SA517381863B1 - طريقة للتحكم في معالجة بالسكر لبروتين سكر تخليقي - Google Patents

طريقة للتحكم في معالجة بالسكر لبروتين سكر تخليقي Download PDF

Info

Publication number
SA517381863B1
SA517381863B1 SA517381863A SA517381863A SA517381863B1 SA 517381863 B1 SA517381863 B1 SA 517381863B1 SA 517381863 A SA517381863 A SA 517381863A SA 517381863 A SA517381863 A SA 517381863A SA 517381863 B1 SA517381863 B1 SA 517381863B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
glycoprotein
insulin
culture medium
glycan
recombinant glycoprotein
Prior art date
Application number
SA517381863A
Other languages
English (en)
Inventor
سو هيون ريو
سام سوك سيول
صن يونج كيم
كيو يونج كيم
Original Assignee
ال جى شيم ليمتد
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=56284687&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SA517381863(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by ال جى شيم ليمتد filed Critical ال جى شيم ليمتد
Publication of SA517381863B1 publication Critical patent/SA517381863B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K19/00—Hybrid peptides, i.e. peptides covalently bound to nucleic acids, or non-covalently bound protein-protein complexes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N9/00—Enzymes; Proenzymes; Compositions thereof; Processes for preparing, activating, inhibiting, separating or purifying enzymes
    • C12N9/14—Hydrolases (3)
    • C12N9/24—Hydrolases (3) acting on glycosyl compounds (3.2)
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C12P21/005—Glycopeptides, glycoproteins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
    • A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • A61K38/1703—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates
    • A61K38/1709—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals
    • A61K38/1741—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans from vertebrates from mammals alpha-Glycoproteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/575—Hormones
    • C07K14/62—Insulins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/435—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
    • C07K14/705—Receptors; Cell surface antigens; Cell surface determinants
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/11—DNA or RNA fragments; Modified forms thereof; Non-coding nucleic acids having a biological activity
    • C12N15/52—Genes encoding for enzymes or proenzymes
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
    • C12N15/09—Recombinant DNA-technology
    • C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
    • C12N15/74—Vectors or expression systems specially adapted for prokaryotic hosts other than E. coli, e.g. Lactobacillus, Micromonospora
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P19/00—Preparation of compounds containing saccharide radicals
    • C12P19/18—Preparation of compounds containing saccharide radicals produced by the action of a glycosyl transferase, e.g. alpha-, beta- or gamma-cyclodextrins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00—Preparation of peptides or proteins
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/10—Immunoglobulins specific features characterized by their source of isolation or production
    • C07K2317/14—Specific host cells or culture conditions, e.g. components, pH or temperature
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/21—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin from primates, e.g. man
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/40—Immunoglobulins specific features characterized by post-translational modification
    • C07K2317/41—Glycosylation, sialylation, or fucosylation
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
    • Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
    • Y02E50/10—Biofuels, e.g. bio-diesel

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Physics & Mathematics (AREA)
  • Plant Pathology (AREA)
  • Marine Sciences & Fisheries (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Diabetes (AREA)
  • Endocrinology (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Apparatus Associated With Microorganisms And Enzymes (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بطريقة للتحكم في نمط معالجة بالسكر glycosylation pattern لبروتين سكر تخليقي recombinant glycoprotein، تشمل زراعة خلية مشتملة على عديد نيكلوتيد polynucleotide يشفر بروتين سكر تخليقي في وسط مزرعة culture medium مشتمل على أنسولين insulin. شكل 1

Description

طربقة للتحكم في معالجة بالسكر لبروتين سكر تخليقي ‎A METHOD FOR CONTROLLING GLYCOSYLATION OF RECOMBINANT‏ ‎GLYCOPROTEIN‏ ‏الوصف الكامل
خلفية الاختراع
يتعلق الاختراع الحالي بطريقة للتحكم في معالجة بالسكر ‎glycosylation‏ لبروتين سكر تخليقي
.recombinant glycoprotein
بالنسبة لبروتين اندماج ‎fusion protein‏ مستقبل عامل تتكرز الورم ‎tumor necrosis factor‏
‎=(TNFR) receptor 5‏ إف سي ‎Fe‏ الذي يتصل فيه جزءٍ ارتباط مجموعة ترابطية لمستقبل عامل
‏تتكرز الورم- » 75م بشري (مسستقبل عامل تنكرز الورم ؛ مستقبل ‎(TNF-a‏ مع ‎Fe a‏ من
‏:6 بشرية؛ يتم إطلاق ‎Etanercept‏ من قبل ‎Amgen‏ تحت الاسم التجاري ‎Enbrel‏ عام 2002.
‏يثبط ‎Etanercept‏ بشكل متنافس الارتباط في الجسم ‎(A‏ بين مستقبلات عامل تنكرز الورم- ‎a‏
‏على سطح خلية؛ بالتالي يتم تثبيط استجابة مناعية متعلقة مع عامل تنكرز الورم- ». طبقا لذلك؛ 0 كمثبط عامل تنكرز الورم- ‎ca‏ يتم استخدام ‎Etanercept‏ لالتهاب المفاصل الروماتويدي
‎«ankylosing spondylitis ‏الصدفية منممت:هوم» التهاب الفقرات الالتصاقي‎ rheumatoid arthritis
‏إلخ» وتكون الدراسات السريرية لتطبيقه على التهاب الأوعية الدموية ‎cvasculitis‏ مرض ألزهايمر
‎<Alzheimer’s disease‏ ومرض كرون ‎Crohn’s disease‏ في تقدم.
‏في غضون هذاء يكون المنتج الصيدلاني ‎pharmaceutical product‏ التخليقي ‎gene (pall‏ ‎recombinant 5‏ هو منتج صيدلاني يحتوي على ببتيد ‎peptide‏ بروتين ‎protein‏ إلخ؛ يتم إنتاجه
‏باستخدام تقنية معالجة جينية ‎genetic manipulation technique‏ كمقوم نشط ‎.active ingredient‏
‏يكون استخدام التكنولوجيا الحيوية مميزا حيث يكون من الممكن الحصول على عدد كبير من
‏البروتينات التخليقية ‎recombinant proteins‏ عالية النقاء التي يكون من الصعب الحصول عليها
‏في الحالة الطبيعية؛ لكن قد تكون بنية الإظهار بذاتها غير مستقرة حيث يتم إقحام جين من 0 البروتين المستهدف في خلية العائل من الخارج. بجانب هذاء يتم إنتاج البروتينات بإظهار الجين
‏في كائن متعضي مجهري ‎microorganism‏ أو خلية حيوانية أو نباتية؛ وليس من جسم بشري؛ قد
‏تكون البروتينات التخليقية مختلفة عن البروتينات الأصسلية من حيث الخصائص أو السمات
البنيوية؛ الكيميائية الفيزيائية؛ الكيميائية المتاعية؛ والحيوية ‎(Kwon, ef al., FDC Legislation‏
.)2010 21-13 2 ‏الجزء 1ء‎ Research V
بصورة محددة؛ في حالة بروتين السكر ‎cglycoprotein‏ قد تختلف معالجة السكر وشكل أو بناء
شكل السكر (سلسلة السكر ‎(sugar chain‏ طبقا لحالة المزرعة. بمعنى آخرء في عملية إنتاج
بروتين ‎ull‏ يؤدي الاختلاف في بنيات شكل السكر أو كميات السكاريدات ‎saccharides‏ التي
تشكل بنية شكل السكر إلى أنواح متنوعة من أشكال السكرء بذلك يسبب تغاير طبقا للاختلافات
في شروط الإنتاج. في حالة بروتينات السكر ‎glycoproteins‏ مع بنيات شكل السكر المختلفة؛
تكون مختلفة عن الأشكال الأصلية من ناحية الحركة في الجسم الحي أو توزيع النسيج ‎ctissue‏ أو
تكون مناهضة للأشكال الأصلية؛ مما يسبب تفاعل عكسي. عند الإعطاء باستمرار لفترة زمنية 0 طويلة؛ تعمل كمستضدات ‎antigens‏ وقد تتسبب في مشكلة مناعية ‎.immunological problem‏
كما هو موصوف أعلاه؛ بما أن أشكال السكر قد تصبح عامل هام قد يؤثر على التأثير الصيدلاني
والحركة في الجسم ‎«al‏ يكون التحكم في بنيات بروتين ‎Sl)‏ هام جدا في مجال تطوير منتجات
بروتين السكر التخليقي ‎recombinant glycoprotein‏ للأدوية وتطوير تقنية الإنتاج واسع النطاق.
بهذا الخصوص؛ يكشف منشور براءة الاختراع الكورية رقم 0139292-2011؛ كفن سابق؛ عن 5 التحكم في معالجة البروتين بالسكر وتركيبات وطرق متعلقة بذلك؛ ويكشف منشور براءة الاختراع
الكورية رقم 0134116-2012 عن طريقة لزيادة ‎Jad‏ موقع ‎dallas‏ السكر ‎N-glycosylation N‏
‎site‏ على بروتينات السكر العلاجية.
‏الوصف العام للاختراع
‏مع الخلفية المذكورة أعلاه» أجرى المخترعون الحاليون جهود مكثفة للعثور على طريقة للتحكم في 0 معالجة بالسكر لبروتين سكر ‎olds‏ ونتيجة لذلك؛ أكدوا على أنه يمكن التحكم في المعالجة
‏بالسكر لبروتين السكر التخليقي عند استخدام وسط مزرعة محتوي على أنسولين ‎insulin‏ بالتالي
‏يكتمل الاختراع الحالي.
‏الغرض الأساسي للاختراع الحالي هو توفير طريقة للتحكم في نمط معالجة بالسكر لبروتين سكر
‏تخليقي» تشمل زراعة ‎(AS‏ متعضي مجهري يشمل عديد نيكلوتيد ‎polynucleotide‏ يشفر بروتين السكر التخليقي في وسط مزرعة ‎culture medium‏ مشتمل على أنسولين.
الغرض الآخر للاختراع الحالي هو توفير طريقة للتحكم في نمط معالجة بالسكر لبروتين سكر تخليقي؛ تشمل (أ) زراعة كائن متعضي مجهري يشمل عديد نيكلوتيد يشفر بروتين سكر تخليقي في وسط مزرعة لنمو الكائن المتعضي المجهري؛ و(ب) إضافة أنسولين إلى وسط المزرعة وزراعته لإنتاج بروتين سكر. التأثير المميز طريقة التحكم في معالجة بالسكر لبروتين السكر التخليقي طبقا للاختراع الحالي يمكنها التحكم في ‎(ali‏ مضاعفة؛ إفرازء ثبات؛ عمر النصف في البلازما ‎eplasma‏ واستجابة مناعية لبروتين السكر التخليقي . شرح مختصر للرسومات 0 شكل 1: يوضح مخطط انشقاق ‎.pCUCBin-mSig-TNFcept‏ ‏شكل 2: يوضح عدد الخلايا الحية ‎viable cells‏ (وحدة :710 خلية/ ملليلتر) والاتاحة الحيوية (7) طبقا لزمن زراعة خلية ‎cell culture time‏ (وحدة: اليوم) في نموذج تمثيلي للاختراع الحالي. يوفر الاختراع الحالي طريقة للتحكم في نمط معالجة بالسكر لبروتين سكر تخليقي؛ تشمل زراعة 5 كائن متعضي مجهري يشمل عديد نيكلوتيد يشفر بروتين السكر التخليقي في وسط مزرعة مشتمل على أنسولين. وبشير السكاريد ‎saccharide‏ إلى شكل سكرء مثلا واحد يتصل فيه واحد على الأقل أو اثنين من مركبات سكاريد أحادية 01000586608:1065. على سبيل المثال؛ قد يتضمن شكل السكرء كأوليجو سكاريد ‎oligosaccharide‏ تتصل فيه مركبات سكاريد أحادية متعددة مع بروتين السكرء سكاريد أحادي ‎monosaccharide‏ مثلا فوكوز ‎fucose‏ 17- أسيتيل جلوكوز أمين ‎«N-acetylglucosamine‏ ‎Join uf -N‏ جالاكتوز أمين ‎(N-acetylgalactosamine‏ جالاكتوز ‎¢galactose‏ مانوز ‎«mannose‏ ‏حمض سياليك ‎esialic acid‏ جلوكوز ‎glucose‏ مركبات ‎exyloses job)‏ مانوز -6- فوسفات ‎cmannose-6-phosphate‏ إلخ؛ شكل متفرع منه؛ إلخ. على سبيل المثال» قد يكون بروتين السكر التخليقي هو بروتين اندماج جلوبيولين مناعي ‎.immunoglobulin fusion protein 5‏ قد يتضمن بروتين اندماج الجلوبيولين المناعي المنطقة ‎Fc‏ ‏التي تكون جزءاً من الجلوبيولين المناع؛ ‎La‏ في ذلك المجال الثابت بالسئلسةة الثقيلة 2 ‎heavy‏
‎chain constant domain 2‏ (2:©)» المجال الثابت ‎dl ol Wb‏ الثقيلة 3 ‎heavy chain constant‏ ‎«(Cy3) domain 3‏ ومنطقة المفصلة؛ باستثناء المجالات المتغيرة من السلاسل ‎ALAN‏ والخفيفة؛ المجال الثابت بالسلسةة التتثقيلة 1 1 ‎heavy chain constant domain‏ (1ن©)»؛ والمجال الثابت بالسسلسلة الخفيفة ‎(CLD) light chain constant domain‏ من الجلوييولين المنا عي ‎.(Ig) immunoglobulin 5‏ على سبيل المثال؛ قد يكون بروتين السكر التخليقي هو بروتين اندماج ‎TNFR-Fc‏ ‏يشير مستقبل عامل تنكرز الورم ‎(TNFR) tumor necrosis factor receptor‏ إلى بروتين سكر يرتبط مع عامل تنكرز الورم- ». قد يكون بروتين مستقبل عامل تنكرز الورم عبارة عن بروتين مستقيل عامل تتكرز الورم مستقيل عامل تتكرز اورم 1 ‎tumor necrosis factor receptor I‏ ‎(p55) (TNFRD 0‏ أو مستقبل عامل تتكرز الورم ]1 ‎(TNFRII) tumor necrosis factor receptor‏ ‎«(p75) TI‏ يفضل بروتين مستقبل عامل تنكرز الورم ‎CIT‏ لكنت هذا ليس حصريا. بصورة إضافية؛ قد يتم استخدام مستقبل عامل تنكرز الورم ‎TT‏ بصورة بديلة مع عضو من الفصيلة العليا ‎superfamily member‏ لمستقيبل عامل تتكرز ‎1B tumor necrosis factor receptor ayy‏ ‎.(TNFRSFIB)‏ يتم تقسيم بروتين مستقبل عامل تنكرز الورم ]1 إلى 4 مجالات ومناطق عبر الغشاء؛ على سبيل المثال؛ بروتين مستقبل عامل تنكرز الورم ]1 يتكون من 235 حمض أميني ‎amino acids‏ يتضمن 4 مجالات وعبر الغشاء؛ لكن هذا ليس حصريا. يمكن الحصول على المعلومات المتعلقة ببروتينات مستقبل عامل تتكرز الورم 1 و مستقبل عامل تنكرز الورم 11 من قواعد بيانات معروفة ‎National Institutes of Health GenBank (fie‏ على سبيل المثال» قد تكون بروتينات مستقبل عامل تنكرز الورم 1 و مستقبل عامل تنكرز الورم 11 عبارة عن بروتينات التي 0 يكون رقم الوصول إليها هو 001056 ‎NP_‏ أو 20333 © لكن هذا ليس حصريا. للحصول على نشاط الارتباط مع عامل تنكرز الورم- ‎cao‏ المعروف بتسببه في أمراض عديدة عند الإظهار المفرط في الجسم الحس» قد يتم استخدام البروتين مستقبل عامل تتكرز الورم لمعالجة أمراض يتوسطها عامل تتكرز الورم- ». من أجل الاستخدام للغرض المذكور؛ يمكن إنتاج واستخدام البروتين مستقبل عامل تتكرز الورم في شكل بروتين اندماج مع عمر نصف زائد باندماج 5 المنطقة ‎Fe‏ من الجلوبيولين المناعي وبروتين مستقبل عامل تنكرز الورم.
يشير مستقبل عامل تنكرز الورم - بروتين اندماج © إلى بروتين اندماج فيه يتصل كل أو قسم من البروتين مستقبل عامل تنكرز الورم مع المنطقة ‎Fo‏ من الجلوبيولين المناعي بواسطة تفاعل إنزيمي أو منتج فيه يتم إظهار اثنين من عديد الببتيدات في عديد ببتيد واحد من خلال المعالجة الجينية. قد يكون لبروتين الاندماج مستقبل عامل تنكرز الورم.- ‎Fe‏ بروتين مستقبل عامل تنكرز الورم وتتصل المنطقة ‎Fe‏ من الجلوبيولين المناعي ‎immunoglobulin‏ مباشرة من خلال وصلة ببتيد ‎peptide linker‏ لكن هذا ليس حصريا. قد يكون المثال غير المحدود لبروتين اندماج مستقبل عامل تتنكرز الورم- ‎Fc‏ هو ‎Etanercept‏ (براءة الاختراع الأمريكية رقم 7.915.225؛ ورقم 600 .؟؛ 36.755 عم). قد يتم إنتاج بروتين اندماج مستقبل عامل تنكرز الورم- ‎Fe‏ بواسطة اندماج كل أو قسم من بروتين 0 مستقبل عامل تنكرز الورم مع المنطقة ‎Fe‏ من الجلوبيولين المناعي؛ على ‎duu‏ المثال» 232 حمض أميني من المنطقة ‎Fe‏ من جلوبيولين مناعي يتضمن منطقة المفصلة وموقع الحمض الأميني الأول إلى 235 من مستقبل عامل تنكرز الورم 17 لكن هذا ليس حصريا. بصورة إضافية؛ قد يكون بروتين الاندماج مستقبل عامل تنكرز الورم- ‎Fe‏ محسن الكودون طبقا إلى خلية عائل ليتم إظهاره وقد يكون؛ على سبيل المثال؛ بروتين اندماج مستقبل عامل تنكرز الورم- ‎Fe‏ محسن 5 الكودون بصفة خاصة لخلية مبيض هامستر صيني ‎((CHO) Chinese Hamster Ovary‏ لكن هذا ليس حصريا. إن بروتين الاندماج مستقبل عامل تنكرز الورم- ‎Fo‏ ليس ترتيب حمض أميني فقط لكنه أيضا ترتيب حمض أميني مشابه بنسبة 770 أو أكثر؛ يفضل 780 أو أكثر؛ يفضل أكثر 0 أو أكثرء يفضل أكثر أيضا 795 أو ‎ST‏ الأكثر تفضيلا 798 لترتيب الحمض الأميني؛ وبتضمن كل البروتينات التي لها نشاط الارتباط جوهريا مع عامل تنكرز الورم- ‎a‏ يتضح أنه 0 طالما أن الترتيب الذي له هذا التشابه يكون ترتيب حمض أميني متماثل مع بروتين اندماج مستقبل عامل تنكرز الورم- ‎Fe‏ أو ترتيب حمض أميني له نشاط حيوي ‎cilia‏ طافرة بروتين لها ترتيبات حمض أميني التي يتم حذف؛ تعديل؛ استبدال» أو إضافة جزء منهاء فإنه يقع ضمن نطاق الاختراع الحالي . يشير ‎Fe‏ إلى جزءِ من الجلوبيولين المناعي؛ متضمنا المجال الثابت للسلسلة الثقيلة 2؛ المجال 5 الثابت للسلسلة الثقيلة 3؛ ومنطقة المفصلة؛ باستثناء المجالات المتغيرة للسلإسل الثقيلة والخفيفة؛ المجال الثابت للسلسلة الثقيلة 1» والمجال الثابت للسلسلة الخفيفة من الجلوبيولين المناعي. بصورة
إضافية؛ تتضمن المنطقة ‎Fe‏ من الاختراع الحالي ليس فقط الشكل الأصلي لترتيب حمض أميني لكن أيضا مشتق ترتيب حمض أميني من ذلك. إن مشتق ترتيب الحمض الأميني يعني أن واحد أو أكثر من متخلفات الحمض الأميني من الشكل الأصلي لترتيب الحمض الأميني له ترتيبات مختلفة ‎das‏ للحذف؛ الإقحام؛ الاستبدال التحفظي أو غير التحفظيء أو توليفة من ذلك. بصورة إضافية؛ قد تكون منطقة ‎Fe‏ للجلوبيولين المناعي عبارة عن منطقة ‎Fe‏ مشتقة من ‎IgM IgG‏ ‎ID IgA «IgE‏ أو توليفة أو هجين من ذلك. بصورة إضافية؛ يفضل اشتقاق منطقة ‎Fe‏ ‏للجلوبيولين المناعي من ‎IgG‏ معروف لتحسين نصف عمر بروتين ‎Jalil‏ ويفضل أكثر أن يتم الاشتقاق من ‎IgGl‏ لكن هذا ليس قصرا على فئتها الفرعية ويمكن الحصول عليها من أي فئة
فرعية من ‎IgG‏ (1861» 1802 1803 و04ع1).
0 يمكن إنتاج المنطقة ‎Fe‏ جينيا أو الحصول على جين يشفر المنطقة ‎Fe‏ باستخدام ناقل تخليقي ‎recombinant vector‏ أو قطع مستضد عديد النسخ مُنقى ‎purified polyclonal antigen‏ أو مستضد أحادي النسخ ‎monoclonal antigen‏ مع لياز ملائم مثل البابايين ‎cpapain‏ الببسين ‎pepsin‏ إلخ؛ على التوالي. يمكن الحصول على بروتين الاندماج مستقبل عامل تنكرز الورم- ‎Fo‏ بإدخال ناقل إظهار يتضمن
5 عديد نيكلوتيد ‎polynucleotide‏ يشفر بروتين الالتحام في خلية عائل ‎host cell‏ وإظهاره. في تجسيد تمثيلي من الاختراع الحالي»؛ يتم امستخدام ناقل ‎pCUCBin-mSig-TNFeept‏ كناقل الإظهار المتضمن عديد نيكلوتيد يشضفر بروتين الاندماج مستقبل عامل تنكرز الورم- ‎ang Fe‏ تنبيغه في خلية مبيض هامستر صيني لإظهار بروتين اندماج مستقبل عامل تنكرز الورم- ‎Fo‏
في الاختراع ‎(Seo Mall‏ استخدام الكائن المتعضي المجهري للحصول على نفس المعنى
0 كخلية العائل أو كمغير )00208)0©020. قد يكون المثال غير المحدد هو خط خلية حيوان» نبات أو خلية عائل خميرة. في تجسيد تمثيلي من الاختراع الحالي؛ يتم استخدام خلية مبيض هامستر صيني كالكائن المتعضي المجهري؛ لكن هذا ليس حصريا طالما أنه يمكن تحويل الكائن المتعضي المجهري بواسطة عديد نيكلوتيد يشفر بروتين السكر التخليقي. يمكن إقحام عديد النيكلوتيد؛ طالما أنه يمكن إظهاره داخل الكائن المتعضي المجهري؛ في
5 الكروموسوم ويبوضع بداخله أو يوضع خارج الكروموسوم ‎chromosome‏ إن عديد النيكلوتيد يتضمن حمض نووي رببوزي ‎(RNA) Ribonucleic acid‏ و حمض النووي الديوكسي رببوزي
‎(DNA) deoxyribonucleic acid‏ اللذان يشفران البروتين المستخدم. إن طريقة تضمين عديد النيكلوتيد غير محددة طالما أن الطريقة مستخدمة في الفن. ‎(JOS‏ يمكن تضمين عديد النيكلوتيد داخل الكائن المتعضي المجهري في شكل كاسيت ‎cassette‏ إظهار؛ بنية جين ‎gene construct‏ تتضمن كل العناصر الأساسية المطلوبة للإظهار الذاتي. كمثال آخرء يمكن استخدام طريقة للتعديل بواسطة ناقل إظهار تتضمن ترتيب عديد النيكلوتيد المشفر للبروتين المستهدف المتصل بصورة قابلة للتشغيل مع ترتيب تنظيم مناسب بحيث يمكن إظهار البروتين المستهدف في خلية عائل ملائمة. إن ترتيب التنظيم يتضمن معزز لبدء الانتساخ؛ ترتيب مشضغل عشوائي لتنظيم الانتساخ؛ ترتيب يشفر ريبوسوم حمض نووي رببوزي الرسول ‎Messenger Ribonucleic acid‏ ‎(mRNA)‏ - مجال ارتباط مناسب؛ وترتيب لتنظيم الانتساخ والترجمة. يمكن نسخ أو إدارة ‎(JB‏
0 بعد تحويله في خلية عائل مناسبة؛ بغض النظر عن الجينوم العائل؛ أو قد يتكامل في جينوم العائل ‎host genome‏ بذاته. قد لا يكون الناقل المستخدم في الاختراع الحالي محددا طالما أن التاقل قابل للنسخ في خلية العائل؛ ويمكن استخدام أي ناقل معروف في الفن. نمط المعالجة بالسكر لبروتين السكر التخليقي يعني نمط إظهار شكل سكرء الذي يظهر من خلال المعالجة بالسكر لبروتين السكر. أمثلة على نمط المعالجة بالسكر تتضمن وجود المعالجة بالسكر
التي تصل السكاريد مع بروتين؛ نوع من السكاريد؛ نوع المعالجة بالسكرء محتوى السكاريد؛ تركيبة أحادي السكاريد (السكاريدات) ‎Lay émonosaccharide (saccharides)‏ في ذلك النسبة المولارية؛ موقع شكل السكرء؛ بنية شكل السكر ‎Lay‏ في ذلك ترتيب؛ موقع معالجة السكر؛ اشغال معالجة السكرء عدد أشكال السكرء والمحتويات النسبية طبقا للبنية. قد يظهر الاختلاف في النشاط الحيوي أو الثبات في الجسم الحي طبقا لنمط المعالجة بالسكر لبروتين السكر التخليقي.
0 في الاختراع الحالي؛ قد يتحكم الأنسولين في المعالجة بالسكر المتصلة مع ‎N-linked N‏ ‎glycosylation‏ لبروتين السكر التخليقي. في الاختراع الحالي؛ قد يتم استخدام المعالجة بالسكر المتصلة مع 17 للحصول على نفس معنى المعالجة بالسكر- ‎(JUS WN‏ قد يعمل الأنسولين على خفض محتوى جليكان-!1 ‎N-glycan‏ من بروتين السكر التخليقي. في الاختراع الحالي؛ قد يتم استخدام ‎NS‏ للحصول على نفس معنى شكل ‎N= Sl‏ وقد يشير إلى ‎dlls‏ فيها يتصل
5 المكاريد مع أسباراجين ‎asparagine‏ من البروتين.
في الاختراع الحالي؛ قد يتحكم الأنسولين في المعالجة بالسكر المتصةة مع ‎O-linked O‏ ‎glycosylation‏ لبروتين السكر التخليقي. في الاختراع الحالي؛ قد يتم استخدام المعالجة بالسكر المتصلة مع ‎N‏ للحصول على نفس معنى المعالجة بالسكر = ‎.O-glycosylation O‏ كمثال؛ قد يعمل الأنسولين على خفض محتوى جليكان-0 ‎O-glycan‏ من بروتين السكر التخليقي. في الاختراع الحالي؛ قد يتم استخدام جليكان-0 للحصول على نفس معنى شكل السكر-0؛ وقد يشير إلى حالة فيها يتصل السكاريد مع سيرين ‎serine‏ أو ثريونين ‎threonine‏ من البروتين. في الاختراع الحالي؛ قد يتحكم الأنسولين في المعالجة بالسكر المتصلة مع ‎N‏ أو المتصلة مع 0 لبروتين السكر التخليقي. في تجسيد تمثيلي من الاختراع الحالي؛ يبدو أن إضافة الأنسولين تؤثر على نمط المعالجة بالسكر 0 لبروتين السكر (جدول 2). بصفة خاصة. يتأكد أنه يتم التحكم في محتوى 17- جليكان و/أو 0- جليكان ليتم خفضه بإضافة الأنسولين. بصورة محددة؛ فيما بين عمليات زراعة خلية قادرة على إنتاج بروتين السكرء يتأكد أن إضافة الأنسولين خلال طور الإنتاج تلعب دورا هاما في التحكم في نمط المعالجة بالسكر. قد يكون تركيز الأنسولين 0.0001 مجم/ لتر إلى 1 جم/ لتر بالنسبة إلى إجمالي حجم وسط 5 المزرعة. في نموذج تمثيلي للاختراع الحالي؛ يتم التأكيد على أنه عند زيادة تركيز الأنسولين» يمكن التحكم في محتوى 17- جليكان و/أو 0- جليكان ليتم تقليله (جدول 2). لا يتم تحديد وسط المزرعة طالما أنه يستخدم لزراعة كائن متعضي مجهري أو خلية عائل متضمنا عديد نيكلوتيد يشفر بروتين سكر في الفن. على سبيل المثال؛ قد يتضمن وسط المزرعة حمض أميني ‎amino acid‏ مثل ‎—L‏ جلوتامين ‎(paws «L-glutamine‏ عصنتنسيطض؛ ألاثين ‎calanine‏ ‏0 أرجنين ‎arginine‏ أحادي هيد روكلوريد ‎«monohydrochloride‏ أحادي هيدرات أسباراجين ‎asparagine monohydrate‏ حمض أسبارتيك ‎caspartic acid‏ سيتين ‎cysteine‏ جليسين ‎«glycine‏ ‏هستيدين ‎chistidine‏ أيزولوسين ‎cisoleucine‏ لوسين ‎deucine‏ أحادي هيدروكلوريد ليسين ‎lysine‏ ‎¢monohydrochloride‏ مثيونين ‎(methionine‏ فنيل الانين ‎¢phenylalanine‏ برولين ‎«proline‏ ‏سيرين ‎«serine‏ تريونين ‎cthreonine‏ تريبتوفان ‎tryptophan‏ تيروسين ‎«tyrosine‏ (ملح ‎bs‏ ‏5 صوديومالدة ‎disodium‏ » نازع للماء ‎«(dehydrate‏ وفالين ‎valine‏ كمثال آخرء قد يتضمن وسط المزرعة جلوكوز ع81:205؛ بيكريونات الصوديوم ‎sodium bicarbonate‏ كلوريد الصوديوم
‎¢sodium chloride‏ كلوريد كالسيوم لامائي ‎calcium chloride anhydrous‏ بنتاهيدرات سلفات تحاسيك ‎cupric sulfate pentahydrate‏ نانتوهيدرات نترات الحديديك ‎«ferric nitrate nonahydrate‏ هبتاهيدرات سلفات الحديدوز ‎ferrous sulfate heptahydrate‏ كلوريد البوتاسيوم ‎potassium‏ ‎chloride‏ سلفات مغنسيوم لامائي ‎magnesium sulfate anhydrous‏ كلوريد مغنسيوم لامائي ‎magnesium chloride anhydrous 5‏ فوسفات صوديوم ‎sodium phosphate‏ (أحادي قاعدي أو ثنائي قاعديء أحادي هيدرات ‎«(monohydrate‏ هبتاهيدرات سلفات زنك ‎zinc sulfate‏ ‎cheptahydrate‏ هيبوزنتين ‎ALS hypoxanthine‏ هيدروكلوريد بوتريسين ‎putrescine‏ ‎«dihydrochloride‏ بيروفات صوديوم ‎¢sodium pyruvate‏ بيوتين ‎chiotin‏ بانتوثينات كالسيوم- ‎D‏ ‎<D-calcium pantothenate‏ كلوريد كولين ‎choline chloride‏ سيانوكويا لامين ‎«cyanocobalamin‏
0 حمض فوليك ‎=i «folic acid‏ إينوزبتول ‎i-inositol‏ نيكوتيناميد ‎«nicotinamide‏ أحادي هيدروكلوريد بيربدوكسارال ‎«pyridoxal monohydrochloride‏ أحادي هيدروكلوريد بيريدوكسين ‎pyridoxine‏ ‎¢monohydrochloride‏ رببوفلافين ‎«riboflavin‏ أحادي هيدروكلوريد ثيامين ‎thiamine‏ ‎¢monohydrochloride‏ جلوكوز لامائي ‎(glucose anhydrous‏ كلوريد بوتاسيوم ‎potassium‏ ‎cchloride‏ فوسفات صوديوم ‎«(NaH2POs-H20) sodium phosphate‏ كريونات هيدروجين صوديوم
‎sodium hydrogen carbonate 5‏ (و001100؛ حمض 4-(2-هيدروكسي إيثيل)-1 -بيبيرازين إيثان سلفونيك ‎(HEPES) 4-{2-hydroxyethyl}-1-piperazineethanesulfonic acid‏ (حمض حر) ‘ سلفات دكستران ‎«dextran sulfate‏ كلوريد صوديوم ‎sodium chloride‏ حمض أسكوربيك ‎—D ascorbic acid‏ بيوتين ‎<Hypep 1510 <D-biotin‏ أو توليفة من اثنين أو أكثر . لمزرعة البذرة الأولية؛ قد يوجد ‎of‏ تي إكس ‎MTX‏ إضافيا لزيادة مستوى الإظهار.
‏0 قد تكون الزراعة هي طريقة زراعة بالتشريب. قد تكون الزراعة هي طريقة زراعة بتشريب مائع زراعة حول ‎HIS‏ متعضي مجهري. من خلال طريق الزراعة بالتشريب» يمكن التحكم بسهولة في تركيز الأنسولين طبقا إلى نمط معالجة بالسكر مستهدف. بالنسبة لجانب آخر» يوفر الاختراع الحالي طريقة للتحكم في نمط معالجة بالسكر لبروتين سكر تخليقي؛ تشمل (أ) زراعة كائن متعضي مجهري يشمل عديد نيكلوتيد يشفر بروتين سكر تخليقي في
‏5 وسط مزرعة لنمو الكائن المتعضي المجهري؛ و(ب) إضافة أنسولين إلى وسط المزرعة وزراعته لإنتاج بروتين سكر.
على سبيل المثال؛ قد يكون بروتين السكر التخليقي هو بروتين اندماج جلوبيولين مناعي. على سبيل مثال آخرء قد يكون بروتين السكر التخليقي هو بروتين اندماج مستقبل عامل تنكرز الورم.- ‎(Fe‏ الموصوف أعلاه. قد تتضمن ‎Lila]‏ الخطوة (أ)» وهي طور نمو ‎cgrowth phase‏ زراعة بذرة.
قد لا يتضمن وسط المزرعة من الخطوة (أ) أنسولين. قد تكون الخطوة (ب) هي خطوة إضافة أنسولين عند تركيزات مختلفة طبقا لنمط معالجة بالسكر مستهدف. في نموذج تمثيلي من الاختراع الحالي؛ يكون من الواضح أنه في طور النمو تختلف محتويات 17- جليكان و/أو 0- جليكان طبقا لإضافة الأنسولين. بصفة خاصة؛ يتم التأكيد على أن إضافة الأنسولين يمكنها التحكم في محتويات 17- جليكان و/أو 0- جليكان ليتم تقليلها.
‎danas 0‏ ضمن عمليات زراعة خلية قادرة على إنتاج بروتين سكرء فإنه يتم التأكيد على إضافة أنسولين أثناء طور الإنتاج ليلعب دوراً هام في التحكم في نمط معالجة بالسكر. قد يكون تركيز الأنسولين 0.0001 مجم/ لتر إلى 1 جم/ لتر بالنسبة إلى إجمالي حجم وسط المزرعة. يتم التأكيد على أنه عند زيادة تركيز الأنسولين؛ يمكن التحكم في محتوى 1<7- جليكان و/أو 0— جليكان ليتم تقليله (جدول 2).
‏5 الأنسولين يعمل على التحكم في المعالجة بالسكر المتصلة مع ‎N‏ والمعالجة بالسكر المتصلة مع 0 من بروتين سكر تخليقي. على سبيل ‎(JE‏ الأنسولين قد يقلل محتوي 17- جليكان لبروتين السكر التخليقي. كمثال آخرء قد يقلل الأنسولين محتوى ©0- جليكان لبروتين السكر التخليقي. كجانب آخر؛ يوفر الاختراع الحالي تركيبة وسط مزرعة للتحكم في نمط معالجة بالسكر لبروتين السكر التخليقي. قد يتم تضمين الأنسولين بتركيز 0.0001 مجم/ لتر إلى 1 جم/ لتر بالنسبة إلى
‏0 إجمالي حجم وسط المزرعة. على سبيل المثال؛ قد يتم استخدام وسط المزرعة فقط أثناء طور الإنتاج ضمن عمليات زراعة كائن متعضي مجهري. نسق الاختراع هنا أدناه»؛ يتم وصف الاختراع الحالي بالتفصيل مع النماذج التمثيلية المرفقة. مع ذلك؛ النماذج
‏5 التمثيلية المكتشفة هنا هي فقط لأغراض توضيحية ولا يجب تفسيرها على أنها تقييد لنطاق الاختراع الحالي.
مثال 1: تحضير خط خلية لإنتاج بروتين السكر 1-1. تحضير ناقل تجرى طرق مستخدمة شيوعا في الحيوية الجزيئية مثلا معالجة إنزيم تقييد؛ تنقية حمض الديوكسي ريبونيوكليك بلازميد؛ اقتران ‎allie‏ حمض الديوكسي رببونيوكليك» وتحويل ‎E.coli‏ عن طريق تطبيق أدنى تعديلات على الطرق المقدمة في ‎Molecular Cloning (2*¢ edition) of Sambrook,‏ ‎etal‏ ‏يتم نسخ جين مستقبل عامل تنكرز الورم 075 بشري باستخدام مكتبة حمض النووي الديوكسي ريبوزي المكمل ‎{cDNA} complementary deoxyribonucleic acid‏ التي تستخدم ‎Messenger‏ ‎mRNA‏ معزول من خط خلية اتش يو في إي سي ‎HUVEC‏ كقالب؛ ويتم دمج الجين المنسوخ مع 0 المنطقة ‎Fe‏ من :180 بشري للحصول على مستقبل عامل تنكرز الورم- :186. يتم تحضير ناقل ‎pCUCBin-mSig-TNFcept‏ باستخدام ناقل ‎pTOP-BA-RL-pA‏ (منشور براءة الاختراع الكورية رقم: 10-2012-0059222؛ المشتمل على ”0478©»؛ ‎“CB”‏ و"بيتا- أكتين إنترون ‎beta-actin‏ ‎AWE (‘intron‏ و مستقبل عامل تنكرز الورم 15617 . 2-1. زراعة خلية أصلية 5 .يتم استخدام مبيض هامستر صيني/ إنزيم ثنائي هيدروفولات ربدوكتاز ‎dihydrofolate reductase‏ ‎(CHO DXB11) (DHFR)‏ كخلية أصلية. إن مبيض هامستر صيني/ إنزيم ثنائي هيدروفولات ربدوكتاز - هي خلية معزولة عن خلية مبيض هامستر صيني وينقصها إنزيم ثنائي هيدروفولات ربدوكتاز. 3-1. خط خلية محول ومختار للإنتاج 0 .يتم تحضير خلية محولة باستخدام مبيض هامستر صيني / إنزيم ثنائي هيدروفولات ربدوكتاز - ‎(CHO DXB11)‏ والناقل ‎pCUCBin-mSig-TNFeept‏ المتضمن جين مستقبل عامل تنكرز الورم ‎p75‏ وبتم تكبير الجين باستخدام تركيز ‎MTX‏ يتم اختيار الخلايا المعينة كخلايا محولة ‎transformant cells‏ وأحادية الميلان ‎monoclines‏ على أنها خط الخلية للإنتاج. بعدئتذ يتم إقحام خطوط الخلية في برطمان زجاجي وتخزن في نيتروجين سائل ‎Jiquid nitrogen‏ مثال 2: زراعة خط خلية لإنتاج بروتين السكر وحصاد البروتين
يتم استخدام أوساط المزرعة المختلفة طبقا لطور الزراعة. تتم إضافة الأنسولين إلى 5.8 جم/ لتر من الأوساط 7601153 (102443 ‎(Merck Millipore, Cat.
No.‏ لتحضير وسط المزرعة الأساسي. يتم استخدام وسط المزرعة (وسط إي سي-إس أى ‎(BC-ST‏ الذي تتم فيه إضافة 10 جم/ لتر جلوكوز لا ‎fan 0.584 5 (Sigma) Sle‏ لتر جلوتامين» جليسين» وسيرين ‎(Sigma)‏ وسط المزرعة الأساسي لطور استنبات البذرة. يتم استخدام وسط المزرعة (إي سي-جي إم ‎(EC-GM‏ ‏الذي تتم فيه إضافة 5 ‎fan‏ لتر جلوكوز لا مائي و0.584 ‎fan‏ لتر جلوتامين» جليسين 6106ر1ع؛ وسيرين ‎serine‏ إلى وسط المزرعة الأساسي لطور النمو. يتم استخدام وسط المزرعة (إي سي-بي ‎(EC-GM ol‏ الذي تتم فيه إضافة 15 ‎fan‏ لتر جلوكوز لا ‎Sle‏ و0.584 ‎fan‏ لتر جلوتامين؛
جليسين؛ وسيرين إلى وسط المزرعة الأساسي لطور الإنتاج.
0 تتم سريعا إزالة الصقيع من البرطمان الزجاجي المحتوي على سلالة الخلية المحضرة في مثال 1 في صهريج الماء؛ وتنتقل الخلايا منه إلى أنبوب فالكون محتوي على 10 ملليلتر من وسط المزرعة. تطرد مركزيا الخلايا الناتجة؛ وتتم إزالة المادة الطافية الأولى. بعدئذ تتم إعادة تعليق الخلايا مع 0 ملليلتر من أوساط ‎EC-SI‏ وتلقح في قارورة ‎Erlenmeyer‏ إلى حجم نهائي بمقدار 0 ملليلتر. باستخدام مفاعل حيوي مزرعة خلية ‎CelliGen310‏ سعته 5 ملليلتر؛ تتم زراعة الخلايا
5 للحصول على 2 لتر على أساس حجم التشغيل. عند وصول عدد الخلية الحية إلى 2 ‎x‏ 10 خلية/ ملليلتر خلال 5 مرات من زراعة البذرة؛ يبدأ وسط المزرعة في التغيير إلى 250-014 خلال الزراعة بالتشربب. عند زيادة عدد الخلايا الحية؛ يزداد معدل تبادل وسط المزرعة لتمييز الخلايا بفعالية. عند وصول عدد الخلية الحية إلى 1.5 ‎x‏ 710 خلية/ ملليلتر (شكل 2)؛ يبدا وسط المزرعة في التغيير إلى ‎(BC-GM‏ بداية من طور النمو إلى طور الإنتاج. يجرى الحصاد بإجمالي
0 أربع مرات؛ وتتم تنقية البروتين المحصود. تكون القيمة الناتجة هي القيمة المتوسطة لأريعة نواتج الحصاد. مثال 3: تحليل محتوى الجليكان 1-3. تحليل محتوي 0-جليكان يتم تخفيف العينة المنقاة في مثال 2 مع 25 مللي جزيئي جرامي مثبت رقم هيدروجيني فوسفات
5 صوديوم ‎sodium phosphate‏ عند رقم هيدروجيني 6.3 لتكون 100 ميكرولتر عند تركيز 1 مجم/ ملليلتر. تتم إضافة 4 ميكرولتر 17- جليكوزيداز 7 (1 وحدة/ ميكرولتر؛ ‎(Roche‏ 2 ميكرولتر
نيورامينيداز (1 وحدة/ 100 ميكرولتر)» و2 ميكرولتر ترييسين ‎trypsin‏ (1 مجم/ ‎FLL‏ ‎(Promega‏ إلى كل عينة إلى كل عينة ويتفاعلوا عند 37"مئوية لمدة 18 ساعة. بعدئذ يجرى تحليل كروماتوجراف سائل- مقياس طيف كتلة ‎mass spectrometer - Liquid Chromatography‏ ‎.LC-(MS)‏ ‏5 يلقح 80 ميكرولتر من العينة؛ ويعدئذ يتم تحليل ببتيد تريسيني ‎tryptic peptide‏ باستخدام ‎CI8 RP‏ )4.6 ملليمتر ‎x‏ 250 ملليمتر» 5 ميكرومتر» 300 أنجستروم؛ ‎.(Cat.
No. 2181054 «Vydac‏ طور متحرك (أ) يستخدم 70.1 ‎TFA‏ في الماء؛ وطور متحرك (ب) يستخدم 70.1 1178 في ‎CAN 780‏ بارد. يجرى التحليل في شرط تدرج لمدة 150 دقيقة. باستخدام ‎dail Ca als‏ فوق بنفسجية؛ يتم الكشف عن ببتيد ‎peptide‏ عند 251 نانومتر؛ وتتلامس المادة المنفصلة من خلال 0 كروماتوجراف سائل مع مقياس طيف كتلة ‎(LTQ XL, Thermo)‏ من أجل تحليل مقياس طيف كتلة لحساب مساحة نسبية (7) من 0- ببتيد سكر. 2-3. تحليل محتوى 17- جليكان يتم تخفيف العينة المنقاة في مثال 2 ومعيار مرجعي ‎(Etanercept, Pfizer)‏ مع مادة تخفيف عينة ‎Ale 25) specimen diluent‏ جزيئي جرامي فوسفات صوديوم ‎sodium phosphate‏ (مثبت رقم هيدروجيني 6.3 رقم هيدروجيني)) لتكون 3 مللي جرام/ ملليلتر. يتم خلط 100 ميكرولتر لكل عينة و6 ميكرولتر من محلول 17- جليكوزيداز 1 ‎N-glycosidase F solution‏ وبنتفاعلوا عند 37 مئوية لمدة 20 ساعة. تتم إضافة 400 ميكرولتر من إيثانول إلى المحلول بعد التفاعل ويخلط في دوامة. يطرد مركزيا المحلول الناتج؛ ‎aang‏ تنقل المادة الطافية إلى أنبوب ‎Eppendorf‏ وتجفف تماما باستخدام أداة تركيز ‎concentrator‏ سرعة- ‎vac‏ بعد إضافة 10 ميكرولتر من عامل تعليم ‎2-AA‏ ‏0 إلى العينة المجففة وخلطهم؛ يتفاعل الخليط عند 45"مثوية ‎yng‏ عند درجة حرارة الغرفة. يتم وضع خرطوشة ‎GlycoClean S‏ على أنبوب مزرعة ‎culture tube‏ متاح» ويعدئتذ يقطر الماء؛ 0 أسيتات ‎cacetate‏ ويتم تشربب أسيتونيتريل ‎acetonitrile‏ تحمل العينة المبردة على مركز غشاء الخرطوشة ‎Jug cartridge membrane‏ تشريبها مع أسيتونيتريل. لتخفيف 17- جليكان؛ تتم إضافة الماء المقطر إلى الخرطوشة للتجميع في أنبوب ‎Eppendorf‏ يتم تجفيد محلول جليكان ‎glycan solution 25‏ الناتج ويخزن حتى يتم تحليله.
يجرى التحليل مع عمود كروماتوجراف سائل عالي ‎High Performance Liquid lay!‏ ‎4E) (HPLC) Chromatography‏ 111120-50 علد طتطديه» 4.6 ‎x‏ 250 ملليمتر) في شط تدرج لمدة 130 دقيقة باستخدام 0.5 مللي جزيئي جرامي أسيتات أمونيوم ‎ammonium acetate‏ (رقم هيدروجيني 6.7) و250 أسيتات أمونيوم (رقم هيدروجيني 5.6) كأطوار متحركة (أ) ‎(Ds‏ على التوالي. يتم استخدام كاشف قياس فلوري ‎fluorometric detector‏ من أجل الكشف؛ وبتم حساب مجموع مساحة الذروات لكل عدد من أحماض السياليك الموجودة عند طرف 17- جليكان. في الحالة التي لا يوجد بها حمض سياليك؛ تلاحظ أنها متعادلة. في حالة واحد (أحادي سياليل ‎(monosialyl‏ واثنين (ثنائي سياليل ‎«(disialyl‏ يلاحظوا على أنهما -1 و-2؛ على التوالي. مثال تجرببي 1. زراعة سلالة خلية باستخدام وسط مزرعة غير مشتمل على أنسولين مضاف أثناء 0 طور الإنتاج يتم استخدام نفس وسط المزرعة مثل الذي من طور الإنتاج في مثال 2 باستثناء الأنسولين؛ لزراعة سلالة الخلية. يتم تحليل محتويات 17- جليكان (7) ونسب مساحة السطح النسبية (7) من 0- ببتيد سكر ‎O-glycopeptide‏ لكل درجة حرارة وتوضح في جدول 1 أدناه. [جدول 1] درجة حرارة المزرعة | ‎pq‏ | شحنة ‎N-Glycan-‏ | نسبة مساحة السطح النسبية (طور ‎(EY)‏ | لمحصودة ‎(bused) 2 ١‏ | لأجل 0- ببتيد سكر ‎d)‏ ‎(N™)‏ متوسط) 2مثوية 16.1 54.38 ‎H4‏ ‏15 مثال تجريبي 2. مقارنة التغيرات في أنماط المعالجة بالسكر طبقا إلى إضافة الأنسولين أثناء طور الإنتاج تتم مقارنة أنماط المعالجة بالسكر طبقا لإضافة الأنسولين ويتم توضيحها في جدول 2 أدناه.
— 6 1 — [جدول 2[ ا شحنة ‎N-‏ نسبة مساحة السطح درجة حرارة ‎١‏ تركيز الانسولين | المادة ‎Glycan-2‏ )7 النسبية لأجل ©0- ببتيد المزرعة في وسط ‎gran all dey yall‏ 82 ‎th‏ متوسط) سكر ) ‎A‏ 3 متوسط) رضح : صفر مجم/ لتر 12.5 56.13 3 مجم/ لتر 10.4 54.68 ‎L530‏ ‏9 مجم/ لتر 10.9 52.68 : نتيجة لذلك» تبين أنه ضمن عمليات زراعة خلية قادرة على إنتاج بروتين سكر؛ فإن إضافة الأنسولين أثناء طور الإنتاج تؤثر على نمط المعالجة بالسكر. ‎cand‏ يتبين تغيير محتوى 7[- جليكان و/أو 0- جليكان طبقا لإضافة أنسولين. بصفة خاصة؛» يتم التأكيد على أنه يمكن التحكم في محتوى 17- جليكان و/أو 0©- جليكان لتقليله عن طريق إضافة الأنسولين. بينما يتم وصف الاختراع الحالي بالإشارة إلى التجسيدات التوضيحية المحددة»؛ سوف يفهم المهرة في الفن الذين يوجه إليهم الاختراع الحالي أن الاختراع ‎Jal‏ قد يتجسد في أشكال خاصة أخرى بدون الخروج عن الروح التقنية أو الخصائص الأساسية للاختراع الحالي. لذلك؛ تعتبر التجسيدات الموصوفة أعلاه توضيحية من كل الجوانب وليست مقيدة. بالإضافة إلى هذاء يتحدد نطاق الاختراع ‎Jal 0‏ بواسطة عناصر الحماية الملحقة بدلا من الوصف التفصيلي؛ ويجب فهم أن كل التعديلات أو التغييرات المشضتقة من المعاني ونطاق الاختراع الحالي ومكافئاتهم موجودة في نطاق عناصمسر الحماية الملحقة.
قابلية التطبيق الصناعي بما أنها قادرة على تغيير ‎gine‏ 7<- جليكان و/أو 0— جليكان طبقا لإضافة الأنسولين تحديدا خلال طور النموء قد تكون طريقة التحكم في نمط المعالجة بالسكر لبروتين السكر التخليقي طبقا للاختراع الحالي نافعة جدا في إنتاج بروتين سكر تخليقي صيدلاني فيه يلعب تجانس ارتباط جزيئات السكاريد ‎saccharide molecules 5‏ دورا هاما. قائمة التتابع: ‎Mul ~~ 'T‏ &' معزز ‎CUCBIin‏ ‎BamHI 'z' 10‏ لد" ‎TNFR‏ ‎Fo ein 4‏ و" ‎Xhol‏ ‎IRES "J‏ "ح ‎DHFR‏ ‏'ط" ‎BGH polyA‏ في" ‎foi‏ ‏'ك' - ‎NeoR‏ ‎pUCori "J‏ ‎AmpR a 20‏ ‎pCUCBin-mSig-TNFcept "(Sf‏ "لس" (الخلية/ مل 161045) عدد خلية حيوية ‎eg‏ خلية حيوية ‎SRE‏ ‏5 لص" )1( حيوية ق" الزمن (ليوم)

Claims (2)

عناصر الحماية
1. طريقة للتحكم في نمط ‎dallas‏ بالسكر ‎glycosylation pattern‏ لبروتين سكر تخليقي ‎recombinant glycoprotein‏ تشمل زراعة كائن متعضي مجهري ‎microorganism‏ يشمل ‎Lae‏ ‏نيكلوتيد ‎polynucleotide‏ يشفر بروتين السكر التخليقي ‎recombinant glycoprotein‏ في وسط مزرعة ‎culture medium‏ مشتمل على أنسولين ‎Jay Gus cinsulin‏ الأنسولين ‎insulin‏ محتوى 17- جليكان ‎N-glycan‏ أو 0- جليكان ‎O-glycan‏ لبروتين السكر التخليقي ‎recombinant‏
‎.glycoprotein‏
‏2. الطريقة من عنصر الحماية ‎Goa]‏ يكون بروتين السكر التخليقي | ‎recombinant‏ ‎glycoprotein‏ هو بروتين اندماج جلوبيولين مناعي ‎-immunoglobulin fusion protein‏
3. الطريقة من عنصر الحماية 1؛ حيث يكون بروتين السكر التخليقي | ‎recombinant‏ ‎glycoprotein‏ هو بروتين اندماج ‎fusion protein‏ مستقبل عامل تنكرز الورم ‎tumor necrosis‏ ‎(TNFR) factor receptor‏ -إف سي ‎‘Fc‏ ‏15 4. الطريقة من عنصر الحماية 1؛ حيث يكون تركيز الأنسولين ‎insulin‏ 0.0001 مجم/ لتر إلى 1 جم/ لتر بالنسبة إلى إجمالي حجم وسط المزرعة ‎culture medium‏
5. الطريقة من عنصر الحماية 1؛ حيث يتحكم الأنسولين ‎insulin‏ في المعالجة بالسكر المتصلة مع 17 ‎N-linked glycosylation‏ والمعالجة بالسكر المتصلة مع ‎glycosylation O‏ 0-1101660. 6» الطريقة من عنصر الحماية 1» حيث تكون الزراعة هي طريقة زراعة بالتشريب ‎perfusion‏
‎.culturing method‏
”. طريقة للتحكم في نمط ‎dallas‏ بالسكر ‎glycosylation pattern‏ لبروتين سكر تخليقي ‎recombinant glycoprotein 5‏ تشمل:
— 9 1 — 0 زراعة كائن متعضي مجهري ‎microorganism‏ يشمل عديد نيكلوتيد ‎polynucleotide‏ يشغر بروتين سكر تخليقي ‎recombinant glycoprotein‏ في وسط مزرعة ‎culture medium‏ لنمو الكائن المتعضي المجهري ‎¢microorganism‏ و (ب) إضافة أنسولين ‎insulin‏ إلى وسط المزرعة ‎culture medium‏ وزراعته لإنتاج بروتين سكر ‎glycoprotein 5‏ حيث يقلل الأنسولين ‎insulin‏ محتوى ‎—N‏ جليكان ‎N-glycan‏ أو 0- جليكان -0 ‎glycan‏ لبروتين السكر التخليقي ‎.recombinant glycoprotein‏
8. الطريقة من عنصر الحماية 7( حيث تكون الخطوة (ب) هي خطوة إضافة أنسولين ‎insulin‏ ‏عند تركيزات مختلفة طبقا لنمط معالجة بالسكر ‎glycosylation pattern‏ مستهدف.
9. الطريقة من عنصر الحماية ‎T‏ حيث يكون بروتين السكر التخليقي | ‎recombinant‏ ‎glycoprotein‏ هو بروتين اندماج جلوبيولين مناعي ‎-immunoglobulin fusion protein‏
0. الطريقة من عنصر الحماية 7 حيث يكون بروتين السكر التخليقي | ‎recombinant‏ ‎glycoprotein 5‏ هو بروتين اندماج ‎fusion protein‏ مستقبل عامل تنكرز الورم ‎tumor necrosis‏
‎.Fc— factor receptor‏
1. الطريقة من عنصر الحماية 7؛ حيث يكون تركيز الأنسولين ‎insulin‏ 0.0001 مجم/ لتر إلى 1 جم/ لتر بالنسبة إلى إجمالي حجم وسط المزرعة ‎culture medium‏
2. الطريقة من عنصر الحماية 7 حيث تكون الزراعة هي طريقة زراعة بالتشريب ‎perfusion‏
‎.culturing method‏
‎CH }‏ ل 5 3 > م م الا اللو الب الى ‎A 0 8 8‏ : 1 ‎oa 8 8 ¥ 0‏ 54 8 ‎LE SE EEN 8 8‏ جا ال امال : ا 8 ‎EE:‏ : ‎WOR es 3‏ ‎U 0‏ ‎HH‏ ‎Er HF 5 8‏ وا ا 8خ ‎a on 8‏ ا ال ‎AR‏ ا تبعل ا[ ‎aa 3‏ اك اماع - ‎Lo‏ ‏1 اح 2 ا - ا ا ‎Tam‏ ‎El 0 . i 8 8‏ ‎CI: ra‏ ب ىق 18 £3 شكل ‎١‏
ٍ ‏ج ا ا‎ hs RX ‏ا‎ Re N hed a A, AR i AAA Woy RRR ‏م م‎ ww ow d :* ‏اا 3 الا اليج‎ : : 3 Neg F<] - i ‏من لمكا‎ ‏سد اس ا و ست سس سس ا انا‎ J By TEEN i Tg [VE dove - 8 ‏ليحي‎ 5 FR Pe ‏ا لجح حت للحت حت حت لوح‎ 7 : ; ‏ب‎ TU 8 8 8 J A ‏الت م‎ te ‏سا م‎ i i Lola « 0: ‏و اراي‎ ٌ Ra oa LE ‏ا ا لالتلا ~~ وا‎ i i = ) H aa o® ‏ال ا سس‎ TRL 5 H @ © OF SY 3 ‏ا ا اا‎ EEE 1 RR 5 ‏ا‎ 5 WE i ed ; EA pd BBE ss fs sss EY x . EY ; 0 ‏اب‎ 0 ‏سنت‎ Fo) 3 * 1 & 1 0 YE ¥ * 8# ‏م‎ ‎3 ‎4 ‏د : ) ل‎
لاله الهيلة السعودية الملضية الفكرية ا ‎Sued Authority for intallentual Property‏ ‎RE‏ .¥ + \ ا 0 § 8 ‎Ss o‏ + < م ‎SNE‏ اج > عي كي الج ‎TE I UN BE Ca‏ ‎a‏ ةا ‎ww‏ جيثة > ‎Ld Ed H Ed - 2 Ld‏ وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها ‎of‏ سقوطها لمخالفتها ع لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف ع النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية. ‎Ad‏ ‏صادرة عن + ب ب ‎٠.‏ ب الهيئة السعودية للملكية الفكرية > > > فهذا ص ب ‎101١‏ .| لريا ‎1*١ v=‏ ؛ المملكة | لعربية | لسعودية ‎SAIP@SAIP.GOV.SA‏
SA517381863A 2014-12-31 2017-07-04 طريقة للتحكم في معالجة بالسكر لبروتين سكر تخليقي SA517381863B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
KR1020140195976A KR102007930B1 (ko) 2014-12-31 2014-12-31 재조합 당단백질의 글리코실화 조절 방법
PCT/KR2015/014512 WO2016108638A1 (ko) 2014-12-31 2015-12-30 재조합 당단백질의 글리코실화 조절 방법

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA517381863B1 true SA517381863B1 (ar) 2020-06-23

Family

ID=56284687

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA517381863A SA517381863B1 (ar) 2014-12-31 2017-07-04 طريقة للتحكم في معالجة بالسكر لبروتين سكر تخليقي

Country Status (11)

Country Link
US (1) US10131891B2 (ar)
EP (1) EP3241908B1 (ar)
JP (1) JP6502505B2 (ar)
KR (1) KR102007930B1 (ar)
AU (1) AU2015372704B2 (ar)
BR (1) BR112017014252A2 (ar)
IL (1) IL253217B (ar)
MX (1) MX2017008634A (ar)
RU (1) RU2670889C9 (ar)
SA (1) SA517381863B1 (ar)
WO (1) WO2016108638A1 (ar)

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5705364A (en) * 1995-06-06 1998-01-06 Genentech, Inc. Mammalian cell culture process
JPH0947284A (ja) * 1995-08-07 1997-02-18 Sumitomo Pharmaceut Co Ltd 動物細胞の培養方法
DE69929198T2 (de) * 1998-05-29 2006-08-10 Genentech, Inc., South San Francisco Zellkulturverfahren für die produktion von glycoproteinen
US7294481B1 (en) 1999-01-05 2007-11-13 Immunex Corporation Method for producing recombinant proteins
EP1487479B1 (en) 2001-10-22 2012-06-20 Merck Serono SA Mutant glycoproteins
US7300773B2 (en) 2004-08-27 2007-11-27 Wyeth Research Ireland Limited Production of TNFR-Ig
WO2007034809A1 (ja) * 2005-09-20 2007-03-29 Taisho Pharmaceutical Co., Ltd. 組み換え蛋白質産生のための宿主細胞
AU2006324163B2 (en) 2005-12-08 2013-05-02 Amgen Inc. Improved production of glycoproteins using manganese
KR101495549B1 (ko) * 2006-07-13 2015-02-25 와이어쓰 엘엘씨 당단백질의 생산
TW201516149A (zh) * 2006-09-13 2015-05-01 Abbvie Inc 細胞培養改良
AU2008223133A1 (en) 2007-03-02 2008-09-12 Wyeth Use of copper and glutamate in cell culture for production of polypeptides
CN102216459A (zh) * 2008-09-15 2011-10-12 弗·哈夫曼-拉罗切有限公司 调节细胞摩尔渗透压浓度的组合物和方法
KR20110139292A (ko) * 2009-04-20 2011-12-28 화이자 인코포레이티드 단백질 글리코실화의 제어 및 그와 관련된 조성물 및 방법
US20120329709A1 (en) 2009-05-26 2012-12-27 Brian Edward Collins Production of glycoproteins
EP2534255B1 (en) * 2010-02-10 2017-05-10 Biocon Limited Method of reducing glycosylation of proteins, processes and proteins thereof
MX2012009802A (es) 2010-02-24 2012-09-12 Merck Sharp & Dohme Metodo para incrementar la ocupacion del sitio de n-glucosilacion en glucoproteinas terapeuticas producidas en pichia pastoris.
KR101868139B1 (ko) 2010-11-30 2018-06-15 주식회사 엘지화학 새로운 융합 프로모터 및 이를 포함하는 재조합 벡터
EP2702077A2 (en) * 2011-04-27 2014-03-05 AbbVie Inc. Methods for controlling the galactosylation profile of recombinantly-expressed proteins
SI2837680T1 (sl) * 2011-07-01 2020-07-31 Amgen Inc. Celična kultura sesalca
KR102202476B1 (ko) 2013-03-15 2021-01-12 제넨테크, 인크. 세포 배양 배지 및 항체 생산 방법
WO2014195452A1 (en) 2013-06-07 2014-12-11 Novo Nordisk A/S Method for making mature insulin polypeptides
WO2015026846A1 (en) 2013-08-19 2015-02-26 Biogen Idec Ma Inc. Control of protein glycosylation by culture medium supplementation and cell culture process parameters
US20160237399A1 (en) * 2015-02-18 2016-08-18 Biogen Ma Inc. Control of Protein Glycosylation by Culture Medium Supplementation and Cell Culture Process Parameters

Also Published As

Publication number Publication date
IL253217A0 (en) 2017-08-31
WO2016108638A1 (ko) 2016-07-07
US20170342392A1 (en) 2017-11-30
AU2015372704B2 (en) 2018-09-20
KR20160081699A (ko) 2016-07-08
EP3241908A4 (en) 2018-06-20
AU2015372704A1 (en) 2017-07-20
MX2017008634A (es) 2018-04-26
IL253217B (en) 2022-08-01
JP6502505B2 (ja) 2019-04-17
US10131891B2 (en) 2018-11-20
KR102007930B1 (ko) 2019-08-06
EP3241908B1 (en) 2020-08-05
EP3241908A1 (en) 2017-11-08
RU2670889C1 (ru) 2018-10-25
BR112017014252A2 (pt) 2018-01-02
JP2018500041A (ja) 2018-01-11
RU2670889C9 (ru) 2018-12-11

Similar Documents

Publication Publication Date Title
KR100496356B1 (ko) 포유동물세포배양으로생산되는단백질의시알릴화조절방법
US7544784B2 (en) Increased recovery of active proteins
ES2252876T3 (es) Proceso para preparar polipeptidos con glicolizacion adecuada.
EA022780B1 (ru) СПОСОБ ПОВЫШЕНИЯ ПРОТИВОВОСПАЛИТЕЛЬНОЙ АКТИВНОСТИ И СНИЖЕНИЯ ЦИТОТОКСИЧЕСКОЙ АКТИВНОСТИ ПРЕПАРАТА IgG
CN105189761A (zh) 细胞培养方法
US20220324952A1 (en) Recombinant glycosylated eculizumab and eculizumab variants
US20120149874A1 (en) Method for preparing recombinant glycoproteins with high sialic acid content
SA517381863B1 (ar) طريقة للتحكم في معالجة بالسكر لبروتين سكر تخليقي
TW202003574A (zh) 具有經調節的聚糖特徵之抗體
US10526631B1 (en) Method of reducing serine for asparagine misincorporation
NZ733430A (en) A method for controlling glycosylation of recombinant glycoprotein
NZ752502B2 (en) A Method For Controlling Glycosylation Of Recombinant Glycoprotein
NZ752502A (en) A Method For Controlling Glycosylation Of Recombinant Glycoprotein
JPH0984582A (ja) 糖転移酵素活性を強化した動物細胞、糖鎖改変糖蛋白質ならびにその製造方法
US10519479B1 (en) Methods for modifying glycosylation using manganese
EP4330383A1 (en) Hypersialylating cells
CN117242175A (zh) 超唾液酸化细胞