SK1172000A3

SK1172000A3 - Method and compositions for treating late phase allergic reactions and inflammatory diseases

Info

Publication number: SK1172000A3
Application number: SK117-2000A
Authority: SK
Inventors: Tahir Ahmed
Original assignee: Baker Norton Pharma
Priority date: 1997-08-04
Filing date: 1998-08-04
Publication date: 2001-03-12
Also published as: KR20010022533A; RU2209624C2; ATE323500T1; US6193957B1; TW585771B; CN1092049C; HUP0003013A2; NO20000558D0; NZ502498A; JP2001511439A; ZA986890B; HUP0003013A3; AR005221A1; EP1003479A1; PL191796B1; CA2298445A1; PL338551A1; BR9811823A; NO20000558L; HK1030370A1

Description

Oblasť techniky

Predložený vynález sa týka použitia heparinov s ultranízkou molekulovou hmotnosťou alebo iných sulfátovaných polysacharidov na liečenie neskorej fázy • alergických reakcií a zápalových ochorení a farmaceutických kompozícií s ich obsahom.

✓

Doterajší stav techniky

Chronickú astmu je možné pokladať za prevažujúce zápalové ochorenie s pridruženým bronchospazmom. Stupeň reaktivity a zúženia priedušiek ako odozva na stimul je väčšie u astmatikov než u normálnych jedincov. Pretrvávajúci zápal je zodpovedný za bronchiálnu hyperaktivitu alebo hypersenzibilitu dýchacích ciest (airway hyperresponsiveness, AH R). Môže byť prítomný edém sliznice, upchatie hlienom a nadmerná sekrécie; pulmonálny parenchým je normálny. Zúženie dýchacích ciest sa môže spätne vrátiť spontánne alebo liečbou. Typ 1, (okamžitá) imunitná odozva môže hrať dôležitú úlohu pri vývoji astmy u detí a mnohých dospelých; avšak ak sa nástup choroby objaví v dospelosti, môže byť obťažné identifikovať alergické faktory. Vystavenie chladnému suchému vzduchu, cvičenie a ďalšie priťažujúce okolnosti môžu taktiež spustiť astmu.

Zásadnými cieľmi liekovej terapie astmy je prevencia bronchospazmu a dlhodobá kontrola bronchiálnej hyperreaktivity. Pretože zvyčajne nie je možné pri . každom pacientovi alebo lekárovi predvídať kedy môže nastať bronchospazmus, >

pacienti s akýmikoľvek, ale väčšinou občasnými a/alebo celkovými sezónnymi * záchvatmi môžu vyžadovať sústavnú liečbu.

Beta agonisty sú využiteľné ako bronchodilatačné činidlá; stimulujú beta₂adrenegné receptory, zvyšujú intracelulárny cAMP a môžu inhibovať uvoľňovanie väčšiny mediátorov žírnych buniek. Ďalšie využiteľné liečivá zahrňujú treofilín a príbuzné xantínové liečivá, ktoré vytvárajú bronchodilatáciu pôsobením mechanizmu, ktorý nie je známy; biskromon, kromoglykát, ktorý zabraňuje uvoľňovaniu mediátorových látok a blokuje respiračné neuronálne reflexy; a kortikosteroidy, ktoré primárne znižujú zápal a edém. Anticholinergné liečivá môžu uvoľňovať bronchospazmus blokovaním parasympatických cholinergných impulzov a hladiny

-2receptora. Antihistamíny niekedy zabránia alebo prerušia alergické astmatické príhody, predovšetkým u detí, avšak môžu byť len čiastočne účinné pri astme, pretože histamín je len jedným z mnohých mediátorov

Súčasné formy liečiv používané na liečenie alergiou vyvolanej astmy majú celý rad nevýhod. Vo všeobecnosti, konvenčné činidlá majú relatívne krátky čas účinku a môžu byť čiastočne alebo úplne neúčinné ak sa podávajú potom, ako sa vyskytne antigénom vyvolaný problém. Okrem toho, z dôvodu závažných adverzných účinkov spojených s použitím činidiel ako sú beta2-adrenergné agonisty a kortikosteroidy, terapeutická hranica bezpečnosti takýchto činidiel je relatívne úzka a pacienti, ktorí ich používajú, musia byť pod starostlivou kontrolou.

Bronchiálna hyperaktivita (alebo AHR) je charakteristickým znakom astmy a je úzko spojená s prepuknutím zápalu dýchacích ciest. Zhoršenie astmy a zápalu dýchacích ciest je spojené so zvýšením bronchiálnej hyperaktivity, ktorá môže byť vyvolaná ako antigénnym tak aj neantigénnym stimulom. Beta₂-adrenergné agonisty sú účinnými činidlami na liečenie bronchospazmu, avšak nemajú vplyv na zápal dýchacích ciest alebo na bronchiálnu hyperaktivitu. V skutočnosti, chronické použitie samotných beta₂-adrenergných činidiel zapríčinením zníženia regulácie beta₂receptorov, môže zhoršiť bronchiálnu hyperaktivitu. V súčasnosti sú kortikosteroidy jedinými dostupnými účinnými činidlami, ktoré znižujú bronchiálnu hyperaktivitu. Hoci inhalované kortikosteroidy sú relatívne bezpečné u dospelých pacientov trpiacich astmou, tieto činidlá vykazujú mimoriadnu toxicitu u detí, vrátane potlačenia činnosti nadobličiek a zníženia hustoty kostí a rastu. Preto pokračuje výskum bezpečných a účinných činidiel, ktoré znižujú bronchiálnu hyperaktivitu.

Pacienti s alergickou -astmou s násobným vyvolaním odozvy so špecifickým antigénom vykazuj# najmenej dva rozdielne modely bronchiálnej odozvy. U väčšiny subjektov sa vyvinie len akútna bronchokonštrikčná odozva, ktorá sa spontánne odstráni v rozpätí 1 až 3 hodín; tieto subjekty sa označujú termínom “akútni respondenti. U menšieho počtu subjektov, sa však vyvinie ako skorá tak i neskorá odozva. Tieto subjekty sa označujú termínom duálni respondenti” U duálnych respondentov po akútnej odozve, ktorá sa spontánne stratí, nasleduje o 4 až 12 hodín neskôr sekundárne zvýšenie rezistencie dýchacích ciest (“neskorá fáza odozvy). Neskoré odozvy a teda duálni respondenti sú klinicky významní, z dôvodu

-3ich pridruženia prolongovanej hyperaktivity dýchacích ciest alebo hypersenzibility (AHR), zhoršenia symptómov a celkového zhoršenia klinickej astmy, vyžadujúcej agresívnu terapiu

Farmakologické štúdie u alergických zvierat preukázali, že nielen bronchokonštrikčná odozva ale tiež vtok zápalových buniek a mediátorový model uvoľnenia pri duálnych odozvách je celkom odlišný od akútnych odoziev. Zatiaľ čo histamín je pravdepodobne bronchokonštrikčným mediátorom počas akútnej fázy, aktivované produkty lipogenázovej cesty (t.j. leukotriény) môžu byť hlavným mediátorom podieľajúcim sa na neskorej fáze reakcie. Žírne bunky však zohrávajú ústrednú úlohu pri IgE-sprostredkovaných alergických odozvách dýchacích ciest a kromoglykát sodný (stabilizátor membrány žírnych buniek) by teoreticky mohol zabraňovať bronchokonštrikčným odozvám pri oboch, teda “akútnych aj “duálnych” respondentoch. Rôznorodosť podtypov žírnych buniek môže hrať signifikantnú úlohu pri divergentných odozvách a môže závisieť na rozdieloch signálnej transdukcie (sekundárny messenger systém).

V posledných niekoľkých rokoch sa zistilo, že heparin podávaný intrabronchiálne môže byť účinným inhibítorom bronchospazmu a bronchokonštrikcie a je preto cenným pri profylaxii astmy (pozri napríklad Ahmed a kol., New Eng. J. Med. 329, 90 - 95, 1993; Ahmed, Resp. Drug. Deliv. IV, 55 - 63, 1994). Ďalej sa zistilo, že heparíny s nízkou molekulovou hmotnosťou, napríklad heparíny s priemernou molekulovou hmotnosťou 4 000 až 5 000 daltonov, účinne zabraňujú antigénom vyvolanej bronchokonštrikcii; tieto heparíny s nízkou molekulovou hmotnosťou taktiež vykazujú významne nižšiu antikoagulačnú aktivitu než komerčný heparin a požadované vlastnosti ak sa tieto činidlá použijú na liečenie astmy (pozri Ashkin a kol., Am. Rev. Resp. Dis., 1993 Intl. Conf. Abstracts, str. A660). Ako komerčne dostupné heparíny tak i heparíny s nízkou molekulovou hmotnosťou nie sú však účinné pri potláčaní AHR, ak sa podávajú potom, ako bol pacient vystavený antigénu.

V predchádzajúcej prihláške č. 08/516,786 sme opísali, že heparíny s ultranízkou molekulovou hmotnosťou (ultra-low molecular weight heparins, ULMWH) s priemernou molekulovou hmotnosťou menej ako približne 3 000 daltonov sú účinné pri potlačení AHR pri akútnych astmatických respondentoch, dokonca ak sa podávajú potom, ako bol pacient exponovaný antigénom. Avšak experimentálne a klinické štúdie ukázali, že zatiaľ čo inhalovaný komerčný heparín môže tiež utlmiť skorú fázu antigénom vyvolanej bronchokonštrikcie pri akútnych respondentoch (i keď nie po expozícii antigénu), je neúčinný pri liečení duálnych respondentov. Z toho dôvodu tu jestvovali značné pochybnosti pri našich skorších prácach s ULMWH, či tieto látky budú vykazovať účinnosť pri liečení duálnych alebo neskorých respondentoch, tak ako vykazujú pri akútnych respondentoch.

Súčasné konvenčné terapeutické postupy pri astmatických pacientoch, ktorí sú duálnymi respondentemi sú vo všeobecnosti agresívnejšie a v časovo prolongovanej forme v porovnaní s liečbami, ktoré sa praktizujú pri akútnych respondentoch, opísaných vyššie. Avšak, tieto liečby nie sú obzvlášť účinné pri potláčaní AHR, ako bolo poznamenané vyššie, a ako výsledok ich všeobecne krátkej doby trvania účinku, nemôžu zamedziť neskorú fázu reakcie a AHR pozorovaných pri duálnych respondentoch.

Je potrebné však poznamenať, že dýchacie cesty sú iba prototypom orgánov alebo tkanív ovplyvnených reakciami neskorej fázy (late phase reaction LPR). V lekárskej literatúre sa potvrdilo, že neskorá fáza bronchokonštrikcie a AHR pozorované pri astmatických pacientoch s duálnou odozvou nejestvuje izolovaný fenomén obmedzený na astmatické alebo dokonca pulmonálne stavy. Okrem pulmonálnych, jestvujú tu kutánne, nasálne, okulárne a systémové prejavy LPR. Tieto alergické LPR fenomény sú považované, že sú v úzkom vzájomnom vzťahu z hľadiska imunologických mechanizmov. Pozri Lemanske a Kaliner “Late Phase Allergic Reactions” publ. In Allergies, Principles and Practice (Mosby Yearbook, Inc. 4^th Ed. 1997). Podľa tohto najnovšieho chápania LPR mechanizmov sa javí, že klinické ochorenia (či už kože, pľúc, nosa, očí alebo ďalších orgánov), pri ktorých sa pripúšťajú alergické mechanizmy, majú histologickú zápalovú zložku, ktorá nasleduje po bezprostrednej alergickej alebo hypersenzitivnej reakcii, vyskytujúcej sa expozícii antigénu. Táto postupnosť odozvy sa javí, že je spojená s mediátormi žírnych buniek a rozširuje sa ďalšími vlastnými bunkami do cieľových orgánov alebo novými bunkami do miest žírnej bunky alebo bazofilnej degranulácie. Kortikosteroidy, ktoré sa ukázali ako cenné pri ošetrení rôznych alergických ochorení a astmy, môžu byť prospešné z dôvodu svojej schopnosti utlmovať zápalový proces.

-5Okrem toho jestvujú tu extra-pulmonálne ochorenia, pri ktorých zápalová odozva hrá hlavnú úlohu, napríklad zápalové črevné ochorenie, reumatoidná artritída, glomerulonefritida a zápalové kožné ochorenie. Tieto stavy sa tiež často liečia s použitím protizápalových činidiel, ktoré môžu mať krátke dobu trvania alebo ktoré, podobne ako steroidné a nesteroidné protizápalové liečivá, môžu často spôsobovať diverzné systémové alebo gastrointestinálne reakcie.

Požaduje sa zlepšené farmaceutické liečenie neskorých alergických reakcií a zápalových chorôb.

Podstata vynálezu

Cieľom tohto vynálezu je poskytnúť účinnejšie a bezpečnejšie spôsoby a kompozície na liečenie stavov charakterizovaných neskorou fázou alergických reakcií alebo zápalových reakcií.

Ďalším cieľom predloženého vynálezu je poskytnúť spôsob a kompozície na liečenie antigénom vyvolanej neskorej fázy astmy a bronchiálnej hyperaktivity, ktoré nevykazujú nevýhody podľa doterajšieho stavu techniky.

Ešte ďalším cieľom predloženého vynálezu je poskytnúť spôsob a kompozície na liečenie astmatických duálnych respondentov, ktoré sú účinné pri prevencii a zvrátení prejavov neskorej fázy astmy.

Ešte ďalším cieľom predloženého vynálezu je poskytnúť spôsob a kompozície, ako je opísané vyššie, ktoré sú vysoko účinné pri znižovaní špecifickej a nešpecifickej bronchiálnej hyperaktivity a dokonca aj vtedy, ak sa pacientovi podávajú po expozícii antigénu.

Pri zachovávaní týchto cieľov a ďalších, ktoré budú zrejmé z ďalšieho opisu, vynález sa týka spôsobu liečenia pacienta, patriaceho k triede cicavcov, trpiaceho stavom, ktorý je charakterizovaný neskorou fázou alergických reakcií, vrátane napríklad pulmonálnych, nasálnych, kutánnych, okulárnych a systémových LPR alebo ktorý je charakterizovaný zápalovými reakciami, s použitím intrabronchiálneho, orálneho, topického, parenterálneho, intarnasálneho alebo intraokulárneho podávania pacientovi farmaceutickej kompozície obsahujúcej v každej dávke od 0,005 do 1,0 mg heparínov s ultranízkou molekulovou hmotnosťou (ULMWH) na

-6kilogram telesnej hmotnosti pacienta. Podávanie týchto heparínov sa môže uskutočňovať na akútnom základe, ako dôsledok expozície antigénu, alebo na chronickom základe, na potlačenie zápalových reakcií, ako je bronchiálna hyperaktivita u astmatických pacientov.

ULMWH účinné pri spôsobe podľa vynálezu majú priemerné molekulové hmotnosti približne 1 000 až 3 000 daltonov a vo všeobecnosti môžu vykazovať nízku hladinu antikoagulačnej aktivity alebo žiadnu antikoagulačnú aktivitu. Poskytnuté sú tiež nové farmaceutické kompozície, napríklad inhalačné (intrabronchiálne) kompozície vo forme kvapalných alebo práškových atomizačných alebo aerosólových kompozícií obsahujúcich vhodné koncentrácie týchto ULMWH.

Krátky popis obrázkov

Obrázok 1 predstavuje graf znázorňujúci účinky expozície antigénu na dvoch skupinách alergických oviec, z ktorých jedna pozostávala z akútnych respondentov a druhá zduálnych respondentov. Údaje pre každú skupinu sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± SE % zmena (SE = štandardná odchýlka) v SR_L(špecifická rezistencia pľúc) znázornená pred (základná línia), bezprostredne po (P.A:) a až do 8 hodín po antigéne.

+ = signifikantne rozdielne od základnej línie (P < 0,05) * = signifikantne rozdielne od duálnych respondentov (P < 0,05)

Obrázky 2A a 2B obsahujú dva grafy znázorňujúce rozdielne účinky inhalovania komerčného heparínu na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu v dvoch skupinách alergických oviec, z ktorých jedna pozostávala z akútnych respondentov (n = 8) a druhá z duálnych respondentov (n = 13).

+ = signifikantne rozdielne od základnej línie (P < 0,05) * = signifikantne rozdielne od kontroly (P < 0,05)

Obrázok 3 predstavuje grafické znázornenie účinku predošetrenia s inhaláciou Fragminu™ (priemerná molekulová hmotnosť 5 030 daltonov) pri 5,0 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu pri alergických ovciach s duálnou odozvou. Údaje sú uvedené ako priemer SR_L (v cm H₂O/L/sec) v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetrení s Fragminom.

-Ί Obrázok 4 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok predošetrenia s inhaláciou Fragminu™ pri 5,0mg/kg pri AHR alergických ovciach. Údaje sú znázornené ako ± SE PD_4Oo v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bc-z ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetreni s Fragminom.

PD₄oo = kumulatívna impulzná dávka karbacholu, zvyšujúca SR_L na 400 % nad základnú líniu + = signifikante rozdielne od základnej línie (P < 0,05)

Obrázok 5 predstavuje graf znázorňujúci účinok predošetrenia s inhalovaným CY-216 (priemerná molekulová hmotnosť 4 270 daltonov) pri 1,25mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec sduálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± SE % zmena vSR_Lv skupine zvierat exponovaných antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetreni s CY-216.

Obrázok 6 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok predošetrenia s inhalovaným CY-216 pri 1,25 mg/kg na AHR u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako priemerná ± SE PD400 v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetreni s CY-216.

+ = signifikante rozdielne od základnej línie (P < 0,05)

Obrázok 7 predstavuje graf znázorňujúci účinok predošetrenia s inhalovanými ULMWH CY-222 (priemerná molekulová hmotnosť 2 355 daltonov) pri 1,0 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec sduálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± SE % zmena v SR_Lv skupine zvierat exponovaných antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dni neskôr po predošetreni s CY-222.

+ = signifikante rozdielne od kontroly (P < 0,05)

Obrázok 8 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok predošetrenia s inhalovaným CY-222 pri 1,0 mg/kg na AHR u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako priemerná ± SE PD400 v jednotkách dychu pri základnej línii a 24

-8hodín po expozícii antigénu v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dni neskôr po predošetrení s CY-222.

+ = signifikante rozdielne od základnej línie (P < 0.05)

Obrázok 9 predstavuje graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu s inhalovaným CY-222 pri 1,0 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec s duálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± SE % zmena v SRl znázornená pred, bezprostredne po (čas 0) a až do 8 hodín po expozícii antigénu v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa CY-222 podával bezprostredne po post-antigénovom meraní SRl (šípka).

+ = signifikante rozdielne od kontroly (P < 0,05)

Obrázok 10 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu (šipka na Obrázku 9) s inhalovaným CY-222 pri 1,0 mg/kg na AH R u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako priemerná ± SE PD400 v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa CY-222 podával bezprostredne po expozícii antigénom.

+ = signifikante rozdielne od základnej línie (P < 0,05)

Obrázok 11 predstavuje graf znázorňujúci účinok predošetrenia s inhalovanými ULMWH FRU-70 (priemerná molekulová hmotnosť 2 500 daltonov) pri 1,0 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec s duálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± SE % zmena v SR_L v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetrení s FRU-70.

+ = signifikante rozdielne od kontroly (P < 0,05)

Obrázok 12 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok predošetrenia s inhalovaným FRU-70 pri 1,0 mg/kg na AHR u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako priemerná ± SE PD400 v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetrení s FRU-70.

-9+ = signifikante rozdielne od základnej línie (P < 0,05)

Obrázok 13 predstavuje graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu s inhalovaným FRU-70 pri 0,5 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec s duálnou odozvou Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± SE % zmena v SRl v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa FRU70 podával bezprostredne po post-antigénovom meraní SRl (šipka).

+ = signifikante rozdielne od kontroly (P < 0,05)

Obrázok 14 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu (šipka na obrázku 13) s inhalovaným FRU-70 pri 0,5 mg/kg na AH R u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako priemerná ± SE PD_4Oo v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa FRU-70 podával bezprostredne po expozícii antigénom.

+ = signifikante rozdielne od základnej línie (P < 0,05)

Obrázok 15 predstavuje graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu s inhalovanou zmesou hexasacharidu (priemerná molekulová hmotnosť 1 930 daltonov) pri 0,5 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec s duálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná + SE % zmena v SRl znázornená pred, bezprostredne po (čas 0) a až do 8 hodín po expozícii antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dni neskôr, keď sa zmes hexasacharidu podávala bezprostredne po post-antigénovom meraní SRl (šipka).

+ = signifikante rozdielne od kontroly (P < 0,05)

Obrázok 16 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu (šipka na obrázku 15) s inhalovanou zmesou hexasacharidu pri 0,5 mg/kg na AHR u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako priemerná ± SE PD_4Oo v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa zmes hexasacharidu podávala bezprostredne po expozícii antigénu.

-10+ = signifikante rozdielne od základnej línie (P < 0,05)

Obrázok 17 predstavuje graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu s inhalovaným prečisteným hexasacharidom (priemerná molekulová hmotnosť 1 998 daltonov) pri 0,062 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec sduálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± SE % zmena v SRl, ako je uvedené vyššie, v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa hexasacharid podával bezprostredne po post-antigénovom meraní SRl (šípka).

* = signifikante rozdielne od kontroly (P < 0,05)

Obrázok 18 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu (šipka na obrázku 17) s inhalovaným prečisteným hexasacharidom pri 0,062 mg/kg na AHR u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako priemerná ±SE PD_4Oo v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa hexasacharid podával bezprostredne po expozícii antigénu.

+ = signifikante rozdielne od základnej línie (P < 0,05)

Obrázok 19 predstavuje graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu s inhalovaným prečisteným tetrasacharidom (priemerná molekulová hmotnosť 1 290 daltonov) pri 0,062 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec sduálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± SE % zmena v SRl, ako je uvedené vyššie, bezprostredne po (čas 0) a až do 8 hodín po expozícii antigénu, v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa tetrasacharid podával bezprostredne po post-antigénovom meraní SR_L (šipka).

* = signifikante rozdielne od kontroly (P < 0,05)

Obrázok 20 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu (šipka na obrázku 19) s inhalovaným prečisteným tetrasacharidom pri 0,062 mg/kg na AHR u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako priemerná ±SE PD400 v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa tetrasacharid podával bezprostredne po expozícii antigénu.

+ = signifikante rozdielne od základnej línie (P < 0,05)

Obrázok 21 predstavuje graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu s inhalovaným oktasacharidom (priemerná molekulová hmotnosť 2 480 daltonov) pri 0,25 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec s duálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± SE % zmena v SRl, ako je uvedené vyššie, bezprostredne po (čas 0) a až do 8 hodín po expozícii antigénu, v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa zmes oktasacharidu podávala bezprostredne po post-antigénovom meraní SRl (šípka).

* = signifikante rozdielne od kontroly (P < 0,05)

Obrázok 22 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok ošetrenia po expozícii antigénu (šípka na obrázku 21) s inhalovaným oktasacharidom pri 0,25 mg/kg na AHR u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako priemerná ± SE PD₄₀₀ v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr, keď sa oktasacharid podával bezprostredne po expozícii antigénu.

+ = signifikante rozdielne od základnej línie (P < 0,05)

Obrázok 23 predstavuje graf znázorňujúci účinok predošetrenia s inhalovaným prečisteným disacharidom (priemerná molekulová hmotnosť 660 daltonov) pri 1,0 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec s duálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± S E % zmena v SR_l, ako je uvedené vyššie, bezprostredne po (čas 0) a až do 8 hodín po expozícii antigénu, v skupine zvierat vystavených antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetrení s disacharidom.

Obrázok 24 predstavuje graf znázorňujúci účinok predošetrenia s orálne podávaným prečisteným hexasacharidom (priemerná molekulová hmotnosť 1 998 daltonov) pri 2,0 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec s duálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ±

-12SE % v SR_l, pre jednotlivú ovcu vystavenú antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetrení s hexasacharidom.

Obrázok 25 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok predošetrenia s orálne podávaným prečisteným hexasacharidom pri 2,0 mg/kg na AHR u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako ± SE PD_4Oo v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu pre jednotlivú ovcu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetrení s hexasacharidom.

Obrázok 26 predstavuje graf znázorňujúci účinok predošetrenia s intravenózne podávaným prečisteným hexasacharidom (priemerná molekulová hmotnosť 1 998 daltonov) pri 0,25 mg/kg na antigénom vyvolanú bronchokonštrikciu u alergických oviec s duálnou odozvou. Údaje sú znázornené ako antigénom vyvolaná priemerná ± SE % zmena v SR_L, pre jednotlivú ovcu vystavenú antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetrení s hexasacharidom.

Obrázok 27 predstavuje stĺpcový graf znázorňujúci účinok predošetrenia s intravenózne podávanými prečistenými hexasacharidmi pri 0,25 mg/kg na AHR u alergických oviec. Údaje sú znázornené ako ± SE PD_4Oo v jednotkách dychu pri základnej línii a 24 hodín po expozícii antigénu pre jednotlivú ovcu vystavenú antigénu, najskôr bez ošetrenia liekom a znova o niekoľko dní neskôr po predošetrení s hexasacharidom.

Obrázok 28 predstavuje graf znázorňujúci porovnávaciu aktivitu pri zabránení antigénom vyvolaného eozinofilného vtoku v bronchoalveolárnej vymývacej kvapaline na troch skupinách myší, ktorým sa prečistený hexasacharid podával, prípadne inhaloval, orálne a intraperitoneálne.

Podrobný opis vynálezu

Predložený vynález sa vo všeobecnosti týka spôsobu liečenia pacientov, patriacich k triede cicavcov, trpiacich alebo náchylných na rozvoj chorobných stavov charakterizovaných neskorou fázou alergických reakcií a/alebo zápalových reakcií, ako aj nových farmaceutických kompozícií obsahujúcich heparíny s ultranízkou molekulovou hmotnosťou, ktoré sú vhodné na použitie pri praktickom uskutočňovaní uvedeného spôsobu.

-13Heparín, sulfátovaný mukopolysacharid, sa syntetizuje v žírnych bunkách ako proteoglykán a hojne sa vyskytuje predovšetkým v pľúcach rozličných zvierat. Heparín nie je špecifickou zlúčeninou so stabilnou molekulovou hmotnosťou ale v skutočnosti je heterogénnou zmesou rozličných sulfátovaných polysacharidových reťazcov pozostávajúcich zopakujúcich sa jednotiek D-glukozaminu a buď Liduronovej alebo D-glukuronovej kyseliny. Priemerná molekulová hmotnosť heparínu izolovaného zo živočíšnych tkanív sa pohybuje v rozsahu od približne 6 000 do asi 30 000 daltonov.

Farmakologicky je heparín primárne známy ako antikoagulačné činidlo. Táto aktivita pochádza zo schopnosti heparínu viazať niektoré zvyšky antitrombínu III (ΑΤΙ II), urýchlenia neutralizácie pomocou ΑΤ-III aktivačných faktorov zrážania a zabránenia konverzie protrombínu na trombín. Väčšie množstvá heparínu môžu inaktivovať trombín a včasnejšie faktory zrážania, zabránením konverzie fibrinogénu na fibrín.

Hemoragická aktivita heparínu súvisí s molekulovou hmotnosťou jeho polysacharidových fragmentov; zložky alebo fragmenty s nízkou molekulovou hmotnosťou (napríklad fragmenty, ktoré majú molekulovú hmotnosť menej ako 6 000 daltonov) vykazujú mierne znižovanie antitrombinových a hemoragických účinkov. Podobne, heparíny s nízkou molekulovou hmotnosťou izolované zo živočíšnych tkanív vo všeobecnosti vykazovali znížené hemoragické vlastnosti v porovnaní s komerčným heparínom, avšak ešte vždy vykazovali signifikantnú antikoagulačnú aktivitu.

Komerčný heparín, ktorý je vo všeobecnosti odvodený z pľúc hovädzieho dobytka alebo z bravčovej črevnej sliznice, má priemernú molekulovú hmotnosť približne 15 000 až 17 500 daltonov.

Ukázalo sa, že heparín pôsobí ako špecifický blokátor IP₃ receptorov a inhibuje IP3 sprostredkované uvoľňovanie vápnika. Už prv sme naznačovali, že heparín môže blokovať IP3 receptory v žírnych bunkách a takto interferovaním so signálnou transdukciou môže modulovať degranuláciu žírnych buniek a uvoľňovanie mediátora. Štúdie in vivo a in vitro podporujú toto ponímanie a ukázali, že inhalácia heparínu môže tlmiť alergickú bronchokonštrikciu u oviec, zabraňovať experimentálne vyvolanej astme, ako aj inhibovať anti-lgE vyvolané uvoľnenie

-14žírnych buniek histamínu. Zistilo sa, že inhalovaný heparín v dávkach až do 1,000 jednotiek/kg nemá žiaden účinok na čiastočný tromboplastínový čas (partial thromboplastin time, PTT), teda, poukazuje na “neantikoagulačný” účinok.

Bolo tiež uvedené, že heparíny s nízkou molekulovou hmotnosťou (priemerná molekulová hmotnosť približne 4 500 daltonov), ktorá znižovala APTT aktivitu, boli účinné v štúdiách na zvieratách pri prevencii antigénom vyvolanej bronchokonštrikčnej odozvy (antigen-induced bronchoconstrictor response, ABR) a bronchiálnej hyperaktivity, ktorá sa tiež označuje ako hypersenzibilita dýchacích ciest (airway-hyperresponsiveness, AHR). Avšak, ako je podrobnejšie rozdiskutované a znázornené nižšie, ani komerčne dostupný heparín, ani heparíny so strednou alebo nízkou molekulovou hmotnosťou, dokonca ani heparíny s veľmi nízkou antikoagulačnou aktivitou, nie sú účinné pri zlepšení AHR nasledujúcej po expozícii antigénu na testovaných zvieratách. Tieto heparíny podľa všetkého poskytujú len profylaktický, preventívny účinok, ale nie sú užitočné pri liečení antigénom spustenej astmatickej príhode.

Zistili sme a opísali v predchádzajúcej prihláške č. 08/516,786, že frakcie s ultranízkou molekulovou hmotnosťou (ULMWH) sú nielen účinnými inhibítormi anafylaxie dýchacích ciest, ale sú vysoko účinné pri potlačení AHR, dokonca ak sa podávajú po expozícii antigénu. Dlhodobé pravidelné používanie ULMWH môže znižovať AHR a ULMWH sa preto môže používať pri chronickej terapii astmy spôsobenej buď špecifickými (t.j. antigénnymi) alebo nešpecifickými faktormi.

Naša skoršia prihláška sa týka a opisuje iba testované údaje, ktoré demonštrujú účinnosť ULMWH pri liečení skorej fázy astmy u akútnych respondentov, nie pri liečení “duálnych respondentov”, u ktorých sa zaznamenávajú obidve fázy, skorá a neskorá fáza bronchokonštrikcie a prolongovaná AHR. Ako bolo už prv rozdiskutované, na základe našich skorších údajov nebolo možné predpokladať, že ULMWH, či už podávané pred alebo po expozícii antigénu, by mohli byť účinné pri inhibícii bronchokonštrikcie (ako skorej tak i neskorej fázy) a AHR u duálnych respondentov. Tento nedostatok schopnosti predpovedateľnosti je dokázaný skutočnosťou, že komerčný heparín a heparíny so strednou alebo nízkou molekulovou hmotnosťou (molekulová hmotnosť > 3 000) vykazujú AHR u akútnych respondentov, ak sa podávajú pred expozíciou antigénu, avšak nemajú signifikantný

-15účinok pri potláčaní neskorej fázy reakcie a AHR pozorovaného u duálnych respondentov.

Po uskutočnení ďalších kontrolných štúdií s ULMWH sme prekvapujúco zistili, že heparínové frakcie s priemernou molekulovou hmotnosťou približne 1 000 až asi 3 000 sú účinné pri potláčaní skorej alebo neskorej fázy bronchokonštrikcie a AHR, ak ich duálni respondenti inhalujú pred alebo dokonca po expozícii antigénu.

Dokonca čo je ešte prekvapujúcejšie, zistili sme, že orálne a intravenózne (alebo iné parenterálne) podávanie ULMWH pred expozíciou antigénu účinne inhibuje bronchokonštrikciu a AHR u duálnych respondentov.

Podľa tohto predložený vynález sa z prvého hľadiska týka spôsobu liečenia pacienta z triedy cicavcov, ktorý je duálnym respondentom a trpí antigénom vyvolanou neskorou fázou astmy zahrňujúcim intrabronchiálne podávanie pacientovi, pred alebo po expozícii antigénu, farmaceutickej kompozície, ktorá v každej dávke uvedenej kompozície obsahuje približne 0,005 až asi 1,0 mg jednej alebo viacerých účinných frakcií ULMWH na kilogram telesnej hmotnosti pacienta, a výhodne od približne 0,075 do asi 0,75 mg/kg na dávku. Pre účely tejto prihlášky sa “účinné ULMWH môže definovať ako heparínové frakcie, ktoré majú priemernú molekulovú hmotnosť približne 1 000 až 3 000 daltonov. ULMWH s priemernou molekulovou hmotnosťou približne 1 000 až 2 500 daltonov sú predovšetkým účinné ak sa použijú v spôsobe podľa vynálezu. Každá ULMWH frakcia môže obsahovať tetrasacharidy, pentasacharidy, hexasacharidy, septasacharidy, oktasacharidy a dekasacharidy ako aj molekuly s väčšou dĺžkou reťazca.

Frakcie ULMWH použité vo vynáleze sú oligomérmi sulfátovaných sacharidových jednotiek, ktoré môžu mať napríklad nasledovný všeobecný štruktúrny vzorec:

-16Napriek známej aktivite N-desulfátovaných heparínov v iných biologických systémoch, napríklad ako inhibítory rastových buniek, zistilo sa, že polysacharidové jednotky v ULMWH frakciách, ktoré sú účinné pre účely podľa predloženého vynálezu, sú všetky N-sulfátované, N-desulfátované frakcie sú neúčinné.

Zatiaľ čo sulfátované polysacharidy používané v spôsobe a kompozíciách podľa vynálezu sú tu vo všeobecnosti uvedené ako heparíny s ultranizkou molekulovou hmotnosťou, t.j. frakcie s ultranizkou molekulovou hmotnosťou odvodené od prírodné sa vyskytujúceho heparínu (alebo syntetické verzie takýchto ULMWH), vynález môže tiež zahrňovať použitie sulfátovaných polysacharidov z heparansulfátu, dermatan-sulfátu, chondroitinsulfátu, pentozanpolysulfátu a/alebo ďalších glykozaminoglykánov a mukopolysacharidov. Podstata sulfátovaných polysacharidových frakcií musí však mať priemernú molekulovú hmotnosť okolo 1 000 až 3 000 daltonov. Môžu sa tiež použiť farmaceutický prijateľné soli účinných ULMWH alebo akékoľvek ďalšie sulfátované polysacharidy uvedené vyššie, napríklad sodné, vápenaté alebo draselné soli.

V súlade s týmto prvým hľadiskom vynálezu, človeku alebo inému pacientovi z triedy cicavcov, ktorý je duálnym respondentom, ktorý inhaloval, prehltol alebo iným spôsobom prišiel do kontaktu s antigénom (t..j. bol exponovaný antigénom) typu, o ktorom je známe že vyvoláva astmatické príhody u tohto pacienta, alebo pacientovi, ktorý môže byť v budúcnosti vystavený expozícii antigénu, sa podáva inhalačnou cestou najmenej jedna dávka farmaceutickej kompozície obsahujúcej jeden alebo viac účinných ULMWH celkovo prítomných vo vyššie opísaných rozsahoch koncentrácie. Podľa potreby sa následne môžu podávať prídavné dávky po expozícii antigénu, až pokým pacient opätovne nedosiahne normálne hladiny rezistencie prietoku vzduchu.

Vynález taktiež zahrňuje v druhom hľadisku dlhodobé podávanie účinných ULMWH astmatickým pacientom s duálnou odozvou na zníženie a potlačenie skorej a neskorej fázy AHR. “Dlhodobé podávanie ako sa tu používa, predstavuje podávanie farmaceutických kompozícií obsahujúcich účinné ULMWH najmenej jedenkrát denne počas najmenej desiatich po sebe nasledujúcich dní. V dlhodobom podávaní kompozície obsahujúcej od približne 0,005 až 1,0 mg/kg v dávke, a výhodne približne 0,0075 až 0,75 mg/kg v dávke, sa môže pokračovať trvalo na

-17zabezpečenie terapie potláčajúcej AHR najmenej porovnateľne s kortikosteroidmi avšak v podstate bez vedľajších účinkov.

Inhalačné (intrabronchiálne) Ul Μ'ΛΉ komoozície používané podľa predloženého vynálezu na liečenie neskoiej fázy astmy a ďalších pulmonálnych stavov môžu obsahovať kvapalné alebo práškové kompozície obsahujúce účinné ULMWH frakcie a vhodné na atomizáciu a intrabronchiálne použitie alebo aerosólové kompozície podávané cestou aerosólovej jednotky rozdeľujúcej odmerané dávky.

Vhodné kvapalné kompozície obsahujú napríklad účinné ULMWH vo vodnom, farmaceutický prijateľnom inhalačnom rozpúšťadle, napríklad izotonickom fyziologickom roztoku alebo bakteriostatickej vode. Roztoky sa podávajú pomocou čerpadla alebo tlakom poháňaného atomizačného rozstrekovacieho dávkovača alebo pomocou iných konvenčných prostriedkov na prinútenie alebo umožnenie potrebného dávkového množstva kvapalnej kompozície inhalovať do pľúc pacienta z triedy cicavcov.

Vhodné práškové kompozície zahrňujú, na ilustráciu, práškové prípravky heparínu dôkladne rozmiešané s laktózou alebo inými inertnými práškami, ktoré sú prijateľné na intrabronchiálne podávanie. Práškové kompozície sa môžu podávať pomocou aerosólového dávkovača alebo zapuzdrené v krehkej kapsule, ktorú môže pacient z triedy cicavcom vložiť do zariadenia, ktoré kapsulu prerazí a vyfukuje prášok v rovnomernom prúde vhodnom na inhaláciu.

Aerosólové prípravky na použitie podľa predloženého spôsobu by typicky zahrňovali fluórované alkánové hnacie plyny, povrchovo aktívne látky a spolurozpúšťadlá a mohli by sa plniť do hliníkových alebo iných konvenčných aerosólových zásobníkov, ktoré sa potom uzatvoria vhodným dávkovacím ventilom a natlakujú sa hnacím plynom, vytvárajúcim odmeriavanú dávku inhalátora (metered dose inhaler, MDI).

Celková koncentrácia účinných ULMWH v hnacom prostriedku vhodnom na použitie v tlakových aerosólových dávkovačoch, ako je MDI, musí byť dostatočne vysoká, aby sa poskytla dávka približne 0,005 až 0,1 mg (5 až 100 pg) účinných ULMWH na kilogram telesnej hmotnosti pacienta na podanie. Napríklad teda, ak MDI dodáva pri spustení približne 85 μΙ hnacieho prostriedku obsahujúceho liek,

- 18koncentrácia účinných ULMWH v prostriedku by v prípade pacienta z triedy cicavcov s hmotnosťou 75 kg predstavovala približne 0,0045 až 0,088 mg/μΙ (4,5 až 88 pg/pl), s poskytnutím 0,375 až 7,5 mg (375 až 7500 pg) ULMWH na spustenie, v prípade, že sa vyžaduje podať celú dávku jedným spustením do chodu. Ak sa požaduje spustenie do chodu v dvoch dávkach, zodpovedajúci rozsah koncentrácie by predstavoval približne 0,0022 až 0,044 mg/μΙ (2,2 až 44 pg/pl) poskytnutím 0,188 až 3,75 mg (188 až 3 750 pg) ULMWH na spustenie.

Celková koncentrácia účinných ULMWH v kvapalnom atomizačnom roztoku musí byť dostatočne vysoká aby sa poskytla dávka približne 0,05 až 1,0 mg (50 až 1000 pg) účinných ULMWH na kilogram telesnej hmotnosti pacienta na podanie lieku. Napríklad teda, ak sa používaný atomizér dodáva 5 ml roztoku na spustenie, koncentrácia účinných ULMWH v prípade pacienta z triedy cicavcov s hmotnosťou 75 kg by predstavovala približne 0,75 až 15,0 mg/ml.

Podľa ďalšieho hľadiska vynálezu sa kompozície obsahujúce účinné ULMWH podávajú orálne alebo parenterálne (napríklad intravenózne alebo intramuskulárne) pacientom z triedy cicavcov trpiacich antigénom vyvolanou neskorou fázou astmy, t.j. takým, ktorí sú duálnymi respondentmi, pred expozíciou pacienta antigénu. Orálne alebo parenterálne kompozície obsahujú v každej dávke približne 0,005 až asi 1,0 mg účinných ULMWH na kilogram telesnej hmotnosti pacienta. Orálne alebo parenterálne kompozície sa môžu podávať až do 8 hodín (avšak výhodne nie viac ako 4 hodiny) pred expozíciou antigénu a sú účinné pri znižovaní skorej a neskorej fázy bronchokonštrikcie a pri potláčaní AHR.

Ako je známe pre odborníkov skúsených vo farmaceutickej oblasti, sú dostupné mnohé konvenčné spôsoby a zariadenia na presné dávkovanie dávok intrabronchiálnych liečiv a regulovanie požadovaného dávkového množstva podľa hmotnosti pacienta a závažnosti pacientovho stavu. Okrem toho, sú v oblasti známe mnohé kvapaliny, prášky a aerosólové prostriedky vhodné pre intrabronchiálne ULMWH kompozície podľa predloženého vynálezu a mnohé farmaceutický prijateľné orálne a parenterálne prostriedky, ktoré sa môžu použiť pri orálnych a parenterálnych kompozíciách obsahujúcich ULMWH. Vynález nie je obmedzený na žiadne špeciálne inertné prostriedky, rozpúšťadlá, nosiče, excipienty alebo dávkové formy a nie je

-19obmedzený na žiadne špecifické spôsoby alebo zariadenia na intrabronchiálne podávanie.

Farmaceutické kompozície môžu byť tiež dávkovými formami, ktoré obsahujú účinné ULMWH ako účinné zložky v akýchkoľvek farmaceutický prijateľných orálnych, injektovateľných alebo intravenóznych dávkových prostriedkoch alebo vtopických alebo intraokulárnych prostriedkoch. Každá dávková forma zahrňuje približne 0,005 až 1,0 mg na kilogram priemernej telesnej hmotnosti pacienta účinných ULMWH fledného alebo kombinácie ULMWH) a farmaceutický prijateľné inertné zložky, napríklad bežné excipienty, vehikulá, plnidlá, spojivá, dezintegrátory, rozpúšťadlá, solubilizačné činidlá, sladidlá, farbivá a iné neaktívne zložky, ktoré sú bežne obsiahnuté vo farmaceutických dávkových formách na orálne podávanie. Vhodné orálne dávkové formy zahrňujú tablety, kapsule, kaplety, želatínové kapsule, pilulky, kvapalné roztoky, suspenzie alebo elixíry, prášky, pastilky, mikronizované častice a osmotické dávkovacie systémy. Injektovateľné a intravenózne dávkové formy zahrňujú izotonické fyziologické roztoky alebo roztoky dextrózy obsahujúce vhodné pufre a konzervačné činidlá. Mnohé vhodné dávkové formy a zoznamy ich neaktívnych zložiek sú v odbore dobre známe a uvedené v štandardizovaných textoch ako je Remington's Pharmaceutical Science, 17^th Edition (1985).

Kompozície ULMWH opísané vyššie poskytujú vysoko účinnú liečbu skorej a neskorej fázy antigénom vyvolanej astmy, dokonca po tom, ako nastala expozícia antigénu, ako aj ďalších stavov charakterizovaných neskorou fázou alergických reakcií.

Na demonštrovanie neočakávanej nadradenosti účinných ULMWH pri porovnaní s heparínmi s vyššou molekulovou hmotnosťou pri liečení astmatických duálnych respondentov sa uskutočnili pokusy porovnania účinkov rozličných typov heparínu na alergických ovciach s duálnou odozvou, a to ako pred tak aj po expozícii antigénu. Podrobný opis týchto pokusov a dosiahnuté výsledky sú uvedené v nasledujúcich príkladoch ako aj na grafoch znázornených na obrázkoch.

Nasledujúce príklady, ktoré ilustrujú spôsoby a kompozície podľa vynálezu a demonštrujú ich účinnosť, nie sú mienené ako uvedenie špecifických kompozícií, materiálov, postupov alebo dávkových režimov, ktoré sa musia výhradne použiť na uskutočnenie vynálezu.

-20Prikladv uskutočnenia vynálezu

Príklad 1

Podávanie inhalovaných ULMWH alergickým ovciam s duálnou odozvou

Spôsoby

Pulmonálna rezistencia dýchacích ciest

Na všetky štúdie sa použili alergické ovce s vopred zdokumentovanou duálnou bronchokonštrikčnou odozvou na antigén Ascaris suum. Ovce sa intubovali manžetovou nasotracheálnou trubicou a merala sa pulmonálna rezistencia dýchacích ciest (Ri) technikou ezofágneho balónového katétra, zatiaľ čo torakálny objem plynu sa meral telovou pletysmografiou. Údaje sú vyjadrené ako špecifický objem R_L (SR_L, definovaný ako Rl časy torakálneho objemu plynu (V_tg)).

Senzibilita dýchacích ciest

Na zhodnotenie senzibility dýchacích ciest sa vytvorili kumulatívne krivky dávka-odozva na inhalovaný kabrachol meraním SRl pred a po inhalácii pufrovaného fyziologického roztoku a po každom podaní 10 vdychov zvýšených koncentrácií karbacholu (0,25, 0,5, 1,0, 2,0 a 4,0 roztoku (hmot./obj.)) Senzibilita dýchacích ciest sa merala stanovením kumulatívnej impulznej dávky (PD₄₀₀) karbacholu (v jednotkách dychu), ktoré zvyšovalo SRl na 400 % vyššie nad základnú líniu. Jedna jednotka dychu bola definovaná ako vdýchnutie 1 % roztoku karbacholu.

Heparínové frakcie

V uvedených štúdiách sa podávali rozličné heparínové materiály alergickým ovciam s duálnou odozvou pred a/alebo po expozícii antigénu. Niektoré z týchto heparínov predstavovali frakcie ULMWH s priemernou molekulovou hmotnosťou medzi 1 000 a 3 000 daltonov, niektoré mali vyššiu priemernú molekulovú hmotnosť a jeden mal nižšiu molekulovú hmotnosť. Testované heparínové frakcie sú uvedené nasledujúcej tabuľke 1.

-21 Tabuľka 1

Heparínové frakcie a ich molekulové hmotnosti

Frakcie	Priemerná mol. hmotnosť	Kategória
Komerčný heparín	15 000 d	Heparín
Fragmin^lwl	5 030 d	Nízka mol. Hmotnosť
CY-216	4 270 d	Nízka mol. Hmotnosť
CY-222¹ (Sanofi)	2 355 d	ULMWH
FRU-70⁴ (Kabivitrum)	2 500 d	ULMWH
Hexasacharidové zmes¹³	1 930 d	ULMWH
Oktasachariď*	2 480 d	ULMWH
Prečistený hexasacharid^&	1 998 d	ULMWH
Prečistený tetrasacharid⁰	1 290 d	ULMWH
Disacharid'	660 d	Sub-ULMWH

¹ antikoagulačná oktasacharidová zmes.

² neantikoagulačná oktasacharidová zmes.

³ Oligosasarid odvodený od komerčného bravčového heparínu, obsahujúci primárne tetrasacharidové, hexasacharidové, oktasacharidové a dekasacharidové frakcie.

⁴ Získané z hexasacharidovej zmesi pomocou gélovej stĺpcovej chromatografie, obsahuje približne 70 % oktasacharidových a 30 % dekasacharidových frakcií.

⁵ Získané z hexasacharidovej zmesi pomocou gélovej stĺpcovej chromatografie.

⁶ Získané z tetrasacharidovej zmesi pomocou gélovej stĺpcovej chromatografie.

⁷ Disacharid sa trisulfátoval avšak jeho molekulová hmotnosť bola taká nízka, že sa nedal považovať za ULMWH frakciu s vlastnosťami podobnými heparínu.

Experimentálny protokol

Štúdie dýchacích ciest

Stanovila sa základná senzibilita dýchacích ciest (PD₄₀₀) pre každé zviera a potom sa v rozličných experimentálnych dňoch ovce podrobili expozícii dýchacích ciest antigénu Ascaris suum. Meralo sa SR|_ pred a bezprostredne po expozícii a potom v hodinových intervaloch počas 8 hodín. Post-expozičná PD400 sa odmerala 24 hodín po expozícii antigénu, keď sa prejavilo AHR. Protokol sa opakoval najneskoršie o 14 dní, avšak každému zvieraťu sa podávala dávka jednej testovanej heparínovej frakcie buď 30 minút pred expozíciou antigénu alebo bezprostredne po post-expozičnom SR_L meraní.

Analytické údaje

Údaje boli vyjadrené ako (a) SRL (% zmeny) = post-expozíčná SRr - základná SRl x 100 základná ŠRl (b) PD400 (v jednotkách dychu)

Výsledky

Obrázok 1 znázorňuje rozdielne reakcie na expozíciu antigénu v dvoch skupinách alergických oviec, z ktorých jedna pozostávala z akútnych respondentov a druhá z duálnych respondentov. Pri akútnych respondentoch sa SRl vrátila na približne základné línie po asi troch hodinách po expozícii antigénu a zostala na tejto hodnote. Pri duálnych respondentoch sa však vyskytuje pík neskorej fázy v SRl pri asi šiestich hodinách pričom hodnoty zostávajú signifikantne nad základnou líniou až do osemhodinového ukončenia štúdie. Toto je druhý pík neskorej fázy, ktorý charakterizuje duálnych respondentov.

Obrázky 2A a 2B znázorňujú účinky ošetrenia pred expozíciou s inhalovaným komerčným heparínom na SR_l pri akútnych respondentoch (Obrázok 2A) a pri duálnych respondentoch (obrázok 2B). Zatiaľ čo SR_l pri akútnych respondentoch zostáva na hladinách blízkych základnej línii dokonca po vystavení antigénu, skorá ako aj neskorá fáza SR_L pri duálnych respondentoch nebola zmiernená predošetrením heparínom, dokonca ani pri duálnych respondentoch, ktorým sa podávalo 2 000 jednotiek na kilogram.

-23Obrázky 3 až 6 znázorňujú nedostatok účinnosti heparínových frakcií s nízkou molekulovou hmotnosťou, Fragminu a CY-216, pri modifikácii buď bronchokonštrikcie alebo AHR pri duálnych respondentoch, ktoré sa podávali pred expozíciou antigénu.

Obrázky 7 až 10 ukazujú, že ako predošetrenie tak aj ošetrenie pred expozíciou antigénu s inhalovanými ULMWH CY-222 (priemerná molekulová hmotnosť 2355 d, v rámci účinných ULMWH podlá predloženého vynálezu) boli účinné pri signifikantnom modifikovaní ako skorej tak aj neskorej fázy antigénom vyvolanej bronchokonštrikcie a AHR pri duálnych respondentoch.

Obrázky 11 až 14 znázorňujú účinnosť ako predošetrenia tak aj ošetrenia po expozícii antigénu s ULMWH FRU-70 (priemerná molekulová hmotnosť 2500 d) pri liečení skorej a neskorej fázy astmy.

Obrázky 15 až 22 demonštrujú účinnosť rozličných účinných frakcií ULMWH, dokonca ak sa podávajú po expozícii antigénu, v signifikantnom znížení bronchokonštrikcie a AHR u duálnych respondentov.

Obrázok 23 ukazuje, že disacharidová frakcia, ktorá má priemernú molekulovú hmotnosť len približne 660 d (podstatne nižšiu ako je molekulový rozsah požadovaný pre účinné ULMWH frakcie) bola neúčinná pri modifikácii antigénom vyvolanej bronchokonštrikcie u alergických oviec s duálnou odozvou.

V pokusoch, ktorých údaje sú zobrazené na obrázkoch 7 až 14 a 17 až 22 dávka účinných ULMWH podávaných alergickým ovciam bola najnižšou účinnou dávkou (stanovené pomocou pokusov s vytýčenými dávkami) pre každú ULMWH frakciu. Pozorovalo sa, že rozličné ULMWH frakcie vykazovali varírujúce hladiny minimálnej účinnej dávky pri liečení duálnych respondentov. Minimálna účinná dávka predstavovala približne 1,0 mg/kg pre CY-222 a pre FRU-70 podávané pred expozíciou antigénu, avšak približne 0,5 mg/kg pre FRU-70 podávané po expozícii antigénu a pre inhalovanú hexasacharidovú zmes. Prečistený tetrasacharid s najnižšou priemernou molekulovou hmotnosťou zo všetkých testovaných účinných ULMWH, vykazoval minimálnu účinnú dávku, ak sa podával po expozícii antigénu v dávke 0,062 mg/kg, rovnako ako prečistený hexasacharid. Tieto údaje majú tendenciu poukazovať na to, že prečistené frakcie s priemernou molekulovou hmotnosťou blízko dolného limitu asi 1000 d môžu byť najúčinnejšími ULMWH,

-24prinajmenšom pri liečení duálnych respondentov. Optimálnou štruktúrnou doménou a/alebo sekvenciou pre pozorovanú antialergickú a/alebo antizápalovú aktivitu sa javí byť tetrasacharid.

Príklad 2

Podávanie orálnych ULMWH alergickým ovciam s duálnou odozvou

V predloženom pokuse sa použil postup z príkladu 1, pokiaľ ide o podmienky testovaných zvierat a spôsoby vyhodnotenia.

Jednej alergickej ovci s duálnou odozvou sa podávalo orálne 2 mg/kg prečisteného hexasacharidu (priemerná molekulová hmotnosť 1998 daltonov) 90 minút pred expozíciou antigénom Ascarís suum. Účinky predošetrenia s hexasacharidom na SRl zo základnej línie (čas podávania hexasacharidu) počas 8 hodín po expozícii antigénu je zobrazené na obrázku 24. Na obrázku 24 je pre účely porovnania znázornená tiež percentuálna zmena SRl u tej istej ovce s duálnou odozvou (v pokuse uskutočnenom niekoľko dní skôr), ktorá bola exponovaná antigénom, avšak bez ULMWH predošetrenia.

Na obrázku 25 sú znázornené hodnoty PD_4Oo merané pri základnej línii a po expozícii antigénu, keď ovca bola exponovaná antigénom pri predošetrení hexasacharidom alebo bez predošetrenia (kontrola).

Príklad 3

Podávanie intravenóznych ULMWH alergickým ovciam s duálnou odozvou

Postup z príkladu 2 sa uskutočnil s inou alergickou ovcou s duálnou odozvou, s tou výnimkou, že 0,25 mg/kg prečisteného hexasacharidu sa podávalo intravenózne jednu hodinu pred expozíciou antigénu v jednom pokuse, pričom antigén sa podával bez ošetrenia v druhom (kontrolnom) pokuse. Percentuálna zmena SR_L pri predošetrení a v kontrolných pokusoch je znázornená na obrázku 26 a hodnoty PD₄₀₀ pre tieto pokusy pri základnej línii a po expozícii antigénu sú znázornené na obrázku 27.

Príklad 4

Prevencia antigénom vyvolaného eozinofilného vtoku u myší

-25V štyroch skupinách senzibilizovaných laboratórnych myší (n = 3 v každej skupine) sa uskutočnilo bronchoalveolárne vymytie 24 hodín po expozícii antigénu na stanovenie hodnôt eozinofilného vtoku v každej skupine. Myši sa ošetrili buď s aerosólovým fyziologickým roztokom (placebo) alebo prečisteným hexasacharidom nasledujúcimi spôsobmi a nasledujúcimi dávkovými množstvami: inhalovaný aerosól⁸, orálne (100 μg) a intraperitoneálne (40 pg). Percento inhibície eozinofilného vtoku účinné pri každej ošetrovanej skupine sa stanovilo porovnaním hladiny takéhoto vtoku meraného v bronchoalveolárnej výplachovej kvapaline následne po podaní hexasacharidu v skupine s fyziologickým roztokom.

Priemerné percentuálne hodnoty inhibície pre tri ošetrované skupiny myší sú zobrazené na obrázku 28. Myši, ktorým sa podával inhalačné a orálne hexasacharid vykazovali 40 až 50 % zníženie eozinofilného vtoku, zatiaľ čo myši, ktorým sa podával intraperitoneálne hexasacharid vykazovali približne 20 % zníženie takéhoto vtoku.

⁸ Myši (n = 3) sa umiestnili do komory obsahujúcej 100 mg hexasacharidu v 9 ml bakteriostatickej vody pre injekcie, ktorý sa aerosóloval. Myši sa nechali inhalovať aerosól počas približne 30 minút.

Rozličné účinky komerčného heparínu, ktoré sa pozorovali u akútnych a duálnych respondentov (znázornené na obrázkoch 2A a 2B), môžu naznačovať zložitosť rozličných signalizačných ciest počas anafylaxie dýchacích ciest. Toto by mohlo poukazovať na to, že počas imunologický sprostredkovanej reakcie žírnych buniek v dýchacích cestách, IP3 je predominantnou účinnou cestou pri “akútnych respondentoch, zatiaľ čo cesty bez IP₃ (napríklad diacyl-glycerol/proteín kinázy C alebo iné cesty) môžu byť určujúce pri “duálnych respondentoch.

Fáza neskorej odozvy a AHR sú spojené so značným zápalom dýchacích ciest. Patologické štúdie sliznice dýchacích ciest a bronchoalveolárny výplach (bronchoalveolar lavage, BAL) ukázali vtok eozinofilov, neutrofilov a aktivovaných Tlymfocytov počas tejto fázy. Zvýšené hladiny zápalových mediátorov, ktoré sú odvodené od eozinofilov, v plazme a BAL, vrátane katiónového proteínu a dôležitého zásaditého proteínu sa pozorovali počas reakcie neskorej fázy. Usmernenie cytokínov TH2-typu (IL₄ a IL₅) v dôsledku expozície alergénu sa pozorovalo počas neskorej fázy. Teda, bunečná zápalová odozva v kombinácii s uvoľnením prozápalových mediátorov (napríklad leukotriénov, PAF, eozinofilných proteínov a podobne) a lokálne produkované cytokíny v sliznici priedušiek hrá hlavnú úlohu pri alergickom zápale v neskorej fáze a pri bronchokonštrikcii.

AHR a teda zápal dýchacích ciest je možné modifikovať buď prevenciou uvoľňovania žírneho mediátora pomocou “anti-alergických činidiel (napríklad kromoglykátu sodného) alebo pôsobením “protizápalových” činidiel, ako sú glukokortikosteroidy. “Anti-alergické” činidlá sú účinné iba ako profylaktické činidlá a môžu zabraňovať uvoľňovaniu mediátora a AHR. Pretože tieto činidlá nemajú protizápalový účinok, vo všeobecnosti sú neúčinné ak sa podávajú po expozícii antigénu. Naopak, “protizápalové činidlá môžu utlmovať post-antigénovú AHR a zápal dýchacích ciest, či sa už podávajú pred alebo po expozícii antigénu. Naše údaje naznačujú, že účinky ULMWH sú analogické protizápalovým účinkom glukokortíkosteroidov.

Pretože účinné ULMWH môžu modifikovať AHR, dokonca i keď sa podávajú po expozícii antigénu, môžu byť taktiež užitočné pri liečení neastmatických stavov spojených s AHR, napríklad chronickej bronchitídy, emfyzému a cystickej fibrózy.

-27Navyše, z hľadiska našich zistení týkajúcich sa účinnosti určitých ULMWH pri inhibícii astmatickej LPR spôsobom, ktorý je podobný protizápalovým účinkom kortikosteroidov, účinné ULMWH by mohli byť využiteľné pri liečení nasledujúcich stavov a s použitím nasledujúcich spôsobov podávania:

1. Neskorá fáza reakcií a zápalová odozva v extrapulmonálnych oblastiach:

(a) alergická rinitída (b) alergická dermatitída (c) alergická konjuktivitída

2. Extrapulmonálne ochorenia, pri ktorých hrá hlavnú úlohu zápalová odozva:

(i) zápalové črevné ochorenie (ii) reumatoidná artritída a ďalšie kolagénno-vaskulárne ochorenia (iii) glomerulonefritída (iv) zápalové kožné ochorenia

3. Spôsoby podávania (i) intrabronchiálne (ii) intranasálne (iii) intraokulárne (iv) topicky (v) orálne (vi) parenterálne (intramuskulárne alebo intravenózne)

Je však potrebné zdôrazniť, že vynález nie je v žiadnym spôsobom obmedzený alebo ohraničený žiadnymi teoretickými alebo platnými fyziologickými alebo biochemickými mechanizmami alebo cestami, ale zahrňuje spôsoby liečenia stavov, ktoré sú charakterizované neskorou fázou alergických reakcií alebo liečenia pacientov z triedy cicavcov sduálnou odozvou, a kompozície na použitie v uvedených spôsoboch opísaných vyššie, bez ohľadu na skutočný mechanizmus príslušného účinku.

Bolo teda ukázané, že boli poskytnuté spôsoby a kompozície, ktorými sa dosiahnu jednotlivé ciele vynálezu a ktoré sú dobre prispôsobené na to, aby vyhoveli podmienkam pri praktickom využití.

-28Sú možné rozlične uskutočnenia podľa vyššie uvedeného vynálezu a rozličné zmeny vyššie uvedených uskutočnení, je však potrebné si uvedomiť, že všetky tu opísané skutočnosti treba chápať ako ilustratívne a nie ako význam obmedzujúce.

To, čo je nárokované a nové a požaduje sa chrániť patentovou listinou, je uvedené ďalej v patentových nárokoch.

Claims

1. Použitie heparínov s ultranízkou molekulovou hmotnosťou od približne 1 000 do asi 3 000 daltonov (ULMWH) na výrobu farmaceutickej kompozície, ktorá obsahuje v dávke približne 0,005 až asi 1,0 mg uvedených ULMWH na kilogram telesnej hmotnosti pacienta, na liečenie pacienta trpiaceho alebo náchylného na stav charakterizovaný neskorou fázou alergických reakcií, senzibilitou dýchacích ciest alebo zápalovými reakciami.

2. Použitie podľa nároku 1, kde ULMWH majú priemernú molekulovú hmotnosť od približne 1 000 do asi 2 500 daltonov.

3. Použitie podľa nároku 1, kde ULMWH obsahujú heparínové frakcie zvolené zo skupiny zahrňujúcej tetrasacharidy, pentasacharidy, hexasacharidy, septasacharidy, oktasacharidy a dekasacharidy a ich farmaceutický prijateľné soli.

4. Použitie podľa nároku 1, kde ULMWH sú N-sulfátované.

5. Použitie podľa nároku 1, kde kompozícia obsahuje v dávke približne 0,075 až asi 0,75 mg ULMWH na kilogram.

6. Použitie podlá nároku 1, kde ULMWH nevykazujú v podstate žiadnu antikoagulačnú aktivitu.

7. Použitie podľa nároku 1, kde kompozícia sa podáva orálnym, parenterálnym, topickým, intrabronchiálnym, intranasálnym alebo intraokulárnym spôsobom.

8. Použitie podľa nároku 7, kde parenterálnym podávaním je intravenózne alebo intramuskulárne podávanie.

9. Použitie podľa nároku 1, kde uvedený stav je charakterizovaný neskorou fázou alergických reakcií zvolených zo skupiny zahrňujúcej neskorú fázu pulmonálnych reakcií, neskorú fázu nasálnych reakcií, neskorú fázu kutánnych reakcií, neskorú fázu okulárnych reakcií a neskorú fázu systémových reakcii.

10. Použitie podľa nároku 9, kde uvedenými neskorými fázami reakcií sú neskoré fázy pulmonálnych reakcii.

11. Použitie podľa nároku 10, kde uvedeným stavom je neskorá fáza astmy.

12. Použitie podľa nároku 1, kde uvedeným stavom je neastmatický stav charakterizovaný hypersenzibilitou dýchacích ciest.

13. Použitie podľa nároku 12, kde uvedený stav je zvolený zo skupiny zahrňujúcej chronickú bronchitídu, emfyzém a cystickú fibrózu.

14. Použitie podľa nároku 1, kde uvedený stav je charakterizovaný zápalovými reakciami.

15. Použitie podľa nároku 1, kde uvedený stav je zvolený zo skupiny zahrňujúcej alergickú rinitídu, alergickú dermatitídu, alergickú konjuktivitídu, zápalové črevné ochorenie, reumatoidnú artritídu, kolagénno-vaskulárne ochorenia, glomerulonefritídu, zápalové kožné ochorenia a sarkoidózu.

16. Použitie podľa nároku 1, kde kompozícia obsahuje roztok alebo suspenziu ULMWH vo vodnom, farmaceutický prijateľnom inhalačnom vehikule.

17. Použitie podľa nároku 16, kde vehikulom je izotonický fyziologický roztok alebo bakteriostatická voda.

18. Použitie podľa nároku 16, kde kompozícia sa podáva pomocou čerpadla alebo tlakom poháňaného atomizéra.

19. Použitie podľa nároku 16, kde postačujúce množstvo kompozície sa podáva pacientovi tak, aby sa poskytla dávka približne 0,05 až 1,0mg/kg uvedených ULMWH.

20. Použitie podľa nároku 16, kde kompozícia obsahuje približne 0,75 až 15,0 mg/ml uvedených ULMWH.

21. Použitie podľa nároku 1, kde kompozíciou je aerosólová kompozícia obsahujúca aerosólový hnací plyn.

22. Použitie podľa nároku 21, kde kompozícia sa rozdeľuje pomocou inhalátora s odmeriavanou dávkou.

23. Použitie podľa nároku 21, kde postačujúce množstvo kompozície sa podáva pacientovi tak, aby sa poskytla dávka približne 0,005 až 0,1 mg/kg uvedených ULMWH.

24. Použitie podľa nároku 21, kde kompozícia obsahuje približne 2,2 až 88 pg/μΙ uvedených ULMWH.

25. Použitie podľa nároku 1, kde kompozícia obsahuje práškový prípravok ULMWH zmiešaný s inertným práškom prijateľným na intrabronchiálne podávanie.

26. Použitie podľa nároku 25, kde inertným práškom je laktóza.

27. Použitie podľa nároku 25, kde kompozícia sa podáva pomocou aerosólového dávkovača.

28. Použitie podľa nároku 25, kde kompozícia sa podáva zo zapuzdrenej krehkej kapsule.

29. Použitie podľa nároku 1, kde kompozícia sa podáva pacientovi pred expozíciou antigénu vyvolávajúceho alergickú reakciu.

30. Použitie podľa nároku 1, kde kompozícia sa podáva pacientovi následne po expozícii antigénu vyvolávajúceho alergickú reakciu.

31. Farmaceutická kompozícia na liečenie padenta z triedy cicavcov, trpiaceho alebo náchylného na stav charakterizovaný neskorou fázou alergických reakcií, hypersenzibilitou dýchacích ciest alebo zápalovými reakciami, vyznačujúca sa tým, že kompozícia obsahuje v každej dávke približne 0,005 až asi 1,0 mg ULMWH na kilogram telesnej hmotnosti pacienta vo farmaceutický prijateľnom inhalačnom, orálnom, parenterálnom, topickom, intranasálnom alebo intraokulárnom vehikule, pričom uvedené ULMWH majú priemernú molekulovú hmotnosť približne 1 000 až 3 000 daltonov.

32. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že ULMWH majú priemernú molekulovú hmotnosť od približne 1 000 do asi 2 500 daltonov.

33. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že ULMWH obsahujú heparínové frakcie zvolené zo skupiny zahrňujúcej tetrasacharidy, pentasacharidy, hexasacharidy, septasacharidy, oktasacharidy a dekasacharidy a ich farmaceutický prijateľné soli.

34. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že ULMWH sú N-sulfátované.

35. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že obsahuje v dávke približne 0,075 až asi 0,75 mg ULMWH na kilogram.

36. Kvapalná alebo tekutá kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že obsahuje približne 1,0 až asi 20,0 ULMWH na ml kompozície

37. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že ULMWH nevykazujú v podstate žiadnu antikoagulačnú aktivitu.

38. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že obsahuje roztok alebo suspenziu ULMWH vo vodnom, farmaceutický prijateľnom inhalačnom vehikule.

39. Kompozícia podľa nároku 38, vyznačujúca sa tým, že vehikulom je izotonický fyziologický roztok alebo bakteriostatická voda.

40. Kompozícia podľa nároku 38, vyznačujúca sa tým, že je vhodná na podávanie pomocou čerpadla alebo tlakom poháňaného atomizéra.

41. Kompozícia podľa nároku 38, vyznačujúca sa tým, že ďalej zahrňuje aerosólový hnací plyn a je vhodná na podávanie pomocou inhalátora s odmeriavanou dávkou.

42. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že obsahuje práškový prípravok ULMWH zmiešaný s inertným práškom prijateľným na intrabronchiálne podávanie.

43. Kompozícia podľa nároku 42, vyznačujúca sa tým, že inertným práškom je laktóza.

44. Kompozícia podľa nároku 42, vyznačujúca sa tým, že sa podáva pomocou aerosólového dávkovača.

45. Kompozícia podľa nároku 42, vyznačujúca sa tým, že sa podáva zo zapuzdrenej krehkej kapsule.

46. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že obsahuje farmaceutický prijateľné orálne vehikulum.

47. Kompozícia podľa nároku 46, vyznačujúca sa tým, že je orálnou dávkovou formou zvolenou zo skupiny zahrňujúcej tablety, kapsule, kaplety, želatínové kapsule, pilulky, kvapalné roztoky, suspenzie alebo elixíry, prášky, pastilky, mikronizované častice a osmotické dávkovacie systémy.

48. Kompozícia podľa nároku 47, vyznačujúca sa tým, že ďalej obsahuje excipienty, vehikulá, plnidlá, spojivá, dezintegrátory, rozpúšťadlá, solubilizačné činidlá, sladidlá alebo farbivá.

49. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že obsahuje farmaceutický prijateľné parenterálne vehikulum.

50. Kompozícia podľa nároku 49, vyznačujúca sa tým, že vehikulum obsahuje izotonický fyziologický roztok alebo roztok dextrózy.

51. Kompozícia podľa nároku 49, vyznačujúca sa tým, že je vhodná na intravenózne podávanie.

52. Kompozícia podľa nároku 49, vyznačujúca sa tým, že je vhodná na intramuskulárne podávanie.

53. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že obsahuje farmaceutický prijateľné topické vehikulum.

54. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že obsahuje farmaceutický prijateľné intranasálne vehikulum.

55. Kompozícia podľa nároku 31, vyznačujúca sa tým, že obsahuje farmaceutický prijateľné intraokulárne vehikulum.

56. Použitie sulfátovaných polysacharidov s priemernou molekulovou hmotnosťou od približne 1 000 do asi 3 000 daltonov na výrobu farmaceutickej kompozície, ktorá obsahuje v dávke približne 0,005 až asi 1,0 mg uvedených sulfátovaných polysacharidov na kilogram telesnej hmotnosti pacienta, na liečenie pacienta trpiaceho alebo náchylného na stav charakterizovaný neskorou fázou alergických reakcii, senzibilitou dýchacích ciest alebo zápalovými reakciami.

57. Použitie podľa nároku 56, kde sulfátované polysacharidy sú odvodené od glykozaminoglykánov alebo mukopolysacharidov.

58. Použitie podľa nároku 57, kde sulfátované polysacharidy sú odvodené od heparínu, heparansulfátu, dermatansulfátu, chondroitinsulfátu alebo pentozanpolysulfátu.

59. Použitie podľa nároku 56, kde sulfátované polysacharidy zahrňujú tetrasacharidy, pentasacharidy, hexasacharidy, septasacharidy, oktasacharidy a dekasacharidy a ich farmaceutický prijateľné soli.

60. Použitie podľa nároku 59, kde sulfátované polysacharidy zahrňujú tetrasacharidy.