RU2133253C1 - Очищенная гепариновая фракция, способ ее получения и содержащая ее фармацевтическая композиция - Google Patents
Очищенная гепариновая фракция, способ ее получения и содержащая ее фармацевтическая композиция Download PDFInfo
- Publication number
- RU2133253C1 RU2133253C1 RU94015595A RU94015595A RU2133253C1 RU 2133253 C1 RU2133253 C1 RU 2133253C1 RU 94015595 A RU94015595 A RU 94015595A RU 94015595 A RU94015595 A RU 94015595A RU 2133253 C1 RU2133253 C1 RU 2133253C1
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- heparin
- molecular weight
- low molecular
- product
- salt
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims abstract description 36
- 239000008194 pharmaceutical composition Substances 0.000 title claims abstract description 8
- 239000002565 heparin fraction Substances 0.000 title description 28
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 64
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 53
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 50
- 239000000243 solution Substances 0.000 claims abstract description 45
- 239000000047 product Substances 0.000 claims abstract description 40
- VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N Hydrochloric acid Chemical compound Cl VEXZGXHMUGYJMC-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 38
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 claims abstract description 38
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims abstract description 20
- 230000000694 effects Effects 0.000 claims abstract description 19
- 159000000000 sodium salts Chemical class 0.000 claims abstract description 18
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 16
- 239000007864 aqueous solution Substances 0.000 claims abstract description 16
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 claims abstract description 10
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 claims abstract description 8
- -1 nitros compound Chemical class 0.000 claims abstract description 8
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 claims abstract description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims abstract description 6
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 5
- 239000012429 reaction media Substances 0.000 claims abstract description 4
- 238000005349 anion exchange Methods 0.000 claims abstract description 3
- OHJKXVLJWUPWQG-PNRHKHKDSA-N Heparinsodiumsalt Chemical compound O[C@@H]1[C@@H](NS(O)(=O)=O)[C@@H](O)O[C@H](COS(O)(=O)=O)[C@H]1O[C@H]1[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@H](C(O)=O)O1 OHJKXVLJWUPWQG-PNRHKHKDSA-N 0.000 claims abstract 2
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 claims abstract 2
- 150000002832 nitroso derivatives Chemical class 0.000 claims description 46
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 claims description 42
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 claims description 33
- GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N nitrous oxide Inorganic materials [O-][N+]#N GQPLMRYTRLFLPF-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 22
- 230000000968 intestinal effect Effects 0.000 claims description 9
- 210000003097 mucus Anatomy 0.000 claims description 9
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 claims description 8
- 150000003839 salts Chemical class 0.000 claims description 8
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 claims description 8
- 239000011734 sodium Substances 0.000 claims description 8
- 230000019635 sulfation Effects 0.000 claims description 8
- 238000005670 sulfation reaction Methods 0.000 claims description 8
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 claims description 7
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 claims description 7
- 159000000007 calcium salts Chemical class 0.000 claims description 4
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N Nitrous acid Chemical compound ON=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 3
- 239000012467 final product Substances 0.000 claims description 3
- 210000004072 lung Anatomy 0.000 claims description 3
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 claims description 2
- 238000005194 fractionation Methods 0.000 claims description 2
- 210000000056 organ Anatomy 0.000 claims description 2
- 229910052783 alkali metal Inorganic materials 0.000 claims 3
- 244000309464 bull Species 0.000 claims 1
- 239000003937 drug carrier Substances 0.000 claims 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 abstract description 7
- 239000000126 substance Substances 0.000 abstract description 6
- 239000003814 drug Substances 0.000 abstract description 5
- 125000000449 nitro group Chemical group [O-][N+](*)=O 0.000 abstract 3
- UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N borane Chemical compound B UORVGPXVDQYIDP-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 229910010277 boron hydride Inorganic materials 0.000 abstract 1
- MOOAHMCRPCTRLV-UHFFFAOYSA-N boron sodium Chemical compound [B].[Na] MOOAHMCRPCTRLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- 239000007795 chemical reaction product Substances 0.000 abstract 1
- 229910052751 metal Inorganic materials 0.000 abstract 1
- 239000002184 metal Substances 0.000 abstract 1
- VQTGUFBGYOIUFS-UHFFFAOYSA-N nitrosylsulfuric acid Chemical compound OS(=O)(=O)ON=O VQTGUFBGYOIUFS-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract 1
- HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M Sodium hydroxide Chemical compound [OH-].[Na+] HEMHJVSKTPXQMS-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 27
- XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N Ethyl acetate Chemical compound CCOC(C)=O XEKOWRVHYACXOJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 15
- 230000005855 radiation Effects 0.000 description 15
- ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N Formamide Chemical compound NC=O ZHNUHDYFZUAESO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 12
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 description 11
- 239000008213 purified water Substances 0.000 description 11
- YLKFDHTUAUWZPQ-UHFFFAOYSA-N N-Nitrosodi-n-propylamine Chemical compound CCCN(N=O)CCC YLKFDHTUAUWZPQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 10
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 10
- XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N Argon Chemical compound [Ar] XKRFYHLGVUSROY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 8
- 229960000899 nadroparin Drugs 0.000 description 8
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 8
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 238000009434 installation Methods 0.000 description 6
- NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M potassium iodide Chemical compound [K+].[I-] NLKNQRATVPKPDG-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 5
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N nitrogen Substances N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 5
- BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 3-azaniumyl-2-hydroxypropanoate Chemical compound NCC(O)C(O)=O BMYNFMYTOJXKLE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 229910052786 argon Inorganic materials 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 4
- 238000010908 decantation Methods 0.000 description 4
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 4
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 4
- 229940079593 drug Drugs 0.000 description 4
- QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N isopentane Chemical group CCC(C)C QWTDNUCVQCZILF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 4
- 239000012528 membrane Substances 0.000 description 4
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 4
- LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N n'-hydroxy-2-propan-2-ylsulfonylethanimidamide Chemical compound CC(C)S(=O)(=O)CC(N)=NO LNOPIUAQISRISI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 4
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 4
- OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N Calcium Chemical compound [Ca] OYPRJOBELJOOCE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000011575 calcium Substances 0.000 description 3
- 229910052791 calcium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000013068 control sample Substances 0.000 description 3
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 3
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 3
- 239000007788 liquid Substances 0.000 description 3
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 3
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 3
- UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L Calcium chloride Chemical compound [Cl-].[Cl-].[Ca+2] UXVMQQNJUSDDNG-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 229920002472 Starch Polymers 0.000 description 2
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 2
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 2
- 230000004071 biological effect Effects 0.000 description 2
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 2
- 239000001110 calcium chloride Substances 0.000 description 2
- 229910001628 calcium chloride Inorganic materials 0.000 description 2
- 238000012691 depolymerization reaction Methods 0.000 description 2
- AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N dimethyl butane Natural products CCCC(C)C AFABGHUZZDYHJO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009826 distribution Methods 0.000 description 2
- 238000012869 ethanol precipitation Methods 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 description 2
- 239000011859 microparticle Substances 0.000 description 2
- 239000000843 powder Substances 0.000 description 2
- 239000010453 quartz Substances 0.000 description 2
- 238000010992 reflux Methods 0.000 description 2
- 229940000204 reviparin sodium Drugs 0.000 description 2
- 239000013049 sediment Substances 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N silicon dioxide Inorganic materials O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000012086 standard solution Substances 0.000 description 2
- 239000008107 starch Substances 0.000 description 2
- 235000019698 starch Nutrition 0.000 description 2
- DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N tetraphosphorus decaoxide Chemical compound O1P(O2)(=O)OP3(=O)OP1(=O)OP2(=O)O3 DLYUQMMRRRQYAE-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000009281 ultraviolet germicidal irradiation Methods 0.000 description 2
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 238000004435 EPR spectroscopy Methods 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L Sulfate Chemical compound [O-]S([O-])(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 239000003513 alkali Substances 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 125000000129 anionic group Chemical group 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N atomic oxygen Chemical compound [O] QVGXLLKOCUKJST-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 238000010411 cooking Methods 0.000 description 1
- 229940018872 dalteparin sodium Drugs 0.000 description 1
- 230000018044 dehydration Effects 0.000 description 1
- 238000006297 dehydration reaction Methods 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 230000006866 deterioration Effects 0.000 description 1
- 230000001627 detrimental effect Effects 0.000 description 1
- 238000004090 dissolution Methods 0.000 description 1
- 239000003651 drinking water Substances 0.000 description 1
- 235000020188 drinking water Nutrition 0.000 description 1
- 238000011156 evaluation Methods 0.000 description 1
- 230000002349 favourable effect Effects 0.000 description 1
- 238000001914 filtration Methods 0.000 description 1
- 239000012530 fluid Substances 0.000 description 1
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 1
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 description 1
- 239000007789 gas Substances 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- 238000009776 industrial production Methods 0.000 description 1
- 238000010253 intravenous injection Methods 0.000 description 1
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 1
- 238000002156 mixing Methods 0.000 description 1
- 238000012544 monitoring process Methods 0.000 description 1
- 229950003543 nadroparin calcium Drugs 0.000 description 1
- 230000007935 neutral effect Effects 0.000 description 1
- 150000002823 nitrates Chemical class 0.000 description 1
- 239000012299 nitrogen atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000001301 oxygen Substances 0.000 description 1
- 229910052760 oxygen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000002572 peristaltic effect Effects 0.000 description 1
- 239000002504 physiological saline solution Substances 0.000 description 1
- 238000012545 processing Methods 0.000 description 1
- 239000012264 purified product Substances 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000002904 solvent Substances 0.000 description 1
- 238000005507 spraying Methods 0.000 description 1
- 239000007858 starting material Substances 0.000 description 1
- 230000003068 static effect Effects 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000010254 subcutaneous injection Methods 0.000 description 1
- 239000007929 subcutaneous injection Substances 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
- C08B37/0078—Degradation products
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
- A61P7/00—Drugs for disorders of the blood or the extracellular fluid
- A61P7/02—Antithrombotic agents; Anticoagulants; Platelet aggregation inhibitors
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Animal Behavior & Ethology (AREA)
- Hematology (AREA)
- Diabetes (AREA)
- Public Health (AREA)
- Veterinary Medicine (AREA)
- Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
- Pharmacology & Pharmacy (AREA)
- Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
- General Chemical & Material Sciences (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Medicines Containing Material From Animals Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
- Compounds Of Unknown Constitution (AREA)
Abstract
Изобретение может быть использовано в медицине и относится к гепаринам низкомолекулярной массы, полученным нитрозной деполимеризацией гепарина природного происхождения и содержащим нитрозосоединения в количестве, менее или равном 5•10-7 мг на мг продукта. Для удаления нитрозосоединений водный раствор гепарина низкомолекулярной массы обрабатывают ультрафиолетовыми лучами с длиной волны от 180 до 350 нм при температуре между 5 и 50oC и при pH между 3 и 8. При получении очищенного гепарина низкомолекулярной массы водный раствор натриевой соли гепарина природного происхождения концентрацией 5-15 мас./об.% обрабатывают раствором нитрита щелочного металла из расчета 1,5-6,9 мас. % нитрита по отношению к взятой соли гепарина. Указанную реакцию проводят в присутствии соляной кислоты при pH от 1 до 5 в течение времени от 20 до 50 мин до появления отрицательного теста на нитроионы. Полученный продукт восстанавливают добавлением боргидрида натрия в количестве 0,5-2,0 мас.% количества взятой соли гепарина. Избыток боргидрида разрушают соляной кислотой. Полученную реакционную среду нейтрализуют и осаждают из нее этанолом гепарин низкомолекулярной массы в виде натриевой соли. Водный раствор полученной натриевой соли обрабатывают ультрафиолетовыми лучами. При этом при получении продукта, содержащего нитрозосоединения в количестве, менее или равном 5•10-8 мг на мг продукта, обработанный ультрафиолетовыми лучами раствор направляют дополнительно на анионообменную колонку. Указанную колонку промывают водой при pH приблизительно 7. Рекуперируют конечный продукт осаждением хлористым натрием и этанолом. Фармацевтическая композиция на основе очищенного гепарина низкомолекулярной массы обладает антитромбозной активностью. Способ очистки гепарина низкомолекулярной массы от нитрозосоединений с помощью ультрафиолетового облучения позволяет сохранить его биологические и физико-химические свойства. 5 с. и 12 з.п. ф-лы, 2 ил., 2 табл.
Description
Настоящее изобретение относится к очищенным гепариновым фракциям и особенно к гепариновым фракциям, очищенным от всех нитрозных соединений, к способу их получения и к содержащей их фармкомпозиции.
В частности, настоящее изобретение относится к гепариновым фракциям, полученным нитрозодеполимеризацией, практически лишенным нитрозосоединений.
Известно, что гепариновые фракции получают путем нитрозной деполимеризации, как описано, например, в европейских заявках на патенты EP-A-0014184 и EP-A-0027089. Некоторые гепариновые фракции, полученные нитрозной деполимеризацией, являются активным началом и используются обычно под названием "гепарины низкого молекулярного веса" или "гепарины с низкой молекулярной массой". Более подробная информация о гепаринах с низким молекулярным весом, используемых в качестве активного начала, об их концентрации и степени сульфатирования, выраженной отношением сульфатов/карбоксилов, изложена в публикации "Гепарины с низкой молекулярной массой" (Фармевропа, октябрь 1991, N 3, стр. 161 - 165), а также в монографии, представленной для Европейской Фармакологии "Гепарины с низкой молекулярной массой", февраль 1993 (PA/PH/Exp. 3T (92) 93). Гепарины с низким молекулярным весом, полученные таким способом и используемые в качестве действующих начал, описаны в заявках на патент или в патентах, опубликованных под номерами Франция-A-2478646, Европа-A-0037319, Европа-Ф-0076279, Европа-A-0181259. Они известны под общими международными названиями (DCI): надропарин кальция, дальтепарин натрия, ревипарин натрия и представляют действующие начала лекарств, выпускаемых в продажу или потенциальных. А именно, ревипарин натрия представляет действующее начало лекарства КЛИВАРИН®, выпускаемого в продажу в Германии. Другие гепарины с низким молекулярным весом, полученные нитрозной деполимеризацией, также присутствуют в лекарствах, имеющихся в распоряжении Медицинской корпорации в Германии (МОНО-ЕМБОЛЕКС® NM), в Австрии (САНДОПАРИН® и TРОПАРИН®) и в Швейцарии (САНДОПАРИН®).
Способ нитрозной деполимеризации включает образование нелетучих нитрозосоединений (обозначаемых ниже соединениями N-NO или просто N-NO) путем присоединения группы -NO к нитрозируемым компонентам, присутствующим в гепарине или в его фракциях или фрагментах. Хотя количество нитрозосоединений, присутствующих во фракциях гепарина, очень небольшое и не наносит ущерба при их использовании в качестве медикаментов, все же получение этих продуктов в промышленном масштабе связано с манипуляцией с большим количеством порошков. Следовательно, полное или практически полное удаление нитрозосоединений улучшило бы характеристики гепаринов с низким молекулярным весом, которые используются в качестве действующих начал.
Способ нитрозной деполимеризации включает образование нелетучих нитрозосоединений (обозначаемых ниже соединениями N-NO или просто N-NO) путем присоединения группы -NO к нитрозируемым компонентам, присутствующим в гепарине или в его фракциях или фрагментах. Хотя количество нитрозосоединений, присутствующих во фракциях гепарина, очень небольшое и не наносит ущерба при их использовании в качестве медикаментов, все же получение этих продуктов в промышленном масштабе связано с манипуляцией с большим количеством порошков. Следовательно, полное или практически полное удаление нитрозосоединений улучшило бы характеристики гепаринов с низким молекулярным весом, которые используются в качестве действующих начал.
В случае гепаринов с низким молекулярным весом, у которых среднемолекулярная масса небольшая, как например, у продукта, который ниже будет назван СУ 222 (среднемолекулярная масса составляет от 1700 Da до 3000 Da), количество нитрозосоединений может быть выше количества этих соединений в продуктах, имеющих более высокую молекулярную массу. Этот продукт отвечает определению продуктов, заявленных в заявках на патенты и в патентах Франция-2478646 и в Европейском патенте 0037319, и может быть получен по описанным в них способам.
Следовательно, в высшей степени желательно, по изложенным выше причинам, иметь гепариновые фракции, полученные нитрозной деполимеризацией, практически лишенные нитрозосоединений.
Известен способ удаления нитратов из питьевой воды с одновременной стерилизацией воды путем облучения ультрафиолетовыми лучами при длине волны ниже 200 нм, преимущественно 185 нм, и при щелочном pH (см. статью P.PRINCZ и др. , Water Supply 1988, 6, 199-205).
Однако, если облучение ультрафиолетовыми лучами применить к биологически активному продукту, то невозможно предвидеть пагубного влияния на его биологические и/или физико-химические свойства.
Заявитель разработал способ очистки гепариновой фракции от нитрозосоединений с использованием ультрафиолетового облучения, который позволяет сохранить биологические и физико-химические свойства.
Таким образом, по одному из аспектов, настоящее изобретение относится к гепариновым фракциям, полученным нитрозной деполимеризацией, в которых общее количество нитрозосоединений ниже или равно 500 частей на биллион, преимущественно, ниже или равно 150 ч/блн и даже ниже или равно 100 ч/блн, в частности, равно 50 ч/блн, причем количество 50 ч/блн представляет собой минимально определяемое количество при настоящем уровне знаний. Вышеназванные фракции представляют собой преимущественно гепарины с низким молекулярным весом и имеют остаточное содержание нитрозосоединений, равное или ниже, чем в природных гепаринах.
Предпочтительно, гепарин с низким молекулярным весом, очищенный согласно изобретению, полученный нитрозной деполимеризацией гепарина природного происхождения, преимущественно, происходящего из кишечной слизи свиньи, из легкого быка или из тканей или органов различных животных, имеет следующие характеристики: среднемолекулярная масса ниже 8000 Da; по меньшей мере, 60% всех компонентов имеет молекулярную массу ниже 8000 Da; активность антифактора Xa не ниже 60 межд. ед./мг; отношение активности антифактора Xa/антифактора 11a не ниже 1,5; количество всех нитрозосоединений равно или ниже 500 ч/блн, преимущественно ниже 150 ч/блн, еще предпочтительнее ниже 50 ч/блн, и находится в виде фармацевтически приемлемой соли, преимущественно соли натрия или кальция.
Активность антифактора Xa и отношение активности антифактора Xa/антифактора 11a определяют по сравнению с международным эталоном гепаринов низкого молекулярного веса; ссылка OMS 1-85/600.
Вышеназванная молекулярная масса определяется по методу, описанному в монографии, представленной для Европейской Фармакопеи (см. ссылку выше).
Под выражением "лишенные всех нитрозосоединений" понимают фракции гепарина низкого молекулярного веса, получаемые нитрозной деполимеризацией и содержащие не больше 500 ч/блн, или не больше 150 ч/блн, особенно не больше 100 ч/блн, в том числе не больше 50 ч/блн всех нитрозосоединений. Под термином "компоненты" понимают все молекулы, которые входят в состав гепарина низкого молекулярного веса.
Гепарины низкого молекулярного веса, лишенные всех нитрозосоединений, согласно изобретению, в основном состоят из 2-0-сульфо-α-L-идопиранозуроновой структуры с невосстанавливающимся концом, из структуры 6-0-сульфо-2,5-ангидро-D-маннитола с восстанавливающимся концом и имеют степень сульфатирования, которая не отличается значительно от степени сульфатирования нефракционированного гепарина природного происхождения. Эта степень сульфатирования составляет между 2 и 2,5, преимущественно, между 2,0 и 2,3.
Предпочтительные гепарины низкого молекулярного веса, согласно изобретению, имеют такое распределение молекулярных масс, при котором 90% их компонентов имеют молекулярную массу между 2000 Da и 10000 Da, преимущественно, между 2000 Da и 9000 Da , предпочтительно, между 2000 и 8000 Da. Кроме того, эти гепарины имеют преобладающую молекулярную массу между 3000 Da и 6000 Da, преимущественно, между 4000 Da и 5000 Da.
Другой предпочтительный гепарин с низким молекулярным весом имеет преобладающую молекулярную массу между 1700 Da и 3000 Da, при этом 90% всех компонентов имеет распределение молекулярных масс между 1000 Da и 8000 Da.
Термином "преобладающая молекулярная масса" обозначают молекулярную массу компонентов гепарина, которая соответствует пику хроматографического профиля, полученного эксклюзивной хроматографией, используя детектор УФ при λ = 205 нм.
Очищенный продукт СУ 22, представляющий собой соль натрия деполимеризованного гепарина, полученного деполимеризацией с азотистой кислотой гепарина природного происхождения, выделенного из слизи кишечника свиньи, имеет преобладающую молекулярную массу, распределенную между 1700 Da и 3300 Da, причем 90% компонентов имеют молекулярную массу, распределенную между 1000 Da и 8000 Da; 2-0-сульфо-α-L- идопиранозуроновую структуру с невосстанавливающимся концом и структуру 6-0-сульфо-2,5-ангидро-D-маннитола с восстанавливающимся концом у большинства компонентов; степень сульфатирования приблизительно 2,1; активность антифактора Xa 60-80 межд.ед/мг; активность антифактора 11a не выше 25 межд.ед./мг, более точно 14-15 межд.ед./мг; количество всех нитрозосоединений ниже или равно 100 ч/блн (1•10-7 мг нитрозосоединений на 1 кг продукта), преимущественно, ниже или равно 50 ч/блн (5 • 10-8 мг нитрозосоединений на мг продукта), этот продукт представляет собой фракцию гепарина, предпочитаемую по настоящему изобретению.
Фракции гепарина, лишенные всех нитрозосоединений (гепарины низкого молекулярного веса), настоящего изобретения получают по способу, описанному ниже.
Таким образом, предложен способ получения гепариновых фракций, содержащий не больше 500 ч/блн всех нитрозосоединений, заключающийся в том, что водный раствор гепариновой фракции, полученной нитрозной деполимеризацией, подвергают облучению ультрафиолетовыми лучами.
В качестве исходного продукта можно использовать любую гепариновую фракцию, полученную нитрозной деполимеризацией. Подобный исходный продукт содержит обычно общее количество нитрозосоединений между 1000 и 20000 ч/блн.
Определение всех нитрозосоединений осуществляют по методу B.Pignatelli и др. , описанному в Analyst, сентябрь 1989, 114, стр. 1103-1108 и в Analyst, июль 1987, 112, стр. 945-949, применяемому к гепарину и его фракциям, преимущественно к гепаринам низкого молекулярного веса.
Способ настоящего изобретения можно проводить на гепарине с низким молекулярным весом фармацевтического качества, растворенном в воде, или же во время промышленного изготовления после стадии нитрозной деполимеризации и перед выделением чистого продукта фармацевтического качества. Преимущественно используют гепарин с низким молекулярным весом фармацевтического качества.
Таким образом, в качестве сырья для способа настоящего изобретения можно использовать любой гепарин низкого молекулярного веса, полученный нитрозной деполимеризацией. Чтобы получать максимальную эффективность способа, выгодно использовать растворы деполимеризованного гепарина, лишенные суспендированных микрочастиц. Присутствие этих микрочастиц может быть вызвано плохим растворением деполимеризованного гепарина, или различными примесями, или же остатками реактивов, используемых при деполимеризации или при очистке. Следовательно, различные растворы деполимеризованного гепарина подвергают преимущественно предварительному фильтрованию.
Способ настоящего изобретения является необыкновенно эффективным и гибким, так как он позволяет удалять нитрозосоединения простым, быстрым и безопасным методом. Кроме того, способ изобретения не влечет за собой никакого изменения в структуре гепариновой фракции, биологические свойства и физико-химические характеристики которой остаются строго идентичными.
Способ настоящего изобретения может быть осуществлен, подвергая водный раствор гепариновой фракции, полученной в результате нитрозной деполимеризации, преимущественно гепарина низкого молекулярного веса с концентрацией 5 - 15 мас./об.%, облучению УФ при длине волны от 180 до 350 нм, преимущественно, 254 нм, при температуре от 5 до 50oC, преимущественно, от 15 до 35oC, преимущественно, при комнатной температуре.
Величина pH раствора слегка кислая или слегка щелочная, а именно: между 3 и 8, преимущественно, между 5 и 8.
Время облучения зависит от используемой установки для облучения, от мощности излучения и от количества удаляемых нитрозосоединений, присутствующих в гепариновой фракции. Оно составляет приблизительно от 2 до 30 мин, хотя после 9 - 15 мин обычно получается почти полная очистка.
В качестве установки для облучения УФ можно предусмотреть или статическую установку или динамическую установку, позволяющую растворам гепариновых фракций циркулировать вокруг источника ультрафиолетового излучения. Предпочитают динамические установки. В этом последнем случае источник ультрафиолетового излучения может быть присоединен к цилиндрической трубе (аппарат типа "закрытый") или к каналу (аппарат типа "открытый"). В качестве аппарата "закрытого" типа можно использовать стерилизатор UV JRI-50 (КАТАДИН) или любой другой эквивалентный аппарат.
Фиг. 1 представляет в разрезе аппарат "закрытого" типа. Этот аппарат состоит из лампы ультрафиолетового излучения (1), вокруг которой установлен кварцевый кожух (2). Растворы, содержащие гепарины низкого молекулярного веса, циркулируют вокруг лампы ультрафиолетового излучения, защищенной кварцевым кожухом (поток циркулирующей жидкости (3)). Их вводят через вход (4), расположенный на уровне одного из концов лампы ультрафиолетового излучения, выход (5) расположен на другом конце лампы ультрафиолетового излучения.
Когда используют динамическую установку, скорость растворов гепариновой фракции, с которой они циркулируют вокруг источника ультрафиолетового излучения, должна быть отрегулирована таким образом, чтобы получить продолжительность излучения, необходимую для удаления нитрозосоединений. Регулируемыми параметрами являются диаметр потока циркулирующей жидкости, размер и/или мощность источника ультрафиолетового излучения, концентрация гепариновой фракции в водном растворе и количество нитрозных удаляемых соединений, содержащееся в этой фракции.
Гепариновая фракция или преимущественно гепарин низкого молекулярного веса, лишенная всех нитрозосоединений, полученная таким образом, может быть рекуперирована традиционными методами.
Когда в качестве исходного продукта используют гепарин низкого молекулярного веса фармацевтического качества, достаточно растворить продукт в воде, установить величину pH раствора между 3 и 8, преимущественно между 5 и 8, и обработать этот раствор согласно способу настоящего изобретения.
В качестве исходного продукта можно использовать также нефракционированный гепарин природного происхождения, целесообразно в форме соли, а именно: натриевый гепарин, преимущественно получающийся из кишечной слизи свиньи. В этом случае, способ настоящего изобретения заключается в еще одной стадии получения конечного продукта, лишенного всех нитрозосоединений, осуществляемый после нитрозной деполимеризации. Этот способ представляет собой другой аспект настоящего изобретения.
Согласно этому аспекту настоящего изобретения предложен способ получения гепарина низкого молекулярного веса, имеющего общее количество нитрозосоединений, ниже или равное 500 ч/блн, преимущественно, ниже или равное 150 ч/блн, преимущественно, ниже или равное 100 ч/блн, еще предпочтительнее, ниже или равное 50 ч/блн, отличающийся тем, что (а) обрабатывают нефракционированный гепариновый раствор натрия в воде с концентрацией 5 - 15% масса/объем раствором щелочного нитрита, преимущественно нитрита натрия из расчета от 15 до 69 г нитрита на 1 кг использованного гепарина, в присутствии соляной кислоты с величиной pH от 1 до 5, преимущественно, от 1,5 до 4, в течение от 20 до 50 мин и подвергают полученный таким путем продукт восстановлению, преимущественно в щелочной среде при помощи 5-20 г борогидрида натрия на 1 кг исходного гепарина, устраняют избыток борогидрида натрия соляной кислотой, нейтрализуют, в случае необходимости, реакционную среду и осаждают этанолом, затем, в случае необходимости, подвергают полученный таким путем гепарин низкого молекулярного веса одному или нескольким спиртовым фракционированиям; (б) подвергают полученный таким путем раствор действию ультрафиолетового излучения; (в) производят, в случае необходимости, очистку хроматографией и выделяют деполимеризованный натриевый гепарин, очищенный и лишенный всех нитрозосоединений, осаждением хлористым натрием и этанолом и, в случае необходимости; (г) превращают натриевую соль в другую фармацевтически приемлемую соль, преимущественно соль кальция.
По предпочтительному аспекту, настоящее изобретение относится к способу получения очищенного продукта СУ 222, представляющего собой натриевую соль деполимеризованного гепарина, полученного деполимеризацией с азотистой кислотой гепарина природного происхождения, извлеченного из кишечной слизи свиньи, имеющего преобладающую молекулярную массу, распределенную между 1700 Da и 3300 Da; 90% компонентов имеют молекулярную массу между 1000 Da и 8000 Da; 2-0-сульфо-α-L-идопиранозуроновую структуру с невосстанавливающимся концом и структуру 6-0-сульфо-2,5-ангидро-D-маннитола с восстанавливающимся концом у большинства своих компонентов; степень сульфатирования приблизительно 2,1; активность антифактора Xa 60-80 межд.ед./мг; активность антифактора 11a не выше 25 межд.ед./мг; содержание нитрозосоединений ниже или равно 100 ч/блн, преимущественно, ниже или равно 50 ч/блн.
Вышеназванный способ отличается тем, что (а) обрабатывают водный гепариновый раствор натрия природного происхождения, не разделенный на фракции, соляной кислотой и количеством щелочного нитрита, составляющим от 3,5 до 4 вес. % по отношению к использованному гепарину, поддерживая кислую величину pH и следя за присутствием азотистых ионов до отрицательной реакции, затем подщелачивают, восстанавливают борогидридом натрия и выделяют из нейтральной среды деполимеризованный продукт путем осаждения этанолом, затем (б) пропускают водный раствор полученного таким путем продукта при pH приблизительно 7 под установкой ультрафиолетового излучения при 254 нм, вводят затем полученный таким путем раствор в верхнюю часть анионообменной колонки и, после промывки колонки водой и при pH приблизительно 7, рекуперируют конечный продукт осаждением хлористым натрием и этанолом.
На стадии (а) используют в качестве щелочного нитрита нитрит натрия в вышеописанных пропорциях.
Преимущественно, на стадии (б) способа установка ультрафиолетового излучения снабжена лампой 16 Вт, и время выдержки под действием ультрафиолетового излучения при 254 нм составляет приблизительно 9-15 минут. Предпочитают динамическую установку ультрафиолетового излучения и особенно аппарат "закрытого" типа. Выгодная концентрация растворов, подвергаемых ультрафиолетовому излучению, составляет 8-12 мас./об.%.
Настоящее изобретения относится также к фармацевтической композиции, содержащей в качестве действующего начала очищенную гепариновую фракцию, лишенную всех нитрозосоединений, преимущественно очищенный гепарин низкого молекулярного веса, лишенный всех нитрозосоединений, который описан выше.
В композиции по настоящему изобретению гепариновая фракция находится в форме лиофилизата или в виде раствора для подкожной инъекции, в стерильном биологически приемлемом растворителе, таком как вода, или в физиологическом растворе, в ампулах, в пузырьках, в шприцах, предварительно наполняемых, или в приспособлениях для самоинъекции типа "перо". Каждая единичная доза фармацевтических составов может содержать от 50 до 50000 (международных единиц) антифактора Xa.
Гепариновые фракции по изобретению можно вводить также путем внутривенных инъекций одни или в смеси с другими действующими началами. Их можно также вводить путем распыления в нос или в легкие.
Фармацевтический состав, предпочитаемый по настоящему изобретению, содержит в качестве действующего начала продукт СУ 222, лишенный всех нитрозосоединений, в единичной дозе, содержащей от 10 до 5000 мг СУ 222 в форме соли натрия.
Как было указано выше, определение всех нитрозосоединений по методу B. Pignatelly и др., описанному в Analyst, сентябрь 1979, 114, стр. 1103-1108 и в Analyst, июль 1987, 112, стр. 945-949, применяемому к гепарину и к гепарину низкого молекулярного веса.
Аналитический метод.
Анализируемые продукты представляют преимущественно порошок, следовательно, в случае определения всех нитрозосоединений, присутствующих в растворе, сначала производят лиофилизацию вышеназванного раствора и затем анализируют лиофилизованный образец.
1. - Реактивы
На 100 мг гепариновой фракции использовали следующие реактивы: этилацетат, обработанный сульфаминовой кислотой, концентрация 20 мас./об.% (раствор 200 г сульфаминовой кислоты в 1000 мл этилацетата, перемешиваемый в течение 3 дней и фильтруемый на бумаге перед использованием); 15%-ная бромистоводородная кислота в уксусной кислоте (маленькие флаконы янтарного цвета с полиэтиленовой пробкой, содержащие 5 мл 30%-ной бромистоводородной кислоты, закрытые в атмосфере азота и хранимые в темноте. В момент применения добавляют 5 мл чистой уксусной кислоты, перемешивают и хранят в маленьком контейнере в темноте. Используют 1 флакон на серию дозировок); 95%-ный формамид, обработанный сульфаминовой кислотой, концентрация 5 мас./об.% (раствор 1 г сульфаминовой кислоты в 20 мл формамида, содержащий 5% очищенной воды).
На 100 мг гепариновой фракции использовали следующие реактивы: этилацетат, обработанный сульфаминовой кислотой, концентрация 20 мас./об.% (раствор 200 г сульфаминовой кислоты в 1000 мл этилацетата, перемешиваемый в течение 3 дней и фильтруемый на бумаге перед использованием); 15%-ная бромистоводородная кислота в уксусной кислоте (маленькие флаконы янтарного цвета с полиэтиленовой пробкой, содержащие 5 мл 30%-ной бромистоводородной кислоты, закрытые в атмосфере азота и хранимые в темноте. В момент применения добавляют 5 мл чистой уксусной кислоты, перемешивают и хранят в маленьком контейнере в темноте. Используют 1 флакон на серию дозировок); 95%-ный формамид, обработанный сульфаминовой кислотой, концентрация 5 мас./об.% (раствор 1 г сульфаминовой кислоты в 20 мл формамида, содержащий 5% очищенной воды).
2. Приготовление растворов-эталонов и анализируемого образца.
Раствор-эталон N-нитрозо-ди-н-пропиламина (NДПА).
Впрыскивают 78,62 г чистого этанола во флакон ISOPAC Сигма, содержащий 1 г N-нитрозо-ди-н-пропиламина, через мембрану. Концентрация составляет 10000 ч/млн NДПА (3379 ч/млн N-NO). Затем разбавляют на 1/100 чистым этанолом и разливают аликвотными частями по 0,5 мл в маленькие закрытые крышками флаконы. Концентрация составляет 100 ч/млн NДПА. Хранят в темноте и при +4oC.
*Раствор-эталон с низкой степенью разбавления: в момент применения производят разбавление на 1/100 в этаноле, затем на 1/17 в обработанном формамиде. Концентрация будет 0,0588 ч/млн NДПА или 19,9 ч/млн N-NO.
*Раствор-эталон со средней степенью разбавления: в момент применения производят разбавление на 1/61 в этаноле, затем на 1/11 в обработанном формамиде. Концентрация будет 0,149 ч/млн NДПА или 50,4 ч/млн N-NO.
*Раствор-эталон с высокой степенью разбавления: в момент применения производят разбавление на 1/10 в этаноле, затем на 1/10 в обработанном формамиде. Концентрация будет 1 ч/млн NДПА или 338 ч/млн N-NO.
Анализируемый образец.
Сушат образцы гепариновой фракции 12 часов при 60oC в вакууме, в атмосфере фосфорного ангидрида. Растворяют 100 мг гепариновой фракции в 1 мл обработанного формамида и перемешивают 30 минут в вибрационном смесителе.
3. Используемая аппаратура
Используемая аппаратура показана на фиг. 2.
Используемая аппаратура показана на фиг. 2.
Аппарат состоит из шаровидного сосуда объемом 500 мл из жаростойкого стекла (1) с установленным над ним холодильником двойного действия (2), охлаждаемого до -15oC. Холодильник соединен с тремя барботерами, установленными последовательно (3), содержащими каждый 30 мл 30%-ной гидроокиси натрия. Эти последние соединены с двумя охлаждаемыми ловушками, установленными последовательно, в одной находится этанол в расплавленном состоянии при -120oC (4), а в другой - изопентан в расплавленном состоянии при -160oC (5).
Ловушки соединены с химическим люминесцентным детектором (TEA) модель 610 (Thermedics Detection INC.) или с аналогичным устройством (6). Детектор присоединен к интегратору/самописцу (7).
Шаровидный сосуд снабжен, с одной стороны, пробкой со сквозным отверстием (8), позволяющим вводить трубку, через которую подают поток аргона, а с другой стороны, винтовым притиром, снабженным пробкой, что позволяет фиксировать мембрану типа CPQ (9), через которую вводят образец. Поток аргона и вакуум, создаваемый вакуум-насосом TEA, подают газы к TEA.
4. Рабочий протокол.
4.1. Регулирование детектора.
TEA регулируют по инструкциям изготовителя, чтобы получать максимальные чувствительность и воспроизводимость.
За час перед дозировкой открывают кислород, устанавливают давление 2 бар, регулируют расход до 0,02 по расходомеру TEA 610 (Thermedics DetectionINC).
4.2. Приготовление ловушек со щелочью натрия.
Наполняют каждую ловушку 30 мл 30%-ной гидроокиси натрия.
4.3. Приготовление холодных ловушек.
Ловушка при - 120oC: в сосуд Дьюара, содержащий 250 мл этанола, наливают, перемешивая при помощи деревянной шпатели, жидкий азот до получения пасты.
Ловушка при -160oC: в сосуд Дьюара, содержащий 250 мл изопентана, медленно наливают, перемешивая при помощи деревянной шпатели, жидкий азот до получения пасты.
Две ловушки из стекла размещены в своих соответствующих сосудах Дьюара и присоединены к системе циркуляции.
4.4. Дегидратация системы шаровидный сосуд-холодильник.
Нагревают до флегмы 50 мл этилацетата в течение 1 часа в атмосфере аргона без присоединения к TEA.
4.5. Реакция и дозировка.
В новый чистый и сухой шаровидный сосуд, снабженный мембраной, вводят 30 мл обработанного этилацетата и устанавливают его под холодильником (криостат должен быть включен за 2 часа до - 15oC), устанавливают нагревательный шаровидный сосуд и нагревают (позиция 4). Присоединяют трубку для аргона, регулируют расход до 0,1 л/мин и контролируют герметичность всей цепи. Только присоединение к TEA остается открытым, чтобы избежать избыточного давления. Когда этилацетат нагрет до состояния флегмы, очень осторожно создают вакуум и одновременно ограничивают подачу к TEA. Вакуум устанавливается во всей цепи и достигает 2-4 мм рт. ст., когда система находится в равновесии. Устанавливают нулевой уровень TEA при 10% полной шкалы интегратора/самописца.
Через мембрану последовательно впрыскивают 0,5 мл очищенной воды, 2 мл разбавленной бромистоводородной кислоты, затем снова 2 мл разбавленной бромистоводородной кислоты, между каждым впрыскиванием проверяют возврат на базовую линию интегратора/самописца. После вспрыскивания реактивов в шаровидный сосуд ожидают возврата на базовую линию и впрыскивают 50 мкл эталона или образца. Между каждым впрыскиванием ожидают возврата на базовую линию. При дозировках используют 5 образцов на 2 эталона и действуют таким образом, чтобы полная реализация способа продолжалась не более 60 минут.
4.6.- Оценка всех нитрозных соединений.
Количество N-NO в ч/блн, вычисленное по формуле
где Cs - концентрация эталона в ч/блн NДПА (0,0588 или 0,149 или 1 ч/млн);
0,05 - (числитель) - взят из опыта с эталоном (мл);
44 - масса молекулы N-NO;
1000 - перевод ч/млн в ч/блн;
0,05 (заменитель) - взят из опыта с образцом (мл);
0,1 - взят из опыта с образцом (г);
130,2 - масса молекулы NДПА.
где Cs - концентрация эталона в ч/блн NДПА (0,0588 или 0,149 или 1 ч/млн);
0,05 - (числитель) - взят из опыта с эталоном (мл);
44 - масса молекулы N-NO;
1000 - перевод ч/млн в ч/блн;
0,05 (заменитель) - взят из опыта с образцом (мл);
0,1 - взят из опыта с образцом (г);
130,2 - масса молекулы NДПА.
Следующие примеры иллюстрируют изобретение.
Пример 1. Получение очищенного надропарина кальция, имеющего содержание всех нитрозированных производных ниже 100 ч/блн.
Стадия А. Деполимеризация и фракционирование этанола.
В реакторе растворяют 20 кг гепарина натрия, получающегося из кишечной слизи свиньи, в очищенной воде до конечной концентрации около 10,3 мас./об. %. Доводят величину pH раствора до 2,5 при помощи концентрированной соляной кислоты.
Вводят в реактор 572 г нитрита натрия, поддерживая величину pH при 2,5 посредством концентрированной соляной кислоты.
За реакцией деполимеризации следят при помощи индикаторной бумаги с крахмалосодержащим йодистым калием. Реакцию заканчивают, когда тест на бумагу отрицательный. Доводят величину pH реакционного раствора до 10 при помощи концентрированной гидроокиси натрия, затем добавляют 200 г борогидрида натрия. Перемешивают в течение 15 часов, затем устанавливают pH между 4 и 3,5 при помощи концентрированной соляной кислоты, чтобы разрушить избыток борогидрида. Затем доводят pH до 7 добавлением концентрированной гидроокиси натрия. Потом осаждают, добавляя 2 объема этанола на 1 объем водного раствора. Производят декантацию, затем удаляют водно-спиртовую надосадочную жидкость. Растворяют осадок в 400 литрах очищенной воды. Добавляют к этому раствору хлористый натрий до получения электрической проводимости около 20000 мкS/см. Затем доводят pH до величины около 4 при помощи концентрированной соляной кислоты и добавляют к раствору при перемешивании 1 объем абсолютного этанола. Производят декантацию в течение приблизительно 60 часов, затем удаляют водно-спиртовую надосадочную жидкость. Таким путем получают надропарин в форме соли натрия.
Потом растворяют осадок в очищенной воде до получения раствора с концентрацией около 18 мас./об.% на основе исходного количества гепарина натрия, доводят величину pH до 7 при помощи концентрированной гидроокиси натрия. Затем фильтруют раствор в установке, снабженной фильтрующими элементами с пористостью 0,2 мкм. Отбирают из фильтрованного раствора, содержащего надропарин натрия, образец, который не будет обработан по способу, описанному на стадии В (обработка ультрафиолетовыми лучами). Этот образец называют контрольным.
Стадия B. Обработка ультрафиолетовыми лучами.
Для обработки ультрафиолетовыми лучами используют трубку Катадина JRI-50 с полезным объемом 750 мл. Рабочая длина волны обработки 254 нм. Предварительно устанавливают при помощи перистальтического насоса и очищенной воды пропускную способность (4800 мл/ч), адекватную тому, чтобы при прохождении без рециркуляции полное время выдержки под действием ультрафиолетовых лучей составило приблизительно 9 минут. Затем вводят обрабатываемый раствор надропарина натрия и промывают линию очищенной водой до полной рекуперации обработанного продукта в сборнике, который находится на выходе из трубки Катадина JRI-50.
Стадия C. Очистка хроматографией и превращение в кальциевую соль.
Очищают раствор надропарина, полученный на предыдущей стадии, на анионовой колонке (0,5 л/кг используемого гепарина натрия). Устанавливают электрическую проводимость собранных эффлюентов на уровне 10000-20000 мкS/см с помощью хлористого натрия и добавляют затем 1,5 объема этанола. Проводят декантацию приблизительно 41 час, затем удаляют надосадочную жидкость.
Растворяют осадок в очищенной воде (K=18 мас./об.% на основе используемого количества гепарина натрия) и добавляют гексагидратированный хлорид кальция (9,63 г/г введенного гепарина натрия). Затем производят осаждение этанолом, добавляя 1,5 объема этанола. Повторяют стадию солеобразования при помощи гексагидратированного хлорида кальция и стадию очистки путем осаждения этанолом. Полученный осадок сушат при температуре, не превышающей 60oC.
Таким путем получают партию 1.
Контрольную партию, полученную на стадии A, обрабатывают также по способу, описанному на этой стадии C, и выделяют контрольную партию надропарина кальция.
На образце партии 1 и партии "контрольного образца" надропарина кальция осуществляют физико-химические анализы и дозировки для определения биологической активности.
Различные результаты даны в табл. I и II (см. табл. I и II в конце описания)
Результаты, приведенные в табл. I и II, показывают, что обработка ультрафиолетовыми лучами не вызывает никакого ухудшения надропарина. В самом деле, различные физико-химические и биологические характеристики партии I, такие как хроматографический профиль продукта, количество различных примесей, активность антифактора Xa и активность антифактора 11a идентичны характеристикам контрольного образца, не обработанного ультрафиолетовыми лучами, за одним исключением. Количество всех нитрозосоединений необработанного контрольного образца составляет приблизительно в 60 раз выше, чем количество всех нитрозосоединений партии I, которая была подвергнута обработке ультрафиолетовыми лучами.
Результаты, приведенные в табл. I и II, показывают, что обработка ультрафиолетовыми лучами не вызывает никакого ухудшения надропарина. В самом деле, различные физико-химические и биологические характеристики партии I, такие как хроматографический профиль продукта, количество различных примесей, активность антифактора Xa и активность антифактора 11a идентичны характеристикам контрольного образца, не обработанного ультрафиолетовыми лучами, за одним исключением. Количество всех нитрозосоединений необработанного контрольного образца составляет приблизительно в 60 раз выше, чем количество всех нитрозосоединений партии I, которая была подвергнута обработке ультрафиолетовыми лучами.
Кроме того, результаты анализов методом электронного парамагнитного резонанса подтверждают, что обработка ультрафиолетовыми лучами не вызывает выделения свободных радикалов.
Пример 2. Получение СУ 222 натриевой соли, имеющей общее количество нитрозосоединений ниже 50 ч/блн.
Стадия A. Деполимеризация.
В реакторе растворяют 250 г гепарина натрия, получающегося из кишечной слизи свиньи, в очищенной воде с получением конечной концентрации около 10,3 мас. /об. %. Доводят pH до 2,5 при помощи концентрированной соляной кислоты. Вводят в реактор 9,49 г нитрита натрия, поддерживая pH при 2,5. Следят за реакцией деполимеризации при помощи теста с индикаторной бумагой с крахмалосодержащим йодистым калием. Реакцию заканчивают, когда тест с бумагой отрицательный. Устанавливают величину pH реакционного раствора между 10 и 10,5 при помощи концентрированной гидроокиси натрия, добавляют 2,5 г борогидрида натрия. Оставляют смесь при перемешивании в течение 15 часов, затем регулируют величину pH между 3,5 и 4 при помощи концентрированной соляной кислоты, чтобы разрушить избыток борогидрида. Доводят величину pH до 7 введением концентрированной гидроокиси натрия. Затем осаждают, добавляя 2 объема этанола на 1 объем раствора. Производят декантацию осадка и удаляют надосадочную жидкость. Таким путем получают СУ 222 в форме натриевой соли. Полученный продукт содержит между 3000 и 10000 ч/блн всех нитрозосоединений (результаты 3-х препаратов).
Стадия B. Обработка ультрафиолетовыми лучами.
Растворяют продукт, полученный на предшествующей стадии, в очищенной воде для получения конечного раствора с концентрацией приблизительно 10% масса/объем на основе введенного количества гепарина натрия, доводят pH до 7 при помощи соляной кислоты или гидроокиси натрия. Отрегулировав пропускную способность насоса, пропускают полученный таким путем раствор под установкой ультрафиолетового излучения при 254 нм (система Катадина JRI-50, снабженная лампой 16 Вт). Продолжительность экспозиции под действием ультрафиолетовых лучей составляет от 9 до 15 минут.
Стадия C. Очистка хроматографией и конечные осаждения.
Очищают раствор, полученный после обработки ультрафиолетовыми лучами, на хроматографической колонке, содержащей минимально 2 л анионообменной смолы на 1 кг введенного гепарина натрия. Устанавливают электрическую проводимость собранных эффлюентов на уровне 30-35 мS/см при помощи хлористого натрия и доводят их pH до 7 при помощи соляной кислоты. Затем добавляют 2 объема этанола на 1 объем водного раствора. Производят декантацию осадка и удаляют надосадочную жидкость. Растворяют осадок в очищенной воде, чтобы получить конечный раствор с концентрацией 20% масса/объем на основе исходного количества гепарина натрия, доводят электрическую проводимость раствора до 30-35 мS/см при помощи хлористого натрия и величину pH устанавливают между 7-7,5 при помощи концентрированной соляной кислоты или концентрированной гидроокиси натрия. Затем осаждают раствор 2 объемами абсолютного этанола и производят декантацию. Собирают осадок, промывают его этанолом и сушат при температуре, не превышающей 60oC. Таким путем получают СУ 222, чистый, определяемый как натриевая соль деполимеризованного гепарина, полученного деполимеризацией нитрокислотой гепарина кишечной слизи свиньи, имеющего преобладающую молекулярную массу, распределенную между 1700 Da и 3300 Da, из которых 90% компонентов имеют молекулярную массу между 1000 Da и 8000 Da; 2-0-сульфо-α-L-идопиранозуроновую структуру на невосстанавливающемся конце и структуру 6-0-сульфо-2,5-ангидро-D-маннитола на восстанавливающемся конце большинства своих компонентов; степень сульфатирования приблизительно 2,1; активность антифактора Xa 60-80 межд.ед./мг; активность антифактора 11a не выше 25 межд. ед./мг, особенно 10-15 межд.ед./мг; содержание нитрозосоединений ниже 50 ч/блн.
Claims (17)
1. Гепарин низкомолекулярной массы, полученный нитрозной деполимеризацией гепарина природного происхождения, отличающийся тем, что он содержит нитрозосоединения в количестве, менее или равном 5 • 10-7 мг на мг продукта.
2. Гепарин по п. 1, отличающийся тем, что представляет собой продукт нитрозной деполимеризации гепарина природного происхождения, извлеченного из кишечной слизи свиньи или легкого быка, или из тканей или других органов животных, в виде фармацевтически приемлемой соли и имеет следующие характеристики: средняя молекулярная масса менее 8000 Да; по меньшей мере 60% компонентов продукта имеют среднюю молекулярную массу менее 8000 Да; активность антифактора ХА не менее 60 МЕ/мг; отношение активности антифактора ХА к активности антифактора IIа не менее 1,5.
3. Гепарин по п. 1 или 2, отличающийся тем, что он представляет собой продукт в виде соли натрия или соли кальция.
4. Гепарин по любому из пп.1 - 3, отличающийся тем, что он представляет собой продукт деполимеризации азотистой кислотой гепарина природного происхождения, извлеченного из кишечной слизи свиньи, в виде соли натрия и имеет следующие характеристики: преобладающая молекулярная масса между 1700 и 3000 Да; 90% компонентов фракции имеют среднюю молекулярную массу между 1000 и 8000 Да; большинство компонентов имеют 2-0-сульфо-альфа-L-идопиранозуроновую структуру с инертной концевой группой или структуру 6-0-сульфо-2,5-ангидро-D-маннитола с реакционноспособной концевой группой; степень сульфатирования приблизительно 2,1; активность антифактора ХА 60 - 80 МЕ/мг; активность антифактора IIа не выше 25 МЕ/мг и содержит нитрозосоединения в количестве, менее или равном 1 • 10-7 мг нитрозосоединений на мг продукта.
5. Гепарин по любому из пп.1 - 4, отличающийся тем, что он содержит нитрозосоединения в количестве, менее или равном 5 • 10-8 мг на мг продукта.
6. Способ удаления нитрозосоединений посредством ультрафиолетовой обработки, отличающийся тем, что водный раствор гепарина низкомолекулярной массы, полученный нитрозной деполимеризацией раствора гепарина природного происхождения концентрацией 5 - 15 мас./об.%, обрабатывают ультрафиолетовыми лучами с длиной волны от 180 до 350 нм при температуре 5 - 50oС и при рН между 3 и 8 с получением гепарина низкомолекулярной массы, содержащего нитрозосоединения в количестве, менее или равном 5 • 10-7 мг на мг продукта.
7. Способ по п.6, отличающийся тем, что водный раствор гепарина низкомолекулярной массы обрабатывают ультрафиолетовыми лучами с длиной волны 254 нм, при температуре между 15 и 35oC и рН 5 - 8.
8. Способ получения гепарина низкомолекулярной массы нитрозной деполимеризацией гепарина природного происхождения, отличающийся тем, что водный раствор натриевой соли гепарина природного происхождения концентрацией 5 - 15 мас. /об.% обрабатывают раствором нитрита щелочного металла из расчета 1,5 - 6,9 мас.% нитрита по отношению к взятой соли гепарина в присутствии соляной кислоты при рН 1 - 5 в течение 20 - 50 мин, при этом реакцию проводят до появления отрицательного теста на нитроионы, полученный продукт восстанавливают добавлением боргидрида натрия в количестве 0,5 - 2,0 мас.% от количества взятой соли гепарина, избыток которого разрушают соляной кислотой, полученную реакционную среду нейтрализуют и осаждают из нее этанолом гепарин низкомолекулярной массы в виде натриевой соли, водный раствор которой обрабатывают ультрафиолетовыми лучами с длиной волны от 180 до 350 нм при температуре 5 - 50oС и при рН 3 - 8 с получением гепарина низкомолекулярной массы, содержащего нитрозосоединения в количестве, менее или равном 5 •10-7 мг на мг продукта.
9. Способ по п.8, отличающийся тем, что перед обработкой ультрафиолетовыми лучами гепарин низкомолекулярной массы в виде натриевой соли подвергают одному или нескольким фракционированиям с помощью спирта.
10. Способ по п.8 или 9, отличающийся тем, что водный раствор натриевой соли гепарина природного происхождения обрабатывают раствором нитрита щелочного металла в присутствии соляной кислоты при рН 1,5 - 4.
11. Способ по любому из пп.8 - 10, отличающийся тем, что восстановление боргидридом натрия проводят в щелочной среде.
12. Способ по любому из пп.8 - 11, отличающийся тем, что натриевую соль гепарина низкомолекулярной массы превращают в любую фармацевтически приемлемую соль.
13. Способ получения гепарина низкомолекулярной массы нитрозной деполимеризацией гепарина природного происхождения, отличающийся тем, что водный раствор натриевой соли гепарина природного происхождения концентрацией 5 - 15 мас./об.% обрабатывают раствором нитрита щелочного металла из расчета 3,5 - 4 мас.% нитрита по отношению к взятой соли гепарина в присутствии соляной кислоты при рН 1 - 5 в течение 20 - 50 мин, при этом реакцию проводят до появления отрицательного теста на нитроионы, полученный продукт восстанавливают добавлением боргидрида натрия в количестве 0,5 - 2,0 мас.% от количества взятой соли гепарина, избыток которого разрушают соляной кислотой, полученную реакционную среду нейтрализуют и осаждают из нее этанолом гепарин низкомолекулярной массы в виде натриевой соли, водный раствор которой обрабатывают ультрафиолетовыми лучами с длиной волны 254 нм при температуре 5 - 50oC и при рН 7 с направлением обработанного раствора на анионообменную колонку, которую промывают водой при рН приблизительно 7, и рекуперируют конечный продукт осаждением хлористым натрием и этанолом с получением гепарина низкомолекулярной массы, содержащего нитрозосоединения в количестве, менее или равном 5 • 10-8 мг на мг продукта.
14. Способ по п.13, отличающийся тем, что используют раствор нитриевой соли гепарина низкомолекулярной массы концентрацией 8 - 12 мас./об.%, а обработку ультрафиолетовыми лучами проводят в течение 9 - 15 мин при использовании 16-ваттной лампы.
15. Способ по п.13 или 14, отличающийся тем, что натриевую соль гепарина низкомолекулярной массы превращают в любую фармацевтически приемлемую соль.
16. Фармацевтическая композиция, обладающая антитромбозной активностью, содержащая действующее начало и фармацвтически приемлемый носитель, отличающаяся тем, что в качестве действующего начала она содержит гепарин низкомолекулярной массы по любому из пп.1 - 5 в эффективном количестве.
17. Фармацевтическая композиция по п.14, отличающаяся тем, что она содержит гепарин низкомолекулярной массы в количестве от 10 до 5000 мг на единицу дозировки.
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| FR9305534 | 1993-05-07 | ||
| FR9305534A FR2704861B1 (fr) | 1993-05-07 | 1993-05-07 | Fractions d'héparine purifiées, procédé d'obtention et compositions pharmaceutiques les contenant. |
Publications (2)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU94015595A RU94015595A (ru) | 1996-09-27 |
| RU2133253C1 true RU2133253C1 (ru) | 1999-07-20 |
Family
ID=9446915
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| RU94015595A RU2133253C1 (ru) | 1993-05-07 | 1994-05-06 | Очищенная гепариновая фракция, способ ее получения и содержащая ее фармацевтическая композиция |
Country Status (26)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5599801A (ru) |
| EP (1) | EP0623629B1 (ru) |
| JP (1) | JP3529835B2 (ru) |
| KR (1) | KR100328095B1 (ru) |
| CN (1) | CN1066155C (ru) |
| AT (1) | ATE141618T1 (ru) |
| AU (1) | AU672291B2 (ru) |
| BR (1) | BR9401920A (ru) |
| CA (1) | CA2122930C (ru) |
| CZ (1) | CZ287889B6 (ru) |
| DE (1) | DE69400385T2 (ru) |
| DK (1) | DK0623629T3 (ru) |
| ES (1) | ES2093494T3 (ru) |
| FI (1) | FI107388B (ru) |
| FR (1) | FR2704861B1 (ru) |
| GR (1) | GR3021648T3 (ru) |
| HK (1) | HK1007432A1 (ru) |
| HU (1) | HU221595B (ru) |
| IL (1) | IL109587A (ru) |
| MY (1) | MY110862A (ru) |
| NO (1) | NO306952B1 (ru) |
| NZ (1) | NZ260460A (ru) |
| PL (1) | PL178294B1 (ru) |
| RU (1) | RU2133253C1 (ru) |
| TW (1) | TW438812B (ru) |
| ZA (1) | ZA943152B (ru) |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2248801C2 (ru) * | 2003-04-21 | 2005-03-27 | ГУ Гематологический научный центр РАМН | Способ получения низкомолекулярных гепаринов |
| RU2295538C2 (ru) * | 2005-03-01 | 2007-03-20 | Гематологический научный центр РАМН | Способ получения гепаринов с низкой молекулярной массой |
| RU186728U1 (ru) * | 2018-10-19 | 2019-01-30 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "МИРЭА - Российский технологический университет" | Лабораторное устройство для отмывки порошковых продуктов химических реакций от посторонних примесей |
| RU2837407C1 (ru) * | 2024-09-20 | 2025-03-31 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Дженгуро" | Способ получения низкомолекулярного гепарина - надропарина кальция |
Families Citing this family (37)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5744457A (en) * | 1995-03-31 | 1998-04-28 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis |
| US6001820A (en) * | 1995-03-31 | 1999-12-14 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis |
| US5763427A (en) * | 1995-03-31 | 1998-06-09 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Compositions and methods for inhibiting thrombogenesis |
| US5980865A (en) * | 1995-08-18 | 1999-11-09 | Baker Norton Pharmaceuticals, Inc. | Method for treating late phase allergic reactions and inflammatory diseases |
| CA2235223A1 (en) | 1995-10-30 | 1997-05-09 | Massachusetts Institute Of Technology | Rationally designed polysaccharide lyases derived from heparinase i |
| US5767269A (en) * | 1996-10-01 | 1998-06-16 | Hamilton Civic Hospitals Research Development Inc. | Processes for the preparation of low-affinity, low molecular weight heparins useful as antithrombotics |
| IT1290814B1 (it) * | 1997-03-24 | 1998-12-11 | Istituto Scient Di Chimica E B | Glicosaminoglicani aventi elevata attivita' antitrombotica |
| US7056504B1 (en) | 1998-08-27 | 2006-06-06 | Massachusetts Institute Of Technology | Rationally designed heparinases derived from heparinase I and II |
| JP2003527822A (ja) * | 1998-08-27 | 2003-09-24 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | ヘパリナーゼｉおよびｉｉ由来の合理的に設計されたヘパリナーゼ |
| CA2643162C (en) * | 1999-04-23 | 2018-01-02 | Massachusetts Institute Of Technology | Polymer identification, compositional analysis and sequencing, based on property comparison |
| CA2402160C (en) * | 2000-03-08 | 2012-02-14 | Massachusetts Institute Of Technology | Heparinase iii and uses thereof |
| US8227449B2 (en) * | 2000-03-30 | 2012-07-24 | Glycores 2000 S.R.L. | Glycosaminoglycans derived from K5 polysaccharide having high anticoagulant and antithrombotic activities and process for their preparation |
| IT1318432B1 (it) * | 2000-03-30 | 2003-08-25 | Inalco Spa | Glicosaminoglicani derivati dal polisaccaride k5 aventi elevataattivita' anticoagulante ed antitrombotica e processo per la loro |
| CA2422059C (en) * | 2000-09-12 | 2012-05-15 | Massachusetts Institute Of Technology | Methods and products related to low molecular weight heparin |
| JP2004523479A (ja) * | 2000-10-18 | 2004-08-05 | マサチューセッツ インスティテュート オブ テクノロジー | 多糖の肺送達に関する方法および産物 |
| US20050027117A1 (en) * | 2000-12-18 | 2005-02-03 | Pasqua Oreste | Anticoagulant and antithrombotic LMW-glycosaminoglycans derived from K5 polysaccharide and process for their preparation |
| JP2002293804A (ja) * | 2001-03-28 | 2002-10-09 | Itoham Foods Inc | 低分子量ヘパリンの製造法 |
| EP1518120A4 (en) | 2002-03-11 | 2008-08-13 | Momenta Pharmaceuticals Inc | ANALYSIS OF SULFATE POLYSACCHARIDES |
| EP1582531A1 (en) | 2004-03-24 | 2005-10-05 | Aventis Pharma S.A. | Process for oxidizing unfractionated heparins and detecting presence or absence of glycoserine in heparin and heparin products |
| ITMO20040199A1 (it) * | 2004-07-29 | 2004-10-29 | Biofer Spa | Procedimento per la purificazione da gruppi e n no rsidui di eparine a basso peso molecolare ottentite tramite nitrosazione. |
| JP2006291028A (ja) * | 2005-04-11 | 2006-10-26 | Q P Corp | 低分子ヘパリンまたはその塩、ならびにその製造方法 |
| ATE552004T1 (de) | 2005-11-30 | 2012-04-15 | Istituto G Ronzoni | Oral verabreichbare heparinderivate |
| US9139876B1 (en) | 2007-05-03 | 2015-09-22 | Momenta Pharmacueticals, Inc. | Method of analyzing a preparation of a low molecular weight heparin |
| WO2011090948A1 (en) * | 2010-01-19 | 2011-07-28 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Evaluating heparin preparations |
| AU2011303081B2 (en) * | 2010-09-14 | 2015-08-13 | Fuso Pharmaceutical Industries, Ltd. | High purity heparin and production method therefor |
| WO2012115952A1 (en) | 2011-02-21 | 2012-08-30 | Momenta Pharmaceuticals, Inc. | Evaluating heparin preparations |
| CN102633905B (zh) * | 2011-04-11 | 2014-10-08 | 南通天龙畜产品有限公司 | 一种肝素钠中不被亚硝酸降解且在肝素钠保留时间附近出峰的物质的去除方法 |
| CN104045744B (zh) * | 2014-06-26 | 2016-01-06 | 常州千红生化制药股份有限公司 | 达肝素钠的制备方法 |
| CN104098716B (zh) * | 2014-07-16 | 2015-04-22 | 南京健友生化制药股份有限公司 | 一种达肝素钠精品的生产方法 |
| US10688249B2 (en) * | 2015-06-11 | 2020-06-23 | Virchow Biotech Pvt. Ltd. | Multiple dose pharmaceutical compositions containing heparin and/or heparin-like compounds and devices and methods for delivering the same |
| CN105294885A (zh) * | 2015-11-23 | 2016-02-03 | 山东大学 | 一种新来源亚硝酸降解低分子肝素的制备方法 |
| EP3740513B1 (en) * | 2018-02-14 | 2022-06-22 | Biological E Limited | Improved process for the preparation of dalteparin sodium |
| WO2021007429A1 (en) | 2019-07-09 | 2021-01-14 | Optimvia Llc | Methods for synthesizing anticoagulant polysaccharides |
| CN110845641A (zh) * | 2019-11-07 | 2020-02-28 | 中国药科大学 | 一种肝素寡糖及其在制备抗血管生成药物中的应用 |
| CN110787489A (zh) * | 2019-11-20 | 2020-02-14 | 江苏千牧生物科技股份有限公司 | 一种肝素钠加工使用的分离装置及加工的工艺 |
| EP4182452A4 (en) | 2020-07-14 | 2024-07-31 | Optimvia, LLC | METHOD FOR THE SYNTHESIS OF NON-ANTICOAGULATING HEPARAN SULFATE |
| CN115304688A (zh) * | 2022-08-25 | 2022-11-08 | 湖北亿诺瑞生物制药有限公司 | 一种达肝素钠的制备方法 |
Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4119774A (en) * | 1976-03-05 | 1978-10-10 | Ab Kabi | Heparin purification method |
| EP0014184A2 (en) * | 1979-01-08 | 1980-08-06 | Kabi AB | Heparin fragments having a selective anticoagulation activity and process for their preparation |
| EP0027089A1 (fr) * | 1979-10-05 | 1981-04-15 | Choay S.A. | Fractions oligosaccharidiques et oligosaccharides possédant des propriétés biologiques, leurs procédés de préparation et leurs applications en tant que médicaments |
| WO1981003276A1 (en) * | 1980-05-19 | 1981-11-26 | Riker Laboratories Inc | Improved anticoagulant substance |
| FR2538404A1 (ru) * | 1982-12-28 | 1984-06-29 | Anic Spa | |
| EP0163582A2 (fr) * | 1984-05-30 | 1985-12-04 | Choay S.A. | Médicaments favorisant les propriétés d'écoulement du sang et leur utilisation en thérapeutique |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| FR2478646A2 (fr) * | 1980-03-20 | 1981-09-25 | Choay Sa | Composition mucopolysaccharidique ayant une activite regulatrice de la coagulation, medicament la contenant et procede pour l'obtenir |
| US4438261A (en) * | 1980-05-19 | 1984-03-20 | Riker Laboratories, Inc. | Anticoagulant substance |
| CA1171375A (en) * | 1980-09-15 | 1984-07-24 | Ulf P.F. Lindahl | Oligosaccharides having selective anticoagulation activity |
| FR2503714B1 (fr) * | 1981-04-10 | 1986-11-21 | Choay Sa | Procede d'obtention de mucopolysaccharides biologiquement actifs, de purete elevee, par depolymerisation de l'heparine |
| US5094815A (en) * | 1988-05-18 | 1992-03-10 | Cornell Research Foundation, Inc. | Photolytic interface for HPLC-chemiluminescence detection of non volatile N-nitroso compounds |
| US5032679A (en) * | 1988-12-15 | 1991-07-16 | Glycomed, Inc. | Heparin fragments as inhibitors of smooth muscle cell proliferation |
| IT1243300B (it) * | 1990-12-20 | 1994-05-26 | Fidia Spa | Derivati dell'eparina |
| US5385937A (en) * | 1991-04-10 | 1995-01-31 | Brigham & Women's Hospital | Nitrosation of homocysteine as a method for treating homocysteinemia |
-
1993
- 1993-05-07 FR FR9305534A patent/FR2704861B1/fr not_active Expired - Lifetime
-
1994
- 1994-05-05 AU AU61912/94A patent/AU672291B2/en not_active Expired
- 1994-05-05 CA CA002122930A patent/CA2122930C/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-05 NZ NZ260460A patent/NZ260460A/en not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 US US08/239,320 patent/US5599801A/en not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 ES ES94400994T patent/ES2093494T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 IL IL109587A patent/IL109587A/xx not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 DK DK94400994.3T patent/DK0623629T3/da active
- 1994-05-06 FI FI942095A patent/FI107388B/fi not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 DE DE69400385T patent/DE69400385T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 NO NO941686A patent/NO306952B1/no not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 CZ CZ19941132A patent/CZ287889B6/cs not_active IP Right Cessation
- 1994-05-06 HU HU9401446A patent/HU221595B/hu unknown
- 1994-05-06 MY MYPI94001141A patent/MY110862A/en unknown
- 1994-05-06 PL PL94303336A patent/PL178294B1/pl unknown
- 1994-05-06 AT AT94400994T patent/ATE141618T1/de active
- 1994-05-06 RU RU94015595A patent/RU2133253C1/ru active
- 1994-05-06 EP EP94400994A patent/EP0623629B1/fr not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-06 BR BR9401920A patent/BR9401920A/pt not_active Application Discontinuation
- 1994-05-06 ZA ZA943152A patent/ZA943152B/xx unknown
- 1994-05-07 TW TW083104157A patent/TW438812B/zh not_active IP Right Cessation
- 1994-05-07 KR KR1019940010033A patent/KR100328095B1/ko not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-07 CN CN94105382A patent/CN1066155C/zh not_active Expired - Lifetime
- 1994-05-09 JP JP09533794A patent/JP3529835B2/ja not_active Expired - Lifetime
-
1996
- 1996-11-14 GR GR960403019T patent/GR3021648T3/el unknown
-
1998
- 1998-06-25 HK HK98106616A patent/HK1007432A1/xx not_active IP Right Cessation
Patent Citations (6)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4119774A (en) * | 1976-03-05 | 1978-10-10 | Ab Kabi | Heparin purification method |
| EP0014184A2 (en) * | 1979-01-08 | 1980-08-06 | Kabi AB | Heparin fragments having a selective anticoagulation activity and process for their preparation |
| EP0027089A1 (fr) * | 1979-10-05 | 1981-04-15 | Choay S.A. | Fractions oligosaccharidiques et oligosaccharides possédant des propriétés biologiques, leurs procédés de préparation et leurs applications en tant que médicaments |
| WO1981003276A1 (en) * | 1980-05-19 | 1981-11-26 | Riker Laboratories Inc | Improved anticoagulant substance |
| FR2538404A1 (ru) * | 1982-12-28 | 1984-06-29 | Anic Spa | |
| EP0163582A2 (fr) * | 1984-05-30 | 1985-12-04 | Choay S.A. | Médicaments favorisant les propriétés d'écoulement du sang et leur utilisation en thérapeutique |
Cited By (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| RU2248801C2 (ru) * | 2003-04-21 | 2005-03-27 | ГУ Гематологический научный центр РАМН | Способ получения низкомолекулярных гепаринов |
| RU2295538C2 (ru) * | 2005-03-01 | 2007-03-20 | Гематологический научный центр РАМН | Способ получения гепаринов с низкой молекулярной массой |
| RU186728U1 (ru) * | 2018-10-19 | 2019-01-30 | Федеральное государственное бюджетное образовательное учреждение высшего образования "МИРЭА - Российский технологический университет" | Лабораторное устройство для отмывки порошковых продуктов химических реакций от посторонних примесей |
| RU2837407C1 (ru) * | 2024-09-20 | 2025-03-31 | Общество С Ограниченной Ответственностью "Дженгуро" | Способ получения низкомолекулярного гепарина - надропарина кальция |
Also Published As
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU2133253C1 (ru) | Очищенная гепариновая фракция, способ ее получения и содержащая ее фармацевтическая композиция | |
| HK1007432B (en) | Purified heparin fractions, process for obtaining them and pharmaceutical compositions containing the same | |
| DE3880577T2 (de) | Heparinderivate, verfahren zu deren herstellung und verwendung fuer pharmazeutische zwecke. | |
| RU2617764C2 (ru) | Неантикоагулянтные гликозаминогликаны, содержащие повторяющиеся дисахаридные звенья, и их медицинское применение | |
| TWI672146B (zh) | 新化學修飾肝素及其製造方法 | |
| CN114767627B (zh) | 一种乳酸环丙沙星氯化钠注射液的制备方法 | |
| ES2317280T3 (es) | Proceso para preparar heparina de bajo peso molecular. | |
| CN111249227A (zh) | 一种磺达肝癸钠注射液的制备方法 | |
| EP1286681B1 (en) | Irradiation of ispaghula | |
| CN116570560A (zh) | 一种地塞米松磷酸钠注射液及其制备方法 | |
| HK1220475B (en) | New processes for the production of chemically-modified heparins |