CN109310800B - 包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物，更详细而言，确认到通过核酸和壳聚糖的混合制备的肩袖撕裂修复用组合物随温度发生溶胶‑凝胶转变，且确认到组织修复效果比现有的单一组合物高，降低组合物的降解速度，增加组合物在撕裂部位的滞留时间，从而持续组织修复效果。由此，利用本发明的包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物，期待可以开发修复撕裂的肩袖组织效果显著高的治疗用组合物。

Description

包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物
技术领域
本发明涉及包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物。
背景技术
肩膀内有活动肩膀所必要的4个肌肉(冈上肌、冈下肌、肩胛下肌、小圆肌)，称其为肩袖。肩袖将三角肌强大的垂直剪切力转换为圆滑的外翻剪切力，起到不使肱骨头接触肩峰下部的保护膜的作用(Kang J.D.,et al.,2007)。
已知肩袖的损伤有时因急性外伤而发生，但大部分患者会在没有特殊外伤的情况下发生而缓慢进展。即，肩袖疾病基本上是由衰老现象引起的退行性疾病，也可能由肩关节的不稳定性、肩峰锁骨关节的关节炎、肩峰骨(osacromiale)、喙肩峰韧带撞击、喙突撞击、与后上方关节的撞击等外部因素而发生。另外，已知肩袖损伤不仅是由在肩峰下部的撞击(撞击综合征)引起的外部压迫而发生，而且还由多种因素的复合作用而发生，如肩袖本身的内部变性(intrinsic degeneration)或炎症反应的影响等。过度使用手臂或伴有轻度外伤时，这种病理变化可能进展为肩袖的撕裂，在日常生活及工作活动中可能导致严重障碍(Cho N.S.,et al.,2012)。
肩袖损伤的症状有疼痛、肌肉萎缩、关节运动受限、肩关节无力、肩关节前外侧部压痛等。如果撕裂程度严重，则撕裂部分在外部促进。另外，试图用健侧手臂抬起患病手臂，虽然可以抬起，但是由于撕裂，无力的手臂不能保持手臂抬起的状态，患病手臂会下垂或导致肩部疼痛。
肩关节的肩袖损伤的早期第一阶段至末期第三阶段的各阶段的临床特征和治疗有所差异。第一阶段出现肩袖浮肿和出血，常见于25岁以下的年龄层，可通过保守治疗来痊愈。第二阶段是出现肩袖的纤维化和腱炎的阶段，常见于25岁至40岁之间的年龄层，根据活动量其症状会复发。通过保守治疗可能有所好转，但症状严重时需要手术。第三阶段是形成退行性骨刺及肩袖撕裂的阶段，常见于40岁以上的年龄层，症状继续恶化，而需要手术。
肩袖撕裂的治疗有保守治疗和手术治疗，在韩国大多进行手术治疗，手术方法有内窥镜关节缝合术和开放性缝合术。手术治疗与手法无关，经常存在手术失败和感染等后遗症可能性，并且存在三角肌上留下手术痕的问题。另外，术后也需要数月的康复训练，也有手术无法完全消除疼痛而存在疼痛或因关节的僵硬而无法完全恢复活动的情况(LeeJ.H.,et al.,2011)。
保守治疗的方法是用于主要缓解炎症和疼痛的方法，可以使用休息、服用镇痛消炎药、使用局部甾体注射剂、物理疗法等，可进行用于恢复软组织的柔软性的伸展运动和用于恢复功能的肌力加强运动(Jung H.J.,et al.,2012)。药物治疗，使用口服或局部适用非甾体消炎镇痛剂的方法，或使用甾体注射用法，然而这种药物治疗法虽短期效果明显，但存在复发率高且伴随副作用的问题。此外，如超声波热疗、电疗等物理治疗方法等非手术治疗方法，由于其仅限于减轻疼痛等缓解症状，因此存在不能成为积极解决原因的治疗法的局限性。
因此，最近作为非手术治疗方法的环节，介绍了如富血小板血浆(platelet-richplasma)注射治疗的基于组织再生效果的新的治疗法，并且据报道实际对肩袖撕裂有治疗效果。
因此，本发明人在研究肩袖撕裂修复用组合物的过程中，确认到包含核酸和壳聚糖的组合物对缓解肩袖撕裂引起的疼痛和修复撕裂肩袖的效果优异，从而完成了本发明。
在作为现有技术的韩国授权专利第2015-0131864中公开了包含DNA片段混合物的肩袖撕裂的预防或治疗用药物组合物，在韩国授权专利第1536134号中记载包括肩袖在内的软组织修复用基质，但没有记载包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物，其构成上与本发明有所差异。
发明内容
所要解决的技术问题
本发明的目的是提供包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物。
本发明的另一目的是提供包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物的制备方法。
课题的解决手段
本发明涉及包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物。
以组合物的总重量为基准，所述核酸的含量可以为0.1重量％至3重量％。
以组合物的总重量为基准，所述壳聚糖的含量可以为0.001重量％至0.1重量％。
所述核酸和壳聚糖的重量比可以为1：1至3000：1。
所述核酸可以为脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA)、核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)或它们的混合物。优选为脱氧核糖核酸(deoxyribonucleicacid，DNA)。
所述脱氧核糖核酸可以选自寡核苷酸(oligonucleotide)、多聚核苷酸(polynucleotide)及多聚脱氧核糖核苷酸(polydeoxyribonucleotide)。
所述核酸的分子量可以为1kDa至100000kDa。优选为10kDa至10000kDa，更优选为50kDa至3500kDa。
所述壳聚糖的分子量可以为3kDa至1000kDa。
所述组合物可包含水溶性高分子作为追加成分。
所述水溶性高分子可以为选自由透明质酸(hyaluronic acid)、硫酸软骨素(chondroitin sulfate)、糖原(glycogen)、糊精(dextrin)、葡聚糖(dextran)、硫酸葡聚糖(dextran sulfate)、羟丙基甲基纤维素(hydroxypropyl methylcellulose)、海藻酸(alginic acid)、几丁质(chitin)、普鲁兰(pullulan)、胶原蛋白(collagen)、明胶(gelatin)及它们的水解物、聚乙烯醇(polyvinyl alcohol)、聚乙烯聚吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)、聚丙烯酸(polyacrylic acid)及羧基乙烯基聚合物(carboxylvinyl polymer)组成的组中的一种以上。优选为透明质酸(hyaluronic acid)。
所述组合物可以通过注射器注入。
所述组合物可以为随温度发生溶胶-凝胶转变的水凝胶。
以下，详细地说明本发明。
包含核酸和壳聚糖的所述肩袖撕裂修复用组合物可以包括i)将核酸放入缓冲溶液(buffer)中并在40℃至70℃搅拌并溶解30分钟至1小时来制备核酸储备溶液的步骤；ii)将壳聚糖溶解于酸性缓冲溶液中来制备壳聚糖储备溶液的步骤；iii)将所述i)步骤的核酸储备溶液和所述ii)步骤的壳聚糖储备溶液，以核酸和壳聚糖的重量比为1：1至3000：1的方式进行混合，并将混合溶液在40℃至70℃搅拌30分钟至1小时的步骤；以及iv)搅拌所述iii)步骤的核酸-壳聚糖混合溶液，并将温度降至室温的步骤。
制备所述核酸储备溶液时可利用的缓冲溶液有十二水合磷酸氢二钠(sodiumphosphate dibasic dodecahydrate)、氯化钠(sodium chloride)、氯化镁(magnesiumchloride)、氯化钾(potassium chloride)、磷酸缓冲食盐水(phosphate buffer saline)、N-(2-羟乙基)哌嗪-N'-2-乙烷磺酸(HEPES，N-(2-hydroxyethyl)-piperazine-N′-2-ethanesulfonic acid)缓冲溶液，优选为十二水合磷酸氢二钠(sodium phosphatedibasic dodecahydrate)，最优选可利用5～300mM的十二水合磷酸氢二钠，但并非限定于此。
制备所述壳聚糖储备溶液时可利用的酸性缓冲溶液有乙酸(acetic acid)、盐酸(hydrochloric acid)、抗坏血酸(ascorbic acid)、乳酸(lactic acid)、硝酸(nitricacid)、谷氨酸(glutamic acid)或甲酸(formic acid)，优选为乙酸(acetic acid)，最优选可利用10～300mM的乙酸，但并非限定于此。
包含核酸和壳聚糖的所述肩袖撕裂修复用组合物可以为随温度发生溶胶-凝胶转变的温敏性水凝胶。
所述温敏性水凝胶随温度溶胶(sol)相变(phase transition)为凝胶(gel)或凝胶相变为溶胶，将溶胶变为凝胶的现象称为凝胶化(gelation)，在本发明中凝胶化定义为具有粘弹性且高分子随着温度的升高形成三维网状结构且不溶于溶剂而残留的状态。
通过将所述具有温敏性水凝胶性质的肩袖撕裂修复用组合物注入到撕裂部位，因体温恢复粘弹性并发生凝胶化，从而所述组合物在撕裂部位的残留时间增加而能够增进组织修复效果。另外，由于组合物的凝胶化，降低了组合物的降解速度，从而可获得长期的治疗效果。
包含核酸和壳聚糖的所述肩袖撕裂修复用组合物是保持均匀(homogeneous)的状态且具有不发生层分离的高稳定性(stability)，核酸和壳聚糖的重量比可以为1：1至3000：1。优选为10：1至300：1。更优选为10：1至100：1。
以组合物的总重量为基准，所述核酸的含量可以为0.1重量％至3重量％。优选为1重量％至2重量％。
所述核酸的分子量可以为10kDa至100000kDa，优选为10kDa至10000kDa，最优选为50kDa至3500kDa。核酸的分子量小于10kDa时，难以控制凝胶的降解速度，大于100000kDa时，难以调节凝胶的粘性，导致使用中存在问题。
所述核酸可以是脱氧核糖核酸(deoxyribonucleic acid，DNA)、核糖核酸(ribonucleic acid，RNA)或它们的混合物。优选为脱氧核糖核酸。
另外，所述脱氧核糖核酸可以为寡核苷酸(oligonucleotide)、多核苷酸(polynucleotide)和多聚脱氧核糖核苷酸(polydeoxyribonucleotide)。
另外，以组合物的总重量为基准，所述壳聚糖的含量可以为0.001重量％至0.1重量％，优选为0.01重量％至0.1重量％。
所述壳聚糖的分子量优选为3kDa至1000kDa，但并非限定于此。
所述核酸和壳聚糖混合，以核酸和壳聚糖的重量比为1：1至3000：1的方式进行混合，此时，优选以组合物的总重量为基准，所述核酸的含量为0.1重量％至3重量％，以组合物的总重量为基准，所述壳聚糖的含量为0.001重量％至0.1重量％。
包含核酸和壳聚糖的所述肩袖撕裂修复用组合物可以包含水溶性高分子作为追加成分。
为了调节包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物的降解速度及巩固治疗效果，可以追加所述水溶性高分子。
所述水溶性高分子可以在生物体内溶解或降解，可使用透明质酸(hyaluronicacid)、硫酸软骨素(chondroitin sulfate)、糖原(glycogen)、糊精(dextrin)、葡聚糖(dextran)、硫酸葡聚糖(dextran sulfate)、羟丙基甲基纤维素(hydroxypropylmethylcellulose)、海藻酸(alginic acid)、几丁质(chitin)、普鲁兰(pullulan)等多糖类或胶原蛋白(collagen)、明胶(gelatin)及它们的水解物等蛋白质，聚乙烯醇(polyvinylalcohol)、聚乙烯基吡咯烷酮(polyvinyl pyrrolidone)、聚丙烯酸(polyacrylic acid)、羧基乙烯基聚合物(carboxylvinyl polymer)等合成高分子化合物，优选为透明质酸。
包含所述水溶性高分子作为追加成分的包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物的核酸、壳聚糖及水溶性高分子可以以1～3000：1：1～3000的重量比混合。优选10～1000：1：10～1000的重量比，更优选25～100：1：25～100的重量比。
所述透明质酸包含线性或交联的形态，分子量可以为20kDa至10000kDa，优选为500kDa至3000kDa，但并非限定于此。
包含核酸和壳聚糖的所述肩袖撕裂修复用组合物能够抑制肩袖撕裂所致的脂肪变性和炎症反应，提高肩袖组织的胶原纤维的连续性和平行性，从而能够呈现出肩袖组织修复效果。
发明效果
本发明涉及包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物，更详细而言，确认到通过核酸和壳聚糖的混合而制备的肩袖撕裂修复用组合物随温度发生溶胶-凝胶转变，确认到组织修复效果比现有的单一组合物高，降低组合物的降解速度，从而持续组织的修复效果。
因此，本发明的肩袖撕裂修复用组合物可直接注入需要治疗的撕裂部位，在所注入的部位通过凝胶化来降低组合物的降解速度，随着药物在撕裂部位的滞留时间增加，能够充分发挥组织修复效果，期待能够获得优异的治疗效果。
附图说明
图1是确认本发明的肩袖撕裂修复用组合物的物性状态的结果。制备各肩袖撕裂修复用组合物并放置3天后，确认组合物的透明度、沉淀物生成以及是否层分离。
图2示出确认本发明的实施例1-1的肩袖撕裂修复用组合物随温度形成发生溶胶-凝胶转变的水凝胶的结果。
图3示出测定经本发明的肩袖撕裂修复用组合物处理的肩袖撕裂时的最大拉伸强度的方法。
具体实施方式
以下详细说明本发明的优选实施例。但是，本发明不限于这里所说明的实施例，也可以以其他方式具体化。相反，为了使这里所说明的内容全面和完整，并向本领域技术人员充分地传达本发明的思想，而提供所述实施例。
<实施例1.制备包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物>
核酸储备溶液(stock solution)通过将核酸放入190mM的十二水合磷酸氢二钠(sodium phosphate dibasic dodecahydrate)缓冲溶液中，利用70℃的加热搅拌机溶解30分钟以上来制备。
利用100mM的乙酸(acetic acid)制备壳聚糖储备溶液。
将制备的核酸和壳聚糖储备溶液混合，在70℃的加热搅拌机中搅拌30分钟。之后，将温度降至常温并搅拌1小时，制备包含核酸和壳聚糖的肩袖撕裂修复用组合物。此时，以核酸和壳聚糖的浓度达到如下表1的浓度的方式进行混合。
[表1]
Figure BDA0001901191770000081
<实施例2.制备包含核酸、壳聚糖和透明质酸的肩袖撕裂修复用组合物>
核酸储备溶液通过将核酸放入190mM的十二水合磷酸氢二钠(sodium phosphatedibasic dodecahydrate)缓冲溶液中，使用70℃的加热搅拌机溶解30分钟以上来制备。
利用100mM的乙酸(acetic acid)制备壳聚糖储备溶液。
将制备的核酸和壳聚糖储备溶液混合，在70℃的加热搅拌机中搅拌30分钟。在核酸和壳聚糖的混合溶液中进一步混合透明质酸原料并在60℃的加热搅拌机中搅拌1小时后，在常温搅拌3小时来制备包含核酸、壳聚糖和透明质酸的肩袖撕裂修复用组合物。此时，以核酸、壳聚糖和透明质酸的浓度达到如下表2的浓度的方式进行混合。
[表2]
Figure BDA0001901191770000082
所述透明质酸使用了分子量为1000kDa的透明质酸，但使用分子量为20kDa至10000kDa的透明质酸也无妨。
<比较例1.制备比较对象的肩袖撕裂修复用组合物>
根据如下表3对应的成分和其含量及混合比制备比较对象的肩袖撕裂修复用组合物。制备方法使用与所述实施例1和实施例2相同的方法。
[表3]
Figure BDA0001901191770000091
<实验例1.确认肩袖撕裂修复用组合物的物性>
利用所述实施例1(实施例1-1至实施例1-5)、实施例2(实施例2-1至实施例2-9)及比较例(比较例1-1至比较例1-13)的肩袖撕裂修复用组合物，确认凝胶化、凝胶的稳定性及溶解性。
混合各组合物，放置3天后，肉眼观察组合物的透明度和凝胶化状态，关于凝胶化程度，利用流变仪(rheometer)，从24℃至40℃，每升高1℃并保持1分钟，来确认粘弹性测定值的增加变化，凝胶的稳定性通过沉淀物生成和是否层分离来确认。关于凝胶的溶解性，在37.5℃的水溶液中滴定实施例1、实施例2及比较例1的肩袖撕裂修复用组合物并使其凝胶化后，保持37.5℃的温度并以400rpm搅拌5分钟，来确认凝胶是否溶解，其结果示于表4及图1中。
[表4]
Figure BDA0001901191770000101
Figure BDA0001901191770000111
参见所述表4及图1，可知实施例1及实施例2的肩袖撕裂修复用组合物在经过3天后也没有出现沉淀物生成及层分离现象，并且维持粘弹性，关于凝胶溶解性，观察到在37.5℃形成凝胶，且所形成的凝胶持续保持。
但是比较例1的比较对象的肩袖撕裂修复用组合物，生成沉淀物、发生层分离或局部生成团块，无法测定粘弹性，关于凝胶溶解性，确认到在37.5℃没有发生凝胶化，或者即使发生凝胶化也在5分钟以内全部溶解。尤其，如比较例1-12及比较例1-13的比较对象的肩袖撕裂修复用组合物，在不包含核酸的情况下，确认到虽然组合物具有粘弹性，但出现沉淀物生成及层分离现象，在37.5℃形成凝胶后5分钟内全部溶解而稳定性下降(参照表4)。
由此，可知本发明的肩袖撕裂修复用组合物根据温度变化而呈现出温敏性，并且即使在凝胶化之后也持续保持凝胶的形态，由此，注入的本发明的组合物在撕裂的肩袖部位发生凝胶化，组合物的降解速度降低，药物滞留性增加，增大损伤的肩袖部位的治疗效果，从而可预测能够呈现出优异的肩袖撕裂治疗效果。
<实验例2.确认基于温度的溶胶-凝胶转变(sol-gel transition)>
确认到所述实施例1、实施例2及比较例1的肩袖撕裂修复用组合物形成随着温度变化的溶胶-凝胶转变的水凝胶。
为了确认溶胶-凝胶转变，利用流变仪(rheometer)。此时，使用的测定条件为PU20、间隙(Gap)0.5mm、0.1Hz及1％的应力-应变率(stress strain)，从24℃至40℃，每升高1℃并保持1分钟，来测定G'(弹性)及G”(粘性)的变化。另外，对各组合物施加温度，肉眼观察36℃前后的溶胶-凝胶转变，其结果如图2所示。
测定实施例1-1的肩袖撕裂修复用组合物基于温度的弹性及粘性变化的结果，观察到温敏性水凝胶所具有的特征，即随着温度升高G'(弹性)的降低幅度平缓且G”(粘度)增加。另外，如图2所示，观察到实施例1-1的肩袖撕裂修复用组合物在小于36℃的温度呈溶胶的形态，相反，大于36℃发生凝胶化。
确认到这种结果均同样发生在实施例1及实施例2的肩袖撕裂修复用组合物中。
由此可知，本发明的肩袖撕裂修复用组合物具有随着温度发生溶胶-凝胶转变的温敏性性质，可预测到注入到肩袖撕裂部位后，因体温发生凝胶化而药物的滞留时间增加，可以使组织的修复效果最大化。
<实验例3.肩袖撕裂的动物模型的制作>
将斯普拉格道利(Sprague-Dawley)系雄性大鼠(rat)按实验组随机分配。对于除了正常组以外的实验组的大鼠，切开右侧肩部并剪掉肩袖之一的冈下肌(infraspinatus)且用潘氏引流管(penrose drain)包裹后缝合皮肤，饲养4周来制作慢性肩袖撕裂(chronicrotator cuff tear)模型。
<实验例4.肩袖撕裂修复用组合物的注入及组织检查>
切开在所述实验例3中制作的慢性肩袖撕裂的动物模型的右侧肩部并对撕裂的肩袖进行缝合手术后，将本发明的肩袖撕裂修复用组合物分别注入0.5mL并饲养3周或6周。在3周或6周后对各组的动物模型的肩袖部位进行组织检查。关于组织检查，将所摘取的组织在10％中性缓冲福尔马林(neutral buffered formalin)中固定24小时以上后，通过脱水和石蜡浸湿，确认肌肉-肌腱连接部(musculotendinous junction)的近端0.3cm的部位。
<实验例5.组织病理学观察>
实验例5-1.通过脂肪变性(fatty degeneration)和炎症反应的组织检查，确认肩袖撕裂修复用组合物的生物相容性和治愈程度
如果发生肩袖撕裂等损伤，则出现肩袖部位的内部变性及炎症反应，在肩袖撕裂缝合失败的情况下，也会出现明显的肩袖的脂肪变性和炎症反应，肩袖再次撕裂的可能性高。由此，经本发明的肩袖撕裂修复用组合物处理后，为了确认肩袖撕裂的修复程度，观察脂肪变性和炎症反应的变化。
为了确认组织切片的脂肪变性，将脂肪细胞的个数变化用S100染色，为了确认炎症反应，将巨噬细胞的个数变化用CD68染色，统计处理染色细胞数的结果示于表5中。
[表5]
Figure BDA0001901191770000131
如所述表5所示，可知在肩袖撕裂的动物模型(未处理组)中随时间的经过脂肪细胞和巨噬细胞的数增加而导致病变恶化。另一方面，在经实施例1-1、实施例2-1、比较例1-1及比较例1-3的肩袖撕裂修复用组合物处理的组中，随时间的经过脂肪细胞和巨噬细胞的数减少，但在经比较例1-2的肩袖撕裂修复用组合物处理的组中，与未处理组类似地，脂肪细胞和巨噬细胞的数增加且没有修复病变组织的效果。进一步，可知经实施例1-1及实施例2-1的肩袖撕裂修复用组合物处理的组，与经比较例1-1及比较例1-3的肩袖撕裂修复用组合物处理的组相比，脂肪细胞和巨噬细胞的数的减少率更大。
由此，可预测本发明的肩袖撕裂修复用组合物的生物相容性优异，在肩袖撕裂部位中药物滞留性增加，组织修复效果显著提高。
实验例5-2.通过胶原纤维的组织检查确认撕裂肩袖的治愈程度
撕裂肩袖的治愈程度通过组织检查骨-腱结合部胶原纤维(collagen fiber)的连续性及规律的平行性来确认。
为了确认组织切片的胶原纤维连续性及规律的平行性，利用马氏三色(Masson'strichrome)染色和苏木素伊红(H&E，hematoxylin and eosin)染色来确认。根据染色的组织切片的胶原纤维的连续性和规律的平行性分为0至3阶段(0：25％，1：25～50％，2：50～75％，3：>75％)后，确认各阶段的大鼠数量来评价撕裂肩袖的治愈程度，其结果示于表6。
[表6]
Figure BDA0001901191770000141
如表6所示，可知在有肩袖撕裂的动物模型(未处理组)中，骨-腱结合部的胶原纤维的连续性及平行性变化的程度直到6周为止处于0和1阶段。但是，实施例1-1和实施例2-1及比较例1-1和比较例1-3的肩袖撕裂修复组合物的骨-腱结合部的胶原纤维的连续性及平行性变化的程度直到6周为止处于1、2、3阶段。尤其，可知实施例1-1和实施例2-1与比较例1-1和比较例1-3相比，呈现出胶原纤维的连续性和平行变化程度高的阶段。
由此，确认到本发明的肩袖撕裂修复用组合物增加对肩袖撕裂部位的药物滞留性，使胶原纤维的连续性和平行性提高，从而呈现出组织修复效果。
<实验例6.测定肩袖的拉伸强度>
利用图3的英斯特朗(Instron)3343设备，确认经本发明的实施例1和实施例2的肩袖撕裂修复用组合物处理的肩袖撕裂时的拉伸强度。
利用气动夹紧器(Pneumatic grip)固定大鼠的肩袖，施加拉伸载荷(tensileload)，测定撕裂时的最大张力。此时，撕裂的形式有在骨和腱(tendon)的结合部发生的插入撕裂(insertional tear)和在腱的中间部发生的中间撕裂(midsubstance tear)的两种形式。撕裂的形式根据结合的强弱程度区分，已知中间撕裂(Midsubstance Tear)在骨-腱中有强烈结合时出现，插入撕裂(Insertional Tear)在骨-腱中有较弱的结合时出现，当出现中间撕裂(midsubstance tear)时，判断为组织被强化。
在实施张力试验前，施加1N的预负荷，并在0.1mm/s的速度下以5％的应变(strain)施加10回(cycle)的反复载荷进行预处理。预处理后，应力松弛反应(stress-relaxation response)在2.5％/s的应变速度(strain rate)下以5％的倾斜度进行试验，等候300秒后再回到1N的预负荷，然后以0.1mm/s实施准静态载荷破坏试验(quasi-staticload-to-failure test)。载荷(Load)和位移(displacement)以100Hz记录。
关于功效分析(Power analysis)，将在破坏载荷程度(peak failure load)的比例(ratio)中检测20％差异所需的最少样本数设为4只，并且将以0.8的功效(power)和0.05阿尔法(alpha)值预测的标准偏差(SD)设为10％。为了比较两组之间的每个参数(parameter)的差异，使用无母数分析，利用针对独立样本(independent samples)的曼-惠特尼检验(Mann-Whitney test)，且使用了SPSS version 13.0(SPSS，Chicago，IL)统计程序。其结果示于表7中。
[表6]
Figure BDA0001901191770000161
在所述表7中，经实施例1-1、实施例1-3、实施例1-4、实施例2-1和实施例2-7的肩袖撕裂修复用组合物处理的组，确认到有肩袖撕裂的右侧肩的肩袖破坏载荷和撕裂形式在经过6周后呈现出与正常肩的破坏载荷和撕裂形式类似的测定值，与经比较例1-1和比较例1-3的肩袖撕裂修复用组合物处理的组相比，呈现出其数值显著增加。
另外，通过在经实施例1-1、实施例1-3、实施例1-4、实施例2-1和实施例2-7的肩袖撕裂修复用组合物处理的组的肩袖撕裂形式中，表现出弱结合的插入撕裂形式的比例高于表现出强结合的中间破撕裂形式的比例，可知肩袖的拉伸强度增强而肩袖撕裂得到修复。
由此，可知经本发明的肩袖撕裂修复用组合物处理的情况下，随处理时间的经过，肩袖的拉伸强度增加，撕裂的肩袖的组织得到修复，从而呈现出优秀的肩袖撕裂修复效果。

Claims (13)

1.一种肩袖撕裂修复用组合物，其包含核酸和壳聚糖，
以组合物的总重量为基准，所述核酸的含量为0.1重量％至3重量％，所述壳聚糖的含量为0.001重量％至0.1重量％，
所述核酸和壳聚糖的重量比为1：1至3000：1。
2.根据权利要求1所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述核酸是脱氧核糖核酸、核糖核酸或它们的混合物。
3.根据权利要求2所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，所述核酸是脱氧核糖核酸。
4.根据权利要求3所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述脱氧核糖核酸选自寡核苷酸、多聚核苷酸和多聚脱氧核糖核苷酸。
5.根据权利要求1所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述核酸的分子量为1kDa至100000kDa。
6.根据权利要求5所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述核酸的分子量为10kDa至10000kDa。
7.根据权利要求6所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述核酸的分子量为50kDa至3500kDa。
8.根据权利要求1所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述壳聚糖的分子量为3kDa至1000kDa。
9.根据权利要求1所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述组合物包含水溶性高分子作为追加成分。
10.根据权利要求9所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述水溶性高分子是选自由透明质酸、硫酸软骨素、糖原、糊精、葡聚糖、硫酸葡聚糖、羟丙基甲基纤维素、海藻酸、普鲁兰、胶原蛋白、明胶及它们的水解物、聚乙烯醇、聚乙烯聚吡咯烷酮、聚丙烯酸和羧基乙烯基聚合物组成的组中的一种以上。
11.根据权利要求10所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述水溶性高分子为透明质酸。
12.根据权利要求1所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述组合物通过注射器注入。
13.根据权利要求1所述的肩袖撕裂修复用组合物，其特征在于，
所述组合物是随温度发生溶胶-凝胶转变的水凝胶。
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Families Citing this family (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR101916193B1 (ko) * 2016-08-25 2018-11-07 주식회사 파마리서치프로덕트 핵산 및 키토산을 포함하는 관절강 주사용 조성물

Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5939323A (en) * 1996-05-28 1999-08-17 Brown University Hyaluronan based biodegradable scaffolds for tissue repair
KR20060022434A (ko) * 2004-09-07 2006-03-10 굿젠 주식회사 키토산을 이용한 ｄｎａ 보관방법 및 분석방법 및 이를이용한 ｄｎａ 제품
CN101873867A (zh) * 2007-09-28 2010-10-27 恩根尼公司 高浓度脱乙酰壳多糖-核酸复合物的组合物
EP2745849A1 (en) * 2012-12-19 2014-06-25 Idea Medical Devices S.r.l. Polydeoxyribonucleotides composition and uses thereof
CN104208711A (zh) * 2014-09-26 2014-12-17 中国医学科学院生物医学工程研究所 壳聚糖半流体缓释凝胶及用途
KR20150068425A (ko) * 2012-10-08 2015-06-19 코매트릭스 카디오바스컬라 인코포레이티드 신경 재생용 조성물, 구조물 및 방법
CN105051186A (zh) * 2013-02-12 2015-11-11 复制细胞生命科学公司 治疗和修复肌腱的组合物和方法
KR20150131864A (ko) * 2014-05-16 2015-11-25 주식회사 파마리서치프로덕트 어류의 정액 또는 정소로부터 분리된 디엔에이 단편 혼합물을 함유하는 회전근개 파열의 예방 또는 치료용 약학 조성물
CN105497913A (zh) * 2016-02-19 2016-04-20 浙江医学高等专科学校 一种三维纳米纤维组织工程支架及制备方法

Family Cites Families (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
NZ523763A (en) * 2000-06-29 2005-02-25 Biosyntech Canada Inc Compostion and method for the repair and regeneration of cartilage and other tissues
US20040078090A1 (en) * 2002-10-18 2004-04-22 Francois Binette Biocompatible scaffolds with tissue fragments
US7824701B2 (en) * 2002-10-18 2010-11-02 Ethicon, Inc. Biocompatible scaffold for ligament or tendon repair
KR100888748B1 (ko) * 2007-06-15 2009-03-17 서울산업대학교 산학협력단 불포화 생물분자를 이용한 키토산 하이드로젤과 이의제조방법
CN104203292B (zh) * 2011-11-09 2019-05-31 塔夫茨大学信托人 可注射丝素蛋白泡沫及其用途
ITTO20130317A1 (it) * 2013-04-19 2014-10-20 Idea Medical Devices S R L Dispositivo medico comprendente una struttura di supporto a base di chitosano
KR101783448B1 (ko) * 2014-05-15 2017-09-29 포항공과대학교 산학협력단 표면 처리된 나노섬유를 포함하는 하이드로젤 및 이의 제조방법

Patent Citations (9)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US5939323A (en) * 1996-05-28 1999-08-17 Brown University Hyaluronan based biodegradable scaffolds for tissue repair
KR20060022434A (ko) * 2004-09-07 2006-03-10 굿젠 주식회사 키토산을 이용한 ｄｎａ 보관방법 및 분석방법 및 이를이용한 ｄｎａ 제품
CN101873867A (zh) * 2007-09-28 2010-10-27 恩根尼公司 高浓度脱乙酰壳多糖-核酸复合物的组合物
KR20150068425A (ko) * 2012-10-08 2015-06-19 코매트릭스 카디오바스컬라 인코포레이티드 신경 재생용 조성물, 구조물 및 방법
EP2745849A1 (en) * 2012-12-19 2014-06-25 Idea Medical Devices S.r.l. Polydeoxyribonucleotides composition and uses thereof
CN105051186A (zh) * 2013-02-12 2015-11-11 复制细胞生命科学公司 治疗和修复肌腱的组合物和方法
KR20150131864A (ko) * 2014-05-16 2015-11-25 주식회사 파마리서치프로덕트 어류의 정액 또는 정소로부터 분리된 디엔에이 단편 혼합물을 함유하는 회전근개 파열의 예방 또는 치료용 약학 조성물
CN104208711A (zh) * 2014-09-26 2014-12-17 中国医学科学院生物医学工程研究所 壳聚糖半流体缓释凝胶及用途
CN105497913A (zh) * 2016-02-19 2016-04-20 浙江医学高等专科学校 一种三维纳米纤维组织工程支架及制备方法

Non-Patent Citations (4)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Title
"Direct chitosan-mediated gene delivery to the rabbit knee joints in vitro and in vivo";Xiaoling Zhang et al;《Biochemical and Biophysical Research Communications》;20060109;第341卷;第202-208页 *
"DNA nanogels composed of chitosan and Pluronic with thermo-sensitive and photo-crosslinking properties";Jung Im Lee et al;《International Journal of Pharmaceutics》;20090124;第373卷;第93-99页 *
"壳聚糖温敏水凝胶的质-构关系及研究进展";孔明灯;《功能材料》;20140430;第45卷(第8期);第8007-8012页 *
"壳聚糖纳米基因载体的制备和鉴定";苏丹等;《南方医科大学学报》;20070520;第27卷(第5期);第595-598页 *

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