SA112331005B1 - جسم مضاد لـ cMET متضمن هندسة منطقة مفصلية - Google Patents

جسم مضاد لـ cMET متضمن هندسة منطقة مفصلية Download PDF

Info

Publication number
SA112331005B1
SA112331005B1 SA112331005A SA112331005A SA112331005B1 SA 112331005 B1 SA112331005 B1 SA 112331005B1 SA 112331005 A SA112331005 A SA 112331005A SA 112331005 A SA112331005 A SA 112331005A SA 112331005 B1 SA112331005 B1 SA 112331005B1
Authority
SA
Saudi Arabia
Prior art keywords
ser
val
thr
pro
lys
Prior art date
Application number
SA112331005A
Other languages
English (en)
Inventor
وورتش تييري
بيس سيدريك
جويتشه ليليان
Original Assignee
بيري فابري ميديكامينت
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=41693124&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=SA112331005(B1) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Priority claimed from PCT/IB2008/055663 external-priority patent/WO2010064089A1/en
Application filed by بيري فابري ميديكامينت filed Critical بيري فابري ميديكامينت
Publication of SA112331005B1 publication Critical patent/SA112331005B1/ar

Links

Classifications

    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/40—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against enzymes
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
    • C07K16/18—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans
    • C07K16/28—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants
    • C07K16/2863—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from animals or humans against receptors, cell surface antigens or cell surface determinants against receptors for growth factors, growth regulators
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/505—Medicinal preparations containing antigens or antibodies comprising antibodies
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/20—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin
    • C07K2317/24—Immunoglobulins specific features characterized by taxonomic origin containing regions, domains or residues from different species, e.g. chimeric, humanized or veneered
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/52—Constant or Fc region; Isotype
    • C07K2317/53—Hinge
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/50—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments
    • C07K2317/56—Immunoglobulins specific features characterized by immunoglobulin fragments variable (Fv) region, i.e. VH and/or VL
    • C07K2317/565—Complementarity determining region [CDR]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/73—Inducing cell death, e.g. apoptosis, necrosis or inhibition of cell proliferation
    • C07K2317/732—Antibody-dependent cellular cytotoxicity [ADCC]
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/75—Agonist effect on antigen
    • C—CHEMISTRY; METALLURGY
    • C07—ORGANIC CHEMISTRY
    • C07K—PEPTIDES
    • C07K2317/00—Immunoglobulins specific features
    • C07K2317/70—Immunoglobulins specific features characterized by effect upon binding to a cell or to an antigen
    • C07K2317/76—Antagonist effect on antigen, e.g. neutralization or inhibition of binding

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Peptides Or Proteins (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Abstract

يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد جديد novel antibody قادر على الارتباط على نحو خاص بمستقبل c-Met البشري human c-Met و/ أو قادرة على نحو خاص على تثبيط نشاط إنزيم tyrosine kinase للمستقبل المذكور, مع نشاط مضاد محسَّن improved antagonistic activity, يشتمل الجسم المضاد المذكور على المنطقة المفصلية المعدلة modified hinge region. يتعلق الاختراع أيضًا بتركيبة تشتمل على الجسم المضاد لـ c-Met المذكور واستخدامه كعقار لعلاج السرطان medicament for treating cancer. شكل 1.

Description

— \ — جسم مضاد ل ‎CMET‏ متضمن هندسة منطقة مفصلية ‎Anti—-cMET antibody comprising engineering hinge region‏ الوصف الكامل خلفية الاختراع ان هذا الطلب عبارة عن طلب ‎Sia‏ من الطلب رقم ‎٠١5750977٠8‏ والذي تم إيداعه في المملكة العربية السعودية بتاريخ ‎[VY [VA‏ 70 ٠ه‏ الموافق © / ‎[VY‏ 4١٠٠م‏ . يتعلق الاختراع الحالي بجسم مضاد جديد ‎AW‏ التكافؤ ‎novel divalent antibody‏ 8 على © الارتباط بشكل محدد بمستقبل ‎c-Met‏ البشري و/ أو قادر على تثبيط نشاط إنزيم ‎tyrosine‏ ‎kinase‏ على وجه التحديد للمستقبل المذكور؛ بالإضافة إلى متواليات الحمض الأميني والحمض النووي ‎Sl amino acid and nucleic acid sequences‏ تشفر الجسم المضاد المذكور. وبمزيد من التحديد؛ يكون الجسم المضاد وفقاً للاختراع قادراً على تثبيط ديمرة ‎dimerization‏ ‏1©/-0. وبالمثل يشتمل الاختراع على استخدام الجسم المضاد المذكور كدواء للعلاج الوقائي ‎medicament for the prophylactic ٠‏ و أو الاستشفائي لأنواع السرطان ‎therapeutic‏ ‎treatment of cancers‏ أو أي مرض متصل بالتعبير المفرط عن المستقبل المذكور بالإضافة إلى العمليات أو الأطقم الخاصة بتشخيص مرض متصل بالتعبير المفرط عن ‎c-Met‏ ويشتمل الاختراع في النهاية على نواتج و/ أو تركيبات تشتمل على مثل هذا الجسم المضاد في توليفة مع أجسام مضاد و/ أو مركبات كيميائية ‎chemical compounds‏ أخرى يتم توجيهها ضد عوامل ‎Vo‏ نمو أخرى مشتركة في تطور أو انتشار الورم ‎[tumor progression or metastasis‏ أو المركبات و/ أو عوامل مضادة للسرطان ‎anti-cancer agents‏ أو عوامل مترافقة مع ‎toxins‏ ‏واستخدامها للوقاية و/ أو العلاج من أنواع معينة من السرطان ‎treatment of certain‏ 65 . استهدف إنزيم ‎tyrosine kinase‏ المستقبل ‎(RTK)‏ عوامل مثل : ‎trastuzumab,‏ ‎ccetuximab, bevacizumab, imatinib‏ وقد أوضحت مثبطات ‎gefitinib imatinib‏ ‎٠‏ أهمية لاستهداف هذه الفئة من البروتينات لعلاج أنواع السرطان المنتقاة. افر
لاد prototypic member of a sub—family ‏العضو المصغر من عائلة فرعية‎ (c-Met ‏يُعد‎
من إنزيمات ‎RTKs‏ التي تشتمل على ‎SEA RON‏ وتختلف عائلة ‎c-Met RTK‏ من حيث
الصيغة البنائية عن عائلات إنزيمات ‎RTK family‏ الأخرى وتمثل المستقبل الوحيد المعروف ذي
الألفة العالية لعامل نمو الخلايا الكبدية ‎(HGF) hepatocyte‏ ويطلق عليه أيضا عامل تشتيت
: scatter factor ٠
بحث باسم دي ‎٠‏ بي بوتارو واخرين 3 دورية ‎SCIENCE‏ لعام )144 العدد ‎You‏ ¢ الصفحات
تيم الى ‎Net‏ ¢ وال نالديتي واخرين 3 دورية بعنوان ‎Mol.
Biol.
Org (SF)‏ نط ‎Y44)‏ «
العدد ‎٠١‏ » الصفحات ‎YATY‏ ألا .
ويتم التعبير عن ‎HEF; c-Met‏ على نحو واسع في تنوع من الأنسجة ويكون التعبير عنها ‎٠‏ مقصورا بشكل طبيعي على الخلايا ذات الأصل الظهاري والمشيمي 800 ‎epithelial‏
‎mesenchymal origin‏ على التوالي:
‏إم.إف. دي رينزو واخرين ؛ دورية ‎Oncogene‏ العدد 1 ؛ صفحات ‎١99597‏ الى 007 ‎se‏ إي
‎. ١ ‏الى‎ YYY ‏صفحات‎ ¢ ١١١ ‏العدد‎ ¢ ١47 » Cell.
Biol « ‏سونيبرج واخرين‎
‏ويكون كل منهما مطلوبا للتكوين الطبيعي ‎normal mammalian development Lil‏ وقد ‎Vo‏ اتضح أنها تكون هامة بصفة خاصة في انتقال الخلايا ‎«cell migration‏ والتمايز التكويني
‏والبنائي ‎morphogenic differentiation‏ « وتنظيم البنيات الأنبوبية ثلاثية الأبعاد
‎ddlaylL organization of the three—dimensional‏ إلى النمو وتكوين الأوعية
‎: angiogenesis
‎cally a)‏ واخرين 3 دورية ناتشر 11405 العدد 77 » الصفحات ‎YYY — VIA‏ ؛ وسي شميث ‎٠‏ واخرين » ناتشر ‎٠595‏ ؛ العدد ‎١77‏ ¢ الصفحات 199 الى لاا تشارفاتي واخرين سينس
‎١ 564‏ ء العدد 11 © صفحات 48 الى ‎CACY‏
‏على الرغم من أنه قد اتضح أن التنظيم المتحكم فيه ل ‎HGF 5 c-Met‏ يكون هاما في تكوين
‏الثدييات ‎mammalian development‏ « والمحافظة واصلاح الأنسجة ‎tissue‏
‎: maintenance and repair
‏افر
— ¢ — بحث باسم ناجايوما تي » ناجويوما ام » كوهارا ‎cul‏ كاميجوشي اتش ¢ شبويا ام » كاتوه واي ؛
Yoo ‏صفحات‎ ٠ (Y ) 999 © ‏عدد‎ (Yet ‏؛ شينوهارا واي دورية باسم براين ريشيرس‎ Jaa نح تا هارا واي .ايرو.ايه. يوماماتو اس. ؛ ميانا واي. » يوتو اتش ‎٠‏ » هوري . تي هاياشي كا ‎٠‏ تويوتشي اتش ؛ دورية باسم ‎Pharmacol Exp Ther‏ « عام ‎٠7‏ عدد ‎١‏ ()؛ ‎. ٠٠0١ ‏الى‎ ١:7 ‏صفحات‎ © ‏إلا أن خلل التنظيم المتعلق بها يكون متضمنا في التطور التدريجي لأنوا ع السرطان ‎the‏ ‎.progression of cancers ‏يُعد إرسال الإشارة غير الطبيعي المشغل بواسطة التنشيط غير الملائم ل ‎c-Met‏ واحدا من أكثر ‏التغييرات تكرارا يلاحظ في أنواع السرطان البشري ‎human cancers‏ ويلعب دورا ‎bss‏ في ‎٠‏ تكوين الورم وانتشاره : ‏بيرتشمير واخرين ¢ دورية باسم ‎Nat. Rev. Mol. Cell Biol‏ « عام ‎٠١7‏ ؛ عدد 4؛ صفحات ‏الى ‎AV0‏ إل تروسوليز ؛ كوموجليو بي. ام » دورية باسم ‎Nat Rev. Cancer‏ « عام ‎79. ‏صفحات 895 الى‎ (07 Ae ¢ Yeo ¥ ‏يمكن أن يحدث التنشيط غير الملائم ل ‎c-Met‏ بواسطة آليات معتمدة وغير معتمدة على المركب ‎١‏ الترابطي؛ والتي تشتمل على التعبير المفرط عن ]6-1/81»؛ و/ أو التنشيط جار الغدد الصماء او ‏الغدد الصماء الذاتية ‎paracrine or autocrine activation‏ « أو من خلال اكتساب ‎sh‏ ‏وظيفية : ‏بحث باسم جا. جي كريستيسين ؛ دورية بعنوان ‎Burrows J. mutation‏ وسالجيا ار ؛ دورية ‏باسم ‎Cancer Latters‏ ؛ عام 005 ؛ عدد 177 ؛ صفحات ‎Y=)‏ ومع ذلك فإن تحويل ‎c-Met dias ٠٠‏ إلى أوليجومر ‎oligomerization‏ ؛ في وجود أو عدم وجود المركب الترابطي؛ ‏يكون مطلوباً لتنظيم ألفة الارتباط وحركيات الارتباط لإنزيم ‎kinase‏ نحو ‎ATP‏ والركائز الأساسية ‏لل ‎peptide‏ الذي يحتوي على ‎ityrosine‏ ‏هيس .جي. ‎«J‏ واتوويتش اس جي ؛ بيوكيمستري + ا اغسطس ‎٠‏ ؟؟؛ عدد ‎١‏ صفحات ‎. ١ +O 7 A— ١ «0 7 ٠ ‏افر
El يستخدم تنشيط ‎c-Met‏ المرسلات العصبية لإرسال الإشارة إلى موضعه متعدد الربط الموجود في نطاق ‎cytoplasm‏ ؛ مما يترتب عليه تتشيط العديد من مسارات إرسال الإشارة الرئيسية؛ بما في ذلك ‎PI3KRas—-MAPK‏ « 556 و جاو سي اف ¢ فاتري فود جي اف » دورية باسم سيل ريسيرشي عام ‎١ ) Yo de ٠5‏ ( ‘ © صفحات ‎td‏ الى ‎5١‏ وفورجي كا ‎cal‏ زانج واي دبليو ¢ ‎sub‏ ستات ؟ ؛ ودي جي اف ¢ دورية . 550895 — 557/87 ‏صفحاتث‎ 0 OH) 4 ‏عدد‎ ٠ Ca Sig ‏باسم‎ وتكون هذه المسارات أساسية لتكاثر خلية الورم ‎tumour cell‏ » وغزوها وتكوين الأوعية ولتجنب تلاشي الخلايا : فورجي كا ايه ‘ زانج واي دبليو ‘ ‎sub‏ وودي ) جي اف ¢ دورية باسم ‎CaS gl‏ + 8 عدد ‎a ٠٠١‏ 1( 0 ¢ صفحات ‎O0Ad-YoAL‏ ؛ جو اتش نيل بي جي دورية باسم تراندس سيل بيول مارس 7 )+ عدد ‎١٠١‏ )7( اااحخركء فارس اس » ما اس واي ‘ فانج جا ايه ‘ وان ‘ ار كيو ¢ ينج كيوء كاو ؛ واي ؛ رتيرنا جا جا ؛ جولدبيرج اي دي » روزين اي ‎a‏ ‘ دورية باسم
CYPYY - 77١٠١١ ‏صفحات‎ : (0 A) Yq 2 ) Yeo ‏ابريل‎ YV « Ca Sig بالإضافة إلى ما سبق؛ تتمثل الواجهة الفريدة في إرسال إشارة ‎c-Met‏ بالنسبة إلى ‎RTK‏ الأخرى ‎Vo‏ في تفاعلها المبلغ عنه مع معقدات التصاق بؤرية وشركاء ارتباط غير ‎kinase aj‏ مثل : integrins بحث باسم ثروسولير ال + برتوتي ايه ؛ كومو جليو بي ام؛ دورية باسم" سيل" عام 7001 © عدد . ‏؛ طاهر‎ CD44v6 [Van der Voort R ‏صفحات 147 الى 194 ؛ وبحث بعنوان‎ ¢ ٠١١ تي ؛ فيلينجرا في جا ؛ سبارجارين ام ؛ بيرفو ار ؛ سميت ؛ غيرار دي اي ؛ بالاس اس تي ؛ ‎٠‏ دورية باسم ‎Nat Cell Biol‏ ؛ عام 1244 عدد ‎)٠١( YVE‏ : صفحات 14594 الى 1900 . والتي يمكن أن تضيف أيضا إلى تعقيد تنظيم وظيفة الخلية بواسطة هذا المستقبل. وفي النهاية توضح البيانات الحديثة أن ‎c-Met‏ يمكن أن يكون مشتركاً في مقاومة الورم ل ‎gefitinib‏ أو ‎erlotinib‏ مما يقترح أن توليفة من المركب الذي يستهدف كل من ‎EGFR‏ و81/١-0‏ يمكن أن ‏يكون محل اهتمام كبير ل انجبيمان جا ايه واخرين ؛ سينس عام اكت 01لا : ‎AV‏
— أ — في الأعوام القليلة الماضية؛ تم ابتكار الكثير من الاستراتيجيات المختلفة لتخفيف إرسال إشارة -ه ‎Met‏ في سلالات خلايا السرطان ‎cell lines‏ +08008. وتشتمل هذه الاستراتيجيات على ‎)١‏ ‏معادلة الأجسام المضادة ضد ‎neutralizing antibodies against‏ : وبحث باسم كاو بي »6 سو واي 3 اوكسارمسون ‎a‏ 3 زهاو بي 3 كورت جي اف جورية باسم ‎Proc‏ ‏م ‎A.‏ 5 ل 50 ‎Natl Acad‏ « عام ‎٠ (0 ¥)4 Ade ٠‏ صفحات ‎VEEN —VEEY‏ وبحث باسم مارتينيس تي ؛ ثميت ان او ؛ ايكريتش سي ؛ فيلبرادنت ار ؛ ميرشانت ام ؛ سوال ار ء وسيتفال ام ؛ لامويس كا ؛ دورية ‎Clin Cancer Res‏ عام ‎٠٠0‏ ؛ عدد ‎(YOY‏ ؛ صفحات 119-484 و بحث باسم كا. ماتسوموتو كا. ؛ داتي كا. ؛ شيمورا اتش تاناكا ام ؛ ناكامورا تي ‎Cancer Res .‏ عام 0030 ؛ عدد ‎Te‏ صفحات 17797 - 1967 . ‎٠‏ أو استخدام ‎HGF [SF‏ مضاد كال للوقاية من ارتباط المركب الترابطي . ") مثبطات موضع ارتباط الصغير 81 ل ‎c-Met‏ التي تعوق نشاط ‎kinase aj)‏ : كريستيسنين جا جي ؛ سكريك ار ؛ بوروز جا ؛ كورو جاني بي ؛ تشان ايه ؛ لي بي ؛ سين جا ؛ وانج زي روسليم ‎J‏ بلاكي ار ليبسون كا ايه رامغال جي ؛ دو اس كوي ‎lls‏ ؛ شيرينجتون جا ‎a‏ ميندل دي بي ‎Cancer Res ٠‏ عام ¥ ‎Yeo‏ ¢ عدد ‎TY‏ ¢ صفحات ٠ه‏ ؟7١-‏
. YYoo ١ ‏المهندسة وراثيا التي تتداخل مع الوصول إلى موضع الربط‎ SH2 ‏نطاق‎ polypeptide )" ‏أو 5027/06 _الذي يقلل من التعبير عن المستقبل أو‎ RNAi; multidocking ‏المتعدد‎ ‎c-Met 1 selective inhibition ‏المركب الترابطي. وتعرض معظم هذه الطرق تثبيط انتقائي‎ ‏يمكن أن يكون محل اهتمام‎ c-Met ‏وتوضح أن‎ tumor inhibition ‏يترتب عليه تثبيط الورم‎ ‏فإن بعض منها يكون أجسام‎ c-Met ‏التي تم توليدها لاستهداف‎ molecules ‏من بين الجزيئات‎ —c-Met ‏ويتمثل الأكثر وصفا منها على نحو مركز في الجسم المضاد ل‎ antibodies ‏مضادة‎ ‏والذي يتسم‎ Genentech ‏الذي تم توليده من قبل الطلب الدولي رقم 17/778551 بواسطة‎ 5 ‏بأنه مساعد قوي عند إضافته بمفرده في النماذج المتنوعة وباعتباره مضاد عند استخدامه كشظية‎
افر
—y— monovalentengineered sisi ‏كما أن الصورة المهندسة وراثيا أحادية‎ .Fab fragment ‏ويتم إنتاجه‎ SDS (OASDS) ‏من هذا الجسم المضاد الموصوف باعتباره جسم مزود بفرع‎ 0
Lal E. Coli ‏في‎ genetic recombination ‏باعتباره بروتين ناتج عودة الاتحاد الجيني‎ ‏ومع ذلك؛ لا يمكن‎ (Genentech ‏بواسطة‎ .7٠001/09579١ ‏موضوع طلب البراءة الدولي‎ ‏اعتبار هذا الجزيء جسما مضاداً بسبب السلسلة التصاعدية المعينة الخاصة به؛ والتي تظهر‎ © ‏طفرات أيضا يمكن أن تكون مولدة للمناعة في البشر. ومن حيث النشاط؛ يكون هذا الجزيء غير‎ devoided ‏من وظائف المرسل العصبي‎ WA unglycosylated ‏المعالج بمجموعة الجليكوسيل‎ ‏يثبط ديمرة‎ OASDS ‏وفي النهاية؛ لا توضح أية بيانات واضحة أن‎ of effector functions ‏وعلاوة على ما سبق؛ عندا اختبارها في 55 في نموذج في الكائن‎ .0-1/061 dimerization c-Met ‏التي تعبر عن‎ glioblastoma cell ‏الحي؛ لم يكن لسلالة خلية الورم الأرومي الدبقي‎ ‏والبروتين الذي ينمو بشكل مستقل عن المركب الترابطي؛‎ HGF MRNA ‏ليس عن‎ (Ss 08505 ‏والمستقبل المضاد ل 64/-0- ذي الفرع أي تأثير على نمو الورم 655 مما يقترح أن‎ ‏وأنه ليس قادرا على استهداف الأورام المنشطة‎ HGF Lig) ‏يؤثر بشكل رئيسي بواسطة إعاقة‎ ‏على نحو مستقل ل‎ ‏؛ عام 0080 عدد‎ Clin. Cancer Res aul ‏بحث باسم مارتينس تي واخرين ¢ دورية‎ V0 .. ١١97 ‏الى‎ 1١44 ‏صفحات‎ (Y ٠ ) ١" ‏باعتباره جسم مضاد يؤثر "بشكل‎ Pfizer ‏من قبل‎ c-Met ‏يستهدف‎ AT ‏ويتم وصف جسم مضاد‎ ‏الطلب‎ "c-Met ‏وفي بعض الحالات باعتباره مساعد ل‎ c-Met ‏رئيسي باعتباره مضاد ل‎ ‏ولم يتم في هذا الطلب وصف أي بيانات توضح أي تأثير للأجسام‎ .٠005/011777 ‏الدولي رقم‎ c-Met dimerization ‏على ديمرة‎ Pfizer ‏المضادة من قبل‎ ٠ ‏الوصف العام للاختراع‎ ‏يتمثل أحد الجوانب الابتكارية للاختراع الحالي في توليد جسم مضاد وحيد النسيلة خيمري و/ أو‎ ‏من دون نشاط‎ chimeric and Jor humanized monoclonal antibody ‏متوافق مع البشر‎ ‏وبمزيد من التحديد؛ يتمثل أحد الجوانب‎ .0-1/61 dimerization ‏مساعد ذاتي وتثبيط ديمرة‎ ‏افر‎
A= ‏الابتكارية للاختراع الحالي في توليد جسم مضاد وحيد النسيلة خيمري و/ أو متوافق مع البشر يتسم‎ .c—Met dimerization ‏بنشاط مضاد وتثبيط ديمرة‎ ‏فإن هذه الطريقة سوف تضعف‎ Jail ‏بالإضافة إلى استهداف الأورام المعتمدة على المركب‎ ‏نتيجة للتعبير‎ c-Met ‏كذلك من عمليات التنشيط غير المعتمدة على المركب الترابطي أيضاً ل‎ ‏المفرط أو الطفرات الخاصة بها للنطاقات داخل الخلايا التي ظلت معتمدة على التحويل‎ oo ‏لإرسال الإشارة. يمكن أن يتمثل جانب آخر من النشاط الخاص‎ oligomerization ‏الأوليجومري‎ ‏مع شركائه مما يمكن أن يترتب عليه‎ c-Met ‏بهذا الجسم المضاد في إعاقة جسدية لتفاعل‎ ‏إضعاف وظائف +0-1/6. ويكون هذا الجسم المضاد متوافقا مع البشر ومهندسا وراثياً على نحو‎ ‏البشري للحصول على وظائف المرسل‎ IG] ‏مفضل؛ غير أنه لا يقتصر على ذلك؛ مثل الجسم‎
C= ‏بالإضافة إلى الوظائف المرتبطة بالإعاقة المحددة للمستقبل‎ CDC 5 ADCC (Jie ‏العصبي‎ ٠ .Met ‏على نحو يثير الاندهاش؛ لأول مرة؛ تمكن المخترعون من توليد جسم مضاد لمضاد خيمري و/ أو‎
Spa ‏غير أنه يكون قادرا على تثبيط‎ c-Met ‏متوافق مع البشر وحيد النسيلة يتمكن من الارتباط ب‎ ‏المذكور‎ monoclonal antibody ‏كذلك؛ بحيث يكون الجسم المضاد وحيد النسيلة‎ c-Met ‏إذا كان الواقع؛ في‎ c-Met ‏ثنائي التكافؤ بعكس الأجسام المضادة للمضاد الموجودة الموجهة ضد‎ c-Met ‏الفن السابق؛ يبين أنه من المقترح أحياناً أن الجسم المضاد يكون قادرا على تثبيط ديمرة‎ ‏مع شركائه مما يمكن أن يكون أمرا هاما لم يتم الكشف عنه من قبل؛ أو تم اقتراحه بشكل واضح؛‎ ‏يتعلق بتحديد الجسم‎ Led ‏أن يكون هناك جسم مضاد قادر على ذلك. علاوة على ما سبق؛‎ ‏هذا الجسم المضاد‎ Jie ‏المضاد؛ لم يكن من الواضح على الإطلاق أن يتحقق النجاح في توليد‎ ‏الفعال ثنائي التكافؤ.‎ ٠ ‏جانب كلي من الاختراع حيث إن مثل‎ c-Met ‏وفقا لما تم توضيحه من قبل؛ يمثل تثبيط ديمرة‎ ‏هذه الأجسام المضادة سوف يقدم مصلحة حقيقية لمجموعات أكبر من المرضى. ليس فقط‎ ‏المعتمد على المركب الترابطي؛ كما كان الحالي حتى الاختراع الحالي؛‎ c-Met ‏لسرطان تنشيط‎ ‏غير المعتمد على المركب الترابطي باستخدام‎ c-Met ‏يمكن كذلك علاج سرطان تنشيط‎ Lily ‏الأجسام المضادة التي تم توليدها بواسطة العملية الموافقة للاختراع الحالي.‎ Yo
‎q —‏ — تم تقييم الأجسام المضادة بواسطة تحليل ‎BRET‏ على الخلايا التي تعبر عن كل من ‎c-Met‏ ‎RLuc/c-Met-YFP‏ وتم انتقاؤها على أساس قدرتها على تثبيط ‎٠0‏ 7 على الأقل؛ وعلى نحو مفضل ‎Org YA to‏ ب و55 ‎A‏ وعلى أفضل نحو ‎A Te‏ من إشارة ‎BRET‏ ‏وتكون تكنولوجيا ‎BRET‏ عبارة عن تكنولوجيا معروفة بأنه تمثل دايمرة البروتين : ‎[Angers et al., PNAS, 2000, 97:3684-89[ ©‏ وتكون تكنولوجيا ‎BRET‏ المستخدمة في الخطوتين ‎(T5 (YF‏ من العملية؛ معروفة جيدا من قبل الشخص المتمرس في الفن وسيتم تفصيلها في الأمثلة التالية. بمزيد من التحديد؛ تكون تكنولوجيا ‎(Bioluminescence Resonance Energy Transfer) BRET‏ عبارة عن نقل للطاقة غير مشع يحدث بين مانح متألق حيوي ‎(Renilla Luciferase (RIUC))‏ ومستقبل متألق فلوري؛ ‎٠‏ وطافرةٍ من ‎GFP‏ (بروتين متألق فلوري أخضر ‎YFP 4 (Green Fluorescent Protein‏ ‎(Yellow fluorescent protein)‏ .45 الحالة الحالية تم استخدام ‎EYFP‏ (بروتين متألق فلوري أصفر معزز ‎(Yellow fluorescent protein‏ تعتمد فعالية التقل على التوجيه والمسافة بين المانح والمستقبل. وبعد ذلك؛ يمكن أن يحدث نقل للطاقة فقط إذا كان الجزيئان في تقارب ‎Gis‏ ‎١ )‏ ا ب ‎١‏ نانو متر). ‎als‏ استخدام هذه الخاصية لتوليد تجارب تفاعل البروتين - البروتين. وفي ‎vo‏ الواقع؛ لدراسة التفاعل بين الشريكين»؛ يتم دمج الأول وراثيا في إنزيم ‎Renilla Luciferase‏ والثاني في الطافرة الصفراء 1 ‎day .GFP‏ عامة؛ يتم التعبير عن بروتينات الاندماج؛ ولكن ليس بشكل ملزم؛ 4 ‎WAN‏ الثديية. وفي وجود ركيزتها المنفذة للغشاء (إلنترازين المشترك ‎«(coelenterazine‏ يطلق ‎Rluc‏ ضوء أزرق. إذا كانت طافرة ‎GFP‏ أقرب من ‎٠١‏ نانو متر من ‎Rluc‏ يمكن أن يحدث نقل للطاقة ويمكن كشف إشارة صفراء إضافية. ويتم قياس إشارة ‎BRET‏ ‎٠‏ كنسبة بين الضوء المنبعث بواسطة المستقبل والضوء المنبعث بواسطة المانح. وبهذه الطريقة سوف يزيد ذلك إشارة ‎BRET‏ حيث يتم إحضار بروتيني الاندماج في تقارب أو في ‎Ala‏ تغيير توافقي يتم إحضار ‎Rluc‏ وطافرة ‎GFP‏ أقرب لبعضهما . إذا كان تحليل ‎BRET‏ في نموذج مفضل؛ فإنه يمكن استخدام أية طريقة معروفة لدى الشخص المتمرس في الفن لقياس التغييرات التوافقية لدايمرات 740144 ‎dimerization‏ بدون اقتصار افر
“yam ‏الطاقة برنين التألق الفلوري‎ Ju) FRET ‏يمكن ذكر التكنولوجيات التالية:‎ dele ‏و14 (تألق فلوري محلل زمنياً‎ «(Fluorescence Resonance Energy Transfer ‏(تصوير مجهري‎ FLIM 5 ((Homogenous Time resolved Fluorescence ‏ومتجانس‎ ‏أو‎ (Fluorescence Lifetime Imaging Microscopy ‏لتصوير عمر التألق الفلوري‎ single ‏موجة مفردة‎ Jshl ‏(التصوير الطيفي للعلاقة التبادلية المشتركة للتألق الفلوريي‎ oo .(SW-FCCS ‏ل‎ wavelength fluorescence
Co- ‏مثل الاستشراد المناعي المشترك‎ gal ‏يمكن أيضا استخدام تكنولوجيات تقليدية‎ ‏؛ والارتباط_التبادلي الكيميائي‎ Alpha screen ‏وفحص ألفا‎ « immunoprecipitation ‏؛ وكروماتوجراف الألفة‎ Double—Hybrid ‏والتهجين المزدوج‎ « Chemical cross-linking
Far western blot ‏أو لطخة وسترن‎ ELISA J ¢ Affinity Chromatography ٠ ‏أو "جلوبيولينات‎ "antibodies ‏أو "أجسام مضادة‎ "antibody ‏مضاد‎ awa ‏يتم استخدام تعبيرات‎ ‏بالتبادل في أوسع معانيها وتغطي الأجسام المضادة أحادية النسيلة‎ " immunoglobulin de li ‏أو‎ «(monoclonal antibodies ‏الأجسام المضادة ذات الطول الكامل أو أحادية النسيلة‎ Si) ‏؛ أو الأجسام المضادة متعددة‎ multivalent antibodies ‏الأجسام المضادة متعددة النسيلة‎ ‏أو الأجسام المضادة متعددة التحديد (على سبيل المثال؛‎ multispecific antibodies ‏التكافٍ‎ ٠ ‏مادامت تُظهر الفعالية البيولوجية‎ bispecific antibodies ‏الأجسام المضادة ثنائية التحديد‎ ‏المطلوبة).‎ biological activity ‏يشتمل على اثنتين‎ glycoprotein ‏وبمزيد من التحديد؛ يتكون مثل هذا الجزيء من بروتين سكري‎ ‏متصلتين بينيا‎ (L) light chain ‏واثنتين من السلاسل الخفيفة‎ (H) ‏على الأقل من السلاسل الثقيلة‎ ‏على منطقة‎ heavy chain ala ‏وتشتمل كل سلسلة‎ . disulfide ‏بواسطة روابط ثاني كبريتيد‎ Yo ‏ومنطقة ثابتة لسلسلة‎ (VH ‏أو‎ HCVR ‏متغيرة (أو نطاق) لسلسلة ثقيلة (يتم اختصارها بالصورة‎ ‏و06113. وتتألف‎ 6112 (CHI ‏ثقيلة. وتشتمل المنطقة الثابتة للسلسلة الثقيلة على ثلاث نطاقات»‎ (VL ‏أو‎ LCVR ‏كل سلسلة خفيفة من منطقة متغيرة لسلسلة خفيفة (يتم اختصارها بالصورة‎ ‏ويمكن‎ «CL candy ‏ومنطقة ثابتة لسلسلة خفيفة. تتكون المنطقة الثابتة للسلسلة الخفيفة من نطاق‎ ‏فرعياً أيضا إلى مناطق قابلية التغير المفرطء ويطلق عليها مناطق‎ VL VH ‏تقسيم المنطقتين‎ Yo ‏افر‎
-١١- تحديد التمامية (4ا0ا0)؛ ويتداخل معها المناطق التي تكون أكثر تحفظاء ويطلق عليها مناطق الإطار ‎٠. (FR)‏ وتتألف كل منطقة ‎VL 5 VH‏ من ثلاث مناطق ‎CDRs‏ وأربع مناطق ‎FRs‏ يتم وضعها من طرف الأمين إلى طرف الكربوكسي بالترتيب التالي: ‎FRI, CDRI, FR2, CDR2,‏ ‎CDR3, FR4‏ ,43ا. تحتوي المناطق المتغيرة للسلسلة الثقيلة والسلسلة الخفيفة على نطاق © ارتباط يتفاعل مع مولد ضد. ويمكن أن تتوسط المناطق الثابتة للأجسام المضادة في ربط الجلوبيولين المناعي ‎binding of the immunoglobulin‏ بالأنسجة أو العوامل المضيفة؛ بما في ذلك الخلايا المتنوعة للنظام المناعي (على سبيل المثال؛ ‎WIA‏ المرسل العصبي ‎effector‏ ‎cells‏ ) والمكون الأول ‎(Clg)‏ للنظام المتمم التقليدي. ‏يمكن تقسيم السلاسل الثقيلة للجلوبيولينات المناعية ‎heavy chains of immunoglobulins‏ ‎٠‏ إلى ثلاث مناطق وظيفية: منطقة ‎(Fd‏ والمنطقة المفصلية؛ ومنطقة ‎Fe‏ (شظية ‎fragment‏ قابلة للتبلر ‎Jails y. (fragment crystallizable‏ منطقة ‎Fd‏ على النطاقين ‎VH‏ و ‎«CHI‏ وفي توليفة مع السلسلة الخفيفة؛ تشكل شظية ‎Fab fragment‏ - الشظية ‎fragment‏ الرابطة لمولد الضد. وتكون شظية ‎Feo fragment‏ مسؤولة عن وظائف المرسل العصبي للجلوبيولين المناعي ‎cimmunoglobulin‏ التي تشتمل؛ على سبيل المثال؛ على تثبيت وارتباط المتمم المتحد في ‎١٠‏ الأصل مع مستقبلات ‎Fe‏ لخلايا المرسل العصبي ل ‎effector cells‏ . وتعمل المنطقة المفصلية؛ وهي توجد في فئات الجلوبيولين المناعي ‎IgA (IgG‏ وناوا؛ كمباعدة مرنة تسمح لجزء ‎Fab‏ ‏بالتحرك بحرية في حيز بالنسبة لمنطقة ‎Fo‏ وتكون المناطق المفصلية متنوعة من حيث الصيغة ‏البنائية؛ وتتفاوت في كل من المتوالية والطول بين فئات ‎immunoglobulin‏ وفئاتها الفرعية. ‏وفقاً للدراسات المتعلقة بالتكوين البلوري؛ يمكن تقسيم المنطقة المفصلية للجلوبيولين المناعي ‎Led‏ ‎lel) ‏أيضا من حيث الصيغة البنائية ومن حيث الوظيفة إلى ثلاث مناطق: المنطقة المفصلية‎ ٠
Shin et al., Immunological Reviews 130:87, ‏والقلب؛ المنطقة المفصلية السفلى‎ ‏طرف‎ «amino acids ‏وتشتمل المنطقة المفصلية العليا على أحماض أمينية‎ .2 ‏إلى الوحدة البنائية الأولى في المنطقة المفصيلية التي تقيد‎ CHI ‏ل‎ carboxyl end ‏الكربوكسيل‎ ‏كبريتيد‎ Sb ‏التي تشكل رابط‎ cysteine ‏وبصفة عامة الوحدة البنائية الأولى لذ‎ AS) ‎Lin Well ‏للسلسلة البينية بين سلسلتين ثقيلتين. يرتبط طول المنطقة المفصلية‎ disulfide Yo ‏افر
-؟١١-‏ بالمرونة القسمية للجسم المضاد. وتحتوي المنطقة المفصلية للقلب على قنطرات ثاني كبريتيد 6 لللسلسلة بين الثقيلة. وتربط المنطقة المفصلية السفلى الطرف الأميني؛ ويشتمل على الوحدات البنائية في نطاق 0112. وتحتوي المنطقة المفصلية للقلب للجسم 061 البشري على متوالية ‎Cys—Pro—Pro-Cys‏ التي؛ عند ديمرتها بواسطة تكوين رابطة ‎disulfide‏ ؛ يترتب © عليها ببتيد ثماني ‎dla‏ يعتقد أنه يعمل كمحور؛ مما يضفي بالتالي المرونة. ويمكن أن تؤثر التغييرات التوافقية المسموح بها من قبل البنية والمرونة لمتوالية ‎polypeptide‏ للمنطقة المفصلية للجلوبيولين المناعي ‎immunoglobulin:‏ على وظائف المرسل العصبي لجزء © من الجسم المضاد. يتم استخدام التعبير "جسم مضاد وحيد النسيلة ‎"monoclonal antibody‏ وفقا لمعناه المعتاد ‎٠‏ ليشير إلى جسم مضاد يتم الحصول عليه من مجموعة من الأجسام ‎salad)‏ المتجانسة إلى حد بعيد؛ أي؛ تكون الأجسام المضادة الفردية التي تشتمل على المجموعة متطابقة ‎Leg‏ عدا الطفرات الممكنة ‎AL)‏ الحادثة بشكل طبيعي والتي يمكن أن توجد بنسب طفيفة. وبعبارة أخرى؛ يتكون الجسم المضاد وحيد النسيلة من جسم مضاد متجانس ينتج عن تكاثر نسيلة مفردة للخلايا (على سبيل ‎WIA (JB‏ الورم الهجين؛ وخلايا عائلة حقيقية النواة تم نقل العدوى إليها باستخدام حمض ‎DNA vo‏ لتشفير الجسم المضاد المتجانس» وخلايا عائلة أولية النواة تم نقل العدوى ‎lel)‏ باستخدام حمض ‎DNA‏ لتشفير الجسم المضاد المتجانس؛ الخ) ويتميز بصفة عامة بسلاسل ثقيلة لفئة ولفئة فرعية واحدة فقطء وسلاسل خفيفة لنوع واحد فقط. وتكون الأجسام المضادة وحيدة النسيلة محددة بدرجة ‎Alle‏ ويتم توجيهها ضد مولد ضد مفرد. وبالإضافة إلى ما سبق؛ على النقيض من مستحضرات الأجسام المضادة متعددة النسيلة التي تشتمل نمطيا على الأجسام المضادة المتنوعة ‎Yo‏ التي يتم توجيهها ضد المحددات المتنوعة؛ أو القمم اللاصقة؛ فإنه يتم توجيه كل جسم مضاد وحيد النسيلة ضد محدد مفرد على مولد الضد. في الوصف الحالي؛ يتم استخدام المصطلحات ‎polypeptide‏ ومتواليات ‎polypeptide‏ ‏ومتواليات الحمض الأميني ‎amino acid‏ و ‎peptides‏ والبروتينات التي يتم ربطها بمركبات الجسم المضاد أو المتواليات الخاصة بها بطريقة يمكن أن تحل محلها محل الآخر. اررق
س١‏ يتعلق الاختراع بالجسم المضاد وحيد النسيلة ؛ أو شظية وظيفية ثنائية ‎divalent sali‏ ‎functional fragment‏ أو مشتق منهاء تكون قادرة على تثبيط ديمرة ‎c-Met dimerization‏ وتشتمل على سلسلة تقيلة ‎heavy chain‏ تشتمل على ‎CDR-HI1, CDR-H2‏ و ‎CDR-H3‏ ‏مع متواليات الحمض الأميني ‎amino acid‏ على نحو مناظر ذات المتوالية ذات أرقام الهوية ‎,١‏ ‏0 و ؟ أو متوالية لها نسبة تطابق تبلغ 860 7 على الأقل بعد المحاذاة المثلى مع المتواليات للمتوالية ذات أرقام الهوية ‎١ ,١‏ و ‎¢F‏ وسلسلة خفيفة تشتمل على ‎CDR-L2(CDR-L1‏ ‎all; CDR-L3‏ لها متواليات الحمض الأميني التي تناظر لها للمتوالية ذات أرقام الهوية 1,0 و 7 أو متوالية لها نسبة تطابق تبلغ ‎A‏ 7 على الأقل بعد المحاذاة المقلى مع المتواليات المتوالية ذات أرقام الهوية ©, 1 أو 7, وحيث يتميز الجسم المضاد المذكور على نحو إضافي بأنه يشتمل ‎٠‏ أيضًا على نطاق مفصلي يشتمل على متوالية ‎Adige amino acid‏ ذات رقم هوية 27. وبمزيد من التحديد؛ يتعلق الاختراع بالجسم المضاد وحيد النسيلة ‎monoclonal antibody‏ , أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ ‎divalent functional fragment‏ أو مشتق منها, وفقا لما تم وصفه أعلاه يتميز بأنه يشتمل ‎Wa‏ على نطاق مفصلي يشتمل على متوالية ‎amino acid‏ _متوالية ذات رقم هوية ‎OV‏ ‎١5‏ وبعبارة أخرى, يتعلق الاختراع بالجسم المضاد وحيد النسيلة, أو شظية وظيفية ‎AE‏ التكافو ‎divalent functional fragment‏ أو مشتق منها, تكون قادرة على تثبيط ديمرة ‎dimerization‏ ‎c-Met‏ وتشتمل على سلسلة ثقيلة ‎heavy chain‏ تشتمل على ‎CDR-H1, CDR-H2‏ ‎CDR-H3‏ والتي لها متواليات الحمض الأميني التي تناظر لها المتوالية ذات أرقام الهوية ‎,١‏ ؟ و ؟ أو متوالية لها نسبة تطابق تبلغ ‎A‏ 7 على الأقل بعد المحاذاة المثلى مع المتواليات للمتوالية ‎I‏ ذات أرقام الهوية ‎,١‏ ؟ و ؟: وسلسلة خفيفة تشتمل على ‎(CDR-L1‏ 004-12 و ‎CDR-L3‏ ‎all‏ لها متواليات ‎a) amino acid‏ تناظر لها للمتوالية ذات أرقام الهوية ©, 1 و 7 أو متوالية لها نسبة تطابق تبلغ ‎A‏ 7 على الأقل بعد المحاذاة ‎Hal‏ مع المتواليات المتوالية ذات أرقام الهوية 1,0 أو 7, وحيث يتميز الجسم المضاد علاوة عل ذلك بأنه يشتمل أيضنًا على نطاق مفصلي يشتمل على متوالية ‎lise amino acid‏ ذات رقم هوية ‎OV‏ ‏افر
— ¢ \ — وبمزيد من التحديد؛ يتعلق الاختراع بالجسم المضاد وحيد النسيلة ‎monoclonal antibody‏ , أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤٌ ‎divalent functional fragment‏ أو مشتق منها, وفقا لما تم وصفه أعلاهيتميز بأنه يشتمل أيضًا على نطاق مفصلي يشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎acid sequence‏ 200100 _متوالية ذات رقم هوية ‎١‏ . © وبعبارة أخرى, يتعلق الاختراع أيضًا بالجسم المضاد وحيد النسيلة ‎monoclonal antibody‏ , أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤؤ ‎divalent functional fragment‏ أو مشتق منها, تكون قادرة على تثبيط ديمرة ‎c-Met dimerization‏ وتشتمل على سلسلة ‎Jai heavy chain ald‏ على ‎aly CDR-H3, 004-111, CDR-H2‏ لها متواليات الحمض الأميني التي تناظر لها المتوالية ذات أرقام الهوية ‎,١‏ 7 و © أو متوالية لها نسبة تطابق تبلغ 868 7 على الأقل بعد ‎٠‏ المحاذاة المثلى مع المتواليات للمتوالية ذات أرقام الهوية ‎١ ,١‏ و ؟: وسلسلة خفيفة تشتمل على 4-11ا0؛ ‎CDR-L2‏ و ‎ally CDR-L3‏ لها متواليات الحمض الأميني التي تناظر لها للمتوالية ذات أرقام الهوية 5, 6+ و “ أو متوالية لها نسبة تطابق تبلغ 88 7 على الأقل بعد المحاذاة المتلى مع المتواليات المتوالية ذات أرقام الهوية ©, 6 أو 7, حيث يتميز الجسم المضاد علاوة على ذلك بأنه يشتمل أيضنًا على نطاق مفصلي يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ‎Yo‏ ذات رقم ‎Nags‏ ‏كما سيتضح للمتمرس في المجال, تكون متواليات الإجماع المتوالية ذات أرقام الهوية ‎5١7‏ و١7‏ متضمنة في متوالية الإجماع متوالية ذات رقم هوية ‎OT‏ ‏جدول ‎١‏ ‏#14 #13 #12 ]#11 #10 #09 808 80 #0 #0 #0 #01802 7 5 4 3 ‎X6| X7| Xg X94 QQ X11] X1 gq X14‏ ادر ‎gd x1] x2] x3] CG‏ ذات رقم هوية 570 افر
-١ ‏اج‎ ‏أمتوالية‎ 1 2 x3] © X5 6 207 X§ X9 GG H ‏لما‎ qq | ‏م‎ ‏ذات رقم‎ ov ‏هوية‎ ‎lad 1 x2| x3] © X5 Cl ‏قر‎ X9 © X11] X1 q X14 ‏ذات رقم‎
YY ‏هوية‎ ‎107 ‏بالنسبة للمتوالية ذات رقم هوية‎
X12: X8: H, V,K, - X5:D, C, ©, - X1: P,R,C, -
P, -
X14: P, T X9:T,C,E,P, - X6: K, C, - X2: K, CR, -
X11: P, 1 X71: T,C, - X3:S,C,D,- o " functional fragments and derivatives ‏سيتم تعريف التعبير "شظايا ومشتقات وظيفية‎ ‏بالتفصيل فيما يلي في المواصفة الحالية.‎ ‏أن تشير إلى المناطق مفرطة التغيير‎ «CDR(s) ‏أو‎ CDRs ‏يكون المقصود بالتعبير مناطق‎ heavy and light chains of the ‏للسلاسل الثقيلة والخفيفة للجلوبيولينات المناعية‎
IMGT ‏وفقا لما تم تعريفه بواسطة‎ immunoglobulins AD ‏الفريد لمقارنة النطاقات المتغيرة مهما كان مستقبل مولد الضد؛ أو‎ IMGT ‏لقد تم تعريف نظام ترقيم‎ : ‏نوع السلسلة؛ أو النوع‎ [Lefranc M.—P., Immunology Today 18, 509 (1997) / Lefranc M.-P., The
Immunologist, 7, 132-136 (1999) / Lefranc, M.-P., Pommié¢, C., Ruiz,
M., Giudicelli, V., Foulquier, E., Truong, L., Thouvenin—-Contet, V. ١٠ ‏افر‎
-؟١-‏ و[(2003) 55-77 ,27 ‎Lefranc, Dev.
Comp.
Immunol.,‏ في نظام ترقيم ‎IMGT‏ ‏الفريد. يكون للأحماض الأمينية المحافظة دائما نفس الموضع؛ على سبيل المثال» ‎cysteine‏ ‎4١ tryptophan ((1st-CYS) vv‏ (0-140ع/0054)؛ حمض أميني غير ألف ‎«(2nd-CYS) ٠4 cysteine 5; 4 hydrophobic amino acid cl‏ ‎phenylalanine, ©‏ أو ‎.(J-PHE or J-TRP) VA tryptophan‏ يوفر نظام ترقيم ‎IMGT‏ ‏الفريد عدم تقييد قياسي لمناطق إطار ‎:FRI-IMGT)‏ المواضع من ‎١‏ إلى ‎(FR2-IMGT «YT‏ من 9؟ إلى 00( ‎:FR3-IMGT‏ من 16 إلى ‎٠١٠١4‏ و ‎١١8 : FRA-IMGT‏ إلى ‎(VYA‏ ومناطق تحديد التتميم: ‎:CDRI-IMGT‏ من ‎YY‏ إلى ‎:CDR2-IMGT «YA‏ من 576 إلى 159 و ‎٠١١ :CDR3-IMGT‏ إلى ‎YY‏ نظرا لأن الفراغات تمثل المواضع غير المشغولة؛ تصبح ‎٠‏ أطوال ‎CDR-IMGT‏ (الموضحة بين أقواس والمفصولة بنقاط» على سبيل ‎«Jbl‏ [5.8.13]) معلومات حيوية. ويتم استخدام نظام ترقيم ‎IMGT‏ الفريد في التمثيلات البيانية ثنائية الأبعاد ؛ المحددة بحسب ‎IMGT Colliers de Perles [Ruiz, M.‏ و ‎Lefranc, M.-P., Immunogenetics, 53, 857-883 (2002) | Kaas, Q.‏ و ‎Lefranc, M.-P., Current Bioinformatics, 2, 21-30 (2007)]‏ وفي البنيات ثلاثية ‎١‏ الأبعاد في ‎IMGT‏ / بنيات ثلاثية الأبعاد ‎١ cell receptor ]»835, Q., Ruiz, M.
DB -‏ ,.-.ا ,2026 تقار ‎MHC structural‏ ‎data.
Nucl.
Acids.
Res., 32, 0208-0210 (2004)].‏ وقد تواجدت السلاسل الثقيلة الثلادث ‎CDRs‏ والسلاسل الخفيفة الثلاث ‎.CDRs‏ تم استخدام المصطلح ‎CDR‏ أو ‎CDRs‏ في هذه الوثيقة لكي يتم توضيح؛ وذلك طبقاً للحالة؛ واحدة من تلك ‎٠‏ المناطق أو مناطق معددة أو حتى كل المناطق المذكورة والتي تشتمل على العديد من الوحدات البنائية للحمض الأميني المسئولة عن الارتباط عن طريق ألفة الجسم المضاد بالنسبة لمولد الضد أو للقمة اللاصقة التي يتم التعرف عليها. في معنى الاختراع الحالي؛ فإن التعبير " النسبة المثوية للتطابق ‎percentage of identity‏ " بين متواليتين من الأحماض النووية أو الأحماض النووية يعني النسبة ‎sill‏ ,4 لل ‎nucleotides‏ ‏رف
-١١- ‏المتطابقة أو الوحدات البنائية للحمض الأميني بين المتواليتين المطلوب مقارنتهماء واللتين تم‎ ‏الحصول عليهما بعد المحاذاة المتلى» بحيث تكون هذه النسبة المثوية إحصائية تماما وبحيث يتم‎ ‏توزيع الفروق بين المتواليتين عشوائيا بامتداد طولهما. ويتم إجراء مقارنة متواليتي الحمض النووي‎
Jid ‏تقليدياً بواسطة مقارنة المتواليات بعد أن تتم محاذاتها على‎ amino acid ‏أو الحمض الأميني‎ ‏نحوء بحيث يكون من الممكن إجراء المقارنة المذكورة بالقسم أو باستخدام "نافذة محاذا”. ويمكن‎ © ‏أو بواسطة خوارزم التجانس‎ edly ‏إجراء المحاذاة المثلى للمتواليات للمقارنة؛ بالإضافة إلى المقارنة‎ ‏أو بواسطة خوارزم‎ (Waterman )1981( [Ad. App. Math. ‏و[2:482‎ Smith ‏الموضعي ل‎ ‏أو‎ Wunsch (1970) [J. Mol. Biol. 48:443] ‏و‎ Neddleman ‏التجانس الموضعي ل‎
Lipman (1988) [Proc. Natl. Acad. Sci. Pearson ‏بواسطة طريقة بحث التشابه ل‎ ‏أو بواسطة برنامج كمبيوتر باستخدام هذه الخوارزمات:‎ (USA 85:2444] ٠
TFASTA in the Wisconsin Genetics Software ‏رو‎ (GAP, BESTFIT, FASTA
Package, Genetics Computer Group, 575 Science Dr., Madison, WI, or by the comparison software BLAST NR or BLAST P). ‏ويتم تحديد النسبة المئوية للتطابق بين اثنتين من متواليات الحمض النووي أو الحمض الأميني‎ ‏والتي يمكن أن تحتوي فيهما متوالية‎ did ‏200100_بمقارنة المتواليتين المتحاذيتين بشكل‎ acid Vo ‏الحمض النووي أو الحمض الأميني المطلوب مقارنتهما على إضافات أو إلغاءات مقارنة بالمتوالية‎ ‏المرجعية للمخاذاة المثلى بين المتواليتين. ويتم حساب النسبة المثوية للتطابق عن طريق تحديد عدد‎ ‏الحمض الأميني أو الوحدة البنائية متطابقة عندها بين‎ nucleotide ‏المواضع التي يكون‎ ‏المتواليتين» وعلى نحو مفضل بين المتواليتين التامتين» وقسمة عدد المواضع المتطابقة على‎ ‏للحصول على النسبة المثوية‎ ٠٠١ ‏إجمالي عدد المواضع في نافذة المحاذاة وضرب النتيجة في‎ ٠ ‏للتطابق بين المتواليتين.‎ “BLAST 2 sequences’ (Tatusovaet BLAST ‏على سبيل المثال؛ يمكن استخدام برنامج‎ nucleotide ;al., “Blast 2 sequences - a new tool for comparing protein : ‏المتوفر على الموقع‎ sequences”, FEMS Microbiol., 1999, Lett. 174:247-250)
Eye
م \ _ ‎abhuidl ae chttp://www.ncbi.nlm.nih.gov/gorf/bl2.html‏ الافتراضية (وبدرجة ملحوظة للمتغيرات "جزاء الفجوة المفتوحة ‎open gap penalty‏ "0< و"جزاء فجوة الامتداد ‎¢Y :' extension gap penalty‏ بحيث تكون المنظومة المنتقاة على سبيل المثال منظومة ‎“BLOSUM 27”‏ المقترحة بواسطة البرنامج)؛ ويتم حساب النسبة المئوية للتطابق بين المتواليتين المطلوب مقارنتهما مباشرة بواسطة البرنامج.
بالنسبة لمتوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ التي تظهر نسبة تطابق 860 7 على ‎(JAY‏ ويفضل ‎AO‏ و 40 5 90 7 و79/8 مع متوالية الحمض الأميني المرجعية؛
وتشتمل الأمثلة المفضلة على تلك التي تحتوي على المتوالية المرجعية؛ أو تعديلات معينة؛ وخصوصا إلغاء؛ أو إضافة؛ أو استبدال لحمض أميني واحد على الأقل؛ أو ‎Ad‏ مقطوعة أو
‎٠‏ امتداد. وفي حالة استبدال واحد أو أكثر من الأحماض الأمينية المتتابعة أو غير المتتابعة؛. يفضل أن تكون الاستبدالات التي يتم فيها استبدال الأحماض الأمينية التي فيها استبدال بأحماض أمينية "مكافئة". وهناء يكون المقصود من التعبير "أحماض أمينية مكافئة” أن تشير إلى أي أحماض أمينية ‎amino acids‏ من المحتمل أن يكون فيها استبدال لواحد من الأحماض الأمينية البنائية؛ على أي حال بدون تعديل الأنشطة البيولوجية للأجسام المضادة التي تناظر ولتلك الأمثلة المحددة
‎Vo‏ المعرفة فيما يلي؛ وبصفة خاصة في الأمثلة. يمكن تحديد هذه الأحماض الأمينية المكافئة إما بالاعتماد على تجانسها البنائي مع الأحماض الأمينية التي يتم لها استبدال أو على نتائج الاختبارات المقارنة للنشاط البيولوجي بين الأجسام المضادة المتنوعة التي يمكن إجراؤها. على سبيل ‎(JB‏ تجدر الإشارة إلى إمكانيات الاستبدال التي يمكن إجراؤها بدون أن يترتب عليها تعديل جوهري للنشاط البيولوجي للجسم المضاد المعدل المناظر.
‎٠‏ كمثال غير مقيد على ما سبق؛ يلخص الجدول رقم ؟ فيما يلي الاستبدالات الممكنة التي يحتمل أن يتم إجراؤها بدون أن يترتب عليها تعديل كبير للنشاط البيولوجي في الجسم المضاد المناظر المعدل؛ وتكون الاستبدالات العكسية ممكنة طبيعيا تحت نفس الظروف. الجدول رقم ‎١‏
-١4- ‏الاستبدال الوحدة البنائية‎
— \ «=
Tyr (Y) Phe, Trp يجب أن يتم هنا فهم أن الاختراع لا يتعلق بأجسام مضادة في شكلها الطبيعي أي؛ أن تاك الأجسام لا يتم أخذها من بيئتها الطبيعية ولكن يتم عزلها أو يتم الحصول عليها عن طريق التنقية من المصادر الطبيعية عن طريق ناتج عودة الارتباط الجيني أو باستخدام التخليق الكيميائي ‎chemical synthesis‏ وبالتالي فيمكن أن تحمل الأحماض الأمينية غير الطبيعية كما سيتم ‎aay ©‏ ذلك فيما يلي. ‏يجب أن يتم فهم؛ وفقا لما تم ذكره ‎Led‏ سبق؛ أن الاختراع يعنى بمزيد من التحديد بجسم مضاد ‏خيمري ‎particularly a chimeric‏ و أو متوافق مع البشر ثنائي التكافؤؤ ‎humanized‏ ‎divalent ‏أو مشتق وظيفي ثنائية التكافز‎ fragment ‏أو أي شظية‎ ¢ divalent antibody ‎(functional derivative‏ لها نشاط ‎.antagonistic activity alas‏ تكون الأجسام المضادة ‎٠‏ ثنائية التكافؤؤ ‎Divalent antibodies‏ من الفن السابق عبارة عن مساعدات أو مساعدات جزئية ‎partial agonists‏ . ويكون الجسم المضاد وحيد النسيلة ‎monoclonal antibody‏ الموافق ‏للاختراع؛ بما في ذلك الجسم المفصلي المعدل وفقا لما تم وصفه فيما سبق؛ أي؛ بما في ذلك ‏المنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ‏ذات رقم هوية 07 ‎oY) OV‏ جديدا ويقدم خاصية نشاط ‎alias‏ محسن مقارنة بالجسم المضاد ‎Vo‏ الخيميري أو البشري ‎chimeric or humanized antibody‏ 224611 بدون الجسيم ‏المفصلي المعدل المذكور كما سيتضح من الأمثلة التالية. ‏على النقيض من الفن السابق, حصل المخترعون على نشاط مضاد محسن بدون تعديل هيئة ‏الجسم المضاد. بالفعل, في الفن السابق المعبر عنه بالجسم المضاد ‎SDS‏ ‏كان من الضروري تطوير شظية أحادية التكافؤ ‎monovalent fragment‏ _من الجسم المضاد ‎Ye‏ لتوليد نشاط مضاد ‎antibody to generate an antagonistic activity‏ . في التطبيق ‏افر
— \ \ — الحالي, باستخدام الجسم المفصلي من الاختراع, يكون من الممكن ولأول مرة الحصول على جسم مضاد ثنائي التكافؤ ‎divalent antibody‏ كامل ذا نشاط مضاد, وهذا مناقض للمعرفة العامة. في نموذج مفضل, يشتمل الجسم المضاد من الاختراع على المنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية حمض أميني ‎amino acid sequence‏ . © منتقاة من المجموعة التي تتكون من المتوالية ذات أرقام الهوية 77 إلى ‎YA‏ و58 إلى 7ا, أو متوالية لها نسبة تطابق تبلغ ‎A‏ 7 على الأقل بعد المحاذاة ‎Hal‏ مع المتواليات المتوالية ذات أرقام الهوية 77 إلى 78 و8 إلى ‎MY‏ ‎ad‏ من التوضيح؛ يعيد الجدولان ‎LE)‏ © و؛_التاليان متواليات الأحماض الأمينية ‎nucleotides‏ الخاصة بالمناطق المفصلية المختلفة للاختراع. *“ ‏الجدول رقم‎ ٠ ‏متوالية ذات رقم |أحماض أمينية متوالية ذات‎ nucleotides ‏رقم هوية‎ amino acids ‏هوية.‎ ‎YY| RKCCVECPPCP ‏اد‎ AGGAAGTGCTGTGTGGAGT
GCCCCCCCTGCCCA
YY| PRDCGCKPCIC ٠١١ CCCCGGGACTGTGGGTGC
T AAGCCTTGCATTTGTACC
Y¢| PKSCGCKPCIC vy | CCCAAGAGCTGTGGGTGCA
T AGCCTTGCATTTGTACC
Yo| PKSCGCKPCIC ‏ا‎ CCAAAGAGCTGCGGCTGCA
P AGCCTTGTATCTGTCCC
Y1| PRDCGCKPCP 7١ CCACGGGACTGTGGCTGC
AAGCCCTGCCCTCCGTGTC
‏افر‎
— \ \ — re ‏إلا‎ PRDCGCHTCP v¢| CCCAGAGACTGTGGGTGTC
PCP ACACCTGCCCTCCTTGTCC
T
YA| PKSCDCHCPPC ١١ CCCAAAAGCTGCGATTGCC
P ACTGTCCTCCATGTCCA
‏الجدول رقم ؛‎ ‏م متوالية‎ ‏متوالية ذات |اأحماض أمينية‎ ‏ذات رقم‎ nucleotides amino acids| ‏رقم هوية.‎ ‏هوية.‎ ‎oA| CKSCDKTHTCP vy | TGCAAGAGCTGCGACAAGACCC
PCP ACACCTGTCCCCCCTGCCCT o4| PCSCDKTHTCP ‏اعلا‎ CCCTGCAGCTGCGACAAGACCC
PCP ACACCTGTCCCCCCTGCCCT
٠١١ PKCCDKTHTCP ‏اعلا‎ CCCAAGTGCTGCGACAAGACCC
PCP ACACCTGTCCCCCCTGCCCT
1Y| PKSCCKTHTCP vi| CCTAAGAGCTGTTGCAAGACCC
PCP ACACCTGTCCCCCCTGCCCT
17| PKSCDCTHTCP vv| CCCAAGAGCTGCGACTGCACCC
PCP ACACCTGTCCCCCCTGCCCT
‏اررق‎
17١ PKSCDKCHTCP YA| CCCAAGAGCTGCGACAAGTGCC
PCP ACACCTGTCCCCCCTGCCCT
‎CCCAAGAGCTGCGACAAGACCC‏ اكلا ‎PKSCDKTHCCP‏ ا ‎PCP ACTGCTGTCCCCCCTGCCCT ‎KCDKTHTCPPC Av | AAGTGCGACAAGACCCACACCT‏ ام ‎P GTCCCCCCTGCCCT ‎11 PKSCDCHTCPP AM | CCCAAGAGCTGCGACTGCCACA ‎CP CCTGTCCCCCCTGCCCT ‎PKSCDCTHCPP AY | CCCAAGAGCTGCGACTGCACCC‏ الا ‎CP ACTGCCCCCCCTGCCCT ‎TA PCSCKHTCPPC AY | CCCTGCAGCTGCAAGCACACCT ‎P GTCCCCCCTGCCCT ‎PSCCTHTCPPC Ae | CCTAGCTGCTGCACCCACACCT‏ اك ‎P GTCCCCCCTGCCCT ‎PSCDKHCCPPC Ao | CCCAGCTGCGACAAGCACTGCT‏ الا ‎P GCCCCCCCTGCCCT ‎ل١‎ PKSCTCPPCP All| CCCAAGAGCTGCACCTGTCCCC
CTTGTCCT
‎CCCAAGAGCTGCGATAAGTGCG‏ .الام ‎١ PKSCDKCVECP‏ ل ‎PCP TGGAGTGCCCCCCTTGTCCT heavy chain ‏لطريقة أولى, سيتم تعريف الجسم المضاد بواسطة متوالية السلسلة الثقيئة‎ ag ‏وبمزيد من التحديدء يتميز الجسم المضاد من الاختراع, أو إحدى شظاياه‎ 4] Sequence ‏بع
الوظيفية أو مشتقاته ‎functional fragments or derivatives‏ , يتميز بأنه يشتمل على سلسلة ثقيلة 00810 ‎heavy‏ تشتمل على ‎JN‏ على ‎CDR‏ واحد تم اختياره من ‎CDRs‏ تشتمل على متواليات الحمض الأميني ‎amino acid‏ المتوالية ذات أرقام الهوية ‎١‏ إلى 7. تكون المتواليات المذكورة كما يلي:
© متوالية ذات رقم هوية ‎GYIFTAYT :١‏ متوالية ذات رقم هوية 1: ‎IKPNNGLA‏ ‏متوالية ذات رقم ‎ARSEITTEFDY Ys‏ ‎Gy‏ لجانب مفضل, يشتمل الجسم المضاد من الاختراع, أو إحدى شظاياه الوظيفية أو مشتقاته, على سلسلة ثقيلة تشتمل على على الأقل واحد, على نحو مفضل اثنين, وعلى أفضل نحو ثلاث,
‎(CDR(s ٠‏ تم اختياره من 608-112 ,608-111 ‎,CDR-H3;‏ حيث: ‎daisy CDR-HI -‏ على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ذات رقم هوية ‎,١‏ ‎CDR-H2 -‏ يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ", ‎CDR-H3 -‏ يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 3.
‏5 في طريقة ثانية, سيتم حاليا تعريف الجسم المضاد بواسطة متوالية السلسلة الخفيفة ‎light chain‏ © له. وبمزيد من التحديد؛ ‎By‏ لجانب خاض ثان من الاختراع, يتميز الجسم المضاد, أو إحدى شظاياه الوظيفية أو مشتقاته, بأنه يشتمل على سلسلة خفيفة تشتمل على الأقل على ‎CDR‏ واحد تم اختياره من ‎CDRs‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid‏ ‎sequence‏ المتوالية ذات أرقام الهوية © إلى 7.
‎Ye‏ تكون المتواليات المذكورة كما يلي: متوالية ذات رقم هوية ‎ESVDSYANSF:0‏
‏افر
اج \ — متوالية ذات رقم هوية ‎RAS:‏ ‏متوالية ذات رقم هوية ‎QQSKEDPLT:Y‏ ‏وفقًا لجانب مفضل آخر, يشتمل الجسم المضاد من الاختراع, أو ‎saa)‏ شظاياه الوظيفية أو مشتقاته ‎functional fragments or derivatives‏ , على سلسلة خفيفة تشتمل على الأقل على © واحد, على نحو مفضل اثنين, وعلى أفضل نحو ثلاث, ‎(CDR(s‏ تم اختياره من ‎«CDR-L1‏ ‎CDR-L2‏ و ‎,CDR-L3‏ حيث: - 064-11 يشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ذات رقم هوية 5, - 6084-12 يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية , ‎٠‏ - 608-13 يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7. تم إيداع الورم الهجين الفأري القادر على تمييز الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ‎monoclonal‏ ‎antibodies‏ وفقًا للاختراع الحالي, على نحو خاص الورم الهجين من أصل فأري, في ‎CNCM‏ ‎((Institut Pasteur, Paris, France‏ بتاريخ 4 ‎٠٠١١ JV ]١‏ برقم 1-3731 ‎.CNCM‏ ‏في التطبيق الحالي , يكون من المفضل أن تستحث 1061 وظائف مستجيب, وعلى أفضل نحو ‎.CDC; ADCC ٠‏ يدرك المتمرس في الفن أن وظائف مستجيب تشتمل, على سبيل المثال, على ارتباط 0190: سمية ‎WA‏ معتمدة مكملة ‎dependent cytotoxicity (CDC)‏ 000101600601:_ارتباط مستقبل ‎Fc receptor binding‏ سمية ‎WA‏ تتوسط فيها الخلية معتمدة على الجسم المضاد ‎cell-mediated cytotoxicity (ADCC)‏ 060600601-/ا501500؛ التقام خلوي ملتهمة: ‎٠‏ وتخفيض متحكم فيه لمستقبلات سطح الخلية ‎Ao)‏ سبيل المثال؛ مستقبل خلية 8؛ ‎(BCR‏ ‏افر
-؟- تكون الأجسام المضادة وفقًا للاختراع الحالي, على نحو مفضل الأجسام المضادة المحددة وحيدة النسيلة, على نحو خاص من أصل فأري, خيمري أو من البشر ‎chimeric or humanized‏ , التي يمكن الحصول عليها وفقًا للطرق القياسية المعروفة للمتمرس في الفن. بصفة عامة, لتحضير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ‎monoclonal antibodies‏ أو ‎alli‏ ‏5 الوظيفية أو مشتقاتها, على نحو خاص من أصل فأري, يمكن الرجوع إلى التقنيات الموصوفة على نحو خاص في الكتيب ‎and Lane, Antibodies: A Laboratory Antibodies” (Harlow"‏ ‎Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold Spring Harbor NY, pp. 726,‏ 1988( أو إلى تقنية التحضير من الأورام الهجينة ‎hybridomas‏ الموصوفة بواسطة ‎Kohler‏ ‎.(and Milstein (Nature, 256:495-497, 1975‏ ‎٠‏ يمكن الحصول على الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ‎monoclonal antibodies‏ وفقاً للاختراع, على سبيل المثال, من خلية حيوانية محصنة ضد 81/ا-0, أو إحدى شظاياه التي تحتوي على القمة اللاصقة التي يتم التعرف عليها بشكل خاص بواسطة الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المذكورة وفقاً للاختراع. يمكن إنتاج ‎c-Met‏ المذكور, أو إحدى شظاياه المذكورة, على نحو خاص وففًا لطرق العمل المعتادة, بواسطة ناتج عودة الاتحاد الجيني ‎geneticrecombination‏ الذي ‎VO‏ يبدء من متوالية الحمض النووي المحتواة في تشفير متوالية حمض ‎CDNA‏ ل ‎c-Met‏ أو بواسطة تخليق ‎peptide‏ الذي يبدء من متوالية أحماض أمينية ‎amino acids‏ متضمنة في متوالية ‎peptide‏ ل ‎.c—Met‏ ‏يمكن أن تنقى الأجسام المضادة وحيدة النسيلة وفقاً للاختراع, على سبيل المثال, على عمود ألفة الارتباط وفيه تم تثبيت ‎c-Met‏ أو إحدى شظاياه التي تحتوي على القمة اللاصقة التي يتم التعرف ‎٠‏ عليها بشكل خاص ‎daly‏ الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ‎monoclonal antibodies‏ المذكورة وفقاً للاختراع. وبمزيد من التحديد؛ يمكن أن تنقى الأجسام المضادة وحيدة النسيلة المذكورة بواسطة الكروماتوجراف على البروتين ‎A‏ و/ أو 6, متبوع أو غير متبوع بكروماتوجراف التبادل الأيوني الذي يهدف لإزالة ملوثات البروتين المتبقية وكذلك حمض ‎DNA‏ و05, الذي يكون بذاته متبوع أو غير متبوع بكروماتوجراف الاستبعاد على هلام ‎Sepharose™‏ لكي تتم اررق
ا"
‎aly)‏ التكتلات الأساسية نظرا لوجود ديمرات ‎dimers‏ أو وحدات متعددة أخرى. في طريقة أكثر
‏تفضيلا, يمكن استخدام كافة هذه التقنيات بالتزامن أو على التوالي.
‏يتكون الجسم المضاد من الاختراع, أو شظية وظيفية ثنائية التكافز ‎divalent functional‏
‎particularly 8 ‏أو مشتق منها, من على نحو مفضل جسم مضاد خيمري‎ fragment
‎. chimeric ©
‏يكون المقصود من الإشارة إلى جسم مضاد خيمري, جسم مضاد يحتوي على منطقة ‎Spall‏
‏المتغيرة الطبيعية (سلسلة خفيفة وسلسلة تقيلة ‎(light chain and heavy chain‏ مشتق من
‏جسم مضاد من نوع محدد في توليفة مع السلسلة الخفيفة ومنطقة ثابتة لسلاسل ثقيلة لجسم مضاد
‏من نوع غير متجانس مع النوع المحدد المذكور (على سبيل ‎QB‏ حصان؛ أرنب»؛ كلب؛ ‎٠‏ بقرة؛ دجاجة؛ إلى غير ذلك).
‏يمكن تحضير الأجسام المضادة أو شظاياها الوظيفية من النوع الخيمري من الاختراع باستخدام
‏تقنيات ناتج عودة الاتحاد الجيني ‎genetic recombination‏ . على سبيل ‎JB‏ يمكن إنتاج
‏الجسم المضاد الخيمري بواسطة استنساخ ناتج عودة الاتحاد الجيني لحمض ‎DNA‏ الذي يحتوي
‏على معزز وتشفير متوالية لمنطقة الصورة المتغيرة لجسم مضاد وحيد النسيلة ‎monoclonal‏ ‎oe antibody ١‏ غير ‎dull‏ على نحو خاص فأري؛ وفقا للاختراع وتشفير متوالية للمنطقة الثابتة
‏لجسم مضاد من البشر. يكون الجسم المضاد الخيمري من الاختراع المشفر بواسطة جين ناتج
‏عودة الاتحاد الجيني ‎genetic recombination‏ ؛ على سبيل ‎(JB‏ عبارة عن خيمري فأر-
‎lad)‏ وتحدد خصوصية هذا الجسم المضاد بواسطة منطقة الصورة المتغيرة المشتقة من حمض
‎DNA‏ من فأر ويتحدد النوع المناظر له بواسطة المنطقة الثابنة المشتقة من حمض ‎DNA‏ من ‎٠‏ البشر. بالنسبة لطرق تحضير الأجسام المضادة الخيمرية ‎chimeric antibodies‏ ؛ على سبيل
‎Jl‏ يمكن الرجوع إلى وثائق:
‎Verhoeyn et al. (BioEssays, 8:74, 1988), Morrison et al. (Proc.
Natl.
‎Acad.
Sci.
USA 82:6851-6855, 1984) ;
‏افر
‎A —‏ \ — أو البراءة الأمريكية رقم ‎(EAYTOTNY‏ وبمزيد من التحديد؛ يشتمل الجسم المضاد المذكور, أو شظية ‎fragment‏ وظيفية أو مشتق منه, على النطاق المتغير لسلسلة ثقيلة خيمرية ‎chimeric‏ ‎heavy chain‏ _لمتوالية تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ذات رقم هوية £7 أو متوالية تحتوي على الأقل على 7850 تطابق بعد المحاذاة المثلى مع 0 المتوالية متوالية ذات رقم هوية 46 . ‎Ha ‏متوالية ذات رقم هوية‎
EVQLQQSGPELVKPGASVKISCKTSGYIFTAYTMHWVRQSLGESLDWIGG
IKPNNGLANYNQKFKGKATLTVDKSSSTAYMDLRSLTSEDSAVYYCARSEI
TTEFDYWGQGTALTVSS
‎٠‏ وبمزيد من التحديد؛ يشتمل الجسم المضاد المذكور, أو شظية ‎fragment‏ وظيفية أو مشتق منه, على النطاق المتغير لسلسلة خفيفة خيمرية ‎chimeric light chain‏ لمتوالية تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ذات رقم هوية ‎£V‏ أو متوالية تحتوي على الأقل على ‎ZA‏ تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 47 . متوالية ذات رقم هوية ‎HA‏ ‎DIVLTQSPASLAVSLGQRATISCRASESVDSYANSFMHWYQQKPGQPPKL ٠١
LIYRASNLESGIPARFSGSGSRTDFTLTINPVEADDVATYYCQQSKEDPLTF
GSGTKLEMKR divalent ‏وبمزيد من التحديدء يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ‎ ‏للاختراع والذي يطلق عليه اسم‎ la, aw ise ‏أو‎ functional fragment ‎٠٠‏ [224611[]/1062010], على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎lls amino acid sequence‏ ذات رقم هوية 4 , النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة يشتمل على متوالية الحمض ‎١‏ لأميني متوالية ذات رقم هوية 47 , والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YY‏ ‏افر
‎q —_‏ \ _ في التطبيق الحالي, لا يكون استخدام الأقواس المعقوفة ضورياء وكمثال؛ ينبغي اعتبار المرجع ‎Glas [224G11][IgG2chim]‏ ل ‎.224G111gG2chim‏ وبنفس الطريقة؛ للإشارة إلى أن الجسم المضاد فأري؛ أو يكون من الممكن إضافة التعبير فأري أو الحرف ‎m‏ : للإشارة إلى أن الجسم المضاد خيمري, أو يمكن استخدام التعبير خيمري أو إضافة الحرف © و: للإشارة إلى أن 0 الجسم المضاد من البشر, يمكن استخدام التعبير بشري, ‎hz, HZ‏ أو يمكن إضافة الحرف ‎hh‏ ‏وكمثال, يمكن الإشارة إلى الجسم المضاد الخيمري 224611962 ك> ‎¢224G11[lgG2], c[224G11]lgG2, ¢[224G11][lgG2],‏ ,2246111062 ‎224G111gG2chim,‏ ‎224G11[lgG2chim], [224G11]lgG2chim‏ ‎[224G11][lgG2chim] § ٠‏ . في جانب آخر, ‎daily‏ جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤو ‎divalent‏ ‎functional fragment‏ أو مشتق منه, ‎la,‏ للاختراع ويطلق عليه ‎[TH7chim]‏ [224611], على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid‏ 6 متوالية ذات رقم هوية 46 , النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة التي تشتمل على متوالية ‎Vo‏ الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؟, والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YA‏ ‏في التطبيق الحالي, يتعين اعتبار المرجع ‎THT‏ على أنه مطابق ل 0746-9 أو -114170786 9. ويعني الرمز له الحذف. في جانب آخر, ‎daily‏ جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤو ‎divalent‏ ‎functional fragment ٠‏ أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه ‎[224G11] [MHchim]‏ « على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية £7 النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؟, والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎XY‏ ‎tyve‏
=« اذ
في جانب آخر, يشتمل الجسم المضاد المفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً
للاختراع ويطلق عليه ‎[MUP9Hchim]‏ [224611], على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي
‎Ja‏ على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية £7 النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة
‏التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؟, و المنطقة المفصلية التي
‏0 تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YU‏
‏في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثتائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً
‏للاختراع ويطلق عليه ‎[MMCHchim]‏ [224611] , على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي
‎Ja‏ على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية £7 النطاق المتغير ‎ALL‏ الخفيفة
‏التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؟, و المنطقة المفصلية التي ‎٠‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YE‏
‏في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً
‏للاختراع ويطلق عليه ‎[C1]‏ [224611] , على النطاق المتغير ‎ALL‏ الثقيلة التي ‎Jam‏ على
‏متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة التي تشتمل
‏على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؟, و المنطقة المفصلية التي تشتمل على . متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎OA‏
‏في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً
‏للاختراع ويطلق عليه ‎[C2]‏ [224611], على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي ‎Jam‏ على
‏متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ذات رقم هوية $7 النطاق المتغير
‎ALL‏ الخفيفة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؟, و المنطقة ‎٠‏ المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 59.
‏في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً
‏للاختراع ويطلق عليه ‎[C3]‏ [224611] , يشتمل على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي
‎Ja‏ على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية £7 النطاق المتغير ‎ALL‏ الخفيفة
‏الف
و التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؟, و المنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 60. في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافو أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه ‎[224G11] [C5]‏ , على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي تشتمل على © متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية £7 النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؛, و المنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎SY‏ ‏في جانب آخر, جسم ‎alias‏ مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافز ‎divalent functional‏ ‎fragment‏ أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه ‎[C6]‏ [224611], يشتمل على النطاق ‎٠‏ المتغير للسلسلة الثقيلة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎ET‏ ‏النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7"؟, و المنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎SY‏ ‏في جانب آخر, جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه ‎[CT]‏ [224611] , يشتمل على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي تشتمل على ‎Vo‏ متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية £7 النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎acid‏ متوالية ذات رقم هوية 7١؟,‏ و المنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎SY‏ ‏في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه ‎[CI]‏ [224611], يشتمل على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي ‎٠‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎Adige amino acid sequence‏ ذات رقم هوية 81 النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎$Y‏ المنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎UE‏ ‏في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافو أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه [41-3] ‎[224G11]‏ , يشتمل على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي
ال تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 76 , النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؟, و المنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 65. في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤو ‎divalent‏ ‎functional fragment ©‏ أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه [46ه07] [224611] , يشتمل على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57 , النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino‏ ‎Allie acid sequence‏ ذات رقم هوية 7 , و المنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎ST‏ في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه [0649] ‎[224G11]‏ , يشتمل على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 576 , النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؟, و المنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎CTY‏
By ‏.في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافو أو مشتق منه,‎ ٠ ‏للاختراع ويطلق عليه [0245-7] [224611] , يشتمل على النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة‎ ‏التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية £7 النطاق المتغير للسلسلة‎ ‏الخفيفة التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7؟, و المنطقة المفصلية‎
CIA ‏التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية‎ ‎٠‏ في جانب آخر, يشتمل الجسم المضاد المفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه ‎[C5A2-6]‏ [224611], على نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة ‎AE)‏ ‏يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ‎ld‏ رقم هوية 7؛, نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الخفيفة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57 , والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎I‏ py ‏في جانب آخر, يشتمل الجسم المضاد المفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً‎ ‏على نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الثقيلة‎ , [224G11] ]0942-7[ ‏للاختراع ويطلق عليه‎ ,57 ‏متوالية ذات رقم هوية‎ amino acid sequence ‏على متوالية الحمض الأميني‎ Jad ‏نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الخفيفة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية‎
No ‏7؟, والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية‎ 5 divalent ‏في جانب آخر, يشتمل الجسم المضاد المفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ‎ [224G11] ]45-6-7- ‏أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه‎ functional fragment ‏على نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الثقيلة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات‎ ,8[ ‏الخفيفة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية‎ AL ‏رقم هوية 47 , نطاق الصورة المتغيرة‎ ‏والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم‎ EV ‏ذات رقم هوية‎ ٠
NY ‏هوية‎ ‏في جانب آخر, يشتمل الجسم المضاد المفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو مشتق منه, وفقاً‎ ‏على نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الثقيلة‎ , [224G11] [IgG1/1gG2] ‏للاختراع ويطلق عليه‎ ‏رقم هوية 7؛, نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة‎ ld ‏يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية‎ ‏الخفيفة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, والمنطقة المفصلية التي‎ Vo
VY ‏تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية‎ ‏يتكون الجسم المضاد من الاختراع, أو شظية وظيفية ثنائية التكافو أو مشتق منه, على نحو‎ ‏مفضل من جسم مضاد من البشر.‎ ‏على كافة الأجسام المضادة التي‎ "human antibody ‏يشتمل المصطلح “جسم مضاد من البشر‎ ‏على واحد أو أكثر من منطقة الصورة المتغيرة والثابتة المشتقة من متواليات جلوبيولين‎ Jam YL ‏في نموذج مفضل, تكون كافة‎ human immunoglobulin sequences ‏مناعي من البشر‎ ‏نطاقات الصورة المتغيرة والثابتة (أو مناطق) مشتقة من متوالية جلوبيولين مناعي من البشر (جسم‎ ‏مضاد تام من البشر). وبعبارة أخرى, تشتمل على جسم مضاد يشتمل على مناطق الصورة المتغيرة‎ ‏والثابتة (إذا وجدت) المشتقة من متواليات جلوبيولين مناعي لسلالة جرثومية من البشر, أي؛ التي‎ ‏افر‎
— اذ
تحتوي على متوالية حمض أميني ‎amino acid sequence‏ تناظرجسم مضاد منتج بواسطة
البشر و/ أو تم تكوينه بواسطة أي تقنيان صناعة الأجسام المضادة من البشر المعروفة للمتمرس
في الفن.
في أحد النماذج, يتم إنتاج الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ‎monoclonal antibodies‏ من © البشر بواسطة الورم الهجين الذي يشتمل على خلية 8 التي تم الحصول عليها من حيوان من غير
البشر معدل ‎By‏ على سبيل المثالء, ‎DB‏ محور ‎Why‏ يحتوي على جينوم يشتمل على سلسلة
ثقيلة ‎heavy chain‏ من البشر معدلة ‎Wis‏ وجين محور وراثياً لسلسلة خفيفة تم دمجها مع خلية
حية.
كمثال على الفأر المحور ‎iy‏ المذكور, يمكن أن نذكر ‎XENOMOUSETM‏ الذي يكون عبارة
‎٠‏ عن سلالة ‎JB‏ مهندس ‎Why‏ يشتمل على شظايا كبيرة من البشر لأماكن الجلوبيولين المناعي ويتميز بالنقص في إنتاج جسم ‎alias‏ من الفأر ( ‎Green at al., 1994, Nature Genetics,‏ 7:13-1). ينتج ‎de seas XENOMOUSETM‏ بالغة تشبه البشر من الأجسام المضادة التامة من البشر, ويولد مولد ضد محدد الأجسام المضادة من البشر وحيدة النسيلة. يحتوي الجيل الثاني من ‎XENOMOUSETM‏ تقريبًا على ‎ZA‏ من مجموعة جسم مضاد من البشر ( 58 ‎Green‏
‎.(Jakobovits, 1998, J.
Exp.
Med., 188:483-495 ٠ ‏كما يمكن أيضا استخدام أية تقنية أخرى معروفة للمتمرس في الفن, مثل تقنية عرض الملتهمة,‎ ‏لتوليد جسم مضاد من البشر وفقاً للاختراع.‎ divalent functional gall ‏يتكون الجسم المضاد من الاختراع, أو شظية وظيفية ثنائية‎ ‏مشتق منه, من على نحو مفضل جسم مضاد من البشر.‎ J fragment
‎٠‏ . يكون المقصود بالتعبير “جسم مضاد من البشر”, الإشارة إلى جسم مضاد يحتوي على مناطق ‎CDR‏ مشتقة من جسم مضاد من غير البشر, وتكون الأجزاء الأخرى من جزيء الجسم المضاد مشتقة من جسم مضاد واحد (أو العديد من) من البشر. علاوة على ما سبق؛, يمكن تعديل بعض بقايا شظايا الهيكل العظمي (المسماة ‎(FR‏ لكي يمكن عكس ألفة الارتباط :
‏اررق
اج اذ
Jones et al., Nature, 321:522-525, 1986; Verhoeyen et al., Science, 239:1534-1536, 1988; Riechmann et al., Nature, 332:323-327, 1988. ‏يمكن تحضير الأجسام المضادة من البشر وفقاً للاختراع أو شظاياها بواسطة التقنيات المعروفة‎ ‏للمتمرس في الفن (مثلا, على سبيل المثال, تلك الموصوفة في وثائق:‎
Singer et al., J. Immun. 150:2844-2857, 1992; Mountain et al., ©
Bebbington et al., J ;Biotechnol. Genet. Eng. Rev., 10: 1-142, 1992.
Bio/Technology, 10:169-175, 1992 ‏تكون الطرق من البشر الأخرى معروفة للمتمرس في الفن مثلا, على سبيل المثال, طريقة “تطعيم‎ : ‏الموصوفة بواسطة‎ "CDR ‎(Protein Design Lab (PDL ٠‏ في طلبات البراءات الاوروبية ارقام 8131341» و 5177 و ‎TAY ٠8‏ و 0177( او الامريكية ١ح‏ لح و ‎covey‏ و ‎SA‏ مامه و 0197971 يمكن ذكر طلبات البراءات ‎Wad Adal‏ منتأخُ و ‎SOTTATEY Te 0EYAY‏ ‎LOAVYYYAY‏ ‏وبمزيد من التحديد؛ يشتمل الجسم المضاد المذكور, أو شظية ‎fragment‏ وظيفية أو مشتق منه, ‎Yo‏ على نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الثقيلة من البشر لمتوالية تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ذات رقم هوية ؛ أو متوالية تحتوي على الأقل على ‎Ihe‏ ‏تطابق بعد المحاذاة المثتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 4 . متوالية ذات رقم هوية : ‎QVQLVQSGAEVKKPGASVKVSCKASGYIFTAYTMHWVRQAPGQGLEWM‏ ‎GWIKPNNGLANYAQKFQGRVTMTRDTSISTAYMELSRLRSDDTAVYYCAR ٠
SEITTEFDYWGQGTLVTVSS
‏وبمزيد من التحديد؛ يشتمل الجسم المضاد المذكور, أو شظية وظيفية أو مشتق منه, على نطاق‎ ‏من مجموعة متواليات تشتمل على متوالية‎ ES) ‏الصورة المتغيرة للسلسلة الخفيفة من البشر تم‎ ‏باب
!و الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ذات رقم هوية 8, 9 أو ‎٠١‏ أو متوالية تحتوي على الأقل على ‎ZA‏ تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 8, 1 أو ‎١ ٠‏ . متوالية ذات رقم هوية ‎tA‏ ‏ه ‎DIVLTQSPDSLAVSLGERATINCKSSESVDSYANSFMHWYQQKPGQPPKL‏ ‎LIYRASTRESGVPDRFSGSGSRTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPLT‏ ‎FGGGTKVEIKR‏ ‏متوالية ذات رقم هوية 4: ‎DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSESVDSYANSFMHWYQQKPGQPPK‏ ‎LLIYRASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPL ٠‏ ‎TFGGGTKVEIKR‏ ‏متوالية ذات رقم هوية ‎:٠١‏ ‎DIVMTQSPDSLAVSLGERATINCKSSESVDSYANSFLHWYQQKPGQPPKL‏ ‎LIYRASTRESGVPDRFSGSGSGTDFTLTISSLQAEDVAVYYCQQSKEDPLT‏ ‎FGGGTKVEIKR ١٠١‏ وبمزيد من التحديدء يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ ‎divalent‏ ‎functional fragment‏ أو مشتق منه, ‎la,‏ للاختراع ويطلق عليه ‎[224G11] [lgG2Hz1]‏ على نطاق الصورة المتغيرة ‎ALL‏ الثقيلة يشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid‏ ‎Adige SEQUENCE‏ ذات رقم هوية 4, نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الخفيفة يشتمل على متوالية ‎ Y.‏ الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎A‏ والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YY‏ ‏في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤ أو ‎Gide‏ منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه [9621122ا] [224611], على نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الثقيلة افر
الا يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ؛, ‎Glas‏ الصورة المتغيرة للسلسلة الخفيفة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية +, والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YY‏ ‏في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافو أو مشتق منه, وفقاً © للاختراع ويطلق عليه [123ا962ا] [224611], على نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الثقيلة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ؛, نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الخفيفة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎,٠١‏ والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YY‏ ‏في جانب آخر, ‎daily‏ جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤو ‎divalent‏ ‎functional fragment ٠‏ أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه ‎[THTHz1]‏ [224611], على نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الثقيلة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 4 , نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الخفيفة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎A‏ والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YA‏ ‎VO‏ في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافؤو ‎divalent‏ ‎functional fragment‏ أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه [111722] ‎[224G11]‏ ‏على نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الثقيلة يشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid‏ 6 متوالية ذات رقم هوية ‏ , نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة الخفيفة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 9, والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض ‎Ye‏ الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YA‏ ‏في جانب آخر, يشتمل جسم مضاد مفضل, أو شظية وظيفية ثنائية التكافو أو مشتق منه, وفقاً للاختراع ويطلق عليه ‎[THTHZ3]‏ [224611], على نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة ‎AE)‏ ‏يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ؛, نطاق الصورة المتغيرة للسلسلة
ل الخفيفة يشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎,٠١‏ والمنطقة المفصلية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YA‏ ‏في جانب آخر, يمكن وصف الأجسام المضادة من الاختراع بواسطة إجمالي سلسلتها ‎Lah‏ ‏والخفيفة, على التوالي. © وكمثال على ذلك, يشتمل الجسم المضاد ‎[IgG2chim]‏ [224611] من الاختراع على سلسلة ثقيلة ‎heavy chain‏ كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎,٠٠0‏ أو متوالية تحتوي على نسبة 7850 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 00 وسلسلة خفيفة ‎ALIS‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم ‎٠‏ هوية ‎OY‏ ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[THTchim]‏ [224611] من الاختراع على سلسلة ثقيلة ‎ALK heavy chain‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ذات رقم هوية )0 أو متوالية تحتوي على نسبة 7280 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية )0 وسلسلة خفيفة ‎ALIS‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎ae ١‏ ذات رقم هوية 7*, أو متوالية تحتوي على نسبة 2780 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎OF‏ ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[C1]‏ [224611] من الاختراع على سلسلة ثقيلة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎AA‏ أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎AA‏ وسلسلة خفيفة كاملة ‎٠‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, أو متوالية تحتوي على نسبة ‎IAs‏ ‏على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎OF‏ ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[C2]‏ [224611] من الاختراع على سلسلة ثقيلة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 84, أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 84, وسلسلة خفيفة كاملة
وب تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎OF‏ ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[C3]‏ [224611] من الاختراع على سلسلة ثقيلة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 90, أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 0 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 90, وسلسلة خفيفة كاملة
تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ذات رقم هوية 7*, أو متوالية تحتوي على نسبة ‎TAY‏ على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎OY‏ ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[224G11] [C5]‏ من الاختراع على سلسلة ثقيلة ‎heavy‏
‎chain ٠‏ كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 99, أو متوالية تحتوي على نسبة ‎ZA‏ على الأقل تطابق بعد المحاذاة ‎JB‏ مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎AY‏ ‏وسلسلة خفيفة ‎ALIS‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎OF‏ أو متوالية تحتوي على نسبة 780 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎oY‏
‎Vo‏ وكمثال ‎AT‏ , يشتمل الجسم المضاد ‎[224G11] [CO]‏ من الاختراع على سلسلة ثقيلة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 17, أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎AY‏ وسلسلة خفيفة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎OF‏
‎٠‏ وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[CT]‏ [224611] من الاختراع على سلسلة ثقيلة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 17, أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎AY‏ وسلسلة خفيفة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎OF‏ fm heavy ‏من الاختراع على سلسلة ثقيلة‎ [224G11] [CIO] ‏يشتمل الجسم المضاد‎ , AT ‏وكمثال‎ ‏متوالية ذات رقم‎ amino acid sequence ‏تشتمل على متوالية الحمض الأميني‎ ALS chain ‏هوية 14, أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية‎ ‏متوالية ذات رقم هوية 94, وسلسلة خفيفة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات‎ ‏أو متوالية تحتوي على نسبة 72850 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المقلى مع‎ oF ‏رقم هوية‎ 0
OF ‏المتوالية متوالية ذات رقم هوية‎ ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد [41-3] [224611] من الاختراع على سلسلة ثقيلة كاملة‎ 7860 ‏تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 5,90 متوالية تحتوي على نسبة‎ ‏على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 40 وسلسلة خفيفة كاملة‎
IAs ‏تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, أو متوالية تحتوي على نسبة‎ ٠
OF ‏على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية‎ ‏الجسم المضاد [746©] [224611] من الاختراع على سلسلة ثقيلة كاملة‎ daisy ‏وكمثال آخر,‎ 7860 ‏تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 97, أو متوالية تحتوي على نسبة‎ ‏على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 97, وسلسلة خفيفة كاملة‎
IA ‏تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, أو متوالية تحتوي على نسبة‎ ١
OF ‏على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية‎ ‏من الاختراع على سلسلة ثقيلة كاملة‎ ]224611[ [COAT] ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد‎ 7860 ‏تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 97, أو متوالية تحتوي على نسبة‎ ‏وسلسلة خفيفة كاملة‎ AY ‏على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية‎
IAs ‏تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, أو متوالية تحتوي على نسبة‎ ٠
OF ‏على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية‎ ‏من الاختراع على سلسلة ثقيلة‎ ]224611[ [C2A5-T] ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد‎ ‏متوالية‎ amino acid sequence ‏كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني‎ heavy chain ‏ذات رقم هوية 98, أو متوالية تحتوي على نسبة 7280 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع‎
PR
‏وسلسلة خفيفة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني‎ 9A ‏المتوالية متوالية ذات رقم هوية‎ ‏متوالية ذات رقم هوية 27, أو متوالية تحتوي على نسبة 7080 على الأقل تطابق بعد المحاذاة‎
OF ‏المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية‎ ‏من الاختراع على سلسلة ثقيلة‎ ]224611[ [C5A2-6] ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد‎ ‏كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 19, أو متوالية تحتوي على نسبة‎ © ‏على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 99 وسلسلة‎ ٠ ‏خفيفة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 57, أو متوالية تحتوي‎
OF ‏على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية‎ TA ‏على نسبة‎ ‏من الاختراع على سلسلة ثقيلة‎ ]224611[ [COA2-T] ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد‎ ‏متوالية ذات رقم هوية‎ amino acid sequence ‏كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني‎ ٠ ‏مع المتوالية‎ Hall ‏أو متوالية تحتوي على نسبة 72860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة‎ , ‏وسلسلة خفيفة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية‎ ,٠٠١ ‏متوالية ذات رقم هوية‎ ‏ذات رقم هوية 07 أو متوالية تحتوي على نسبة 7280 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع‎
OF ‏المتوالية متوالية ذات رقم هوية‎
AE ‏من الاختراع على سلسلة‎ ]224611[ [A5-6-T-8] ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد‎ ٠ ‏أو‎ ,٠١١ ‏كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية‎ heavy chain ‏متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم‎
OF ‏وسلسلة خفيفة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية‎ ,٠١١ ‏هوية‎ ‏مع المتوالية متوالية ذات‎ all ‏على الأقل تطابق بعد المحاذاة‎ ZA ‏أو متوالية تحتوي على نسبة‎
OY ‏رقم هوية‎ Ye ‏من الاختراع على سلسلة ثقيلة‎ ]224611[ [IgG1/1gG2] ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد‎ ‏متوالية تحتوي على‎ VY ‏كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية‎
NY ‏مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية‎ JB ‏نسبة 7880 على الأقل تطابق بعد المحاذاة‎ ‏متوالية‎ OF ‏تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية‎ ALIS ‏وسلسلة خفيفة‎
وه تحتوي على نسبة 780 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎oY‏ ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[IgG2HZI]‏ ]224611[ من الاختراع على سلسلة ثقيلة ‎ALIS‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎TT‏ متوالية تحتوي على نسبة 0 2806 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 776 وسلسلة خفيفة ‎ALIS‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎of, TA‏ متوالية تحتوي على نسبة ‎٠‏ على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎TA‏ ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[I9G2HZ2]‏ [224611] من الاختراع على سلسلة ‎ald‏ ‎ALIS‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎TT‏ متوالية تحتوي على نسبة ‎7280٠‏ على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 776 وسلسلة خفيفة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ذات رقم هوية 8, أو متوالية تحتوي على نسبة ‎ZA‏ على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎FA‏ ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[IgG2HZ3]‏ [224611] من الاختراع على سلسلة ‎ald‏ ‎heavy chain Yo‏ كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YT‏ متوالية تحتوي على نسبة 780 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎v‏ وسلسلة خفيفة ‎ALK‏ تشتمل على ‎Adige‏ الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 560, أو متوالية تحتوي على نسبة 7860 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 560. ‎٠‏ وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[224G11] [THTHZL]‏ من الاختراع على سلسلة ثقيلة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎TY‏ متوالية تحتوي على نسبة ‎٠‏ على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎TY‏ وسلسلة خفيفة ‎ALIS‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎of, TA‏ متوالية تحتوي على نسبة ‎٠‏ على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎TA‏
اسه وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[224G11] [THTHZ2]‏ من الاختراع على سلسلة ثقيلة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية 7©, أو متوالية تحتوي على نسبة ‎٠‏ على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎TY‏ وسلسلة خفيفة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎TR‏ متوالية تحتوي على نسبة © 280 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎TA‏ ‏وكمثال آخر, يشتمل الجسم المضاد ‎[224G11] [THTHZ3]‏ من الاختراع على سلسلة ثقيلة ‎ALIS heavy chain‏ تشتمل على متوالية الحمض الأميني متوالية ذات رقم هوية ‎YY‏ متوالية تحتوي على نسبة 780 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المتلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية ‎YY‏ وسلسلة خفيفة كاملة تشتمل على متوالية الحمض الأميني ‎amino acid sequence‏ متوالية ‎٠‏ ذات رقم هوية ‎Ee‏ متوالية تحتوي على نسبة 72850 على الأقل تطابق بعد المحاذاة المثلى مع المتوالية متوالية ذات رقم هوية 660 . تشتمل الأمثلة الأخرى للأجسام المضادة, أو المشتقات منه, وفقاً للاختراع على سلاسل ‎AE‏ كاملة تشتمل على متوالية حمض أميني منتقاة من المجموعة التي تتكون من متوالية ذات رقم هوية ‎A‏ ‏إلى ‎٠١١‏ (المناظرة لمتواليات ‎nucleotide‏ وهي المتوالية ذات أرقام الهوية ‎٠١١‏ إلى ‎.)١١١7‏ ‎VO‏ يكون المقصود من “شظية وظيفية ‎functional fragment‏ جسم مضاد وفقاً للاختراع, الإشارة بشكل خاص إلى شظية جسم مضاد, ‎Fv, scFv (sc Jie‏ للسلسلة الفردية) , شظايا ‎Fab,‏ ‎F(ab’)2, Fab’, scFv-Fc‏ أو الأجسام ثنائية التكافؤ, أو أية شظية يزيد زمن عمر النصف لها بواسطة التعديل ‎Jie, Slash‏ إضافة ‎poly (alkylene) glycol‏ مثل ‎poly (ethylene) glycol‏ ‎("PEGylation®)‏ (شظايا معالجة ب ‎PEG‏ المسماة ‎FV—PEG, scFv-PEG, Fab-PEG,‏ ‎F(ab’)2-PEG ٠٠‏ أو ‎(poly(ethylene) glycol "Fab’-PEG) ("PEG‏ أو بواسطة الدمج في حويصلة, تحتوي الشظايا المذكورة على ‎aa)‏ سمات ‎CDRs‏ على الأقل لمتوالية المتوالية ذات أرقام الهوية ‎١‏ إلى 9 ‎os‏ إلى 7 وفقاً للاختراع, و, على نحو خاص, تكون قادرة على إضفاء بطريقة عامة نشاط جزئي من الجسم المضاد الذي تنحدر منه, مثلا على نحو خاص القدرة عل التعرف على والارتباط ب 61/ا-6, و, حسب الحاجة, تثبيط ‎.c—Met Lis‏ افر
على نحو مفضل, يتم تكوين الشظايا الوظيفية المذكورة أو تتضمن متوالية جزئية من السلسلة ‎ALE‏ أو الخفيفة المتغيرة من الجسم المضاد التي اشتقت منه, تكون المتوالية الجزئية المذكورة كافية للاحتفاظ بنفس خصوصية الارتباط ‎Jie‏ الجسم المضاد الذي انحدرت منه وألفة ارتباط كافية, على نحو مفضل على الأقل مساوية ل ‎,٠٠١/١‏ بطريقة مفضلة أكثر مساوية على الأقل ل ‎NN‏ ‏0 من ذلك الجسم المضاد الذي انحدرت منه, فيما يتعلق ب ‎c-Met‏ تحتوي الشظية ‎fragment‏ ‏الوظيفية المذكورة بحد أدنى على © أحماض أمينية ‎amino acids‏ , على نحو مفضل 1, ‎ALY‏ ‎Yo No NY ,١ 4‏ 00 و١١٠٠‏ أحماض أمينية متتالية من متوالية الجسم المضاد الذي ‎jan)‏ منه. على نحو مفضل, تكون هذه الشظايا الوظيفية عبارة عن شظايا من نوع ‎Fv, scFv, Fab,‏ ‎F(ab’)2, F(ab’), 50/-6 1.‏ أو الأجسام ثنائية التكافؤ, التي تحتوي بصفة عامة على نفس خصوصية الارتباط مثل الجسم المضاد الذي انحدرت منه. في نموذج مفضل أكثر من الاختراع, يتم انتقاء هذه الشظايا من بين الشظايا ثنائية التكافو ‎Jie‏ شظايا 5)857(2. ‎Gy‏ للاختراع الحالي, يمكن الحصول على شظايا جسم مضاد من الاختراع بدء من الأجسام المضادة ‎Jie‏ الموصوفة أعلاه بواسطة طرق مثل الهضم بواسطة الإنزيمات, مثل بيبسين أو بابين و/ أو بواسطة انشطار ‎Vo‏ قناطر ثاني كبريتيد ‎disulfide‏ بواسطة الاختزال الكيميائي. وبطريقة أخرى, يمكن الحصول على شظايا الجسم المضاد المتضمنة في الاختراع الحالي بواسطة تقنيات ناتج عودة الاتحاد الجيني ‎genetic recombination‏ المشابهة المعروفة للمتمرس في الفن أو أيضا بواسطة تخليق الببتيد باستخدام, على سبيل المثال, مزج الببتيد آليا ‎Jie‏ تلك المتوفرة بواسطة شركة ‎Applied‏ ‏5 , إلى غير ذلك. ‎Yo‏ يتين أن يكون مفهومًا أن “شظية ثنائية التكافؤ ‎"divalent fragment‏ تشير إلى أي شظايا الجسم المضاد التي تشتمل على فرعين وبمزيد من التحديد؛ شظايا 85:(2)]. يكون المقصود من “مشتقات ‎“derivatives‏ جسم مضاد وفقاً للاختراع, بروتين ربط يشتمل على سلسلة تصاعدية للبروتين ‎binding protein‏ وعلى ‎JN‏ على واحد من ‎CDRs‏ تم اختياره من الجسم المضاد الأصلي لكي يتم الحفاظ على القدرة على الارتباط. تكون المركبات المذكورة معروفة ‎YO‏ جيدا للمتمرس في المجال وسيتم وصفها بمزيد من التفصيل في المواصفة التالية.
اج ¢ — وبمزيد من التحديد؛ يتميز الجسم المضاد, أو إحدى شظاياه الوظيفية أو مشتقاته ‎functional‏ ‎fragments or derivatives‏ , وفقاً للاختراع بأن المشتق المذكور يتكون من بروتين ربط يشتمل على سلسلة تصاعدية تم عليها تطعيم ‎CDR‏ واحد على الأقل لتحويل خواص قريبة من السطح للتعرف على الجسم المضاد الأصلي.
يمكن تقديم متوالية أو عدة متواليات خلال متواليات 6 ‎CDR‏ الموصوفة في الاختراع على سلسلة تصاعدية للبروتين. في هذه الحالة, تعيد سلسلة تصاعدية للبروتين إنتاج عصب البروتين مع مضاعفة مناسبة ل ‎(CDR(s‏ المطعم, وبالتالي تتيح له (أو لهم) الاحتفاظ بخواص التعرف على مولد ضد ‎ing‏ من السمطح . يدرك المتمرس في المجال كيفية اختيار سلسلة تصاعدية للبروتين يمكن تطعيم على الأقل ‎CDR‏
‎٠‏ واحد تم اختياره من الجسم المضاد الأصلي عليها. وبمزيد من التحديد؛ يكون من المعروف أنه, لانتقاء, السلسلة التصاعدية المذكورة يتعين عرض مزايا عديدة مثل ما يلي : ‎:(Skerra A., J.
Mol.
Recogn., 13, 2000, 167-187)‏ - جيدة الحفظ من الناحية السلالية, ‎ -‏ - بنية قوية مع تنظيم جزيئي ثلاثي الأبعاد معروف (مثلا, على سبيل المثال, بلوري ‎crystallography ٠‏ أى ‎(NMR‏ ‏- حجم صغير, - عدم وجود أو أو درجة منخفضة من تعديلات ما بعد الترجمة, - سهولة الإنتاج, التعبير والتنقية. يمكن أن تكون السلسلة التصاعدية للبروتين عبارة عن, على سبيل المثال لا الحصر, بنية تم ‎Yo‏ اختيارها من مجموعة تتكون من 110701661077 وعلى نحو مفضل نطاق نوع ‎fibronectin‏ العاشر ‎Skerra A., J.
Biotechnol., 2001, )anticalin lipocalin (Ill (FNfn10‏ 74(4):257-75(, البروتين ‎Z‏ المشتق من النطاق 8 ل ‎staphylococcal‏ بروتين ‎A‏ ‏افر
— أ ¢ — ‎thioredoxin A‏ أو أي بروتين ذا نطاق متكرر مثل “ ‎ankyrin‏ متكرر” ) ‎Kohl et al.,‏ ‎(PNAS, 2003, vol. 100, No.4, 1700-1705‏ “80018010 متكرر”, “غني بليوسين ‎leucin-rich‏ متكرر” أو ‎Utetratricopeptide”‏ ‎WS‏ يمكن ذكر سلسلة تصاعدية مشتقة من السموم (مثلا, على سبيل ‎JB‏ العقرب, حشر, نبات © أو سموم الرخويات) أو مثبطات البروتين لإنزيم سنثاز أكسيد النيتريك العصبي ‎neuronal nitric‏ ‎.oxyde synthase (PIN)‏ ‎JBS‏ غير مقيد على مثل هذه البنيات الهجينة, يمكن ذكر ‎CDR-HI zh‏ (سلسلة ثقيلة ‎(heavy chain‏ للجسم المضاد ل 004, أي جسم مضاد 1388.2, في إحدى الحلقات المكشوفة ل ل1ا5. تظل خواص الارتباط لبروتين الربط الذي تم الحصول عليه مشابهة للجسم ‎٠‏ المضاد الأصلي )334-344 ,2006 ,343 ‎et al., BBRC‏ 865). كما يمكن ذكر تطعيم ‎CDR-H3‏ (سلسلة_ثقيلة) للجسم المضاد المضاد لجسيم حال ل ‎VHH‏ على حلقة ‎.(Nicaise et al., 2004) neocarzinostatine‏ وفقا لما تم ذكره أعلاه, يمكن أن تتضمن السلسلة التصاعدية للبروتين من ‎١‏ إلى 6 ‎(COR(s‏ من الجسم المضاد الأصلي. في نموذج مفضل, على سبيل المثال لا الحصر, يمكن أن يختار ‎١‏ المتمرس في المجال على الأقل ‎CDR‏ من سلسلة ثقيلة, تكون ‎ALLL‏ الثقيلة المذكورة معروف تضمنيها على نحو خاص في خصوصية الجسم المضاد. يتضح انتقاء ‎(CDR(s‏ المعني للمتمرس في الفن باستخدام الطريقة المعروفة )67-74 ,2001 ,508 ‎.(BES et al., FEBS letters‏ وكدليل على ذلك, لا تكون هذه الأمثلة مقيدة ويتعين أن تكون أية سلسلة تصاعدية أخرى معروفة أو موصوفة مضمنة في المواصفة الحالية. ‎٠‏ وفقًا لجانب جديد, يتعلق الاختراع الحالي بحمض نووي معزول ‎isolated nucleic acid‏ يتميز بأنه قد تم اختياره من الأحماض النووية التالية: 0 حمض نووي ‎DNA ae,‏ أو ‎RNA‏ مشفر لجسم مضاد, أو إحدى شظاياه الوظيفية أو مشتقاته ‎functional fragments or derivatives‏ , وفقاً للاختراع: افر
— ¢ 7 — ب) متوالية الحمض النووي تشتمل على المتواليات متوالية ذات رقم هوية ‎,١١‏ متوالية ذات رقم هوية ‎VY‏ متوالية ذات رقم هوية ‎١١‏ والمتواليات متوالية ذات رقم هوية ‎V0‏ متوالية ذات رقم هوية ج) متوالية الحمض النووي تشتمل على المتواليات متوالية ذات رقم هوية ‎VE‏ ومتوالية ذات رقم
Ye JV 18 ‏هوية‎ 5 2( الأحماض النووية ‎RNA‏ المناظرة للأحماض النووية ‎Gay‏ لتعريفها في ب) أو ج): 2( الأحماض النووية المكملة للأحماض النووية ‎By‏ لتعريفها في أ), ب) وج): و و) حمض نووي يتكون من على الأقل ‎nucleotides YA‏ قادرة على التهجين في ‎Jb‏ ظروف التقشف الشديد باستخدام على الأقل واحد من ‎CDRs‏ لمتوالية المتوالية ذات أرقام الهوية ‎١١‏ إلى ‎0٠‏ 9٠و٠١‏ إلى ‎AY‏ وفقًا لجانب آخر أيضًا, يتعلق الاختراع الحالي بحمض نووي معزول, يتميز بأنه قد تم اختياره من الأحماض النووية التالية: - حمض نووي ‎DNA ae,‏ أو ‎RNA‏ مشفر لجسم مضاد, أو إحدى شظاياه الوظيفية أو مشتقاته, وففًا للاختراع الحالي وحيث يشتمل تشفير متوالية الحمض النووي للمنطقة المفصلية من ‎Vo‏ الجسم المضاد المذكور على أو يحتوي على متوالية منتقاة من المجموعة التي تتكون من المتواليات المتوالية ذات أرقام الهوية ‎Ya‏ إلى ‎Yo‏ والمتوالية ذات أرقام الهوية 77 إلى ‎AY‏ يكون المقصود بحمض نووي, نووي أو متوالية الحمض النووي, ‎polynucleotide‏ ‎,0ligonucleotide‏ متوالية ‎nucleotide polynucleotide‏ متوالية, المصطلحات التي سيتم ‏استخدامها بشكل حيادي في الاختراع الحالي, للإشارة إلى رابطة محددة لذ ‎Nucleotides‏ , معدلة ‎Yo‏ أو غير معدلة, تسمح بتعريف شظية ‎fragment‏ منطقة حمض نووي, تحتوي أو لا تحتوي ‏على ‎nucleotides‏ غير طبيعية, وقادرة على التناظر فقط كذلك مع حمض ‎DNA‏ المجدول ‏المزدوج, حمض ‎DNA‏ المجدول المفرد وكذلك مع منتجات الانتساخ لأحماض ‎DNAS‏ المذكورة. ‏افر
A
‏في بيئة الكروموزومات‎ nucleotide ‏يجب أن يتم هنا فهم أن الاختراع الحالي لا يتعلق بمتواليات‎ ‏لها , أي في الحالة الطبيعية. فهو يتعلق بالمتواليات التي تم‎ natural chromosomal ‏الطبيعية‎ ‏عزلها و/ أو تنقيتها, أي التي تم انتقائها على نحو مباشر أو غير مباشر, على سبيل المثال‎ ‏بواسطة الاستنساخ, وتم تعديل بيئتها بشكل جزئي على الأقل. وبالتالي يكون المقصود بها هنا‎ ‏الإشارة إلى الأحماض النووية المعزولة التي تم الحصول عليه بواسطة ناتج عودة الاتحاد الجيني‎ oo ‏بواسطة, على سبيل المثال, الخلايا العائلة أو التي تم الحصول عليه‎ genetic recombination . chemical synthesis ‏بواسطة التخليق الكيميائي‎ ‏يدل التهجين في ظروف عالية التقشف على اختيار ظروف درجة الحرارة وظروف المقاومة الأيونية‎ ‏مكملتين. وعلى سبيل التوضيح,‎ DNA ‏بطريقة تتيح الحفاظ على التهجين بين شظيتين حمض‎
LBS ‏بغرض تعريف‎ de ‏التهجين على نحو‎ hal andl ‏تكون ظروف_التقشف‎ ٠ ‏الموصوفة أعلاه كما يلي.‎ polynucleotide ‏التهجين المسبق عند‎ )١( ‏على خطوتين‎ DNA-RNA ‏أو‎ DNA-DNA ‏يتم إجراء تهجين حمض‎ ‏ملي‎ Y+) phosphate buffer ‏درجة مثوية لمدة ؟ ساعات في محلول منظم للفوسفات‎ £Y ‏مناظر ل‎ SSC ‏ضعف‎ ١( SSC ‏يحتوي على © ضعف‎ (Vio pH ‏مولار, الرقم الهيدروجيني‎ ‏لا‎ , formamide ‏م من‎ ©. ,) 50010 citrate ‏مولار محلول‎ «0 V0 + NaCl ‏مولار‎ ..١# Vo dextran sulfate 7 ‏ه‎ Denhardt’s ‏ضعف‎ ٠١ ¢ sodium dodecyl sulfate (SDS) A ‏ساعة عند ردجة‎ ٠١ ‏التهجين الفعلي لمدة‎ (Y) salmon ‏للحيونات المنوية‎ DNA ‏حمض‎ 7 ١و‎ (nucleotides ٠٠١ > ‏درجة مئوية, لحجم مسابار‎ £Y ‏حرارة تعتمد على حجم المسبار (أي:‎ ‏درجة مئوية في 7 ضعف 2 + 7550 من‎ 7١ ‏دقيقة عند‎ ٠١0 ‏يلي ذلك عمليتي غسل لمدة‎ 2 ov.) + 550 ‏درجة مئوية في ).+ ضعف‎ ٠١0 ‏دقيقة عند‎ ٠١0 ‏لمدة‎ Jue ‏عملية‎ ,505 ٠ 3١ ‏لمدة‎ SDS ‏من‎ 7 +.) + SSC ‏يتم إجراء عملية الغسل الأخيرة في )+ ضعف‎ .5 ‏يمكن تهيئة ظروف التهجين‎ . nucleotides ٠٠١ > ‏لحجم مسبار‎ digi ‏درجة‎ ٠١ ‏دقيقة عند‎ ‏ذا حجم معروف بواسطة المتمرس في‎ polynucleotide ‏ذات التقشف المرتفع المذكورة أعلاه ل‎ : ‏الأكبر أو الأصغر حجمًا, وفقًا للقواعد المذكورة في‎ nucleotides ‏الفن لأوليجو‎ ‏افر‎
Sambrook et al. (1989, Molecular cloning: a laboratory manual. 2nd Ed.
Cold Spring Harbor. ‏تعبير يشتمل على حمض نووي وفقًا للاختراع الحالي.‎ Bly ‏يتعلق الاختراع على نحو مماثل‎ ‏التي تحتوي على‎ vectors ‏يهدف الاختراع على نحو خاص إلى استنساخ و/ أو نواقل التعبير‎ ‏وفقاً للاختراع.‎ nucleotide ‏متوالية‎ © ‏من الاختراع على نحو مفضل على عناصر تسمح بالتعبير عن‎ vectors ‏تحتوي نواقل التعبير‎ ‏في خلية عائلة محددة. من ثم يجب أن يحتوي ناقل التعبير‎ nucleotide ‏و / أو إفراز متواليات‎ ‏نطاقات تضبيط نسخ ملائمة. يجب أن يمكن‎ Sl , ‏على معزز, إشارات بدء وانهاء الترجمة‎ ‏الاحتفاظ به بصو )3 مستقرة في الخلية العائلة وقد يحتوي اختيارياً على إشارات محددة تحدد إفراز‎ ‏البروتين المترجم. يتم انتقاء العناصر المتنوعة وتطويرها بواسطة المتمرس في المجال وفقاً للخلية‎ ٠ vectors ‏في نواقل التعبير‎ nucleotide ‏العائلة المستخدمة. ولهذا الغرض, يمكن إدراج متواليات‎ ‏للعائل المنتقى.‎ vectors ‏ذات النسخ الذاتي داخل العائل المنتقى أو دمجها في نواقل التعبير‎ ‏المذكورة بواسطة الطرق المستخدمة نمطياً بواسطة المتمرس‎ vectors ‏يتم تحضير نواقل التعبير‎
Jie ‏في المجال ويمكن إدخال الاستنساخات الناتجة في عائل مناسب بواسطة الطرق القياسية‎ .chemical methods ‏فكتين دهني, أو استشراد كهربائي, أو الصدمة الحرارية أو طرق كيميائية‎ ٠ ‏عبارة عن نواقل التعبير للبلازميد أو ذات‎ (JB ‏تكون نواقل التعبير وفقاً للاختراع, على سبيل‎ ‏من أجل استساخ أو التعبير عن متواليات‎ Ak ‏أصل فيروسي. يتم استخدامها لنقل الخلايا‎ ‏من الاختراع.‎ nucleotide ‏بواسطة‎ host cells transformed ‏يشتمل الاختراع بطريقة مماثلة على الخلايا العائلة المنقولة‎ ‏أو المشتملة على ناقل تعبير وفقا للاختراع الحالي.‎ ٠ prokaryotic or ‏يمكن انتقاء الخلية العائلة من بين أنظمة حقيقية النواة أو أولية النواة‎ ‏على سبيل المثال الخلايا البكتيرية, ولكن أيضاً خلايا الفطر أو الخلايا‎ « eukaryotic systems ‏الحشرات أو النبات.‎ WIA ‏الثدييات. كما يمكن أيضاً استخدام‎ WDA ‏الحيوانية, على نحو ملحوظ‎ ‏اررق‎
ير - يتعلق الاختراع الحالي أيضاً بالحيوانات, غير الإنسان, التي لها خلية متحولة وفقاً للاختراع. يتعلق جانب آخر من الاختراع بطريقة لإنتاج الجسم المضاد وفقاً للاختراع» أو أحد شظاياه الوظيفية وفقا للاختراع, ويتميز بأنه يشتمل على الخطوات التالية: ‎(I‏ الزراعة في وسط من وظروف الزراعة المناسبة لخلية عائلة وفقاً للاختراع: و 0( استرجاع الأجسام المضادة المذكورة, أو أحد شظاياها الوظيفية, المنتجة من وسط مزرعة أو من الخلايا المزروعة المذكورة. يتم استخدام الخلايا المتحولة وفقاً للاختراع في طرق لتحضير ‎polypeptide‏ ناتج عودة الاتحاد الجيني ‎genetic recombination‏ وفقاً للاختراع. ‏ يتم أيضا ‎ana‏ طرق لتحضير ‎polypeptides‏ وفقاً للاختراع في صورة ناتج عودة الاتحاد الجيني, تتميز بأن الطرق المذكورة ‎٠‏ تستخدم ناقل تعبير و / أو خلية متحولة بواسطة ناقل تعبير وفقاً للاختراع؛ في الاختراع الحالي. على نحو مفضل, تتم زراعة خلية متحولة بواسطة ناقل تعبير وفقاً للاختراع في ظل ظروف تسمح لناقل التعبير بالتعبير عن ‎polypeptides‏ المذكور سابقاً واسترجاع ببتيد ناتج عودة الاتحاد الجيني المذكور. وفقا لما تم ‎Ll oS)‏ يمكن انتقاء الخلية العائلة من بين ‎Adal‏ حقيقية النواة أو أولية النواة ‎prokaryotic or eukaryotic systems ١٠‏ . على نحو خاص, يكون من الممكن تعريف متواليات ‎nucleotide‏ من الاختراع التي تعمل على تسهيل الإفراز في النظام المذكور حقيقي النواة أو أولي النواة. بالتالي يمكن استخدام ناقل التعبير وفقاً للاختراع الحامل للمتوالية المذكورة على نحو مفيد لإنتاج بروتينات ناتج عودة الاتحاد الجيني ‎genetic recombination‏ التي سيتم إفرازها. بالفعل, يمكن تسهيل تنقية بروتينات ناتج عودة الاتحاد الجيني محل الاهتمام نظراً لحقيقة ‎٠‏ تواجدها في المحلول الطافي لمزرعة الخلايا بدلا من داخل الخلايا العائلة. كما يمكن أيضاً تحضير ‎polypeptides‏ من الاختراع بواسطة التخليق الكيميائي ‎chemical‏ ‎synthesis‏ تعد الطريقة المذكورة للتحضير من الموضوعات الموافقة للاختراع. يدرك المتمرس في المجال طرق للتخليق الكيميائي, مثل تقنيات طور المادة الصلبة (انظر على نحو خاص ‎Steward et al., 1984, Solid phase peptides synthesis, Pierce Chem.‏ افر
_— \ جم ‎(.Company, Rockford, 111, 2nd ed‏ أو تقنيات طور مادة صلبة جزئياً, بواسطة تكثيف الشقوق أو بواسطة التخليق التقليدي في المحلول. يتم ضم ‎polypeptide‏ ات التي تم الحصول عليها بواسطة التخليق الكيميائي والقادرة على الاحتواء على أحماض أمينية ‎amino acids‏ غير طبيعية مناظرة في الاختراع. © يشتمل الاختراع الحالي أيضا على الأجسام المضادة, أو المشتقات أو الشظايا الوظيفية منها, التي يمكن الحصول عليها بواسطة العملية من الاختراع. كما يتعلق الاختراع أيضا بالجسم المضاد من الاختراع كعقار. يتعلق الاختراع الحالي أيضاً بتركيبة صيدلانية تشتمل على مكون نشط من مركب يشتمل على الجسم المضاد من الاختراع؛ أو شظية ‎fragment‏ وظيفية ‎locale‏ نحو مفضل, يكون الجسم ‎٠‏ المضاد المذكور مختلط مع بسواغ ‎excipient‏ و/أو مادة حاملة مقبولة صيدلانياً. يتكون نموذج تكميلي آخر من الاختراع من تركيبة ‎Jia‏ تلك الموصوفة ‎lad‏ سبق تشتمل, علاوة على ما سبق؛ على منتج توليفة للاستخدام المتزامن, المنفصل أو التسلسلي, لجسم مضاد للورم ‎.anti-tumoral antibody‏ على أفضل نحو, يمكن انتقاء الجسم المضاد للورم الثاني المذكور من خلال الجسم المضاد ل ‎[IGF-IR Vo‏ الجسم المضاد ل ‎[EGFR‏ الجسم المضاد ل 15842/080, الجسم المضاد ل ‎VEGFR‏ الجسم المضاد ل ‎VEGF‏ إلى غير ذلك, من الأجسام المضادة أو أي الأجسام المضادة للورم الأخرى المعروفة للمتمرس في المجال. يكون من الواضح أن استخدام, في صورة جسم مضاد ثاني, الشظايا الوظيفية أو المشتقات من الأجسام المضادة المذكورة يعد جزء من الاختراع. ‎٠‏ وكجسم مضاد مفضل, يتم اختيار الأجسام المضادة ل ‎EGFR‏ مثلا على سبيل المثال الجسم المضاد 0225 ‎.(Erbitux)‏ ‏يكون المقصود من "الاستخدام المتزامن 156 ‎"Separate‏ إعطاء كلا المركبين من التركيبة وفقاً للاختراع في صورة ‎EN‏ فريدة أو مطابقة للصورة الصيد لانية .
— \ جم
يكون المقصود من "الاستخدام المنفصل" إعطاء؛ في نفس التوقيت؛ كلا المركبين من التركيبة وفقاً للاختراع في صورة ‎Badia EN‏ يكون المقصود من "الاستخدام التسلسلي ‎Sequential use‏ " الإعطاء المتتالي لكل من المركبين من التركيبة وفقاً للاختراع» كل منهما في صورة جرعة صيدلانية متميزة.
بصورة عامة, تعمل التركيبة من الاختراع على زيادة فعالية علاج السرطان على نحو ملحوظ. وبعبارة أخرى, يتمة تحفيز الأثر العلاجي للأجسام المضادة ل ‎c-Met‏ وفقاً للاختراع بطريقة غير متوقعة عن طريق إعطاء عامل سام للخلايا. وتتعلق ميزة أخرة تالية تنتج عن التركيبة من الاختراع بإمكانية استخدام جرعات أقل فعالية من المربك النشط, تسمح بتجنب مخاطر ظهور الآثار الثانوية أو خفضها, على نحو خاص آثار العامل السام للخلايا.
‎٠‏ علاوة على ما سبق, تجعل هذه التركيبة من الاختراع من الممكن تحقيق التأثير العلاجي المتوقع كما تتميز التركيبة من الاختراع بأنها تشتمل على, علاوة على ما ‎(Baw‏ منتج توليفة للاستخجام المتزامن, المنفصل أو التسلسلي | لعامل سام للخلايا/قاتل للخلايا ‎.cytotoxic agent‏ يكون المقصود من “عوامل علاجية مضاد للسرطان ‎"anti-cancer therapeutic agents‏ أو
‎Vo‏ “عوامل سامة للخلايا/قاتلة للخلايا ‎“cytotoxic/cytostatic agents‏ مادة عند إعطائها لمريض, تعمل على علاج أو منع تطور السرطان في جسم المريض. تشتمل الأمثلة غير المقيدة لهذا العامل على عوامل “الكلة ‎alkylating agents‏ “, مضادات الأيض ‎,anti—-metabolites‏ ‏أجسام مضادة للورم ‎anti-tumor antibiotics‏ متبطات التفتل ‎mitotic Mitotic inhibitors‏ ‎inhibitors‏ مثبطات وظائف كروماتين ‎,chromatin function inhibitors‏ عوائنل مضادات
‎٠‏ تخلق الأوعية ‎;anti—angiogenesis agents‏ مضاد الإستروجين ‎,anti-estrogens‏ مضاد أندروجين ‎anti-androgens‏ ومعدلات مناعية ‎.immunomodulators‏ ‏يتم ذكر العوامل المذكورة, على سبيل المثال»؛ في ‎edition of VIDAL‏ 2001, في الصفحة المخصصة للمركبات المتعلقة بعلم دراسة الأورام وأمراض الدم تحت عنوان ‎"Cytotoxic‏ تكون
‏افر
-." جم المركبات السامة للخلايا المذكورة بالرجوع إلى هذا المستند مذكورة في الطلب الحالي كعوامل سامة للخلايا مفضلة. وبمزيد من التحديدء تكون العوامل التالية مفضلة وفقًا للاختراع. يشير “عامل ألكلة” إلى أية مادة ترتبط تساهمياً مع أو يمكنها ألكلة أي جزيء, على نحو تفضيلي © حمض نووي (على سبيل المثال, حمض ‎(DNA‏ , داخل الخلية. تشتمل أمثلة عوامل الألكلة المذكورة على خردلات النيتروجين ‎nitrogen mustard‏ مثل : ‎mechlorethamine, chlorambucol, melphalen, chlorydrate, pipobromen,‏ ‎prednimustin, disodic-phosphate or estramustine; oxazophorins‏ مثل : ‎cyclophosphamide, altretamine, trofosfamide, sulfofosfamide or ifosfamide; ٠‏ ‎aziridines or imine—ethylenes‏ مثل : ‎thiotepa, triethylenamine or altetramine; nitrosourea‏ مثل : ‎carmustine, streptozocin, fotemustin or lomustine; alkyle —sulfonates‏ مثل : ‎dacarbazine; or : (fix busulfan, treosulfan or improsulfan; triazenes‏ ‎cis—platinum, oxaliplatin and carboplatin : (igplatinum complexes yo‏ . يشير “مضاد الأيض ‎anti-metabolites‏ ” إلى المادة التي تمنع نمو و / أو أيض الخلايا عن طريق التداخل مع أنشطة محددة, على نحو عام تخليق حمض ‎DNA‏ تشتمل أمثلة مضاد الأيض ‎anti-metabolites‏ على : ‎methotrexate, S—fluoruracil, floxuridine, 5S—fluorodeoxyuridine, capecitabine,‏ ‎cytarabine, fludarabine, cytosine arabinoside, 6-mercaptopurine (6-MP), ٠‏ ‎6-thioguanine (6-TG), chlorodesoxyadenosine, 5-azacytidine,‏ ‎gemcitabine, cladribine, deoxycoformycin and pentostatin.‏ ‎Eye‏
_ جم يشير “مضاد حيوي ‎alias‏ للورم ‎anti-tumor antibiotics‏ ” إلى مركب يمكنه منع أو تثبيط تخليق حمض و / أو _بروتينات ‎.DNA, RNA‏ تشمل أمثلة المضادات الحيوية المضادة للورم على : doxorubicin, daunorubicin, idarubicin, valrubicin, mitoxantrone, dactinomycin, mithramycin, plicamycin, mitomycin C, bleomycin, and © procarbazine. تمنع “مثبطات التفتل ‎Mitotic inhibitors‏ ” التقدم الطبيعي لدورة الخلية وتخلق التفتل. بصفة عامة, تكون مثبطات الإنبيب ‎microtubule inhibitors‏ أو “شبيهات السميات ‎"taxoides‏ مثل
Vinca ‏قادرة على تثبيط تخلق الفتائل. شبيهات القلويات فنكا‎ paclitaxel and docetaxel ‏أيضاً قادر‎ ,cwvinblastine, vincristine, vindesine and vinorelbine ‏متل‎ alkaloid ٠ على تثبيط تخلق الفتائل. تكون “مثبطات وظيفة كروماتين ‎chromatin function inhibitors‏ 7 أو “مثبطات 0686© مواد تعمل على تثبيط الوظائف الطبيعية للبروتينات التي تشكل ‎chromatin‏ topoisomerase | or ‏اوا ا. تشتمل أمثلة المتبطات المذكورة على,‎ topoisomerase ‏مثل‎ , topoisomerase ١٠ etoposide, etoposide ‏ومشتقاته, مل‎ topoisomerase ١١ Yo .phosphate and teniposide “مضاد الجينات الوعائية” عبارة عن عقار, مركب, مادة أو عامل مثبط لنمو الأوعية الدموية. تشتمل أمثلة مضادات الجينات الوعائية على, على سبيل المثال لا الحصر : razoxin, marimastat, batimastat, prinomastat, tanomastat, ilomastat, CGS- 27023A, halofuginon, COL-3, neovastat, BMS-275291, thalidomide, CDC Y. 501, DMXAA, L-651582, squalamine, endostatin, SU5416, 56668 interferon-alpha, EMD121974, interleukin—-12, IM862, angiostatin and vitaxin.
Eye
يشير “مضاد إستروجين ‎"anti-estrogenic‏ أو “مضاد إستروجين ‎"anti-estrogenic‏ إلى أية مادة تعمل على خفض , تضاد أو تثبيط عمل 800009©60. تشتمل أمثلة هذه العوامل على : ‎tamoxifen, toremifene, raloxifene, droloxifene, iodoxyfene, anastrozole,‏ ‎letrozole, and exemestane.‏ © يشير “مضاد أندروجين ‎"anti-androgens‏ أو “مضاد أندروجين ‎"antiandrogen‏ إلى أية مادة تعمل على خفض, تضاد أو تثبيط عمل ‎androgens‏ تشتمل أمثلة مضادات أندروجين 2011-2005 على : ‎flutamide, nilutamide, bicalutamide, sprironolactone, cyproterone acetate,‏ ‎finasteride and cimitidine.‏ ‎٠‏ المعدلات المناعية ‎Sle‏ عن مواد تحاكي النظام المناعي. تشتمل أمثلة المعدلات المناعية على ‎aldesleukine, 0601-43, denileukin diflitox and (i interferon, interdeukin‏ ‎interleukin-2, tumoral necrose fators‏ مثل ‎tasonermine‏ أو أنواع أخرى من المعدلات المناعية ‎sizofiran, roquinimex, pidotimod, pegademase, (Jiu‏ , ‎levamisole thymopentine, poly ٠:6‏ في توليفة مع ‎.S-fluorouracil‏ ‎Vo‏ للحصول على تفاصيل إضافية, يمكن للمتمرس في الفن الرجوع إلى الدليل المنشور بواسطة ‎"Association Francaise des Enseignants de Chimie Thérapeutique®‏ بعنوان ‎Traité de chimie thérapeutique”, vol. 6, Médicaments antitumoraux et “‏ ‎.perspectives dans le traitement des cancers, edition TEC & DOC, 2003‏ يمكن أيضا ذكر كاتفة مثبطات إنزيم ‎kinase‏ كعوامل كيميائية أو عوامل سامة للخلايا, مثتل, على ‎Yo‏ سبيل المثال, ‎.gefitinib or erlotinib‏ في نموذج مفضل على نحو خاص, تكون التركيبة المذكورة من الاختراع كمنتج توليفة من الاختراع وتتميز بأن العامل السام للخلايا المذكور يكون مرتبط كيميائياً بالجسم المضاد المذكور للاستخدام المتزامن. ب
‎h —_‏ جم لتسهيل الارتباط بين عامل سام للخلايا والجسم المضاد وفقاً للاختراع» يمكن إدخال جزيئات مباعدة بين المركبين لربط, ماد ‎poly(alkylene) glycols‏ بي ‎polyethylene glycol‏ أو الأحماض الأمينية: أو, في نموذج آخر, يمكن استخدام المشتقات النشطة للعوامل السامة للخلايا المذكورة, حيث تم إدخال وظائف قادرة على التفاعل مع الجسم المضاد المذكور فيها. تكون تقنيات © الارتباط المذكورة معروفة جيداً للمتمرس في المجال ولن تخضع للمناقشة بالتفصيل في إطار
‏الوصف الحالي. يتعلق جانب آخر من الاختراع بتركيبة ويتميز بدمج أحد الأجسام المضادة على الأقل, أو مركبات أو شظايا وظيفية مشتقة منه, أو إقرانه ب 10*19 للخلايا ‎cell toxin‏ / أو عنصر إشعاعي ‎.radioelement‏
‎Vs‏ على نحو مفضل, يكون ‎toxin‏ أو العنصر الإشعاعي ‎radioelement‏ المذكور قادر على تثبيط نشاط خلية واحدة على الأقل من الخلايا المعبرة عن ‎c-Met‏ ؛ وبطريقة مفضلة أكثر قادر على منع نمو أو تكاثر الخلية المذكورة. على نحو ملحوظ تثبيط الخلية المذكورة على نحو تام. أيضاً على نحو مفضل, يكون ‎toxin‏ المذكور عبارة عن ‎LES toxin‏ معوية ‎enterobacterial toxin‏ , على نحو ملحوظ ‎.Pseudomonas exotoxin A‏
‎Yo‏ تكون النظائر الإشعاعية (أو الأنواع المناظرة الإشعاعية) مدمجة على نحو تفضيلي مع الأجسام المضادة العلاجية عبارة عن أنواع مناظرة إشعاعية تنبعث منها أشعة جاما, على نحو ‎Anni‏ ‎gold199, palladium100, copper67, bismuth217 and‏ ,0090لا ‎iodine131,‏ ‎LS antimony 211‏ يمكن أيضاً استخدام الأنواع المناظرة الإشعاعية التي تبعث أشعة الفا وبيتا في العلاج.
‎Yo‏ يشير “10*10 أو ‎pall‏ المناظر الإشعاعي المتحد مع جسم ‎alias‏ واحد على الأقل من الاختراع, أو شظية وظيفية منه” إلى أي الوسائل التي تجعل من الممكن ربط ‎toxin‏ أو النوع المناظر الإشعاعي المذكور بجسم مضاد واحد على الأقل, على نحو ملحوظ باستخدام ارتباط متآزر بين المركبين, مع أو بدون إدخال جزيء الربط.
— 7 جم تشتمل أمثلة العوامل التي تسمح بالارتباط الكيميائي (التساهمي)؛ أو الثابت ‎giles‏ ‏التساهمي لجميع أو جزء من عناصر ‎(GHA‏ على وجه الخصوص؛ ‎benzoquinone,‏ ‎carbodiimide‏ وبمزيد من التحديد : ‎EDC (1-ethyl-3-[3-dimethyl-aminopropyl]-carbodiimide hydrochloride),‏ ‎dimaleimide, dithiobis—nitrobenzoic acid (DTNB), N-succinimidyl S-acetyl ©‏ ‎thio—acetate (SATA),‏ وعوامل ‎ae plaid‏ واحدة أو أكثر من المجموعات؛ مع واحدة أو أكثر من مجموعات ‎cphenylazide‏ وتتفاعل مع أشعة فوق البنفسجية ‎eg (UV)‏ أفضل نحو : ‎N-[-4-(azidosalicylamino)butyl]-3’~(2’-pyridyldithio)-propionamide‏ ‎(APDP), N-succinimid-yl 3—(2-pyridyldithio)propionate (SPDP), 6- 1.‏ ‎hydrazino-nicotinamide (HYNIC).‏ ويمكن أن تتكون صورة أخرى من الارتباط» على نحو خاص للنظائر المشعة؛ من استخدام عوامل خالبة لأيون ثنائي الوظيفة. وتتشمل الأمثلة على العوامل الخالبة المذكورة على العوامل الخالبة المشتقة من : ‎EDTA (ethylenediaminetetraacetic acid) or from DTPA Yo‏ ‎(diethylenetriaminepentaacetic acid)‏ التي تم ابتكارها لربط المعادن؛ وعلى وجه الخصوص المعادن المشعة؛ بالجلوبيولينات المناعية. وبالتالي؛ يمكن استبدال ‎DTPA‏ ومشتقاتها على سلسلة الكربون بمجموعات متنوعة بطريقة معينة بحيث تتم زيادة ثبات وصلابة معقد المركب الترابطي - الفلز :1977 ‎(Krejcarek et al.,‏
.Brechbiel et al., 1991; Gansow, 1991; US patent 4,831,175) ٠ ‏ومشتقاتها؛ والتي‎ diethylenetriaminepentaacetic acid (DTPA) ‏على سبيل المثال؛‎ ‏كانت مستخدمة منذ أمد بعيد على نحو واسع في العقار والبيولوجيا إما في صورتها الحرة أو في‎ ‏بحيث تظهر خواص مميزة ملحوظة لتشكيل خلبيات ثابتة مع أيونات الفلز التي‎ «Jl ‏معقد مع أيون‎
ب
‎A —_‏ جم يمكن اقترانها مع بروتينات ذات أهمية علاجية أو تشخيصية؛ ‎Jie‏ الأجسام المضادة؛ لتكوين مترافقات مشعة مناعية لعلاج السرطان )1990 ‎.(Meases et al., 1984; Gansow et al.,‏ على نحو مفضل أيضاء يتم انتقاء الجسم المضاد من الاختراع المذكور الواحد على الأقل الذي يشكل المترافق المذكور من بين شظاياه الوظيفية؛ ولاسيما الشظايا التي فقدت مكون © الخاص © بهاء مثل ‎scFv Las‏
‏وفقا لما تم ذكره بالفعل, في نموذج مفضل من الاختراع, يقترن العامل السام للخلايا / العامل القاتل للخلايا المذكور أو ‎toxin‏ المذكور و/ أو النظير المشع كيميائيًا بعلى الأقل أحد نظائر التركيبة المذكورة للاستخدام المتزامن.
‏يشتمل الاختراع الحالي على التركيبة الموصوفة كعقار.
‎٠‏ يشتمل الاختراع الحالي علاوة على ما سبق على استخدام التركيبة وفقاً للاختراع لتحضير عقار. في جانب آخر, يتعلق الاختراع باستخدام جسم مضاد, أو إحدى شظاياه الوظيفية أو مشتقاته ‎functional fragments or derivatives‏ , و/ أو التركيبة وفقا لما تم وصفه أعلاه لتحضير عقار يهدف إلى تثبيط نمو و/ أو تكاثر خلايا الورم. يتعلق جانب آخر من الاختراع باستخدام جسم مضاد, أو إحدى شظاياه الوظيفية أو مشتقاته و/ أو
‎١‏ التركيبة, وفقا لما تم ذكره ‎Led‏ سبق أو الاستخدام المذكور آنفا, لتحضير عقار لمنع أو علاج كما يشتمل الاختراع الحالي أيضا على طريقة لتثبيط نمو و/ أو تكاثر خلايا الورم في مريض وحيث تشتمل الطريقة على إعطاء جسم مضاد أو إحدى شظاياه الوظيفية أو مشتقاته وفقاً للاختراع, إلى مريض في حاجة إليه, وهو جسم مضاد منتج بواسطة الورم الهجين وفقا للاختراع أو
‎٠‏ تركيبة وفقاً للاختراع. كما يشتمل الاختراع الحالي أيضا على طريقة لمنع أو علاج السرطان في مريض به, تشتمل على إعطاء جسم مضاد, أو إحدى شظاياه الوظيفية أو مشتقاته وفقاً للاختراع, إلى مريض»؛ وهو الجسم المضاد المنتج بواسطة الورم الهجين وفقاً للاختراع أو تركيبة وفقاً للاختراع.
‎q —‏ جم في جانب مفضل على نحو خاص» تكون أورام السرطان المذكورة عبارة عن تلك التي تم اختيارها من سرطان البروستاتا ‎prostate cancer‏ ؛ أو ورم سرطان العظام ‎osteosarcomas‏ « أو سرطان الرئة ‎lung cancer‏ ؛ أو سرطان ‎breast cancer all‏ ؛ أو سرطان بطانة الرحم ‎cendometrial cancer‏ أو ورم نخاعي متعدد؛ أو سرطان ‎(andl‏ أو سرطان القولون. وفي © جانب مفضل خاص؛ يكون السرطان المذكور عبارة عن سرطان تم اختياره من سرطان البروستاتا ‎prostate cancer‏ » أو ورم سرطاني عظمي 05160805 + أو سرطان الرئة ‎lung‏ ‎cancer‏ « أو سرطان الثدي ‎breast cancer‏ ؛ أو سرطان بطانة الرحم ‎endometrial‏ ‎«cancer‏ أو سرطان ورم أرومي دبقي ‎glioblastoma‏ أو سرطان القولون ‎.colon cancer‏ وفقا لما تم شرحه فيما سبق, تكمن ميزة الاختراع في إتاحة علاج أنواع السرطانات المعتمدة وغير ‎٠‏ المعتمدة على ‎HGF‏ وذات الصلة بتنشيط ‎Met‏ ‏ينطوي الاختراع؛ في جانب ‎AT‏ كذلك؛ على طريقة تشخيص للمرض في المعمل والمحفز بواسطة التعبير المفرط أو التعبير المنخفض عن المستقبل ‎ee c-Met‏ العينة البيولوجية والتي يشتبه وجود غير طبيعي للمستقبل ‎Cua, c-Met‏ تتميز الطريقة المذكورة بأنها تشتمل على خطوة حيث تتلامس العينة البيولوجية المذكورة مع جسم مضاد من الاختراع, ويكون من الممكن ترقيم الجسم ‎Yo‏ المضاد المذكور , حسب الضرورة. على نحو مفضل, تكون الأمراض المذكورة المتصلة بوجود غير طبيعي لمستقبل ‎C-Met‏ في طريقة التشخيص المذكورة عبارة عن سرطانات. يمكن أن يكون الجسم المضاد المذكورء أو شظية ‎fragment‏ وظيفية ‎dle‏ في صورة مترافق مناعي أو جسم مضاد مرقم من أجل الحصول على إشارةٍ ‎ALE‏ للكشف و / أو ‎ALE‏ للتحديد ‎٠‏ -_ الكمي. تشتمل الأجسام المضادة المرمزة من الاختراع» أو شظايا وظيفية منهاء على سبيل ‎Jal‏ على مترافقات الجسم المضاد (المترافقات المناعية)؛ التي يمكن دمجهاء؛ على سبيل المثال؛ مع الإنزيمات مثل إنزيم فوق أكسيد ‎peroxidase‏ « وانزيم فوسفاتاز قلوي ‎alkaline phosphatase‏ ؛ وأنزيم ‎beta—D-galactosidase‏ « أو إنزيم ‎glucose oxydase‏ « أو إنزيم ‎glucose‏ ‏افر
‎-1١ «=‏ ‎amylase‏ » أو إنزيم ‎carbonic anhydrase‏ « أو إنزيم ‎acetylcholinesterase‏ ؛ أو جسم حال؛ أو إنزيم ‎malate dehydrogenase‏ أى ‎glucose 6-phosphate dehydrogenase‏ أو بواسطة جزيء مثل ‎.biotin, digoxygenin or 5-bromodeoxyuridine‏ يمكن دمج مرقمات التألق الفلوري مع الأجسام المضادة وفقاً للاختراع أو الشظايا الوظيفية منهاء بما في ذلك © على ‎aay‏ التحديد ‎fluorescein‏ ومشتقاته؛ وحامل اللونء و ‎rhodamine‏ ومشتقاته؛ وبروتين
‏التألق الفلوري الأخضر ‎dansyl, umbelliferone (GFP)‏ ؛ الخ. في مثل هذه المترافقات؛ يمكن تحضير الأجسام المضادة وفقاً للاختراع أو الشظايا الوظيفية منها بواسطة طرق معروفة لدى الشخص المتمرس في المجال. ويمكن ارتباطها بالإنزيمات أو مرقمات التألق الفلوري مباشرة؛ عن طريق مجموعة أو مجموعة ارتباط مثل :
‎polyaldehyde, like glutaraldehyde, ethylenediaminetetraacetic acid (EDTA), ٠ diethylene-triaminepentaacetic acid (DPTA) ‏؛ أو في وجود عوامل ارتباط مثل تلك المذكورة فيما سبق للمترافقات العلاجية. ويمكن‎ (DPTA) ‏بواسطة التفاعل مع‎ fluorescein ‏تحضير المترافقات التي تحمل المرقمات المتألقة فلوريا‎ .Isothiocyanate
‎« dioxetanes Juminol Jie ‏تشتمل المترافقات الأخرى أيضا على مرقمات متألقة كيميائيا‎ ٠ : Jie ‏؛ أو مرقمات مشعة‎ luciferase and luciferin JiS ‏ومرقمات حيوية متألقة فلورياً‎ 100106123, 100106125, 100106126, iodine133, bromine77, technetium99m, indium111, indium113m, gallium67, gallium68, ruthenium95, ruthenium97, ruthenium103, ruthenium105, mercuryl1(Q7, mercury203, rhenium99m,
‎rhenium101, 60100105, scandium47, tellurium121m, telluriuml122m, ٠ tellurium125m, thuliuml165, thuliuml167, thuliuml168, fluorinels, yttrium199, iodinel31. ‏يمكن استخدام الطرق الموجودة المعروفة لدى الشخص المتمرس في المجال لربط النظائر المشعة‎ ‏أو تم ذكرها فيما سبق‎ EDTA Jie lla ‏مع الأجسام المضادة؛ إما مباشرة أو عن طريق عامل‎
‏رف
‎h \ —_‏ _ للنظائر المشعة التشخيصية. وبالتالي ينبغي أن نذكر الترقيم ب ‎[1125INa‏ بواسطة تقنية ‎[Hunter W.M. and Greenwood F.C. (1962) Nature T- chloramine‏ ]¢194:495 والترقيم تيكنيتيوم 0099 وفقاً لما تم وصفه بواسطة ‎Crockford et al. (US‏ )4,424,200 1 أو المرتبط عن طريق ‎DTPA‏ وفقا لما تم وصفه من قبل ‎Hnatowich‏ ‎.(US patent 4,479,930) ©‏ وهكذا, يمكن استخدام الجسم المضاد, أو شظية ‎fragment‏ وظيفية أو مشتق منه, وفقاً للاختراع في عملية لرصد و/ أو التحديد الكمي للتعبير المفرط أو ‎,underexpression‏ على نحو مفضل التعبير المفرط, عن مستقبل ‎c-Met‏ في عينة حيوية, يتميز ‎al‏ يشتمل على الخطوات التالية: أ) تلامس العينة الحيوية مع جسم مضاد, أو شظية وظيفية أو مشتق منه, وفقاً للاختراع: و ‎١١‏ ب توضيح ‎[c-Met‏ معقد جسم مضاد المتكون على نحو ممكن . في نموذج خاص, يمكن استخدام الجسم المضاد, أو شظية وظيفية أو مشتق منه, وفقاً للاختراع, في عملية لرصد و/ أو التحدي الكمي لمستقبل 0-1/64 في عينة حيوية, لمراقبة فعالية العلاج الوقائي و/ أو الدوائي لسرطان تابع ل ‎c-Met‏ ‏على نحو أعم, يمكن استخدام الجسم المضاد أو شظية ‎fragment‏ وظيفية أو مشتق منه, وفقاً ‎١‏ للاختراع على نحو ‎ade‏ في أية ‎Alla‏ ينبغي فيها ملاحظة التعبير عن مستقبل ‎c-Met‏ بطريقة نوعية و/ أو كمية. على نحو مفضل تتكون العينة الحيوية ‎dad gs‏ مائع حيوي, مثل مصل د دم كلي خلايا , ‎ue‏ ‏أنسجة أو خزعات من أصل بشري. يمكن استخدام أي إجراء أو اختبار تقليدي في إجراء الرصد المذكور و/ أو الجرعة. قد يكون ‎٠‏ الاختبار المذكور عبارة عن اختبار تنافسي أو اختبار ‎sandwich‏ أو أي اختبار معروف للمتمرس في الفن ومعتمد على تكوين معقد ‎ie‏ عي من نوع جسم مضاد - مولد ضد. التطبيقات التالية وفقاً للاختراع, يمكن أن يكون الجسم المضاد أو شظية ‎fragment‏ وظيفية أو مشتق منه
‎h \ —_‏ _ مثبت أو مرمز. يمكن إجراء هذا التثبيت على مواد حاملة متنوعة معروفة للمتمرس في الفن. قد تشتمل المواد الحاملة هذه على نحو خاص الزجاج و ‎polystyrene, poly—propylene, polyethylene, dextran, nylon‏ , أو خلايا طبيعية أو معدلة. قد تكون هذه المواد الحاملة قابلة للذوبان أو غير قابلة للذوبان. © وكمثال على ذلك, تقدم لنا الطرق المفضلة العمليات المناعية الإنزيمية وفقًا لتقنية ‎ELISA‏ ‏بواسطة التألق الفلوري المناعي, أو تقنية الاختبار المناعي الإشعاعي ‎(RIA)‏ أو مكافئ. وهكذا, يشتمل الاختراع الحالي بالمتل على المجموعات أو المجموعات الضرورية لتنفيذ طريقة لتشخيص الأمراض المحفزة بواسطة التعبير المفرط أو التعبير المنخفض عن مستقبل ‎c-Met‏ أو لتنفيذ عملية لرصد و/ أو التحديد الكمي للتعبير المفرط أو التعبير المنخفض عن المستقبل ‎C—‏ ‎Met ٠‏ في عينة حيوية, على نحو مفضل التعبير المفرط عن المستقبل المذكور, يتميز ‎ob‏ ‏المجموعة المذكورة أو المجموعة تشتمل على العناصر التالية: أ) جسم مضاد, أو شظية ‎fragment‏ وظيفية أو مشتق منه, وفقاً للاختراع: ب) على نحو اختياري, المواد الكاشفة لتكوين الوسيط المفضل للتفاعل المناعي: ج) على نحو اختياري, المواد الكاشفة التي تسمح بتوضيح ]0-1/6/معقدات جسم مضاد منتجة ‎Vo‏ بواسطة التفاعل المناعي. يتمثل موضوع الاختراع بطريقة مماثلة في تقديم جسم مضاد أو تركيبة وفقاً للاختراع لتحضير ‎lie‏ للاستهداف المحدد لمركب نشط بيولوجيا للخلايا المعبرة عن أو المعبرة على نحو مفرط عن المستقبل ‎.c—Met‏ ‏يكون المقصود في الطلب الحالي بمركب نشط بيولوجيا أي مركب قادر على تعديل, على نحو ‎٠‏ خاص تثبيط, نشاط الخلية, على نحو خاص نموها, تكاثرها, انتساخها أو ترجمة الجين. كما يتمثتل موضوع الاختراع في مادة كشف تشخيصية في الكائن الحي تشتمل على جسم مضاد وفقاً للاختراع, أو شظية ‎fragment‏ وظيفية أو مشتق منه, على نحو مفضل مرمز, على نحو
© خاص مرمز إشعاعي, واستخدامه في التصوير الطبي, على نحو خاص لرصد سرطان متصل بالتعبير أو التعبير المفرط بواسطة خلية من المستقبل ‎c-Met‏ . يتعلق الاختراع بطريقة مماثلة بتركيبة كمنتج توليفة أو بجسم ‎alias‏ ل 0-1/61/ مترافق ‎toxin‏ أو نظير مشع , وفقا للاختراع , كعقار . © على نحو مفضل, سيتم خلط التركيبة المذكورة كمنتج توليفة أو المترافق المذكور وفقاً للاختراع مع سواخ و/ أو مادة حاملة مقبولة صيدلانيًا. في الوصف الحالي؛ تشير ‎sale‏ حاملة مقبولة صيدلانيًا غلى مركب أو توليفة من المركبات التي ‎Jas‏ في التركيبة الصيدلانية ولا تحفز التفاعلات الثانوية والتي تسمح, على سبيل المثال, بتسهيل إعطاء المركب (المركبات) النشط, وتزيد مدى عمره و/ أو فعاليته في الجسم, وزيادة في قابليته ‎٠‏ ا للذوبان في المحلول أو تحسين تحوله. تكون المواد الحاملة المقبولة صيدلانيًا معروفة جيدًا وتتم تهيئتها بواسطة المتمرس في الفن كدالة على طبيعة ووضع الإعطاء المركب (المركبات) النشط المختار. على نحو مفضل, يتم إعطاء هذه المركبات عن طريق مسلك جهازي, على نحو خاص تحت الجلد ‎,Ssubcutaneous‏ في العضل ‎intramuscular‏ في الجلد ‎٠ intradermal‏ في الغشاء البريتوني ‎intraperitoneal ١‏ أو تحت الجلد ‎Subcutaneous‏ أو عن طريق الفم. بطريقة مفضلة أكثر, تشتمل التركيبة على الأجسام المضادة وفقاً للاختراع التي يتم إعطائها مر واحدة, بطريقة تتابعية. تتحدد طرق الإعطاء, الجرعات والصور الصيدلانية المثالية ‎Gag‏ للمعيار المأخوذ بصفة عامة بعين الاعتبار في تحديد العلاج المقدم للمريض مثلا, على سبيل المثال, العمر أو وزن جسم المريض, خطورة حالته / حالتها العامة, تحمل العلاج والآثار الثانوية الملحوظة ‎yi ٠‏ 4 مختصر ‎A‏ سومات تتضح السمات والمزايا الأخرى من الاختراع من خلال استمرار الوصف مع الأمثلة والأشكال حيث:
‎h ¢ —_‏ _ الشكل رقم ‎:١‏ تأثير ‎Mabs‏ 1961 غير ذات الصلة من البشر ومن فأر و ‎PBS‏ على ‎Sind‏ ‎phosphorylation‏ مستقبل ‎c-Met‏ على خلايا ‎A549‏ ‏الأشكال رقم "أ و7ب: تأثير ‎Mabs‏ 224611 من الفئران ومن البشر المنتجة على هيئة ‎١961‏ ‏من البشر/نوع مناظر كبا على فسفرة مستقبل ‎c-Met‏ على ‎WA‏ 549. © الشكل رقم ؟أ: التأثير المساعد المحسوب كنسبة مئوية مقابل المحاكاة القصوى لفسفرة ‎c-Met‏
‏بواسطة ‎٠٠١[ HGF‏ نانو جم/مل].
‏الشكل رقم “ب: التأثير المضاد المحسوب كنسبة مئوية لتثبيط المحاكاة القصوى لفسفرة ‎c-Met‏
‏بواسطة ‎٠٠١[ HGF‏ نانو جم/مل].
‏الأشكال؟أ و ‎sat‏ مقارنة بين ‎Mab‏ 224611 من الفثران و ‎Mabs‏ 224611 خيمري يحتوي ‎٠‏ على مناطق مفصلية مختلفة مهندسة ‎Ui‏ على فسفرة ‎phosphorylation‏ مستقبل ‎c-Met‏
‏على خلايا ‎A549‏
‏الشكل رقم ؟أ: التأثير المساعد المحسوب كنسبة مئوية مقابل المحاكاة القصوى لفسفرة ‎c-Met‏
‏بواسطة ‎٠٠١[ HGF‏ نانو جم/مل].
‏الشكل رقم ‎oY‏ التأثير المضاد المحسوب كنسبة مئوية لتثبيط المحاكاة القصوى لفسفرة ‎c-Met‏ ‎١٠‏ بواسطة ‎٠٠١[ HGF‏ نانو جم/مل].
‏الأشكال ؛أ و؛ب: مقارنة بين ‎Mab‏ 224611 من الفثران 5 ‎Mabs‏ 224611 خيمري ومن
‏البشر المنتج على هيئة 0962| من البشر/نوع مناظر كبا, على فسفرة مستقبل ‎c-Met‏ على خلايا
‎A549
‏الشكل رقم ؛أ: التأثير المساعد المحسوب كنسبة مئوية مقابل المحاكاة القصوى لفسفرة ‎c-Met‏ ‎Yu‏ بواسطة 165 ‎٠٠١[‏ نانو جم/مل].
‏الشكل رقم ؛ ب: التأثير المضاد المحسوب كنسبة مئوية لتثبيط المحاكاة القصوى لفسفرة ‎c-Met‏
‏بواسطة ‎٠٠١[ HGF‏ نانو جم/مل].
_ h ‏اج‎ الأشكال ‎fo‏ ودب: مقارنة بين ‎Mab‏ 224611 من الفثران 5 ‎Mabs‏ 224611 خيمري ومن البشر المنتجة على هيئة طفرة منطقة مفصلية مهندسة وراثياً 11171961/كبا, على فسفرة مستقبل
A549 ‏على خلايا‎ c-Met الشكل رقم ‎(fo‏ التأثير المساعد المحسوب كنسبة مئوية مقابل المحاكاة القصوى لفسفرة ‎c-Met‏ ‎Yeo ] HGF dad gs lo}‏ نانو جم/مل]. ‏الشكل رقم ‎roo‏ التأثير المضاد المحسوب كنسبة مئوية لتثبيط المحاكاة القصوى لفسفرة ‎c-Met phosphorylation‏ بواسطة ‎٠٠١[ HGF‏ نانو جم/مل]. ‏الأشكال ١أ ‎Jats‏ الأشكال أ ولاب, الأشكال ‎IA‏ وهب, الأشكال ‎ea la‏ الأشكال ‎٠١‏ ‏و١٠ب:‏ نماذج ‎BRET‏ مع الشكل أ: ديمرة نموذج ‎:0-١/61‏ والشكل ب: نموذج ‎c-Met‏ المنشط. ‎Ve‏ الشكل رقم : التعرف على ‎dail gs c—Met‏ صور 1 1 22465 خيمري ومن البشر . ‏الشكل رقم ‎:١١‏ تأثير الأجسام المضادة من الفثران والخيمرية على التكاثر المحفز ب ‎HGF‏ على ‏خلايا ‎NCI-H441‏ في المعمل. تم وضع خلايا 001-1441 في أطباق وسط خال من المصل. ‏بعد ‎YE‏ ساعة من الوضع في الأطباق تمت إضافة 01224611 و[؛61177]الخيمري إما في ‏وجود أو غياب ]16. تشير الأسهم السوداء إلى العيون المغطاة بالخلايا فقط إما في غياب حا ‎٠‏ أو وجود لا ‎HGF‏ تم تقديم (961ا00) ‎IgG‏ من ‎oll‏ كنوع مناظر لعينة مقارنة . ‏الشكل رقم ‎VY‏ مقارنة في الكائن الحي ل ‎IgG‏ من الفثران و1/855 224611 خيمري على ‏نموذج مطعم ‎NCI-H441‏ ‏الأشكال ‎Tre‏ و؛١ب:‏ تأثير ‎Mab‏ 224611 من الفئران والنسخ المختلفة الخيمرية ومن البشر ‏لهذا الجسم المضاد على التكاثر المحفز ب +16اعلى خلايا ‎NCI-H441‏ في المعمل. تم وضع ‎NCI-H441 DAY.‏ في أطباق وسط خال من المصل. وبعد ‎YE‏ ساعة من الوضع في الأطباق؛ ‏تم إضافة الجسم المضاد المراد اختباره إما في وجود أو غياب ‎HGF‏ في اللوحة (الشكل رقم ‎(I)‏ يتم عرض نسخ 01224611 من الفثران, 1961 خيمري ‎224G111chim, 19G1]‏ من ‎[Hz1], [224G11] [Hz2], [224G11] [Hz3] La‏ [224611]. في اللوحة (الشكل رقم ‎tyve
-؟١؟-‏ 4٠ب),‏ تم تقديم 01224611 من الفئران والصور الخيمرية المختلفة من [224611]) ‎IgG1‏ ‎chim, ]224611[ [MH chim], [224G11] [MUP9H chim], [224G11] [MMCH‏ ‎yiichim], [224G11] [THT chim).‏ الأسهم السوداء إلى العيون المغطاة بالخلايا فقط إما في غياب ا أو وجود ‎HGF N‏ تم تقديم ‎IgG]‏ كعينة مقارنة سالبة للنشاط المساعد. وتم © استخدام ‎MSDS‏ كعينة مقارنة مساعدة تامة الاعتماد على الجرعة. الشكل رقم ‎:١5‏ تأثير ‎Mab‏ 224611 من ‎hall‏ والنسخ المختلفة الخيمرية ومن البشر لهذا الجسم المضاد على التكاثر المحفز ب ‎JeHGF‏ خلايا 001-1441 في المعمل. تم وضع خلايا ‎NCI-H441‏ في أطباق وسط خال من المصل. وبعد ‎YE‏ ساعة من الوضع في الأطباق؛ تم ‎dil)‏ الجسم المضاد المراد اختباره إما في وجود أو غياب ‎HGF‏ تم تقديم 01224611 من ‎٠‏ الفثران» والصور الخيمرية من 1961 ‎chim, [224G11] [THT chim])‏ [224611]؛ ‎[224G11] [THT Hzl), ]224611[ [THT Hz3],)‏ .تشير الأسهم السوداء إلى العيون المغطاة بالخلايا فقط إما في غياب ا أو وجود أ ‎HGF‏ تم تقديم 1961 كعينة مقارنة سالبة للنشاط المساعد. وتم استخدام ‎MSDS‏ كعينة مقارنة مساعدة تامة الاعتماد على الجرعة. الشكل رقم 16: مقارنة في الكائن الحي, ل ‎Mabs‏ 224611 من الفثران وخيمري ومن البشر ‎Vo‏ على نموذج ‎NCI-H441‏ مطعم. الشكل رقم 7١٠أ:‏ التأثير المساعد المحسوب كنسبة ‎Le‏ مقابل المحاكاة القصوى لفسفرة ‎c-Met phosphorylation‏ بواسطة ‎٠٠١[ HGF‏ نانو جم/مل]. الشكل رقم ‎١١‏ ب: التأثير المضاد المحسوب كنسبة مئوية لتثبيط المحاكاة القصوى لفسفرة ‎c-Met‏ ‏بواسطة ‎٠٠١[ HGF‏ نانو جم/مل]. ‎٠‏ الشكل رقم 18: نماذج ‎BRET‏ مع نموذج ‎c-Met‏ المنشط. الشكل رقم ‎Lab :٠5‏ 00224611 و224611" على تحلل ‎c-Met‏ على ‎Wa‏ 2549. أ) ‎danse‏ ¢ تجارب مستقلة +/- 8 .5.6.00) صورة لطخة ويسترن ‎Western blot‏ المعبرة عن التجارب الأربع المستقلة التي تم إجرائها.
— 7 أ — الشكل رقم ‎:٠١‏ تأثير 122461190224611 على تحلل ‎c-Met‏ على خلايا ‎NCI-H441‏ ‏أ) متوسط ؛ تجارب مستقلة +/- 8 .5.6.01) صورة لطخة ويسترن المعبرة عن التجارب الأربع المستقلة التي تم إجرائها. الشكل رقم ‎dae) :7١‏ تجربة ‎ELISA‏ لتقييم تظليل ‎c-Met‏ ‏© الشكل رقم 7؟: تقييم في المعمل لتظليل ‎c-Met‏ على خلايا ‎NCI-H441‏ المعالجة لمدة © أيام باستخدام 01224611. يكون 001961 عبارة عن جسم مضاد غير ذي صلة يستخدم على هيئة عينة مقارنة من نوع مناظر. الشكل رقم 77: تقييم في المعمل لتظليل ‎c-Met‏ على 1157461 المضخمة, ‎MKN45‏ ‏وسلالات خلية 5806-1 المعالجة لمدة © أيام باستخدام ‎.M224G11‏ يكون 071961 ‎Sle‏ عن ‎٠‏ جسم مضاد غير ذي ‎dla‏ يستخدم على هيئة عينة مقارنة من نوع مناظر. يكون ‎PMA‏ عبارة عن محفز تظليل ‎shedding inducer‏ يستخدم على هيئة عينة مقارنة موجبة. الشكل رقم 4 7: تقييم في المعمل لتظليل ‎c-Met‏ على ‎NCI-H441‏ و157461 المضخم, ‎MKN45‏ وسلالات خلية ‎EBC-1‏ المعالجة لمدة © أيام باستخدام 01224©511. يكون 001961 عبارة عن جسم مضاد غير ذي ‎dla‏ يستخدم على هيئة ‎Age‏ مقارنة من نوع مناظر. ويكون ‎PMA ١‏ عبارة عن محفز تظليل يستخدم على هيئة عينة مقارنة موجبة. الشكل رقم © ؟: دراسة الفسفرة الذاتية ‎phosphorylation‏ 10110516 ل 224611" على سلالة خلية ‎Hs746T‏ ‏الشكل رقم 176: دراسة الفسفرة الذاتية ل 2246511 "على سلالة خلية ‎NCI-H441‏ 0 تجربة فوسفورية ‎ELISA‏ وب) تحليل ويسترن. ‎٠‏ الشكل رقم ‎YY‏ دراسة الفسفرة الذاتية ل 2246511 على سلالة ‎ads‏ 155781. 0 تجربة فوسفورية ‎ELISA‏ وب) تحليل ويسترن ‎Western analysis‏ الشكل رقم 78: دراسة الفسفرة الذاتية ل 224611" على سلالة خلية ‎NCI-H125‏ . أ) تجربة فوسفورية ‎ELISA‏ وب) تحليل ويسترن. اررق
الشكل رقم 19: دراسة الفسفرة الذاتية ل ‎h224G11‏ على سلالة خلية 1986. ‎(I‏ تجربة فوسفورية ‎ELISA‏ وب) تحليل ويسترن. الشكل رقم ٠؟:‏ دراسة الفسفرة الذاتية ل ‎h224G11‏ على سلالة خلية ‎(i.
MDA-MB-231‏ تجربة فوسفورية ‎ELISA‏ وب) تحليل ويسترن. ‎oo‏ الشكل رقم ١؟:‏ دراسة الفسفرة الذاتية ل 224611"اعلى سلالة خلية ‎PC3‏ أ)تجربة فوسفورية ‎ELISA‏ وب) تحليل ويسترن. الشكل رقم 7 ؟: دراسة الفسفرة الذاتية ل 1224611 على خلايا ‎HUVEC‏ ‏الشكل رقم ‎TY‏ مقارنة في الكائن الحي للنوع غير المعالج من الجسم المضاد 224611 من الفئران بمنطقة مفصلية خيمرية مهندسة وراثيا ‎[C2D5-T7] Mabs‏ 224611 على نموذج ‎NCI-H441 ٠‏ مطعم. الشكل رقم 324: تحفيز ‎ADCC‏ بواسطة 224611" على كل من ‎WA‏ 157461 وخلايا ‎.NCI-H44]‏ تم خلط ‎51Cr-labeled 157461 (A) Wa‏ أر ‎or NCI-H441 (B)‏ المحملة (أقواس معقوفة ثقيلة ‎(bold squares‏ أم لا (أقواس معقوفة فارغة ‎(empty squares‏ مع 224611 بنسب مختلفة من خلايا ‎NK‏ من البشر وحضانتها لمدة ؛ ‎١‏ ساعة. ثم جمع ‎Vo‏ الخلايا وعد ‎WIA‏ 5160 المحررة بواسطة التحلل. تم تخطيط النتائج في صورة نسبة مثوية للتحلل مقابل نسبة الخلية المستجيبة / الهدف. الا للخلايا غير المحملة. الشكل رقم 5؟: تبقيع ‎staining‏ 7224611 في طعم الورم المعبر عن مستوى مختلف من -6 ‎Met‏ (أ: سلالة خلية ‎١157461‏ مضخمة ل ‎,6-١/6]‏ ب: ‎NCI-H44]‏ مستوى مرتفع من التعبير عن ‎c-Met‏ وج: ‎ius MCF-T‏ منخفض من ‎(c—Met‏ ‎٠‏ الوصف ‎١‏ لتفصيلي: مثال رقم ‎:١‏ توليد الأجسام المضادة ل ‎c-Met‏ ‏ار
-١4-
لتوليد الأجسام المضادة ل ‎generate anti-c-Met antibodies c-Met‏ تم تحصين فثران ‎BALB/C‏ تبلغ من العمر ‎A‏ أسابيع من ؟ إلى © مرات تحت الجلد ‎subcutaneously‏ باستخدام سلالة الخلية المعدية ‎CHO‏ التي تعبر ‏ عن ‎c-Met‏ .في غشاء البلازما ‎Voaxye)‏ ‏خلية/جرعة/فأر) أو ؟ إلى ؟ مرات ببروتين دمج نطاق ‎c-Met‏ خارج الخلية ‎١5-٠١(‏ ميكرو © جم/جرعة/فأر) ‎(R&D Systems, Catalog # 358MT)‏ أو شظايا من بروتين ناتج ‎sae‏ ‏الاتحاد الجيني ‎genetic recombination‏ هذا مختلطة مع مادة مساعدة ‎Freund‏ كامل في التحصين الأول و مادة مساعدة ‎Freund‏ غير كامل في التحصينات التالية. كما تم ‎shal‏ ‏البروتوكولات المختلطة التي تلقت فيها الفثران كل من خلايا ‎CHO-cMet‏ وبروتينات ناتج عودة الاتحاد الجيني. قبل ثلاثة ايام من دمج الخلية, تم تعزيز الفثران في الغشاء البريتوني أو في الوريد ‎gm ٠‏ ناتج عودة الاتحاد الجيني ‎genetic recombination‏ أو شظايا. ثم تم تجميع خلايا طحال الفئران ودمجها مع خلايا ‎SP2/0-Agl4 (ATCC jlaju‏ ) واخضاعها لانتقاء ‎HAT‏ تم إجراء ؛ عمليات دمج. وبصفة عامة, لتحضير الأجسام المضادة وحيدة النسيلة ‎monoclonal‏ ‎antibodies‏ أو شظياها الوظيفية, على نحو خاص ذات الأصل الفأري, يمكن الرجوع إلى التقنيات الموصوفة على نحو خاص في كتيب “الأجسام المضادة” ‎Lane ; Harlow)‏ ‎A Laboratory Manual, Cold Spring Harbor Laboratory, Cold :Antibodies ١٠١‏ ‎ius tof (Spring Harbor NY, pp. 726, 1988‏ التحضير ‎Of‏ الأورام الهجينة ‎.(Milstein (Nature, 256:495-497, 1975 shybridomas described by Kohler‏ تم فحص الأورام الهجينة ‎Al) hybridomas‏ تم الحصول عليها بشكل ‎Jae‏ بواسطة ‎ELISA‏ ‏على بروتين ناتج عودة الاتحاد الجيني ‎c-Met‏ ثم بواسطة تحليل ‎FACS‏ على ‎A549‏ ‎NSCLC, 8003 | ٠٠‏ بنكرياسي ‎pancreatic‏ وسلالات خلية ورم أرومي دبقي ‎glioblastoma‏ ‎cell lines‏ 87-1/6لا للتأكد من الأجسام المضادة المنتجة ستتمتع بالقدرة على التعرف على المستقبل الأصلي في خلايا الورم. تم تضخيم عوامل التفاعل الموجبة في الاختبارين, استنساخهم واستعادة مجموعة من الأورام الهجينة ‎hybridomas‏ , تتقيتها وفحص قدرتها على تثبيط تكاثر
الخلية في المعمل في نماذج ‎BXPC3‏
افر yao
RPMI, 2 ‏في أطباق بها 97 عين في وسط‎ BXPC3 ‏لهذا الغرض تم وضع 50000 خلية‎ ‏من الوضع في الأطباق, تمت‎ dele YE ‏بدون 57/5. بعد‎ , glutamine ‏ميكرو مولار لتر.‎ ‏ميكرو جم/مل‎ fv ‏إضافة الأجسام المضادة المراد اختبارها بتركيز نهائي يتراوح من 00997 إلى‎
HGF ‏نانو جم / مل من‎ ٠٠١ ‏دقيقة قبل إضافة‎ ٠ [3H]thymidine ‏من‎ pCi +.0 ‏باستخدام‎ cells were pulsed ‏بعد ؟ أيام, تم نبض الخلايا‎ © trichloroacetic acid ‏ساعة. تم تحديد مقدار 0010106/ا311[17]الذي تم دمجه في‎ ١١ ‏لمدة‎ ‏بواسطة عد نبض السائل. تم التعبير عن النتائح في صورة‎ DNA ‏غير قابل للزوبان في حمض‎
Mab ‏بيانات خام لتقييم الأثر المساعد الجوهري الفعلي لكل‎ ‏ثم تم تقييم الأجسام المضادة المثبطة ل 756 على الأقل من تكاثر الخلية وتقييم تأثير نشاطها‎
C— ‏على الخلايا المعدية. تم تحديد كمية نشاط مستقبل‎ BRET ‏على ديمرة 6-1/61 وتنشيط تحليل‎ ٠ ‏لهذا الغرض, تم‎ c-Met ‏بواسطة قياس استخدام جزيء إرسال إشارات 6851 على تنشيط‎ Met
C-Met- ; C-Met-Rluc ‏أر‎ C-Met-Rluc ‏المستقرة المعبرة عن‎ CHO ‏توليد سلالات خلية‎ 6851 [Maroun et ‏وصورة الطفرة من‎ C-Met-RIuc ‏أو‎ c-Met ‏لديمرة‎ K1100A-YFP ‏تم‎ .0-1/61 Lyin ‏ل‎ YFP ‏المدمجة مع‎ [al., Mol. Cell. Biol., 1999, 19:1784-9
DMEM= ‏توزيع الخلايا في أطباق عيار دقيق طبق أبيض به 37 عين في وسط مزرعة‎ Vo
YY ‏ثم تمت أولا زراعة الخلايا عند‎ BRET ‏يوم أو يومين قبل إجراء تجارب‎ 7 © F12/FBS ‏درجة مئوية باستخجام 002 بنسبة 5 7 لكي يتم التصاق الخلية بالطبق. ثم تم تجويع الخلايا‎ ‏ميكرو لتر 01/81/4/عين على مدار الليل. على الفور قبل إجراء التجربة, تمت‎ ٠00 ‏باستخدام‎ ‏تمت حضانة الخلايا في 085 في وجود أو‎ PBS ‏وغسل الخلايا سريعا باستخدام‎ DMEM ‏إزالة‎ ‏درجة مئوية قبل‎ TY ‏دقائق عند‎ ٠١ ‏غياب الأجسام المضادة المراد اختبارها أو المركبات المرجعية,‎ ٠ ٠١ ‏ميكرو لتر. بعد الحضانة لمدة‎ 5٠ ‏بحجم نهائي يبلغ‎ HEF ‏إضافة كولينترازين مع أو بدون‎
OF + 5 ‏درجة مثوية, تم بدء اكتساب انبعاث الضوء عند 585 نانو مولار‎ TV ‏دقائق إضافية عند‎ ‏طول/عين مكرر‎ dase ‏ثانية/طول‎ Berthold) (1) Mithras ‏مولار باستخدام مقياس اللمعة‎ sb ‏مرة).‎ ٠
١ \ —
[Angers et al., Proc.
Natl.
Acad.
Sci. (rue ‏وفقا لما تم وصفه‎ BRET ‏تم تعريف نسبة‎
‎(USA, 2000, 97:3684-3689[‏ [(انبعاث عند ‎OF‏ نانو متر) - (انبعاث عند 485 نانو
‏متر) ‎[[X CF‏ (انبعاث عند £40 نانو متر), حيث ‎Cf‏ = (انبعاث عند ‎oY‏ نانو متر) / (انبعاث
‏عند ‎AO‏ نانو متر) بالنسبة للخلايا المعبرة عن دمج بروتين ‎RIUC‏ فقط في ظل ظروف تجارب
‏© مشابهة. يوضح تبسيط هذه المعادلة مناظرة نسبة ‎BRET‏ نسبة 85/576 ‎gb‏ متر التي تم
‏الحصول عليها في حالة وجود الشريكين, وتم تصحيحها باستخدام النسبة 485/5758 نانو ‎Jie‏
‏التي تم الحصول عليها في ظل ظروف تجارب مشابهة, في حالة وجود العامل المدمج فقط مع
‏إنزيم ‎luciferase‏ 1601000015 .4 في التجربة. بغرض قابلية القراءة, تم التعبير عن النتائج
‏باستخدام وحدات ‎milliIBRET‏ (لا018): حيث تناظر ‎mBU‏ نسبة ‎BRET‏ مضروبة في ‎.٠٠٠١‏ ‎٠‏ بعد هذا الاختبار الثاني في المعمل؛ تم انتقاء الجسم المضاد 2246511 ‎)١‏ بدون نشاط ذاتي
‏كجزيء ‎JIS‏ في الاختبار الوظيفي للتكاثر؛ ¥( تثبيط تكاثر ‎BXPC3‏ بدرجة كبيرة و©) تثبيط ديمرة
‏00 0-1/0181. في التجارب»؛ تمت إضافة الجسم ‎Mab‏ 5105 الذي تم توليده بواسطة
‎Genentech‏ متاحة عند ‎(ATCC‏ كعينة مقارنة للتأكد من النشاط المساعد الذاتي.
‏مثال رقم ؟: عملية التحويل إلى التوافق البشري للجسم ‎Mab‏ 224611 من الفأر بواسطة ‎Yo‏ التطعيم 2 ‎CDR-‏
‎)١‏ تحويل النطاق المتغير للسلسلة الخفيفة ‎(VL)‏ إلى صورة معدة للاستخدام البشري
‏في خطوة تمهيدية؛ تمت مقارنة متوالية ‎nucleotide‏ ل ‎VL‏ 224611 بمتواليات جين ‎ADL‏
‏الجرثومية الفأرية المدرجة ‎corresponding mouse germlines‏ في قاعدة بيانات ‎IMGT‏
‎-http:/[/imgt.cines.fr‏ وتم تمييز جينات السلالة الجرثومية الفأرية ‎IGKV3-5%01‏ و ‎٠‏ 4*01ل6/6الفأرية التي توضح تطابق المتوالية بنسبة )99.7 7 لمنطقة ‎Vo‏ ونسبة ‎VEYA‏
‏لمنطقة ‎oJ‏ على التوالي. بالنسبة لهذه التجانسات العالية؛ تم استخدام متوالية ‎nucleotide‏
‏/ا224611 مباشرة للبحث عن التجانسات البشرية؛ بدلاً من السلالات الجرثومية التي تناظر
‎.corresponding mouse germlines ‏للفأر‎
‏افر
‎١ \ —_‏ في خطوة ثانية؛ تم بحث جين السلالة الجرثومية البشري الذي يظهر أفضل تطابق مع الجسم ‎224G11VL‏ لتمييز أفضل مرشح بشري للتطعيم ب ‎LCDR‏ لتحسين ‎co EY)‏ تم إجراء المحاذيات بين متواليات الحمض الأميني ‎amino acid‏ . وأحدث جين ‎ADL‏ الجرتومية ‎IGKVA-1*01‏ ‏البشري تطابق متوالية بنسبة 167.30 ‎of‏ غير أنه أظهر طولا مختلفاً ل 060851 ‎٠١(‏ أحماض © أمينية في ‎VL‏ 224611 و١١‏ حمضا أمينياً في ‎L(IGKV4-1#01‏ بالنسبة لمنطقة ‎J‏ تم انتقاء جين ‎ADL‏ الجرثومية 4*02ل5/6! البشري (تطابق المتوالية بنسبة 797.16 7). في الخطوة التالية؛ تم تطعيم مناطق ‎VL CDR‏ 224611 من الفأر في متواليات الإطار البشري المنتقاة السابقة. وتم تحليل كل موضع حمض أميني للتأكد من العديد من المعايير ‎Jie‏ المشاركة في الاتصال البيني ‎VHVL‏ في ارتباط مولد ضد أو في بنية ‎CDR‏ وتحديد مكان الوحدة ‎٠‏ البنائية في البنية ثلاثية الأبعاد للنطاق المتغير» ومثبتات ‎(CDR‏ والوحدات البنائية التي تنتمي إلى منطقة ‎Vernier‏ وتم تكوين ثلاث نسخ متوافقة مع البشر؛ تناظر متوالية ذات رقم هوية ‎A‏ ‏متوالية ذات رقم هوية 9 ومتوالية ذات رقم هوية ‎١٠١‏ وتحتوي على التوالي على أربع وحدات بنائية ‎(Af 40 Yc)‏ أو اثنتين ‎FQ)‏ £0( أو واحدة )£4( فأرية في مناطق ‎FR‏ الخاصة بها ومناطق ‎CDRs‏ التي تناظر ‎VL‏ 224611 من الفأر. ‎(Y ١‏ تحويل النطاق المتغير للسلسلة الثقيلة ‎(VH)‏ إلى صورة معدة للاستخدام البشري في خطوة تمهيدية؛ تمت مقارنة متوالية ‎nucleotide‏ ل ‎VH‏ 224611 بمتواليات جين ‎ADL)‏ ‏الجرثومية الفأرية المدرجة في قاعدة بيانات ‎http: /fimgt.cines.fr IMGT‏ وتم تمييز جينات السلالة الجرثومية الفأرية ‎IGHD2-4*01, IGHV1-18*01‏ و 1* 64 |الفأرية التي توضح تطابق المتوالية بنسبة 97.78 7 لمنطقة ‎١/‏ ونسبة ‎Vo‏ لمنطقة ‎D‏ ‎٠‏ ونسبة ‎ATT‏ لمنطقة ‎oJ‏ على التوالي. بالنسبة لهذه التجانسات ‎dled‏ تم استخدام متوالية ‎224G11VH nucleotide‏ مباشرة للبحث عن التجانسات البشرية؛ بدلاً من السلالات الجرثومية التي تناظر الفأر ‎.corresponding mouse germlines‏ في خطوة ثانية؛ تم بحث جين السلالة الجرثومية البشري ‎human germline gene‏ الذي يظهر أفضل تطابق مع الجسم ‎224G1IVH‏ لتمييز أفضل مرشح بشري للتطعيم ب ‎LCDR‏ لهذا
_ 7 Ad —_
الغرض» تمت محاذاة متوالية ‎nucleotide‏ ل ‎224G11VH‏ مع متواليات جينات السلالة
الجرثومية البشرية التي تنتمي إلى قاعدة بيانات ‎IMGT‏ وأظهرت متوالية ‎IGHV1-2%02 V‏
البشرية تطابق متوالية بنسبة ‎١5‏ 7 عند مستوى ‎nucleotide‏ و15.70 7 عند مستوى الحمض
الأميني ‎amino acid‏ . بحثاً عن التجانسات لمنطقة ل أدى إلى تمييز جين ‎ADL‏ الجرثومية
‎IGHI4*04 | 5‏ البشري بتطابق متوالية بنسبة 78.977 7.
‏في خطوة تالية؛ تم تطعيم مناطق ‎VL CDR‏ 224611 من الفأر في متواليات الإطار البشري
‏المنتقاة السابقة. وتم تحليل كل موضع حمض أميني للتأكد من العديد من المعايير ‎Jie‏ المشاركة
‏في الاتصال البيني ‎VH/VL‏ وفي ارتباط مولد ضد أو في بنية ‎(CDR‏ وتحديد مكان الوحدة
‏البنائية في البنية ثلاثية الأبعاد للنطاق المتغير؛ ومثبتات ‎(CDR‏ والوحدات البنائية التي تنتمي إلى ‎٠‏ منطقة ‎Vernier‏
‏وتم تكوين صورة واحدة متوافقة تماماً مع البشرء تناظر متوالية ذات رقم هوية ؛؛ وتحتوي بشكل
‏حصري على الوحدات البنائية البشرية في مناطق ‎FR‏ الخاصة بها ومناطق ‎CDRs‏ التي تناظر
‎VH‏ 224611 من الفأر.
‏مثال رقم ؟: هندسة الطفرات المفصلية المحسنة ‎Engineering of improved hinge‏ ‎mutants Yo‏
‏من المعروف جيداً من قبل المتمرس في الفن أن المنطقة المفصلية تشارك 8558 مرونة النطاق
‎Brekke et al., 1995; Roux lil) immunoglobulins ‏المتغير للجلوبيولينات المناعية‎
‎(et al., 1997‏ أثناء عملية تحويل الجسم ‎Mab‏ 224611 إلى خيمري؛ تم استبدال النطاق
‏الثابت من ‎IGHGT lal‏ بالجزء ‎IGHGT‏ المكافئ ذي الأصل البشري. نظرا لأن متوالية الحمض ف الأميني ‎amino acid sequence‏ للمنطقة المفصلية كانت متقاربة إلى حد بعيد؛ وتم ‎shal‏
‏"تحويل إلى 'فأري” للمنطقة المفصلية للإبقاء على طولها وصلابتها. ونظرا لأن المنطقة المفصلية
‏2 البشرية تناظر أقرب متجانس للمنطقة المفصلية ‎IGHGT‏ من الفأرء فإنه تمت دراسة
‏هذه المتوالية بشكل جيد. وتم تكوين سلسلة من “ متواليات مفصلية مختلفة (المتوالية ذات أرقام
‎١ —‏ الهوية ‎YY‏ إلى ‎(YA‏ من خلال إدراج أجزاء من الجسم 16/161 من الفأر والمناطق المفصلية 62 البشرية في جزء المنطقة ‎IGHG]‏ المفصلية البشرية. وتم تصميم سلسلة أخرى من الطافرات المفصلية ‎hinge mutants‏ وتم تكوينها (المتوالية ذات أرقام الهوية ‎oA‏ إلى ‎(VY‏ لتقييم تأثير أي من ‎cysteine‏ الإضافي وموضعه بطول النطاق 0 المفصلي؛ والغاء ‎OY ١‏ 9 أو ؛ أحماض أمينية ‎amino acids‏ بطول النطاق المفصلي وتوليفة من هذين المتغيرين (إضافة ‎cysteine‏ والغاء حمض أميني). مثال رقم 4؟: إنتاج الجسم ‎Mab‏ 224611 المتوافق مع البشر والهيئات ‎Mab‏ المفصلية المهندسة ‎engineered hinge Mab formats ays‏ تم إنتاج جميع جميع صور ‎Mab‏ التي تم وصفها فيما سبق ‎Ally‏ تحتوي على أي من المناطق ‎٠‏ المفصلية الخيمرية ‎chimeric‏ ؛ أو المتوافقة مع البشر ‎humanized‏ و/ أو المهندسة وراثياً ‎engineered hinge‏ عند نقل العدوى العارض وباستخدام نظام ‎HEK293/EBNA‏ مع ناقل التعبير ‎.(InVitrogen, US) pCEP4‏ تم تخليق متواليات ‎nucleotide‏ الكلية المناظرة للنسخ المتوافقة مع البشر للنطاقات المتغيرة للسلاسل الخفيفة والثقيلة ‎Mab‏ 2246511 (متوالية ذات رقم هوية ‎VA‏ متوالية ذات رقم هوية ‎VA‏ ‎Vo‏ ومتوالية ذات رقم هوية ‎(Yo‏ بواسطة تخليق الجين الكلي ‎Luxembourg)‏ ,68060051). وتم استنساخها ‎Le jd‏ إلى ناقل التعبير ‎InVitrogen, US) pCEP4‏ ( الحامل لمتوالية التشفير بالكامل للنطاق الثابت ‎[CH1-Hinge-CH2-CH3]‏ 1 19061 جلوبيولين مناعي بشري ‎.immunoglobulin‏ تم إجراء تعديل المنطقة المفصلية من خلال تبادل شظية ‎fragment‏ تقييد ‎{Nhell-Bell}‏ بواسطة الجزء المكافئ الذي يحمل التعديلات المطلوبة؛ وبحيث يتم تخليق كل ‎٠‏ شظية ‎{Nhel-Bell}‏ مناظرة منها بواسطة تخليق الجين الكلي ‎.(Genecust, LU)‏ تم ‎shal‏ ‏كافة خطوات الاستنساخ ‎By‏ لتقنيات بيولوجيا الجزيئات التقليدية وفقا لما تم وصفه في كتيب ‎(Sambrook and Russel, 2001) Laboratory‏ وفقاً لتعليمات جهة التوريد. تم التحقق من كل تركيبة جينية على نحو كامل بواسطة متوالية ‎Nucleotide‏ باستخدام مجموعة متوالية اررق
١ ‏اج‎
3100 ‏وتحليلها باستخدام‎ (Applied Biosystems, US) Big Dye ‏دورة عامل إنهاء‎ .Genetic Analyzer (Applied Biosystems, US)
تمت زراعة خلايا ‎HEK293 EBNA‏ المهيأة للتعليق ‎(InVitrogen, US)‏ على نحو روتيني في قوارير ‎75٠‏ مل من وسط خال من المصل ‎Excell 293 (SAFC Biosciences)‏ مكمل ب
‎fo}‏ 1 ملي مولار ‎glutamine‏ على وسيلة رج مدارية (سرعة دوران ‎٠‏ دور في الدقيقة).
‏تم إجراء نقل العدوى العارضة باستخدام ‎7.٠٠7‏ خلية / مل باستخدام ‎polyethyleneimine‏ ‎kDa Yo‏ مستقيم ‎(Polysciences) (PEI)‏ تم تحضيرها في الماء بتركيز نهائي يبلغ ‎١‏ مجم / مل مخلوطة و ‎plasmid DNA‏ (تركيز_نهائي ‎YoYo aly‏ ميكرو جم / مل للسلسلة الثقيلة والسلسلة الخفيفة بنسبة بلازميد تبلغ ‎(Ve)‏
‎٠‏ عند ؛ ساعات بعد نقل العدوى؛ تم تخفيف المزرعة باستخدام حجم واحد من وسط زراعة نقي لتحقيق كثافة خلايا نهائية تبلغ ‎٠١‏ خلية / مل. تمت مراقبة عملية الزراعة على أساس حيوية الخلية وانتاج ‎Mab‏ نمطياً؛ تم الاحتفاظ بالمزارع ‎sad‏ تتراوح من ؛ إلى © أيام. تم تطهير ‎Mabs‏ ‏باستخدام طريقة كروماتوجراف تقليدية على راتنج بروتين ‎GE ) Protein A resin‏ ‎.(Healthcare, us‏
‏5 تتم إنتاج جميع صور ‎Mabs‏ المختلفة على مستويات ملائمة ذات تقييمات وظيفية. تتراوح مستويات الإنتاجية نمطياً بين ‎١١‏ و30 مجم / لتر من ‎Mabs‏ المنقاة. مثال رقم *#: تقييم حالة فسفرة ‎c-Met phosphorylation‏ بواسطة تجربة ‎ELISA‏ المحددة ل ‎c-Met‏ الفوسفوري ‎Phospho‏ ‏تسمح هذه التجربة الفوسفورية ‎functional assay‏ بمراقبة تعديل حالة فسفرة
‎c-Met phosphorylation ٠٠‏ إما بواسطة أجسام 1/855 بمفردها أو في الوجود المشترك ل ‎HGF‏ ‏تمت تنوية ‎WIA‏ 8549 في طبق ‎VY‏ ملي مولار في وسط نمو كامل ‎[FCS 7 ٠١+ FI2K]‏ تم تجويع الخلايا لمدة ‎١١‏ ساعة قبل التحفيز ب ‎٠٠١[ HGF‏ نانو جم / مل]؛ وتمت إضافة كل
‏افر
-١/1-
جسم ‎Mab‏ يراد اختباره عند تركيزه النهائي الذي يبلغ ‎Vo‏ ميكرو جم/مل قبل تحفيز المركب الترابطي ب ‎Vo‏ دقيقة. وتمت إضافة المحلول المنظم للحل المبرد بالتلج بعد إضافة ‎HGF‏ ب ‎Vo‏ ‏دقيقة لإيقاف تفاعل الفسفرة ‎phosphorylation reaction‏ وتم كشط الخلايا ميكانيكيا وتم تجميع نواتج تحليل الخلايا بواسطة الطرد المركزي عند ‎١00١0‏ دورة في الدقيقة ‎٠١ sad‏ دقائق © عند ؛ درجة مئوية مناظرة لطور المحلول الطافي. وتم تحديد كمية المحتوى من البروتين باستخدام طقم ‎BCA‏ من ‎(Pierce)‏ وتم تخزينها عند - ‎٠١‏ درجة مئوية حتى الاستخدام. وتم تحديد كمية ‎dls‏ الفسفرة ‎phosphorylation‏ ل ‎c-Met‏ بواسطة ‎(ELISA‏ وتم استخدام جسم ‎alias‏ ل ‎—C—‏ ‎Met Mab‏ من ‎eld!‏ من ‎(R&D, ref AF276)‏ كجسم مضاد التقاط (تغليف طوال الليل عند ؛ درجة مثوية) وبعد خطوة تشبع باستخدام محلول منظم /185-85 © 7 ‎sad)‏ ساعة واحدة ‎٠‏ عند درجة حرارة الغرفة ‎(RT)‏ وتمت إضافة ‎YO‏ ميكرو جم من نواتج تحليل البروتين إلى كل عين من الطبق المغطى ب 976 ملي مولار. وبعد 90 دقيقة من الحضانة عند درجة ‎la‏ الغرفة؛ تم غسل الأطباق أربع مرات وتمت إضافة الجسم المضاد للكشف ‎slag)‏ ل ‎—c-Met Mab‏ الفوسفوري» والموجه ضد الوحدات البنائية ‎Tyr‏ المسفسرة عند الموضع ‎VIVE 3 ٠77١‏ و75١).‏ وبعد حضانة ‎sad‏ ساعة واحدة إضافية و؛ غسلات؛ تمت إضافة الجسم المضاد ‎Vo‏ للأرنب المقترن ب ‎HRP‏ من ‎(Biosource)‏ لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة وتم ‎shal‏ ‏كشف اللمعة من خلال إضافة ا1000100. وكانت قراءات التألق اللمعي على وسيلة قراءة طبق
متعدد الوضع 8920 ‎Mithras‏ من ‎.(Berthold)‏ ‏تم إبعاد التأثير عن كل من مستوى الفسفرة لمستقبل ‎c-Met‏ المحفز ‎JS‏ من المادة الأساسية و ‎٠٠١[ HGF‏ نانو جم / ‎[Je‏ لا بالمعالجة ب ‎(PBS‏ ولا بإضافة أجسام ‎Mabs‏ من الفأر أو بشرية ‎Yo‏ والتي لا تستهدف مستقبل ‎c-Met‏ البشري (الشكل رقم ‎.)١‏ ومن ناحية ‎caf‏ ثبط الجسم (00) ‎Mab‏ 224611 من الفأر فسفرة ‎c-Met‏ المحفزة ب ‎HGF‏ بقوة ‎٠٠١[‏ نانو جم / ‎[de‏ (الشكل رقم "ب) بدون تغيير من قبل ذاته لفسفرة المستقبل (الشكل رقم ‎(IY‏ على نحو يثير الاندهاش؛ ‎coal‏ ‏الصورة الخيمرية من الجسم ‎¢(224G11chim/IgGl) 224611 Mab‏ مما يعني أن النطاق المتغير ‎(VHHAVL)‏ من 0224611 المتحد مع النطاق الثابت البشري ‎IgGl kappa‏ قد أنتج ‎Yo‏ نشاط مساعد ‎VY) gf‏ 7 من التأثير الأقصى ل ‎(HGF‏ الشكل رقم ‎(IY‏ المرتبط بفعالية مضاد
الال منخفضة )04 7 تثبيط للتأثير الأقصى ل ‎HGF‏ مقارنة بالجسم 0224611 الذي يحدث ‎Avo‏ ‏تثبيط للتأثير الأقصى ل ‎HGF‏ الشكل رقم “ب). وقد أحدثت الصور الثلاث المتوافقة مع البشر من ‎[224G11]Hz2/lgGl + [224G11]Hz1/lgG1:224G11 Mab‏ و ‎([224G11]Hz3/IgG1‏ المتكون أيضا على الركيزة الأساسية ل ‎IgGl [kappa‏ البشرية؛ فعالية © مضاد منخفضة ونشاط مساعد كبير (من ‎١١‏ إلى ‎YE‏ 7 من التأثير الأقصى لمستوى ‎(HGF‏ ‏مقارنة بالجسم 224611 من الفأر (الشكلان رقما "أ و7ب). وتم تكوين سلسلة من النسخ المهندسة وراثيا من النطاق المفصلي للسلسلة الثقيلة وتمت تجربتها في تجربة فسفرة المستقبل ‎C=‏ ‎Met‏ وفقاً لما هو موضح في الشكل رقم ‎(fF‏ تمت ملاحظة تخفيض هام للتأثير المساعد المرتبط بالنمط ‎(led)‏ ل 1961/8008 لكل من التركيبة التي أساسها 10962 وبالنسبة للتركيبات ‎I9G1 kappa ٠‏ المهندسة وراثياً ‎(MH]‏ 1100914 و1117]. وتم الحصول كذلك على زيادة متزامنة في فعالية المضاد. وتم انتقاء الطافرة المفصلية ‎THT‏ التي أساسها 8م8م10961/8؛ مع معظم المتوالية البشرية؛ لاستكمال عملية التحويل إلى جسم متوافق مع البشر. في الخطوة التالية؛ تم توليد النسخ الثلاث المتوافقة مع البشر من النطاق المتغير للجسم ‎Mab‏ 224611 بواسطة الاندماج مع أي من 962/8068 البشري أو النطاق الثابت المفصلي المهندس ‎THT Lys‏ الذي أساسه ‎IgGl kappa Vo‏ بالنسبة للتكوينات ‎higG2 kappa‏ المتوافقة مع البشرء أحدثت النسخة ‎Hz3‏ ‏المتوافقة مع البشر مساعدة قوية (الشكل رقم ؛أ)؛ وبالنسبة لجميع النسخ الثلاث المتوافقة مع البشرء وكانت فعالية المضاد أدنى من الفعالية الملحوظة مع الجسم الفأري ‎Mab‏ 224611 وقابلة للمقارنة مع الجسم ‎Mab‏ الذي أساسه 71961 الخيمري )0¥=21 7 تثبيط لتأثير ‎(HGF‏ ‏الشكل رقم ؛ب). ومن ناحية أخرى؛ أدى دمج النسخ الثلاث المتوافقة مع البشر ‎Hz2‏ ,11 أو ‎٠٠‏ 3حلامع الطافرة 961/1117| المهندسة ‎Ul)‏ إلى استعادة خواص ‎Mab‏ 224611 من الفأر بالكامل تقريباً من حيث نشاط المساعد الضعيف )1-0 7 تأثير ‎(HOF‏ وفعالية مضاد قوية (من ‎TA‏ إلى 77 7 تثبيط لتأثير ‎(HGF‏ لفسفرة مستقبل ‎pal) c-Met‏ رقما ‎slo‏ 20( وتم تحسين هذه الصور المتغيرة بدرجة عالية مقارنة بالجسم 1/485 224611 الذي أساسه الجسم 1 الخيمري ولكن مقارنة كذلك بالصور المتوافقة مع البشر التي أساسها الجسم 962ا.
١ ‏م‎
وتم تكوين سلسلة ثانية من النسخ المهندسة وراثيا من النطاق المفصلي للسلسلة الثقيلة وتمت
تجربتها في تجربة فسفرة المستقبل ‎c-Met‏ . وفقاً لما هو موضح في الشكل رقم ‎VV‏ أظهرت
جميع تلك النسخ الجديدة :
(c224G11[C2], 224611]63[, c224G11[C5], c224G11[C6], c224G11[CT],
c224G11[A1-3], c224G11[CTA6], c224G11[C6AY], c224G11[C2A5-T], © c224G11[A5-6-7-8]) £224G11[C5A2-6], c224G11[CIA2-T] .
تأثير مساعد أضعف من 0224611 نظرا لأن أنشطة المساعدة الخاصة بها تتألف بين 6+ و؛١‏
# من تأثير ‎HGF‏ مقارنة ب ‎ley .0224611 17 YY‏ غرار [224611]1117»؛ أظهرت
جميع تلك النسخ الجديدة زيادة متزامنة في فعالية المضاد [الشكل رقم ‎١١‏ ب]. وأظهرت تلك ‎٠‏ النتائج أن هندسة ‎Ua‏ السلسلة الثقيلة بواسطة تطفير و/ أو إلغاء نقطة يمكن أن تعدل من
الخواص المساعدة / المضادة للجسم المضاد.
المثال رقم = تحليل ‎BRET‏
في أول مجموعة من التجارب؛ تم التحكم في أن الجسم 1961 من ‎Sl‏ عديم الصلة والجسم
1 البشري والجسم 962 البشري لم يكن له أي تأثير لإشارة ‎BRET‏ المحفزة ب ‎HGF‏ في كل ‎٠‏ .من نموذجي ‎BRET‏ (التجربة التمثيلية من ‎VY‏ تجربة مستقلة؛ الشكل رقم 71). وتم التنويه عن هذه
الأجسام 1/855 مقدما كعينات مقارنة.
وتم تقييم تأثير الصورة الخيمرية للجسم 1961 من الجسم ‎Mab‏ 224611 الفأري
‎([224G11]chim)‏ على كل من ديمرة ‎c-Met‏ ونموذج ‎BRET‏ لتنشيط ‎.c-Met‏ على الرغم
‏من أن الجسم ‎Mab‏ 224611 من الفأر قد تبط 59.4 7 من إشارة ‎BRET‏ المحفزة ب ‎HGF‏ ‎٠‏ على نموذج ديمرة ‎c-Met‏ وقد ‎YA. [224G11]chim Mab Li‏ 7 فقط (الشكل رقم ‎(Iv‏
‏وكان الجسم المضاد ‎[224G1 1]chim‏ أقل فعالية في تثبيط تنشيط ‎c-Met‏ المحفز ب ‎HGF‏
‏نظرا لأن الأجسام المضادة ‎[224G11]chim‏ و0224611 قد ثبطت على التوالي 7.5 7
‏07.8 7 من إشارة ‎BRET‏ المحفزة ب ‎HGF‏ (الشكل رقم ‎١‏ ب). علاوة على ما سبق؛ لم يكن
‏للجسم 01224611 بمفرده أي تأثير على تنشيط ]0-1/6 في حين كان للجسم ‎[224G11]chim‏
١ q —_
تأثير مساعد جزئي على تنشيط ‎c-Met‏ يناظر 77.4 7 من الإشارة المحفزة ب ‎(HGF‏ وتمت كذلك ملاحظة هذا التأثير المساعد الجزئي للجسم ‎[224G11]chim‏ على نموذج ‎BRET‏ لديمرة ‎c-Met‏ نظرا لأن 224611[0100] بمفرده قد حفز زيادة ‎BRET‏ تناظر 81.7 7 من الإشارة المحفزة ب ‎HGF‏ مقابل ‎7٠١‏ 7 للجسم 00224611 (الشكل رقم ‎(IV‏
0 في الشكلين رقمي “أ ‎cA‏ أظهرت الصور الخيميرية المفصلية المطفرة من الجسم المضاد 1 تأثير تثبيطي أكبر على إشارة ‎BRET‏ المحفزة ب ‎HGF‏ من الجسم ‎[224G11]chim‏ ‏نظراً لأنها أظهرت نسب تثبيط 84.7 ‎of Tet, of‏ و 87.7 7 و ‎VY.A‏ 7 لإشارة ‎BRET‏ ‏للتنشيط المحفزة ب ‎HGF‏ (الشكل رقم ‎(QV‏ ونسبة تثبيط 11.8 ‎NEE glove let gd‏ 7 لإشارة ‎BRET‏ لديمرة ‎c-Met‏ المحفزة ب ‎HGF‏ (الشكل رقم ‎(Tv‏ بالنسبة للأجسام :
[224G11][MH chim], [224G11][MUPSH chim], [224G11][MMCH chim] ٠ ‏الذي كان له‎ ([224G11]Jchim ‏على التوالي. وعلى عكس الجسم‎ [224G11][THT chim], ‏لم تظهر الصور الخيمرية المطفرة المفصلية للجسم‎ (c-Met ‏تأثير مساعد جزئي على تنشيط‎ ‏و-‎ AY ‏بمفرده (8.1 7 7.3 و-‎ c-Met ‏المضاد 224611 أي تأثير كبير على تنشيط‎
4 7 على التوالي) وفقا لما تمت ملاحظته بالنسبة للجسم 01224611.
في الشكل رقم 49 ب؛ على ‎Je‏ الجسم ‎([224G11] [THT chim]‏ لم تحفز النسخ الثلاث المتوافقة مع البشر للجسم المضاد ‎IGG]‏ 224611 مع المنطقة المفصلية ‎THT‏ أي زيادة ذات دلالة إحصائية في إشارة ‎BRET‏ في نموذج التنشيط عند اختبارها بمفردها وأظهرت تثبيطاً قوياً لإشارة ‎BRET‏ المحفزة ب ‎€).A5 54.4 (HGF‏ ل و3.لاه 7 للصور ‎Hz3 Hzl, Hz2‏ على التوالي. علاوة على ما سبق؛ ثبطت الأجسام ‎[THT Hz1]‏ [224611] [224611]
‎[THT Hz3], [TH7 Hz2] ٠‏ [224611] إشارة ‎BRET‏ المحفزة ب ‎HGF‏ على نموذج الديمرة بنسبة 07.7 ل و75.8 7 £9.85 7 على التوالي (الشكل رقم 4 أ). وعلى عكس الجسم 224611[00170]؛ لم تظهر الصورة الخيمرية للجسم المضاد 224611 2 وهي ‎chim])‏ 962ا] [224611]) أي تأثير مساعد جزئي بمفردها وإنما قامت بتثبيط ‎dus‏ 66.9 7 لتأثير ‎HGF‏ على تنشيط نموذج ‎c-Met‏ (الشكل رقم ‎٠١‏ ب). وعند ديمرة
‎A «=‏ — نموذج ‎«c-Met‏ قام الجسم ‎[224G11] [IgG2 chim]‏ بتثبيط 17.4 7# من إشارة ‎BRET‏ ‏المحفزة ‎HGF,‏ (الشكل رقم ‎٠١‏ أ). وتم تقييم فعالية المساعد للسلسلة الثانية من النسخ المهندسة وراثيا من النطاق المفصلي للسلسلة الثقيلة في نموذج ‎BRET‏ لتنشيط ‎c-Met‏ (الشكل رقم ‎(VA‏ وعلى النقيض من 6224611؛ © والذي كان له تأثير مساعد ‎Ja‏ على تنشيط 0-1/61؛ لم تظهر الصور الخيمرية المفصلية ‎c224G11[C2], c224G11[C3], c224G11[C3], c224G11[C6], 224611]‏ ‎c224G11[A1-3], c224G11[CTA6], c224G11[C6AY], c224G11[C2A5-T],‏ ‎€224G11[AS-6-T-8] 5 c224G11[C5A2-6], c224G11[COA2-T]‏ من الجسم المضاد 224611 أي تأثير ذي دلالة إحصائية على تنشيط ‎C-Met‏ بمفرده.
‎Ye‏ مثال رقم 7: التعرف على ‎c-Met‏ بواسطة الصور الخيمرية والمتوافقة مع البشر من الجسم 2241 تم ‎dae)‏ تجربة ‎ELISA‏ مباشرة لتحديد القدرة على الارتباط للصور الخيمرية والمتوافقة مع البشر المتنوعة على مستقبل ‎c-Met‏ لناتج عودة الاتحاد الجيني ‎genetic recombination‏ . باختصار تمت تغطية مستقبل ‎c-Met‏ ديمري ‎dimeric‏ لناتج عودة الاتحاد الجيني ‎genetic‏
‎R&D Systems (recombination ١٠‏ عند تركيز ‎V.Yo‏ ميكرو جم/مل على أطباق ‎Immunlon ١١‏ بها 47 ‎Je‏ ‏بعد حضانة طوال الليل عند ؛ درجة مثوية؛ تم إشباع العيون ب ‎gelatine 7 ٠.5‏ / محلول ‎PBS‏ وتمت بعد ذلك حضانة الأطباق لمدة ساعة واحدة عند ‎FY‏ درجة مئوية قبل إضافة تخفيفات ضعفين من الأجسام المضادة المراد اختبارها.
‎٠‏ وتمت حضانة الأطباق لمدة ساعة إضافية قبل إضافة الجسم ‎HRP‏ 196 من الماعز والمضاد ‎fal‏ لكشف الجسم المضاد الفأري ‎HRP;‏ للسلسلة الخفيفة كبا المضادة للماعز والتعرف على الجسم المضاد المتوافق مع البشر. تمت حضانة الأطباق لمدة ساعة واحدة وتمت إضافة الركيزة الأساسية من إنزيم فوق أكسيداز ‎sad TMB Uptima peroxydase‏ © دقائق قبل المعادلة باستخدام ‎١‏ مولار من ‎H2804‏
‏افر
‎“AY —‏ وأظهرت النتائج المقدمة في الشكل رقم ‎١١‏ أن جميع الصور المختبرة كانت مقارنة للتعرف على ‎.c—Met‏ ‏مثال رقم ‎eA‏ تأثير الجسم 224611 الفأري والخيمري على التكاثزر المحفز ب ‎NCI= WAI HGF‏ 1 في المعمل © تم استنبات خلايا ‎NCI-H441‏ من ‎ATCC‏ روتينياً في وسط 1640 ‎(Invitrogen RPMI‏ ‎«(Invitrogen Corporation) FCS % V+ 5 «Corporation, Scotland, UK)‏ و١‏ 7 1- ‎(Invitrogen corporation) glutamine‏ ولإجراء تجارب التكاثر؛ تم تقسيم الخلايا قبل الاستخدام بثلاثة أيام بحيث كانت في طور التدفق للنمو قبل وضعها في الأطباق. تم وضع خلايا 1101-1 في أطباق مزرعة نسيج ‎be 97 lg tissue culture plates‏ عند كثافة ‎Y.vo‏ ‎٠١ *‏ ؛ خلايا / العين في ‎٠٠09‏ ميكرو لتر من الوسط الخالي من المصل ‎serum free‏ ‎medium‏ (وسط 1640 ‎RPMI‏ علاوة على ‎(glutamine - 1 7 ١‏ بعد الوضع في الأطباق بأربع وعشرين ‎dele‏ تمت إضافة الأجسام المضادة المراد اختبارها إلى ‎NCI-H441‏ وتمت حضانتها عند ‎TV‏ درجة مثوية لمدة ثلاثين دقيقة قبل إضافة ‎HOF‏ بتركيز نهائي ‎aly‏ 50860 نانو جم / مل )0 نانو مولار) لمدة ‎VEY‏ ساعة إضافية. وتراوح مدى الجرعة المختبرة لكل جسم مضاد .من ‎٠١‏ إلى ‎١.5099‏ ميكرو جم/مل (تركيز نهائي في كل عين ‎final concentration in‏ ‎well‏ 8017© ). في هذه التجربة؛ تمت إضافة الجسم الفأري كعينة مقارنة للنوع المناظر الفأري وتمثلت الأجسام المضادة المختبرة في الجسم التالي: 01224611 وتم تمييز الصورة ‎IgG]‏ ‏الخيمرية البشرية منه في صورةة 224611[05100]. وتم أيضا إدراج العيون المملوءة بالخلايا بمفردها وتم كذلك إدراج ‎HGF‏ +/-. وبعد ذلك تم تعريض الخلايا لنبض يبلغ 75 ميكرو ‎Ci‏ ‎٠‏ من : ‎(Amersham Biosciences AB, Uppsala, Sweden) [3H]Thymidine‏ لمدة لا ساعات 5 ‎Ve‏ دقيقة. تم تحديد كمية سعة ‎[BH]Thymidine‏ المدرجة في حمض ‎DNA‏ غير القابل للذوبان في ‎trichloroacetic acid‏ بواسطة عد ومضان الساثل ‎liquid scintillation‏ 9 . تم التعبير عن ‎ll‏ في صورة بيانات عد في الدقيقة غير المحولة لتقييم نشاط المساعد الذاتي الكامن بشكل أفضل مما يمكن أن يحدث مع الأجسام ‎c-Met Mabs‏ المضادة ‎YO‏ عند إضافتها بمفردها إلى خلية الورم ‎tumour cell‏ . افر
-م- أوضحت التجارب التي تم وصفها في الشكل رقم ‎١١‏ أنه؛ وفقا لما هو متوقع؛ لم يظهر الجسم المضاد 0224611 الفأري أي تأثير مساعد عند إضافته بمفرده إلى ‎WA‏ ورم السرطان ‎cancer cells‏ مهما كانت الجرعة المختبرة. ولم تتم ملاحظة أي تثبيط ذي دلالة إحصائية للتكاثر المحفز ب ‎HGF‏ مع العينة المقارنة من النوع المناظر فيما يتعلق بالتنويعات في العد بالدقيقة الملاحظ لهذا المركب في هذه التجربة. وعند إضافته بمفرده؛ لم يظهر الجسم المضاد 1 أي تأثير مساعد مقارنة بالجسم ‎Mab‏ المقارن من ‎gall‏ المناظر 01961 أو الخلايا بمفردها. وتمت ملاحظة أنشطة مضادة للتكاثر ‎anti—proliferative activities‏ معتمدة على الجرعة تبلغ ‎VA‏ 7 بالنسبة للجسم 012246511 )7 حساب التثبيط: ‎WIA] -٠٠١‏ العد في الدقيقة + ‎Mab‏ المراد اختباره - متوسط خلفية العد في الدقيقة ‎٠٠١ X(MIgGT‏ ( متوسط ‎WIA‏ ‎٠‏ العد في الدقيقة + ‎HGF‏ - متوسط ‎WIA‏ العد في الدقيقة بمفرده)]). على نحو يثير الاندهاش؛ حفزت الصورة الخيمرية من الأجسام 1/855 224611 تأثير مساعد معتمد على الجرعة ذي دلالة إحصائية عند إضافتها بمفردها. واتسم هذا التأثير المساعد بأثر على التثبيط في المعمل ‎pial‏ المحفز ب ‎HGF‏ والذي تحول من ‎VA‏ 7 بالنسبة للجسم 224611 الفأري إلى 560 7 بالنسبة إلى صورته الخيمرية. لتحديد ما إذا كان ‎Jie‏ هذا النشاط المساعد الذاتي في المعمل ‎١‏ "الأقل" متوائم مع التأثير غير المتغير في الكائن الحي؛ تم إنتاج كل من 0224611 و ‎[224G11]chim‏ لاختبار في الكائن الحي. وكما في دراسات سابقة؛ اتسمت جرعة تبلغ ‎Vo‏ ‏ميكرو جم / فثران بنشاط في الكائن ‎al‏ ذي دلالة إحصائية؛ وتم انتقاء تلك الجرعة للتقييم في الكائن الحي. مثال رقم 9: مقارنة في الكائن الحي للجسم ‎Mabs‏ 224611 الفأري والخيمري على نموذج ‎٠‏ الطعم الخارجي ‎NCI-H441 xenograft model‏ تم اشتقاق ‎derived‏ خلايا ‎NCI-H441‏ من ورم سرطاني غدي للرئة الحليمية ‎papillary lung‏ ‎adenocarcinoma‏ ؛ ويعبر عن مستويات عالية من ‎c-Met‏ ويظهر فسفرة تكوينية ‎.c—Met RTK 1 constitutive phosphorylation‏ لتقييم تأثير الأجسام المضادة في الكائن ‎all‏ على نموذج الطعم الخارجي ‎(NCI-HA441‏ وتم ‎Yo‏ تكين ‎oh‏ منزوعة الغدة الدرقية يتراوح عمرها من ستة إلى ثمان أسابيع في أقفاص معقمة اررق
ام بمرشحات من أعلى؛ وتمت المحافظة عليها في ظروف معقمة.؛ وتم التعامل معها وفقا للإرشادات الفرنسية والأوروبية. وتم حقن الفثران تحت الجلد ب 9 * ‎٠١‏ + خلية. وبعد ذلك؛ بعد الغرس بستة ‎cali‏ كانت الأوام قابلة للقياس (ما يقرب من ‎٠٠١‏ مم7)؛ وتم تقسيم الحيوانات إلى مجموعات من فئران بحجم ورم قابل للمقارنة وتم علاجها أولا بجرعة تحميل تبلغ ‎Te‏ ميكرو جم من الجسم 0 المضاد / الفثران وبعد ذلك مرتين في الأسبوع ب ‎٠0‏ ميكرو جم / جرعة من كل جسم مضاد مطلوب اختباره. وتمت متابعة الفثران لملاحظة معدل نمو الطعم الخارجي. وتم حساب حجم الورم بواسطة المعادلة ‎xT / 7 (Pi)‏ طول ” عرض ” الارتفاع. التجارب التي تم وصفها في الشكل رقم ‎١١‏ توضح أن الجسم ‎Mab‏ الفأري كان خالية من نشاط المساعد في خواص في الكائن الحي؛ وفقا لما هو متوقع؛ كمضاد ‎of‏ حتى عند الجرعة المختبرة المنخفضة. وعلى النقيض مما ‎٠‏ هو ملاحظ مع الجسم ‎(lil Mab‏ أظهر الجسم الخيمري نشاط عارض للغاية في الكائن الحي وقد أفلت الورم تماما للعلاج عند 020 بعد حقن الخلية. وتظهر هذه التجربة بوضوح أن الزيادة في تأثير المساعد في المعمل الذي يترتب عليه نقص في نشاط المضاد كان مسؤولا أيضا عن فقد كبير في الكائن ‎al‏ للنشاط المضاد. مثال رقم ‎:٠١‏ تأثير الجسم ‎Mab‏ 224611 الفأري والنسخ الخيمرية والمتوافقة مع البشر المتنوعة من هذا الجسم المضاد على التكاثر المحفز ب ‎HGF‏ لخلايا ‎NCI-H441‏ في المعمل تمت زراعة خلايا ‎NCI-HA41‏ من ‎ATCC‏ على نحو روتيني في وسط 1640 ‎RPMI‏ من ‎«(Invitrogen Corporation) JAR «(Invitrogen Corporation, Scotland, UK)‏ و ‎(Invitrogen Corporation) glutamine—L yA‏ لاختبارات التكاثرء تم فصل الخلايا قبل ؟ أيام من اختبارات التكاثر بحيث كانت في طور التدفق ‎pall‏ قبل الوضع في الأطباق. تم وضع ‎٠‏ خلايا ‎NCI-H441‏ في أطباق زراعة للأنسجة بها 97 عين بكثافة تبلغ ‎٠١ x Tove‏ ؛ خلية / عين في ‎Yoo‏ ميكرو لتر وسط خال من المصل (وسط 1640 ‎RPMI‏ علاوة على ‎١‏ 7 1 - ‎(glutamine‏ بعد الوضع في الأطباق بأربع وعشرين ساعة؛ تمت إضافة الأجسام المضادة المراد اختبارها إلى ‎NCI-H441‏ وتمت حضانتها عند ‎TV‏ درجة مئوية لمدة ثلاثين دقيقة قبل إضافة ‎HGF‏ بتركيز نهائي يبلغ 50860 نانو جم / مل (© نانو مولار) لمدة ‎VY‏ ساعة إضافية. وتراوح ‎YO‏ مدى الجرعة المختبرة لكل جسم مضاد من ‎٠١‏ إلى ‎ver AY‏ ميكرو جم/مل (تركيز نهائي في كل
CAE
عين ‎final concentration in each well‏ ). في هذه التجربة؛ تمت إضافة الجسم ‎IgG]‏ ‎Mab‏ الفأري كعينة مقارنة للنوع المناظر الفأري وكعينة مقارنة سالبة للمساعد. وتمثلت الأجسام المضادة المختبرة في الجسم التالي: ‎)١‏ 01224611؛ وتم تمييز الصور ‎IgG]‏ الخيمرية البشرية منه على التوالي في الصور ‎chim, ]224611[ [MH chim], [224G11]‏ [224611] ‎[MUPOH chim], [224G11] [MMCH chim], ]224611[ [TH7 chim] ٠‏ ؟) وصور 1 المتوافقة مع البشر الخاصة بها التي تم وصفها على التوالي في صورة ‎[224G11]‏ ‎[224G11] [Hz2], ]224611[ [Hz3]‏ ,[121]. وتم أيضا إدراج العيون المملوءة بالخلايا بمفردها وتم كذلك إدراج ‎HGF‏ +/-. وتم إدخال الجسم المضاد 5105 بالكامل من ‎Genentech‏ ‏المتوفر تجارياً عند ‎ATCC‏ في صورة سلالة خلية الورم ‎tumour cell‏ الهجين كعينة مقارنة ‎٠‏ موجبة مساعد تام وبعد ذلك أطلق عليه 015005. وبعد ذلك تعريض الخلايا لنبض يبلغ ‎Yo‏ ‎Su‏ أ من ‎(Amersham Biosciences AB, Uppsala, Sweden) [3H]Thymidine‏ لمدة ‎١‏ ساعات ‎Top‏ دقيقة. تم تحديد كمية سعة ‎[BH]Thymidine‏ المدرجة في حمض ‎DNA‏ ‏غير القابل للذوبان في ‎trichloroacetic acid‏ بواسطة_ عد ‎glass‏ الساثل ‎liquid‏ ‎scintillation counting‏ . تم التعبير عن النتائج في صورة بيانات عد في الدقيقة غير المحولة ‎١‏ _لتقييم نشاط المساعد الذاتي الكامن بشكل أفضل مما يمكن أن يحدث مع الأجسام ‎c-Met Mabs‏ المضادة عند إضافتها بمفردها إلى خلية الورم ‎tumour cell‏ . أوضحت التجارب التي تم وصفها في الشكل ‎VE)‏ أنه وفقا لما هو متوقع؛ لم يظهر النوع المناظر المقارن ولا الجسم المضاد ‎M224G11‏ أي نشاط مساعد على تكاثر ‎NCI-H441‏ ‏وكان النوع المقارن المناظر بدون تأثير على تكاثر الخلية المحفز ب ‎HGF‏ في حين أظهر ‎٠‏ 0224611 16 7 تثبيط عند إضافته عند التركيز النهائي ‎Le‏ يبلغ ‎٠١‏ ميكرو جم/مل. وأظهر الجسم ‎MSDS‏ المستخدم كعينة مقارنة مساعد؛ وفقا لما هو متوقع؛ تأثير مساعد معتمد على ‎dep‏ تامة عند إضافته بمفرده إلى الخلايا. وفقا لما تمت ملاحظته بالفعل» أظهر الجسم ‎chim Mab‏ [224611] تأثيرا مساعدا معتمداً على الجرعة ذي دلالة إحصائية و؛ تمت ملاحظة نشاط تثبيطي منخفض لهذه الصورة الخيمرية: ‎١9‏ 7 بدلا من ‎TT‏ 7 للصورة الفأرية. وعند ‎Yo‏ إضافتها بمفردهاء أظهرت الأجسام 1/855 ‎IgG] ADEN‏ المتوافقة مع البشر تأثيرات مساعدة
—Ao— [224G11] [Hzl], sal ‏واتسمت‎ .m224G11 ‏معتمدة على الجرعة مقارنة بالصورة‎ ٠١ ort ‏مقارنة تتراوح من حوالي‎ alias ‏بأنشطة‎ [224G11] [Hz3]4224G11] [Hz2] ‏وكانت هذه الأنشطة أقل بدرجة ذات دلالة إحصائية من النشاط الخاص بالجسم‎ .7 Yo ‏تم اختبار صور 10661 خيمرية متنوعة. مقارنة بالجسم‎ VE ‏في الشكل رقم‎ .1 ‏الذي أظهر تأثيرا مساعدا معتمداً على الجرعة عند إضافته بمفرده إلى خلايا‎ ]224611[ chim © [224G11] [MH chim], [224G11] [MUP9H chim], sal ‏وكانت‎ (NCI-H441 ‏بدون تأثير مساعد ذاتي ذي دلالة‎ [224G11] [MMCH chim], [224G11] [THT chim] )7 57( 0224611 Mab ‏من النشاط الملاحظ للجسم‎ Jef ‏إحصائية. وكان نشاطها المضاد‎ [224G11] [MH chim], ‏و97 7 على التوالي للجسم‎ VA 79 ‏بالتثبيطات التي تصل إلى‎ .[224G11] [THT chim] {224G11] [MUP9H chim], [224G11] [MMCH chim] ٠١ 224611 ‏مع البشر المتنوعة للجسم‎ IgG] ‏التأثير في المعمل للصورة المتوافقة‎ :١١ ‏مثال رقم‎
Mab تم استنبات خلايا ‎NCI-HA41‏ من ‎ATCC‏ روتينياً في وسط 1640 ‎(Invitrogen RPMI‏ ‎«(Invitrogen Corporation) FCS % V+ 5 «Corporation, Scotland, UK)‏ و١‏ 7 1- ‎(Invitrogen corporation) glutamine Yo‏ ولإجراء تجارب التكاثر؛ تم تقسيم الخلايا قبل الاستخدام بثلاثة أيام بحيث كانت في طور التدفق للنمو قبل وضعها في الأطباق. تم وضع خلايا 1101-1 في أطباق مزرعة نسيج ‎be 97 lg tissue culture plates‏ عند كثافة ‎Y.vo‏ ‎٠١ *‏ ؛ خلايا / العين في ‎Yoo‏ ميكرو لتر من الوسط الخالي من المصل ‎serum free‏ ‎medium‏ (وسط 1640 ‎RPMI‏ علاوة على ‎(glutamine - 1 7 ١‏ بعد الوضع في الأطباق ‎Yo‏ بأربع وعشرين ‎dele‏ تمت إضافة الأجسام المضادة المراد اختبارها إلى ‎NCI-HA4T‏ وتمت حضانتها عند ‎FV‏ درجة مئوية لمدة ثلاثين دقيقة قبل إضافة ‎HGF‏ بتركيز نهائي يبلغ ‎50٠0‏ نانو جم / مل (© نانو مولار) لمدة ‎VEY‏ ساعة إضافية. وتزاوح مدى الجرعة المختبرة لكل جسم مضاد من ‎٠١‏ إلى 0041© ميكرو جم/مل (تركيز نهائي في كل عين ‎(final concentration in each well‏ في هذه التجربة؛ تمت إضافة الجسم ‎Mab Yo‏ 1061 الفأري كعينة مقارنة ‎pall‏ المناظر الفأري وكعينة مقارنة سالبة للمساعد. وتمثلت اررق
— A ‏أ‎ —
الأجسام المضادة المختبرة في الجسم التالي: ‎em224G11 )١‏ وتم تمييز الصور 1061 الخيمرية
البشرية منه على التوالي في الصور ‎chim, [224G11] [MH chim],‏ [224611]
[224G11] [MUPSH chim], [224G11] [MMCH chim], [224G11] [TH7 chim]
") وصور ‎[9G]‏ المتوافقة مع البشر الخاصة بها التي تم وصفها على التوالي في صورة
[224G11] [Hz1], [224G11] [Hz2], ]224611[ [Hz3] ©
وتم أيضا إدراج العيون المملوءة بالخلايا بمفردها وتم كذلك إدراج ‎HGF‏ +/-. وتم إدخال الجسم
المضاد 505 بالكامل من ‎Genentech‏ المتوفر ‎Las‏ عند ‎ATCC‏ في صورة سلالة خلية الورم
‎tumour cell‏ الهجين كعينة مقارنة موجبة مساعد تام وبعد ذلك أطلق عليه 01505. وبعد ذلك
‏تعريض ‎WAN‏ لنبض ‎aly‏ 6.75 ميكرو ‎Ci‏ من ‎(Amersham [3H]Thymidine‏ ‎Biosciences AB, Uppsala, Sweden) ٠‏ لمدة ‎١‏ ساعات و٠‏ ؟ دقيقة. تم تحديد كمية سعة
‎trichloroacetic acid ‏غير القابل للذوبان في‎ DNA ‏المدرجة في حمض‎ [BH]Thymidine
‏بواسطة عد ومضان السائل ‎liquid scintillation counting‏ .
‏تم التعبير عن النتائج في صورة بيانات عد في الدقيقة غير المحولة لتقييم نشاط المساعد الذاتي
‏الكامن بشكل أفضل مما يمكن أن يحدث مع الأجسام ‎c-Met Mabs‏ المضادة عند إضافتها ‎٠‏ بمفردها إلى خلية الورم ‎tumour cell‏ .
‏أوضح الشكل رقم ‎Vo‏ أن الجسم ‎Mab‏ 0224611 أظهر التأثير التثبيطي المعتاد ‎١76(‏ 7
‏تثبيط). واتسمت الصورة 1961 الخيمرية وهي ‎[224G11] chim‏ وفقا لما هو متوقع تأثير
‏مساعد ذات معتمد على الجرعة وتأثير مضاد أقل مقارنة بالصورة الفأرية: 7 7 مقابل 76 7
‏تثبيط. واتسم الجسم بنشاط مساعد ضعيف للغاية في هذه التجربة. ومع ذلك فقد أظهر تأثير ‎٠‏ تثبيطي ‎AY) dle‏ 7) قريب من التأثير الملاحظ للجسم ‎Mab‏ الفأري.
‏لم تتسم الصورتان المتوافقتان مع البشر بأي تأثير مساعد ذاتي واتسمتا بنشاط مضاد قريب لتلك
‏الملاحظة للجسم ‎Mab‏ الفأري أو ‎[THT chim]‏ [2246©11] بنسبة تثبيط على التوالي تبلغ 197
‎. [224G11] [THT Hz3] ‏[224611]و‎ ]1117 Hz1] ‏و 6لا 7# للجسم‎
‏اررق
_ A 7 _
مثال رقم 17: مقارنة في الكائن ‎all‏ للأجسام ‎Mabs‏ 224611 الفأرية؛ والخيمرية والمتوافقة مع
البشر التي تحمل أي من النوع غير المعالج أو النوع المفصلي ‎THT‏ المهندس وراثياً (نموذج
الطعم الخارجي ‎(NCI-H441‏
تم اشتقاق خلايا ‎NCI-H441‏ من ورم سرطاني غدي للرئة الحليمية ‎papillary lung‏
‎adenocarcinoma ©‏ ويعبر عن مستويات ‎Alle‏ من ‎c-Met‏ ويظهر فسفرة تكوينية
‎.c—Met RTK 1 constitutive phosphorylation
‏لتقييم ضرورة الهندسة الوراثية المفصلية لحفظ نشاط في الكائن ‎all‏ للجسم المضاد الفأري
‎emurine antibody 224G11‏ تم تسكين ‎of‏ منزوعة الغدة الدرقية يتراوح عمرها من ستة إلى
‏ثمان أسابيع في أقفاص معقمة بمرشحات من ‎lef‏ وتمت المحافظة عليها في ظروف معقمة؛ ‎Yo‏ وتم التعامل معها وفقا للإرشادات الفرنسية والأوروبية.
‏وتم حقن الفثران تحت الجلد ب 49 7 ‎١ ٠١‏ من خلايا 01-11441)ل. وبعد ذلك؛ بعد غرس الخلية
‏بستة ‎Gl‏ كانت الأورام ‎ALE‏ للقياس (ما يقرب من ‎(Fae ٠٠١‏ وتم تقسيم الحيوانات إلى
‏مجموعات من + فثران بحجم ورم قابل للمقارنة وتم علاجها أولا بجرعة تحميل تبلغ ؟ مجم من
‏الجسم المضاد / الفثران وبعد ذلك مرتين في الأسبوع ب ‎١‏ ميكرو جم / جرعة من كل جسم مضاد ‎٠‏ مطلوب اختباره.
‏وتم تقييم الأجسام المضادة في هذه التجربة بما في ذلك 01224611 والصورة الخيمرية التي
‏تظهر النوع المفصلي غير المعالج (6224611)؛ والصورة الخيمرية المهندسة وراثياً -1147
‏([10ا© 224611]1117)؛ والصور الثلاث المتوافقة مع البشر التي تحمل النوع المفصلي غير
‎224611 [IgG1 Hz3]) ‏و‎ )224611]961 Hzl], 224G11[IgG1 Hz2] ‏المعالج‎ ‎(224G11[THT Hzl], 224G11[THT Hz2] ‏المهندسة وراثيا المناظرة‎ THT= ‏والصور‎ ٠
‎[THT Hz3])‏ 224611. وتمت متابعة ‎al‏ لملاحظة معدل نمو الطعم الخارجي.
‏وتم حساب حجم الورم بواسطة المعادلة ‎xT / 7 (Pi)‏ طول ‎X‏ عرض ‎X‏ الارتفاع.
‏النتائج التي تم وصفها في الشكل رقم 17 توضح أن الجسم ‎Mab‏ الفأري كان خالياً من أي نشاط
‏مساعد في خواص في الكائن الحي؛ وفقاً لما هو متوقع؛ كمضاد قوي في الكائن الحي. وعلى
م ‎A‏ _ النقيض مما هو ملاحظ مع الجسم ‎Mab‏ الفأري» أظهرت كل من الصورة الخيمرية والمتوافقة مع البشر التي تحمل النوع المفصلي غير المعالج الذي تم عرضه نشاط عارض للغاية فقط في الكائن الحي. في أي من الحالتين ترتب على استبدال النوع المفصلي غير المعالج بالنوع المهندس وراثيا ‎THT‏ استعادة تامة للنشاط في الكائن ‎all‏ تمت ملاحظته مع الأجسام المضادة الفأرية. وتظهر 0 هذه التجربة بوضوح أن الزيادة في تأثير المساعد في المعمل التي يترتب عليها نقص في نشاط المضاد كانت مسؤولة أيضا عن فقد كبير في الكائن الحي للنشاط المضاد. كما تظهر أن استخدام المنطقة المهندسة وراثيا ‎THT—‏ بدلا من النوع غير المعالج يكون مطلوبا للمحافظة على خواص الجسم ‎Mab‏ الفأري في الكائن الحي. مثال رقم ‎:١١‏ تأثير الجسم 01224611 وصورته 224611" المتوافقة مع البشر على تخفيض ‎c-Met ٠‏ في المعمل في الأمثلة التالية؛ لتجنب الشك؛ يشير التعبير 224611" إلى الصورة ‎[THT Hz3]‏ 224611 المتوافقة مع البشر ‎[THT HZ3]‏ 224611 من الجسم المضاد من الاختراع. تم انتقاء سلالتي خلايا لتناول نشاط الأجسام المضادة ل ‎c-Met‏ على ‎Plas)‏ مستقبل ‎c-Met‏ ‎A549 (#HTB-174) Jiu,‏ و ‎NCI-H441 (#CCL-185)‏ سلالتي خلايا ‎NSCLC‏ من ‎Vo‏ مجموعة ‎ATCC‏ وتمت تنوية ‎NCI-H441 Wa‏ في 1640 ‎glutamine-L 7) + RPMI‏ ‎FBS 7 ٠١ +‏ منشط بالحرارة؛ عند تركيز ‎٠١ XY‏ ؛ خلايا / ‎Yau‏ في أطباق بها ست عيون لمدة ‎VE‏ ساعة عند ‎TY‏ درجة ‎Asie‏ في جو من 5 7 002. وتمت تنوية خلايا 0549 في ‎FBS‏ منشطة بالحرارة ‎٠١ + FI2K‏ 7 منشطة ‎Gall‏ عند ‎٠١ XY‏ ؛ خلايا / سم ‎SAY‏ ‏أطباق بها ست عيون لمدة ؛ ‎١‏ ساعة عند ‎١‏ درجة ‎YEP‏ في جو من د 7 ‎.CO2‏ ‎Yo‏ وبعد ذلك؛ تم غسل الخلايا مرتين بمحلول ملحي منظم بفوسفات ‎(PBS)‏ قبل أن يتم إزالة المصل منه لمدة ‎YE‏ ساعة إضافية. وتمت إضافة الأجسام المضادة ‎٠١( c-Metd‏ ميكرو جم/مل)؛ و 1 غير ذي صلة ‎٠١(‏ ميكرو جم/مل)؛ أو ‎HGF‏ )£00 نانو جم / مل) في وسط ‎DMEM‏ خالي من المصل عند ‎YY‏ درجة مئوية. وبعد أي من ؛ ساعات أو 74 ساعة من الحضانة؛ تمت إزالة الوسط برفق وتم غسل الخلايا مرتين باستخدام ‎PBS‏ بارد. وتم تحليل الخلايا
A=
باستخدام ‎508٠0‏ ميكرو لتر من محلول منظم للتحليل المبرد بالثلج ‎١[‏ 5 ملي مولار من ‎Tris—HCI‏ ‏(برقم هيدروجين 7.5)؛ و١5٠١‏ ملي مولار ‎«Nonidet P40 7١و «NaCl‏ و ‎٠.٠‏ 7 دايوكسي كولات؛ و١‏ قرص به مزيج من مثبط إنزيم بروتيز تام علاوة على ‎١‏ 7 من مضاد إنزيمات فوسفاتاز]. وتم رج نواتج تحليل الخلايا لمدة ‎٠0‏ دقيقة عند ؛ درجة مئوية وتم جعلها رائقة عند ‎٠50006 0‏ دورة في الدقيقة ‎٠١ sad‏ دقائق. وعند هذه المرحلة؛ أمكن تخزين نواتج تحليل الخلايا عند ‎٠0 —‏ درجة مثوية حتى الحاجة إليها لتحليل لطخة وسترن ‎western blot‏ . وتم تحديد كمية تركيز البروتين باستخدام 868. وتم فصل نواتج تحليل الخلايا الكاملة )0 ميكرو جم في ‎٠١‏ ‏ميكرو لتر) بواسطة ‎SDS-PAGE‏ وتم نقلها إلى غشاء نيترو سليلوز. وتم إشباع الأغشية لمدة ‎dela‏ واحدة عند ‎dap‏ حرارة الغرفة مع ).+7 20 ‎TBS-Tween‏ (1851)؛ ‎Zo‏ من حليب ‎٠‏ جاف بدون دسم وتم سبره باستخدام جسم مضاد ل ‎c-Met‏ (تخفيف ‎)٠٠٠١ /١‏ طوال الليل عند ؛ درجة مئوية في -1851 75 من حليب جاف بدون دسم. وتم تخفيف الأجسام المضادة في محلول ملحي منظم بتريس- ‎tween 20 7 0.١‏ (حجم/ حجم) ‎(TBST)‏ مع ‎١‏ 7 حليب ‎Gala‏ ‏بدون دسم. وبعد ذلك؛ تم ‎Jue‏ الأغشية ب ‎TBST‏ وتمت حضانتها باستخدام جسم مضاد ثانوي مترافق مع إنزيم فوق أكسيداز (نسبة تخفيف ‎)٠٠٠١ :١‏ لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة. ‎VO‏ وتم تصور البروتينات المتفاعلة مناعيا باستخدام ‎(Pierce # 32209) ECL‏ وبعد تصور ‎C=‏ ‎(Met‏ تم غسل الأغشية مرة أخرى باستخدام ‎TBST‏ وتمت حضانتها لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة الغرفة باستخدام الجسم المضاد ل ‎GAPDH‏ (نسبة تخفيف ‎)٠٠٠٠٠١ /١‏ في ‎TBST‏ - 5 7 من حليب ‎Gila‏ بدون دسم. وبعد ذلك؛ تم ‎Jue‏ الأغشية في ‎TBST‏ وتمت حضانتها مع الأجسام المضادة الثانوية المترافقة مع إنزيم فوق أكسيداز لمدة ساعة واحدة عند درجة حرارة ‎٠‏ الغرفة. وتم ‎Jue‏ الأغشية وتم كشف ‎GAPDH‏ باستخدام ‎ECL‏ وتم تحديد شدة النطاق باستخدام
مقياس الكثافة. النتائج المقدمة في الأشكال أرقام ‎ve 5 ١9‏ أظهرت أن كل من 00224611 و ‎h224G11‏ ‏يكونان قادرين بدرجة كبيرة على التخفيض المتحكم فيه ل ‎c-Met‏ بطريقة معتمدة على الجرعة؛ في كل من سلالتي الخلايا 8549 و 001-11441. ويكون التخفيض المتحكم فيه هاما بالفعل ‎YO‏ بعد زمن حضانة لمدة ؛ ساعات وزادت مع ذلك عند ؛ ؟ ساعة. وتناظر الأشكال البيانية المجسمة
Pa ‏القيم المتوسطة أو على التوالي ؛ و9 تجارب مستقلة. وتم‎ Iv, ‏المقدمة في الأشكال أرقام أ‎
VA ‏التي تناظر تجربة واحدة هامة في الشكلين رقمي‎ western blot ‏إدراج صور لطخة وسترن‎
TARE
‏تأثير الجسم 70224611 وصورته 224611" المتوافقة مع البشر على تتابع‎ :٠4 ‏مثال رقم‎ ‏في المعمل‎ c-Met o ‏تحدث الصور المتتابعة القابلة للذوبان من المستقبل0-1/61 بشكل طبيعي في مصل مطعم خارجياً‎ ‏علاوة على‎ c-Met ‏من الفثران بورم بشري أو في مصل مريض من البشر يحمل أورام تعبر عن‎ ‏با عتبارها‎ 01130 Mab ‏مثل الجسم‎ c-Met ‏ما سبق؛ يتم وصف الأجسام المضادة الموجهة ضد‎
Jie 01224611 ‏في التجارب في المعمل. ولتحديد ما إذا كان للجسم‎ c-Met ‏محفزات تتابع ل‎ ‏وعندما‎ (FCS ‏من وسط‎ 7 ٠١ ‏هذه الخاصية؛ وتمت تنوية الخلايا في أطباق بها ست عيون في‎ ٠ ‏تدفق؛ تمت إزالة الوسط وتمت إضافة وسط المزرعة التام الجديد‎ 7 Av ‏وصلت إلى ما يقرب من‎ ‏ساعة إضافية مع أي من‎ VY sad ‏المركبات المراد اختبارها. وتمت حضانة الخلايا‎ -/ + ‏(أسيتات‎ PMA ‏والجسم المقارن من النوع المناظر 001961 أو .085. وتم إدخال‎ 1 ‏على الخلايا لتحديد تأثير المركب‎ HGF ‏ميريستات فوربول) كمحفز تتابع. وتم أيضا اختبار‎ ‏على تتابع الحدوث الطبيعي. وبعد ذلك تم تجميع المحاليل الطافية وتم‎ c-Met ‏الترابطي ل‎ ١ ‏الذي تم التقاط صوره القابلة‎ ELISA ‏ميكرو مولار قبل الاستخدام في اختبار‎ ١7 ‏ترشيحها على‎ ‏الذي لا يتعرف على نفس القمة اللاصقة في‎ c-Met ‏مع الجسم المضاد ل‎ c-Met ‏للذوبان من‎ ‏علاوة على ما سبق؛ تم غسل الخلايا‎ (VY ‏صورة أي من 00224611 أو 01151 (الشكل رقم‎ ‏وتم تحليلها لتحديد تركيز البروتين. وبالنسبة لإجراء تجربة‎ PBS ‏من كل عين مرة واحدة باستخدام‎ ‏؛ تم استخدام 224010 كجسم مضاد التقاط وبعد تشبع الطبق؛ تمت إضافة المحاليل‎ ELISA ٠
C= Syma ‏وتم استخدام‎ (ELISA ‏الطافية المرشحة من الأطباق التي بها ستة عيون في اختبار‎ ‏مونومرية كمقارن موجب. وبعد حضانة المحلول الطافي؛ تم غسل الأطباق لإزالة المستقبل‎ Met 224611 ‏الملتقط بواسطة الجسم‎ c-Met ‏و0111 غير المرتبطين لكشف المستقبل‎ c-Met ‏وتم في النهاية إجراء إحداث صلة بالاختبار بواسطة إضافة جسم مضاد متعدد النسيلة‎ Mab
HRP ‏مضاد ل 176 ومترافق مع‎ Yo qn ‏قد حدث عندما تم‎ c-Met ‏أن التتابع الطبيعي ل‎ YY ‏تشير النتائج الموضحة في الشكل رقم‎ ‏ساعة في المعمل. ولم تتم ملاحظة أي تأثير ل 011961. ومع ذلك؛ بدا‎ VY ‏استنبات الخلايا لمدة‎ ‏تثبط تتابع 61/ا-0. وتم التأكيد على هذه النتائج بالنسبة لثلاث سلالات‎ m224G11 ‏أن إضافة‎ ‏وفي تلك التجربة الثانية؛ أدى‎ YY ‏في الشكل رقم‎ ) MKN45 HsT46T, EBCL ( ‏خلايا أخرى‎ ‏على الأقل في سلالاتي الخلايا‎ c-Met ‏المضاف باعتباره محفز تتابع إلى زيادة تتابع‎ (PMA © ‏في‎ (MKN45 ‏وفقاً لما كان متوقعا بدرجة ذات دلالة إحصائية في سلالاتي الخلايا ( 157461 و‎ ‏كعينة مقارنة. لم يتم حفز أي تتابع‎ HGF ‏تم إدخال‎ «(YE ‏النهاية؛ في تجربة ثالثة (الشكل رقم‎ ‏مقارنة بالخلايا بمفردها أو الخلايا + 011961. مرة أخرى؛ تمت ملاحظة‎ HGF ‏إضافي بواسطة‎ .M224G11 ‏مع‎ c-Met ‏تثبيط ذي دلالة إحصائية لتتابع‎ ‏على سلالات الخلايا المتنوعة‎ "224611 Ab ‏التأثير الذاتي للجسم‎ Yo ‏مثال رقم‎ Ys ‏في التجارب السابقة التي تم وصفها في هذه البراءة؛ اتضح أنه على النقيض مما تمت ملاحظته‎ ‏لا‎ ١224611 ‏505؛ و01224611؛ وصورته المتوافقة مع البشر‎ Jie ‏مع أجسام مضاد أخرى‎ ‏تظهر سلالات خلايا ورم ذات نشاط ذاتي ذي دلالة إحصائية. لتمديد هذه الخاصية إلى سلالات‎ ‏و/5ااع_الفوسفورية مع الجسم‎ western blot ‏تم إجراء لطخة وسترن‎ (AY) ‏الخلايا‎ ‏السرطان» ذات‎ WIA ‏المضاد بمفرده» وتمت إضافته للمرات المتنوعة» على مجموعة من سلالات‎ ١ 157461, NCI-H441, 155781, ‏بما في ذلك‎ «c-Met ‏مستويات متغيرة من التعبير عن‎ ‏وتم أيضا إجراء نفس الاختبار في خلية‎ .8061-01125, 1986, MDA-MB-231, PC3
HUVEC ‏عادية هي:‎ ‏التي تم‎ phosphor ‏الفوسفورية‎ cMet ELISA ‏وتم بالفعل وصف الطريقة الخاصة بتجربة‎ « western analysis jing ‏وصفها في مثال رقم © من طلب البراءة الحالية. بالنسبة لتحليل‎ Yo ‏تم عمل نواتج تحليل البروتين من الخلايا المحولة إلى كريات بواسطة الحضانة في محلول منظم‎ 15-10١ ‏ملي مولار من‎ V+] phosphatase ‏ومثبطات‎ proteases ‏تحليل مع إنزيمات‎ 7 ‏وه..‎ EGTA ‏ملي مولار من‎ ١و‎ NaCl ‏ملي مولار‎ ١٠5١و‎ (Vet 0اانيجورديه ‏(برقم‎ ‎sodium ‏؛ و١٠ ملي مولار من‎ sodium fluoride ‏ملي مولار من‎ ٠٠١و‎ (Nonidet P40
PMSF ‏؛ و ؟ ملي مولار من‎ orthovanadate ‏؛ و١ ملي مولار من وسط‎ pyrophosphate Yo
—qy— ‏عند ؛ درجة مثوية. وتم إخلاء نواتج‎ [aprotinin ‏؛ و١٠ مجم/ مل‎ leupeptin ‏مجم/ مل‎ ٠١و‎ 7 8 ‏تحليل البروتين من فتات الخلايا بالطرد المركزي؛ وتم تحليلها بالاستشراد الكهربائي على‎ ‏وتم تعريضها للاستشراد الكهربائي إلى غشاء نيترو سليلوز‎ «SDS-PAGE ‏هلامات‎ ‏تعريض نواتج تحليل الخلايا‎ c-Met ‏056اناا0100086. وبالنسبة لتجارب‎ membrane electrophoresis ‏للترسيب المناعي لبروتين معين محل الاهتمام قبل الاستشراد الكهربائي‎ © ‏والتحويل.‎ ‏مرةٍ أخرى أنه لم يكن هناك أي نشاط ذاتي‎ YY ‏إلى‎ Yo ‏توضح النتائج المقدمة في الأشكال أرقام‎ ‏للجسم المضاد 0224611 ملاحظ في الخلايا التي تم اختبارها.‎ ‏مقارنة في الكائن الحي ل 224611 من النوع غير المعالج من الفثران مع صورة‎ YT ‏المثال رقم‎ [224G11 [C2D5-7 ‏موصوفة على هيئة‎ 224611 Uys ‏منطقة مفصلية خيمرية مهندسة‎ ٠ {(NCI=H44] ‏(نموذج مطعم‎ ‏من ورم غدي سرطاني بالرثة لورم حليمي, ويعبر عن مستويات مرتفعة‎ NCI-H44T ‏تم اشتقاق‎ .c-Met RTK ‏ويوضح ضفرة تتابعية ل‎ ,c-Met ‏من‎ ‎1177 4 ‏لتقييم ضرورة هندسة المنطقة المفصلية لحفظ النشاط في الكائن الحي للجسم المضاد‎ ‏أسابيع في أقفاص‎ A ‏من الفثران, تم إيواء فثران منزوعة الغدة الدرقية تتراوح أعمارهها من 6 إلى‎ 5 ‏للتوجيهات‎ By ‏معقمة مزودة بمرشح في قمتها, والاحتفاظ بها في ظروف معقمة ومتحكم فيها‎ + ‏خلايا 61-11441ل2. ثم, بعد‎ ٠١4 ‏الفرنسية والأوربية. تم حقن الفثران تحت الجلد باستخدام‎ ‏وتم تقسيم الحيوانات إلى‎ (Vas ٠٠١ ‏أيام من غرس الخلايا, كانت الأورام قابلة للقياس (تقريبا‎ ‏متشابهة ومعالجتها أولا بجرعة محملة من ؟‎ ALE ‏مجموعات تتكون من + فثران ذات أحجدام ورم‎ ‏مجم/جرعة من كل جسم مضاد‎ ١ ‏مجم من الجسم المضاد /الفأر ثم مرتين في السبوع باستخدام‎ Yo ‏مراد اختباره. تم إخضاع الفثران للملاحظة لمراقبة معدل نمو الطعم. تم حساب حجم الورم بواسطة‎
VY ‏العرض # الارتفاع. توضح النتائج الموصوفة في الشكل رقم‎ X ‏الصيغة: 01(7)/ 26 الطول‎ ‏من الفئران الخالي من أي نشاط مساعد في المعمل يسلك, كما هو متوقع, كمقوي في‎ Mab ‏أن‎ ‏مضاد في الكاثئن الحي. وكما تقترح النتائج التي تم الحصول عليها في المعمل, في تجارب الفسفرة,‎ ‏افر‎
—qy— ‏الجسم المضاد ذا المنطقة المفصلية المهندسة وراثيا 224611]0205-7ع], لا يظهر تأثير‎ ‏الحي, مشابه لذلك الخاص ب 00224611 على‎ AN ‏مساعد ملحوظ, ويظهر نشاط قوي في‎ ‏المطعم.‎ NCI-H441 ‏نموذج‎ ‎ADCC ‏في اختبار‎ ١224611 ‏تقييم‎ :١١7 ‏المثال رقم‎ ‏جزء من فعاليته في‎ ADCC ‏كما يعد 62246511 عبارة عن نوع مناظر 0961ا, يتعين اعتبار‎ © ‏في المعمل باستخدام إما‎ [S1Cr] ‏في البشر. تم إجراء تجربة إطلاق سمية الخلايا‎ al ‏الكائن‎ ‏من الخلايا الليمفاوية وحيدة‎ NK ‏خلايا‎ dan, ‏كخلايا هدف‎ NCI-H441 ‏أو خلايا‎ 1 ‏النواة للدم المحيطي من البشر.‎ ‏الهدف باستخدام أو بدون‎ NCI-H441 ‏أو‎ 157461 WA ‏مليون من‎ ١ ‏بإيجاز, تمت حضانة‎ (Perkin ‏من 1ككروم‎ Ci ‏ميكرو‎ ٠٠١ ‏في وجود‎ 0224611 Ab ‏ميكرو جم من‎ 7 ٠ ‏الطبيعية‎ (NK) ‏خلية مع عدد متزايد من خلايا‎ ٠١" X ‏ساعة واحدة. ثم تم وضع ؛‎ ةدملاع١016(‎ ‏باستخدام انتقاء سالب‎ (PBMC) ‏القاتلة من البشر والمعزولة من خلايا وحيدة النواة الدم المحيطي‎ ‏درجة‎ TV ‏ال5180006). تمت حضانة الخلايا معا لمدة ؛ ساعات إضافية عند‎ Technologies) 51Cr ‏مثوية. تم حساب نسبة تحلل الخلايا باستخدام الصيغة: [(إطلاق تجريبي +©516- إطلاق‎ ‏الإطلاق التلقائي العدات التي‎ Say .٠٠١*|])يئاقلت‎ 5160+ ‏تلقائي)/(إطلاق 5103 كامل- إطلاق‎ Ye ‏تم الحصول عليها عند زراعة الخلايا الهدف في غياب الخلايا القاتلة الطبيعية. يعبر الإطلاق التام‎ .٠٠١-فعض ‏تريتون‎ 17١ ‏عند تحليل الخلايا الهدف باستخدام‎ de ‏العدات التي تم الحصول‎ (ve ‏(شكل رقم‎ HST46T ‏على نحو ملحوظ على تحسين تحلل كل من‎ h224G11 ‏عمل‎ ‎Jue ‏بنسبة 7017.9 و217.7, على_التوالي,‎ (FE ‏(شكل رقم‎ NCI-H441 ‏وخلايا‎ ‎Nee ‏»ال/الخلايا الهدف يبلغ‎ ٠ (IHC) ‏دراسات التاريخ المناعي‎ :١8 ‏المثال رقم‎ ١١ ‏تم تثبيت من + إلى‎ :08+8170 Tumors ‏للأورام المضنة البارافينية‎ THC ‏إجراءات تبقيع‎ ‏لمدة ؟‎ a Yeo ‏مبرد مسبقا‎ acetone ‏ميكرو مولار مقطع من الأورام المجمدة على الفور في‎ ‏؟ دقيقة إلى ساعة واحدة. بعد‎ ٠ ‏دقائق. ثم تم تبريد الشرائح عند درجة حرارة الغرفة لمدة تتراوح من‎ ‏اف‎
‎q ¢ —_‏ _ ‎PBS 4 Jue Jie‏ تمت إعاقة ‎Endogenous peroxidase Llu‏ ._باستخدام ‎(Peroxidase Blocking Reagent (Dako K4007‏ لمدة © دقائق. تم غسل المقاطع باستخدام ‎PBS‏ وحضانتها في مادة كاشفة للإعاقة ‎(Dako X0590) avidin/biotin‏ قبل تشبع المواقع غير المحددة في ‎PBS-BSA‏ 74 لمدة ‎Vo‏ دقيقة عند درجة حرارة الغرفة. وتلى ذلك © حضانة الشرائح باستخدام 224611" معالج بالبيوتينيل ‎ov) biotinylated‏ إلى ‎٠١‏ ميكرو جم/مل) أو 1961/كبا من البشر معالج بالبيوتينيل ‎biotinylated‏ )04 إلى ‎٠١‏ ميكرو جم/مل, موقع الارتباط) كعينة مقارنة سالبة لمدة ساعتين عند درجة حرارة الغرفة. تم ‎Jue‏ المقاطع باستخدام ‎PBS‏ وحضانتها باستخدام معقد ‎Streptavidin—peroxydase‏ ‏العالمي (40679ا ‎sad (Dako‏ تتراوح من ‎Ye‏ إلى ‎fo‏ دقيقة. تم استخدام -3-00100-9 ‎dels zie ul silEthylcarbazole AD‏ أحمر اللون (559008). & غمس الشرائح في ‎hematoxylin‏ لمدة ؛ دقائق للتبقيع العكسي ‎.(Dako S3309)‏ يتم عرض النتائج في الشكل رقم ‎Yo‏ ‏يبقع 10224611 على نحو تفاضلي غشاء الخلية ذا أنوع الورم المختلفة. في إجراء التاريخ المناعي المذكور, يرتبط ناتج التفاعل الأحمر اللون بالتبقيع الموجب لغشاء الخلية ويرتبط الافتقار ‎mld 5‏ التفاعل الأحمر اللون بالتبقيع السالب وعدم رؤية غشاء الخلية. يكون ©9| المقارن, 1 أب من البشر عبارة عن عينة مقارنة مطابقة لنوع مناظر من البشر. قائمة المتواليات ‎Goetsch, Liliane‏ <110> ‎Wurch, Thierry‏ ‎Bes, Cédric ٠‏ ‎Novel anti-cMet antibody‏ >120< ‎D27117PROV1‏ >130< ‎Eye‏
-ه40- 117 >160< ‎Patentln version 3.3‏ >170< 1 >210< 8 >211< ه ‎PRT‏ >212< <213> mus musculus <400> 1
Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr Thr 1 5 <210> 2 0-٠ <211> 8 <212> PRT <213> mus musculus <400> 2 lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala ٠١ 1 5 <210> 3 <211> 11 <212> PRT رف
-؟؟- ‎mus musculus‏ >213< 3 >400< ‎Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr‏ 5 1 ‎oo‏ 4 >210< 118 >211< ‎PRT‏ >212< ‎mus musculus‏ >213< 4 >400< ‎٠‏ فاح ‎GIn Val GIn Leu Val 60 Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly‏ 10 5 1 ‎Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr‏ 25 20 ‎Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Met‏ ‎yo‏ 45 40 35 ‎Gly Trp lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala Gln Lys Phe‏ 60 55 50 ‎Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lle Ser Thr Ala Tyr‏ 80 75 70 65 رف
—qy—
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser ٠ 115 <210> 5 <211> 10 <212> PRT <213> mus musculus ٠ <400> 5
Glu Ser Val Asp Ser Tyr Ala Asn Ser Phe 1 5 10 <210> 6 <211> 3 ١٠ <212> PRT <213> mus musculus <400> 6
Arg Ala Ser رف
4A 1 <210> 17 <211> 9 <212> PRT <213> mus musculus © <400> 7
Gln GIn Ser Lys Glu Asp Pro Leu Thr 1 5 <210> 8 <211> 112 ٠ <212> PRT <213> mus musculus <400> 8
Asp lle Val Leu Thr GIn Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 ١٠
Glu Arg Ala Thr lle Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
Ala Asn Ser Phe Met His Trp Tyr 60 ‏ماي‎ Lys Pro Gly Gin Pro Pro رف
Lys Leu Leu lle Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Ser 65 70 75 80
Ser Leu GIn Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys © 85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys Arg 100 105 110 <210> 9 <211> 112 ٠ <212> PRT <213> mus musculus <400> 9
Asp lle Val Met Thr GIn Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 ١٠
Glu Arg Ala Thr lle Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
Ala Asn Ser Phe Met His Trp Tyr 60 ‏ماي‎ Lys Pro Gly Gin Pro Pro ‏رف‎
Nam
Lys Leu Leu lle Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp 50 55 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Ser 65 70 75 80
Ser Leu GIn Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys © 85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys Arg 100 105 110 <210> 10 <211> 112 ٠ <212> PRT <213> mus musculus <400> 10
Asp lle Val Met Thr GIn Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 ١٠
Glu Arg Ala Thr lle Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr
Ala Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr 60 GIn Lys Pro Gly Gin Pro Pro ‏رف‎
-١.١-
Lys Leu Leu lle Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Ser 65 70 75 80
Ser Leu GIn Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys Gln Gln Ser Lys © 85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys Arg 100 105 110 <210> 11 <211> 24 ©. <212> DNA <213> mus musculus <400> 11 ggctacatct tcacagcata cacc 24 <210> 12 ١ <211> 24 <212> DNA <213> mus musculus <400> 12 ‏رف‎
-١,7- attaaaccca acaatgggct ggcc 24 <210> 13 <211> 33 <212> DNA <213> mus musculus ©
<400> 13 gccaggagcg aaattacaac agaattcgat tac 33 <210> 14 <211> 354
<212> DNA ٠ <213> mus musculus <400> 14 caggtccagc tggtgcaatc cggcgcagag gtgaagaagc caggcgcttc cgtgaaggtg 60 agctgtaagg cctctggcta catcttcaca gcatacacca tgcactgggt gaggcaaget 120 ١٠ cctgggcagg gactggagtg gatgggatgg attaaaccca acaatgggct ggccaactac 180 gcccagaaat tccagggtag ggtcactatg acaagggata ccagcatcag caccgcatat 240
رف
١,
atggagctga gcaggctgag gtctgacgac actgctgtct attattgcg > 8038
300 attacaacag aattcgatta ctgggggcag ggcaccctgg tgaccgtgtc ctct 354
>210< هه 30 >211<
<212> DNA
<213> mus musculus
<400> 15 gaatctgtgg actcttacgc aaacagcttt 30 <210> 16 ٠
<211> 9
<212> DNA
<213> mus musculus
<400> 16 agggcttct 9 ١5
<210> 7
<211> 7
<212> DNA
<213> mus musculus
رف
-١.- <400> 7 cagcagtcca aggaggaccc cctgact 27 <210> 18 <211> 333 <212> DNA ٠ <213> lus musculus <400> 18 gacattgtgc tgacccagtc tcccgatagce ctggcecgtgt ccctgggega gagggetace 60 atcaactgta aaagctccga atctgtggac tcttacgcaa acagctttat gcactggtat 120 cagcaaaagc caggccaacc tccaaagctg ctgatttaca gggctictac cagggagage ٠ 180 ggcgtgcccg ataggttcag cggatctgge agcaggaccg actttacact gaccatctce 240 agcctgcagg ccgaagatgt ggcagtctat tactgccage agtccaagga ggacccectg 300 ٠ actttcgggg gtggtactaa agtggagatc aag 333 <210> 19 <211> 333 <212> DNA <213> mus musculus ٠ ‏رف‎
-١.ه-‎ >400< 9 gacattgtga tgacccagtc tcccgatagce ctggecgtgt ccectgggega gagggetace 0 atcaactgta aaagctccga atctgtggac tcttacgcaa acagctttat gcactggtat 120 cagcaaaagc caggccaacc tccaaagctg ctgatttaca gggctictac cagggagagce 180 © ggcgtgccecg ataggttcag cggatctgge agcggcaccg actttacact gaccatctec 240 agcctgcagg ccgaagatgt ggcagtctat tactgccage agtccaagga ggacccectg 300 actttcgggg gtggtactaa agtggagatc aag 333 ٠ <210> 20 <211> 333 <212> DNA <213> mus musculus <400> 20 ١٠ gacattgtga tgacccagtc tcccgatagce ctggecgtgt ccectgggega gagggetace 0 atcaactgta aaagctccga atctgtggac tcttacgcaa acagctttct gcactggtat 120 cagcaaaagc caggccaacc tccaaagctg ctgatttaca gggctictac cagggagagce 180
Eye
-١.1- ggcgtgcccg ataggttcag cggatctgge agecggcaccg actttacact gaccatctce 240 agcctgcagg ccgaagatgt ggcagtctat tactgccage agtccaagga ggacccectg 300 actttcgggg gtggtactaa agtggagatc aag 333 ©
<210> 21 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence
<220> ٠ <223> consensus artificial hinge proteic sequence <220> <221> MUTAGEN <222> (1)..(1)
<223> XaaisPorR ١٠ <220> <221> MUTAGEN <222> (2)..(2) <223> Xaais KorR
رف
RV
<220> <221> MUTAGEN <222> (3)..(3) <223> Xaa is S, D or nothing <220> ‏هه‎ ‎<221> MUTAGEN <222> )5(..)5( <223> Xaa is G, D or nothing <220> <221> MUTAGEN ٠ <222> )7(..)7( <223> Xaais K, Hor V <220> <221> MUTAGEN <222> (8)..(8) ٠ <223> Xaa isE, P, T or nothing <220> <221> MUTAGEN <222> (10)..(10)
EYYe
-١١ ‏حم‎ ‎<223> 78815 0 orl <220> <221> MUTAGEN <222> (11)..(11) <223> Xaa is © or nothing © <220> <221> MUTAGEN <222> (13)..(13) <223> XaaisPorT <400> 21 ٠
Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Cys Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Cys Xaa 1 5 10 <210> 22 <211> 11 <212> PRT ١٠ <213> artificial sequence <220> <223> artificial hinge derived from 2 <400> 22 رف
-١.4-
Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 23 <211> 12 <212> PRT ‏ه‎ ‎<213> artificial sequence <220> <223> artificial hinge derived from 1 <400> 23
Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys lle Cys Thr ٠ 1 5 10 <210> 24 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence ١٠ <220> <223> artificial hinge derived from 1 <400> 24
Pro Lys Ser Cys Gly Cys Lys Pro Cys lle Cys Thr ‏رف‎
Ny 1 5 10 <210> 25 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence © <220> <223> artificial hinge derived from 1 <400> 25
Pro Lys Ser Cys Gly Cys Lys Pro Cys lle Cys Pro. 1 5 10 <210> 26 <211> 13 <212> PRT <213> artificial sequence ١٠ <220> <223> artificial hinge derived from 1 <400> 26
Pro Arg Asp Cys Gly Cys Lys Pro Cys Pro Pro Cys Pro ‏افر‎
-١١١- 1 5 10 <210> 7 <211> 3 <212> PRT <213> artificial sequence © <220> <223> artificial hinge derived from 1 <400> 27
Pro Arg Asp Cys Gly Cys His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 ٠ <210> 28 <211> 12 <212> PRT <213> artificial sequence <220> ١٠ <223> artificial hinge derived from 1 <400> 28
Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 رف
-١١"- <210> 29 <211> 33 <212> DNA <213> artificial sequence <220> ‏هه‎ ‎<223> artificial hinge derived from 2 <400> 29 aggaagtgct gtgtggagtg ccccccectge cca 33 <210> 30 <211> 36 ٠ <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> artificial sequence derived from 1 <400> 30 ١٠ ccccgggact gtgggtgcaa gecttgeatt tgtacc 36 <210> 31 <211> 36 <212> DNA ‏رف‎
١1 - <213> artificial sequence <220> <223> artificial hinge derived from 1 <400> 31 cccaagagct gtgggtgcaa gccttgcatt tgtace 36 © <210> 32 <211> 36 <212> DNA <213> artificial sequence <220> ٠ <223> artificial hinge derived from 1 <400> 32 ccaaagagct gcggctgcaa gccttgtatc tgtcce 36 <210> 33 <211> 39 ١٠ <212> DNA <213> artificial sequence <220> <223> artificial hinge derived from 1 ‏افر‎
-١١5- >400< 3 ccacgggact gtggctgcaa gccctgecct cegtgteca 39 <210> 34 <211> 39 <212> DNA ٠ <213> artificial sequence <220> <223> artificial hinge derived from 1 <400> 34 cccagagact gtgggtgtca cacctgcecct ccttgtect 39 0٠ <210> 35 <211> 36 <212> DNA <213> artificial sequence <220> ١٠ <223> artificial hinge derived from 1 <400> 35 cccaaaagct gcgattgcca ctgtccteca tgtcca 36 <210> 36 ‏رف‎
-١١ه-‎ <211> 3 <212> PRT <213> mus musculus <400> 36
GIn Val GIn Leu Val 60 Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala © 1 5 10 15
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Met 0٠
Gly Trp lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala GIn Lys Phe 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lle Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys ٠١ 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro رف
-١١1- 115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 ه٠‎
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 60 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Asn Phe Gly Thr GIn Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser ٠ 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys 210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 ١٠
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Gin Phe 260 265 2770 رف
-١١/-
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285
Arg Glu Glu GIn Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300
Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val © 305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle Ser Lys Thr 325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 340 345 350 0٠
Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly Gin Pro 370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser ١٠١ 385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gin 405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His رف
-١١- 420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 37 <211> 445 ه٠‎ <212> PRT <213> mus musculus <400> 37
GIn Val GIn Leu Val 60 Ser Gly Ala Glu Val Lys Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 ٠
Ser Val Lys Val Ser Cys Lys Ala Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ala Pro Gly 60 Gly Leu Glu Trp Met
Gly Trp lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Ala 60 Lys Phe \o 60
Gln Gly Arg Val Thr Met Thr Arg Asp Thr Ser lle Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Glu Leu Ser Arg Leu Arg Ser Asp Asp Thr Ala Val Tyr Tyr Cys رف
-١١؟-‎ 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gln Gly Thr 100 105 110
Leu Val Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 ه٠‎
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn Ser 145 150 155 160
Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GIn Ser ٠ 165 170 175
Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser Ser 180 185 190
Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Asn 195 200 205 ١٠
Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Cys 210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu 225 230 235 240 ‏رف‎
-١١72-
Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro Glu 245 250 255
Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys 260 265 2770
Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys © 275 280 285
Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu 290 295 300
Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys 305 310 315 320 ٠
Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle Ser Lys 325 330 335
Ala Lys Gly GIn Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser 340 345 350
Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys 355 360 365
Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 60 370 375 380
Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly رف
-١؟أ١٠-‎ 385 390 395 400
Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 60 405 410 415
GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn 420 425 430 ‏هه‎
His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 38 <211> 218 <212> PRT ٠ <213> mus musculus <400> 38
Asp lle Val Leu Thr GIn Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr lle Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr ٠
Ala Asn Ser Phe Met His Trp Tyr 60 ‏ماي‎ Lys Pro Gly Gin Pro Pro
Lys Leu Leu lle Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp رف
-١؟؟-‎ 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Ser 65 70 75 80
Ser Leu 60 Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 60 GIn Ser Lys 85 90 95 oo
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys Arg 100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr \. 130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val GIn Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser 145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 ١٠
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 ‏رف‎
AR
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 39 <211> 218 <212> PRT ‏ه‎ <213> mus musculus <400> 39
Asp lle Val Met Thr ‏ماك‎ Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr lle Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr ٠
Ala Asn Ser Phe Met His Trp Tyr 60 ‏ماي‎ Lys Pro Gly Gin Pro Pro
Lys Leu Leu lle Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp 60 ١٠
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Ser 65 70 75 80
Ser Leu 60 Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 60 60 Ser Lys 85 90 95 رف
-١؟4-‎
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys Arg 100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu 6 115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr © 130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val GIn Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser 145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 ٠
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys ٠١ 210 215 <210> 40 <211> 218 <212> PRT رف
-١؟ه-‎ <213> mus musculus <400> 40
Asp lle Val Met Thr GIn Ser Pro Asp Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15
Glu Arg Ala Thr lle Asn Cys Lys Ser Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr ©
Ala Asn Ser Phe Leu His Trp Tyr Gin Gin Lys Pro Gly Gln Pro Pro
Lys Leu Leu lle Tyr Arg Ala Ser Thr Arg Glu Ser Gly Val Pro Asp 60 0٠
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Gly Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Ser 65 70 75 80
Ser Leu 60 Ala Glu Asp Val Ala Val Tyr Tyr Cys 60 60 Ser Lys 85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Gly Gly Thr Lys Val Glu lle Lys Arg Yo 100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr رف
-١؟1-‎ 130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val 60 Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu 60 Ser 145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 ‏هه‎ ‎Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys ٠ 210 215 <210> 41 <211> 1332 <212> DNA <213> mus musculus ٠ <400> 41 caggtccagc tggtgcaatc cggcgcagag gtgaagaagc caggcgcttc cgtgaaggtg 60 agctgtaagg cctctggcta catcttcaca gcatacacca tgcactgggt gaggcaaget 120 ‏رف‎
-١77/- cctgggcagg gactggagtg gatgggatgg attaaaccca acaatgggct ggccaactac 180 gcccagaaat tccagggtag ggtcactatg acaagggata ccagcatcag caccgcatat 240 atggagctga gcaggctgag gtctgacgac actgctgtct attattgcgc caggagcgaa ٠ 300 attacaacag aattcgatta ctgggggcag ggcaccctgg tgaccgtgtc ctctgccage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctageg cectgetcca gaagcaccag cgagagceaca 420 gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtectggaac ٠ 480 agcggagccc tgaccagcegg cgtgcacacc ttccecgecg tgetgcagag cageggcectg 540 tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgcca agcagcaact tcggcaccca gacctacacce 600 ١٠ tgtaacgtgg accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaccgtgga gaggaagtge 660 tgtgtggagt gcceccectg cccagceccee ccagtggecg gacccagegt gttectgtte 720 ccccccaage ccaaggacac cctgatgatc agcagaacce ccgaggtgac ctgtgtggtg 780 ٠ gtggacgtgt cccacgagga ccccgaggtg cagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag 840 ‏افر‎
—\YA- gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag gagcagttta acagcacctt 090 900 tccgtgctga ccgtggtgeca ccaggactgg ctgaacggeca aggagtacaa gtgtaaggtc 960 tccaacaagg gcctgccagce ccccatcgaa aagaccatca gcaagaccaa gggacagcca ٠ 1020 agagagccac aggtctacac cctgcccecc agcagggagg agatgaccaa gaaccaggtg 1080 tccctgacct gtctggtgaa gggcttctac ccaagcgaca tcgecgtgga gtgggagage 1140 ٠ aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc acccccccaa tgetggacag cgacggcage 1200 ttcttcctgt acagcaagcet gacagtggac aagagcagat ggcagcaggg caacgtgttc 1260 agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagag cctgagectg ٠ 1320 tccccaggcet ga 1332 <210> 42 <211> 1341 <212> DNA ٠ <213> mus musculus ‏افر‎
-١"4-
<400> 42 caggtccagc tggtgcaatc cggcgcagag gtgaagaagc caggegcttc cgtgaaggtg
60 agctgtaagg cctctggcta catcttcaca gcatacacca tgcactgggt gaggcaaget 120 cctgggcagg gactggagtg gatgggatgg attaaaccca acaatgggct ggccaactac ©
180 gcccagaaat tccagggtag ggtcactatg acaagggata ccagcatcag caccgcatat
240 atggagctga gcaggctgag gtctgacgac actgctgtct attattgcgc caggagcegaa 300 ٠ attacaacag aattcgatta ctgggggcag ggcaccctgg tgaccgtgtc ctctgccage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagece cegtcttcaa agagtacctc aggcggaact
420 gccgctcttg gttgcecttgt gaaggactat tttcctgage ccgtgacggt cagetggaac 0 tctggcgcac tgactagegg cgtacacaca ttccctgegg tgctccaaag ttccgggetg 540 ٠ tactcactgt ccteegttgt gaccgttcca tetagticece tcgggacaca gacatacatc 600 tgtaatgtga atcataagcc ttcaaacacc aaggtcgaca aacgggtcga gcccaaaage
660 tgcgattgcce actgtectce atgtccagece cccgaactgt tgggecggacce gagcegtgttc 7/20 ttgtttccac ccaagcccaa agataccctc atgatcagca gaaccccecga 90910302102 ٠
780
افر
١“. 0109119199 acgtgtccca cgaggaccca gaggtgaagt tcaactggta cgtggacgge 840 gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaggagc agtacaacag cacctacagg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt getgcaccag gactggetga acggcaagga gtacaagtgt ه٠‎
960 aaggtgtcca acaaggccct gccageccca atcgaaaaga ccatcagcaa ggccaagggce 1020 cagccaagag agccccaggt gtacaccctg ccacccagca gggaggagat gaccaagaac
1080 ٠ caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc ttctacccaa gcgacatcge cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc ccccagtgcet ggacagcgac 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacce gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac ١٠ 1260 gtgttcagct gcteegtgat gcacgaggcec ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccec caggcaagtg a 1341
<210> 43 ٠ <211> 657
افر
—V ry - <212> DNA <213> mus musculus <400> 43 gacattgtgc tgacccagtc tcccgatagce ctggcecgtgt ccctgggega gagggcetace 0 atcaactgta aaagctccga atctgtggac tcttacgcaa acagctttat gcactggtat 120 © cagcaaaagc caggccaacc tccaaagctg ctgatttaca gggctictac cagggagagce 180 ggcgtgcccg ataggttcag cggatctgge agcaggaccg actttacact gaccatctce 240 agcctgcagg ccgaagatgt ggcagtctat tactgccage agtccaagga ggaccecectg ٠ 300 actttcgggg gtggtactaa agtggagatc aagcgtacgg tggccgctce cagegtgttc 360 atcttcccce caagcgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagegtggt gtgtetgetg 420 aacaacttct accccaggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagagc ٠ 480 ggcaacagcc aggagagcgt caccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagce 540 agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgce ctgtgaggtg 600 ٠ ‏افر‎
-١“7- acccaccagg gcctgtccag cccecgtgacc aagagcttca acaggggcga 1038 657 <210> 44 <211> 657 <212> DNA ٠ <213> mus musculus <400> 44 gacattgtga tgacccagtc tcccgatagce ctggecgtgt ccectgggega gagggetace 0 atcaactgta aaagctccga atctgtggac tcttacgcaa acagctttat gcactggtat 120 cagcaaaagc caggccaacc tccaaagctg ctgatttaca gggctictac cagggagage ٠ 180 ggcgtgcccg ataggttcag cggatctgge agcggcaccg actttacact gaccatctec 240 agcctgcagg ccgaagatgt ggcagtctat tactgccage agtccaagga ggacccectg 300 ١٠ actttcgggg gtggtactaa agtggagatc aagcgtacgg tggccgctce cagegtgttc 360 atcttcccce caagcgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagcegtggt gtgtctgetg 420 aacaacttct accccaggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagage 480 ٠ ‏افر‎
١م‎ ggcaacagcc aggagagcgt caccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagce 540 agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgce ctgtgaggtg 600 acccaccagg gcctgtccag cccegtgacc aagagcttca acaggggcega gtgetga ٠ 657 <210> 45 <211> 657 <212> DNA <213> mus musculus ٠ <400> 45 gacattgtga tgacccagtc tcccgatagce ctggecgtgt ccectgggega gagggetace 0 atcaactgta aaagctccga atctgtggac tcttacgcaa acagctttct gcactggtat 120 cagcaaaagc caggccaacc tccaaagctg ctgatttaca gggctictac cagggagagce 180 ١٠ ggcgtgcccg ataggttcag cggatctgge agcggcaccg actttacact gaccatctec 240 agcctgcagg ccgaagatgt ggcagtctat tactgccage agtccaagga ggacccectg 300 actttcgggg gtggtactaa agtggagatc aagcgtacgg tggccgcetcec cagegtgttc 360 ٠ ‏افر‎
AE atcttcccce caagcgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagegtggt gtgtetgetg 420 aacaacttct accccaggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagage 480 ggcaacagcc aggagagcgt caccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgage ه٠‎ 540 agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgce ctgtgaggtg 600 acccaccagg gcctgtccag cccecgtgacc aagagcttca acaggggcga gtgctga 657 0٠ <210> 46 <211> 118 <212> PRT <213> mus musculus <400> 46 ١٠
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle ٠ ‏رف‎
٠١ه‎
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ‏هه‎ ‎Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser ٠٠ 115 <210> 47 <211> 112 <212> PRT <213> mus musculus ٠ <400> 47
Asp lle Val Leu Thr GIn Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 ‏دا‎ Arg Ala Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr ‏رف‎
-١“1-
Ala Asn Ser Phe Met His Trp Tyr 60 GIn Lys Pro Gly Gin Pro Pro
Lys Leu Leu lle Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly lle Pro Ala 60 o
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Asn 65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys 60 GIn Ser Lys 85 90 95
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Arg ٠ 100 105 110 <210> 48 <211> 354 <212> DNA <213> mus musculus ٠ <400> 48 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ‏رف‎
1١ ‏لا‎ ‎ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag 300 o atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctcc 354 <210> 49 <211> 333 <212> DNA <213> mus musculus ٠ <400> 49 gatattgtgc tgacacagtc tcccgcaagc ctcgcetgtta gcctgggtca acgggecaca 0 attagttgtc gcgcctctga atccgtcgac tettatgeta acagcetttat gcactggtat 120 caacagaagc ccgggcagcc acctaaactg ctgatctaca gggccagcaa tctggagagt 180 ١٠ ggcatcccag ctagatttag cggttccggg tccaggaccg acttcactct gaccatcaac 240 cccgtggagg cagacgacgt ggccacttac tactgccage agtctaaaga ggatcccecte 300 acattcggct ccggaacaaa gctggaaatg aag 333 <210> 50
Eye
-١ ‏حم‎ ‎<211> 3 <212> PRT <213> mus musculus <400> 50
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala © 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle 0٠
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys ٠١ 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro رف
-١“4- 115 120 125
Leu Ala Pro Cys Ser Arg Ser Thr Ser Glu Ser Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 ه٠‎
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GIn 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Asn Phe Gly Thr GIn Thr Tyr Thr Cys Asn Val Asp His Lys Pro Ser 1. 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Thr Val Glu Arg Lys Cys Cys Val Glu Cys 210 215 220
Pro Pro Cys Pro Ala Pro Pro Val Ala Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240 ١٠
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 60 Phe 260 265 2770 رف
-١م2-‎
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285
Arg Glu Glu GIn Phe Asn Ser Thr Phe Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300
Val Val His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val © 305 310 315 320
Ser Asn Lys Gly Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle Ser Lys Thr 325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 340 345 350 0٠
Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365
Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly GIn Pro 370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Met Leu Asp Ser Asp Gly Ser ١٠١ 385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp Gln Gin 405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His رف
-١؟١-‎ 420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly 435 440 <210> 1 <211> 446 ‏هه‎ ‎<212> PRT <213> mus musculus <400> 51
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 ٠
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe ١١ 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys ‏رف‎
-١؟7-‎ 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 ه٠‎
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GIn ٠ 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 ١٠
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His 210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 ‏رف‎
-١6©-
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro 245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 2770
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr © 275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300
Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 ٠
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle Ser 325 330 335
Lys Ala Lys Gly GIn Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu Val \o 355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 ‏ا‎ Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp رف
VEE
385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415
Gln GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 ه٠‎
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 52 <211> 218 <212> PRT ٠ <213> mus musculus <400> 52
Asp lle Val Leu Thr GIn Ser Pro Ala Ser Leu Ala Val Ser Leu Gly 1 5 10 15 ‎Arg Ala Thr lle Ser Cys Arg Ala Ser Glu Ser Val Asp Ser Tyr ٠‏ دا 25 20 ‎Lys Pro Gly Gin Pro Pro‏ ماي 60 ‎Ala Asn Ser Phe Met His Trp Tyr‏ 40 35 ‎Lys Leu Leu lle Tyr Arg Ala Ser Asn Leu Glu Ser Gly lle Pro Ala‏ ‏رف
-١عه-‎ 60
Arg Phe Ser Gly Ser Gly Ser Arg Thr Asp Phe Thr Leu Thr lle Asn 65 70 75 80
Pro Val Glu Ala Asp Asp Val Ala Thr Tyr Tyr Cys 60 GIn Ser Lys 85 90 95 oo
Glu Asp Pro Leu Thr Phe Gly Ser Gly Thr Lys Leu Glu Met Lys Arg 100 105 110
Thr Val Ala Ala Pro Ser Val Phe lle Phe Pro Pro Ser Asp Glu Gin 115 120 125
Leu Lys Ser Gly Thr Ala Ser Val Val Cys Leu Leu Asn Asn Phe Tyr ٠ 130 135 140
Pro Arg Glu Ala Lys Val GIn Trp Lys Val Asp Asn Ala Leu GIn Ser 145 150 155 160
Gly Asn Ser Gln Glu Ser Val Thr Glu ‏ماك‎ Asp Ser Lys Asp Ser Thr 165 170 175 ١٠
Tyr Ser Leu Ser Ser Thr Leu Thr Leu Ser Lys Ala Asp Tyr Glu Lys 180 185 190
His Lys Val Tyr Ala Cys Glu Val Thr His Gln Gly Leu Ser Ser Pro 195 200 205 ‏رف‎
EA
Val Thr Lys Ser Phe Asn Arg Gly Glu Cys 210 215 <210> 3 <211> 1332 <212> DNA ٠ <213> mus musculus <400> 3 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ٠ ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag 300 ١٠ atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctageg ccctgetcca gaagcaccag cgagagcaca 420 gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtectggaac ٠ 480 افر
-١6/- agcggagccc tgaccagcegg cgtgcacacc ttccecgecg tgetgcagag cageggectg 540 tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgcca agcagcaact tcggcaccca gacctacacce 600 tgtaacgtgg accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agaccgtgga gaggaagtge ©
660 tgtgtggagt gcceccectg cccagceccee ccagtggecg gacccagegt gttectgtte 720 ccccccaage ccaaggacac cctgatgatc agcagaacce ccgaggtgac ctgtgtggtg 780 gtggacgtgt cccacgagga ccccgaggtg cagttcaact ggtacgtgga cggegtggag ٠ 840 gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag gagcagttta acagcacctt 090 900 tccgtgctga ccgtggtgeca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgtaaggtc
960 ١٠٠ tccaacaagg gcctgccagce ccccatcgaa aagaccatca gcaagaccaa gggacagceca 1020 agagagccac aggtctacac cctgcccecc agcagggagg agatgaccaa gaaccaggtg 1080 tccctgacct gtctggtgaa gggcttctac ccaagcgaca tcgecgtgga gtgggagage 0 ٠ 1140
افر
-١ ‏م‎ ‎aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc acccccccaa tgctggacag 03-0963806 1200 ttcttcctgt acagcaagcet gacagtggac aagagcagat ggcagcaggg caacgtgttc 1260 agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagag cctgagectg ه٠‎
1320 tccccaggcet ga 1332 <210> 54 <211> 1341
<212> DNA ٠ <213> mus musculus <400> 54 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ١٠ ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcct ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag
300 ٠
افر
-١؟4-‎ atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagece cegtcttcaa agagtacctc aggcggaact 420 gccgctcttg gttgcecttgt gaaggactat tttcctgage ccgtgacggt cagetggaac 480 ٠ tctggcgceac tgactagegg cgtacacaca ttccetgegg tgctccaaag ttccgggetg 50 tactcactgt ccteegttgt gaccgttcca tetagttcee tcgggacaca gacatacatc 600 tgtaatgtga atcataagcc ttcaaacacc aaggtcgaca aacgggtcga gcccaaaagce 660 tgcgattgcce actgtectce atgtccagece cccgaactgt tgggeggacce gagcegtgtte 720 ٠ ttgtttccac ccaagcccaa agataccctc atgatcagca gaaccccecga ggtg acctgt 780 gtggtggtgg acgtgtccca cgaggaccca gaggtgaagt tcaactggta cgtggacgge 840 gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaggagc agtacaacag cacctacagg Vo 900 gtggtgtccg tgctgaccgt getgcaccag gactggetga acggcaagga gtacaagtgt 960 aaggtgtcca acaaggccct gccageccca atcgaaaaga ccatcagcaa ggccaagggce
1020 ٠
افر
_ \ OW — cagccaagag agccccaggt gtacaccctg ccacccagca gggaggagat gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc ttctacccaa gcgacatcge cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccacce ccccagtgct ggacagecgac ٠ 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacce gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctcegtgat gcacgaggec ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg 1320 ٠ agcctgtccc caggcaagtg a 1341 <210> 55 <211> 657 <212> DNA <213> mus musculus ٠٠ <400> 55 gatattgtgc tgacacagtc tcccgcaagc ctcgcetgtta gcctgggtca acgggecaca 0 attagttgtc gcgcctctga atccgtcgac tcttatgcta acagcetttat gcactggtat 120 caacagaagc ccgggcagcc acctaaactg ctgatctaca gggccagcaa tctggagagt 180 ٠ ggcatcccag ctagatttag cggttccggg tccaggaccg acttcactct gaccatcaac 00 ‏افر‎
— \ o \ — cccgtggagg cagacgacgt ggccacttac tactgccage agtctaaaga ggatcccecte 300 acattcggct ccggaacaaa gctggaaatg aagcgtacgg tggccgctce cagcegtgttc 360 atcttcccce caagcgacga gcagctgaag agcggcaccg ccagegtggt gtgtctgetg ه٠‎ 420 aacaacttct accccaggga ggccaaggtg cagtggaagg tggacaacgc cctgcagage 480 ggcaacagcc aggagagcgt caccgagcag gacagcaagg actccaccta cagcctgagce 540 ٠ agcaccctga ccctgagcaa ggccgactac gagaagcaca aggtgtacgce ctgtgaggtg 600 acccaccagg gcctgtccag cccecgtgacc aagagcttca acaggggcga gtgctga 657 <210> 56 ١٠ <211> 14 <212> PRT <213> artificial <220> <223> consensus artificial hinge proteic sequence ٠٠ <220> ‏افر‎
١مل‎ <221> mutagen <222> (1)..(1) <223> Xis P, R, C or nothing <220> <221> mutagen © <222> (2)..(2) <223> Xs K, C, R or nothing <220> <221> mutagen <222> (3)..(3) ٠ <223> Xs 5, C, D or nothing <220> <221> mutagen <222> )5(..)5( <223> XisD, C, 6 ornothing ١٠ <220> <221> mutagen <222> (6)..(6) <223> Xs K, C or nothing
EYYe
١ ‏ارج‎ ‎<220> ‎<221> mutagen <222> )7(..)7( <223> Xs T, C or nothing <220> ‏هه‎ ‎<221> mutagen <222> (8)..(8) <223> Xis H, V, K or nothing <220> <221> mutagen ٠ <222> )9(..)9( <223> XisT, C, E, © or nothing <220> <221> mutagen <222> (11)..(11) ٠ <223> XisPorl <220> <221> mutagen <222> (12)..(12)
EYYe
-١86- <223> Xs P or nothing <220> <221> mutagen <222> (14)..(14) <223> XisPorT ٠ <400> 56
Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Cys Xaa 1 5 10 <210> 57 <211> 14 ©. <212> PRT <213> artificial <220> <223> consensus artificial hinge proteic sequence <220> ١٠ <221> mutagen <222> (1)..(1) <223> Xis P, R, C or nothing <220> ‏افر‎
-١ ‏8ه‎ ‎<221> mutagen <222> (2)..(2) <223> Xs K, C, R or nothing <220> <221> mutagen © <222> (3)..(3) <223> Xs 5, C, D or nothing <220> <221> mutagen <222> )5(..)5( ٠ <223> Xs ‏,لا‎ C, G or nothing <220> <221> mutagen <222> (6)..(6) <223> Xis K, C or nothing ١٠١ <220> <221> mutagen <222> )7(..)7( <223> Xs T, C or nothing
EYYe
-١ه1-‎ <220> <221> mutagen <222> (8)..(8) <223> Xis H, V, K or nothing <220> ‏هه‎ <221> mutagen <222> )9(..)9( <223> XisT, C, E, © or nothing <400> 57
Xaa Xaa Xaa Cys Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cys Pro Pro Cys Pro ٠ 1 5 10 <210> 58 <211> 14 <212> PRT <213> artificial Yo <220> <223> artificial hinge region <400> 58
Cys Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro رف
—yoy— 1 5 10 <210> 59 <211> 14 <212> PRT <213> artificial © <220> <223> artificial hinge region <400> 59
Pro Cys Ser Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 ٠ <210> 60 <211> 14 <212> PRT <213> artificial <220> ١٠ <223> artificial hinge region <400> 60
Pro Lys Cys Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 رف
-١ ‏مه‎ ‎<210> 1 <211> 14 <212> PRT <213> artificial <220> ‏هه‎ ‎<223> artificial hinge region <400> 61
Pro Lys Ser Cys Cys Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 62 ٠ <211> 14 <212> PRT <213> artificial <220> <223> artificial hingeregion ١٠١ <400> 62
Pro Lys Ser Cys Asp Cys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 63 ‏رف‎
-١ه4-‎ <211> 14 <212> PRT <213> artificial <220> <223> artificial hinge region © <400> 63
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Cys His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 64 <211> 14 ©. <212> PRT <213> artificial <220> <223> artificial hinge region <400> 64 ١٠
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr His Cys Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 65 <211> 12 ‏رف‎
-١١؟-‎ <212> PRT <213> artificial <220> <223> artificial hinge region <400> 65 ‏هه‎
Lys Cys Asp Lys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 66 <211> 13 <212> PRT ٠ <213> artificial <220> <223> artificial hinge region <400> 66
Pro Lys Ser Cys Asp Cys His Thr Cys Pro Pro Cys Pro ١١ 1 5 10 <210> 67 <211> 13 <212> PRT رف
-١١١- <213> artificial <220> <223> artificial hinge region <400> 67
Pro Lys Ser Cys Asp Cys Thr His Cys Pro Pro Cys Pro © 1 5 10 <210> 68 <211> 12 <212> PRT <213> artificial ٠ <220> <223> artificial hinge region <400> 68
Pro Cys Ser Cys Lys His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 ١٠ <210> 69 <211> 12 <212> PRT <213> artificial رف
Rh <220> <223> artificial hinge region <400> 69
Pro Ser Cys Cys Thr His Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 ‏هه‎ <210> 70 <211> 12 <212> PRT <213> artificial <220> ٠ <223> artificial hinge region <400> 70
Pro Ser Cys Asp Lys His Cys Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 71 ١ <211> 10 <212> PRT <213> artificial <220> رف
-١٠- <223> artificial hinge region <400> 1
Pro Lys Ser Cys Thr Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 72 oo <211> 14 <212> PRT <213> artificial <220> <223> artificial hingeregion ٠٠ <400> 72
Pro Lys Ser Cys Asp Lys Cys Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro 1 5 10 <210> 73 <211> 42 ١ <212> DNA <213> artificial <220> <223> artificial hinge region رف
-١١4- <400> 3 tgcaagagct gcgacaagac ccacacctgt ccccectgec ct 42 <210> 74 <211> 42 <212> DNA ٠ <213> artificial <220> <223> artificial hinge region <400> 74 ccctgcagcet gcgacaagac ccacacctgt cceccectgcece ct 42 0 0٠ <210> 5 <211> 2 <212> DNA <213> artificial <220> ٠ <223> artificial hinge region <400> 5 cccaagtgct gcgacaagac ccacacctgt ccceectgcec ct 42 <210> 6 ‏رف‎
-١١9- <211> 2 <212> DNA <213> artificial <220> <223> artificial hinge region © <400> 76 cctaagagct gttgcaagac ccacacctgt cccccctgec ct 42 <210> 7 <211> 42 <212> DNA ٠ <213> artificial <220> <223> artificial hinge region <400> 7 cccaagagct gcgactgcac ccacacctgt cceccectgcece ct 42 ١٠ <210> 78 <211> 42 <212> DNA <213> artificial ‏رف‎
-١١1-
<220>
<223> artificial hinge region
<400> 78 cccaagagct gcgacaagtg ccacacctgt cccecectgec ct 42 <210> 79 ‏هه‎
<211> 42
<212> DNA
<213> artificial
<220> <223> artificial hingeregion ٠٠
<400> 9 cccaagagct gcgacaagac ccactgcetgt cccecectgec ct 42
<210> 0
<211> 36 <212> DNA ٠١
<213> artificial
<220>
<223> artificial hinge region
<400> 80
رف
-١ ‏-/؟‎ aagtgcgaca agacccacac ctgtcccecc tgeect 36
<210> 1
<211> 39
<212> DNA <213> artificial ©
<220>
<223> artificial hinge region
<400> 1 cccaagagct gcgactgeca cacctgtccc cecctgecct 39 <210> 82 ٠
<211> 39
<212> DNA
<213> artificial
<220> <223> artificial hinge region ١٠
<400> 82 cccaagagct gcgactgcac ccactgcccc cectgecect 39
<210> 83
<211> 36
رف
-١ ١8
<212> DNA
<213> artificial
<220>
<223> artificial hinge domain <400> 83 ‏هه‎ ccctgcagcet gcaagcacac ctgtccecce tgeect 36
<210> 4
<211> 36
<212> DNA <213> artificial ٠
<220>
<223> artificial hinge region
<400> 84 cctagctgct gcacccacac ctgtcecccce tgccect 36 <210> 85 ٠
<211> 36
<212> DNA
<213> artificial
<220>
رف
-١١4- <223> artificial hinge region <400> 85 cccagctgcg acaagcactg ctgccceccc tgecct 36 <210> 86 <211> 30 ‏هه‎ ‎<212> DNA <213> artificial <220> <223> artificial hinge region <400> 86 ٠ cccaagagct gcacctgtcc cccttgtect 30 <210> 87 <211> 42 <212> DNA <213> artificial Yo <220> <223> artificial hinge region <400> 87 cccaagagct gcgataagtg cgtggagtgce ccccecttgte ct 42 ‏رف‎
-١١- <210> 88 <211> 448 <212> PRT <213> mus musculus <400> 88 ©
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gin Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle ٠
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ve
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110 رف
A
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp ‏معط‎ © 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 60 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 ٠
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Cys Lys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser ٠١ 225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg 245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro رف
-١77- 260 265 270
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu Gln Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300 ‏هه‎
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr 325 330 335 lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu ٠ 340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 ١٠
Asn Gly GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415 رف
١ /-
Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 89 oo <211> 448 <212> PRT <213> mus musculus <400> 9
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly ‏قلح‎ ٠ 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle yo
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 رف
-١١/4-
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro © 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 ٠
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GIn 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Yo 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Cys Ser Cys Asp Lys Thr 210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser رف
—\yo- 225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg 245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 270 ©
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr ٠ 305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr 325 330 335 lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 ١٠
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380 ‏رف‎
A
Asn Gly GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415
Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala © 420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 90 <211> 448 ٠ <212> PRT <213> mus musculus <400> 90
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 ١٠
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle ‏رف‎
-١ ‏لال‎ ‎Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys © 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 ٠
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GIn ٠١ 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser رف
-١ ‏حم‎ ‎195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Cys Cys Asp Lys Thr 210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240 ه٠‎
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg 245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 2770
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn ‏قاط‎ ٠ 275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu ‏ماك‎ Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 ١٠
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr 325 330 335 lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350 رف
-١١/4-
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn ‏ماى‎ Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380
Asn Gly GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp © 385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415
Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430 0٠
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 91 <211> 448 <212> PRT ١٠ <213> mus musculus <400> 91
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 رف
CA A—
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe © 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 0٠
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly ٠١ 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GIn رف
-١م81-‎ 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Ser Leu Gly Thr Gln Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 oo
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Cys Lys Thr 210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser ‏و91‎ ٠ 245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 2770
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 ١٠
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320 ‏رف‎
-١87-
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr 325 330 335 lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gin Val Ser Leu Thr Cys © 355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380
Asn Gly GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 0٠
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415
Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys Yo 435 440 445 <210> 92 <211> 448 <212> PRT ‏رف‎
-١م-‎ <213> mus musculus <400> 92
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr ©
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60 0٠
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly GIn Gly Thr ٠٠ 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly رف
-١م84-‎ 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 60 165 170 175 ‏هه‎ ‎Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys Thr ٠ 210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg 245 250 255 ١٠
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 2770
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 ‏رف‎
-١م8ف-‎
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu ‏ماك‎ Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr © 325 330 335 lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 ٠
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380
Asn Gly GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser ٠١ 405 410 415
Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys رف
-١م81-‎ 435 440 445 <210> 93 <211> 448 <212> PRT ‏ه‎ <213> mus musculus <400> 93
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr ٠
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 60 ١٠
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 رف
-١ ‏لام‎ ‎Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly ٠ 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 0 165 170 175 ٠
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Cys ٠١ 210 215 220
His Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg رف
-١ ‏حم‎ ‎245 250 255
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 2770
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285 ه٠‎
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val 290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr ٠ 325 330 335 lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 ١٠
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380
Asn Gly GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400 ‏رف‎
-١م4حح‎
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser 405 410 415
Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys © 435 440 445 <210> 94 <211> 448 <212> PRT <213> mus musculus ٠ <400> 94
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr ١٠
Thr Met His Trp Val Arg Gin Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60 رف
-١4.-
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly Gin Gly Thr © 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 ٠
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 60 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser ٠ 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Thr رف
-١4١- 210 215 220
His Cys Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg 245 250 255 oo
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 2770
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val ٠ 290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr 325 330 335 ١٠ lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gln Val Tyr Thr Leu 340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365 ‏رف‎
-١7-
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser 370 375 380
Asn Gly GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser © 405 410 415
Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 0٠ <210> 95 <211> 446 <212> PRT <213> mus musculus <400> 95 ٠
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr رف
-١6*-
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn Gin Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr © 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110 ٠
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn ٠ 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 0 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser رف
-١46- 180 185 190
Ser Leu Gly Thr ‏0ا6‎ Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Lys Cys Asp Lys Thr His Thr 210 215 220 ه٠‎
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro 245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val ٠ 260 265 2770
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300 ١٠
Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle Ser 325 330 335 ‏رف‎
Lys Ala Lys Gly GIn Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly © 370 375 380
GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415 0٠
Gln GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 96 ١٠ <211> 447 <212> PRT <213> mus musculus <400> 96 رف
-١1-
Glu Val GIn Leu GIn 60 Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Glin Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle ©
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 ٠
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro Yo 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn رف
-١/- 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 60 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 ©
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys His 210 215 220
Thr Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val ٠ 225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr 245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu 260 265 270 ١٠١
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 ‏رف‎
-١ ‏م‎ ‎Val Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle 325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly GIn Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr Thr LeuPro © 340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 ٠
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 ١٠
Trp Gln GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu 420 425 430
His Asn His Tyr Thr GIn Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 ‏رف‎
<210> 97 <211> 447 <212> PRT <213> mus musculus <400> 97 ‏هه‎
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle ٠
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80 Ve
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110 رف
Yam
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn © 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu Gin 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190 ٠
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Cys Thr 210 215 220
His Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Yo 225 230 235 240
Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr 245 250 255
Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu رف
-؟.١-‎ 260 265 270
Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys 275 280 285
Thr Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser 290 295 300 ‏هه‎ ‎Val Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys 305 310 315 320
Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle 325 330 335
Ser Lys Ala Lys Gly GIn Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr Thr Leu Pro. 340 345 350
Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu 355 360 365
Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn 370 375 380 ١٠
Gly Gln Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser 385 390 395 400
Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg 405 410 415 ‏رف‎
ل ‎Trp Gln GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu‏ 430 425 420 ‎His Asn His Tyr Thr GIn Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys‏ 445 440 435 هه 98 >210< 446 >211< ‎PRT‏ >212< ‎mus musculus‏ >213< 98 >400< ‎٠‏ فاح ‎Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly‏ 10 5 1 ‎Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr‏ 25 20 ‎Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle‏ ‎yo‏ 45 40 35 ‎Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe‏ 60 55 50 ‎Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr‏ 80 75 70 65 رف
ا ‎Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys‏ 95 90 85 ‎Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr‏ 110 105 100 ‎Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro ©‏ 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160 ٠
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 60 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser Yo 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Cys Ser Cys Lys His Thr 210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe رف
IRVIN
225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro 245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 270 ©
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300
Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys ‏كلا‎ ٠ 305 310 315 320
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle Ser 325 330 335
Lys Ala Lys Gly GIn Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 ١٠
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 ‏رف‎
١2ه‎
GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415
Gln GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His © 420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 99 <211> 446 ©. <212> PRT <213> mus musculus <400> 99
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 ١٠
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle ‏رف‎
RVI
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys © 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125 ٠
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu GIn ٠١ 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser رف
—¥.y— 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Ser Cys Cys Thr His Thr 210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240 ه٠‎
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro 245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 2770
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr ٠ 275 280 285
Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300
Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 ١٠
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle Ser 325 330 335
Lys Ala Lys Gly GIn Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350 رف
Yu ‏م‎ ‎Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu Val 355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380
GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp © 385 390 395 400
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415
Gln GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430 0٠
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys 435 440 445 <210> 100 <211> 446 <212> PRT ١٠ <213> mus musculus <400> 100
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15 ‏رف‎
‎Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr‏ 25 20 ‎Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle‏ 40 35 ‎Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe ©‏ 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95 0٠
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly ٠١ 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 60 رف
YY a— 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205 oo
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Ser Cys Asp Lys His Cys 210 215 220
Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe 225 230 235 240
Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro ٠ 245 250 255
Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val 260 265 2770
Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr 275 280 285 ١٠
Lys Pro Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val 290 295 300
Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys 305 310 315 320 ‏رف‎
-؟١١-‎
Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle Ser 325 330 335
Lys Ala Lys Gly GIn Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr Thr Leu Pro Pro 340 345 350
Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu Val © 355 360 365
Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly 370 375 380 ‏ا‎ Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp 385 390 395 400 0٠
Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp 405 410 415
Gln GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His 420 425 430
Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys ٠١ 435 440 445 <210> 101 <211> 444 <212> PRT ‏رف‎
-؟١؟-‎ <213> mus musculus <400> 101
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr ©
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60 ٠
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr ٠ 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly رف
-؟١+-‎ 130 135 140
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 60 165 170 175 oo
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Thr Cys 00 \. 210 215 220
Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser Val Phe Leu Phe 225 230 235 240
Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg Thr Pro Glu Val 245 250 255 ١٠
Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro Glu Val Lys Phe 260 265 2770
Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala Lys Thr Lys Pro 275 280 285 ‏رف‎
-؟١؟-‎
Arg Glu Glu GIn Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val Ser Val Leu Thr 290 295 300
Val Leu His Gln Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr Lys Cys Lys Val 305 310 315 320
Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr lle Ser Lys Ala © 325 330 335
Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro Gin Val Tyr Thr Leu Pro Pro Ser Arg 340 345 350
Glu Glu Met Thr Lys Asn GIn Val Ser Leu Thr Cys Leu Val Lys Gly 355 360 365 0٠
Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser Asn Gly GIn Pro 370 375 380
Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp Ser Asp Gly Ser 385 390 395 400
Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser Arg Trp GIn GIn ١٠ 405 410 415
Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala Leu His Asn His 420 425 430
Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys رف
—¥yo— 435 440 <210> 102 <211> 448 <212> PRT <213> mus musculus © <400> 102
Glu Val GIn Leu GIn GIn Ser Gly Pro Glu Leu Val Lys Pro Gly Ala 1 5 10 15
Ser Val Lys lle Ser Cys Lys Thr Ser Gly Tyr lle Phe Thr Ala Tyr ٠
Thr Met His Trp Val Arg Gln Ser Leu Gly Glu Ser Leu Asp Trp lle
Gly Gly lle Lys Pro Asn Asn Gly Leu Ala Asn Tyr Asn GIn Lys Phe 60
Lys Gly Lys Ala Thr Leu Thr Val Asp Lys Ser Ser Ser Thr Ala Tyr ٠١ 65 70 75 80
Met Asp Leu Arg Ser Leu Thr Ser Glu Asp Ser Ala Val Tyr Tyr Cys 85 90 95
Ala Arg Ser Glu lle Thr Thr Glu Phe Asp Tyr Trp Gly 60 Gly Thr ‏رف‎
-؟١1-‎ 100 105 110
Ala Leu Thr Val Ser Ser Ala Ser Thr Lys Gly Pro Ser Val Phe Pro 115 120 125
Leu Ala Pro Ser Ser Lys Ser Thr Ser Gly Gly Thr Ala Ala Leu Gly 130 135 140 ه٠‎
Cys Leu Val Lys Asp Tyr Phe Pro Glu Pro Val Thr Val Ser Trp Asn 145 150 155 160
Ser Gly Ala Leu Thr Ser Gly Val His Thr Phe Pro Ala Val Leu 60 165 170 175
Ser Ser Gly Leu Tyr Ser Leu Ser Ser Val Val Thr Val Pro Ser Ser \. 180 185 190
Ser Leu Gly Thr GIn Thr Tyr lle Cys Asn Val Asn His Lys Pro Ser 195 200 205
Asn Thr Lys Val Asp Lys Arg Val Glu Pro Lys Ser Cys Asp Lys Cys 210 215 220 ١٠
Val Glu Cys Pro Pro Cys Pro Ala Pro Glu Leu Leu Gly Gly Pro Ser 225 230 235 240
Val Phe Leu Phe Pro Pro Lys Pro Lys Asp Thr Leu Met lle Ser Arg 245 250 255 ‏رف‎
-؟١/-‎
Thr Pro Glu Val Thr Cys Val Val Val Asp Val Ser His Glu Asp Pro 260 265 2770
Glu Val Lys Phe Asn Trp Tyr Val Asp Gly Val Glu Val His Asn Ala 275 280 285
Lys Thr Lys Pro Arg Glu Glu ‏ما‎ Tyr Asn Ser Thr Tyr Arg Val Val © 290 295 300
Ser Val Leu Thr Val Leu His GIn Asp Trp Leu Asn Gly Lys Glu Tyr 305 310 315 320
Lys Cys Lys Val Ser Asn Lys Ala Leu Pro Ala Pro lle Glu Lys Thr 325 330 335 0٠ lle Ser Lys Ala Lys Gly Gln Pro Arg Glu Pro GIn Val Tyr Thr Leu 340 345 350
Pro Pro Ser Arg Glu Glu Met Thr Lys Asn Gln Val Ser Leu Thr Cys 355 360 365
Leu Val Lys Gly Phe Tyr Pro Ser Asp lle Ala Val Glu Trp Glu Ser ٠١ 370 375 380
Asn Gly GIn Pro Glu Asn Asn Tyr Lys Thr Thr Pro Pro Val Leu Asp 385 390 395 400
Ser Asp Gly Ser Phe Phe Leu Tyr Ser Lys Leu Thr Val Asp Lys Ser رف
-؟١ ‏0م‎ ‎405 410 415
Arg Trp GIn GIn Gly Asn Val Phe Ser Cys Ser Val Met His Glu Ala 420 425 430
Leu His Asn His Tyr Thr Gln Lys Ser Leu Ser Leu Ser Pro Gly Lys © 435 440 445 <210> 103 <211> 1347 <212> DNA <213> mus musculus ٠ <400> 103 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggect ggctaactat 180 ١٠ aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag 300 ‏رف‎
-؟١٠4-‎ atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcageca agagcaccag cggcggcaca 420 gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgacegt gtcctggaac © 480 agcggagccc tgacctcegg cgtgcacaca ttccecegeceg tgetgcagag cageggcectg 540 tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600 ٠ tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agcgggtgga gtgcaagagc 660 tgcgacaaga cccacacctg tcceceectge cetgececectg aactgetggg cggaccecage 720 gtgttcctgt tccceccccaa gecccaaggac accctgatga tcagcagaac ccccgaggtg ٠ 780 acctgtgtgg tggtggacgt gtcccacgag gacccagagg tgaagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagta caacagcacc 900 ٠٠ tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 ‏افر‎
-.؟؟- ‎aagtgtaagg tgtccaacaa ggccctgcca gccccaatcg aaaagaccat cagcaaggcec‏ 1020 ‎aagggccagc caagagagcc ccaggtgtac accctgeccac ccagcaggga ggagatgacc‏ 1080 ٠ه ‎aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggcttct acccaagcga catcgeegtg‏ 1140 ‎gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccce agtgetggac‏ 1200 ‎agcgacggca gcttcttect gtacagcaag ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag‏ ‎٠‏ 1260 ‎ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag‏ 1320 ‎agcctgagcc tgtccccagg caagtga 1347‏ 104 >210< ‎١٠‏ 1347 >211< ‎DNA‏ >212< ‎mus musculus‏ >213< 104 >400< ‎gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt‏ ‎0٠٠‏ 60 ‎agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120‏ افر
-؟"١-‎ ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag 300 o atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcageca agagcaccag cggcggcaca 420 gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgacegt gtcctggaac ٠ 480 agcggagccc tgacctcegg cgtgcacaca ttccecegeceg tgetgcagag cageggcectg 540 tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600 ١٠ tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gccctgcagce 660 tgcgacaaga cccacacctg tcceceectge cetgececectg aactgetggg cggaccecage 720 gtgttcctgt tccceccccaa gecccaaggac accctgatga tcagcagaac ccccgaggtg ٠ 780 ‏افر‎
-؟؟؟- ‎acctgtgtgg tggtggacgt gtcccacgag gacccagagg tgaagttcaa ctggtacgtg‏ 840 ‎gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagta caacagcacc‏ 900 ‎tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac ٠‏ 960 ‎aagtgtaagg tgtccaacaa ggccctgcca gccccaatcg aaaagaccat cagcaaggcec‏ 1020 ‎aagggccagc caagagagcc ccaggtgtac accctgeccac ccagcaggga ggagatgacc‏ ‎٠‏ 1080 ‎aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggcttct acccaagega catcgecegtg‏ 1140 ‎gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccce agtgetggac‏ 1200 ‎agcgacggca gcttcttect gtacagcaag ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag Vo‏ 1260 ‎ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag‏ 1320 ‎agcctgagcc tgtccccagg caagtga 1347‏ ‎٠٠‏ 105 >210< 1347 >211< افر
—-YYY- <212> DNA <213> mus musculus <400> 105 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 o agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgc ccggtctgag ٠ 300 atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcageca agagcaccag cggcggcaca 420 ١٠ gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtectggaac 480 agcggagccc tgacctcegg cgtgcacaca ttccecegeceg tgetgcagag cageggcectg 540 tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcec tgggcaccca gacctacatc ٠ 600 ‏افر‎
—-YY¢- tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agcgcgtgga gcccaagtgce 660 tgcgacaaga cccacacctg tcececcectge cetgecectg aactgetggg cggacccage 720 gtgttcctgt tccceccccaa gecccaaggac accctgatga tcagcagaac ccccgaggtg ه٠‎ 780 acctgtgtgg tggtggacgt gtcccacgag gacccagagg tgaagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagta caacagcacc 900 ٠ tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgtaagg tgtccaacaa ggccctgcca gccccaatcg aaaagaccat cagcaaggcec 1020 aagggccagc caagagagcc ccaggtgtac accctgeccac ccagcaggga ggagatgace ٠ 1080 aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggctict acccaagecga catcgecegtg 1140 gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccce agtgetggac 1200 ٠ agcgacggca gcttcttect gtacagcaag ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag 1260 ‏افر‎
— \ \ ‏اج‎ ‎ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac gaggccectgc acaaccacta cacccagaag 1320 agcctgagcc tgtccccagg caagtga 1347 <210> 106 <211> 1347 ‏هه‎ ‎<212> DNA <213> mus musculus <400> 106 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 0٠ agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgc ccggtctgag ٠٠ 300 atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcageca agagcaccag cggcggcaca 420 ٠ ‏افر‎
‎gccgcecectgg 1-1-2199 gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtecctggaac‏ 480 ‎agcggagccc tgacctcegg cgtgcacaca ttccecgeceg tgetgcagag cagceggcectg‏ 540 ٠ه ‎tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcec tgggcaccca gacctacatc‏ 600 ‎tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcctaagagce‏ 660 ‎tgttgcaaga cccacacctg tccecectge cetgecectg aactgetggg cggacccage‏ ‎٠‏ 720 ‎gtgttcctgt tcccecccaa geccaaggac accctgatga tcagcagaac ccccgaggtg‏ 780 ‎acctgtgtgg tggtggacgt gtcccacgag gacccagagg tgaagttcaa ctggtacgtg‏ 840 ‎gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagta caacagcacc ٠‏ 900 ‎tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgcetg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac‏ 960 ‎aagtgtaagg tgtccaacaa ggccctgcca gccccaatcg aaaagaccat cagcaaggcec‏ ‎٠‏ 1020 ‎aagggccagc caagagagcc ccaggtgtac accctgeccac ccagcaggga ggagatgacc‏ 1080 افر
—-YYV- aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggcttct acccaagcga catcgecgtg 1140 gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccce agtgetggac 1200 agcgacggca gcttcttect gtacagcaag ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag ه٠‎
1260 ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320 agcctgagcc tgtccccagg caagtga 1347
<210> 107 ©. <211> 1346 <212> DNA <213> mus musculus <400> 107 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt Yo 60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 10 ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac
240 ٠
افر
—YYA- atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag 300 atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgecage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcagca agagcaccag cggecggcaca © 420 gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtecctggaac 480 agcggagccc tgacctcegg cgtgcacaca ttccecegeceg tgetgcagag cageggcectg 540 ٠ tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600 tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcccaagagce 660 tgcgactgca cccacacctg tecceccectge cetgecectg aactgetggg cggacccage Yo 720 gtgttcctgt tcccecccaa geccaaggac accctgatga tcagcagaac cccecgaggtg 780 acctgtgtgg tggtggacgt gtcccacgag gacccagagg tgaagttcaa ctggtacgtg 840 ٠ gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagta caacagcacc 900 ‏افر‎
‎tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac‏ 960 ‎aagtgtaagg tgtccaacaa ggccctgcca gccccaatcg aaaagaccat cagcaaggcec‏ 1020 ٠ه ‎aagggccagc caagagagcc ccaggtgtac accctgeccac ccagcaggga ggagatgace‏
1080 aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggcttct acccaagega catcgecegtg 1140 gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccc agtgetggac
1200 ٠ agcgacggca gcttcttect gtacagcaag ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag 1260 ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320 agcctgagcc tgtccccagg caagtg 1346 ١٠ <210> 108 <211> 1347 <212> DNA <213> mus musculus
<400> 108 ٠
افر
—YY.- gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac © 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag 300 atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage 360 ٠ accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcagca agagcaccag cggcggcaca 420 gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtecctggaac 480 agcggagccc tgacctcegg cgtgcacaca ttcceccgeceg tgetgcagag cageggectg ١٠ 540 tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcec tgggcaccca gacctacate 600 tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcccaagagce 660 ٠ tgcgacaagt gccacacctg tccececctge cetgeccctg aactgetggg cggacccagce 720 ‏افر‎
-؟»١-‎ gtgttcctgt tcccecccaa geccaaggac accctgatga tcagcagaac ccccgaggtg 780 acctgtgtgg tggtggacgt gtcccacgag gacccagagg tgaagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagta caacagcacc ٠ 900 tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgtaagg tgtccaacaa ggccctgcca gccccaatcg aaaagaccat cagcaaggcec 1020 ٠ aagggccagc caagagagcc ccaggtgtac accctgeccac ccagcaggga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggcttct acccaagega catcgecegtg 1140 gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccceccce agtgctggac ٠١ 1200 agcgacggca gcttcttcct gtacagcaag ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag 1260 ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320 ٠ agcctgagcc tgtccccagg caagtga 1347 <210> 109 ‏افر‎
—YYY- <211> 1347 <212> DNA <213> mus musculus <400> 109 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt ©
60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac
240 ٠ atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag 300 atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagee cccagcagca agagcaccag cggeggcaca ٠ 420 gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtecctggaac 480 agcggagccc tgacctcegg cgtgcacacc ttccecgeceg tgetgcagag cagceggcectg
540 ٠
افر
—Yyy- tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600 tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcccaagagce 660 tgcgacaaga cccactgctg tccececctge cetgeccctg aactgetggg cggacccage ٠
720 gtgttcctgt tcccecccaa geccaaggac accctgatga tcagcagaac ccccgaggtg 780 acctgtgtgg tggtggacgt gtcccacgag gacccagagg tgaagttcaa ctggtacgtg
840 | ٠ gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagta caacagcacc 900 tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgtaagg tgtccaacaa ggccctgcca gccccaatcg aaaagaccat cagcaaggec ٠١ 1020 aagggccagc caagagagcc ccaggtgtac accctgecac ccagcaggga ggagatgacc 1080 aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggcttct acccaagega catcgecegtg
1140 ٠ gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccce agtgetggac 1200
افر
١+6 agcgacggca gcttcttect gtacagcaag ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag 1260 ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320 agcctgagcc tgtccccagg caagtga 1347 oo <210> 110 <211> 1341 <212> DNA <213> mus musculus <400> 110 ٠ gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac ٠١ 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag 300 atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage 360 ٠ ‏افر‎
—Yyo- accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcageca agagcaccag cggcggcaca 420 gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtcctggaac 480 agcggagccc tgacctcegg cgtgcacaca ttcceccgeceg tgetgcagag cageggectg ٠ 540 tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600 tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agcgggtgga gaagtgcgac 660 ٠ aagacccaca cctgtccccc ctgecctgece cetgaactge tgggeggacce cagcegtgtte 720 ctgttcccce ccaagceccaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt 780 gtggtggtgg acgtgtccca cgaggaccca gaggtgaagt tcaactggta cgtggacgge ٠ 840 gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaggagc agtacaacag cacctacagg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt getgcaccag gactggetga acggcaagga gtacaagtgt 960 ٠ aaggtgtcca acaaggccct gccageccca atcgaaaaga ccatcagcaa ggccaagggce 1020 ‏افر‎
—-Yyi- cagccaagag agccccaggt gtacaccctg ccacccagca gggaggagat gaccaagaac 1080 caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc ttctacccaa gcgacatcge cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccacce ccccagtgct ggacagcgac ٠ 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacce gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gcteegtgat gcacgaggcece ctgcacaacc actacaccca gaagagcectg 1320 ٠ agcctgtccc caggcaagtg a 1341 <210> 111 <211> 1344 <212> DNA <213> mus musculus ٠٠ <400> 111 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggect ggctaactat 180 ٠ ‏افر‎
—YYvV- aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgc ccggtctgag 300 atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgccage ٠ 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcageca agagcaccag cggcggcaca 420 gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtecctggaac 480 0٠ agcggagccc tgacctcegg cgtgcacaca ttccecegeceg tgetgcagag cageggcectg 540 tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc 600 tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcccaagage ٠ 660 tgcgactgcc acacctgtce ccectgecect geccectgaac tgetgggegg acccagcegtg 720 ttcctgttcc cccccaagec caaggacacc ctgatgatca gcagaaccece cgaggtgacce 780 ٠ tgtgtggtgg tggacgtgtc ccacgaggac ccagaggtga agttcaactg gtacgtggac 840 ‏افر‎
—YYA- ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg agcagtacaa cagcacctac 900 agggtggtgt ccgtgctgac cgtgectgcac caggactgge tgaacggcaa ggagtacaag 960 tgtaaggtgt ccaacaaggc cctgccagcec ccaatcgaaa agaccatcag caaggccaag © 1020 ggccagccaa gagagcccca ggtgtacacc ctgccaccca gcagggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtgt ccctgacctg tctggtgaag ggcttctacc caagcgacat cgcegtggag 1140 ٠ tgggagagca acggccagcc cgagaacaac tacaagacca cccccccagt gctggacage 1200 gacggcagct tcttcctgta cagcaagcetg accgtggaca agagcagatg gcagcagggce 1260 aacgtgttca gctgctcegt gatgcacgag geccctgcaca accactacac ccagaagage Vo 1320 ctgagcctgt ccccaggeaa gtga 1344 <210> 112 <211> 1344 <212> DNA ٠ <213> mus musculus ‏افر‎
-4+؟- 2 >400< ‎gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt‏ 60 ‎agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt ١0‏ ‎ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggect ggctaactat 180 ©‏ ‎aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac‏ 240 ‎atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag‏ 300 ‎atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgccage ٠‏ 360 ‎accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcageca agagcaccag cggcggcaca‏ 420 ‎gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtecctggaac‏ ‎١٠‏ 480 ‎agcggagccc tgacctcegg cgtgcacacc ttcceegeceg tgetgcagag cageggcectg‏ 540 ‎tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc‏ 600 ‎tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcccaagage ٠‏ 660 افر
_ \ ¢ «= tgcgactgca cccactgecce ceectgecct gecectgaac tgetgggegg acccagegtg 720 ttcctgttcc cccccaagec caaggacacc ctgatgatca gcagaaccce cgaggtgacce 780 tgtgtggtgg tggacgtgtc ccacgaggac ccagaggtga agttcaactg gtacgtggac ٠ 840 ggcgtggagg tgcacaacgc caagaccaag cccagagagg agcagtacaa cagcacctac 900 agggtggtgt ccgtgctgac cgtgetgcac caggactgge tgaacggcaa ggagtacaag 960 0٠ tgtaaggtgt ccaacaaggc cctgccagcec ccaatcgaaa agaccatcag caaggccaag 1020 ggccagccaa gagagcccca ggtgtacacc ctgccaccca gcagggagga gatgaccaag 1080 aaccaggtgt ccctgacctg tctggtgaag ggcttctacc caagcgacat cgeegtggag Vo 1140 tgggagagca acggccagcec cgagaacaac tacaagacca cccccccagt gectggacage 1200 gacggcagct tcttcctgta cagcaagcetg accgtggaca agagcagatg gcagcagggce 1260 ٠ aacgtgttca gctgctcegt gatgcacgag gecctgcaca accactacac ccagaagagce 1320 ‏افر‎
-؟4١-‎ ctgagcctgt ccccaggeaa gtga 1344 <210> 113 <211> 1341 <212> DNA <213> mus musculus © <400> 113 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcct ggctaactat 180 ٠ aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag 300 atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage ٠ 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcageca agagcaccag cggcggcaca 420 gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtecctggaac 480 ٠ ‏افر‎
‎agcggagccc tgacctcegg cgtgcacaca ttccecegeceg tgetgcagag cageggcectg‏ 540 ‎tacagcctga gcagcegtggt gaccgtgect agcagcagcec tgggcaccca gacctacate‏ 600 ‎tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gccctgcage ٠‏ 660 ‎tgcaagcaca cctgtccecce ctgecctgee cetgaactge tgggeggacce cagcegtgtte‏ 720 ‎ctgttcccce ccaagceccaa ggacaccctg atgatcagca gaacccecga ggtgacctgt‏ ‎٠‏ 780 ‎acgtgtccca cgaggaccca gaggtgaagt tcaactggta cgtggacgge‏ 0109119199 840 ‎gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaggagc agtacaacag cacctacagg‏ 900 ‎gtggtgtccg tgctgaccgt getgcaccag gactggcetga acggcaagga gtacaagtgt ١٠‏ 960 ‎aaggtgtcca acaaggccct gccageccca atcgaaaaga ccatcagcaa ggccaaggge‏ 1020 ‎cagccaagag agccccaggt gtacaccctg ccacccagca gggaggagat gaccaagaac‏ ‎٠‏ 1080 ‎caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc ttctacccaa gcgacatcge cgtggagtgg‏ 1140 افر
١6م‎ gagagcaacg gccagcccga gaacaactac 3803003066 ccccagtgct ggacagcgac 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacce gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac 1260 gtgttcagct gctcegtgat gcacgaggec ctgcacaacc actacaccca gaagagectg ه٠‎
1320 agcctgtccc caggcaagtg a 1341 <210> 114 <211> 1341
<212> DNA ٠ <213> mus musculus <400> 114 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ١٠ ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag
300 ٠
افر
‎atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage‏ 360 ‎accaagggcc caagcgtgtt cccgctagece cccagcageca agagcaccag cggcggceaca‏ 420 ‎gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgacegt gtcctggaac ©‏ 480 ‎agcggagccc tgacctcegg cgtgcacaca ttccecegeceg tgetgcagag cageggcectg‏ 540 ‎tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc‏ ‎٠‏ 600 ‎tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcctagctge‏ 660 ‎tgcacccaca cctgtcccce ctgecctgec cetgaactge tgggeggacce cagcegtgttc 7/20‏ ‎ctgttcccce ccaagceccaa ggacaccctg atgatcagca gaacccccga ggtgacctgt‏ ‎١٠‏ 780 ‎gtggtggtgg acgtgtccca cgaggaccca gaggtgaagt tcaactggta cgtggacgge‏ 840 ‎gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaggagc agtacaacag cacctacagg‏ 900 ‎gtggtgtccg tgctgaccgt getgcaccag gactggetga acggcaagga gtacaagtgt ٠‏ 960 افر
-ه4؟- ‎aaggtgtcca acaaggccct gccageccca atcgaaaaga ccatcagcaa gg ccaagggce‏ 1020 ‎cagccaagag agccccaggt gtacaccctg ccacccagca gggaggagat gaccaagaac‏ 1080 ‎caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc tictacccaa gcgacatcge cgtggagtgg ©‏ 1140 ‎gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc ccccagtgcet ggacagcgac‏ 1200 ‎ggcagcttct tcctgtacag caagctgacc gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac‏ ‎٠‏ 1260 ‎gtgttcagct gctcegtgat gcacgaggec ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg‏ 1320 ‎agcctgtccc caggcaagtg a 1341‏ 115 >210< ‎١٠‏ 1341 >211< ‎DNA‏ >212< ‎mus musculus‏ >213< 115 >400< ‎gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt‏ ‎0٠٠‏ 60 ‎agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120‏ افر
‎ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180‏ ‎aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac‏ 240 ‎atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgce ccggtctgag‏ ‎o‏ 300 ‎atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage‏ 360 ‎accaagggcc caagcgtgtt cccgctagee cccagcageca agagcaccag cggcggceaca‏ 420 ‎gccgcecectgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccegt gtectggaac ٠‏ 480 ‎agcggagccc tgacctcegg cgtgcacacc ttccecgeceg tgetgcagag cagceggcectg‏ 540 ‎tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcc tgggcaccca gacctacatc‏ ‎١٠‏ 600 ‎tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcccagcetgce‏ 660 ‎gacaagcact gctgccccecc ctgccctgec cetgaactge tgggecggacc cagcegtgtte‏ 720 ‎ctgttcccce ccaagceccaa ggacaccctg atgatcagca gaaccceccga ggtgacetgt ٠‏ 780 افر
—Y¢vV- gtggtggtgg acgtgtccca cgaggaccca gaggtgaagt tcaactggta cgtggacgge 840 gtggaggtgc acaacgccaa gaccaagccc agagaggagc agtacaacag cacctacagg 900 gtggtgtccg tgctgaccgt getgcaccag gactggetga acggcaagga gtacaagtgt ه٠‎
960 aaggtgtcca acaaggccct gccageccca atcgaaaaga ccatcagcaa ggccaagggce 1020 cagccaagag agccccaggt gtacaccctg ccacccagca gggaggagat gaccaagaac
1080 ٠ caggtgtccc tgacctgtct ggtgaagggc ttctacccaa gcgacatcge cgtggagtgg 1140 gagagcaacg gccagcccga gaacaactac aagaccaccc ccccagtgcet ggacagcgac 1200 ggcagcttct tcctgtacag caagctgacce gtggacaaga gcagatggca gcagggcaac ١٠ 1260 gtgttcagct gctcegtgat gcacgaggec ctgcacaacc actacaccca gaagagcctg 1320 agcctgtccec caggcaagtg a 1341
<210> 116 ٠٠٠ <211> 1335
افر
-م؛؟- ‎DNA‏ >212< ‎mus musculus‏ >213< 116 >400< ‎gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgecag cgtgaagatt‏ ‎o‏ 60 ‎agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120‏ ‎ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180‏ ‎aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac‏ 240 ‎atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgc ccggtctgag ٠‏ 300 ‎atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage‏ 360 ‎accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcagca agagcacaag cggcggaaca‏ ‎١٠‏ 420 ‎gccgcecctgg getgectggt gaaggactac ttccccgage cegtgaccegt gtettggaac‏ 480 ‎agcggagccc tgaccagcegg cgtgcacacc tttccagecg tgctgcagag cagcggcectg‏ 540 ‎tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcec tgggcaccca gacctacatc ٠‏ 600 افر
‎tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcccaagagce‏ 660 ‎tgcacctgtc ccccttgtee tgccectgag ctgctgggeg gacccagegt gttectgttc 7/20‏ ‎ccccccaage ccaaggacac cctgatgatc agcagaacce ccgaggtgac ctgtgtggtg‏ © 780 ‎gtggacgtgt cccacgagga cccagaggtg aagttcaact ggtacgtgga cggcgtggag‏ 840 ‎gtgcacaacg ccaagaccaa gcccagagag gagcagtaca acagcaccta cagggtggtg‏ 900 ‎tccgtgctga ccgtgctgca ccaggactgg ctgaacggca aggagtacaa gtgtaaggtg ٠‏ 960 ‎tccaacaagg ccctgccagce cccaatcgaa aagaccatca gcaaggccaa gggccageca‏ 1020 ‎agagagcccc aggtgtacac cctgccaccc agcagggagg agatgaccaa gaaccaggtg‏ ‎١٠‏ 1080 ‎tccctgacct gtctggtgaa gggcttctac ccaagcgaca tcgecgtgga gtgggagage‏ 1140 ‎aacggccagc ccgagaacaa ctacaagacc acccccccag tgetggacag cgacggcage‏ 1200 ‎ttcttcctgt acagcaagcet gaccgtggac aagagcagat ggcagcaggg caacgtgttc ٠‏ 1260 افر
_ \ OW — agctgctccg tgatgcacga ggccctgcac aaccactaca cccagaagag cctgagcectg 1320 tccccaggca agtga 1335 <210> 7 <211> 1347 ‏هه‎ ‎<212> DNA <213> mus musculus <400> 7 gaggtccagc tgcagcagag cgggccagaa ctggttaaac ctggcgccag cgtgaagatt 60 0٠ agctgtaaga ccagcggtta catctttaca gcatatacca tgcactgggt gaggcagagt 120 ctgggggaat ctctggactg gatcggaggt attaagccca acaatggcect ggctaactat 180 aatcaaaaat tcaagggcaa agccacactg accgtcgata agtcctcttc cacagcttac 240 atggatctga gaagcctgac atccgaggac agtgcagtgt actactgcgc ccggtctgag ٠١ 300 atcactaccg agttcgacta ttggggacag ggcactgcac tgaccgtctc ctccgeccage 360 accaagggcc caagcgtgtt cccgctagec cccagcagca agagcacaag cggcggaaca 420 ٠ ‏افر‎
— \ o \ — gccgcecctgg getgectggt gaaggactac ttcccecgage cegtgaccgt gtettggaac 480 agcggagccc tgaccagcegg cgtgcacacc tttccagecg tgctgcagag cagcggcectg 540 tacagcctga gcagcgtggt gaccgtgect agcagcagcec tgggcaccca gacctacatc ه٠‎ 600 tgcaacgtga accacaagcc cagcaacacc aaggtggaca agagagtgga gcccaagagce 660 tgcgataagt gcgtggagtg ccccccttgt cectgececetg agcetgetggg cggacccage 720 ٠ gtgttcctgt tcccecccaa geccaaggac accctgatga tcagcagaac ccccgaggtg 780 acctgtgtgg tggtggacgt gtcccacgag gacccagagg tgaagttcaa ctggtacgtg 840 gacggcgtgg aggtgcacaa cgccaagacc aagcccagag aggagcagta caacagcacc ٠ 900 tacagggtgg tgtccgtgct gaccgtgctg caccaggact ggctgaacgg caaggagtac 960 aagtgtaagg tgtccaacaa ggccctgcca gccccaatcg aaaagaccat cagcaaggcec 1020 ٠ aagggccagc caagagagcc ccaggtgtac accctgccac ccagcaggga ggagatgacc 1080 ‏افر‎
— \ o \ —
aagaaccagg tgtccctgac ctgtctggtg aagggcttict acccaagecga catcgecegtg 1140 gagtgggaga gcaacggcca gcccgagaac aactacaaga ccaccccccce agtgetggac 1200 agcgacggca gcttcttect gtacagcaag ctgaccgtgg acaagagcag atggcagcag ه٠‎ 1260 ggcaacgtgt tcagctgctc cgtgatgcac gaggccctgc acaaccacta cacccagaag 1320 agcctgagcc tgtccccagg caagtga 1347
افر

Claims (4)

  1. —Yoy— ‏عناصر الحماية‎ ‏أو شظية وظيفية‎ monoclonal antibody ‏النسيلة‎ aa, antibody ‏جسم مضاد‎ -١ , dimerization inhibit ‏او مشتق منه, يكون قادراً على تثبيط ديمرة‎ functional fragment CDR-H1, CDR- ‏المذكور يشتمل على سلسلة ثقيلة تشتمل على‎ antibody ‏والجسم المضاد‎ ‏لها‎ amino acid sequences ‏لها متواليات الحمض الأميني المناظرة‎ Ally CDR-H3 5 2 ‏و‎ CDR-L2 (CDR-L1 ‏؟ و ؟: وسلسلة خفيفة تشتمل على‎ ,١ ‏هه المتوالية ذات أرقام الهوية‎
    ‎ally CDR-L3‏ لها متواليات الحمض الأميني المناظرة ‎amino acid sequences‏ لها للمتوالية ذات أرقام الهوية 57,0 7, والجسم المضاد ‎antibody‏ المذكور يتميز أيضنًا بأنه يشتمل على جسم مضاد ‎antibody‏ خميري أو بشري وشبيه بالبشري ‎chimeric, human or‏ ‎humanized antibody‏ ويتضمن علاوة على ذلك المنطقة المفصلية ‎hinge region‏ التي
    ‎YY ‏متوالية ذات رقم هوية‎ amino acid sequence ‏تشتمل على متوالية الحمض الأميني‎ ٠ amino ‏التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني‎ hinge region ‏باستثناء المنطقة المفصلية‎ ‏إلى‎ 7١ ‏المنتقاة من المجموعة المحتوية على المتوالية ذات أرقام الهوية من‎ acid sequence YA
    ‎functional ‏أو شظية وظيفية‎ ,١ Llall ‏وفقًا لعنصر‎ antibody ‏الجسم المضاد‎ - Y ١ ‏المذكور يشتمل على سلسلة‎ antibody ‏مشتق منها, يتميز بأن الجسم المضاد‎ J fragment amino acid ‏ثقيلة ذات مجال متغير من المتوالية التي تشتمل على متوالية الحمض الأميني‎ .٠١ ‏متوالية ذات أرقام هوية 48 9 أو‎ sequence
    ‎VY‏ - حمض نووي ‎nucleic acid‏ معزول ‎isolated nucleic acid‏ يتميز بأنه قد تم اختياره من الأحماض النووية ‎nucleic acids‏ التالية: أ) حمض نووي ‎nucleic acid‏ حمض ‎DNA‏ أو 8ل0, مشفر لجسم مضاد ‎antibody‏ ‎coding for antibody‏ أو إحدى شظاياه الوظيفية ‎functional fragment‏ أو مشتقاته ‎la,‏ ‏لأي من عنصري الحماية ‎١‏ و 7:
    ‏افر
    ‎o ¢ —‏ \ — ب الأحماض النووية ‎nucleic acids‏ المكملة للأحماض النووية ‎nucleic acids‏ وفقًا لتعريفها في ب). ¢ - ناقل ‎vector‏ يشتمل على حمض نووي ‎nucleic acid‏ وفقا لعنصر الحماية ‎YF‏ ‎lo}‏ ‏© - خلية عائلة معزولة ‎host cell‏ 15018160 تشتمل على ناقل ‎Wyvector‏ لعنصر الحماية 4. 7- عملية لإنتاج جسم مضاد ‎process for production antibody antibody‏ أو شظية وظيفية ‎functional fragment‏ أو مشتق منه, وفقا لأي عناصر الحماية ‎Ys)‏ وتتميز ‎٠‏ بالخطوات التالية: ‎(I‏ الزراعة في وسط وظروف الزراعة المناسبة لخلية وفقا لعنصر الحماية 530 ب) استرجاع الجسم المضاد ‎antibody‏ المذكور, أو شظية وظيفية ‎functional fragment‏ أو مشتق منها, وهكذا المنتج بدء من وسط المزرعة أو الخلايا المزروعة المذكورة. ‎Vo‏ #- الجسم المضاد ‎antibody‏ أو شظية وظيفية ‎functional fragment‏ أو مشتق منها, وفقاً لعنصر ‎١‏ أو "حيث يكون الجسم المضاد ‎antibody‏ المذكور متقارن كيميائيا بعامل سام للخلايا
    ‎.coupled chemically to cytotoxic agent‏ ‎A‏ - الجسم المضاد ‎antibody‏ وفقا لعناصر الحماية ‎١‏ ؛ حيث أن العامل السام للخلايا ‎cytotoxic agent ٠٠‏ المذكورة يتم اختياره من المجموعة المكونة من عوامل ألكلة ‎alkylating‏ ‎agents‏ أو عوامل مضادة للاستقلاب ‎anti-metabolites‏ أو عوامل مضادة للأورام ‎anti-‏ ‎tumor antibiotics‏ أو مثبطات انقسام الخلايا ‎mitotic inhibitors‏ أو مثبطات وظيفية الكروماتين ‎chromatin function inhibitors‏ أو العوامل المضادة لتكوين الأوعية ‎anti-‏ ‎angiogenesis agents‏ أو العوامل المولدة للعظام ‎anti-oestrogenic agents‏ أو العوامل ‎Yo‏ المضادة لذ ‎antiandrogen agents‏ أو العوامل المعدلة ‎.immunomodulators ic lull‏ افر
    — 00 \ _ 4 - الجسم المضاد ‎antibody‏ لعنصر الحماية ‏ 9 0 حيث أن العامل السام للخلايا ‎cytotoxic agent‏ المذكور عبارة عن ‎Lis‏ لانقسام ‎.mitotic inhibitor WAN‏ ‎-٠‏ الجسم المضاد ‎antibody‏ شظية وظيفية ‎functional fragment‏ أو ‎Lie Bide‏ وفقاً 0 لعناصر الحماية ‎١‏ أو ‎A JV JY‏ عبارة عن دواء. ‎١١‏ - تركيبة متضمنة ؛ باعتباره عنصر ‎active principle Lis‏ ؛ مركب مكون من جسم مضاد ‎antibody‏ أو شظية وظيفية ‎functional fragment‏ أو مشتق منها ؛ وفقا لما تم ذكره في واحد من عناصر الحماية ‎١‏ 6 7 ا + أو ‎A‏ ‎١١9 NV‏ - التركيبة وفقًا لعنصر الحماية ‎,١١‏ حيث أن التركيبة المذكورة تتضمن, علاوة على ذلك باعتباره منتج مؤتلف للاستخدام المتزامن ‎,combination product for simultaneous‏ المنفصل أو المتتابع, لجسم مضاد ضد الأورام ‎.anti-tumoral antibody‏ ‎١‏ - التركيبة ‎Gay‏ لعنصر الحماية ‎,١١‏ تتميز بأنها تشتمل على, علاوة على ما سبق؛ كمنتج توليفة للاستخدام المتزامن, المنفصل أو الاستخدام التتابعي ‎product for simultaneous,‏ ‎or sequential use Vo‏ 5608+816, لعامل سام للخلايا/ قاتل للخلايا ‎cytotoxic/cytostatic‏
    ‎.agent‏ ‏4 - التركيبة وفقاً لعنصر الحماية ‎IF‏ حيث أن العامل السام للخلايا / القاتل للخلايا ‎cytotoxic/cytostatic agent‏ المذكور يكون متقارن كيميائياً ‎chemically‏ 00110160 مع واحد ‎٠‏ على الأقل من عناصر التركيب المذكور للاستخدام المتزامن. ‎٠‏ - التركيبة وفقاً لعنصر الحماية ‎VE‏ حيث أن العامل السام للخلايا ‎cytotoxic agent‏ المذكورة يتم اختياره من المجموعة المكونة من عوامل الكلة ‎alkylating agents‏ أو عوامل مضادة للاستقلاب ‎anti-metabolites‏ أو عوامل مضادة للأورام ‎anti-tumor antibiotics‏ أو ‎YO‏ مثبطات انقسام الخلايا ‎mitotic inhibitors‏ أو مثبطات وظيفية الكروماتين ‎chromatin‏ ‎function inhibitors‏ أو العوامل ‎salad)‏ لتكوين الأوعية ‎anti-angiogenesis agents‏ أو افر
    1ه العوامل المولدة للعظام ‎anti-oestrogenic agents‏ أو العوامل المضادة لل ‎antiandrogen‏ ‎agents‏ أو العوامل المعدلة للمناعة ‎.immunomodulators‏ ‏- التركيبة وفقاً لعنصر الحماية ‎١64‏ أو ‎Vo‏ ؛ حيث أن العامل السام للخلايا / القاتل للخلايا ٠ه ‎cytotoxic/cytostatic agent‏ المذكور عبارة عن ‎Lis‏ لانقسام الخلديا ‎.mitotic inhibitor‏ ‎١١‏ - التركيبة ‎Gay‏ لعنصر الحماية ‎,١١‏ تتميز بإقران واحد, على الأقل, من الأجسام المضادة المذكورة, أو شظية وظيفية ‎functional fragment‏ أو مشتق منها, مع خلية سامة ‎cell toxin‏ و/ أو نظير مشع ‎radioelement‏ ‎ye‏ ‎١‏ طريقة ‏ تجرى .في المعمل لتشخيص الأمراض المحفزة بواسطة_التعبير المفرط ‎overexpression‏ أو التعبير المنخفض عن المستقبل ‎under expression of c-Met‏ ‎receptor‏ بدء من عينة حيوية ‎biological sample‏ بحثا عن وجود غير طبيعي لمستقبل ‎C—‏ ‎led Met‏ حيث تتميز الطريقة المذكورة بأنها تشتمل على خطوة حيث تتلامس العينة الحيوية ‎biological sample Yo‏ المذكورة مع جسم مضاد ‎antibody‏ لعناصر الحماية ‎AY 7 ١‏ أو 4 شظية وظيفية ‎functional fragment‏ أو مشتق منها. 4 - طريقة التشخيص في المعمل وفقا لعنصر الحماية ‎VA‏ ؛ حيث أن الطريقة تتضمن خطوة يكون فيها الجسم المضاد ‎antibody‏ المذكور مرمزاً ‎labeled‏ ‏افر
    ‎o 7 _‏ \ _ ‎ae Lo‏ ا ‎TT‏ 1 ال 25 ‎+HGF [ie a alas‏ لأا ال ‎NEE‏ 3 ‎ons ET er‏ ياي ءامل + الح ا ‎ud Sa‏ ‎wo Asean a a ْ‏ ع حنم عم ع ا و ‎EB Bh‏ مق ‎A‏ ‏= ا ‎ERO‏ ‎EEE |]‏ ببسب 3 3 متسس ووو 1 ا راج جرد ودود 5 ‎x‏ 0 جسم م1051 بشري ( غير متصل ) ‎see‏ 1051 قفاري ( غير متصل ) شكل ‎١‏
    ‏.1:6
    ‎o A —_‏ \ _ ‎femme ey‏ ا ‎i Lang EL‏ للل'ب لللبدام<اللإو#دإ6ااالغعتَذدذا[ ‎Moyes SE‏ 5 ض | 3
    ‎SR.‏ الس ا لاب 3 ‎oF | |‏ : إ ‎a‏ ‎eee‏ سس اماما 1 ‎EA i ;‏ 3 ‎Ax 3 + :‏ إٍْ 0 ¥ 1 ‎y‏ !4 إ 3 ‎i‏ ززع نو جد ¥ | ‎x‏ ‎oo ] |‏ ) | ا نا :ااا : 1 لاا 3 3 7 ااانا لان اااي ‎fi] 3 + > EA 100 ne‏ ‎I | i 8 N :‏ ‎N\ :‏ 5 ا ا ‎Se‏ ل د ا ا ةك ‎ia‏ ‏اام ابا ججح حم الي ى ‎BER OB‏ 52 5 55 8 = الل لاد 28 5 لتم 0 ‎pe‏ ‏3 85 اخ 9 ¥ 2 م الم م + = ”- ‎zB =‏ 3 2 ‎8B 5 ©‏ 6 0 شكل ؟1 اا د الو وا 3 3 ‎Te |‏ سس ست ات ‎A‏ 31 ‎Th as 13 :‏ 7 اط ل ال 11 0 1 ‎SN | '‏ 0 3 ‎N :‏ © 0 8 ‎a 0 EN NON |‏ الست - ‎Fo NTN‏ إ ‎N‏ © ب 0 سسب ‎nn‏ الا ل 1 ‎bh‏ ‎Ow >‏ ا ‎I EF OW‏ ‎BOE OE OE ©‏ ا © 8 © ‎Eg‏ ‏تنخ لي <> ‎Ra = age‏ ل ال © © 33 ¥ ‎a 8 a‏ & ‎Hoe © a‏ ‎ow‏ 0 ‎bona ¥ 5 fs 1 : 5 :‏ ساب
    -4ه-
    ٍ ا ‎٠‏ 14 ‎EN‏ ‎ys 3 ٍِ‏ 3 ض ع . ‎FUENTES BEE IE EE‏ ‎maaan] 2G] {224G11] [224GHY] [2G [2246]‏ موقي هوناظ ‎folate flgGa.‏
    ‎ohiml chim) IgGiohin‏ ال
    ‎ir ; Fe 11 ١ ‏تستستستصمسسردس ديت‎ ‏ض‎ ْ m= BB ‏لان‎ - FRR 39 Ye i . — ‏»ته‎ . TE» "' "tr EE EEE.
    Een IE IE IE Bh Bh hr mga] {2240011 ‏بويع‎ [024B31] ‏رايم رقع‎ light ‏فوص هعور‎ (MUPGH- [TH7:chin whim] ching chit] ‏توا‎ ahind ‏يك 0 با‎
    AT 4 Nw | ‏الا لازن ااال الال‎ AE N § 3 N i ER N Hy Es 8 3 3 1 ‏إٍْ‎ i 3 ; N 4 ‏الج لاا ا لني منت ناذا للنيا لمانا لات لتنا لان الال لاا لاا لاا لات ا ا‎ RE k N 4 ; ) 0 8 ET 14 y HM : 0 ‏الس ا ا امات اتا تدا لاا اااي الما لتنا لانن ااا لاا لا ةلا ااا الا ل ل ا‎ 0 ُ 0 : 3 : 1 i. 1 ‏رٌ ل‎ 5 SE ih A ‏لاد‎ op ay 3 Ca as SRS Ea ER Hy SJE I S——- ‏لسوت حمسيس لت د ات سسا الا ا الس عا ال ا ا ا ل ا ات‎ ‏مضع‎ [ERAT SREY 1 ‏قم‎ ISG EE SRP RPE SI Sh ‏الجا‎ RE, JY TYR 1 Sy ‏اجا ل‎ ay {pGtching ‏لسن تقو‎ fgabiat] ‏إصقيا‎ [hab] 1+ ‏شكل‎ الست لست ل ل سيت سسا م الم ل بارال N ‎A i‏ ب ‎1 5 ‏ل‎ va 1 ‎# a § ‏سس ا ااا | — الالال لأ ام ‎hs FS‏ ‎4 ‏اج اديب ا‎ i ‎ES 4 8 i ; ‎SF ‏ب‎ + Te 8% 5 ay ‏لتحت حكن تتححت حلت الات تتح كحك ‎rrr SS‏ لاحن تتح حت ا الل ‎RO‏ أ لاطا ‎PR‏ ‎i : SE RR ES Pr ved ‏ممح‎ : 5 8 ‎ga EERE Se FRR SE rates SEER N ‎EX = SERRE Ry RRR ‏ل ل ا‎ H ‎9 ‏ال ال‎ IN RR Rt TE H ‎ey SRNR say RRR RRR RRR FIRE H ‎he SY SEE ES SER SE SHE 8 ‏ا ا ال 0 الست الم ا ا ججح ‎Baa‏ ل ‎SR‏ ال 4[ 3 ‎8 SEE aay bats Es RRs SRE i ‎0 8 Raa SE aay Raa Paes SR ; ‎hx 3 8 ‏ا‎ Ra SERRE SERRE SEE i
    ‏.حب" 0 ححا ‎SPEER‏ ححا بحسب صا ‎SH TT‏ ‎La a a a :‏ ا ا قا ‎Eo Sa he Sh Shan a a : ‏لم ا ب ا + ‎SER‏ “ ا 5 ا ‎Bag Sasi J‏ ‎[emery] RASH] panty‏ شيع ‎ERG]‏ انه ‎BoGeHeE Boldly‏ إجاجع”عم عقي لمعي ليخ ‎ng‏ ‏شكل ‎wt‏ ‏:4ض
    -١١؟-‏ ‎Aa‏ 3 7 ‎oes :‏ 1 و ‎oe‏ ‏* :0 1 3 3 ‎i 9 ee‏ ‎BE |‏ ا ب 88 ل ا ‎De‏ - صش ]224611[ ]224611[ ]24011 وضع سيمع ‎MEME]‏ ‏موعت ‎[THEME‏ سار وعدم ‎[lg@iahic]‏ ‎ad : 5‏ 3 & ا
    ‎I. Ve ْ‏ 4 إٍْ ‎1A WY‏ ل 1 ا 0 ‎od‏ ب ب امم 41 ْ ا سان ‎FE‏ . - ل ‎EN BE |‏ ب ‎eo‏ ‎OB OB‏ نا ‎LB‏ ‏ا ‎EE = ha -_ SS‏ 1 الل ا ب م ‎Ca‏ ا ا + 4 ال ‎٠ fe a a a‏ ا نا ا ب ب ب ب ا 2,0 ااا ل ات ل ا متتو ا — ‎EE‏ ا متتو ‎SR‏ مسو ‎SR‏ ا شر م ومع أإصضع ]224891[ قوع ‎MEAG]‏ ‏رفو 107 ‎[THPchim] [THZHz1} [THRH2E]‏ وض عوا فا اب
    -؟)؟- ‎Ey wg‏ ‎Fond SR (+ :‏ ‎SERRE : or :‏ ا ‎i ١‏ ¥ جٍِ ل ال سا 1 ‎Ek‏ ‎fn BREE SRE : a‏ ‎ped Sh Ra poe‏ ‎eri Shams EEE Pt‏ ‎B BREE SRE Sr‏ الل ‎fe SO Rasy Ea Tis‏ ‎SE ERR fol‏ ‎La Sa‏ ‎Sm RRR Si‏ ‎SEE . poste‏ ا 5 ‎a owed ١‏ ا 8 ‎fies‏ 0 ال ال ‎eek NN FC Lo SO‏ 5 الال شي 0 2561000000 ‎x Te fe en BRR‏ ل ا ا 2 ا ا ا 0 ‎Fe‏ ل ا 5 5 ‎BREE SE Ra Sy : Le‏ ‎Se San Ra Ra SSE ra‏ ‎J N SE EE RE ERR eee‏ . شل ‎lige, Gl Hs - ne : 1 7‏ ‎oe‏ - + - 5 = ب : 8 بالق كرام ا مستبا | يسيس 7 ‎ab‏ كن ‎HGF‏ ‎h loge‏ :1 ا 5 الال 18 ا صن ‎A le‏ ‎Fa 3‏ & 3 ب 1 $ ; الاين ‎To 8‏ مو ‎a‏ ; ‎mn Ya 4 nn 0 0‏ ‎RR Ener‏ ا ‎١‏ ان اد لكك ‎fore J i RRR 0 1 Er‏ ‎bE Raa Bnd‏ 1 © ‎Er Nie Sa TE 7‏ ‎me ROT ay Rha Berns‏ ‎H RRR RY gna‏ تعمل ‎iY: 1 aR Se go‏ ‎SES Hee‏ ا ل اد © ‎os Ye a Lan 7‏ ‎La Bog‏ - ا د أننا ‎B Bh moi LR‏ ننه ‎a‏ تاق يا ‎Yoo‏ ‎Po ee OE Bc a‏ ‎Eh‏ ال ‎Pod i EEE a.
    Sy‏ ‎RE 1 a Sy Rha ool Lee‏ م ‎SEER COO.‏ ل ا 1 ل يد ‎Ei H i SEER ssa] IS IR : A‏ ‎Ras BS Be‏ ل ا 1 ‎Pod‏ ‎i RR RR RRR RNa B‏ 0 ‎H H H nn] | SRR BRR 3‏ 0 41 ل ‎RSE I en LEE BES BESS pee‏ & - ا - ا - - ‎SEE‏ ‏ليسي البنسسسيييييت ا البنيييسسسسيتا بجعا ال ‎HGE br‏ واد 1131 ‎EEE‏ مل مقارية ا 3 ‎id‏ 5 لما ب ا =
    ا ‎mui‏ ‎sel LCA RR‏ ‎a"‏ 7 08 8 #0 شكل أب
    ‎Ey y on‏ م 0 3 ‎I‏ د عم ‎HB‏ هال ‎ms |. EE‏ دجم عنم جم ‎a‏ = ا ‎Soya aim gE ke‏ ‎iE‏ ل ‎OB ba‏ شن § ل ‎Be‏ ل ‎g‏ ‎a J. aE ae Be . AES Be BEN te sae‏ ‎NS J CR A Gy‏ لحب ‎E Ny BEE RRS‏ ا ‎BR BE BB BB‏ !ا ا ْ ةا ة ذا ‎i aE BE Be NR OBER OB‏ ‎i Be EN Be RNY BS BE BE Nn‏ ‎ER BE BE BB BB‏ > ‎aN RR SEE XN ] Bea SEER a FS aa‏ \ = : = + م 7 ا للشو + # + د ‎ipmaN‏ ‏متها — 0 ٍ : الا ال ‎HGF goals EN‏ بيع 824371 1 د ‎{Ray aga‏ رماع ‎Sede RSG‏ ‎aN‏ ا نرج ‎BMH‏ الله ‎UPAR‏ لسكا ‎fs‏ . ‎i A i pL 7‏ ‎Ye 0‏ ب 0 5 ص 51 ‎Ra praia‏ ‎I‏ ب ا 5 ‎di 5‏ ل" ‎g‏ ‎Sh paren SEER‏ خخ 1 اح الح ‎BB SE ore a I,‏ ل #5 اا 3 ‎EE‏ ا ض الة»» ‎SERRE - ! -‏ - مسبت ‎No‏ نا لا ‎eT or 8 BE‏ جع د ل ين ‎ON‏ ا نحم ‎BE‏ 400 نا ‎BE‏ للد ‎a‏ 0 : 0 نذا ةا ‎a‏ 0 0 ‎RS SEE RC Ra SRE SE a‏ ا ا ‎i‏ ‏ين ‎iE‏ د لم ‎REN BY‏ ةع م 0 ‎BB‏ م 2 0" ‎٠‏ م ا ا ا با ‎I‏ لد ‎HL‏ الت ‎NN‏ ذا ‎Pod 58 BE‏ خخ ا لجخ الخ ‎BE‏ بم بن تم ‎io BE BE‏ : ‎BBR‏ يا ذه ذه ا هه © »© للششر ‎N fe o 1 - 1 0 . ~ 8, 0‏ ; ‎ETF a : * ¥ ¥ +‏ ‎SA haa J a] SRNR 8‏ مستت ‎cm‏ سس ‎١١‏ و ‎HSPs‏ ‏ولعي 3311م الاك تكب ات تتضيع تار ‎ching STH ohired‏ لكا ‎USER ohn)‏ تف ‎TEE GE or‏ ششل + ب
    -ه+؟- 8
    ‎ra.‏ ‏= ‏اح ‎a‏ د ‎Y‏ 8 ‎EE 0 8‏ ا« ا ‎Eye‏ ‎a rr BE 1 BEE Tr BE Ea BE‏ 0 م ا ‎OB‏ لي جم كا بحم ‎OE‏ و ‎RH‏ 5 = © © - = | = © 0 د ا ‎N | NE‏ ‎BB‏ ا م ا 0 ا ا 0 1 ‎si]‏ ‏م ‎EB BEEBE‏ إْ ‎wm N‏ ان ل ‎ia 1 0 LEE LEE NN 0 gE‏ + = اح - + - + - ب - + = ‎ [THZ Hz®‏ 2م747 ‎[TH7 chien] TH7 Hat]‏ ‎Lge‏ ‎ro‏ ‎Xo‏
    ‏."م ع ‎ol:‏ “ ‎ET‏ م و)50- 7 8 - = ال 00 0 بق ك5 ‎hi i LL La‏ = © 8 8 ي : 8 ‎ACE EE ER‏ 8 8 8 0 8 0 8 0 ‎BB 1 "A BEB EB‏ : ب 5 ب 5 % = + - & = + > ‎pase 122453100000 pact [24ST] 204011] )264611[‏ تدع ‎chim} TH Hz} THZ Heal [THT‏ 107 شكل ‎wh‏ ‎tyve‏
    -؟1١-‎ ‏ا‎ ‎va - g ‏+*؟‎ Ee 0 ‏ب ا‎ ‏ومست ا ا 0 4 اس‎ ‏ا 0 ا‎ BE = ee ES ‏لع كع نم غم‎ |] oo. Yu | \- BB BB . = Bn BB BB ‏ال‎ Ee ‏لذ لم‎ Ea : Raa as SE Rey Eset & REE SE SEER : ‏ا ا‎ 3 REE a ay OOS Peri LL - = BF = x NERS EEG aE a poses ‏هبش‎ / , NN EE | ‏ا د لشم ل‎ Se = + = 4 = + 5 + ie Bia ‏فكوا زرا تققطع . طهر لضفت‎ ehim] 11 Ty ‏شكل‎ ‏م‎ ‎Ta = 2 0 0 & ١ ‏وت‎ ‏اج‎ Fa ; 8 0 ‏ا‎ ¥ EEE ER : : ‏عتم‎ 8 HE NEES Re (+ NY a Sa Yoo oe ‏ل ال ا ا ل ا ا‎ 8
    - =. BB BH = ٠ LE BEE OB ‏لا‎ Ee 2 SEE SEE SE ay : En: RR Anahi ahahaha KOR So as Ly HEE LEER Ea Ss ‏لينم ل 0 شرق‎ EE ‏لد‎ Bd 2 F = ¥ = + - ‏ا‎ ‎as is {RAG him 2245771 ‏قصو1‎ shim] ERG nad § ¥ ‏شل‎ eh Creole JARRETT Saul Se [RAT sb Tew ee [RR Si : ‏را قمواي تماق لسو‎ ‏نا"‎ Sa ee [FRAGT BE HRY Re 1 ‏ا ا مب دا الا‎ 4 ‏رتك 2235710108 سمه هات سا« جحي‎ Cd Re ‏ا ا الها ا سا‎ 34 ‏مها لوا حا و‎ Bn, ‏مامت‎ 22177 MEY ‏ل‎ TERE WE ‏وي .بدي‎ By He : ‏ايها‎ 1 2 % CTR a STE RS ‏الا‎ HARE hd 1% = 0 132061177753 oy LN ‏ا‎ ; : w Ma a . ‏ين ا ا لها ا ع‎ a ‏تك ميا‎ AA 3 3 :ِ ‏ا‎ 5 0 |ّ ‏قا‎ Ne ‏اا‎ ‏ام‎ NR i 8 ‏نب‎ ‎8 ‏الات نا‎ ‏وا‎ © : ly 0 we : 0 ‏ب ب 7 وا‎ pe ‏ب‎ 0 - ‏ال‎ SENET EIU (FJ ‏اليب قب بتع بره اللاي الفا الوك‎ en fama] ‏ا‎ ‎_— —— [ZIG] [HER v * > © ‏و‎ [ZG] IMWSR hing Xoo i : : 0 : 8 3 ٍ 5 ‏مص الهس نا‎ {E04G] ‏اوتا‎ Shi he LR pe SE 0 ‏الا‎ p : Re . XL 0 By Y EN os TE ‏الات موا‎ 8 4 31 iH [the fhe 4 ‏تعب اا ل لا فو‎ [ERI ‏لاد شو‎ LSE 0 Seg ‏ا‎ GN CET ‏كال‎ A ogy Ey he ‏لب‎ 284311] ‏الح‎ Noe ‏ا‎ Sing Le i a4, Nay Thy ee ‏اد‎ ‏الالح ا 0 ا‎ oo ‏ل‎ ‎4 8 | ‏ال شلا‎ an) ‏ال‎ ‎LAL Ro ‏ل‎ ‎= ‏ا‎ ‏ال‎ hf ie BY NN ay & AW : : ‏ا‎ i Ng Ma xy ¥ Ne : Na es: £ 8 ‏ةا‎ fe By 2 ‏ا‎ TR ‏لي‎ ‏اوش‎ ‏و ا‎ ‏ا‎ A A HL ‏يمه فل‎ ‏ل ل‎ UTE ET ‏ال‎ NA a > ‏ل ل ا لا‎ $Y ‏شكل‎ ‏رفير‎
    ١ 8 EEE ‏اا‎ Xo | iy i ER iy i 8 6 RE ‏عد‎ H : SR HY 088 8 12: ‏يي‎ 8 2]8 H : NE i Hh RY REAR IE 4 i 01 ewe ‏لع للا‎ BENE ESLER i 13 ‏بي‎ add 7 1: ‏ال‎ 8 : fh RI RE R IRE 3 ER Rig ER HY RELRRE H 28 CRAY ERNE RELRRE i Rad REY HE 0 080 H 1 : 1: ; : i aes a EHH ER cen dE ‏ا‎ i HN = : SCRE SRM Rent = HERE RR SHY HER NER go i i 3 1 3 k nd mn : HY AELRE SR HY AN REL ERE 138 3 RHE REY ‏ا‎ aN ‏ل‎ 1 Ld how ‏اي‎ 3d FHHR 3 8 NE 8 018 15 ‏م‎ 1 JERE RHE RRR 1 1 ‏ا‎ RB RHE REY HRRY aN iRELRRE RH: RHE RAY BRE ANS K 1 EN 1 0 1 I i 1 08 AN by ST FREE RIN HR HY RR 1 ‏ا‎ AN ‏ا 3 الح الا الل‎ i 1 8 1 ‏الج ال لع الح 3 ا ل ا سس سس‎ NB 1 ‏ل ا‎ NE 1: A Ek 1 3 [3 Ey 3 RRR RS NE: RHE RE ‏ا‎ HY INR 1 SREY ERY ‏يل‎ oi NH IHR REY RENE 3 0: ‏ا‎ NH RHE REY BERNE RE s EH ‏ا‎ BY SER 38] 3 ‏ماد‎ REE Ri ‏ا ا‎ ١ ‏ا(‎ oA & SRE ERE HN HY RENE 1 0 ERE osm SH HHL HR TNE] 1 ‏اننا بار تمان ان الوا‎ J 3a RS 8 0 ‏اخ و‎ CIHR A 3 : 8 1 1 bs NE 111 TRH RENIN EEE FH: 0] ‏أ دا 8 ل ام‎ i RINE FIRE RH 3 ‏ا جا م ا‎ RE x43 i] an] 3 a» Rl SS 1s Fi £1 AHR: HN + FN EH: : ‏أ اا‎ ١١: Hi | SREY HHER NAG alt BHM ERNE REE RY 3 1 : IO ‏ا‎ x8 HEBERT 3 WETS HALE BH RI bah AR ‏ا‎ RE rigs PINT] ‏ال ا ا اال ا الما ا ا‎ NERY HR 1 8 0 RNS EERE 4 5 ‏ا‎ SEES FE NER HR 1:5 ‏و ا 1 ا 83 8 أ لام‎ PEER EA NRE NE ERNE ERR ER ‏لا ا اللو وام‎ NREL ‏ا‎ NY: ‏ا‎ AR RHE BRYN N ‏ا ا ا‎ 81 MI ‏بلج جا ل‎ i: 3 HER HRHYEERHY REY HRY 11081 ‏ا الث ايا اتا‎ ‏تبش‎ BNE ‏نا تنا قا‎ BEM REN BEN MERE RHAS RAYE RU BEHE RENE BY; IRA RE ERE RENE > ‏ل ’ - + = اجا‎ ‏ساي‎ — i : / FY ‏شكل‎ ‎La ‎8 ‏ا‎ i 3 ‏ا‎ ‎2 eR ‏راب‎ 1 #0 “ ‏المح‎ 1 2245 : ‏اااي ا 1 اا‎ a a ‏مج‎ [224G 11]chim ‏ا‎ ‎1 woe [42d enim. iu Fi 3 ‏لجيج‎ a. » 8 ‏ل‎ 8 A <* “3 Yeu Se
    ¥ . 4 ‏ل‎ ‎= ‏ل‎ § ١ 3 , 2 a. : : A 8 3 1 1 & 0 5 hams Y a 0 ‏اج‎ i NE ig Ed SE . Ri 8
    5. ‏نامث‎ 0 3 5 I SN : 3 ‏الخ‎ NT i es 0 AE oe . a x FF Ae a k ‏ل 3 تعن‎ Bo FEES =a ‏ال سا‎ J Spee : ] as PEE 777 ‏ا حي ال‎ ‏ل شه‎ ei i ‏يي‎ ‎Nef§ 0 ‏ا ات ا‎ eg x Shea EIR £0 a ‏ل" بو‎ 1 9 3 EN 8 ¥ : . . 3 Es ny pat on \ ya ‏و عد ب‎ fe JE ond 5 1 Te LR ‏شكل‎
    0 ‏الا‎ 0 / Cr ‏إي ا للا‎
    1 . | | 7! "RR Il Ml Jill 0 1 080 17 ‏ات‎ ١ il i | 4 ‏ب‎ 7 ١ 1 ‏الال 0 1 | وى‎ | 1 1 7 7
    ١و‎
    0 1 ‏لها‎ . 0 ' , 0+١ ٍْ y | ٍ ‏ا‎ PRE : 28 SE 2 in 1 1 ‏ايد‎ | : 1 d y PRT : Koad ! Ly : 1 ْ BE ‏الل‎ ١ ] 0١ 0
    0 N ١ 9# ١! 7# 9 ©
    ا ا ] 88 1 ل مسي ا : ] ‎oe‏ ا 48 ‎SN‏ ا ال اج الوا ‎Fos on‏
    ”7 ا
    د ل ف 0 نات التي ‎SRR‏ ل ‎SRE pn 8 Lo 5 َ 8 RIE‏ 0 تسر
    + 2 ب = + = + ‎B‏ + - + - تج 2 + *
    ١ن‏ ا تان ل ةمس — ‎A‏ ——
    05م ‎E24GH1] E2361]‏ اللي .]224611[ اتسينا اي ‎chim “HAT 11:31 [Hz3)‏ شكل ‎bE‏ ب
    -١ال١-‎ THz Yan a ‏ما مه‎ Contr : ‏ل راج‎ Lot 224611 x ox 1 ‏ا‎ ٍ ٍ 8 8 oer Lot 1 Nias 8 HEN wil Lint 2215111 ein AT Ay Sg Lut 22414 [THF Hed) ‏ا لس با‎ + SF ‏لف‎ Let 224311 [igi Het) ¥ 3 CH Cl 8 ike SE ‏الاب‎ ‎0 Fe ‏الت‎ ed JRE : en i ‏تفل‎ rrr ‏لد‎ A 7 ‏مدا 4 صقن‎ Yh os ow. ve i all ed NTI LR RT = ‏ا‎ Lot Contra: : ‏ديبم‎ | il ERA Yeo ¥ i wave ‏ااا‎ ‎% 6 ‏م ب‎ w= Lot 224014 [THE chifn] TATE hE 8 ‏ف عوك‎ 224610 [THE ‏تق‎ ‏ا 7 نل“‎ coer Led 224811 [igo Hat Fear al Fi + LIE 8 le 8 A to] L&E a : 5 i Ss Pr a a oo] ‏اموت ا‎ ‏ضفر‎ BY ‏ص بل ها‎ 0 te = un 1 1 3 ‏ا ل‎ ١ I "Fi wt wens Lob 22481 rE Cg Let e226 An : 0 ‏حب‎ Lok 224017 [THF ‏زا‎ ‎8 0 ‏لسرت‎ 14224571 [PHT HES] ‏لي‎ 8 i esse Lob 22461 [gE HA]: ] 5 1 8 ‏ا‎ ‎£ ERNE ta | 8 i B® ] | 0 ¥ z IFN CE LS 5 g . ‏لين‎ : A Fe) Sy ‏احج جد لاس اللي‎ ‏لا ال ا ٍِ ال‎ 1 Shea ® Yu de Ys ova ‏را‎ Pa ala 1١ ‏شكل‎
    ٍ ا معت ‎ST 1‏ 1 ‎i 1‏ 4 1 + ‎i i B‏ ‎Nea 1 1 1 8 1‏ ‎bh i 1 1 ]‏ ‎i ify 1 BR B‏ ‎i ١! ١‏ | 1 1 ‎iB‏ ل ‎i 1 0 1 h aig‏ ‎CEL‏ 1 0 0 :| 1 و ال 1 ‎Id ii 1 if i‏ 5 :| ما ‎١ i: ETE‏ :8 أو ا بد 1 #* ‎REEL hl 1:‏ م ل اا 1 1 0 : ‎A Ash qd I A AiR‏ 1 1ج ‎H 2 NTR Ad bob‏ ‎HEH HH Fm wid fi Fa EE paid 1A‏ ل ‎Hie ti RIA FEE‏ الا ‎EH‏ م اال ‎WIP CIT.‏ 0 ال ‎fee‏ ال ال ‎dial 1h i |e Ha EHH‏ مم ‎fH | Hin HEI HR THE TR‏ اله ‎AH Be HH‏ 1 ا 1 ل ‎F‏ ا ان ات ‎FELL HH [Lk‏ ا ‎١‏ الالال 0 لل ‎wil 1H i FALL HA HAH HR 43 HA AHA‏ ا ‎Hie‏ ال 1 ‎i: it HA | dh ffi‏ ل 0 ‎HE‏ ‏ا رن ل 11 ‎HEE | Bet HR 1 Ha A HH‏ وا 110 ‎A 10d Ho 1 BH BRE BE AH 1 AR HHH A Hino Hae Hid i aH AR | Ad i‏ ‎REE EEC ER i | BY BRR iH HTH 7 ff {HH Hit fan He Rik AR THA‏ ‎HEE RE HH Bt) BRE HE AH BE 00100 [i fal HH 4H ga Hid 1 [AA Rik HR 1 1‏ ‎ak HR BEELER Fd R‏ ل ‎AH 1 BRE SAREE AEA {HH‏ 0 ‎REL EREL EAL gh BRN AR 11 EEE PR HEH HHH Ho Nile HH Bek AR HA 1‏ 0 ل ا اام ل 001 8 ا ا ‎Fd B‏ 0 ل ‎Hid‏ ل ‎it i ARR 1 1H 111 801 A HH | 4H BH‏ 13 ‎RRA HAY Bt HH EAR bY HH | Td HEH I HA i | fi i te | 1‏ ا | ‎bo GER ERE BRE Het | Be RR HR EE J CREEL RELI HHH iA ht HHH ft‏ ا 0 ل ل ‎5b HE RALHRNA vc‏ ا ‎IEE FR‏ لا 0 ال ‎HA | 3B fs HRA 100 0 HEH fil it‏ 00 ‎He eb AE 1 RE Ho | BB RK BRR EH Je AH RA 1H EH HEH HHH HH ERR TR FAT RA Ti 1‏ 8 ا 1 ‎AA FAR DE. lind AH Ra dH EH Had HH Hi fl‏ ل ا ‎frat HE HEA HH [hit Bek AR LAR B‏ 1 وا ‎Had {HA‏ 0 0 ل ا ‎He eb AE 1 RE Ho | BB RK BRR BEE L] EERE HH HER fH SER Holts yA HEHE SA HR | HY 1‏ 8 ‎Hom A Heth ba | AY HER ERE ERLE 1‏ ا ‎Ho | BB RK BRR AH EHR HA HHA‏ ا ‎HE} HH | A EERE LG HR HH BH IRA ERERRER EEE‏ ل ا ‎HHH al |] HER ERE ERLE 0‏ ا ‎HH Bb AE | HR Ho | BB RK BRR AH EHH HE HHA a EE ph HHH Hid HH‏ 8 ‎A HAS ul | A HEA HH | ht Bet AR LAR R‏ ا ‎HEH HH HH‏ ا ‎AAR EA AR Hs‏ 011 ا ا 001 ا ا ا ‎ffl A 4H 1] HHH nH‏ دا اا و ا 41 ‎HH HE pb AE 1 Bd Ho 1 RH BAK BRA‏ ‎EERE He Hi Lif if RR AR IR‏ ا ‎ffl AHH 4H 01 NAH [ah‏ 11 0 ل ا ‎Ay Hi mn‏ ‎eR | AB‏ ا ل ا ا ‎FERED RR: HLH RH AE ١ HHA HR THR‏ 1 ل 1 ا 80 ا 1 ‎RELERE BR EAE‏ ‎HAHAH AR HR BH FAH AR fhm dL HH 8 AE HA ER HH HA LHR dH HEH [HH HH HHH il | BY HEHE 1 A HR | HY 1‏ ‎ih RH BR IRA HH RR A le ed HHH Hh i | HHH il | RY HI JAH ilk AR 1 HY 1‏ ل ‎HI RL‏ 1 ‎a‏ ا ا ا ‎RE LER [RL HE A A‏ م ل ل داج ‎BH | 1B HRA RIES itd HH BEN AA HH BH | fA HEH lH i HHih tl 1 IR ERR ERL EERE |:‏ ا يعدي ا 1 ‎(ERB BE‏ ب ‎HER HHH DRE‏ ا ‎AH EAS DHA HER‏ ل ‎REL ERE BIL Ho | BB AK BRR Hie‏ 1 ا ‎AE 1 BA Ho 1 BH BRE BRA ani NAA EAA AR {af AH AH 1 4H HH HHA fn HD A FERRELL fo‏ ل ‎AR it REEL RE EERE EES FLL HTT Ta‏ ل ‎FERED BE: HAY | Bt‏ ‎He eb AE 1 RE HM | BB RE RRR RRIERIERL ERR EBERLE Ae AEE RAH [A MH EHNA EERE HEFT T Het B ft | et Bete HR THR 1:‏ 8 ‎He eb AE 1 RE HM | BB RE RRR RRIEREERL ERB EREEE AH AA dH A HELE LL FREER FI He Hi Lt il RR HR 1:‏ 8 1 ل 0 01 ا 1 ‎He eb AE 1 RE Hd | 1 BH EE RRIEARERL ER TER LREGE Hol BH ER dR 0 bd‏ 8 1 ا م 0 ا ا 1 0 ل 0 ‎AN | AA § HA AH KH REAR HR AAA NAY Hit‏ 0 ا 0 ‎He eb AE‏ 8 : ل ‎HAIER AN | RRR IHR HER HH HALE i pire fds i to 0 | EE‏ ل ا ‎RY‏ ب لزان لا للا لا 0 ا 0 0 ‎BACH BY | RA | AH HR HA‏ ل ا ‎BEAN EET ERE TEE‏ ال ‎[Rl ed‏ 1000و ‎EERE BA 111١١ HLH A CEREAL FER i‏ ‎He eb AE 1 RE Hi | BY IRR HEE H HHO BEY AE AH RA 4 HE LH a A JAR HEA RHA HI DER AR. oR Alin idly Ph Hit [Lt pik RR 1A‏ 8 1 ا ‎BREE: 1111:1111 TEE‏ ل ا ‎BE AEH RH‏ اللا ل 1 ‎LED LL‏ ‎om AE AE A HH BE ly HHH HE TO 1 TM BRERA‏ انا ‎CHE He HER Th‏ ‎HE ERE AE EREEERREER BREE HE HH {HH Hh od Rh At HR CRE REERRRE J |‏ و ارا ‎SHEEHAN Ha [RH AR HANH HAIER AN | RAE HR IHR‏ . ‎FRET HE THA He HHH AEH RA NR HRA RH | BB ART RE HE LH La ih Ae i]:‏ را ‎GR At‏ ا 1 ا 00000 1 ا ا | ا ل 1 ‎EE TR HF | AR EH ile HY EHR HH ih‏ ب ‎Hid | Bit B Ae Rel A Ha HHH HEN | BH} HY ERIE E EE TEE NR HE it BE ERED RR ff HHH iad MH EERE ELEN] LL (EERE RRL [11]:‏ ل ل" ا 0 0 ا ‎AE THR HHA RB RH HEA JILL EEE TERE EEETRETRBRREER J HAH fe ih‏ ااانا 1 00 ‎Ay Hi mn fk | BY Hy pb 3 gE HOE HY ug MEA BEIT FE 1:1 NETSB LRH HER AH | 3H HH NHL 8 bE AH HR SHA Hid HH RREEEM Lr CEEREERRERIE FE BI‏ 3 ا ‎LE ME EE tt FE tt‏ ا ا ا ‎RRR OR MR AR‏ | اسن ‎a Lo‏ ا ا ل ب ا ‎FREE BR‏ انا نأل ‎i IRE EAT Ee RN TAR FE CERRECA ER RA EE REEL RRL ER‏ ‎BEE 1 HH HEB ERED RE HR HA Hid Hi gtk BA 2‏ ا 0 جا 1 ‎E +‏ شيا ااا الا ال ااا اا اا م ‎AA NE bk | BHA AR AHA 1 8 VEE x‏ 0 ل ا ‎TINE Boh‏ ‎N‏ 3 40 484 § 1 ا 0 ‎EL REE J HA HIE nt HABE | BERR HAH HR‏ ا ‎i‏ = + ا ا الال ‎dR dE Am‏ : 88110 ا ‎SAEEEERRE BREE REE EE |b HH HAH‏
    ‎NP.‏ = 0 ا ل م * = ‎Ea oe EERIE EEA HE‏ سين م — + . ‎Is A ELELLR: bt PR EE BR‏ ‎x - he a 1‏ ا ولايد 6131 ‎Ae I VT‏ : = * تار ‎SE J 0 2 1 1771‏ ‎mgGi ١ chim‏ ‎ia‏ ‎$a AE‏ hE Al } TEA ET oH ———] 1 : ¥ 4 ‏ا‎ ‏ل‎ ْ' ْ, ‏ب‎ : ey ‏ال‎ EE ‏الل د ا ا‎ TE ‏ل‎ ‎3 : ¥ ¥ EE EE RENEE ERE 1 11 ve ‏با‎ 8 FEET i. 5. : 5 0 ‏ااا 0 ب‎ i oO ¥ * ih RETA 1 1 ١ 1: yy ‏انا ا ال‎ EA : ١ ' : ١ 1 | ١ ‏ض‎ Tiel ١ - ‏دده !ا !ا‎ Fei ‏نا « تا ت 8 8 لا 8 ا ا 8 8 لا‎ FF § BE ‏؟ 5 5 7ق ة5ة‎ 5 5 5 TE - - - © - 28 8 ‏ذه م ل‎ 8 ‏5ج 5 ؟ 9 2 8&8 _ة "؟‎ oz ‏اله لا و‎ 2 8 A 5 8 8 SE © ee oO ‏مها‎ ‎8 hy 0H 0H Ak ‏ل اله‎ 5 OF ‏الي مي‎ 8 ّ ‏؟‎ 8# oq 4 8 3 8# : 7 4% ‏؟ة‎ ‎PAV ‏شكل‎ ‏صصص ص‎ 85 * ‏اا‎ ee 1 an ‏ا ال اام ان ان ال لان الا‎ ‏ا لاه‎ SI Lod 21 ‏ب 8 ل‎ 3 ‏ان‎ VE ‏ل‎ TTT ‏سق‎ ‏؟‎ 1 1 ; EE TE] Fo Li ad 5 ‏لحا أ اين سا ال ف‎ SE oo ‏ا نذا تم ان‎ co ‏د‎ oe ‏ااا‎ ‎0 LEY WE mm » a Hoe LT . » ‏ا ال 0 ل‎ 1 3 * prep anes SE. - Aas RR. ‏ل م يح‎ and ‏أذ‎ J. - 8 3 tl ‏له ا‎ BE ‏نا‎ BEB ‏ام نا د ده ا نم ذا‎ ‏م 0 0 1 م 1 م م م ا‎ 8 7 ٠٠١ | i 10h EEE
    5. TE EE BE © © BEBE © © BRE BOB A: 2 EE FE RE EE ‏5ج <ج - »5 5ج <ج‎ © ‏ص‎ | B : | 1 5 "; tT E 8 8 8 8 ‏؟‎ TES 35 5 OT 1 E - - = = - ££ ‏لا‎ & 5 0 § 0% Ped fillies § Boo 0 8 4 0 0 8 g ‏_ةق‎ & gz 3 1 1 8 888d 0" 0 1 8 ‏شك 13 با‎ ‏فر‎
    -YVé- : 8 : a 0 [ 1 = i : = he inn GJ sss Hi i ‏خط‎ ْ fad i ; : : 88 i ‏ا‎ LET 1 1 4 : ‏بس‎ | SS NUON SOS SO SUE, ‏اا‎ ‎i + TUR § 1 ‏ا اا ا ا مدا‎ i orbs ey EE
    FI. H i j i R + [ 1 ‏ال‎ ‎TR SY pe ome ‏ذا‎ 1 ‏د »د ند م ند 7ط ند اا‎ BE SE ‏نا‎ EE BE ‏8د‎ ‎T FI EER ER ‏ج © # © # ج #ج وةو‎ Ed og ‏ج‎ £& 8B BB 2 8B = ‏8م‎ og ‏م © © لله‎ 8 > F&F To > ‏ا له © ال ا = ابا ند ام‎ a Na Tomy ‏م ان 2ل‎ ROR OB ORD ‏السو‎ NRE ‏انا‎ ‎2 ‏ع‎ = UE [ii] 8 ‏فا امف بد شي الب‎ he = 2, 0 5 3 2 3 ZF QF 5 zo oo = 8 & OH 8 § 8 8 8 8§ 8 5» ‏جم يج‎ © 8 © ‏لم له > 2 © هه‎ © 8 2 9 9 = 2 5% 3 | ‏اا الل 1 الاك‎ 3 $8 8 8 8 3 ELIE ‏يت له‎ i ‏ا‎ ow YA SSG
    م١"‏ ‎i‏
    ‎YY.‏ ‏ا ض : ب بايا 3 ل ل د ال ‎EEE oT‏ م ال ‎NI EERE AED‏ ‎Ye 0 0 0 0 oa 0 0 NL‏ ‎MI ERE RREEEER‏ ‎z‏ . 3 - | الس 2 ير ل اما لام جا ام با لوا ا ل ‎one‏ ‎sss ss ss os ss ss os 98#‏ مشاه ساسم سم سا يب زطق ‎PY‏ ‏شكل ‎١4‏
    —Yvyi- } go EY 1 3 i * : 1 ‏عي‎ ED 1 ‏متسس امسا سس يسا مر إل‎ 8 ‏اا‎ | | ON wd 2 fet | | 0 0 a ‏ا‎ ‏ال‎ BB & 1 0 : 0 0 ‏ب ا‎ ‏ااا و‎ EERE vr Ar 8 : 3 : 1 Hae) pi A DER EB NOR ‏ا‎ NW
  2. 2 . | | in 0 > Sea ‏ا ا ال د‎ LEER NL " I ‏*ؤة‎ 5 L LL ZI EL GL EEE EEE EEE. SEE : 3 zt 2 ogi oz Tos ‏جم‎ 8 og ” * = ‏لو‎ ‎Zool hl : ‏ب‎ ‎ad ‎0 ‎iach ‏ات‎ td i 1 Le RX ahd USNS > ‏ل‎ 4 ‏لل تفيل‎ ‏امت‎ ee ‏د‎ ٍ ORR ‏لاع‎ Aaa Ta ‏ال ات‎ a AE ‏الت‎ ARATE ‏اديس الست المع لمحي الستتكتت‎ GAPDH ‏للا سات ساسا ساب سا سان سان اه‎ = ‏م‎ ‎7+ ‏إشكل‎ ‏افر‎
    -YVV- ELISHA H R FP Frog SR ‏عط‎ hEC — a : 8 1 ‏ا‎ # 4 eh gn a NEY 5 ‏يد‎ { Are ‏اختيار يده مقارمة موجبة‎ ١ 1 : i Sota te Eee ho ron c-Met ‏للخلية 0 أ 000 موتومري‎ Ala ‏المطول‎ ‎WN ‎4 \ 3 &F Sea ‏الى ا الما ا‎ ‏مجمسيع ا‎ ‏ل‎ ‎7 ٠ ‏كا‎ ‎ids ‎JI ‏ال‎ ‎ha ee RE ‏التي‎ | _
    ! . ‏ااا ا ا ا ا اا د ته نب‎ i oo | iy NE x ‏حضتي‎ a "١ ; 33 5 * ‏ل‎ 0 ¥ ay ¢ toy ‏د‎ ¥ 2, N 5 ay ‏ا ب‎ A Ph 8 : TY ‏شكل‎
    —YVYA- ‏ذلاب‎ ‎$e ‏بيست سسس مت تمس‎ ‏صن‎ | | fit] J = 3 emma ST] a 1 = ee Len 224G1 Es el Voss PRA as Ee H Sa ; RAR Ed ‏مي ل‎ H 1 ‏ا‎ 3 5 A IRE ‏ا ااا سسا‎ 8 ‏ال ا‎ : NR H ‏يم كن 7 صقن‎ wif i “HeT4BT Tos . = ‏ا ان م‎ ————— =a |g = 0 I ‏اا‎ Poo ‏ب‎ (51 Na; ‏اب مستت حب‎ 1 TF | PMA eed 3 5 : ‏ب‎ foi i TE A a a ‏اس‎ 4 i, [ev : : ‏وا ل ل ¥ ا ; ضبق‎ A hl ‏ون لفون‎ - EBG-T 50 parnatants hi * = Pot RI an ¥ ‏سير تع ل‎ Nn : ‏الات‎ yop Teno, TE sem 1031
    NEF. ee m 224611 7 ‏اي ساسح سس مه ا‎ ST + ‏نح أن ال‎ 3° : ‏و + وا سر‎ + § Tr 4 0
    1:6.
    NRE Te ‏ب‎ Neha ) EHC Fie ‏ل ا( ( يدك ال‎ i ‏ا‎ i iin ; ke EE ig RE TOURIST SOE ‏الت ل امت‎ 8" : gel 1 ‏ست‎ Vor i Coa Li : ‏حي‎ RE 2230 i Ec fa gy = ‏هب‎ DOIG 3 3 ‏م‎ i So a : we pe mee PME PROSE STN CONSTRAINS SURO J ‏د‎ ‏المأ‎ saa REET Se HERA nn vo . ‏اد حي لي‎ ٌ ‏ل ا‎ : 0 A Ln ‏وو اا‎ Is TE : 8 ‏و ست با جنا :اتات‎ RE [UU ‏لاجد‎ H Fa a OI Bh s ‏حرا م لا‎ : wi ; ‏شن‎ : : TE ‏ااا‎ ‎2 ly 3 bs RO + vied wnt ‏ال 4 خخ‎ : ‏الم ا الت ل ا ات ل 1 4 هدر‎ Lee 5 ‏ا يخ ا‎ 4 ve freer MK ¥ ‏ال ا ا‎ Y ‏جني‎ SS EE EN HI re w= {oa PSH FUE ‏سيد اا يت تتفي‎ Sh A TSO ise: He ® EE EE Toes iany ‏عن‎ 7 IEEE Ec FO HERE 3 I SE ‏ع : الا‎ SY 2 ‏ل تق متي ا‎ ‏مستا ا ا ا ا لمجا مم ماس ات ا ا‎ HCI Oo ‏سس م‎ = SS ET ee ‏يي 0 ا دفوم الال لخ حي : ال‎ ite ei H 5 ‏ااه ني بج‎ : IY pie EE UU.
    SO pi ‏ا‎ CU + ¥ & H Cw ‏ل ممصي‎ dea : . * TR REE RP SE SC GE 1# ‏كيم ار« 2 صقر‎ Cf i vif & ts
    ‎ot id 3 3 0‏ 3 = كد 3 + ‎Tg pd‏ مووي : سس ‎i‏ ‎sur‏ ‏اا ——— ‎mm‏ ‏ل ا ل نعم آنا ‎ue‏ ‏0 0 0 0 2 ا ل ل ‎١ EE‏ 0 0 ا 0 0 0 ج حم د حم م ا ‎J‏ ‏= ب" 0 نا 0 ٍ 0 اضفر دقيقة ا دثيقة #* ‎Adda‏ ا ‎y ةقيثد * SAB‏ دقيقة مج يط يط اع شكل ‎Ye‏
    } ‏لطر‎ C-Miet ELISA sai Cole ‏ا‎ ‎NI BE BE 8 BE !
    i a. ‏إ ا‎ ‏دقيقة «< دقيقة . * دفيقة‎ ¥ Ada a = * dae 3 3 4 ‏ات‎ 3 = 8 © qa 8 © ‏م‎ wu ‏ب‎ 3 2 8 8 ¢ ‏ا حت سه ب ا‎ A MET ‏مي‎ ‎— ‎0 FE Mo — | B ob un E 7> SE BEN ‏جع ذم م آم‎ SEM ‏تنقيا‎ 0 Pr SBF
    —YAY- j washed CNet ELISA ‏اختبار‎ ‎h 1k SE TRIO ‏اس ا ات ل يال‎ << ‏ا ا يا تاج‎ ٍ ‏تتا ريل‎ FE ‏ل مام عام ارا‎ ‏ا ا‎ 5 RANE Fai = i — ‏اسبح‎ ‎0 ‏ع ضفر‎ — 0 BE © ‏دشقة © دقيقة‎ © Nadav ‏دقيقة 5< دقيقة‎ dadeve ‏جوع‎ ِ HGF heady ud ‏حي انو‎ 3 2 it 5) 4 9 3 : ‏م بن‎ : 3 343 ‏ي يق‎ ‏م ل = الب‎ 1 3996 - ‏قد زر بي‎ ‏ممسوحيناسها اليد ا اا‎ ‏اكه ال م ل ا ال‎ A ‏ارده اي ال أب اح ست‎ ‏تسن‎ ‏ل ا‎ ‏ب لاني‎ - ge - ia eo — Talay ger ‏ذانقفة #نققة‎ Gale SFM | REST | | ‏ا معط‎ ‏شكل 7؟‎
    م ‎een D-Met BLISA Asi‏ اعت كك [ | شه ا ‎rrr‏ ‏' ا — ‎PIONS‏ ‏ض | 5 م ا لا ل اللا ا ا 1 دشقة ‎Riders | ads Y‏ 8 داثيقة 18 دش 0 دشقة ا ‎FES HEF helEasil‏ ا ‎os‏ ‎hi‏ ‎N >‏ ‎oJ‏ 2 3 8 3 > ‎i‏ > 3 د — 8 ‎RG Gg‏ ‎oN Now‏
    ا لإا 28 4
    : x z= I x Me ere Gham maa maa aa ‏جعي بها الوا‎ ‏ص د حب‎ WR SS Garg
  3. 3 A ‏مضو مستت‎ «> hal ‏سح ا للق‎ EN SE ; : AES ‏#نشقة | #نثقة‎ Ade ts ECR ‏ؤ»»:»‎ >- Mmst amen Her Tih ‏شكل‎ ‎11:6
    -04/؟- ‎cashes Chet ELISA 3b‏ ‎ssi‏ ا ‎FENCE SES TR‏ ¥ 3 نا ‎hs‏ ل : ب امن نا ض ادا ‎LL a‏ ل الما لاو ‎hod‏ ‎AEB eRe Y Madu 8‏ دقيقة #ادقيقة 7 دقيقة << م ‎PRE HEF‏ ‎Lid‏ ‎hs -‏ ,+ + 3 > 2 : ل ب ‎ES‏ الم ‎iN‏ ‏3 ج ‎PE‏ ‎of‏ 3 ال ا © 8 §
  4. 4 Sa : J 0 5 :
    8 3 2 4 ساس او تا اا ا ات لت ‎A‏
    د يخي — 0 ل اه | ااال ‎i‏ ‏ب 3 بي علد اساسا ‎Sault CR Cos Y GEA Lda‏ ‎HEF‏ 1 حيتت : امات شكل ؟؟ رار
    اج ‎A‏ \ _ ‎i usd GMBT ELISA ob‏ ‎Vere i my ٍ‏ ٍ أ ااا امع ٍ ب وا ا يا اا | ل اط
    ٍ . . تيبر قلا ون ‎BF‏ ل ا ان سس ‎ade v Sadar‏ #؛دقاقة ؟ دقيقة # ا دقيقة برو ‎AE‏ ‎nos sacs rods‏ ‎fd‏ ‎“ou‏ ‎yg‏ ‏3 34 . ‎qa fone fF‏ 3 3 5 ق + د © 8 ‎C83‏ ‏| ؟ 8 28 4 ين ا ل ‎Coes‏ ‎WE‏ مسب ا اي سي سيب سم ‎SAT‏ 4 امس الل مه بحب ب اعابت مج ا اا ا ل ا ا 1 ‎Lo 8 “0 rt‏ ا ‎Gel SE _ sew NW ® . :‏ #دقيقة | ‎Ader RBar mbar Wave‏ ‎SEM gt SEE HEE‏ شكل ‎re‏
    -ك0- 3 ‎ELISA Jas‏ 16ر4 ‎gonad‏ ‏اا ا ا ا ا لاا أ ا ا ااا ا اا ا لاا ااا لاي لج اج لاط ا 3 . _ ونوا ‎Boe od‏ ‎Avs anc 0 ;‏ ‎Ba ;‏ | ا ; | و ‎Sodan.‏ ‎LET I. :‏ ‎Ean II i‏ ل ا ا ‎a‏ ‎CREAR 0‏ ال * ‎N— NN a‏ ا ‎ARs‏ حل ‎NR i‏ | سا ‎NEN ae Nn‏ ‎>a N : an 2 ¥ He Sk : a‏ 4 0 1 ب ‎Cad sw‏ يق 0 ‎Fret‏ : ‎L | eg | < J}‏ ال ‎PES HEF‏ ‎i‏ ‏اللي ‎fi‏ ‎SB‏ 1 ‎We MR‏ 4 8 0 ‎x w 1‏ و + : > ج - 3 4 0 السب لسن الهلا 4 با 3 ني 0 . . - 3 هر = 1254490 ‎Te o£ o£ o£ I‏ ‎ee = 8: © HF SE‏ اا ا ا ا هع سه ‎NEE ER‏ ‎ET‏ ال تتا «# اه 8 ‎Ea‏ ‎«ce‏ ‏ل ‎Gamma‏
    ‏.02020 077 3 % نا ‎(EF ES‏ ‎i =‏ 81 م ‎TO ET‏ ‎al PL‏ © الل ااا ‎Na RE =x‏ 0 دابقيقة «اطنققة ‎Aksar Sf‏ *#دقيئة * ‎Aids‏ ‎SFR HES! he2 2468 HEE‏ شكل ‎ry‏
    —YAV- “ ps wm oR fe RY 8 ‏حا‎ 1% . 3+ 3 ‏ب 32 ل - ب‎ ‏أ‎ Lo a 381 4 fa ye a 4 ) vi 0 0 3 ‏ا : ل ب‎ 25 ١ ‏اس‎ r= ‏ل‎ =f a 2 0 00 NNW ‏جب ا‎ Rio] Tad ud 2 ٍِ ‏ال الله‎ ١ = ‏ل ركعت اح‎ o BRET IES ep HE ‏اا الا ا‎ ee hE a ‏7م‎ ‏د‎ ‏ا‎ ‏ادا‎ ‏ل ا الس سسا الد»‎ ‏الا اع‎ E ee rE BB NY B= a ‏#ردشقة «#ادشقة ورئيئة | «٠دثثة *دشقة | #دشقة‎ SFR ‏توت‎ hzd 24511 HEF ry ‏شكل‎ ‎vv
    —YAA— 4 8 0 ¥ es : A «* 1 Ves 3 ‏واه‎ ] ’ [82 = 88 8 i * : 4 ‏ب‎ ’ £ pe hi : ١ wd aw ihe X oR _ ‏م‎ 3 L | + You ) 5 STR 8 ٍ aN TAY Ri a = a . Sma SN : [ 4 CAN ‏جه .!؟ صر‎ Yo ‏وغ‎ ‎1 ‏يوم‎ ‎-8- ‏مقاونة‎ ‏مستا‎ RG 11 ‏سح‎ CRAG ‏حمق‎ ‎ry ‏شكل‎ ‎1:6.
    —YA4— Yo ‏ا‎ * 7 8
    2. of = 8 3 : f Epon - Eo = 7 po $n ‏يج‎ ‎١ : a rtd
    2#. 5 8 - : 3 Ye i ‏لا‎ ‎NIRS THT dud ow ; =
    J. 8 % 3 Fe Sy o oS RNG 2 Lo ;
    ©. ; oe LE 8 Yoo Pp ‏ا‎ 8 ‏د د‎ : 0 ‏لمعت عه‎ a. ! A * 0 ‏الي‎ ‏الى تيز‎ 25.8 vi ‏شكل‎ ‏ساب‎
    م ؟- ‎RRA‏ ‏_ ا لا ا ‎TR SER RSE‏ ل 8 ‎aE ae Hanae‏ ‎Laan‏ ادا ‎LER‏ ‏ااا هااا ا يا .ا ‎Fs REE Ra 2 Rem SE SA‏ ا ا ا ‎a‏ ‎RRS Sa a‏ الي ا ‎ae‏ ايم ‎TIA‏ اح ‎eat‏ ‎Be RG EERE NE A ON ERTS‏ ‎AR‏ متا لقا : ‎a 3 aR‏ ‎ERR ' wae Sa a‏ ‎RNR‏ ا 0 ‎SR EN Re a ETRE‏ ‎NN ee Lhe‏ ‎a AR Ie S‏ ‎i Ya a‏ ‎Ranh EN Sd aa XN‏ ‎Raat Li syns en A AR REA: NR‏ ‎Gu ae‏ لا ااا ‎RRR Ee.‏ ‎SINE‏ ا ا ‎RENEE aE‏ ‎onal ain‏ ‎X 0 3 Coes oases FET‏ ‎SE BR La ST‏ اا ل ‎EER X RNR oy‏ ‎PE NER TDR:‏ ‎La SR‏ ‎RETR NE sey RE SEN‏ ‎aE X‏ ا ‎Ry‏ ‏0 ل ‎aE EN ga‏ ا لاا ااا حا الا ‎SRR ERR NE RR ERR Po RX‏ ‎Na‏ ااال لإ ‎ot‏ ‎CREAR TRE TEE aaa‏ ‎Lage : Na‏ 8 اد ااا بط ‎SRE a‏ اله ا ب ‎A = he‏ ‎NER Le Sah‏ ‎OER Ah TREY‏ ‎ER Ts hea NE DO‏ ‎RN RR a RRR Rr Se‏ ‎TR Ga an NN‏ ‎nn AL RA‏ : ‎RR 8 oe SN aa SANT NN‏ ‎ORS a @ = CHR‏ £ اسلا ‎Cae‏ سس اع ‎RE‏ ‎RE NE 2‏ ‎AR RRR AS .‏ ‎Naa...‏ اا 0 ‎EN RRS ES HNN Sma‏ ‎LL Le NL‏ ‎I AR‏ ‎an LL Le‏ ‎NS Sl a La a‏ ‎No aR 8 SERRE ERNE‏ ‎na; 8‏ الحا 8 3 ‎ol RY REED EN‏ ‎hal A RRR SOR AN 0 AR‏ ‎Ha Ra a a TTA NER‏ ‎ee Ee‏ ‎Nhe Nie a‏ ‎LL LL‏ ‎Ln ahaa Nh aan‏ ‎aa Rae AN TTR‏ ‎NER : HES ND NNR‏ ‎hanna Tn NHR‏ ا ا 888 ‎a Ra AN‏ ‎RS NSE AER NN Nk a‏ ‎at NNR aR‏ +8 ‎XN IR NLR RN‏ الس لح : ب ‎I‏ ىق
    مدة سريان هذه البراءة عشرون سنة من تاريخ إيداع الطلب وذلك بشرط تسديد المقابل المالي السنوي للبراءة وعدم بطلانها أو سقوطها لمخالفتها لأي من أحكام نظام براءات الاختراع والتصميمات التخطيطية للدارات المتكاملة والأصناف النباتية والنماذج الصناعية أو لائحته التنفيذية صادرة عن مدينة الملك عبدالعزيز للعلوم والتقنية ؛ مكتب البراءات السعودي ص ب ‎TAT‏ الرياض 57؟؟١١‏ ¢ المملكة العربية السعودية بريد الكتروني: ‎patents @kacst.edu.sa‏
SA112331005A 2008-12-02 2009-12-05 جسم مضاد لـ cMET متضمن هندسة منطقة مفصلية SA112331005B1 (ar)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
PCT/IB2008/055663 WO2010064089A1 (en) 2008-12-02 2008-12-02 Novel anti-cmet antibody
US18450209P 2009-06-05 2009-06-05

Publications (1)

Publication Number Publication Date
SA112331005B1 true SA112331005B1 (ar) 2015-09-13

Family

ID=41693124

Family Applications (2)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA109300720A SA109300720B1 (ar) 2008-12-02 2009-12-05 جسم جديد مضاد لـ cMET
SA112331005A SA112331005B1 (ar) 2008-12-02 2009-12-05 جسم مضاد لـ cMET متضمن هندسة منطقة مفصلية

Family Applications Before (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
SA109300720A SA109300720B1 (ar) 2008-12-02 2009-12-05 جسم جديد مضاد لـ cMET

Country Status (39)

Country Link
US (4) US8741290B2 (ar)
EP (4) EP3431502B1 (ar)
JP (3) JP5863458B2 (ar)
KR (1) KR101838299B1 (ar)
CN (2) CN102227446B (ar)
AR (1) AR074439A1 (ar)
AU (3) AU2009328318C1 (ar)
BR (2) BR122019023930B1 (ar)
CA (1) CA2743433C (ar)
CL (2) CL2011001296A1 (ar)
CO (1) CO6382139A2 (ar)
CR (1) CR20110324A (ar)
CY (2) CY1119172T1 (ar)
DK (2) DK3135691T3 (ar)
EC (1) ECSP11011127A (ar)
ES (3) ES2697098T3 (ar)
GE (2) GEP20135930B (ar)
HK (2) HK1190414A1 (ar)
HR (2) HRP20171011T8 (ar)
HU (3) HUE051288T2 (ar)
IL (2) IL213273A0 (ar)
LT (2) LT2370468T (ar)
MA (1) MA32892B1 (ar)
MX (2) MX2011005677A (ar)
MY (2) MY185200A (ar)
NZ (1) NZ593853A (ar)
PE (1) PE20120343A1 (ar)
PH (1) PH12015501515A1 (ar)
PL (3) PL3135691T3 (ar)
PT (3) PT2370468T (ar)
RS (2) RS56204B1 (ar)
RU (2) RU2560257C2 (ar)
SA (2) SA109300720B1 (ar)
SG (2) SG171851A1 (ar)
SI (3) SI2370468T1 (ar)
TN (1) TN2011000216A1 (ar)
TW (2) TWI459964B (ar)
WO (1) WO2010069765A1 (ar)
ZA (1) ZA201105164B (ar)

Families Citing this family (43)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
EP2014681A1 (en) 2007-07-12 2009-01-14 Pierre Fabre Medicament Novel antibodies inhibiting c-met dimerization, and uses thereof
US8545839B2 (en) * 2008-12-02 2013-10-01 Pierre Fabre Medicament Anti-c-Met antibody
EP2287197A1 (en) * 2009-08-21 2011-02-23 Pierre Fabre Medicament Anti-cMET antibody and its use for the detection and the diagnosis of cancer
EP2545077B1 (en) 2010-03-10 2018-10-31 Genmab A/S Monoclonal antibodies against c-met
EP2611928B1 (en) 2010-09-03 2016-04-27 Academia Sinica Anti-c-met antibody and methods of use thereof
RU2608644C2 (ru) 2010-11-03 2017-01-23 арДЖЕН-ИКС Н.В. Антитела против белка рецептора с-мет
CN107903325B (zh) 2011-05-16 2021-10-29 埃泰美德(香港)有限公司 多特异性fab融合蛋白及其使用方法
KR101865223B1 (ko) 2011-10-05 2018-06-08 삼성전자주식회사 항 ｃ-Ｍｅｔ 인간화 항체 및 그의 용도
KR20130036993A (ko) * 2011-10-05 2013-04-15 삼성전자주식회사 ｃ-Ｍｅｔ의 ＳＥＭＡ 도메인 내의 에피토프에 특이적으로 결합하는 항체
US9926364B2 (en) 2011-11-03 2018-03-27 Argen-X N.V. Chimeric human-llama antigens and methods of use
KR101463098B1 (ko) * 2011-11-28 2014-11-27 한국생명공학연구원 ｃ-Ｍｅｔ에 대한 인간항체에 약물이 접합된 약물 복합체 및 이의 용도
KR101910601B1 (ko) 2011-12-22 2018-10-23 삼성전자주식회사 면역원성이 제거된 항 ｃ-Ｍｅｔ 인간화 항체 및 그의 용도
WO2013192594A2 (en) * 2012-06-21 2013-12-27 Sorrento Therapeutics Inc. Antigen binding proteins that bind c-met
EP2708556B1 (en) 2012-09-12 2018-11-07 Samsung Electronics Co., Ltd Pharmaceutical composition for the use in a combination therapy for prevention or treatment of c-met or angiogenesis factor induced diseases
ME03486B (me) 2012-10-12 2020-01-20 Medimmune Ltd Pirolobenzodiazepini i njihovi konjugati
CN105209077B (zh) 2013-03-13 2019-06-11 麦迪穆有限责任公司 吡咯并苯并二氮杂卓以及其结合物
KR102049990B1 (ko) * 2013-03-28 2019-12-03 삼성전자주식회사 c-Met 항체 및 VEGF 결합 단편이 연결된 융합 단백질
US9994644B2 (en) 2013-04-30 2018-06-12 Agency For Science, Technology And Research mAB 2 anti-Met antibody
US9567641B2 (en) * 2013-07-03 2017-02-14 Samsung Electronics Co., Ltd. Combination therapy for the treatment of cancer using an anti-C-met antibody
US9717715B2 (en) 2013-11-15 2017-08-01 Samsung Electronics Co., Ltd. Method of combination therapy using an anti-C-Met antibody
EP3083697B1 (en) * 2013-12-20 2019-04-17 Development Center for Biotechnology Alpha-enolase specific antibodies and methods of uses in cancer therapy
US10188746B2 (en) 2014-09-10 2019-01-29 Medimmune Limited Pyrrolobenzodiazepines and conjugates thereof
US20180057595A1 (en) * 2015-03-16 2018-03-01 Celldex Therapeutics, Inc. Anti-MET Antibodies and Methods of Use Thereof
KR102476846B1 (ko) * 2016-02-05 2022-12-12 주식회사 헬릭스미스 항―ｃ―ＭＥＴ 항체 및 이의 용도
US10870701B2 (en) 2016-03-15 2020-12-22 Generon (Shanghai) Corporation Ltd. Multispecific fab fusion proteins and use thereof
LT3458102T (lt) * 2016-05-17 2020-08-25 Abbvie Biotherapeutics Inc. Anti-cmet antikūnų vaisto konjugatai ir jų naudojimo būdai
US10457726B2 (en) 2016-06-30 2019-10-29 University Of Connecticut Antibody and antigen-binding fragment compositions targeting cell surface antigens in tumors and methods of use thereof
JP2019534882A (ja) 2016-10-11 2019-12-05 メドイミューン・リミテッドＭｅｄＩｍｍｕｎｅ Ｌｉｍｉｔｅｄ 免疫介在性療法薬を有する抗体−薬物コンジュゲート
RU2741228C2 (ru) * 2016-11-14 2021-01-22 Общество С Ограниченной Ответственностью "Панацела Лабс" Противоопухолевые эффекты вирусного вектора, кодирующего толл-подобный рецептор и агонист толл-подобного рецептора
TWI782930B (zh) 2016-11-16 2022-11-11 美商再生元醫藥公司 抗ｍｅｔ抗體，結合ｍｅｔ之雙特異性抗原結合分子及其使用方法
WO2018129029A1 (en) * 2017-01-04 2018-07-12 Immunogen, Inc. Met antibodies and immunoconjugates and uses thereof
CN109771642B (zh) 2017-11-13 2022-09-20 同济大学苏州研究院 c-MET激动型抗体及其用途
GB201803892D0 (en) * 2018-03-12 2018-04-25 Ultrahuman Six Ltd C-met binding agents
MX2020012418A (es) 2018-05-23 2021-04-28 Adc Therapeutics Sa Adyuvante molecular.
EP3833385A4 (en) * 2018-08-08 2021-12-22 Dragonfly Therapeutics, Inc. PROTEINS THAT BINDING NKG2D, CD16 AND A TUMOR-ASSOCIATED ANTIGEN
CN109541221B (zh) * 2018-10-24 2022-03-22 益善生物技术股份有限公司 一种c-Met特异性抗体、组合物及试剂盒
KR102353568B1 (ko) * 2018-11-14 2022-01-20 주식회사 헬릭스미스 안정성이 향상된 항 c-Met 항체 또는 그의 항원 결합 단편
CN114340684A (zh) 2019-09-16 2022-04-12 瑞泽恩制药公司 用于免疫pet成像的放射性标记的met结合蛋白
US20230372528A1 (en) 2020-10-16 2023-11-23 University Of Georgia Research Foundation, Inc. Glycoconjugates
GB202102396D0 (en) 2021-02-19 2021-04-07 Adc Therapeutics Sa Molecular adjuvant
WO2022214517A1 (en) * 2021-04-08 2022-10-13 Byondis B.V. Anti-c-met antibodies and antibody-drug conjugates
UY39743A (es) * 2021-04-29 2022-11-30 Abbvie Inc Conjugados de anticuerpo anti-c-met y fármaco
US20230285394A1 (en) 2022-03-11 2023-09-14 Abbvie Biotherapeutics Inc. Methods of treatment of non-small-cell lung carcinoma using telisotuzummab vedotin and osimertinib

Family Cites Families (23)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4424200A (en) 1979-05-14 1984-01-03 Nuc Med Inc. Method for radiolabeling proteins with technetium-99m
US4479930A (en) 1982-07-26 1984-10-30 Trustees Of The University Of Massachusetts Amines coupled wth dicyclic dianhydrides capable of being radiolabeled product
US4816567A (en) 1983-04-08 1989-03-28 Genentech, Inc. Recombinant immunoglobin preparations
US4831175A (en) 1986-09-05 1989-05-16 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Backbone polysubstituted chelates for forming a metal chelate-protein conjugate
IL162181A (en) 1988-12-28 2006-04-10 Pdl Biopharma Inc A method of producing humanized immunoglubulin, and polynucleotides encoding the same
US5530101A (en) 1988-12-28 1996-06-25 Protein Design Labs, Inc. Humanized immunoglobulins
GB8924581D0 (en) 1989-11-01 1989-12-20 Pa Consulting Services Bleaching of hair
GB9014932D0 (en) 1990-07-05 1990-08-22 Celltech Ltd Recombinant dna product and method
WO1994004679A1 (en) 1991-06-14 1994-03-03 Genentech, Inc. Method for making humanized antibodies
JPH05244982A (ja) 1991-12-06 1993-09-24 Sumitomo Chem Co Ltd 擬人化ｂ−ｂ１０
US5639641A (en) 1992-09-09 1997-06-17 Immunogen Inc. Resurfacing of rodent antibodies
US5686292A (en) * 1995-06-02 1997-11-11 Genentech, Inc. Hepatocyte growth factor receptor antagonist antibodies and uses thereof
WO2002055106A2 (en) * 2001-01-09 2002-07-18 Merck Patent Gmbh Combination therapy using receptor tyrosine kinase inhibitors and angiogenesis inhibitors
BRPI0407446A (pt) * 2003-02-13 2006-01-31 Pharmacia Corp Anticorpos para c-met para o tratamento de cânceres
HN2004000285A (es) 2003-08-04 2006-04-27 Pfizer Prod Inc ANTICUERPOS DIRIGIDOS A c-MET
AU2004298483A1 (en) * 2003-12-11 2005-06-30 Genentech, Inc. Methods and compositions for inhibiting c-met dimerization and activation
NZ552485A (en) * 2004-08-05 2009-11-27 Genentech Inc Humanized anti-cmet antagonists
US8008443B2 (en) * 2005-04-26 2011-08-30 Medimmune, Llc Modulation of antibody effector function by hinge domain engineering
NO345593B1 (no) * 2005-07-18 2021-05-03 Amgen Inc Humane anti-B7RP1 nøytraliserende antistoffer
WO2007016285A2 (en) * 2005-07-28 2007-02-08 Novartis Ag M-csf specific monoclonal antibody and uses thereof
WO2007126799A2 (en) 2006-03-30 2007-11-08 Novartis Ag Compositions and methods of use for antibodies of c-met
EP2014681A1 (en) * 2007-07-12 2009-01-14 Pierre Fabre Medicament Novel antibodies inhibiting c-met dimerization, and uses thereof
US8545839B2 (en) 2008-12-02 2013-10-01 Pierre Fabre Medicament Anti-c-Met antibody

Also Published As

Publication number Publication date
JP2016117721A (ja) 2016-06-30
HRP20171011T1 (hr) 2017-09-22
RS56204B1 (sr) 2017-11-30
JP6074018B2 (ja) 2017-02-01
MY185200A (en) 2021-04-30
CR20110324A (es) 2011-07-28
LT3135691T (lt) 2018-11-12
SI2370468T1 (sl) 2017-08-31
CO6382139A2 (es) 2012-02-15
DK2370468T3 (en) 2017-06-19
GEP20146207B (en) 2014-12-10
MA32892B1 (ar) 2011-12-01
US20110239316A1 (en) 2011-09-29
BRPI0923231A2 (pt) 2016-01-26
TWI523866B (zh) 2016-03-01
SI3135691T1 (sl) 2018-12-31
CN102227446B (zh) 2015-10-21
CL2011001296A1 (es) 2011-08-26
AU2017203929A1 (en) 2017-07-06
RU2560257C2 (ru) 2015-08-20
PL2370468T3 (pl) 2017-09-29
GEP20135930B (en) 2013-10-10
TWI459964B (zh) 2014-11-11
JP2012510280A (ja) 2012-05-10
ES2629855T3 (es) 2017-08-16
HRP20181868T1 (hr) 2019-01-11
CA2743433A1 (en) 2010-06-24
US20130109841A1 (en) 2013-05-02
CN102227446A (zh) 2011-10-26
SG171851A1 (en) 2011-07-28
WO2010069765A1 (en) 2010-06-24
MX341014B (es) 2016-08-03
PL3431502T3 (pl) 2020-12-28
KR20110097839A (ko) 2011-08-31
US8765128B2 (en) 2014-07-01
HK1190414A1 (zh) 2014-07-04
RS58018B1 (sr) 2019-02-28
IL231525A0 (en) 2014-04-30
TW201446805A (zh) 2014-12-16
IL231525B (en) 2019-07-31
HRP20171011T8 (hr) 2019-01-25
IL213273A0 (en) 2011-07-31
ECSP11011127A (es) 2011-07-29
SA109300720B1 (ar) 2013-05-25
EP3431502B1 (en) 2020-07-22
JP6309657B2 (ja) 2018-04-11
JP5863458B2 (ja) 2016-02-16
BR122019023930B1 (pt) 2021-05-04
PL3135691T3 (pl) 2019-02-28
AU2016200725C1 (en) 2017-10-19
HUE051288T2 (hu) 2021-03-01
RU2015127471A (ru) 2018-12-21
ES2827277T3 (es) 2021-05-20
AU2009328318A1 (en) 2011-07-28
AU2009328318B2 (en) 2015-11-05
JP2017099392A (ja) 2017-06-08
BRPI0923231B1 (pt) 2020-04-28
MX2011005677A (es) 2011-06-30
EP3431502A1 (en) 2019-01-23
AU2016200725A1 (en) 2016-02-25
CY1121025T1 (el) 2019-12-11
PE20120343A1 (es) 2012-04-16
US8741290B2 (en) 2014-06-03
TN2011000216A1 (en) 2012-12-17
CN103351438A (zh) 2013-10-16
HUE035047T2 (en) 2018-05-02
US8747850B2 (en) 2014-06-10
RU2011124751A (ru) 2013-01-10
US20130109840A1 (en) 2013-05-02
EP3135691B1 (en) 2018-08-15
CN103351438B (zh) 2016-04-20
AU2016200725B2 (en) 2017-05-25
ZA201105164B (en) 2012-03-28
KR101838299B1 (ko) 2018-03-14
AU2009328318C1 (en) 2017-11-02
AU2017203929B2 (en) 2019-03-28
PT2370468T (pt) 2017-07-13
HUE040553T2 (hu) 2019-03-28
DK3135691T3 (en) 2018-11-19
CA2743433C (en) 2019-06-11
EP3135691A1 (en) 2017-03-01
CY1119172T1 (el) 2018-02-14
MY192567A (en) 2022-08-29
CL2014000181A1 (es) 2014-07-25
LT2370468T (lt) 2017-07-10
HK1162536A1 (zh) 2012-08-31
ES2697098T3 (es) 2019-01-22
NZ593853A (en) 2013-03-28
AR074439A1 (es) 2011-01-19
US8729249B2 (en) 2014-05-20
PT3135691T (pt) 2018-11-27
PT3431502T (pt) 2020-10-29
EP2370468A1 (en) 2011-10-05
EP2370468B1 (en) 2017-04-05
TW201023892A (en) 2010-07-01
PH12015501515A1 (en) 2015-12-14
SG187518A1 (en) 2013-02-28
US20130109844A1 (en) 2013-05-02
BRPI0923231B8 (pt) 2021-05-25
EP3757132A1 (en) 2020-12-30
SI3431502T1 (sl) 2021-01-29

Similar Documents

Publication Publication Date Title
SA112331005B1 (ar) جسم مضاد لـ cMET متضمن هندسة منطقة مفصلية
JP6755866B2 (ja) Ｃｄ７３特異的結合分子及びその使用
JP5973998B2 (ja) 新規抗ｃＭＥＴ抗体
TW202003041A (zh) 特異性針對gucy2c之抗體及其用途
CN113754768A (zh) 结合cd39的抗体及其用途
JP2017530119A (ja) リンパ球における阻害経路の中和
RU2595394C2 (ru) Гуманизированные антитела к cxcr4 для лечения рака
US20230406940A1 (en) ANTI-cMET ANTIBODY
KR20220088847A (ko) 항-vsig4 항체 또는 항원-결합 단편 및 이들의 용도
WO2020095866A1 (en) Her2 s310f specific antigen-binding molecules
CA2735433C (en) Anti-extended type i glycosphingolipid antibody, derivatives thereof and use
RU2786434C2 (ru) Антитело к tigit и его использование