RU96102761A - Рекомбинантный химотрипсиновый энзим роговичного слоя /scce/ - Google Patents

Claims (27)

1. Нуклеотидная последовательность, кодирующая полипептид, содержащий аминокислотную последовательность, представленную в последовательности ID N 2 или ее аналог или вариант, обладающие SCCE активностью.

2. Нуклеотидная последовательность по п. 1, отличающаяся тем, что содержит в основном последовательность, представленную в последовательности ID N 1.

3. Нуклеотидная последовательность по п. 1 или 2, отличающаяся тем, что кодирует полипептид, содержащий субпоследовательность аминокислотой последовательности ID N 2.

4. Нуклеотидная последовательность по п. 3, отличающаяся тем, что кодирует полипептид, содержащий аминокислотную последовательность -7-224 или 1-224 последовательности ID N 2.

5. Нуклеотидная последовательность по п. 1, отличающаяся тем, что гибридизуется с нуклеотидной последовательностью ID N 1 или ее частью в жестких условиях гибридизации.

6. Нуклеотидная последовательность, имеющая нуклеотидную последовательность ID N 1 или ее аналог или ее субпоследовательность, которые:
1/ гомологичны с последовательностью, представленной в последовательности ID N 1 по крайней мере на 90%, и/или
2/ кодируют полипептид, аминокислотная последовательность которого по крайней мере на 80% гомологична аминокислотной последовательности, представленной в последовательности ID N 2, и/или
3/ кодируют полипептид, который связан с моноклональным антителом, продуцируемым гибридомной клеточной линией TE4b, которая была депонирована в соответствии с требованиями Будапештского соглашения 18 июня 1993 г. в ECACC под регистрационным номером ECACC 93061817, или моноклональным антителом, продуцируемым гибридомной клеточной линией TE9b, которая была депонирована в ECACC 18 июня 1993 г. под регистрационным номером ECACC 93061816, и/или
4/ кодируют полипептид, который связывается поликлональной антисывороткой, выработанной против нативного SCCE, который был выделен из экстракта диссоциированных клеток роговичного слоя пяточной поверхности (stratum corneum).

7. Экспрессирующая система, содержащая нуклеотидную последовательность по любому из пп. 1 - 6, например, реплицируемый вектор экспрессии, который содержит и способен быть медиатором экспрессии нуклеотидной последовательности по любому из пп. 1 - 6.

8. Реплицируемый вектор экспрессии, обозначенный PS 507, депонированный 11 мая 1993 г. в коллекции Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM) под регистрационным номером DSM 8282 в соответствии с требованиями Будапештского соглашения, и векторы экспрессии, экспрессирующие нуклеотидные последовательности, которые отличаются от нуклеотидной последовательности указанного депонированного вектора экспрессии, но которые кодируют тот же полипептид, или его аналог, или вариант его, которые обладают SCCE активностью.

9. Плазмида, обозначенная pS 500, которая была депонирована 11 мая 1993 г. в коллекции Deutsche Sammlung von Mikroorganismen und Zellkulturen GmbH (DSM) под регистрационным номером DSM 8281 в соответствии с требованиями Будапештского соглашения, и плазмиды, содержащие нуклеотидную последовательность, которая отличается от нуклеотидной последовательности, представленной в последовательности ID N 1, но которая кодирует полипептид, представленный в последовательности ID N 2, или его аналог, или его вариант, которые обладают SCCE активностью, или которые гибридизуют с нуклеотидной последовательностью, представленной в последовательности ID N 1, или ее частью в жестких условиях гибридизации.

10. Нечеловеческий организм, такой, как микроорганизм, например, бактерия, например, Escherichia coli, дрожжи, простейшие или клетка, полученная из многоклеточного организма, такого, как грибы, клетки насекомого, клетка растения, клетка млекопитающего или клеточная линия, которая содержит систему экспрессии по п. 7.

11. Практически чистый полипептид, содержащий аминокислотную последовательность ID N 2, или ее аналог, или вариант, обладающие SCCE активностью, такой, как рекомбинантный полипептид, содержащий субпоследовательность аминокислотной последовательности ID N 2.

12. Практически чистый полипептид, имеющий аминокислотную последовательность -7-224 в последовательности ID N 2 или 1-224 в последовательности ID N 2.

13. Практически чистый полипептид, имеющий аминокислотную последовательность, в которой нить последовательности из 20 аминокислот гомологична по крайней мере на 80% нити аминокислот той же длины, выбранной из аминокислотной последовательности, представленной в последовательности ID N 2.

14. Способ получения полипептида по любому из пп. 11 - 13, отличающийся тем, что включает следующие стадии:
/a/ встраивания нуклеотидной последовательности по любому из пп. 1 - 6 в вектор экспрессии;
/b/ трансформирования подходящего организма хозяина вектором, полученным на стадии /a/;
/c/ культивирования организма хозяина, полученного на стадии /b/ в условиях, подходящих для экспрессии полипептида;
/d/ сбора полипептида и
/e/ необязательного осуществления посттрансляционной модификации полипептида.

15. Способ по п. 14, отличающийся тем, что полученный полипептид выделяют способом, который включает одну или более из стадий подобных афинной хроматографии, с использованием иммобилизованного нативного или рекомбинантного SCCE полипептида или антител, реагирующих с указанным полипептидом, и/или других хроматографических и электрофоретических процедур.

16. Фармацевтическая композиция, содержащая полипептид по любому из пп. 11-13.

17. Косметическая композиция или композиция для ухода за кожей, отличающаяся тем, что содержит полипептид по любому из пп. 11 - 13.

18. Композиция по п. 16 или 17, отличающаяся тем, что имеет форму, пригодную для поверхностного нанесения, например, форму крема, мази, лосьона, линимента, геля, раствора, суспензии, пасты, пластыря, спрея, шампуня, мыла, кондиционера для волос или порошка.

19. Применение полипептида по любому из пп. 11 - 13 для лечения или профилактики акне, ксеродермы или других гиперкератоидных состояний, таких, как мозоли и keratosis pilaris.

20. Применение полипептида по любому из пп. 11 - 13 для получения фармацевтической композиции для лечения или профилактики различных ихтиозов, акне, псориаза и других воспалительных кожных заболеваний, таких, как экземы.

21. Способ лечения и/или предотвращения различных ихтиозов, акне, псориаза или других воспалительных кожных заболеваний, таких, как экземы, причем способ включает введение пациенту, нуждающемуся в этом, терапевтически или профилактически эффективного количества полипептида по любому из пп. 11 - 13.

22. Применение соединения, обладающего ингибирующим действием по отношению к энзиматической активности полипептида по п. 11, для получения фармацевтической композиции для лечения или профилактики аутоиммунных пузырчатых заболеваний или акантолитических заболеваний, таких, как семейная пузырчатка и болезнь Darier's.

23. Способ лечения и/или предотвращения аутоиммунных пузырчатых заболеваний или акантолитических заболеваний, таких, как семейная пузырчатка и болезнь Darier's, отличающийся тем, что включает введение пациенту, нуждающемуся в нем, терапевтически или профилактически эффективного количества соединения, которое обладает ингибирующим действием на энзиматическую активность нативного SCCE.

24. Способ идентификации соединения, которое оказывает воздействие на энзиматическую активность нативного SCCE, отличающийся тем, что включает использование полипептида по любому из пп. 11 - 13.

25. Способ по п. 24 идентификации соединения, обладающего ингибирующим действием на энзиматическую активность нативного SCCE.

26. Способ по п. 25 для идентификации соединения, которое способно повысить энзиматическую активность нативного или рекомбинантного SCCE.

27. Способ идентификации соединения, которое способно превращать проэнзимную форму SCCE в активный SCCE, отличающийся тем, что включает использование полипептида по любому из пп. 11 - 13.