RU2678878C2 - Композиции и способы для лечения и восстановления сухожилий - Google Patents
Композиции и способы для лечения и восстановления сухожилий Download PDFInfo
- Publication number
- RU2678878C2 RU2678878C2 RU2015138403A RU2015138403A RU2678878C2 RU 2678878 C2 RU2678878 C2 RU 2678878C2 RU 2015138403 A RU2015138403 A RU 2015138403A RU 2015138403 A RU2015138403 A RU 2015138403A RU 2678878 C2 RU2678878 C2 RU 2678878C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- cells
- nbds
- hair
- tendon
- dermal
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 32
- 210000002435 tendon Anatomy 0.000 title abstract description 46
- 239000000203 mixture Substances 0.000 title description 24
- 230000002500 effect on skin Effects 0.000 claims abstract description 42
- 210000003780 hair follicle Anatomy 0.000 claims abstract description 34
- 210000004209 hair Anatomy 0.000 claims abstract description 27
- 210000001519 tissue Anatomy 0.000 claims abstract description 18
- 238000012258 culturing Methods 0.000 claims abstract description 8
- 230000004663 cell proliferation Effects 0.000 claims abstract description 3
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 claims abstract 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 claims abstract 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 claims abstract 2
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 31
- 238000001574 biopsy Methods 0.000 claims description 11
- 239000002609 medium Substances 0.000 claims description 9
- 238000005520 cutting process Methods 0.000 claims description 8
- 210000004761 scalp Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 claims description 5
- 210000001732 sebaceous gland Anatomy 0.000 claims description 4
- 102000029816 Collagenase Human genes 0.000 claims description 3
- 108060005980 Collagenase Proteins 0.000 claims description 3
- 229960002424 collagenase Drugs 0.000 claims description 3
- 230000006862 enzymatic digestion Effects 0.000 claims description 2
- 239000012679 serum free medium Substances 0.000 claims description 2
- 230000006378 damage Effects 0.000 abstract description 12
- 102000008186 Collagen Human genes 0.000 abstract description 5
- 108010035532 Collagen Proteins 0.000 abstract description 5
- 229920001436 collagen Polymers 0.000 abstract description 5
- 208000014674 injury Diseases 0.000 abstract description 5
- 208000027418 Wounds and injury Diseases 0.000 abstract description 4
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 144
- 208000000491 Tendinopathy Diseases 0.000 description 32
- 210000001361 achilles tendon Anatomy 0.000 description 14
- 208000021945 Tendon injury Diseases 0.000 description 9
- 208000013201 Stress fracture Diseases 0.000 description 8
- 208000004760 Tenosynovitis Diseases 0.000 description 8
- 210000002510 keratinocyte Anatomy 0.000 description 8
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 7
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 7
- 206010006811 Bursitis Diseases 0.000 description 6
- 102000012422 Collagen Type I Human genes 0.000 description 6
- 108010022452 Collagen Type I Proteins 0.000 description 6
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 201000011275 Epicondylitis Diseases 0.000 description 6
- 102000018233 Fibroblast Growth Factor Human genes 0.000 description 6
- 108050007372 Fibroblast Growth Factor Proteins 0.000 description 6
- 208000002240 Tennis Elbow Diseases 0.000 description 6
- 229940126864 fibroblast growth factor Drugs 0.000 description 6
- KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N (2S,3S,4S,5R,6R)-6-[(2S,3R,4R,5S,6R)-3-Acetamido-2-[(2S,3S,4R,5R,6R)-6-[(2R,3R,4R,5S,6R)-3-acetamido-2,5-dihydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-2-carboxy-4,5-dihydroxyoxan-3-yl]oxy-5-hydroxy-6-(hydroxymethyl)oxan-4-yl]oxy-3,4,5-trihydroxyoxane-2-carboxylic acid Chemical compound CC(=O)N[C@H]1[C@H](O)O[C@H](CO)[C@@H](O)[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](O[C@H]3[C@@H]([C@@H](O)[C@H](O)[C@H](O3)C(O)=O)O)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)NC(C)=O)[C@@H](C(O)=O)O1 KIUKXJAPPMFGSW-DNGZLQJQSA-N 0.000 description 5
- 102000008100 Human Serum Albumin Human genes 0.000 description 5
- 108091006905 Human Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 206010043255 Tendonitis Diseases 0.000 description 5
- 229920002674 hyaluronan Polymers 0.000 description 5
- 229960003160 hyaluronic acid Drugs 0.000 description 5
- 239000004615 ingredient Substances 0.000 description 5
- 210000002752 melanocyte Anatomy 0.000 description 5
- 210000003205 muscle Anatomy 0.000 description 5
- 208000013525 paratenonitis Diseases 0.000 description 5
- 210000000426 patellar ligament Anatomy 0.000 description 5
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 5
- 201000004415 tendinitis Diseases 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 102000019034 Chemokines Human genes 0.000 description 4
- 108010012236 Chemokines Proteins 0.000 description 4
- 102000004127 Cytokines Human genes 0.000 description 4
- 108090000695 Cytokines Proteins 0.000 description 4
- 229920002683 Glycosaminoglycan Polymers 0.000 description 4
- 241000282414 Homo sapiens Species 0.000 description 4
- 108090000723 Insulin-Like Growth Factor I Proteins 0.000 description 4
- 102000004889 Interleukin-6 Human genes 0.000 description 4
- 108090001005 Interleukin-6 Proteins 0.000 description 4
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 description 4
- 102000001708 Protein Isoforms Human genes 0.000 description 4
- 108010029485 Protein Isoforms Proteins 0.000 description 4
- 102000013275 Somatomedins Human genes 0.000 description 4
- 102000004887 Transforming Growth Factor beta Human genes 0.000 description 4
- 108090001012 Transforming Growth Factor beta Proteins 0.000 description 4
- 239000003242 anti bacterial agent Substances 0.000 description 4
- 229940088710 antibiotic agent Drugs 0.000 description 4
- 238000003384 imaging method Methods 0.000 description 4
- 229940100601 interleukin-6 Drugs 0.000 description 4
- 230000003902 lesion Effects 0.000 description 4
- 102000049853 macrophage stimulating protein Human genes 0.000 description 4
- 108010053292 macrophage stimulating protein Proteins 0.000 description 4
- ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N tgfbeta Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H](CCCNC(N)=N)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(C)C)[C@@H](C)CC)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC=1C=CC=CC=1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(O)=O)C1=CC=C(O)C=C1 ZRKFYGHZFMAOKI-QMGMOQQFSA-N 0.000 description 4
- 102100022464 5'-nucleotidase Human genes 0.000 description 3
- 241000282472 Canis lupus familiaris Species 0.000 description 3
- 239000006144 Dulbecco’s modified Eagle's medium Substances 0.000 description 3
- 208000001708 Dupuytren contracture Diseases 0.000 description 3
- 102000016942 Elastin Human genes 0.000 description 3
- 108010014258 Elastin Proteins 0.000 description 3
- 208000004678 Elbow Tendinopathy Diseases 0.000 description 3
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 3
- 241000283086 Equidae Species 0.000 description 3
- 241000282326 Felis catus Species 0.000 description 3
- 108010080379 Fibrin Tissue Adhesive Proteins 0.000 description 3
- 108010017213 Granulocyte-Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 3
- 102100039620 Granulocyte-macrophage colony-stimulating factor Human genes 0.000 description 3
- 102100031573 Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Human genes 0.000 description 3
- 102000003745 Hepatocyte Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 108090000100 Hepatocyte Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 101000678236 Homo sapiens 5'-nucleotidase Proteins 0.000 description 3
- 101000777663 Homo sapiens Hematopoietic progenitor cell antigen CD34 Proteins 0.000 description 3
- 101001078133 Homo sapiens Integrin alpha-2 Proteins 0.000 description 3
- 101000614436 Homo sapiens Keratin, type I cytoskeletal 14 Proteins 0.000 description 3
- 101000738771 Homo sapiens Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Proteins 0.000 description 3
- 101000800116 Homo sapiens Thy-1 membrane glycoprotein Proteins 0.000 description 3
- 102100025305 Integrin alpha-2 Human genes 0.000 description 3
- 102100040445 Keratin, type I cytoskeletal 14 Human genes 0.000 description 3
- 102000011782 Keratins Human genes 0.000 description 3
- 108010076876 Keratins Proteins 0.000 description 3
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 3
- 208000010332 Plantar Fasciitis Diseases 0.000 description 3
- 102000010780 Platelet-Derived Growth Factor Human genes 0.000 description 3
- 108010038512 Platelet-Derived Growth Factor Proteins 0.000 description 3
- 241000700159 Rattus Species 0.000 description 3
- 102100037422 Receptor-type tyrosine-protein phosphatase C Human genes 0.000 description 3
- 208000023835 Tendon disease Diseases 0.000 description 3
- 102100033523 Thy-1 membrane glycoprotein Human genes 0.000 description 3
- 230000003698 anagen phase Effects 0.000 description 3
- 210000002808 connective tissue Anatomy 0.000 description 3
- 229920002549 elastin Polymers 0.000 description 3
- 229940088598 enzyme Drugs 0.000 description 3
- 238000000684 flow cytometry Methods 0.000 description 3
- -1 human albumin) Chemical compound 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 3
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 3
- 210000002107 sheath cell Anatomy 0.000 description 3
- 210000003491 skin Anatomy 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- 238000010186 staining Methods 0.000 description 3
- 208000013515 tendinosis Diseases 0.000 description 3
- 239000006163 transport media Substances 0.000 description 3
- 210000000707 wrist Anatomy 0.000 description 3
- SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 5-bromo-2-(trifluoromethoxy)pyridine Chemical compound FC(F)(F)OC1=CC=C(Br)C=N1 SQDAZGGFXASXDW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 2
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 2
- 241000700198 Cavia Species 0.000 description 2
- 229920001287 Chondroitin sulfate Polymers 0.000 description 2
- 102000010834 Extracellular Matrix Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010037362 Extracellular Matrix Proteins Proteins 0.000 description 2
- 108010073385 Fibrin Proteins 0.000 description 2
- 102000009123 Fibrin Human genes 0.000 description 2
- BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N Fibrin monomer Chemical compound CNC(=O)CNC(=O)CN BWGVNKXGVNDBDI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000016359 Fibronectins Human genes 0.000 description 2
- 108010067306 Fibronectins Proteins 0.000 description 2
- 229920002971 Heparan sulfate Polymers 0.000 description 2
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100021866 Hepatocyte growth factor Human genes 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N Leupeptin Natural products CC(C)CC(NC(C)=O)C(=O)NC(CC(C)C)C(=O)NC(C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 2
- 102100021669 Stromal cell-derived factor 1 Human genes 0.000 description 2
- 101710088580 Stromal cell-derived factor 1 Proteins 0.000 description 2
- 241000282887 Suidae Species 0.000 description 2
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 230000001464 adherent effect Effects 0.000 description 2
- 229940035676 analgesics Drugs 0.000 description 2
- 239000000730 antalgic agent Substances 0.000 description 2
- 229940124599 anti-inflammatory drug Drugs 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 210000000988 bone and bone Anatomy 0.000 description 2
- 230000010261 cell growth Effects 0.000 description 2
- 230000004656 cell transport Effects 0.000 description 2
- 238000005119 centrifugation Methods 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 229940059329 chondroitin sulfate Drugs 0.000 description 2
- 230000037319 collagen production Effects 0.000 description 2
- 108010007093 dispase Proteins 0.000 description 2
- 210000002744 extracellular matrix Anatomy 0.000 description 2
- 239000000835 fiber Substances 0.000 description 2
- 229950003499 fibrin Drugs 0.000 description 2
- 239000003102 growth factor Substances 0.000 description 2
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 2
- 230000035876 healing Effects 0.000 description 2
- 230000002519 immonomodulatory effect Effects 0.000 description 2
- 230000004957 immunoregulator effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N leupeptin Chemical compound CC(C)C[C@H](NC(C)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](C=O)CCCN=C(N)N GDBQQVLCIARPGH-ULQDDVLXSA-N 0.000 description 2
- 108010052968 leupeptin Proteins 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 2
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000008188 pellet Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000000047 product Substances 0.000 description 2
- 230000035755 proliferation Effects 0.000 description 2
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 2
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 2
- 239000004017 serum-free culture medium Substances 0.000 description 2
- 238000007390 skin biopsy Methods 0.000 description 2
- 210000004927 skin cell Anatomy 0.000 description 2
- 210000002536 stromal cell Anatomy 0.000 description 2
- 238000011477 surgical intervention Methods 0.000 description 2
- 229940124597 therapeutic agent Drugs 0.000 description 2
- VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N uroanthelone Chemical compound C([C@@H](C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)CC)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(O)=O)C(C)C)[C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC=1NC=NC=1)NC(=O)[C@H](CCSC)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@@H](NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)CNC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CS)NC(=O)CNC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O)C(C)C)[C@@H](C)CC)C1=CC=C(O)C=C1 VBEQCZHXXJYVRD-GACYYNSASA-N 0.000 description 2
- 206010002091 Anaesthesia Diseases 0.000 description 1
- 208000025978 Athletic injury Diseases 0.000 description 1
- 102000004954 Biglycan Human genes 0.000 description 1
- 108090001138 Biglycan Proteins 0.000 description 1
- 208000019300 CLIPPERS Diseases 0.000 description 1
- 241000700199 Cavia porcellus Species 0.000 description 1
- 102000001187 Collagen Type III Human genes 0.000 description 1
- 108010069502 Collagen Type III Proteins 0.000 description 1
- 102000004237 Decorin Human genes 0.000 description 1
- 108090000738 Decorin Proteins 0.000 description 1
- 241000283073 Equus caballus Species 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010061218 Inflammation Diseases 0.000 description 1
- 208000032984 Intraoperative Complications Diseases 0.000 description 1
- JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M Lactate Chemical compound CC(O)C([O-])=O JVTAAEKCZFNVCJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 102000007651 Macrophage Colony-Stimulating Factor Human genes 0.000 description 1
- 108010046938 Macrophage Colony-Stimulating Factor Proteins 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 108090000445 Parathyroid hormone Proteins 0.000 description 1
- 102000003982 Parathyroid hormone Human genes 0.000 description 1
- 102000043299 Parathyroid hormone-related Human genes 0.000 description 1
- 101710123753 Parathyroid hormone-related protein Proteins 0.000 description 1
- 241000282898 Sus scrofa Species 0.000 description 1
- 102000007000 Tenascin Human genes 0.000 description 1
- 108010008125 Tenascin Proteins 0.000 description 1
- 102100033740 Tenomodulin Human genes 0.000 description 1
- 101710114852 Tenomodulin Proteins 0.000 description 1
- 206010052428 Wound Diseases 0.000 description 1
- 239000000654 additive Substances 0.000 description 1
- 230000032683 aging Effects 0.000 description 1
- 230000037005 anaesthesia Effects 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 1
- 239000012888 bovine serum Substances 0.000 description 1
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007975 buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000000459 calcaneus Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 238000005266 casting Methods 0.000 description 1
- 230000003778 catagen phase Effects 0.000 description 1
- 238000004113 cell culture Methods 0.000 description 1
- 210000000038 chest Anatomy 0.000 description 1
- 230000009693 chronic damage Effects 0.000 description 1
- 208000021930 chronic lymphocytic inflammation with pontine perivascular enhancement responsive to steroids Diseases 0.000 description 1
- 210000004748 cultured cell Anatomy 0.000 description 1
- 210000004207 dermis Anatomy 0.000 description 1
- 238000011161 development Methods 0.000 description 1
- 230000018109 developmental process Effects 0.000 description 1
- 230000009977 dual effect Effects 0.000 description 1
- 210000000981 epithelium Anatomy 0.000 description 1
- 239000012894 fetal calf serum Substances 0.000 description 1
- 210000002950 fibroblast Anatomy 0.000 description 1
- 230000003325 follicular Effects 0.000 description 1
- 239000012737 fresh medium Substances 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000008187 granular material Substances 0.000 description 1
- 230000012010 growth Effects 0.000 description 1
- 210000000442 hair follicle cell Anatomy 0.000 description 1
- 238000010191 image analysis Methods 0.000 description 1
- 230000000984 immunochemical effect Effects 0.000 description 1
- 230000002055 immunohistochemical effect Effects 0.000 description 1
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 description 1
- 230000036512 infertility Effects 0.000 description 1
- 230000004054 inflammatory process Effects 0.000 description 1
- 230000028709 inflammatory response Effects 0.000 description 1
- 239000000463 material Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 238000001000 micrograph Methods 0.000 description 1
- 238000000386 microscopy Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 230000001537 neural effect Effects 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 208000013519 paratenonitis with tendinosis Diseases 0.000 description 1
- 239000000199 parathyroid hormone Substances 0.000 description 1
- 229960001319 parathyroid hormone Drugs 0.000 description 1
- 210000004417 patella Anatomy 0.000 description 1
- 108010088880 plasmagel Proteins 0.000 description 1
- 210000004623 platelet-rich plasma Anatomy 0.000 description 1
- 229920000747 poly(lactic acid) Polymers 0.000 description 1
- 229920001610 polycaprolactone Polymers 0.000 description 1
- 229920001223 polyethylene glycol Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 238000003908 quality control method Methods 0.000 description 1
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 1
- 230000008439 repair process Effects 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 210000000513 rotator cuff Anatomy 0.000 description 1
- 238000005070 sampling Methods 0.000 description 1
- 238000004621 scanning probe microscopy Methods 0.000 description 1
- 239000012090 serum-supplement Substances 0.000 description 1
- 241000894007 species Species 0.000 description 1
- 238000012306 spectroscopic technique Methods 0.000 description 1
- 238000004611 spectroscopical analysis Methods 0.000 description 1
- 210000000130 stem cell Anatomy 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 230000035882 stress Effects 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- 239000000725 suspension Substances 0.000 description 1
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- 229940030990 tachosil Drugs 0.000 description 1
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 1
- 210000002303 tibia Anatomy 0.000 description 1
- 229940033618 tisseel Drugs 0.000 description 1
- 230000017423 tissue regeneration Effects 0.000 description 1
- 230000008736 traumatic injury Effects 0.000 description 1
- 238000002604 ultrasonography Methods 0.000 description 1
- 210000000689 upper leg Anatomy 0.000 description 1
- 230000035899 viability Effects 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K35/00—Medicinal preparations containing materials or reaction products thereof with undetermined constitution
- A61K35/12—Materials from mammals; Compositions comprising non-specified tissues or cells; Compositions comprising non-embryonic stem cells; Genetically modified cells
- A61K35/36—Skin; Hair; Nails; Sebaceous glands; Cerumen; Epidermis; Epithelial cells; Keratinocytes; Langerhans cells; Ectodermal cells
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1808—Epidermal growth factor [EGF] urogastrone
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1825—Fibroblast growth factor [FGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1833—Hepatocyte growth factor; Scatter factor; Tumor cytotoxic factor II
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1841—Transforming growth factor [TGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/18—Growth factors; Growth regulators
- A61K38/1858—Platelet-derived growth factor [PDGF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/193—Colony stimulating factors [CSF]
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/19—Cytokines; Lymphokines; Interferons
- A61K38/20—Interleukins [IL]
- A61K38/204—IL-6
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
- A61K38/16—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- A61K38/17—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from animals; from humans
- A61K38/22—Hormones
- A61K38/30—Insulin-like growth factors, i.e. somatomedins, e.g. IGF-1, IGF-2
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K45/00—Medicinal preparations containing active ingredients not provided for in groups A61K31/00 - A61K41/00
- A61K45/06—Mixtures of active ingredients without chemical characterisation, e.g. antiphlogistics and cardiaca
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P21/00—Drugs for disorders of the muscular or neuromuscular system
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0625—Epidermal cells, skin cells; Cells of the oral mucosa
- C12N5/0627—Hair cells
- C12N5/0628—Hair stem cells; Hair progenitors
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/066—Tenocytes; Tendons, Ligaments
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N5/00—Undifferentiated human, animal or plant cells, e.g. cell lines; Tissues; Cultivation or maintenance thereof; Culture media therefor
- C12N5/06—Animal cells or tissues; Human cells or tissues
- C12N5/0602—Vertebrate cells
- C12N5/0652—Cells of skeletal and connective tissues; Mesenchyme
- C12N5/0662—Stem cells
- C12N5/0666—Mesenchymal stem cells from hair follicles
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/10—Growth factors
- C12N2501/113—Acidic fibroblast growth factor (aFGF, FGF-1)
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2501/00—Active agents used in cell culture processes, e.g. differentation
- C12N2501/90—Polysaccharides
- C12N2501/905—Hyaluronic acid
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Public Health (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Epidemiology (AREA)
- Immunology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Developmental Biology & Embryology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Rheumatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Dermatology (AREA)
- Orthopedic Medicine & Surgery (AREA)
- Rehabilitation Therapy (AREA)
- Virology (AREA)
- Endocrinology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Physical Education & Sports Medicine (AREA)
- Neurology (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
Abstract
Изобретение относится к области биотехнологии, конкретно к способу выделения клеток внелуковичной дермальной оболочки волосяного фолликула (NBDS), и может быть использовано в медицине. Ткань внелуковичной дермальной оболочки, полученную из жизнеспособных волос затылочной части головы, подвергают ферментативному расщеплению с последующим культивированием выделенной ткани внелуковичной дермальной оболочки в среде, которая стимулирует пролиферацию клеток, с получением клеток NBDS. Изобретение позволяет получать клетки NBDS, синтезирующие коллаген и пригодные для применения в лечении повреждений сухожилий. 3 з.п. ф-лы, 4 ил., 4 пр.
Description
ПЕРЕКРЕСТНАЯ ССЫЛКА НА РОДСТВЕННЫЕ ЗАЯВКИ
[0001] Настоящая заявка испрашивает приоритет согласно § 119(e) статьи 35 U.S.C. по предварительной заявке на патент США № 61/763908, поданной 12 февраля 2013 г., которая включена в данный документ в полном объеме посредством ссылки.
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ, К КОТОРОЙ ОТНОСИТСЯ НАСТОЯЩЕЕ ИЗОБРЕТЕНИЕ
[0002] Настоящее изобретение относится к композициям и способам для восстановления сухожилий и, более конкретно, к композициям, содержащим клетки внелуковичной дермальной оболочки для применения в лечении и восстановлении сухожилий, а также для предотвращения повреждений сухожилий.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
Описание известного уровня техники
[0003] Сухожилия представляют собой жесткие полосы волокнистой соединительной ткани, которые обычно присоединяют мышцу к кости. Примеры обычных сухожилий включают ахиллово сухожилие, которое присоединяет икроножную мышцу к пяточной кости, и сухожилие надколенника, которое соединяет коленную чашечку и берцовую кость.
[0004] Сухожилия могут быть повреждены в ряде случаев, включая, например, чрезмерные нагрузки, напряжение, заболевание и общее старение. Термин "тендинопатия" может применяться в отношении ряда повреждений, включая повреждения, вызванные как воспалением, так и микроразрывами. Сухожилия также могут отрываться или разрываться, что, как правило, требует хирургического вмешательства.
[0005] Существует ряд хирургических способов, которые можно применять для лечения повреждений сухожилий, но, даже с такими способами заживление сухожилий может занять несколько лет, если они вообще заживут. Настоящее изобретение раскрывает новые композиции и способы для лечения повреждений сухожилий и дополнительно предполагает другие связанные преимущества.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0006] Вкратце, настоящее изобретение предусматривает композиции и способы для лечения или предупреждения повреждений сухожилий с использованием клеток внелуковичной дермальной оболочки волосяного фолликула (“NBDS”). В одном аспекте настоящего изобретения предполагаются способы, предусматривающие стадии (a) получения жизнеспособных (т.е. "живых") волос и (b) культивирования жизнеспособных волос таким образом, чтобы можно было получить популяцию клеток NBDS. В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения клетки NBDS являются выделенными.
[0007] В одном аспекте настоящего изобретения предполагаются способы выделения клеток NBDS, предусматривающие стадии (a) получения жизнеспособных волос; (b) разрезания волос, полученных на стадии (a), с удалением луковицы волосяного фолликула (который содержит чашу дермальной оболочки и дермальный сосочек); (c) выделения ткани внелуковичной дермальной оболочки волосяного фолликула и (d) культивирования выделенной ткани внелуковичной дермальной оболочки волосяного фолликула с получением клеток NBDS. В одном варианте осуществления настоящего изобретения жизнеспособные волосы получают с помощью биопсии из затылочной области волосистой части кожи головы субъекта. В другом варианте осуществления волосы разрезают с использованием микроманипулятора и скальпеля. В других вариантах осуществления приведенные в настоящем документе способы дополнительно предусматривают стадию проведения ферментативного расщепления выделенной ткани внелуковичной дермальной оболочки волосяного фолликула, необязательно, с использованием, например, ферментов, расщепляющих коллаген, таких как коллагеназа, диспаза и леупептин. В дополнительных вариантах осуществления клетки пересевают в течение нескольких пассажей.
[0008] В других аспектах настоящего изобретения предполагаются выделенные клетки NBDS, необязательно, полученные в соответствии со способами, описанными выше, где клетки выделяют с целью получения популяции, которая является преимущественно положительной по одному или нескольким из CD90, CD73 и CD49b и/или преимущественно отрицательной по одному или нескольким из CD34, CD45 и KRT14 (необязательно, до или после культивирования). В предпочтительных вариантах осуществления выделенные клетки NBDS являются по меньшей мере на 70%, 80%, 90%, 95%, 98% или 100% положительными по одному или нескольким из положительных маркеров, описанным выше, и/или по меньшей мере на 80%, 90%, 95% или 98% отрицательными по одному из отрицательных маркеров, описанных выше.
[0009] В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения выделенные клетки NBDS характеризуются наличием менее 15%, 10%, 5%, или 1% кератиноцитов в клеточной популяции и/или менее 15%, 10%, 5% или 1% меланоцитов в клеточной популяции. Тем не менее, в дополнительных вариантах осуществления популяцию выделенных клеток NBDS получают из популяции дермальных клеток (предпочтительно из волосяного фолликула), в состав которой входят некоторые нежелательные типы клеток, в том числе, например, по меньшей мере 1%, 5%, 10%, 0,01%, 0,1% или 1% кератиноцитов в клеточной популяции и/или по меньшей мере 5%, 10%, 0,1%, 0,1% меланоцитов. В дополнительных вариантах осуществления настоящего изобретения выделенные клетки NBDS являются по меньшей мере на 95% чистыми и содержат по меньшей мере один нежелательный тип клеток (например, по меньшей мере один кератиноцит) в клеточной популяции.
[0010] Эти клетки NBDS (или выделенные клетки NBDS) могут содержаться в композициях с другими ингредиентами, такими как, например, плазма, сыворотка, фибрин и/или гиалуроновая кислота. В других вариантах осуществления клетки NBDS (или выделенные клетки NBDS) могут входить в состав композиции, пригодной для инъекции, например, раствора Рингера с лактатным буфером или буферного солевого раствора. Другие ингредиенты, которые можно использовать для создания композиций по настоящему изобретению, включают, например, компоненты внеклеточного матрикса (например, гликозаминогликаны (GAG), гепарин-сульфат, хондроитин-сульфат, кератин-сульфат, гиалуроновую кислоту, альбумин (например, человеческий альбумин), эластин, фибронектины и ламинины), цитокины и хемокины (например, трансформирующий фактор роста бета (TGF-бета) и его изоформы, инсулиноподобный фактор роста (IGF) и его изоформы, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), белок, родственный паратиреоидному гормону, фактор роста гепатоцитов/"рассеивающий фактор" (HGF/SF), стимулирующий макрофаги белок (MSP), эпидермальный фактор роста (EGF), интерлейкин 6 (IL-6), фактор стромальных клеток 1 (SDF-1), тромбоцитарный фактор роста (PDGF) и фактор роста фибробластов (FGF) и/или различные терапевтические средства (например, анальгетики, противовоспалительные средства и иммуномодулирующие средства). Однако, в других вариантах осуществления предполагаются клетки NBDS (и выделенные клетки NBDS) в композициях, которые не содержат какого-либо из вышеупомянутых ингредиентов (в том числе, например, сыворотку или плазму).
[0011] В других аспектах настоящего изобретения предполагаются способы лечения или предупреждения повреждений сухожилий, предусматривающие стадию введения субъекту композиции, содержащей клетки NBDS, которые описаны выше (и в предпочтительных вариантах осуществления выделенные клетки NBDS). В одном варианте осуществления субъектом является млекопитающее, выбранное из группы, включающей людей, лошадей, свиней, собак, кошек, морских свинок, кроликов, крыс и мышей.
[0012] В различных вариантах осуществления настоящего изобретения повреждение сухожилия представляет собой отрыв или разрыв сухожилия или другое повреждение, выбранное из группы, включающей тендиноз, тендосиновит и авульсию. В еще одном варианте осуществления сухожилие представляет собой ахиллово сухожилие или сухожилие надколенника. В других вариантах осуществления сухожилие представляет собой сухожилие сгибателя или сухожилие разгибателя. В других вариантах осуществления повреждения сухожилия следует рассматривать как включающие широкий спектр связанных с сухожилиями заболеваний (в том числе тендинопатий, тендинозов, тендинита, тендосиновита, паратенонита, паратенонита с тендинозом и микроразрывов сухожилия), лечение которых также можно проводить с использованием композиций, приведенных в данном документе. Типичные сухожилия, лечение которых можно проводить, включают, например, а) ахиллово сухожилие (например, тендинопатия средней части ахиллова сухожилия, паратендинопатия ахиллова сухожилия, инсерционная тендинопатия ахиллова сухожилия, ретрокальканеальный бурсит, поверхностный кальканеальный бурсит); b) сухожилия плеча (например, тендинопатия сухожилия двуглавой мышцы плеча, тендинопатия вращательной манжеты плеча); c) сухожилия локтя (например, медиальный или латеральный эпикондилит или «теннисный локоть»); d) ладонь и запястье (например, тендинопатия сгибателей/разгибателей, тендосиновит сгибателей/разгибателей, болезнь Де-Кервена и контрактура Дюпюитрена); е) тендопатии подколенного сухожилия и сухожилия надколенника с микроразрывами или без них и f) подошвенный фасциит с микроразрывами или без них.
[0013] Детали одного или нескольких вариантов осуществления изложены в приведенном ниже описании. Другие признаки, объекты и преимущества будут понятны из описания сущности изобретения, графических материалов и формулы изобретения. Кроме того, раскрытия всех патентов и патентных заявок, упомянутых в данном документе, включены посредством ссылки в своей полноте.
КРАТКОЕ ОПИСАНИЕ ЧЕРТЕЖЕЙ
[0014] Фигура 1 иллюстрирует срез волосяного фолликула человека. На фигуре 1А показан выделенный волосяной фолликул человека, который может быть разрезан выше луковичной части корня волоса (т.е. выше клеток дермального сосочка и чаши дермальной оболочки), но ниже основания канала сальной железы с целью получения выделенной дермальной оболочки (см. фигуру 1B). Структура, изображенная на фигуре 1В, может быть разделена по меньшей мере на два отдельных компонента, как показано на фигурах 1C и 1D. На фигуре 1С представлены волокно волоса и ассоциированная внутренняя корневая оболочка, а также наружная корневая оболочка, которая содержит преимущественно кератиноциты, и на фигуре 1D представлена дермальная оболочка, содержащая клетки NBDS (также, иногда называемая соединительнотканной оболочкой).
[0015] Фигура 2 является иллюстрацией волосяного фолликула, на которой изображено место происхождения клеток дермального сосочка (“DP”), клеток чаши дермальной оболочки (“DSC”) и клеток внелуковичной дермальной оболочки ("NBDS").
[0016] Фигура 3 представляет собой микрофотографию клеток NBDS в культуре.
[0017] Фигура 4 иллюстрирует клетки NBDS, которые были окрашены в отношении выработки коллагена. Более конкретно, смесь NBDS/плазма в геле подвергали слабому растяжению через 5 дней (фигура 4А) и 12 дней (фигура 4В). Клетки на фигуре 4В заметно темнее, чем на фигуре 4A, что указывает на выработку коллагена типа I.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ НАСТОЯЩЕГО ИЗОБРЕТЕНИЯ
[0018] Как отмечено выше, настоящее изобретение предусматривает клетки внелуковичной дермальной оболочки волосяного фолликула для применения в лечении или предупреждении повреждений сухожилий у млекопитающего. Перед изложением изобретения полезным для его понимания может быть изложение определений некоторых терминов, которые используются в ниже в данном документе.
[0019] Клетки внелуковичной дермальной оболочки или клетки "NBDS" относятся к клеткам, происходящим из дермы (или, более конкретно, полученным из волосяных фолликулов). В предпочтительных вариантах осуществления клетки оболочки получают из наружной дермальной оболочки волосяного фолликула выше луковичной части корня волоса (т.е. выше клеток дермального сосочка и чаши дермальной оболочки), но ниже основания канала сальной железы. Клетки NBDS можно легко идентифицировать с помощью ряда способов, в том числе, например, с помощью способа получения и культивирования (как описано ниже), по морфологии (см., например, фигуру 3), а также по специфическим для клеток маркерам (например, клетки NBDS преимущественно положительны по CD90, CD73 и CD49b, и/или преимущественно отрицательны по CD34, CD45 и KRT14, либо до, либо после культивирования). Тем не менее, во всех случаях клетки должны иметь дермальное происхождение, и более конкретно, фолликулярное происхождение.
[0020] Нарощенные клетки внелуковичной дермальной оболочки, или "клетки eNBDS" относятся к клеткам NBDS, которые подверглись наращиванию в течение нескольких пассажей в культуре, но которые сохраняют способность к выработке коллагена (например, коллагена типа I), а также ряда цитокинов и хемокинов. Указанные выше клетки eNBDS, неожиданно, также могут быть иммунорегуляторными. В предпочтительных вариантах осуществления клетки можно наращивать в культуре в течение 1, 2, 3, 4, 5, 10, 20 пассажей или более.
[0021] "Выделенные" клетки NBDS относятся к клеточной популяции более чем из 70%, 80%, 90%, 95%, 98% или 100% клеток NBDS. Клетки NBDS обладают способностью к выработке коллагена (например, коллагена типа I), а также ряда цитокинов и хемокинов. Неожиданно, клетки NBDS также могут быть иммунорегуляторными, что делает их особенно подходящими для лечения повреждений сухожилий (например, за счет содействия подавлению любого воспалительного ответа).
[0022] В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения программное обеспечение или другие методики визуализации, которые можно использовать для визуализации клеток в микроскопическом масштабе, можно применять для оценки размера, формы, жизнеспособности и гранулированности большого количества клеток в поле зрения и определения количества клеток NBDS (которые являются фибробластоподобными, как показано на фигуре 3, в отличие от кератиноцитов, меланоцитов, DSC и других типов клеток, которые имеют отличную морфологию). Следовательно, в одном варианте осуществления настоящего изобретения предусматриваются способы выделения клеток NBDS, предусматривающие стадию культивирования клеток из волосяного фолликула в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 10 или 20 пассажей таким образом, чтобы получить популяцию выделенных клеток NBDS. В предпочтительных вариантах осуществления клетки помещают в чашки или колбы, которые обеспечивают возможность прикрепления клеток NBDS, и с каждым пассажем неприкрепившиеся клетки удаляют, а оставшиеся прикрепленные клетки высвобождают (например, с помощью трипсинизации) с последующим добавлением свежей среды. В таких предпочтительных вариантах осуществления можно определить, когда была получена достаточная популяция выделенных клеток NBDS, с помощью визуализации клеток в клеточной культуре с целью оценки количества клеток NBDS в сравнении с клетками, не относящимися к клеткам NBDS. Методики визуализации включают без ограничения непосредственную визуализацию с помощью микроскопии, окрашивание клеток в отношении маркеров (или их отсутствия, например, в отношении отсутствия кератина) и анализ с использованием светового/лазерного излучения для выяснения дифракционного паттерна различных типов клеток (см., в общем смысле, "Laser Scanning Microscopy and Quantitative Image Analysis of Neuronal Tissue" Lidia Bakota и Roland Brandt, eds., Humana Press, 2014; см. также "Imaging and Spectroscopic Analysis of Living Cells: Optical and Spectroscopic Techniques”, Conned., Academic Press, 2012).
[0023] В других вариантах осуществления для оценки уровня клеток NBDS в сравнении с нежелательными типами клеток можно применять специфические для клеток маркеры (например, клетки NBDS преимущественно положительны по CD90, CD73 и CD49b и/или преимущественно отрицательны по CD34, CD45 и KRT14 (необязательно, до или после культивирования)). “Applications of Flow Cytometry in Stem Cell Research and Tissue Regeneration”, Krishan, Krishnamurthy, and Totey eds., Wiley-Blackwell, 2010). Например, выделенные клетки NBDS можно получить путем а) получения одного или нескольких жизнеспособных волосяных фолликулов; b) высвобождения клеток из волосяного фолликула (например, посредством применения ферментов или путем культивирования клеток, растущих из волосяного фолликула) и с) сортировки клеток (например, с помощью проточной цитометрии или посредством применения магнитных гранул) с получением популяции выделенных клеток NBDS. В некоторых вариантах осуществления настоящего изобретения клетки на любой стадии способа, необязательно, можно культивировать, как описано выше (например, клетки можно культивировать в течение по меньшей мере 1, 2, 3, 4, 5, 6, 10 или 20 пассажей, как описано выше), и полученные в результате клетки можно, кроме того, выделить, например, с помощью проточной цитометрии или магнитных гранул.
[0024] В предпочтительных вариантах осуществления выделенные клетки NBDS являются по меньшей мере на 70%, 80%, 90%, 95%, 98% или 100% положительными по одному или нескольким положительным маркерам, описанным выше, и/или по меньшей мере на 80%, 90%, 95% или 98% отрицательными по одному из отрицательных маркеров, описанных выше.
[0025] В предпочтительных вариантах осуществления настоящего изобретения (и при использовании любой из методик, описанных в данном документе), выделенные клетки NBDS имеют менее чем 15%, 10%, 5% или 1% кератиноцитов в клеточной популяции и/или менее чем 15%, 10%, 5%, или 1% меланоцитов в клеточной популяции. Однако, в дополнительных вариантах осуществления популяция выделенных клеток NBDS получена из популяции дермальных клеток (предпочтительно, из волосяных фолликулов), которые содержат некоторые нежелательные типы клеток, в том числе, например, по меньшей мере 1%, 5%, 10%, 0,01%, 0,1% или 1% кератиноцитов в клеточной популяции и/или по меньшей мере 5%, 10%, 0,1%, 0,1% меланоцитов.
[0026] Используемый в данном документе термин "повреждения сухожилия", следует понимать, как относящийся к широкому спектру различных состояний, связанных с сухожилиями, которые приводят или могут, в конечном итоге, привести к трудностям в должном использовании сухожилия (и структур, связанных с сухожилиями, таких как кости и мышцы). Повреждения сухожилия могут включать травматическое повреждение (например, вследствие спортивных травм, чрезмерных нагрузок или медицинского или хирургического вмешательства), повреждение генетического происхождения и заболевание (которое может быть вызвано любым из вышеупомянутого). Типичные повреждения сухожилия включают без ограничения тендинопатии, тендинозы, тендинит, тендосиновит, паратенонит, паратенонит с тендинозом и микроразрывы сухожилия. Типичные сухожилия, лечение которых можно проводить, включают, например, а) ахиллово сухожилие (например, тендинопатия средней части ахиллова сухожилия, паратендинопатия ахиллова сухожилия, инсерционная тендинопатия ахиллова сухожилия, ретрокальканеальный бурсит, поверхностный кальканеальный бурсит); b) сухожилия плеча (например, тендинопатия сухожилия двуглавой мышцы плеча; тендинопатия вращательной манжеты плеча); c) сухожилия локтя (например, медиальный или латеральный эпикондилит или «теннисный локоть»); d) ладонь и запястье (например, тендинопатия сгибателей/разгибателей, тендосиновит сгибателей/разгибателей, болезнь Де-Кервена и контрактура Дюпюитрена); е) тендопатии подколенного сухожилия и сухожилия надколенника с микроразрывами или без них и f) подошвенный фасциит с микроразрывами или без них.
Получение NBDS
[0027] Как отмечено выше, настоящее изобретение предполагает способы выделения клеток NBDS. В одном аспекте настоящего изобретения такие способы предусматривают стадии (a) получения жизнеспособных волос и (b) культивирования жизнеспособных волос таким образом, чтобы можно было получить популяцию клеток NBDS. Что касается стадии (a), широкий спектр способов можно использовать для получения жизнеспособных волос, в том числе, например, хирургические способы для удаления множества волосяных фолликулов (вместе с кожей), или путем выщипывания одного или нескольких волосяных фолликулов непосредственно из субъекта.
[0028] После получения жизнеспособных волос их можно культивировать в условиях, которые обеспечивают возможность роста клеток NBDS и преимущественно стимулируют рост клеток NBDS. В предпочтительных вариантах осуществления это культивирование происходит в условиях, при которых обеспечивается возможность пролиферации фибробластоподобных клеток. В предпочтительных вариантах осуществления стадию культивирования осуществляют с использованием бессывороточной среды. После нескольких пассажей (например, по меньшей мере 2, 3, 4, 5, 10 пассажей или более), культивируемые клетки анализируют, как описано выше, чтобы выяснить, присутствует ли достаточное количество клеток NBDS, и были ли клетки в достаточной степени отделены от нежелательных типов клеток.
[0029] В других аспектах настоящего изобретения предполагаются способы, предусматривающие стадии (a) получения жизнеспособных волос; (b) разрезания волос, полученных на стадии (a), с удалением луковицы волосяного фолликула (которая содержит чашу дермальной оболочки и дермальный сосочек); (c) выделения ткани внелуковичной дермальной оболочки волосяного фолликула и (d) культивирования выделенной ткани внелуковичной дермальной оболочки волосяного фолликула с получением клеток NBDS.
[0030] С целью получения жизнеспособных (или «живых») волос образец обычно получают из данного субъекта (например, млекопитающего, такого как человек, лошади, свинья, кошка, собака, кролик, морские свинки, крысы и мыши). Образец можно получить из ряда участков (например, для людей - из затылочной области волосистой части кожи головы, груди или бедра, а для лошадей - из гривы или хвоста). Образец можно получить посредством биопсии или другими подходящими средствами (например, «выщипыванием» или вырезанием). Предпочтительно выбирают волосяные фолликулы, находящиеся на фазе анагена, хотя также можно использовать другие фазы развития (например, фазу катагена).
[0031] После получения образца от субъекта образец разделяют, чтобы выделить волосяной фолликул, как правило, с использованием микроманипулятора и скальпеля, хотя также можно использовать другие инструменты, такие как иглы. В некоторых вариантах осуществления выделенный волосяной фолликул, который показан на фигуре 1А, можно дополнительно разрезать выше луковичной части корня волоса (т.е. выше клеток дермального сосочка и чаши дермальной оболочки), но ниже основания канала сальной железы с целью получения выделенной дермальной оболочки (см. фигуру 1B). Структуру, изображенную на фигуре 1В, можно разделить по меньшей мере на два отдельных компонента, как показано на фигурах 1C и 1D. На фигуре 1С представлены волокно волоса и ассоциированная внутренняя корневая оболочка, а также наружная корневая оболочка, которая содержит преимущественно кератиноциты, и на фигуре 1D представлена дермальная оболочка, содержащая клетки NBDS (также иногда называемая соединительнотканной оболочкой).
[0032] Дермальную оболочку (фигура 1D) в некоторых вариантах осуществления можно дополнительно разделить, например, путем продольного разрезания вдоль одной стороны или с применением таких методик, как ферментативное расщепление (например, ферментами, расцепляющими коллаген, такими как коллагеназа, диспаза и леупептин).
[0033] Дермальную оболочку, содержащая клетки NBDS, или отделенные клетки NBDS можно затем культивировать в среде (либо с сывороткой, либо без нее), которая стимулирует пролиферацию клеток (см., например, фигуру 3). Подходящая среда включает, например, DMEM/Hams F12, дополненную фактором роста фибробластов (FGF), эмбриональной телячьей/бычьей сывороткой и антибиотиками. В качестве альтернативы, клетки можно наращивать бессывороточным способом, в котором используются различные комбинации бессывороточных сред и добавок. Примеры бессывороточных сред включают X-Vivo™ и TheraPEAK™ FGM-CD™, содержащие сывороточные добавки и/или экстракт тромбоцитов человека. Как правило, после 3-5 дней свежую среду для пролиферации добавляют в культуральную среду. Затем среду можно менять каждые 2-4 дня. Когда культура достигла конфлюэнтности примерно 80-90%, клетки снимают культурального флакона посредством трипсинизации и высевают в колбу для культуры ткани большего объема. Эту стадию повторяют в течение нескольких пассажей (например, 2, 4 или 6) до тех пор, пока не будет получено от 5 до 100 миллионов клеток.
[0034] После получения необходимого количества клеток клетки промывают несколько раз, трипсинизируют и ресуспендируют в среде для транспортировки клеток (CTM), которая состоит из раствора Рингера, забуференного лактатом, 10% сывороточного альбумина человека (HAS) и 5% диметилсульфоксида (DMSO). Клетки подсчитывают, объем доводят для получения конечной концентрации 20 миллионов клеток/мл и хранят в жидком азоте.
Получение композиций, содержащих клетки NBDS
[0035] Как отмечено выше, клетки NBDS (и выделенные клетки NBDS) могут содержаться в композициях с другими ингредиентами, такими как, например, сыворотка, плазма, обогащенная тромбоцитами плазма, альбумин (например, человеческий альбумин), фибрин и/или гиалуроновая кислота. Другие коммерчески доступные продукты также можно использовать для получения подходящих композиций, в том числе, например, TISSEEL и COSEAL (доступный у Baxter), TISSUCOL, BERIPLAST, QUIXIL, TACHOSIL и EVICEL. Также можно использовать другие композиции на основе полимеров, в том числе, например, полиэтиленгликоли, полимолочные кислоты и поликапролактоны. В предпочтительных вариантах осуществления композицию обеспечивают в виде одной или двух частей (например, в двуствольном шприце, который смешивает компоненты), которые являются свободнотекучими и пригодными для инъекций.
[0036] В данные композиции также можно включать другие ингредиенты, в том числе, например, компоненты внеклеточного матрикса (например, гликозаминогликаны (GAG), гепарин-сульфат, хондроитин-сульфат, кератин-сульфат, гиалуроновую кислоту, эластин, фибронектины и ламинины), цитокины и хемокины (например, трансформирующий фактор роста бета (TGF-бета) и его изоформы, инсулиноподобный фактор роста (IGF) и его изоформы, гранулоцитарно-макрофагальный колониестимулирующий фактор (GM-CSF), белок, родственный паратиреоидному гормону, фактор роста гепатоцитов/"рассеивающий фактор" (HGF/SF), стимулирующий макрофаги белок (MSP), эпидермальный фактор роста (EGF), интерлейкин 6 (IL-6), фактор стромальных клеток 1 (SDF-1), тромбоцитарный фактор роста (PDGF) и фактор роста фибробластов (FGF) и/или различные терапевтические средства (например, анальгетики, противовоспалительные средства и иммуномодулирующие средства).
Способы лечения повреждений сухожилий с использованием клеток NBDS
[0037] Также предполагаются способы лечения или предупреждения повреждений сухожилий, предусматривающие стадию введения субъекту композиции, содержащей клетки NBDS (в том числе композиций с выделенными клетками NBDS, как описано выше). Как правило, клетки вводят путем инъекции, хотя в различных вариантах осуществления при использовании хирургического способа клетки можно доставлять непосредственно в открытую рану. Иллюстративные примеры подходящих способов введения включают стандартный шприц, а также специализированные устройства, такие как раскрытые в заявке на патент США № 12/153248 и PCT публикации заявки WO/2013/113121, причем обе них включены в данный документ в своей полноте посредством ссылки.
[0038] С использованием клеток NBDS (и выделенных клеток NBDS) и способов, приведенных в данном документе, можно осуществлять лечение или предупреждение широкого спектра повреждений сухожилий. Например, также могут осуществлять лечение отрывов или разрывов сухожилий, полученных в результате несчастных случаев или повреждений, поражения или заживления в результате хирургических операций. Кроме того, также можно осуществлять лечение других хронических повреждений, в том числе, например, тендинопатий, таких как тендинит или тендиноз, тендосиновит и авульсия.
[0039] С помощью клеток NBDS (и выделенных клеток NBDS) и композиций, приведенных в данном документе, можно осуществлять лечение широкого спектра сухожилий. Например, в одном варианте осуществления подвергаются лечению сухожилия, которые были повреждены из-за заболевания и/или травмы (например, из-за медицинской или хирургической травмы или другого повреждения). Сухожилия могут отрываться и/или могут иметь полные или частичные разрывы (или микроразрывы). Примеры связанных с сухожилиями повреждений включают тендинопатии, тендинозы, тендинит, тендосиновит, паратенонит, паратенонит с тендинитом и микроразрывы сухожилия. Иллюстративные сухожилия, лечение которых можно проводить, включают, например, а) ахиллово сухожилие (например, тендинопатия средней части ахиллова сухожилия, паратендинопатия ахиллова сухожилия, инсерционная тендинопатия ахиллова сухожилия, ретрокальканеальный бурсит; поверхностный кальканеальный бурсит); b) сухожилия плеча (например, тендинопатия сухожилия двуглавой мышцы плеча, тендопатия вращательной манжеты плеча); c) сухожилия локтя (например, медиальный или латеральный эпикондилит или «теннисный локоть»); d) ладонь и запястье (например, тендинопатия сгибателей/разгибателей, тендосиновит сгибателей/разгибателей, болезнь Де-Кервена и контрактура Дюпюитрена); е) тендопатии подколенного сухожилия и сухожилия надколенника с микроразрывами или без них и f) подошвенный фасциит с микроразрывами или без них.
[0040] Большое количество видов организмов может подвергаться лечению клетками NBDS (и выделенными клетками NBDS) и композициями, приведенными в данном документе, в том числе, например, млекопитающие, такие как люди, лошадей, свиньи, собаки, кошки, кролики, морские свинки, крысы и мыши.
[0041] Следующие примеры иллюстрируют настоящее изобретение, и их не следует рассматривать как ограничивающие объем настоящего изобретения.
Пример 1
Взятие образцов ткани
[0042] Биопсию кожи с затылочной области волосистой части кожи головы получали у субъекта следующим образом. Вкратце, после выбора соответствующей области волосистой части кожи головы ее брили с помощью машинки для стрижки волос, обеспечивая наличие остаточной щетины. Затем область взятия биопсии тщательно дезинфицировали и анестезировали. После того как анестезия подействовала, пункционную биопсию глубиной 4-10 мм осторожно удаляли из места взятия биопсии, а на место разреза накладывали швы, которые могли быть удалены через 12-14 дней. Затем в асептических условиях биопсию кожи помещали в предварительно промаркированную пробирку для биопсии, содержащую среду для транспортировки биопсии, состоящую из DMEM/Hams F12 с антибиотиками.
Пример 2
Выделение и культивирование клеток NBDS
[0043] Проверку стерильности осуществляли на среде, в которой транспортировалась биопсия, чтобы удостовериться в отсутствии контаминации образца или, в качестве альтернативы, если образец контаминирован, чтобы удостовериться в дальнейшей утилизации среды с антибиотиками. Затем биопсию промывали несколько раз для удаления среды для транспортировки биопсии и какого-либо дебриса с получением ткани для последующей обработки. Волосяные фолликулы обрабатывали в Hams F10 путем срезания эпителия кожи с помощью стерильного скальпеля и "выщипывания" или вырезания участка с целым волосяным фолликулом из окружающей дермальной ткани с использованием стерильного пинцета. Волосяной фолликул захватывали пинцетом как можно ближе к поверхности кожи и фолликул обнажали путем вытягивания за волос в участке с волосяным фолликулом. Фолликулы в фазе анагена (фаза роста в цикле развития волос, на которую указывает видимая наружная корневая оболочка и DSC волосяной луковицы) выбирали для дальнейшей обработки.
[0044] Выделение NBDS выполняли в Hams F10 путем первоначального отделения клеток чаши дермальной оболочки фолликула и сосочка от остальной части волосяного фолликула с помощью стерильного мини-скальпеля или иглы и их удаления. Дермальную оболочку, содержащую клетки NBDS, удаляли и получали ткань для культивирования.
[0045] От шести до десяти образцов ткани дермальной оболочки осторожно помещали в гель с 3% гиалуроновой кислотой и покрывали культуральной средой, стимулирующей пролиферацию клеток, такой как, например, DMEM/Hams F12, дополненной FGF, 10% FCS и антибиотиками. Через 3-5 дней в культуру добавляли свежую среду для пролиферации. В дальнейшем среду меняли каждые 2-4 дня. Когда культура достигла конфлюэнтности примерно 80-90%, клетки снимали с культурального флакона с помощью трипсинизации и высевали в колбы для культуры ткани большего объема. Эту стадию повторяли в течение четырех пассажей с получением примерно 100 миллионов клеток.
[0046] После получения примерно 100 миллионов клеток их промывали PBS, трипсинизировали и ресуспендировали в среде для транспортировки клеток (CTM: раствор Рингера, забуференный лактатом, 10% сывороточный альбумин человека и 5% диметилсульфоксид). Клетки осаждали центрифугированием и объединяли. Супернатант отсасывали и осадок клеток ресуспендировали в CTM. Два образца клеток/аликвоты удаляли из смеси клетки-CTM для контроля качества и подсчета клеток. После подсчета клеток их снова осаждали центрифугированием и полученный в результате осадок ресуспендировали в CTM с получением конечной концентрации 20 миллионов клеток/мл. Конечные клеточные продукты хранили при температуре ниже -130°С в жидком азоте до перевозки.
Пример 3
Получение и введение клеток NBDS в сухожилие
[0047] Получали клетки для применения в двухкамерном шприце. Первая камера содержала примерно 20 миллионов клеток, суспендированных в общем объеме 1 мл. Вторая камера содержала 1,5 мл аутологичной плазмы от пациента (полученной отдельно перед этой процедурой).
[0048] Двухкамерный шприц применяли для введения клеток (под контролем ультразвука) в несколько мест в сухожилии, которое нужно восстановить.
Пример 4
Синтез коллагена типа I в исследованиях с растяжением сухожилий
[0049] Вкратце, 1,5 мл замороженных клеток NBDS (всего 3 миллиона клеток) оттаивали путем смешивания с 0,15 мл CaCl2 (500 мМ маточный раствор). Добавляли 1,5 мл плазмы и суспензию переносили в овальную отливочную форму. По прошествии примерно одного часа образовывался гель, который может быть удален из формы. Затем кольцо помещали в машину, которая может растягивать сформованную кольцевую структуру в течение времени. Можно производить измерения в отношении силы натяжения, приложенной в течение времени.
[0050] Сформованное кольцо также можно удалить, зафиксировать в параформальдегиде и провести иммуногистохимическое окрашивание на наличие одного или нескольких белков (например, коллагена типа I, коллагена типа III, бигликана, тенасцина C, эластина, теномодулина и декорина).
[0051] Как показано на фигуре 4, смесь клетки NBDS/плазма в геле подвергали легкому растяжению после 5 дней (фигура 4А) и 12 дней (фигура 4В). Проводили иммунохимическое окрашивание образцов на выработку коллагена типа I (с пероксидазой хрена). Окрашивание на фигуре 4B заметно темнее (коричневый), чем на фигуре 4А, это указывает на то, что клетки были положительными в отношении выработки коллагена, которая повышалась после механического растяжения. Результаты этих исследований четко демонстрируют, что клетки NBDS способны к выработке коллагена и образованию подобных сухожилиям структур in vitro. В частности, клетки сформованном геле ориентированы в соответствии с направлением растяжения (подобно клеткам в нормальном сухожилии).
[0052] Различные варианты осуществления, описанные выше, могут быть объединены с получением дополнительных вариантов осуществления. Все из патентов США, публикаций заявок на патент США, заявок на патент США, иностранных патентов, иностранных патентных заявок и непатентных публикаций, указанных в данном описании изобретения и/или перечисленных в сведениях о заявке, включены в данный документ в полном объеме посредством ссылки. Аспекты вариантов осуществления можно модифицировать, если необходимо, с использованием идей из различных патентов, заявок и публикаций для обеспечения дополнительных вариантов осуществления.
[0053] Эти и другие изменения могут быть сделаны в вариантах осуществления в свете вышеприведенного подробного описания. В целом, в нижеследующей формуле изобретения используемые термины не следует толковать как ограничивающие формулу изобретения конкретными вариантами осуществления, раскрытыми в описании изобретения и формуле изобретения, а их следует толковать как включающие все возможные варианты осуществления вместе с полным объемом эквивалентов, к которым относится такая формула изобретения. Соответственно, формула изобретения не ограничивается раскрытием изобретения.
Claims (9)
1. Способ выделения клеток внелуковичной дермальной оболочки волосяного фолликула (NBDS), предусматривающий:
(a) получение жизнеспособных волос при помощи биопсии из затылочной области волосистой части кожи головы субъекта;
(b) разрезание волос, полученных на стадии (а), с удалением луковицы волосяного фолликула и выделением волосяного фолликула;
(c) выделение ткани внелуковичной дермальной оболочки путем последующего разрезания выделенного волосяного фолликула выше луковичной части корня волоса, но ниже основания канала сальной железы;
(d) проведение ферментативного расщепления указанной выделенной ткани внелуковичной дермальной оболочки; и
(e) культивирование выделенной ткани внелуковичной дермальной оболочки в среде, которая стимулирует пролиферацию клеток, с получением клеток NBDS.
2. Способ по п. 1, где указанные волосы разрезают с использованием микроманипулятора и скальпеля.
3. Способ по п. 1, где указанное ферментативное расщепление проводят с использованием коллагеназы.
4. Способ по п. 1, где указанные клетки NBDS культивируют в течение нескольких пассажей либо в среде, содержащей сыворотку, либо в бессывороточной среде.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US201361763908P | 2013-02-12 | 2013-02-12 | |
| US61/763,908 | 2013-02-12 | ||
| PCT/US2014/016109 WO2014127047A1 (en) | 2013-02-12 | 2014-02-12 | Compositions and methods for treating and repairing tendons |
Related Child Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019100033A Division RU2019100033A (ru) | 2013-02-12 | 2014-02-12 | Композиции и способы для лечения и восстановления сухожилий |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2015138403A RU2015138403A (ru) | 2017-03-20 |
| RU2678878C2 true RU2678878C2 (ru) | 2019-02-05 |
Family
ID=50179962
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2015138403A RU2678878C2 (ru) | 2013-02-12 | 2014-02-12 | Композиции и способы для лечения и восстановления сухожилий |
| RU2019100033A RU2019100033A (ru) | 2013-02-12 | 2014-02-12 | Композиции и способы для лечения и восстановления сухожилий |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2019100033A RU2019100033A (ru) | 2013-02-12 | 2014-02-12 | Композиции и способы для лечения и восстановления сухожилий |
Country Status (16)
| Country | Link |
|---|---|
| US (2) | US10272118B2 (ru) |
| EP (2) | EP2956543B1 (ru) |
| JP (3) | JP6581908B2 (ru) |
| KR (1) | KR102252223B1 (ru) |
| CN (2) | CN105051186B (ru) |
| AU (1) | AU2014216300B2 (ru) |
| BR (1) | BR112015019395B1 (ru) |
| CA (1) | CA2900976A1 (ru) |
| DK (1) | DK2956543T3 (ru) |
| ES (1) | ES2701006T3 (ru) |
| IL (1) | IL240469B (ru) |
| MX (1) | MX366410B (ru) |
| RU (2) | RU2678878C2 (ru) |
| SG (2) | SG11201506312TA (ru) |
| WO (1) | WO2014127047A1 (ru) |
| ZA (1) | ZA201505875B (ru) |
Families Citing this family (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR102252223B1 (ko) | 2013-02-12 | 2021-05-14 | 리플리셀 라이프 사이언시스 인크. | 힘줄 치료 및 회복을 위한 조성물 및 방법 |
| NZ715905A (en) * | 2013-06-18 | 2021-12-24 | Replicel Life Sciences Inc | Compositions and methods for treating skin |
| US10500233B2 (en) | 2014-02-12 | 2019-12-10 | Replicel Life Sciences Inc. | Compositions and methods for treating bone, joints and cartilage |
| TW201538729A (zh) * | 2014-02-12 | 2015-10-16 | Replicel Life Sciences Inc | 與口腔治療有關之組合物及方法 |
| CN109310800B (zh) * | 2016-07-29 | 2022-01-07 | 医药研究有限公司 | 包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物 |
| RU2712763C1 (ru) * | 2019-02-22 | 2020-01-31 | Вероника Андреевна Гусева | Способ комплексного лечения травм связок и сухожилий у лошадей |
| EP3766963A1 (en) * | 2019-07-15 | 2021-01-20 | Universität Leipzig | Method of culturing mesenchymal stem cells |
| KR20230091232A (ko) | 2021-12-15 | 2023-06-23 | 주식회사 파인메딕스 | 담즙 배출을 위한 스텐트 기구 및 그 제어방법 |
Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995001423A1 (en) * | 1993-07-01 | 1995-01-12 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of culturing and modulating the growth of hair follicular stem cells |
Family Cites Families (44)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5804178A (en) | 1986-11-20 | 1998-09-08 | Massachusetts Institute Of Technology | Implantation of cell-matrix structure adjacent mesentery, omentum or peritoneum tissue |
| US5736372A (en) | 1986-11-20 | 1998-04-07 | Massachusetts Institute Of Technology | Biodegradable synthetic polymeric fibrous matrix containing chondrocyte for in vivo production of a cartilaginous structure |
| CN1091315A (zh) | 1992-10-08 | 1994-08-31 | E·R·斯奎布父子公司 | 血纤维蛋白封闭剂组合物及其使用方法 |
| US7556825B2 (en) | 1993-04-02 | 2009-07-07 | Anticancer, Inc. | Method for promoting hair growth |
| US7419661B2 (en) | 1997-04-30 | 2008-09-02 | The Centre Of Excellence For Life Sciences Limited | Dermal sheath tissue in wound healing |
| GB9708692D0 (en) | 1997-04-30 | 1997-06-18 | Jahoda Colin A B | Dermal sheath tissue and/or cells derived therefrom in wound healing |
| CN1333818A (zh) | 1998-11-19 | 2002-01-30 | 奥加诺吉尼西斯公司 | 生物工程化的组织构建物、其制备方法及其应用 |
| GB9925964D0 (en) | 1999-11-03 | 1999-12-29 | Jahoda Colin A B | Hair transplantation |
| US7799325B2 (en) | 1999-11-05 | 2010-09-21 | Kleinsek Donald A | Removal of hypertrophic scars |
| US20080267923A2 (en) * | 1999-11-05 | 2008-10-30 | Donald Kleinsek | Hair undifferentiated cells |
| PT1276486E (pt) | 2000-04-25 | 2011-02-07 | Osiris Therapeutics Inc | Reparação de articulação utilizando células estaminais do mesênquima |
| DE10056465A1 (de) * | 2000-11-14 | 2002-07-18 | Rosemarie Daig | Zellkonstrukte erhältlich aus mesenchymalen Stammzellen und davon ableitbaren Zellen und ihre Verwendung |
| US6607745B2 (en) | 2001-05-18 | 2003-08-19 | Harry Leneau | Ingestion of hyaluronic acid for improved joint function and health |
| DE10136882B4 (de) | 2001-07-24 | 2004-10-07 | Coty B.V. | Kosmetisches Produkt mit Acrylaten sowie Verfahren zu dessen Herstellung |
| US20030161815A1 (en) * | 2002-02-12 | 2003-08-28 | Intercytex Limited | Cell delivery system |
| DE10224982A1 (de) | 2002-06-05 | 2003-12-24 | Rolf Hoffmann | Mesenchymale Stammzellen des Haarfollikels und deren Verwendung |
| AU2003300776A1 (en) | 2002-09-09 | 2004-05-25 | Omeros Corporation | G protein coupled receptors and uses thereof |
| US7316822B2 (en) | 2003-11-26 | 2008-01-08 | Ethicon, Inc. | Conformable tissue repair implant capable of injection delivery |
| FR2889062B1 (fr) | 2003-12-23 | 2007-08-31 | Rhodia Chimie Sa | Composition cosmetique comprenant un copolymere ampholyte |
| EP2824174B1 (en) | 2004-03-22 | 2018-11-28 | Mesoblast International Sàrl | Mesenchymal stem cells and uses therefor |
| CN101506355B (zh) * | 2004-09-24 | 2012-06-27 | 成血管细胞系统公司 | 多能扩增间充质前体细胞子代（memp）及其应用 |
| US8039258B2 (en) | 2004-09-28 | 2011-10-18 | Ethicon, Inc. | Tissue-engineering scaffolds containing self-assembled-peptide hydrogels |
| KR100616752B1 (ko) * | 2004-11-29 | 2006-08-31 | 박정극 | 모낭 유도 능력이 있는 모유두 조직의 제조방법 |
| ES2387195T3 (es) | 2005-05-27 | 2012-09-17 | Royer Biomedical, Inc. | Matrices de polímero y métodos de fabricación y uso de las mismas |
| CN1709523A (zh) * | 2005-07-01 | 2005-12-21 | 浙江大学 | 含毛囊人工皮肤的制备方法 |
| WO2008020815A1 (en) | 2006-08-15 | 2008-02-21 | Agency For Science, Technology And Research | Mesenchymal stem cell conditioned medium |
| US20100273231A1 (en) | 2005-09-20 | 2010-10-28 | Andreadis Stelios T | Multipotent mesenchymal stem cells from human hair follicles |
| US8206980B2 (en) | 2005-09-30 | 2012-06-26 | Phoenixbio Co., Ltd. | Method for cultivation of hair follicular dermal sheath cells |
| AU2007223276B2 (en) | 2006-03-03 | 2012-12-20 | Organogenesis, Inc. | Oral tissue regeneration and repair |
| US8105380B2 (en) | 2006-10-23 | 2012-01-31 | Stemedica Cell Technologies, Inc. | Cellular scaffold |
| JP4418827B2 (ja) | 2007-05-16 | 2010-02-24 | 三菱電機株式会社 | 画像表示装置及び方法、並びに画像発生装置及び方法 |
| EP2167108A4 (en) * | 2007-06-06 | 2011-01-19 | Hospital For Sick Children | SKIN PRE-CELLARS AND THEIR USES |
| BRPI0815946B8 (pt) * | 2007-09-19 | 2021-05-25 | Pluristem Ltd | artigo de fabricação |
| MX2010005791A (es) | 2007-11-28 | 2010-08-10 | Organogenesis Inc | Construcciones de tejido hechas mediante bio-ingenieria y metodos para produccion y uso. |
| WO2009097559A1 (en) | 2008-01-30 | 2009-08-06 | Histogen, Inc. | Extracellular matrix compositions |
| RU2523339C2 (ru) | 2008-11-14 | 2014-07-20 | Хистоджен, Инк. | Композиции внеклеточного матрикса для лечения рака |
| US9511093B2 (en) * | 2009-03-23 | 2016-12-06 | The Texas A & M University System | Compositions of mesenchymal stem cells to regenerate bone |
| WO2010113117A2 (en) | 2009-03-30 | 2010-10-07 | Edimer Biotech S.A. | Preparation of isolated agonist anti-edar monoclonal antibodies |
| CA2787050A1 (en) | 2010-01-14 | 2011-07-21 | Organogenesis, Inc. | Bioengineered tissue constructs and methods for producing and using thereof |
| EP2623146B1 (en) | 2012-01-31 | 2016-01-06 | TrichoScience Innovations Inc. | Injection devices |
| KR102252223B1 (ko) | 2013-02-12 | 2021-05-14 | 리플리셀 라이프 사이언시스 인크. | 힘줄 치료 및 회복을 위한 조성물 및 방법 |
| NZ715905A (en) | 2013-06-18 | 2021-12-24 | Replicel Life Sciences Inc | Compositions and methods for treating skin |
| US10500233B2 (en) | 2014-02-12 | 2019-12-10 | Replicel Life Sciences Inc. | Compositions and methods for treating bone, joints and cartilage |
| TW201538729A (zh) | 2014-02-12 | 2015-10-16 | Replicel Life Sciences Inc | 與口腔治療有關之組合物及方法 |
-
2014
- 2014-02-12 KR KR1020157024662A patent/KR102252223B1/ko active IP Right Grant
- 2014-02-12 RU RU2015138403A patent/RU2678878C2/ru active
- 2014-02-12 WO PCT/US2014/016109 patent/WO2014127047A1/en active Application Filing
- 2014-02-12 AU AU2014216300A patent/AU2014216300B2/en not_active Ceased
- 2014-02-12 EP EP14706762.3A patent/EP2956543B1/en active Active
- 2014-02-12 DK DK14706762.3T patent/DK2956543T3/da active
- 2014-02-12 CN CN201480011232.5A patent/CN105051186B/zh active Active
- 2014-02-12 CN CN201811168013.4A patent/CN109251883B/zh active Active
- 2014-02-12 EP EP18191527.3A patent/EP3461886A1/en active Pending
- 2014-02-12 CA CA2900976A patent/CA2900976A1/en active Pending
- 2014-02-12 MX MX2015010404A patent/MX366410B/es active IP Right Grant
- 2014-02-12 ES ES14706762T patent/ES2701006T3/es active Active
- 2014-02-12 US US14/767,577 patent/US10272118B2/en active Active
- 2014-02-12 JP JP2015558113A patent/JP6581908B2/ja active Active
- 2014-02-12 RU RU2019100033A patent/RU2019100033A/ru not_active Application Discontinuation
- 2014-02-12 SG SG11201506312TA patent/SG11201506312TA/en unknown
- 2014-02-12 SG SG10201706598WA patent/SG10201706598WA/en unknown
- 2014-02-12 BR BR112015019395-1A patent/BR112015019395B1/pt active IP Right Grant
-
2015
- 2015-08-10 IL IL240469A patent/IL240469B/en active IP Right Grant
- 2015-08-14 ZA ZA2015/05875A patent/ZA201505875B/en unknown
-
2019
- 2019-04-29 US US16/397,121 patent/US20190388476A1/en not_active Abandoned
- 2019-09-02 JP JP2019159354A patent/JP6970718B2/ja active Active
-
2021
- 2021-10-29 JP JP2021177890A patent/JP2022016464A/ja active Pending
Patent Citations (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| WO1995001423A1 (en) * | 1993-07-01 | 1995-01-12 | The Trustees Of The University Of Pennsylvania | Methods of culturing and modulating the growth of hair follicular stem cells |
Non-Patent Citations (7)
| Title |
|---|
| BAJPAI V. K. et al., Clonal multipotency and effect of long-term in vitro expansion on differentiation potential of human hair follicle derived mesenchymal stem cells, Stem cell research, 2012, V. 8, N. 1, p. 74-84. * |
| MCELWEE K. J. et al., Cultured peribulbar dermal sheath cells can induce hair follicle development and contribute to the dermal sheath and dermal papilla, Journal of investigative dermatology, 2003, V. 121, N. 6, p. 1267-1275. * |
| MCELWEE K. J. et al., Macrophage-stimulating protein promotes hair growth ex vivo and induces anagen from telogen stage hair follicles in vivo, Journal of investigative dermatology, 2004, V. 123, N. 1, p. 34-40. * |
| MCELWEE K. J. et al., Macrophage-stimulating protein promotes hair growth ex vivo and induces anagen from telogen stage hair follicles in vivo, Journal of investigative dermatology, 2004, V. 123, N. 1, p. 34-40. ЧЕРМНЫХ Э. С. и др., Культивированные клетки волосяного фолликула человека способны встраиваться в структуру кожи in vivo, Цитология, 2010, Т. 52, N. 3, с. 219-224. MCELWEE K. J. et al., Cultured peribulbar dermal sheath cells can induce hair follicle development and contribute to the dermal sheath and dermal papilla, Journal of investigative dermatology, 2003, V. 121, N. 6, p. 1267-1275. YOUNG R. G. et al., Use of mesenchymal stem cells in a collagen matrix for Achilles tendon repair, Journal of Orthopaedic Research, 1998, V. 16, N. 4, p. 406-413. BAJPAI V. K. et al., Clonal multipotency and effect of long-term in vitro expansion on differentiation potential of human hair follicle derived mesenchymal stem cells, Stem cell research, 2012, V. 8, N. 1, p. 74-84. ВАСИЛЬЕВ Р. Г., М * |
| YOUNG R. G. et al., Use of mesenchymal stem cells in a collagen matrix for Achilles tendon repair, Journal of Orthopaedic Research, 1998, V. 16, N. 4, p. 406-413. * |
| ВАСИЛЬЕВ Р. Г., Мультипотентные стволовые клетки из бульбарного региона волосяного фолликула со свойствами производных нервного гребня, Проблемы криобиологии, 2012, Т. 22, N. 2, с. 165-168. * |
| ЧЕРМНЫХ Э. С. и др., Культивированные клетки волосяного фолликула человека способны встраиваться в структуру кожи in vivo, Цитология, 2010, Т. 52, N. 3, с. 219-224. * |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2678878C2 (ru) | Композиции и способы для лечения и восстановления сухожилий | |
| US20210106628A1 (en) | Compositions and methods for treating skin | |
| JP6626245B2 (ja) | 再構成皮膚の作製用の組成物および方法 | |
| Linon et al. | Engraftment of autologous bone marrow cells into the injured cranial cruciate ligament in dogs | |
| JP5964956B2 (ja) | 胎児の組織からの親細胞バンクの調製 | |
| US10500233B2 (en) | Compositions and methods for treating bone, joints and cartilage | |
| NZ711563B2 (en) | Compositions and methods for treating and repairing tendons | |
| NZ750474A (en) | Compositions and methods for treating and repairing tendons | |
| NZ750474B2 (en) | Compositions and methods for treating and repairing tendons |