SE502323C2 - Användning av N-(2-hydroxietyl)nikotinamidnitrat eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav för framställning av ett läkemedel aktivt för behandling av sjukdomar förbundna med cerebral ischemi - Google Patents

Description

502 323 även samma effekter på de andra perifera blodkärlen vilket leder till oönskade biverkningar såsom systemisk hypotension.

Man har därför sökt efter medel som selektivt verkar på cere- brala blodkärl. Å andra sidan anses aktivatorer för den cere- brala metabolismen att underlätta cerebral ischemi genom att öka den cerebrala syrekonsumtionen och hjärnglukosintaget, och alltså utöva skyddande effekter på det energiproducerande systemet såsom visas i ischemiska försök även om mekanismen för deras effekt inte klarlagts.

Sammanställning av uppfinningen: Endast några av de tidigare kända medlen för behandling av cerebrala cirkulatoriska sjukdomar har selektiv effekt på de cerebrala blodkärlen och vissa av dessa medför systemisk hypotension. Dessutom är inte verkningsmekanismen för de flesta av dem känd.

Föreliggande uppfinnare har funnit att föreningarna enligt föreliggande uppfinning, dvs. N-(2-hydroxietyl)nikotinamid- nitrat och salterna därav, dilaterar cerebrala blodkärl utan att medföra någon väsentlig sänkning av det systemiska blod- trycket (Kekkan (Blood Vessel), §, 3 (1983), Japanese Heart Journal (Jap. Heart J.) lg, ll2 (1977), och Chiryou (Treat- ment) gg, 1 (1978)). Dessutom har de funnit att dessa före- ningar förbättrar den cerebrala metabolismen genom att öka glukosintaget i hjärnan och att dessa föreningar är effektiv för behandling av olika hypoximodeller, och har sålunda gjort föreliggande uppfinning fullständig.

Detaljerad beskrivning av uppfinningen: Föreningarna som användes enligt föreliggande uppfinning, N- (2-hydroxietyl)nikotinamidnitrat och salter därav kan exempel- vis framställas såsom beskrives nedan: Till en nitratester av 2-aminoetanol sättes en katalysator såsom natriumvätekarbonat, pyrimidin eller en basisk katalysa- tor, t.ex. kaliumkarbonat, trietylamin, etc. Användningen av en katalysator föredrages även om reaktionen fortsätter utan 502 323 denna. Vatten eller ett organiskt lösningsmedel såsom kloro- form, pyridin, koltetraklorid, bensen, diklormetan, toluen, trietylamin, etc., sättes till reaktionsblandningen som där- efter kyles. Under omröring tillsättes lika mängd eller ett noküt överskott av nikotinsyraklorid eller dess hydroklorid- salt eller ett annat funktionellt derivat av nikotinsyra, por- tionsvis under omröring vid rumstemperatur, företrädesvis mellan 0-SOC i 5-90 minuter, mera föredraget i 10-30 minuter.

Efter ytterligare omröring och avskiljning av lösningsmedels- skiktet från den erhållna produkten extraheras vattenskiktet åter med lösningsmedlet. Dazkombinerade lösningsmedelsskiktet tvättas och torkas och koncentreras därefter under reducerat tryck. Den erhållna resten omkristalliseras ur ett organiskt lösningsmedel och ger den avsedda föreningen som färglösa nålliknande kristaller.

Denna förening kan eventuellt överföras till oorganiska eller organiska salter såsom klorvätesalt, oxalatsalt, p-toluen- sulfonatsalt, maleatsalt, etc. enligt en rutinmetod.

Dessa terapeutiska mnedel som användes för framställning av ett läkemedel för behandling av cerebrala cirkulatoriska sjukdomar kan administreras till en människa genom ändamåls- enliga metoder, sàsom oralt eller parenteralt (intramuskulärt, subkutant, intravenöst eller genom suppositoria).

Föreningen enligt föreliggande uppfinning kan formuleras i sådana dosformer som tabletter, granuler, pulver, kapslar, suspensioner, injektioner, suppositorier, etc. enligt en rutinmetod inom formuleringsteknologiområdet. Exempelvis kan den formuleras till tabletter, granuler eller pulver genom blandning av denna med en konstituent, ett bindemedel, ett lösningsmedel, etc., t.ex. farmaceutiska konstituenter såsom laktos, stärkelse, mannitol, kaolin, kristallin cellulosa, talk, kalciumkarbonat, magnesiumstearat, etc. Föreningen kan även formuleras i kapselform antingen genom fyllning av en hårdkapsel med föreningen i form av granuler eller pulver eller genom fyllning av en mjuk kapsel med den oljeupplösta formen av föreningen. Ifråga om suspensionsformuleringar kan föreningen suspenderas i en vattenlösning tillsammans med 502 323 gummi arabicumpulver eller vitt socker följt av justering av dess pH. Ifråga om injektionsformuleringar kan föreningen blandas med mannitol.

Halten av föreliggande förening i de olika dosformerna såsom tabletter, kapslar, etc. bör vara en ändamålsenlig mängd så att den terapeutiska och profylaktiska verkan av föreningen på cerebrala cirkulatoriska sjukdomar åstadkommes utan att ge negativa effekter. I allmänhet är det lämpligt om varje tablett eller kapsel innehåller l-20 mg av detta medel för behandlingen av cirkulatoriska sjukdomar som en dosenhet för oral administration och varje flaska innehåller ungefär 0,1- 12 mg av medlet som en dosenhet för parenteral administration.

Den aktuella dosen att administrera till en patient med användning av ovan angivna preparationsdoser beror på patien- tens individuella kondition. Det är onödigt att säga att det är nödvändigt att ändra den aktuella dosen beroende på behovet hos en individuell patient. Den ändamålsenliga dags- dosen för en vuxen patient är ungefär l-100 mg vid oral administration och ungefär 0,1-150 mg vid intravenös injek- tion.

Exempel l (preparat) (a) Sublingual tablett Förening enligt föreliggande uppfinning (fri form) 5 mg Laktos 19,7 mg Mannitol 25 mg Magnesiumstearat 0,3 mg 50 mg/tablett De ovan uppräknade komponenterna blandas väl och stansas direkt till tabletter om 50 mg vikt och med 5 mm diameter i en tab- letteringsmaskin. ' 502 323 (b) Tabletter (för oral administration) Förening enligt föreliggande uppfinning (hydrokloridsalt) 10 mg Laktos 44,5 mg Majsstärkelse 20 mg Kristallin cellulosa 25 mg Magnesiumstearat 0,5 mg 100 mg/tablett De ovan uppräknade komponenterna blandades väl och stansades direkt till tabletter om 100 mg vikt och med 7 mm diameter i en tabletteringsmaskin. (c) Hårdkapsel Förening enligt föreliggande uppfinning (fri form) 20 mg Laktos 176 mg Magnesiumstearat 4 mg 200 mg/kapsel De ovan uppräknade komponenterna blandades väl och infördes i en kapselfyllningsmaskin för att satsas i kapslar nr. 3 så att varje kapsel skulle innehålla 200 mg av blandningen och väga 250 mg totalt. (d) Granul (hârdkapsel) Förening enligt föreliggande uppfinning (fri form) 10 mg Laktos 710 mg Majsstärkelseklister 280 mg 1000 mg/förpackning De ovan uppräknade komponenterna blandades och knådades väl.

Blandningen formades till granuler med l mm diameter med an- vändning av en granulator. De satsades i kapslar nr. 3 så att varje kapsel skulle innehålla 200 mg av granulerna och väga totalt 250 mg. 502 523 (e) Injektion Förening enligt föreliggande uppfinning (fri form) 5 mg Mannitol 50 mg 55 mg/flaska De ovan uppräknade komponenterna blandades väl och satsades i en lämplig flaska följt av lyofilisering enligt en rutin- metod. Flaskan förseglades därefter för framställning av ett injektionspreparat. Produkten tillverkades för att upplösas i 1 ml destillerat vatten vid tidpunkten för injektion. §§§mp§l_å (akut toxicitet) De orala och intravenösa akuta toxiciteterna för föreningen enligt föreliggande uppfinning studerades på fyra veckor gamla SD-råttor av han- och honkön. Resultaten visade att oralt LD50 är mellan l200 mg/kg och 1300 mg/kg hos råttor av både han- och honkön och att intravenöst LD50 är mellan 800 mg/kg och 1000 mg/kg hos råttor av både han- och honkön.

Exempel 3 (effekt på hypoxi eller KCN-inducerad död) (1) Använda djur och läkemedel F344/NSlc (Fischer)-råttor av hankön med en vikt av 178-210 g (9 veckor gamla) användes i denna undersökning.

Det testade läkemedlet suspenderades i 2 % gummi arabicum- lösning och administrerades oralt till djuren 30 minuter innan gasintroduktion eller intravenös KCN-injektion. En kontroll- grupp erhöll likaså oralt 2,0 ml/kg av en 2%ig gummi arabi- cum-lösning. (2) Effekt på normobar hypoxi Råttor placerades i en bur under normalt atmosfärstryck och en blandning av gas bestående av 97 % N2 och 3 % 02 inför- des med en hastighet av 2 liter/minut. Perioden från starten av gasinföringen till upphörd respiration noterades som över- levnadstid (sekunder). Tabell 1 visar resultaten. ' ~5Û2 323 c 7 Tabell 1 Testat läkemedel Dos (mg/kg) överlevnadstid (sek.) oralt admini- (medel 1 S.E.) strerad Kontroll - 311,8 1 10,3 Förening enl. 3 357,4 1 19,4 föreliggande uppfinning 10 446,5 1 31,2xxx 411,8 1 28,6xx Nicardipin 1 318,3 1 9,6 3 293,7 1 15,3 283,8 1 14,4 Vinpocetin 10 348,3 1 18,1 367,8 1 l8,6x 100 371,4 1 23,8x x P <0,05, xx P<0,01, xxx P <0,00l (S.tudent's t-test) (3) Effekt på KCN-inducerad död En grupp av 10 råttor av hankön (läkemedelstestgrupp) och en grupp om 20 råttor av hankön (kontrollgrupp) användes. minuter efter administration av testläkemedlet admini- strerades 3 mg/kg KCN från caudavenen och överlevnadstiden noterades. Signifikansen av överlevnadsdata testades genom X2-metoden. Tabell 2 visar resultaten. '502 323 8 Tabell 2 Testat läkemedel Dos (mg/kg) Överlevnadsprocent oralt admini- strerad Kontroll - 3/20 (l5,0) Förening enl. 3 2/10 (20,0) föreliggande uppfinning 10 3/10 (30,0) 8/l0xx (80,0) Nicardipin l 0/l0 ( 0,0) 3 0/10 ( 0,0) 3/10 (30,0) Vinpocetin 10 3/10 (30,0) 5/10 (50,0) 100 7/l0xx (70,0) xx P <0,0l Exempel 4 (effekter på hjärnglukosintag) (l) Använda djur och läkemedel 9-ll veckor gamla F344/NSlc (Fischer)-råttor av hankön an- vändes. De utsattes för försöket efter ungefär l8 timmars fasta.

Det testade läkemedlet suspenderades i 2 % gummi arabicum- lösning och 2 ml/kg därav administrerades oralt till varje grupp. Kontrolldjuren erhöll likaså 2 % gummi arabicum- lösning oralt. (2) Ökning av hjärnglukosintag hos normala råttor Djuren uppdelades i fyra grupper, 5 per grupp. Föreningen enligt föreliggande uppfinning administrerades oralt till testgrupper i tre dosnivåer, 3, 10 och 30 mg/kg; en kontroll- grupp erhöll 2%-ig gummi arabicum-lösning. minuter efter administrationen dödades råttorna genom . ~ 502 323 mikrovågsstrålning (Toshiba mikrovågapplikator, TMW-6402, KW, 1,4 sek.) applicerad på huvudet. Skallen öppnades omedelbart för att ta ut hjärnan och dissekera ut cerebral cortex. Kvantitativa analysprov preparerades enligt metoden av Forbergrova et al (J. Neurochem., vol. 19 (1972)). Dvs. till ett vägt hjärnprov sattes en iskyld 0,3N HCIO4/l mM-EDTA- lösning (2 ml/200 mg våtvävnadsvikt). Blandningen homogeni- serades och centrifugerades (26000 x g, 10 minuter vid 4°C) för att separera supernatant, som lagrades. Detta erhållna precipitat homogeniserades och centrifugerades åter under samma betingelser och supernatanten kombinerades med den som erhållits från första centrifugeringen. De kombinerade supernatanterna neutraliserades med en iskyld blandning av l,5N KOH - 0,4M imidazol - 0,3N KCl och efter centrifugering användes den erhållna supernatanten som prov för kvantitativ glukosanalys. Proven analyserades med en fluorofotometer (utströmmande våglängd: 340 nm, fluorescentvåglängd 455 nm, Aminco spektrofotofluorometer framställd av American Insti- tute Company), som monitorerade bildningen och sönderdelningen av NADH eller NADPH. Tabell 3 visar resultaten.

Tabell 3 Administrerat Dos N Hjärnglukosnivå läkemedel (mg/kg p.o.) yu mol/g hjärna) medel 1 S.E.) Kontroll - 5 0,93 1 0,06 Förening enl. 3 5 1,45 1 0,07xxx fmfetlgïande 10 s 1,53 + ouoxxx uppfinning - 5 1,80 1 0,08xxx xxx P<0,00l (Student's t-test) (3) Ökning i hjärnglukosintag på råttor under hypoxibetingel- ser Djuren erhöll antingen 30 mg/kg av föreningen enligt före- liggande uppfinning eller 2 % gummi arabicum-lösning (kon- '502 323 troll) oralt. 30 minuter efter administration av testläke- medlet placerades råttorna i en bur och en blandad gas be- stående av 97 % N2 och 3 % 02 infördes med en hastighet av 2 liter/minut i 5 minuter för att utsätta djuren för ett hypoxiskt tillstånd. Omedelbart efter den hypoxiska perioden dödades råttorna genom mikrovågsstrålning. Den normala råttor- na i kontrollgruppen dödades enligt en liknande metod 30 minu- ter efter administration av kontrollösningen. Cerebral cortex dissekerades ut och prov för analys preparerades såsom be- skrivits i (l) och glukosnivån fastställdes. Tabell 4 visar resultaten.

Tabell 4 Administrerat Dos N Hjärnglukosnivå läkemedel (mg/kg p.o.) (p mol/g hjärna) (medel 1 S.E.

Kontroll - 8 0,92 1 0,05 Hypoxi- till- Förening enl. stånd föreliggande 30 8 l,l2 1 0,04xx uppfinning Normal Kontroll - 8 l,30 1 0,03xxx xx P<(0,0l, xxx P<0,00l (Student's t-test) Exempel 5 (kliniskt test) Tabletter innehållande föreningen enligt föreliggande upp- finning gav oralt i en dagsdos av 15-30 mg i 8 veckor till patienter med en ålder mellan 40 och 80 år som led av cere- bral infarkt (trombos eller embolism) och cerebral arterio- skleros. Lindringen av subjektiva och mentala symtom utvärde- rades (lätt återvinning - remarkabel återvinning) och resul- taten framgår av tabell 5. “ 502 323 ll Tabell 5 Totalt antal fall Antal fall hos vilka behandlingen var effektiv (effektiv procentï 49 33 (67,3 %) Som enda negativa reaktioner observerades en lindrig huvud- värk i två fall.

De beskrivna resultaten visar att föreningen enligt före- liggande uppfinning förlänger överlevnadstiden och ökar hjärnglukosintaget hos råttor under hypoxibetingelser. Den har således visats vara användbar som terapeutiskt medel för behandling av sjukdomar förbundna med cerebral ischemi.

Claims (4)

1. 502 323 A2 PATENTKRAV L Användning av N-(2-hydroxietyl)nikotinamidnitrat eller ett farmaceutiskt godtagbart salt därav för framställning av ett läkemedel aktivt för behandling av sjukdomar förbundna med cerebral ischemi.

2. Användningen enligt patentkravet 1 av ett läkemedel i form av en tablett innehållande 0,1-20 mg av nämnda aktiva beståndsdel.

3. Användningen enligt patentkravet l av läkemedlet i form av en kapsel innehållande 0,1-20 mg av nämnda aktiva beståndsdel.

4. Användningen enligt patentkravet l av läkemedlet i form av en injektion innehållande l-12 mg av nämnda aktiva be- ståndsdel.