RU2205662C2 - Конъюгат, содержащий антагонист фолиевой кислоты и носитель - Google Patents

Конъюгат, содержащий антагонист фолиевой кислоты и носитель Download PDF

Info

Publication number
RU2205662C2
RU2205662C2 RU99125777/14A RU99125777A RU2205662C2 RU 2205662 C2 RU2205662 C2 RU 2205662C2 RU 99125777/14 A RU99125777/14 A RU 99125777/14A RU 99125777 A RU99125777 A RU 99125777A RU 2205662 C2 RU2205662 C2 RU 2205662C2
Authority
RU
Russia
Prior art keywords
folic acid
conjugate
carrier
conjugate according
linker
Prior art date
Application number
RU99125777/14A
Other languages
English (en)
Other versions
RU99125777A (ru
Inventor
Ханнсйёрг ЗИНН
Ханс-Германн ШРЕНК
Вольфганг МАЙЕР-БОРСТ
Эва ФРАЙ
Герд ШТЕЛЕ
Original Assignee
Дойчес Кребсфоршунгсцентрум Штифтунг Дес Оффентлихен Рехтс
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Дойчес Кребсфоршунгсцентрум Штифтунг Дес Оффентлихен Рехтс filed Critical Дойчес Кребсфоршунгсцентрум Штифтунг Дес Оффентлихен Рехтс
Publication of RU99125777A publication Critical patent/RU99125777A/ru
Application granted granted Critical
Publication of RU2205662C2 publication Critical patent/RU2205662C2/ru

Links

Images

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/643—Albumins, e.g. HSA, BSA, ovalbumin or a Keyhole Limpet Hemocyanin [KHL]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/56—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule
    • A61K47/59—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes
    • A61K47/60—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being an organic macromolecular compound, e.g. an oligomeric, polymeric or dendrimeric molecule obtained otherwise than by reactions only involving carbon-to-carbon unsaturated bonds, e.g. polyureas or polyurethanes the organic macromolecular compound being a polyoxyalkylene oligomer, polymer or dendrimer, e.g. PEG, PPG, PEO or polyglycerol
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P29/00—Non-central analgesic, antipyretic or antiinflammatory agents, e.g. antirheumatic agents; Non-steroidal antiinflammatory drugs [NSAID]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P35/00—Antineoplastic agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
    • Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
    • Y10S530/81—Carrier - bound or immobilized peptides or proteins and the preparation thereof, e.g. biological cell or cell fragment as carrier
    • Y10S530/812—Peptides or proteins is immobilized on, or in, an organic carrier
    • Y10S530/815—Carrier is a synthetic polymer
    • Y10S530/816—Attached to the carrier via a bridging agent

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Pain & Pain Management (AREA)
  • Rheumatology (AREA)
  • Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)
  • Organic Low-Molecular-Weight Compounds And Preparation Thereof (AREA)
  • Acyclic And Carbocyclic Compounds In Medicinal Compositions (AREA)

Abstract

Изобретение относится к медицине и касается конъюгата, содержащего D-энантиомер антагониста фолиевой кислоты и носитель, используемого для терапии опухолей. Конъюгат обладает повышенной активностью. 2 с. и 11 з.п.ф-лы, 2 табл.

Description

Настоящее изобретение относится к конъюгату, содержащему антагонист фолиевой кислоты и носитель, способу получения такого конъюгата, а также к его применению.
Фолиевая кислота является встречающимся в природе соединением, имеющим важное значение для переноса метильных групп в клетках, а тем самым и для роста клеток. Фолиевая кислота имеет следующую структурную формулу:
Figure 00000001

СН-группа глутаминовой кислоты содержит асимметричный атом. Следовательно, фолиевая кислота существует в двух энатиомерных формах, а именно в виде D- и L-энантиомеров.
Однако из этих энантиомерных форм только L-энантиомер находится в клетках, благодаря чему только эта форма фолиевой кислоты, но не D-энантиомер, ответственна за ее действие. Причина этого заключается в том, что фолиевая кислота поглощается клетками через фолатный рецептор, который, однако, поглощает только L-энатиомер фолиевой кислоты, но не поглощает ее D-энантиомер.
Антагонистами фолиевой кислоты являются соединения, которые представляют собой производные фолиевой кислоты, но которые противодействуют ей именно в том месте, куда она стремится, т.е. в клетках. Поэтому антагонисты фолиевой кислоты существуют в виде L-энатиомеров, а не в виде D-энатиомеров. Примерами антагонистов фолиевой кислоты являются аминоптерин и аметоптерин, который имеет и другое название - метотрексат.
Метотрексат, т. е. L-энантиомер аметоптерина, часто применяется для лечения опухолей и воспалений. При этом, однако, имеют место значительные побочные действия, поскольку метотрексат поглощается также здоровой тканью, для которой он токсичен. Конъюгаты из метотрексата и альбумина, которые более интенсивно поглощаются опухолями, чем здоровой тканью, и тем самым являются менее токсичными, описаны только в DE-A 4122210.5. Тем не менее существует необходимость в разработке средств, которые обладали бы еще меньшими побочными действиями.
Исходя из вышеизложенного, в основу настоящего изобретения была положена задача разработать средство для лечения больных тканей, в частности для терапии опухолей, которое обладало бы минимальным побочным действием.
Согласно изобретению указанная цель достигается с помощью технических решений, представленных в формуле изобретения.
Объектом настоящего изобретения является, следовательно, конъюгат, содержащий D-энантиомер антагониста фолиевой кислоты и носитель.
Настоящее изобретение основано на полученных заявителем результатах исследований, которые свидетельствуют о том, что D-энантиомер антагониста фолиевой кислоты в конъюгате, содержащем носитель, предпочтительно поглощается больной тканью, в частности опухолевыми клетками, и в них проявляет свое действие против заболевания. Далее было установлено, что D-энантиомер антагониста фолиевой кислоты как таковой, т.е. существующий не в конъюгате по изобретению, не оказывает побочных действий на здоровую ткань.
Понятие "конъюгат" указывает на то, что антагонист фолиевой кислоты и носитель связаны ковалентно, например, через амидные и/или сложноэфирные связи, соответственно через линкер.
Понятие "D-энантиомер антагониста фолиевой кислоты" включает соединения любого типа, которые являются производными фолиевой кислоты, действуют в качестве антагониста фолиевой кислоты и существуют в виде D-энантиомера. D-энантиомер антагониста фолиевой кислоты содержит в качестве компонентов птеридин, в частности птерин, п-аминобензойную кислоту и D-аминокислоту, прежде всего D-глутаминовую кислоту, которые химически изменены, т.е. модифицированы относительно имеющихся в фолиевой кислоте компонентов. Эти изменения включают, например, замещения, такие как замещение атомов водорода С1-С4 алкильными группами, в частности метильной группой, атомами галогена, такими как F, Cl, Вr и I, ОН- и NH2-группами, замещение ОН-групп вышеуказанными алкильными группами, NH2-группами, атомами водорода и галогена, а также замещение NH2-групп вышеуказанными алкильными группами, ОН-группами, атомами водорода и галогена. Далее, одна или обе карбоксильные группы глутаминовой кислоты могут присутствовать в виде кислотного производного, например в виде эфира или амида. Из вышеупомянутых модификаций одна или несколько могут присутствовать в применяемых согласно изобретению антагонистах фолиевой кислоты.
Антагонистами фолиевой кислоты предпочтительно являются D-аметоптерин (ниже называемый D-метотрексатом)
Figure 00000002

D-аминоптерин
Figure 00000003

и D-e,t-ФМТК (аналог метотрексата, у которого глутаминовая кислота (Glu) заменена на D-эритро,трео-4-фторо-Glu).
Конъюгат по изобретению может содержать в своем составе один или несколько антагонистов фолиевой кислоты. Если он содержит несколько антагонистов, то последние могут быть как одинаковыми, так и отличными друг от друга.
Понятие "носитель" включает соединения любого типа, которые пригодны для обогащения конъюгата в больной ткани, например в опухоли или очаге воспаления. Примеры таких носителей включают белки, которые не рассматриваются как чужеродные для организма, и простые полиэфиры.
Белки предпочтительно присутствуют в нативной форме. В нативной форме белки не имеют межмолекуляных и/или внутримолекулярных поперечных связей. Предпочтительно белки имеют молекулярную массу до 100000 дальтон, в частности от 30000 до 100000 дальтон. Далее, целесообразно использовать белки человека. Примеры белков включают альбумин, фибриноген, трансферрин, иммуноглобулины и липопротеины, причем предпочтителен человеческий альбумин. Могут применяться также фрагменты вышеуказанных белков. Кроме того, последовательность белков, соответственно их фрагментов может иметь модификации одной или нескольких аминокислот в сравнении с известной последовательностью белков, соответственно их фрагментов.
Примерами простых полиэфиров являются полиэтиленгликоли, в частности таковые с молекулярной массой от 100 до 20000 дальтон. Предпочтительны полиэтиленгликоли, которые этерифицированы до сложного или простого эфира по концевой гидроксильной группе С1-С12алкильной группой, прежде всего метильной группой.
Предлагаемый конъюгат может иметь один или несколько, в частности два, вышеуказанных носителя. Если он содержит несколько носителей, то последние могут быть как одинаковыми, так и отличными друг от друга. В случае нескольких полиэфиров последние предпочтительно выбирают таким образом, чтобы молекулярная масса всех полиэфиров составляла приблизительно 20000 или более дальтон.
В предлагаемом конъюгате антагонист фолиевой кислоты может быть ковалентно соединен с носителем непосредственно или через линкер, т.е. между носителем и антагонистом фолиевой кислоты присутствует линкер. В качестве линкера пригодны все соединения, способные соединять антагонист фолиевой кислоты с носителем.
Предпочтительно, чтобы линкер обладал способностью расщепляться в клетке. Термин "клетка" включает отдельные клетки и состоящие из клеток структуры. Примерами первых являются эндогенные клетки, не объединенные в общую структуру с другими клетками. Примерами объединенных в общую структуру клеток являются ткани, органы и опухоли.
Линкер вышеуказанного типа известен специалистам в данной области техники. Специалистам известны также факторы, например ферменты, которые обусловливают расщепление определенных химических связей в клетках. Поэтому специалист в данной области техники может сконструировать расщепляемые в клетке линкеры. Особенно предпочтительно, чтобы такой линкер включал азогруппу. Более предпочтительно, если линкер имеет следующую структуру:
-Y-R-N=N-
где R обозначает органическую группу, предпочтительно ароматическую, особенно предпочтительно фенилен или его производное, и
Y обозначает группу, выбранную из С(О), S(O)2, P(O)OH и As(О)ОН.
Вышеуказанная структура предпочтительного линкера соответствует той, которую имеет линкер в конъюгате по изобретению. Кроме того, эта структура, по меньшей мере если R представляет собой фенилен или его производное, включает активное соединение, которое наиболее пригодно для лечения опухолевых, воспалительных и аутоиммунных заболеваний. После расщепления линкера и при определенных условиях разложения еще связанного с линкером белка это соединение может в полной мере проявить свою активность.
Предлагаемые согласно изобретению конъюгаты могут быть получены путем ковалентного связывания антагониста фолиевой кислоты с носителем и при необходимости с линкером. Пригодные для этой цели способы, а также необходимые материалы известны специалистам в данной области техники.
Если антагонист фолиевой кислоты имеет по меньшей мере одну карбоксильную группу, например карбоксильную группу глутаминовой кислоты, конъюгаты можно получать путем взаимодействия антагониста фолиевой кислоты с карбодиимидом и гидроксисукцинимидом с образованием реакционноспособных сложных сукцинимидиловых эфиров и взаимодействия последних с носителем. В случае конъюгатов с несколькими антагонистами фолиевой кислоты сукцинимидиловые эфиры можно получать совместно или раздельно.
Взаимодействие антагонистов фолиевой кислоты с карбодиимидом и гидроксисукцинимидом проводят в полярном апротонном растворителе, предпочтительно диметилформамиде (ДМФ). Молярное отношение антагонист фолиевой кислоты : карбодиимид : гидроксисукцинимид составляет приблизительно 1:1,5:10. Образовавшийся сложный сукцинимидиловый эфир затем подвергают взаимодействию в водном буферном растворе, предпочтительно NаНСО3, с носителем, таким как альбумин. Концентрация носителя составляет приблизительно от 10 до 70 мг/мл. Активированная таким образом карбоксильная группа может затем реагировать с ОН- и NH-группами носителя с образованием амидных и эфирных связей кислоты, причем в результате этой реакции получают предлагаемые в изобретении конъюгаты. Эти конъюгаты можно подвергать многократной очистке, например, путем ультрафильтрации, и затем стерилизовать фильтрацией, после чего они готовы для применения.
Предлагаемые согласно изобретению конъюгаты отличаются тем, что они остаются в течение длительного времени в системе кровообращения пациента. Далее, они накапливаются в больной ткани, в частности в опухолях и очагах воспаления. Кроме того, конъюгаты по изобретению отличаются тем, что они обладают еще меньшим побочным действием, чем конъюгаты с антагонистами L-фолиевой кислоты, известными из DE-A 4122210.5, причем их действие на больные ткани, прежде всего опухоли и очаги воспаления, сохраняется.
Таким образом, предлагаемые согласно изобретению конъюгаты наиболее пригодны для лечения опухолей, таких как гематологические и солидные опухоли, воспалений, например заболеваний ревматичесого характера, таких как хронический полиартрит, или псориаза, и аутоиммунных заболеваний.
Ниже изобретение проиллюстрировано на примерах.
Пример 1: Получение предлагаемого в изобретении конъюгата из D-метотрексата и человеческого сывороточного альбумина.
D-метотрексат (D-MTK) растворяли в концентрации 20 мг/мл в диметилформамиде. К прозрачному желтому раствору добавляли 1,5 моля дициклогексилкарбодиимида и приблизительно 10 молей гидроксисукцинимида. По истечении приблизительно 12 ч реакции превращение в сложный сукцинимидиловый эфир (D-MTK-ГСИЭ) завершалось, что можно было установить по выпавшему в кристаллический осадок количеству дициклогексилмочевины (ДЦМ). Аналитический контроль реакции проводили с помощью тонкослойной хроматографии:
пластинки: силикагель 60 с флуоресцентным индикатором;
система растворителей: этилацетат/МеОН в соотношении 75/25;
значения Rf: для D-MTK 0,0; для D-MTK-ГСИЭ 0,35-0,38.
Прозрачный желтый раствор D-MTK-ГСИЭ в ДМФ медленно, при постоянном перемешивании добавляли к раствору белка (50-70 мг человеческого сывороточного альбумина в 0,17-молярном растворе NаНСО3, рН 8,5), при этом по истечении некоторого времени появлялось помутнение, обусловленное взвесью из непрореагировавшего дициклогексилкарбодиимида и еще растворенной в диметилформамиде ДЦМ. По истечении по меньшей мере 30 мин реакции взвесь отделяли фильтрованием через стерилизационный фильтр (0,22 мкм), а диметилформамид удаляли путем ультрафильтрации с соответствующим мембранным фильтром (YM30, фирма Amicon).
Контроль чистоты проводили с помощью жидкостной хроматографии высокого разрешения (ЖХВР):
предварительная колонка: Zorbach Diol размером 50•4 мм;
колонки: 1-я: Zorbach GF 450, 2-я: Zorbach GF 250;
элюент: 0,2М фосфатный буфер, рН 7,4;
скорость потока: 1,0 мл/мин;
давление: около 65 бар.
В результате получили конъюгат по изобретению из D-метотрексата и человеческого сывороточного альбумина.
Пример 2: Сравнение токсичности конъюгата по изобретению, полученного из D-метотрексата и человеческого сывороточного альбумина, с конъюгатом, полученным из метотрексата и человеческого сывороточного альбумина.
Для этого опыта применяли конъюгат по изобретению из D-метотрексата и человеческого сывороточного альбумина (D-MTK-ЧCA) из примера 1. Далее применяли известный из DE-A 4122210.5 конъюгат, полученный из метотрексата и человеческого сывороточного альбумина (МТК-ЧСА).
Группам из пяти здоровых крыс линии Sprague-Dawley вводили D-MTK-ЧCA, соответственно МТК-ЧСА. Крысам инъицировали по 4 мг конъюгата (в пересчете на долю МТК, соответственно D-MTK в конъюгатах) на килограмм веса тела с двухдневным интервалом. Полученные результаты представлены в таблице 1.
Использованные в таблице 1 сокращения имеют следующие значения: ВС означает "воспаление слизистой оболочки"; ПН означает "понос"; ВШ означает "взъерошенная шерсть"; ПВ означает "потеря веса"; СМ означает "смерть".
Как видно из таблицы 1, крысы при введении им конъюгата МТК-ЧСА, уже начиная с третьего дня, испытывали сильные побочные действия. На четвертый день две крысы были найдены мертвыми в клетке. Остальных трех крыс пришлось умертвить, поскольку они страдали от сильных побочных действий. В отличие от этого ни у одной из крыс, которым вводили конъюгат D-MTK-ЧCA по изобретению, не отмечалось побочных действий.
Таким образом, конъюгаты по изобретению оказывают лишь незначительные побочные действия.
Пример 3: Терапия опухолей конъюгатом по изобретению, полученным из D-метотрексата и человеческого сывороточного альбумина, в сравнении с коньюгатом, полученным из метотрексата и человеческого сывороточного альбумина.
Для этого опыта применяли указанные в примере 2 конъюгаты. В качестве подопытных животных использовали крыс-носителей карциносаркомы линии Walker-256. Лечение начинали на шестой день после пересадки опухоли объемом от 1000 до 2500 мм3 (диаметр опухоли от 1•1 до 1•2 см). Пяти крысам вводили МТК-ЧСА (3 инъекции с двухдневным интервалом дозой по 2 мг МТК-ЧСА в пересчете на долю МТК на килограмм веса тела). Предлагаемый в изобретении конъюгат D-MTK-ЧCA вводили двойной дозой согласно вышеприведенному протоколу. При указанных дозах в случае МТК-ЧСА имели место значительные побочные действия, тогда как при введении предлагаемого конъюгата D-MTK-ЧСА побочных действий не наблюдалось (см. пример 2). Полученные результаты представлены в таблице 2.
Использованные в таблице 2 сокращения имеют следующие значения: ПД означает "побочные действия"; СМ означает смерть в результате рецидива опухоли.
Результаты, приведенные в таблице 2, показывают, что в группе, в которой животным вводили МТК-ЧСА, опухоль спадала у трех животных (ремиссия). В этой группе у двух крыс имел место рецидив, и их пришлось умертвить. У трех крыс наблюдались побочные действия. В отличие от этого в группе, в которой животным вводили конъюгат D-MTK-ЧСА по изобретению, все животные излечивались от опухоли и при этом не наблюдалось побочных действий, хотя в сравнении с группой, которой вводили МТК-ЧСА, применяли двойную дозу конъюгата.
Таким образом, конъюгаты по изобретению обладают минимальными побочными действиями, причем с помощью этих конъюгатов возможно достижение исключительно высоких результатов в терапии опухолей.

Claims (13)

1. Конъюгат, содержащий D-энантиомер антагониста фолиевой кислоты и носитель.
2. Конъюгат по п.1, отличающийся тем, что антагонист фолиевой кислоты содержит одно или несколько производных птеридина, п-аминобензойной кислоты и D-аминокислоты.
3. Конъюгат по п.2, отличающийся тем, что D-аминокислота является глутаминовой кислотой.
4. Конъюгат по п.3, отличающийся тем, что антагонист фолиевой кислоты является D-аметоптерином или D-аминоптерином.
5. Конъюгат по любому из пп.1-4, отличающийся тем, что содержит несколько антагонистов фолиевой кислоты.
6. Конъюгат по любому из пп.1-5, отличающийся тем, что носитель является нативным белком, который не рассматривается как чужеродный для организма, или простым полиэфиром.
7. Конъюгат по п.6, отличающийся тем, что белок является сывороточным альбумином.
8. Конъюгат по п.6, отличающийся тем, что полиэфир является полиэтиленгликолем.
9. Конъюгат по любому из пп.1-8, отличающийся тем, что содержит несколько носителей.
10. Конъюгат по любому из пп.1-9, отличающийся тем, что между антагонистом фолиевой кислоты и носителем имеется линкер.
11. Конъюгат по п.10, отличающийся тем, что линкер способен расщепляться в клетке.
12. Конъюгат по п.11, отличающийся тем, что линкер содержит азогруппу.
13. Способ получения конъюгатов по любому из пп.1-12, отличающийся тем, что антагонист фолиевой кислоты, носитель и необязательно линкер ковалентно связывают друг с другом.
RU99125777/14A 1997-05-09 1998-05-08 Конъюгат, содержащий антагонист фолиевой кислоты и носитель RU2205662C2 (ru)

Applications Claiming Priority (2)

Application Number Priority Date Filing Date Title
EP97107657.5 1997-05-09
EP97107657A EP0879604B1 (de) 1997-05-09 1997-05-09 Konjugat, umfassend einen Folsäureantagonisten und einen Träger

Publications (2)

Publication Number Publication Date
RU99125777A RU99125777A (ru) 2001-10-20
RU2205662C2 true RU2205662C2 (ru) 2003-06-10

Family

ID=8226780

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RU99125777/14A RU2205662C2 (ru) 1997-05-09 1998-05-08 Конъюгат, содержащий антагонист фолиевой кислоты и носитель

Country Status (14)

Country Link
US (1) US6720304B1 (ru)
EP (1) EP0879604B1 (ru)
JP (1) JP2002501512A (ru)
KR (1) KR100596940B1 (ru)
CN (1) CN1260725A (ru)
AT (1) ATE236657T1 (ru)
AU (1) AU733885B2 (ru)
BR (1) BR9808770A (ru)
CA (1) CA2289448A1 (ru)
DE (1) DE59709788D1 (ru)
DK (1) DK0879604T3 (ru)
ES (1) ES2197265T3 (ru)
RU (1) RU2205662C2 (ru)
WO (1) WO1998051349A1 (ru)

Cited By (2)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2497825C1 (ru) * 2012-07-03 2013-11-10 Государственное Научное Учреждение "Институт Физики Имени Б.И. Степанова Национальной Академии Наук Беларуси" Конъюгат фолиевой кислоты и способ его получения
RU2589697C2 (ru) * 2009-12-18 2016-07-10 Экзодос Лайф Сайенсиз Лимитед Партнершип Способы получения стабильных жидких лекарственных препаратов и их композиции

Families Citing this family (18)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
KR20020002480A (ko) * 1999-03-17 2002-01-09 한센 핀 베네드, 안네 제헤르, 웨이콥 마리안느 펩티드의 아실화법 및 신규한 아실화제
US7273921B2 (en) * 2002-09-25 2007-09-25 Novo Nordisk A/S Method for producing acylated peptides
WO2004082718A1 (ja) * 2003-03-20 2004-09-30 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha 難水溶性抗癌剤と新規ブロック共重合体を含むミセル調製物
DE102004016355A1 (de) * 2004-04-02 2005-11-03 Rösner Research GmbH & Co.KG Herstellung und Verwendung des Konjugats Methotrexat-Albumin als Mittel zur Immunosuppression bei GVHD
KR101203475B1 (ko) * 2004-09-22 2012-11-21 니폰 가야꾸 가부시끼가이샤 신규 블록 공중합체, 미셀 제제물 및 이를 유효성분으로함유하는 항암제
DE102004057196A1 (de) * 2004-11-26 2006-06-01 Rösner Research GmbH & Co.KG Verfahren zur Herstellung von Albumin-Konjugaten mit Nicht-steroidalen Antirheumatika (NSAR)
US8940332B2 (en) * 2006-05-18 2015-01-27 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha High-molecular weight conjugate of podophyllotoxins
JP5548364B2 (ja) * 2006-10-03 2014-07-16 日本化薬株式会社 レゾルシノール誘導体の高分子結合体
EP2080779B1 (en) * 2006-11-06 2016-05-18 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymeric derivative of nucleic acid metabolic antagonist
JP5349318B2 (ja) 2007-09-28 2013-11-20 日本化薬株式会社 ステロイド類の高分子結合体
EP2258397B1 (en) * 2008-03-18 2017-10-11 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer conjugate of physiologically active substance
WO2009136572A1 (ja) * 2008-05-08 2009-11-12 日本化薬株式会社 葉酸若しくは葉酸誘導体の高分子結合体
KR101746757B1 (ko) * 2009-01-24 2017-06-13 아미놉테린 엘엘씨. 라세미 아미노프테린을 포함하는 약제 조성물
CN102421827B (zh) 2009-05-15 2014-07-30 日本化药株式会社 具有羟基的生理活性物质的高分子结合体
CN102451301A (zh) * 2010-10-22 2012-05-16 王京姝 一种治疗牛皮癣的外用膏剂
EP2641605B1 (en) 2010-11-17 2018-03-07 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Polymer derivative of cytidine metabolism antagonist
EP2754682B1 (en) 2011-09-11 2017-06-07 Nippon Kayaku Kabushiki Kaisha Method for manufacturing block copolymer
DE102017204850A1 (de) * 2017-03-22 2018-09-27 Michael Denck HSA-Konjugat

Family Cites Families (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
GB2116979B (en) * 1982-02-25 1985-05-15 Ward Page Faulk Conjugates of proteins with anti-tumour agents
CA1330378C (en) * 1986-05-08 1994-06-21 Daniel J. Coughlin Amine derivatives of folic acid analogs
DE4122210C2 (de) * 1991-07-04 1999-04-01 Deutsches Krebsforsch Konjugate aus tumoraktiver Verbindung und Serumalbumin sowie Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung
WO1993015751A1 (en) * 1992-02-14 1993-08-19 Merck & Co., Inc. CHIMERIC TOXINS BINDING TO THE GnRH RECEPTOR
DE4433890C2 (de) * 1994-09-22 1999-02-18 Deutsches Krebsforsch Konjugat aus einem Wirkstoff und einem nicht als körperfremd angesehenen, nativen Protein

Cited By (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
RU2589697C2 (ru) * 2009-12-18 2016-07-10 Экзодос Лайф Сайенсиз Лимитед Партнершип Способы получения стабильных жидких лекарственных препаратов и их композиции
US9629920B2 (en) 2009-12-18 2017-04-25 Exodos Life Sciences Limited Partnership Methods and compositions for stable liquid drug formulations
RU2497825C1 (ru) * 2012-07-03 2013-11-10 Государственное Научное Учреждение "Институт Физики Имени Б.И. Степанова Национальной Академии Наук Беларуси" Конъюгат фолиевой кислоты и способ его получения

Also Published As

Publication number Publication date
AU733885B2 (en) 2001-05-31
BR9808770A (pt) 2001-10-30
CN1260725A (zh) 2000-07-19
EP0879604A1 (de) 1998-11-25
KR100596940B1 (ko) 2006-07-07
KR20010012412A (ko) 2001-02-15
ATE236657T1 (de) 2003-04-15
EP0879604B1 (de) 2003-04-09
CA2289448A1 (en) 1998-11-19
DK0879604T3 (da) 2003-08-04
WO1998051349A1 (de) 1998-11-19
DE59709788D1 (de) 2003-05-15
JP2002501512A (ja) 2002-01-15
ES2197265T3 (es) 2004-01-01
US6720304B1 (en) 2004-04-13
AU7910998A (en) 1998-12-08

Similar Documents

Publication Publication Date Title
RU2205662C2 (ru) Конъюгат, содержащий антагонист фолиевой кислоты и носитель
US6709679B2 (en) Antineoplastic conjugates of transferin, albumin and polyethylene glycol
CN1039015C (zh) 聚乙二醇-干扰素结合物
EP0584552B1 (en) Chlorophyll and bacteriochlorophyll derivatives, their preparation and pharmaceutical compositions comprising them
US4315851A (en) Pharmaceutical composition having antitumor activity
EP0200467B1 (en) Superoxide dismutase combined with a poly(alkylene oxide)
DE19926475A1 (de) Träger-Pharmaka-Konjugate
US4376765A (en) Medicaments, their preparation and compositions containing same
BG60800B2 (bg) Полиетиленгликолови конюгати на протеина
CZ298579B6 (cs) Konjugát polyolu a interferonu-beta
JP2515389B2 (ja) ス―パ―オキサイドディスムタ―ゼ結合体
JP2003515538A (ja) クロロフィル及びバクテリオクロロフィルのエステル類、その調製及びそれを含む医薬組成物
US20030166513A1 (en) Dds compound and process for the preparation thereof
JPH049771B2 (ru)
EP1263761A2 (en) Compounds for pdt
US5672688A (en) Immunoglobulin Fc fragment bound to an alkylating, antibiotic, or antimetabolic antitum or substance
JPWO2006040980A1 (ja) レシチン化スーパーオキシドディスムターゼ組成物およびその製造方法
US6150327A (en) Conjugate of an active agent, a polyether and possibly a native protein regarded as acceptable by the body
US20040186285A1 (en) Water-soluble mono-PEGylated tetrapyrrole derivatives for photodynamic therapy and method of production
CN110922451A (zh) 一种卟啉修饰的穿膜肽及其制备和应用
US7319147B2 (en) Porphyrins and related compounds
JP2545729B2 (ja) メトトレキセート誘導体とピラン共重合体の高分子結合体及びその製造方法
MXPA99010278A (en) Conjugate comprising a folic acid antagonist and a carrier
JPS62185029A (ja) 修飾インタ−ロイキン−２
JPS6256137B2 (ru)

Legal Events

Date Code Title Description
MM4A The patent is invalid due to non-payment of fees

Effective date: 20060509