RU96119971A

RU96119971A - Способ получения биологического клея, изготовленного из концентрированных коагулирующих факторов посредством "высаливания"

Info

Publication number: RU96119971A
Application number: RU96119971/04A
Authority: RU
Inventors: Буи-Хак Трунг; Ловои Лизе; Мишел СТ Пик Доминик
Original assignee: Эмакюр Биотек Инк.
Filing date: 1994-02-28
Publication date: 1998-11-20

Claims

1. Способ приготовления белкового концентрата, коагулируемого тромбином и содержащего в основном фибриноген, эндогенный фактор ХIII и фибронектин, характеризуется тем, что он предусматривает следующие стадии: а) первое осаждение белков цельной плазмы добавлением соли в достаточном количестве для достижения высаливания указанных белков и рН 7,5-8,5, причем осаждение проводят при 0-4^oС в присутствии минимальной концентрации 50 мМ амино-6-гексановой кислоты, b) первая солюбилизация осажденных белков в присутствии L-гистидина до конечной концентрации 0,2-0,3 г на грамм белков, с) стадия дезактивации вирусов в растворе растворителя-детергента; d) второе осаждение той же самой солью, что и в стадии а) при той же температуре в присутствии той же самой концентрации амино-6-гексановой кислоты, е) промывание осадка слегка подкисленной чистой водой, f) вторая солюбилизация осадка в присутствии L-гистидина, как в стадии b), g) добавление 50% сахарозы по отношению к количеству белков, h) стерильное фильтрование, i) распределение аликвот стерильно профильтрованного концентрата в стерильные флаконы, и j ) лиофилизация.

2. Способ по п. 1, отличающийся тем, что указанная соль представляет собой ацетат натрия или калия.

3. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первую и вторую стадии осаждения проводят в течение периода времени по меньшей мере 30 мин.

4. Способ по п. 1, отличающийся тем, что стадию е) проводят при 2^oС с водой, охлажденной до 2^oС.

5. Способ по п. 1, отличающийся тем, что стадии а), d) и е) проводят при комнатной температуре в течение по меньшей мере 30 мин.

6. Способ по п. 1, отличающийся тем, что после стадии е) следуют растворение осадка в слегка основной чистой воде и диализ или диафильтрование.

7. Способ по п. 1, отличающийся тем, что слегка подкисленная чистая вода является раствором Трис-НСl (0,1% с рН 4,5-5,0).

8. Способ по п. 6, отличающийся тем, что слегка основная чистая вода, используемая для растворения осадка перед диализом или диафильтрованием, является раствором 0,5% Трис рН 7,3.

9. Способ по п. 1, отличающийся тем, что первую солюбилизацию проводят в 1% Трис и 1,6% цитрате натрия рН 7,30 для доведения концентрации белка до 20-22 мг/мл перед добавлением L-гистидина.

10. Способ по п. 1, отличающийся тем, что вторую солюбилизацию проводят в 0,5% Трис рН 7,30 для доведения концентрации белка до 30-35 мг/мл перед добавлением L-гистидина.

11. Способ по п. 1, отличающийся тем, что дезактивацию вирусов выполняют при 28^oС в течение 6 ч при непрерывном перемешивании в растворе, состоящем из 10 мг/мл растворенных белков, 1% Твин 80^® и 0,3% Три-н-бутилфосфата.

12. Способ по п. 1, отличающийся тем, что лиофилизированный концентрат растворяется в воде менее, чем за 5 мин, при ручном перемешивании.

13. Способ по п. 12, отличающийся тем, что растворенный концентрат стабилен при температуре 4-20^oС в течение по меньшей мере 24 ч.

14. Способ по п. 1, отличающийся тем, что плазма имеет человеческое или животное происхождение.