CN104072635B - 一种用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法 - Google Patents

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Abstract

本发明涉及一种用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法，包括如下步骤：1）将阴离子交换树脂进行装柱，采用碱性混合液对树脂进行再生；2）先采用纯化水对树脂清洗，然后用氯化钠溶液平衡树脂；（3）将达肝素钠粗品溶于纯化水中，上样，再用氯化钠溶液进行冲洗；（4）采用氯化钠溶液进行洗脱；（5）洗脱完毕后，采用纯化水冲洗层析柱；（6）洗脱液用乙醇沉淀，减压干燥得到符合质量标准的达肝素钠原料药。本发明通过采用溶液浓度及PH值均在最佳范围内的氯化钠溶液进行制备过程中的平衡、冲洗和洗脱，既保证了产品分子量分布符合达肝素钠标准要求，又具有较高的纯度和收率，保证了达肝素钠产品质量。

Description

一种用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法
技术领域
本发明涉及一种用阴离子交换树脂纯化制备的方法，特别涉及一种用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法，属生物医药领域。
背景技术
达肝素钠是低分子量肝素的一种，用作治疗急性深静脉血栓；血液透析和血液过滤期间防止在体外循环系统中发生凝血；不稳定型冠状动脉疾病；预防与手术有关的血栓形成等。
欧洲药典和英国药典对低分子量肝素的定义是：一类以未分级肝素为起始物料经过分级或降解而得到的具有较低分子量的低分子量肝素。英国药典BP从1993年版的1994年增补本中开始收载低分子量肝素，其中对低分子量肝素总则要求：重均分子量在8000以下，小于8000的级分不少于60%；抗Xa因子与抗IIa因子活性比不小于1.5。由于低分子量肝素的制备方法有多种，不同来源和方法制得的产品其末端结构、分子量及其分布、抗Ⅹa因子活性、抗Ⅱa因子活性、抗Ⅹa因子与抗Ⅱa因子活性比及药理作用等均有差异。
我国已上市的低分子肝素没有分级，基本上只能满足两个条件，重均分子量小于8000和抗Ⅹa因子活性应不低于70IU/mg、抗Ⅹa因子与抗Ⅱa因子活性比应不低于1.5，这将不利于临床安全用药。因此，将用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠，使产品收率、纯度和质量明显提高，降低临床用药风险，对临床治疗的有效性和安全性带来巨大意义。
发明内容
本发明的目的是克服现有技术存在的缺陷，提供一种用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法，能够明显提高产品收率、纯度和质量，降低临床用药风险。
实现本发明目的的技术方案是：一种用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法；包括如下步骤：
（1）将阴离子交换树脂进行装柱，然后采用碱性混合液对树脂进行再生；
（2）再生后，先采用纯化水对树脂清洗，然后用氯化钠溶液平衡树脂；
（3）将达肝素钠粗品溶于纯化水中，上样，再用氯化钠溶液进行冲洗，去除粗品中杂质及多余小分子；
（4）采用氯化钠溶液对步骤（3）中的中间产品进行洗脱；
（5）洗脱完毕后，采用纯化水冲洗层析柱；
（6）洗脱液用乙醇沉淀，减压干燥得到符合质量标准的达肝素钠原料药。
上述技术方案，所述步骤（1）中碱性混合液为氢氧化钠和氯化钠混合液，所述氢氧化钠浓度为0.1mol/L～0.5mol/L，氯化钠浓度为1mol/L～3mol/L。
上述技术方案，步骤（2）中纯化水冲洗阴离子交换树脂至流出液pH＜8，再用0.04mol/L～0.06mol/L氯化钠溶液冲洗平衡至流出液pH＜8，所述氯化钠溶液PH值为7～7.5。
上述技术方案，所述步骤（3）中达肝素钠溶于纯化水后形成的溶液浓度为1%，上样时采用蠕动泵将上述达肝素钠溶液打入树脂柱中，并采用浓度为0.04mol/L～0.06mol/L、PH值为7～7.5的氯化钠溶液平衡2柱体积；最后用浓度为0.08mol/L、PH值为7～7.5的氯化钠溶液冲洗至紫外检测仪数字归零。
上述技术方案，所述步骤（4）中洗脱所用的氯化钠溶液浓度为0.6mol/L～1mol/L，PH值为7～7.5。
上述技术方案，所述碱性混合液中氢氧化钠浓度为0.3mol/L，氯化钠浓度为2mol/L。
上述技术方案，所述步骤（2）和步骤（3）中冲洗平衡用氯化钠溶液浓度均为0.05mol/L。
上述技术方案，所述步骤（5）洗脱完毕后，采用2柱体积纯化水冲洗层析柱。
本发明制备过程中所用各种溶液的浓度及PH值都对产品具有很大影响，经过实验得出如下结论：
（一）阴离子交换树脂柱平衡液氯化钠浓度及pH值的选择：
考察上样后，用平衡液平衡时氯化钠浓度、平衡液pH值对产品质量的影响。实验结果表明，在所考察的因素中，氯化钠浓度和溶液pH值对产品质量有较大影响。浓度过小，不易使未吸附的样品冲洗出来；浓度过大，将使已吸附好的样品被洗掉。pH值偏酸或偏碱均影响树脂的吸附力。
（二）冲洗液氯化钠浓度与pH值的选择：
考察对解聚好的达肝素钠中杂质及多余小分子的冲洗过程中氯化钠浓度和pH值对产品质量的影响。实验结果表明，冲洗液浓度过小，导致产品中小分子偏多，分子量与分子量分布不符合达肝素钠标准要求；冲洗液浓度过高，导致产品中小分子偏少，分子量与分子量分布不符合达肝素钠标准要求。冲洗液pH值偏酸或偏碱，导致树脂吸附能力改变，冲洗条件随之改变。
（三）洗脱液氯化钠浓度与pH值的选择：
考察对终产品的洗脱过程中氯化钠浓度和溶液pH值对产品质量的影响。实验结果表明，洗脱液中氯化钠浓度过小，导致一部分大分子难以洗脱，产品不符合达肝素钠质量标准；洗脱液中氯化钠浓度过大，导致产品中钠含量不符合要求，产品不合格。洗脱液pH值偏酸或偏碱，导致树脂吸附能力改变，洗脱条件随之改变
采用上述技术方案后，本发明具有以下积极的效果：本发明通过采用溶液浓度及PH值均在最佳范围内的氯化钠溶液进行制备过程中的平衡、冲洗和洗脱，既保证了产品分子量分布符合达肝素钠标准要求，又具有较高的纯度和收率，保证了达肝素钠产品质量，降低了临床用药风险。
附图说明
为了使本发明的内容更容易被清楚地理解，下面根据具体实施例并结合附图，对本发明作进一步详细的说明，其中
图1为本发明制备过程流程图；
图2为本发明脱过程中紫外监测器显示的洗脱液吸光度随时间的变化图；
图3为市售产品通过离子色谱法电化学检测器测定的亚硝酸盐色谱图；
图4为本发明自制产品通过离子色谱法电化学检测器测定的亚硝酸盐色谱图；
图5为本产品解聚后粗品，处理前杂质色谱图；
图6为本发明制备方法处理后成品色谱图。
具体实施方式
（实施例1）
见图1，本发明用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法包括如下步骤：
步骤1：将阴离子交换树脂进行装柱，随后将0.3mol/L氢氧化钠2mol/L氯化钠混合溶液用蠕动泵打入层析柱，至少冲洗2个柱体积。
步骤2：用纯化水冲洗至流出液pH值至7.0～8.0，再用平衡液0.05mol/L氯化钠（pH7.0～7.5）冲洗至流出液pH值为7.0～7.5，并检查紫外检测仪是否连接妥当。
步骤3：将解聚好的达肝素钠溶于纯化水中，配成1%溶液，用蠕动泵打入树脂柱中上样。
步骤4：用平衡液0.05mol/L氯化钠（pH7.0～7.5）平衡2个柱体积。
步骤5：用冲洗液0.08mol/L氯化钠（pH7.0～7.5）冲洗，紫外冲洗峰从0开始上升，至紫外冲洗峰归零，见图2。
步骤6：用1mol/L氯化钠（pH7.0～7.5）洗脱，收集紫外洗脱峰。
步骤7：洗脱完毕，才用2柱体积纯化水冲洗层析柱。
步骤8：洗脱液用乙醇沉淀，减压干燥得到符合质量标准的达肝素钠原料药。
对上述方法制备的达肝素钠成品中的亚硝酸盐通过离子色谱法电化学检测器检测测定，其残留量小于5ppm，同时其他阴离子与市售产品比较也明显减少，见图3和图4。图5和图6分别为达肝素钠裂解后粗品和通过本发明方法制备的达肝素钠成品通过分子排阻法测定的达肝素钠分子量与分子量分布图，由上述两图可知，通过阴离子交换树脂纯化制备后的达肝素钠成品色谱图中的硫酸皮肤素等杂质明显降低。
综上所述，利用本发明方法制备的达肝素钠重均分子量为5600～6400，抗Xa因子效价与抗IIa因子效价的比值1.9～3.2，产品质量明显提高，对临床治疗的有效性和安全性带来巨大意义。
以上所述的具体实施例，对本发明的目的、技术方案和有益效果进行了进一步详细说明，所应理解的是，以上所述仅为本发明的具体实施例而已，并不用于限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所做的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

Claims (7)

1.一种用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法；其特征在于：包括如下步骤：
(1)将阴离子交换树脂进行装柱，然后采用碱性混合液对树脂进行再生；
(2)再生后，先采用纯化水对树脂清洗，然后用浓度为0.04mol/L～0.06mol/L、pH值为7～7.5的氯化钠溶液平衡树脂；
(3)将达肝素钠粗品溶于纯化水中，上样，再用浓度为0.08mol/L、pH值为7～7.5的氯化钠溶液进行冲洗，去除粗品中杂质及多余小分子；
(4)采用浓度为0.6mol/L～1mol/L，pH值为7～7.5的氯化钠溶液对步骤(3)中的中间产品进行洗脱；
(5)洗脱完毕后，采用纯化水冲洗层析柱；
(6)洗脱液用乙醇沉淀，减压干燥得到符合质量标准的达肝素钠原料药。
2.根据权利要求1所述的用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法，其特征在于：所述步骤(1)中碱性混合液为氢氧化钠和氯化钠混合液，所述氢氧化钠浓度为0.1mol/L～0.5mol/L，氯化钠浓度为1mol/L～3mol/L。
3.根据权利要求1所述的用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法，其特征在于：步骤(2)中纯化水冲洗阴离子交换树脂至流出液pH＜8，再用氯化钠溶液冲洗平衡至流出液pH＜8。
4.根据权利要求3所述的用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法，其特征在于：所述步骤(3)中达肝素钠溶于纯化水后形成的溶液浓度为1％，上样时采用蠕动泵将上述达肝素钠溶液打入树脂柱中，并采用浓度为0.04mol/L～0.06mol/L、pH值为7～7.5的氯化钠溶液平衡2柱体积；最后用氯化钠溶液冲洗至紫外检测仪数字归零。
5.根据权利要求2所述的用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法，其特征在于：所述碱性混合液中氢氧化钠浓度为0.3mol/L，氯化钠浓度为2mol/L。
6.根据权利要求4所述的用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法，其特征在于：所述步骤(2)和步骤(3)中冲洗平衡用氯化钠溶液浓度均为0.05mol/L。
7.根据权利要求1～6任一项权利要求所述的用阴离子交换树脂纯化制备达肝素钠的方法，其特征在于：所述步骤(5)洗脱完毕后，采用2柱体积纯化水冲洗层析柱。
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Families Citing this family (3)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN104448045A (zh) * 2014-12-24 2015-03-25 青岛九龙生物医药有限公司 一种高纯度低分子肝素的制备方法
CN108329405B (zh) * 2018-02-08 2020-06-23 黄石市典雅生物科技有限公司 一种树脂吸附状态下保护及纯化肝素钠的方法
CN109280092A (zh) * 2018-05-16 2019-01-29 山阳县恒桓生物科技有限公司 一种粗品肝素钠的提纯方法

Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1308088A (zh) * 2001-02-28 2001-08-15 灌云县金瑞生物制品有限公司 酶解法生产肝素钠
CN1749284A (zh) * 2005-09-19 2006-03-22 南京健友生物化学制药有限公司 低分子肝素纯化方法
CN102558393A (zh) * 2011-12-31 2012-07-11 河北常山生化药业股份有限公司 一种达肝素钠制备工艺
CN102757516A (zh) * 2012-08-03 2012-10-31 常州千红生化制药股份有限公司 依诺肝素钠的脱色方法
CN103214597A (zh) * 2013-05-14 2013-07-24 枣庄赛诺康生化股份有限公司 依诺肝素钠中间体脱色方法

Family Cites Families (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
ITMO20040199A1 (it) * 2004-07-29 2004-10-29 Biofer Spa Procedimento per la purificazione da gruppi e n no rsidui di eparine a basso peso molecolare ottentite tramite nitrosazione.

Patent Citations (5)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CN1308088A (zh) * 2001-02-28 2001-08-15 灌云县金瑞生物制品有限公司 酶解法生产肝素钠
CN1749284A (zh) * 2005-09-19 2006-03-22 南京健友生物化学制药有限公司 低分子肝素纯化方法
CN102558393A (zh) * 2011-12-31 2012-07-11 河北常山生化药业股份有限公司 一种达肝素钠制备工艺
CN102757516A (zh) * 2012-08-03 2012-10-31 常州千红生化制药股份有限公司 依诺肝素钠的脱色方法
CN103214597A (zh) * 2013-05-14 2013-07-24 枣庄赛诺康生化股份有限公司 依诺肝素钠中间体脱色方法

Non-Patent Citations (1)

* Cited by examiner, † Cited by third party
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低分子肝素分离方法的临床研究;姬胜利 等;《求医问药》;20121231;第10 卷(第8期);第267页摘要，第1-4节 *

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