ES2317280T3 - Proceso para preparar heparina de bajo peso molecular. - Google Patents
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Abstract
Proceso para preparar una heparina purificada despolimerizada en solución que incluye las siguientes etapas operativas: i) preparación de una heparina de bajo peso molecular, mediante despolimerización de una heparina con nitrito de sodio en una solución acuosa, y ii) tratamiento de la heparina despolimerizada en la solución acuosa a una temperatura comprendida entre 40ºC y 90ºC por un período de tiempo comprendido entre 0,5 y 3 horas para un pH comprendido entre 3,0 y 13,0, y luego iii) conducción de la solución a un pH comprendido entre 11 y 13 y a una temperatura comprendida entre 70ºC y 90ºC.
Description
Proceso para preparar heparina de bajo peso
molecular.
La heparina y sus derivados se hallan entre los
productos más utilizados para la prevención y el tratamiento de
eventos de tromboembolismo.
Este ingrediente activo, heparina, tiene un
efecto muy importante sobre la coagulación y es por este motivo que
se lo utiliza para impedir eventos trombóticos después de
operaciones quirúrgicas y en el tratamiento de embolismos
pulmonares o trombosis venosas profundas. El efecto anticoagulante
de la heparina es tan relevante que el tratamiento con esta droga
impone un constante monitoreo de los procesos hemocoagulantes, lo
cual implica la hospitalización del paciente, o por lo menos un
tratamiento ambulatorio del paciente.
La reducción del peso molecular de la heparina
a través del fraccionamiento (L. O. Andersson y otros, Throm Res.
9:575 (1976)) o mediante despolimerización ha dado como resultado
ingredientes activos menos anticoagulantes, si bien siguen
manteniendo una buena actividad antitrombótica residual.
Por ejemplo, las patentes de invención europeas
EP 0.014.184, EP 0.040.144, EP 0.076.279 y EP 0.121.067 describen
varios procesos de despolimerización de heparina y obtienen varios
tipos de heparina de bajo peso molecular, lo cual típicamente se
indica con su acrónimo LMWH (del inglés, Low Molecular Weight
Heparin). Esos tipos de LMWH exhiben diferentes pesos moleculares y
estructuras químicas distintamente modificadas, especialmente en
sus grupos terminales, y también diferentes actividades
farmacológicas.
En particular, la reducción del peso molecular
le proporciona a los productos despolimerizados una actividad
anticoagulante general menor (APTT = Activated Partial Plastin Time,
es decir tiempo de tromboplastina parcial activado (TTPA)) con
respecto a la heparina inicial mientras que la actividad Axa
(actividad antiXa) es mantenida a buenos niveles, como es la
actividad antitrombótica del producto (F. A. Ofosu y otros
"Mechanism of action of low molecular weight heparins and
heparinoids" Balliere's Clin. Haematol. 3:505-529
(1990)).
Las patentes de invención US 4.804.652 y US
4.351.938 describen métodos para la preparación de dicha LMWH y su
uso como sustancia anticoagulante y antitrombótica.
También la farmacodinámica se ve beneficiada por
la reducción del peso molecular, puesto que el ingrediente activo
se queda más tiempo en el circuito sanguíneo, con mayores niveles
hemáticos que los con heparina no fraccionada (L. Bars y otros,
"Increased anti Xa bioavailability for a low molecular weight
heparin compared with unfractionated heparin" Semin Thromb,
Hemost, 11:316-317 (1985)).
Las características descritas con anterioridad
de LMWH han conducido a expertos del sector a buscar procesos para
producirla utilizando procesos extremadamente variados de
despolimerización de heparina.
Se han utilizado métodos que explotan las
reacciones de hidrólisis radical (agua oxigenada y catalizador de
cobre o perácidos), reacción de hidrólisis oxidativa con peryodato o
hidrólisis enzimática con heparinasa, o reacciones de
\beta-eliminación mediante hidrólisis básica del
éster de heparina o tratamiento con nitrito de sodio en un ambiente
ácido.
El último proceso mencionado, descrito y
reivindicado en las patentes de invención europeas EP 0.014.184 y
EP 0.076.279, proporciona una LMWH que luego requiere una adicional
purificación o fraccionamiento.
El uso de nitrito de sodio proporciona heparina
despolimerizada con un peso molecular que es más o menos bajo en
función de la cantidad de nitrito de sodio que se ha utilizado, pero
exige mucho cuidado y atención porque el producto final no debe
contener más que una pocas partes por millón (ppm) de iones de
nitrito y menos de 0,25 ppm de grupos de N-nitroso
(N-NO).
Si, por un lado, la contención de nitrito de
sodio en el producto final (J. C. Lormeau y otros, patente de
invención US 5.019.649 (1991)) y su determinación no representa un
problema, por otro lado tanto la contención como la cuantificación
de los grupos N-NO son difíciles de realizar.
Puesto que en teoría no debería haber aminas
secundarias en la estructura de la heparina, los únicos grupos
funcionales en condiciones de volver derivados de
N-nitroso suficientemente estables son los grupos de
N-acetilglucosamina.
Cabe suponer que los grupos de
N-nitroso que se manifiestan a nivel de unos pocos
ppm en el producto despolimerizado antes de la purificación se
derivan de una nitrosación de la N-acetilglucosamina
presente en la heparina.
Los grupos de N-NO que se
derivan de la nitrosación de heparina son muy estables, si bien no
al nivel de N-alquilnitrosaminas, y probablemente,
durante la reacción de despolimerización, una parte de la
glucosamina acetilo-N-NO formada
puede reaccionar, perdiendo el grupo acetilo y convirtiéndose en la
sal de diazonio de glucosamina desacetilada, proporcionando
heparina despolimerizada en la reacción normal.
\newpage
Puesto que esos grupos de N-NO
son muy estables, es esencial aplicar un proceso de
despolimerización que lleve a un contenido de
N-nitroso aminas que esté por debajo del límite
prescrito o, alternativamente, remover todo grupo de
N-NO que pudiera estar presente para así satisfacer
los límites prescritos impuestos por Farmacopea Europea IVª
edición.
Se sabe muy bien que los grupos de
N-NO son muy sensibles a las radiaciones de alta
energía, tales como rayos ultravioletas y rayos gama (\gamma), y
que el tratamiento del producto (heparina despolimerizada por
nitrosación) en solución o incluso en estado sólido con esas
radiaciones puede conducir a la desaparición total de los nitritos
y residuos de N-NO contenidos en el producto.
Los rayos ultravioletas son muy utilizados para
mantener la esterilidad del agua estéril o para reducir los
derivados de nitroso en agua potable. En la patente de invención US
5.599.801 de J. F. Branellee y otros, se describe un proceso y un
aparato para eliminar grupos nitrosos de las heparinas de bajo peso
molecular, obtenidas usando el proceso de nitrosación.
La limitación de este método es la baja potencia
de penetración de los rayos ultravioletas, tanto en soluciones como
en sólidos: este hecho afecta los tiempos y los aparatos a emplear
para la purificación.
En el caso de tratamiento con rayos \gamma, el
problema más grave es la estabilidad del producto que ha sido
expuesto al tratamiento por irradiación.
Por tal motivo existe la necesidad de
proporcionar un proceso para reducir las cantidades de nitritos y/o
de grupos de N-NO en la LMWH, el cual proceso sea
efectivo, más económico con respecto a la técnica conocida y muy
eficiente.
Uno de los principales objetivos de la presente
invención es el de realizar un proceso de despolimerización que
permita obtener una LMWH con niveles de N-NO
residuales por debajo de 0,25 ppm.
Otro de los objetivos de la presente invención
es el de proporcionar un proceso para la despolimerización que
obtenga una LMWH cuyo contenido de nitritos esté por debajo de 5
ppm.
Otro objetivo de la presente invención es el de
proporcionar un proceso de purificación para heparina
despolimerizada, obtenida usando nitrito de sodio, en condiciones
de purificar la heparina despolimerizada por reducción de las
cantidades residuales de nitritos y grupos de N-NO
nitroso.
Esos y otros objetivos, que se pondrán de
manifiesto a partir de la descripción detallada que sigue, se
obtienen en su totalidad mediante la presente invención, que ha
desarrollado un proceso para preparar LMWH y un proceso para
purificar la misma.
Además, la presente invención se refiere a un
proceso para preparar LMWH con un cierto nivel de nitritos y al
mismo tiempo un cierto nivel de grupos de N-NO
nitroso dentro de los límites impuestos por Farmacopea Europea IVª
edición, que tenga las características expresadas en las
reivindicaciones de 1 a 7 que están más adelante.
Otro objetivo de la presente invención es el de
proporcionar un proceso de purificación capaz de obtener una
reducción del nitrito y de grupos de N-NO que
pudieran estar presentes en la LMWH, por debajo de los límites
impuestos por Farmacopea Europea IVª edición, mediante un
tratamiento térmico o con microondas.
En este documento se ha incorporado Farmacopea
Europea IVª edición sólo a título de referencia. En particular, la
página 1.296, que se refiere a heparinas en general; las páginas
1.297-1.299 que se refieren a LMWH; las páginas
1.610-1.612 que se refieren a Nadroparina (heparina
despolimerizada obtenida por nitrosación); las páginas
999-1.000 que se refieren a Deltaparina (heparina
despolimerizada obtenida por nitrosación).
El proceso de la presente invención se lleva a
cabo utilizando una concentración de heparina, del tipo estándar
que se halla en el mercado, comprendida entre el 1% y el 25% (gramos
de heparina con respecto al peso total de la solución),
preferentemente del 5% al 20%; y más exactamente, preferiblemente
entre el 10% y el 16%. La forma de la heparina que se halla en el
mercado generalmente es la liofilizada como sal de sodio - heparinum
natricum - Farmacopea Europea IVª edición, página 1.296.
La parte solicitante ha hallado que la
despolimerización de la heparina en presencia de nitrito de sodio se
realiza con una relación peso:peso de heparina con respecto a
nitrito de sodio comprendida entre 60:1 y 45:1.
Ventajosamente la parte solicitante ha hallado
que una relación peso:peso de heparina con respecto a nitrito de
sodio comprendida entre 60:1 y 45:1 produce una LMWH con un
contenido de nitrito menor que 5 ppm y al mismo tiempo un contenido
de grupos de N-NO menor que 0,25 ppm.
En una realización preferida, la relación
peso:peso de heparina con respecto a nitrito de sodio está
comprendida entre 52:1 y 47:1.
\newpage
En las relaciones de peso mencionadas con
anterioridad, el nitrito de sodio es considerado como tal
independientemente del título de la sal usada, por ejemplo el
nitrito de sodio es puro por análisis, si tiene un título de nitrito
de sodio aproximado del 97%.
Durante el uso, se disuelve la heparina de sodio
con forma liofilizada, por ejemplo a 25ºC, en un contenedor
provisto de medios para calentar y agitar.
Preferentemente el proceso de despolimerización
se lleva a cabo a una temperatura comprendida entre 15ºC y 30ºC,
por ejemplo entre 23ºC y 27ºC, preferiblemente a 25ºC.
A la solución se le agrega nitrito de sodio, por
ejemplo nitrito de sodio al 97%, y una sustancia acidificante, por
ejemplo ácido clorhídrico, para llevar el pH de la solución a un
valor comprendido entre 2,0 y 4,0. La desaparición del nitrito se
monitorea utilizando papel de almidón iodurado. Posteriormente,
agregando una sustancia alcalina se lleva el pH de la solución a un
valor comprendido entre 10 y 13. Finalmente se agrega NaBH_{4} en
una cantidad en peso comprendida entre 0,5% y 2,5%, con respecto al
peso inicial de la heparina. Después de lo cual se deja la solución
a una temperatura comprendida entre 20 y 30ºC, por ejemplo 25ºC, por
un intervalo de tiempo comprendido entre 10 y 30 horas, por ejemplo
20 horas. El exceso de NaBH_{4} se quita adicionando una
sustancia ácida hasta un pH comprendido entre 2 y 4, por ejemplo pH
3.
Después de realizar dicho proceso se obtiene un
producto despolimerizado que respeta las especificaciones
químico-físicas y biológicas de Farmacopea Europea
IVª edición para heparina despolimerizada con ácido nitroso, que
tiene un contenido de N-nitrosamina menor que 0,25
ppm y un rendimiento final no menor que el 70% (gramos de heparina
despolimerizada con respecto al peso inicial de la heparina), por
ejemplo un rendimiento comprendido entre el 75% y el 85%.
Con una relación de peso
heparina-nitrito de sodio menor que 45:1, se obtiene
un producto que tiene un contenido de N-nitrosamina
superior a los límites establecidos y con una cantidad producida
menor que la deseada. Este producto deberá ser vuelto a
purificar.
Con una relación de peso de
heparina-nitrito de sodio superior a 60:1, no se
obtiene un aceptable nivel de despolimerización.
El proceso de purificación, objeto de la
presente invención, de una heparina despolimerizada, obtenida por
nitrosación, puede ser llevado a cabo mediante calentamiento o
tratamiento con microondas.
Se ha hallado que tanto el calor como las
microondas en un intervalo de frecuencia entre 900 y 2.450 MegaHertz
(MHz) pueden reducir drásticamente la presencia de nitritos y de
grupos de N-nitroso para un pH comprendido entre
3,0 y 13,0, preferentemente para un pH comprendido entre 4,0 y 12,0,
por ejemplo para un pH comprendido entre 10 y 12.
El calor y las microondas se pueden usar por
separado si bien el tratamiento con microondas de las soluciones
acuosas que contienen LMWH conduce a un calentamiento de la solución
acuosa y, por ende, a una acción sinérgica de calentamiento y
microondas para la eliminación de los grupos nitrosos presentes en
la LMWH que se derivan de la despolimerización por nitrosación.
En una realización preferida, el proceso de
purificación se realiza por calentamiento.
Se calienta una solución acuosa que contiene del
1% al 20% (peso:peso) de LMWH (obtenida por nitrosación) a
purificar y se la agita hasta que llegue a una temperatura
comprendida entre 40ºC y 90ºC, preferentemente entre 60ºC y 80ºC,
para un pH comprendido entre 3,0 y 13,0, preferiblemente entre 4,0 y
12,0, por un período de tiempo comprendido entre 0,5 y 3 horas.
Después de lo cual se lleva la solución a un
valor de pH comprendido entre 11 y 13, preferiblemente un pH de 12,
a una temperatura comprendida entre 70ºC y 90ºC, bajo agitación. La
solución se purifica, siguiendo métodos conocidos, con
ultrafiltración a través de membranas.
En una realización, el proceso de purificación
se realiza usando microondas. La purificación de LMWH que contiene
nitritos y grupos de N-nitroso se puede llevar a
cabo sometiendo la solución acuosa que contiene del 1% al 20% de
LMWH con un pH comprendido entre 7,0 y 13,0, preferiblemente entre
10,0 y 20,0, a radiación con microondas por un período de tiempo
comprendido entre 60 y 300 segundos usando microondas de una
frecuencia comprendida entre 900 y 2.450 MHz, con una potencia
comprendida entre 600 y 1.000 Vatios, en presencia de silicatos
inertes, preferentemente pertenecientes a la clase montmorillonita,
en polvo y en cantidades comprendidas entre el 5% y el 15% con
respecto al peso de la LMWH. La presencia del silicato inerte actúa
como amplificador del efecto de las microondas.
Se enfría la suspensión que contiene LMWH en
solución y el silicato inerte hasta la temperatura ambiente, para
luego filtrarla para eliminar el material inerte, el pH se lo lleva
a un valor comprendido entre 6,5 y 7,0, la solución sufre una
ultrafiltración para eliminar las sales presentes en la solución y
se liofiliza el ingrediente activo.
Se obtiene una LMWH extremadamente pura, como se
puede ver en la tabla 1, con rendimientos comprendidos entre el 96%
y el 98%, y con la actividad farmacológica prácticamente
inmutada.
\hskip0.3cm*n.v: no evaluable
\vskip1.000000\baselineskip
Los análisis de los parámetros biológicos, es
decir la actividad anti IIA (AIIa) y la actividad anti Xa (Axa),
los parámetros químicos, es decir el contenido de nitritos y de
grupos N-nitroso, se llevaron a cabo siguiendo los
métodos descritos en Farmacopea Europea IVª edición para LMWH,
páginas 999, 1.297 y 1.610.
Como se puede observar en la Tabla 1, el proceso
de despolimerización de la presente invención permite obtener LMWH
con una cantidad de nitritos menor o igual que 5 ppm (determinada
por cromatografía líquida, Farmacopea Europea IVª edición, página
999) y una cantidad de grupos nitrosos menor o igual que 0,25 ppm
(determinada por rotura del enlace N-NO usando
ácido hidrobrómico en acetato de etilo en un condensador de reflujo
midiendo la liberación de NO mediante quimioluminiscencia,
Farmacopea Europea IVª edición, página 1.611 - conocida como
solución EPS).
En una realización preferida, la solución EPS
puede ser sometida al proceso de purificación de la presente
invención con el objetivo de obtener Dalteparina o Nadroparina
purificadas.
Alternativamente, en otra realización, la
solución EPS puede ser sometida a separación en Dalteparina o
Nadroparina. Posteriormente, las fracciones de Dalteparina y
Nadroparina obtenidas a partir de la separación se purifican con la
finalidad de obtener Dalteparina o Nadroparina purificadas.
Los ejemplos dados a continuación deberán ser
considerados una ilustración adicional de la invención y, por ende,
no implican ninguna restricción del alcance de esta última.
Ejemplo
1
Se disuelven 100 gramos de heparina de sodio con
actividad anticoagulante < 160 IU/mg en 900 ml de agua destilada
a 25ºC. A la solución se agregan 2,07 gramos de NaNO_{2} (97%) y
luego se agrega HCl 5N hasta un pH de 2,5. Se controla la reacción
para detectar la desaparición del nitrito usando papel de almidón
iodurado. Se lleva el pH de la solución a 10,5 agregando una
solución concentrada de NaOH y se agrega NaBH_{4} en una cantidad
equivalente al 1,5% del peso inicial de la heparina.
Se deja la solución a temperatura ambiente por
un período de tiempo de 20 horas y luego se la acidifica con HCl
5N, llevando el pH a 3,2 para destruir el exceso de NaBH_{4}.
Luego se neutraliza la solución con NaOH 5N, llevando el pH a 6,8.
Se purifica la solución obtenida mediante ultrafiltración para
eliminar las sales y sustancias que tienen un peso molecular muy
bajo, en línea con las especificaciones dadas por Farmacopea
Europea IVª edición, páginas 999 y 1.610.
Luego se liofiliza la solución, obteniendo una
heparina de bajo peso molecular con un rendimiento no menor que el
70% del peso inicial de la heparina.
El producto obtenido, sin ser sometido a otra
purificación, tiene un contenido de N-nitrosamina
menor que los límites de Farmacopea Europea IVª edición (0,25 ppm)
como se ha mencionado en la descripción de la invención y en la
Tabla 1.
Si bien el producto obtenido en conformidad con
el proceso de despolimerización de la presente invención cae dentro
de las especificaciones de Farmacopea Europea IVª edición por
contenido de nitrito y de N-nitrosamina, igualmente
es sometido a un proceso de purificación para verificar la
eficiencia de este proceso, como se explica en los ejemplos que
siguen.
El proceso de purificación es un método general
que puede ser aplicado para la purificación de una LMWH obtenida
mediante despolimerización por nitrosación.
Ejemplo
2
Se disuelven 50 gramos de LMWH, obtenida como se
ha descrito en el ejemplo 1, en 1.000 ml de agua destilada sin
nitritos, y se corrige el pH llevándolo a 4,5 con HCl 1N,
calentando, luego, la solución hasta 50ºC por 30 minutos, bajo
agitación. Se enfría la solución y se lleva el pH a 12,0 con NaOH
5N, calentando hasta 80ºC, bajo agitación, por 30 minutos. Se
corrige el pH con HCl 2N llevándolo a un valor de 6,7. Luego se
elimina el cloruro de sodio de la solución mediante
ultrafiltración, usando una membrana con cut-off de
600 Daltons y agua bidestilada libre de nitritos y nitratos. Se
liofiliza la heparina purificada, obteniendo 48,35 gramos de
heparina de bajo peso molecular con un rendimiento final del
96,7%.
Ejemplo
3
Se disuelven 70 gramos de LMWH, obtenida en
conformidad con el ejemplo 1, en 1.400 ml de agua bidestilada libre
de nitritos y nitratos, llevando el pH a 12 con NaOH 1N. Se agregan
5 gramos de montmorillonita en polvo a la solución que luego se la
somete a radiación con microondas de 2.450 MHz por 100 segundos a
600 Vatios, y se la deja enfriar hasta 25ºC, se corrige el pH con
HCl 5N llevándolo a 6,5. Se filtra el material inerte, se purifica
la solución y se la liofiliza; se obtiene 68,7% de producto, dando
un rendimiento total del 98,14%.
Ejemplo
4
Se disuelven 65 gramos de LMWH, obtenida en
conformidad con el ejemplo 1, en 800 ml de agua bidestilada libre
de nitritos y nitratos. A la solución se agregan 4 gramos de
montmorillonita en polvo, llevando su pH a 11,0 con NaOH 2N y se la
somete a radiación con microondas de 2.450 MHz a 600 Vatios por 100
segundos. Luego se enfría la solución y se lleva el pH a 6,5 - 7,0
con HCl 1N, se filtra el material inerte y a la solución remanente
se la somete a ultrafiltración usando una membrana con
cut-off de 600 Daltons. Se liofiliza la solución
ultrafiltrada, obteniendo 63,3 gramos de producto, es decir un
rendimiento del 97,38%.
\newpage
Ejemplo
5
Se repite el proceso del ejemplo 4 usando 60
gramos de LMWH, obtenida en conformidad con el ejemplo 1, disueltos
en 1.000 ml de agua. A la solución se agregan 9 gramos de
montmorillonita en polvo, la cual se lleva a un pH 12 con NaOH 2N y
se irradia con microondas de 2.450 MHz a 600 Vatios. Se corrige el
pH con HCl 2N, llevándolo a 7,1. Se filtra el material inerte y se
liofiliza la solución resultante, después de una ultrafiltración,
obteniendo 59,1 gramos de producto, es decir un rendimiento del
98,5%.
Ejemplo
6
Se repite el proceso del ejemplo 4 usando 65
gramos de LMWH, obtenida en conformidad con el ejemplo 1, disueltos
en 1.000 ml de agua. A la solución se agregan 8 gramos de
montmorillonita en polvo, la cual se la lleva a un pH de 10,5 con
NaOH 2N y se la irradia por 120 segundos con microondas de 2.450 MHz
a 600 Vatios. Se enfría la solución hasta 24ºC y se corrige el pH
con HCl 2N, llevándolo a 6,9. Se filtra el material inerte y la
solución resultante se somete a ultrafiltración usando una membrana
con cut-off de 600 Daltons y se la desala antes de
ser liofilizada. Se obtienen 64,1 gramos de producto purificado, es
decir un rendimiento del 98,6%.
Ejemplo
7
En 133 ml de agua destilada a 25ºC se disuelven
20 gramos de heparina de sodio con actividad anticoagulante de <
160 IU/mg. Se agregan 0,427 gramos de NaNO_{2} al 97%, así como
ácido clorhídrico con una concentración 5N para alcanzar un pH de
2,5. Durante la consiguiente reacción se utiliza papel de almidón
iodurado para controlar la desaparición del nitrito. Luego se lleva
el pH de la solución a 10,5 con una solución concentrada de
hidróxido de sodio y se agregan 0,3 gramos de NaBH_{4}, al
1,5%.
Se deja la solución a temperatura ambiente por
20 horas, y luego se la acidifica para llevar el pH a 2,8 de manera
de destruir el exceso de NaBH_{4}. La solución que se obtiene se
purifica mediante ultrafiltración.
Ejemplo
8
En 133 ml de agua destilada a 15ºC se disuelven
20 gramos de heparina de sodio con actividad anticoagulante de <
160 IU/mg. Se agregan 0,412 gramos de NaNO_{2} al 97%, así como
ácido clorhídrico con una concentración de 5N para alcanzar un pH
de 2,5. Durante la consiguiente reacción se utiliza papel de almidón
iodurado para controlar la desaparición del nitrito. Luego se lleva
el pH de la solución a 10,5 con una solución concentrada de
hidróxido de sodio y se agregan 0,3 gramos de NaBH_{4}, al
1,5%.
Se deja la solución a temperatura ambiente por
20 horas y luego se la acidifica para llevar el pH a 3,0 de manera
de destruir el exceso de NaBH_{4}. La solución que se obtiene se
purifica mediante ultrafiltración.
Claims (7)
1. Proceso para preparar una heparina purificada
despolimerizada en solución que incluye las siguientes etapas
operativas:
- i)
- preparación de una heparina de bajo peso molecular, mediante despolimerización de una heparina con nitrito de sodio en una solución acuosa, y
- ii)
- tratamiento de la heparina despolimerizada en la solución acuosa a una temperatura comprendida entre 40ºC y 90ºC por un período de tiempo comprendido entre 0,5 y 3 horas para un pH comprendido entre 3,0 y 13,0, y luego
- iii)
- conducción de la solución a un pH comprendido entre 11 y 13 y a una temperatura comprendida entre 70ºC y 90ºC.
2. Proceso según la reivindicación 1, donde la
solución de la etapa operativa ii) se la lleva a un valor de pH
igual a 12.
3. Proceso según la reivindicación 1 o 2, donde
la ultrafiltración por membrana se utiliza para purificar la LMWH
de la solución que se obtiene de la etapa operativa ii).
4. Proceso para preparar una heparina purificada
despolimerizada que incluye las siguientes etapas operativas:
- -
- preparación de una heparina de bajo peso molecular, mediante despolimerización de una heparina con nitrito de sodio en una solución acuosa, y
- -
- tratamiento de la heparina despolimerizada en la solución acuosa con microondas de una frecuencia comprendida entre 900 y 2.450 MHz y a una potencia comprendida entre 600 y 1.000 Vatios por un período de tiempo comprendido entre 60 y 300 segundos.
5. Proceso según la reivindicación 4, donde a la
heparina despolimerizada se agrega un silicato inerte,
preferentemente un silicato proveniente de la clase de silicatos de
montmorillonitas.
6. Proceso según la reivindicación 5, donde la
cantidad de silicato inerte que se agrega está comprendida entre el
5 y el 20% del peso, con respecto al peso de la heparina.
7. Proceso según las reivindicaciones de 4 a 6,
donde la heparina despolimerizada está en una solución acuosa con
una concentración comprendida entre el 1 y el 25% y un valor de pH
comprendido entre 6 y 13.
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