DE4122210C2 - Konjugate aus tumoraktiver Verbindung und Serumalbumin sowie Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung - Google Patents

Konjugate aus tumoraktiver Verbindung und Serumalbumin sowie Verfahren zu deren Herstellung und ihre Verwendung

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Description

Die vorliegende Erfindung betrifft Konjugate aus einer tumoraktiven Verbindung, die mindestens eine Corboxylgruppe aufweist, und Serumalbumin, das in nativer Form vorliegt. Ferner betrifft die Erfindung Verfahren zur Herstellung solcher Konjugate und die Verwendung dieser.
Seit längerem ist bekannt, tumoraktive Verbindungen an Proteine zu binden, um dadurch das Verbleiben der Verbindungen im Kreislauf des Patienten zu verlängern. Konjugate obiger Art, insbesondere aus Methotrexat und Serumalbumin, sind hierfür als Beispiel zu nennen (vgl. Chu, B. C. F. and Whiteley, J. M. Mol. Pharmacol. (1977), 13, 80-88). Zu ihrer Herstellung werden die tumoraktiven Verbindungen direkt mit den Proteinen in Gegenwart von Carbodiimid umgesetzt. Hierbei entsteht sowohl inter- als auch intramolekulares Crosslinking, wodurch die Proteine in den Konjugaten letztlich in modifizierter Form vorliegen.
Es hat sich nun gezeigt, daß solche Konjugate im Organismus wenig stabil sind. Vielfach werden ihre Proteine sofort in der Leber abgebaut. Damit werden die tumoraktiven Verbindungen frühzeitig freigesetzt und an einem längeren Verbleiben im Kreislauf des Patienten gehindert. Auch stellt die Freisetzung der tumoraktiven Verbindungen in der Leber für diese eine große Belastung dar.
DE 29 52 690 A1 beschreibt ein Konjugat aus einer Antitumorsubstanz mit wenig­ stens einer Carboxylgruppe, z. B. Methotrexat, die an einem Antitumorantikörper über eine Amidbindung gebunden ist.
DE 26 23 736 A1 beschreibt ein Antitumormittel, wobei an ein Fab'-Dimeres von Antitumor-Immunglobulinen ein Antikrebs-Arzneimittel, z. B. Methotrexat, kovalent gebunden ist.
DE 25 41 931 A1 beschreibt ein Antitumormittel, bestehend aus p-Di(2-chlor- ethyl)amino-L-phenylalanin als cytotoxisches Mittel, das durch Peptidbindung an einen tumorspezifischen Antikörper gebunden ist.
DD 254 009 A5 beschreibt ein Konjugat aus Vinblastin, das über eine Brücke (Linker) an humanes Serumalbumin gebunden ist.
EP 0 121 388 A2 beschreibt ein Konjugat aus Vinca-Derivaten, die eine Carboxylgrup­ pe aufweisen, die über einen Linker OCOXCO an ein Immunglobulin gebunden sind.
EP 0 115 171 A2 beschreibt ein Konjugat aus Serumalbumin, einer tumoraktiven Verbindung, z. B. Methotrexat und einem zellspezifischen Immunglobulin.
US 5 024 835 beschreibt Konjugate aus Vinca-Derivaten, die über einen Linker mit 7 aliphatischen C-Atomen an ein Protein gebunden sind.
Der vorliegenden Erfindung liegt daher die Aufgabe zugrunde, Konjugate obiger Art dahingehend zu verbessern, daß die angesprochenen Nachteile vermieden werden können.
Erfindungsgemäß wird dies dadurch erreicht, daß das Serumalbumin in den Konjugaten in nativer Form vorliegen.
Es ist dabei nicht entscheidend, welche tumoraktiven Verbindungen gebunden werden sollen. Dies können beispielsweise aromatische Verbindungen, insbesondere Methotrexat und Derivate davon, Anthrachinon-2-Carbonsäure und Derivate davon, Carminsäure und Derivate davon sowie ein Platinkomplex, sein.
Auch können mehrere verschiedene tumoraktive Verbindungen an das Protein (Serumalbumin) gebunden werden. Hierbei hat sich die Bindung zweier aromatischer Verbindungen, insbesondere von Methotrexat und einem Platinkomplex, als günstig erwiesen.
Erfindungsgemäße Konjugate können hergestellt werden, indem tumoraktive Verbindungen mit Carbodiimid und Hydroxysuccinimid zu reaktiven Succinimidylestern und diese mit dem Protein umgesetzt werden. Bei Konjugaten mit mehreren verschiedenen tumoraktiven Verbindungen kann die Herstellung der einzelnen Succinimidylester gemeinsam oder getrennt erfolgen.
Die Umsetzung der tumoraktiven Verbindung mit Carbodiimid und Hydroxysuccinimid erfolgt in einem polaren aprotischen Lösungsmittel, vorzugsweise Dimethylformamid (DMF). Das Mol-Verhältnis von tumoraktiver Verbindung : Carbodiimid : Hydroxysuccinimid beträgt etwa 1 : 1,5 : 6,0. Der gebildete Succinimidylester wird dann in einer wässrigen Pufferlösung, vorzugsweise NaHCO3, mit dem Serumalbumin umgesetzt. Die Proteinkonzentration beträgt etwa 10-20 mg/ml. Die hierbei gebildeten Konjugate werden mehrfach gereinigt, beispielsweise durch Ultrafiltration, und schließlich steril filtriert, worauf sie applikationsfertig sind.
Erfindungsgemäße Konjugate zeichnen sich dadurch aus, daß sie über lange Zeit im Kreislauf des Patienten verbleiben. Ihr Protein weist eine ähnliche Stabilität auf, wie in nicht-gebundener Form. Somit lassen sich tumoraktive Verbindungen in sehr hoher Dosis, nämlich bis zu 6% der applizierten Dosis, in Tumoren anreichern.
Erfindungsgemäße Konjugate eignen sich somit insbesondere zur Behandlung von Tumorerkrankungen.
Beispiel Herstellung eines Konjugates aus Anthrachinon-2-Carbonsäure und Serumalbumin
Zu 40 mg (etwa 0,16 mmol) Anthrachinon-2-Carbonsäure (Ac-2-c) und 115 mg (1 mmol) Hydroxysuccinimid (HSI), gelöst in 4 ml Dimethylformamid (DMF), werden 50 mg (etwa 0,24 mmol) Di-Cyclohexyl-carbodiimid (DCC) gegeben. Das Mol-Verhältnis beträgt etwa 1 : 1,5 : 6,0. Die Umsetzung wird bei Raumtemperatur durchgeführt und mittels Dünnschichtchromatographie (DC) kontrolliert:
DC-Platten: Silikagel 60 mit F254
Laufstrecke: 10 cm, Laufzeit 20 min
Laufmittel (v/v): Ethylacetat/Methanol (75/25)
Rf-Werte: ursp. 0,1; Succinimidylester 0,8
Nachdem mehr als 80% der Ausgangsverbindung umgesetzt sind (etwa nach 24 h), bringt man den in DMF gelösten Succinimidylester bei Raumtemperatur in eine NaHCO3 (0,13 mol) gepufferte Serumalbuminlösung (pH 8,5) ein, die eine Proteinkonzentration von etwa 10-20 mg/ml aufweist.
Nach einer Reaktionszeit von 20-30 min wird möglicher Überschuß an DCC über ein Membranfilter (0,45 µm) abgetrennt, die Reaktionsmischung mit 400 ml reinstem sterilen Wasser verdünnt und einer Reinigung durch Ultrafiltration unterworfen. Es werden dabei DMF, Wasser, HSI und Salze abgetrennt. Nach einem zweiten Waschvorgang und anschließender Sterilfiltration ist das Konjugat applikationsfertig.

Claims (12)

1. Konjugat aus mindestens einer tumoraktiven Verbindung, die mindestens eine Carbo­ xylgruppe aufweist, und Serumalbumin, dadurch gekennzeichnet, daß das Serumalbumin in nativer Form vorliegt.
2. Konjugat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß als tumoraktive Verbindung eine aromatische Verbindung vorliegt.
3. Konjugat nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß als aromatische Verbindung Methotrexat oder ein Derivat davon vorliegt.
4. Konjugat nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß als aromatische Verbindung Anthrachinon-2-Carbonsäure oder ein Derivat davon vorliegt.
5. Konjugat nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß als aromatische Verbindung Carminsäure oder ein Derivat davon vorliegt.
6. Konjugat nach Anspruch 2, dadurch gekennzeichnet, daß als aromatische Verbindung ein Platinkomplex vorliegt.
7. Konjugat nach Anspruch 1, dadurch gekennzeichnet, daß mehrere verschiedene tumoraktive Verbindungen vorliegen.
8. Konjugat nach Anspruch 7, dadurch gekennzeichnet, daß als tumoraktive Verbindungen zwei verschiedene aromatische Verbindungen vorliegen.
9. Konjugat nach Anspruch 8, dadurch gekennzeichnet, daß als aromatische Verbindungen Methotrexat und ein Platinkomplex vorliegen.
10. Verfahren zur Herstellung der Konjugate nach einem der Ansprüche 1 bis 6, dadurch gekennzeichnet, daß die tumoraktive Substanz mit Carbodiimid und Hydroxysuccinimid zu einem reaktiven Succinimidylester und dieser mit Serumalbumin umgesetzt wird.
11. Verfahren zur Herstellung der Konjugate nach einem der Ansprüche 7 bis 9, dadurch gekennzeichnet, daß die tumoraktiven Substanzen gemeinsam oder getrennt mit Carbodiimid und Hydroxysuccinimid zu reaktiven Succinimidyl­ estern und diese mit Serumalbumin umgesetzt werden.
12. Verwendung der Konjugate nach einem der Ansprüche 1 bis 9 zur Behand­ lung von Tumorerkrankungen.
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Families Citing this family (15)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE4433890C2 (de) 1994-09-22 1999-02-18 Deutsches Krebsforsch Konjugat aus einem Wirkstoff und einem nicht als körperfremd angesehenen, nativen Protein
DE19636889A1 (de) * 1996-09-11 1998-03-12 Felix Dr Kratz Antineoplastisch wirkende Transferrin- und Albuminkonjugate zytostatischer Verbindungen aus der Gruppe der Anthrazykline, Alkylantien, Antimetabolite und Cisplatin-Analoga und diese enthaltende Arzneimittel
DE59709788D1 (de) * 1997-05-09 2003-05-15 Deutsches Krebsforsch Konjugat, umfassend einen Folsäureantagonisten und einen Träger
WO1999029706A2 (en) * 1997-12-08 1999-06-17 Glycomed Incorporated DISALICYLATE ANALOG BASED SIALYL LEWISx MIMETICS
DE19847362A1 (de) * 1998-10-14 2000-04-20 Deutsches Krebsforsch Makromolekulare Wirkstoffkonjugate und Verfahren zu ihrer Herstellung
DE19926154A1 (de) 1999-06-09 2000-12-14 Ktb Tumorforschungs Gmbh Verfahren zur Herstellung einer injizierbaren Arzneimittelzubereitung
EP1889639A3 (de) * 1999-09-07 2008-04-09 ConjuChem Biotechnologies Inc. Verfahren und Zusammensetzungen zur Herstellung antineoplastischer Wirkstoffe von hoher Haltbarkeit
US6706892B1 (en) 1999-09-07 2004-03-16 Conjuchem, Inc. Pulmonary delivery for bioconjugation
EP1212120A2 (de) * 1999-09-07 2002-06-12 Conjuchem, Inc. Verwendungen und zusammensetzungen, welche succinimide oder maleimide derivaten von antineoplastischen wirkstoffen enthalten, zur herstellung antineoplastischer wirkstoffen
WO2002013873A2 (en) * 2000-08-17 2002-02-21 Synapse Technologies, Inc. P97-active agent conjugates and their methods of use
WO2002013843A2 (en) * 2000-08-17 2002-02-21 University Of British Columbia Chemotherapeutic agents conjugated to p97 and their methods of use in treating neurological tumours
BR0206919A (pt) 2001-02-02 2004-07-06 Conjuchem Inc Derivados de fator de liberação de hormÈnio de crescimento de longa duração
AU2002233089B2 (en) 2001-02-16 2005-12-22 Conjuchem Biotechnologies Inc. Long lasting glucagon-like peptide 2 (GLP-2) for the treatment of gastrointestinal diseases and disorders
DE102004016355A1 (de) * 2004-04-02 2005-11-03 Rösner Research GmbH & Co.KG Herstellung und Verwendung des Konjugats Methotrexat-Albumin als Mittel zur Immunosuppression bei GVHD
DE102017204850A1 (de) 2017-03-22 2018-09-27 Michael Denck HSA-Konjugat

Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2541931A1 (de) * 1974-09-20 1976-04-01 Searle & Co Immunologische verbindungen
DE2623736A1 (de) * 1975-05-27 1976-12-09 Yeda Res & Dev Antitumormittel und verfahren zu dessen herstellung
DE2952690A1 (de) * 1978-12-29 1980-07-03 Kureha Chemical Ind Co Ltd Pharmazeutische zubereitung
EP0115171A2 (de) * 1982-12-24 1984-08-08 Teijin Limited Konjugat mit Zytotoxizität und Verfahren zu seiner Herstellung
EP0121388A2 (de) * 1983-03-30 1984-10-10 Lilly Industries Limited Immunoglobulinkonjugate
DD254009A5 (de) * 1986-04-08 1988-02-10 Omnichem,Societe Anonyme,Be Verbindung zur herstellung neuer konjugierter verbindungen von vinblastin und seinen derivaten
US5024835A (en) * 1988-02-08 1991-06-18 Ire-Celltarg S.A. Conjugates of a vinca derivative carrying a detergent chain in the C-3 position

Patent Citations (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
DE2541931A1 (de) * 1974-09-20 1976-04-01 Searle & Co Immunologische verbindungen
DE2623736A1 (de) * 1975-05-27 1976-12-09 Yeda Res & Dev Antitumormittel und verfahren zu dessen herstellung
DE2952690A1 (de) * 1978-12-29 1980-07-03 Kureha Chemical Ind Co Ltd Pharmazeutische zubereitung
EP0115171A2 (de) * 1982-12-24 1984-08-08 Teijin Limited Konjugat mit Zytotoxizität und Verfahren zu seiner Herstellung
EP0121388A2 (de) * 1983-03-30 1984-10-10 Lilly Industries Limited Immunoglobulinkonjugate
DD254009A5 (de) * 1986-04-08 1988-02-10 Omnichem,Societe Anonyme,Be Verbindung zur herstellung neuer konjugierter verbindungen von vinblastin und seinen derivaten
US5024835A (en) * 1988-02-08 1991-06-18 Ire-Celltarg S.A. Conjugates of a vinca derivative carrying a detergent chain in the C-3 position

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