CN115304688A - 一种达肝素钠的制备方法 - Google Patents
一种达肝素钠的制备方法 Download PDFInfo
- Publication number
- CN115304688A CN115304688A CN202211026535.7A CN202211026535A CN115304688A CN 115304688 A CN115304688 A CN 115304688A CN 202211026535 A CN202211026535 A CN 202211026535A CN 115304688 A CN115304688 A CN 115304688A
- Authority
- CN
- China
- Prior art keywords
- solution
- dalteparin sodium
- preparing
- sodium
- precipitation
- Prior art date
- Legal status (The legal status is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the status listed.)
- Pending
Links
- 229940018872 dalteparin sodium Drugs 0.000 title claims abstract description 42
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title claims abstract description 25
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 claims abstract description 33
- 229920000669 heparin Polymers 0.000 claims abstract description 32
- ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N heparin Chemical compound CC(O)=N[C@@H]1[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](COS(O)(=O)=O)O[C@@H]1O[C@@H]1[C@@H](C(O)=O)O[C@@H](O[C@H]2[C@@H]([C@@H](OS(O)(=O)=O)[C@@H](O[C@@H]3[C@@H](OC(O)[C@H](OS(O)(=O)=O)[C@H]3O)C(O)=O)O[C@@H]2O)CS(O)(=O)=O)[C@H](O)[C@H]1O ZFGMDIBRIDKWMY-PASTXAENSA-N 0.000 claims abstract description 28
- 229960001008 heparin sodium Drugs 0.000 claims abstract description 24
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 19
- 239000011941 photocatalyst Substances 0.000 claims abstract description 19
- 238000000108 ultra-filtration Methods 0.000 claims abstract description 18
- 229910010413 TiO 2 Inorganic materials 0.000 claims abstract description 14
- 238000004108 freeze drying Methods 0.000 claims abstract description 13
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 claims abstract description 11
- 238000013033 photocatalytic degradation reaction Methods 0.000 claims abstract description 6
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 claims abstract description 4
- LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N Ethanol Chemical compound CCO LFQSCWFLJHTTHZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 35
- 239000012528 membrane Substances 0.000 claims description 21
- 239000008213 purified water Substances 0.000 claims description 19
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 19
- 238000001914 filtration Methods 0.000 claims description 15
- 239000000706 filtrate Substances 0.000 claims description 12
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims description 10
- 239000007788 liquid Substances 0.000 claims description 10
- 239000002244 precipitate Substances 0.000 claims description 10
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 claims description 10
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 claims description 7
- 238000001514 detection method Methods 0.000 claims description 6
- 239000011148 porous material Substances 0.000 claims description 5
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 claims description 2
- 230000035484 reaction time Effects 0.000 claims description 2
- 238000006731 degradation reaction Methods 0.000 abstract description 15
- 230000015556 catabolic process Effects 0.000 abstract description 12
- HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N Heparin Chemical compound OC1C(NC(=O)C)C(O)OC(COS(O)(=O)=O)C1OC1C(OS(O)(=O)=O)C(O)C(OC2C(C(OS(O)(=O)=O)C(OC3C(C(O)C(O)C(O3)C(O)=O)OS(O)(=O)=O)C(CO)O2)NS(O)(=O)=O)C(C(O)=O)O1 HTTJABKRGRZYRN-UHFFFAOYSA-N 0.000 abstract description 4
- 229960002897 heparin Drugs 0.000 abstract description 4
- 230000000694 effects Effects 0.000 abstract description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 abstract description 3
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 2
- 238000002144 chemical decomposition reaction Methods 0.000 abstract description 2
- 239000012535 impurity Substances 0.000 abstract description 2
- 230000000052 comparative effect Effects 0.000 description 15
- 239000000047 product Substances 0.000 description 11
- 230000009467 reduction Effects 0.000 description 4
- LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M sodium nitrite Chemical compound [Na+].[O-]N=O LPXPTNMVRIOKMN-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 4
- DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M Ilexoside XXIX Chemical compound C[C@@H]1CC[C@@]2(CC[C@@]3(C(=CC[C@H]4[C@]3(CC[C@@H]5[C@@]4(CC[C@@H](C5(C)C)OS(=O)(=O)[O-])C)C)[C@@H]2[C@]1(C)O)C)C(=O)O[C@H]6[C@@H]([C@H]([C@@H]([C@H](O6)CO)O)O)O.[Na+] DGAQECJNVWCQMB-PUAWFVPOSA-M 0.000 description 3
- 230000002785 anti-thrombosis Effects 0.000 description 3
- 239000003146 anticoagulant agent Substances 0.000 description 3
- 239000003055 low molecular weight heparin Substances 0.000 description 3
- 229940127215 low-molecular weight heparin Drugs 0.000 description 3
- 229910052708 sodium Inorganic materials 0.000 description 3
- 239000011734 sodium Substances 0.000 description 3
- IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M Nitrite anion Chemical compound [O-]N=O IOVCWXUNBOPUCH-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000003814 drug Substances 0.000 description 2
- 239000003480 eluent Substances 0.000 description 2
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 2
- 235000010288 sodium nitrite Nutrition 0.000 description 2
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 2
- PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N (2S)-6-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-4-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-5-amino-2-[[(2S)-1-[(2S,3R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2R)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-1-[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-[[(2S)-2-amino-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]propanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]acetyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-sulfanylpropanoyl]amino]-4-methylsulfanylbutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]pyrrolidine-2-carbonyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-(1H-imidazol-5-yl)propanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-hydroxybutanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-3-carboxypropanoyl]amino]-3-hydroxypropanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-methylbutanoyl]amino]-4-methylpentanoyl]amino]-4-oxobutanoyl]amino]-5-carbamimidamidopentanoyl]amino]-3-(1H-indol-3-yl)propanoyl]amino]-4-carboxybutanoyl]amino]-5-oxopentanoyl]amino]hexanoic acid Chemical compound CSCC[C@H](N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)NCC(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CS)C(=O)N[C@@H](CCSC)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N1CCC[C@H]1C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](Cc1cnc[nH]1)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CO)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](Cc1ccccc1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](Cc1c[nH]c2ccccc12)C(=O)N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CCCCN)C(O)=O PGOHTUIFYSHAQG-LJSDBVFPSA-N 0.000 description 1
- USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N Ammonium acetate Chemical compound N.CC(O)=O USFZMSVCRYTOJT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000005695 Ammonium acetate Substances 0.000 description 1
- 206010053567 Coagulopathies Diseases 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000009471 action Effects 0.000 description 1
- 235000019257 ammonium acetate Nutrition 0.000 description 1
- 229940043376 ammonium acetate Drugs 0.000 description 1
- 239000003957 anion exchange resin Substances 0.000 description 1
- 230000001858 anti-Xa Effects 0.000 description 1
- 230000010100 anticoagulation Effects 0.000 description 1
- 239000004019 antithrombin Substances 0.000 description 1
- 229940127217 antithrombotic drug Drugs 0.000 description 1
- 230000000740 bleeding effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 1
- 238000004587 chromatography analysis Methods 0.000 description 1
- 230000035602 clotting Effects 0.000 description 1
- 239000012043 crude product Substances 0.000 description 1
- 230000007547 defect Effects 0.000 description 1
- 230000000593 degrading effect Effects 0.000 description 1
- 230000007515 enzymatic degradation Effects 0.000 description 1
- 239000000945 filler Substances 0.000 description 1
- 238000010829 isocratic elution Methods 0.000 description 1
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 210000004400 mucous membrane Anatomy 0.000 description 1
- 230000002035 prolonged effect Effects 0.000 description 1
- 239000002994 raw material Substances 0.000 description 1
- 238000007670 refining Methods 0.000 description 1
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 229910000033 sodium borohydride Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000012279 sodium borohydride Substances 0.000 description 1
- 230000001954 sterilising effect Effects 0.000 description 1
- 238000004659 sterilization and disinfection Methods 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
Images
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C08—ORGANIC MACROMOLECULAR COMPOUNDS; THEIR PREPARATION OR CHEMICAL WORKING-UP; COMPOSITIONS BASED THEREON
- C08B—POLYSACCHARIDES; DERIVATIVES THEREOF
- C08B37/00—Preparation of polysaccharides not provided for in groups C08B1/00 - C08B35/00; Derivatives thereof
- C08B37/006—Heteroglycans, i.e. polysaccharides having more than one sugar residue in the main chain in either alternating or less regular sequence; Gellans; Succinoglycans; Arabinogalactans; Tragacanth or gum tragacanth or traganth from Astragalus; Gum Karaya from Sterculia urens; Gum Ghatti from Anogeissus latifolia; Derivatives thereof
- C08B37/0063—Glycosaminoglycans or mucopolysaccharides, e.g. keratan sulfate; Derivatives thereof, e.g. fucoidan
- C08B37/0075—Heparin; Heparan sulfate; Derivatives thereof, e.g. heparosan; Purification or extraction methods thereof
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Materials Engineering (AREA)
- Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Polymers & Plastics (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Polysaccharides And Polysaccharide Derivatives (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
Abstract
本发明公开了一种达肝素钠的制备方法，包括如下步骤：S1、肝素钠溶液的制备，S2、TiO2光催化降解，S3、一次沉淀，S4、超滤，S5、氧化，S6、二次沉淀，S7、冷冻干燥；本发明提出了一种新的达肝素钠的制备工艺，该工艺采用了负载型TiO2光催化剂对肝素钠溶液进行降解，解决了现有技术中化学降解与酶降解法所得产物收率不高，杂质偏多等问题；同时，对负载型TiO2光催化剂的用量、紫外灯照射波长和照射时间进行了优化，使制得达肝素钠收率更高、纯度更高，另外，负载型TiO2光催化剂在降解的过程中，能显著降低解聚过程中的硫酸化基团的丢失，能更好的保持肝素活性，并且整个制备工艺操作简便，适合大规模的推广应用。
Description
技术领域
本发明属于生物医药制备技术领域，具体涉及一种达肝素钠的制备方法。
背景技术
达肝素钠为猪黏膜的低分量肝素钠，平均分子量4000～6000，为新一代抗血栓形成药，具有明显的抗血栓形成功能，尤其抗凝血Xa因子的功能很强，但抗凝作用微弱，抗凝血酶作用极微弱。在常规剂量下不引起总的凝血方面的明显变化，也不延长出血时间。与常规的肝素相比，达肝素钠生物利用度高，作用时间长，具有稳定的抗血栓形成作用，因此，在抗血栓药物领域中有广泛的应用前景。
目前，国内外制备低分子量肝素钠的主要方法有亚硝酸钠降解法、过氧化氢降解法、酶降解法等。例如中国专利文献CN 102558393B公开了一种肝素钠制备工艺，包括制备肝素钠溶液、制备肝素降解液、制备还原液、制备粗品、精制、冻干等步骤；所得产品重均分子量为5500～6500，峰位分子量为3500～6000，分子量小于3000的组分不大于13％，分子量大于8000的组分不大于15％，抗Xa活性≥130IU/mg，原料来源丰富、产率高、质量稳定可靠、纯度高、成本低、工艺简单、操作方便。中国专利文献CN 104045744A公开了一种肝素钠的制备方法，包括：①肝素钠的降解：将肝素钠溶解并降解，得到降解液；②降解液的还原：将降解液加入硼氢化钠进行还原，得到降解还原液；③采用阴离子交换树脂进行层析，收集洗脱液；④向洗脱液中加入酒精进行沉淀；⑤除菌；⑥冻干后得到成品达肝素钠。上述专利文献中均是采用亚硝酸钠降解法制备低分子量肝素钠，这种方法会使得产物的收率偏低，同时还伴有亚硝酸根的残留。
有鉴于此，有必要提供一种新的达肝素钠的制备方法来解决上述技术问题。
发明内容
本发明的目的在于克服现有技术的不足，提供一种达肝素钠的制备方法。解决现有的低分子量肝素钠的制备方法会使得产物的收率偏低，同时还伴有亚硝酸根的残留等问题。
为解决现有技术中存在的上述问题，本发明是通过如下的技术方案来实现的：
一种达肝素钠的制备方法，包括如下步骤：
S1、肝素钠溶液的制备：将肝素钠用纯化水溶解，并调节溶液的pH值，得到第一溶液；
S2、TiO2光催化降解：向步骤S1中得到的第一溶液中加入负载型TiO2光催化剂，在紫外灯的照射下进行反应，得到第二溶液；
S3、一次沉淀：将步骤S2中得到的第二溶液用滤膜过滤，然后加入乙醇进行一次沉淀；
S4、超滤：倒去步骤S3中得到的一次沉淀的上清液，加纯化水溶解沉淀，并用超滤膜进行超滤，收集滤液；
S5、氧化：调节步骤S4中得到的滤液的pH值为碱性，加入过氧化氢溶液进行氧化反应，得到第三溶液；
S6、二次沉淀：将步骤S5中得到的第三溶液用滤膜过滤，调节料液的pH值，然后加入乙醇进行二次沉淀；
S7、冷冻干燥：倒去步骤S6中得到的二次沉淀的上清液，加纯化水溶解沉淀，然后调节溶液的pH值为酸性，经HPLC检测、过滤、冷冻干燥，即可得到达肝素钠。
进一步地，步骤S1中，所述肝素钠溶液的质量浓度为2～5％，所述pH值为6.5～7.5。
进一步地，步骤S2中，所述负载型TiO2光催化剂的加入量为所述肝素钠质量的0.02～0.05倍；所述紫外灯照射波长为380～390nm；所述反应时间为3～5h。
进一步地，步骤S3中，所述滤膜的孔径规格为0.22μm，所述乙醇的浓度为95％，用量为所述第一溶液体积的2～4倍。
进一步地，步骤S4中，所述纯化水的用量为所述第一溶液体积的2～4倍，所述超滤膜的截留分子量为10000。
进一步地，步骤S5中，所述pH值为10～11；所述过氧化氢溶液的浓度为30％，加入量为所述滤液体积的0.5～1.5％；所述氧化反应的温度为室温，时间为12～15h。
进一步地，步骤S6中，所述滤膜孔径规格为0.22μm，所述pH值为6.5～7.5，所述乙醇的浓度为95％，用量为所述第一溶液体积的4～8倍。
进一步地，步骤S7中，所述纯化水的用量为所述第一溶液体积的1～2倍，所述pH值为5.5～6.5。
与现有技术相比，本发明具有如下优点：
本发明提出了一种新的达肝素钠的制备工艺，该工艺采用了负载型TiO2光催化剂对肝素钠溶液进行降解，解决了现有技术中化学降解与酶降解法所得产物收率不高，杂质偏多等问题；同时，对负载型TiO2光催化剂的用量、紫外灯照射波长和照射时间进行了优化，使制得达肝素钠收率更高、纯度更高，另外，负载型TiO2光催化剂在降解的过程中，能显著降低解聚过程中的硫酸化基团的丢失，能更好的保持肝素活性，并且整个制备工艺操作简便，适合大规模的推广应用。
附图说明
为了更清楚地说明本发明实施例中的技术方案，下面将对实施例描述中所需要使用的附图作简单的介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。
图1为本发明达肝素钠的制备方法流程图；
图2为本发明实施例2中达肝素钠的HPLC检测图，其中，图(A)为达肝素钠标品色谱图；图(B)为制得的达肝素钠样品色谱图。
具体实施方式
下面将结合本发明实施例中的附图对本发明实施例中的技术方案进行清楚、完整地描述。显然，所描述的实施例仅仅是本发明一部分实施例，而不是全部的实施例，基于本发明中的实施例，本领域普通技术人员在没有做出创造性劳动前提下所获得的所有其他实施例，都属于本发明保护的范围。
本发明所使用的常规试剂和设备，如无特殊说明，均可市售获得。
实施例1
一种达肝素钠的制备方法，包括如下步骤：
S1、肝素钠溶液的制备：将10g肝素钠用500ml纯化水溶解，并调节溶液的pH值为6.5，得到第一溶液；
S2、TiO2光催化降解：向步骤S1中得到的第一溶液中加入负载型TiO2光催化剂0.2g，在波长为390nm紫外灯的照射下反应5h，得到第二溶液；
S3、一次沉淀：将步骤S2中得到的第二溶液用孔径规格为0.22μm的滤膜过滤，然后加入95％乙醇1000ml进行一次沉淀；
S4、超滤：倒去步骤S3中得到的一次沉淀的上清液，加1000ml纯化水溶解沉淀，并用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，收集滤液；
S5、氧化：调节步骤S4中得到的滤液的pH值为10，加入30％过氧化氢溶液5ml，在室温下进行氧化反应12h，得到第三溶液；
S6、二次沉淀：将步骤S5中得到的第三溶液用孔径规格为0.22μm的滤膜过滤，调节料液的pH值为6.5，然后加入95％乙醇2000ml进行二次沉淀；
S7、冷冻干燥：倒去步骤S6中得到的二次沉淀的上清液，加500ml纯化水溶解沉淀，然后调节溶液的pH值为5.5，经HPLC检测、过滤、冷冻干燥，即可得到达肝素钠7.13g。
实施例2
一种达肝素钠的制备方法，包括如下步骤：
S1、肝素钠溶液的制备：将20g肝素钠用500ml纯化水溶解，并调节溶液的pH值为7.0，得到第一溶液；
S2、TiO2光催化降解：向步骤S1中得到的第一溶液中加入负载型TiO2光催化剂0.8g，在波长为387.5nm紫外灯的照射下反应4h，得到第二溶液；
S3、一次沉淀：将步骤S2中得到的第二溶液用孔径规格为0.22μm的滤膜过滤，然后加入95％乙醇1500ml进行一次沉淀；
S4、超滤：倒去步骤S3中得到的一次沉淀的上清液，加1500ml纯化水溶解沉淀，并用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，收集滤液；
S5、氧化：调节步骤S4中得到的滤液的pH值为10.5，加入30％过氧化氢溶液15ml，在室温下进行氧化反应14h，得到第三溶液；
S6、二次沉淀：将步骤S5中得到的第三溶液用孔径规格为0.22μm的滤膜过滤，调节料液的pH值为7.0，然后加入95％乙醇3000ml进行二次沉淀；
S7、冷冻干燥：倒去步骤S6中得到的二次沉淀的上清液，加750ml纯化水溶解沉淀，然后调节溶液的pH值为6.0，经HPLC检测、过滤、冷冻干燥，即可得到达肝素钠14.5g。
所述达肝素钠的HPLC(岛津LC-20AD)检测条件如下：
保护柱：TSKgel guardcolumnSWXL6.0*40；
分析柱：亲水性键合硅胶为填充剂[TSK G2000SWXL(300mm×7.8mm)]；
柱温：30℃；
进样量：25μl；
流速：0.5ml/min；
流动相：0.771％乙酸铵水溶液；
检测器：示差折光检测器(温度为30℃、灵敏度为32)；
等度洗脱。
所得液相色谱图如图2所示，从图中的色谱图中可以看出，肝素钠经负载型TiO2光催化剂降解为达肝素钠。
实施例3
一种达肝素钠的制备方法，包括如下步骤：
S1、肝素钠溶液的制备：将25g肝素钠用500ml纯化水溶解，并调节溶液的pH值为7.5，得到第一溶液；
S2、TiO2光催化降解：向步骤S1中得到的第一溶液中加入负载型TiO2光催化剂1.25g，在波长为380nm紫外灯的照射下反应3h，得到第二溶液；
S3、一次沉淀：将步骤S2中得到的第二溶液用孔径规格为0.22μm的滤膜过滤，然后加入95％乙醇2000ml进行一次沉淀；
S4、超滤：倒去步骤S3中得到的一次沉淀的上清液，加2000ml纯化水溶解沉淀，并用截留分子量为10000的超滤膜进行超滤，收集滤液；
S5、氧化：调节步骤S4中得到的滤液的pH值为11，加入30％过氧化氢溶液30ml，在室温下进行氧化反应15h，得到第三溶液；
S6、二次沉淀：将步骤S5中得到的第三溶液用孔径规格为0.22μm的滤膜过滤，调节料液的pH值为7.5，然后加入95％乙醇4000ml进行二次沉淀；
S7、冷冻干燥：倒去步骤S6中得到的二次沉淀的上清液，加1000ml纯化水溶解沉淀，然后调节溶液的pH值为6.5，经HPLC检测、过滤、冷冻干燥，即可得到达肝素钠17.73g。
对比例1
达肝素钠的制备方法基本同实施例2一致，不同之处在于步骤S2中，负载型TiO2光催化剂的用量为0.2g。
对比例2
达肝素钠的制备方法基本同实施例2一致，不同之处在于步骤S2中，负载型TiO2光催化剂的用量为1.2g。
对比例3
达肝素钠的制备方法基本同实施例2一致，不同之处在于步骤S2中，紫外灯的波长为370nm。
对比例4
达肝素钠的制备方法基本同实施例2一致，不同之处在于步骤S2中，紫外灯的波长为400nm。
对比例5
达肝素钠的制备方法基本同实施例2一致，不同之处在于步骤S2中，在紫外灯的照射下反应2h。
对比例6
达肝素钠的制备方法基本同实施例2一致，不同之处在于步骤S2中，在紫外灯的照射下反应6h。
对比例7
达肝素钠采用中国专利文献CN 104045744A实施例1中的方法进行制备。
实施例4
将实施例1～3和对比例1～7中制得的达肝素钠进行性能指标的测试，测试结果如下表1所示：
表1达肝素钠性能指标测试结果
从表1中的数据可以看出，实施例1～3制得的达肝素钠的性能指标均符合EP标准，并且收率在70％以上。对比例1中负载型TiO2光催化剂的用量较少、对比例4中紫外灯的照射波长较长、对比例5中紫外灯的照射时间较短，导致降解反应不充分，使得重均分子量偏高，产物中大于8000分子量的比例较高，产物的纯度下降，收率降低；对比例2中负载型TiO2光催化剂的用量较多、对比例3中紫外灯的照射波长较短、对比例6中紫外灯的照射时间较长，导致降解过度，使得重均分子量偏低，产物中小于3000分子量的比例较高，产物的纯度下降，收率降低，结果表明，负载型TiO2光催化剂的用量、紫外灯照射波长和照射时间只有在本发明的范围内，才能使得产物的纯度更高，收率更高；对比例7为采用中国专利文献CN104045744A中实施例1的方法进行制备，结果发现，制得的产物收率偏低。
以上实施例，仅为本发明的具体实施方式，用以说明本发明的技术方案，而非对其限制，本发明的保护范围并不局限于此，尽管参照前述实施例对本发明进行了详细的说明，本领域的普通技术人员应当理解：任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，其依然可以对前述实施例所记载的技术方案进行修改或可轻易想到变化，或者对其中部分技术特征进行等同替换；而这些修改、变化或者替换，并不使相应技术方案的本质脱离本发明实施例技术方案的精神和范围，都应涵盖在本发明的保护范围之内。
Claims (8)
1.一种达肝素钠的制备方法，其特征在于，包括如下步骤：
S1、肝素钠溶液的制备：将肝素钠用纯化水溶解，并调节溶液的pH值，得到第一溶液；
S2、TiO2光催化降解：向步骤S1中得到的第一溶液中加入负载型TiO2光催化剂，在紫外灯的照射下进行反应，得到第二溶液；
S3、一次沉淀：将步骤S2中得到的第二溶液用滤膜过滤，然后加入乙醇进行一次沉淀；
S4、超滤：倒去步骤S3中得到的一次沉淀的上清液，加纯化水溶解沉淀，并用超滤膜进行超滤，收集滤液；
S5、氧化：调节步骤S4中得到的滤液的pH值为碱性，加入过氧化氢溶液进行氧化反应，得到第三溶液；
S6、二次沉淀：将步骤S5中得到的第三溶液用滤膜过滤，调节料液的pH值，然后加入乙醇进行二次沉淀；
S7、冷冻干燥：倒去步骤S6中得到的二次沉淀的上清液，加纯化水溶解沉淀，然后调节溶液的pH值为酸性，经HPLC检测、过滤、冷冻干燥，即可得到达肝素钠。
2.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于，步骤S1中，所述肝素钠溶液的质量浓度为2～5％，所述pH值为6.5～7.5。
3.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于，步骤S2中，所述负载型TiO2光催化剂的加入量为所述肝素钠质量的0.02～0.05倍；所述紫外灯照射波长为380～390nm；所述反应时间为3～5h。
4.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于，步骤S3中，所述滤膜的孔径规格为0.22μm，所述乙醇的浓度为95％，用量为所述第一溶液体积的2～4倍。
5.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于，步骤S4中，所述纯化水的用量为所述第一溶液体积的2～4倍，所述超滤膜的截留分子量为10000。
6.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于，步骤S5中，所述pH值为10～11；所述过氧化氢溶液的浓度为30％，加入量为所述滤液体积的0.5～1.5％；所述氧化反应的温度为室温，时间为12～15h。
7.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于，步骤S6中，所述滤膜孔径规格为0.22μm，所述pH值为6.5～7.5，所述乙醇的浓度为95％，用量为所述第一溶液体积的4～8倍。
8.根据权利要求1所述的达肝素钠的制备方法，其特征在于，步骤S7中，所述纯化水的用量为所述第一溶液体积的1～2倍，所述pH值为5.5～6.5。
Priority Applications (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211026535.7A CN115304688A (zh) | 2022-08-25 | 2022-08-25 | 一种达肝素钠的制备方法 |
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| CN202211026535.7A CN115304688A (zh) | 2022-08-25 | 2022-08-25 | 一种达肝素钠的制备方法 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| CN115304688A true CN115304688A (zh) | 2022-11-08 |
Family
ID=83863947
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| CN202211026535.7A Pending CN115304688A (zh) | 2022-08-25 | 2022-08-25 | 一种达肝素钠的制备方法 |
Country Status (1)
| Country | Link |
|---|---|
| CN (1) | CN115304688A (zh) |
Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5599801A (en) * | 1993-05-07 | 1997-02-04 | Choay S.A. | Purified heparin fractions, method for obtaining them and pharmaceutical compositions containing them |
| CN104558252A (zh) * | 2015-02-03 | 2015-04-29 | 华北制药华坤河北生物技术有限公司 | 一种由肝素钠粗品生产依诺肝素钠的方法 |
| CN107141373A (zh) * | 2017-07-01 | 2017-09-08 | 湖北亿诺瑞生物制药有限公司 | 一种新的达肝素钠的制备工艺 |
| WO2019000336A1 (zh) * | 2017-06-29 | 2019-01-03 | 辰欣药业股份有限公司 | 低分子肝素那曲肝素钙标准品库及其制备方法 |
-
2022
- 2022-08-25 CN CN202211026535.7A patent/CN115304688A/zh active Pending
Patent Citations (4)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US5599801A (en) * | 1993-05-07 | 1997-02-04 | Choay S.A. | Purified heparin fractions, method for obtaining them and pharmaceutical compositions containing them |
| CN104558252A (zh) * | 2015-02-03 | 2015-04-29 | 华北制药华坤河北生物技术有限公司 | 一种由肝素钠粗品生产依诺肝素钠的方法 |
| WO2019000336A1 (zh) * | 2017-06-29 | 2019-01-03 | 辰欣药业股份有限公司 | 低分子肝素那曲肝素钙标准品库及其制备方法 |
| CN107141373A (zh) * | 2017-07-01 | 2017-09-08 | 湖北亿诺瑞生物制药有限公司 | 一种新的达肝素钠的制备工艺 |
Non-Patent Citations (2)
| Title |
|---|
| A. BLAZKOVÁ等: "Photocatalytic degradation of heparin over titanium dioxide", JOURNAL OF MATERIALS SCIENCE, vol. 30, pages 729, XP009018286, DOI: 10.1007/BF00356334 * |
| HIGASHI K等: "Photochemical preparation of a novel low molecular weight heparin", CARBOHYDRATE POLYMERS, vol. 87, no. 02, pages 1737 - 1743, XP028112478, DOI: 10.1016/j.carbpol.2011.09.087 * |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| JP2746621B2 (ja) | 血液透析用透析膜 | |
| CN105481923B (zh) | 一种烟酰胺腺嘌呤二核苷酸的制备方法 | |
| CN111718427B (zh) | 高醛基含量的双醛纤维素及其制备方法和应用 | |
| JP2012111758A (ja) | 未分画ヘパリンの酸化方法及びヘパリン及びヘパリン製品中のグリコセリンの有無の検出 | |
| CN103232558B (zh) | 一种高品质低分子达特安瑞的制备方法 | |
| CN114591448B (zh) | 一种桑树桑黄子实体甘露半乳聚糖及其制备和用途 | |
| CN102040671A (zh) | 一种超低分子量肝素的制备及纯化工艺 | |
| CN106883321B (zh) | 一种从肝素钠副产物中提取舒洛地特原料药的方法 | |
| CN113201081A (zh) | 具免疫活性的平卧菊三七多糖及其制备方法和应用 | |
| CN115304688A (zh) | 一种达肝素钠的制备方法 | |
| CN115386013B (zh) | 一种具有强效抗凝活性的海带多糖及其制备方法和应用 | |
| CN102516408A (zh) | 一种玻璃酸钠的纯化方法 | |
| CN116903688A (zh) | 一种具有urat1抑制活性的密蒙花苷及其制备方法和应用 | |
| CN109589947A (zh) | 一种含多酚羟基聚苯乙烯系大孔吸附树脂制备方法及应用 | |
| CN101787039A (zh) | 一种高纯度的头孢美唑钠化合物 | |
| CN109761858B (zh) | 一种甲磺酸加贝酯的精制方法 | |
| CN111196862B (zh) | 一种舒更葡糖钠的精制方法 | |
| CN110586042B (zh) | 废水处理的方法及六价铬离子吸附剂的制备方法 | |
| CN112107590A (zh) | 鱼鳔来源肝素类粘多糖在制备血管生成抑制剂中的应用 | |
| CN110694617B (zh) | 一种莫西沙星合成用催化剂的制备方法 | |
| CN111154012A (zh) | 一种超高纯度硫酸乙酰肝素的制备方法 | |
| CN112321751A (zh) | 一种高品质依诺肝素钠的精制方法 | |
| CN112094177A (zh) | 一种丁香酚二聚体b的制备方法及应用 | |
| CN115057950A (zh) | 一种从那屈肝素钙废料中制备超低分子肝素的方法 | |
| CN115057846B (zh) | 一种曲格列汀二聚体的制备方法 |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PB01 | Publication | ||
| PB01 | Publication | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination | ||
| SE01 | Entry into force of request for substantive examination |