RU2739847C2 - Кислотная композиция, содержащая фикоцианин - Google Patents

Кислотная композиция, содержащая фикоцианин Download PDF

Info

Publication number
RU2739847C2
RU2739847C2 RU2018112989A RU2018112989A RU2739847C2 RU 2739847 C2 RU2739847 C2 RU 2739847C2 RU 2018112989 A RU2018112989 A RU 2018112989A RU 2018112989 A RU2018112989 A RU 2018112989A RU 2739847 C2 RU2739847 C2 RU 2739847C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
phycocyanin
seq
composition
identity
acidic
Prior art date
Application number
RU2018112989A
Other languages
English (en)
Other versions
RU2018112989A (ru
RU2018112989A3 (ru
Inventor
Оливье КАНЬЯК
Original Assignee
Ферментальж
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Family has litigation
First worldwide family litigation filed litigation Critical https://patents.darts-ip.com/?family=55178111&utm_source=google_patent&utm_medium=platform_link&utm_campaign=public_patent_search&patent=RU2739847(C2) "Global patent litigation dataset” by Darts-ip is licensed under a Creative Commons Attribution 4.0 International License.
Application filed by Ферментальж filed Critical Ферментальж
Publication of RU2018112989A publication Critical patent/RU2018112989A/ru
Publication of RU2018112989A3 publication Critical patent/RU2018112989A3/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2739847C2 publication Critical patent/RU2739847C2/ru

Links

Images

Classifications

    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L33/00Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof
    • A23L33/10Modifying nutritive qualities of foods; Dietetic products; Preparation or treatment thereof using additives
    • A23L33/17Amino acids, peptides or proteins
    • A23L33/185Vegetable proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L2/00Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Preparation or treatment thereof
    • A23L2/52Adding ingredients
    • A23L2/58Colouring agents
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P21/00Preparation of peptides or proteins
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L2/00Non-alcoholic beverages; Dry compositions or concentrates therefor; Preparation or treatment thereof
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L5/00Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
    • A23L5/40Colouring or decolouring of foods
    • A23L5/42Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners
    • A23L5/43Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using naturally occurring organic dyes or pigments, their artificial duplicates or their derivatives
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23LFOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES, NOT OTHERWISE PROVIDED FOR; PREPARATION OR TREATMENT THEREOF
    • A23L5/00Preparation or treatment of foods or foodstuffs, in general; Food or foodstuffs obtained thereby; Materials therefor
    • A23L5/40Colouring or decolouring of foods
    • A23L5/42Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners
    • A23L5/46Addition of dyes or pigments, e.g. in combination with optical brighteners using dyes or pigments of microbial or algal origin
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A61MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61PSPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P19/00Drugs for skeletal disorders
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K1/00General methods for the preparation of peptides, i.e. processes for the organic chemical preparation of peptides or proteins of any length
    • C07K1/14Extraction; Separation; Purification
    • C07K1/145Extraction; Separation; Purification by extraction or solubilisation
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C07ORGANIC CHEMISTRY
    • C07KPEPTIDES
    • C07K14/00Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
    • C07K14/405Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from algae
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12NMICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
    • C12N1/00Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
    • C12N1/12Unicellular algae; Culture media therefor
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P17/00Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms
    • C12P17/16Preparation of heterocyclic carbon compounds with only O, N, S, Se or Te as ring hetero atoms containing two or more hetero rings
    • C12P17/165Heterorings having nitrogen atoms as the only ring heteroatoms
    • CCHEMISTRY; METALLURGY
    • C12BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
    • C12PFERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
    • C12P23/00Preparation of compounds containing a cyclohexene ring having an unsaturated side chain containing at least ten carbon atoms bound by conjugated double bonds, e.g. carotenes
    • AHUMAN NECESSITIES
    • A23FOODS OR FOODSTUFFS; TREATMENT THEREOF, NOT COVERED BY OTHER CLASSES
    • A23VINDEXING SCHEME RELATING TO FOODS, FOODSTUFFS OR NON-ALCOHOLIC BEVERAGES AND LACTIC OR PROPIONIC ACID BACTERIA USED IN FOODSTUFFS OR FOOD PREPARATION
    • A23V2002/00Food compositions, function of food ingredients or processes for food or foodstuffs

Landscapes

  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Wood Science & Technology (AREA)
  • Zoology (AREA)
  • Biotechnology (AREA)
  • Genetics & Genomics (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Biochemistry (AREA)
  • Nutrition Science (AREA)
  • Food Science & Technology (AREA)
  • Polymers & Plastics (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • General Engineering & Computer Science (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Biomedical Technology (AREA)
  • Botany (AREA)
  • Cell Biology (AREA)
  • Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
  • Virology (AREA)
  • Biophysics (AREA)
  • Gastroenterology & Hepatology (AREA)
  • Analytical Chemistry (AREA)
  • Physical Education & Sports Medicine (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Coloring Foods And Improving Nutritive Qualities (AREA)
  • Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
  • Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)

Abstract

Группа изобретений относится к пищевой промышленности. Жидкая кислотная пищевая композиция содержит по меньшей мере один фикоцианин, экстрагированный из водоросли (или микроводоросли) порядка Cyanidiales, устойчивый к кислому рН, с содержанием от 2,5 до 2500 мг/л, и по меньшей мере одну неорганическую или органическую кислоту, выбранную из угольной, фосфорной, соляной, серной, перхлорной, сульфоновой, азотной, лимонной, молочной, яблочной, винной и янтарной кислот. Композиция имеет рН 4 или меньше. Фикоцианин представляет собой фикобилипротеин, апобелок которого содержит белок с SEQ ID NO: 1 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 83%-ную идентичность SEQ ID NO: 1, или SEQ ID NO: 2 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 82%-ную идентичность SEQ ID NO: 2. Газированный или негазированный напиток содержит указанную жидкую кислотную композицию. Твердая кислотная пищевая композиция содержит по меньшей мере один фикоцианин, экстрагированный из водоросли (или микроводоросли) порядка Cyanidiales, устойчивый к кислому рН, с содержанием от 0,01 до 10 мг/г, и по меньшей мере одну неорганическую или органическую кислоту, выбранную из угольной, фосфорной, соляной, серной, перхлорной, сульфоновой, азотной, лимонной, молочной, яблочной, винной и янтарной кислот. Композиция имеет рН 4 или меньше. Группа изобретений обеспечивает продукт, который имеет более стабильное окрашивание при кислом рН с течением времени. 3 н. и 17 з.п. ф-лы, 3 ил., 4 табл., 6 пр.

Description

ОБЛАСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Настоящее изобретение касается кислотной композиции, в частности кислотной пищевой композиции, содержащей по меньшей мере один стабильный при кислом рН фикоцианин.
ПРЕДШЕСТВУЮЩИЙ УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
Фикоцианины представляют собой пищевые красители, которые придают синий цвет продуктам, в которые их добавляют. Фикоцианин, экстрагированный из спирулины, является сегодня единственным природным синим пигментом, одобренным US-FDA (Управление по контролю качества пищевых продуктов и лекарственных средств США) (FR Doc No: 2013-19550). Он продается в жидком виде или в виде порошка для применения в качестве синего пигмента в пищевых продуктах.
Данный фикоцианин, имеющий происхождение из спирулины, имеет, однако, недостаток в том, что он является нестабильным при кислом рН - ниже 5 - приводящем к потере окрашивания и к выпадению в осадок, что ограничивает его применение. В лучшем случае потеря стабильности происходит при рН около 4 (сравни технические спецификации имеющего происхождение из спирулины фикоцианина Linablue®; http://www.dlt-spl.co.jp/business/en/spirulina/linablue.html).
Следовательно, имеется много кислотных пищевых композиций, а именно газированных или негазированных напитков, для которых фикоцианин, имеющий происхождение из спирулины, не может использоваться в качестве пищевого красителя или в отношении его антиоксидантных свойств.
Существует потребность в идентификации новых фикоцианинов, стабильных при кислом рН, в частности стабильных при кислом рН ниже 4. рН - устойчивость или стабильность измеряется здесь как меньше, чем 10%-ная потеря окрашивания после минимальной экспозиции 10 минут при кислом рН. рН-стабильность может быть измерена другими способами, такими как физическая характеристика фикоцианинов в кислотных композициях как функция времени.
РАСКРЫТИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Таким образом, настоящее изобретение касается кислотной композиции, в частности кислотной пищевой композиции, которая может содержать по меньшей мере один устойчивый к кислому рН фикоцианин. Преимущественно указанный фикоцианин может представлять собой фикобилипротеин, апобелок которого может содержать по меньшей мере белок с SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или его варианты.
Согласно данному изобретению фикоцианин может, в частности, представлять собой фикоцианин, экстрагированный из Galdieriaceae, более конкретно, экстрагированный из Galdieria.
Кислотная композиция согласно данному изобретению, в частности кислотная пищевая композиция, может быть либо твердой, либо пастообразной, либо жидкой, в частности, возможно, газированным напитком.
Под кислотной композицией, в частности кислотной пищевой композицией, согласно изобретению подразумевают композицию, имеющую рН 4 или меньше, чем 4, преимущественно имеющую рН от 2 до 4, более предпочтительно от 2,5 до 3,5.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Фикоцианины и аллофикоцианины представляют собой фикобилипротеины, содержащие альфа- и бета-субъединицы, состоящие из апобелка, ковалентно связанного с хромофором. Разные фикоцианины различаются по существу по последовательности их апобелков альфа- и бета-субъединиц.
Согласно конкретному воплощению изобретения кислотная композиция, в частности кислотная пищевая композиция, содержит устойчивый к кислому рН фикоцианин, апобелок α-субъединицы которого содержит SEQ ID NO: 1 (номер доступа YP_009051179.1), и апобелок β-субъединицы которого содержит SEQ ID NO: 2 (номер доступа YP_009051180.1), или их варианты.
Согласно предпочтительному воплощению изобретения кислотная композиция, в частности кислотная пищевая композиция, содержит устойчивый к кислому рН фикоцианин, апобелок α-субъединицы которого состоит из SEQ ID NO: 1 (номер доступа YP_009051179.1) и апобелок β-субъединицы которого состоит из SEQ ID NO: 2 (номер доступа YP_009051180.1) или их вариантов.
Согласно другому воплощению изобретения кислотная композиция, в частности кислотная пищевая композиция, может дополнительно содержать аллофикоцианин в комбинации с фикоцианином.
Преимущественно апобелок альфа-субъединицы указанного аллофикоцианина содержит SEQ ID NO: 3 (номер доступа YP_009051103.1), и апобелок β-субъединицы содержит SEQ ID NO: 4 (YP 009051104.1) или их варианты.
Согласно другому предпочтительному воплощению изобретения апобелок альфа-субъединицы указанного аллофикоцианина состоит из SEQ ID NO: 3 (номер доступа YP_009051103.1) и апобелок β-субъединицы состоит из SEQ ID NO: 4 (YP_009051104.1) или их вариантов.
Аминокислотный состав белка может придавать указанному белку разные свойства согласно указанному аминокислотному составу. Среди прочего, характеристики белка зависят от его аминокислотного состава и его изоэлектрической точки (pI). Изоэлектрическая точка представляет собой рН раствора, при котором белок не несет нетто заряд или, другими словами, рН, при котором молекула является электрически нейтральной, и белки имеют тенденцию притягиваться друг к другу, агрегировать и выпадать в осадок. При рН выше их изоэлектрической точки белки имеют тенденцию быть отрицательно заряженными и отталкиваться друг от друга.
Сравнительный анализ изоэлектрических точек разных белков с использованием расчетной методики, описанной Patrickios and Yamasaki (Polypeptide Amino Acid Composition and Isoelectric Point. II. Comparison between Experiment and Theory. Analytical Biochemistry. 231, 1, 1995: 82-91.1995), демонстрирует определенную корреляцию между теоретическими расчетами и устойчивостью к кислому рН, наблюдаемой экспериментально.
Исследования, проведенные заявителем, показывают то, что устойчивость фикоцианина к кислому рН может быть связана с аминокислотной последовательностью α-субъединицы указанного фикоцианина. Кроме того, отмечается то, что в пределах аминокислотной последовательности α-субъединицы фикоцианина идентичность первых 26 аминокислот, по-видимому, является особенно важной. Это особенно верно для фикоцианина, полученного посредством культивирования штаммов микроводорослей родов Cyanidioschyzon, Cyanidium или Galdieria, более конкретно - штаммов Galdieria sulphuraria, Cyanidium caldarium и Cyanidioschyzon merolae.
Таким образом, преимущественно композиция согласно данному изобретению может содержать по меньшей мере один фикоцианин, у которого по меньшей мере один апобелок, в частности апобелок α-субъединицы, может иметь низкую изоэлектрическую точку, обеспечивающую лучшую стабильность при кислом рН.
Под низкой изоэлектрической точкой подразумевается изоэлектрическая точка 3 или меньше, предпочтительно 2,5 или меньше, более предпочтительно 2,2 или меньше.
Таким образом, более преимущественно композиция согласно изобретению может содержать по меньшей мере один фикоцианин, по меньшей мере один апобелок которого, в частности апобелок α-субъединицы, может иметь изоэлектрическую точку 3 или меньше, предпочтительно 2,5 или меньше, более предпочтительно 2,2 или меньше.
Таким образом, согласно конкретному воплощению изобретения кислотная композиция, в частности кислотная пищевая композиция, может содержать по меньшей мере один фикоцианин, апобелок α-субъединицы которого, может иметь низкую изоэлектрическую точку, более конкретно, по меньшей мере один фикоцианин, апобелок α-субъединицы которого, может содержать SEQ ID NO: 1 или вариант.
Таким образом, согласно другому конкретному воплощению изобретения кислотная композиция, в частности кислотная пищевая композиция, содержит по меньшей мере один фикоцианин, апобелок α-субъединицы которого имеет низкую изоэлектрическую точку, более конкретно, по меньшей мере один фикоцианин, апобелок α-субъединицы которого состоит из SEQ ID NO: 1 или вариант.
Согласно изобретению под вариантом подразумевается последовательность белка, соответствующая эталонной последовательности, в данном случае - белку, представленному последовательностью SEQ ID NO: 1 или SEQ ID NO: 2, или SEQ ID NO: 3, или SEQ NO: 4, модифицированной посредством одной или более чем одной замены, вставки или делеции одной или более чем одной аминокислоты эталонной последовательности, и которая имеет такие же функциональные свойства, что и указанная эталонная последовательность.
Преимущественно варианты согласно изобретению имеют по меньшей мере 83%-ную идентичность последовательности с α-субъединицами фикоцианина, и по меньшей мере 82%-ную с β-субъединицами фикоцианина.
Предпочтительно варианты согласно изобретению имеют по меньшей мере 90%-ную идентичность с α (SEQ ID NO: 1) и β (SEQ ID NO: 2) субъединицами.
Аналогичным образом, для аллофикоцианинов варианты преимущественно имеют по меньшей мере 89%-ную идентичность последовательности с α-субъединицами аллофикоцианина, и по меньшей мере 90%-ную с β-субъединицами аллофикоцианина.
Специалисты в данной области знают, как измерять идентичность последовательности белка с использованием обычных способов, имеющихся в их распоряжении, а именно: программы BLASTP (http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi).
Аналогично, специалистам в данной области известно, как идентифицировать варианты указанных последовательностей и подтвердить то, что они сохраняют такие же структурные свойства посредством простого анализа стабильности при кислом рН, например, посредством проведения такого анализа, как анализ, представленный в Примере 3.
Специалисты в данной области знают, что полипептид может быть модифицирован заменой, вставкой и/или делецией по меньшей мере одной аминокислоты без существенной модификации его функции.
Например, замена аминокислоты в данном положении другой химически эквивалентной аминокислотой является известным примером варьирования последовательности, которое существенно не влияет на свойства белка.
Эти «консервативные» замены могут быть определены как замены в пределах следующих групп аминокислот:
- Ala, Ser, Thr, Pro, Gly
- Asp, Asn, Glu, Gln
- His, Arg, Lys
- Met, Leu, Ile, Val, Cys и
- Phe, Tyr, Trp
Таким образом, варианты апобелков фикоцианинов и/или аллофикоцианинов согласно данному изобретению могут иметь отличие 1-30 аминокислот относительно соответствующей эталонной последовательности, особенно в том, что касается α- и/или β-субъединиц фикоцианина, до такой степени, при которой полученный вариант сохраняет свойства эталонного белка и процентные доли гомологий/идентичностей, заявленные выше.
Более конкретно, согласно данному изобретению:
- варианты апобелка α-субъединицы фикоцианинов, полезные в кислотных композициях согласно данному изобретению, образующиеся в результате замен, вставок и/или делеций, могут иметь отличие 1-27 аминокислот относительно соответствующей эталонной последовательности, до такой степени, при которой полученный вариант сохраняет свойства эталонного белка и процентные доли идентичностей, заявленные выше;
- варианты апобелка β-субъединицы фикоцианинов, полезные в кислотных композициях согласно данному изобретению, образующиеся в результате замен, вставок и/или делеций, могут иметь отличие 1-30 аминокислот относительно соответствующей эталонной последовательности, до такой степени, при которой полученный вариант сохраняет свойства эталонного белка и процентные доли идентичностей, заявленные выше;
- варианты апобелка α-субъединицы аллофикоцианинов, полезные в кислотных композициях согласно данному изобретению, образующиеся в результате замен, вставок или делеций, могут иметь отличие 1-24 аминокислот относительно соответствующей эталонной последовательности, до такой степени, при которой полученный вариант сохраняет свойства эталонного белка и процентные доли идентичностей, заявленные выше;
- варианты апобелка β-субъединицы аллофикоцианинов, полезные в кислотных композициях согласно данному изобретению, образующиеся в результате замен, вставок и/или делеций, могут иметь отличие 1-20 аминокислот относительно соответствующей эталонной последовательности, до такой степени, при которой полученный вариант сохраняет свойства эталонного белка и процентные доли идентичностей, заявленные выше.
Более конкретно, согласно данному изобретению и независимо от рассматриваемой эталонной последовательности (α- и/или β-субъединица фикоцианина и/или α- и/или β-субъединица аллофикоцианина), варианты указанных субъединиц могут преимущественно иметь отличие 1-15 аминокислот, предпочтительно отличие 1-10 аминокислот, в частности, отличие 1 или 2, или 3, или 4, или 5, или 6, или 7, или 8, или 9, или 10 аминокислот относительно соответствующей эталонной последовательности, до такой степени, при которой полученный вариант сохраняет свойства эталонного белка и процентные доли идентичностей, заявленные выше.
Согласно данному изобретению фикоцианин или его варианты, полезные в кислотных композициях, в частности в кислотных пищевых композициях, одни или в смеси с аллофикоцианином или его вариантами, могут быть получены посредством культивирования природного организма, экспрессирующего в природе интересующий фикоцианин или его вариант, или посредством культивирования организма, генетически трансформированного для экспрессии интересующего фикоцианина или его варианта, отобранного по его способности продуцировать указанный фикоцианин или его варианты.
Типичные природные организмы, экспрессирующие в природе фикоцианин, полезный в композициях согласно данному изобретению, или его интересующий вариант, включают водоросли (или микроводоросли) порядка Cyanidiales.
Порядок Cyanidiales включает семейства Cyanidiaceae и Galdieriaceae, которые сами подразделяются на роды Cyanidioschyzon, Cyanidium и Galdieria, члены которых включают, среди прочих, виды Cyanidioschyzon merolae 10D, Cyanidioschyzon merolae DBV201, Cyanidium caldarium, Cyanidium daedalum, Cyanidium maximum, Cyanidium partitum, Cyanidium rumpens, Galdieria daedala, Galdieria maxima, Galdieria partita and Galdieria sulphuraria. Можно сделать конкретное упоминание штамма Galdieria sulphuraria (также именуемого Cyanidium caldarium) UTEX#2919.
Таким образом, согласно одному воплощению изобретения кислотная композиция, особенно кислотная пищевая композиция, содержит устойчивый к кислому рН фикоцианин из природных организмов, таких как водоросли или микроводоросли порядка Cyanidiales, в частности из природных организмов семейств Cyanidiaceae или Galdieriaceae.
Более конкретно, согласно данному изобретению кислотная композиция, в частности кислотная пищевая композиция, содержит устойчивый к кислому рН фикоцианин из природных организмов, которые принадлежат к родам Cyanidioschyzon, Cyanidium, Galdieria, преимущественно выбранным из видов рода Cyanidium и Galdieria.
Даже более конкретно, согласно данному изобретению кислотная композиция, в частности кислотная пищевая композиция, содержит устойчивый к кислому рН фикоцианин из природных организмов, выбранных из видов Cyanidioschyzon merolae 10D, Cyanidioschyzon merolae DBV201, Cyanidium caldarium, Cyanidium daedalum, Cyanidium maximum, Cyanidium partitum, Cyanidium rumpens, Galdieria daedala, Galdieria maxima, Galdieria partita, Galdieria sulphuraria.
Предпочтительная форма кислотной композиции, в частности кислотной пищевой композиции согласно данному изобретению, содержит устойчивый к кислому рН фикоцианин из природных микроводорослей, таких как Galdieria sulphuraria, Cyanidium caldarium или Cyanidioschyzon merolae. Более предпочтительно, устойчивый к кислому рН фикоцианин происходит из природной микроводоросли, выбранной из Galdieria sulphuraria и Cyanidium caldarium.
В качестве примера организма, трансформированного для экспрессии интересующего фикоцианина или его варианта, выбранного по его способности продуцировать указанный фикоцианин или его варианты, можно упомянуть микроорганизм, трансформированный таким образом, чтобы экспрессировать апобелок SEQ ID NO: 1 и/или SEQ ID NO: 2, и/или SEQ ID NO: 3, и/или SEQ ID NO: 4, причем указанный микроорганизм также содержит биосинтетические пути, необходимые для продукции хромофора и для его связывания с апобелком. В частности, можно упомянуть дрожжи в качестве микроорганизмов, которые могут быть модифицированы для продукции фикоцианина и/или аллофикоцианина, используемых в пищевых композициях согласно изобретению.
Специалисты в данной области не будут иметь трудностей в нахождении в предшествующем уровне техники описания способов культивирования природных и/или модифицированных организмов, которые могут продуцировать фикоцианин, полезный в композициях согласно данному изобретению.
Например, культивирование Cyanidiaceae или Galdieriaceae из порядка Cyanidiales, хорошо известных специалистам в данной области, можно преимущественно проводить в миксотрофном режиме, причем свет обычно необходим для биосинтеза пигментов.
Такое промышленное культивирование преимущественно может проводиться в ферментерах большого объема (т.е. 1000-литровых, 10000-литровых, 20000-литровых, 100000-литровых). Культивирование может проводиться при условиях, известных специалистам в данной области. Оно может проводиться в периодическом режиме, режиме с подпиткой или в непрерывном режиме.
Фикоцианин, полезный в композициях согласно данному изобретению, более конкретно может быть экстрагирован из биомассы, полученной культивированием водоросли порядка Cyanidiales, как определено выше, культивированной в миксотрофном режиме со светом, имеющим длину волны от 400 нм до 550 нм, преимущественно от 420 до 500 нм, предпочтительно от 430 до 480 нм, более предпочтительно - 455 нм. Он может представлять собой «белый» свет, имеющий широкий спектр, включающий свет указанной длины волны. Он также преимущественно может представлять собой свет узкого спектра, состоящий из указанных длин волн.
Такой способ промышленного получения биомассы Cyanidiales в миксотрофном режиме и биомасса, полученная таким образом, описываются, в частности, в патентной заявке FR 15 59072, поданной 25 сентября 2015 г., содержание которой включено сюда посредством ссылки.
Целью данного изобретения является предложение композиции, в которой фикоцианин является стабильным при кислом рН. Под кислотной композицией согласно данному изобретению подразумевается любая композиция, содержащая неорганическую или органическую кислоту и фикоцианин. Указанная композиция, которая имеет кислый рН, и в которую включен устойчивый к кислому рН фикоцианин, может быть жидкой, текучей или вязкой, пастообразной или твердой.
Для водных жидких композиций рН измеряется обычным способом. Для неводных жидких композиций или для пастообразных или твердых композиций рН измеряется после растворения указанной композиции в достаточном количестве воды для растворения содержащихся в ней растворимых соединений, включающих неорганические или органические кислоты и фикоцианин.
Преимущественно композиция согласно данному изобретению представляет собой водную жидкую композицию, возможно в виде геля, или пастообразную, или твердую композицию, разработанную для растворения в водном растворе или в твердой или пастообразной композиции, содержащей воду. Согласно другому преимущественному воплощению изобретения кислотная композиция представляет собой пастообразную или твердую композицию, предназначенную для применения и/или хранения во влажной среде.
Неорганические или органические кислоты, полезные в композициях согласно данному изобретению, являются хорошо известными специалистам в данной области. Типичные неорганические кислоты включают, в частности, угольную, фосфорную, соляную, серную, перхлорную, сульфоновую и азотную кислоты. Типичные органические кислоты включают, в частности, лимонную, молочную, яблочную, винную, янтарную кислоты, преимущественно лимонную кислоту.
Под кислотной пищевой композицией согласно данному изобретению подразумевается любая композиция, разработанная для приема внутрь людьми или животными, и которая попадает в пределы предшествующего определения. Нутрицевтические кислотные композиции должны рассматриваться как попадающие в пределы определения кислотных пищевых композиций в пределах контекста данного изобретения.
Кислотные пищевые композиции согласно данному изобретению хорошо известны специалистам в данной области. Они могут содержать носитель, который может содержать структурные компоненты, ассоциированные с активными соединениями, идентифицированными по их пищевой ценности или по их полезным для здоровья свойствам, которые приносят пользу человеку или животным. Кислотная пищевая композиция согласно данному изобретению также может содержать пищевые добавки, такие как структурирующие агенты, корригенты, консерванты или любые компоненты, хорошо известные специалистам в данной области. Носитель может содержать воду и/или белки, и/или жиры, и/или волокна, и/или сахара. Компоненты носителя могут иметь только структурные свойства, но они обычно известны за их пищевую ценность.
Кислотная пищевая композиция по изобретению может быть готовой к применению или находиться в форме пищевой добавки, подлежащей добавлению в твердый, пастообразный или жидкий препарат для того, чтобы приготовить съедобную пищу.
Для пищевых композиций кислота предпочтительно будет выбрана из списка подкислителей, одобренных для пищевых продуктов, в частности, угольной, фосфорной, лимонной, яблочной, винной и молочной кислот, более конкретно - лимонной кислоты.
В том, что касается непищевых кислотных композиций по изобретению, они могут представлять собой, среди прочего, фармацевтические, ветеринарные или косметические композиции и дополнительно содержат любые добавки и/или активные агенты, известные и применяемые в таких композициях.
В твердой, жидкой или пастообразной кислотной композиции по изобретению фикоцианин может быть включен, например, в форме порошка. Указанная кислотная композиция, в частности указанная кислотная пищевая композиция, таким образом, может находиться в любой известной традиционной форме, такой как кремы, гели, пены, пасты и т.д. Типичные твердые пищевые композиции включают торты или печенье, сухие пищевые продукты для готовки, растворимые порошки, желеобразные твердые композиции (желе), пены и т.д.
Согласно данному изобретению указанная жидкая кислотная композиция может представлять собой водную композицию, в которой растворяется фикоцианин. Она может находиться в форме готовой к применению композиции или жидкого концентрата для разведения, а именно: для приема внутрь или для добавления в твердый пищевой продукт либо для его приготовления, либо для его приема внутрь, например, концентрированная жидкая композиция «покрытия», подлежащая нанесению на торт для придания ему цвета. Среди данных концентрированных композиций можно упомянуть сиропы, возможно содержащие спирт.
Жидкая кислотная композиция по изобретению может иметь варьирующую вязкость и, возможно, содержит такие добавки, как агенты, придающие вязкость, гелеобразующие агенты и другие структурирующие добавки, известные специалистам в данной области и типичные для приготовления жидких пищевых композиций.
Согласно конкретному воплощению изобретения жидкая пищевая композиция возможно может представлять собой кислотный газированный напиток. Можно конкретно упомянуть газированные воды, соки, спортивные напитки, энергетические напитки, восстановительные напитки и т.д. Составы данных напитков хорошо известны специалистам в данной области и могут, в частности, содержать сахара, неорганические соли, пищевые добавки, растворенный газ и т.д. Напиток согласно данному изобретению представляет собой традиционный кислотный напиток, в котором обычно используемый краситель был полностью или частично заменен устойчивым к кислому рН фикоцианином согласно данному изобретению.
Согласно данному изобретению содержание фикоцианина в композициях согласно данному изобретению может согласоваться с практиками специалистов в данной области.
Например, когда фикоцианин будет использоваться для окрашивания кислотной композиции, тогда содержание фикоцианина в указанной композиции может согласоваться с практикой специалистов в данной области в том, что касается окрашивания.
В жидкой кислотной композиции в пределах контекста данного изобретения содержание фикоцианина может составлять от 2,5 мг/л до 2500 мг/л, предпочтительно от 25 мг/л до 300 мг/л.
В жидкой композиции типа готового к применению напитка содержание фикоцианина обычно может составлять от 25 мг/л до 300 мг/л, предпочтительно от 50 мг/л до 100 мг/л.
В концентрированной жидкой композиции для разведения перед применением, такой как сироп, содержание фикоцианина обычно может составлять от 250 мг/л до 2500 мг/л, предпочтительно от 500 мг/л до 1000 мг/л.
В твердой композиции содержание фикоцианина обычно может составлять от 0,01 мг/г до 10 мг/г, предпочтительно от 0,1 мг/г до 5,0 мг/г, более предпочтительно - от 0,25 мг/г до 2,5 мг/г.
Одно из преимуществ данного изобретения, как можно видеть в следующих примерах, состоит в том, что окрашивание, предоставляемое устойчивыми к кислотному рН фикоцианинами, является более стабильным с течением времени.
Другие аспекты и характеристики изобретения станут очевидными из прочтения примеров и графических материалов.
ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
На Фиг. 1 описаны аминокислотные последовательности апобелков фикоцианина и аллофикоцианина Galdieria sulphuraria:
SEQ ID NO 1: YP_009051179.1: α-субъединица фикоцианина; SEQ ID NO 2: YP_009051180.1: β-субъединица фикоцианина; SEQ ID NO 3: YP_009051103.1: α-субъединица аллофикоцианина; SEQ ID NO 4: YP_009051104.1: β-субъединица аллофикоцианина; На Фиг. 2 представлена кривая стабильности как функция рН фикоцианинов, экстрагированных из Galdieria sulphuraria (UTEX2919) и Cyanidioschyzon merolae (ACUF 199), последовательность апобелка которых состоит из SEQ ID NO: 1 или варианта, по отношению к кривой стабильности фикоцианина Linablue®, полученного из спирулины.
Figure 00000001
: фикоцианин из Galdieria sulphuraria (UTEX#2919)
Figure 00000002
: фикоцианин из Cyanidioschyzon merolae (ACUF 199)
Figure 00000003
: Lina Blue®: фикоцианин из Spirulina platensis (Arthrospira platensis) (данные, полученные с веб-сайта http://www.dlt-spl.co.jp/business/en/spirulina/linablue.html, демонстрирующие значения рН, при которых появляется выпадение фикоцианина в осадок).
На Фиг. 3 представлено изменение окрашивания кислотного напитка, содержащего фикоцианин, с течением времени. НО, Н2, Н4 и Н6: неделя 0, 2, 4 и 6.
ПРИМЕРЫ
Пример 1: продукция и экстракция фикоцианина из Galdieria sulphuraria UTEX#2919
Материалы и методы
Штамм: Galdieria sulphuraria (также именуемая Cyanidium caldarium) UTEX#2919 Культуральная среда
Миксотрофия: 30 г/л глицерина, 8 г/л (NH4)2SO4, 1 г/л KH2PO4, 716 мг/л MgSO4, 44 мг/л CaCl2, 3 мл/л маточного раствора Fe-EDTA (6,9 г/л FeSO4 и 9,3 г/л EDTA-Na2) и 4 мл/л раствора металлов-микроэлементов (3,09 г/л EDTA-Na2; 0,080 г/л CuSO4, 5H2O; 2,860 г/л H3BO3; 0,040 г/л NaVO3, 4H2O; 1,820 г/л MnCl2; 0,040 г/л CoCl2,6H2O; 0,220 г/л ZnSO4,7H2O; 0,017 г/л Na2SeO3; 0,030 г/л (NH4)6Mo7O24, 4H2O).
Культуральные условия:
Культивирования проводят в реакторах с полезным объемом от 1 до 2 л с автоматическими системами, контролируемыми компьютером. рН культуры регулируют добавлением основания (14%-ный раствор аммиака (масс.NH3/масс.) и/или кислоты (4 н. раствор серной кислоты). Останавливают температуру культуры 37°С. Культуру освещают отражателями, оснащенными системой белых LED (светодиоды) или синих LED (455 нм), способом, аналогичным способу, описанному в патенте WO 2014/174182. Отслеживание роста клеток осуществляют в разные моменты времени посредством измерения поглощения при 800 нм, а измерение сухой массы осуществляют посредством фильтрования.
Характеристики эффективности культуры в конце роста обобщают в следующей Таблице 1:
Figure 00000004
Измерения внутриклеточного содержания фикоцианина на грамм сухого вещества проводили с использованием экстракции и способа анализа, описанного Moon и коллегами [Moon et al, Korean J. Chem. Eng., 2014, 1-6], с заменой фосфатного буфера водой.
Пример 2: экстракция фикоцианинов
Штаммы Galdieria sulphuraria (UTEX#2919) и/или Cyanidioscyizon merolae (ACUF 199) культивировали при условиях примера 1.
Фикоцианин затем экстрагируют согласно модификации протокола, описанного Moon et al., 2014 (в цитируемой работе). Указанная модификация заключается в замене фосфатного буфера, используемого для солюбилизации фикоцианина, деминерализованной водой.
Таким образом, получают экстракт (также именуемый «фикоцианиновый экстракт» или «неочищенный экстракт»), который, помимо интересующего фикоцианина, содержит другие водорастворимые белки. Указанный фикоцианиновый экстракт может иметь несколько возможных характеристик, в зависимости от использованного способа экстракции и/или очистки. Например, неочищенный экстракт будет содержать большее количество водорастворимых белков, отличных от фикоцианина, чем количество, обнаруженное в очищенном экстракте. Под очищенным экстрактом подразумевают неочищенный экстракт, из которого, при сохранении фикоцианина, была удалена часть водорастворимых белков посредством ультрафильтрации, фильтрования на полых волокнах или ионообменной хроматографии - способов, известных специалистам в данной области.
Индекс чистоты традиционно выражается расчетом отношения поглощения раствора при 618 нм (специфичное поглощение фикоцианина) к поглощению при 280 нм - специфичному поглощению ароматических аминокислот, дающему представление об общем уровне белка. Чем ниже данное отношение, тем больше количество белков, отличных от фикоцианина, в растворе.
Неочищенный экстракт очищали с использованием фильтрационной системы с тангенциальным потоком KrosFlo® от Spectrum® Labs.
Figure 00000005
Таблица 2. Измерение индекса чистоты фикоцианинового экстракта до и после очистки.
Пример 3: исследование стабильности фикоцианина, экстрагированного из штаммов Galdieria sulphuraria (UTEX#2919), Cyanidioschyzon merolae (ACUF199) и Spirulina (Arthrospira) platensis, как функция рН
Штаммы Galdieria sulphuraria (UTEX#2919) и Cyanidioschyzon merolae (ACUF 199) культивировали при условиях примера 1.
Анализы проводят, принимая в качестве контроля данные имеющегося в продаже продукта LinaBlue® (http://www.dlt-spl.co.jp/business/en/spirulina/linablue.html) от компании DIC Lifetec Co., Ltd. (Токио, Япония), который представляет собой фикоцианин, экстрагированный из Spirulina (Arthrospira) platensis.
Данные анализы проводили с фикоцианинами, полученными в примере 2 и имеющими индекс чистоты 2,12. Измерение голубого окрашивания осуществляют измерением поглощения при 618 нм с использованием спектрофотометра Ultraspec 2100 pro (Amersham). Процент потери окрашивания рассчитывают относительно измерению поглощения образца при контрольных условиях (рН 6).
Для анализа устойчивости при кислых условиях рН постепенно понижают добавлением 5%-ного раствора лимонной кислоты (Sigma 251275) в препарат фикоцианина. Для каждого значения рН отбирают образец раствора фикоцианина, и измеряют его поглощение при 618 нм через 10 минут после снижения рН до желательного значения.
Результаты данных анализов представлены на Фиг. 2: Фикоцианин, экстрагированный из Galdieria sulphuraria (UTEX#2919)
Figure 00000006
демонстрирует очень хорошую устойчивость к рН по сравнению с фикоцианином спирулины, с меньше, чем 10% потери пигментации вплоть до рН 2,75 (98,25% его окрашивания при рН 3, 92,4% при рН 2,75), причем потеря увеличивалась при рН 2,5 (79% при рН 2,5; 75% при рН 2,25; 46% при рН 2).
Фикоцианин, экстрагированный из штамма Cyanidioschyzon merolae (ACUF 199)
Figure 00000007
демонстрирует хорошую устойчивость к рН по сравнению с фикоцианином спирулины, с более чем 90% его окрашивания при рН 3; 70% при рН 2,75; 40% при рН 2,5; 23% при рН 2,25; 20% при рН 2.
Фикоцианин, экстрагированный из штамма Spirulina platensis
Figure 00000008
демонстрирует только 90% его окрашивания при рН 4, 80% при рН 3,8; 60% при рН 3,6; 38%) при рН 3,4. Фикоцианин, экстрагированный из Spirulina platensis, начинает выпадать в осадок при рН 3,8.
В заключение, фикоцианины Galdieria sulphuraria или Cyanidioschyzon merolae являются более устойчивыми к кислому рН, чем фикоцианин, экстрагированный из спирулины.
Пример 4 - сравнительный анализ последовательностей апобелков фикоцианина и аллофикоцианина из разных микроводорослей и измерение их изоэлектрических точек
Для того чтобы идентифицировать возможную причину увеличения устойчивости к кислому рН, проводили сравнение последовательностей α- и β-субъединиц фикоцианинов и аллофикоцианинов, продуцируемых разными микроорганизмами, в частности микроводорослями, с использованием программы BLASTP, применение которой хорошо известно специалистам в данной области, на основе опубликованных последовательностей, доступных в базах данных (см. номер доступа). Сравнение делают относительно последовательности апобелка соответствующей субъединицы штамма Galdieria sulphuraria.
В то же самое время, изоэлектрическая точка апобелков α- и β-субъединиц фикоцианинов и аллофикоцианинов, для которых было проведено сравнение последовательности, была определена расчетной методикой, описанной Patrickios and Yamasaki (1995).
Фикоцианин и аллофикоцианин, продуцированные штаммом Galdieria sulphuraria, служат в данных исследованиях в качестве контроля.
Результаты
Результаты сравнений последовательности и расчетов pI представлены в таблицах 3 и 4 ниже:
Figure 00000009
Таблица 3. Сравнение последовательностей апобелков альфа- и бета-субъединиц фикоцианина из разных организмов. Показана изоэлектрическая точка каждого белка (Patrickios and Yamasaki, 1995).
Figure 00000010
Figure 00000011
Таблица 4. Сравнение последовательностей апобелков альфа- и бета-субъединиц аллофикоцианина из разных организмов. Показана изоэлектрическая точка каждого белка (Patrickios and Yamasaki, 1995).
Сравнения последовательности и изоэлектрической точки показывают то, что наиболее устойчивые к кислому рН α-субъединицы фикоцианинов имеют изоэлектрическую точку меньше 3 и более высокий процент идентичности с последовательностью Galdieria sulphuraria.
Пример 5: стабильность в напитке с течением времени
Анализ стабильности в кислой среде с течением времени для фикоцианина, экстрагированного из штамма UTEX#2919, проводили посредством добавления данного фикоцианина в лимонадный напиток (рН 2,95; как описано в примере 6: напиток 1). После добавления 0,025% фикоцианина, последовательность апобелка которого состоит из варианта SEQ ID NO: 1, данный напиток подвергали воздействию цикла дня/ночи (16 ч/8 ч) с искусственным освещением в течение 6 недель при комнатной температуре.
С течением времени осуществляли регулярный отбор образцов для измерения поглощения при 618 нм. Аликвоту отбирают в недели 0 (Н0), 2 (Н2), 4 (Н4) и 6 (Н6), и поглощение при 618 нм измеряют с использованием спектрофотометра Ultraspec 2100 pro (Amersham) для того, чтобы определять точку 100%-ного окрашивания. Остаточное окрашивание выражают как процентную долю исходного контрольного значения.
На Фиг. 3 показаны результаты данного эксперимента. Отмечается постоянная потеря окрашивания с течением на протяжении долговременного воздействия света. Однако после 6 недель воздействия сохраняется больше, чем 60% окрашивания.
Пример 6: примеры кислотных напитков в жидком виде, содержащих фикоцианин
Напитки, содержащие фикоцианин, могут иметь следующий состав:
Напиток 1 - газированный напиток:
- газированная вода qs (достаточное количество до) 1 л
- сахара 70 г
- лимонная кислота 1,5 г
- природный органический корригент от 4 до 8 г
- фикоцианиновый экстракт, полученный
в примере 2 qs 100 мг фикоцианина
рН данного напитка составляет 2,95.
Напиток 2 - оздоровительный напиток для спортсменов, улучшающий общее состояние организма:
- родниковая вода qs 1 л
- глюкоза 20 г
- фруктоза 10 г
- лимонная кислота 2,7 г
- цитрат натрия 1,87 г
- цитрат калия 0,327 г
- хлорид магния 2,5 мг
- хлорид кальция 3 мг
- природный органический корригент 4 г
- фикоцианиновый экстракт, полученный
в примере 2 qs 150 мг фикоцианина
рН данного напитка составляет 3,5
Пример 6: кислотный напиток в форме растворимого порошка, содержащий фикоцианин
- сахара от 70 до 100 г
- лимонная кислота от 1 до 1,5 г
- природный органический корригент от 4 до 8 г
- фикоцианиновый экстракт, полученный
в примере 2 qs 250 мг фикоцианина
Полученный таким образом порошок (от 75 до 110 г) может быть растворен в 1 л воды с получением кислотного напитка синего цвета.
Пример 7: твердая кислотная композиция, содержащая фикоцианин:
кислотные конфеты:
- вода qs 1 кг
- сахара 800 г
- лимонная кислота от 1 до 2 г
- фикоцианиновый экстракт, полученный
в примере 2 qs 2500 мг фикоцианина
ССЫЛКИ
- Moon et al, Korean J. Chem. Eng., 2014, 1-6
- Patrickios et Yamasaki, Polypeptide Amino Acid Composition and Isoelectric Point. II. Comparison between Experiment and Theory. Analytical Biochemistry. 231, 1, 1995: 82-91
- FR Doc No: 2013-19550
- WO 2014/174182
- FR 15 59072, поданная 25 сентября 2015 г.
- http://www.dlt-spl.co.jp/business/en/spirulina/linablue.html
- http://blast.ncbi.nlm.nih.gov/Blast.cgi

Claims (26)

1. Кислотная пищевая композиция, содержащая по меньшей мере один фикоцианин, устойчивый к кислому рН, и по меньшей мере одну неорганическую или органическую кислоту, выбранную из угольной, фосфорной, соляной, серной, перхлорной, сульфоновой, азотной, лимонной, молочной, яблочной, винной и янтарной кислот, где указанная пищевая композиция является жидкой, отличающаяся тем, что:
- указанная кислотная пищевая композиция имеет рН 4 или меньше и содержание фикоцианина составляет от 2,5 мг/л до 2500 мг/л,
- указанный фикоцианин представляет собой фикобилипротеин, апобелок которого содержит белок с SEQ ID NO: 1 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 83%-ную идентичность SEQ ID NO: 1, или SEQ ID NO: 2 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 82%-ную идентичность SEQ ID NO: 2, и
- указанный фикоцианин представляет собой фикоцианин, экстрагированный из водоросли (или микроводоросли) порядка Cyanidiales.
2. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что кислота представляет собой лимонную кислоту.
3. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что апобелок α-субъединицы указанного фикоцианина содержит SEQ ID NO: 1 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 83%-ную идентичность SEQ ID NO: 1, и апобелок β- субъединицы указанного фикоцианина содержит SEQ ID NO: 2 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 82%-ную идентичность SEQ ID NO: 2.
4. Композиция по п. 3, отличающаяся тем, что указанный апобелок α-субъединицы состоит из SEQ ID NO: 1 или последовательности белка, имеющей по меньшей мере 83%-ную идентичность SEQ ID NO: 1, и апобелок β-субъединицы состоит из SEQ ID NO: 2 или последовательности белка, имеющей по меньшей мере 82%-ную идентичность SEQ ID NO: 2.
5. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит аллофикоцианин в комбинации с фикоцианином, причем апобелок α-субъединицы указанного аллофикоцианина содержит SEQ ID NO: 3 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 89%-ную идентичность SEQ ID NO: 3, и апобелок β-субъединицы указанного аллофикоцианина содержит SEQ ID NO: 4 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 90%-ную идентичность SEQ ID NO: 4.
6. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что фикоцианин представляет собой фикоцианин, экстрагированный из водоросли (или микроводоросли) семейства Cyanidiaceae или семейства Galdieriaceae.
7. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что фикоцианин представляет собой фикоцианин, экстрагированный из водоросли (или микроводоросли) родов Cyanidioschyzon, Cyanidium или Galdieria.
8. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что она имеет рН примерно от 2,5 до 3,5.
9. Композиция по п. 1, отличающаяся тем, что апобелок α-субъединицы указанного фикоцианина имеет изоэлектрическую точку меньше 3.
10. Газированный или негазированный напиток, отличающийся тем, что содержит жидкую кислотную композицию по п. 1.
11. Кислотная пищевая композиция, содержащая по меньшей мере один фикоцианин, устойчивый к кислому рН, и по меньшей мере одну неорганическую или органическую кислоту, выбранную из угольной, фосфорной, соляной, серной, перхлорной, сульфоновой, азотной, лимонной, молочной, яблочной, винной и янтарной кислот, где указанная пищевая композиция является твердой, отличающаяся тем, что:
- указанная кислотная пищевая композиция имеет рН 4 или меньше и содержание фикоцианина составляет от 0,01 мг/г до 10 мг/г,
- указанный фикоцианин представляет собой фикобилипротеин, апобелок которого содержит белок с SEQ ID NO: 1 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 83%-ную идентичность SEQ ID NO: 1, или SEQ ID NO: 2 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 82%-ную идентичность SEQ ID NO: 2, и
- указанный фикоцианин представляет собой фикоцианин, экстрагированный из водоросли (или микроводоросли) порядка Cyanidiales.
12. Композиция по п. 11, отличающаяся тем, что кислота представляет собой лимонную кислоту.
13. Композиция по п. 11, отличающаяся тем, что содержание фикоцианина составляет от 0,25 мг/г до 2,5 мг/г.
14. Композиция по п. 11, отличающаяся тем, что апобелок α-субъединицы указанного фикоцианина содержит SEQ ID NO: 1 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 83%-ную идентичность SEQ ID NO: 1, и апобелок β- субъединицы указанного фикоцианина содержит SEQ ID NO: 2 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 82%-ную идентичность SEQ ID NO: 2.
15. Композиция по п. 13, отличающаяся тем, что указанный апобелок α-субъединицы состоит из SEQ ID NO: 1 или последовательности белка, имеющей по меньшей мере 83%-ную идентичность SEQ ID NO: 1, и апобелок β-субъединицы состоит из SEQ ID NO: 2 или последовательности белка, имеющей по меньшей мере 82%-ную идентичность SEQ ID NO: 2.
16. Композиция по п. 11, отличающаяся тем, что она дополнительно содержит аллофикоцианин в комбинации с фикоцианином, причем апобелок α-субъединицы указанного аллофикоцианина содержит SEQ ID NO: 3 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 89%-ную идентичность SEQ ID NO: 3, и апобелок β-субъединицы указанного аллофикоцианина содержит SEQ ID NO: 4 или последовательность белка, имеющую по меньшей мере 90%-ную идентичность SEQ ID NO: 4.
17. Композиция по п. 11, отличающаяся тем, что фикоцианин представляет собой фикоцианин, экстрагированный из водоросли (или микроводоросли) семейства Cyanidiaceae или семейства Galdieriaceae.
18. Композиция по п. 11, отличающаяся тем, что фикоцианин представляет собой фикоцианин, экстрагированный из водоросли (или микроводоросли) родов Cyanidioschyzon, Cyanidium или Galdieria.
19. Композиция по п. 12, отличающаяся тем, что она имеет рН примерно от 2,5 до 3,5.
20. Композиция по п. 12, отличающаяся тем, что апобелок α-субъединицы указанного фикоцианина имеет изоэлектрическую точку меньше 3.
RU2018112989A 2015-09-25 2016-09-22 Кислотная композиция, содержащая фикоцианин RU2739847C2 (ru)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
FR1559072 2015-09-25
FR1559072A FR3041653B1 (fr) 2015-09-25 2015-09-25 Procede de culture d'algues, particulierement d'algues rouges unicellulaires (arus)
FR1653525A FR3041505B1 (fr) 2015-09-25 2016-04-21 Composition acide comprenant au moins une phycocyanine stable a ph acide
FR1653525 2016-04-21
PCT/EP2016/072583 WO2017050918A1 (fr) 2015-09-25 2016-09-22 Composition acide comprenant une phycocyanine

Publications (3)

Publication Number Publication Date
RU2018112989A RU2018112989A (ru) 2019-10-25
RU2018112989A3 RU2018112989A3 (ru) 2020-01-31
RU2739847C2 true RU2739847C2 (ru) 2020-12-29

Family

ID=55178111

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU2018112989A RU2739847C2 (ru) 2015-09-25 2016-09-22 Кислотная композиция, содержащая фикоцианин

Country Status (10)

Country Link
US (2) US20180271119A1 (ru)
EP (2) EP3353282A1 (ru)
JP (4) JP6976933B2 (ru)
CN (2) CN116349890B (ru)
BR (1) BR112018005928A2 (ru)
CA (1) CA2998973A1 (ru)
FR (2) FR3041653B1 (ru)
MX (1) MX386418B (ru)
RU (1) RU2739847C2 (ru)
WO (2) WO2017050917A1 (ru)

Families Citing this family (26)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
FR3041653B1 (fr) 2015-09-25 2017-12-29 Fermentalg Procede de culture d'algues, particulierement d'algues rouges unicellulaires (arus)
FR3044679B1 (fr) 2015-12-04 2022-06-10 Fermentalg Procede de culture d'algues, particulierement d'algues rouges unicellulaires (arus), avec du lactose
JP6399254B2 (ja) * 2016-06-28 2018-10-03 Dic株式会社 色素材及び色素材の製造方法
FR3064635B1 (fr) * 2017-03-30 2021-07-23 Fermentalg Purification des phycobiliproteines
FR3067568B1 (fr) * 2017-06-15 2021-08-13 Algama Procede d’obtention d’une boisson alimentaire stabilisee a base de jus de fruits comprenant des extraits de microalgues et/ou des cyanobacteries
FR3070164B1 (fr) 2017-08-18 2021-12-24 Fermentalg Reacteur a dispositif d'eclairage et de chauffage integre
EP3719114A4 (en) * 2017-11-28 2021-08-18 Japan Science and Technology Agency NEW MICROALGAE AND ASSOCIATED USE
FR3081880B1 (fr) 2018-05-31 2024-12-20 Fermentalg Procede de culture d'algues rouges unicellulaires (aru) sur un melange de substrats
FR3085386B1 (fr) 2018-09-05 2022-10-07 Fermentalg Procede d'enrichissement d'une biomasse en proteines
EP3777559B1 (en) * 2018-12-17 2022-10-12 DIC Corporation Aqueous colorant material solution, production method for aqueous colorant material, and blue-colored beverage
FR3091703B1 (fr) 2019-01-11 2021-02-12 Fermentalg Procédé d’extraction de phycocyanines
FR3091640B1 (fr) 2019-01-11 2021-06-11 Fermentalg Procédé de purification de phycocyanines
EP3692806A1 (en) 2019-02-11 2020-08-12 GNT Group B.V. A colored beverage having a neutral ph
EP3692804A1 (en) 2019-01-18 2020-08-12 GNT Group B.V. A colored beverage having a low ph
FR3092586A1 (fr) 2019-02-08 2020-08-14 Fermentalg Procédé optimisé d’exploitation industrielle d’algues rouges unicellulaires
BE1027115B1 (fr) * 2019-03-12 2020-10-12 B Blue Nutraceuticals S A Composition liquide comprenant de la phycocyanine
US20230113048A1 (en) 2020-02-14 2023-04-13 Fermentalg Reactor having an optimized lighting device
GB202006886D0 (en) 2020-05-11 2020-06-24 Univ Sheffield Method of culturing algae
EP3939437A1 (en) 2020-07-17 2022-01-19 GNT Group B.V. A composition comprising spirulina extract
WO2022045109A1 (ja) * 2020-08-24 2022-03-03 Dic株式会社 崩壊性単細胞性紅藻の製造方法、及び崩壊性単細胞性紅藻用培地
WO2022045110A1 (ja) * 2020-08-24 2022-03-03 Dic株式会社 1倍体単細胞性紅藻の製造方法、及び1倍体単細胞性紅藻用培地
CN113229430A (zh) * 2021-05-24 2021-08-10 中国科学院海洋研究所 一种富锶海藻蛋白保健功能饮品及其制备方法
KR20240083173A (ko) 2021-08-24 2024-06-11 더 윌리엄슨 그룹 엘엘씨 산성 조성물에서 피코시아닌의 개선된 안정화
JP2023129015A (ja) * 2022-03-04 2023-09-14 Eneos株式会社 イデユコゴメ綱に属する藻類の培養方法
FR3147934A1 (fr) 2023-04-19 2024-10-25 Fermentalg Procede de degradation du glycogene present dans une biomasse de galdieria
WO2025012135A1 (fr) 2023-07-07 2025-01-16 Fermentalg Extrait de biomasse d'algues rouges et son utilisation cosmetique pour eliminer les imperfections de la peau

Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2320195C1 (ru) * 2006-05-31 2008-03-27 Владимир Кимович Мазо Способ получения белкового препарата из цианобактерий

Family Cites Families (21)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
JPS626691A (ja) * 1985-07-02 1987-01-13 Dainippon Ink & Chem Inc 藍藻からのフイコシアニン色素a、その製造方法及びその用途
FR2789399B1 (fr) 1999-02-04 2001-04-13 Alpha Biotech Procede de fabrication d'extraits de micro-organismes photosynthetiques tels que notamment de spiruline
AU7321300A (en) * 1999-09-29 2001-04-30 Micro Gaia Co., Ltd. Method of culturing algae capable of producing phototrophic pigments, highly unsaturated fatty acids, or polysaccharides at high concentration
FR2863615A1 (fr) * 2003-12-12 2005-06-17 Minard Florence Procede de photo-stabilisation de phycobiliproteines dans un extrait aqueux, compositions contenant des phycobiliproteines stabilisees et utilisation de phycobiliproteines stabilisees
EP1561809A3 (de) * 2004-01-23 2005-08-17 Signalomics GmbH Phycocyanin exprimierende Eukaryotenzelle
CN1786026B (zh) * 2004-12-10 2010-12-15 骆建华 荧光藻蓝蛋白、晶体的生产工艺及制品
JP4677250B2 (ja) * 2005-02-24 2011-04-27 Dicライフテック株式会社 藍藻類からのフィコシアニンの抽出方法
CN100560599C (zh) * 2006-12-27 2009-11-18 山东理工大学 同时制备藻蓝蛋白和别藻蓝蛋白的方法
CN101240011B (zh) * 2008-02-28 2010-08-11 山东大学 一种快速大量制备高纯度异藻蓝蛋白的方法
CN101240009B (zh) * 2008-02-28 2010-06-02 山东大学 一种快速分离纯化r-藻红蛋白、r-藻蓝蛋白的方法
CA2774542A1 (en) * 2009-09-18 2011-03-24 Phycoil Biotechnology International, Inc. Microalgae fermentation using controlled illumination
FR2964667B1 (fr) 2010-09-15 2014-08-22 Fermentalg Procede de culture d'algues unicellulaires mixotrophes en presence d'un apport lumineux discontinu sous forme de flashs
FR2976951A1 (fr) 2011-06-21 2012-12-28 Fermentalg Nouvelles souches de microalgues du genre isochrysis pour la production d'epa et de dha en mode mixotrophe
JP5926524B2 (ja) * 2011-09-21 2016-05-25 Npo法人サーモレックス・ラボ 金属の回収または除去方法、および、脂質の生産方法
CN104955937A (zh) 2012-11-09 2015-09-30 赫里开发公司 在非纯性兼养条件中培养微生物和用乙酸盐和/或氧化剂控制培养物中细菌污染的方法
FR2997959B1 (fr) 2012-11-09 2016-04-01 Invivo Nsa Utilisation de sucre dans une culture de microalgues pour diminuer leur auto-floculation
FR3004724B1 (fr) 2013-04-22 2015-05-22 Fermentalg Reacteur a eclairage integre
WO2015107312A1 (fr) 2014-01-20 2015-07-23 Roquette Freres Procédé d'enrichissement en protéines de la biomasse de microalgues
FR3025214A1 (fr) 2014-08-26 2016-03-04 Fermentalg Nouveau procede de culture d'algues, particulierement de microalgues
WO2016099261A1 (en) * 2014-12-16 2016-06-23 Rijksuniversiteit Groningen Natural blue photopigments, methods for producing them and to uses thereof as colorant.
FR3041653B1 (fr) 2015-09-25 2017-12-29 Fermentalg Procede de culture d'algues, particulierement d'algues rouges unicellulaires (arus)

Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2320195C1 (ru) * 2006-05-31 2008-03-27 Владимир Кимович Мазо Способ получения белкового препарата из цианобактерий

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
EISELE L E et al, Studies on C-phycocyanin from Cyanidium caldarium, a eukaryote at the extremes of habitat, Biochimica et biophysica ACTA, Bioenergetics, Amsterdam, vol. 1456, N 2-3, 2000, p.99-107. *
KAO O H et al, Physical-chemical properties of C-phycocyanin isolated from an acido-thermofhilic eukaryote, Cyanidium caldarium, Biochemical journal, vol. 147, N 1, 1975. p.63-70. *
KAO O H et al, Physical-chemical properties of C-phycocyanin isolated from an acido-thermofhilic eukaryote, Cyanidium caldarium, Biochemical journal, vol. 147, N 1, 1975. p.63-70. EISELE L E et al, Studies on C-phycocyanin from Cyanidium caldarium, a eukaryote at the extremes of habitat, Biochimica et biophysica ACTA, Bioenergetics, Amsterdam, vol. 1456, N 2-3, 2000, p.99-107. MYOUNGHOON MOON et al, Isolation and characterization of thermostable phycocyanin from Galdieria sulphuraria, Korean journal of chemical engineering, 2014, vol. 31, N 3, p.490-495. *
MYOUNGHOON MOON et al, Isolation and characterization of thermostable phycocyanin from Galdieria sulphuraria, Korean journal of chemical engineering, 2014, vol. 31, N 3, p.490-495. *

Also Published As

Publication number Publication date
FR3041505A1 (fr) 2017-03-31
JP2021176341A (ja) 2021-11-11
RU2018112989A (ru) 2019-10-25
FR3041653B1 (fr) 2017-12-29
CN108431202B (zh) 2023-02-17
WO2017050918A1 (fr) 2017-03-30
CN116349890A (zh) 2023-06-30
CN108431202A (zh) 2018-08-21
BR112018005928A2 (pt) 2018-12-11
JP6976933B2 (ja) 2021-12-08
EP3353283A1 (fr) 2018-08-01
FR3041505B1 (fr) 2021-06-11
US20180274002A1 (en) 2018-09-27
CA2998973A1 (fr) 2017-03-30
MX386418B (es) 2025-03-18
WO2017050917A1 (fr) 2017-03-30
US20180271119A1 (en) 2018-09-27
CN116349890B (zh) 2025-05-09
JP2018529343A (ja) 2018-10-11
FR3041653A1 (fr) 2017-03-31
RU2018112989A3 (ru) 2020-01-31
EP3353282A1 (fr) 2018-08-01
JP7469269B2 (ja) 2024-04-16
JP2018527940A (ja) 2018-09-27
US11162126B2 (en) 2021-11-02
JP2024010035A (ja) 2024-01-23
MX2018003696A (es) 2018-04-30

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2739847C2 (ru) Кислотная композиция, содержащая фикоцианин
Rahman et al. Thermostable phycocyanin from the red microalga Cyanidioschyzon merolae, a new natural blue food colorant
KR20250052382A (ko) 피코빌리프로테인의 정제
Sarada et al. Phycocyanin from Spirulina sp: influence of processing of biomass on phycocyanin yield, analysis of efficacy of extraction methods and stability studies on phycocyanin
Moon et al. Isolation and characterization of thermostable phycocyanin from Galdieria sulphuraria
Usup et al. Growth and toxin production of the toxic dinoflagellate Pyrodinium bahamense var. compressum in laboratory cultures
Mishra et al. Effect of preservatives for food grade C-PC from Spirulina platensis
Brain-Isasi et al. Combined extraction methodology for simultaneous recovery of phycobiliproteins and agar from the red alga Gracilaria chilensis CJ Bird, McLachlan & EC Oliveira
US20240407416A1 (en) Improved stabilization of phycocyanins in acidic compositions
US11560542B2 (en) Process for producing phycocyanin-rich biomass via URA culturing
US20230279233A1 (en) Atrorosins as food colors
Yachai Carotenoid production by halophilic Archaea and its applications
Weber et al. Teaching techniques for mycology: 20. Astaxanthin, a carotenoid of biotechnological importance from yeast and salmonid fish
Gavrailov et al. Stability of phycocyanin extracted from Arthrospira platensis under different conditions
AU2004322412B2 (en) An economical and efficient method for mass production of spirulina
KR20180115103A (ko) 셀레늄 함량이 증진된 스피룰리나 생산방법 및 셀레늄 함량이 증진된 스피룰리나의 용도
RU2781831C2 (ru) Очистка фикобилипротеинов
KR20180137729A (ko) 스피룰리나 생산증진을 위한 미네랄 함유 배지조성물 및 이를 이용한 스피룰리나 대량생산 방법
TWI548744B (zh) 一株可以大量生產藻紅素、藻藍素及異藻藍素的顫藻生物材料Oscillatoriales sp. HSW-1
KR20190088746A (ko) 바이오매스 및 루테인 생산성이 높은 세네데스무스 오블리쿠스 abc-009 균주 및 이의 용도
Singh et al. Microalgae: a Source of Natural Colours
Al-Harbi Physiological and biotechnological studies on the microalga Dunaliella, the bacterium Halomonas, and the cyanobacteria Arthrospira and Spirulina.