SK10702001A3 - Vakcína proti BHV-1 obsahujúca vírus s deletovaným génom - Google Patents
Vakcína proti BHV-1 obsahujúca vírus s deletovaným génom Download PDFInfo
- Publication number
- SK10702001A3 SK10702001A3 SK1070-2001A SK10702001A SK10702001A3 SK 10702001 A3 SK10702001 A3 SK 10702001A3 SK 10702001 A SK10702001 A SK 10702001A SK 10702001 A3 SK10702001 A3 SK 10702001A3
- Authority
- SK
- Slovakia
- Prior art keywords
- virus
- vaccine
- gene
- deleted
- galactosidase
- Prior art date
Links
- 241000700605 Viruses Species 0.000 title claims abstract description 90
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 title claims abstract description 29
- 108010005774 beta-Galactosidase Proteins 0.000 claims abstract description 47
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims abstract description 21
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims abstract description 20
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 claims abstract description 17
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 claims abstract description 14
- 101000807236 Human cytomegalovirus (strain AD169) Membrane glycoprotein US3 Proteins 0.000 claims abstract description 11
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims abstract description 6
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 28
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 19
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 claims description 15
- 241001529453 unidentified herpesvirus Species 0.000 claims description 13
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 claims description 8
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 claims description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 claims description 6
- 230000002238 attenuated effect Effects 0.000 claims description 6
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 241000701024 Human betaherpesvirus 5 Species 0.000 claims description 5
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims description 5
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 claims description 5
- 230000001744 histochemical effect Effects 0.000 claims description 4
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 claims description 3
- 238000011065 in-situ storage Methods 0.000 claims description 3
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 claims description 3
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 claims description 3
- 238000002255 vaccination Methods 0.000 claims description 3
- 230000003053 immunization Effects 0.000 claims description 2
- 238000012216 screening Methods 0.000 claims description 2
- 102000005936 beta-Galactosidase Human genes 0.000 claims 8
- 238000003556 assay Methods 0.000 claims 3
- 101150017040 I gene Proteins 0.000 claims 2
- 238000012151 immunohistochemical method Methods 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims 1
- 241000701083 Bovine alphaherpesvirus 1 Species 0.000 abstract description 83
- WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N beta-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-FPRJBGLDSA-N 0.000 abstract description 22
- 238000012217 deletion Methods 0.000 abstract description 18
- 230000037430 deletion Effects 0.000 abstract description 18
- 101150072564 gE gene Proteins 0.000 abstract description 11
- 238000003780 insertion Methods 0.000 abstract description 7
- 230000037431 insertion Effects 0.000 abstract description 7
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 abstract description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 abstract description 4
- 244000309466 calf Species 0.000 description 36
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 21
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 10
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 9
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 9
- 238000012512 characterization method Methods 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- 241000701093 Suid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 7
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 6
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 6
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 6
- 238000002105 Southern blotting Methods 0.000 description 5
- 238000010276 construction Methods 0.000 description 5
- 241000701081 Equid alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 4
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 4
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 4
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 4
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 4
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 4
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 4
- 230000029142 excretion Effects 0.000 description 4
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 4
- 230000009545 invasion Effects 0.000 description 4
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 4
- 206010010741 Conjunctivitis Diseases 0.000 description 3
- 206010011224 Cough Diseases 0.000 description 3
- 102100027723 Endogenous retrovirus group K member 6 Rec protein Human genes 0.000 description 3
- 101800000342 Glycoprotein C Proteins 0.000 description 3
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 3
- 206010000210 abortion Diseases 0.000 description 3
- 231100000176 abortion Toxicity 0.000 description 3
- 230000002788 anti-peptide Effects 0.000 description 3
- 230000027645 antigenic variation Effects 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 230000004069 differentiation Effects 0.000 description 3
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 3
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 3
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 3
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 3
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 3
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 3
- 230000011664 signaling Effects 0.000 description 3
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 3
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 3
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 3
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 3
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 3
- 102100026189 Beta-galactosidase Human genes 0.000 description 2
- HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N Chloroform Chemical compound ClC(Cl)Cl HEDRZPFGACZZDS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101001095863 Enterobacteria phage T4 RNA ligase 1 Proteins 0.000 description 2
- 101710121417 Envelope glycoprotein Proteins 0.000 description 2
- 206010020565 Hyperaemia Diseases 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 2
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 2
- 101150031479 US9 gene Proteins 0.000 description 2
- 208000025865 Ulcer Diseases 0.000 description 2
- 108020005202 Viral DNA Proteins 0.000 description 2
- 230000036528 appetite Effects 0.000 description 2
- 235000019789 appetite Nutrition 0.000 description 2
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 2
- 108010070396 bovine herpesvirus type-1 glycoproteins Proteins 0.000 description 2
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 2
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 2
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 2
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 2
- 244000144980 herd Species 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 238000011081 inoculation Methods 0.000 description 2
- 210000003292 kidney cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- 210000002850 nasal mucosa Anatomy 0.000 description 2
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 2
- 230000007918 pathogenicity Effects 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 2
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 2
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 2
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 231100000397 ulcer Toxicity 0.000 description 2
- 238000011144 upstream manufacturing Methods 0.000 description 2
- 230000001018 virulence Effects 0.000 description 2
- LINMATFDVHBYOS-MBJXGIAVSA-N (2s,3r,4s,5r,6r)-2-[(5-bromo-1h-indol-3-yl)oxy]-6-(hydroxymethyl)oxane-3,4,5-triol Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1OC1=CNC2=CC=C(Br)C=C12 LINMATFDVHBYOS-MBJXGIAVSA-N 0.000 description 1
- -1 9-fluorenylmethoxycarbonyl (FMOC) Chemical class 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N Amphotericin-B Natural products O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1C=CC=CC=CC=CC=CC=CC=C[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-KKGHZKTASA-N 0.000 description 1
- 102100022717 Atypical chemokine receptor 1 Human genes 0.000 description 1
- 241001440741 CHER virus Species 0.000 description 1
- 229920000742 Cotton Polymers 0.000 description 1
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 1
- 208000000059 Dyspnea Diseases 0.000 description 1
- 206010013975 Dyspnoeas Diseases 0.000 description 1
- 101150013191 E gene Proteins 0.000 description 1
- 208000004232 Enteritis Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 241000701533 Escherichia virus T4 Species 0.000 description 1
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 1
- CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N Gentamicin Chemical compound O1[C@H](C(C)NC)CC[C@@H](N)[C@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](NC)[C@@](C)(O)CO2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N CEAZRRDELHUEMR-URQXQFDESA-N 0.000 description 1
- 229930182566 Gentamicin Natural products 0.000 description 1
- 101000678879 Homo sapiens Atypical chemokine receptor 1 Proteins 0.000 description 1
- 241000700588 Human alphaherpesvirus 1 Species 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 238000002944 PCR assay Methods 0.000 description 1
- 206010033799 Paralysis Diseases 0.000 description 1
- ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N Phenol Chemical compound OC1=CC=CC=C1 ISWSIDIOOBJBQZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010076504 Protein Sorting Signals Proteins 0.000 description 1
- 108091081062 Repeated sequence (DNA) Proteins 0.000 description 1
- 206010051497 Rhinotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 241000282849 Ruminantia Species 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 101001039145 Suid herpesvirus 1 (strain Rice) Envelope glycoprotein I Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 206010051511 Viral diarrhoea Diseases 0.000 description 1
- 230000002159 abnormal effect Effects 0.000 description 1
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N amphotericin B Chemical compound O[C@H]1[C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](C)O[C@H]1O[C@H]1/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/C=C/[C@H](C)[C@@H](O)[C@@H](C)[C@H](C)OC(=O)C[C@H](O)C[C@H](O)CC[C@@H](O)[C@H](O)C[C@H](O)C[C@](O)(C[C@H](O)[C@H]2C(O)=O)O[C@H]2C1 APKFDSVGJQXUKY-INPOYWNPSA-N 0.000 description 1
- 229960003942 amphotericin b Drugs 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 1
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 1
- 230000017531 blood circulation Effects 0.000 description 1
- 108010044381 bovine herpesvirus 5 glycoprotein D Proteins 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012761 co-transfection Methods 0.000 description 1
- 230000021615 conjugation Effects 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 206010061428 decreased appetite Diseases 0.000 description 1
- 238000010586 diagram Methods 0.000 description 1
- 230000008030 elimination Effects 0.000 description 1
- 238000003379 elimination reaction Methods 0.000 description 1
- 206010014599 encephalitis Diseases 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 1
- 238000000605 extraction Methods 0.000 description 1
- 210000000416 exudates and transudate Anatomy 0.000 description 1
- 101150036031 gD gene Proteins 0.000 description 1
- 101150015940 gL gene Proteins 0.000 description 1
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 1
- 210000003128 head Anatomy 0.000 description 1
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 1
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000002169 hydrotherapy Methods 0.000 description 1
- 230000036039 immunity Effects 0.000 description 1
- 229940031551 inactivated vaccine Drugs 0.000 description 1
- 208000005562 infectious bovine rhinotracheitis Diseases 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 1
- 238000002941 microtiter virus yield reduction assay Methods 0.000 description 1
- 210000002200 mouth mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000004877 mucosa Anatomy 0.000 description 1
- 210000003928 nasal cavity Anatomy 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 210000000944 nerve tissue Anatomy 0.000 description 1
- 230000005156 neurotropism Effects 0.000 description 1
- 230000002085 persistent effect Effects 0.000 description 1
- 238000012247 phenotypical assay Methods 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108010071967 protein K Proteins 0.000 description 1
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 1
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 230000004044 response Effects 0.000 description 1
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 1
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 208000013220 shortness of breath Diseases 0.000 description 1
- 238000002415 sodium dodecyl sulfate polyacrylamide gel electrophoresis Methods 0.000 description 1
- 230000000087 stabilizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000001629 suppression Effects 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 1
- 230000009885 systemic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 230000000007 visual effect Effects 0.000 description 1
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
- A61P31/16—Antivirals for RNA viruses for influenza or rhinoviruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/20—Antivirals for DNA viruses
- A61P31/22—Antivirals for DNA viruses for herpes viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
- A61P37/02—Immunomodulators
- A61P37/04—Immunostimulants
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N7/00—Viruses; Bacteriophages; Compositions thereof; Preparation or purification thereof
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5254—Virus avirulent or attenuated
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/51—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising whole cells, viruses or DNA/RNA
- A61K2039/525—Virus
- A61K2039/5256—Virus expressing foreign proteins
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
- A61K2039/54—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the route of administration
- A61K2039/541—Mucosal route
- A61K2039/543—Mucosal route intranasal
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16722—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16741—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2710/16743—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2710/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA dsDNA viruses
- C12N2710/00011—Details
- C12N2710/16011—Herpesviridae
- C12N2710/16711—Varicellovirus, e.g. human herpesvirus 3, Varicella Zoster, pseudorabies
- C12N2710/16761—Methods of inactivation or attenuation
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Virology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Public Health (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Pulmonology (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
Description
Vakcína proti BHV-1 obsahujúca vírus s deletovaným génom
Oblasť vynálezu
Tento vynález sa všeobecne týka rekombinantných vakcín proti bovinnému herpesvírusu a príslušných metód. Špeciálne sa tento vynález týka vytvorenia infekčného rekombinantného bovinného herpesvírusu typu 1 (BHV-1) s deletovanou časťou natívnej oblasti kódujúcej glykoproteín E (gE) a funkčným β-galaktozidázovým génom (β-gal) do nej vloženým v lokuse gE. Táto delécia natívnej gE kódujúcej oblasti vírus oslabuje a slúži ako genotypový alebo imunologický signálny znak (marker) na rozlíšenie infekcie rekombinantným vírusom s deletovaným gE od vírusovej infekcie štandardným typom. Okrem toho inzercia génu β-gal znamená fenotypový spôsob skúšky na prítomnosť infekcie rekombinantným vírusom s deletovaným génom gE expresiou aktivity génu β-gal v hostiteľských bunkách.
Doterajší stav techniky
Bovinný herpesvírus typu 1 (BHV-1), známy ako nákazlivý vírus bovinnej rinotracheitídy (IBRV) je spájaný s radom klinických chorôb vrátane rinotracheitídy, konjunktivitídy, pohlavných infekcií, občasného potratu, enteritídy, encefalitídy a celkových systémových infekcií dobytka Genóm BHV1 pozostáva z lineárnej molekuly dsDNA s cca 140 kb. Je zložený z jedinej dlhej (UL) oblasti a jedinej krátkej (Us) oblasti, ktoré sú lemované vnútornými a terminálnymi prevrátenými opakujúcimi sa sekvenciami (IR a TR) Genóm BHV-1 kóduje približne 70 proteínov (Misra a ďalší, Proteins Specified Bovine Herpesvírus 1 (Infectious Bovine Rhinotracheitis), zv 40, J Virol., s.367-378 (1981)). Rovnako ako niekoľko ďalších zvieracích herpes vírusov kóduje genóm BHV-1 gén glykoproteínu (g) gE. Génová sekvencia BHV-1 gE, ktorá kóduje 575 zvyškov aminokyselín (aa), bola opísaná u dvoch rôznych kmeňov (LeungTaek, P. a ďalší, The Complete DNA Sequence and the Genetic Organization of
| ·· | • · | ·· | ···· | • · · | ||
| • · | • | • | • · | • | • | • · |
| • | ··· | • | • · | • | • | • |
| • | ||||||
| • | • · | • | • · | • | • | • |
| ···· | • · | • · | • | ·· | • · · |
the Short Unique Región (Us) of the Bovine Herpesvirus Type 1 Strain (ST strain), zv. 199, Virology, s. 409-421 (1994); Rebordosa, X. a ďalší, Mapping, Cloning and Sequencing of a Glycoprotein-Encoding Gene from Bovine Herpesvirus Type 1 Homologous to the gE Gene from HSV-1, zv 149, Gene, s. 203-209 (1994). Očakávané aminokyseliny obsahujú predĺženie (stretches) hydrofóbnych aminokyselín na N-konci sekvencie (predpokladaná signálna sekvencia) a blízko C-konca (transmembránová sekvencia), typické pre integrálne membránové proteíny I triedy. Ukázalo sa, že BHV-1 gE a jeho homológy v iných herpesvírusoch je možné postrádať pri replikáciach in vitro, ale delécia celej gE kódujúcej sekvencie v genóme vírusu pseudobesnoty (PRV) je zodpovedná ako za zníženú virulenciu živých vakcínových kmeňov Norden a Bartha (Petrovskis, E.A. a ďalší, Deletion in Vaccine Strains of Pseudorabies Virus and Their Effect on Synthesis of Glycoprotein gp 63, zv. 60, J.Virol., s 1 166-1169 (1986), tak za zmenu invazívnosti vírusov voči nervovému tkanivu (Card, J.P. a ďalší, Pseudorabies Virus Envelope Glycoprotein gl Influences Both Neurotropism and Virulence During Lnfection of the Rat Visual System, zv. 66, J Virol , s. 3032-3041 (1992). Expresia génu gE je nutná pre úplný patogénny potenciál vírusov vo zvieratách, ale nie pre rast v tkanivových kultúrach (Kritas a ďalší, Invasion and Spread of Single Glycoprotein Deleted Mutants of Aujeszky's Disease Virus (ADV) in Trigeminal Nervous Pathway of Pigs After Intranasal Inoculation, zv. 50, Vet. Microbiol., s. 323-334 (1994); Kritas a ďalší, Role of Envelope Glycoproteins gl, gp63 and glll in the Invasion and Spread of Aujeszky's Disease Virus in the Olfactory Nervous Pathway od the Pig, zv 75, General Virol., s. 2319-2327 (1994).
V súčasnej dobe sú mutanty PRV a IBR s deletovaným génom gE zaujímavé z hľadiska použitia ako diferenciačné vakcíny so signálnym znakom (markerové). Dnes sa markerová vakcína používa na zlikvidovanie IBR v Európe Tento vakcínový kmeň s deletovaným génom gE však nemá v Európe signálny znak β-gal umožňujúci in situ histochemické detekčné spôsoby na zistenie aktivity β-gal enzýmu a in situ histochemické spôsoby alebo detekciu βgal proteinu imunoblotovanim. Kódujúca oblasť génu β-gal tiež slúži ako genotypový signálny znak rekombinantného vírusu Vírus sa ľahšie deteguje ·· ···· ·· • · • ··· ···· ··
Southernovou hybridizáciou a testy PCR tiež môžu určiť genetickú čistotu vakcínového vírusu štandardného typu. Preto sa pociťuje potreba avirulentného kmeňa IBRV s deletovaným gE, ktorý by obsahoval signálny znak β-gal vhodný fenotypovo, histochemicky a genotypovo.
Podstata vynálezu
Bol vytvorený rekombinantný vírus BHV-1 (gEA3.IIBRP), v ktorom sa deletovali otvorené čítacie rámce (ORF) obsahujúce časť sekvencií kódujúcich gén gE a na ich miesto sa vložil chimérny gén ako reportér a signálny znak. Vložený gén β-galaktozidáza (β-gal) nemá pri replikácii vírusu žiadnu regulačnú úlohu, ale slúži ako fenotypový signálny znak pre vírus gEΔ3.1IBRβ.
Pri vytváraní tohto rekombinantného vírusu BHV-1 sa klonovala oblasť kódujúca gén gE BHV-1 a lemujúce sekvencie po smere i proti smeru expresie génu. S cieľom delécie v oblasti kódujúcej gén gE sa vyššie uvedená klonovaná DNA štiepila vhodnými enzýmami na odštiepenie amínových dvoch tretín tejto oblasti a viazala sa ligäciou na gén β-gal. Výsledný plazmid DNA bol kotransfektovaný do buniek MDBK s DNA zo štandardného vírusu IBR kmeňa Cooper v pôvodnej dĺžke. Rekombinantné vírusy exprimujúce β-gal (modré plaky) boli prečistené plakovou technikou a ďalej testované hybridizáciou blotovaním pre genetickú charakterizáciu a imunoblotingom na reaktivitu proti polyklonálnej králičej protilátke špecifickej proti peptidom génu gE BHV-1. Jeden rekombinantný vírus gEΔ3.1IBRβ bol charakterizovaný in vitro z hľadiska množenia a in vivo na teľatách z hľadiska patogénnych vlastností Schopnosť rekombinantného vírusu vniesť protilátky neutralizujúce BHV-1 do infikovaných teliat sa študovala testami potlačovania plakov.
Regulácia a expresia chimérického génu β-gal v tomto rekombinantnom víruse BHV-1 sú špecifické vo dvoch smeroch. Prvý zvláštny aspekt tohto rekombinantného vírusu je, že sa gén β-gal reguluje silným bezprostredným skorým promótorom z ľudského cytomegalovírusu (HCMV-IE) a nie regulačnou ·· ·· ···· ·· ··· ·· · · · · • ··· · · · · · ··· ··· ··
Λ ···· ·· ·· · ·· · sekvenciou odvodenou z BHV-1. Druhý špecifický aspekt je, že sa gén exprimuje ako gén kódovaný v BHV-1 ako v skorej, tak v neskorej fáze infekcie. Vlastnosti tohto rekombinantného vírusu s deletovaným gE in vitro a in vivo sa analyzovali porovnaním s rodičovským kmeňom Cooper IBRV.
V experimentoch s tkanivovou kultúrou sa vírus gEA3.1IBRP pomnožoval v skorej etape po infekcii k nižšiemu titru než štandardný typ (rodičovský kmeň Cooper), ale v neskorej etape po infekcii sa rekombinantný vírus množil do takmer rovnakého titra ako rodičovský štandardný typ kmeňa Cooper. To mohlo byť spôsobené neexistenciou šírenia vírusu od bunky k bunke a je v súlade s výsledkami u iných herpesvírusov.
Pri pokusoch so zvieratami v teľatách infikovaných gEA3.1IBRP zaniklo približne lOOkrát menej vírusov v porovnaní s teľatami infikovanými rodičovským kmeňom Cooper v etape ubúdania vírusov. Doba ubúdania vírusov bola tiež o dva dni kratšia u teliat infikovaných gEA3.1IBRp. Zatiaľ čo teľatá infikované vírusom gEA3.1IBRP zostali zdravé, teľatá infikované rodičovským kmeňom Cooper vykazovali typické symptómy IBR a lézie. Výsledky neutralizácie sérom ukázali, že ako teľatá infikované štandardným kmeňom IBRV, tak aj infikované IBRV s deletovaným génom gE indukovali porovnateľné protilátky neutralizujúce BHV-1 Ako už bolo uvedené, IBRV s génom deletovaným tymidínkinázou (TK) sa m vitro aj in vivo pomnožoval s podstatne nižším titrom (Chowdhury, S.I., Construction and Characterization of an Attenuated Bovine Herpesvirus Type 1 (BHV-1) Recombinant Virus, zv. 52,
Vet Microbiol., s 13-23 (1996)). Zhrnuté, tieto výsledky dokazujú, že aj keď sa rekombinantný vírus gEA3.1IBR0 množí relatívne dobre v porovnaní s IBR deletovaným TK, vírus gEA3.1IBRp bol pre teľatá prakticky avirulentný Zoslabené vlastnosti vykázané rekombinantným vírusom gEA3 11BRP boli v súlade s vlastnosťami vyvolanými: 1) deléciou TK v BHV-1 ako je uvedené v článku Chowdbury, S.I., Construction and Characterization of an Attenuated Bovine Herpesvirus Type 1 (BHV-1) Recombinant Virus, zv 52, Vet. Microbiol., s 13-23 (1996); 2) deléciou gE v PRV ako ukázal Kritas a ďalší v Invasion and Spread of Single Glycoprotein Deleted Mutants of Aujeszky's ·· ···· • · ··· · · · · · • ··· · · · · · ··· ··· ·· ···· ·· ·· · ·· ·
Disease Virus (ADV) in the Trigeminal Nervous Pathway of Pigs After Intranasal Inoculation, zv. 50, Vet. Microbiol., s. 323-334 (1994) a Kritas a ďalší v Role of Envelope Glycoproteins gl, gp63 and glll in the Invasion and Spread of Aujeszky's Disease Virus in the Olfactory Nervous Pathway of the Pig, zv. 75, J. General. Virol., s. 2319-2327 (1994); a 3) európskym vakcínovým izolátom IBRV s deletovaným génom gE ako ukázal Kaashoek a ďalší v: An Inactivated Vaccine Based on a Glycoprotein E-Negative Strain of Bovine Herpesvirus 1 Induces Prospective Immunity and Allows Serological Differentiation (zv. 13, Vaccine, s. 342-346 (1995) a Van Englenburg a ďalší v.
A Glycoprotein E Deletion Mutant of Bovine Herpesvirus 1 Infects the Samé Limited Number of Tissues in Calves as Wild-Type Virus, but for a Shorter Periód, zv. 76, J. Gen. Virol., s. 2387-2392 (1994).
Z výskumov tiež vyplynulo, že delécia gE ORF sekvencií a inzercia funkčného β-gal génu do lokusu gE vírusu trvalé vírus oslabuje. Praktické využitie tohto vírusu spočíva v jeho aplikácii ako bezpečnej živej vakcíny proti IBR. Delécia génu gE bude slúžiť ako imunologický signálny znak na odlíšenie vakcinovaných zvierat od infikovaných zvierat. Okrem toho produkcia β-gal umožní ľahké hodnotenie replikácie vírusu gEΔ3.1IBRβ v nosnom epiteli vakcinovaných zvierat v porovnaní s dnešným v Európe používaným kmeňom vakcíny s deletovaným gE, ktorý neobsahuje tento fenotypový signálny znak βgal, rovnako ako umožní jej odlíšenie od infekcie spôsobenej vírusom štandardného typu IBR.
Prehľad obrázkov na výkresoch
Obrázok 1 je prietoková schéma znázorňujúca tvorbu vírusu BHV-1 s deletovaným gE ^ΕΔ3.1ΙΒΒβ) a vektorový plazmid pre inzerciu a deléciu obsahujúci funkčný gén β-gal nahradzujúci dve tretiny s N-koncoin oblasti kódujúcej gE.
·· ·· • · · • ··· ·· ···· • · · ···· ·· • · · • · · • · · ·· · • · ·· ·
Obrázok 2 je reprodukcia Southernovej hybridizácie pre zamýšľanú deléciu oblasti kódujúcej gE a inzerciu sekvencií β-gal v polohe (lokuse) gE.
Obrázok 3 ukazuje proteín gE BHV-1 detegovaný v rodičovskom štandardnom kmeni Cooper, ale nedetegovaný v rekombinantnom víruse (gEÁ3 ÍIBRP) s deletovaným gE.
Obrázok 4 je graf ilustrujúci výsledok jednostupňového experimentu s pomnožovaním pri porovnaní rýchlosti množenia IBR s deletovaným gE s rýchlosťou rastu štandardného typu IBR v bunkách MDBK, pričom všetky hodnoty vynesené v bodoch predstavujú priemer výsledkov získaných s každou skupinou teliat.
Obrázok 5 je graf porovnávajúci denné klinické počty teliat infikovaných IBR s deletovaným génom gE s dennými klinickými počtami teliat infikovaných štandardnými typmi IBR, pričom všetky hodnoty vynesené v bodoch predstavujú priemer výsledkov získaných s každou skupinou teliat.
Obrázok 6 je graf porovnávajúci rektálne merané teploty teliat infikovaných IBR s deletovaným génom gE s rektálne meranými teplotami teliat infikovaných štandardnými typmi IBR, pričom všetky hodnoty vynesené v bodoch predstavujú priemer výsledkov získaných s každou skupinou teliat.
Obrázok 7 je graf porovnávajúci nazálnu exkréciu vírusu IBR s deletovaným génom gE s nazálnou exkréciou vírusu štandardného typu IBR, pričom všetky hodnoty vynesené v bodoch predstavujú priemer výsledkov získaných s každou skupinou teliat
Nasledujúce príklady opisujú tvorbu infekčného rekombinantného vírusu BHV-1 s deletovanou natívnou oblasťou kódujúcou gE a tým oslabujúcou vírus, ktorý má v lokuse gE vložený funkčný gén β-gal, spôsob imunizácie zvierat proti chorobám spôsobeným BHV-1 s použitím tohto rekombinantného vírusu BHV-1 ako vakcíny, a spôsoby genotypickej a fenotypickej detekcie a diferenciácie infekcie týmto rekombinantným vírusom a štandardným vírusom vo zvierati ·· ···· ·· ·· ·· ·
| • · · | • · • · | • • | • · • · | ·· é | |
| • | ··· | ||||
| • | • · | • · | • | • · | • |
| ···· | ·· | ·· | • | • · | ··· |
Tieto príklady sa uvádzajú len ilustratívne a v žiadnom prípade nemajú obmedzovať celkový rozsah vynálezu.
Príklady uskutočnenia vynálezu
Príklad 1
Tento vynález viedol ku vzniku a charakterizácii rekombinantného IBRV s deletovaným génom gE a exprimujúceho β-galaktozidázu. Vytvorený rekombinantný vírus obsahuje chimérický gén (dĺžka 4,5 Kb), ktorý nahradil oblasť kódujúcu gE v BHV-1. Tento chimérický gén je výhodne zložený z promótora HCMV-IE a jeho sekvencií zosilňujúcich transkripciu, spojených so sekvenciami kódujúcimi gén β-gal napojenými na polyadenylačné polohy SV40. Je výhodné, keď sú sekvencie kódujúce β-gal bakteriálne, ale usudzuje sa, že sa uplatnia akékoľvek sekvencie kódujúce gén β-gal.
Na prípravu a charakterizáciu rekombinantného BHV-1 bol získaný z American Type Culture Collection kmeň IBRV Cooper (Colorado-1). Vírusy sa pomnožili a titrovali v bunkách hovädzích obličiek Madin-Darby s použitím spôsobov opísaných v Chowdhury S.I., Molecular Basis of Antigenic Variation Between Glycoprotein C (gC) of Respirátory Bovine Herpesvirus 1 (BHV-1) and Neurovirulent BHV-5, zv. 213, Virology, s. 558-568 (1995), čo je metóda tu zahrnutá ako odkaz Vírusová DNA sa izolovala pomocou dodecylsulfátu sodného a lýzou proteínom K, extrakciou zmesou fenol/chloroform a zrážaním etanolom podľa opisu Chowdhury a ďalších, Equine Herpesvirus Type 1 (EHV1) Induced Abortion and Paralysis in a Lipizzaner Stud' a Contribution to the Classification of Equine Hespervirus, zv.90, Árch. Virol. s. 273-288 (1986), čo je metóda tu zahrnutá ako odkaz.
Bola uskutočnená syntéza antipeptidového králičieho polyklonálneho séra špecifického pre gE BHV-1 na základe očakávanej regionálnej hydropatie a antigenity Bol syntetizovaný tento peptid gE obsahujúci zvyšky 378-398 podľa popisu Leung-Taeka, P a ďalších, The Complete DNA Sequence and the Genetic ·· • · · · • · ·· ·· • · • ··· ···· ·· ···· • · · ·· · • · ·· ·
Organization of the Short Unique Región (Us) of the Bovine Herpesvirus Type 1 Strain (ST strain), zv. 199, Virology, s 409-421 (1994), ktorého sekvencia a genetická organizácia je tu zahrnutá vo forme odkazu. Pri príprave peptidu gE sa použila syntéza 9-fluorenylmetoxykarbonylu (FMOC), ktorú opísal Abdelmagid a ďalší vo. Fine Mapping of Bovine Herpesvirus-1 (BHV-1) Glycoprotein D (gD) Neutralizing Epitopes by Type-Specific Monoclonal Antibodies and Sequence Comparison with BHV-5 gD, zv. 206, Virology s. 242253 (1995), čo je metóda tu zahrnutá ako odkaz Na uľahčenie konjugácie na hemokyanín prílipkového plža (keyhole limpet hemocyanin - KLH) sa na Ckoniec peptidu pripojil doplnkový irelevantný cysteín (C) (označený *). 17mérny peptid [HJ-TSDRLVRAVTDHTRPEC* [OH] sa spojil s KLH a antiséra sa pripravili podľa opisu Kyte,J., Doolittle, R.F., A Simple Method for Displaying the Hydropathic Character of Protein, zv. 157, J. Mol.BioL, s. 105-132 (1982), čo je metóda tu zahrnutá ako odkaz.
V redukčných podmienkach sa uskutočnil SDS-PAGE a westernový prenos neinfikovaných a vírusom infikovaných bunečných proteínov, ako opisuje Chowdhury S.I., Molecular Basis of Antigenic Variation Between Glycoprotein C (gC) of Respirátory Herpesvirus 1 (BHV-1) and Neurovirulent BHV-5, zv. 213, Virology, s. 558-568 (1995) a Laemli, U.K., Cleavage of Stuctural Proteins During the Assembly of the Head of Bacteriophage T4, zv 227, Náture (London), s. 680-685 (1970), čo je metóda tu zahrnutá ako odkaz.
Konštrukcia rekombinantných plazmidov sa uskutočnila cestou získania pBHVIHK a pBHVIHF od Dr W. Lawrence (U Pennsylvania, Philadelphia, USA).Plazmidy obsahovali fragmenty jednak HindIII-K, jednak HindlII-F DNA BHV-1. Subfragment Xhol/HindlII dĺžky 4,4 Kb z plazmidu pBHVIHK obsahujúci celý gD a časť, výhodne dve tretiny s N-koncom oblasti kódujúcej gE, sa subklonovala do polôh Xhol/HindlII plazmidu pGEM7Z (pBHVlgES'). Potom sa fragment HindIII/Bsu361 (1,15 Kb) s tupo zarovnanými koncami reťazcov Klenowom, z pBHVIHF obsahujúci tretinu s C-koncom oblasti kódujúcej gE a celú sekvenciu kódujúcu US9 ORF subklonoval do polôh HindlII/HindlI plazmidu pBluescript KS (pBHVlgE3') Nakoniec, na zostavenie
| ·· • · • | ·· • ··· | ·· • • | ···· • · • · | ·· • · • · | • ·· • |
| • | • · | • | • · | • · | • |
| ···· | ·· | ·· | • | ·· | ··· |
celej oblasti kódujúcej gE gén a jeho lemujúcich sekvencii sa vektorový polohový fragment HindlII/Xbal (dĺžka 4,4 Kb) pBHVlgE5' obsahujúci fragment HindlII/Xhol klonoval do polôh HindlII/Xbal plazmidu pBHVlgE3' Výsledný kloň sa označil ako pBHVlgE5'3'.
Na deléciu oblasti kódujúcej gE sa DNA pBHVlgE5'3' sčasti štiepila pomocou AsuII a následne znovu štiepila na kompletáciu s Hindlll. Väčší fragment sa prečistil z gélu a viazal ligáciou na fragment PstI dĺžky 4,5 Kb (s tupo zarovnanými koncami T4 polymerázou) pCMVp (od firmy Clontech, Palo Alto, Ca, USA), obsahujúci sekvencie β-gal regulované skorým promótorom regulovanej CMV. Výsledný plazmid s deletovaným gE a vloženým β-gal (ρΒΗν^ΕΔβ) sa vyznačuje deléciou sekvencii DNA BHV-1 (1Kb) obsahujúcich génové sekvencie kódujúce prvých 372 aminokyselín a inzerciou génu β-gal pri regulácii promótorom CMV. Gén β-gal je lemovaný pre tento vírus špecifickými sekvenciami (3,32 Kb) proti smeru expresie génu (obsahujúcimi celé sekvencie génu gD a génu gl a sekvencie promótora gE) a sekvenciami po smere expresie génu dĺžky 1,15 Kb (obsahujúcimi tretinu s C-koncami oblasti kódujúcej gén gE a celé sekvencie US9 génu), ktoré sú nevyhnutné na rekombináciu s vírusom DNA.
S cieľom vytvorenia rekombinantného vírusu IBR s deletovaným gE sa linearizovaný ρΒΗν^ΕΔβ (prírastkové č. VR-2637 v ATCC) a štandardný typ DNA IBRV (kmeň Cooper) v pôvodnej dĺžke kotransfektoval iipofekciou v bunkách hovädzích obličiek Madin-Darby (MDBK) Správna inzercia β-gal v lokuse gE v IBRV s pôvodnou dĺžkou a následná delécia časti oblasti kódujúcej gE štandardného typu IBRV je daná homológnou rekombináciou pre BHV-1 špecifickými lemujúcimi sekvenciami v plazmide s replikáciou vírusu DNA. Pre vírus špecifická lemujúca sekvencia sa vradí do novo syntetizovanej vírusovej DNA, pričom dôjde k delécii v kódujúcej oblasti rovnako ako k inzercii v tej istej oblasti. Rekombinäntné vírusy exprimujúce β-gal boli trikrát prečistené plakovou technikou skríningom modrých plakov pod prevrstvením Bluo-Gal podľa opisu Chowdery, S.I , Construction and Characterization of an Attenuated Bovine Herpesvirus Type 1 (BHV-1) Recombinant Virus, zv 52, Vet.
·· • · · • · ·· ···· ·· ·· • · · • ··· • · ···· ·· • · · • · • · · ·· · • · ·· ·
Microbiol., s 13-23 (1996), čo je metóda tu zahrnutá ako odkaz. Niekoľko rekombinantných izolátov sa ďalej charakterizovalo Southernovou hybridizáciou a imunoblotingom detekciou peptidu s použitím antipeptidového králičieho polyklonálneho séra špecifického pre gE proti BHV-1 Použil sa spôsob Southernovej hybridizácie podľa Chowdery,S I., Construction and Characterization of an Attenuated Bovine Hespervirus Type 1 (BHV-1)
Recombinant Virus, zv. 52, Vet. Microbiol., s. 13-23 (1996), čo je metóda tu zahrnutá ako odkaz. Tiež sa použil imunobloting podľa Chowdhury S.I., Molecular Basis of Antigenic Variation Between Glycoprotein C (gC) of Respirátory Bovine Herpesvirus 1 (BHV-1) and Neurovirulent BHV-5, zv 213, Virology, s. 558-568 (1995), čo je metóda tu zahrnutá ako odkaz.
Výsledky
Na obrázku 2 sa ukazuje analýza DNA z dvoch rekombinantných vírusov, gEÁ3.1IBRp (ATCC ACCESSION č. VR-2367) a gEA3.5IBRP Southernovou hybridizáciou pre zamýšľanú deléciu a inzerciu sekvencii β-gal v lokuse gE. Neprítomnosť sekvencii fragmentu Asull-HindlII (1 Kb) kódujúcich prvých 372 aminokyselín na N-konci génu E a prítomnosť sekvencii β-gal v izolátoch gEA3.1IBRP a gEΔ3.5IBRβ ukázali, že v týchto izolátoch došlo k zamýšľanej polohovo špecifickej rekombinácii. S týmto zistením je v súlade, že v štandardnom type rodičovského kmeňa Cooper bol detegovaný proteín gE 92-95 Kd BHV-1 pre gE BHV-1 špecifickým antipeptidovým králičím polyklonálnym sérom, ktorý ale chýbal v rekombinantnom víruse gEΔ3.1IBRβ s deletovaným gE. Tento výsledok sa demonštruje na obrázku 3 a tento izolát sa použil v ďalších štúdiách Okrem toho je možné gEΔ3.1IBRβ revertovať spať na štandardný typ IBR kotransfekciou s plazmidom obsahujúcim lemujúce sekvencie a pôvodnú sekvenciu gE zo štandardného typu IBRV Tým sa podstatne mení proces kotransfekcie používaný na vytvorenie gEΔ3.1IBRβ.
Kinetika expresie β-gal v bunkách MDBK infikovaných vírusom sa zisťovala histochemicky 3, 6, 12 a 24 hodín po infekcii Aktivita β-gal sa detegovala ako za tri hodiny po infekcii, tak po 24 hodinách po infekcii
| ·· | ·· | ·· | ···· | ·· · | ||
| • · | • | • | • · | « | • | ·· |
| • | ··· | • | • e | • | • | • |
| • | ||||||
| • | • · | • | • · | • | • | • |
| ···· | ·· | ·· | • | • · | ··· |
Preukázalo sa, že β-galaktozidázový gén vírusu gEA3.1IBRP regulovaný promótorom CMV-IE sa exprimuje ako v skorom, tak v neskoršom čase. Okrem toho, aj keď sa chimérický gén reguluje cudzím humánnym promótorom herpesvírusu HCMV-IE a obsahuje nevírusové sekvencie β-gal rovnako ako zosilňovače transkripcie cudzie ako pre β-gal tak pre BHV-1, je regulovaný aj exprimovaný ako autentický gén BHV-1. Preto je β-gal cudzí (neprítomný v prirodzenom stave BHV-1) pre BHV-1 a HCMV-IE a jeho sekvencie zosilňujúce transkripciu sú cudzie ako pre BHV-1, tak aj pre β-gal, ktorý regulujú a ktorého transkripciu zosilňujú.
Delécia génu gE sa použije ako imunologický signálny znak na diferenciáciu vakcinovaných a infikovaných zvierat. Protilátková odpoveď indukovaná kmeňom vakcíny nebude obsahovať protilátku špecifickú pre gE a tým sa odlíši od odpovede indukovanej infekciou štandardným typom BHV-1, ktorá bude zahrnovať protilátku pre gE špecifickú. Infikované zvieratá vo vakcinovanom stáde môžu teda byť identifikované a vytriedené. Tento sérologický signálny znak je dôležitý pre elimináciu BHV-1 zo stáda
Plazmid (pBHVlgEAP)použitý na prípravu rekombinantného vírusu a vzniknutý rekombinantný vírus gEΔ3.1IBRβ boli uložené v American Type Culture Collection (ATCC). Plazmid (ρΒΗνίβΕΔβ) bol zaradený ako prírastok ATCC č. 203607 a rekombinantný vírus (βΕΔ3.1ΙΒΚβ) bol zaradený pod č. VR-2637.
Príklad 2
Tento pokus určil patogenitu vírusu gEA3.1IBR3 teliat a porovnával tieto výsledky s patogenitou rodičovského IBRV kmeňa Cooper. Desať šesťmesačných teliat Holstein bez vírusu IBRV a bovinnej vírusovej diarey sa náhodne rozdelilo do dvoch skupín (A a B) po piatich teľatách. Tieto dve skupiny sa ustajnili v izolovaných stajniach za identických podmienok. Pred experimentom boli všetky teľatá zdravé a až do začiatku pokusu bola séronegatívne.
·· ···· ·· • · • · ·· ·· • · · • ··· · · · e · ·· «··· ·· ·· · ··
V skupine A sa všetky teľatá intranazálne očkovali rekombinantným IBRV s deletovaným gE. V skupine B sa všetky teľatá intranazálne očkovali rodičovským IBRV kmeňa Cooper. Očkovacia dávka obsahovala 1x10 TC1D5O príslušného vírusu na jedno zviera. Očkovanie sa uskutočňovalo v aerosóle s použitím nebulizačného prístroja DEVILBIS model 50 od Delvis Co ,Somerset, Pennsylvania, v množstve 2 ml očkovacej látky na nozdru počas 30 sekúnd až jednej minúty.
Po expozícii vírusu (očkovaní) sa 14 dní denne uskutočňovalo intenzívne klinické pozorovanie všetkých teliat Denne sa sledovali rektálne teploty Špeciálna pozornosť sa venovala týmto faktorom: chovanie (depresia), chuť k jedlu, kašeľ, očné a nosné výlučky, hyperémia, alebo lézie nazálnych a ústnych slizníc, zápal spojiviek a abnormálny dych. Všetky tieto parametre boli individuálne číselne vyhodnotené a denné klinické hodnoty pre každú skupinu boli prepočítané sčítaním všetkých číselných hodnôt pre každý faktor Klasifikácia sa uskutočňovala takto:
Nosné výlučky normálne = 0; mierne serózne = 1; ťažko serózne = 2;
slabo mikrohnisavé = 2; mierne mikrohnisavé = 3; ťažko mikrohnisavé = 4
Chovanie (depresia) nie je = 0; slabá = 1; mierna = 2; ťažká = 3
Prekrvenie (hyperémia)/sčervenanie nosnej sliznice = 1
Vredy na nosnej sliznici = 2
Konjunktivitída = 2
Kašeľ = 2
Dýchavičnosť = 2
Denná rektálna teplota
39,7-39,99 °C = 1, 40,0-40,5 °C = 2; 40,6-41,0 °C = 3, nad 41,0 °C = 4, ·· ···· ·· • · • e ·· ·· • · · • ··· ··· · · · · ·
...........
Teľatá v skupine B infikované rodičovským Cooperovým kmeňom IBRV (štandardný typ IBRV) vykazovali typické znaky infekcie: depresiu, zníženú chuť k jedlu, očné a nosné výlučky, vredy a úsady v nozdrách a kašeľ. Výsledkom týchto klinických nálezov boli vysoké hodnoty dennej klasifikácie vyššie uvedených faktorov počas niekoľkých dní, ako ukazuje obrázok 5 Teľatá infikované rekombinantným vírusom βΕΔ3.1ΙΒΚβ (skupina A) však nevykazovali žiadne klinické znaky (viď obrázok 5) a ich chovanie a chuť k jedlu boli normálne. Obrázok 6 ukazuje rektálne teploty teliat z oboch skupín (A a B). Vysoké rektálne teploty od 39,7 °C do 40,5 °C sa počas niekoľkých dní zisťovali u teliat infikovaných rodičovským kmeňom Cooper (skupina B). U teliat infikovaných gEA3.1IBRp (skupina A) sa nikdy nezaznamenali rektálne teploty vyššie než 38,9 °C.
Príklad 3
Tento pokus porovnával kinetiku pomnožovania medzi vírusom gEA3.1IBR3 v bunkách MDBK a rodičovským vírusom IBR kmeňa Cooper v bunkách MDBK. Rad replikátových kultúr buniek MDBK sa oddelene infikoval dávkou 5 plak formujúcich jednotiek (PFU) na bunku, ktorá bola buď rekombinantnou gEA3.1IBRp alebo z rodičovského kmeňa Cooper Infikované kultúry sa zbierali v následných poinfekčných intervaloch a získané vírusy sa pripravovali na použitie v titračných testoch vírusov.
Obrázok 4 ukazuje výsledky jednostupňového pomnožovacieho experimentu. Krivky pomnožovania vírusu ukazujú, že časový priebeh prírastkov dcérskych generácií vírusov bol podobný medzi gEA3 IIBRP a rodičovským kmeňom Cooper. V skorých poinfekčných etapách sa však rekombinantný vírus množil pomalšie.
·· ···· • · ·· ·· • · · • ··· • · · • · · ···· ·· • · • · • · · • · ·· ·· ·
Príklad 4
V tomto pokuse sa izolovali a kvantifíkovali vírusy z každého zvieraťa v skupinách A a B (z príkladu 3 vyššie). Zahrotený vatový tampón sa vložil do každej nosnej dutiny a v dotyku so sliznicou sa trikrát otočil. Vírus sa z tampónu vymýval pri izbovej teplote jednu hodinu v 3 ml vzorky média (MEM obsahujúci 100 μg/ml gentamycínu, 3 % obj./obj. FBS, amfotericín B v množstve 25 pg/ml). Vzorky sa vyčírili odstredením pri 1000 g počas 5 minút a skladovali sa pri -70 °C. Izolácia vírusu z buniek MDBK sa uskutočňovala s použitím 100 μΙ suspenzie tampónu v zriedení 1:10 Vzorky pozitívne na vírus sa titrovali na mikrotitračných platniach. Kultivačné médium sa následne desaťnásobne riedilo a 50 μΐ každého zriedenia sa vložilo do každej z ôsmich jamiek (na platni s 96 jamkami) obsahujúcich 1,5 x 105 buniek MDBK. Po 5 dňoch pri teplote 37 °C sa cytopatický účinok (CPE) zisťoval z platní mikroskopicky. Titre vírusu sa počítali v TCID5o spôsobom, ktorý opísal Reed, L.J a Muench, H., zv. 27, Am.J.Hyg., s. 493 (1938), čo je spôsob tu zahrnutý vo forme odkazu.
Množstvo vírusov izolovaných z nazálne použitých tampónov ukázalo, že sa vírus gEÁ3.1IBRp v bunkách nosného epitelu množil menej efektívne v porovnaní s rodičovským kmeňom Cooper Obrázok 7 ukazuje ubúdanie vírusu v nosnom sekréte. Toto ubúdanie vírusu bolo u vírusu gEΔ3.1IBRβ približne 15 až 550x nižšie než u štandardného typu BHV-1 (rodičovský kmeň Cooper) Etapa ubúdania vírusu bola tiež o 2 dni kratšia u teliat infikovaných gEA3 1IBRP než u teliat infikovaných štandardným typom vírusu.
Príklad 5
Tento príklad stanovil titre protilátok neutralizujúcich BHV-1 v sére odobranom z teliat v skupinách A a B (z príkladov 3 a 4 uvedených vyššie)
Vzorky krvi sa odoberali 13 dní po infekcii od každého teľaťa z oboch skupín A a B Titre protilátok neutralizujúcich BHV-1 v sére sa stanovili spôsobom redukcie plakov s použitím platní s 12 jamkami podľa opisu Chowdhury, S.I. a ·· ···· ·· ·· ·· • · · • ··· • · · • · · ···· · • · • · • · · • · ·· · ďalších, Molecular Biological Characterization of Equine Herpesvirus 1 (EHV-1) Isolated from Ruminant Hosts, zv. 11, Vírus Res., s. 127-139 (1988), čo je spôsob tu zahrnutý vo forme odkazu.
Vírusy ako štandardného typu (rodičovský kmeň Cooper), tak IBRV s deletovaným gE (gEA3.1IBRp) indukovali v teľatách vznik protilátok neutralizujúcich BHV-1. Séra z teliat infikovaných štandardným typom mali mierne vyššie neutralizačné titre (1:20 - Γ35 so stredným titrom 1:30) v porovnaní s titrom protilátok neutralizujúcich vírusy s deletovaným gE (1:11 1:30 so stredným titrom 1.16).
Claims (26)
- PATENTOVÉ NÁROKY1. Oslabený rekombinantný bovinný herpesvírus typu I, zahrnujúci bovinný herpesvírus typu I majúci časť natívnej oblasti kódujúcej glykoproteín E deletovanú a nahradenú genetickým inzertom, kde uvedený inzert obsahuje kódujúcu oblasť cudzieho génu β-galaktozidázy, pričom uvedený rekombinantný vírus exprimuje β-galaktozidázu v hostiteľskej bunke.
- 2. Vírus podľa nároku 1, kde uvedený inzert zahrnuje bezprostredný skorý promótor z ľudského cytomegalovírusu a sekvencie urýchľovača transkripcie uvedeného bezprostredného skorého promótora z ľudského cytomegalovírusu.
- 3. Vírus podľa nároku 2, kde uvedená deletovaná časť zahrnuje asi dve tretiny uvedenej natívnej oblasti kódujúcej glykoproteín E
- 4. Vírus podľa nároku 2, kde uvedený inzert je naviazaný na polyadenylačné polohy SV4o·
- 5. Vírus podľa nároku 1, kde uvedený cudzí gén β-galaktozidázy sa exprimuje ako autentický kódovaný gén bovinného herpesvírusu typu I.
- 6. Vírus podľa nároku 1, kde uvedená deletovaná natívna kódujúca oblasť slúži ako genotypový signálny znak.·· ···· ·· ·· ··· • · • · • ··· • · • · • ·· ·· ·· ·Vírus podľa nároku 1. kde uvedený genetický inzert slúži ako fenotypový signálny znak.
- 8. Vírus podľa nároku 1, kde uvedená deletovaná natívna kódujúca oblasť slúži ako imunologický signálny znak.
- 9. Vírus podľa nároku 1, kde uvedené sekvencie kódujúce β-galaktozidázu sa exprimujú v uvedenej hostiteľskej bunke v skorom i neskorom štádiu infekcie.
- 10. Vakcína, účinná indukovaním do organizmu protilátok neutralizujúcich bovinný herpesvírus typu I, vyznačujúca sa tým, že zahrnuje rekombinantný vírus podľa nároku 1.
- 11. Vakcína podľa nároku 10, vyznačujúca sa tým, že uvedená deletovaná časť zahrnuje dve tretiny uvedenej natívnej oblasti kódujúcej glykoproteín E
- 12. Vakcína podľa nároku 11, vyznačujúca sa tým, že uvedený inzert zahrnuje bezprostredný skorý promótor z ľudského cytomegalovírusu a sekvencie urýchľovača transkripcie uvedeného bezprostredného skorého promótora z ľudského cytomegalovírusu.
- 13. Vakcína podľa nároku 10, vyznačujúca sa tým, že uvedený inzert je viazaný na polyadenylačné polohy SV40.·· ·· • · · • ·· • · · • · · ···· ·· •e ···· • · • · • · • · ··
- 14. Vakcína podľa nároku 10, vyznačujúca sa tým, že uvedený gén βgalaktozidázy sa exprimuje ako autentický kódovaný gén bovinného herpesvírusu typu I.
- 15 Vakcína podľa nároku 10, vyznačujúca sa tým, že uvedené sekvencie kódujúce β-galaktozidázu sa exprimujú v uvedenej hostiteľskej bunke v skorom i neskorom štádiu infekcie.
- 16. Vakcína podľa nároku 10, vyznačujúca sa tým, že uvedená deletovaná natívna oblasť kódujúca glykoproteín E slúži ako genotypový signálny znak.
- 17. Vakcína podľa nároku 10, vyznačujúca sa tým, že uvedená deletovaná natívna oblasť kódujúca glykoproteín E slúži ako fenotypový signálny znak.
- 18 Vakcína podľa nároku 10, vyznačujúca sa tým, že uvedené deletované natívne kódujúce oblasti slúžia ako imunologický signálny znak.
- 19. Spôsob odlíšenia zvierat infikovaných vakcínou obsahujúcou rekombinantný vírus podľa nároku 10 od zvierat infikovaných štandardným typom bovinného herpesvírusu typu I, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje stupne.a) získanie vzorky tekutiny zo zvieraťa,b) analýza každej vzorky ac) rozdelenie zvierat do skupín na základe uvedenej analýzy.·· ·· • · · • ··· • · · • · · ···· ·· ·· ···· • · • · • · · • · ··
- 20. Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že stupeň b) analýza zahrnuje test na prítomnosť β-galaktozidázy.
- 21. Spôsob podľa nároku 20, vyznačujúci sa tým, že roztriedenie v stupni c) sa zakladá na tom, či dôjde či nedôjde k expresii β-galaktozidázy
- 22. Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že stupeň b) analýza zahrnuje protilátkovú odpoveď špecifickú pre glykoproteín E.
- 23. Spôsob podľa nároku 22, vyznačujúci sa tým, že stupeň c) roztriedenie sa zakladá na tom, či dôjde alebo nedôjde k protilátkovej odpovedi špecifickej pre glykoproteín E
- 24. Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že stupeň b) analýza zahrnuje histochemické spôsoby in situ na detekciu enzýmovej aktivity β-galaktozidázy
- 25 Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že stupeň b) analýza zahrnuje imunohistochemické spôsoby m situ na detekciu proteínu β-galaktozidázy ·· ···· ··
- 26.26.
- 27.27.29.29.30.30.·· ·· • · · • ··· • · • · ···· ·· ·· · • · · • · • · · • · ·· ·Spôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že uvedená analýza v stupni b) zahrnuje imunoblotovanie na detekciu proteínu β-galaktozidázySpôsob podľa nároku 19, vyznačujúci sa tým, že uvedená analýza v stupni b) zahrnuje histochemické spôsoby tu situ na detekciu glykoproteínu E.Rekombinantný vírus, ktorý v ATCC má prírastkové číslo VR-2367.Plazmid, ktorý v ATCC má prírastkové číslo 203607.Spôsob imunizácie dobytka proti bovinnému herpesvírusu typu I, vyznačujúci sa tým, že zahrnuje očkovanie uvedeného dobytka vakcínou s rekombinantným vírusom podľa nároku 10.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US09/240,173 US6284251B1 (en) | 1996-02-26 | 1999-01-29 | BHV-1 gene-deleted virus vaccine |
| PCT/US2000/001085 WO2000044884A1 (en) | 1999-01-29 | 2000-01-18 | Bhv-1 gene-deleted virus vaccine |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| SK10702001A3 true SK10702001A3 (sk) | 2002-01-07 |
Family
ID=22905424
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SK1070-2001A SK10702001A3 (sk) | 1999-01-29 | 2000-01-18 | Vakcína proti BHV-1 obsahujúca vírus s deletovaným génom |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US6284251B1 (sk) |
| EP (1) | EP1155119B1 (sk) |
| JP (2) | JP2002535000A (sk) |
| CN (1) | CN1197961C (sk) |
| AT (1) | ATE342731T1 (sk) |
| AU (1) | AU776261B2 (sk) |
| BG (1) | BG105701A (sk) |
| BR (1) | BR0007855A (sk) |
| CA (1) | CA2359177C (sk) |
| CZ (1) | CZ20012589A3 (sk) |
| DE (1) | DE60031374T2 (sk) |
| DK (1) | DK1155119T3 (sk) |
| EA (1) | EA005736B1 (sk) |
| EE (1) | EE200100396A (sk) |
| ES (1) | ES2269101T3 (sk) |
| HK (1) | HK1042512B (sk) |
| HR (1) | HRP20010476B1 (sk) |
| HU (1) | HUP0200560A2 (sk) |
| NO (1) | NO20013697L (sk) |
| NZ (1) | NZ512125A (sk) |
| PT (1) | PT1155119E (sk) |
| SK (1) | SK10702001A3 (sk) |
| TR (1) | TR200102168T2 (sk) |
| UA (1) | UA75035C2 (sk) |
| WO (1) | WO2000044884A1 (sk) |
| YU (1) | YU45601A (sk) |
Families Citing this family (7)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| ES2193842B1 (es) * | 2001-06-28 | 2005-06-01 | Consejo Superior De Investigaciones Cientificas | Virus recombinante de la fiebre aftosa que carece del sitio antigenico a y su utilizacion como vacuna marcada. |
| CN101353670B (zh) * | 2007-07-27 | 2012-07-04 | 中国农业科学院哈尔滨兽医研究所 | 牛传染性鼻气管炎病毒重组毒株、其构建方法及应用 |
| US8877211B2 (en) | 2011-06-27 | 2014-11-04 | Board Of Supervisors Of Louisiana State University And Agricultural And Mechanical College | Bovine herpes virus vaccine with multiple mutations |
| CN104640991B (zh) * | 2012-07-04 | 2017-09-19 | 昆士兰州农渔林业部 | 重组低毒力1型牛疱疹病毒(BoHV‑1)疫苗载体 |
| EP3194968B1 (en) * | 2014-08-01 | 2020-09-02 | The Board of Supervisors of Louisiana State University and Agricultural and Mechanical College | Bovine herpesvirus detection and treatment |
| CN107893056B (zh) * | 2017-12-13 | 2019-08-27 | 江苏省农业科学院 | 山羊疱疹病毒ⅰ型疫苗株及其应用 |
| CN108690835B (zh) * | 2018-05-30 | 2021-08-31 | 内蒙古元山生物科技有限公司 | 一株I型牛疱疹病毒gE缺失毒株及其获取方法 |
Family Cites Families (11)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| GB8305323D0 (en) | 1983-02-25 | 1983-03-30 | Baylor College Medicine | Infectious bovine rhinotracheitis vaccine |
| US4810634A (en) | 1985-07-29 | 1989-03-07 | The Upjohn Company | Pseudorabies virus mutants incapable of producing glycoprotein X |
| US4703011A (en) | 1985-11-12 | 1987-10-27 | Novagene, Inc. | Thymidine kinase deletion mutants of bovine herpesvirus-1 |
| US5593873A (en) * | 1986-01-27 | 1997-01-14 | Syntro Corporation | Recombinant infectious bovine rhinotracheitis virus |
| WO1989010965A2 (en) | 1988-05-03 | 1989-11-16 | The Upjohn Company | Glycoprotein h of herpes viruses |
| FR2693472B1 (fr) | 1992-06-26 | 1994-12-23 | Rhone Merieux | Mutants du virus de la rhinotrachéite infectieuse bovine, délétés dans l'un des gènes des glycoprotéines mineures, vaccins préparés à partir de ces souches, méthodes de production et méthodes d'utilisation. |
| NL9100989A (nl) | 1991-06-07 | 1993-01-04 | Stichting Centr Diergeneeskund | Bovine herpesvirus type 1 deletiemutanten, daarop gebaseerde vaccins, diagnostische kits voor detectie van bovine herpesvirus type 1. |
| AU672583B2 (en) | 1991-07-18 | 1996-10-10 | Prutech Research And Development Partnership | Recombinant infectious bovine rhinotracheitis virus |
| US5874279A (en) * | 1991-07-18 | 1999-02-23 | Syntro Corporation | Recombinant infectious bovine rhinotracheitis virus |
| CA2057387A1 (en) | 1991-12-11 | 1993-06-12 | Lorne A. Babiuk | Recombinant bovine herpesvirus type 1 polypeptides and vaccines |
| ES2074965B1 (es) * | 1994-01-31 | 1996-05-01 | Hipra Lab Sa | Virus mutante recombinante de rinotraqueitis infecciosa bovina y vacunas que lo contienen. |
-
1999
- 1999-01-29 US US09/240,173 patent/US6284251B1/en not_active Expired - Fee Related
-
2000
- 2000-01-18 CN CNB008031363A patent/CN1197961C/zh not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 TR TR2001/02168T patent/TR200102168T2/xx unknown
- 2000-01-18 JP JP2000596128A patent/JP2002535000A/ja active Pending
- 2000-01-18 DK DK00904385T patent/DK1155119T3/da active
- 2000-01-18 AU AU26152/00A patent/AU776261B2/en not_active Ceased
- 2000-01-18 EE EEP200100396A patent/EE200100396A/xx unknown
- 2000-01-18 NZ NZ512125A patent/NZ512125A/xx unknown
- 2000-01-18 HU HU0200560A patent/HUP0200560A2/hu unknown
- 2000-01-18 YU YU45601A patent/YU45601A/sh unknown
- 2000-01-18 CA CA002359177A patent/CA2359177C/en not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 WO PCT/US2000/001085 patent/WO2000044884A1/en active IP Right Grant
- 2000-01-18 PT PT00904385T patent/PT1155119E/pt unknown
- 2000-01-18 UA UA2001075409A patent/UA75035C2/uk unknown
- 2000-01-18 CZ CZ20012589A patent/CZ20012589A3/cs unknown
- 2000-01-18 BR BR0007855-7A patent/BR0007855A/pt not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 EP EP00904385A patent/EP1155119B1/en not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-18 AT AT00904385T patent/ATE342731T1/de not_active IP Right Cessation
- 2000-01-18 ES ES00904385T patent/ES2269101T3/es not_active Expired - Lifetime
- 2000-01-18 DE DE60031374T patent/DE60031374T2/de not_active Expired - Fee Related
- 2000-01-18 SK SK1070-2001A patent/SK10702001A3/sk unknown
- 2000-01-18 EA EA200100720A patent/EA005736B1/ru not_active IP Right Cessation
-
2001
- 2001-06-25 HR HR20010476A patent/HRP20010476B1/xx not_active IP Right Cessation
- 2001-07-12 BG BG105701A patent/BG105701A/bg unknown
- 2001-07-27 NO NO20013697A patent/NO20013697L/no not_active Application Discontinuation
-
2002
- 2002-03-25 HK HK02102265.2A patent/HK1042512B/zh not_active IP Right Cessation
-
2006
- 2006-08-23 JP JP2006226616A patent/JP2007020574A/ja active Pending
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| Tengelsen et al. | Herpes simplex virus type 1 DNA cleavage and encapsidation require the product of the UL28 gene: isolation and characterization of two UL28 deletion mutants | |
| Van Oirschot et al. | Marker vaccines, virus protein-specific antibody assays and the control of Aujeszky's disease | |
| Mettenleiter | Molecular biology of pseudorabies (Aujeszky's disease) virus | |
| JP3247376B2 (ja) | 弱毒化され、遺伝子的に加工されたシュードラビーウイルスｓ−ｐｒｖ−１５５およびその使用 | |
| US8986707B2 (en) | gM-negative EHV-mutants without heterologous elements | |
| CZ283283B6 (cs) | Deleční mutanty bovinního herpesvirusu typu 1, vakcíny založené na těchto delečních mutantách a diagnostické soupravy pro detekci bovinního herpe sviru typu 1 | |
| Fuchs et al. | In vitro and in vivo relevance of infectious laryngotracheitis virus gJ proteins that are expressed from spliced and nonspliced mRNAs | |
| Neubauer et al. | Equine herpesvirus 1 mutants devoid of glycoprotein B or M are apathogenic for mice but induce protection against challenge infection | |
| JP2007020574A (ja) | Ｂｈｖ−１遺伝子欠失ウィルスワクチン | |
| Yokoyama et al. | Recombinant viral vector vaccines for the veterinary use | |
| Chowdhury | Construction and characterization of an attenuated bovine herpesvirus type 1 (BHV-1) recombinant virus | |
| US20100291142A1 (en) | Bacterial Artificial Chromosome Containing Feline Herpes Virus Type 1 Genome and Uses Thereof | |
| Marshall et al. | An equine herpesvirus-1 gene 71 deletant is attenuated and elicits a protective immune response in mice | |
| US8877211B2 (en) | Bovine herpes virus vaccine with multiple mutations | |
| Ur-Rehman et al. | Locally prepared bovine herpesvirus 1 gE deleted vaccine induced immunogenicity in rabbits. | |
| KR101111998B1 (ko) | 이종성 요소가 없는 ｇＭ-음성 ＥＨＶ-돌연변이체 | |
| US20030198650A1 (en) | gM-negative EHV-mutants | |
| AU784310B2 (en) | Recombinant infectious laryngotracheitis virus vaccine | |
| Kirisawa et al. | Isolation of equine herpesvirus-1 lacking glycoprotein C from a dead neonatal foal in Japan | |
| CA2141392A1 (en) | Recombinant infectious bovine rhinotracheitis virus mutant, methods for the production of same, and vaccines containing the same | |
| Kit | Significance of Virulence Factors and Immuno-Evasion for the Design of Gene-Deleted Herpesvirus Marker Vaccines |