RU2754686C1 - Новые штаммы микроводорослей рода Thraustochytrium и способ получения полиненасыщенных жирных кислот с их использованием - Google Patents
Новые штаммы микроводорослей рода Thraustochytrium и способ получения полиненасыщенных жирных кислот с их использованием Download PDFInfo
- Publication number
- RU2754686C1 RU2754686C1 RU2020128068A RU2020128068A RU2754686C1 RU 2754686 C1 RU2754686 C1 RU 2754686C1 RU 2020128068 A RU2020128068 A RU 2020128068A RU 2020128068 A RU2020128068 A RU 2020128068A RU 2754686 C1 RU2754686 C1 RU 2754686C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- microalgae
- strains
- cjm01
- docosahexaenoic acid
- dha
- Prior art date
Links
- 241000233675 Thraustochytrium Species 0.000 title claims abstract description 62
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 38
- 235000020777 polyunsaturated fatty acids Nutrition 0.000 title description 16
- MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N all-cis-docosa-4,7,10,13,16,19-hexaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCC(O)=O MBMBGCFOFBJSGT-KUBAVDMBSA-N 0.000 claims abstract description 88
- 235000020669 docosahexaenoic acid Nutrition 0.000 claims abstract description 69
- 229940090949 docosahexaenoic acid Drugs 0.000 claims abstract description 44
- 239000002028 Biomass Substances 0.000 claims abstract description 43
- DVSZKTAMJJTWFG-SKCDLICFSA-N (2e,4e,6e,8e,10e,12e)-docosa-2,4,6,8,10,12-hexaenoic acid Chemical compound CCCCCCCCC\C=C\C=C\C=C\C=C\C=C\C=C\C(O)=O DVSZKTAMJJTWFG-SKCDLICFSA-N 0.000 claims abstract description 25
- GZJLLYHBALOKEX-UHFFFAOYSA-N 6-Ketone, O18-Me-Ussuriedine Natural products CC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O GZJLLYHBALOKEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- KAUVQQXNCKESLC-UHFFFAOYSA-N docosahexaenoic acid (DHA) Natural products COC(=O)C(C)NOCC1=CC=CC=C1 KAUVQQXNCKESLC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 25
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims abstract description 19
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 claims abstract description 15
- 238000000605 extraction Methods 0.000 claims abstract description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 37
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 claims description 36
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 27
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 claims description 18
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 claims description 14
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 claims description 14
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 claims description 11
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 claims description 11
- 239000008103 glucose Substances 0.000 claims description 11
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 claims description 9
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 claims description 9
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 claims description 9
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 claims description 8
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 claims description 8
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 claims description 8
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 claims description 8
- VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N sodium nitrate Chemical compound [Na+].[O-][N+]([O-])=O VWDWKYIASSYTQR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 8
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 claims description 6
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 6
- 235000013923 monosodium glutamate Nutrition 0.000 claims description 6
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 claims description 5
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 4
- 239000004317 sodium nitrate Substances 0.000 claims description 4
- 235000010344 sodium nitrate Nutrition 0.000 claims description 4
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N D-mannopyranose Chemical compound OC[C@H]1OC(O)[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-QTVWNMPRSA-N 0.000 claims description 3
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 claims description 3
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 claims description 3
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 claims description 3
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 claims description 3
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N alpha-D-galactose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-PHYPRBDBSA-N 0.000 claims description 3
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 claims description 3
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 claims description 3
- PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N arabinose Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-WDCZJNDASA-N 0.000 claims description 3
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 claims description 3
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 claims description 3
- 229930182830 galactose Natural products 0.000 claims description 3
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 claims description 3
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 2
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 claims description 2
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 claims description 2
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 claims description 2
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 claims description 2
- 235000015278 beef Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 claims description 2
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 claims description 2
- 239000000284 extract Substances 0.000 claims description 2
- 239000012137 tryptone Substances 0.000 claims description 2
- 239000000203 mixture Substances 0.000 abstract description 20
- 239000012075 bio-oil Substances 0.000 abstract description 15
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- -1 docosahexaenoic acid Chemical class 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 2
- 235000021122 unsaturated fatty acids Nutrition 0.000 abstract description 2
- 150000004670 unsaturated fatty acids Chemical class 0.000 abstract description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 49
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 19
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 18
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 18
- 239000003921 oil Substances 0.000 description 14
- 235000019198 oils Nutrition 0.000 description 14
- 235000013305 food Nutrition 0.000 description 10
- 230000002538 fungal effect Effects 0.000 description 10
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 10
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 8
- 210000002686 mushroom body Anatomy 0.000 description 8
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 7
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 7
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 241001467333 Thraustochytriaceae Species 0.000 description 6
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 6
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 6
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 6
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 6
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 6
- 108020004463 18S ribosomal RNA Proteins 0.000 description 5
- 241000195493 Cryptophyta Species 0.000 description 5
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 5
- VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N n-Hexane Chemical compound CCCCCC VLKZOEOYAKHREP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 5
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 4
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 4
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 4
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 4
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 4
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 4
- 235000019688 fish Nutrition 0.000 description 4
- 229960003646 lysine Drugs 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 229960004452 methionine Drugs 0.000 description 4
- LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M monosodium L-glutamate Chemical compound [Na+].[O-]C(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O LPUQAYUQRXPFSQ-DFWYDOINSA-M 0.000 description 4
- 239000004223 monosodium glutamate Substances 0.000 description 4
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 4
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 4
- 235000015097 nutrients Nutrition 0.000 description 4
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 4
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N (2S)-2-Amino-3-hydroxypropansäure Chemical compound OC[C@H](N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 3
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 3
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 3
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P L-argininium(2+) Chemical compound NC(=[NH2+])NCCC[C@H]([NH3+])C(O)=O ODKSFYDXXFIFQN-BYPYZUCNSA-P 0.000 description 3
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N L-isoleucine Chemical compound CC[C@H](C)[C@H](N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-WHFBIAKZSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 3
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Natural products CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 3
- 229960003767 alanine Drugs 0.000 description 3
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 3
- 239000003674 animal food additive Substances 0.000 description 3
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960003121 arginine Drugs 0.000 description 3
- 229940009098 aspartate Drugs 0.000 description 3
- 238000012136 culture method Methods 0.000 description 3
- 238000011161 development Methods 0.000 description 3
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 3
- 230000007613 environmental effect Effects 0.000 description 3
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 3
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 3
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 3
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 3
- 229930195712 glutamate Natural products 0.000 description 3
- 229940049906 glutamate Drugs 0.000 description 3
- 235000011187 glycerol Nutrition 0.000 description 3
- 229960002449 glycine Drugs 0.000 description 3
- 229910052500 inorganic mineral Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 3
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 3
- 229960003136 leucine Drugs 0.000 description 3
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 3
- 235000010755 mineral Nutrition 0.000 description 3
- 239000011707 mineral Substances 0.000 description 3
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 3
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960005190 phenylalanine Drugs 0.000 description 3
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 3
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 3
- 238000000926 separation method Methods 0.000 description 3
- 229960001153 serine Drugs 0.000 description 3
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 3
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 3
- 229960004441 tyrosine Drugs 0.000 description 3
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229960004295 valine Drugs 0.000 description 3
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 3
- GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N (±)-α-Tocopherol Chemical compound OC1=C(C)C(C)=C2OC(CCCC(C)CCCC(C)CCCC(C)C)(C)CCC2=C1C GVJHHUAWPYXKBD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 3-(2,4,6,7-tetrahydrotriazolo[4,5-c]pyridin-5-yl)-1-[4-[2-[[3-(trifluoromethoxy)phenyl]methylamino]pyrimidin-5-yl]piperazin-1-yl]propan-1-one Chemical compound N1N=NC=2CN(CCC=21)CCC(=O)N1CCN(CC1)C=1C=NC(=NC=1)NCC1=CC(=CC=C1)OC(F)(F)F YLZOPXRUQYQQID-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001306132 Aurantiochytrium Species 0.000 description 2
- CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N Carbon dioxide Chemical compound O=C=O CURLTUGMZLYLDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical compound [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000008331 Pinus X rigitaeda Nutrition 0.000 description 2
- 235000011613 Pinus brutia Nutrition 0.000 description 2
- 241000018646 Pinus brutia Species 0.000 description 2
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 2
- JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N all-cis-5,8,11,14,17-icosapentaenoic acid Chemical compound CC\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/C\C=C/CCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-JLNKQSITSA-N 0.000 description 2
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- WTEOIRVLGSZEPR-UHFFFAOYSA-N boron trifluoride Chemical compound FB(F)F WTEOIRVLGSZEPR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 235000010980 cellulose Nutrition 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 2
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 2
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 2
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 2
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 2
- 235000015872 dietary supplement Nutrition 0.000 description 2
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 2
- 235000020673 eicosapentaenoic acid Nutrition 0.000 description 2
- 229960005135 eicosapentaenoic acid Drugs 0.000 description 2
- JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N eicosapentaenoic acid Natural products CCC=CCC=CCC=CCC=CCC=CCCCC(O)=O JAZBEHYOTPTENJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 2
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 description 2
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N lactic acid Chemical compound CC(O)C(O)=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 235000012054 meals Nutrition 0.000 description 2
- OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N methanol Natural products OC OKKJLVBELUTLKV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 244000005700 microbiome Species 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 230000008569 process Effects 0.000 description 2
- 230000001681 protective effect Effects 0.000 description 2
- 238000010298 pulverizing process Methods 0.000 description 2
- 239000013535 sea water Substances 0.000 description 2
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 2
- 241000894007 species Species 0.000 description 2
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 2
- 150000003722 vitamin derivatives Chemical class 0.000 description 2
- WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 2,6-dimethoxybenzenecarbothioamide Chemical compound COC1=CC=CC(OC)=C1C(N)=S WEEMDRWIKYCTQM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010000700 Acetolactate synthase Proteins 0.000 description 1
- 235000001674 Agaricus brunnescens Nutrition 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- 241000972773 Aulopiformes Species 0.000 description 1
- 229910015900 BF3 Inorganic materials 0.000 description 1
- 241000555825 Clupeidae Species 0.000 description 1
- RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N Copper Chemical compound [Cu] RYGMFSIKBFXOCR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004544 DNA amplification Effects 0.000 description 1
- 206010012289 Dementia Diseases 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N Hydrogen Chemical compound [H][H] UFHFLCQGNIYNRP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N Linoleic acid Chemical compound CCCCC\C=C/C\C=C/CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-HZJYTTRNSA-N 0.000 description 1
- UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N Lycopene Natural products CC(=C/C=C/C=C(C)/C=C/C=C(C)/C=C/C1C(=C)CCCC1(C)C)C=CC=C(/C)C=CC2C(=C)CCCC2(C)C UPYKUZBSLRQECL-UKMVMLAPSA-N 0.000 description 1
- PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N Niacin Chemical compound OC(=O)C1=CC=CN=C1 PVNIIMVLHYAWGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019483 Peanut oil Nutrition 0.000 description 1
- 241001274189 Pomatomus saltatrix Species 0.000 description 1
- 241000233671 Schizochytrium Species 0.000 description 1
- BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N Selenium Chemical compound [Se] BUGBHKTXTAQXES-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M Sodium bicarbonate-14C Chemical compound [Na+].O[14C]([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-DEQYMQKBSA-M 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 229930003316 Vitamin D Natural products 0.000 description 1
- QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N Vitamin D3 Natural products C1(/[C@@H]2CC[C@@H]([C@]2(CCC1)C)[C@H](C)CCCC(C)C)=C/C=C1\C[C@@H](O)CCC1=C QYSXJUFSXHHAJI-XFEUOLMDSA-N 0.000 description 1
- 229930003427 Vitamin E Natural products 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 239000004480 active ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000001335 aliphatic alkanes Chemical class 0.000 description 1
- 235000020661 alpha-linolenic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 229960000723 ampicillin Drugs 0.000 description 1
- AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N ampicillin Chemical compound C1([C@@H](N)C(=O)N[C@H]2[C@H]3SC([C@@H](N3C2=O)C(O)=O)(C)C)=CC=CC=C1 AVKUERGKIZMTKX-NJBDSQKTSA-N 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 1
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 1
- 230000003712 anti-aging effect Effects 0.000 description 1
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 1
- 235000021405 artificial diet Nutrition 0.000 description 1
- 150000007514 bases Chemical class 0.000 description 1
- 239000000440 bentonite Substances 0.000 description 1
- 229910000278 bentonite Inorganic materials 0.000 description 1
- SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N bentoquatam Chemical compound O.O=[Si]=O.O=[Al]O[Al]=O SVPXDRXYRYOSEX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 230000008827 biological function Effects 0.000 description 1
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000006227 byproduct Substances 0.000 description 1
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 description 1
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 1
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 1
- 239000001569 carbon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910002092 carbon dioxide Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000005473 carotenes Nutrition 0.000 description 1
- 150000001746 carotenes Chemical class 0.000 description 1
- 210000002421 cell wall Anatomy 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 239000013611 chromosomal DNA Substances 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 229910017052 cobalt Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010941 cobalt Substances 0.000 description 1
- GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N cobalt atom Chemical compound [Co] GUTLYIVDDKVIGB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 1
- 239000000356 contaminant Substances 0.000 description 1
- 238000011109 contamination Methods 0.000 description 1
- 229910052802 copper Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000010949 copper Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 230000007423 decrease Effects 0.000 description 1
- 235000013325 dietary fiber Nutrition 0.000 description 1
- 230000001079 digestive effect Effects 0.000 description 1
- 229910001873 dinitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 235000020774 essential nutrients Nutrition 0.000 description 1
- 239000003925 fat Substances 0.000 description 1
- 235000019197 fats Nutrition 0.000 description 1
- 150000002191 fatty alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 150000002192 fatty aldehydes Chemical class 0.000 description 1
- 239000011790 ferrous sulphate Substances 0.000 description 1
- 235000003891 ferrous sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 230000035558 fertility Effects 0.000 description 1
- 235000013373 food additive Nutrition 0.000 description 1
- 239000002778 food additive Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000000446 fuel Substances 0.000 description 1
- 230000006870 function Effects 0.000 description 1
- 235000013376 functional food Nutrition 0.000 description 1
- WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N gamma-tocopherol Natural products CC(C)CCCC(C)CCCC(C)CCCC1CCC2C(C)C(O)C(C)C(C)C2O1 WIGCFUFOHFEKBI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003208 gene overexpression Methods 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 235000001497 healthy food Nutrition 0.000 description 1
- 229910001385 heavy metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 229930195733 hydrocarbon Natural products 0.000 description 1
- 150000002430 hydrocarbons Chemical class 0.000 description 1
- 230000002209 hydrophobic effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000006698 induction Effects 0.000 description 1
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 1
- 150000002484 inorganic compounds Chemical class 0.000 description 1
- 229910010272 inorganic material Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 230000003834 intracellular effect Effects 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000359 iron(II) sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N kanamycin A sulfate Chemical compound OS(O)(=O)=O.O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N OOYGSFOGFJDDHP-KMCOLRRFSA-N 0.000 description 1
- 229960002064 kanamycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000004310 lactic acid Substances 0.000 description 1
- 235000014655 lactic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 235000020778 linoleic acid Nutrition 0.000 description 1
- OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N linoleic acid Natural products CCCCC\C=C/C\C=C\CCCCCCCC(O)=O OYHQOLUKZRVURQ-IXWMQOLASA-N 0.000 description 1
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 1
- 238000004811 liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 208000002780 macular degeneration Diseases 0.000 description 1
- 239000000395 magnesium oxide Substances 0.000 description 1
- CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N magnesium oxide Inorganic materials [Mg]=O CPLXHLVBOLITMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N magnesium;oxygen(2-) Chemical compound [O-2].[Mg+2] AXZKOIWUVFPNLO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N mercury Chemical compound [Hg] QSHDDOUJBYECFT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052753 mercury Inorganic materials 0.000 description 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 description 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 description 1
- 230000000813 microbial effect Effects 0.000 description 1
- 230000002906 microbiologic effect Effects 0.000 description 1
- 235000013379 molasses Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000004570 mortar (masonry) Substances 0.000 description 1
- 210000002161 motor neuron Anatomy 0.000 description 1
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000000653 nervous system Anatomy 0.000 description 1
- 235000001968 nicotinic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960003512 nicotinic acid Drugs 0.000 description 1
- 239000011664 nicotinic acid Substances 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000020660 omega-3 fatty acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006014 omega-3 oil Substances 0.000 description 1
- 238000005457 optimization Methods 0.000 description 1
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 239000005416 organic matter Substances 0.000 description 1
- 230000008520 organization Effects 0.000 description 1
- 239000000312 peanut oil Substances 0.000 description 1
- 229940056360 penicillin g Drugs 0.000 description 1
- 239000003208 petroleum Substances 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000000049 pigment Substances 0.000 description 1
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 1
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 1
- 201000010041 presbyopia Diseases 0.000 description 1
- 238000004321 preservation Methods 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 239000006041 probiotic Substances 0.000 description 1
- 230000000529 probiotic effect Effects 0.000 description 1
- 235000018291 probiotics Nutrition 0.000 description 1
- 230000001737 promoting effect Effects 0.000 description 1
- 239000000941 radioactive substance Substances 0.000 description 1
- 230000001850 reproductive effect Effects 0.000 description 1
- 235000019515 salmon Nutrition 0.000 description 1
- 235000019512 sardine Nutrition 0.000 description 1
- 229910052711 selenium Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000011669 selenium Substances 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- GRONZTPUWOOUFQ-UHFFFAOYSA-M sodium;methanol;hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+].OC GRONZTPUWOOUFQ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 239000002689 soil Substances 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 229960002385 streptomycin sulfate Drugs 0.000 description 1
- 239000012879 subculture medium Substances 0.000 description 1
- 235000000346 sugar Nutrition 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N tristearoylglycerol Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(=O)OCC(OC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC)COC(=O)CCCCCCCCCCCCCCCCC DCXXMTOCNZCJGO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004304 visual acuity Effects 0.000 description 1
- 235000019155 vitamin A Nutrition 0.000 description 1
- 239000011719 vitamin A Substances 0.000 description 1
- NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N vitamin A aldehyde Natural products O=CC=C(C)C=CC=C(C)C=CC1=C(C)CCCC1(C)C NCYCYZXNIZJOKI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000019156 vitamin B Nutrition 0.000 description 1
- 239000011720 vitamin B Substances 0.000 description 1
- 235000019166 vitamin D Nutrition 0.000 description 1
- 239000011710 vitamin D Substances 0.000 description 1
- 150000003710 vitamin D derivatives Chemical class 0.000 description 1
- 235000019165 vitamin E Nutrition 0.000 description 1
- 229940046009 vitamin E Drugs 0.000 description 1
- 239000011709 vitamin E Substances 0.000 description 1
- 229940046008 vitamin d Drugs 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- 230000004580 weight loss Effects 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
- C12P7/6434—Docosahexenoic acids [DHA]
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/12—Unicellular algae; Culture media therefor
- C12N1/125—Unicellular algae isolates
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P7/00—Preparation of oxygen-containing organic compounds
- C12P7/64—Fats; Fatty oils; Ester-type waxes; Higher fatty acids, i.e. having at least seven carbon atoms in an unbroken chain bound to a carboxyl group; Oxidised oils or fats
- C12P7/6409—Fatty acids
- C12P7/6427—Polyunsaturated fatty acids [PUFA], i.e. having two or more double bonds in their backbone
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12R—INDEXING SCHEME ASSOCIATED WITH SUBCLASSES C12C - C12Q, RELATING TO MICROORGANISMS
- C12R2001/00—Microorganisms ; Processes using microorganisms
- C12R2001/89—Algae ; Processes using algae
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
- Y02E—REDUCTION OF GREENHOUSE GAS [GHG] EMISSIONS, RELATED TO ENERGY GENERATION, TRANSMISSION OR DISTRIBUTION
- Y02E50/00—Technologies for the production of fuel of non-fossil origin
- Y02E50/30—Fuel from waste, e.g. synthetic alcohol or diesel
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Botany (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к биотехнологии. Предложены микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium КСТС 13538ВР, обладающие повышенным продуцированием докозагексаеновой кислоты (DHA) и уменьшенным продуцированием аминокислот; способ получения биомассы, включающий культивирование заявленных микроводорослей, и способ получения биомасла, включающий культивирование заявленных микроводорослей и извлечение из них липида, содержащего докозагексаеновую кислоту (DHA). Изобретения обеспечивают получение продукта с повышенным содержанием ненасыщенных жирных кислот, в частности докозагексаеновой кислоты, пригодного для использования в качестве кормовой композиции. 3 н. и 6 з.п. ф-лы, 2 ил., 5 табл., 3 пр.
Description
Область техники
Настоящее изобретение относится к штаммам рода Thraustochytrium, имеющим высокое содержание полиненасыщенных жирных кислот, к биомассе, полученной из этих штаммов, к липиду, содержащему в этих штаммах, и к способу получения полиненасыщенных жирных кислот.
Предшествующий уровень техники
Докозагексаеновая кислота (DHA), которая является полиненасыщенной жирной кислотой, представляет собой жирную кислоту, необходимую для мозга, тканей глаза и нервной системы, и, как известно, играет важную роль в развитии остроты зрения и способности двигательных нейронов у младенцев. Сообщалось, что количество DHA значительно снижено в мозге пациента с деменцией, и недавно было обнаружено, что DHA обладает различными антивозрастными функциями, такими как подавление дегенерации желтого пятна при пресбиопии. Кроме того, сообщалось, что DHA также можно использовать в качестве кормовой добавки для рыбы (публикация корейской патентной заявки 10-2007-0040751). Поскольку большинство высших животных, включая человека, не может легко синтезировать полиненасыщенные жирные кислоты, необходимые для нормальных биологических функций, они должны потреблять полиненасыщенные жирные кислоты в качестве необходимых питательных веществ и Всемирная организация здравоохранения рекомендует постоянное потребление DHA-содержащих в количестве по меньшей мере 1 г/сутки. Традиционно источниками полиненасыщенных жирных кислот DHA являются глубоководные рыбы, такие как тунец и лосось, которые занимают верхний уровень морской экосистемы. Однако по мере ухудшения загрязнения морской среды возрастает риск при поедании глубоководных рыб из-за накопления в организме глубоководных рыб загрязняющих веществ, таких как ртуть, тяжелые металлы, гормоны из окружающей среды и радиоактивные вещества.
Следовательно, в качестве нового средства для безопасного и надежного снабжения полиненасыщенным жирнокислотным маслом DHA, очень важное промышленное значение имеют микроводоросли рода Thraustochytrium.
Различные способы сверхэкспрессии генов были предложены для микроводорослей рода Thraustochytrium. Были описаны технологии трансформации микроводорослей рода Thraustochytrium с использованием различных генов устойчивости к антибиотикам в качестве селективных маркеров с тех пор, как генетические методы трансформации микроводорослей рода Thraustochytrium с использованием ацетолактатсинтазы в качестве селекционного маркера были впервые введены корпорацией Martec. В частности, в публикации корейской патентной заявки 2015-0084148 описан "рекомбинантный вектор для повышения продуктивности биомассы микроводорослей и липида и его применение".
Однако до сих пор технология генетической трансформации, разработанная для микроводорослей рода Thraustochytrium, представляет собой метод хромосомной интеграции, при котором гены, введенные совместно, встраивают в хромосомную ДНК, преимуществом этого метода является стабильное сохранение встроенных генов, но ограничением этого метода является количество копий генов и контроль экспрессии по сравнению с методом экспрессии генов с использованием центромерной или эписомальной плазмиды со способностью к саморепликации.
Описание изобретения
Техническая задача
Соответственно, авторы настоящего изобретения разработали микроводоросли, имеющие улучшенное содержание и продуцирование докозагексаеновой кислоты путем мутирования микроводорослей КС01 рода Thraustochytrium и разработали биомассу, включающую липиды, содержащие докозагексаеновую кислоту и способ получения биомасла путем культивирования этих микроводорослей. На основании этих разработок было завершено данное изобретение.
Решение технической задачи
Одной задачей настоящего изобретения является предложение микроводорослей CJM01 (номер депонирования: КСТС 13538 ВР) рода Thraustochytrium с помощью которых увеличивается продуцирование докозагексаеновой кислоты (DHA) и уменьшается получение аминокислот по сравнению с микроводорослями дикого типа.
Другой задачей настоящего изобретения является предложение способа получения биомассы, включающего стадии: культивирования микроводорослей CJM01 рода Thraustochytrium; и извлечения биомассы, содержащей докозагексаеновую кислоту (DHA) из микроводорослей, продукта их культивирования, их высушенного продукта или их пульверизированного продукта.
Еще одной задачей настоящего изобретения является создание способа получения биомасла, включающего стадии: культивирования микроводорослей CJM01 рода Thraustochytrium; и извлечение липида, содержащего докозагексаеновую кислоту (DHA) из микроводорослей, продукта их культивирования, их высушенного продукта или их пульверизированного продукта.
Полезные эффекты изобретения
В новых микроводорослях CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению продуцирование аминокислот существенно снижено, а содержание жира в биомассе и содержание ненасыщенных жирных кислот, таких как докозагексаеновая кислота, является высоким, так что сами микроводоросли, биомасса, полученная путем культивирования и ферментации микроводорослей, концентрат биомассы и высушенный продукт из биомассы являются очень полезными в качестве кормовой композиции.
Краткое описание графических материалов
На Фиг. 1 представлена фотография, показывающая штаммы КС01 рода Thraustochytrium, наблюдаемые при помощи оптического микроскопа.
На Фиг. 2 показано филогенетическое дерево штаммов КС01 рода Thraustochytrium, штаммов рода Thraustochytrium, штаммов рода Aurantiochytrium и штаммов рода Schizochytrium.
Лучший вариант осуществления изобретения
Ниже настоящее изобретение будет описано подробно.
Между тем, конкретные структурные и функциональные описания воплощений, раскрытых здесь, предназначены только для целей иллюстрации других воплощений. Настоящее изобретение может быть воплощено во многих разных формах без отступления от сущности и существенных характеристик настоящего изобретения. Таким образом, воплощения настоящего изобретения раскрыты только для иллюстративных целей и их не следует истолковывать как ограничивающие настоящее изобретение.
Для достижения вышеуказанных целей в одном аспекте настоящего изобретения предложены микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium, у которых продукция докозагексаеновой кислоты (DHA) увеличена, а продукция аминокислот уменьшена, по сравнению с микроводорослями дикого типа.
Используемый здесь термин "штаммы рода Thraustochytrium" относится к органическим гетеротрофным микроводорослям, которые играют важную роль в качестве источников триацилглицерина, содержащего различные полиненасыщенные жирные кислоты, включая докозагексаеновую кислоту (DHA) в высокой концентрации. Кроме того, "микроводоросли" относятся к живым организмам, которые можно увидеть только через микроскоп, потому что их нельзя увидеть невооруженным глазом, и которые свободно плавают в воде, и также называются фитопланктоном.
Используемые здесь, например, штаммы дикого типа КС01 рода Thraustochytrium облучают гамма-лучами для создания мутантных штаммов, из мутантных штаммов выделяют штаммы, обладающие повышенной продукцией масла, содержащего полиненасыщенные кислоты, и эти штаммы были названы как штаммы CJM01 рода Thraustochytrium и депонированы 30 мая 2018 года в Корейской коллекции типовых культур (КСТС), международный депозитарий в соответствии с Будапештским договором под номером депонирования КСТС 13538 ВР.
Кроме того, микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению могут иметь 18s рРНК с SEQ ID NO: 1, но настоящее раскрытие не ограничено ими.
Используемый здесь термин "докозагексаеновая кислота (DHA)" представляет собой одну из полиненасыщенных жирных кислот, представленную формулой С22Н32О2, и является веществом, экстрагируемым в широких масштабах из голубой рыбы (bluefish), такой как тунец или сардина. Кроме того, докозагексаеновая кислота (DHA) принадлежит к омега-3 вместе с эйкозапентаеновой кислотой (ЕРА) и α-линоленовой кислотой (ALA).
Микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению могут включать большое количество докозагексаеновой кислоты (DHA) по сравнению со штаммами КС01 рода Thraustochytrium, которые являются родительскими штаммами. В частности, микроводоросли CJM01 могут включать докозагексаеновую кислоту (DHA) в количестве 30% масс.-65% масс., 30% масс.-60% масс., 40% масс -65% масс. или 40% масс.-60% масс, исходя из общей массы жирных кислот, входящих в состав микроводорослей, но настоящее изобретение не ограничивается этим.
Кроме того, микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению могут иметь улучшенное продуцирование докозагексаеновой кислоты (DHA) по сравнению со штаммами КС01 рода Thraustochytrium, которые являются родительскими штаммами. Продуцирование докозагексаеновой кислоты (DHA) можно измерить по концентрации (г/л) докозагексаеновой кислоты (DHA), продуцируемой за 1 час. Микроводоросли по настоящему изобретению могут иметь продуцирование докозагексаеновой кислоты (DHA) 0,4-0,8 (г/л/ч), 0,4-0,7 (г/л/ч), 0,5 - 0,8 (г/л/ч) или 0,5-0,7 (г/л/ч), но настоящее раскрытие не ограничивается этим.
В то же время в микроводорослях CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению продуцирование аминокислот может быть уменьшено по сравнению со штаммами КС01 рода Thraustochytrium, которые являются родительскими штаммами. В частности, микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению или их культуральный раствор может не включать по меньшей мере одну аминокислоту, выбранную из группы, состоящей из аспартата, серина, глутамата, глицина, аланина, валина, метионина, изолейцина, лейцина, тирозина, фенилаланина, лизина и аргинина. Например, как видно из Примера 2, аспартат, серии, глутамат, глицин, аланин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин, лизин и аргинин может не определяться в культуральном растворе микроводорослей CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению.
Например, общее количество аминокислот, продуцируемых микроводорослями CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению, может быть снижено на 90% или более, 95% или более, 97% или более, или 99% или более, по сравнению со штаммами КС01 рода Thraustochytrium, которые являются родительскими штаммами. Это указывает на то, что штаммы CJM01 более эффективно используются в пути биосинтеза докозагексаеновой кислоты по сравнению с родительскими штаммами КС01. В частности, поскольку микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению редко продуцируют аминокислоты, культуральный раствор этих штаммов может включать аминокислоты в количестве только 0,1-20 мг/л, 0,1-15 мг/л, 0,1-10 мг/л, 0,1-7 мг/л или 0,1-5 мг/л.
В другом аспекте настоящего изобретения предложен способ получения биомассы, включающий культивирование микроводорослей CJM01 рода Thraustochytrium; и извлечение биомассы, содержащей докозагексаеновую кислоту (DHA), из микроводорослей, из продукта их культивирования, из их высушенного продукта или из пульверизированного продукта. Кроме того, биомасса может быть получена в форме сухого грибного тела, но настоящее раскрытие не ограничивается этим.
В настоящем изобретении предложена биомасса, полученная данным способом. Биомасса может включать докозагексаеновую кислоту (DHA) в количестве 15-40% масс, 20-35% масс., или 25-30% масс., исходя из их общей массы, но настоящее раскрытие не ограничивается этим.
В еще одном аспекте настоящего изобретения предложен способ получения биомасла, включающий: культивирование микроводорослей CJM01 рода Thraustochytrium; и извлечения липида, содержащего докозагексаеновую кислоту (DHA) из микроводорослей, продукта их культивирования, их высушенного продукта или их пульверизированного продукта.
В настоящем изобретении предложено биомасло, полученное этим способом. Биомасло может включать докозагексаеновую кислоту (DHA) в количестве 30-65% масс., 30-60% масс., 40-65% масс., или 40-60% масс., на основе общей массы жирных кислот, но настоящее изобретение не ограничивается этим.
В частности, способ получения биомасла согласно настоящему изобретению может включать стадии: культивирования микроводорослей CJM01 рода Thraustochytrium; получение биомассы, содержащей докозагексаеновую кислоту (DHA), из микроводорослей, продукта их культивирования, их высушенного продукта или их пульверизированного продукта; и извлечение липида, содержащего докозагексаеновую кислоту (DHA), из полученной биомассы. Однако настоящее раскрытие не ограничивается этим.
"Род Thraustochytrium " и "докозагексаеновая кислота" описаны выше.
Используемое здесь "биомасло" получают из биомассы при помощи биологического, термохимического или физико-химического процесса экстракции. Биомасло, полученное в соответствии с настоящим описанием, может включать: полиненасыщенную жирную кислоту, в частности докозагексаеновую кислоту, но настоящее раскрытие не ограничивается этим.
Дополнительно, "биомасса" относится к организмам, таким как растения, животные и микроорганизмы, которые могут быть использованы в качестве химической энергии, то есть энергетических источников биоэнергии. Кроме того, биомасса экологически также относится к массе или количеству энергии конкретного организма, выходящей в единицу времени и пространства. Кроме того, хотя биомасса включает соединения, секретируемые клетками, она может также включать внеклеточные вещества, а также клетки и/или внутриклеточное содержимое. При использовании в настоящем документе биомасса может представлять собой саму микроводоросль CJM01 рода Thraustochytrium, продукт ее культивирования, ее высушенный продукт, ее пульверизированный продукт, продукт, полученный путем культивирования или ферментации микроводорослей, или может представлять концентрат биомассы или высушенный продукт биомассы. Однако биомасса не ограничивается этим.
Используемый здесь культуральный продукт микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium относится к продукту, полученному путем культивирования микроводорослей и, в частности, может представлять собой культуральный раствор, включающий микроводоросли, или культуральный раствор, не включающий микроводоросли, но настоящее раскрытие не ограничивается этим. При использовании здесь культуральный продукт микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium относится к продукту, полученному путем удаления влаги из микроводорослей и, в частности, может быть приготовлен в виде сухого грибного тела, но настоящее раскрытие не ограничивается этим. При использовании здесь, пульверизированный продукт водорослей CJM01 рода Thraustochytrium относится в совокупности к продукту, полученному путем пульверизирования микроводорослей, и может быть изготовлен в виде супернатанта или гранул, но настоящее раскрытие не ограничивается ими.
Сами микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium, продукт их культивирования, их высушенный продукт или их пульверизированный продукт включают докозагексаеновую кислоту и могут быть использованы для получения биомассы или биомасла.
При использовании здесь термин "культивирование" означает, что микроводоросли выращивают в умеренно контролируемых условиях окружающей среды. Процесс культивирования по настоящему изобретению может быть осуществлен в зависимости от подходящей питательной среды и условий культивирования. Такой процесс культивирования может быть легко адаптирован специалистами в данной области в соответствии с выбранными микроводорослями.
В частности, культивирование микроводорослей CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению можно выполнять в гетеротрофных условиях, но настоящее раскрытие не ограничивается этим.
При использовании здесь "гетеротрофное питание" представляет собой питательную форму, которая зависит от органического вещества, полученного из источника энергии (питания) in vitro, и является термином, соответствующим независимому питанию. Микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению могут улучшить количество и продуктивность по докозагексаеновой кислоте путем оптимизации состава питательной среды источника углерода или источника азота в гетеротрофных условиях. Кроме того, используемый здесь термин "гетеротрофное питание" можно использовать взаимозаменяемо с "темной культурой" (dark culture).
Кроме того, стадия культивирования конкретно не ограничена и может быть выполнена посредством известного способа периодической культуры, известного способа непрерывной культуры, способа культуры с подпиткой и тому подобного. Питательная среда и другие условия культивирования, используемые при культивировании микроводорослей по настоящему изобретению, можно использовать без ограничений до тех пор, пока они могут быть в целом использованы для культивирования микроводорослей. В частности, микроводоросли по настоящему изобретению можно культивировать в общей питательной среде, включающей источник углерода, источник азота, источник фосфора, неорганическое соединение, аминокислоты и/или витамины, при регулировании температуры, рН и тому подобного в аэробных условиях.
В частности, оптимальное значение рН (например рН 5-9, в частности рН 6-8, и более конкретно рН 6,8) можно регулировать с помощью основного соединения (например гидроксида натрия, гидроксида калия или аммиака) или кислотного соединения (например фосфорной кислоты или серной кислоты), но настоящее раскрытие не ограничивается этим.
Кроме того, кислород или кислородсодержащий газ может быть введен в культуру для поддержания аэробного состояния культуры, или газообразный азот, газообразный водород или газообразный диоксид углерода может быть введен в культуру без введения кислорода или кислородсодержащего газа для поддержания анаэробного или неаэробного состояния культуры, но настоящее раскрытие не ограничивается этим.
Кроме того, температуру культивирования можно поддерживать на уровне 20°С-45°С, в частности 25°С-40°С, и культивирование можно выполнять в течение примерно 10-160 часов, но настоящее раскрытие не ограничивается этим. Кроме того, во время культивирования образование пузырьков можно ингибировать с помощью пеногасителя, такого как полигликолевый эфир жирной кислоты, но настоящее раскрытие не ограничивается этим.
Культивирование водорослей CJM01 рода Thraustochytrium по настоящему изобретению может быть выполнено путем использования культуральной среды, содержащей источник углерода и источник азота.
Используемый здесь термин "культуральная среда" относится к среде для культивирования микроводорослей по настоящему изобретения и/или к продукту, полученному после культивирования микроводорослей. Культуральная среда может иметь как форму, включающую микроводоросли, так и форму, полученную путем удаления микроводорослей из культурального раствора, включающего микроводоросли, путем центрифугирования, фильтрации или тому подобного.
Кроме того, в культуральной среде, используемой в настоящем изобретении, в качестве источников углерода можно использовать отдельно или в комбинации сахара и углеводы (например глюкоза, сахароза, лактоза, фруктоза, галактоза, манноза, мальтоза, арабиноза, ксилоза, меласса, крахмал и целлюлоза), жиры и масла (соевое масло, подсолнечное масло, арахисовое масло и кокосовое масло), жирные кислоты (например пальмитиновая кислота, стеариновая кислота и линолевая кислота), спирты (например глицерин и этанол) и органические кислоты (например уксусная кислота). В частности, источником углерода может быть по меньшей мере один источник выбранный из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы, мальтозы, галактозы, маннозы, сахарозы, арабинозы, ксилозы и глицерина, без ограничения ими, при условии, что он может быть использован для культивирования микроводорослей. Кроме того, в культуральной среде, используемой в настоящем изобретении, в качестве источника углерода можно использовать глюкозу в концентрации 10-50 г/л, 10-40 г/л, 20-50 г/л, 20-40 г/л или 25-35 г/л, но настоящее изобретение не ограничивается этим.
Источники азота в культуральной среде, используемой в настоящем изобретении, можно разделить на органические источники азота и неорганические источники азота, но эти органические источники азота и неорганические источники азота можно использовать отдельно или в комбинации. В частности, источником азота может быть органический источник азота, выбранный из группы, состоящей из дрожжевого экстракта, говяжьего экстракта, пептона и триптона, или может быть неорганический источник азота, выбранный из группы, состоящей из ацетата аммония, нитрата аммония, хлорида аммония, сульфата аммония, нитрата натрия, мочевины и однозамещенного глутамата натрия (MSG).
Кроме того, в культуральной среде, используемой в настоящем изобретении, примеры источника азота могут включать дрожжевой экстракт, сульфат аммония, нитрат натрия и MSG, без ограничения ими, при условии, что его можно использовать для культивирования микроводорослей.
В частности, дрожжевой экстракт может быть включен в культуральную среду в концентрации 0,1-10 г/л, 0,5-10 г/л, 0,5-7 г/л, 0,5-5 г/л, 0,5-3 г/л, 0,5-2 г/л или 0,5-1,5 г/л, сульфат аммония может быть включен в культуральную среду в концентрации 1-5 г/л, 1-4 г/л, 2-5 г/л или 2-4 г/л, нитрат натрия может быть включен в культуральную среду в концентрации 0,1-10 г/л, 0,5-9 г/л, 1-9 г/л, 2-9 г/л, 3-9 г/л, 5-9 г/л или 7-9 г/л и MSG может быть включен в культуральную среду в концентрации 0,1-2 г/л, 0,1-1,5 г/л, 0,5-2 г/л или 0,5-1,5 г/л. Однако настоящее изобретение не ограничивается этим.
Для целей настоящего изобретения, поскольку штаммы CJM01 характеризуются тем, что они не обладают ингибированием аммиаком и могут расти в широком диапазоне концентрации солей, источники углерода и источники азота могут быть соответствующим образом скорректированы с учетом этих характеристик.
В культуральной среде, используемой в настоящем раскрытии, в качестве источника фосфора могут быть использованы дигидрофосфат калия, гидрофосфат калия и соответствующие им натрийсодержащие соли по отдельности или в комбинации, но настоящее изобретение не ограничивается этим. Культуральная среда может включать другие соли металлов (например сульфат магния и сульфат железа), аминокислоту и незаменимые вещества, способствующие росту, такие как витамин.
На стадии извлечения биомассы из микроводорослей, культивируемых на стадии культивирования, из продукта их культивирования, высушенного продукта или пульверизированного продукта, необходимая биомасса может быть собрана с использованием подходящего способа, известного в данной области техники.
На стадии извлечения докозагексаеновой кислоты, продуцируемой на стадии культивирования, необходимая докозагексаеновая кислота может быть извлечена из самих микроводорослей или продукта их культивирования посредством использования подходящего способа, известного в данной области. Например, необходимая биомасса или необходимая докозагексаеновая кислота может быть извлечена из микроводорослей, культивируемых посредством подходящего способа, известного в данной области, продукта их культивирования, их высушенного продукта или их пульверизированного продукта, при этом можно использовать центрифугирование, фильтрацию, анионообменную хроматографию, кристаллизацию, ВЭЖХ или тому подобное. Стадия извлечения биомассы или докозагексаеновой кислоты может, кроме того, включать стадию разделения и/или стадию очистки.
Например, липиды и производные липидов, такие как жирные альдегиды, жирные спирты и углеводороды (например алканы), могут быть экстрагированы гидрофобным растворителем, таким как гексан (Frenz et al. 1989, Enzyme Microb. Technol., 11:717). Липиды и производные липидов также могут быть извлечены с помощью ожижения (Sawayama et al. 1999, Biomass and Bioenergy 17: 33-39 и Inoue et al. 1993, Biomass Bioenergy 6 (4): 269-274); масляного ожижения (Minowa et al. 1995, Fuel 74 (12): 1735-1738); и экстракции CO2 в сверхкритическом состоянии (Mendes et al. 2003, Inorganica Chimica Acta 356: 328-334). Кроме того, в протоколе известного извлечения липидов микроводорослей раскрыт способ, включающий следующие этапы 1) сбор клеток с использованием центрифугирования, промывка собранных клеток дистиллированной водой и последующая лиофилизация промытых клеток с получением порошка клеток, и 2) пульверизация полученного клеточного порошка в ступке и последующее извлечение липидов с помощью н-гексана [Miao and Wu, Biosource Technology (2006) 97:841-846].
Еще одном аспекте настоящего раскрытия предлагается композиция, включающая микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium, продукт их культивирования, их высушенный продукт или их пульверизированный продукт.Композиция может включать биомассу или биомасло, полученные с использованием микроводорослей.
Микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium, продукт их культивирования, их высушенный продукт и их пульверизированный продукт являются такими, как описано выше. Биомасса или биомасло, получаемые с использованием микроводорослей, также описаны выше. Для получения композиции, включающей высокое содержание докозагексаеновой кислоты, могут быть использованы микроводоросли по настоящему изобретению. Композиция может быть получена в виде раствора, порошка или суспензии, но настоящее раскрытие не ограничивается ими. В частности, может быть предложена пищевая композиция, кормовая композиция или кормовая добавка, включающая микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium, продукт их культивирования, их высушенный продукт или их пульверизированный продукт.
Используемый здесь термин "корм" относится к пище для животных для съедания, проглатывания и переваривания, или относится к любой подходящей естественной или искусственной диете, к одному приему пищи или к ингредиенту одного приема пищи. Корм по настоящему изобретению, который включает композицию для предупреждения или лечения метаболических заболеваний в качестве активного ингредиента, может быть изготовлен в виде различных типов кормов, известных в данной области техники, и конкретные примеры этого могут включать концентрированные корма, грубые корма и/или специальные корма.
Используемый здесь термин "кормовая добавка" относится к веществу, которое добавляют в корм для различных эффектов, таких как пополнение питательных веществ, предупреждение потери веса, улучшение пищеварительного использования целлюлозы в корме, улучшение качества масла, предупреждение репродуктивных расстройств, улучшение оплодотворяемости и предупреждение высокотемпературного стресса летом. Кормовая добавка по настоящему изобретению соответствует дополнительному корму в соответствии с законом об использовании кормов, и может дополнительно включать минеральный препарат, такой как гидрокарбонат натрия, бентонит, оксид магния или минеральный комплекс; минеральный препарат, представляющий собой микроэлемент, такой как цинк, медь, кобальт или селен; витаминный препарат, такой как каротин, витамин Е, витамины А, витамин D, никотиновая кислота или комплекс витаминов группы В; защитный аминокислотный препарат, такой как метионин или лизин; защитный жирнокислотный препарат, такой как кальциевая соль жирных кислот; препарат живых бактерий, таких как пробиотические бактерии (молочнокислые бактерии), дрожжевые культуры или продукты брожения с использованием плесневых грибов; и дрожжевой препарат.
Используемый здесь термин "пищевая композиция" включает все виды пищевых продуктов, таких как функциональная пища, питательная добавка, здоровая пища и пищевые добавки. Вышеуказанная пищевая композиция может быть получена в различных формах в соответствии со способами, общеизвестными в данной области техники.
В настоящем изобретении предложен способ получения композиции, содержащей биомассу или биомасло. Биомасса, биомасло и композиция являются такими, как описано выше.
В указанном выше способе получения биомасла, биомасло, включающее высокое содержание докозагексаеновой кислоты, может быть получено посредством стадии культивирования микроводорослей CJM01 рода Thraustochytrium, имеющих высокую продуктивность докозагексаеновой кислоты, в культуральной среде, содержащей источник углерода определенного состава и источник азота определенного состава в гетеротрофных условиях.
Способ осуществления изобретения
Ниже настоящее изобретение будет описано более подробно со ссылкой на Примеры. Однако эти Примеры являются лишь иллюстративными для настоящего изобретения и объем настоящего изобретения не ограничен этими Примерами.
Микроводоросли CJM01 по настоящему изобретению представляют собой микроводоросли, принадлежащие к семейству Thraustochytrid и способны продуцировать полиненасыщенные жирные кислоты, включающие высокое содержание докозагексаеновой кислоты. Микроводоросли CJM01 по настоящему изобретению имеют нуклеотидную последовательность ДНК гена 18S рРНК, представленную в SEQ ID ΝΟ:1, и имеют высокое содержание биомассы в гетеротрофных условиях, но не в ростовых условиях в световой культуре (light culture).
В следующих Примерах экспериментальные методы описаны более подробно.
Пример 1: Выделение водорослей КС01 семейства Thraustochytrid
Для выделения штаммов водорослей семейства Thraustochytrid были проведены следующие эксперименты.
В частности, собирали морскую воду, почву, листья и пробы окружающей среды из 20 прибрежных районов областей Кодже и Тхонъён в Кенсан-Намдо, Южная Корея. Затем образцы хранили в ящике со льдом при температуре 10°С и переносили в лабораторию. Образцы использовали в работе по выделению бактерий в течение 2-3 суток. Эти образцы были непосредственно нанесены мазками на среду с агаром и затем штаммы Thraustochytrid выделяли, используя метод нанесения жидкого соснового порошка. Каждый образец, включающий микроводоросли-подобную форму, наблюдаемую в микроскопе, наносили мазками на культуральную среду IYP для микробиологического выделения (1 г/л дрожжевого экстракта, 1 г/л пептона, 2 г/л MgSO4⋅7H2O, 20 г/л морской соли, 5,0 мг/л Н3ВО3, 3,0 мг/л МnСl2, 0,2 мг/л CuSO4, 0,05 мг/л NaMo4⋅2H2O, 0,05 мг/л CoSO4, 0,7 мг/л ZnSO4⋅7H2O и 15 г/л агара) с получением колоний. Полученные колонии несколько раз подвергали субкультивированию для очистки и отделения, и затем отбирали и выделяли только штаммы, образующие зооспорангии, характерные для микроводорослей Thraustochytrid. Природные образцы, которые не могут быть подтверждены посредством микроскопического наблюдения, разбавляли и промывали, используя стерилизованную морскую воду с соленостью 1,5%, а затем эти образцы распрыскивали с сосновым порошком и культивировали. Микробные сообщества, полученные посредством культивирования при температуре и рН, аналогичных окружающей среде каждой коллекции, наносили мазками на культуральную среду IYP для выделения микроорганизмов и субкультивировали для очистки и разделения. В этом случае вводили раствор коктейля антибиотиков (0-500 мг/л сульфата стрептомицина, 0-500 мг/л ампициллина, 0-500 мг/л пенициллина G и 0-500 мг/л сульфата канамицина) с корректировкой их концентрации и таким образом контролировали рост и загрязнение другими микробами.
Отделенные колонии культивировали в колбе объемом 500 мл при температуре от 15°С до 28°С и скорости вращения от 50 до 200 об/мин в течение примерно 7 суток с использованием культуральной среды IGGYP (10 г/л глицерина, 10 г/л глюкозы, 1 г/л дрожжевого экстракта, 1 г/л пептона, 2 г/л MgSO4⋅7H2O, 20 г/л самосадочной соли, 5,0 мг/л Н3ВО3, 3,0 мг/л МnСl2, 0,2 мг/л CuSO4, 0,05 мг/л NaMo4⋅2H2O, 0,05 мг/л CoSO4, 0,7 мг/л ZnSO4⋅7H2O и 10 мл/л раствора смеси витаминов). Наконец был выбран один вид микроводорослей, скорость роста которого была быстрой и условия культивирования небыли сложными, и были выделены грибные тела. Формы выделенных штаммов наблюдали с помощью оптического микроскопа (показано на Фиг. 1). Выбранные грибные тела промывали фосфатным буферным раствором (PBS, рН 7,5) и затем сушили в сухой печи при 55°С в течение 16 часов с получением сухих грибных тел.
Последовательность гена 18s рРНК была проанализирована для молекулярной идентификации штаммов окончательно выбранных микроводорослей. ДНК выделяли от чисто отделенных колоний выбранных видов и затем 18s рРНК амплифицировали посредством полимеразной цепной реакции (ПЦР) с использованием праймеров для амплификации генов в области 18s рРНК. Праймеры для амплификации генов обощены в Таблице 1 ниже.
В этом случае после денатурации при 95°С в течение 5 минут, выполняли PCR, в течение в общей сложности 25 циклов В следующих условиях: денатурация при 95°С в течение 30 секунд; отжиг при 52°С в течение 30 секунд; и полимеризация при 72°С в течение 1 минуты и 30 секунд. После этого была проведена реакция полимеризации при 72°С в течение 7 минут.
В результате анализа нуклеотидной последовательности с использованием амплифицированного реакционного раствора, была получена нуклеотидная последовательность 1 (SEQ ID NO: 1) размером примерно 1792 п.н. В результате поиска с помощью NCBI BLAST было обнаружено, что нуклеотидная последовательность 1 имеет примерно 99% гомологию со штаммами рода Thraustochytrium, о которых сообщалось ранее, и примерно 84% гомологию со штаммами рода Aurantiochytrium и рода Schizochytriит.
Таким образом, получено филогенетическое дерево для штаммов и результаты этого показаны на Фиг. 2. Соответствующие штаммы были идентифицированы как микроводоросли рода Thraustochytrium семейства Thraustochytrid и были, таким образом, названы, как КС01 рода Thraustochytrium.
Пример 2: Разработка мутантных водорослей
Пример 2-1: Отбор мутантных микроводорослей с помощью метода искусственных мутаций
В настоящем изобретении был проведен следующий эксперимент с целью выделения штаммов, обладающих улучшенной продуктивностью докозагексаеновой кислоты (DHA), посредством индукции мутации при помощи гамма-облучения с получением штаммов КС01 рода Thraustochytrium, которые были выделены в Примере 1.
В частности, штаммы КС01 рода Thraustochytrium культивировали в культуральной среде GYEP (2% глюкозы, 1% пептона, 0,5% дрожжевого экстракта и 2% самосадочной соли) в течение 24 часов для активации штаммов. Активированные штаммы инокулировали в субкультуральной среде (5% глюкозы, 1% пептона, 0,5% дрожжевого экстракта и 2% самосадочной соли), которая была стерилизована при 121°С в течение 15 минут, и культивировали в течение 14 часов и затем выделяли грибные тела. Выделенные грибные тела суспендировали в 50 мл буфера PBS, облучали гамма-лучами в дозе 1-5 кГр в течение 1 часа, и затем культивировали в 50 мл базовой культуральной среды (5% глюкозы, 1% пептона, 0,5% дрожжевого экстракта и 2% самосадочной соли) с использованием 500 мл колбы при температуре 28°С и вращении при 120 об/мин в течение 2 суток. Затем суспендированные грибные тела были соответствующим образом разбавлены при уровне гибели 99% и их дважды субкультивировали в культуральной среде GYEP в плоском планшете (2% глюкозы, 1% пептона, 0,5% дрожжевого экстракта и 2% самосадочной соли, 2% агара, рН 7,0).
В первую очередь были отобраны колонии, цвет которых становится белым, для того, чтобы выбрать штаммы, которые, по прогнозам, будут иметь сниженные сульфатированные пигменты, продуцируемые в дополнение к маслам, содержащим полиненасыщенные жирные кислоты. Мутантные штаммы, полученные вышеуказанным способом, были названы штаммами CJM01 рода Thraustochytrium, и депонированы 30 мая 2018 г в Корейской коллекции типовых культур (КСТС), международный депозитарий в соответствии с Будапештским договором под номером депонировния КСТС 13538 ВР.
Пример 2-2: Анализ способности впервые выделенных микроводорослей и мутантных штаммов продуцировать масло, содержащее полиненасыщенные жирные кислоты.
Штаммы CJM01 и КС01, выбранные из Примера 2-1, культивировали следующим образом, чтобы сравнить способность штаммов CJM01 продуцировать масло, содержащее полиненасыщенные жирные кислоты, со способностью штаммов КС01 продуцировать масло, содержащее полиненасыщенные жирные кислоты.
В частности, чтобы культивировать штаммы CJM01 и КС01, которые представляют собой микроводоросли рода Thraustochytrium по настоящему изобретению, штаммы CJM01 и КС01 культивировали в культуральной среде MJW01 (30 г/л глюкозы, 3,0 г/л MgSO4⋅7H2O, 10 г/л Na2SO4, 1,0 г/л NaCl, 9,0 г/л дрожжевого экстракта, 1,0 г/л MSG⋅1H2O, 1,0 г/л NaNO3, 0,1 г/л KН2РO4, 0,5 г/л K2НРO4, 0,5 г/л СаСl2 и 10 мл/л раствора смеси витаминов) в условиях базовой культуральной среды 28°С, 300 об/мин, 1 об/об/мин и рН 7,5 в течение 4 суток. Грибные тела извлекали центрифугированием, трижды промывали буфером PBS, а затем сушили при 55°С в течение 12 часов для измерения массы грибных тел.
Содержание масла, содержащего докозагексаеновую кислоту, при использовании сухих грибных тел, измеряли следующим образом. В частности, на 2 г сухих грибных тел наносили 8,3 м раствора соляной кислоты для гидролиза клеточных стенок грибных тел микроводорослей при 80°С, к сухим грибным телам добавляли 30 мл этилового эфира и 20 мл петролейного эфира и перемешивали в течение 30 секунд, а затем смесь разделяли в центрифуге 3. Эту процедуру повторяли три раза или более. Затем отделенный слой растворителя извлекали, помещали в круглую колбу, массу которой предварительно измеряли, продували азотом для удаления растворителя, а затем полученный продукт помещали в емкость, из которой была удалена влага, и сушили. Массу высушенного масла измеряли для расчета общего содержания масла. Содержание DHA в масле измеряли посредством хроматографии после предварительной обработки масла 0,5 н. метанольным NaOH и 14% трифторидом бора (BF3)- метанолом.
Характеристики культуры штаммов КС01 рода Thraustochytrium, культивируемых вышеуказанным способом, и характеристики культуры мутантных штаммов CJM01, полученных посредством гамма-облучения, представлены в Таблицах 2 и 3. Из Таблиц 2 и 3 было установлено, что была получена DHA, которая является высокофункциональным омега-3 маслом.
"Биомасса" в Таблицах 2 и 3 относится к концентрации грибных тел в культуральном растворе и может использоваться в комбинации с сухой массой клеток (DCW). Содержание DHA выражают как ее содержание по отношению к биомассе или к общему количеству жирных кислот (TFA).
Как показано в следующих результатах, было обнаружено, что продуцирование DHA мутантными штаммами CJM01 была улучшено по сравнению с продуцированием родительскими штаммами (штаммами КС01 рода Thraustochytrium) (см. Таблицы 2 и 3). В частности, продуцирование DHA мутантными штаммами CJM01 была увеличено примерно в 1,3 раза по сравнению со штаммами КС01. Кроме того, было установлено, что продуцирование DHA мутантными штаммами CJM01 было увеличено примерно в 1,7 раза по сравнению со штаммами КС01, поскольку время культивирования было значительно сокращено без уменьшения полученных грибных тел.
Из приведенных выше результатов было установлено, что штаммы CJM01, являющиеся мутантными штаммами, имели повышенное содержание DHA и улучшенную проводимость DHA по сравнению со штаммами КС01, которые являются родительскими штаммами.
Пример 2-3: Анализ способности впервые выделенных микроводорослей и мутантных штаммов продуцировать аминокислоты.
Для оценки характеристик культуры штаммов CJM01 определяли общее содержание аминокислот в вышеуказанном культуральной растворе.
В частности, из каждого из указанных выше культуральных растворов отбирали 10 мл пробы, разбавляли дистиллированной водой в 20 раз и фильтровали, и затем общее содержание аминокислот анализировали с использованием жидкостной хроматографии. В результате анализа суммарной концентрации аминокислот аспартат, серии, глутамат, глицин, аланин, валин, метионин, изолейцин, лейцин, тирозин, фенилаланин, лизин и аргинин были соответственно обнаружены в культуральном растворе родительских штаммов КС01 в количестве 10 мг/л, тогда как большинство аминокислот не было обнаружено в культуральном растворе штаммов CJM01, имеющих улучшенное содержание DHA
В частности, было обнаружено, что в случае мутантных штаммов CJM01 общая концентрация аминокислот как побочных продуктов, отличных от DHA, снижена примерно на 99% или более, по сравнению с родительскими штаммами КС01 (см. Таблицу 4).
Таким образом, было обнаружено, что в случае мутантных штаммов CJM01 рост грибных тел находится на эквивалентном уровне по сравнению с родительскими штаммами КС01, и общее содержание липидов не сильно снижено по сравнению с содержанием грибных тел, и, таким образом, мутантные штаммы CJM01 используют предоставляемый источник углерода для механизма биосинтеза DHA более эффективно, чем родительские штаммы КС01.
Пример 3: Оптимимзация условий культуральной среды
Для дальнейшего улучшения содержания и продуцирования DHA с использованием штаммов CJM01, имеющих пониженное содержание аминокислот и улучшенное содержание DHA, из примера 2 были выбраны штаммы, и условия среды были оптимизированы.
В частности, на основе культуральной среды MJW01, используемой в Примере 2-2, для того чтобы увеличить содержание источников азота в культуральной среде и снизить себестоимость продукции, концентрацию дрожжевого экстракта в качестве органического источника азота понижали, добавляли (NH4)2SO4 в качестве неорганического источника азота и повышали концентрацию NaNO3 для превращения культуральной среды MJW01 в культуральную среду MJW02 (30 г/л глюкозы, 5,0 г/л MgSO4⋅7H2O, 3 г/л Na2SO4, 0,5 г/л NaCl, 1,0 г/л дрожжевого экстракта, 1,0 г/л MSG⋅1H2O, 8,0 г/л NaNO3, 3,0 г/л (NH4)2SO4, 0,1 г/л KН2РO4, 0,5 г/л K2НРO4, 0,1 г/л СаСl2, и 10 мл/л раствора смеси витаминов).
Чтобы сравнить условия культуральной среды MJW01 с условиями культуральной среды MJW02, штаммы CJM01 соответственно культивировали в вышеуказанных культуральных средах. В результате, как показано в Таблице 5 ниже, количество грибных тел уменьшалось с уменьшением концентрации дрожжевого экстракта, но время культивирования значительно сокращалось с увеличением источника неорганического азота. Следовательно, было обнаружено, что содержание DHA в культуральной среде MJW02 равно или превышает количество DHA в культуральной среде MJW01, и продуцирование DHA в культуральной среде MJW02 увеличено в 1,13 раза по сравнению с продуцированием DHA в культуральной среде MJW01.
Как описано выше, специалисты в данной области смогут понять, что настоящее изобретение может быть легко выполнено в других подробных формах без изменения технической идеи или его существенных признаков. Поэтому следует понимать, что вышеуказанные воплощения являются иллюстративными во всех аспектах и не являются ограничивающими. Объем настоящего изобретения представлен нижеописанной формулой изобретения, а не подробным описанием, и следует понимать, что значение и объем формулы изобретения, а также все изменения или модифицированные формы, полученные из их эквивалентов, входят в объем настоящего изобретения.
Claims (10)
1. Микроводоросли CJM01 (номер депонирования: КСТС 13538ВР) рода Thraustochytrium, у которых увеличено продуцирование докозагексаеновой кислоты (DHA) и уменьшено продуцирование аминокислот по сравнению с микроводорослями дикого типа.
2. Микроводоросли по п. 1, где микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium содержат докозагексаеновую кислоту в количестве 40% масс. - 60% масс. в расчете на общую массу жирных кислот.
3. Микроводоросли по п. 1, где микроводоросли CJM01 рода Thraustochytrium имеют продуцирование докозагексаеновой кислоты от 0,5 до 0,7 г/л/ч.
4. Способ получения биомассы, включающий:
культивирование микроводорослей CJM01 рода Thraustochytrium по п. 1 и извлечение биомассы, содержащей докозагексаеновую кислоту, из микроводорослей, продукта их культивирования, их высушенного продукта и их пульверизированного продукта.
5. Способ по п. 4, где культивирование проводят в гетеротрофных условиях.
6. Способ по п. 4, где культивирование осуществляют с использованием культуральной среды, включающей источник углерода и источник азота.
7. Способ по п. 6, где источник углерода представляет собой по меньшей мере один источник, выбранный из группы, состоящей из глюкозы, фруктозы, мальтозы, галактозы, маннозы, сахарозы, арабинозы, ксилозы и глицерина.
8. Способ по п. 6, где источник азота представляет собой 1) органический источник азота, выбранный из группы, состоящей из дрожжевого экстракта, говяжьего экстракта, пептона и триптона, или 2) неорганический источник азота, выбранный из группы, состоящей из ацетата аммония, нитрата аммония, хлорида аммония, сульфата аммония, нитрата натрия, мочевины и однозамещенного глутамата натрия (MSG).
9. Способ получения биомасла, включающий: культивирование микроводорослей CJM01 рода Thraustochytrium по п. 1 и извлечение липида, содержащего докозагексаеновую кислоту (DHA), из микроводорослей, продукта их культивирования, их высушенного продукта или их пульверизированного продукта.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020180075945A KR102100650B1 (ko) | 2018-06-29 | 2018-06-29 | 신규한 트라우즈토카이트리움 속 균주, 및 이를 이용한 다중불포화지방산 생산방법 |
| KR10-2018-0075945 | 2018-06-29 | ||
| PCT/KR2019/007697 WO2020004924A1 (ko) | 2018-06-29 | 2019-06-26 | 신규한 트라우즈토카이트리움 속 균주, 및 이를 이용한 다중불포화지방산 생산방법 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2754686C1 true RU2754686C1 (ru) | 2021-09-06 |
Family
ID=68500429
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2020128068A RU2754686C1 (ru) | 2018-06-29 | 2019-06-26 | Новые штаммы микроводорослей рода Thraustochytrium и способ получения полиненасыщенных жирных кислот с их использованием |
Country Status (19)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US11773417B2 (ru) |
| EP (1) | EP3760705B1 (ru) |
| JP (1) | JP6947941B2 (ru) |
| KR (1) | KR102100650B1 (ru) |
| CN (1) | CN112513247B (ru) |
| AR (1) | AR115667A1 (ru) |
| AU (1) | AU2019292277B2 (ru) |
| BR (1) | BR112020019053B8 (ru) |
| CA (1) | CA3095279C (ru) |
| CL (1) | CL2020002416A1 (ru) |
| DK (1) | DK3760705T5 (ru) |
| ES (1) | ES2932536T3 (ru) |
| FI (1) | FI3760705T3 (ru) |
| HU (1) | HUE060352T2 (ru) |
| MY (1) | MY194114A (ru) |
| RU (1) | RU2754686C1 (ru) |
| TW (1) | TWI715088B (ru) |
| UY (1) | UY38286A (ru) |
| WO (1) | WO2020004924A1 (ru) |
Families Citing this family (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR20230066973A (ko) | 2021-11-08 | 2023-05-16 | 씨제이제일제당 (주) | 세포 내 오일 함유량이 높은 신규한 스키조키트리움 속 균주 및 이를 이용한 오메가3를 함유한 오일 생산방법 |
| KR20230066972A (ko) | 2021-11-08 | 2023-05-16 | 씨제이제일제당 (주) | 세포 내 오일 추출이 용이한 신규한 스키조키트리움 속 균주 및 이를 이용한 오메가3를 함유한 오일 생산방법 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7022512B2 (en) * | 1988-09-07 | 2006-04-04 | Martek Biosciences Corporation | Schizochytrium and thraustochytrium strains for producing high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids |
| RU2346033C2 (ru) * | 2003-09-01 | 2009-02-10 | Новозимс А/С | Способ непрерывного культивирования водорослей |
| US20160177255A1 (en) * | 2014-05-22 | 2016-06-23 | Synthetic Genomics, Inc. | Labyrinthulomycete strains for producing docosahexaenoic acid |
Family Cites Families (13)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| JP4280158B2 (ja) * | 2002-12-27 | 2009-06-17 | 富士フイルム株式会社 | ドコサヘキサエン酸生産能を有する微生物及びその利用 |
| DE102004022015A1 (de) | 2004-05-03 | 2005-12-01 | Nutrinova Nutrition Specialties & Food Ingredients Gmbh | Fischfutter für Aquafarmen auf Basis fermentativ gewonnener mehrfach ungesättigter Fettsäuren |
| WO2007068997A2 (en) * | 2005-12-16 | 2007-06-21 | Avestha Gengraine Technologies Pvt.Ltd. | Docosahexaenoic acid (dha) producing thraustochytrid strain - sc1 |
| US8617857B2 (en) * | 2010-05-04 | 2013-12-31 | Korea Research Institute Of Bioscience And Biotechnology | Thraustochytrid-based microalgae, and method for preparing bio-oil by using same |
| FR3003872B1 (fr) * | 2013-03-29 | 2017-02-10 | Roquette Freres | Procede de stabilisation des metabolites sensibles a l'oxydation produits par les microalgues du genre chlorella |
| FR3015516B1 (fr) * | 2013-12-19 | 2016-01-22 | Roquette Freres | Procede d'enrichissement en dha de la biomasse de microalgues du genre thraustochytrium |
| KR101567308B1 (ko) | 2014-01-13 | 2015-11-09 | 재단법인 탄소순환형 차세대 바이오매스 생산전환 기술연구단 | 미세조류의 바이오매스와 지질 생산성을 증가시키기 위한 재조합 벡터 및 이의 용도 |
| US10351884B2 (en) * | 2014-10-15 | 2019-07-16 | Algaenergy, S.A. | Method for the enrichment of microalgae biomass in polyunsaturated fatty acids |
| FR3031984B1 (fr) * | 2015-01-27 | 2019-05-24 | Roquette Freres | Procede d'enrichissement de la biomasse de microalgues du genre traustochytrium en dha et en acides amines arg et glu |
| KR101654219B1 (ko) * | 2015-04-21 | 2016-09-05 | 한국생명공학연구원 | 고 함량의 다중불포화지방산을 함유하는 트라우스토키트리대 속 균주 및 이의 용도 |
| JPWO2017094804A1 (ja) * | 2015-12-01 | 2018-09-13 | 日本水産株式会社 | ドコサヘキサエン酸含有油及びその製造方法 |
| FR3045069B1 (fr) * | 2015-12-14 | 2019-01-25 | Metabolium | Procede d'enrichissement de protistes en lipides riches en acides gras polyinsatures, plus particulierement de classe omega 3, et sa mise en oeuvre pour la production de ces lipides |
| BR112019012421A2 (pt) * | 2016-12-22 | 2020-02-27 | MARA Renewables Corporation | Cultura, microrganismo eucariótico, métodos para fazer uma composição lipídica e para produzir uma biomassa rica em proteínas |
-
2018
- 2018-06-29 KR KR1020180075945A patent/KR102100650B1/ko active IP Right Grant
-
2019
- 2019-06-26 RU RU2020128068A patent/RU2754686C1/ru active
- 2019-06-26 BR BR112020019053A patent/BR112020019053B8/pt active Search and Examination
- 2019-06-26 FI FIEP19825193.6T patent/FI3760705T3/fi active
- 2019-06-26 AU AU2019292277A patent/AU2019292277B2/en active Active
- 2019-06-26 ES ES19825193T patent/ES2932536T3/es active Active
- 2019-06-26 MY MYPI2020004539A patent/MY194114A/en unknown
- 2019-06-26 US US16/971,713 patent/US11773417B2/en active Active
- 2019-06-26 CA CA3095279A patent/CA3095279C/en active Active
- 2019-06-26 EP EP19825193.6A patent/EP3760705B1/en active Active
- 2019-06-26 CN CN201980026079.6A patent/CN112513247B/zh active Active
- 2019-06-26 DK DK19825193.6T patent/DK3760705T5/da active
- 2019-06-26 WO PCT/KR2019/007697 patent/WO2020004924A1/ko unknown
- 2019-06-26 HU HUE19825193A patent/HUE060352T2/hu unknown
- 2019-06-26 JP JP2020545479A patent/JP6947941B2/ja active Active
- 2019-06-28 UY UY38286A patent/UY38286A/es unknown
- 2019-06-28 TW TW108122883A patent/TWI715088B/zh active
- 2019-07-01 AR ARP190101847A patent/AR115667A1/es unknown
-
2020
- 2020-09-17 CL CL2020002416A patent/CL2020002416A1/es unknown
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7022512B2 (en) * | 1988-09-07 | 2006-04-04 | Martek Biosciences Corporation | Schizochytrium and thraustochytrium strains for producing high concentrations of omega-3 highly unsaturated fatty acids |
| RU2346033C2 (ru) * | 2003-09-01 | 2009-02-10 | Новозимс А/С | Способ непрерывного культивирования водорослей |
| US20160177255A1 (en) * | 2014-05-22 | 2016-06-23 | Synthetic Genomics, Inc. | Labyrinthulomycete strains for producing docosahexaenoic acid |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| VIDYAH MANIKAN et al. "A new strain of docosahexaenoic acid producing microalga from Malaysian coastal waters".//Algal Research, 2015, N 9, р. 40-47. * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| CL2020002416A1 (es) | 2020-12-28 |
| EP3760705B1 (en) | 2022-11-09 |
| DK3760705T3 (da) | 2023-01-09 |
| TWI715088B (zh) | 2021-01-01 |
| BR112020019053A2 (pt) | 2021-01-12 |
| US20210002680A1 (en) | 2021-01-07 |
| AR115667A1 (es) | 2021-02-10 |
| BR112020019053B1 (pt) | 2021-12-07 |
| EP3760705A4 (en) | 2021-05-19 |
| FI3760705T3 (fi) | 2023-01-13 |
| UY38286A (es) | 2019-08-30 |
| KR20200002448A (ko) | 2020-01-08 |
| ES2932536T3 (es) | 2023-01-20 |
| AU2019292277B2 (en) | 2022-09-01 |
| HUE060352T2 (hu) | 2023-02-28 |
| DK3760705T5 (da) | 2024-06-10 |
| EP3760705A1 (en) | 2021-01-06 |
| WO2020004924A1 (ko) | 2020-01-02 |
| CA3095279A1 (en) | 2020-01-02 |
| CN112513247B (zh) | 2023-11-14 |
| KR102100650B1 (ko) | 2020-04-16 |
| US11773417B2 (en) | 2023-10-03 |
| JP6947941B2 (ja) | 2021-10-13 |
| MY194114A (en) | 2022-11-14 |
| CA3095279C (en) | 2023-04-04 |
| TW202016289A (zh) | 2020-05-01 |
| JP2021514645A (ja) | 2021-06-17 |
| BR112020019053B8 (pt) | 2022-01-25 |
| AU2019292277A1 (en) | 2021-02-04 |
| CN112513247A (zh) | 2021-03-16 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| KR102550213B1 (ko) | 신규한 스키조키트리움 속 균주 및 이를 이용한 다중불포화지방산 생산방법 | |
| RU2754686C1 (ru) | Новые штаммы микроводорослей рода Thraustochytrium и способ получения полиненасыщенных жирных кислот с их использованием | |
| US20170327851A1 (en) | Microalgae Aurantiochytrium sp. LA3 (KCTC12685BP) and Method for Preparing Bio-Oil Using the Same | |
| KR100700486B1 (ko) | 오메가-3 불포화 지방산을 생산하는 균주 및 이를 이용한오메가-3 불포화 지방산의 제조방법 | |
| KR101654219B1 (ko) | 고 함량의 다중불포화지방산을 함유하는 트라우스토키트리대 속 균주 및 이의 용도 | |
| TWI844072B (zh) | 具有高細胞內油含量的新穎裂殖壺菌屬物種（Schizochytrium sp.）品系及使用其生產含ω-3之油的方法 | |
| TWI842054B (zh) | 易於萃取細胞中之油的新穎裂殖壺菌屬物種（Schizochytrium sp.）品系及使用其生產含ω-3之油的方法 | |
| TW202319535A (zh) | 具有高細胞內油含量的新穎裂殖壺菌屬物種（Schizochytrium sp.）品系及使用其生產含ω-3之油的方法 | |
| TW202319534A (zh) | 易於萃取細胞中之油的新穎裂殖壺菌屬物種（Schizochytrium sp.）品系及使用其生產含ω-3之油的方法 | |
| CN118318031A (en) | Novel schizochytrium strain easy to extract oil in cells and method for producing omega-3-containing oil using same | |
| KR20240094204A (ko) | 신규한 스키조키트리움 속 균주 및 이를 이용한 오메가-3를 함유한 오일 생산방법 | |
| Rizwan et al. | Influence of organic carbon sources on growth and lipid content of marine green alga Dunaliella tertiolecta | |
| KR102023756B1 (ko) | 신규 트라우스토키트리드〔Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｄ〕 계 미세조류 트라우스토키트리움〔Ｔｈｒａｕｓｔｏｃｈｙｔｒｉｕｍ〕ｓｐ．ＬＡ６〔ＫＣＴＣ１２３８９ＢＰ〕및 이를 이용한 바이오오일의 생산방법 | |
| KR20160063888A (ko) | 종자박을 이용한 미세조류로부터 도코사헥사엔산 생산 방법 |