RU2667425C2 - Микроорганизм Corynebacterium sp. с повышенной способностью продуцировать L-лизин и способ получения L-лизина с его помощью - Google Patents
Микроорганизм Corynebacterium sp. с повышенной способностью продуцировать L-лизин и способ получения L-лизина с его помощью Download PDFInfo
- Publication number
- RU2667425C2 RU2667425C2 RU2016114418A RU2016114418A RU2667425C2 RU 2667425 C2 RU2667425 C2 RU 2667425C2 RU 2016114418 A RU2016114418 A RU 2016114418A RU 2016114418 A RU2016114418 A RU 2016114418A RU 2667425 C2 RU2667425 C2 RU 2667425C2
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- lysine
- gene
- microorganism
- promoter
- vector
- Prior art date
Links
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 title claims abstract description 106
- 244000005700 microbiome Species 0.000 title claims abstract description 45
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 title claims abstract description 13
- 241000186216 Corynebacterium Species 0.000 title claims description 22
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 claims abstract description 70
- 235000019766 L-Lysine Nutrition 0.000 claims abstract description 38
- 108091033319 polynucleotide Proteins 0.000 claims abstract description 32
- 102000040430 polynucleotide Human genes 0.000 claims abstract description 32
- 239000002157 polynucleotide Substances 0.000 claims abstract description 32
- 241000186226 Corynebacterium glutamicum Species 0.000 claims abstract description 26
- 230000014509 gene expression Effects 0.000 claims abstract description 18
- WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N subtilin Chemical compound CC1SCC(NC2=O)C(=O)NC(CC(N)=O)C(=O)NC(C(=O)NC(CCCCN)C(=O)NC(C(C)CC)C(=O)NC(=C)C(=O)NC(CCCCN)C(O)=O)CSC(C)C2NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C1NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(NC(=O)C1NC(=O)C(=C/C)/NC(=O)C(CCC(N)=O)NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(C)NC(=O)CNC(=O)C(NC(=O)C(NC(=O)C2NC(=O)CNC(=O)C3CCCN3C(=O)C(NC(=O)C3NC(=O)C(CC(C)C)NC(=O)C(=C)NC(=O)C(CCC(O)=O)NC(=O)C(NC(=O)C(CCCCN)NC(=O)C(N)CC=4C5=CC=CC=C5NC=4)CSC3)C(C)SC2)C(C)C)C(C)SC1)CC1=CC=CC=C1 WPLOVIFNBMNBPD-ATHMIXSHSA-N 0.000 claims abstract description 5
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 58
- 238000000034 method Methods 0.000 claims description 15
- 108091081024 Start codon Proteins 0.000 claims description 8
- 150000001413 amino acids Chemical group 0.000 claims description 6
- 230000008859 change Effects 0.000 claims description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 claims description 3
- 230000004048 modification Effects 0.000 claims 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 claims 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 6
- 241000186249 Corynebacterium sp. Species 0.000 abstract 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract 1
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 36
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 31
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 31
- 210000000349 chromosome Anatomy 0.000 description 21
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 15
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 14
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 13
- 239000013612 plasmid Substances 0.000 description 12
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 11
- XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N Urea Chemical compound NC(N)=O XSQUKJJJFZCRTK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 8
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 230000001105 regulatory effect Effects 0.000 description 8
- DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N Nicotinamide Chemical compound NC(=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 6
- 101150035025 lysC gene Proteins 0.000 description 6
- 108091008146 restriction endonucleases Proteins 0.000 description 6
- WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N Glucose Natural products OC[C@H]1OC(O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-GASJEMHNSA-N 0.000 description 5
- 108700026244 Open Reading Frames Proteins 0.000 description 5
- 108090000854 Oxidoreductases Proteins 0.000 description 5
- 102000004316 Oxidoreductases Human genes 0.000 description 5
- 230000006696 biosynthetic metabolic pathway Effects 0.000 description 5
- 239000004202 carbamide Substances 0.000 description 5
- 239000008103 glucose Substances 0.000 description 5
- 101150040063 orf gene Proteins 0.000 description 5
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000001888 Peptone Substances 0.000 description 4
- 108010080698 Peptones Proteins 0.000 description 4
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 4
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 4
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 4
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 4
- FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L calcium D-pantothenic acid Chemical compound [Ca+2].OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O.OCC(C)(C)[C@@H](O)C(=O)NCCC([O-])=O FAPWYRCQGJNNSJ-UBKPKTQASA-L 0.000 description 4
- 229960002079 calcium pantothenate Drugs 0.000 description 4
- 229940041514 candida albicans extract Drugs 0.000 description 4
- 238000012364 cultivation method Methods 0.000 description 4
- 238000004925 denaturation Methods 0.000 description 4
- 230000036425 denaturation Effects 0.000 description 4
- 239000012153 distilled water Substances 0.000 description 4
- 239000001963 growth medium Substances 0.000 description 4
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 4
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 4
- 235000019319 peptone Nutrition 0.000 description 4
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 4
- 229960003495 thiamine Drugs 0.000 description 4
- DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M thiamine hydrochloride Chemical compound Cl.[Cl-].CC1=C(CCO)SC=[N+]1CC1=CN=C(C)N=C1N DPJRMOMPQZCRJU-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- 235000019190 thiamine hydrochloride Nutrition 0.000 description 4
- 239000011747 thiamine hydrochloride Substances 0.000 description 4
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 239000012138 yeast extract Substances 0.000 description 4
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108010055400 Aspartate kinase Proteins 0.000 description 3
- OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N Carbon Chemical compound [C] OKTJSMMVPCPJKN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 3
- 101710088194 Dehydrogenase Proteins 0.000 description 3
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 3
- PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N Glycerine Chemical compound OCC(O)CO PEDCQBHIVMGVHV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 3
- KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M Potassium hydroxide Chemical compound [OH-].[K+] KWYUFKZDYYNOTN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 3
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 3
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 3
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 3
- 235000014113 dietary fatty acids Nutrition 0.000 description 3
- 235000019441 ethanol Nutrition 0.000 description 3
- 239000000284 extract Substances 0.000 description 3
- 239000000194 fatty acid Substances 0.000 description 3
- 229930195729 fatty acid Natural products 0.000 description 3
- 229930027917 kanamycin Natural products 0.000 description 3
- SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N kanamycin Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CN)O[C@@H]1O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](O[C@@H]2[C@@H]([C@@H](N)[C@H](O)[C@@H](CO)O2)O)[C@H](N)C[C@@H]1N SBUJHOSQTJFQJX-NOAMYHISSA-N 0.000 description 3
- 229960000318 kanamycin Drugs 0.000 description 3
- 229930182823 kanamycin A Natural products 0.000 description 3
- 229960003966 nicotinamide Drugs 0.000 description 3
- 235000005152 nicotinamide Nutrition 0.000 description 3
- 239000011570 nicotinamide Substances 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 3
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 3
- LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K potassium phosphate Substances [K+].[K+].[K+].[O-]P([O-])([O-])=O LWIHDJKSTIGBAC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 3
- FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 4-amino-1-[(2r)-6-amino-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-[[(2r)-2-amino-3-phenylpropanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]hexanoyl]piperidine-4-carboxylic acid Chemical compound C([C@H](C(=O)N[C@H](CC(C)C)C(=O)N[C@H](CCCCN)C(=O)N1CCC(N)(CC1)C(O)=O)NC(=O)[C@H](N)CC=1C=CC=CC=1)C1=CC=CC=C1 FWMNVWWHGCHHJJ-SKKKGAJSSA-N 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N Ammonia chloride Chemical compound [NH4+].[Cl-] NLXLAEXVIDQMFP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004625 Aspartate Aminotransferases Human genes 0.000 description 2
- 108010003415 Aspartate Aminotransferases Proteins 0.000 description 2
- SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N D-xylopyranose Chemical compound O[C@@H]1COC(O)[C@H](O)[C@H]1O SRBFZHDQGSBBOR-IOVATXLUSA-N 0.000 description 2
- 241000620209 Escherichia coli DH5[alpha] Species 0.000 description 2
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L Magnesium sulfate Chemical compound [Mg+2].[O-][S+2]([O-])([O-])[O-] CSNNHWWHGAXBCP-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 238000012408 PCR amplification Methods 0.000 description 2
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N Phosphoric acid Chemical compound OP(O)(O)=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N Phosphorus Chemical class [P] OAICVXFJPJFONN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 240000008042 Zea mays Species 0.000 description 2
- 235000005824 Zea mays ssp. parviglumis Nutrition 0.000 description 2
- 235000002017 Zea mays subsp mays Nutrition 0.000 description 2
- XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N [[(2r,3r,4r,5r)-5-(6-aminopurin-9-yl)-3-hydroxy-4-phosphonooxyoxolan-2-yl]methoxy-hydroxyphosphoryl] [(2s,3r,4s,5s)-5-(3-carbamoylpyridin-1-ium-1-yl)-3,4-dihydroxyoxolan-2-yl]methyl phosphate Chemical compound NC(=O)C1=CC=C[N+]([C@@H]2[C@H]([C@@H](O)[C@H](COP([O-])(=O)OP(O)(=O)OC[C@@H]3[C@H]([C@@H](OP(O)(O)=O)[C@@H](O3)N3C4=NC=NC(N)=C4N=C3)O)O2)O)=C1 XJLXINKUBYWONI-DQQFMEOOSA-N 0.000 description 2
- 230000003321 amplification Effects 0.000 description 2
- 238000000137 annealing Methods 0.000 description 2
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 2
- 150000001720 carbohydrates Chemical class 0.000 description 2
- 235000014633 carbohydrates Nutrition 0.000 description 2
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 2
- 235000005822 corn Nutrition 0.000 description 2
- 230000002255 enzymatic effect Effects 0.000 description 2
- 150000004665 fatty acids Chemical class 0.000 description 2
- 238000000855 fermentation Methods 0.000 description 2
- 230000004151 fermentation Effects 0.000 description 2
- IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N hexadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O IPCSVZSSVZVIGE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000006801 homologous recombination Effects 0.000 description 2
- 238000002744 homologous recombination Methods 0.000 description 2
- 230000006872 improvement Effects 0.000 description 2
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 2
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 2
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 2
- 150000002632 lipids Chemical class 0.000 description 2
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 2
- 239000011159 matrix material Substances 0.000 description 2
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000002184 metal Chemical class 0.000 description 2
- 230000035772 mutation Effects 0.000 description 2
- 229930027945 nicotinamide-adenine dinucleotide Natural products 0.000 description 2
- 238000003199 nucleic acid amplification method Methods 0.000 description 2
- 150000007524 organic acids Chemical class 0.000 description 2
- 125000001477 organic nitrogen group Chemical group 0.000 description 2
- 229910052698 phosphorus Inorganic materials 0.000 description 2
- 239000011574 phosphorus Substances 0.000 description 2
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 2
- 239000013587 production medium Substances 0.000 description 2
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 description 2
- 230000028327 secretion Effects 0.000 description 2
- 239000013605 shuttle vector Substances 0.000 description 2
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 2
- 230000009466 transformation Effects 0.000 description 2
- OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N (9Z,12Z)-9,10,12,13-tetratritiooctadeca-9,12-dienoic acid Chemical compound C(CCCCCCC\C(=C(/C\C(=C(/CCCCC)\[3H])\[3H])\[3H])\[3H])(=O)O OYHQOLUKZRVURQ-NTGFUMLPSA-N 0.000 description 1
- OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 100676-05-9 Natural products OC1C(O)C(O)C(CO)OC1OCC1C(O)C(O)C(O)C(OC2C(OC(O)C(O)C2O)CO)O1 OWEGMIWEEQEYGQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 2-(3-bromo-2-fluorophenyl)acetic acid Chemical compound OC(=O)CC1=CC=CC(Br)=C1F PAWQVTBBRAZDMG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000004567 6-phosphogluconate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020001657 6-phosphogluconate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 102100031126 6-phosphogluconolactonase Human genes 0.000 description 1
- 108010029731 6-phosphogluconolactonase Proteins 0.000 description 1
- 229920001817 Agar Polymers 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N Alpha-Lactose Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](O)[C@@H](O)[C@@H](CO)O[C@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)O[C@H](O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-XLOQQCSPSA-N 0.000 description 1
- ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N Ammonium bicarbonate Chemical compound [NH4+].OC([O-])=O ATRRKUHOCOJYRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N Ammonium hydroxide Chemical compound [NH4+].[OH-] VHUUQVKOLVNVRT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004254 Ammonium phosphate Substances 0.000 description 1
- 241000186145 Corynebacterium ammoniagenes Species 0.000 description 1
- 241000186227 Corynebacterium diphtheriae Species 0.000 description 1
- 241001644925 Corynebacterium efficiens Species 0.000 description 1
- 241001485655 Corynebacterium glutamicum ATCC 13032 Species 0.000 description 1
- RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M D-gluconate Chemical compound OC[C@@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)C([O-])=O RGHNJXZEOKUKBD-SQOUGZDYSA-M 0.000 description 1
- 206010059866 Drug resistance Diseases 0.000 description 1
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 1
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 1
- 229930091371 Fructose Natural products 0.000 description 1
- 239000005715 Fructose Substances 0.000 description 1
- RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N Fructose Chemical compound OC[C@H]1O[C@](O)(CO)[C@@H](O)[C@@H]1O RFSUNEUAIZKAJO-ARQDHWQXSA-N 0.000 description 1
- 206010064571 Gene mutation Diseases 0.000 description 1
- 108010050375 Glucose 1-Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 108010018962 Glucosephosphate Dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- 235000010469 Glycine max Nutrition 0.000 description 1
- 108010064711 Homoserine dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N Lactose Natural products OC[C@H]1O[C@@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)C(O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QKKXKWKRSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N Maltose Natural products O[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](CO)OC(O)[C@H](O)[C@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-PICCSMPSSA-N 0.000 description 1
- 108010052285 Membrane Proteins Proteins 0.000 description 1
- 235000021314 Palmitic acid Nutrition 0.000 description 1
- 102000003992 Peroxidases Human genes 0.000 description 1
- 108091000080 Phosphotransferase Proteins 0.000 description 1
- 102000001253 Protein Kinase Human genes 0.000 description 1
- 108010053763 Pyruvate Carboxylase Proteins 0.000 description 1
- 102100039895 Pyruvate carboxylase, mitochondrial Human genes 0.000 description 1
- 108700005075 Regulator Genes Proteins 0.000 description 1
- 238000012300 Sequence Analysis Methods 0.000 description 1
- 108010073771 Soybean Proteins Proteins 0.000 description 1
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 1
- 235000021355 Stearic acid Nutrition 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- 235000019486 Sunflower oil Nutrition 0.000 description 1
- 102400000368 Surface protein Human genes 0.000 description 1
- DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N [14c]-nicotinamide Chemical compound N[14C](=O)C1=CC=CN=C1 DFPAKSUCGFBDDF-ZQBYOMGUSA-N 0.000 description 1
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 1
- 238000010521 absorption reaction Methods 0.000 description 1
- 239000008272 agar Substances 0.000 description 1
- 150000001298 alcohols Chemical class 0.000 description 1
- 229910000147 aluminium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001099 ammonium carbonate Substances 0.000 description 1
- 235000012501 ammonium carbonate Nutrition 0.000 description 1
- 235000019270 ammonium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 239000000908 ammonium hydroxide Substances 0.000 description 1
- 229910000148 ammonium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019289 ammonium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N ammonium sulfate Chemical compound N.N.OS(O)(=O)=O BFNBIHQBYMNNAN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229910052921 ammonium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011130 ammonium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 238000005571 anion exchange chromatography Methods 0.000 description 1
- PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N arabinose Natural products OCC(O)C(O)C(O)C=O PYMYPHUHKUWMLA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N azane;(2e)-3-ethyl-2-[(e)-(3-ethyl-6-sulfo-1,3-benzothiazol-2-ylidene)hydrazinylidene]-1,3-benzothiazole-6-sulfonic acid Chemical compound [NH4+].[NH4+].S/1C2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N(CC)C\1=N/N=C1/SC2=CC(S([O-])(=O)=O)=CC=C2N1CC OHDRQQURAXLVGJ-HLVWOLMTSA-N 0.000 description 1
- SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N beta-D-Pyranose-Lyxose Natural products OC1COC(O)C(O)C1O SRBFZHDQGSBBOR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N beta-D-glucose Chemical compound OC[C@H]1O[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O WQZGKKKJIJFFOK-VFUOTHLCSA-N 0.000 description 1
- GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N beta-maltose Chemical compound OC[C@H]1O[C@H](O[C@H]2[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)O[C@@H]2CO)[C@H](O)[C@@H](O)[C@@H]1O GUBGYTABKSRVRQ-QUYVBRFLSA-N 0.000 description 1
- 235000013877 carbamide Nutrition 0.000 description 1
- 239000004359 castor oil Substances 0.000 description 1
- 235000019438 castor oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002759 chromosomal effect Effects 0.000 description 1
- 239000003240 coconut oil Substances 0.000 description 1
- 235000019864 coconut oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000012141 concentrate Substances 0.000 description 1
- 238000002425 crystallisation Methods 0.000 description 1
- 230000008025 crystallization Effects 0.000 description 1
- 238000012258 culturing Methods 0.000 description 1
- 231100000433 cytotoxic Toxicity 0.000 description 1
- 230000001472 cytotoxic effect Effects 0.000 description 1
- 230000003247 decreasing effect Effects 0.000 description 1
- 108010056578 diaminopimelate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N diammonium hydrogen phosphate Chemical compound [NH4+].[NH4+].OP([O-])([O-])=O MNNHAPBLZZVQHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L dipotassium hydrogen phosphate Chemical compound [K+].[K+].OP([O-])([O-])=O ZPWVASYFFYYZEW-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 229910000396 dipotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019797 dipotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000003623 enhancer Substances 0.000 description 1
- 235000020776 essential amino acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000003797 essential amino acid Substances 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- -1 fatty acid ester Chemical class 0.000 description 1
- 235000013312 flour Nutrition 0.000 description 1
- 229940050410 gluconate Drugs 0.000 description 1
- 102000006602 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Human genes 0.000 description 1
- 108020004445 glyceraldehyde-3-phosphate dehydrogenase Proteins 0.000 description 1
- ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N glycerol triricinoleate Natural products CCCCCC[C@@H](O)CC=CCCCCCCCC(=O)OC[C@@H](COC(=O)CCCCCCCC=CC[C@@H](O)CCCCCC)OC(=O)CCCCCCCC=CC[C@H](O)CCCCCC ZEMPKEQAKRGZGQ-XOQCFJPHSA-N 0.000 description 1
- 230000036541 health Effects 0.000 description 1
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000010354 integration Effects 0.000 description 1
- 229910000358 iron sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L iron(2+) sulfate (anhydrous) Chemical compound [Fe+2].[O-]S([O-])(=O)=O BAUYGSIQEAFULO-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 239000008101 lactose Substances 0.000 description 1
- 229910052943 magnesium sulfate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019341 magnesium sulphate Nutrition 0.000 description 1
- 235000013372 meat Nutrition 0.000 description 1
- 229910000402 monopotassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000019796 monopotassium phosphate Nutrition 0.000 description 1
- WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N n-Pentadecanoic acid Natural products CCCCCCCCCCCCCCC(O)=O WQEPLUUGTLDZJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 238000010899 nucleation Methods 0.000 description 1
- 102000039446 nucleic acids Human genes 0.000 description 1
- 108020004707 nucleic acids Proteins 0.000 description 1
- 150000007523 nucleic acids Chemical class 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 230000035764 nutrition Effects 0.000 description 1
- QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Chemical compound CCCCCCCCCCCCCCCCCC(O)=O QIQXTHQIDYTFRH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N octadecanoic acid Natural products CCCCCCCC(C)CCCCCCCCC(O)=O OQCDKBAXFALNLD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000005985 organic acids Nutrition 0.000 description 1
- 230000002018 overexpression Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 1
- PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N phosphoric acid;potassium Chemical compound [K].OP(O)(O)=O PJNZPQUBCPKICU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000020233 phosphotransferase Human genes 0.000 description 1
- 229920000151 polyglycol Polymers 0.000 description 1
- 239000010695 polyglycol Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229910000160 potassium phosphate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000011009 potassium phosphates Nutrition 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 239000002243 precursor Substances 0.000 description 1
- 230000002265 prevention Effects 0.000 description 1
- 230000008569 process Effects 0.000 description 1
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 1
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 1
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000006798 recombination Effects 0.000 description 1
- 238000005215 recombination Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 230000003584 silencer Effects 0.000 description 1
- 235000002639 sodium chloride Nutrition 0.000 description 1
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 description 1
- 238000009331 sowing Methods 0.000 description 1
- 229940001941 soy protein Drugs 0.000 description 1
- 239000003549 soybean oil Substances 0.000 description 1
- 235000012424 soybean oil Nutrition 0.000 description 1
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 1
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 1
- 239000008117 stearic acid Substances 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 239000002600 sunflower oil Substances 0.000 description 1
- 239000011573 trace mineral Substances 0.000 description 1
- 235000013619 trace mineral Nutrition 0.000 description 1
- 238000013518 transcription Methods 0.000 description 1
- 230000035897 transcription Effects 0.000 description 1
- 230000001131 transforming effect Effects 0.000 description 1
- 238000013519 translation Methods 0.000 description 1
- 229940088594 vitamin Drugs 0.000 description 1
- 235000013343 vitamin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011782 vitamin Substances 0.000 description 1
- 229930003231 vitamin Natural products 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12P—FERMENTATION OR ENZYME-USING PROCESSES TO SYNTHESISE A DESIRED CHEMICAL COMPOUND OR COMPOSITION OR TO SEPARATE OPTICAL ISOMERS FROM A RACEMIC MIXTURE
- C12P13/00—Preparation of nitrogen-containing organic compounds
- C12P13/04—Alpha- or beta- amino acids
- C12P13/08—Lysine; Diaminopimelic acid; Threonine; Valine
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N1/00—Microorganisms, e.g. protozoa; Compositions thereof; Processes of propagating, maintaining or preserving microorganisms or compositions thereof; Processes of preparing or isolating a composition containing a microorganism; Culture media therefor
- C12N1/20—Bacteria; Culture media therefor
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Zoology (AREA)
- Wood Science & Technology (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- General Engineering & Computer Science (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Virology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Micro-Organisms Or Cultivation Processes Thereof (AREA)
Abstract
Группа изобретений относится к области биотехнологии. Предложен микроорганизм рода Corynebacterium, продуцирующий L-лизин, с улучшенной экспрессией полинуклеотида, кодирующего ген NCgl0862 Corynebacterium glutamicum. Предложен способ получения L-лизина, с использованием указанного модифицированного микроорганизма. Группа изобретений позволяет повысить продукцию L-лизина по сравнению с родительским штаммом. 2 н. и 3 з.п. ф-лы, 6 табл., 9 пр.
Description
ОБЛАСТЬ ТЕХНИКИ
Настоящее изобретение относится к микроорганизму, принадлежащему к роду Corynebacterium, с повышенной способностью продуцировать L-лизин и к способу получения L-лизина с применением этого микроорганизма.
УРОВЕНЬ ТЕХНИКИ
L-лизин является типичным представителем незаменимых аминокислот и применяется в областях, связанных с питанием, медициной и кормами. В основном, L-лизин получают в результате прямого ферментирования с помощью такого микроорганизма, как Escherichia coli или Corynebacterium, и в этом отношении улучшения способности продуцировать L-лизин путем разработок с целью получения продуцирующих штаммов с улучшенными выходами или усовершенствованием процесса ферментации может в результате дать существенные экономические результаты.
В отношении способа улучшения эффективности продукции лизина применяли способ усиления гена, вовлеченного в путь биосинтеза лизина, или модификации промотора этого гена с целью увеличения активности ферментов, вовлеченных в путь биосинтеза лизина. К тому же, с целью повышения способности продуцировать лизин непрерывно продолжались исследование генов, отличных от вовлеченных в путь биосинтеза лизина.
Авторы настоящего изобретения попытались создать и изучить библиотеку ДНК дикого типа Corynebacterium glutamicum с целью обнаружения признаков, которые относятся к способности продуцировать лизин. В результате было подтверждено, что при повышенной экспрессии гена NCgl0862 лизин эффективно продуцируется, что, таким образом, позволяет реализовать настоящее изобретение. До этого времени еще не было публикаций исследований. посвященных микроорганизмам, принадлежащим к роду Corynebacterium, способным продуцировать L-лизин вследствие дополнительного введения в них гена NCgl0862, полученного из Corynebacterium.
ПОДРОБНОЕ ОПИСАНИЕ ИЗОБРЕТЕНИЯ
ТЕХНИЧЕСКАЯ ЗАДАЧА
Настоящее изобретение относится к микроорганизму, принадлежащему к роду Corynebacterium, у которого усилена экспрессия полинуклеотида. кодирующего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.
Настоящее изобретение относится к способу получения L-лизина с использованием этого микроорганизма.
ТЕХНИЧЕСКОЕ РЕШЕНИЕ
Один аспект настоящего изобретения относится к микроорганизму, принадлежащему к роду Corynebacterium, у которого усилена экспрессия полинуклеотида, кодирующего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.
Полинуклеотид может кодировать аминокислотную последовательность, которая характеризуется приблизительно 70% или более высокой, приблизительно 75% или более высокой, приблизительно 80% или более высокой, приблизительно 85% или более высокой, приблизительно 90% или более высокой, приблизительно 92% или более высокой, приблизительно 95% или более высокой, приблизительно 97% или более высокой, приблизительно 98% или более высокой или приблизительно 99% или более высокой гомологией последовательности с аминокислотной последовательностью SEQ ID NO: 1. Термин "гомология", используемый в данном документе, относится к проценту идентичности между двумя полинуклеотидами или двумя полипептидными фрагментами. Гомологию последовательностей между одним фрагментом и другим фрагментом можно определить с помощью способов, известных в данной области. Например, такую гомологию последовательностей можно определять с помощью алгоритма BLAST, который раскрыт в литературе [см. Karlin and Altschul, Pro. Natl. Acad. Sci. USA, 90, 5873 (опубликовано в 1993 году)] или алгоритма FASTA по Пирсону [см. Methods Enzymol., 183, 63 (опубликовано в 1990 году)]. На основе алгоритма BLAST также разработаны программы под названием BLASTN или BLASTX [см. www.ncbi.nlm.nih.gov].
Экспрессию полинуклеотида можно усиливать путем модификации последовательности, регулирующей экспрессию, с помощью замены или мутации, мутации, внесенной в полинуклеотидную последовательность, изменения в стартовом кодоне, повышения числа копий полинуклеотида путем внесения хромосомной вставки или вектора или их комбинаций.
Последовательность, регулирующую экспрессию полинуклеотида. можно модифицировать. Последовательность, регулирующая экспрессию. управляет экспрессией функционально связанного с ней полинуклеотида и, к примеру, может охватывать промотор, терминатор, энхансер, сайленсер и последовательность Шайна-Дальгарно. Полинуклеотид может иметь замены в стартовом кодоне. Стартовый кодон. который состоит из TTG или GTG, может быть заменен на ATG с тем, чтобы могла быть увеличена ферментативная активность продукта соответствующего гена. Полинуклеотид может быть встроен в конкретный сайт хромосом в целях повышения, таким образом, числа копий. В этом случае конкретный сайт может включать в себя, например, транспозонный сайт или сайт между генами. К тому же, полинуклеотид может быть встроен в экспрессирующий вектор, который вводят в клетку-хозяина с повышением, таким образом, числа копий.
Полинуклеотид может включать в себя, к примеру, нуклеотидную последовательность SEQ ID NO: 2.
Термин "функционально связанный", используемый в данном документе, относится к функциональной связи между регуляторной последовательностью и полинуклеотидной последовательностью, где регуляторная последовательность управляет транскрипцией и/или трансляцией полинуклеотидной последовательности. Регуляторная последовательность может быть сильным промотором, который может повышать уровень экспрессии полинуклеотида. Регуляторная последовательность может представлять собой промотор, полученный из микроорганизма, принадлежащего к роду Corynebacterium. или может представлять собой промотор, полученный из других микроорганизмов. Промотор может представлять собой, к примеру, промотор trc, промотор gap, промотор tac, промотор Т7, промотор lac, промотор trp, промотор araBAD или промотор cj7. Регуляторную последовательность можно модифицировать таким образом, чтобы, к примеру, промоторная последовательность главного гена, вовлеченного в путь биосинтеза лизина, проявляла более усиленную промоторную активность у микроорганизма, принадлежащего к роду Corynebacterium. Регуляторная последовательность может представлять собой, к примеру, промотор lysCP1. Термин "промотор lysCP1". используемый в данном документе, относится к сильному промотору, ферментативная активность продукта гена которого усилена примерно в 5 раз по сравнению с диким типом путем увеличения уровня экспрессии гена, кодирующего аспартаткиназу, где уровень экспрессии увеличен путем замены последовательностей в промоторном сайте генов, каждый из которых кодирует аспартаткиназу и дегидрогеназу полуальдегида аспарагиновой кислоты (корейский патент №10-0930203).
Термин "вектор", используемый в данном документе, относится к полинуклеотидной конструкции, которая содержит регуляторную последовательность гена и последовательность гена и выполнена с возможностью экспрессии целевого гена в подходящей клетке-хозяине. Альтернативно, вектор может также относиться к полинуклеотидной конструкции, которая содержит последовательности, подходящие для гомологической рекомбинации, так что благодаря введению вектора в клетку-хозяина можно изменять регуляторную последовательность эндогенного гена в геноме клетки-хозяина или в конкретный сайт генома хозяина можно встроить целевой ген, который может экспрессироваться. В связи с этим вектор, применяемый в настоящем изобретении, может дополнительно содержать селективный маркер для определения введения вектора в клетку-хозяина или встраивания вектора в хромосому клетки-хозяина. Селективный маркер может включать маркер, придающий селектируемый фенотип, такой как устойчивость к лекарственным средствам, ауксотрофия, устойчивость к цитотоксическому средству или экспрессия поверхностного белка. Поскольку выживать или проявлять особенные стенотипические характеристики могут только клетки, экспрессирующие селективный маркер, в среде, обработанной таким селективным средством, можно произвести отбор трансформированных клеток.
Вектор, применяемый в настоящем изобретении, может представлять собой, к примеру, вектор pECCG122, который может самореплицироваться в обоих направлениях у бактерий Е. coli и коринебактерий (корейский патент №10-0057684), или вектор pDZ, применяемый для трансформации клетки-хозяина, обеспечивающий встраивание гена, который кодирует целевой белок, в хромосомы клетки-хозяина, при этом вектор pDZ не реплицируется у Corynebacterium glutamicum (корейский патент №10-0924065). Вдобавок, вектор в контексте данного документа может представлять собой, к примеру, вектор pDZTn, полученный из вектора pDZ и подходящий для встраивания гена в транспозонный сайт в хромосоме штаммов АТСС13032 Corynebacterium glutamicum (корейский патент №10-1126041). по вектор им не ограничен.
Термин "трансформация", используемый в данном документе, относится к введению полинуклеотида в клетку-хозяина так, чтобы полинуклеотид мог реплицироваться как внегеномный элемент или как встроенный в геном клетки-хозяина. Способ трансформации вектором, применяемым в настоящем изобретении, может включать способ введения нуклеиновой кислоты в клетку. Вдобавок, как раскрыто в предшествующем уровне техники, можно осуществлять способ с использованием электрического импульса в зависимости от клетки-хозяина.
Микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium, может представлять собой, к примеру, Corynebacterium glutamicum, Corynebacterium efficiens, Corynebacterium diphtheriae или Corynebacterium ammoniagenes.
Микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium. может обладать способностью продуцировать L-лизин. Микроорганизм может обладать улучшенной способностью продуцировать L-лизин в результате введения вышеописанного полинуклеотида в микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium. со способностью продуцировать L-лизин.
Термин "со способностью продуцировать L-лизин", используемый в данном документе, относится к наличию способности продуцировать и секретировать L-лизин в культуральную среду в процессе культивирования в ней микроорганизма. Микроорганизм может быть способен продуцировать и аккумулировать L-лизин в культуральной среде в больших количествах по сравнению со штаммом дикого типа или родительским штаммом.
Микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium, со способностью продуцировать L-лизин может иметь усиленную или сниженную экспрессию гена, связанного с выработкой NADPH, и/или гена, связанного с биосинтезом или секрецией L-лизина, или может иметь ген, замененный чужеродным геном. Ген, связанный с выработкой NADPH, может охватывать, к примеру, ген, кодирующий глюкозодегидрогеназу, ген, кодирующий глюконаткипазу. ген, кодирующий глицеральдегид-3-фосфатдегидрогеназу, ген, кодирующий глюкозо-6-фосфатдегидрогеназу, или ген, кодирующий 6-фосфоглюконатдегидрогеназу. Ген, связанный с биосинтезом L-лизина, может охватывать, к примеру, ген, кодирующий аспартатаминотрансферазу, ген, кодирующий аспартаткиназу. ген. кодирующий дегидрогеназу полуальдегида аспарагиновой кислоты, ген, кодирующий дегидродипиколинатсинтазу, ген, кодирующий дегидродипиколинатредуктазу, ген, кодирующий мезо-диаминопимелатдегидрогеназу, или ген, кодирующий диаминодипимелатдекарбоксилазу. Ген, связанный с секрецией L-лизина. может включать lysE, который является геном носителя, участвующего в экспорте лизина. Микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium, со способностью продуцировать L-лизин может также приобретать такую способность продуцировать L-лизин благодаря применению ксилозы как источника углерода.
В одном варианте осуществления микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium, может представлять собой КССМ11016Р (KFCC10881) Corynebacterium glutamicum (корейский патент №10-0159812).
В другом варианте осуществления в микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium, может быть введен полинуклеотид. кодирующий аспартатаминотрансферазу, полинуклеотид, кодирующий аспартаткиназу. полинуклеотид, кодирующий дегидрогеназу полуальдегида аспарагиновой кислоты, полинуклеотид, кодирующий дегидродипиколинатсинтазу, полинуклеотид. кодирующий дегидродипиколинатредуктазу. и полинуклеотид. кодирующий диаминодипимелатдекарбоксилазу. К примеру, микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium, может представлять собой КССМ10770Р Corynebacterium glutamicum (корейский патент №10-0924065).
В другом варианте осуществления микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium, может представлять собой КССМ11347Р (KFCC10750) Corynebacterium glutamicum.
В другом варианте осуществления микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium, может приобретать способность продуцировать лизин в результате введения мутантного полинуклеотида, кодирующего пируваткарбоксилазу (рус), мутантного полинуклеотида, кодирующего гомосериндегидрогеназу (hom), и мутантного полинуклеотида, кодирующего аспартаткиназу (lysC) (Binder et al. Genome Biology, 2012, 13:R40). Микроорганизм может представлять собой, к примеру. CJ3P Corynebacterium glutamicum.
Другой аспект настоящего изобретения предусматривает способ получения L-лизина, при этом способ включает культивирование микроорганизма и получение I -лизина из культуры.
Микроорганизм является таким же, как описано выше.
Культивирование микроорганизма можно проводить в соответствующей среде в условиях культивирования, известных в данной области техники. Такой процесс культивирования можно легко регулировать в зависимости от выбранного микроорганизма. Способ культивирования может включать одно или несколько, выбранных из группы, состоящей из периодической культуры, непрерывной культуры и культуры с подпиткой.
Среда, которую применяют при культивировании, может соответствовать требованиям конкретного микроорганизма. Среду можно выбрать из группы, состоящей из источников углерода, источников азота, микроэлементов и их комбинаций.
Источник углерода может быть выбран из группы, состоящей из углеводов, липидов, жирных кислот, спиртов, органических кислот и их комбинаций. Углеводом может быть глюкоза, сахароза, лактоза, фруктоза, мальтоза, крахмал, целлюлоза или их комбинация. Липидом может быть соевое масло, подсолнечное масло, касторовое масло, кокосовое масло или их комбинация. Жирной кислотой может быть пальмитиновая кислота, стеариновая кислота, линолевая кислота или их комбинация. Спиртом может быть глицерин или этанол. Органической кислотой может быть уксусная кислота.
Источник азота может включать источник органического азота, источник неорганического азота или их комбинацию. Источник органического азота может быть выбран из группы, состоящей из пептона, дрожжевого экстракта, мясного экстракта, экстракта солода, кукурузного экстракта (CSL), соевой муки и их комбинаций. Источник неорганического азота может быть выбран из группы, состоящей из мочевины, сульфата аммония, хлорида аммония, фосфата аммония, карбоната аммония, нитрата аммония и их комбинаций.
Среда может включать один элемент, выбранный из группы, состоящей из фосфора, солей металлов, аминокислот, витаминов, предшественников и их комбинаций. Источник фосфора может включать дигидрофосфат калия, фосфат дикалия, натрийсодержащую соль, соответствующую ему. Соль металла может представлять собой сульфат магния и сульфат железа.
Среду или ее отдельные компоненты можно добавлять в культуральную среду в режиме периодической культуры, непрерывной культуры или культуры с подпиткой.
В способе культивирования рН культуры можно регулировать. Регулирование рН можно осуществлять путем добавления гидроксида аммония, гидроксида калия, аммиака, фосфорной кислоты или серной кислоты к культуре. Дополнительно, способ культивирования может включать предотвращение образования воздушных пузырьков. Предотвращение образования воздушных пузырьков можно осуществлять путем применения противовспенивающего средства. Противовспенивающее средство может включать полигликолевый эфир жирной кислоты. Дополнительно, способ культивирования может включать введение газа в культуру. Газ может включать любой газ, способный поддерживать аэробные условия культуры. Газ может представлять собой кислород или кислородсодержащий газ. Кислородсодержащий газ может включать воздух. При культивировании температура культуры может составлять от 20 до 45°С, к примеру, от 22 до 42°С или от 25 до 40°С. Культивирование может продолжаться до того момента, пока продукция L-лизина не достигнет желаемого уровня.
Полученный L-лизин можно, к примеру, извлекать из культуры путем обработки культуры серной кислотой или соляной кислотой с последующим выполнением комбинации таких способов, как анионообменная хроматография, концентрирование, кристаллизация и осаждение в изоэлектрической точке.
ПРЕИМУЩЕСТВЕННЫЕ ЭФФЕКТЫ ИЗОБРЕТЕНИЯ
Способность продуцировать L-лизин можно повысить путем применения микроорганизма согласно аспекту настоящего изобретения.
Способность продуцировать L-лизин можно повысить путем применения способа получения L-лизина согласно другому аспекту настоящего изобретения.
ПРИНЦИП ИЗОБРЕТЕНИЯ
В дальнейшем, настоящая заявка будет описана более подробно со ссылками на примеры. Однако эти примеры приведены только в целях иллюстрации, и не подразумевается ограничение объема настоящей заявки этими примерами.
Пример 1. Получение геномной библиотеки ДНК Corynebacterium glutamicum дикого типа
Получали геномную ДНК штамма АТССТ3032 Corynebacterium glutamicum. а затем обрабатывали ферментом рестрикции Sau3AI так. чтобы получить частичные фрагменты размером от 6 до 8 т.п.о. Фрагмент лигировали в челночный вектор pECCG122 для трансформации Е. coli и Corynebacterium, при этом челночный вектор включает концы для фермента рестрикции BamHI. Затем DH5α Е. coli трансформировали полученным в результате вектором и наносили на твердую среду LB, содержащую канамицин (25 мг/л). Колонии, трансформированные вектором, в который были встроены фрагменты, отбирали с помощью ПЦР (с применением праймеров SEQ ID NO: 3 и 4) и вносили в смешанную культуру, и из них получали плазмиды с помощью общеизвестного способа выделения плазмид.
Пример 2. Внедрение библиотеки и отбор штамма с улучшенной способностью продуцировать лизин
Штамм КССМ11016Р Corynebacterium glutamicum, продуцирующий лизин, трансформировали рекомбинантным вектором, полученным в примере 1 с применением способа с использованием электрического импульса, а затем вносили в планшет с комплексной средой, как описано ниже.
<Комплексная среда для планшета>
20 г глюкозы, 50 г (NH4)2SO4, 10 г пептона, 5 г дрожжевого экстракта, 1,5 г мочевины, 5 г КН2РО4, 10 г K2HPO4, 0,5 г MgSO4⋅7H2O, 100 мкг биотина, 1000 мкг тиамина-HCl, 2000 мкг пантотената кальция, 2000 мкг никотинамида, 20 г агара и 25 мг канамицина (на основе 1 л дистиллированной воды).
Приблизительно 2000 колоний инокулировали в каждую лунку 96-луночного планшета (изготовленного в Bioneer Company), содержащую 200 мкл комплексной жидкой среды, описанной выше, и затем культивировали путем встряхивания при 200 об./мин. и 30°С в течение 24 часов. В соответствии со способом с использованием лизиноксидазы 50 мкл каждой культуры добавляли в 96-луночный планшет с распределенной в нем реакционной смесью, содержащей лизиноксидазу (содержащей 200 мкл фосфата калия (рН 7,5), 0,04 мкл лизиноксидазы (0,1 ед./мкл), 0,04 мкл пероксидазы (1 ед./мкл) и 0,4 мг ABTS). После прохождения реакции в течение 30 минут измеряли поглощение при OD405нм и сравнивали степень изменения цвета. Среди них были выбраны 7 типов экспериментальных групп, каждая из которых характеризовалась более высоким поглощением, чем контрольная группа (KCCM11016P/pECCG122).
<Комплексная жидкая среда>
20 г глюкозы, 10 г пептона, 5 г дрожжевого экстракта, 1,5 г мочевины, 4 г КН2РО4, 8 г К2НРО4, 0,5 г MgSO4⋅7H2O, 100 мкг биотина. 1000 мкг тиамина-HCl. 2000 мкг пантотената кальция и 2000 мкг никотинамида (на основе 1 л дистиллированной воды).
Отдельные штаммы инокулировали во флакон с угловыми перегородками объемом 250 мл, содержащий 25 мл среды для посева, описанной ниже, и затем культивировали путем встряхивания при 200 об./мин. и 30°С в течение 20 часов. Затем 1 мл засеянной культуры инокулировали во флакон с угловыми перегородками объемом 250 мл, содержащий 24 мл продукционной среды, описанной ниже, и затем культивировали путем встряхивания при 200 об./мин. и 37°С в течение 96 часов. После окончания культивирования анализировали концентрации L-лизина с помощью HPLC, а результаты анализа показаны в таблице 1.
<Среда для посева (рН 7,0)>
20 г глюкозы, 10 г (NH4)2SO4, 10 г пептона, 5 г дрожжевого экстракта, 1,5 г мочевины, 4 г KH2PO4, 8 г К2НРО4, 0.5 г MgSO4⋅7H2O. 100 мкг биотина. 1000 мкг тиамина-HCl, 2000 мкг пантотената кальция и 2000 мкг никотинамида (на основе 1 л дистиллированной воды).
<Продукционная среда (рН 7,0)>
100 г глюкозы, 40 г (NH4)2SO4, 2,5 г соевого белка. 5 г концентрата кукурузного экстракта, 3 г мочевины, 1 г KH2PO4, 0,5 г MgSO4⋅7H2O, 100 мкг биотина, 1000 мкг тиамина-HCl, 2000 мкг пантотената кальция, 3000 мкг никотинамида и 30 г СаСО3 (на основе 1 л дистиллированной воды).
На основании результатов, приведенных выше, были отобраны КССМ11016Р/М2 и KCCM11016P/L52, которые демонстрировали повышенную способность продуцировать лизин по сравнению с контрольной группой, а затем из них выделяли плазмиды с последующим анализом последовательности с применением праймеров SEQ ID NO: 3 и 4. Плазмиду, полученную из КССМ11016Р/М2, назвали рЕС-L1, а плазмиду, полученную из KCCM11016P/L52, назвали pEC-L2. Плазмида pEC-L1 охватывает нуклеотиды от приблизительно 200 пар оснований (п.о.) выше стартового кодона открытой рамки считывания (ORF) гена NCgl0857 до приблизительно 200 п.о. ниже стоп-кодона открытой рамки считывания (ORF) гена NCgl0862. Плазмида pEC-L2 охватывает нуклеотиды от приблизительно 250 п.о. ниже стоп-кодона ORF гена NCgl0861 до приблизительно 300 п.о. выше стартового кодона ORF гена NCgl0865. Соответственно, подтвердили, что оба из двух типов плазмид одновременно содержат ген NCgl0862.
Пример 3. Получение вектора для замены промотора гена NCgl0862
На основании результатов, полученных в примере 2, чтобы подтвердить, индуцирует ли фактически сверхэкспрессия гена NCgl0862 улучшение способности продуцировать лизин, получали вектор, выполненный с возможностью замены промотора гена NCgl0862 в хромосоме. Для замены промотора промотор дикого типа (lysCP) и модифицированный промотор lysCP1 применяли в качестве промоторов гена lysC.
Подробное описание приведено ниже.
На основе GenBank Национальных институтов здравоохранения (GenBank NIH, США) была разработана пара праймеров (SEQ ID NO: 5 и 6 или SEQ ID NO: 7 и 8), выполненных с возможностью проведения амплификации соответственно выше и ниже стартового кодона ORF гена NCgl0862 (SEQ ID NO: 2). Вдобавок, была разработана пара праймеров (праймеры SEQ ID NO: 9 и 10) для амплификации промоторного сайта из последовательностей выше гена lysC. SEQ ID NO: и последовательности праймеров показаны ниже. Подчеркнутые последовательности указывают на сайты, которые узнаются ферментами рестрикции.
Проводили ПЦР с применением геномной ДНК штамма КССМ11016Р Corynebacterium glutamicum в качестве матрицы и пар праймеров SEQ ID NO: 5 и 6, и SEQ ID NO: 7 и 8, и SEQ ID NO: 9 и 10, с получением, таким образом, фрагментов ДНК размером 300 п.о., каждый из которых имеет фланкирующие последовательности слева и справа от стартового кодона ORF гена NCgl0862 и фрагмент промотора lysCP. Условия ПЦР-амплификации включают денатурацию при 94°С в течение 5 мин., 30 циклов денатурации при 94°С в течение 30 секунд, отжиг при 56°С в течение 30 секунд и полимеризацию при 72°С в течение 30 секунд, а затем полимеризацию при 72°С в течение 7 минут. Каждый из продуктов размером 300 и.о., амплифицированных с помощью ПЦР и имевших фланкирующую последовательность слева или справа от стартового кодона ORF гена NCgl0862, соответственно обрабатывали EcoRI и BamHI и BamHI и Sail, а затем лигировали с фрагментом ДНК, полученным путем обработки вектора pDZ для встраивания в хромосому у микроорганизма, принадлежащего к роду Corynebacterium, ферментами рестрикции SalI и EcoRI, с получением, таким образом, вектора.
Для амплификации промотора lysCP или промотора lysCPl ПЦР проводили с применением геномной ДНК штамма АТСС 13032 или штамма KCCM11016P-lysCP1 Corynebacterium glutamicum (корейский патент №10-0930203) в качестве матрицы и пары праймеров. SEQ ID NO: 9 и 10. с получением, таким образом, фрагментов промотора lysCP и промотора lysCP1 размером 300 п. о. Фрагменты ДНК промотора lysC дикого типа и промотора lysCP1 обрабатывали BamHI и NdeI. Затем полученный ранее вектор лигировали с фрагментом ДНК, полученным путем обработки BamHI и NdeI, с получением, таким образом, рекомбинантных плазмид pDZ-lysCP_N0862 и PDZ-lysCP1_N0862.
Пример 4. Анализ способности продуцировать лизин у штамма, продуцирующего лизин, происходящего от штамма с замененным промотором NCgl0862
Рекомбинантными плазмидами pDZ-lysCP_N0862 и pDZ-lysCP1_N0862, полученными в примере 3, трансформировали КССМ11016Р Corynebacterium glutamicum согласно способу с использованием электрического импульса (Van der Rest et al., Appl Microbiol Biotechnol 52:541-545, 1999). В соответствии с широко известной хромосомной гомологической рекомбинацией штаммы, в которых промотор lysC встраивался в промоторный сайт гена NCgl0862, были отобраны путем ПЦР (праймеры SEQ ID NO: 5 и 8). Отобранные рекомбинантные штаммы назвали Corynebacterium glutamicum KCCM11016P::lysCP_N0862 и KCCM11016P::lysCP1_N0862 Corynebacterium glutamicum.
Для определения способности продуцировать лизин у таких полученных штаммов, продуцирующих лизин, KCCM11016P::lysCP_N0862 и KCCM11016P::lysCP1_N0862, штаммы культивировали на среде для посева и продукционной среде так же, как в примере 2. а затем анализировали концентрации лизина в каждой культуре, как показано ниже (см. таблицу 2).
Как показано в таблице 2, было подтверждено, что у штамма KCCM11016P::lysCP_N0862, в котором промотор был заменен промотором lysC дикого типа, способность продуцировать лизин повышалась в среднем на 1% по сравнению с родительским штаммом, КССМ11016Р, и что у штамма KCCM11016P::lysCP1_N0862, в котором промотор был заменен промотором lysCP1, способность продуцировать лизин повышалась в среднем на 4% по сравнению с родительским штаммом. Впоследствии штамм KCCM11016P::lysCP_1_N0862 назвали CA01-2269 и передали на депонирование в Корейский центр культур микроорганизмов (КССМ) 12 июня 2013 г. с номером доступа КССМ11430Р.
Пример 5. Получение вектора для дополнительного встраивания в хромосому гена NCgl0862
Для обеспечения встраивания необходимого гена в положение трапспозомного гена вектор pDZTN, сконструированный на основе вектора pDZ, применяли как основной вектор, конструируя и получая, таким образом, вектор, выполненный с возможностью дополнительного встраивания гена NCgl0862 из примера 2 в хромосомы.
На основе представленных последовательностей были синтезированы праймеры (SEQ ID NO: 7 и 12) для амплификации сайтов гена NCgl0862. Проводили ПЦР с применением хромосом АТСС 13032 Corynebacterium glutamicum в качестве матрицы, амплифицируя, таким образом, сайт ORF гена NCgl0862 размером приблизительно 370 п.о.
Вдобавок, были синтезированы праймеры (SEQ ID NO: 10 и 11) для амплификации сайтов промотора гена lysC. Проводили ПЦР с применением хромосом штамма для введения KCCM11016P-lysCP1 Corynebacterium glutamicum в качестве матрицы, амплифицируя, таким образом, промоторный сайт размером приблизительно 300 п.о. В этом случае условия ПЦР-амплификации включают денатурацию при 94°С в течение 5 минут, 30 циклов денатурации при 94°С в течение 30 секунд, отжиг при 56°С в течение 30 секунд и полимеризацию при 72°С в течение 30 секунд, а потом полимеризацию при 72°С в течение 7 минут.
Фрагменты генов, амплифицированных с помощью ПЦР, обрабатывали ферментами рестрикции SpeI и NdeI, чтобы, таким образом, получить из них фрагменты ДНК. Фрагменты ДНК лигировали в вектор pDZTN для встраивания в хромосому, который имеет концы для фермента рестрикции SpeI. Затем DH5α Е. coli трансформировали полученным в результате вектором и наносили на твердую среду LB, содержащую 25 мг/л канамицина. Колонии, трансформированные вектором, содержащим встроенный в него необходимый ген, отбирали с помощью ПЦР (праймеры SEQ ID NO: 12 и 13), а плазмиды получали путем осуществления общеизвестного способа выделения плазмид и затем называли pDZTN-N0862.
Пример 6. Анализ способности продуцировать лизин у штамма с NCgl0862, дополнительно встроенным в хромосому
На основе гомологической рекомбинации хромосом вектор pDZTN-N0862. полученный в примере 5, применяли для трансформации штамма КССМ11016Р Corynebacterium glutamicum, продуцирующего L-лизин. Затем его колонии подвергали селективному скринингу с помощью ПЦР (с применением праймеров SEQ ID NO: 12 и 13), и полученный в результате штамм назвали KCCM11016P::N0862-Tn. KCCM11016P::N0862-Tn и контрольную группу в каждом случае культивировали так же, как в примере 2, а затем анализировали концентрации L-лизина в культурах, как показано ниже (см. таблицу 3).
В результате было подтверждено, что у KCCM11016P::N0862-Tn, который представлял собой штамм с дополнительно встроенным в хромосому геном NCgl0862, способность продуцировать лизин повышалась на 8% по сравнению с родительским штаммом КССМ11016Р.
Пример 7. Получение L-лизина с применением микроорганизма, происходящего от КССМ10770Р, содержащего NCgl0862, дополнительно встроенный в хромосому
Вектор pDZTN-N0862, полученный в примере 5. применяли для трансформации КССМ10770Р Corynebacterium glutamicum, который представлял собой штамм, продуцирующий лизин, в котором 7 типов генов, вовлеченных в путь биосинтеза L-лизина, дополнительно добавляли в его хромосому. Впоследствии штамм, в котором ген NCgl0862 был дополнительно встроен в хромосому, отбирали с помощью ПЦР, и полученный в результате штамм назвали KCCM10770P::N0862-Tn Corynebacterium glutamicum. Штамм культивировали так же, как в примере 2, а затем анализировали концентрации L-лизина в культуре, как показано ниже (таблица 4).
В результате было подтверждено, что способность продуцировать лизин повышалась на 5% по сравнению с родительским штаммом.
Пример 8. Получение L-лизина с применением микроорганизма, происходящего от CJ3P, содержащего NCgl0862, дополнительно встроенный в хромосому
Для определения эффектов в других штаммах, принадлежащих к Corynebacterium glutamicum, вектор pDZTN-N0862, полученный в примере 5, применяли для трансформации CJ3P Corynebacterium glutamicum. который представлял собой штамм, продуцирующий лизин, с 3 типами генных мутаций, связанных с улучшениями способности продуцировать L-лизин. Впоследствии штамм, в котором ген NCgl0862 был дополнительно встроен в хромосому, отбирали с помощью ПЦР, а полученный в результате штамм назвали CJ3P::N0862-Tn. Штамм культивировали также, как в примере 2, а затем анализировали концентрации извлеченного из него L-лизина, как показано ниже (см. таблицу 5).
В результате было подтверждено, что способность продуцировать лизин повышалась на 12% по сравнению с родительским штаммом.
Пример 9. Получение L-лизина с применением микроорганизма, происходящего от КССМ11347Р, содержащего NCgl0862, встроенный в хромосому
Для определения эффектов в других штаммах, принадлежащих к Corynebacterium glutamicum, вектор pDZTN-N0862 вводили в штамм КССМ11347Р Corynebacterium glutamicum, продуцирующий L-лизин (корейский патент №1994-0001307) таким же путем, как в примере 5, и полученный в результате штамм назвали KCCM11347P::N0862-Tn. Штамм культивировали также, как в примере 2, а затем анализировали концентрации извлеченного из него L-лизина. как показано ниже (см. таблицу 6).
В результате было подтверждено, что способность продуцировать лизин повышалась на 6% по сравнению с родительским штаммом.
Claims (5)
1. Микроорганизм, принадлежащий к роду Corynebacterium, продуцирующий L-лизин, с улучшенной экспрессией полинуклеотида, кодирующего аминокислотную последовательность SEQ ID NO: 1.
2. Микроорганизм по п.1, где улучшенная экспрессия индуцируется посредством повышения числа копий генов, манипуляции с последовательностью, регулирующей экспрессию, или их комбинаций.
3. Микроорганизм по п.2, где манипуляция с последовательностью, регулирующей экспрессию, представляет собой модификацию промотора с помощью замены, изменение в стартовом кодоне или их комбинации.
4. Микроорганизм по п.1, где микроорганизм представляет собой Corynebacterium glutamicum.
5. Способ получения L-лизина, при этом способ предусматривает: культивирование микроорганизма по п.1 в среде и извлечение L-лизина из микроорганизма или среды.
Applications Claiming Priority (3)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| KR1020130128634A KR101498630B1 (ko) | 2013-10-28 | 2013-10-28 | Ｌ-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 l-라이신 생산방법 |
| KR10-2013-0128634 | 2013-10-28 | ||
| PCT/KR2014/008932 WO2015064917A1 (ko) | 2013-10-28 | 2014-09-25 | Ｌ-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 ｌ-라이신 생산방법 |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU2016114418A RU2016114418A (ru) | 2017-12-06 |
| RU2667425C2 true RU2667425C2 (ru) | 2018-09-19 |
Family
ID=53004468
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU2016114418A RU2667425C2 (ru) | 2013-10-28 | 2014-09-25 | Микроорганизм Corynebacterium sp. с повышенной способностью продуцировать L-лизин и способ получения L-лизина с его помощью |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US9758801B2 (ru) |
| EP (1) | EP3064569A4 (ru) |
| JP (1) | JP6286571B2 (ru) |
| KR (1) | KR101498630B1 (ru) |
| CN (1) | CN105849249B (ru) |
| BR (1) | BR112016009324B1 (ru) |
| MY (1) | MY181203A (ru) |
| RU (1) | RU2667425C2 (ru) |
| WO (1) | WO2015064917A1 (ru) |
Cited By (1)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2793441C1 (ru) * | 2021-01-29 | 2023-04-03 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Новый вариант белка сборки праймосомы и способ получения l-лизина с его применением |
Families Citing this family (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| CN104824364A (zh) * | 2015-05-28 | 2015-08-12 | 河南双成生物科技有限公司 | 富含五种必需氨基酸的功能蛋白饲料生产方法 |
| KR101766964B1 (ko) * | 2015-08-27 | 2017-08-09 | 씨제이제일제당 (주) | L-라이신 생산능을 가지는 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 l-라이신 생산방법 |
| KR101863456B1 (ko) * | 2016-11-15 | 2018-06-01 | 씨제이제일제당 (주) | L-라이신을 생산하는 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 l-라이신의 생산방법 |
| KR101947945B1 (ko) * | 2018-01-25 | 2019-02-13 | 씨제이제일제당 (주) | L-아미노산을 생산하는 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 l-아미노산의 생산방법 |
| KR102147776B1 (ko) * | 2019-09-20 | 2020-08-26 | 대상 주식회사 | L-라이신 생산능력이 향상된 코리네박테리움속 미생물 및 이를 이용한 라이신의 생산 방법 |
| KR102291553B1 (ko) * | 2021-01-29 | 2021-08-18 | 씨제이제일제당 (주) | 신규한 프리모솜 조립 단백질 변이체 및 이를 이용한 l-라이신 생산 방법 |
| KR20230154199A (ko) * | 2021-03-05 | 2023-11-07 | 더 리젠트스 오브 더 유니이버시티 오브 캘리포니아 | 피부 프로바이오틱스 |
| CN112695036B (zh) * | 2021-03-23 | 2021-07-06 | 中国科学院天津工业生物技术研究所 | 一种天冬氨酸激酶基因表达调控序列及其应用 |
| KR20230084993A (ko) * | 2021-12-06 | 2023-06-13 | 대상 주식회사 | L-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주 및 이를 이용한 l-라이신의 생산 방법 |
Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2316588C1 (ru) * | 2004-01-30 | 2008-02-10 | Адзиномото Ко., Инк. | Бактерия - продуцент l-аминокислоты и способ получения l-аминокислоты (варианты) |
| KR20130061570A (ko) * | 2011-12-01 | 2013-06-11 | 씨제이제일제당 (주) | Ｌ-아미노산 및 리보플라빈을 동시에 생산하는 미생물 및 이를 이용한 ｌ-아미노산 및 리보플라빈을 생산하는 방법 |
| US20130157370A1 (en) * | 2008-04-10 | 2013-06-20 | Cj Cheiljedang Corporation | Transformation Vector Comprising Transposon, Microorganisms Transformed with the Vector, and Method for Producing L-Lysine Using the Microorganism |
Family Cites Families (9)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR940001307B1 (ko) | 1991-12-27 | 1994-02-19 | 제일제당 주식회사 | L-라이신을 생산하는 신규 미생물 |
| KR0159812B1 (ko) | 1995-12-20 | 1998-11-16 | 손경식 | 코리네박테리움 글루타미컴 씨에이치 77 및 이 균주를 이용한 l-라이신의 제조 방법 |
| JP4623825B2 (ja) | 1999-12-16 | 2011-02-02 | 協和発酵バイオ株式会社 | 新規ポリヌクレオチド |
| KR100789270B1 (ko) | 2005-11-30 | 2008-01-02 | 씨제이 주식회사 | Ｌ-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및그를 이용하여 ｌ-라이신을 생산하는 방법 |
| KR100789271B1 (ko) * | 2005-11-30 | 2008-01-02 | 씨제이 주식회사 | Ｌ-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 속 미생물 및그를 이용하여 ｌ-라이신을 생산하는 방법 |
| KR100733928B1 (ko) * | 2005-11-30 | 2007-07-02 | 씨제이 주식회사 | 카나마이신 내성을 갖고 ｌ-라이신 생산능이 향상된코리네형 미생물 및 그를 이용하여 ｌ-라이신을 생산하는방법 |
| EP2066782A4 (en) | 2006-09-15 | 2010-02-03 | Cj Cheiljedang Corp | CORYNEBACTERIA WITH IMPROVED L-LYSINE PRODUCTIVITY AND METHOD FOR THE PREPARATION OF L-LYSINE THEREWITH |
| KR100930203B1 (ko) | 2008-01-28 | 2009-12-07 | 씨제이제일제당 (주) | 개량된 프로모터 및 이를 이용한 ｌ-라이신의 생산 방법 |
| KR101126041B1 (ko) | 2008-04-10 | 2012-03-19 | 씨제이제일제당 (주) | 트랜스포존을 이용한 형질전환용 벡터, 상기 벡터로형질전환된 미생물 및 이를 이용한 ｌ-라이신 생산방법 |
-
2013
- 2013-10-28 KR KR1020130128634A patent/KR101498630B1/ko active IP Right Grant
-
2014
- 2014-09-25 CN CN201480059300.5A patent/CN105849249B/zh active Active
- 2014-09-25 RU RU2016114418A patent/RU2667425C2/ru active
- 2014-09-25 WO PCT/KR2014/008932 patent/WO2015064917A1/ko active Application Filing
- 2014-09-25 BR BR112016009324-0A patent/BR112016009324B1/pt active IP Right Grant
- 2014-09-25 US US15/032,279 patent/US9758801B2/en active Active
- 2014-09-25 MY MYPI2016000600A patent/MY181203A/en unknown
- 2014-09-25 EP EP14858611.8A patent/EP3064569A4/en not_active Withdrawn
- 2014-09-25 JP JP2016550437A patent/JP6286571B2/ja active Active
Patent Citations (3)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2316588C1 (ru) * | 2004-01-30 | 2008-02-10 | Адзиномото Ко., Инк. | Бактерия - продуцент l-аминокислоты и способ получения l-аминокислоты (варианты) |
| US20130157370A1 (en) * | 2008-04-10 | 2013-06-20 | Cj Cheiljedang Corporation | Transformation Vector Comprising Transposon, Microorganisms Transformed with the Vector, and Method for Producing L-Lysine Using the Microorganism |
| KR20130061570A (ko) * | 2011-12-01 | 2013-06-11 | 씨제이제일제당 (주) | Ｌ-아미노산 및 리보플라빈을 동시에 생산하는 미생물 및 이를 이용한 ｌ-아미노산 및 리보플라빈을 생산하는 방법 |
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| UNIPROTKB Q8NL10, 01.10.2002, Найдено в Интернет 16.06.2017 по адресу www.uniprot.org/uniprot/Q8NL10. * |
Cited By (2)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2794550C1 (ru) * | 2021-01-15 | 2023-04-21 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | "Новый вариант субъединиц гамма и тау ДНК-полимеразы III и способ получения L-лизина с его применением" |
| RU2793441C1 (ru) * | 2021-01-29 | 2023-04-03 | СиДжей ЧеилДжеданг Корпорейшн | Новый вариант белка сборки праймосомы и способ получения l-лизина с его применением |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| RU2016114418A (ru) | 2017-12-06 |
| EP3064569A1 (en) | 2016-09-07 |
| WO2015064917A1 (ko) | 2015-05-07 |
| US20160251687A1 (en) | 2016-09-01 |
| CN105849249A (zh) | 2016-08-10 |
| BR112016009324B1 (pt) | 2023-03-28 |
| EP3064569A4 (en) | 2017-06-07 |
| CN105849249B (zh) | 2019-11-15 |
| JP6286571B2 (ja) | 2018-02-28 |
| KR101498630B1 (ko) | 2015-03-04 |
| US9758801B2 (en) | 2017-09-12 |
| JP2016533771A (ja) | 2016-11-04 |
| BR112016009324A2 (pt) | 2017-09-19 |
| MY181203A (en) | 2020-12-21 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2667425C2 (ru) | Микроорганизм Corynebacterium sp. с повышенной способностью продуцировать L-лизин и способ получения L-лизина с его помощью | |
| RU2725193C1 (ru) | Новый полипептид и способ продуцирования IMP с его использованием | |
| RU2615454C1 (ru) | Способ получения L-лизина с использованием микроорганизмов, обладающих способностью продуцировать L-лизин | |
| KR102028554B1 (ko) | 신규한 프로모터 및 이를 이용한 l-아미노산 생산 방법 | |
| CN105392880B (zh) | 生产o-乙酰基高丝氨酸的微生物和用其生产o-乙酰基高丝氨酸的方法 | |
| KR20130082124A (ko) | 자일로즈 이용능이 부여된 코리네박테리움 속 미생물 및 이를 이용한 ｌ-라이신의 생산방법 | |
| RU2663135C2 (ru) | Микроорганизм, обладающий улучшенной способностью к продуцированию l-лизина, и способ производства l-лизина с использованием данного микроорганизма | |
| RU2681475C1 (ru) | Вариант репрессора глюконата, микроорганизм-продуцент L-лизина, содержащий его, и способ получения L-лизина с его использованием | |
| RU2736372C1 (ru) | Вариант фосфорибозилпирофосфатамидотрансферазы и способ получения пуринового нуклеотида с его использованием | |
| RU2651505C1 (ru) | Микроорганизм Corynebacterium с улучшенной способностью продуцировать L-лизин и способ получения L-лизина с его помощью | |
| JP2018518977A (ja) | Ｌ−リジンを生産する微生物及びそれを用いたｌ−リジン生産方法 | |
| JP2019030316A (ja) | Ｌ−リシン生産能を有する微生物及びそれを用いたｌ−リシンの生産方法 | |
| RU2668830C2 (ru) | Микроорганизм рода Corynebacterium для продуцирования L-лизина и способ получения L-лизина с его помощью | |
| RU2720522C1 (ru) | Микроорганизм рода Corynebacterium, продуцирующий L-лизин, и способ получения L-лизина с использованием этого микроорганизма | |
| JP2018529354A (ja) | Ｌ−トレオニンを生産する組み換え微生物及びそれを用いてｌ−トレオニンを生産する方法 | |
| JP7286758B2 (ja) | α－グルコシダーゼの活性が強化されたＬ－アミノ酸を生産する微生物及びそれを用いたＬ－アミノ酸生産方法 | |
| KR102589135B1 (ko) | 3-메틸-2-옥소뷰타노에이트 하이드록시 메틸트랜스퍼라아제의 활성이 강화된 미생물, 및 이의 용도 | |
| KR102285951B1 (ko) | 시트레이트 신타아제의 활성이 약화된 신규한 변이형 폴리펩티드 및 이를 이용한 l-아미노산 생산 방법 | |
| RU2697005C2 (ru) | Способ получения l-аминокислот | |
| JP2020504598A (ja) | Ｌ−アルギニンを生産するコリネバクテリウム属微生物及びこれを用いたｌ−アルギニン生産方法 | |
| US20220275412A1 (en) | Microorganism for producing l-amino acid having increased cytochrome c activity, and l-amino acid production method using same | |
| RU2819270C1 (ru) | Микроорганизм для продуцирования L-аминокислоты, обладающий повышенной активностью цитохрома С, и способ получения L-аминокислоты с его использованием | |
| JP2024515389A (ja) | Ｌ－リシン生産能が向上したコリネバクテリウム・グルタミカム変異株及びそれを用いたｌ－リシンの生産方法 | |
| KR20230053351A (ko) | L-라이신 생산능이 향상된 코리네박테리움 글루타미쿰 변이주 및 이를 이용한 l-라이신의 생산 방법 | |
| KR20210143591A (ko) | 신규한 폴리펩티드 및 이를 이용한 l-류신의 생산 방법 |