

Termín „IL-18“ označuje cytokín majúci sekvenciu aminokyseliny ako je uvedené v Okamura, H. et al. (1995) Náture 378:88-91 (myš) alebo Ushio, S. et al (1996) J. immunol. 156:4274-4279 (človek) a ich iné cicavčie homológy.

Cytokín IL-18 bol tiež označovaný v odbore ako Vyvolanie Faktoru Interferónu γ (IGIF)(„Interferón γ Inducing Factor,,) IL-Ιγ.

Termín „antagonista IL-18“ je zamýšľaný, aby zahrnoval prostriedky, ktoré inhibujú syntézu alebo produkciu IL-18, prostriedky, ktoré inhibujú aktivitu IL-18 jeden krát syntetizovanú, prostriedky ktoré inhibujú interakciu IL-18 s receptorom IL-18 a prostriedky, ktoré inhibujú aktivitu receptoru IL18. Príklady antagonistu IL-18 zahrnujú inhibítory proteázy z rodiny kaspasy (napríklad inhibítory ICE) a protilátky, fragmenty protilátok alebo vystavaný väzbový protein, ktorý sa viaže na IL-18 alebo na receptor IL-18.

Termín „interleukín-12 (IL-12),, označuje cytokín majúci sekvenciu aminokyseliny ako je uvedené v Schoenhaut, D. et al. (1992J J. Immunol. 148:3433; patentová prihláška PCT číslo WO 951059; európska patentová prihláška číslo EP 433 827 A2 a ich iné cicavčie homológy.

Termín „antagonista IL-12“ je zamýšľaný, aby zahrnoval prostriedky, ktoré inhibujú syntézu alebo produkciu IL-12, prostriedky, ktoré inhibujú aktivitu IL-12 jeden krát syntetizovanú, prostriedky, ktoré inhibujú interakciu IL-12 s receptorom IL-12 a prostriedky, ktoré inhibujú aktivitu receptoru IL12. Príklady antagonistu IL-12 zahrnujú protilátky, fragmenty protilátok alebo vystavané väzbové proteíny, ktoré sa viažu buď na IL-12 alebo na receptor IL12, prostriedky, ktoré stimulujú intracelulárnu produkciu cAMP v bunkách, ktoré produkujú IL-12 (tak ako inhibítory fosfodiesterázy IV alebo agonisti beta-2) a prostriedky, ktoré inhibujú STAT4.

Termín „proteázy z rodiny kaspasy,, je zamýšľaný, aby zahrnoval členy proteáz z rodiny kaspasy ako je opísané v Alnemri, E. et al. (1996) Celí 87:171 vrátane kaspasy-1 (ICE), kaspasy-2 (ICH-1), kaspasy-3 (CPP32, Yama, apopain), kaspasy-4 (TX, ICH-2, ICE_rei-II), kaspasy-5 (ICE_rei-III, TY), kaspasy-6 (Mch2), kaspasy-7 (Mch3, ICE-LAP3, CMH-1), kaspasy-8 (MACH, FLICE,Mch5), kaspasy-9 (ICE-LAP6, Mch6) a kaspasy-10 (Mch4). Okrem toho termín „proteázy z rodiny kaspasy“ je zamýšľaný, aby zahrnoval akýkoľvek protein, ktorý sa podieľa na identite sekvencie aminokyseliny viacej ako 20 % s ICE v aktívnych doménach proteázy (menovite aktívne domény p 10 ap20 subjednotiek ICE), ktorý obsahuje sekvenciu peptidu glutamín-alaníncysteín-X-glycín (QACXG), v ktorej cystein (C) je katalytický aktívny zvyšok cysteínu a X znamená akúkoľvek aminokyselinu, a ktorý obsahuje sekvenciu serín-histidín-glycín (SHG), lokalizovaný N-koniec k motívu QACXG, v ktorom histidín (H) je katalytický esenciálny zvyšok histidínu. Proteázy z rodiny kaspasy typicky demonštrujú výraznú preferenciu pre hydrolýzu peptidovej väzby okamžite nasledovanou kyslou aminokyselinou (menovite aspartová kyselina alebo glutámová kyselina).

Proteázy z rodiny kaspasy sú známe u ľudí a iných organizmov vrátane myší a Caenorhabditis elegans. Príklady proteáz z rodiny kaspasy zahrnujú napríklad ICH-1 (Wang, L. et al. (1994) Celí 78:739-750); ICH-2 (Kamens, J. et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:15250-15256); Mch2 (Fernandes-Alnemri, T. et al. (1995) Cancer Res. 55:2737-2742); CPP32 (Fernandes-Alnemri, T. et al. (1994) J. Biol. Chem. 269:3076130764); Yama/CPP32p (Tewari, M. et al. (1995) Celí 81 :801-809); produkt myšieho génu Nedd2 (Kumar, S. et al. (1992) Biochem. Biophys. Res. Commun. 185:1155-1161; Kumar, S. el al. (1994) Genes Dev. 8:1613-1626); produkt génu C. elegans , ced-3 (Yuan, J. et al. (1993) Celí 75:641-652); ľudský proteín TX (Faucheu, C., et al., (1995) EMBO J. 14:1914-1922); ICE_re,II and ICE_re,III (Munday, N.A. et al. (1995) J. Biol. Chem. 270:15870-15876).

Termín „interleukín-ΐβ konvertujúci enzým (ICE)“ je zamýšľaný, aby označoval proteázu majúcu sekvenciu aminokyseliny takú aká je opísaná v Cerretti, D.P. et al. (1992) Science 256 97-100 (človek) alebo Nett, M.A. et al. (1992) J. Immunol. 149:3254-3259 (myš), a ich iné cicavčie homológy.

Termín „inhibítor ICE“ je zamýšľaný, aby zahrnoval chemické prostriedky, ktoré inhibujú proteolityckú aktivitu ICE. Príklady inhibitorov ICE sú známe v odbore vrátane napríklad prostriedkov uvedených v patentovej prihláške U.S. číslo 5,585,357 (deriváty pyrazolylu); patentovej prihláške U.S. číslo 5,677,283 (deriváty pyrazolylu); patentovej prihláške U.S. Číslo 5,656,627 (inhibítory obsahujúce vodíkovú väzbovú skupinu, hydrofóbnu skupinu a elektronegatívnu skupinu); patentovej prihláške U.S. číslo 5,411,985 (zlúčeniny gama-pyrón-3-octovej kyseliny); patentovej prihláške U.S. číslo 5,430,128 (deriváty tripeptidylu); patentovej prihláške U.S. číslo 5,434,248 (zlúčeniny tripeptidylu); patentovej prihláške U.S. číslo 5,565,430 (zlúčeniny Ν,Ν'-diacylhydrazínooctovej kyseliny); patentovej prihláške U. S. číslo 5,416,013 (deriváty peptidylu); patentovej prihláške PCT číslo WO 94/21673 (deriváty alfa-ketoamidu); patentovej prihláške PCT číslo WO 97/22619 (zlúčeniny N-acylamino ); patentovej prihláške PCT číslo WO 97/22618 (aminokyseliny alebo deriváty di- alebo tripeptidamid); patentovej prihláške PCT číslo WO 95/3 5308 (inhibítory obsahujúce vodíkovú väzbovú skupinu, hydrofóbnu skupinu a elektronegatívnu skupinu); patentovej prihláške PCT číslo WO 93/14777 (deriváty peptidylu); patentovej prihláške PCT číslo WO 93/16710 (deriváty peptidylu); patentovej prihláške PCT číslo WO 95/05152 (deriváty substituovaného ketónu); patentovej prihláške PCT číslo WO 94/03480 (deriváty peptidylu 4-amino-2, 2-difluór-3-oxo-l, 6-hexánediovej kyseliny); patentovej prihláške PCT číslo WO 94/00154 (deriváty peptidylu); Patentovej prihláške PCT číslo WO 93/05071 (deriváty peptidylu); európskej patentovej prihláške EP číslo 519 748 (deriváty peptidylu); európskej patentovej prihláške EP číslo EP 590 650 (deriváty cyklopropénu); európskej patentovej prihláške EP číslo 628 550 (pyridazíny); európskej patentovej prihláške EP číslo 644 198 (alfa-heteroaryloxymetylketóny); európskej patentovej prihláške EP číslo 644 197 (peptidové fosfinyloxymetylketóny); európskej patentovej prihláške EP číslo 547 699 (deriváty peptidylu); patentovej prihláške Veľkej Británie GB číslo 2,278,276 (gama-pyrón-3octovej zlúčeniny); a patentovej prihláške Kanady číslo 2,109,646 (paranitroanilidpeptidy). Predložený vynález obsahuje použitie inhibítorov ICE uvedených v akomkoľvek predchádzajúcom zverejnení pri spôsoboch tu opísaných

Dodatočné výhodné inhibítory na použitie pri spôsoboch podľa vynálezu zahrnujú inhibítory ICE substituovaných aspartových kyselín sulfonamidu majúcej všeobecný vzorec I:

OR 'm

Ο Ο (%)) * //

I x

v ktorom substituent R¹ je vodík, Ci-Cealkyl alebo benzyl;

substituent R² je -CHO, COR^a alebo -CN;

každý R* je nezávisle vodík alebo Ci-Cgalkyl;

všeobecné označenie X je väzba, CH₂, CHR⁵, NH, NR⁵ alebo O;

substituent R³ je aryl, substituovaný-aryl, heteroaryl, substituovaný-heteroaryl, cykloalkyl, substituovaný-cykloalkyl, heterocykl alebo substituovanýheterocykl;

všeobecné označenie Y je neprítomné, NR⁵, CO, S, O, SO2, -O(CHR⁵)„-, CHR⁵, NR^SCO, NCR⁵, CONR⁵, OCHR⁵, CHR⁵O, SCHR⁵, CHR^sS, SO2 NR⁵, CiC6alkyl, NR⁵SO2. CH₂CHR⁵, CHR⁵CH₂, COCH₂ alebo CH₂CO;

substituent R⁴ je neprítomný, aryl, substituovaný-aryl, Ci-Cgalkyl, heteroaryl, substituovaný-heteroaryl, cykloalkyl, Ci-C₆alkyl, substituovaný-cykloalkyl, heterocykloalkyl alebo substituovaný-heterocykloalkyl;

každý substituent R⁵ je nezávisle vodík Ci-Cealkyl, aryl, -(CH₂)„aryl alebo (CH₂)„cykloalkyl;

každé n je nezávisle 0 až 5, m je 1 alebo 2 a farmaceutický prijateľné soli, estery, amidy a ich prekurzory liečiv.

V rámci uskutočnenia vynálezu, R² je CHO.

V rámci iného uskutočnenia vynálezu, R¹ je vodík.

V rámci iného uskutočnenia vynálezu, R^a je vodík.

V rámci iného uskutočnenia vynálezu, všeobecné označení X je väzba.

V rámci iného uskutočnenia vynálezu, R³ je fenyl alebo substituovaný fenyl.

V rámci iného uskutočnenia vynálezu, všeobecné označenie Y je väzba

V rámci iného uskutočnenia vynálezu, všeobecné označenie Y je O.

V rámci iného uskutočnenia vynálezu, všeobecné označenie Y je CH2.

V rámci iného uskutočnenia vynálezu, R⁴ je fenyl alebo substituovaný fenyl.

V rámci iného uskutočnenia vynálezu, R² je CHO, R“ je H, R¹ je vodík, všeobecné označenie X je väzba, substituenty R³ a R⁴ sú fenyl alebo substituovaný fenyl a všeobecné označenie Y je väzba, CH2 alebo O.

V rámci iného uskutočnenia vynálezu, m je 1 a substituent R⁵ je vodík.

Iné výhodné sulfoamidové substituované inhibítory ICE majú všeobecný vzorec II

O O TOm W //

X' ^{S N}J>R²

R

II v ktorom substituent R¹ je vodík, Ci-Cealkyl alebo benzyl;

substituent R² je -CHO, COR’ alebo -CN;

každý R’ je nezávisle vodík alebo Ci-Ceälkyl;

všeobecné označenie X je väzba, CH2, CHR⁵, NH, NR⁵ alebo O;

všeobecné označenie Y je neprítomné NR⁵, CO, S, O, SO2,CHR⁵, NR^SCO, CONR⁵, OCHR⁵, CHR^SO, -O(CHR⁵)n-, SCHR⁵, CHR^sS, SO2NR⁵, NR⁵SO2, CH2CHR⁵, CHR⁵CH2, COCH2 alebo CH₂CO;

každý substituent R⁵ je nezávisle vodík Ci-Cealkyl, aryl alebo -(CH₂)_naryl; každé n je nezávisle 0 až 5; m je 1 alebo 2, každé Z je nezávisle vodík alebo aryl, substituovaný aryl, heteroaryl, substituovaný heteroaryl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, heterocyklická alebo substituovaná heterocyklická skupina, ktorá je kondenzovaná na fenylovú skupinu, ktorá obsahuje Z ako substituent;

substituenty R^b, R^c, R^d a R^e sú každý vodík, Ci-C6alkyl, Ci-Cealkoxy, -OH, Ci-Cetioalkoxy, halogén, trifluórmetyl, dialkylamino, -NO2, -CN, -CF3, CO2alkyl, -SO3H, -CHO, -COalkyl, -CONH-alkyl, -CONHR’, -CON(alkyl)2, (CH2)n-NH2, -(CH2)„-NH-alkyl, -NHR^q, -NHCOR^q, -(CH2)„OH, -(CH₂)_nCONH₂ alebo -(CH₂)_nCO₂H; a substituent R^q je vodík alebo Ci-Cealkyl a farmaceutický prijateľné soli, estery, amidy a ich prekurzory liečiv.

V rámci	iného	uskutočnenia	s ohľadom	na	zlúčeniny	vzorca	n,
substituent R1	je vodík.
V rámci	iného	uskutočnenia	s ohľadom	na	zlúčeniny	vzorca	n,
substituent R2	je CHO.
V rámci	iného	uskutočnenia	s ohľadom	na	zlúčeniny	vzorca	II,

substituent R* je vodík.

V rámci iného uskutočnenia s ohľadom na zlúčeniny vzorca II, všeobecné označenie X je väzba.

V rámci iného uskutočnenia s ohľadom na zlúčeniny vzorca II, všeobecné označenie Y je väzba, O alebo CH₂.

V rámci iného uskutočnenia s ohľadom na zlúčeniny vzorca II, substituenty R^b a R^c sú vodík.

V rámci iného uskutočnenia s ohľadom na zlúčeniny vzorca II, v ktorom substituenty R^b, R^c a R^d sú vodík a R^e je Ci-Cealkyl.

V rámci iného výhodného uskutočnenia s ohľadom na zlúčeniny vzorca II, substituenty R^b a R^c sú lokalizované v para polohe fenylového kruhu s ohľadom na všeobecne označenie X a R^b alebo R^c je -OCH₃.

V rámci iného uskutočnenia s ohľadom na zlúčeniny vzorca II, m je 1 a R⁵ je vodík.

Výhodné zlúčeniny zahrnujú:

3-(Bifenyl-2-sulfoamino)-4-oxo-butánovú kyselinu;

3- (2-Benzyl-benzénsulfonylamino)-4-oxo-butánovú kyselinu;

4- Oxo-3-(2-fenoxy-benzénsulfonylamino)-butánovú kyselinu;

4-Oxo-3-(2-p-tolyloxy-benzénsulfonylamino)-butánovú kyselinu;

3- [2-(4-Izopropyl-fenoxy)-benzénsulfonylamino]-4-oxo-butanovú kyselinu;

4- Oxo-3-(2-m-tolyloxy-benzénsulfonylamino)-butanovú kyselinu;

3-[2-(3-Izopropyl-fenoxy)-benzénsulfonylamino]-4-oxo-butánovú kyselinu; a 3-(4'-Metyl-bifenyl-2-sulfonylamino)-4-oxo-butánovú kyselinu.

Iné inhibítory ICE obsahujú zlúčeniny všeobecného vzorca III.

III v ktorom substituent R¹ je vodík, Ci-Cíalkyl alebo benzyl;

substituent R² je -CHO, COR^a alebo -CN;

každý R* je nezávisle vodík alebo Ci-Cealkyl;

všeobecné označenie X je väzba, CH₂, CHR⁵, NH, NR^S alebo O;

substituent R⁵ je vodík, Ci-Cealkyl, aryl alebo -(CH₂)„aryl;

každé n je nezávisle 0 až 5;

m je 1 alebo 2;

substituent Z je neprítomný alebo je aryl, substituovaný aryl, heteroaryl, substituovaný heteroaryl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, heterocyklická alebo substituovaná heterocyklická skupina, ktorá je kondenzovaná na fenylovú skupinu, ktorá obsahuje Z ako substituent;

substituent R^f, R⁸ sú nezávisle vodík, Ci-Cealkyl, hydroxy, halogén, trifluórmetyl, dialkylamino, -NO₂, -CN, -CO₂H, -CO₂alkyl, -SO₃H, -CHO, COalkyl, -CONH₂₎ -CONH(CH₂)„aryl, -CONH(CH₂)_a-substituovaný-aryl, 17

CONH-alkyl, -CONHR^q, -CON(alkyl)2, -(CH2)n-NH2, -(CH2)„-NH-alkyl, NHR^q, -NHCOR^q, -OR^q, -SR^q alebo -(CH2)_naryl; a substituent R^q je vodík alebo Ci-Cg-alkyl a prijateľné soli, estery, amidy a ich prekurzory liečiv.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca III, substituent R^f je v orto polohe voči X na fenylovom kruhu a substituent R⁸ je vodík.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca III, všeobecné označenie Z je vodík, m je 1, substituent R⁵ je vodík a R* je vodík.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca III, zlúčenina je 3benzénsulfonylamino-4-oxo-butanová kyselina;

Vyššie opísané sulfonamidové substituované aspartové kyseliny inhibítorov ICE môžu byť všeobecne pripravené nasledovné:

Iné sulfonamidové inhibítory ICE, ktoré môžu byť použité vo vynálezy sú zlúčeniny všeobecného vzorca IV:

v ktorom substituent R¹ je

O

II .s

R^4Z^H

O

R⁵

R6X

R< S ^_Νφ(Αλ<

R⁶^

substituent R³ je vodík,

C,-C«alkyl,

-(CH₂)_naryl alebo -(CH2)_nheteroaryl;

substituent R⁴ je Ci-Cealkyl,

-(CH2)„aryl alebo -(CH₂)_nheteroaryl;

substituenty R⁵ a R⁶ sú každý nezávisle vodík,

Ci-C₆alkyl, -(CH₂)_naryl alebo -(CH₂)_nheteroaryl;

substituent R⁷ je Ci-Cealkyl, -(CH₂)_naryl alebo -(CH₂)_nheteroaryl;

každé n je O až 6;

každé m je 0,1,2 alebo 3;

všeobecné označenie A je alanín, leucín, izoleucín, prolín, fenylalanín, glycín, tyrozín, serín, treonín, tryptofán, cysteín, metionín, valín, asparagín, glutamín, aspartová kyselina, lyzín, glutámová kyselina, arginín alebo histidín; substituent R² je -(CH₂)_n-Z; a všeobecné označenie Z je aryl, heteroaryl, cykloalkyl, Ci-C₆alkyl,

fluórenyl, substituovaný fluórenyl, substituovaný aryl, substituovaný heteroaryl alebo substituovaný cykloalkyl a farmaceutické prijateľné soli, estery, amidy ich prekurzory.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorce IV, substituent R¹ je

R⁷O

(A)

m

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca IV, substituent R je

R⁷O

m je 0 a R⁷ je -(CH₂)_naryl.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca IV, substituent R¹ je

R⁷O

m je 0 a substituent R⁷ je -CHiaryl.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca IV, substituent R² je (CH₂)„aryl.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca IV, aryl je fenyl alebo naftyl.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca IV, substituent R² je (CH₂)_ncykloalkyl.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca IV, substituent R¹ je

O ^_ζΑ_κθ_ζχ(ΟΗ₂)_η—fenyl alebo SO₂-fenyl.

V rámci iného výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca IV, substituent

R² je

O

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca IV, substituent R² je

Iné sulfónamidové inhibítory ICE obsahujúce zlúčeniny všeobecného vzorca V

v ktorom R² je -CH2CH2-aryl, -CH2-cykloalkyl, -CKhCKh-cykloalkyl alebo CH₂CH2-heteroaryl;

substituent R¹ je

substituent R’je -(CH2)„aryl alebo -(CH₂)_nheteroaryl; substituent R^b je aryl alebo heteroaryl; substituent R^c je -CH₂aryl alebo aryl;

substituent R^d je vodík alebo Ci-Cealkyl;

substituent R^e je -CH₂aryl alebo je -CH₂heteroaryl; a ich farmaceutický prijateľné soli, estery, amidy a prekurzory liečiv.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca V, substituent R¹ je

R^eO

V rámci iného výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca V, substituent R¹ je .S.

Rb^ll^

K Q

V rámci iného výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca V, substituent R^e je -(CH₂)„aryl.

V rámci iného výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca V, aryl je fenyl alebo naftyl.

V rámci iného výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca V, substituent R^b je aryl.

Výhodné zlúčeniny zahrnujú:

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(2-fenoxy-etánsulfonylamino)-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(3-fenyl-propán-l -sulfonylamino)pentánovú kyselinu;

3-Benzénsulfonylamino-4-oxo-5-(2-fenyletán-l-sulfonylamino)-pentánovú kyselinu;

5-Benzénsulfonylamino-3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo-pentánovú kyselinu, 3-Benzyloxykarbonylamino-5-metánsulfonylamino-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(naftalén-l-sulfonylamino)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(2-cyklohexyl-etánsulfonylamino)-4-oxopentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(2-naftalen-l-yl-etánsulfonylamino)-4-oxopentánovú kyselinu;

3-BenzyIoxykarbonylamino-5-(7,7-dimetyl-2-oxo-bicyklo[2.2. l]hept-l-(R)ylmetánsulfonylamino)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(indan-l-ylmetánsulfonylamino)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(9-fluór-9H-fluorén-9-yImetánsulfonylamino)-4oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(7,7-dimetyl-2-oxo-bicyklo[2.2. l]hept-l-(S)ylmetánsulfonylamino)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyrylamino)-propionylamino)-4oxo-5-(2-fenyl-etánsulfonylamino)-pentánovú kyselinu;

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-4-karboxy-butyrylamino)-3-metyl-butyrylamino]-4-oxo-5-(2-fenyl-etánsulfonylamino)-pentánovú kyselinu;

3-{2-[4-Karboxy-2-(3-fenyl-propionylamino)-butyrylamino]-3-metyl-butyrylamino}-4-oxo-5-(2-fenyl-etánsulfonylamino)-pentánovú kyselinu;

3-(2-{2-[2-Acetylamino-3-(4-hydroxy-fenyl)-propionylamino]-4-karboxybutyrylamino}-3-metyl-butyrylamino)-4-oxo-5-(2-fenyl-etánsulfonylamino)pentánovú kyselinu;

3-(2-Acetylamino-3-metyl-butyrylamino)-5-(7,7-dimetyl-2-oxobicyklo[2.2.l]hept-l-(S)-ylmetánsulfonylamino)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-(2-Acetylamino-propylamino)-5-(7,7-dimetyl-2-oxo-bicyklo[2.2. l]hept-l (S)-ylmetánsulfonylamino)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-3-metyl-biityrylamino)-propionylamino]-5(7,7-dimetyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1 ]hept-1 -ylmetánsulfonylamino)-4-oxopentánovú kyselinu;

3-{2-[4-Karboxy-2-(3-fenyl-propionylamino)-butyrylamino]-3-metyl-butyrylmino}-5-(7,7-dimetyl-2-oxo-bicyklo[2.2. l]hept-l-ylmetánsulfonylamino)-4oxo-pentánovú kyselinu;

3-(2-{2-[2-Acetylamino-3-(4-hydroxy-fenyl)-propionylamino]-4-karboxybutyrylamino}-3-metyl-butyrylamino)-5-(7,7-dimetyl-2-oxo-bicyklo[2.2. ljhept1 -ylmetánsulfonylamino)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-4-karboxy-butyryIamino)-3-metyl-butyryImino]-5-(7,7-dimetyl-2-oxo-bicyklo[2.2.1 ]hept-l-ylmetánsulfonylamino)-4oxo-pentánovú kyselinu;

3- (l,2,3,4-tetrahydro-l-oxo-izochinolin-2-yl-acetamino-5-benzénsulfonylmino-4-hydroxy-pentánovú kyselinu;

(S)-5-(Bicyklo[2.2. l]hept-l-ylmetánsulfonylamino)-4-oxo-3-[2-(l-oxo-3,4dihydro-lH-izochinolin-2-yl)-acetylamino]-pentánovú kyselinu;

(S)-4-Oxo-3-[2-(l-oxo-3,4-dihydro-lH-izochinolin-2-yl)-acetylamino]-5-(2fenyl-etánsulfonylamino)-pentánovú kyselinu; a

4- Oxo-3-[2-( 1-oxo-3,4-dihydro-lH-izochinolin-2-yl)-acetylamino]-5-fenyletánulfonylamino-pentánovú kyselinu.

Iné sulfónamidy inhibítorov ICE obsahujú zlúčeniny všeobecného vzorca VI.

v ktorom substituent R* je

Ο

Ο

R^eO

Ο

Ο substituent R^a je -(CH2)„-aryl alebo -(CH₂)„heteroaryl;

substituent R^b je aryl alebo heteroaryl;

substituent R^c je -CH₂aryl alebo aryl;

substituent R^d je vodík alebo Ci-Cealkyl;

substituent R^e je -CH₂aryl alebo je -CH₂heteroaryl a ich farmaceutický prijateľné soli, estery, amidy a prekurzory liečiv.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca VI, substituent R¹ je

R^eO

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca VI, substituent R¹ je

O

II

V rámci iného výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca VI, substituent R^e je -(CH₂)„aryl.

V rámci iného výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca VI,aryl je fenyl alebo naftyl.

V rámci iného výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca VI, substituent R^b je aryl.

Vyššie opísané zlúčeniny všeobecných vzorcov IV, V alebo VI môžu byť všeobecne pripravené premenou príslušného východiskového sulfonamidu 1 na Boc-sulfonamid 2 použitím činidla takého ako je di-/erf-butyldikarbonát. Bocsulfonamid 2 sa potom môže nechať reagovať s vhodne substituovaným brómmetylketón-P-/erŕ-butylesterom kyseliny aspartovej 3. za prítomnosti bázy, následne reakciou s kyselinou, čím sa získa požadovaný produkt 4.

Schéma 1

O

II

HJM—S—R^{2 2} II o

dife/f-butyldikarbonat

Boe—N-S—R² H II

O

1. Boo— N-S—R² H II

O báza

2. HCI alebo CF₃COOH

Iným spôsobom sa môžu zlúčeniny všeobecných vzorcov IV, V alebo VI všeobecne pripraviť reakciou vhodne substituovaného aldehydu kyseliny aspartovej 1 s nitrometánom za prítomnosti bázy takej ako ZerZ-butoxid draselný, čím sa získa nitroalkohol 2. Redukciou 2 na amín 3., následne potom reakciou s vhodným sulfonylchloridom sa získa 4, ktorá môže byť oxidovaná na ketón 5. činidlom takým ako „ Dess Martin periodinane,, alebo Swernovou oxidáciou („Swern oxidation,,). Kyslým odobratím chrániacej t-butylesterovej skupiny pomocou HC1 alebo trifluóroctovej kyseliny sa získa požadovaný produkt 6.

Schéma 2

H

R¹—hL ^COOMe —COOt-Bu _t H

R¹—N^COOH

COOt-Bu

R¹—N^,CH₂OH —COOt-Bu _t H

R¹—N. XHO

H

R¹—N

OH

NO.

H

R¹—N

OH

NH, —COOt-Bu —COOt-Bu —COOt-Bu

R²-SO,CI

H

R¹—N

OH

H

N—SO₂-R² —COOt-Bu

H

R¹—N

O

H

N-SO^- R²

R¹

H II H ^—Nx^\/^N”^SO2“^r2 —COOt-Bu —CO₂H

6 v

Dalej iné zlúčeniny inhibítora ICE, ktoré môžu byť použité vo vynáleze zahrnujú zlúčeniny hydroxamátu vrátane zlúčenín všeobecného vzorca

v ktorom substituent R¹ je alebo

R⁷CT ^(A)<

O O

JL ¹¹

R’-'NA),/ , R^/n^x-(A)/'

O O ^R5\

O

R< s /

R6^ ^υ každý substituent R je nezávisle vodík alebo Ci-Cealkyl;

substituent R³ je vodík, Ci-Cealkyl, -(CH₂)_naryl, -(CH₂)„heteroaryl, -(CH₂)_PX-aryl alebo -(CH₂)_p-X-heteroaryl;

substituent R⁴ je Ci-C₆alkyl, -(CH₂)„aryl, -(CH₂)„heteroaryl, -(CH₂)j-X-aryl alebo -(CH₂)j-X-heteroaryl;

substituenty R⁵ a R⁶ sú každý nezávisle vodík, Ci-C6alkyl, -(CH2)„aryl, (CH2)nheteroaryl, -(CH2)j-X-aryl alebo -(CH2)j-X-heteroaryl; substituent R⁷ je Ci-Cealkyl, -(CH2)_paryl, -(CH₂)_pheteroaryl, -(CH₂)j-X-aryl alebo -(CH₂)j-X-heteroaryl;

každé n je nezávisle 0 až 6;

každé p je nezávisle 1 až 6;

každé j je nezávisle 2 až 6;

každé m je 0 až 2;

všeobecné označenie A je alanín, valín, serín, treonín, glutámová kyselina, lyzín, arginín, histidin, glutamín alebo α-aminobutánová kyselina; substituent R’je vodík, Cj-Cealkyl alebo -(CH₂)_nfenyl; všeobecné označenie X je O alebo S; a všeobecné označenie Q je Ci-Cealkyl, -(CH₂)„aryl, -(CH₂)„heteroaryl a farmaceutický prijateľné soli, estery, amidy a ich prekurzory liečiv.

V rámci uskutočnenia zlúčenín vzorca VII, každý substituent R je vodík.

R⁷O

V rámci iného uskutočnenia zlúčenín vzorca II, substituent R¹ je a m je 0.

V rámci iného uskutočnenia zlúčenín vzorca VII, substituent R¹ je

O

m je 0 a R⁷ je -(CH2)„aryl.

V rámci iného uskutočnenia zlúčenín vzorca VII, všeobecné označenie Q je -(CH2)«fenyI alebo -(CH₂)_nnaftyl.

V rámci iného uskutočnenia zlúčenín vzorca VII, substituent R* je vodík alebo metyl.

V rámci iného uskutočnenia zlúčenín vzorca VII, všeobecné označenie Q je -CH₂-fenyl, -CH₂-naftyl, je -CH₂CH₂-fenyl,-CH2CH₂-naftyl.

Iné zlúčeniny hydroxamátu inhibítora ICE obsahujú zlúčeniny majúce

všeobecný vzorec VIII v ktorom všeobecné označenie Z je

VIII

každé g je nezávisle vodík, Ci-Cealkyl, Ci-Cealkoxy, -(CH₂)„CO₂R (CH₂)naryl, aryl, -(CH₂)„heteroaryl alebo heteroaryl; všeobecné označenie U je O alebo CH₂;

substituent R¹ je

R³ (A) o

II _RA^(A)_m

R⁵ rsA

R⁵ (A)

R⁷O (A) alebo

R^s/ každý substituent R je nezávisle vodík alebo Ci-Cealkyl;

substituent R³ je vodík, Cj-Cealkyl, -(CH2)_naryl, -(CH2)_nbeteroaryl, -(CH₂)_PX-aryl alebo -(CH₂)_p-X-heteroaryl;

substituent R⁴ je Ci-C₆alkyl, -(CH₂)_naryl, -(CH₂)nheteroaryI, -(CH₂)j-X-aryl alebo -(CH₂)j-X-heteroaryl;

substituenty R⁵ a R⁶ sú každý nezávisle vodík, Ci-Cealkyl, -(CH₂)„aryl, (CH₂)_nheteroaryl, -(CH₂)j-X-aryl alebo -(CH₂)j-X-heteroaryl; každé n je nezávisle 0 až 6;

každé p je nezávisle 1 až 6;

každé j je nezávisle 2 až 6;

každé m je 0 až 2;

všeobecné označenie A je alanín, valín, serín, treonín, glutámová kyselina, lyzín, arginín, histidín, glutamín alebo α-aminobutánová kyselina; a všeobecné označenie X je O alebo S a farmaceutický prijateľné soli, estery, amidy a ich prekurzory liečiv.

V rámci uskutočnenia zlúčenín vzorca VIII, všeobecné označenie Z je

a každé g je vodík.

V rámci uskutočnenia zlúčenín vzorca VIII, substituent R¹ je

O

a m je 0.

V rámci uskutočnenia zlúčenín vzorca VIII, substituent R¹ je

O

m je 0 a substituent R⁷ je -(CH₂)„aryl.

V rámci uskutočnenia zlúčenín vzorca VIII, substituent R⁷ je (CH₂)„fenyl.

V rámci výhodného uskutočnenia zlúčenín vzorca VIII, všeobecné označenie Z je

O g

g g g a každé g je vodík.

Výhodné zlúčeniny hydroxamátu inhibítora ICE zahrnujú:

3-Benzyloxykarbonyl-amino-4-oxo-5-fenylacetylaminooxy-pentánovú kyselinu;

3-BenzyloxykarbonyIamino-4-oxo-5-(2-oxo-pyroIidin-l-yloxy)-pentánovú kyselinu;

3-BenzyloxykarbonyIamino-5-(3,5-dioxo-10-oxa-4-aza-tricyklo[5.2.1.0^2,6]dec8-en-4-yloxy)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-BenzyIoxykarbonylamino-5-(2-oxo-2,3-dihydro-indol-l-yloxy)-4-oxopentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(7-metoxykarbonylmetyl-2-oxo-oktahydro-indoll-yloxy)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(2-oxo-oktahydro-indol-l-yloxy)pentánovú kyselinu;

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyrylamino)-propionylamino]-5-(7metoxykarbonylmetyl-2-oxo-oktahydro-indol-l -yloxy)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-[2-(2-benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyrylamino)-propionylamino]-4oxo-5-(2-oxo-2,3-dihydro-indoI-1 -yloxy)-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(2,5-dioxo-pyrolidín-l-yloxy)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(2,2,3-trimetyI-5-oxo-pyrolidín-l-yloxy)pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(l,3-dioxo-oktahydro-izoindol-2-yloxy)-4-oxopentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(l,3-dioxo-l,3-dihydro-izoindol-2-yloxy)-4-oxopentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[3-(4-bróm-fenyl)-2,5-dioxo-2,5-dihydro-pyroll-yloxy]-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-BenzyloxykarbonyIamino-5-(3,5-dioxo-4-aza-tricyklo[5.2.1.0²’⁶]dec-8-en-4yloxy)-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(2,4-dioxo-3-aza-spiro[5.5]undeka-3-yloxy)-4oxo-pentánovú kyselinu;

5-(2-Bifenyl-4-yl-5-oxo-pyrolidín-l-yloxy)-4-oxo-3-(2-propenyl-penta-2,4dienyloxykarbonylamino)-pentánovú kyselinu;

5-Benzoylaminooxy-3-benzyloxykarbonyIamino-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(3-fenyl-propionyl-aminooxy)-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(2-naftalen-l-yl-acetyl-aminooxy)-4-oxopentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(3-naftalen-l-yl-propionylaminooxy)-4-oxopentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[metyl-{3-fenyl-propionyl)-aminooxy]-4-oxopentánovú kyselinu;

5-(Benzoyl-metyl-aminooxy)-3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[metyl-(3-naftalen-l-yl-propionyl)-aminooxy]-4oxo-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[metyl-(naftalen-l-yl-acetyl)-aminooxy]-4-oxopentánovú kyselinu;

3- Benzyloxykarbonylamino-5-[benzyl-(3-fenyl-propionyl)-aminooxy]-4-oxopentánovú kyselinu;

5-[Benzyl-(3-naftalen-l-yl-propionyl)-aminooxy]-3-benzyloxykarbonylatnino4- 21-pentánovú kyselinu;

5- (3-Benzyl-2-oxo-pyrolidin-l-yloxy)-4-oxo-3-(2-propenyl-penta-2,4-dienyloxykarbonylamino)-pentánovú kyselinu;

5-(3-Metyl-2-oxo-pyrolidin-l-yloxy)-4-oxo-3-(2-propenyl-penta-2,4-dienyloxykarbonylamino)-pentánovú kyselinu;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-[metyl-(fenylacetyl)-aminooxy]-pentánovú kyselinu alebo

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(l-oxo-l,3-dihydro-izoindol-2-yloxy)pentánovú kyselinu.

Hydroxamátové inhibátory ICE ako sú vyššie opísané môžu byť pripravené napríklad tak, ako v príklade 12.

Ešte iné typy inhibítorov ICE, ktoré môžu byť použité vo vynáleze obsahujú inhibítory esteru aspartátu vrátane zlúčenín majúcich všeobecný vzorec IX:

O

O

R2 v ktorom substituent R¹ je R³OC(O)-,

R³CO-, r³so₂,

R⁵N(R’)CHR⁶CO-,

IX

každý substituent R^a je nezávisle vodík, Ci-Cealkyl alebo -(CH₂)„aryl;

Substituent R² je -(CRR)„-aryl,

-(CRR)„-X-aryI,

-(CRR)„-heteroaryl,

-(CRR)n-X-heteroaryl,

-(CRR)n-(substituovaný-heteroaryl),

-(CRR)„-(substituovaný-aryl),

-(CRR)n-X-(substituovaný-aryl),

-(CRR)n-aryl-aryl,

-(CRR)n-aryl-heteroaryl,

-(CRR)„-aryl-(CH₂)_naryl,

-(CRR)_n-CH(aryl)₂,

-(CRR)n-cykloalkyl,

-(CRR)„-X-cykloalkyl,

-(CRR)n-heterocyklus,

-(CRR)n-X-heterocyklus,

-(CRR)n-substituovaný heterocyklus ^CH^-aryl

-(CRRJ-CH \CH₂)—aryl , substituovaný aryl

-(CRRJ-CH \cH₂)—aryl .

O — (CRRJ—N /

-(CRR)-CH ,(CH2)^— heteroaryl (^CH2⁾n^_aryl >

O

O

N-Š—[aryl» substituovaný aryl.]

II ’

O o

N—CO(CH2)jjJ—[aryl. ^or substituovaný aryl

O

Λ ,

N aryl.,

AJ

Ο

_.Nr^O(CH₂)_naryl

T⁴ f ^N>CHR)_n- _aleb0 00^N>(CHR).

každý substituent R je nezávisle vodík, Ci-Cealkyl, halogén alebo hydroxy skupina;

všeobecné označenie X je O alebo S;

substituent R³ je Ci-C₆alkyl, aryl, heteroaryl,

-(CHR)„-aryl,

-(CHR)„-heteroaryl,

-(CHR)_n-substituovaný heteroaryl, -(CHR)_n-substituovaný aryl,

-(CRR)„C(O)ORa,

-(CRR)„-S(CH₂)„-aryl, cykloalkyl, substituovaný cykloalkyl, heterocyklus, substituovaný heterocyklus,

-(CRR)_n-C(O)NRaRa,

-(CRR)_n-SO₂-(CH₂)_n-aryl,

-(CRR)_n-SO₂-Ci-C₆alkyl,

J-CH₂C(R*)H-,

-CHR⁶C(O)-heteroaryl,

-(CRR)_n-S(CH₂)„C(O)OR\

-(CRR)„-SO₂-(CH₂)„C(O)ORa,

-(CRR)„-S(CH₂)_n-aryl,

-(CRR)_n-SO₂-(CH₂)_n-aryl,

-(CRR)„-SC(O)Ci-C₆ alkyl,

-(CRR)„-S(O)(CH₂)„ aryl,

-(CRR)„-S(O)(CH₂)_naCO₂R^a,

-(CRR)—N

NHCC_rC₆alkyl

-CH₂NHC(O)-Ci-C₆alkyl,

Ο

-(CRR)h-N

(CH₂)_naryl,

CNR^bR^b

I aryl s v

I—Ν^ζΉ^ζΧχ \ / <CH₂)_n θ R' R'

ΛΧ \ / (CH₂)_n

O

II aryl—S

II o

•N, w //

CH₂C(O)NR^bR^b,

Ο R' R'

R' R'

X) o

II

CC^Cgalkyl N,

O

II

CC^-Cgalkyl

OCH₂-aryl

Č (CRR)_n alebo každý substituent R' je nezávisle Ci-C₆alkyl, Ci-Cealkylaryl, aryl alebo vodík;

každé všeobecné označenie J je nezávisle

-CO₂R^b

-SO₂NR^bR^b alebo -SO₂R^b;

-CONR^bR^b,

aryl o4=o O ,N ¹¹ tr

C-(CRR)_n— každý substituent R^b je nezávisle vodík, Ci-C₆alkyl, aryl, substituovaný aryl; arylalkyl, heteroarylalkyl, substituovaný arylalkyl alebo substituovaný heteroarylalkyl;

substituent R⁴ je vodík Ci-Cealkyl,

CH₃OC(O)-, fenyl alebo Ci-C₆alkyl C(O)-;

substituent R⁵ je Ci-Cealkyl-CO-,

-(CH₂)„aryl,

Ci-C₆alkylOC(O)-,

C,-C6alkyl-X-(CH₂)„CO,

C,-C₆alkyl-X-(CH₂)_nOC(O)-,

-C(O)(CRR)„-aryl,

-C(0)NR^aR\

-SO₂-Ci-C6alkyl,

-C(O)(CH₂)_nC(O)NR’R’,

-C(O)O(CH₂)_naryl,

-C(O)O(CH₂)„substituovaný aryl,

-C(O)(CRR)„NHC(O)O(CH₂)„-aryl,

O

II —c—

-(CH₂)„X(CH₂)_n-aryl,

-Ci-Cgalkyl Χ-Ci-Cealkyl aryl alebo OOO

-C-CH-NHC-CH-NHCC j -C₆alky 1 (CH2)_n CH2-heteroaryl

C0₂R^a substituent R⁵’ je C(O)Ci-C₆alkyl,

-C(O)OC,-C₆alkyl,

-C-CH-NHCCi-Có alkyl,

I (CH₂)_n aryl substitovaný aryl

-C(O)O(CH₂)„aryl, -C(O)(CH₂)_naryl alebo

O O « ¹¹

CCHNHCCi-Cô alkyl;

I

CH₂ heteroaryl substituent R⁶ je vodík, Ci-Cealkyl, -(CH₂)_naryl, -(CH₂)_BCO₂R*, hydroxyl substituovaný Ci-C₆alkylom alebo imidazol substituovaný CiCealkylom;

každé n je nezávisle 0 až 3 a ich farmaceutický prijateľné soli, estery, amidy a prekurzory liečiv.

V rámci uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R¹ je fenyl-CH₂OC(O)-.

V rámci	ďalšieho	uskutočnenia	zlúčenín	vzorca	ix,	substituent	R1	je
fenyl-SO2-.
V rámci	ďalšieho	uskutočnenia	zlúčenín	vzorca	ix,	substituent	R1	je
CH3-OC(O)-.
V rámci	ďalšieho	uskutočnenia	zlúčenín	vzorca	IX,	substituent	R1	je

fenyl-CH₂CH₂-CO-.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R¹ je

H₃C

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R*je:

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R¹ j< fenyl-CH₂-CO-.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R¹ je

CO- .

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, každý substituent R je vodík.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R² je (CH₂)„-fenyl.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R² je (CH₂)„-naftyl.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R² je (CH₂)„-O-fenyl.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R² je (CH₂)„-naftyl.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R² je (CH₂)_n-S-fenyl.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, substituent R² je (CH₂)„-CH(fenyl)₂.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, každý substituent R^a je vodík; substituent R¹ je benzyloxykarbonyl; substituent R² je aryI-X(CRR)„-, aryl-(CRR)„-, heteroaryl-(CRR)„- alebo cykloalkyl-(CRR)„-; n je 1,2 alebo 3; všeobecné označenie X je O alebo S; a R je vodík, metyl alebo benzyl.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, každý substituent R* je vodík;

substituent R¹ je benzyloxykarbonyl; a substituent R² je -(CH₂)„-naftyl,

-(CH₂)„-fenyl,

-(CH₂)_n-cykloalkyl,

-(CH₂)„O(CH₂)„-naftyl,

-(CH₂)_nO(CH₂)„-fenyl alebo -(CH₂)„S(CH₂)„-fenyl.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, každý substituent R^a je vodík;

substituent R¹ je benzyloxykarbonyl; a substituent R² je -CH₂-naftyl.

V rámci ďalšieho uskutočnenia zlúčenín vzorca IX, každý substituent R* je vodík; R² je benzyloxykarbonyl, ο

II ο

II ο

ιι ο

ιι

C—CH—NHC—CHNHC-CHNHCCpCg alkyl , cíó'ch₃

CH₂CH₂CO₂H ^CH2^heteroaryl

Ο Ο

II II

-c—CH—NHCch^ch₃

-CHNHC-CHNHCCj-Cg alkyl ,

CH₂CH₂CO₂H ^CH2^aryl »

-C-CH-CH₂-S-aryl, < I ch₃ o o

II H

-C-CHCH₂-S-aryI.

I II ch₃ o

Iné zlúčeniny esteru aspartátu inhibítora ICE, ktoré môžu byť použité vo vynáleze zahrnujú zlúčeniny všeobecného vzorca X:

X v ktorom substituent R¹ je -C(O)OCH₂ fenyl, -SO₂-fenyl, -C(O)OCH₃, C(O)CH₂CH₂ fenyl,

O O

II II

C-CHNHCCH3, ch₃

-C(O)CH₂ tienyl, -C(O)Ci-C₆ alkyl,

O

II ch₃c

-CH-NH^CH,

O

II

-COCH₂fenyl,

-(CH₂ )₃ fenyl,

O O

H II

-CCH-NHS-CH3,

I B ch₃ o

000

II II N

-c-ch-nh-c-ch-nhcch₃,

I I

CH₃ (CH₂)2

I fenyl o o n 11

-c-ch-nhcch₃, ch₂

I ch₃ ο ο σ

II II II

CCHNHC(CH2)3CNH?

I ch₃ ο ο

II II

C-CHCH₂S- fenyl

I II ch₃ ο

-C-CH-NHCNH2,

CH₃

Ο ο ο II II . ,

-CCH-C- tienyl,

Ο ιι c-ch₃ ch₃

Ο Ο

II II c-chch₂-s-ch₃

I II ch₃ ο ο ο

II II

C(CH₂)₂CNH₂, ο ο

II II

C(CH₂)₃CNH₂, ο ο

II Η cchch₂cnh₂,

-S(CH₂)_nSCH₃,í/

Ο ο

Ο ο

II II

-cchch₂sch_3>

I I ch₃ ο

CI

CH-

CH

-CCHNH

Íh·

O

II ľ—chnhcoch₂ fenyl o

II o

II

C—CH—NHCOCH-, fenyl

Λ h₃c ch.

fenyl o

II

O=S=O íi Ň —cch₂ch₂c—C >

0 0

II II II

C-CH-NHC-CHNHCCH3,

I I

CH3 (CH₂)2

I co₂H o

II —C-CH—N N- fenyl

I v_y ^yCH,

O

II

CCH-SCH·? fenyl .

I ch₃ o

í? Λ

-C-CH-N N- fenyl ¹ kJ

CH,

Ο Ο Ο

-C-CH-NHC—CH-NHCOCH₂ fenyl

Λ.

h₃c' ch₃ (ch₂)₂ co₂h o

II o

II

O

II

ΌΓ1

Λ.

H₃C' 'ch₃

o

II

C-CH-NHC—CH-NHC(CH₂)₂ fenyl

A.

h₃c

CH, (ch₂)₂ co₂h o

II

-C-CH-NHC(CH₂)2 fenyl I ch₃ o

II

II c-CH—NHC—CH /CH₃

CH, ch₂ch₃ o

II

O

II

O

II _C CH—NHC— CH-NHCCHNHCCH₃ (CH₂)₂ ch₂ co₂h h₃c

CH, imidazoyl

Ο ιι h₃c

Ο

II

CH—NHCCH,

O

OH

-CGHCH₂CNH(CH2)2 fenyl , I ch₃

O

II

O

II

O

II h₃c

CH,

O

II

O

II

-ČCH-CH2-S- fenyl

I

CH₃

O O

II . II

-CČHCH₂-S- fenyl

I II ch₃ o o

II

-Č-CHCH₂-S-(CH₂)2 fenyl , I ch₃

O o

II u

C-CH-CH₂-S(CH₂)₂ fenyl .

I II ch₃ o o

-C-CHCH₂SCH₂ fenyl

I ch₃

Ο Ο

B- II

C-CH-CH2-S(CH2)2 fenyl

I ιι ch₃ ο ο ο

Β «

C-CH—SCH2 fenyl

I II ch₃ ο

-C-CH-NHCCHnCHn fenyl

Λ h₃c \;h₃

o o

II II

-S-CHCH2SCH₃,

II I II o ch₃ o o o

II II

-CCHCH2SCCH₃,

I

CH₃ o

II

-CCHCH2CO2H,

I

CH₃

O

-CCHCH2S-(CH2)3- fenyl

C-CH-CH₂S-(CH₂)3 fenyl ,

-c-ch-ch₂s(ch₂)₂ eo₂H, ch₃ o o o

-CCHCH₂S-(CH2)2CO2H;

I II ch₃ o substituent R² je

-CH₂CH₂ fenyl,

-CH₂ naftyl,

-CH₂CH₂ cyklohexyl,

-CH₂O naftyl,

-CH₂O fenyl,

-CH₂S-fenyl,

-CH₂-substitutovaný naftyl,

-CH₂CH(fenyl)₂,

-CH₂-imidazol,

-(CH₂)₃-fenyl,

-C(CH₃)H-naftyl,

O — CH

CH₂ n f_enyi

-CH[CH₂ fenyl]₂ , -C(OH)H-naftyl, -CH₂ -NH fenyl,

CH₂substituovaný fenyl naftyl

-CH₂ -naftyl-fenyl,

-CH₂ -fluorenyl,

-CH₂ naftyl-tienyl,

O

Λ 2

N—S — substituovaný fenyl ô

-CH₂ -benzofuranyl,

-CH₂ -benzotienyl,

-CH₂ -naftyl-CH₂ -fenyl, -CH₂ -substituovaný fenyl,

CH₂ -substituovaný indolyl, ο

ιι

C^— fenyl

Zľ) o

C OCH-, fenyl I ² N, fenyl — CH₂~CH

CH₂phenyl / fenyl

/pyridyl — CH₂—CH fenyl¹

O

- ch₂-n

-(CH₂)₂ pyridyl, alebo

každé n je nezávisle 0 až 3 a ich farmaceutický prijateľné soli, estery, amidy a prekurzory liečiv.

Výhodné zlúčeniny esteru aspartátu inhibítora ICE zahrnujú zlúčeniny:

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(3-fenyl-propionyloxy)-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(-cyklohexyl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(naftaIen-l-yl-oxy)-acetoxy]-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-fenoxyacetoxy-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-fenylsulfanylacetoxy-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(6-metoxy-naftalen-l-yl)-acetoxy]-4-oxopentánová kyselina;

3-BenzyIoxykarbonylamino-5-(naftalen-2-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(3-naftalen-2-yl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina,

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(3,3-difenyl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(lH-indol-3-yl)-acetoxy]-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(indol-l-yI-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(2-naftalen-l-yl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-[(2-oxo-pyrolidín-l-yl)-acetoxy]-pentánová kyselina;

5-[(Acetyl-fenyl-amino)-acetoxy]-3-benzyloxykarbonyl-amino-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(2-benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(hydroxy-naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-[(fenyl-amino)-acetoxy]-pentanová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(6-hydroxy-naftalen-l-yl)-acetoxy]-4-oxopentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[3-(4-hydroxy-fenyl)-2-naftalen-l-yl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

(S)-3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-fenylacetoxy-pentánová kyselina;

(S)-3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(4-fenyl-butyryloxy)-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-[(4-fenyl-naftalen-l-yl)-acetoxy]pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(4-metyl-naftalen-l-yl)-acetoxy]4-oxopentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-[(4-tiofen-2-yl-naftalen-l-yl)-acetoxy]pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(4-fluór-naftalen-l-yl)-acetoxy]-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(2-metyl-naftalen-l-yl)-acetoxy]-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(2-fluór-naftalen-l-yl)-acetoxy]-4-oxopentánová kyselina;

5-(Benzofuran-4-yl-acetoxy)-3-benzyIoxykarbonylamino-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(Benzo[b]tiofen-7-yl-acetoxy)-3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(Benzo[b]tiofen-4-yl-acetoxy)-3-benzyIoxykarbonylamino-4-oxo-pentánová kyselina;

5-[(4-Benzyl-naftalen-l-yl)-acetoxy]-3-benzyloxykarbonylamino-4-oxopentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(3,4-dihydro-naftalen-l-yl)-acetoxy]-4-oxopentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(5-bróm-IH-indol-3-yl)-acetoxy]-4-oxopentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(3,4-difenyl-butyryloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(3-fenyl-3-fenylamino-propionyloxy)pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-[(l,2,3,4-tetrahydro-naftalen-2-yl)acetoxyj-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(l-metánsulfonyl-piperidín-4-yl)-acetoxy]-4oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-[(2,3,5,6-tetrametyl-fenyl)-acetoxy]pentánová kyselina;

5-(Benzotiazol-4-yl-acetoxy)-3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(Benzofuran-3-yl-acetoxy)-3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(Benzo[b]tiofen-3-yl-acetoxy)-3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(3-fenyl-3-pyridin-2-yl-propionyloxy)pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(2,3-dichlór-fenyl)-acetoxy]-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(5-metyl-naftalen-l-yl)-acetoxy]-4-oxopentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(2-jód-fenyl)-acetoxy]-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(3-pyridin-3-yl-propionyloxy)-pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(5-metoxy-naftalen-l-yl)-acetoxy]-4-oxopentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(8-metyl-naftalen-l-yl)-acetoxy]-4-oxopentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(9H-fluoren-9-yl)-acetoxy]-4-oxo-pentánová kyselina;

3-BenzyIoxykarbonylamino-5-[(10,ll-dihydro-5H-dibenzo[a,d]cyklohepten-5yl)-acetoxy]-4-oxo-pentánová kyselina;

3-benzyloxykarbonylamino-4-karboxy-2-oxo-butylester 5-Oxo-l-(toluén-4-sulfonyl)-pyrolidín-2-karboxylovej kyseliny ;

1-benzylester 2-(3-benzyloxykarbonylamino-4-karboxy-2-oxo-butyl)ester 5Oxo-pyrolidín-l,2-dikarboxylovej kyseliny;

3-benzyloxykarbonylamino-4-karboxy-2-oxo-butylester l-Benzoyl-pyrolidín-2 karboxylovej kyseliny

Pyrolidín-l,2-dikarboxylová kyselina 1-benzylester 2-(3-benzyloxykarbonyl amino-4-karboxy-2-oxo-butyl)esteru;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(2-benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-5-[(5-kyano-naftalen-l-yl)-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(3-fenyl-3-pyridin-3-yl-propionyloxy)pentánová kyselina;

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(3-fenyl-3-pyridin-4-yl-propionyloxy)pentánová kyselina; a

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-[(l-oxo-3,4-dihydro-lH-izochinolin-2-yl)· acetoxyj-pentánová kyselina.

3-Benzénsulfonylamino-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Metoxykarbonylamino-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-(3-fenyl-propionylamino)-pentánová kyselina;

3-Metoxykarbonylamino-4-oxo-5-fenoxyacetoxy-pentánová kyselina; a

3-(2-Metánsulfonyl-l-metyl-etylsulfanylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4oxo-pentánová kyselina.

[S-(R*,R*)]-3-(2-Acetylamino-propionylaniino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4oxo-pentánová kyselina;

5-(Naftalen- l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[(tiofen-3-karbornyl)-amino]-pentánová kyselina;

3-[(Furán-3-karbonyl)-amino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-(4-fenyl-butyrylamino)-propylamino]pentánová kyselina;

3-(2-Metánsulfonylamino-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-[2-(2-Acetylamino-4-fenyl-butyrylamino)-propionylamino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-butyrylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3- [2-(4-Karbamoyl-butyrylamino)-propionylamino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)4- oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Benzyloxykarbonylamino-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4oxo-pentánová kyselina;

5- (Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-(2-ureido-propionylamino)-pentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[(l-Acetyl-pyrolidín-2-karbonyl)-amino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-(2-Metyl-3-oxo-3-tiofen-2-yl-propionylamino)-5-(naftaIen-l-yl-acetoxy)-4oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-acetylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-propionylamino)-5-(3,3-difenyl-propionyloxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-[2-(2-Acetylamino-4-karboxy-butyrylamino)-propionylamino]-5-(naftalen-lyl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-(3-fenyl-propionylamino)-propionylamino]-pentánová kyselina;

3-[2-(3-Metyl-butyrylamino)-propionyIamino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-[(l-Acetyl-4-benzyloxy-pyroIidín-2-karbonyI)-amino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(4-Karbamoyl-butyrylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina; a

3-[2-(l-Metyl-lH-imidazol-4-yl)-acetylamino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4oxo-pentánová kyselina.

(S)-5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-fenylacetylamino-pentánová kyselina;

(S)-5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-(2-tiofen-2-yl-acetylamino)-pentánová kyselina;

3-[(2-Karbamoyl-cyklopentánkarbonyl)-amino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4oxo-pentánová kyselina;

3-[(3-Karbamoyl-bicyklo[2.2.1]heptán-2-karbonyl)-amino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(3-Metánsulfonyl-2-metyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-(3-Benzénsulfonyl-2-metyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo pentánová kyselina;

3-Butyrylamino-5-(naftalen-2-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-Acetylamino-5-(naftalen-1 -yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(3-Metánsulfonyl-2-metyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-(3-Metyl-butyrylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(3-Karbamoyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

[S-(R*,R*)]-3-(3-Acetylsulfanyl-2-metyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina; a ŕraws-3-[(3-Karbamoyl-cyklopentánkarbonyl)-amino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)*-4-oxo-pentánová kyselina.

3-(l,2,3,4-tetrahydro-l-oxo-izochinolin-2-yl)-acetamino-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Metyl-3-fenetylkarbamoyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4oxo-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-2-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-(2-oxo-6-fenyl-piperidin-l-yl)-acetylamino]-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-(2-oxo-6-fenyl-piperidin-l-yl)-acetylamino]-pentánová kyselina;

3-[3-Metyl-2-(3-fenyl-propionylamino)-butyrylamino]-4-oxo-5-[(l-oxol,2,3,4-tetrahydro-naftalen-2-yl)-acetoxy]-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-2-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-(l-oxo-3,4-dihydro-l H-izochinolin-2yl)-acetylamino]-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4-oxo-3-[2-(l-oxo-3,4-dihydro-l H-izochinolin-2-yl)-acetylamino]-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4-oxo-3-[2-(2-oxo-6-fenyl-piperidin-l-yl)acetylaminoj-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-1-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-( 1-oxo-1,2,3,4-tetrahydro-naftalen-2-yl)acetylaminoj-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-(l-oxo-3,4-dihydro-lH-izochinolin-2yl)-propionylamino]-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-2-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-(l-oxo-3,4-dihydro-lH-izochinolin-2yl)-propionylamino]-pentánová kyselina;

3-[4-(l-Benzensulfonyl-lH-pyrol-2-yl)-4-oxo-butyrylamino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4-oxo-3-[2-(l-oxo-l,2,3,4-tetrahydronaftalen-2-yl)-acetylamino]-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4-oxo-3-[2-(l-oxo-3,4-dihydro-l H-izochinolin-2-yl)-propionylamino]-pentánová kyselina;

4-Oxo-3-[2-(l-oxo-3,4-dihydro-lH-izochinolin-2-yl)-propionylamino]-5-[(loxo-l,2,3,4-tetrahydro-naftalen-2-yl)-acetoxy]-pentánová kyselina;

3- [4-(l-Benzénsulfonyl-lH-pyrol-2-yl)-4-oxo-butyrylamino]-5-(2-benzyl-3fenyl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

4- Oxo-5-[(l-oxo-l,2,3,4-tetrahydro-naftalen-2-yl)-acetoxy]-3-[2-(l-oxol,2,3,4-tetrahydro-naftalen-2-yl)-acetylamino]-pentánová kyselina;

5- (Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-(2-oxo-3-fenyl-imidazolidin-l-yl)propionylaminoj-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-(2-oxo-3-fenyl-tetrahydro-pyrimidin-lyl)-propionylamino]-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-[2-(2-oxo-3-fenyl-tetrahydro-pyrimidin-lyl)-acetylamino]-pentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-3-metyl-butyrylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-3-metyl-butyrylamino)-5-(2-benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4 oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-3-metyl-butyrylamino)-5-(3-benzyl-4-fenyl-butyryloxy)-4oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-3-metyl-butyrylamino)-5-(4-benzyl-5-fenyl-pentanoyloxy)-4 oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-3-metyl-butyrylamino)-4-oxo-5-[(l-oxo-l,2,3,4-tetrahydronaftalen-2-yl)-acetoxy]-pentánová kyselina,

5-(3-Benzyl-4-fenyl-butyryloxy)-3-[3-metyl-2-(3-fenyl-propionylamino)butyrylamino]-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[2-(3-Acetylamino-2-oxo-2H-pyridin-l -yl)-acetylamino]-5-(3,3-difenylpropionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina; a

3-[2-(3-Acetylamino-2-oxo-2H-pyridin-l-yl)-acetylamino]-5-(2-benzyl-3-fenyl propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina.

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-4-karboxy-butyrylamino)-3-metyl-butyrylamino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyrylamino)-propionylamino]-5(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-3-metyI-butyrylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyrylamino)-propionylamino]-5(3,3-difenyl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyryIamino)-propionylamino]-5-(2 benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyrylamino)-propionylamino]-5(naftalen-1 -yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-{2-[4-karboxy-2-(3-fenyl-propionylamino)-butyrylamino]-3-metyl-butyrylamino}-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyryIamino)-5-(3,3-difenylpropionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-3-hydroxy-butyrylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-(2-Acetylamino-3-hydroxy-butyrylamino)-5-(3,3-difenyl-propionyloxy)-4oxo-pentánová kyselina;

3-(2-{2-[2-Acetylamino-3-(lH-indol-3-yl)-propionylamino]-4-karboxybutyrylamino}-3-metyl-butyrylamino)-5-(2-benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4oxo-pentánová kyselina; a

5-(3,3-Difenyl-propionyloxy)-4-oxo-3-[2-(4-fenyl-butyrylamino)-propionylamino]-pentánová kyselina.

3-(2-{2-[2-Acetylamino-3-(lH-indol-3-yl)-propionylamino]-4-karboxybutyryIamino}-3-metyl-butyrylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina; a

3-(2-{2-[2-Acetylamino-3-(4-hydroxy-fenyl)-propionylamino]-4-karboxybutyrylamino}-3-metyl-butyrylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina.

3-[(2-Karboxy-cyklohexánkarbonyl)-amino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3- [(2-Metoxykarbonyl-cyklohexánkarbonyl)-amino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)4- oxo-pentánová kyselina; a

3-[(2-Karbamoyl-cyklohexánkarbonyl)-amino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo pentánová kyselina.

3-(3-Benzylsulfanyl-2-metyl-propionyIamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-(2-Metyl-3-fenylmetánsulfonyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4oxo-pentánová kyselina;

3-[3-(2-Karboxy-etánsulfanyl)-2-metyl-propionylamino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5- (2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-[3-(2-karboxy-etánsulfonyl)-2-metylpropionylamino]-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-[3-(3-karboxy-propán-l-sulfinyl)-2metyl-propionylamino]-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-(2-fenylmetánsulfanyl-propionylamino)pentánová kyselina;

3-(2-Metyl-3-fenyIsulfanyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyIoxy)-3-(2-metyl-3-fenylsulfanyl-propionylamino)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(2-Metyl-3-fenetylsulfanyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-(2-metyl-3-fenetylsulfanylpropionylamino)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-(3-benzylsulfanyl-2-metyl-propionylamino)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-(2-benzylsulfanyl-propionylamino)-4-oxo· pentánová kyselina;

3-[2-Metyl-3-(3-fenyl-propylsulfanyl)-propionylamino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(3-Benzénsulfonyl-2-metyI-propionyIamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy]-4-oxo pentánová kyselina;

3-(3-Benzénsulfonyl-2-metyl-propionylamino)-5-(2-benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-[2-metyl-3-(2-fenyl-etánsulfonyl)propionylamino]-4-oxo-pentánová kyselina;

-[2-Metyl-3 -(2-fenyl-etánsulfonyl)-propionylamino]-5-(naftalen-1 -ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(Naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-3-(2-fenylmetánsulfonyl-propionylamino)pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-(2-metyl-3-fenylmetánsulfonyl-propionylamino)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4-oxo-3-(2-fenylmetánsulfonyl-propionylamino)-pentánová kyselina;

3-[2-Metyl-3-(3-fenyl-propán-l-sulfonyl)-propionylamino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-[2-metyl-3-(3-fenyl-propán-l-sulfonyl)propionylamino]-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-[3-(2-karboxy-etylsulfanyl)-2-metylpropionylamino]-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[3-(3-Karboxy-propylsulfanyl)-2-metyl-propionylamino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-[3-(3-karboxy-propylsulfanyl)-2-metylpropionylamino]-4-oxo-pentánová kyselina;

3- (3-Karboxymetylsulfanyl-2-metyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)

4- oxo-pentánová kyselina;

5- (2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-(3-karboxymetylsulfanyl-2-metylpropionylamino)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[3-(2-Karboxy-etánsulfonyl)-2-metyl-propionylamino]-5-(naftaIen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[3-(3-Karboxy-propán-l-sulfonyl)-2-metyl-propionylamino]-5-(naftalen-l-yl acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-(3-Karboxymetánsulfbnyl-2-metyl-propionylamino)-5-(naftaIen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

5-(2-Benzyl-3-fenyI-propionyloxy)-3-[3-(3-karboxy-propán-l-sulfonyl)-2metyI-propionylamino]-4-oxo-pentánová kyselina;

-(2-Benzyl-3 -fenyl-propionyloxy)-3 -(3 -karboxymetánsulfonyl-2-metylpropionylamino)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[3-(3-Karboxy-propán-l-sulfínyl)-2-metyl-propionylamino]-5-(naftalen-l -ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[2-MetyI-3-(3-fenyl-propán-l-sulfinyl)-propionylamino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina; a

5-(2-Benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-3-[2-metyl-3-(3-fenyl-propán-l-sulfinyl)propionylamino]-4-oxo-pentánová kyselina.

3-[3-Metyl-2-(fenetyIkarbamoyl-metyl)-butyrylamino]-5-(naftalen-l-ylacetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina; a

3-(3-Karboxy-2-metyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina.

3-(2-Metyl-3-sulfamoyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina.

3-(3-Karbamoyl-2-metyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-(2-BenzyIoxykarbonyIamino-3-metyl-naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-[(2-Karbamoyl-cyklopentánkarbonyl)-amino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4oxo-pentánová kyselina;

3-[(l-Karbamoyl-pyrolidín-2-karbonyl)-amino]-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4oxo-pentánová kyselina;

3-(2-{2-[2-Acetylamino-3-(4-hydroxy-fenyl)-propionylamino]-4-karboxybutyrylamino}-3-metyl-butyrylamino)-5-(2-benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4oxo-pentánová kyselina;

3-(3-Karbamoyl-2-metyl-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-(2-Karbamoylmetyl-3-metyl-butyrylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-(3-Benzyloxy-2-ureido-propionylamino)-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxopentánová kyselina;

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-4-karboxy-butyrylamino)-3-metyl-butyrylamino]-5-(2-benzyl-3-fenyl-propionyloxy)-4-oxo-pentánová kyselina;

3-{2-[4-Karboxy-2-(3-fenyl-propionylamino)-butyrylamino]-3-metyl-butyrylamino}-5-(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina; a

3-[2-(2-Acetylamino-4-karboxy-butyrylamino)-3-metyl-butyrylamino]-5(naftalen-l-yl-acetoxy)-4-oxo-pentánová kyselina. .

Vyššie uvedené inhibítory aspartát esteru ICE môžu byť vyrobené podľa nasledujúcich schém 1-11:

Schéma 1

íerc-Butylester kyseliny 3-benzyloxykarbonylamino-5-bróm-4-oxopentozoovej, tiež známy ako Z-asp(OtBu)-brómmetylketón, je komerčne dostupný alebo môže byť pripravený podľa nasledujúceho uverejneného postupu: Dolle, et al., J. Med. Chem., 1994; 37:563-564. Tento metylbrómketón sa nechá reagovať s vhodne substituovanou karboxylovou kyselinou a s bázou takou ako fluorid draselný. Pri inom spôsobe sa môžu použiť bázy také ako uhličitan cézny alebo t-butoxid draselný. Činidlá by sa mali zmiešavať v dimetylformamide (DMF), dimetylacetamide (DMA), dimetylsulfoxide (DMSO), acetonitrile alebo inom vhodnom rozpúšťadle a mieša sa pri teplote miestnosti počas od 8 do 24 hodín. Chrániaca tbutylesterová skupina môže byť odstránená v kyslom prostredí, výhodne v kyseline trifluóroctovej, čím sa získajú karboxyaspartylestery, ukázané v schéme 1.

Schéma 2

alebo ROCOCI

Zmes vhodne substituovaného acyloxymetylketónu t-butylesteru karbobenzoxyaspartylu sa hydrogenuje ekvivalentnou kyselinou chlorovodíkovou alebo inou kyselinou za prítomnosti katalyzátora takého ako paládium na aktívnom uhlí, čím sa získa soľ amínu. Soľ sa môže acylovať s vhodne substituovaným izokyanatom, sulfonylchloridom, chloroformiátom alebo fenylpropionylchloridom, čím sa získajú N-substituované deriváty. Tieto izokyanáty, sulfonylchloridy alebo chlórformiáty sú komerčne dostupné alebo sa môžu syntetizovať pomocou metód opísaných v chemickej literatúre. Chrániaca t-butylesterová skupina sa môže v konečnom kroku odstrániť použitím kyslého prostredia, výhodne trifluóroctovej kyseliny, čím sa získajú deriváty acyloxymetylketónu ukázané v schéme 2.

Schéma 3

Krok A

R2 R¹CO₂H

Spojovacie prost. HOBT, Báza

Krok B CF₃CO₂H

Soľ amínu acyloxymetylketónu Z-asp(Ot-Bu)OH sa syntetizuje a nechá sa reagovať s vhodne substituovanou karboxylovou kyselinou a spojovacím prostriedkom. Spojovacím prostriedkom môžu byť, ale nie je to obmedzené, také prostriedky ako 1,3-dicyklohexylkarbodiimid (DCC), l-(3dimetylaminopropyl)-3-etylkarbodiimidhydrochlorid (EDCI), 1,1'karbonyldiimidazol (CDI), l,l'-karbonylbis(3-metylimidazolium)triflat (CBMIT), izobutylchlórformiát, benzotriazol-1 -yloxytris(dimetylamino)fosfónium hexafluórfosfát (BOP), 2-(3,4-dihydro-4-oxo-l,2,3-benzotriazín-3yl)-l,l,3,3-tetrametylurónium tetrafluórborát (TDBTU) a 2-(lH-benzotriazoll-yl)-l,l,3,3-tetrametylurónium hexafluórfosfát (HBTU). Hydrát 1hydroxybenzotriazolu by sa mal pridať do reakcie na zlepšenie výťažku, zamedzenie izomerizácie, zvýšenie bazicity, výhodne amín taký ako trimetylamín alebo metylmorfolín by sa mal pridať ako zachytávač kyseliny. Výsledný amidový produkt sa nechá reagovať s kyslým médiom, výhodne trifluórctová kyselina, čím sa odstráni t-butylester a získajú sa konečné produkty ako je opísané v schéme 3.

Schéma 4 hci.h₂n

CO₂‘Bu

Krok A

R2 R¹COX(X=CI,F)

Krok B

CF₃CO₂H ^R1

O

O k O

R2

CO₂H

Soľ amínu acyloxymetylketónu Cbz-Asp(Ot-Bu)OH sa syntetizuje a nechá sa reagovať s vhodne substituovaným chloridom kyseliny alebo fluoridom kyseliny, čím sa generuje produkt amidu. Chloridy kyseliny sú komerčne dostupné alebo sa môžu pripraviť reakciou karboxylových kyselín s činidlami takými ako tionylchlorid, bromid fosforitý alebo oxalylchlorid/DMF. Fluoridy kyselín sa pripravia reakciou karboxylovej kyseliny s kyanurovou kyselinou. Predposledný amidový produkt sa nechá reagovať s kyslým médiom, výhodne trifluoroctová kyselina, čím sa odstráni t-butylester a získajú sa konečné produkty ako je to opísané v schéme 4.

Schéma 5

2. NaOH

Krok B

Krok A

1. R¹C0₉H, Spojovacie prost.

Krok C

Vznik Brómmetylketónu ¹

RCO₂H, KF DMF

Krok D CF3CO2H	0 R2 0 < 0 co2h

Soľ hydrochloridu H-Asp(OtBu)OMe sa nechá reagovať s vhodne substituovanou karboxylovou kyselinou a spojujúcim prostriedkom. Hydrát 1hydroxybenzotriazolu by sa mal pridať do reakcie na zlepšenie výťažku, zamedzenie izomerizácie, zvýšenie bazicity, výhodne amín taký ako trimetylamín alebo metylmorfolín by sa mal pridať ako zachytávač kyseliny. Výsledný amidový produkt sa nechá reagovať s alkalickým činidlom takým ako hydroxid sodný, aby sa hydrolyzoval metylester, čím sa získa karboxylová kyselina. Výsledná karboxylová kyselina sa nechá reagovať s chlórformiátom takým ako izobutylchlórformiát, nasledované reakciou s diazometánom a potom s kyselinou bromovodíkovou, čím sa získa metylbrómketón. Reakciou metylbrómketónu s vhodne substituovanou karboxylovou kyselinou a bázou takou ako fluorid draselný, sa získajú požadované ketóny, u ktorých sa docieli odstránenia chrániacej skupiny kyselinou trifluoroctovou, čím sa získajú konečné zlúčeniny ak je to opísané v schéme 5.

Schéma 6

Krok E

Vznik brómmetylketónu jjj. väzba Cbz-AA iv. atcf

Soľ hydrochloridu H-Asp(OctBu)OMe sa nechá reagovať s vhodne chránenou aminokyselinou a spojovacím prostriedkom. Hydrát 1hydroxybenzotriazolu by sa mal pridať do reakcie na zlepšenie výťažku, zamedzenie izomerizácie a zvýšenie bazicity, výhodne amín taký ako trimetylamín alebo metylmorfolín by sa mal pridať ako zachytávač kyseliny. Výsledný amidový produkt sa nechá reagovať s alkalickým činidlom takým ako hydroxid sodný, aby sa hydrolyzoval metylester, čím sa získa karboxylová kyselina. Chrániaca skupina Cbz-amínu sa odstráni s použitím štandardných katalytických hydrogenačných podmienok a väzba ďalšej chránenej aminokyseliny môže prebiehať ako je to opísané vyššie. Tento postup sa opakuje dokiaľ peptid nemá požadovanú dĺžku. Výsledný peptidový produkt sa nechá reagovať s alkalickým činidlom takým ako hydroxid sodný, aby sa hydrolyzoval metylester, čím sa získa karboxylová kyselina. Výsledná kyselina sa potom nechá reagovať s chlórformiátom takým ako izobutylchlórformiát a ďalej s diazometánom a potom s kyselinou bromovodíkovou, čím sa získa metylbrómketón. Reakciou metylbrómketónu s výhodne substituovanou karboxylovou skupinou a bázou takou ako fluorid draselný, sa získajú požadované acyloxymetylketóny, u ktorých sa docieli odobratie chrániacej skupiny kyselinou, čím sa získajú konečné zlúčeniny ako je to opísané v schéme

6.

Schéma 7

Cbz-AA

O

Krok A

H_2l 20% Pd/C

Vhodne substituované acylmetylketóny chránenej aminokyseliny sa syntetizujú. Chrániaca skupina Cbz-amínu sa odstráni s použitím štandardných katalytických hydrogenačných podmienok a aminový produkt sa nechá reagovať s vhodne substituovanou karboxylovou skupinou a spojovacím činidlom. Hydrát 1-hydroxybenzotriazolu by sa mal pridať do reakcie na zlepšenie výťažku, zamedzenie izomerizácie a zvýšenie bazicity, výhodne amín taký ako trimetylamín alebo metylmorfolín by sa mal pridať ako zachytávač kyseliny. Predposledný amidový produkt sa nechá reagovať s kyslým médiom, výhodne trifluoroctová kyselina, na odstránenie t-butylesteru a získanie konečných produktov ako je to opísané v schéme 7.

Schéma 8

pyridín, DMAP

1. Vznik amidu alebo esteru

2. CF₃CO₂H

Anhydrid kyseliny trans-1,2-cyklobexandikarboxylovej sa nechá reagovať so soľou amínu vhodne substituovaného acyloxymetylketónom t-butylesteru aspartylu za prítomnosti pyridínu a 4-dimetylaminopyridínu (DMAP) na získanie amidového produktu. Karboxylová kyselina sa môže funkcionalizovať vhodne substituovanými amínmi alebo alkoholmi a štandardnými spojovacími činidlami, čím sa získajú esterové produkty. Predposledný produkt sa nechá reagovať s kyslým médiom, výhodne trifluoroctová kyselina, čím sa odstráni tbutylester a získajú sa konečné produkty ako je to opísané v schéme 8.

Schéma 9

1.R¹SH, NaH

Me

CO₂R

2. NaOH

1. spojovacie prost. .

2. NaOH

1. Oxidácia

2. CF₃CO₂H

Metylmetakrylát sa nechá reagovať s aniónom vhodne substituovaného sulfidu, čo poskytne Michaelov adukt, ktorý sa hydrolyzuje v bázickom médiu takom ako hydroxid sodný, čím sa získa karboxylová kyselina. Táto kyselina sa spojí so soľou amínu acyloxymetylketónu t-butylesteru aspartylu a spojovacím činidlom, čím sa získa amidový produkt. Pokiaľ je požadovaným produktom sulfid (n=0), nepoužije sa oxidačný krok a t-butylester amidu je odstránený (chrániaca skupina) v kyslom prostredí. Alternatívne: Pokiaľ sulfoxid (n=l) alebo sulfón (n=2) je konečný produkt, amidový meziprodukt sa nechá reagovať s oxidačným činidlom, ktoré môže byť, ale nie je to obmedzené, mchlórperbenzoová kyselina, monoperoxysulfát draselný alebo natrium perborát, čím sa získa požadovaný oxidovaný produkt. T-butylesterová chrániaca skupina predposledného medziproduktu sa odstráni v kyslom médiu, výhodne trifluóroctová kyselina, čím sa získajú konečné zlúčeniny ako je to opísané v schéme 9.

Ο χ

Ο NH

Η

R

Ο Ο

i. n-BuLi, -78°C „X.,A /R' i· NaNfSiMeJ;,,-78°C _„ ON

H ii. R^HjCOCI

LiOH, H₂O_2l ‘BuO,C

THF, voda

O

Spojovacie prost.

ii. BrCH₂CO₂ ^tBu R¹

R³N

1. CF₃CO₂H

u.

⁰ Yr°

2. R₃R₂NH alebo PhCH₂ONH₂ spojovacie prost.

1. PhSiH₃, Pd(PPh3)₄

2. Vznik brómmetylketónu

3. R₂CO₂H, KF, DMF

O O. ^Ph

1. PhSiH₃, Pd(PPh₃)₄

2. Vznik brómmetylketónu

3. R₂CO₂H, KF, DMF

R¹

R³N

O

Ύ

R2 ‘BuO₂C

R¹

H,

.Ph

Pomocný chirálny 4-substituovaný-2-oxazolidín ako je opísaný v Evans, et al.,

J.Org.Chem., 1985; 50:1830 sa zmieša s bázou takou ako n-butyllítium, ale nie je to obmedzené, a ďalej nasleduje reakcia s vhodne substituovaným chloridom kyseliny alebo inou aktivovanou karboxylovou kyselinou, čím sa získa Nacylovaný produkt. Tento produkt sa potom nechá reagovať s bázou takou, ale nie je to obmedzené, ako natrium bis(trimetylsilyl)amid a t-butyl-brómacetát, čo vedie ku vzniku alkylovaného chirálneho produktu. Potom sa pomocný chirálny produkt odstráni použitím hydroxidu litneho a peroxidu vodíka, čím sa získa chirálna kyselina. Reakcia kyseliny so soľou amínu H-Asp(OBz)O-alyl a spojovacím činidlom poskytne sukcinylamidový produkt.

V tomto štádiu procesu, môže byť produkt vypracovaný jedným z dvoch spôsobov. Prvý, v ktorom sa odstráni t-butylester v kyslom médiu, výhodne trifluoroctová kyselina, a výsledná kyselina sa spoja s vhodne substituovaným amínom za prítomnosti spojovacieho prostriedku, čo vedie ku vzniku nového amidového produktu. Ester alylu sa odstráni fenylsilánom a tetrakis(trifenylfosfín)paládiom alebo iným Pd(O) katalyzátorom, čím sa získa karboxylová kyselina, ktorá sa konvertuje na metylbrómketón a potom na acyloxymetylketón. Predposledný medziprodukt sa vystaví katalytickej hydrogenácii na odstránenie benzylesteru, čo poskytne konečné amidové produkty ako je to opísané v schéme 10.

Eventuálne, pri druhom spôsobe, ako získať konečné produkty, sa alylester odstráni použitím fenylsilánu a tetrakistetrakis(trifenylfosfín)paládia alebo iného Pd(0) katalyzátora, čím sa získa karboxylová kyselina. Táto kyselina sa konvertuje na metylbrómketón a potom na acyloxymetylketón. Odstránenie t-butylesteru acyloxymetylketónu trifluórkyslou kyselinou a nasledujúca konverzia výslednej karboxylovej kyseliny na ester rezultuje v nový esterový produkt. Esterifikácia sa môže vykonať použitím rozmanitých techník uvedených v príslušnej literatúre, ktoré zahrnujú, ale nie sú obmedzené, reakcie karboxylovej kyseliny s vhodne substituovaným alkoholom za prítomnosti spojovacieho činidla. Predposledný medziprodukt sa vystaví katalytickej hydrogenácii na odstránenie esteru benzylu a poskytnutie konečných esterových produktov ako je opísané v schéme 10.

Schéma 11

1. PhCH₂Br, DBU

2- Cl₂(g) EtOH:CCI₄(1:9)

R¹

JL cK ^x/XO₂CH₂Ph

1. (R)₂NH, EtgN, CH₂CI₂

2. H₂, 20% Pd/C

2. H-Asp(O‘Bu)-OMe.HCI NMM,CH₂CI₂

3. NaOH, H₂, EtOH

1. SOCI₂ aleboFluorid kyuranový

Vhodne substituovaná S-acetylmerkaptokarboxylová kyselina sa nechá reagovať s benzylbromidom a l,8-diazobicyklo[5.4.0]undek-7-énom (DBU) na získanie benzylesteru, ktorý sa potom nechá reagovať s plynom chlóru na získanie sulfonylchloridu. Sulfonylchlorid sa nechá reagovať s N,N-bis(pmetoxybenzyl)amínom na poskytnutie sulfónamidu, ktorý sa vystaví katalytickej hydrogenácii na získanie karboxylovej kyseliny ako meziproduktu. Kyselina sa aktivuje použitím kyuránového fluoridu, ktorý sa potom zmieša so soľou amínu H-Asp(Ot-Bu)OMe na získanie amidového produktu. Metylester sa hydrolyzuje hydroxidom sodným a karboxylová kyselina sa spracuje na acyloxymetylketón. P-metyoxybenzyl chrániace skupiny sulfónamidu sa odstránia za oxidačných podmienok, výhodne, ale nie je to obmedzené, dusičnan amónno-ceričitý, a chrániaca t-butylesterová skupina sa odstráni v kyslom médiu, výhodne trifluoroctová kyselina na poskytnutie požadovaných sulfónamidových produktov ako je opísané v schéme 11.

Termín „alkyl“, ako je používaný tu, znamená rozvetvený alebo nerozvetvený uhľovodíkový reťazec. Typické príklady alkylových skupín sú metyl, etyl, propyl, izopropyl, izobutyl, butyl, tert-butyl, sec-butyl, pentyl a hexyl.

Termín „alkoxy“ znamená alkylovú skupinu pripojenú na atóm kyslíka.

Typické príklady alkoxy skupín zahrnujú metoxy, etoxy, tert-butoxy, propoxy a izobutoxy.

Termín „halogén“ zahrnuje chlór, fluór, bróm a jód.

Termín „aryl“ znamená aromatický uhľovodík. Typické príklady arylových skupín zahrnujú fenyl a naftyl.

Termín „heteroatóm“ zahrnuje atóm kyslíka, dusíka, síry a fosforu.

Termín „heteroaryl“ znamená arylovú skupinu, v ktorej jeden alebo viac atómov uhlíka aromatického uhľovodíka boli nahradené heteroatómom. Príklady heteroarylových skupín zahrnujú furán, tiofén, pyrol, tiazol, pyridín, pyrimidín, pyrazín, benzofurán, indol, kumarín, chinolín, izochinolín a naftyridín.

Termín „cykloalkyl“ znamená cyklickú alkylovú skupinu. Príklady cykloalkylových skupín zahrnujú cyklopropán, cyklobután, cyklopentán a cyklohexán.

Termín „heterocyklus“ znamená cykloalkylovú skupinu, v ktorej jeden alebo viacej atómov uhlíka bolo nahradených heteroatómom. Príklady heterocyklov zahrnujú piperazín, morfolín a piperidín.

Arylové, heteroarylové alebo cykloalkylové skupiny môžu byť substituované jedným alebo viacerými substituentami, ktoré môžu byť rovnaké alebo rôzne. Príklady vhodných substituentov zahrnujú alkyl, alkoxy, tioalkoxy, hydroxy, halogén, trifluórmetyl, amino, alkylamino, dialkylamino, NO₂, -CN, -CO₂H, -CO₂alkyl, -SO₃H, -CHO, -COalkyl, -CONH₂, -CONHalkyl, -CONHR^q, -CON(alkyl)₂, -(CH₂)„-NH₂, -OH, -CF₃, -OC^Cealkyl, (CH₂)-NH-alkyl, -NHRq, -NHCORq, fenyl, -(CH₂)_n-OH, -(CH₂)_nC(O)NH₂ alebo -(CH₂)„CO₂H, pričom n je 1 až 5 a R^q je atóm vodíka alebo alkyl.

Symbol znamená väzbu.

Príklady iných inhibítorov z rodiny kaspasy zamýšľaných na použitie vo vynáleze zahrnujú inhibítory ICH-1 také ako tie, ktoré sú opísané v patentovej prihláške PCT uverejnenej pod číslom 97/27220.

Termín „inhibitor fosfodiesterázy IV“ je zamýšľaný, aby označoval prostriedky, ktoré inhibujú aktivitu enzýmovej fosfodiesterázy IV. Príklady inhibítorov fosfodiesterázy IV sú známe v odbore a zahrnujú 4arylpyrolidinóny také ako rolipram (k nahliadnutiu napríklad v Sekut, L. et al.(1995) Clin. Exp. Immunol. 100:126-132), nitraquazon (k nahliadnutiu napríklad v Van Wauwe, J. et al. (1995) Inflamm. Res. 44:400-405), denbufylín, tibenelast (k nahliadnutiu napríklad v Banner, K.H. et a/.(1996) Br. J.Pharmacol. 119:1255-1261), CP-80633 (k nahliadnutiu napríklad v Cohan, V. L. et a/.(1996) J.Pharmacol. Exp.Therap. 278:1356-1361), chinazolíndióny také ako CP-77059 (k nahliadnutí napríklad v Sekut, L. et «/.(1995) Clin. Exp. Immunol. 100:126-132).

Termín „agonista beta-2“je zamýšľaný, aby označoval prostriedky, ktoré stimulujú adrenergický receptor beta-2. Príklady angonistov beta-2 sú známe v odbore a zahrnujú salmeterol (k nahliadnutiu napríklad v Sekut, L. et ar/.(1995) Clin. Exp. Immunol. 99:461-466), fenoterol a izoproterenol (k nahliadnutiu napríklad v Severn, A. et al.(1992) J.. Immunol. 148:3441-3445).

Termín „STAT4“ je zamýšľaný, aby označoval faktor transkripcie obsiahnutý v reakciách IL-12 (k nahliadnutiu napríklad v Thierfelder, W.E. et al.(1996) Náture 382:171-174; Kaplan, M. H. et al.(\996) Náture 382:174177). Termín „inhibítor STAT4“ označuje prostriedok, ktorý inhibuje aktivitu faktoru transkripcie STAT4 tak, že reakcie na IL-12 sú inhibované.

Termín „protilátka“, ako je používaný tu, sa vzťahuje na molekuly imunoglobulínu a imunologický aktívne determinanty molekúl imunoglobulínu, menovite molekuly, ktoré obsahujú väzbové miesto antigénu, ktoré špecificky viažu (imunoreaguje s) antigén.

Termín „protilátka“ je ďalej zamýšľaný, aby zahrnoval bišpecifické a chimérické molekuly majúce aspoň jeden väzbový determinant antigénu v

odvodený z molekuly protilátky. Dalej ešte, aj keď H a L reťazce Fv fragmentu sú zakódované jednotlivými génmi, syntetická väzba môže byť vyrobená tak, že im umožní, aby boli vyrobené rekombinantnými metódami ako jednoduchý proteínový reťazec (známa ako jednoduchá reťazová protilátka, sAb; Bird et al. 1988 Science 242:423-426; a Huston et al., 1988 PNAS 85:5879-5883). Také jednoduché reťazové protilátky sú tiež obsiahnuté v termíne „protilátka“ a môžu byť využité ako väzba determinantov vo vzore a technike multišpecifickej väzbovej molekuly.

Termín „fragment protilátky“, ako je používaný tu, označuje aktívny fragment protilátky, ktorý si zachováva schopnosť viazať (imunoreagovať s) antigén. Príklady fragmentov protilátky zahrnujú: fragment Fab skladajúci sa z domén V_L, V_H,C_L a C_Hi; fragment Fd skladajúci sa z domén V_H a Cm; fragment F_v skladajúci sa z domén Vl a Vh jednoduchých ramenných protilátok; fragment dAb (Ward et al., 1989 Náture 341:544-546) skladajúci sa z domény

Vh; izolovanú komplementaritu determinujúcu oblasť (CDR) a fragment F'(ab')2, bivalentný fragment skladajúci sa z dvoch Fab' fragmentov spojených disulfidovým mostíkom v oblasti ginglymu. Tieto fragmenty protilátky sa získavajú použitím konvenčných techník dobre známych v odbore tým, ktorí majú skúsenosti, a fragmenty sú vyhľadávané pre užitočnosť v rovnakom spôsobe ako sú intaktné protilátky.

Termín „vystavaný väzbový proteín“, ako je používaný tu, je zamýšľaný, aby zahrnoval molekuly získané z protilátky alebo inej väzbovej molekuly (napr. receptor alebo ligand), ktorá si zachováva požadovanú väzbovú špecificitu, ale ktorá bola vystavaná rekombinantnými technikami DNA a/alebo sú vyjadrené použitím rekombinantných techník DNA. Príklady vystavaných väzbových proteínov zahrnujú rozpustné a obmedzené formy receptorov, dimérov receptorov (napr. diméry receptorov p40 IL-12) a pozmenené alebo mutované formy protilátok, ligandov alebo receptorov vybraných použitím kombinatoriálnych knižníc (napr.metóda zobrazenia knižnice fágov).

Termín „antagonista buniek NK“, ako je používaná tu, je zamýšľaný, aby zahrnoval protilátky, fragmenty protilátky a techniku viazania proteínov, ktoré sú schopné vyprázdniť bunky NK/podobné NK, pokiaľ sú aplikované subjektu. Príklady antagonistov buniek NK zahrnujú protilátky proti asialo-GMl a protilátky NK1.1.

Termíny „ochorenie rezistencie proti steroidu“ a „subjekt rezistentný proti steroidu“, ako sú používané tu, sú zamýšľané, aby zahrnovali ochorenie a subjekty, ktoré významne nereagujú na terapiu kortikosteroidmi pred ošetrením, podľa spôsobov vynálezu. Rezistencia proti steroidu je tiež označovaná ako odolnosť voči steroidu.

Termín „imunozápalové ochorenie alebo porucha“ je zamýšľaný, aby zahrnoval zápalové ochorenia alebo poruchy, v ktorých imunitné bunky a/alebo cytokíny sú zahrnuté do patofyziológie ochorenia alebo poruchy. Termín „akútna zápalová porucha“ je zamýšľaný, aby zahrnoval poruchy a epizódy porúch charakterizované rýchlym začiatkom príznakov spojených so zápalovou reakciou a relatívne krátky čas trvania príznakov, kdežto termín „chronická zápalová porucha“ je zamýšľaný, aby zahrnoval poruchy charakterizované pokračujúcou prítomnosťou príznakov spojených so zápalovou reakciou a stále trvajúcim časom trvania príznakov.

I, Príklady uskutočnenia vynálezu

V rámci uskutočnenia, vynález poskytuje spôsob na moduláciu reakcie na kortikosteroid u subjektu, obsahujúci aplikáciu subjektu:

prostriedok, ktorý antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu interferónu-γ (IFN-γ) u subjektu, prostriedok je aplikovaný v dávke a spôsobom podania dostačujúcom na inhibíciu produkcie IFN-γ u subjektu a kortikosteroid, tak, že reakcia subjektu na kortikosteroid je modulovaná v porovnaní s tým, keď je subjektu aplikovaný samotný kortikosteroid.

V rámci uskutočnenia sa spôsob týka aplikácie prostriedku, ktorý je antagonista IL-18. Antagonista IL-18 je aplikovaný subjektu v dávke a spôsobom podania dostačujúcim na inhibíciu aktivity IL-18 u subjektu. Antagonista IL-18 môže pôsobiť napríklad inhibíciou syntézy IL-18 u subjektu, inhibíciou aktivity cytokínu IL-18 u subjektu, inhibíciou interakcie IL-18 s receptorom IL-18 alebo inhibíciou aktivity receptoru IL-18.

V rámci výhodného uskutočnenia je antagonista IL-18 inhibitor proteázy z rodiny kaspasy. Proteázy z rodiny kaspasy a predovšetkým ICE spracovávajú formy prekurzoru IL-18 na zrelú (menovite aktívnu) formu (k nahliadnutiu napr. Príklad 4). Podľa tohto, aj keď nie je zamýšľané, aby bolo limitované mechanizmom, sa uvažuje, že inhibitor proteázy z rodiny kaspasy antagonizuje aktivitu IL-18 inhibíciou spracovania IL-18 z jeho formy prekurzoru na jeho zrelú (menovite aktívnu) formu. Výhodný inhibitor proteázy z rodiny kaspasy na použitie v spôsoboch vynálezu je ICE inhibitor. Dodatočne alebo eventuálne iné proteázy z rodiny kaspasy, ktoré sú schopné štiepenia prekurzoru IL-18 na zrelý IL-18 (taký ako Ich-2 (kaspasa-4) a ICE_reiIII (kaspasa-5)), môžu byť inhibované. Chemické prostriedky, ktoré môžu inhibovať aktivitu ICE a iné proteázy z rodiny kaspasy sú známe v odbore, vrátane derivátov peptidylu, analóg kyseliny azaaspartovej a gama-pyrón-3-etánovej kyseliny (k nahliadnutiu U.S.Patent číslo 5,411,985, U.S.Patent číslo 5,430,128, U.S.Patent číslo 5,434,248, U.S.Patent číslo 5,565,430, U.S.Patent číslo 05,416,013, patentovej prihlášky PCT uverejnenej pod číslom WO 94/00154, patentovej prihlášky PCT uverejnenej pod číslom WO 93/16710, patentovej prihlášky PCT uverejnenej pod číslom WO 93/14777, patentovej prihlášky PCT uverejnenej pod číslom WO 93/05071, patentovej prihlášky PCT uverejnenej pod číslom WO 95/35308, európskej patentovej prihlášky EP 547 699 a európskej patentovej prihlášky EP 519 748). Ďalšie vhodné inhibítory ICE a iné inhibítory z rodiny kaspasy sú uverejnené v U.S. Application Seriál No. 08/700,716 a U.S. Provisional Applications Seriál Nos. 60/028,322,60/028,324,60/028,313 A 60/028,323). Presná dávka a režim pre aplikovanie inhibítora ICE alebo proteázy z rodiny ICE bude nevyhnutne závisieť na potrebách liečenia subjektu, typu liečenia, účinnosti zlúčeniny a stupni sily ochorenia u subjektu. Viac-menej nelimitujúci príklad rozsahu dávky pre inhibítor ICE a iné proteázy z rodiny kaspasy je od asi 0.05 do asi 150 mg/kg telesnej váhy/denne.

V rámci iných uskutočnení je antagonista IL-18 protilátka, fragment protilátky alebo vystavaný väzbový protein, ktorý viaže IL-18 alebo receptor IL-18. Takéto väzbové prostriedky môžu byť pripravené štandardnými spôsobmi známymi v odbore na pripravenie polyklonálnych a monoklonálnych protilátok a rekombinantné väzbové proteíny a sú ďalej opísané napríklad v európskej patentovej prihláške 692 536, európskej patentovej prihláške 712 931, patentovej prihláške PCT uverejnenej pod číslom WO 97/24441 a patentovej prihláške PCT uverejnené pod číslom WO 97/44468.

V rámci ďalšieho uskutočnenia, spôsob podľa vynálezu zahrnuje aplikáciu prostriedku, ktorý je antagonista IL-12. Antagonista IL-12 je aplikovaný subjektu v dávkach a spôsobom podania dostačujúcim na inhibíciu aktivity IL-12 u subjektu. Antagonista IL-12 môže spôsobiť napríklad inhibíciu syntézy IL-12 u subjektu, inhibíciu cytokinnej aktivity IL-12 u subjektu, inhibíciu interakcie IL-12 s receptorom IL-12 alebo inhibíciu aktivity receptoru IL-12.

V rámci uskutočnenia vynálezu je antagonista IL-12 protilátka, fragment protilátky alebo vystavaný väzbový proteín, ktorý viaže IL-12 alebo receptor IL-12. Výhodný antagonista IL-12 je monoklonálna protilátka proti IL-12. Takéto protilátky boli opísané v odbore (k nahliadnutiu napríklad Chizzonite, R., et al., (1991) J. Immunol. 147: 1548-1556). Schopnosť monoklonálnych protilátok proti IL-12 inhibíciou reakcií ochorenia boli tiež opísané v odbore (k nahliadnutiu napríklad Leonard, J.P., et al., (1995) J. Exp. Med. 18Γ. 381386); Neurath, M.F., et al., (1995) J. Exp. Med. 182: 1281-1290). Ďalší typ antagonistu IL-12 je homodimér p40 (k nahliadnutiu napríklad Gillessen, S., et al., (1995) Eur. J. Immunol. 25: 200-206; Gately, M. K., et al. (1996) NY Acad. Sci. 795: 1-12; Ling, P., et al. (1995) J. Immunol. 154: 116-127). Ešte ďalší typ antagonistu IL-12 je forma s nízkou aktivitou receptora IL-12 ako je opísané v európskej patentovej prihláške EP 638 644 a U.S. patentovej prihláške číslo 5,536,657.

Nelimitujúce príklady antagonistov IL-12 na použitie v spôsoboch uskutočnenia vynálezu zahrnujú monoklonálne a polyklonálne protilátky a ich, chimérické protilátky a fragmenty chimérických protilátok, rozpustné receptory IL-12 a ich fragmenty, reaktívne peptidy alebo ich fragmenty, chemicky alebo geneticky modifikované peptidy IL-12, subjednotky IL-12 a ich fragmenty, homopolyméry subjednotiek IL-12 a ich fragmenty a malé organické molekuly designované na inhibovanie bioaktivity IL-12 alebo receptorov IL-12. Príprava antagonistov IL-12, vrátane: (i) druhu, ktorý viaže IL-12 alebo ich biologicky aktívne fragmenty a (ii) druhu, ktorý interferuje s väzbovými IL-12 na receptoroch alebo iné väzbové proteíny, bola opísaná v odbore (k nahliadnutiu v patentovej prihláške PCT uverejnenej pod číslom WO 95/24918 Leonard, et al., the contents of which are expressly incorporated herein by reference; k nahliadnutiu tiež v Presky, D. H. et al., (1995 ) Res. Immunol. 146:439-445).

V rámci ďalšieho uskutočnenia je antagonista IL-12 používaný v spôsobe vynálezu ako prostriedok, ktorý stimuluje produkciu cyklickej AMP (cAMP) v bunkách, ktoré produkujú IL-12. Produkcia IL-12 bola ukázaná, že sa inhibuje zvýšením intracelulárnej produkcie cAMP (k nahliadnutiu napríklad, van der Pouw Kraan et al. (1995) J. Exp. Med. 181:775-779). Príklady prostriedkov, ktoré môžu byť používané na stimulovanie intracelulárnej produkcie cAMP zahrnujú inhibítory fosfodiesterázy IV a agonistu beta-2. Ako bolo demonštrované v príklade 3 je aplikácia inhibítora fosfodiesterázy IV v modely septického šoku inhibovaná produkciou IL-12 navodenou LPS. Príklady vhodných inhibítorov fosfodiesterázy IV na použitie v spôsoboch vynálezu zahrnujú rolipram, denbufylin, tibenelast, nitroquazon a CP-80633. Príklady agonistov beta-2 na použitie v spôsoboch vynálezu zahrnujú salmeterol, fenoterol a izoproterenol. Presná dávka a režim na aplikáciu inhibítora fosfodiesterázy IV alebo agonistu beta-2 bude nevyhnutne závisieť na potrebách subjektu, ktorý je ošetrovaný, typu liečenia, účinnosti zlúčeniny a stupni sily ochorenia u subjektu. Viac-menej nelimitujúci príklad rozpätia dávky pre inhibítory fosfodiesterázy IV alebo agonistu beta-2 je od si 0.05 do asi 150 mg/kg na telesnú hmotnosť/denne. V rámci výhodného uskutočnenia je prostriedok, ktorý stimuluje produkciu cyklickej AMP (cAMP) (napríklad inhibítor fosfodiesterázy IV alebo agonista beta-2) aplikovaný sústavne (napríklad perorálne alebo intravenózne) na inhibíciu produkcie IL-12 sústavne monocyty a makrofágy.

V rámci ďalšieho uskutočnenia je antagonista IL-12 používaný v spôsoboch vynálezu inhibítor STAT4. STAT4 je faktor transkripcie, u ktorého bolo ukázané, že je zapojený do reakcií IL-12. (k nahliadnutiu napríklad, Thierfelder, W. E. et al. (1996) Náture 382:171-174; Kaplan, M. H. et al. (1996ý Náture 382:174-177). Preto reakcie IL-12 v subjekte môžu byť inhibované pomocou aplikácie inhibítora STAT4.

Iné inhibítory aktivity IL-12, ktoré sú známe v odbore môžu tiež byť používané v spôsoboch vynálezu. Napríklad patentová prihláška PCT číslo WO 96/40093 uvádza deriváty bifenylu na antagonizovanie vyvolaných imunitných reakcií IL-12. Takéto deriváty bifenylu môžu byť používané ako antagonisti IL-12 v spôsoboch vynálezu.

V rámci ďalšieho uskutočnenia sa spôsob vynálezu týka aplikácie prostriedku, ktorý je antagonista buniek NK. Antagonista buniek NK je aplikovaný subjektu v dávkach a spôsobom podania lieku dostačujúcim na inhibíciu aktivity IFN-γ u subjektu. Výhodne antagonista buniek NK je protilátka, fragment protilátky alebo vystavaný väzbový protein, ktorý sa špecificky viaže na bunky NK/podobnej NK tak, že subjekt je týchto buniek zbavovaný alebo eliminovaný. Preto výhodný antagonisti buniek NK sa viažu na špecifické povrchové indikátory prítomné na bunkách NK/podobných NK. Jednotlivý výhodný antagonisti buniek NK sú protilátky proti asialo-GMl a protilátky NK1.1., v ktorých bolo ukázané, že sú účinné pri zbavovaní aktivity buniek NK/podobných NK zo subjektu (k nahliadnutiu príklad 10; Axelsson, LG. et al. (1996) Inflamm. Res. 45:181-191; Heremans, H. et al. (1994) Eur. J. Immunol. 24:1155-1160).

Iné protilátky, ktoré označujú povrchové indikátory, ktoré identifikujú bunky NK/podobné NK zahrnujú protilátky reaktívne s receptormi Fc-IgG B73.1 („Fc-IgG receptors B73„) a Leu 11 (CD16)(Lancer, L.L. et al. (1983) J. Immunol. 131:1789-1796; Perussia, B. et al. (1983) J. Immunol. 130:21332141), Leu 7 (proti HNK1, ktorý identifikuje bunky NK zo 40-60% ; Abo, T. and Balch, C.M. (1981) J. Immunol. 127:1024-1029) a OKT11 (CD2, ktorý identifikuje 50 % alebo viacej buniek NK ; Lancer, L.L. et al. supra; Perussia,

B. et al., supra). Iné špecifické povrchové antigény buniek NK a antigénmi k nim, ktoré boli opísané, zahrnujú antigén DX1 (k nahliadnutiu patentová prihláška PCT číslo WO 95/02611 ), PEN5-alfa a PEN5-beta glykoproteínový pár (k nahliadnutiu patentová prihláška PCT číslo WO 95/06247) a antigén NKB1 (k nahliadnutiu patentová prihláška PCT číslo WO 95/20604). Presné dávkovanie a režim na aplikáciu antagonistu buniek NK bude nevyhnutne závisieť na potrebách subjektu, ktorý je liečený, typu ochorenia, účinnosti zlúčeniny a stupni sily u subjektu. Viac-menej nelimitujúci príklad rozpätia dávky pre protilátky proti bunkám NK/podobným NK je od si 0.01 do asi 150 mg/kg na telesnú hmotnosť/denne. Jednotlivá dávka protilátky môže byť dostačujúca na zbavenie alebo eliminovanie aktivity buniek NK/podobných NK alebo, alternatívne, mnohopočetné dávky môžu byť podávané pri potrebe na zbavenie alebo eliminovanie aktivít buniek NK/podobných NK. Výhodne je antagonista buniek NK aplikovaný intravenóznym alebo intraperitoneálnym spôsobom podania.

V spôsoboch vynálezu je prostriedok, ktorý antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu interferónu-γ (IFN-γ), aplikovaný subjektu v kombinácii s jedným alebo viacerými kortikosteroidmi. Termín „v kombinácii s“ kortikosteroidom je zamýšľaný, aby zahrnoval simultánnu aplikáciu prostriedku a kortikosteroidu, aplikácia prostriedku je prvá nasledovaná kortikosteroidom alebo opačne. Akékoľvek terapeuticky užitočné kortikosteroidy známe v odbore môžu byť používané v spôsoboch vynálezu. Kortikosteroidy sú typicky klasifikované časom trvania ich tkanivového účinku: zlúčeniny krátko pôsobiace (beklometazón, flunizolid, hydrokortizón, kortizón), stredne pôsobiace zlúčeniny (napríklad prednizón, prednizolón, metylprednizolón, triamcinolón, deflazakort) a dlho pôsobiace zlúčeniny (napríklad dexametazón, beta metazón). Jeden alebo viacej kortikosteroidov môže byť aplikovaných subjektu spôsobom podania a v efektívnych dávkach na dosiahnutie požadovaného terapeutického výsledku. Príklady vhodných spôsobov podania dávky zahrnujú intravenózne aplikácie, perorálnu aplikáciu, miestnu aplikáciu, aplikáciu inhaláciou (napríklad bronchiálne aplikácie) a lokálnu injekciu (napríklad intraspojenie(„intra-joint„)). Presné dávkovanie a režim na aplikovanie kortikosteroidu subjektu bude nevyhnutne závisieť na potrebách subjektu, ktorý je liečený, typu ochorenia, účinnosti zlúčeniny a stupni sily ochorenia u subjektu. Viac-menej nelimitujúci príklad rozpätia dávky pre kortikosteroidy je od si 0.05 mg/denne do asi 1 mg/denne, pritom rozpätie dávok závisí na samotnom používaní kortikosteroidu. Určité výhodné dávkovacie režimy využívajú alternatívnu dennú aplikáciu (napríklad vysoká dávka intravenóznej pulznej terapie).

Prípravky kortikosteroidu vhodné na aplikáciu sú dobre známe v odbore a komerčne dostupné. Napríklad dexametazónacetát, 16 mg/ml vodná suspenzia, je vhodný na intramuskulárnu injekciu pri liečení reumatických, dermatologických, oftalmických, gastrointestinálnych, hematologických, neoplastických, alergických stavov a porúch kolagénu. Nelimitujúce príklady rozpätia dávkovania zahrnujú 0.8 mg ,1.5 mg , 4 mg a 16 mg dexametazónu injekciou.

Hydrokortizón je vhodný ako sterilný vodný roztok na intravenózne, intramuskulárne a subkutánne injekcie a je silne účinný protizápalový prostriedok pre také stavy ako osteoartritída, reumatická artritída, mladistvá reumatická artritída, akútna chronická burzitída. Výhodné počiatočné dávky môžu byť od 15 mg do 250 mg pre ľudský subjekt denne. Výhodné podávanie dávok je perorálne alebo parenterálne a môže byť aplikované v polovičných denných dávkach dvakrát za deň alebo viackrát. Injekcia hydrokortizónu môže byť pridaná do injekcie chloridu sodného alebo do injekcie dextrózy a aplikovaná intravenóznym kvápaním. Hydrokortizónvalerát, 0.2% váhy, je formulovaný ako krém na miestne použitie, pod menom Westcort. Výhodné podávanie dávok zahrnuje aplikáciu slabého tenkého povlaku na postihnuté oblasti niekoľkokrát denne.

Bekonáza (beklometazón) je vhodný na inflamáciu nazálnych ciest a dutín napríklad ako 8.4 mg pre 200 meraných podaní dávok v spreji v 0.042% vodnej suspenzii, dodávaný v merných dávkach 100 mg obsahujúcich 42 μg na mernú dávku tak, že denné nazálne dodanie sa skladá z výhodne 42 μg nosnou dierkou, 84 μg nosnou dierkou, 168 μg nosnou dierkou, 336 μg nosnou dierkou, 672 μg nosnou dierkou alebo 1,344 μg nosnou dierkou. Je výhodne dodávané napríklad vo vodnom médiu v suspenzii s mikrokryštalickou celulózou, karboxymetylcelulózou sodnou, dextrózou, benzalkóniumchloridom, polysorbátom 80, a 0.25% v /w fenyletylalkoholom. Dodatočné hnacie látky a média sú zahrnuté v niektorých prípravkoch.

V určitých uskutočneniach, v ktorých prostriedok vynálezu je koaplikovaný s kortikosteroidom, je prostriedok aplikovaný sústavne na reguláciu produkcie IFN-γ, zatiaľ čo kortikosteroid je aplikovaný buď miestne alebo sústavne. Napríklad v určitých uskutočneniach, keď inhibítor fosfodeiesterázy IV alebo agonista beta-2 je aplikovaný dohromady s kortikosteroidom, inhibítor fosfodeiesterázy IV alebo agonista beta-2 je aplikovaný sústavne intravenóznym alebo perorálnym spôsobom a kortikosteroid je aplikovaný buď sústavne alebo miestne. Dodatočne, v určitých uskutočneniach spôsobov vynálezu je použitie inhibítora fosfodeiesterázy IV alebo agonistu beta-2 v kombinácii s kortikosteroidom na liečenie astmy, špecificky vyňaté z rozsahu vynálezu.

Spôsoby vynálezu môžu byť používané pri liečení rôznych poruchách imunity a zápalových poruchách. Napríklad, vo výhodnom uskutočnení, je liečený subjekt, ktorý utrpel septický šok (menovite spôsoby vynálezu umožňujúce pre kortikosteroidy, aby boli používané pri liečení septického šoku). V ďalšom výhodnom uskutočnení je liečený subjekt, ktorý má Crohnovu chorobu. V ďalšom výhodnom uskutočnení je liečený subjekt, ktorý trpí astmou. V ďalšom výhodnom uskutočnení je liečený subjekt, ktorý trpí ochorením štepu proti hostiteľovi alebo rejekciou transplantátu. V ďalšom výhodnom uskutočnení je liečený subjekt, ktorý trpí autoimunitným ochorením.

V ďalšom uskutočnení je liečený subjekt, ktorý trpí ochorením alebo imunozápalovou poruchou. Nelimitujúce príklady imunozápalových ochorení alebo porúch, ktoré môžu byť liečené podľa vynálezu zahrnujú astmu, syndróm dospelej respiračnej úzkosti, sústavný erytematózny lupus, zápalové črevné ochorenie (vrátane Crohnovej choroby a vredovitej sklerózy), mnohopočetnú sklerózu, na inzulíne závislú diabetes, autoimunitnú artritídu (vrátane reumatickej artritídy, mladistvej reumatickej artritídy („juvenile rheumatoid arthritis,,), psoriatickej artritídy), zápalový pulmonálny syndróm, všeobecný pemfigus, idiopatickú trombocytopenickú purpuru, autoimunitnú meningitídu, ťažkú myasténiu, autoimunitnú tyreoiditídu, dermatitídu (vrátane atopickej dermatitídy a ekzémovej dermatitídy), psoriázu, Sjógrenov syndróm („Sjógren's Syndróme,,) (vrátane sekundárnej suchej keratokonjunktivitídy k Sjogrenovmu syndrómu), plošnú holohlavosť, alergické reakcie spôsobené reakciami na pokúšanie člankovcom, aftózny ulkus, iritídu, konjunktivitídu, keratokonjunktivitídu, kožný erytematózny lupus, sklerodermiu, vaginitídu, proktitídu, erupciu lieku (takého ako Stevens-Johnsonov syndróm („StevensJohnson syndróme,,)), leprové reakcie na zvrat, uzlinatú lepra erytému („erythema nodosum leprosum,,), autoimunitnú uveitídu, alergickú encefalomyelitídu, aplastickú anémiu, čistú červenú bunkovú anémiu („pure red celí anémia,,), idiopatickú trombocytopéniu, polychondritídu, Wegenerovu granulomatózu („Wegener's granulomatosis,,), chronickú aktívnu hepatitídu, Gravesovu oftalmopatiu („Graves opftalmopatiu“), primárnu biliárnu cirhózu, zadnú uveitídu a interstíciálnu fibrózu pľúc.

V ďalšom uskutočnení je liečený subjekt, ktorý trpí akútnou zápalovou poruchou. Príklady akútnej zápalovej poruchy, ktoré môžu byť liečené zahrnujú ochorenie štepu proti hostiteľovi, rejekciu transplantátu, septický šok, endotoxemiu, Lymskú artritídu („Lyme arthritis,,), infekčnú meningitídu (napríklad vírusová, bakteriálna, spojené Lymské ochorenie), akútny záchvat astmu a akútny záchvat autoimunitnej choroby.

V ďalšom uskutočnení je liečený subjekt, ktorý trpí chronickou zápalovou poruchou. Nelimitujúce príklady chronickej zápalovej poruchy, ktoré môžu byť liečené zahrnujú astmu, artritídu rubeoly a chronické autoimunitné ochorenie také ako sústavný erytematózny lupus, psoriázu, zápalové črevné ochorenie, vrátane Crohnovej choroby a vredovitejúcej kolitídy, mnohopočetnej sklerózy a reumatickej artritídy.

V určitých prípadoch prostriedok, ktorý antagonizuje jednotlivé objekty, ktoré regulujú IFN-γ u subjektu, môžu byť výhodné na ošetrenie jednotlivých porúch. Napríklad, aj keď nie je zamýšľané, aby bol limitovaný mechanizmus, poruchy, v ktorých IFN-γ je prednostne alebo prevažne produkovaná bunkami NK, sú výhodne liečené použitím prostriedku, ktorý antagonizuje IL-18 (taký ako inhibítor ICE) alebo priamo antagonizuje bunky NK (menovite antagonistu bunky NK, taký ako protilátka proti bunkám NK/podobným NK), v kombinácii s kortikosteroidom. Alternatívne poruchy, v ktorých je IFN-γ prednostne alebo prevažne produkovaný T-bunkami sú výhodnejšie liečené použitím prostriedku, ktorý antagonizuje IL-12 (napríklad protilátka proti IL-12 alebo prostriedok, ktorý stimuluje intracelulárnu produkciu cAMP), kombináciou s kortikosteroidom. Pri iných okolnostiach môže byť prospešné použiť oba tzn. antagonistu IL-18 aj antagonistu IL-12 (napríklad pri liečení porúch, v ktorých produkcia IFN-γ je príspevkom obidvoch dvoch T-buniek a buniek NK).

Prostriedok a kortikosteroid sú aplikované subjektu pri potrebe ošetrenia podľa štandardných spôsobov podania dávky lieku dobre známymi v odbore, jednotlivý spôsob podania a dávky prostriedku a kortikosteroidu sú vybrané na základe potrieb na liečenie subjektu, typu liečenia, účinnosti zlúčeniny a stupni sily ochorenia u subjektu. Prostriedok a kortikosteroid sú aplikované v „účinnej terapeutickej dávke“, čo znamená to, že množstvo terapeutického prípravku ktoré, keď je aplikované subjektu vyvoláva zlepšenie poruchy v porovnaní s týmito subjektami, ktorým nebol aplikovaný liek. Bežnými znalosťami v odbore môže byť určenie a predpísanie požadovaného účinného terapeutického množstva prostriedku a kortikosteroidu. Prostriedok a kortikosteroid vynálezu sú aplikované subjektu v biologicky kompaktibilných formách vhodných na farmaceutickú aplikáciu in vivo na vyvolanie požadovanej terapeutickej reakcie. „Biologicky kompaktibilnými formami vhodnými na farmaceutickú aplikáciu in vivo„ sa rozumie forma lieku, ktorá sa aplikuje takým spôsobom, pri ktorom terapeutické účinky prípravku prevažujú nad akýmikoľvek toxickými účinkami a vedľajšími účinkami. Okrem toho prostriedok vynálezu, ktorý antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu IFN-γ u subjektu, je aplikovaný subjektu v dávke a spôsobom podania dostačujúcim na inhibíciu produkcie IFN-γ u subjektu. Podobne antagonista IL12 alebo antagonista IL-18 vynálezu je aplikovaný, samostatne, subjektu v dávke a spôsobom podania dostačujúcim na inhibíciu aktivity IL-12 alebo aktivity IL-18 u subjektu.

Modely zvierat so zápalovými a imunologickými poruchami, ktoré sa akceptujú v odbore ako modely ľudského ochorenia môžu byť používané na vyhodnotenie rôznych terapeutických režimov vynálezu. Napríklad P.acweí/LPS model septického šoku opisovaný v príkladoch môže byť používaný na vyhodnotenie účinnosti terapeutických režimov na liečenie, nelimitujúce príklady, ktoré zahrnujú experimentálnu kolitídu (k nahliadnutiu napríklad Neurath, M. F. et al. (1995) J. Exp. Med. 182:1281-1290), experimentálnu alergickú encefalomyelitídu (k nahliadnutiu napríklad Leonard,

K. J. et al. (1995/ J. Exp. Med. 181:381-386), kolagénom navodenú artritídu („collagen-induced arthritis,,) (Banerjee, S. et al. (1989) J. Immunol. 142:2237-2243) a ľudský TNFa transgénový model polyartritídy (k nahliadnutiu napríklad Keffer, J. et al. EMBO J (1991) 10:4025-4031). Na terapeutické režimy týkajúce sa inhibície aktivity ICE, myší ochudobnených na ICE môžu byť používané ako model kompletnej inhibície aktivity ICE. Také myši ICE -/- boli opísané v odbore (k nahliadnutiu napríklad Li, P., et al. (1995) Celí 80:401-411 a patentová prihláška PCT číslo WO 96/12025).

Spôsoby vynálezu sú užitočné na moduláciu reakcie kortikosteroidu pri rôznych klinických stanoveniach. Napríklad v jednom uskutočnení sú spôsoby vynálezu používané na reverzovanie rezistencie voči steroidu u subjektu v porovnaní s tým, keď je subjektu aplikovaný samotný kortikosteroid. V ďalšom uskutočnení sú spôsoby vynálezu používané na zvýšenie senzitivity voči steroidu u subjektu v porovnaní s tým, keď je subjektu aplikovaný samotný kortikosteroid. V ešte ďalšom uskutočnení je kortikosteroid aplikovaný subjektu podľa rozvrhu, ktorý redukuje dávky kortikosteroidu v priebehu doby a spôsob zlepšenia spontánnej reakcie na steroidy spojenú s aplikáciou redukovaných dávok kortikosteroidov. Schopnosť spôsobov vynálezu na zvýšenie senzitivity voči steroidu (menovite mať „obmedzený účinok steroidov“) môže preto umožniť použitie terapie kortikosteroidmi v klinických stanoveniach, v ktorých predtým také terapie boli kontraindikované. Napríklad použitie spôsobov vynálezu môže umožniť terapiu kortikosteroidmi u pacientov, ktorí predtým nemohli byť takto liečení, pretože to nedovolili škodlivé vedľajšie účinky terapie kortikosteroidov, takými ako sú malé deti (napríklad u mladistvých reumatická artritída), pacienti s nekontrolovateľnou diabetes a pacienti s hypertenziou.

Ďalší aspekt vynálezu sa týka spôsobu modulácie reakcie na kortikosteroidy u subjektu, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje:

vyberanie subjektu pri potrebe modulácie reakcie na kortikosteroid; a aplikovanie subjektu prostriedok, ktorý antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu interferónu-γ (IFN-γ) u subjektu, prostriedok, ktorý je aplikovaný v dávke a spôsobom podania dostačujúcim na inhibíciu produkcie IFN-γ u subjektu, tak, že reakcia subjektu na kortikosteroid je modulovaná v porovnaní s tým, keď je subjektu aplikovaný samotný kortikosteroid.

Subjekt, ktorý je vybraný na liečenie podľa spôsobu vynálezu môže byť napríklad subjekt, ktorý je rezistentný voči kortikosteroidu pred aplikáciou prostriedku. Alternatívne, subjekt, ktorý je vybraný na liečenie môže byť subjekt, ktorý je citlivý na kortikosteroidy pred aplikáciou prostriedkov, ale ktorý vykazuje zvýšenú senzitivitu na kortikosteroidy po aplikácii prostriedku. Príklady takéhoto subjektu sú pacienti, ktorí trpia poruchou závislosti na steroidoch, u ktorých môže byť porucha liečená nižšími dávkami kortikosteroidov, pokiaľ sú liečení podľa spôsobov vynálezu. Ďalší príklad takéhoto subjektu je pacient, ktorému terapia steroidmi spôsobila kontraindikáciu vedľajšími účinkami, pokiaľ je samotný kortikosteroid aplikovaný, ale ktorý môže tolerovať nižšiu dávku kortikosteroidu, pokiaľ je kortikosteroid aplikovaný v súhlase so spôsobmi vynálezu. Ďalej subjekt, ktorý je vybraný na liečenie podľa spôsobu vynálezu môže byť taký subjekt, ktorému aplikácia prostriedku zlepšuje spontánnu reakciu na steroidy u subjektu, ale ktorý už podstúpil terapiu kortikosteroidmi s následným zastavením tejto terapie. Prostriedky na antagonizáciu objektu, ktorý reguluje produkciu IFN-γ u subjektu, sú opísané vyššie.

II. Farmaceutické prípravky

Ďalší aspekt vynálezu sa týka farmaceutických prípravkov na moduláciu reakcie na kortikosteroidy. V rámci uskutočnenia, farmaceutický prípravok vynálezu obsahuje prostriedok, ktorý antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu interferónu-γ (IFN-γ) u subjektu, kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič. Ako je pojednávané vyššie, objekt, ktorý je antagonizovaný môže byť napríklad IL-18, IL-12 alebo bunky NK (menovite farmaceutický prípravok môže obsahovať antagonistu IL-18, antagonistu IL-12 alebo antagonistu buniek NK, ako je predtým tu opísané, kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič).

V rámci výhodného uskutočnenia, farmaceutický prípravok vynálezu obsahuje inhibítor proteázy z rodiny kaspasy, kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič. Príklady inhibítorov proteáz z rodiny kaspasy a nelimitujúcich príkladných dávok sú predtým tu opísané. V rámci výhodného uskutočnenia, inhibítor proteázy z rodiny kaspasy je inhibítor ICE.

V rámci ďalšieho uskutočnenia, farmaceutický prípravok vynálezu obsahuje antagonistu IL-12, kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič. Príklady takýchto antagonistov IL-12 sú tu predtým opísané. V rámci výhodného uskutočnenia, antagonista IL-12 je monoklonálna protilátka proti IL-12. V rámci ďalšieho výhodného uskutočnenia, antagonista IL-12 je inhibítor fosfodiesterázy IV. V rámci ešte ďalšieho výhodného uskutočnenia, antagonista IL-12 je agonista beta-2.

V rámci ďalšieho uskutočnenia, farmaceutický prípravok vynálezu obsahuje antagonistu buniek NK, kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič. Príklady takýchto antagonistov buniek NK sú predtým tu opísané. V rámci výhodného uskutočnenia, antagonista proti bunkám NK je protilátka proti bunkám NK/podobným NK, výhodne protilátka proti asialo-GMl alebo protilátka NK1.1.

Termín „farmaceutický prijateľný nosič“, ako je používaný tu, je zamýšľaný, aby zahrnoval akékoľvek a všetky rozpúšťadlá, disperzné média, povlaky, antibakteriálne a antifungálne prostriedky, izotonické a absorpciu zadržujúce prostriedky, apod., kompaktibilné s farmaceutickou aplikáciou. Použitie takýchto médií a prostriedkov pre farmaceutický aktívne látky je dobre známy v odbore. Bez použitia v prípravkoch akýchkoľvek konvenčných médií alebo prostriedkov, ktoré sú nekompaktibilné s účinnou zlúčeninou. Doplnkové aktívne zlúčeniny môžu tiež byť včlenené do prípravkov.

Farmaceutický prípravok vynálezu je formulovaný tak, aby bol kompaktibilný s jeho zamýšľaným spôsobom podania. Napríklad roztoky alebo suspenzie používané na parenterálne, intradermálne alebo podkožné aplikácie môžu zahrnovať nasledujúce komponenty; sterilný riediaci roztok taký ako voda pre injekciu, fyziologický roztok („saline solution,,), pevné oleje, polyetylénglykoly, glycerín, propylénglykol alebo iné syntetické rozpúšťadlá; antibakteriálne prostriedky také ako benzylalkohol alebo metylparabény; antioxidanty také ako kyselina askorbová alebo bisulfit sodný; chelatotvorné činidlá také ako kyselina etyléndiamintetraoctová; pufry také ako acetáty, citráty alebo fosfáty a prostriedok na úpravu tonicity taký ako chlorid sodný alebo dextróza. pH môže byť upravované kyselinami alebo bázami takými ako HC1 alebo hydroxid sodný. Patenterálny preparát môže byť priložený v ampulkách, injekčných striekačkách na jedno použitie alebo mnohopočetných fľaštičkách s rozdelenými dávkami vyrobených zo skla alebo z plastu.

Farmaceutické prípravky vhodné na injikovateľné použitie zahrnujú sterilné vodné roztoky (rozpustné vo vode) alebo disperzie a sterilné zásypy na prípravok pripravený v čas potreby sterilného injikovateľného roztoku alebo disperzie. Na intravenóznu aplikáciu, vhodné nosiče zahrnujú fyziologický roztok („physiological saline,,), bakteriostatickú vodu, Kremofor EL™ („Cremophor EL™ ) (BASF, Parsippany, NJ) alebo fyziologický roztok tlmený fosfátom (PBS). Vo všetkých prípadoch, prípravok musí byť sterilný a mal by byť tekutina, ktorá má schopnosť byť ľahko v injekčnej striekačke. Musí byť stabilná za podmienok výroby a uskladnenia a musí byť uchovávaná proti pôsobeniu kontaminácie mikroorganizmami takými ako baktérie a huby. Nosič môže byť rozpúšťadlo alebo disperzné médium obsahujúce napríklad vodu, etanol, polyol (napríklad glycerol, propylénglykol a tekuté polyetylénglykoly, apod.) a ich vhodné zmesi. Vlastná tekutosť môže byť udržiavaná napríklad použitím povlaku takého ako lecitín, udržovaním požadovaných veľkostí čiastočiek v prípade disperzie a použitím surfaktantov. Prevencia proti pôsobeniu mikroorganizmov môže byť dosiahnutá rôznymi antibakteriálnymi a antifungálnymi prostriedkami napríklad parabénmi, chlórbutanolom, fenolom, kyselinou askorbovou, timerozalom, apod. V mnohých prípadoch bude výhodné zahrnúť izotonické prostriedky napríklad cukry, polyalkoholy také ako manitol, sorbitol, chlorid sodný do prípravkov. Predĺžená absorpcia injikovateľných prípravkov môže byť spôsobená pridávaním takých prostriedkov do prípravkov, ktoré predlžujú absorpciu, napríklad alumínium monostearát a želatína.

Sterilné injikovateľné roztoky môžu byť pripravené včlenením aktívnej zlúčeniny v požadovanom množstve do vhodného rozpúšťadla s jedným alebo kombináciou ingrediencií vymenovaných vyššie, ako je požadované, nasledované sterilizáciou pomocou filtrácie. Všeobecné, disperzie sú pripravované včlenením aktívnej zlúčeniny do sterilného nosiča, ktorý obsahuje bázické disperzné médium a požadované iné ingrediencie z tých, ktoré boli vyššie vymenované. V prípade sterilných práškov na prípravu sterilných injikovateľných roztokov, sú výhodné spôsoby prípravy ako vákuové sušenie a lyofilizácia, ktoré poskytujú zásyp účinnej zložky plus akúkoľvek dodatočne požadovanú zložku z roztoku predtým sterilné filtrovaného.

Perorálne prípravky všeobecne zahrnujú inertný riediaci roztok alebo jedlý nosič. Môžu byť priložené v želatínových kapsulách alebo stlačené do tabliet. Na účel perorálnej terapeutickej aplikácie môže byť účinná zlúčenina pripojená s excipientami a používaná vo forme tabliet, pastiliek alebo kapsúl. Perorálne prípravky môžu tiež byť pripravené použitím tekutého nosiča na použitie ako kloktadlo, pričom zlúčenina v tekutom nosiči je aplikovaná orálne a prehltnutá a vykašlávaná alebo prehítaná. Farmaceutický kompaktibilný väzbový prostriedok a/alebo materiály adjuvans môžu byť obsiahnuté ako časť prípravku. Tablety, pilulky, kapsule, pastilky apod. môžu obsahovať akúkoľvek z nasledujúcich zložiek alebo zlúčenín podobnej povahy: spojivo také ako mikrokryštalická celulóza, arabská guma alebo želatína; excipient taký ako škrob alebo laktóza, rozmelňovacie prostriedky také ako kyselina algínová, Primogél alebo kukuričný škrob; také mazivo ako magnézium stearát alebo Sterotes; taký glidant ako koloidný oxid kremičitý; zjemňujúci prostriedok taký

100 ako sacharóza alebo sacharín; alebo aromatizačný prostriedok taký ako mäta pieporná, metylsalicylát alebo aromatizačná oranž.

V rámci uskutočnenia sú účinné zlúčeniny pripravované s nosičmi, ktoré budú chrániť zlúčeninu proti rýchlej eliminácii z tela, takými ako formulácie kontrolovateľné uvoľňujúce sa, vrátane implantátov a systémov mikrozapúzdrenej dávky. Biologicky rozpadu schopné, biologicky kompaktibilné polyméry môžu byť používané, také ako etylénvinylacetát, polyanhydridy, polyglykolové kyseliny, kolagén, plyortoestery a polyaktové kyseliny. Spôsoby prípravy takýchto formulácii budú zrejmé kvalifikovaným v odbore. Materiály môžu byť tiež získané komerčne od Alza Corporation a Nová Pharmaceuticals, Inc. Lipozomálna suspenzia (vrátane lipozómov zameraných na infikované bunky s monoklonálnymi protilátkami k vírusovým antigénom) môžu tiež byť používané ako farmaceutický prijateľné nosiče. Tie môžu byť pripravené podľa spôsobov známych kvalifikovaným v odbore napríklad ako je opísané v patentovej prihláške U.S. číslo 4,522,811.

Farmaceutické prípravky vynálezu môžu byť formulované na aplikáciu jednotlivým spôsobom podania lieku takým ako perorálna aplikácia, intravenózna aplikácia, oftalmové aplikácie, apod.

V rámci výhodného uskutočnenia je farmaceutický prípravok vynálezu formulovaný na miestnu aplikáciu. Preto prostriedok, ktorý antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu interferónu-γ (IFN-γ) u subjetku, kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič môžu byť formulované do krému, masti, masti (na rany) a podobných, ktoré sú vhodné na použitie na kožu.

V rámci výhodného uskutočnenia je farmaceutický prípravok vynálezu formulovaný na aplikáciu inhaláciou. Preto prostriedok, ktorý antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu interferónu-γ (IFN-γ) u subjektu, kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič môžu byť formulované do nazálneho spreja alebo inhalačného prostriedku na umožnenie dodania

101 terapeutických prostriedkov do nazálnych alebo dutinných ciest alebo do pľúc (napríklad bronchiálne cesty) inhaláciou.

Tento vynález je okrem toho ilustrovaný nasledujúcimi príkladmi, ktoré by nemali byť chápané ako limitujúce. K obsahom všetkých referencií, uverejnených patentov a patentových prihlášok citovaných všade v prihláške sú pripojené odkazy.

Príklad 1: Inhibícia aktivity ICE v modely septického šoku majúca za výsledok reakciu steroidu

V tomto príklade bol skúmaný účinok inhibície aktivity ICE na reakciu steroidu v modely septického šoku. Model septického šoku bol vyvolaný u myší ochudobnených na ICE (ICE -/-) a u myší štandardného typu (ICE +/+), nasledované liečením kortikosteroidmi. Myši ICE -/- slúžili ako model úplnej inhibície aktivity ICE (k nahliadnutiu Li, P., et al. (1995) Celí 80:401-411 na ďalší opis myší s nedostatkom ICE). Reakcia zvierat na ošetrenie kortikosteroidmi bola stanovená monitorovaním hladín zápalového cytokínu TNFa v sére myší.

Myši s nedostatkom ICE a myši štandardného typu boli najprv senzitivizované materiálom bunkovej steny propionibacterium acnes (1 mg na myš) na vyvolanie inflamácie nízkeho stupňa a potom o šesť dní neskoršie bola vyvolaná odozva lipopolysacharidom (LPS) (1 gg na myš pri 0.1 ml fyziologickom roztoku intravenózne). 30 minút po aplikácii LPS boli myši ošetrené kortikosteroidom dexametazón (4 mg/kg na myš pri 0.5 ml 95% fyziologického roztoku /0.5% etanol, i.p.). Kontrolované myši boli ošetrené samotným vehikulom. Všetky myši boli 90 minút po aplikácii LPS vykrvácané a vzorky séra boli analyzované na prítomnosť TNF-α štandardnou metódou ELISA.

Výsledky sú ukázané na obrázku 1. Myši štandardného typu a myši chudé na ICE ošetrené samotným vehikulom mali podobné hladiny TNF-α séra.

102

Ošetrenie myší štandardného typu dexametazónom významne neovplyvnilo sérum hladiny TNF-α , demonštrujúce ich rezistenciu voči ošetreniu steroidmi v tomto modely septického šoku. V porovnaní s ošetrením myší s nedostatkom ICE dexametazónom potlačilo sérum hladiny TNF-α o 74% (p<0.002). Tieto údaje ukazujú, že inhibícia aktivity ICE reverzuje rezistenciu voči ošetreniu steroidmi v modely septického šoku.

Príklad 2: Inhibícia aktivity ICE v modely septického šoku zvyšuje senzitivitu na steroidy

V tomto príklade bol skúmaný účinok inhibície aktivity ICE na senzitivitu ku steroidom v modely septického šoku. Bol používaný rovnaký LPS/P.acnes model septického šoku opísaný v príklade 1, bez toho, že myši s nedostatkom ICE a myši štandardného typu boli predbežne ošetrené vehikulom alebo kortikosteroidom pred vyvolaním odozvy s LPS. Reakcia zvierat na ošetrenie kortikosteroidmi bola znovu stanovená monitorovaním séra hladín zápalového cytokínu TNFa myší.

Myši s nedostatkom ICE a myši štandardného typu boli najprv senzitivizované materiálom bunkovej steny propionibacterium acnes (1 mg na myš) na vyvolanie inflamácie nízkeho stupňa a potom o šesť dní neskoršie bola vyvolaná odozva lipopolysacharidom (LPS) (1 μg na myš pri 0.1 ml fyziologickom roztoku i.v.). 15 minút pred vyvolaním odozvy boli zvieratá ošetrené zmenšujúcimi sa množstvami kortikosteroidu dexametazónu (0.05, 0.005 alebo 0.0005 mg/kg na myš v 0.5 ml 95% fyziologického roztoku/0.5% etanolu, i.p.). Kontrolované myši boli ošetrené samotným vehikulom. Všetky myši boli 90 minút po aplikácii LPS vykrvácané a vzorky séra boli analyzované na prítomnosť TNF-α štandardnou metódou ELISA.

Výsledky sú ukázané na obrázku 2. Ako myši štandardného typu tak aj myši s nedostatkom ICE vykazovali reakciu na predbežné ošetrenie s 0.05 mg/kg dexametazónu. Predbežné ošetrenie myší chudých na ICE len s 0.005 alebo 0.005 mg/kg dexametazónu vykazovalo 76 % a 78 % (p<0.005) nižšie

103 hladiny TNF-α séra, jednotlivo, v porovnaní s nedostatkom potlačenia TNF-α u zvierat štandardného typu podobne liečených. Tieto údaje ukazujú, že inhibícia aktivity ICE má za výsledok zvýšenie senzitivity ku steroidu v modely septického šoku, od 10-100 nižších dávok fald dexametazónu boli terapeuticky účinné u zvierat s nedostatkom ICE v porovnaní s zvieratami štandardného typu.

Príklad 3: Inhibitor fosfodiesterázy IV redukuje produkciu IL-12

V tomto príklade, účinok inhibítora fosfodiesterázy IV, Rolipram, bola skúmaná produkcia IL-12 indukovaná LPS. Myši B6 boli predbežne ošetrené vehikulom alebo Rolipramom (30 mg/kg pri 0.5 ml 0.1% metylcelulózy, intraperitoneálne). 15 minút pred vyvolaním odozvy s LPS (10gg/myš, intravenózne). Myši boli 90 minút po aplikácii LPS vykrvácané a vzorky séra boli analyzované na IL-12 štandardnou metódou ELISA.

Výsledky sú ukázané na obrázku 3. Myši predbežne ošetrené Rolipramom mali 70 % nižšiu hladinu IL-12 séra, ako myši predbežne ošetrené samotným vehikulom. Tieto údaje ukazujú, že inhibítory fosfodiesterázy IV sú účinné na inhibíciu LPS indukovanej produkcie IL-12.

Príklad 4: Štiepenie IL-18 proteázami z rodiny kaspasy

Schopnosť rôznych rekombinant (menovite E.coli vyjadrené) proteáz z rodiny kaspasy na štiepenie prekurzora IL-18 (pre IL-18) na platný IL-18 bolo testované pri stanovení proteolýzy in vitro. Štiepenie poly(ADP-ribóza) polymerázy (PARP) bolo používané ako pozitívna kontrola. Výsledky sú zhrnuté v tabuľke 1 nižšie.

104

Tabuľka 1 Proteolýza proIL-18 kaspasami rekombinantov

				U %Stiepenie
Kaspasa*		Koncentrácia (pg/ml)	proIL-18	PARP
ICE	(O	1.25	100	99
Ich-2	(4)	5.00	82	93
ICEre,III	(5)	20.00	55	90
CPP32	(3)	5.00	0a	100
Mch2	(6)	10.00	2	96
Mch3	(7)	5.00	32b	97
ICH-1	(2)	75.00	5	98

* Kaspasy sú číslované v zátvorkách podľa odporúčania Alnemri et al. (1996) Celí 87:171 ^aCPP32 (5 pg/ml) štiepený proIL-18, ale vytváraný 12kDa a lOkDa fragment miesto očakávaného 18 kDa fragmentu.

^bNa rozdiel od ostatných kaspas, prekurzor Mch3 získaný z v E. coli nepodstupuje autokatalýzu na vytvoreniu účinnej proteázy. Pridanie ICE bolo vyžadované na iniciovanie autokatalýzy Mch3 a na vytvorenie účinnej proteázy Mch3. Parciálne štiepenie proIL-18 vykonané Mch3 je sprostredkované prítomnosťou ICE v preparácii Mch3.

Príklad 5. Ošetrenie septického šoku

Pacientom účastniacich sa klinických stanovení so septickým šokom (napríklad v konjunkcii s infikovanou abraziou, vyčnievajúcimi ranami alebo sústavnou bakterémiou z iných zdrojov) je aplikovaný prostriedok vybraný

105 z inhibítora ICE, inhibítora fosfodiesterázy IV (napríklad rolipram, 30 mg/kg) a monoklonálne protilátky proti IL-12, dohromady s kortikosteroidom (napríklad vysoká dávka metylprednizolónu, lgm/denne, i.v.). Kortikosteroid a prostriedok môžu byť aplikované spoločne alebo zvlášť, prostriedok môže byť aplikovaný pred alebo po aplikácii kortikosteroidu. Pacienti sú tiež liečení vhodnou antibiotickou terapiou.

Príklad 6: Ošetrenie rejekcie transplantátu

Pacientom, ktorí prijímajú transplantát obličky, je aplikovaný prostriedok vybraný z inhibítora ICE, inhibítora fosfodiesterázy IV (napríklad rolipram, 30 mg/kg) a monoklonálna protilátka proti IL-12, dohromady s kortikosteroidom (napríklad perorálny prednizolón, 25-75 mg/denne). Výhodné ošetrenie je pred prijatím darovanej obličky (napríklad aplikácia lieku môže začať 24 hodín pred prijatím darovanej obličky), dávkami, ktoré sa môžu opakovať podľa potreby (napríklad každých 24 hodín). Kortikosteroid a prostriedok môžu byť aplikované spoločne alebo zvlášť, prostriedok môže byť aplikovaný pred alebo po aplikácii kortikosteroidu. Pacienti sú tiež liečení doplnkovou imunosupresívnou terapiou (takou ako liečenie cyklosporínom A alebo liečenie protilátkou OKT3) tak, že imunitná rejekcia a zápalová reakcia sú simultánne potlačené.

Príklad 7: Zlepšenie spontánnej reakcie na steroidy

Pacientom s astmou, alergickou rinitídou alebo reumatickou artritídou, ktorí podstupujú ošetrenie inhalačným prostriedkom pomocou kortikosteroidu alebo so systemickými kortikosteroidmi, a ktorí začali prerušovať stanovenú liečbu kortikosteroidmi, je aplikovaný prostriedok vybraný z inhibítora ICE, inhibítora fosfodiesterázy IV (napríklad rolipram, 30 mg/kg) a monoklonálne protilátky proti IL-12. Pacienti sú výhodne ošetrení pred zúžením alebo prerušením liečenia kortikosteroidmi na zlepšenie spontánnej reakcie na

106 steroidy, ktorá môže byť výsledkom prerušenia terapie steroidmi. Podľa potreby môžu byť pacienti liečení doplnkovými nesteroidnými protizápalovými prostriedkami.

Príklad 8: Ošetrenie akútneho záchvatu ochorenia autoimunity

Pacientom trpiacim akútnou recidívou ochorenia autoimunity takej ako zápalové črevné ochorenie (napríklad vredovitá kolitída alebo Crohnova choroba) je aplikovaný prostriedok vybraný z inhibítora ICE, inhibítora fosfodiesterázy IV (napríklad rolipram, 30 mg/kg) a monoklonálne protilátky proti IL-12, dohromady s kortikosteroidom (napríklad perorálny prednizón, 2575 mg/denne). Kortikosteroid a prostriedok môžu byť aplikované spoločne alebo zvlášť, prostriedok môže byť aplikovaný pred alebo po aplikácii kortikosteroidu. Pacienti môžu tiež byť liečení doplnkovou imunosupresívnou terapiou na potlačenie akútnej recidívy ochorenia autoimunity.

Príklad 9: Ošetrenie chronického ochorenia autoimunity

Pacientom trpiacim chronickým ochorením autoimunity takým ako Crohnova choroba je aplikovaný prostriedok vybraný z inhibítora ICE, inhibítoru fosfodiesterázy IV (napríklad rolipram, 30 mg/kg) a monoklonálna protilátka proti IL-12, dohromady s kortikosteroidom (napríklad perorálny prednizón, 25-75 mg/denne). Kortikosteroid a prostriedok môžu byť aplikované spoločne alebo zvlášť, prostriedok môže byť aplikovaný pred alebo po aplikácii kortikosteroidu. Pacienti môžu tiež byť liečení doplnkovou imunosupresívnou terapiou na potlačenie ochorenia autoimunity.

Príklad 10: Inhibícia produkcie IFN-γ pomocou eliminácie buniek NK

V tomto príklade bol šok vyvolaný u myší vysokou dávkou pôsobenia LPS (40 mg/kg LPS aplikovaného intravenózne). Bol skúmaný účinok

107 vyčerpávania buniek na produkciu rôznych cytokínov u myší a na mortalitu aplikovaním intravenózne protilátky (proti ASGM1) proti asialo-GMl 10 minút pred aplikáciou LPS. Sledované zvieratá prijali králičí IgG („Rabbit IgG„). Účinok ASGM1 pôsobenia na produkciu IL-Ιβ, TNFa a IFN-γ, ako takej aj na mortalitu, je zhrnutý v tabuľke 2 nižšie.

tabuľka 2

Pôsobenie	# Myši	Produkcia	cytokín	u (pg/ml)	Mortalita hodín)	(30
		IL-Ιβ		TNFa		IFN-γ		% Prežitie
LPS + králičí IgG(kontrol a)	6	1946 483	±	5857 1071	+	1663 811	±	0(n = 10)*
LPS + protilátky ASGM1	6	1647 482	±	5453 1103	±	363 108	±	90(n = 10)

* Všetky zvieratá zomreli počas 15 hodín.

Tieto výsledky ukazujú, že eliminácia buniek NK pôsobením protilátky proti asialo-GMl redukuje produkciu IFN-γ a predlžuje prežitie po aplikácii LPS pri vysokej dávke LPS šoku.

Príklad 11: Účinok inhibítora ICE a kortikosteroidu v modely septického šoku

V tomto príklade bol používaný LPS/P.acnes model septického šoku opísaný v príklade 1 a 2 bol používaný na skúmanie účinku inhibítora ICE v kombinácii s kortikosteroidom. Myši B6 boli implantované 24 hodinovou osmotickou pumpou obsahujúcou inhibítor ICE acetyl-tyrozín-valín-alanínaspartová kyselina-CHO (Ac-YVAD-CHO) (100 mg/kg) alebo kontrolou vehikula, podkožné 18 hodín pred injekciou LPS. LPS bol injektovaný intravenózne (0.01 gg/myš alebo 10 gg/myš) v čase nula. Všetky myši boli injektované 5 mg/kg dexametazónu intraperitoneálne 30 minút po injekcii LPS.

108

Reakcia zvierat na ošetrenie kortikosteroidmi bola stanovená monitorovaním hladín zápalového TNFa cytokínu, ako aj interleukínu-6 (IL-6) a interleukínu-1 β (IL-Ιβ), v sére myši. 90 minút po aplikácii LPS boli všetky myši vykrvácané a vzorky séra boli analyzované na prítomnosť TNFa, IL-6 a IL-Ιβ štandardnými metódami.

Výsledky sú ukázané na obrázku 4, 5 a 6, pre TNF-α, IL-6 a IL-Ιβ, jednotlivo. Údaje demonštrujú, že myši liečené ako inhibítorom ICE AcYVAD-CHO a tak dexametazónom mali významne nižšie hladiny séra TNF-a, IL-6 a IL-lb, pokiaľ bolo buď 0.01 gg alebo 10 gg LPS bolo použité na vyvolanie septického šoku. Ako je skôr ukázané v príklade 1, liečenie myší samotným dexametazónom významne neovplyvnilo hladiny séra TNF-a, demonštrujúce rezistenciu myší voči ošetreniu samotným steroidom v tomto modely septického šoku. Ošetrenie myší ako dexametazónom tak inhibítorom ICE potlačilo hladiny séra TNF-α o 96% (p<0.005), u myší liečených 0.01 gg LPS a o 86% (p<0.005), u myší liečených 10 gg LPS. Okrem toho hladiny séra IL-6 boli redukované o 95% (p<0.00005) a o 91% (p<0.00005), jednotlivo a hladiny séra IL-Ιβ boli redukované o 94% (p<0.001) a o 92% (p<0.0002), jednotlivo. Tieto údaje ukazujú, že inhibícia aktivity ICE používaním inhibítora ICE reverzuje rezistenciu voči ošetreniu steroidmi v modely septického šoku.

Príklad 12; Syntéza hydroxamátu inhibítorov ICE

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-fenylacetylaminooxy-pentánová kyselina

Krok A N-(Fenylmetoxy)-benzénacetamid [(0.760g, 3.15 mmol), pripravený spôsobom podľa Hearn M.T.W. and Ward A.D. (Aust. J. Chem.. 1969;22:1731)] sa vychytá v 10 ml CH₃CN a nechá sa reagovať s dimetylamino-pyridínom (DMAP) (50 mg) a di-Zerí-butylom dikarbonátu (0.824 g, 3.78 mmol). Reakcia sa môže miešať pod argónom po dobu 12 hodín, potom sa zriedi etylacetátom (EtOAc) a premyje sa 3M K2SO5 (1 x 10 ml), NaHCO₃

109 (1 x 10 ml). Organická vrstva sa suší nad Na2SO₄, filtruje a koncentruje. Purifíkácia chromatografiou (SiO₂, 9:IHexán-EtOAc) poskytne 0.910 g (84%) l,l-dimetyletyl(fenylacetyl)fenyl-metoxy) karbámatu ako číry, viskózny olej.

’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆) : á 7 . 41 [m, 5H] , 7 . 32 [m, 2H] , 7 . 24 [m, 3H] , 4 . 90 [s, 2H] , 4 . 09 [s, 2H] , 1 .48 [s, 9H] .IR(„infračervená spektroskopia,,) (tenká vrstva) 3063, 3032, 2979, 2935, 2886, 1777, 1736, 1497, 1455, 1370, 1302 cm'¹ . MS („hmotnostná spektroskopia,,) (chemická ionizácia [Cl] - NH₃) 342 (M⁺+H).

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C₂oH₂₃N0₄.0.051 CH₂C1₂: C, 69.66; H, 6.74; N, 4.05.

Zistené: C; 69.66; H, 6.83; N, 3.99.

Krok B l,l-DimetyletyI(fenylacetyl)(fenyl-metoxy)karbamát (810 mg, 2.37 mmol) sa rozpustí v 75 ml suchého THF a pridá sa 90 mg 5% Pd/BaSO₄. Reakcia sa nechá reagovať s H₂ (20 psi („pounds per squre inch,,)) počas 20 hodín. Reakcia sa filtruje cez celit a koncentruje, čím sa získa 588 mg (99%) l,l-dimetyl-etyl-hydroxy-(fenylacetyl)karbámatu vo forme oleja. Ďalšia purifíkácia nebola robená.

‘H NMR (400 MHz, CDC1₃): á 8 . 22 [s, 1H] , 7 . 31 [m, 5H] , 4 . 24 [s, 2H], 1.55 [s, 9H],

Krok C , 1,1-dimetyletylester (S)-5-Bróm-4-oxo-3-[[(fenylmetoxy)karbonyl]amino]-pentánovej kyseliny [(297 mg, 0.742 mmol), pripravenej podľa procedúry Dolle R.E., et al., (J. Med. Chem., 1994;37:563-4)], l,l-dimethyletyl-hydroxy(fenylacetyl)karbamát (187 mg, 0.742 mmol) a KF (104 mg, 1.85 mmol) sa spoja v 5 ml dimetylformamide (DMF) a môžu sa miešať pod Ar počas 12 hodín. Reakcia sa zriedi EtOAc (15 ml) a premyje sa vodou (3 x 15 ml) a soľankou

110 (1x15 ml). Organická vrstva sa suší nad Na₂SO₃ a koncentruje. Purifikácia chromatografiou (SiO₂, 4:1 Hexán-EtOAc) poskytne 168 mg (40%) 1,1dimetyl etylester [[[(1, l-dimetyletoxy)-karbonyl](fenylacetyl)amino]oxy]-4oxo-3-[[((fenylmetoxy)karbonyl]amino]-pentánovej kyseliny, ako číry olej.

*H NMR (300 MHz, CDC1₃): á 7. 35 (m, 5H] , 5 . 84 [d, J = 9 . 0 Hz, 1H] , 4.79, [A z AB, J = 15.3 Hz, 1H] , 4 .70 [m, 1H] , 4 .57 (B z AB, J = 15.3 Hz, 1H] , 4.10 [s, 2H] , 3.09 [dd, J = 16. 8, 4 . 6 Hz, 1H] , 2 . 79 [dd, J = 16.8,

4.9 Hz, 1H], 1.52 [s, 9H], 1.39 [s, 9H], IR (tenká vrstva) 3374, 2980, 2935, 1726 (br), 1499, 1370, 1298, 1150 cm'¹. MS (APCI, Metanol(MeOH)) 571.5 (M⁺+H).

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C30H38NO9: C, 63.15; H, 6.71; N, 4.91.

Zistené: C, 62.76; H, 6.70; N, 4.69.

Krok D 1,1-dimetyletylester 3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5fenylacetylaminooxy-pentánovej kyseliny (208 mg, 0.365 mmol) sa vychytá v 3 ml of 1:1 trifluóroctovej kyseliny (TFA)/CH₂C1₂ a môže sa miešať počas 2 hodín. Reakcia sa zriedi acetonitrilom (MeCN) (10 ml) a koncentruje. Zvyšok sa päť krát vymýva od MeCN. Purifikácia chromatografiou (SiO₂, 90:9: CH₂Cl₂-acetón-metánová kyselina) poskytne 3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo5-fenylacetylaminooxy-pentánovú kyselinu (51 mg, 34%) ako bielu penu.

*H NMR (300 MHz, CDCI3): á 8.63 [s, 1H], 7.34 [široký (br) s, 10H], 5.48 [br d, J = 4 Hz, 1H], 5.08 [br dd, J = 16, 12 Hz, 2H], 4.23 [m, 1H], 3.97 [m, 2H], 3.58 [br s, 2H], 2.80 [m, 1H], 2.64 [m, 1H],

IR (KBr) 3305 (br), 2928, 1791, 1772, 1717, 1699, 1685, 1674, 1654, 1521, 1455 cm’¹. MS (APCI, MeOH) 415 (M⁺+H).

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C₂iH₂₂N₂O₇*0.1 06 CF₃CO₂H: C, 59.73; H, 5.22; N, 6.57.

111

Zistené: C, 59.73; H, 5.46; N, 6.28.

Ďalej boli pripravené z 1,1-dimetyletylesteru (S)-5-bróm-4-oxo-3[[(fenylmetoxy)karbonyl)amino]-pentánovej kyseliny spôsobom opísaným vyššie, krok C a krok D.

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(2-oxo-pyrolidín-l-yloxy)-pentánová kyselina

Krok A Pripravené z l-hydroxy-2-pyrolidinónu [Biswas A. a Miller M.J.(Heterocycles, 1987;26:2849)j spôsobom opísaným vyššie, krok C, na získanie 1,1-dimetyletylesteru 3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(2-oxopyrolidín-l-yloxy)-pentánovej kyseliny (74%).

*H NMR (400 MHz, CDC1₃): á 7. 37 [m, 5H] ; 5. 88 [br d, J = 8.9 Hz) ;5.16 [A z AB, J = 12.2 Hz, 1H]; 5.11 [B z AB, J = 12.2 Hz, 1H]; 4.95 [A z AB, J = 17.1Hz, 1H], 4 .81 [B z AB, J = 17. 1 Hz, 1H] , 4 .60 [m, 1H], 3 . 62 [m, 2H], 3.01 [dd, J =17. 1, 4.6 Hz, 1H], 2.75 [dd, J = 17.1, 4.8 Hz, 1H], 2.30 [t, J = 7.95 Hz, 2H], 1.99 [kvintet, J = 7.5 Hz, 2H], 1.41 [s, 9H], IR (KBr) 3328 (br), 2976, 2932, 1717, 1701, 1522, 1256 cm'¹.

MS (APCI, MeOH) 421 (M⁺+H).

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C2iH₂8N2O₇*0.096 DMF: C, 59.81; H, 6.76; N, 6.87.

Zistené: C, 59.56; H, 7.00; N, 6.52.

Krok B: Pripravené z 1,1-dimetyletylesteru 3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo5-(2-oxo-pyrolidín-l-yloxy) pentánovej kyseliny spôsobom opísaným vyššie, krok D, na získanie 3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(2-oxo-pyrolidín-lyloxy)-pentánovej kyseliny (72%).

112 ’Η NMR (400 MHz, CDC1₃): á 8.55 [br s, 1H], 7.36 [m, 5H], 5.46 [br d, J =

9.4 Ηζ,ΙΗ], 5.14 [A z AB, J = 5.2 Hz, 1H], 5.11 [B z AB, J = 5.2 Hz, 1H], 4 . 23 [m, 1H], 4.19 [A z AB, J = 13.3 Hz, 1H], 3.96 [B z AB, J = 13.3 Hz, 1H], 3.67 [m, 1H], 3.52 [dd, J = 15.1, 7.9 Hz, 1H], 2.84 [dd, J = 16.9, 8.2 Hz, 1H], 2.61 [dd, J = 16.9, 10.9 Hz, 1H], 2.42 [m, 2H], 2.11 [m, 2H], IR (KBr) 3408 (br), 2926, 1791, 1717, 1700, 1540, 1268, 1054 cm·¹. MS (APCI, MeOH) 365 (M⁺+H).

Analýza vypočítaná pre Ci7H2oN₂0₇*0.32 C3H7OC3H7: C, 57.27; H, 6.24; N, 7.04.

Zistené: C, 57.27; H, 6.24; N, 6.74.

3-Benzyloxykarboylamino-5-(3,5-dioxo-10-oxa-4-aza-tricyklo[5.2.1.0^2,6]dek-8en-4-yloxy)-4-oxo-pentánová kyselina

Krok A Pripravené z 3a,4,7,7a-tetrahydro-2-hydroxy-4,7-epoxy-lHizoindol-l,3(2H)-dión [Narita M., Teramoto T, Okawara M (Bull. Chem. Soc. Jap., 1971 ;44:1084)] spôsobom opísaným vyššie, krok C, na získanie 1,1dimetyletylesteru 3-benzyloxykarbonylamino-5-(3,5-dioxo-10-oxa-4-azatricyklo[5.2:1.0^2,6]dek-8-en-4-yloxy)-4-oxo-pentánovej kyseliny, (64%).

*H NMR (400 MHz, DMSO-d₆): á 7 . 84 [d, J = 8 . 2 Hz, 1H], 7 . 34 [m, 5H], 6 . 54 [s, 2H], 5 . 16 [s, 2H]; 5 .07 [A z AB, J = 12.5 Hz, 1H], 5.03 [B z AB, J = 12.5 Hz, 1H], 4.93 [A z AB, J = 16.2 Hz, 1H], 4.87 [B z AB, J = 16.2 Hz, 1H], 4.52 [m, 1H], 2.87 [s, 2H], 2.73 [dd, J = 16.2, 5.8 Hz, 1H], 2.50 [zatienenej rezonanciou dimetyl-sulfoxidu (DMSO)], 1.37 [s, 9H]. IR (KBr) 3421, 2979, 2930,1790, 1726, 1520, 1368 cm'¹. MS (APCI, MeOH) 445 (M⁺C₄H₈).

Analýza vypočítaná pre C25H28N2O9: C, 59.65; H, 5.70; N, 5.35.

Zistené: C, 59.99; H, 5.64; N, 5.60.

Krok B Pripraveno z 1,1-dimetyletylesteru 3-benzyloxykarbonylamino-5-(3,5 dioxo-10-oxa-4-aza-tricyklo[5.2.1.0²'⁶]dek-8-en-4-yloxy)-4-oxo-pentánovej

113 kyseliny spôsobom opísaným vyššie, krok C, na získanie 3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-fenylacetylaminooxy-pentanovej kyseliny (78%). IR (tenká vrstva) 3360, 1789, 1723, 1530, 1220 cm’¹. MS (APCI, MeOH) 445 (M⁺+H).

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C2iH₂oN209«0.194 CF3CO2H: C, 55.06; H, 4.36; N, 5.96. Zistené: C, 55.06; H, 4.58; N, 5.99.

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(2-oxo-2.3-dihydro-indol-l-yloxy)-4-oxopentánová kyselina.

Pripravená z 1-hydroxyoxindolu [Kende A.S. and Thurston J. (Synthetic Communications, 1990;20:2133-8)) na získanie 3-benzyloxykarbonylamino-4oxo-5-(2-oxo-2,3-dihydro-indol-l-yloxy)-pentánovej kyseliny (24%), 1.1. 5870°C (rozloženie).

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C21H20N2O7: C, 61.16; H, 4.89; N, 6.79.

Zistené: C, 60.84; H, 4.72; N, 6.46.

3-Benzyloxykarbonylamino-5-(7-metaxykarbonylmetyl-2-oxo-oktahydro-indol1 -yloxy)-4-oxo-pentánová kyselina

Krok A Hydroxylamínhydrochlorid (200 mmol, 13.8 g) sa rozpustí v pyridíne (200 mmol, 16 ml) a metanole (10 ml) a tento roztok sa pridá do zmesi dimetylesteru cis-2-oxo-l,3-cyklo-hexándioctovej kyseliny, [(35 mmol,

8.5 g) pripravenej podľa procedúry Grieco P.A., Noguez J.A., Masaki Y., Hiroi K., Nishizawa M., Rosowsky A., Oppenheim S., Lazarus H. J. Med. Chem., 1977;20:71 ] v 200 ml MeOH. K tomuto roztoku sa pridá po častiach NaCNBH₄ (30 mmol, 1.9 g) počas asi jednej hodiny a výsledný roztok sa mieša pri izbovej teplote počas 4 dní. Reakčná zmes sa potom koncentruje k suchosti,

114 znova zriedi v 500 ml etylacetátu a premyje sa 3 x 50 ml nasýteného NaCI, suší sa Na₂SO4, filtruje a koncentruje na získanie surovej pevnej látky, ktorá bola väčšinou požadovaný produkt a pyridín. Surový metylester oktahydro-1hydroxy-2-oxo-lH-indol-7-octovej kyseliny sa rekryštalizuje od EtOAc na získanie 4.05 g (51 %) bielej pevnej látky.

’HNMR: 9.26 [1H, s], 3.64 [1H, dd], 3.59 [3H, s], 2.65 [1H, dd], 2.49 [1H, dd], 2.34 [1H, dd], 2.18 [ 1H, m], 2.04 [ 1H, m], 1.79, [1H, d], 1.62 [ 1H, m], 1.60 [ 1H, sbr], 1 .42 [ 1H, m], 1.25 [2H, m], 1.06 [1H, m], MS (CI, NH₃) 228 (M⁺+H).

Krok B Pripravené z metylesteru oktahydro-l-hydroxy-2-oxo-lH-indol7-octovej kyseliny spôsobom opísaným vyššie, krok C, na získanie 1,1trimetyletylesteru 3-benzyloxykarbonylamino-5-(7-metoxykarbonylmetyl-2oxo-oktahydro-indol-l-yloxy)-4-oxo-pentánovej kyseliny ako sklovitého oleja (45%).

^lH NMR (400 MHz, DMSO-dg, 1 : 1 zmes diastereoizomérov: á 7 . 85 [d, J =

5.8 Hz, 0.5H] , 7.83 [d, J = 5.8 Hz, 0.5H], 7.35 [m, 5H], 5. 06 [s, 2H], 4 . 94 [A z AB, J = 16 .9 Hz, 0.25H], 4 . 87 [A z AB, J = 17.6 Hz, 0.25H] , 4.82 [B z AB, J = 17.6 Hz, 0.25H], 4.74 [B z AB=, J = 16.9 Hz, 0.25H], 4.23 [m, 1H], 3.82 [m, 0.5H], 3.79 [m, 0.5H], 3.57 [s, 1.5H]; 3.57 [s, 1.5H], 2.72 [m, 0.5H], 2.70 [m, 0.5H], 2.52 [m, tienené DMSO], 2.39 [m, 2H], 2.22 [br m, 1H], 2.10 [br m, 1H], 1.88 [br s, 0.5H], 1.84 [br s, 0.5H], 1 .61 [m, 2H], 1.42 [m, 1H], 1.36 [s, 9H], 1.25 [m, 2H], 1.06 [m, 1H], IR (tenká vrstva) 3418, 3344, 3017, 2979, 2934, 2860, 1725, 1506 cm’¹. MS (APCI, MeOH) 547.6 (M⁺+H).

Krok C Pripravené z 1,1-trimetyletylesteru 3-benzyIoxykarbonylamino-5(7-metoxykarbonylmetyl-2-oxo-oktahydro-indol-l-yloxy)-4-oxo-pentánovej kyseliny spôsobom opísaným vyššie, krok D na získanie 3-benzyloxykarbonylamino-5-(7-metoxykarbonylmetyl-2-oxo-oktahydro-indol-l-yloxy)-4oxo-pentánovej kyseliny (45%), 1.1. 55-58°C.

115 ’H NMR (400 MHz, DMSO-d₆, 1 : 1 zmes diastereoizomérov ): á 12 . 4 [s,lH], 7.84 [m, 1H], 7.35 [m, 5H], 5.05 [s, 2H], 4.86 [m, 2H], 4 .45 [m, 1H], 3. 83 [m, 0.5H], 2 .79 [m, 0.5H], 3.59 [s, 1 ,5H], 3 .58 [s, 0. 5H], 2.57 [m, tienené DMSO], 2.41 (komplex m, 4H], 2.20 [m, 2H], 1.88 [m, 1H], 1.62 [m, 2H], 1.43 [m, 2H], 1.23 [m, 2H], 1.05 [m, 1H]. IR (KBr) 3337, 2931, 1790, 1726, 15384 cm¹. MS (ES, NH₄OH) 489.5 (M⁺+H).

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C24H30N2O9: C, 58.77; H, 6.16; N, 5.71.

Zistené: C, 59.19; H, 6.40; N, 5.34.

3-Benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(2-oxo-oktahydro-indol-l-yloxy)pentánová kyselina

Krok A Etyl-2-cyklohexanónacetát (4.28 g, 23.3 mmol) a Oenzylhydroxylamínhydrochlorid sa spojí v 100 ml etanolu (EtOH) a pridá sa 2.59 g (25.6 mmol, 3.55 ml) trietylamínu (Et₃N). Reakčná zmes sa mieša pri izbovej teplote počas 12 hodín, v tomto bode sa koncentrovalo vo vákuu. Zvyšok sa vloží do EtOAc a premyje sa IN HCI (2 x 20 ml), nasýteným NaHCO₃ (1 x 20 ml), suší sa nad Na₂SO₄, filtruje a koncentruje. Purifikácia chromatografiou (SiO₂, 90:1 Hexány-EtOAc) sa získa etylester (2benzyloxyimino-cyklohexyl)-octovej kyseliny (4.76 g, 72%) ako zmes izomérov oximu.

'H NMR (400 MHz, CDCI3 7 : 1 zmes izomérov oximu): á 7 . 32 [komplex m, 5H] , 5.05 [s, 0.25 H], 5. 02 [s, l.H] , 4.05 [q, J = 7.2 Hz, 2H] , 3.20 [m, 1H] , 2.73 [komplex m, 2H] , 2.46 [d, J = 8.0 Hz, 0.125H], 2.21 [dd, J = 15.4, 6.3 Hz, 0.875H], 1.92 [m, 1H] , 1 .79 [komplex m, 3H], 1.43 [m, 1H], 1.38 [komplex m, 2H], 1.22 [t, J = 7.2 Hz, 3H]. IR (tenká vrstva) 2931, 1735, 1638, 1451 cm'¹. MS (Cl, NH₃) 290 (M⁺+H).

Vypočítané pre Ci7H₂₃NiO₃: C, 70.56; H, 8.01; N, 4.84.

Zistené: C, 70.47; H, 7.92; N, 4.78.

116

Krok B etylester (2-Benzyloxyimino-cyklohexyl)-octovej kyseliny (4.66 g, 16.1 mmol) sa vychytá v 15 ml octovej kyseliny (AcOH) a NaBEhCN a mieša sa počas 72 hodín. Reakcia sa vleje do NaHCOj a extrahuje do EtOAc (3 x 30 ml). Spojené organické vrstvy sa jeden krát premyjú soľankou, sušia sa nad Na₂SO₄, filtrujú sa a koncentrujú. Číry olej sa rozpustí v 50 ml MeOH a K2CO3 (5.55 g, 40.2 mmol) sa pridá a reakcia sa mieša po dobu 12 hodín. Reakcia sa koncentruje, zvyšok sa vychytá v CHCI3, filtruje, a koncentruje. Purifikáciou chromatografiou (S1O2, 4:1 Hexány/EtOAc) sa získa 1.72 g (43%) etylesteru cis-(2-benzyloxyamino-cyklohexyl)-octovej kyseliny a 0.441 g (11%) etylesteru trans-(2-benzyloxyamino-cyklohexyl)-octovej kyseliny.

Dáta pre cis izomér:

'H NMR (400 MHz, CDC1₃): á 7.44 [komplex m, 2H] , 7.37 [komplex m, 3H], 5. 05 [A z AB, J = 10.4 Hz, 1H], 4.94 [B z AB, J = 10.4 Hz, 1H], 3.47 [dd, J = 10.6, 5.3 Hz, 1H] , 2.33 [dd, J = 16.4 Hz, 1H] , 2.20 [m, 1H] , 2.08 [dd, J = 16.4, 4.6 Hz, 1H] , 1.74 [komplex m, 2H], 1.60 [m, 1H], 1.32 [komplex m, 5H]. IR (roztok, CHCI3) 3031, 2932, 2856, 1717, 1453 cm'¹. MS (Cl, NH₃) 246 (M⁺+H).

Dáta pre trans izomér: 1.1. 79-82°C.

Elementárna analýza:

Vypočítané pre CuHisNiOi: C, 73.44 H, 7.81; N, 5.71.

Zistené: C, 73.38; H, 7.89; N, 5.63.

Krok C Pripravené z etylesteru cis-(2-benzyloxyamino-cyclohexyl)octovej kyseliny spôsobom opísaným vyššie, krok B, na získanie cis-l-hydroxyoktahydro-indol-2-onu (85%), 1.1. 85-86°C.

*H NMR (400 MHz, CDCI3): á 9.86 [br s, 1H] , 3.75 [dd, J = 10 .4, 4.8 Hz, 1H], 2.41 [dd, J = 16.1, 7.7 Hz, 1H], 2.33 [m, 1H], 1.97 [m, 1H], 1,71 [komplex m, 2H], 1.54 [m, 1H], 1.44 [komplex m, 2H], 1.31 [komplex m, 2H].

117

IR (KBr) 3037, 2936, 2856, 2710, 1690, 1659, 1548 cm’¹. MS (Cl, NH₃) 156 (M⁺+H).

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C₈Hi₃NiO₂: C, 61.91; H, 8.44; N, 9.03.

Zistené: C, 61.94; H, 8.49; N, 8.96.

Krok D Pripravený z cis-l-hydroxy-oktahydro-indol-2-ónu spôsobom opísaným vyššie, krok C, na získanie 1,1-dimetyletylesteru 3benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(2-oxo-oktahydro-indol-l-yloxy)-pentánovej kyseliny (41%). IR (tenká vrstva) 2933, 1723, 1516, 1367 cm'¹. Elementárna analýza:

Vypočítané pre C₂5Hi₃₄N₂O7: C, 63.28; H, 7.22; N, 5.90.

Zistené: C, 63.03; H, 7.36; N, 5.65.

Krok E Pripravené z 1,1-dimethyletylesteru 3-benzyloxykarbonylamino-4oxo-5-(2-oxo-oktahydro-indol-l-yloxy)-pentánovej kyseliny spôsobom opísaným vyššie, krok D, na získanie 3-benzyloxykarbonylamino-4-oxo-5-(2oxo-oktahydro-indol-l-yloxy)-pentánovej kyseliny (72%). IR (KBr) 3352 (br), 2935, 2869, 1789, 1704, 1535 cm'¹. MS (APCI, MeOH) 419.5 (M⁺+H).

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C₂iH₂₆N₂O₇*0. 12 H₂O*0.322 CH₂C1₂: C, 57.17; H, 6.05; N, 6.26.

Zistené: C, 57.17; H, 6.05;N, 5.89.

Nasledujúce boli pripravené z 1,1-dimetylesteru 5-bróm-3-[2-(2benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyrylamino)-propionylamino]-)-4-oxopentánovej kyseliny [Dolle R.E., et al. (J. Med. Chem., 1994;37:563-4)] spôsobom opísaným vyššie, krok C a krok D.

118

3-[2-(2-Benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyrylamino)-propionylamino]-5-(7metoxykarbonylmetyl-2-oxo-oktahydro-indol-l-yloxy)-4-oxo-pentánová kyselina.

Pripravená z metylesteru oktahydro-l-hydroxy-2-oxo-lH-indol-7-octovej kyseliny (65%), t.t. 162-167°C, dec.

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C₂9H₃₄N₄O₉*0.75 H₂O (596.127): C, 58.43; H, 6.00; N, 9.40. Zistené: C, 58.40; H, 5.68; N, 9.19.

3-[2-(2-benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyrylamino)-proionylamino]-4-oxo5-(2-oxo-2.3-dihydro-indol-l-yIoxy)-pentánová kyselina

Pripravená z 1-hydroxyoxindolu [Kende A.S. and Thurston J. (Synthetic Communications, 1990;20:2133-8)] na získanie 3-(2-(2benzyloxykarbonylamino-3-metyl-butyrylamino)-propionylamino]-4-oxo-5-(2oxo-2,3-dihydro-indol-l-yloxy)-pentánovej kyseliny (67%), t.t. 162-167°C, dec.

Elementárna analýza:

Vypočítané pre C₂9H₃₄N4O9*0.75 H₂O (596:127):

C, 58.43; H, 6.00; N, 9.40.

Zistené: C, 58.40; H, 5.68; N, 9.19.

Iné zlúčeniny sa pripravia použitím automatizovanej pararelnej syntézy nasledovné: K 7-ml fľaštičke so skleneným skrutkovacím vrchnákom obsahujúcej 17 mg (0.3 mmol, 3 ek KF sa pridá 500 μΐ (0.1 mmol, 1 ek) 0.2 M roztoku vhodného hydroxamátu v DMF. Reakčné fľaštičky sa pretrepávajú niekoľko minút, pokiaľ sa KF kompletne nerozpustí. V tomto bode, 500 μΐ (0.1 mmol, 1 ek) 0.2 M roztoku 1, l-dimetyletylesteru (S)-5-bróm-4-oxo-3[[(fenylmetoxy)karbonyl]amino]-pentánovej kyseliny v DMF. Fľaštičky sa

119 zakrývajú vrchnákom a stojan 30 až 40 fľaštičiek sa umiestni navrch do kruhového miešacieho zariadenia počas 12 hodín.

Reakčné zmesi sa zriedia 2 ml etylacetátu nasledované 2 ml deionizované vody. Dva mililitre kvapaliny sa odoberú zo stredu fľaštičky a rýchle sa dvakrát injektujú späť. Fľaštičky sa nechajú 30 minút ustáť a organická vrstva sa odstráni z hornej polovice fľaštičky. Ešte dvakrát sa pridá, 2 ml etylacetátu, zmieša sa a separuje. Spojené organické vrstvy sa odparia pod stálou parou dusíka cez noc.

Surový zvyšok z reakcií sa rozpustí v 3 až 4 ml 40 % TFA v metylénchloride. Fľaštičky sa pretrepú bez vrchnákov na zaistenie kompletného rozpúšťania vo výparnom digestóriu. Po 2 hodinách sa fľaštičky znova umiestnia cez noc pod dusíkovou atmosférou

Surová reakčná zmes sa vychytá v 1 ml chloroformu (MeOH sa niekedy pridá na úplné rozpustenie). Roztok sa aplikuje na 500-mikrometrové preparatívne vrstvy silikagélu TLC a potom sa eluuje 20% acetonóm v metyléchloride s 1% až 2% octovou kyselinou. Pásy produktu sa vizualizujú UV absorpciou, zhrnú sa z vrstvy a silikagél sa premyje metanolom do tvárovanej fľaštičky. Fľaštičky sa umiestnia cez noc pod páru dusíka. Vážené purifikované produkty sa potom analyzujú a biologicky vyhodnocujú. Roztoky sa môžu odpariť vo výparnom digestóriu počas 72 hodín.

Ekvivalenty

Kvalifikovaní v odbore rozpoznajú alebo sú schopní zistiť, že je možné použiť viacej ako len jeden zvyčajný postup uskutočnenia pokusov, existuje mnoho rovnocenných postupov na špecifické uskutočnenia vynálezu opísaných tu. Aj také ekvivalenty sú zamýšľané v obsahu nasledujúcich patentových nárokov.

Claims (25)

1. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje:

agens, ktoré antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu interferónu-γ (IFN-γ) u subjektu, a kortikosteroid.

2. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že agens je antagonista IL-18.

3. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 2, vyznačujúci sa tým, že agens je inhibítor proteázy z rodiny kaspasy, napríklad inhibítor ICE.

4. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 2 alebo 3, vyznačujúci sa tým, že agens je protilátka, fragment protilátky alebo vystavený väzbový protein, ktorý viaže IL-18 alebo receptor IL-18.

5. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že agens je antagonista interleukínu-12 (IL-12).

121

6. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že agens je protilátka, fragment protilátky alebo vystavený väzbový proteín, ktorý viaže IL-12 alebo receptor IL-12.

7. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 5 alebo 6, vyznačujúci sa tým, že agens stimuluje produkciu cyklickej AMP v bunkách, ktoré produkujú IL-12.

8. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že agens je inhibítor fosfodiesterázy IV, napríklad vybraný zo skupiny, ktorú tvoria 4-arylpyrolidinóny, rolipram, denbufylín, tibenelast, nitraquazón, CP-80633, chinazolíndióny a CP-77059.

9. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 7, vyznačujúci sa tým, že agens je agonista beta-2, napríklad vybraný zo skupiny, ktorú tvorí salmeterol, fenoterol a izoproterenol.

10. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 5, vyznačujúci sa tým, že agens je inhibítor STAT4.

11. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 1, vyznačujúci sa tým, že agens je antagonista buniek NK.

122

12. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 11, vyznačujúci sa tým, že agens je protilátka proti bunkám NK/podobným NK, napríklad protilátka proti asialo-GMl alebo protilátka NK1.1.

13. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že kortikosteroid je vybraný zo skupiny, ktorú tvorí kortizón, hydrokortizón, beklometazón, flunizolid, prednizón, prednisolón, metylprednisolón, triamcinolón, deflazakort, betametazón a dexametazón.

14. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa ktoréhokoľvek z predchádzajúcich nárokov, vyznačujúci sa tým, že subjekt trpí septickým šokom, Crohnovou chorobou, astmou, ochorením štepu proti hostiteľovi alebo rejekciou transplantátu alebo autoimunitným ochorením alebo poruchou.

15. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13, vyznačujúci sa tým, že subjekt trpí imunozápalovým ochorením alebo poruchou vybranou zo skupiny, ktorú tvorí astma, syndróm dospelej respiračnej tiesne, systémový erytematózny lupus, zápalové črevné ochorenie, Crohnova choroba, vredovitá kolitída, mnohopočetná skleróza, na inzulíne závislý diabetes mellitus, autoimunítna artritída, reumatická artritída, juvenilná reumatická artritída, psoriatická artritída, zápalový pulmonálny syndróm, chronický pemfigus, idiopatická trombo123 cytopenická purpura, autoimunítna meningitída, ťažká myasténia, autoimunítna thyreoiditída, dermatitída, atopická dermatitída, ekzémová dermatitída, psoriáza, Sjôgrenov syndróm, keratokonjunktivitis sicca sekundárny k Sjôgrenovmu syndrómu, ložisková holohlavosť, alergické reakcie spôsobené reakciami na pokúšanie článkovcom, aftózny ulkus, iritída, konjunktivitída, keratokonjunktivitída, kožný erytematózny lupus, sklerodermia, vaginitída, proktitida, erupcie z liekov, Stevens-Johnsonov syndróm, leprózne reverzné reakcie, uzlinatý leprózny erytém, autoimunítna uveitída, alergická encefalomyelitída, aplastická anémia, čistá anémia červených krviniek, idiopatická trombocytopénia, polychondritída, Wegenerova granulomatóza, chronická aktívna hepatitída, Gravesova oftalmopatia, primárna biliárna cirhóza, zadná uveitída a intersticiálna fibróza pľúc.

16. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13, vyznačujúci sa tým, že subjekt trpí akútnou zápalovou poruchou.

17. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13, vyznačujúci sa tým, že rezistencia voči steroidu u subjektu je reverzovaná alebo zvýšená v porovnaní s tým, keď je subjektu aplikovaný samotný kortikosteroid.

18. Kombinovaný prípravok na súčasné, oddelené alebo postupné použitie pri modulácii reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 13, vyznačujúci sa tým, že kortikosteroid je aplikovaný subjektu podľa režimu, ktorý redukuje dávku kortikosteroidu počas doby

124 a tento spôsob zlepšuje spontánne reakcie na steroidy spojené s aplikáciou redukovaných dávok kortikosteroidu.

19. Agens na moduláciu reakcie na kortikosteroid u subjektu, kde agens antagonizuje objekt, ktorý reguluje produkciu interferónu-γ (IFN-γ) u subjektu.

20. Agens na moduláciu reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku 19, kde:

a) subjekt je rezistentný voči kortikosteroidu pred aplikáciou agens,

b) subjekt reaguje na kortikosteroid pred aplikáciou agens, ale prejavuje zvýšenú senzitivitu voči kortikosteroidu po aplikácii agens, alebo

c) liečenie subjektu kortikosteroidom má byť zastavené a aplikácia agens zlepšuje spontánne reakcie na steroidy u subjektu.

21. Agens na moduláciu reakcie na kortikosteroid u subjektu podľa nároku

19, kde agens je antagonista IL-18 alebo antagonista interleukínu-12 (IL12).

22. Farmaceutický prípravok, vyznačujúci sa tým, že obsahuje agens podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 12 alebo 19 až 21, kortikosteroid a farmaceutický prijateľný nosič.

23. Farmaceutický prípravok podľa nároku 22, vyznačujúci sa tým, že je formulovaný pre miestnu aplikáciu alebo pre aplikáciu inhaláciou.

125

24. Použitie agens podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 12 alebo 19 až 21 (poprípade v kombinácii s kortikosteroidom) pri výrobe liečiva na moduláciu reakcie na kortikosteroid u subjektu.

25. Použitie agens podľa ktoréhokoľvek z nárokov 1 až 12 alebo 19 až 21 (poprípade v kombinácii s kortikosteroidom) pri výrobe liečiva na liečenie jednej alebo viacerých porúch podľa ktoréhokoľvek z nárokov 14 až