RU2683497C2 - Композиция и способы высокоэффективного переноса генов с помощью вариантов капсида aav - Google Patents
Композиция и способы высокоэффективного переноса генов с помощью вариантов капсида aav Download PDFInfo
- Publication number
- RU2683497C2 RU2683497C2 RU2014146159A RU2014146159A RU2683497C2 RU 2683497 C2 RU2683497 C2 RU 2683497C2 RU 2014146159 A RU2014146159 A RU 2014146159A RU 2014146159 A RU2014146159 A RU 2014146159A RU 2683497 C2 RU2683497 C2 RU 2683497C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- nucleic acid
- aav
- acid sequence
- heterologous nucleic
- vector
- Prior art date
Links
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 title claims description 47
- 210000000234 capsid Anatomy 0.000 title claims description 25
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 31
- 238000012546 transfer Methods 0.000 title description 5
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 4
- 150000007523 nucleic acids Chemical group 0.000 claims abstract description 63
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 claims abstract description 44
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 44
- 239000013598 vector Substances 0.000 claims abstract description 43
- 239000013607 AAV vector Substances 0.000 claims abstract description 41
- 238000010361 transduction Methods 0.000 claims abstract description 38
- 230000026683 transduction Effects 0.000 claims abstract description 38
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 33
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 33
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 claims abstract description 33
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims abstract description 28
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 claims abstract description 19
- 102100023321 Ceruloplasmin Human genes 0.000 claims abstract description 19
- 230000034512 ubiquitination Effects 0.000 claims abstract description 12
- 238000010798 ubiquitination Methods 0.000 claims abstract description 12
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 claims abstract description 11
- 241000702421 Dependoparvovirus Species 0.000 claims abstract description 8
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 claims description 32
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 claims description 32
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 claims description 25
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 24
- 201000010099 disease Diseases 0.000 claims description 23
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims description 23
- 101710197658 Capsid protein VP1 Proteins 0.000 claims description 22
- 241001164825 Adeno-associated virus - 8 Species 0.000 claims description 18
- 241000702423 Adeno-associated virus - 2 Species 0.000 claims description 16
- 241001655883 Adeno-associated virus - 1 Species 0.000 claims description 14
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 claims description 14
- 101710118046 RNA-directed RNA polymerase Proteins 0.000 claims description 12
- 230000001225 therapeutic effect Effects 0.000 claims description 11
- 230000002401 inhibitory effect Effects 0.000 claims description 10
- 239000003814 drug Substances 0.000 claims description 8
- 230000001965 increasing effect Effects 0.000 claims description 8
- 102100022641 Coagulation factor IX Human genes 0.000 claims description 7
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 claims description 7
- 108091030071 RNAI Proteins 0.000 claims description 6
- 230000009368 gene silencing by RNA Effects 0.000 claims description 6
- 230000010076 replication Effects 0.000 claims description 6
- 108010076282 Factor IX Proteins 0.000 claims description 5
- 229960004222 factor ix Drugs 0.000 claims description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 claims description 5
- 108010054218 Factor VIII Proteins 0.000 claims description 4
- 102000001690 Factor VIII Human genes 0.000 claims description 4
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 claims description 4
- 210000003169 central nervous system Anatomy 0.000 claims description 4
- 229960000301 factor viii Drugs 0.000 claims description 4
- 230000002463 transducing effect Effects 0.000 claims description 4
- 208000035473 Communicable disease Diseases 0.000 claims description 3
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 claims description 3
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 claims description 3
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 claims description 3
- 208000026350 Inborn Genetic disease Diseases 0.000 claims description 3
- 239000012634 fragment Substances 0.000 claims description 3
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 claims description 3
- 102220313588 rs376510300 Human genes 0.000 claims description 3
- 108010039209 Blood Coagulation Factors Proteins 0.000 claims description 2
- 102000015081 Blood Coagulation Factors Human genes 0.000 claims description 2
- 208000024556 Mendelian disease Diseases 0.000 claims description 2
- 230000000840 anti-viral effect Effects 0.000 claims description 2
- 239000003114 blood coagulation factor Substances 0.000 claims description 2
- 208000035475 disorder Diseases 0.000 claims description 2
- 208000014951 hematologic disease Diseases 0.000 claims description 2
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 claims 2
- 208000019838 Blood disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000029578 Muscle disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000021642 Muscular disease Diseases 0.000 claims 1
- 102220614761 Small muscular protein_K77R_mutation Human genes 0.000 claims 1
- 108010017070 Zinc Finger Nucleases Proteins 0.000 claims 1
- 208000030533 eye disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000018706 hematopoietic system disease Diseases 0.000 claims 1
- 208000030159 metabolic disease Diseases 0.000 claims 1
- 102220226361 rs1064794680 Human genes 0.000 claims 1
- 102200155593 rs121434623 Human genes 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 12
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 94
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 23
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 22
- 210000001151 cytotoxic T lymphocyte Anatomy 0.000 description 17
- 108700019146 Transgenes Proteins 0.000 description 15
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 15
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 14
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 14
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 13
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 description 13
- 241000125945 Protoparvovirus Species 0.000 description 12
- 239000013603 viral vector Substances 0.000 description 12
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 10
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 10
- 210000004185 liver Anatomy 0.000 description 10
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 10
- 230000001575 pathological effect Effects 0.000 description 9
- 102000053602 DNA Human genes 0.000 description 8
- 108091034117 Oligonucleotide Proteins 0.000 description 8
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 7
- 210000003494 hepatocyte Anatomy 0.000 description 7
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 7
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 7
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 7
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 7
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 6
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 6
- 108010043121 Green Fluorescent Proteins Proteins 0.000 description 6
- 102000004144 Green Fluorescent Proteins Human genes 0.000 description 6
- 101710108545 Viral protein 1 Proteins 0.000 description 6
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 6
- 239000005090 green fluorescent protein Substances 0.000 description 6
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 6
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 6
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 6
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 5
- 239000000443 aerosol Substances 0.000 description 5
- 125000000637 arginyl group Chemical group N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)* 0.000 description 5
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 5
- 238000001415 gene therapy Methods 0.000 description 5
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 5
- 230000001404 mediated effect Effects 0.000 description 5
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 5
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 4
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 4
- 108700028146 Genetic Enhancer Elements Proteins 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 4
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 4
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 4
- 108020004682 Single-Stranded DNA Proteins 0.000 description 4
- 108090000848 Ubiquitin Proteins 0.000 description 4
- 102000044159 Ubiquitin Human genes 0.000 description 4
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 4
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 4
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 210000004556 brain Anatomy 0.000 description 4
- 230000002950 deficient Effects 0.000 description 4
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 4
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 4
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 description 4
- 239000000463 material Substances 0.000 description 4
- 210000002569 neuron Anatomy 0.000 description 4
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 description 4
- UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N streptomycin Chemical compound CN[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@](C=O)(O)[C@H](C)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@@H](NC(N)=N)[C@H](O)[C@H]1O UCSJYZPVAKXKNQ-HZYVHMACSA-N 0.000 description 4
- 208000024891 symptom Diseases 0.000 description 4
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 4
- 102100026735 Coagulation factor VIII Human genes 0.000 description 3
- 201000003883 Cystic fibrosis Diseases 0.000 description 3
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 102000001039 Dystrophin Human genes 0.000 description 3
- 108010069091 Dystrophin Proteins 0.000 description 3
- 201000003542 Factor VIII deficiency Diseases 0.000 description 3
- 208000009292 Hemophilia A Diseases 0.000 description 3
- 101000911390 Homo sapiens Coagulation factor VIII Proteins 0.000 description 3
- 208000023105 Huntington disease Diseases 0.000 description 3
- 102000003855 L-lactate dehydrogenase Human genes 0.000 description 3
- 108700023483 L-lactate dehydrogenases Proteins 0.000 description 3
- 108700018351 Major Histocompatibility Complex Proteins 0.000 description 3
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 3
- 241000286209 Phasianidae Species 0.000 description 3
- 241000251539 Vertebrata <Metazoa> Species 0.000 description 3
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 3
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 3
- 231100000135 cytotoxicity Toxicity 0.000 description 3
- 230000003013 cytotoxicity Effects 0.000 description 3
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 3
- 239000012636 effector Substances 0.000 description 3
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 3
- 210000002919 epithelial cell Anatomy 0.000 description 3
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 3
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 3
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 3
- 210000005229 liver cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 3
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 210000003819 peripheral blood mononuclear cell Anatomy 0.000 description 3
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 230000020382 suppression by virus of host antigen processing and presentation of peptide antigen via MHC class I Effects 0.000 description 3
- 238000001890 transfection Methods 0.000 description 3
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 3
- 210000003462 vein Anatomy 0.000 description 3
- DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N (2R)-6-amino-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2R,3S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S,3S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[2-[[2-[[2-[(2-amino-1-hydroxyethylidene)amino]-3-carboxy-1-hydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxypropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1,5-dihydroxy-5-iminopentylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxybutylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1,3-dihydroxypropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]-1-hydroxy-3-sulfanylpropylidene]amino]-1-hydroxyethylidene]amino]hexanoic acid Chemical compound C[C@@H]([C@@H](C(=N[C@@H](CS)C(=N[C@@H](C)C(=N[C@@H](CO)C(=NCC(=N[C@@H](CCC(=N)O)C(=NC(CS)C(=N[C@H]([C@H](C)O)C(=N[C@H](CS)C(=N[C@H](CO)C(=NCC(=N[C@H](CS)C(=NCC(=N[C@H](CCCCN)C(=O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)N=C([C@H](CS)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](CO)N=C([C@H](C)N=C(CN=C([C@H](CO)N=C([C@H](CS)N=C(CN=C(C(CS)N=C(C(CC(=O)O)N=C(CN)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O)O DIGQNXIGRZPYDK-WKSCXVIASA-N 0.000 description 2
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 description 2
- 108700028369 Alleles Proteins 0.000 description 2
- 102100023635 Alpha-fetoprotein Human genes 0.000 description 2
- 208000024827 Alzheimer disease Diseases 0.000 description 2
- 241000272517 Anseriformes Species 0.000 description 2
- 241000271566 Aves Species 0.000 description 2
- 206010010099 Combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 241000701022 Cytomegalovirus Species 0.000 description 2
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 2
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 2
- 208000015872 Gaucher disease Diseases 0.000 description 2
- 229920002527 Glycogen Polymers 0.000 description 2
- 102000015779 HDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010010234 HDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 241000711549 Hepacivirus C Species 0.000 description 2
- 208000028782 Hereditary disease Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 102000006992 Interferon-alpha Human genes 0.000 description 2
- 108010047761 Interferon-alpha Proteins 0.000 description 2
- ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N L-glutamine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-VKHMYHEASA-N 0.000 description 2
- 229930182816 L-glutamine Natural products 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N L-phenylalanine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 2
- 102000007330 LDL Lipoproteins Human genes 0.000 description 2
- 108010007622 LDL Lipoproteins Proteins 0.000 description 2
- 208000019693 Lung disease Diseases 0.000 description 2
- 102000003792 Metallothionein Human genes 0.000 description 2
- 108090000157 Metallothionein Proteins 0.000 description 2
- 208000012902 Nervous system disease Diseases 0.000 description 2
- 208000025966 Neurological disease Diseases 0.000 description 2
- 208000018737 Parkinson disease Diseases 0.000 description 2
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 2
- 229930182555 Penicillin Natural products 0.000 description 2
- JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N Penicillin G Chemical compound N([C@H]1[C@H]2SC([C@@H](N2C1=O)C(O)=O)(C)C)C(=O)CC1=CC=CC=C1 JGSARLDLIJGVTE-MBNYWOFBSA-N 0.000 description 2
- 208000002903 Thalassemia Diseases 0.000 description 2
- 238000009825 accumulation Methods 0.000 description 2
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 2
- 201000009628 adenosine deaminase deficiency Diseases 0.000 description 2
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 2
- 108010026331 alpha-Fetoproteins Proteins 0.000 description 2
- 206010002026 amyotrophic lateral sclerosis Diseases 0.000 description 2
- 208000007502 anemia Diseases 0.000 description 2
- 230000000692 anti-sense effect Effects 0.000 description 2
- 208000036556 autosomal recessive T cell-negative B cell-negative NK cell-negative due to adenosine deaminase deficiency severe combined immunodeficiency Diseases 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 210000004958 brain cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 2
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003086 colorant Substances 0.000 description 2
- 229920001940 conductive polymer Polymers 0.000 description 2
- 238000002784 cytotoxicity assay Methods 0.000 description 2
- 231100000263 cytotoxicity test Toxicity 0.000 description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 description 2
- 230000007812 deficiency Effects 0.000 description 2
- 206010012601 diabetes mellitus Diseases 0.000 description 2
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 2
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 description 2
- 210000002889 endothelial cell Anatomy 0.000 description 2
- 206010015037 epilepsy Diseases 0.000 description 2
- 210000003527 eukaryotic cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000012091 fetal bovine serum Substances 0.000 description 2
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 2
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 2
- 108091006104 gene-regulatory proteins Proteins 0.000 description 2
- 229940096919 glycogen Drugs 0.000 description 2
- 210000002216 heart Anatomy 0.000 description 2
- 208000009429 hemophilia B Diseases 0.000 description 2
- 102000053391 human F Human genes 0.000 description 2
- 108700031895 human F Proteins 0.000 description 2
- 229960000027 human factor ix Drugs 0.000 description 2
- 238000009616 inductively coupled plasma Methods 0.000 description 2
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 2
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 2
- 210000003734 kidney Anatomy 0.000 description 2
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 description 2
- 230000002503 metabolic effect Effects 0.000 description 2
- 201000006938 muscular dystrophy Diseases 0.000 description 2
- 238000002703 mutagenesis Methods 0.000 description 2
- 231100000350 mutagenesis Toxicity 0.000 description 2
- 229940049954 penicillin Drugs 0.000 description 2
- 210000001428 peripheral nervous system Anatomy 0.000 description 2
- 239000008177 pharmaceutical agent Substances 0.000 description 2
- COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N phenylalanine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=CC=C1 COLNVLDHVKWLRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 108010079892 phosphoglycerol kinase Proteins 0.000 description 2
- 230000035479 physiological effects, processes and functions Effects 0.000 description 2
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 2
- 230000008488 polyadenylation Effects 0.000 description 2
- 238000003752 polymerase chain reaction Methods 0.000 description 2
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 2
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 210000001525 retina Anatomy 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 210000004989 spleen cell Anatomy 0.000 description 2
- 239000003381 stabilizer Substances 0.000 description 2
- 229960005322 streptomycin Drugs 0.000 description 2
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- 238000011200 topical administration Methods 0.000 description 2
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 2
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 2
- 238000012250 transgenic expression Methods 0.000 description 2
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 2
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N (4S)-4-[[(4R,7S,10S,16S,19S,25S,28S,31R)-31-[[(2S)-2-[[(1R,6R,9S,12S,18S,21S,24S,27S,30S,33S,36S,39S,42R,47R,53S,56S,59S,62S,65S,68S,71S,76S,79S,85S)-47-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-3-methylbutanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)propanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-18-(4-aminobutyl)-27,68-bis(3-amino-3-oxopropyl)-36,71,76-tribenzyl-39-(3-carbamimidamidopropyl)-24-(2-carboxyethyl)-21,56-bis(carboxymethyl)-65,85-bis[(1R)-1-hydroxyethyl]-59-(hydroxymethyl)-62,79-bis(1H-imidazol-4-ylmethyl)-9-methyl-33-(2-methylpropyl)-8,11,17,20,23,26,29,32,35,38,41,48,54,57,60,63,66,69,72,74,77,80,83,86-tetracosaoxo-30-propan-2-yl-3,4,44,45-tetrathia-7,10,16,19,22,25,28,31,34,37,40,49,55,58,61,64,67,70,73,75,78,81,84,87-tetracosazatetracyclo[40.31.14.012,16.049,53]heptaoctacontane-6-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-7-(3-carbamimidamidopropyl)-25-(hydroxymethyl)-19-[(4-hydroxyphenyl)methyl]-28-(1H-imidazol-4-ylmethyl)-10-methyl-6,9,12,15,18,21,24,27,30-nonaoxo-16-propan-2-yl-1,2-dithia-5,8,11,14,17,20,23,26,29-nonazacyclodotriacontane-4-carbonyl]amino]-5-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(2S)-3-carboxy-1-[[(2S)-1-[[(2S)-1-[[(1S)-1-carboxyethyl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]amino]-3-(1H-imidazol-4-yl)-1-oxopropan-2-yl]amino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](Cc1c[nH]cn1)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H]1CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H]2CSSC[C@@H]3NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@@H]4CCCN4C(=O)[C@H](CSSC[C@H](NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)[C@H](Cc4c[nH]cn4)NC(=O)[C@H](Cc4ccccc4)NC3=O)[C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc3ccccc3)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(=O)N3CCC[C@H]3C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N2)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](Cc2ccccc2)NC(=O)[C@H](Cc2c[nH]cn2)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@@H](N)C(C)C)C(C)C)[C@@H](C)O)C(C)C)C(=O)N[C@@H](Cc2c[nH]cn2)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](Cc2ccc(O)cc2)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N1)C(=O)N[C@@H](C)C(O)=O NMWKYTGJWUAZPZ-WWHBDHEGSA-N 0.000 description 1
- 108010046716 3-Methyl-2-Oxobutanoate Dehydrogenase (Lipoamide) Proteins 0.000 description 1
- 101710169336 5'-deoxyadenosine deaminase Proteins 0.000 description 1
- 102000007469 Actins Human genes 0.000 description 1
- 108010085238 Actins Proteins 0.000 description 1
- 102000055025 Adenosine deaminases Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 208000023275 Autoimmune disease Diseases 0.000 description 1
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 206010006187 Breast cancer Diseases 0.000 description 1
- 208000026310 Breast neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 241000282465 Canis Species 0.000 description 1
- 101150044789 Cap gene Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 1
- 108020004635 Complementary DNA Proteins 0.000 description 1
- 108091035707 Consensus sequence Proteins 0.000 description 1
- 108010015742 Cytochrome P-450 Enzyme System Proteins 0.000 description 1
- 102000003849 Cytochrome P450 Human genes 0.000 description 1
- 102000000311 Cytosine Deaminase Human genes 0.000 description 1
- 108010080611 Cytosine Deaminase Proteins 0.000 description 1
- 102100029588 Deoxycytidine kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010033174 Deoxycytidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000016607 Diphtheria Toxin Human genes 0.000 description 1
- 108010053187 Diphtheria Toxin Proteins 0.000 description 1
- 241000196324 Embryophyta Species 0.000 description 1
- 102400001368 Epidermal growth factor Human genes 0.000 description 1
- 101800003838 Epidermal growth factor Proteins 0.000 description 1
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 1
- 108090000394 Erythropoietin Proteins 0.000 description 1
- 102000003951 Erythropoietin Human genes 0.000 description 1
- 108010014173 Factor X Proteins 0.000 description 1
- 108010071289 Factor XIII Proteins 0.000 description 1
- 241000282324 Felis Species 0.000 description 1
- 241000287828 Gallus gallus Species 0.000 description 1
- 102100028652 Gamma-enolase Human genes 0.000 description 1
- 102100027685 Hemoglobin subunit alpha Human genes 0.000 description 1
- 108091005902 Hemoglobin subunit alpha Proteins 0.000 description 1
- 102100021519 Hemoglobin subunit beta Human genes 0.000 description 1
- 108091005904 Hemoglobin subunit beta Proteins 0.000 description 1
- 241000700721 Hepatitis B virus Species 0.000 description 1
- 208000009889 Herpes Simplex Diseases 0.000 description 1
- 102000002268 Hexosaminidases Human genes 0.000 description 1
- 108010000540 Hexosaminidases Proteins 0.000 description 1
- 101000937544 Homo sapiens Beta-2-microglobulin Proteins 0.000 description 1
- 101001002657 Homo sapiens Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 101000600434 Homo sapiens Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Proteins 0.000 description 1
- 102000018251 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 108010091358 Hypoxanthine Phosphoribosyltransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000006496 Immunoglobulin Heavy Chains Human genes 0.000 description 1
- 108010019476 Immunoglobulin Heavy Chains Proteins 0.000 description 1
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 1
- 102000016921 Integrin-Binding Sialoprotein Human genes 0.000 description 1
- 108010028750 Integrin-Binding Sialoprotein Proteins 0.000 description 1
- 108090000467 Interferon-beta Proteins 0.000 description 1
- 102000003996 Interferon-beta Human genes 0.000 description 1
- 102000008070 Interferon-gamma Human genes 0.000 description 1
- 108010074328 Interferon-gamma Proteins 0.000 description 1
- 102000013462 Interleukin-12 Human genes 0.000 description 1
- 108010065805 Interleukin-12 Proteins 0.000 description 1
- 108010002350 Interleukin-2 Proteins 0.000 description 1
- 102000000588 Interleukin-2 Human genes 0.000 description 1
- 102000004388 Interleukin-4 Human genes 0.000 description 1
- 108090000978 Interleukin-4 Proteins 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108010001831 LDL receptors Proteins 0.000 description 1
- 108010013563 Lipoprotein Lipase Proteins 0.000 description 1
- 102100022119 Lipoprotein lipase Human genes 0.000 description 1
- 102100024640 Low-density lipoprotein receptor Human genes 0.000 description 1
- 102000004083 Lymphotoxin-alpha Human genes 0.000 description 1
- 108090000542 Lymphotoxin-alpha Proteins 0.000 description 1
- 108010059343 MM Form Creatine Kinase Proteins 0.000 description 1
- 241000713333 Mouse mammary tumor virus Species 0.000 description 1
- 102000003505 Myosin Human genes 0.000 description 1
- 108060008487 Myosin Proteins 0.000 description 1
- 108010025020 Nerve Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000015336 Nerve Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 102400000058 Neuregulin-1 Human genes 0.000 description 1
- 108090000556 Neuregulin-1 Proteins 0.000 description 1
- 102000007530 Neurofibromin 1 Human genes 0.000 description 1
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 1
- 102000007981 Ornithine carbamoyltransferase Human genes 0.000 description 1
- 101710198224 Ornithine carbamoyltransferase, mitochondrial Proteins 0.000 description 1
- 102000004067 Osteocalcin Human genes 0.000 description 1
- 108090000573 Osteocalcin Proteins 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 102000012288 Phosphopyruvate Hydratase Human genes 0.000 description 1
- 108010022181 Phosphopyruvate Hydratase Proteins 0.000 description 1
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 1
- 108010068086 Polyubiquitin Proteins 0.000 description 1
- 102100037935 Polyubiquitin-C Human genes 0.000 description 1
- 241000288906 Primates Species 0.000 description 1
- 102000004245 Proteasome Endopeptidase Complex Human genes 0.000 description 1
- 108090000708 Proteasome Endopeptidase Complex Proteins 0.000 description 1
- 102100037401 Putative uncharacterized protein encoded by MIR7-3HG Human genes 0.000 description 1
- 208000017442 Retinal disease Diseases 0.000 description 1
- 108091028664 Ribonucleotide Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 206010039491 Sarcoma Diseases 0.000 description 1
- 241000242583 Scyphozoa Species 0.000 description 1
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 1
- 102000005890 Spectrin Human genes 0.000 description 1
- 108010019965 Spectrin Proteins 0.000 description 1
- 102000011971 Sphingomyelin Phosphodiesterase Human genes 0.000 description 1
- 108010061312 Sphingomyelin Phosphodiesterase Proteins 0.000 description 1
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 description 1
- 101710172711 Structural protein Proteins 0.000 description 1
- 108091008874 T cell receptors Proteins 0.000 description 1
- 102000016266 T-Cell Antigen Receptors Human genes 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000004098 Tetracycline Substances 0.000 description 1
- 108010022394 Threonine synthase Proteins 0.000 description 1
- 102000006601 Thymidine Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108020004440 Thymidine kinase Proteins 0.000 description 1
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 1
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 1
- 102400001320 Transforming growth factor alpha Human genes 0.000 description 1
- 101800004564 Transforming growth factor alpha Proteins 0.000 description 1
- 102000004142 Trypsin Human genes 0.000 description 1
- 108090000631 Trypsin Proteins 0.000 description 1
- 108060008682 Tumor Necrosis Factor Proteins 0.000 description 1
- 102000011856 Utrophin Human genes 0.000 description 1
- 108010075653 Utrophin Proteins 0.000 description 1
- 101150004676 VGF gene Proteins 0.000 description 1
- 101000756604 Xenopus laevis Actin, cytoplasmic 1 Proteins 0.000 description 1
- HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N Zinc Chemical compound [Zn] HCHKCACWOHOZIP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 230000001154 acute effect Effects 0.000 description 1
- 230000000996 additive effect Effects 0.000 description 1
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 1
- 238000010171 animal model Methods 0.000 description 1
- 230000001093 anti-cancer Effects 0.000 description 1
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000007503 antigenic stimulation Effects 0.000 description 1
- 108010062796 arginyllysine Proteins 0.000 description 1
- 230000009286 beneficial effect Effects 0.000 description 1
- 230000003115 biocidal effect Effects 0.000 description 1
- 210000002449 bone cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000001185 bone marrow Anatomy 0.000 description 1
- 210000004271 bone marrow stromal cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000009395 breeding Methods 0.000 description 1
- 230000001488 breeding effect Effects 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M caesium chloride Chemical compound [Cl-].[Cs+] AIYUHDOJVYHVIT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000030833 cell death Effects 0.000 description 1
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 235000013330 chicken meat Nutrition 0.000 description 1
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000009089 cytolysis Effects 0.000 description 1
- 239000005547 deoxyribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002637 deoxyribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N dexamethasone Chemical compound C1CC2=CC(=O)C=C[C@]2(C)[C@]2(F)[C@@H]1[C@@H]1C[C@@H](C)[C@@](C(=O)CO)(O)[C@@]1(C)C[C@@H]2O UREBDLICKHMUKA-CXSFZGCWSA-N 0.000 description 1
- 229960003957 dexamethasone Drugs 0.000 description 1
- 230000029087 digestion Effects 0.000 description 1
- 102000004419 dihydrofolate reductase Human genes 0.000 description 1
- 239000002552 dosage form Substances 0.000 description 1
- 230000002222 downregulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000004520 electroporation Methods 0.000 description 1
- 239000000839 emulsion Substances 0.000 description 1
- 229940116977 epidermal growth factor Drugs 0.000 description 1
- 229940105423 erythropoietin Drugs 0.000 description 1
- 230000001747 exhibiting effect Effects 0.000 description 1
- 238000002474 experimental method Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 229940012426 factor x Drugs 0.000 description 1
- 229940012444 factor xiii Drugs 0.000 description 1
- 230000001605 fetal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001943 fluorescence-activated cell sorting Methods 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 229940044627 gamma-interferon Drugs 0.000 description 1
- 210000001035 gastrointestinal tract Anatomy 0.000 description 1
- 208000016361 genetic disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004602 germ cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 1
- 230000003394 haemopoietic effect Effects 0.000 description 1
- 210000003958 hematopoietic stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 208000031169 hemorrhagic disease Diseases 0.000 description 1
- 229940088597 hormone Drugs 0.000 description 1
- 239000005556 hormone Substances 0.000 description 1
- 102000047279 human B2M Human genes 0.000 description 1
- 230000028996 humoral immune response Effects 0.000 description 1
- 210000000987 immune system Anatomy 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 1
- 230000001976 improved effect Effects 0.000 description 1
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 1
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 238000013383 initial experiment Methods 0.000 description 1
- 239000003999 initiator Substances 0.000 description 1
- 230000000977 initiatory effect Effects 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229940117681 interleukin-12 Drugs 0.000 description 1
- 229940028885 interleukin-4 Drugs 0.000 description 1
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 description 1
- 238000001361 intraarterial administration Methods 0.000 description 1
- 238000010255 intramuscular injection Methods 0.000 description 1
- 239000007927 intramuscular injection Substances 0.000 description 1
- 238000007912 intraperitoneal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007913 intrathecal administration Methods 0.000 description 1
- 238000007914 intraventricular administration Methods 0.000 description 1
- 210000004153 islets of langerhan Anatomy 0.000 description 1
- 230000021633 leukocyte mediated immunity Effects 0.000 description 1
- 239000006193 liquid solution Substances 0.000 description 1
- 239000006194 liquid suspension Substances 0.000 description 1
- 230000002132 lysosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 108020004999 messenger RNA Proteins 0.000 description 1
- 238000000520 microinjection Methods 0.000 description 1
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 1
- 210000000663 muscle cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000003098 myoblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000002107 myocardial effect Effects 0.000 description 1
- 239000006199 nebulizer Substances 0.000 description 1
- 210000005036 nerve Anatomy 0.000 description 1
- 229940053128 nerve growth factor Drugs 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 208000015122 neurodegenerative disease Diseases 0.000 description 1
- 210000005044 neurofilament Anatomy 0.000 description 1
- 230000000508 neurotrophic effect Effects 0.000 description 1
- 238000006386 neutralization reaction Methods 0.000 description 1
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 1
- 244000309711 non-enveloped viruses Species 0.000 description 1
- 239000002777 nucleoside Substances 0.000 description 1
- 238000004806 packaging method and process Methods 0.000 description 1
- 210000000496 pancreas Anatomy 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 238000007911 parenteral administration Methods 0.000 description 1
- 230000001717 pathogenic effect Effects 0.000 description 1
- 230000037361 pathway Effects 0.000 description 1
- 230000002093 peripheral effect Effects 0.000 description 1
- 230000026731 phosphorylation Effects 0.000 description 1
- 238000006366 phosphorylation reaction Methods 0.000 description 1
- 230000035790 physiological processes and functions Effects 0.000 description 1
- 239000013600 plasmid vector Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N potassium;[2-butyl-5-chloro-3-[[4-[2-(1,2,4-triaza-3-azanidacyclopenta-1,4-dien-5-yl)phenyl]phenyl]methyl]imidazol-4-yl]methanol Chemical compound [K+].CCCCC1=NC(Cl)=C(CO)N1CC1=CC=C(C=2C(=CC=CC=2)C2=N[N-]N=N2)C=C1 OXCMYAYHXIHQOA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000003825 pressing Methods 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 210000001236 prokaryotic cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000002062 proliferating effect Effects 0.000 description 1
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000005267 prostate cell Anatomy 0.000 description 1
- 230000017854 proteolysis Effects 0.000 description 1
- 230000002685 pulmonary effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 239000013608 rAAV vector Substances 0.000 description 1
- 230000002285 radioactive effect Effects 0.000 description 1
- 230000022532 regulation of transcription, DNA-dependent Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000009256 replacement therapy Methods 0.000 description 1
- 230000001718 repressive effect Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000002345 respiratory system Anatomy 0.000 description 1
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 1
- 230000002207 retinal effect Effects 0.000 description 1
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 1
- 206010039073 rheumatoid arthritis Diseases 0.000 description 1
- 239000002336 ribonucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000002652 ribonucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 102220271164 rs1555604887 Human genes 0.000 description 1
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 1
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 1
- 238000009738 saturating Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 1
- 238000010572 single replacement reaction Methods 0.000 description 1
- 210000002027 skeletal muscle Anatomy 0.000 description 1
- 210000001626 skin fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 210000000952 spleen Anatomy 0.000 description 1
- 210000004988 splenocyte Anatomy 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 1
- 238000013268 sustained release Methods 0.000 description 1
- 239000012730 sustained-release form Substances 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 230000008685 targeting Effects 0.000 description 1
- 229930101283 tetracycline Natural products 0.000 description 1
- 229960002180 tetracycline Drugs 0.000 description 1
- 235000019364 tetracycline Nutrition 0.000 description 1
- 150000003522 tetracyclines Chemical class 0.000 description 1
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 1
- 238000002560 therapeutic procedure Methods 0.000 description 1
- 230000002103 transcriptional effect Effects 0.000 description 1
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 1
- 238000011820 transgenic animal model Methods 0.000 description 1
- 239000001226 triphosphate Substances 0.000 description 1
- 235000011178 triphosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000012588 trypsin Substances 0.000 description 1
- 239000002753 trypsin inhibitor Substances 0.000 description 1
- 102000003390 tumor necrosis factor Human genes 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000006663 ubiquitin-proteasome pathway Effects 0.000 description 1
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 239000003981 vehicle Substances 0.000 description 1
- 238000003142 viral transduction method Methods 0.000 description 1
- 239000011701 zinc Substances 0.000 description 1
- 229910052725 zinc Inorganic materials 0.000 description 1
- -1 β-glu ocerebrosidase Proteins 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K48/00—Medicinal preparations containing genetic material which is inserted into cells of the living body to treat genetic diseases; Gene therapy
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
- A61P31/12—Antivirals
- A61P31/14—Antivirals for RNA viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/04—Antihaemorrhagics; Procoagulants; Haemostatic agents; Antifibrinolytic agents
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07H—SUGARS; DERIVATIVES THEREOF; NUCLEOSIDES; NUCLEOTIDES; NUCLEIC ACIDS
- C07H21/00—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids
- C07H21/04—Compounds containing two or more mononucleotide units having separate phosphate or polyphosphate groups linked by saccharide radicals of nucleoside groups, e.g. nucleic acids with deoxyribosyl as saccharide radical
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
- C07K14/01—DNA viruses
- C07K14/015—Parvoviridae, e.g. feline panleukopenia virus, human parvovirus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N15/00—Mutation or genetic engineering; DNA or RNA concerning genetic engineering, vectors, e.g. plasmids, or their isolation, preparation or purification; Use of hosts therefor
- C12N15/09—Recombinant DNA-technology
- C12N15/63—Introduction of foreign genetic material using vectors; Vectors; Use of hosts therefor; Regulation of expression
- C12N15/79—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts
- C12N15/85—Vectors or expression systems specially adapted for eukaryotic hosts for animal cells
- C12N15/86—Viral vectors
- C12N15/864—Parvoviral vectors, e.g. parvovirus, densovirus
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2750/00—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA ssDNA viruses
- C12N2750/00011—Details
- C12N2750/14011—Parvoviridae
- C12N2750/14111—Dependovirus, e.g. adenoassociated viruses
- C12N2750/14141—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector
- C12N2750/14143—Use of virus, viral particle or viral elements as a vector viral genome or elements thereof as genetic vector
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Virology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Zoology (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Plant Pathology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Oncology (AREA)
- Communicable Diseases (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к биотехнологии. Описан вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки субъекту гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, содержащей капсидный белок VP1, который содержит одну или несколько замен лизина, где одна замена лизина представляет K137R. При этом упомянутый вектор дополнительно содержит миниген, содержащий инвертированные концевые повторы AAV и гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, функционально связанную с регуляторными последовательностями, которые направляют экспрессию продукта из гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты в клетку-хозяин, и упомянутая замена лизина является эффективной для ингибирования убиквитинирования упомянутого капсидного белка, и тем самым увеличивается трансдукция упомянутого вектора AAV в клетке-мишени. Описано также применение заявленного вектора. 14 н. и 15 з.п. ф-лы, 9 табл., 1 пр., 20 ил.
Description
По настоящей заявке испрашивается приоритет предварительных заявок США №№ 61/635273 и 61/794995, поданных 18 апреля 2012 года и 15 марта 2013 года, соответственно, и полное содержание каждой из указанных заявок включено в настоящее изобретение путем ссылки, как если бы они были изложены в полном объеме.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящая заявка относится к области генной терапии и молекулярной биологии. Более конкретно, настоящее изобретение относится к аденоассоциированным вирусным векторам, содержащим варианты капсидных белков, которые повышают эффективность трансдукции AAV векторов, содержащих терапевтически полезные трансгены.
УРОВЕНЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем документе упомянуты ряд публикаций и патентных документов для описания состояния области техники, к которой относится настоящее изобретение. Каждое из этих упоминаний включено в настоящее описание посредством ссылки, как изложенное в полном объеме.
Аденоассоциированный вирус (AAV) представляет собой небольшой (20 нм), дефектный по репликации, безоболочечный вирус. У человека и приматов описано множество различных серотипов AAV. Геном AAV состоит из одноцепочечной ДНК, имеющей 145 пар оснований (п.о.), с инвертированными концевыми повторами (ИКП) на обоих концах. Имеются две открытые рамки считывания (ОРС), rep и cap. Продукты rep имеют важное значение для репликации AAV, при этом от гена cap экспрессируются 3 капсидных белка (VP1, VP2 и VP3). Белки VP1, VP2 и VP3 находятся в соотношении 1:1:10, образуя икосаэдрический капсид (Xie Q et al., 2002). При образовании рекомбинантного вектора AAV (rAAV) кассета экспрессии, фланкированная ИКП, упаковывается в капсид AAV. Гены, необходимые для репликации AAV, не входят в кассету. Рекомбинантный AAV считается самым безопасным и одним из наиболее широко используемых вирусных векторов для переноса генов in vivo. Векторы могут инфицировать клетки из тканей множества типов, обеспечивая мощную и устойчивую трансгенную экспрессию. Они также являются непатогенными и имеют низкий профиль иммуногенности (High KA, 2011).
Одной из насущных целей для генно-терапевтических исследований является оптимизация векторов для максимальной тканевой трансдукции при минимизации дозы вектора. После внедрения в клетку капсидные белки AAV подвергаются протеасомно-опосредованному расщеплению. Фосфорилирование экспонированных на поверхности остатков тирозина в капсиде AAV является одним из первых этапов, которые ведут к разрушению вируса посредством убиквитин-протеасомного пути (Zhong L. et al., 2007). Регулируемый протеолиз в клетке происходит в основном посредством этого пути. Убиквитин представляет собой небольшой белок (примерно 8,5 кДа), который можно обнаружить во всех эукариотических клетках. Убиквитин присоединен к боковой цепи аминокислот в белковом субстрате. После присоединения дополнительных убиквитиновых белков к матрице с помощью изначально присоединенного убиквитина образуется полиубиквитиновая цепь, и матрица получает метку для расщепления (Thrower J.S. et al. 2000, Peng J. et al. 2003, Bedford L. et al. 2011). Было показано, что мутации экспонированных на поверхности остатков тирозина приводят к повышению эффективности трансдукции векторов AAV2 (Zhong L. et al., 2008). В последнее время некоторые исследователи показали, что эта стратегия также эффективна во многих тканях в отношении других серотипов AAV, включающих в себя AAV-серотипы 6 и 8.
Очевидно, что в данной области техники существует потребность в композициях и способах, которые улучшают трансдукцию AAV, несущих клинически важные трансгены, у нуждающихся в этом пациентов.
СУЩНОСТЬ ИЗОБРЕТЕНИЯ
В настоящем изобретении рассмотрены новые варианты AAV, проявляющие повышенную эффективность трансдукции по сравнению с серотипами AAV (например, AAV1, AAV2, AAV8, AAV-rh74), которые не имеют модификаций, описанных в настоящем изобретении. Такие улучшенные векторы являются полезными для трансдукции в различных тканях, в том числе в печени, мышцах, мозге и сетчатке.
В одном варианте осуществления рассмотрен вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV), содержащий измененный капсидный белок VP1, и упомянутый измененный капсидный белок содержит замену остатка лизина, тем самым снижая убиквитинирование капсида и повышая эффективность трансдукции вариантного AAV в целевых тканях и клетках. В одном варианте осуществления вектор дополнительно содержит гетерологичную нуклеиновую кислоту (например, миниген, содержащий инвертированные концевые повторы AAV и гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты), функционально связанную с регуляторными последовательностями, которые направляют экспрессию продукта из гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты в клетку-хозяина. В предпочтительном варианте осуществления вектор AAV содержит одну или несколько замен лизина в VP1, что показано в таблицах настоящего описания. В другом варианте осуществления вектор AAV имеет серотип AAV8 и содержит альтерацию, указанную в таблице 3.
В предпочтительном варианте осуществления векторы AAV по изобретению, содержащие вариантные капсидные белки, являются полезными для экспрессии терапевтических пептидов или терапевтических нуклеиновых кислот. Такие пептиды включают в себя без ограничения противовирусную молекулу иРНК, фактор VIII, фактор IX или их функциональный фрагмент. Дополнительные продукты экспрессии включают в себя, например, IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, химерные иммуноглобулины, гуманизированные антитела или одноцепочечные антитела. В одном аспекте продуктом экспрессии является ингибирующая РНК (РНКи), которая полезна для ингибирования инфекции и репликации вируса гепатита С (HCV). В другом варианте осуществления продуктом экспрессии является антисмысловая нуклеиновая кислота, полезная для понижающей регуляции рассматриваемой клетки-мишени.
В другом варианте осуществления настоящего изобретения рассмотрена фармацевтическая композиция, содержащая вариантные векторы AAV по изобретению в биологически совместимом носителе. В объем настоящего изобретения также входят клеточные культуры, содержащие описанные в изобретении векторы.
Изобретение также охватывает способ доставки трансгена в клетку субъекта, при этом указанный способ содержит этап контактирования клетки с вектором AAV по изобретению, и упомянутый вектор AAV содержит трансген, при этом присутствие замены лизина в последовательности VP1 капсида в указанном векторе связано со снижением убиквитинирования и повышением эффективности трансдукции.
В конечном аспекте настоящее изобретение относится к вирусным вариантам-ловушкам, которые неэффективны при инфицировании клетки, но при этом эффективно блокируют нейтрализацию антителами вариантов вирусов, несущих полезные трансгены, которая обусловлена структурным сходством двух вариантов вируса. Примерные варианты капсидов для этой цели включают в себя, например, K38R, K143R, K510R и K709R.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
Фиг.1: остатки лизина на поверхности AAV1, AAV2 и AAV8: в изобретении используются серотипы AAV под следующими номерами по базе данных PDB: AAV1: 3NG9, AAV2: 1LP3 и AAV8: 2QA0. Стрелками указаны соответствующие остатки лизина. (А) Имеется 11 остатков лизина на поверхности AAV1 VP3. Остатки обозначены следующим цветом: K258 - красный, K459 - синий, K491 - желтый, K493 - пурпурный, K508 - голубой, K528 - темный оранжево-розовый, K533 - светло-зеленый, K545 - светло-голубой (синевато-серый), K567 - темный оранжево-розовый, K666 - светло-голубой, K707 - серый. (В) Имеются 10 остатков лизина на поверхности AAV2 VP3. Остатки обозначены следующим цветом: K258 - красный, K490 - желтый, K507 - голубой, K527 - темный оранжево-розовый, K532 - светло-зеленый, K544 - светло-голубой (синевато-серый), K549 - светло-желтый, K556 - светло-пурпурный, K665 - светло-голубой, K706 - серый. (C) Имеются 8 остатков лизина на поверхности AAV8 VP3. Остатки обозначены следующим цветом: K259 - красный, K333 - зеленый, K510 - голубой, K530 - темный оранжево-розовый, K547 - светло-голубой (синевато-серый), K569 - темный оранжево-розовый, K668 светло-голубой, K709 - серый. Следует отметить, что остатки K528 и K567 из AAV1 и остатки K530 и K569 из AAV8 структурно примыкают друг к другу и показаны одним и тем же цветом.
Фиг.2: несколько остатков лизина в капсиде AAV8 были заменены на аргинин. У животных отбирали кровь через 8 недель после инъекции вируса через хвостовую вену. Уровни hF.IX определяли с помощью анализа ELISA. (А) Выполняли замену на аргинин остатков с предполагаемым убиквитинированием, определенным с помощью программного обеспечения с высоким и средним доверительным уровнем. Вирусные частицы в количестве 2,5×1010 на мышь вводили через хвостовую вену. (B, C) Остатки с предполагаемым убиквитинированием, но с низким доверительным уровнем, определенным с помощью программного обеспечения, были заменены на аргинин. Вирусные частицы в количестве 2,5×109 на мышь вводили через хвостовую вену. (B) Мутации капсида K569R и K668R. (C) Влияние капсидных мутаций K38R, K143R, K259R, K510R и K547R по сравнению с влиянием мутации K530R.
Фиг.3: комбинация капсидных мутаций K на R. (А) Комбинация мутаций K137R, K33R и K530R, тем не менее, выше, чем у дикого типа, но статистически не отличается от K530R. (В) Мутация K709R негативно влияет на трансдукцию AAV8; добавление мутации K709R в мутантный K(137/333/530)R также уменьшает трансдукцию вируса. (С) Комбинация множественных мутаций лизина на аргинин не увеличивает частоту трансдукции. (D) Комбинация трех остатков от лизина до аргинина с четырьмя или шестью остатками от тирозина до фенилаланина снижает скорость трансдукции.
Фиг.4: трансдукция AAV1: (А) уничтожение посредством CTL гепатоцитов HHL5-В7, трансдуцированных мутантными AAV-1 лизинами при трех разных значениях множественности инфекции (MOI): 5K, 50K и 500K. В качестве положительного контроля использовали пептид (IPQYGYLTL для AAV1; VPQYGYLTL для AAV2). Высвобождение липопротеинов высокой плотности (ЛВП) коррелирует с гибелью клеток. (B) Общее количество GFP-положительных клеток и экспрессию зеленого флуоресцирующего белка (GFP) сравнивали в разных конструкциях с показателями MOI 50K и 500K.
Фиг.5: трансдукция AAV2: (А) мутантные AAV2 K137R, K527R или K532R сравнивали с WT AAV2 в отношении скорости трансдукции клеточной линии HHL5. Клетки трансфецировали с MOI 10K, 50K, 100K и 500K и проверяли через 24 часа на экспрессию GFP. (В) график, показывающий цитотоксичность, которую измеряли по высвобождению липопротеинов низкой плотности (ЛНП) тестируемых вариантов.
Фиг.6: анализ цитотоксических Т-лимфоцитов (CTL), в котором целевые клетки-гепатоциты трансдуцировали вектором AAV2 с повышением концентраций, а затем инкубировали с эффекторными клетками, подобранными по HLA. Векторы AAV кодировали AAV-2 капсид дикого типа или одиночные мутации лизина, как указано. Эффекторы получали из мононуклеарных клеток периферической крови (РВМС), выращенных in vitro, против AAV-2 главного комплекса гистосовместимости (МНС) класса I эпитопа VPQYGYLTL, при соотношении эффектор-мишень 10:1. Результаты выражены в процентах от активности CTL (% цитотоксичности по сравнению с клетками, обработанными 10% SDS в качестве максимального контроля цитотоксичности после вычитания фоновых значений) по отношению к вектору дикого типа.
Фиг.7: данные RH74: уровни экспрессии человеческого трансгена F.IX в плазме, измеренные с помощью ELISA, являются специфичными для человеческого F.IX. (А) Определение TMR=K(137/333/530)R, определение HMF=Y(253/275/447/703/707/733)F. (В) Определение HMR: K(137/259/333/530/552/569)R, определение 195/202: G195A+L199V+S201P+G202N. После инъекции мышам HMR+195/202, HMR+195/202+K(38)R, HMR+195/202+K(51)R, HMR+195/202+K(61)R и HMR+195/202+K(77)R продуцируются на более высоком уровне, чем продукция hFIX, тогда как инъекции HMR+195/202+K(122/123)R или HMR+195/202+K(142/413)R вообще не вызывают какой-либо определяемой продукции hFIX. (C): мутантный RHM13_1 продуцировал аналогичные уровни hFIX по сравнению с Rh74 WT, тогда как уровни hFIX, полученные у мышей после введения RHM17_1, только слегка превышали фоновый уровень. (D) мутантный RHM14_2 продуцировал аналогичные уровни hFIX по сравнению с Rh74 WT; показатели у RHM15_1 имеют промежуточное значение между показателями AAV8 и AAVrh74 WT.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Согласно настоящему изобретению, авторы обнаружили, что замена остатков лизина на капсиде AAV на остатки аргинина увеличивает эффективность трансдукции AAV. Начальные эксперименты авторов привели к предположению, что одиночная замена остатка лизина будет мишенью для убиквитинирования и даст в результате более высокий уровень экспрессии трансгена человеческого фактора IX (FIX) у мышей по сравнению с животными, получающими немодифицированные векторы AAV. Описанные в изобретении мутанты можно выгодно использовать в AAV-лизиновых остатках для создания векторов, которые с более высокой эффективностью нацелены на печень, ЦНС, мышцы и другие органы, по сравнению с капсидом AAV дикого типа. Таким образом, настоящее открытие может быть использовано для разработки лекарственных препаратов для лечения гемофилии А, В, болезни Хантингтона и практически любого другого заболевания, при котором требуется повышенный уровень трансдукции желательных трансгенов в ткани-мишени, представляющей интерес.
Следующие определения приведены для облегчения понимания настоящего изобретения.
I. ОПРЕДЕЛЕНИЯ:
"Генная терапия" представляет собой вставку генов в клетки и/или тканей субъекта для лечения заболевания, обычно, наследственных заболеваний, при этом дефектный мутантный аллель заменяется или дополняется функциональным аллелем.
"Аденоассоциированные вирусы" относятся к семейству парвовирусов и представляют собой небольшие вирусы с геномом одноцепочечной ДНК. Эти вирусы могут встраивать генетический материал в конкретный сайт на хромосоме 19 и являются предпочтительными, поскольку не связаны с инфекционными заболеваниями человека.
"Терапевтический" пептид или белок представляет собой пептид или белок, который может облегчить или уменьшить симптомы, возникающие в результате отсутствия белка или дефекта в белке в клетке или у субъекта. С другой стороны, "терапевтическим" пептидом или белком является пептид или белок, который иным образом приносит полезный эффект для субъекта, например, обладает противораковыми эффектами. Терапевтические пептиды и белки включают в себя без ограничения CFTR (ген трансмембранного регуляторного белка кистозного фиброза), дистрофин (в том числе белковый продукт минигенов дистрофина, см., например, Vincent et al., (1993) Nature Genetics 5:130), утрофин (Tinsley et al, (1996). Nature 384:349), факторы свертывания (фактор XIII, фактор IX, фактор X и т.д.), моноклональные антитела (Lewis et al., 2002), эритропоэтин, рецептор ЛНП, липопротеинлипазы, орнитин транскарбамилазу, β-глобин, α-глобин, спектрин, α-антитрипсин, аденозиндезаминазу, гипоксантин-гуанин фосфорибозилтрансферазу, β-глюкоцереброзидазу, сфингомиелиназу, лизосомальную гексозаминидазу, дегидрогеназу кетокислот с разветвленной цепью, гормоны, факторы роста (например, инсулиноподобные факторы роста 1 и 2, тромбоцитарный фактор роста, эпидермальный фактор роста, фактор роста нервов, нейротрофический фактор -3 и -4, мозговой нейротрофический фактор, глиальный фактор роста, трансформирующий фактор роста α и β и тому подобное), цитокины (например, α-интерферон, β-интерферон, γ-интерферон, интерлейкин-2, интерлейкин-4, интерлейкин-12, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор, лимфотоксин), продукты гена самоубийства (например, тимидинкиназа вируса простого герпеса, цитозиндезаминаза, дифтерийный токсин, цитохром Р450, дезоксицитидинкиназа и фактор некроза опухоли), белки, придающие устойчивость к лекарственному средству, применяемому в противораковой терапии, продукты гена-супрессора опухоли (например, р53, Rb, Wt-1, NF1, VHL, APC и т.п.) и любой другой пептид или белок, который обладает терапевтическим эффектом у нуждающегося в этом субъекта.
Дополнительные примеры терапевтических пептидов или белков включают в себя пептиды или белки, которые можно применять для лечения заболевания, включающего в себя без ограничения кистозный фиброз (и другие заболевания легких), гемофилию А, гемофилию В, талассемию, анемии и другие заболевания крови, СПИД, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Гентингтона, боковой амиотрофический склероз, эпилепсию и другие неврологические расстройства, рак, сахарный диабет, мышечную дистрофию (например, Дюшенна, Беккера), болезнь Гоше, болезнь Херлера, дефицит аденозиндеаминазы, болезни накопления гликогена и другие метаболические дефекты, дегенеративные заболевания сетчатки (и другие заболевания глаз), а также заболевания солидных органов (например, головного мозга, печени, почек, сердца).
Термин "промоторы" или "промотор", используемый в изобретении, может относиться к последовательности ДНК, которая расположена как смежная с последовательностью ДНК, кодирующей рекомбинантный продукт. Промотор предпочтительно функционально связан со смежной последовательностью ДНК. Промотор обычно увеличивает количество экспрессируемого рекомбинантного продукта от последовательности ДНК по сравнению с количеством экспрессируемого рекомбинантного продукта в отсутствие промотора. Промотор из одного организма может быть использован для усиления экспрессии рекомбинантного продукта из последовательности ДНК, которая происходит из другого организма. Например, промотор от позвоночных можно использовать для экспрессии GFP медузы у позвоночных. Дополнительно, один промоторный элемент может увеличивать количество экспрессируемых рекомбинантных продуктов для нескольких попарно присоединенных последовательностей ДНК. Следовательно, один промоторный элемент может усиливать экспрессию одного или нескольких рекомбинантных продуктов. Множество промоторных элементов хорошо известны специалистам в данной области техники.
В одном варианте осуществления будет желательным высокий уровень конститутивной экспрессии. Примеры таких промоторов включают в себя без ограничения промотор/энхансер LTR вируса ретровирусной саркомы Рауса (RSV), немедленно-ранний промотор/энхансер цитомегаловируса (CMV) (см., например, Boshart et al., Cell, 41: 521-530 (1985)), промотор SV40, промотор дигидрофолатредуктазы, промотор цитоплазматического β-актина и промотора фосфоглицеролкиназы (PGK).
В другом варианте осуществления могут быть желательными индуцируемые промоторы. Индуцируемые промоторы представляют собой промоторы, которые регулируются экзогенно поступающими соединениями как в цис-, так и в транс-форме, включая в себя без ограничений индуцируемый цинком промотор металлотионеина (MT) овцы; индуцируемый дексаметазоном (Dex) промотер вируса опухоли молочной железы мыши (MMTV); промотерную систему T7-полимеразы (WO 98/10088); тетрациклин-репрессируемую систему (Gossen et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 89:5547-5551 (1992)); тетрациклин-индуцируемую систему (Gossen et al., Science, 268:1766-1769 (1995); также см. Harvey et al. Curr. Opin. Chem. Biol., 2:512-518 (1998)); RU486 - индуцируемую систему (Wang et al., Nat. Biotech, 15:239-243 (1997) и Wang et al., Gene Ther., 4:432-441 (1997)); и рапамицин-индуцируемую систему (Magari et al., J. Clin. Invest., 100:2865-2872 (1997); Rivera et al., Nat. Medicine 2:1028-1032 (1996)). Другие типы индуцируемых промоторов, которые могут быть полезны в этом плане, представляют собой промоторы, которые регулируются определенным физиологическим состоянием, например, исключительно температурой, острой фазой заболевания или при репликации клеток.
В другом варианте осуществления используется природный промотор для рассматриваемого трансгена или последовательности нуклеиновой кислоты. Природный промотор может быть предпочтительным, если желательно, чтобы экспрессия трансгена или последовательности нуклеиновой кислоты имитировала нативную экспрессию. Можно использовать природный промотор, если экспрессия трансгена или другой последовательности нуклеиновой кислоты должна регулироваться по времени, или по мере развития, или тканеспецифичным образом, или в ответ на конкретные транскрипционные раздражители. В дополнительном варианте осуществления для имитации нативной экспрессии также можно использовать другие элементы контроля нативной экспрессии, такие как энхансерные элементы, сайты полиаденилирования или консенсусные последовательности Козака.
В одном варианте осуществления рекомбинантный вирусный геном содержит трансген, функционально связанный с тканеспецифичным промотором. Например, если желательно получить экспрессию в скелетных мышцах, можно использовать промотор, действующий в мышцах. В число таких промоторов входят промоторы из генов, кодирующих скелетный α-актин, легкую цепь 2А миозина, дистрофин, мышечную креатинкиназу, а также синтетические мышечные промоторы, активность которых превышает активность промоторов природного происхождения. См. Li et al., Nat. Biotech., 17:241-245 (1999). Примеры промоторов, которые являются тканеспецифичными, известны для альбумина печени, Miyatake et al., J. Virol., 71:5124-32 (1997); также, среди прочих, известны: коровый промотор вируса гепатита В, Sandig et al., Gene Ther. 3:1002-9 (1996); альфа-фетопротеина (АФП), Arbuthnot et al., Hum. Gene Ther., 7:1503-14 (1996), кости (остеокальцин, Stein et al., Mol. Biol. Rep., 24:185-96 (1997)); костного сиалопротеина, Chen et al., J. Bone Miner. Res. 11:654-64 (1996), лимфоцитов (CD2, Hansal et al., J. Immunol., 161:1063-8 (1998)); тяжелой цепи иммуноглобулина; Т-клеточный рецептор α-цепи, нейрональный промотор (нейрон-специфичная энолаза (NSE), Andersen et al., Cell. Mol. Neurobiol., 13:503-15 (1993); ген нейрофиламентов легкой цепи, Piccioli et al., Proc. Natl. Acad. Sci. USA, 88:5611-5 (1991); нейрон-специфичный ген vgf, Piccioli et al., Neuron, 15:373-84 (1995).
Термины "энхансеры" или "энхансер", используемые в изобретении, могут относиться к последовательности ДНК, которая расположена как смежная с последовательностью ДНК, кодирующей рекомбинантный продукт. Энхансерные элементы обычно расположены в 3'-5' направлении от промоторного элемента или могут быть расположены ниже или в пределах кодирующей последовательности ДНК (например, последовательности ДНК, транскрибированной или транслированной в рекомбинантный продукт или продукты). Таким образом, энхансерный элемент может быть расположен на расстоянии 100 пар оснований, 200 пар оснований или 300 или больше пар оснований перед последовательностью ДНК, которая кодирует рекомбинантный продукт, или после этой последовательности. Энхансерные элементы могут увеличивать количество экспрессируемого рекомбинантного продукта от последовательности ДНК, превышая повышенную экспрессию, обусловленную промоторным элементом. Специалистам в данной области техники доступно множество энхансерных элементов.
Термины "нуклеиновая кислота" или "молекула нуклеиновой кислоты", используемые в изобретении, относятся к любой и одноцепочечной и двухцепочечной молекуле ДНК или РНК и, в случае одноцепочечной молекулы, к ее комплементарной последовательности в линейной или циркулярной форме. При описании молекул нуклеиновых кислот в настоящем изобретении последовательность или структура конкретной молекулы нуклеиновой кислоты может быть описана в соответствии с общепринятой конвенцией, рассматривая последовательность в направлении от 5' к 3'. В отношении нуклеиновых кислот по изобретению иногда используется понятие "выделенная нуклеиновая кислота". Это понятие, в отношении ДНК, относится к молекуле ДНК, которая отделена от последовательностей, с которыми она непосредственно граничит в природном геноме организма, из которого эта молекула происходит. Например, "выделенная нуклеиновая кислота" может содержать молекулу ДНК, встроенную в вектор, такой как плазмида или вирусный вектор, или быть интегрированной в геномную ДНК в прокариотических или эукариотических клетках или в организме-хозяине.
"Вектор" представляет собой репликон, такой как плазмида, космида, бакмида, фаг или вирус, к которому может присоединяться другая генетическая последовательность или элемент (или ДНК, или РНК) таким образом, чтобы вызвать репликацию присоединенной последовательности или элемента.
"Оперон экспрессии" относится к сегменту нуклеиновой кислоты, которая может иметь последовательности контроля транскрипции и трансляции, такие как промоторы, энхансеры, старт-сигналы трансляции (например, кодоны ATG или AUG), сигналы полиаденилирования, терминаторы и т.п., которые способствуют экспрессии кодирующей последовательности полипептида в клетке-хозяине или организме-хозяине.
Термины "трасформация", "трансфекция", "трансдукция" относятся к любому способу или средствам, с помощью которых нуклеиновая кислота вводится в клетку или организм-хозяин, и могут быть использованы взаимозаменяемо для передачи аналогичного значения. Такие способы включают в себя без ограничения трансфекцию, электропорацию, микроинъекции, инфицирование, ПЭГ-сплавление и тому подобное.
Встраиваемая нуклеиновая кислота может быть не интегрирована или интегрирована (ковалентно связана) в нуклеиновую кислоту клетки-реципиента или организма. В клетках бактерий, дрожжей, растений и млекопитающих встраиваемая нуклеиновая кислота может, например, сохраняться в качестве эписомального элемента или независимого репликона, например, в виде плазмиды. С другой стороны, встраиваемая нуклеиновая кислота может становиться интегрированной в нуклеиновую кислоту клетки-реципиента или организма и находиться в стабильном состоянии в этой клетке или организме, и далее передаваться или наследоваться потомством клеток или организмов упомянутой клетки-реципиента или организма. Наконец, встраиваемая нуклеиновая кислота может только временно находиться в клетке-реципиенте или в организме-хозяине.
Термин "селектируемый маркерный ген" относится к гену, который при экспрессии придает трансформированной клетке или растению селектируемый фенотип, например, устойчивость к антибиотикам.
Термин "функционально связанный" означает, что регуляторные последовательности, необходимые для экспрессии кодирующей последовательности, расположены в молекуле ДНК в соответствующих позициях по отношению к кодирующей последовательности таким образом, чтобы осуществлялась экспрессия кодирующей последовательности. Это же определение иногда применяется к расположению в векторе экспрессии единиц транскрипции и других элементов контроля транскрипции (например, энхансеров).
Термин "олигонуклеотид", используемый в изобретении, относится к последовательностям, праймерам и зондам, согласно настоящему изобретению, и определяется как молекула нуклеиновой кислоты, состоящая из двух или нескольких, предпочтительно более чем из трех рибонуклеотидов или дезоксирибонуклеотидов. Точный размер олигонуклеотида будет зависеть от различных факторов и от конкретного применения и использования олигонуклеотида.
Понятие "специфичная гибридизация" относится к связи между двумя молекулами одноцепочечных нуклеиновых кислот с достаточной степенью комплементарности последовательностей (иногда их называют "практически комплементарными"), которая позволит осуществление такой гибридизации при заранее определенных условиях, обычно используемых в данной области техники. В частности, это понятие относится к гибридизации олигонуклеотида по существу с комплементарной последовательностью, содержащейся в одноцепочечной молекуле ДНК или РНК по изобретению, за существенным исключением гибридизации олигонуклеотида с одноцепочечными нуклеиновыми кислотами с некомплементарными последовательностями.
Термин "праймер", используемый в изобретении, относится к ДНК-олигонуклеотиду, и к одноцепочечному и к двухцепочечному, или полученному из биологической системы, который создан путем расщепления ферментами рестрикции или получен синтетическим путем, при этом праймер при попадании в соответствующую среду способен функционально действовать в качестве инициатора матрично-зависимого синтеза нуклеиновых кислот. Если имеется соответствующая матрица нуклеиновой кислоты, подходящие трифосфатные нуклеозиды - предшественники нуклеиновых кислот, полимеразный фермент, подходящие кофакторы и условия, такие как подходящая температура и уровень рН, можно удлинять праймер на его 3'-конце путем добавления нуклеотидов посредством активности полимеразы или сходного действия, с получением продукта удлинения праймера. Праймер может иметь вариабельную длину в зависимости от конкретных условий и требований применения. Например, олигонуклеотидный праймер для диагностических применений обычно имеет длину от 15 до 25 или больше нуклеотидов. Праймер должен иметь достаточную степень комплементарности к желательной матрице, чтобы запускать синтез желательного продукта удлинения, то есть, чтобы была возможность для отжига с желательной матричной цепью таким способом, который будет достаточным для получения 3'-гидроксильной группы праймера в соответствующей юкстапозиции, для использования при инициации синтеза посредством полимеразы или подобного фермента. Не требуется полная комплементарность праймерной последовательности к желательной матрице. Например, можно присоединять некомплементарную нуклеотидную последовательность к 5'-концу праймера, который в остальном является комплементарным. Альтернативно, в последовательность олигонуклеотидного праймера можно вкраплять некомплементарные основания при условии, что последовательность праймера имеет достаточную степень комплементарности с последовательностью желательной матричной цепи, чтобы функционально получить матрично-праймерный комплекс для синтеза продукта удлинения.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) была описана в патентах США №№ 4683195, 4800195 и 4965188, полное раскрытие которых включено в настоящее изобретение путем ссылки.
Термин "выделенный" может относиться к соединению или комплексу, который был в достаточной степени отделен от других соединений, с которыми он был бы связан в природном виде. Термин "выделенный" не предназначен для исключения искусственных или синтетических смесей с другими соединениями или материалами, или наличия примесей, которые не нарушают основополагающего действия или последующих анализов и которые могут присутствовать, например, из-за неполной очистки или добавления стабилизаторов.
Термин "иммунный ответ" предназначен для обозначения любого ответа на антиген или антигенную детерминанту со стороны иммунной системы позвоночного субъекта. Примеры иммунных ответов включают в себя гуморальные иммунные ответы (например, выработку антиген-специфичных антител) и клеточно-опосредованные иммунные ответы (например, пролиферацию лимфоцитов), что описано в настоящем изобретении ниже.
II. СПОСОБЫ ИСПОЛЬЗОВАНИЯ И СПОСОБЫ ВВЕДЕНИЯ ВАРИАНТНЫХ АДЕНОАССОЦИИРОВАННЫХ ВИРУСНЫХ ВЕКТОРОВ ПО ИЗОБРЕТЕНИЮ
Способы по настоящему изобретению относятся к средствам для доставки гетерологичных последовательностей нуклеиновых кислот в разнообразные клетки-хозяева, в том числе и в делящиеся и в непролиферирующие клетки. Векторы и другие реагенты, способы и фармацевтические композиции по настоящему изобретению являются дополнительно полезными в способе введения белка или пептида субъекту, нуждающемуся в этом, в качестве способа лечения или с другой целью. Таким образом, белок или пептид могут быть получены в субъекте in vivo. Субъект может иметь потребность в белке или пептиде, потому что у этого субъекта имеется дефицит белка или пептида, или потому, что выработка белка или пептида в субъекте может давать некоторый терапевтический эффект, в качестве способа лечения или с другой целью, что описано ниже.
В общем, настоящее изобретение можно использовать для доставки любой чужеродной нуклеиновой кислоты с биологическим эффектом для лечения или ослабления симптомов, связанных с каким-либо расстройством, обусловленным генной экспрессией. Примеры патологических состояний включают в себя без ограничения кистозный фиброз (и другие заболевания легких), гемофилию А, гемофилию В, талассемию, анемии и другие нарушения свертываемости крови, СПИД, болезнь Альцгеймера, болезнь Паркинсона, болезнь Гентингтона, боковой амиотрофический склероз, эпилепсию и другие неврологические расстройства, рак, сахарный диабет, мышечные дистрофии (например, Дюшенна, Беккера), болезнь Гоше, болезнь Херлера, дефицит аденозиндеаминазы, болезни накопления гликогена и другие метаболические дефекты, дегенеративные заболевания сетчатки (и другие заболевания глаз), заболевания солидных органов (например, мозга, печени, почек, сердца) и тому подобное.
Дополнительно, настоящее изобретение можно использовать для доставки нуклеиновых кислот, кодирующих моноклональные антитела или их фрагменты, которые, как известно, обеспечивают полезные биологические эффекты для лечения или ослабления симптомов, связанных с раком, инфекционными заболеваниями и аутоиммунными заболеваниями, такими как ревматоидный артрит. Другие последовательности могут кодировать, например, цитокины, такие как интерферон-альфа, которые могут модулировать течение болезни.
Перенос генов обладает значительным потенциалом применения для понимания и создания способов лечения патологических состояний. Существует ряд наследственных заболеваний, для которых были изучены и клонированы дефектные гены. В некоторых случаях известна функция этих клонированных генов. В целом, упомянутые выше патологические состояния делятся на два класса: дефицитные состояния, как правило, дефицит ферментов, которые обычно наследуются рецессивным образом, и состояния нарушения баланса, иногда с вовлечением по меньшей мере регуляторных или структурных белков, которые наследуются доминантным образом. При дефицитных заболеваниях можно использовать перенос генов, чтобы внести нормальный ген в пораженные ткани для заместительной терапии, а также для создания животных моделей этого заболевания с помощью антисмысловых мутаций. При патологических состояниях нарушения баланса перенос генов можно использовать для создания патологического состояния в смоделированной системе, которую затем можно использовать для разработки мер против этого патологического состояния. Таким образом, способы по настоящему изобретению позволяют лечить генетические заболевания. Согласно изобретению, патологическое состояние лечится путем частичного или полного устранения дефекта или дисбаланса, который вызывает заболевание или усугубляет степень его тяжести. Также возможно использование сайт-специфичной интеграции нуклеиновых последовательностей для запуска мутаций или исправления дефектов.
Наконец, настоящее изобретение находит дополнительное использование в способах диагностики и скрининга, где вызывающий интерес ген транзиторно или стабильно экспрессируется в клеточной культуральной системе или, альтернативно, в трансгенной животной модели.
III. СУБЪЕКТЫ, ФАРМАЦЕВТИЧЕСКИЕ РЕЦЕПТУРЫ, ВАКЦИНЫ И СПОСОБЫ ВВЕДЕНИЯ
Настоящее изобретение находит применение в областях ветеринарии и медицины. Подходящие субъекты включают в себя и птиц и млекопитающих, при этом предпочтительными являются млекопитающие. Термин "птицы", используемый в изобретении, включает в себя без ограничения кур, уток, гусей, перепелов, фазанов и индеек. Термин "млекопитающее", используемый в изобретении, включает в себя без ограничения людей, представителей крупного рогатого скота, овец, коз, лошадей, кошачьих, собачьих, зайцеобразных и тому подобное. Человеческие субъекты являются наиболее предпочтительными. Человеческие субъекты включают в себя плодные субъекты, новорожденных, младенцев, несовершеннолетних и взрослых людей.
В конкретных вариантах осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей вирусную частицу по изобретению в фармацевтически приемлемом носителе или в других лекарственных соединениях, фармацевтические агенты, носители, адъюванты, разбавители и т.д. Носитель для инъекций обычно является жидким. Носитель для других способов введения может быть или твердым, или жидким, таким как стерильная апирогенная вода или стерильный апирогенный фосфатно-солевой буферный раствор. Для введения путем ингаляции носитель является вдыхаемым и предпочтительно находится в твердой или жидкой дисперсной форме. В качестве инъекционной среды предпочтительно использовать воду, содержащую добавки, общепринятые для инъекционных растворов, такие как стабилизирующие агенты, соли или солевые растворы и/или буферы.
В других вариантах осуществления настоящее изобретение относится к фармацевтической композиции, содержащей клетку, в которой провирус AAV интегрирован в геном, в фармацевтически приемлемом носителе или других лекарственных соединениях, фармацевтических агентах, носителях, адъювантах, разбавителях и т.д.
"Фармацевтически приемлемым" считается материал, который не имеет биологических или других противопоказаний, например, материал можно вводить субъекту без каких-либо нежелательных биологических эффектов. Таким образом, такие фармацевтические композиции можно использовать, например, для трансфекции клетки ex vivo или для введения in vivo вирусной частицы или клетки непосредственно субъекту.
Настоящее изобретение дополнительно относится к способу доставки нуклеиновой кислоты в клетку. В способах in vitro вирус можно вводить в клетку с помощью стандартных способов вирусной трансдукции, известных в данной области техники. Предпочтительно, чтобы вирусные частицы добавлялись в клетки при соответствующем показателе множественности инфекции в соответствии со стандартными способами трансдукции, подходящими для конкретных клеток-мишеней. Титры вводимого вируса могут варьироваться в зависимости от типа клетки-мишени и конкретного вирусного вектора и могут быть определены специалистами в данной области техники без излишнего экспериментирования. С другой стороны, введение парвовирусного вектора по настоящему изобретению можно осуществлять с помощью любых других способов, известных в данной области техники.
Рекомбинантные вирусные векторы предпочтительно вводят в клетку в биологически эффективном количестве. "Биологически эффективное" количество вирусного вектора представляет собой количество, которое достаточно, чтобы вызвать инфекцию (или трансдукцию) и экспрессию гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты в клетке. Если вирус вводят в клетку in vivo (например, вирус вводят субъекту, как описано ниже), "биологически эффективное" количество вирусного вектора представляет собой количество, которое достаточно, чтобы вызвать трансдукцию и экспрессию гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты в клетке-мишени.
Клетка для введения вирусного вектора по изобретению может быть клеткой любого типа, включая в себя без ограничения нервные клетки (включающие в себя клетки периферической и центральной нервной системы, в частности, клетки головного мозга), легочные клетки, клетки сетчатки, эпителиальные клетки (например, эпителиальные клетки кишечника и дыхательных путей), мышечные клетки, клетки поджелудочной железы (в том числе островковые клетки), печеночные клетки, клетки миокарда, костные клетки (например, стволовые клетки костного мозга), гемопоэтические стволовые клетки, клетки селезенки, кератиноциты, фибробласты, эндотелиальные клетки, клетки предстательной железы, половые клетки и тому подобное. Альтернативно, клетка может быть любой клеткой-предшественником. В качестве дополнительной альтернативы, клетки могут представлять собой стволовые клетки (например, нервные стволовые клетки, стволовые клетки печени). Кроме того, клетки могут происходить от любых видов, как указано выше.
В конкретных вариантах осуществления настоящего изобретения клетки забирают из субъекта, в эти клетки вводят парвовирусный вектор и затем клетки возвращают в субъект. Способы забора клеток от субъекта для обработки ex vivo с последующим введением обратно субъекту известны в данной области техники. Альтернативно, вектор rAAV вводят в клетки от другого субъекта, в культивируемые клетки или в клетки из любого другого подходящего источника, и затем клетки вводят нуждающемуся в этом субъекту.
Подходящие клетки для генной терапии ex vivo включают в себя без ограничения клетки печени, нервные клетки (включающие в себя клетки центральной и периферической нервной системы, в частности, клетки головного мозга), клетки поджелудочной железы, клетки селезенки, фибробласты (например, фибробласты кожи), кератиноциты, эндотелиальные клетки, эпителиальные клетки, миобласты, гемопоэтические клетки, стромальные клетки костного мозга, клетки-предшественники и стволовые клетки.
Дозировки клеток для введения субъекту будут варьироваться в зависимости от возраста, состояния и вида субъекта, типа клеток, нуклеиновой кислоты, экспрессируемой этими клетками, от способа введения и тому подобного. Обычно в одной дозе можно вводить по меньшей мере приблизительно от 102 приблизительно до 108, предпочтительно приблизительно от 103 приблизительно до 106 клеток. Предпочтительно, клетки вводятся в "терапевтически эффективном количестве".
Термин "терапевтически эффективное" количество, используемый в изобретении, представляет собой количество, которое достаточно для облегчения (например, для смягчения, уменьшения, снижения) по меньшей мере одного из симптомов, связанных с патологическим состоянием. Другими словами, "терапевтически эффективное" количество представляет собой количество, которое достаточно для обеспечения некоторого улучшения состояния субъекта.
Еще в одном аспекте изобретение относится к способу лечения субъектов in vivo вирусными частицами по изобретению. Введение парвовирусных частиц по настоящему изобретению субъекту-человеку или животному, нуждающемуся в этом, можно проводить любым известным в данной области способом для введения вирусных векторов.
Примеры способов введения включают в себя местное применение, пероральное, ректальное, чрезслизистое, трансдермальное, ингаляционное, парентеральное введение (например, внутривенное, подкожное, внутрикожное, внутримышечное и внутрисуставное) и т.п., а также инъекции непосредственно в ткань или в орган и, альтернативно, интратекальные, непосредственно внутримышечные, внутрижелудочковые, внутривенные, внутрибрюшинные, интраназальные или внутриглазные инъекции. Инъекционные препараты могут быть приготовлены в общепринятых лекарственных формах: в виде жидких растворов или суспензий, твердых форм, подходящих для приготовления растворов или суспензий в жидкости перед инъекцией, или в виде эмульсий. Альтернативно, можно вводить вирус локально, а не системно, например, в виде депо или в композиции с замедленным высвобождением.
В конкретных предварительно оформленных вариантах осуществления настоящего изобретения рассматриваемая нуклеотидная последовательность доставляется в печень субъекта. Введение в печень можно осуществлять любым способом, известным в данной области и включающим в себя без ограничения внутривенное введение, внутрипортальное введение, интрабилиарное введение, внутриартериальное введение и непосредственную инъекцию в паренхиму печени.
Предпочтительно клетки (например, клетки печени) инфицируются рекомбинантным парвовирусным вектором, кодирующим пептид или белок, эти клетки экспрессируют кодированный пептид или белок и выделяют его в кровеносную систему в терапевтически эффективном количестве (как описано выше). Альтернативно, доставка и экспрессия вектора происходит в другой клетке или ткани, включающей в себя без ограничения головной мозг, поджелудочную железу, селезенку или мышцы.
В других предпочтительных вариантах осуществления парвовирусные частицы по изобретению вводят внутримышечно, более предпочтительно, путем внутримышечной инъекции или путем местного применения (как описано выше). В других предпочтительных вариантах осуществления парвовирусные частицы по настоящему изобретению вводят в легкие.
Парвовирусный вектор, раскрытый в изобретении, можно вводить в легкие субъекта с помощью любых подходящих способов, но предпочтительным является введение в форме аэрозольной суспензии вдыхаемых частиц, состоящих из парвовирусного вектора по изобретению, который вдыхается субъектом. Вдыхаемые частицы могут быть жидкими или твердыми. Аэрозоли из жидких частиц, содержащих парвовирусные векторы по изобретению, можно делать любыми подходящими способами, например, в виде аэрозольного ингалятора под давлением или ультразвукового распылителя, которые известны специалистам в данной области техники. См., например, патент США № 4501729. Также можно делать аэрозоли твердых частиц, содержащие вирусные векторы по изобретению, с любым генератором твердых лекарственных аэрозольных частиц с помощью известных в фармацевтической области технологий.
Дозировки парвовирусных частиц по изобретению будут зависеть от способа введения, заболевания или состояния, подлежащего лечению, от состояния субъекта, конкретного вирусного вектора и доставляемого гена, и их можно определять рутинными способами. Примерными дозами для достижения терапевтического эффекта являются вирусные титры, составляющие по меньшей мере примерно 105, 106, 107, 108, 109, 1010, 1011, 1012, 1013, 1014, 1015, 1016 трансдуцирующих единиц или больше, предпочтительно приблизительно от 108 до 1013 трансдуцирующих единиц, еще более предпочтительно 1012 трансдуцирующих единиц.
Таким образом, парвовирусные векторы, реагенты и способы по настоящему изобретению можно использовать для направления нуклеиновой кислоты в делящиеся или неделящиеся клетки и для стабильной экспрессии в этих клетках гетерологичной нуклеиновой кислоты. С использованием этой векторной системы стало возможно вводить в клетки в условиях in vitro или in vivo гены, которые кодируют белки, влияющие на физиологию клеток. Таким образом, векторы по настоящему изобретению могут быть полезными в генной терапии при патологических состояниях или для экспериментальной модификации клеточной физиологии.
Следующий пример приведен для иллюстрации некоторых вариантов осуществления настоящего изобретения. Пример не предназначен для какого-либо ограничения объема изобретения.
ПРИМЕР I
Замены лизина на аргинин влияют на скорость трансдукции AAV и доставки МНС
Идентификация остатков лизина, нацеливаемых на векторы AAV1 и AAV8
Авторы использовали программное обеспечение UbPred для прогнозирования возможных сайтов убиквитинирования на капсидных белках AAV1, AAV2, AAV8 и Rh74 (Radivojac P. et al., 2010). Программное обеспечение UbPred доступно в Интернете по адресу http://www.ubpred.org/index.html. Результатом анализа является прогнозирование в отношении важных для убиквитинирования остатков лизина в указанной последовательности капсида серотипа AAV. Данные приведены в фиг.1 и таблице 1. К ним относятся следующие последовательности:
Последовательность AAV1 капсидного белка VP1:
Последовательность AAV8 капсидного белка VP1:
Таблица 3, приведенная в настоящем описании, показывает выход вектора, полученного с использованием различных капсидных мутаций, включающих в себя AAV8 по изобретению. В таблице также указан результат мутации, а именно увеличение, уменьшение или сравнимая эффективность трансдукции по сравнению с векторами дикого типа этого же серотипа.
Последовательность AAV2 капсидного белка VP1:
Последовательность AAV-Rh74 капсидного белка VP1:
Желательные мутанты в AAV-rh74 (также см. таблицу 3)
Следующие наборы праймеров были использованы для создания лизина, содержащего варианты капсида согласно изобретению:
Праймеры, используемые для мутагенеза:
- AAV1 праймеры:
- Праймеры AAV8
- Праймеры AAV2
- Праймеры AAV-rh74
Таблица 5 представляет серию векторов AAV, полученных посредством мутагенеза, которые были использованы для упаковки специфичных для печени AAV трансгенных кассет экспрессии для FIX. Эффективность упаковки была неотличимой от эффективности, наблюдаемой у немодифицированных векторов AAV8 дикого типа.
В объем настоящего изобретения также входят капсидные мутанты, которые содержат 2, 3, 4, 5, 6, 7 или больше измененных остатков лизина в любом из капсидных белков, описанных в изобретении, для дополнительного повышения эффективности трансдукции. Данные также показывают, что определенные мутации приводят к вариантам, которые проявляют значительно сниженную эффективность трансдукции. Такие варианты можно использовать в сочетании с вариантами, которые обладают повышенной эффективностью трансдукции, чтобы действовать в качестве ловушек для нейтрализации или насыщения антитела, направляющего иммунный ответ на вставляемые вектора, тем самым позволяя несущим желательные трансгены векторам с большей эффективностью проникать в клетки.
На фиг.1 схематично показана поверхность капсида. Данные, представленные на фиг.2А, 2В и 2С, показывают, что замена остатков лизина в капсиде VP1 на AAV8 изменяет уровень продуцируемого трансгена по причине изменения уровня трансдукции. Фиг.3А, 3В и 3С показывают эффекты одиночной и множественных мутаций на продукцию HF.IX в трансдуцированных клетках. Фиг.3D показывает, что комбинированные мутации, например, замена трех остатков лизина на аргинин вместе с заменой четырех или шести остатков тирозина на фенилаланин, снижают скорость трансдукции.
Уничтожение цитотоксическими T-лимфоцитами (CTL) HHL5-B7 гепатоцитов с помощью AAV-мутантов лизина
Авторы оценивали CTL-уничтожение гепатоцитов, трансдуцированных некоторыми AAV-мутантами лизина, раскрытыми в изобретении. Для оценки CTL-уничтожения трансдуцированных гепатоцитов использовали следующие материалы и способы.
Создание вектора
AAV векторы получали из клеток НЕК-293 с использованием технологии тройной трансфекции, как описано ранее (Matsushita, 1998) и очищали с градиентом хлорида цезия с помощью центрифугирования (Ayuso, 2010). Пептиды с AAV-эпитопами были синтезированы в компании Genemed Synthesis и ресуспендированы в 100% ДМСО с концентрацией 5 мг/мл.
Размножение Т-клеток in vitro
Человеческие РВМС (Cellular Technology LTD) оттаивали, промывали, подсчитывали и ресуспендировали при концентрации 2×106 клеток/мл в среде для лимфоцитов AIM-V (Gibco), содержащей 3% человеческой сыворотки (Bioreclamation), 1% L-глутамина (Gibco) и 1% пенициллина/стрептомицина (Gibco). Для каждого условия размножения добавляли 1×106 (500 мкл) клеток в каждую лунку в 24-луночном планшете (BD Falcon) в объеме 500 мкл. Дополнительно в качестве питающих клеток в каждую лунку добавляли 1×106 (500 мкл) аутологичных облученных спленоцитов (3000 рад) вместе с 2,5 мкг/мл человеческого β-2-микроглобулина (Lee BioSolutions) и 10 нг/мл человеческого рекомбинантного ИЛ-7 (R & D Systems). Клетки размножались в присутствии пептида AAV в конечной концентрации 10 мкг/мл при 37°С в 5% CО2. По истечении первых 24 часов к культуре клеток добавляли человеческий ИЛ-2 (Roche) в концентрации 10 нг/мл и после этого пополняли каждые 48 часов. По мере необходимости клетки распределяли по новым лункам и повторяли антигенную стимуляцию (антиген и фидерные клетки) каждые 7-10 дней до 3-х циклов рестимуляции.
АНАЛИЗ CTL
Анализ CTL проводили, как описано ранее (Pien, 2009). Коротко, измеряли высвобождение лактатдегидрогеназы (ЛДГ) после CTL-опосредованного направленного лизиса с помощью анализа нерадиоактивной цитотоксичности CytoTox 96 (Promega). Четыре тысячи клеток-мишеней HHL5 гепатоцитов высевали в каждую лунку в плоскодонный 96-луночный планшет Microtest Primaria (BD Falcon) в среде DMEM, не содержащей сыворотки. Клетки-мишени трансдуцировали с MOI 5000, 50000 и 500000 из капсида AAV и инкубировали в течение 18 часов при 37°С 5% CО2. После обработки и инкубации культивируемые клетки-мишени промывали средой однократно перед добавлением эпитоп-специфичных цитотоксических Т-лимфоцитов и оставляли для размножения, как описано выше. Клетки CTL добавляли при соотношении эффектор:клетка-мишень 10:1 в течение 4 часов при 37°С, 5% СО2 и измеряли уровень ЛДГ после 30-минутной инкубации при комнатной температуре с ферментной матрицей, считываемой при 490 нм с использованием спектрофотометра (Spectramax).
Проточная цитометрия
Экспрессии GFP после трансдукции AAV измеряли с помощью проточной цитометрии. Гепатоциты человека из клеточных линий HHL5 или Huh7 высевали в среду DMEM, содержащую 10% фетальной бычьей сыворотки, 1% L-глутамина (Gibco) и 1% пенициллина/стрептомицина (Gibco) при плотности 250000 клеток/лунку в 24-луночный планшет Primaria (BD Falcon). Клетки трансдуцировали вектором AAV с MOI 5000, 50000 или 5000000 и инкубировали в течение 18 часов при 37°С 5% CО2. После инкубации клетки обрабатывали трипсином, дважды промывали фосфатно-буферным раствором (ФБР) с 2% FBS и фиксировали 2% параформальдегидом. Образцы исследовали на проточном цитометре FACS Canto II с помощью FACSDiva® (BD Biosciences) и проводили дальнейший анализ с использованием программного обеспечения Flowjo® (Treestar).
РЕЗУЛЬТАТЫ АНАЛИЗА CTL
Для дальнейшего исследования эффекта мутаций лизина на вирусную трансдукцию авторы применяли анализ CTL-опосредованной цитотоксичности in vitro, ранее разработанный в лаборатории авторов, для тестирования функциональности векторов AAV (Pien et al.). Результаты трансдукции AAV1 и AAV2 показаны на фиг.4, 5 и 6. На фиг.4 показано, что все мутации лизина в капсиде AAV-1 вызывали уменьшение CTL-опосредованного уничтожения клеток-мишеней, что свидетельствует о том, что мутации лизина приводили к уменьшению эффективности процессинга и представления поверхностного антигена при трансдукции. Кроме того, эффект мутаций лизина, по-видимому, является аддитивным, а именно, тройные и четверные мутации лизина показывают наибольшее уменьшение CTL-опосредованного уничтожения (фиг.4A, B). Мутации в AAV-2 капсиде показали аналогичный эффект. См. фиг.5 и 6. На фиг.7 показаны результаты трансдукции, полученные при изучении вариантов Rh74.
Таким образом, авторы обнаружили, что замена остатков лизина в капсидах AAV на остатки аргинина повышает эффективность трансдукции AAV. В этих экспериментах было выявлено несколько вариантов, которые при трансдукции вызывали более выраженную экспрессию трансгена человеческого фактора IX (FIX) у мышей по сравнению с животными, получавшими немодифицированные векторы AAV.
ССЫЛКИ
Xie Q, Bu W, Bhatia S, Hare J, Somasundaram T, Azzi A, et al. The atomic structure of adeno-associated virus (AAV-2), a vector for human gene therapy. Proc Natl Acad Sci USA, 2002; 99:10405-10410.
High KA, Aubourg P «rAAV human trial experience» Methods Mol Biol. 2011; 807:429-57. Zhong L, Zhao W, Wu J, Li B, Zolotukhin S, Govindasamy L, Agbandje-McKenna M, Srivastava A. «A dual role of EGFR protein tyrosine kinase signaling in ubiquitination of AAV2 capsids and viral second-strand DNA synthesis», Mol Ther. 2007 Jul; 15(7):1323-30. Epub 2007 Apr 17.
Zhong L, Li B, Mah CS, Govindasamy L, Agbandje-McKenna M, Cooper M, Herzog RW, Zolotukhin I, Warrington KH Jr, Weigel-Van Aken KA, Hobbs JA, Zolotukhin S, Muzyczka N, Srivastava A. «Next generation of adeno-associated virus 2 vectors: point mutations in tyrosines lead to high-efficiency transduction at lower doses», Proc Natl Acad Sci USA. 2008 Jun 3; 105(22):7827-32.
Thrower JS, Hoffman L, Rechsteiner M, and Pickart С M «Recognition of the polyubiquitin proteolytic signal», EMBO J. 2000 January 4; 19(1):94-102.
Bedford L, Lowe J, Dick LR, Mayer RJ, Brownell JE. «Ubiquitin-like protein conjugation and the ubiquitin-proteasome system as drug targets» Nat Rev Drug Discov. 2011 Jan; 10(l):29-46.
Peng, J; Schwartz; Elias; Thoreen; Cheng; Marsischky; Roelofs; Finley et al (Aug 2003). «A proteomics approach to understanding protein ubiquitination». Nature biotechnology 21 (8):921-6.
Radivojac, P., Vacic, V., Haynes, C., Cocklin, R. R., Mohan, A., Heyen, J. W., Goebl, M. G., and Iakoucheva, L. M. Identification, Analysis and Prediction of Protein Ubiquitination Sites. Proteins: Structure, Function, and Bioinformatics. 78(2):365-380. (2010).
Описаны и приведены в качестве примера выше некоторые из предпочтительных вариантов осуществления настоящего изобретения, вместе с тем, это не означает, что изобретение ограничено такими вариантами осуществления. Можно делать различные модификации без отклонения от объема и сущности настоящего изобретения, изложенной в формуле изобретения ниже.
Claims (29)
1. Вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки субъекту гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, содержащий капсидный белок VP1, который содержит одну или несколько замен лизина, где указанные одна или несколько замен лизина выбраны из группы, состоящей из: замены K137R, замены K459R; замены K528R; замены K533R; замены K707R или замены K137R/K459R/K533R капсидного белка VP1 AAV1, при этом упомянутый вектор дополнительно содержит миниген, содержащий инвертированные концевые повторы AAV и гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, функционально связанную с регуляторными последовательностями, которые направляют экспрессию продукта из гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты в клетку-хозяин, и упомянутая замена лизина является эффективной для ингибирования убиквитинирования упомянутого капсидного белка, и тем самым увеличивается трансдукция упомянутого вектора AAV в клетке-мишени по сравнению с вектором AAV, содержащим капсидный белок VP1 AAV1 без одной или нескольких замен лизина.
2. Вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки субъекту гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, содержащий капсидный белок VP1, который содержит одну или несколько замен лизина, где указанные одна или несколько замен лизина выбраны из группы, состоящей из: замены K137R, замены K527R или замены K532 капсидного белка VP1 AAV2, при этом упомянутый вектор дополнительно содержит миниген, содержащий инвертированные концевые повторы AAV и гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, функционально связанную с регуляторными последовательностями, которые направляют экспрессию продукта из гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты в клетку-хозяин, и упомянутая замена лизина является эффективной для ингибирования убиквитинирования упомянутого капсидного белка, и тем самым увеличивается трансдукция упомянутого вектора AAV в клетке-мишени по сравнению с вектором AAV, содержащим капсидный белок VP1 AAV2 без одной или нескольких замен лизина.
3. Вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки субъекту гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, содержащий капсидный белок VP1, который содержит одну или несколько замен лизина, где указанные одна или несколько замен лизина выбраны из группы, состоящей из: замены K137R, замены K668R или замены K(137/333/530)R капсидного белка VP1 AAV8, при этом упомянутый вектор дополнительно содержит миниген, содержащий инвертированные концевые повторы AAV и гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, функционально связанную с регуляторными последовательностями, которые направляют экспрессию продукта из гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты в клетку-хозяин, и упомянутая замена лизина является эффективной для ингибирования убиквитинирования упомянутого капсидного белка, и тем самым увеличивается трансдукция упомянутого вектора AAV в клетке-мишени по сравнению с вектором AAV, содержащим капсидный белок VP1 AAV8 без одной или нескольких замен лизина.
4. Вектор на основе аденоассоциированного вируса (AAV) для доставки субъекту гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты, содержащий капсидный белок VP1, который содержит одну или несколько замен лизина, где указанные одна или несколько замен лизина выбраны из группы, состоящей из: замен K(137/333/530)R; замен K(137/333/530/552)R; замен K(137/259/333/530/552/569)R + G195A + Ll99V + S201P + G202N; замен K(137/259/333/530/552/569)R + G195A + Ll99V + S201P + G202N + K38R; замен K(137/259/333/530/552/569)R + G195A + Ll99V + S201P + G202N + K51R; замен K(137/259/333/530/552/569)R + G195A + Ll99V + S201P + G202N + K61R; или замен K(137/259/333/530/552/569)R + G195A + Ll99V + S201P + G202N + K77R капсидного белка VP1 AAV-rh74, при этом упомянутый вектор дополнительно содержит миниген, содержащий инвертированные концевые повторы AAV и гетерологичную последовательность нуклеиновой кислоты, функционально связанную с регуляторными последовательностями, которые направляют экспрессию продукта из гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты в клетку-хозяин, и упомянутая замена лизина является эффективной для ингибирования убиквитинирования упомянутого капсидного белка, и тем самым увеличивается трансдукция упомянутого вектора AAV в клетке-мишени по сравнению с вектором AAV, содержащим капсидный белок VP1 AAV-rh74 без одной или нескольких замен лизина.
5. Вектор AAV согласно любому из пп.1-4, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой терапевтический пептид или нуклеиновую кислоту.
6. Вектор AAV по п.5, где терапевтический пептид представляет собой фактор свертывания крови, выбираемый из группы, состоящей из фактора VIII, фактора IX или их функционального фрагмента.
7. Вектор AAV по любому из пп.1-4, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой IgG, IgM, IgA, IgD, IgE, химерный иммуноглобулин, гуманизированное антитело или одноцепочечное антитело.
8. Вектор AAV по п.7, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой химерный иммуноглобулин.
9. Вектор AAV по любому из пп.1-4, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой одноцепочечное антитело.
10. Вектор AAV по любому из пп.1-4, где продукт экспрессии представляет собой противовирусную РНКи.
11. Вектор AAV по п.10, где ингибирующая РНК является эффективной для ингибирования инфекции и репликации HCV.
12. Вектор AAV по п.10, где ингибирующая РНК является эффективной для ингибирования экспрессии эукариотического гена-мишени.
13. Вектор AAV по любому из пп.1-4, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой цитокин, модифицирующий заболевание.
14. Вектор AAV по любому из пп.1-4, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой пару нуклеаз цинковых пальцев.
15. Вектор AAV по любому из пп.1-4, включающий 2, 3 или 4 замены лизина.
16. Культура клеток для получения вектора AAV по любому из пп.1-4, содержащая вектор AAV по любому из пп.1-4.
17. Вектор AAV по любому из пп.1-4, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой фактор IX.
18. Вектор AAV по любому из пп.1-4, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой фактор VIII.
19. Фармацевтическая композиция, содержащая векторы AAV по любому из пп.1-4 и физиологически совместимый с ними носитель, для лечения, где присутствует по меньшей мере 105 трансдуцирующих единиц векторов AAV.
20. Применение фармацевтической композиции по п.19 в лечении заболевания или расстройства крови.
21. Применение фармацевтической композиции по п.19 в лечении заболевания или расстройства центральной нервной системы.
22. Применение фармацевтической композиции по п.19 в лечении заболевания или расстройства метаболизма.
23. Применение фармацевтической композиции по п.19 в лечении заболевания или расстройства мышц.
24. Применение фармацевтической композиции по п.19 в лечении заболевания или расстройства глаз.
25. Применение фармацевтической композиции по п.19 в лечении инфекционного заболевания.
26. Применение фармацевтической композиции по п.19 в лечении наследственного заболевания.
27. Применение фармацевтической композиции по п.19 в производстве лекарственного средства для доставки гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты в клетку субъекта.
28. Применение по любому из пп.20-27, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой фактор IX.
29. Применение по любому из пп.20-27, где продукт экспрессии гетерологичной последовательности нуклеиновой кислоты представляет собой фактор VIII.
Applications Claiming Priority (5)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201261635273P | 2012-04-18 | 2012-04-18 | |
| US61/635,273 | 2012-04-18 | ||
| US201361794995P | 2013-03-15 | 2013-03-15 | |
| US61/794,995 | 2013-03-15 | ||
| PCT/US2013/037170 WO2013158879A1 (en) | 2012-04-18 | 2013-04-18 | Composition and methods for highly efficient gene transfer using aav capsid variants |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2014146159A RU2014146159A (ru) | 2016-06-10 |
| RU2683497C2 true RU2683497C2 (ru) | 2019-03-28 |
Family
ID=49384070
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2014146159A RU2683497C2 (ru) | 2012-04-18 | 2013-04-18 | Композиция и способы высокоэффективного переноса генов с помощью вариантов капсида aav |
Country Status (27)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US9909142B2 (ru) |
| EP (1) | EP2839014B1 (ru) |
| JP (1) | JP6342886B2 (ru) |
| KR (1) | KR102063483B1 (ru) |
| CN (1) | CN104487579B (ru) |
| AU (1) | AU2013249202B2 (ru) |
| BR (2) | BR112014025985A2 (ru) |
| CA (1) | CA2870736C (ru) |
| CO (1) | CO7200251A2 (ru) |
| DK (1) | DK2839014T3 (ru) |
| ES (1) | ES2862912T3 (ru) |
| HK (1) | HK1207663A1 (ru) |
| HU (1) | HUE054087T2 (ru) |
| IL (1) | IL235102B (ru) |
| IN (1) | IN2014DN08812A (ru) |
| MX (1) | MX359518B (ru) |
| MY (1) | MY172457A (ru) |
| NZ (1) | NZ701693A (ru) |
| PE (1) | PE20150163A1 (ru) |
| PH (1) | PH12014502347A1 (ru) |
| PL (1) | PL2839014T3 (ru) |
| PT (1) | PT2839014T (ru) |
| RU (1) | RU2683497C2 (ru) |
| SG (1) | SG11201406776TA (ru) |
| SI (1) | SI2839014T1 (ru) |
| WO (1) | WO2013158879A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201407582B (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2777404C1 (ru) * | 2022-05-06 | 2022-08-03 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Экспрессионный вектор на основе аденоассоциированного вируса и способ его применения для экстренной профилактики и профилактики заболеваний, вызываемых вирусом SARS-CoV-2 (варианты) |
Families Citing this family (103)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| DK2359867T3 (en) * | 2005-04-07 | 2015-01-05 | Univ Pennsylvania | A method for increasing an AAV vector function |
| US9725485B2 (en) | 2012-05-15 | 2017-08-08 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | AAV vectors with high transduction efficiency and uses thereof for gene therapy |
| DK2191001T3 (en) | 2007-04-09 | 2016-09-19 | Univ Florida | RAAV VECTOR COMPOSITIONS WITH TYROSIN MODIFIED CAPSIDE PROTEINS AND PROCEDURES FOR USE THEREOF |
| US8734809B2 (en) | 2009-05-28 | 2014-05-27 | University Of Massachusetts | AAV's and uses thereof |
| CN107261154A (zh) | 2011-04-29 | 2017-10-20 | 西莱克塔生物科技公司 | 致耐受性合成纳米载体 |
| MY172457A (en) | 2012-04-18 | 2019-11-26 | Childrens Hospital Philadelphia | Composition and methods for highly efficient gene transfer using aav capsid variants |
| US10294281B2 (en) | 2012-05-15 | 2019-05-21 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | High-transduction-efficiency rAAV vectors, compositions, and methods of use |
| US11136557B2 (en) * | 2013-05-31 | 2021-10-05 | The Regents Of The University Of California | Adeno-associated virus variants and methods of use thereof |
| CA3209883A1 (en) * | 2013-07-22 | 2015-01-29 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Variant aav and compositions, methods and uses for gene transfer to cells, organs and tissues |
| WO2015048534A1 (en) | 2013-09-26 | 2015-04-02 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Synthetic combinatorial aav capsid library for targeted gene therapy |
| GB201403684D0 (en) * | 2014-03-03 | 2014-04-16 | King S College London | Vector |
| US10308957B2 (en) | 2014-03-04 | 2019-06-04 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | rAAV vectors and methods for transduction of photoreceptors and RPE cells |
| WO2015191508A1 (en) | 2014-06-09 | 2015-12-17 | Voyager Therapeutics, Inc. | Chimeric capsids |
| EP3189138A4 (en) | 2014-09-07 | 2018-04-18 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions for attenuating gene editing anti-viral transfer vector immune responses |
| CA2964272A1 (en) | 2014-10-21 | 2016-04-28 | Guangping Gao | Recombinant aav variants and uses thereof |
| BR112017009497A2 (pt) | 2014-11-05 | 2018-02-06 | Voyager Therapeutics, Inc. | polinucleotídeos de aadc para o tratamento da doença de parkinson |
| GB201420139D0 (en) | 2014-11-12 | 2014-12-24 | Ucl Business Plc | Factor IX gene therapy |
| BR112017010087A2 (pt) | 2014-11-14 | 2018-06-05 | Voyager Therapeutics, Inc. | composições e métodos para tratar esclerose lateral amiotrófica (ela) |
| KR20230145206A (ko) | 2014-11-14 | 2023-10-17 | 보이저 테라퓨틱스, 인크. | 조절성 폴리뉴클레오티드 |
| EP3230441A4 (en) | 2014-12-12 | 2018-10-03 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods for the production of scaav |
| WO2016126857A1 (en) | 2015-02-03 | 2016-08-11 | University Of Florida Research Foundation, Inc. | Recombinant aav1, aav5, and aav6 capsid mutants and uses thereof |
| US10648000B2 (en) | 2015-02-16 | 2020-05-12 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | rAAV vector compositions, methods for targeting vascular endothelial cells and use in treatment of type I diabetes |
| US20180044698A1 (en) * | 2015-02-19 | 2018-02-15 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Site-specific integrating recombinant aav vectors for gene therapy and improved production methods |
| JP6519080B2 (ja) * | 2015-06-22 | 2019-05-29 | ライオン株式会社 | 繊維製品用抗ウイルス組成物 |
| JP6831779B2 (ja) | 2015-06-23 | 2021-02-17 | ザ・チルドレンズ・ホスピタル・オブ・フィラデルフィアＴｈｅ Ｃｈｉｌｄｒｅｎ’Ｓ Ｈｏｓｐｉｔａｌ Ｏｆ Ｐｈｉｌａｄｅｌｐｈｉａ | 修飾された第ｉｘ因子、並びに、細胞、器官及び組織への遺伝子導入のための組成物、方法及び使用 |
| SG10202107733QA (en) | 2015-09-28 | 2021-09-29 | Univ North Carolina Chapel Hill | Methods and compositions for antibody-evading virus vectors |
| BR112018008407A2 (pt) | 2015-10-28 | 2018-11-27 | Univ Pennsylvania | administração intratecal de vetores virais adenoassociados para terapia genética |
| AU2016362477A1 (en) | 2015-12-02 | 2018-06-14 | Voyager Therapeutics, Inc. | Assays for the detection of AAV neutralizing antibodies |
| RU2762948C2 (ru) * | 2016-04-16 | 2021-12-24 | Юниверсити Оф Флорида Рисерч Фаундэйшн, Инкорпорейтед | Способы усиления биологической активности рекомбинантного аденоассоциированного вуруса, продуцируемого бакуловирусной системой |
| WO2017189959A1 (en) | 2016-04-29 | 2017-11-02 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions for the treatment of disease |
| EP3448987A4 (en) | 2016-04-29 | 2020-05-27 | Voyager Therapeutics, Inc. | COMPOSITIONS FOR THE TREATMENT OF DISEASES |
| MA44740A (fr) | 2016-05-13 | 2019-02-27 | 4D Molecular Therapeutics Inc | Variantes de capsides de virus adéno-associé et leurs procédés d'utilisation |
| MX2018014154A (es) | 2016-05-18 | 2019-05-06 | Voyager Therapeutics Inc | Polinucleotidos moduladores. |
| RU2764587C2 (ru) | 2016-05-18 | 2022-01-18 | Вояджер Терапьютикс, Инк. | Способы и композиции для лечения хореи гентингтона |
| TN2019000047A1 (en) | 2016-08-15 | 2020-07-15 | Genzyme Corp | Methods for detecting aav |
| EP3831281A1 (en) | 2016-08-30 | 2021-06-09 | The Regents of The University of California | Methods for biomedical targeting and delivery and devices and systems for practicing the same |
| EP3526333A4 (en) * | 2016-10-13 | 2020-07-29 | University of Massachusetts | AAV CAPSIDE DESIGNS |
| EP3565572A1 (en) | 2017-01-07 | 2019-11-13 | Selecta Biosciences, Inc. | Patterned dosing of immunosuppressants coupled to synthetic nanocarriers |
| WO2018139634A1 (ja) * | 2017-01-30 | 2018-08-02 | 学校法人日本医科大学 | アデノ随伴ウイルス（ａａｖ）キャプシドタンパク質の変異体 |
| CA3054131C (en) | 2017-02-21 | 2021-05-25 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Modified aav capsid proteins and uses thereof |
| JOP20190200A1 (ar) | 2017-02-28 | 2019-08-27 | Univ Pennsylvania | تركيبات نافعة في معالجة ضمور العضل النخاعي |
| US10550405B2 (en) | 2017-03-15 | 2020-02-04 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Rational polyploid adeno-associated virus vectors and methods of making and using the same |
| AU2018234695A1 (en) | 2017-03-15 | 2019-09-12 | The University Of North Carolina At Chapel Hill | Polyploid adeno-associated virus vectors and methods of making and using the same |
| AU2018241252A1 (en) | 2017-03-30 | 2019-10-03 | The University Of Queensland | Chimeric molecules and uses thereof |
| EP3619308A4 (en) | 2017-05-05 | 2021-01-27 | Voyager Therapeutics, Inc. | COMPOSITIONS AND METHODS OF TREATMENT FOR HUNTINGTON'S MORBUS |
| AU2018261790A1 (en) | 2017-05-05 | 2019-11-28 | Voyager Therapeutics, Inc. | Compositions and methods of treating amyotrophic lateral sclerosis (ALS) |
| JOP20190269A1 (ar) | 2017-06-15 | 2019-11-20 | Voyager Therapeutics Inc | بولي نوكليوتيدات aadc لعلاج مرض باركنسون |
| US20210228738A1 (en) | 2017-07-17 | 2021-07-29 | INSERM (Institut National de la Santé et de la Recherche Médicale) | Compositions and methods for increasing or enhancing transduction of gene therapy vectors and for removing or reducing immunoglobulins |
| WO2019018342A1 (en) | 2017-07-17 | 2019-01-24 | Voyager Therapeutics, Inc. | NETWORK EQUIPMENT TRACK GUIDE SYSTEM |
| PT3684423T (pt) | 2017-09-20 | 2023-06-09 | 4D Molecular Therapeutics Inc | Cápsides variantes de vírus adeno-associado e métodos de utilização das mesmas |
| KR20200086670A (ko) | 2017-10-13 | 2020-07-17 | 셀렉타 바이오사이언시즈, 인크. | 항바이러스 전달 벡터 IgM 반응을 약화시키기 위한 방법 및 조성물 |
| EP4124658A3 (en) | 2017-10-16 | 2023-04-19 | Voyager Therapeutics, Inc. | Treatment of amyotrophic lateral sclerosis (als) |
| WO2019079242A1 (en) | 2017-10-16 | 2019-04-25 | Voyager Therapeutics, Inc. | TREATMENT OF AMYOTROPHIC LATERAL SCLEROSIS (ALS) |
| EP3717636B1 (en) | 2017-11-27 | 2023-03-08 | 4D Molecular Therapeutics Inc. | Adeno-associated virus variant capsids and use for inhibiting angiogenesis |
| JP7403165B2 (ja) | 2017-12-19 | 2023-12-22 | ザ・ユニヴァーシティ・オヴ・ノース・キャロライナ・アト・チャペル・ヒル | 血液脳関門を通過してウイルスベクターを送達するための方法および組成物 |
| US10610606B2 (en) | 2018-02-01 | 2020-04-07 | Homology Medicines, Inc. | Adeno-associated virus compositions for PAH gene transfer and methods of use thereof |
| WO2019161365A1 (en) | 2018-02-19 | 2019-08-22 | Homology Medicines, Inc. | Adeno-associated virus compositions for restoring f8 gene function and methods of use thereof |
| JP2021515037A (ja) | 2018-02-26 | 2021-06-17 | アントルクス，インコーポレーテッド | 寛容原性リポソーム及びその使用方法 |
| CA3091806A1 (en) * | 2018-02-27 | 2019-09-06 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Novel adeno-associated virus (aav) vectors, aav vectors having reduced capsid deamidation and uses therefor |
| US20210087584A1 (en) * | 2018-03-16 | 2021-03-25 | Research Intitute at Nationwide Children's Hospital | Increasing tissue specific gene delivery by capsid modification |
| WO2019195449A1 (en) | 2018-04-03 | 2019-10-10 | Stridebio, Inc. | Antibody-evading virus vectors |
| TN2020000187A1 (en) | 2018-04-05 | 2022-04-04 | Univ Devry Val Dessonne | Hybrid recombinant adeno-associated virus serotype between aav9 and aavrh74 with reduced liver tropism |
| US20210363192A1 (en) * | 2018-04-27 | 2021-11-25 | Spark Therapeutics, Inc. | Engineered aav capsids with increased tropism and aav vectors comprising the engineered capsids and methods of making and using same |
| BR112020023393A2 (pt) * | 2018-05-16 | 2021-02-09 | Spark Therapeutics, Inc. | cassetes de expressão de a-glicosidase ácida otimizados por códon e métodos de uso dos mesmos |
| CA3106639A1 (en) | 2018-07-16 | 2020-01-23 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions of otc constructs and vectors |
| CA3106640A1 (en) | 2018-07-16 | 2020-01-23 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions of mma constructs and vectors |
| US11702673B2 (en) | 2018-10-18 | 2023-07-18 | University Of Florida Research Foundation, Incorporated | Methods of enhancing biological potency of baculovirus system-produced recombinant adeno-associated virus |
| JP2022520875A (ja) | 2019-02-25 | 2022-04-01 | ノバルティス アーゲー | Ｂｉｅｔｔｉクリスタリン網膜症を治療するための組成物及び方法 |
| CA3130731A1 (en) | 2019-02-25 | 2020-09-03 | Friedrich Miescher Institute For Biomedical Research | Compositions and methods to treat bietti crystalline dystrophy |
| MX2021011468A (es) | 2019-03-21 | 2021-12-15 | Vectores de virus adenoasociados recombinantes. | |
| US20200360453A1 (en) | 2019-04-28 | 2020-11-19 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods for treatment of subjects with preexisting immunity to viral transfer vectors |
| CA3141863A1 (en) | 2019-05-28 | 2020-12-03 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions for attenuated anti-viral transfer vector immune response |
| RU2751592C2 (ru) | 2019-08-22 | 2021-07-15 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Анабион" | Выделенный модифицированный белок VP1 капсида аденоассоциированного вируса 5 серотипа (AAV5), капсид и вектор на его основе |
| US20220347298A1 (en) | 2019-10-04 | 2022-11-03 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc. | Methods for improved therapeutic use of recombinant aav |
| WO2021076925A1 (en) | 2019-10-17 | 2021-04-22 | Stridebio, Inc. | Adeno-associated viral vectors for treatment of niemann-pick disease type c |
| MX2022008003A (es) * | 2020-01-03 | 2022-10-07 | Sarepta Therapeutics Inc | Métodos para analizar proteínas de la cápside de aav. |
| TW202140791A (zh) | 2020-01-13 | 2021-11-01 | 美商霍蒙拉奇醫藥公司 | 治療苯酮尿症之方法 |
| BR112022015921A2 (pt) | 2020-02-14 | 2022-10-04 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc | Terapia gênica para tratar o transtorno de deficiência de cdkl5 |
| EP4121544A1 (en) | 2020-03-19 | 2023-01-25 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc. | Compositions and methods for reducing reverse packaging of cap and rep sequences in recombinant aav |
| US20230129893A1 (en) | 2020-03-31 | 2023-04-27 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc. | Gene therapy for treating propionic acidemia |
| IL302046A (en) | 2020-10-15 | 2023-06-01 | Hoffmann La Roche | Nucleic acid structures for va RNA transcription |
| KR20230085170A (ko) | 2020-10-15 | 2023-06-13 | 에프. 호프만-라 로슈 아게 | 동시 유전자 활성화를 위한 핵산 구조체 |
| WO2022150335A1 (en) | 2021-01-05 | 2022-07-14 | Selecta Biosciences, Inc. | Viral vector dosing protocols |
| KR20240000542A (ko) * | 2021-04-23 | 2024-01-02 | 유니버시티 오브 플로리다 리서치 파운데이션, 인코포레이티드 | 근이영양증의 유전자 요법을 위한 AAVrh74 벡터 |
| WO2023019168A1 (en) | 2021-08-11 | 2023-02-16 | Ultragenyx Pharmaceutical Inc. | Compositions and methods for treating a muscular dystrophy |
| AR126839A1 (es) | 2021-08-20 | 2023-11-22 | Llc «Anabion» | Proteína de la cápside vp1 modificada aislada del virus adeno-asociado de serotipo 9 (aav9), cápside y vector basado en esta |
| WO2023022631A1 (ru) | 2021-08-20 | 2023-02-23 | Акционерное общество "БИОКАД" | Способ получения модифицированного капсида аденоассоциированного вируса |
| AR126840A1 (es) | 2021-08-20 | 2023-11-22 | Llc «Anabion» | Proteína de la cápside vp1 modificada aislada del virus adeno-asociado de serotipo 5 (aav5), cápside y vector basado en esta |
| WO2023044306A1 (en) * | 2021-09-14 | 2023-03-23 | California Institute Of Technology | Aav capsid variants |
| US20230140196A1 (en) | 2021-10-12 | 2023-05-04 | Selecta Biosciences, Inc. | Viral vector dosing protocols |
| US20230141563A1 (en) | 2021-10-12 | 2023-05-11 | Selecta Biosciences, Inc. | Methods and compositions for attenuating anti-viral transfer vector igm responses |
| CA3237037A1 (en) | 2021-11-14 | 2023-05-19 | Cartesian Therapeutics, Inc. | Multiple dosing with viral vectors |
| CN116554278A (zh) * | 2022-01-30 | 2023-08-08 | 上海玮美基因科技有限责任公司 | 变异型腺相关病毒及其在疾病治疗中的应用 |
| TW202342740A (zh) | 2022-03-07 | 2023-11-01 | 美商奧崔基尼克斯製藥公司 | 改良的批量aav生產系統和方法 |
| US20230357437A1 (en) | 2022-03-09 | 2023-11-09 | Selecta Biosciences, Inc. | Immunosuppressants in combination with anti-igm agents and related dosing |
| WO2023198685A1 (en) | 2022-04-13 | 2023-10-19 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for determining aav genomes |
| WO2023220287A1 (en) * | 2022-05-11 | 2023-11-16 | The Children's Hospital Of Philadelphia | Adeno-associated viral vectors for targeting deep brain structures |
| WO2023227438A1 (en) | 2022-05-23 | 2023-11-30 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Raman-based method for the differentiation of aav particle serotype and aav particle loading status |
| WO2023232922A1 (en) | 2022-06-03 | 2023-12-07 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for producing recombinant aav particles |
| WO2024013239A1 (en) | 2022-07-14 | 2024-01-18 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for producing recombinant aav particles |
| US20240148841A1 (en) | 2022-08-11 | 2024-05-09 | Selecta Biosciences Inc. | Compositions and methods related to immunoglobulin proteases and fusions thereof |
| WO2024038002A1 (en) | 2022-08-15 | 2024-02-22 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Prevention or mitigation of adverse effects related to recombinant viral vectors |
| WO2024056561A1 (en) | 2022-09-12 | 2024-03-21 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Method for separating full and empty aav particles |
Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6127525A (en) * | 1995-02-21 | 2000-10-03 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same |
| RU2335542C2 (ru) * | 2003-06-13 | 2008-10-10 | Джэпэн Эз Репрезентед Бай Президент Оф Нэшнл Сентер Фор Джериэтрикс Энд Джеронтолоджи | Аденоассоциированный вирусный вектор для лечения болезни альцгеймера, его применение для получения терапевтических средств, а также способ лечения болезни альцгеймера с помощью данного вектора |
| US20090197338A1 (en) * | 2005-04-07 | 2009-08-06 | The Trustees Of Teh University Of Pennsylvania | Method of Increasing the Function of an AAV Vector |
| US7629322B2 (en) * | 2003-06-11 | 2009-12-08 | Kleinschmidt Juergon | AAV vector for gene therapy |
| WO2011126808A2 (en) * | 2010-03-29 | 2011-10-13 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Pharmacologically induced transgene ablation system |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CA1202962A (en) | 1982-10-19 | 1986-04-08 | David P. Clifford | Substituted n-phenyl-n'-benzoyl ureas and their use as insecticides and acaricides |
| US4501729A (en) | 1982-12-13 | 1985-02-26 | Research Corporation | Aerosolized amiloride treatment of retained pulmonary secretions |
| US4965188A (en) | 1986-08-22 | 1990-10-23 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or cloning nucleic acid sequences using a thermostable enzyme |
| US4683195A (en) | 1986-01-30 | 1987-07-28 | Cetus Corporation | Process for amplifying, detecting, and/or-cloning nucleic acid sequences |
| WO1998010088A1 (en) | 1996-09-06 | 1998-03-12 | Trustees Of The University Of Pennsylvania | An inducible method for production of recombinant adeno-associated viruses utilizing t7 polymerase |
| US9198984B2 (en) | 2006-04-28 | 2015-12-01 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Scalable production method for AAV |
| WO2013078316A1 (en) | 2011-11-23 | 2013-05-30 | Nationwide Children's Hospital, Inc. | Recombinant adeno-associated virus delivery of alpha-sarcoglycan polynucleotides |
| MY172457A (en) | 2012-04-18 | 2019-11-26 | Childrens Hospital Philadelphia | Composition and methods for highly efficient gene transfer using aav capsid variants |
-
2013
- 2013-04-18 MY MYPI2014002969A patent/MY172457A/en unknown
- 2013-04-18 CA CA2870736A patent/CA2870736C/en active Active
- 2013-04-18 DK DK13778449.2T patent/DK2839014T3/da active
- 2013-04-18 PT PT137784492T patent/PT2839014T/pt unknown
- 2013-04-18 MX MX2014012680A patent/MX359518B/es active IP Right Grant
- 2013-04-18 PE PE2014001722A patent/PE20150163A1/es active IP Right Grant
- 2013-04-18 SI SI201331862T patent/SI2839014T1/sl unknown
- 2013-04-18 EP EP13778449.2A patent/EP2839014B1/en active Active
- 2013-04-18 CN CN201380020980.5A patent/CN104487579B/zh active Active
- 2013-04-18 WO PCT/US2013/037170 patent/WO2013158879A1/en active Application Filing
- 2013-04-18 PL PL13778449T patent/PL2839014T3/pl unknown
- 2013-04-18 HU HUE13778449A patent/HUE054087T2/hu unknown
- 2013-04-18 JP JP2015507176A patent/JP6342886B2/ja active Active
- 2013-04-18 RU RU2014146159A patent/RU2683497C2/ru active
- 2013-04-18 KR KR1020147032322A patent/KR102063483B1/ko active IP Right Grant
- 2013-04-18 BR BR112014025985A patent/BR112014025985A2/pt not_active Application Discontinuation
- 2013-04-18 US US14/394,454 patent/US9909142B2/en active Active
- 2013-04-18 IN IN8812DEN2014 patent/IN2014DN08812A/en unknown
- 2013-04-18 BR BR122021020419-5A patent/BR122021020419B1/pt active IP Right Grant
- 2013-04-18 AU AU2013249202A patent/AU2013249202B2/en active Active
- 2013-04-18 NZ NZ701693A patent/NZ701693A/en unknown
- 2013-04-18 SG SG11201406776TA patent/SG11201406776TA/en unknown
- 2013-04-18 ES ES13778449T patent/ES2862912T3/es active Active
-
2014
- 2014-10-17 ZA ZA2014/07582A patent/ZA201407582B/en unknown
- 2014-10-19 IL IL235102A patent/IL235102B/en active IP Right Grant
- 2014-10-20 PH PH12014502347A patent/PH12014502347A1/en unknown
- 2014-11-18 CO CO14253041A patent/CO7200251A2/es unknown
-
2015
- 2015-08-25 HK HK15108225.3A patent/HK1207663A1/xx unknown
-
2018
- 2018-02-02 US US15/887,641 patent/US11279950B2/en active Active
Patent Citations (5)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6127525A (en) * | 1995-02-21 | 2000-10-03 | Cornell Research Foundation, Inc. | Chimeric adenoviral coat protein and methods of using same |
| US7629322B2 (en) * | 2003-06-11 | 2009-12-08 | Kleinschmidt Juergon | AAV vector for gene therapy |
| RU2335542C2 (ru) * | 2003-06-13 | 2008-10-10 | Джэпэн Эз Репрезентед Бай Президент Оф Нэшнл Сентер Фор Джериэтрикс Энд Джеронтолоджи | Аденоассоциированный вирусный вектор для лечения болезни альцгеймера, его применение для получения терапевтических средств, а также способ лечения болезни альцгеймера с помощью данного вектора |
| US20090197338A1 (en) * | 2005-04-07 | 2009-08-06 | The Trustees Of Teh University Of Pennsylvania | Method of Increasing the Function of an AAV Vector |
| WO2011126808A2 (en) * | 2010-03-29 | 2011-10-13 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Pharmacologically induced transgene ablation system |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2777404C1 (ru) * | 2022-05-06 | 2022-08-03 | федеральное государственное бюджетное учреждение "Национальный исследовательский центр эпидемиологии и микробиологии имени почетного академика Н.Ф. Гамалеи" Министерства здравоохранения Российской Федерации | Экспрессионный вектор на основе аденоассоциированного вируса и способ его применения для экстренной профилактики и профилактики заболеваний, вызываемых вирусом SARS-CoV-2 (варианты) |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2683497C2 (ru) | Композиция и способы высокоэффективного переноса генов с помощью вариантов капсида aav | |
| EP2675484B1 (en) | Improved aav8 vector with enhanced functional activity and methods of use thereof | |
| KR102234672B1 (ko) | 캡시드-변형된 raav3 벡터 조성물, 및 인간 간암의 유전자 요법에서의 용도 | |
| KR102516647B1 (ko) | 고 형질도입 효율 raav 벡터, 조성물 및 사용 방법 | |
| US20190100773A1 (en) | Metabolically activated recombinant viral vectors and methods for their preparation and use | |
| CN111235158A (zh) | 用于表达重组人β-珠蛋白的病毒载体及其应用 | |
| RU2761879C1 (ru) | Вакцина на основе AAV5 для индукции специфического иммунитета к вирусу SARS-CoV-2 и/или профилактики коронавирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2 | |
| RU2760301C1 (ru) | Вакцина на основе AAV5 для индукции специфического иммунитета к вирусу SARS-CoV-2 и/или профилактики коронавирусной инфекции, вызванной SARS-CoV-2 | |
| RU2742837C1 (ru) | Кодон-оптимизированная нуклеиновая кислота, которая кодирует белок SMN1, и ее применение | |
| CN117247973B (zh) | 一种用于遗传性凝血因子缺乏病治疗的核酸构建体及其用途 | |
| JP2023552535A (ja) | 異種導入遺伝子の発現を制御するためのオーファンモチーフ（ｏｒｐｈａｎ ｍｏｔｉｆ）とＣｐＧ密度との組み合わせの使用 |