RU95122726A

RU95122726A - Способ получения иммуногенов или диагностических реагентов, а также иммуногены и диагностические реагенты, получаемые с его помощью

Info

Publication number: RU95122726A
Application number: RU95122726/13A
Authority: RU
Inventors: Феличи Франко; Лудзаго Алессандра; Никосиа Альфредо; Моначи Паоло; Кортесе Риккардо
Original assignee: Иституто Ди Ричерке Ди Биолоджиа Молеколаре П.Анджелетти С.П.А.
Priority date: 1993-05-11
Filing date: 1994-05-05
Publication date: 1998-02-27

Claims

1. Способ получения иммуногенов или диагностических реагентов, которые имитируют действие антигена или патогенного организма, специфичных к тому или иному заболеванию, с помощью процедуры, которая может быть применена без наличия какой-либо информации о природе и/или идентификации антигена(ов) патогенного организма, специфичного для заболевания, а также без какой-либо информации о природе, и/или структуре, и/или свойствах специфических антител, который включает следующие операции:
идентификацию по крайней мере двух сывороток, которые содержат неохарактеризованные антитела, реагирующие с антигеном или патогенным организмом, специфичными для заболевания, даже если такой антиген и/или патогенный организм также не охарактеризованы или неизвестны;
создание библиотеки фагов, которые несут на поверхности капсида олигопептиды, экспрессируемые на основе олигонуклеотидных вставок со случайной последовательностью, которые вводят в ген, кодирующий белок фагового капсида, с помощью генноинженерной техники;
отбор фагов, которые несут на поверхностях своих капсидов антигенные олигопептиды, с помощью первой патологической сыворотки, с последующим скринингом с применением дополнительных патологических сывороток с целью идентификации фага, который несет олигопептиды, взаимодействующие со всеми или с большей частью исследованных сывороток, при параллельном скрининге с помощью набора сывороток, отобранных от другой группы индивидуумов, рассматриваемых в качестве контроля с целью идентификации олигопептидов, которые не реагируют со всеми или с большей частью сывороток, отобранных от контрольных индивидуумов;
факультативное использование отобранных фагов, и/или их фрагментов, и/или их производных для приготовления диагностических наборов к специфическому патогенному агенту или к заболеваниям в целом, включая иммунологические расстройства, типичные для так называемых аутоиммунных заболеваний, с известными или неизвестными этиологией и/или патогенезом;
факультативное использование отобранных фагов, и/или их фрагментов, и/или их производных для создания антагониста компонента системы антиген-антитело с целью применения его для лечения заболевания, индуцированного упомянутым антигеном;
факультативное использование отобранных фагов, и/или их фрагментов и/или их производных с целью индуцирования толерантности к явлению гиперчувствительности и/или к аллергии на соединения и/или натуральные или синтетические препараты;
факультативная иммунизация организма с помощью отобранных фагов и/или их фрагментов, и/или их производных; и
факультативное подтверждение наличия к сыворотке крови иммунизированного организма антител, которые распознают вышеупомянутые антиген или организм, специфичные для данного заболевания.

2. Способ получения иммуногенов или диагностических реагентов, имитирующих действие антигена или патогенного организма, специфичных для того или иного заболевания, по п. 1, отличающийся тем, что для создания упомянутой фаговой библиотеки используют нитевидные фаги, отобранные из группы, включающей М13, F1, Fd и их производные.

3. Способ получения иммуногенов и диагностических реагентов, имитирующих действие антигена или патогенного организма, специфичных для того или иного заболевания, по п. 1 или 2, отличающийся тем, что упомянутый ген, который кодирует фаговый капсид, включая олигонуклеотидные вставки со случайной последовательностью, представляет собой ген, кодирующий белок VIII капсида фага.

4. Способ получения иммуногенов и диагностических реагентов, имитирующих действие антигена или патогенного организма, специфичных для того или иного заболевания, по пп. 1 и 2, отличающийся тем, что упомянутый ген, который кодирует фаговый капсид, включая олигонуклеотидные вставки со случайной последовательностью, представляет собой ген, кодирующий белок III капсида фага.

5. Способ получения иммуногенов и диагностических реагентов, имитирующих действие антигена или патогенного организма, специфичных для того или иного заболевания, по любому из пп. 1 - 4, отличающийся тем, что упомянутый патогенный агент отбирается из группы, включающей поверхностный антиген вируса гепатита В человека (НВSАg), вируса гепатита С человека и антигены, патогенетически связанные с аутоиммунными заболеваниями, в частности, диабетом.

6. Способ получения иммуногенов и диагностических реагентов, имитирующих действие антигена или патогенного организма, специфичных для того или иного заболевания, по п. 5, отличающийся тем, что вышеупомянутое антитело, которое обладает протективной или нейтрализующей активностью по отношению к патогенному реагенту, содержится в сыворотке индивидуумов, иммунизированных с использованием поверхностного антигена вируса гепатита В человека (НВSАg) или вируса гепатита С человека.

7. Способ получения иммуногенов и диагностических реагентов, имитирующих действие антигена или патогенного организма, специфичных для того или иного заболевания, по любому из пп. 1 - 6, отличающийся тем, что упомянутые антигенные олигопептиды, распознаваемые используемым антителом, получают в результате экспрессии олигонуклеотидных вставок со случайной последовательностью с использованием в качестве вектора плазмиды рС89.

8. Способ получения иммуногенов и диагностических реагентов, имитирующих действие антигена или патогенного организма, специфичных для того или иного заболевания, по любому из пп. 1 - 7, отличающийся тем, что для создания упомянутой библиотеки нитевидных фагов из содержащихся в их капсиде белка VIII или белка III, от сайта, идентифицируемого рестрикционным ферментом ЕсоR1 (GААТТС) до сайта, идентифицируемого рестрикционным ферментом ВаmН1 (GGАТСС), выделяется аминокислотная последовательность, отбираемая из группы, включающей последовательности SЕQ 1D NO : 1, SЕQ 1D NО : 2, SЕQ 1D NO : 3, SЕQ 1D NO : 7 и от SЕQ 1D от NO : 9 до 47.

9. Олигопептиды, которые получают по способу пп. 1 - 8, которые реагируют с патологическими сыворотками из индивидуумов, пораженных тем же заболеванием, что и пациенты, чьи сыворотки были использованы для селекции и скрининга фага, несущего указанные олигопептиды, в соответствии с п. 1, и которые не реагируют с сыворотками из индивидуумов, не пораженным тем же самым заболеванием.

10. Олигопептиды в соответствии с п. 9, которые обладают способностью вызывать в живом организме иммунный ответ против натурального антигена.

11. Олигопептиды по п.9, которые обладают способностью вызывать образование в живом организме антител против НСV (вируса гепатита С).

12. Олигопептиды по п.9, которые обладают способностью вызывать образование в живом организме антител против НВV (вируса гепатита В).

13. Использование олигопептидов по пп. 9-12 в качестве иммуногенов для индукции антительного ответа против специфических патологических антигенов, какими являются, например, инфекционные патогены, а в случае, если упомянутые индуцированные антитела обладают также протективной или нейтрализующей активностью, - для приготовления вакцины против упомянутых специфических патогенных агентов.