CN108546294A - 犬白蛋白的制备方法及其产品 - Google Patents

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Abstract

本发明公开了一种犬白蛋白的制备方法，包括：以健康犬血清或血浆为原料，用阴离子交换层析柱UniGel‑80Q进行第一次层析分离得到犬白蛋白粗品；(Ⅱ)将犬白蛋白粗品用阴离子交换层析柱QBestaroseFF进行第二次层析分离得到纯化的犬白蛋白。本发明直接以健康的犬血清或血浆为原料，用阴离子交换层析柱进行两次层析分离制备得到犬白蛋白，最终制品中犬白蛋白的含量＞100mg/ml，纯度≥97％，内毒素含量＜8EU/ml。本发明制备方法能够最大限度的降低白蛋白活性的损失，显著提高犬白蛋白纯度和回收率，步骤简便、安全性高，综合生产成本也低于常用的低温乙醇法。

Description

犬白蛋白的制备方法及其产品
技术领域
本发明涉及白蛋白的制备方法，本发明进一步涉及犬白蛋白的制备方法以及由该方法制备得到的犬白蛋白产品，属于犬白蛋白的制备领域。
背景技术
血浆白蛋白是血浆中含量最多、分子最小、溶解度大、功能较多的一种蛋白质。血浆胶体渗透压维持主要依靠血浆中白蛋白(血浆白蛋白构成血浆胶体渗透压的75％～80％左右)。1g白蛋白产生的渗透压相当于20ml血浆或40ml全血所得到的血流动力学效应。
白蛋白的制备方法很多，主要采用盐析法、有机溶剂沉淀法和热激法提取等。盐析法用硫酸铵分级沉淀后，经辛酸处理精制而得。有机溶剂沉淀法最早用于人血液制品的生产，利用乙醇的低介电常数性质以及蛋白质在一定温度、pH、离子强度及浓度条件下在不同浓度乙醇中的溶解度不同分离血浆蛋白质，可以生产出多种血浆蛋白。热激法是取血浆加热，加入辛酸钠，调pH值后加乙醇，再经过滤、脱盐、浓缩、冻干后得白蛋白。
无论是盐析法、有机溶剂沉淀法还是热激法提取方法，采用这些方法均存在白蛋白纯度和收率都较低的缺陷，不能满足生产实践的需要，亟待改进。
发明内容
本发明的主要目的是提供一种新的犬白蛋白的制备方法，该制备方法所获得的犬白蛋白不仅纯度高、收率高，该方法还可除去大肠杆菌内毒素，大大降低产品中内毒素的含量，提高产品的安全性。
本发明的上述目的是通过以下技术方案来实现的：
一种犬白蛋白的制备方法，包括：(Ⅰ)以健康犬血清或血浆为原料，用阴离子交换层析柱进行第一次层析分离得到犬白蛋白粗品；(Ⅱ)将犬白蛋白粗品用阴离子交换层析柱进行第二次层析分离得到纯化的犬白蛋白。
采用层析法制备犬白蛋白时，所采用的层析柱类型以及在进行层析时所用到的缓冲液的种类、浓度和pH值等对于犬白蛋白的收率以及纯度等有非常显著的影响。
本发明通过大量的试验发现，在采用采用层析法制备犬白蛋白时，采用阴离子交换层析柱能够明显提高犬白蛋白的收率和纯度，其中，用阴离子交换层析柱进行第一次层析分离得到犬白蛋白粗品时所采用的阴离子交换层析柱优选为阴离子交换层析柱UniGel-80Q，将犬白蛋白粗品用阴离子交换层析柱进行第二次层析分离得到纯化的犬白蛋白时所采用的阴离子交换层析柱优选为阴离子交换层析柱QBestaroseFF。
本发明通过进一步的筛选试验发现，在第一次层析以及第二次层析中用到缓冲液的种类、浓度和pH值等参数对于犬白蛋白的收率以及纯度等也有非常显著的影响。为了提高犬白蛋白的收率以及纯度，本发明对于在第一次层析以及第二次层析中用到缓冲液的种类、浓度和pH值等参数进行了优化筛选最终筛选得到了能够有效提高白蛋白的收率以及纯度的有关参数。
步骤(Ⅰ)所述的层析分离的方法优选为：
(1)将阴离子交换层析柱用缓冲液平衡；(2)将犬血清或血浆用缓冲液稀释后上样；(3)上样结束后用缓冲液对阴离子交换层析柱进行冲洗；(4)冲洗完成后用缓冲液洗脱层析柱，收集洗脱液，得到犬白蛋白粗品。
进一步优选的，步骤(Ⅰ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子交换层析柱UniGel-80Q用醋酸盐缓冲液缓冲液平衡；(2)将犬血清或血浆用醋酸盐缓冲液缓冲液稀释后上样；(3)上样结束后用醋酸盐缓冲液缓冲液对阴离子交换层析柱进行冲洗；(4)冲洗完成后用醋酸盐缓冲液缓冲液洗脱层析柱，收集洗脱液，得到犬白蛋白粗品。
更进一步优选的，步骤(Ⅰ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子交换层析柱UniGel-80Q用pH4.9～5.2的醋酸盐缓冲液缓冲液平衡；(2)将犬血清或血浆用pH4.9～5.2的醋酸盐缓冲液缓冲液稀释后上样；(3)上样结束后用pH4.9～5.2的醋酸盐缓冲液缓冲液对阴离子交换层析柱进行冲洗；(4)冲洗完成后用pH6.8～7.2的醋酸盐缓冲液缓冲液洗脱层析柱，收集洗脱液，得到犬白蛋白粗品。
特别优选的，步骤(Ⅰ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子交换层析柱UniGel-80Q用pH值为4.9～5.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液平衡至流出液pH值为4.9～5.2；(2)将犬血清或血浆用8～10倍量pH4.9～5.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液稀释后上样；(3)上样结束后用pH4.9～5.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液缓冲液对阴离子交换层析柱进行冲洗直至A280吸收回到基线水平为止；(4)冲洗完成后用pH6.8～7.2的含0.4mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液缓冲液洗脱层析柱，收集洗脱液(即洗脱液(Ⅰ))，得到犬白蛋白粗品。
步骤(Ⅱ)中将犬白蛋白粗品用阴离子交换层析柱进行第二次层析分离得到纯化的犬白蛋白的方法优选为：
(1)将阴离子层析柱QBestaroseFF用醋酸盐缓冲液平衡后，将洗脱液上样；
(2)上样结束后，用醋酸盐缓冲液洗涤层析柱直到A280吸收至基线水平，再用含0.1mol/L NaCl的醋酸盐缓冲液洗涤层析柱，当A280吸收回到基线水平后，用含0.4mol/LNaCl的醋酸盐缓冲液洗脱，收集蛋白峰，得到纯化后的犬白蛋白。
进一步优选的，步骤(Ⅱ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子层析柱QBestaroseFF用pH值为6.8～7.2的醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为6.8～7.2后，调节洗脱液的pH至6.8～7.2，上样；(2)上样结束后，用pH值为6.8～7.2的醋酸盐缓冲液充分洗涤，直到A280吸收至基线水平，再用pH 6.8～7.2含0.1mol/L NaCl的醋酸盐缓冲液洗涤层析柱，当A280吸收回到基线水平后，用pH 6.8～7.2、含0.4mol/LNaCl的醋酸盐缓冲液洗脱，收集蛋白峰，得到纯化后的犬白蛋白。
特别优选的，步骤(Ⅱ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子层析柱QBestaroseFF用pH值为6.8～7.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为6.8～7.2后，调节洗脱液的pH至6.8～7.2，上样；
(2)上样结束后，用pH值为6.8～7.2、0.03mol/L的醋酸盐缓冲液充分洗涤，直到A280吸收至基线水平，再用pH 6.8～7.2、含0.1mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液洗涤层析柱，当A280吸收回到基线水平后，用pH 6.8～7.2、含0.4mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液洗脱，收集蛋白峰(即洗脱液(Ⅱ))得到纯化后的犬白蛋白。
为了达到更好的效果，本发明还可进一步将纯化后的犬白蛋白(即洗脱液(Ⅱ))用截留率为20kDa的超滤膜超滤浓缩，直至蛋白浓度达到10％以上，然后在搅拌条件下缓慢加入加入辛酸钠，使每克白蛋白辛酸钠含量为0.16mmol～0.18mmol，0.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.4～7.4后用巴氏消毒法病毒灭活，进行配制分装。
其中，所述巴氏消毒法病毒灭活优选按照以下步骤进行：把透析后的白蛋白制品除菌过滤于无菌容器中，将白蛋白溶液加热至60℃保温10小时，使制品pH值为6.4～7.4，每克白蛋白辛酸钠含量为0.16mmol～0.18mmol的条件下进行病毒灭活。
采用本发明的两步层析方法所制备得到的最终制品中犬白蛋白的含量＞100mg/ml，纯度≥97％，内毒素含量＜8EU/ml。
本发明对上述离子交换层析法中调整pH值所用的试剂没有特殊限定。
本发明直接以健康的犬血清或血浆为原料，用阴离子交换层析柱进行两次层析分离制备得到高纯度和高收率的犬白蛋白，最终制品中犬白蛋白的含量＞100mg/ml，纯度≥97％，内毒素含量＜8EU/ml；和现有的制备方法相比，本发明制备方法能够最大限度的降低白蛋白活性的损失，显著提高犬白蛋白纯度和回收率，步骤简便、安全性更高，而且综合生产成本低于常用的低温乙醇法，具有广阔的市场应用前景。
本发明所涉及到的术语定义
除非另外定义，否则本文所用的所有技术和科学术语都具有与本发明所属领域的普通技术人员通常所了解相同的含义。
术语“内毒素”是革兰氏阴性菌细胞壁中的一种成分，也称为脂多糖。脂多糖对宿主是有毒性的。内毒素只有当细菌死亡溶解或用人工方法破坏菌细胞后才释放出来，所以称为内毒素。其毒性成分主要为类脂质A。
具体实施方式
以下结合具体实施例来进一步描述本发明，本发明的优点和特点将会随着描述而更为清楚。但这些实施例仅是范例性的，并不对本发明的范围构成任何限制。本领域技术人员应该理解的是，在不偏离本发明的精神和范围下可以对本发明的细节和形式进行修改或替换，但这些修改和替换均落入本发明的保护范围内。
实施例1犬白蛋白制剂的制备
1、制备方法
(1)将健康犬血浆或血清融化，用10倍量pH值为5.1的0.03mol/L醋酸盐缓冲液进行稀释，并用1.0mol/L醋酸调pH值至5.1，过滤澄清；
(2)将阴离子层析柱(UniGel-80Q，购自苏州纳微科技有限公司)用pH值为5.1的0.03mol/L醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为5.1后，将稀释过滤后的血清或血浆样品上样；
(3)上样结束后，用pH值为5.1的0.03mol/L醋酸盐缓冲液进行冲洗，直至A280吸收回到基线水平为止，然后用含0.4mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液(pH 6.8)洗脱层析柱，此洗脱液(Ⅰ)即为犬白蛋白粗品；
(4)将阴离子层析柱(QBestaroseFF，购自博格隆(上海)生物技术有限公司)用pH值为6.8的0.03mol/L醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为6.8后，用NaOH调节洗脱液(Ⅰ)的pH至6.8，上样；
(5)上样结束后，用pH值为6.8的0.03mol/L醋酸盐缓冲液充分洗涤，直到A280吸收至基线水平，然后用含0.1mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液(pH 6.8)洗涤层析柱，以去除结合在阳离子柱上的杂蛋白，当A280吸收回到基线水平后，用含有0.4mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液(pH 6.8)洗脱目标蛋白，收集蛋白峰，此洗脱液(Ⅱ)即为纯化后的犬白蛋白；
(6)将收集的洗脱液(Ⅱ)，用截留率为20kDa的超滤膜超滤浓缩，直至蛋白浓度达到10％以上，然后在搅拌条件下缓慢加入加入辛酸钠，使每克蛋白辛酸钠含量为0.16mmol，0.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.0。
(7)把透析后的白蛋白制品除菌过滤于无菌容器中，将白蛋白溶液加热至60℃保温10小时，使制品pH值为7.0，每克白蛋白辛酸钠含量为0.16mmol的条件下进行病毒灭活。
(8)配制分装：使最终制品为犬白蛋白的含量104mg/ml，纯度98％，内毒素含量4EU/ml的制品。
按照《中国兽药典》、《中国药典》规定的方法测定所制备的犬白蛋白的蛋白质浓度、纯度和内毒素含量。
2、制备结果
经过检测，所制备的犬白蛋白的蛋白质浓度为104mg/ml，蛋白质纯度为98％，内毒素含量4EU/ml，pH为7.0。
实施例2犬白蛋白制剂的制备
1、制备方法
(1)将健康犬血浆或血清融化，用8倍量pH值为5.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液进行稀释，并用1.0mol/L醋酸调pH值至5.2，过滤澄清；
(2)将阴离子层析柱(UniGel-80Q，苏州纳微科技有限公司)用pH值为5.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为5.2后，将稀释过滤后的血清或血浆样品上样；
(3)上样结束后，用pH值为5.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液进行冲洗，直至A280吸收回到基线水平为止，然后用含0.4mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液(pH 7.0)洗脱层析柱，此洗脱液(Ⅰ)即为犬白蛋白粗品；
(4)将阴离子层析柱(QBestaroseFF，博格隆(上海)生物技术有限公司)用pH值为7.0的0.03mol/L醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为7.0后，用NaOH调节洗脱液(Ⅰ)的pH至7.0，上样；
(5)上样结束后，用pH值为7.0的0.03mol/L醋酸盐缓冲液充分洗涤，直到A280吸收至基线水平，然后用含0.1mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液(pH 7.0)洗涤层析柱，以去除结合在阳离子柱上的杂蛋白，当A280吸收回到基线水平后，用含有0.4mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液(pH 7.0)洗脱目标蛋白，收集蛋白峰，此洗脱液(Ⅱ)即为纯化后的犬白蛋白；
(6)将收集的洗脱液(Ⅱ)，用截留率为20kDa的超滤膜超滤浓缩，直至蛋白浓度达到10％以上，然后在搅拌条件下缓慢加入加入辛酸钠，使每克蛋白辛酸钠含量为0.18mmol，0.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至6.9。
(7)把透析后的白蛋白制品除菌过滤于无菌容器中，将白蛋白溶液加热至60℃保温10小时，使制品pH值为6.9，每克白蛋白辛酸钠含量为0.18mmol的条件下进行病毒灭活。
(8)配制分装：使最终制品为犬白蛋白的含量102mg/ml，纯度97％，内毒素含量8EU/ml的制品。
按照《中国兽药典》、《中国药典》规定的方法测定所制备的犬白蛋白的蛋白质浓度、纯度和内毒素含量。
2、制备结果
经过检测，所制备的犬白蛋白的蛋白质浓度为102mg/ml，蛋白质纯度为97％，内毒素含量8EU/ml，pH为6.9。
实施例3犬白蛋白制剂的制备
1、制备方法
(1)将健康犬血浆或血清融化，用8倍量pH值为4.9的0.03mol/L醋酸盐缓冲液进行十倍稀释，并用1.0mol/L醋酸调pH值至4.9，过滤澄清；
(2)将阴离子层析柱(UniGel-80Q，苏州纳微科技有限公司)用pH值为4.9的0.03mol/L醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为4.9后，将稀释过滤后的血清或血浆样品上样；
(3)上样结束后，用pH值为4.9的0.03mol/L醋酸盐缓冲液进行冲洗，直至A280吸收回到基线水平为止，然后用含0.4mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液(pH 7.2)洗脱层析柱，此洗脱液(Ⅰ)即为犬白蛋白粗品；
(4)将阴离子层析柱(QBestaroseFF，博格隆(上海)生物技术有限公司)用pH值为7.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为7.2后，用NaOH调节洗脱液(Ⅰ)的pH至7.2，上样；
(5)上样结束后，用pH值为7.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液充分洗涤，直到A280吸收至基线水平，然后用含0.1mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液(pH 7.2)洗涤层析柱，以去除结合在阳离子柱上的杂蛋白，当A280吸收回到基线水平后，用含有0.4mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液(pH 7.2)洗脱目标蛋白，收集蛋白峰，此洗脱液(Ⅱ)即为纯化后的犬白蛋白；
(6)将收集的洗脱液(Ⅱ)，用截留率为20kDa的超滤膜超滤浓缩，直至蛋白浓度达到10％以上，然后在搅拌条件下缓慢加入加入辛酸钠，使每克蛋白辛酸钠含量为0.17mmol，0.5mol/L氢氧化钠溶液调节pH至7.2。
(7)把透析后的白蛋白制品除菌过滤于无菌容器中，将白蛋白溶液加热至60℃保温10小时，使制品pH值为7.2，每克白蛋白辛酸钠含量为0.17mmol的条件下进行病毒灭活。
(8)配制分装：使最终制品为犬白蛋白的含量103mg/ml，纯度98％，内毒素含量4EU/ml的制品。
按照《中国兽药典》、《中国药典》规定的方法测定所制备的犬白蛋白的蛋白质浓度、纯度和内毒素含量。
2、制备结果
经过检测，所制备的犬白蛋白的蛋白质浓度为103mg/ml，蛋白质纯度为98％，内毒素含量4EU/ml，pH为7.2。
本发明制备工艺与传统低温乙醇制备工艺所得产品参数比较结果见表1。
表1本发明制备工艺与传统低温乙醇制备工艺所得产品参数比较结果
从表中1可以看出，用本发明方法制备的犬白蛋白的质量和收率优于用传统低温乙醇法制备的犬白蛋白。

Claims (10)

1.一种犬白蛋白的制备方法，其特征在于，包括：以健康犬血清或血浆为原料，用阴离子交换层析柱进行第一次层析分离得到犬白蛋白粗品；(Ⅱ)将犬白蛋白粗品用阴离子交换层析柱进行第二次层析分离得到纯化的犬白蛋白。
2.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅰ)用阴离子交换层析柱进行第一次层析分离得到犬白蛋白粗品时所采用的阴离子交换层析柱为阴离子交换层析柱UniGel-80Q；步骤(Ⅱ)中将犬白蛋白粗品用阴离子交换层析柱进行第二次层析分离得到纯化的犬白蛋白时所采用的阴离子交换层析柱为阴离子交换层析柱QBestaroseFF。
3.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅰ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子交换层析柱用缓冲液平衡；(2)将犬血清或血浆用缓冲液稀释后上样；(3)上样结束后用缓冲液对阴离子交换层析柱进行冲洗；(4)冲洗完成后用缓冲液洗脱层析柱，收集洗脱液，得到犬白蛋白粗品。
4.按照权利要求3所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅰ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子交换层析柱UniGel-80Q用醋酸盐缓冲液缓冲液平衡；(2)将犬血清或血浆用醋酸盐缓冲液缓冲液稀释后上样；(3)上样结束后用醋酸盐缓冲液缓冲液对阴离子交换层析柱进行冲洗；(4)冲洗完成后用醋酸盐缓冲液缓冲液洗脱层析柱，收集洗脱液，得到犬白蛋白粗品。
5.按照权利要求4所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅰ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子交换层析柱UniGel-80Q用pH4.9～5.2的醋酸盐缓冲液缓冲液平衡；(2)将犬血清或血浆用pH4.9～5.2的醋酸盐缓冲液缓冲液稀释后上样；(3)上样结束后用pH4.9～5.2的醋酸盐缓冲液缓冲液对阴离子交换层析柱进行冲洗；(4)冲洗完成后用pH6.8～7.2的醋酸盐缓冲液缓冲液洗脱层析柱，收集洗脱液，得到犬白蛋白粗品；
优选的，步骤(Ⅰ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子交换层析柱UniGel-80Q用pH值为4.9～5.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液平衡至流出液pH值为4.9～5.2；(2)将犬血清或血浆用8～10倍量pH4.9～5.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液稀释后上样；(3)上样结束后用pH4.9～5.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液缓冲液对阴离子交换层析柱进行冲洗直至A280吸收回到基线水平为止；(4)冲洗完成后用pH6.8～7.2的含0.4mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液缓冲液洗脱层析柱，收集洗脱液，得到犬白蛋白粗品。
6.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅱ)中将犬白蛋白粗品用阴离子交换层析柱进行第二次层析分离得到纯化的犬白蛋白的方法包括：
(1)将阴离子层析柱QBestaroseFF用醋酸盐缓冲液平衡后，将洗脱液上样；
(2)上样结束后，用醋酸盐缓冲液洗涤层析柱直到A280吸收至基线水平，再用含0.1mol/L NaCl的醋酸盐缓冲液洗涤层析柱，当A280吸收回到基线水平后，用含0.4mol/LNaCl的醋酸盐缓冲液洗脱，收集蛋白峰，得到纯化后的犬白蛋白。
7.按照权利要求6所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅱ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子层析柱QBestaroseFF用pH值为6.8～7.2的醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为6.8～7.2后，调节洗脱液的pH至6.8～7.2，上样；(2)上样结束后，用pH值为6.8～7.2的醋酸盐缓冲液充分洗涤，直到A280吸收至基线水平，再用pH 6.8～7.2含0.1mol/L NaCl的醋酸盐缓冲液洗涤层析柱，当A280吸收回到基线水平后，用pH 6.8～7.2、含0.4mol/L NaCl的醋酸盐缓冲液洗脱，收集蛋白峰，得到纯化后的犬白蛋白。
8.按照权利要求7所述的制备方法，其特征在于，步骤(Ⅱ)所述的层析分离的方法为：
(1)将阴离子层析柱QBestaroseFF用pH值为6.8～7.2的0.03mol/L醋酸盐缓冲液平衡至出液pH值为6.8～7.2后，调节洗脱液的pH至6.8～7.2，上样；
(2)上样结束后，用pH值为6.8～7.2、0.03mol/L的醋酸盐缓冲液充分洗涤，直到A280吸收至基线水平，再用pH 6.8～7.2、含0.1mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液洗涤层析柱，当A280吸收回到基线水平后，用pH 6.8～7.2、含0.4mol/L NaCl的0.03mol/L醋酸盐缓冲液洗脱，收集蛋白峰得到纯化后的犬白蛋白。
9.按照权利要求1所述的制备方法，其特征在于，还包括将纯化后的犬白蛋白用截留率为20kDa的超滤膜超滤浓缩，直至蛋白浓度达到10％以上，然后在搅拌条件下缓慢加入加入辛酸钠，使每克白蛋白辛酸钠含量为0.16mmol～0.18mmol，调节pH至6.4～7.4后用巴氏消毒法病毒灭活，进行配制分装；
优选的，所述巴氏消毒法病毒灭活按照以下步骤进行：把透析后的白蛋白制品除菌过滤于无菌容器中，将白蛋白溶液加热至60℃保温10小时，使制品pH值为6.4～7.4，每克白蛋白辛酸钠含量为0.16mmol～0.18mmol的条件下进行病毒灭活。
10.由权利要求1-9任何一项制备方法制备得到犬白蛋白产品，其特征在于：犬白蛋白的含量＞100mg/ml，纯度≥97％，内毒素含量＜8EU/ml。
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