RU2021126015A

RU2021126015A - ОЧИСТКА иРНК ФИЛЬТРАЦИЕЙ В ТАНГЕНЦИАЛЬНОМ ПОТОКЕ

Info

Publication number: RU2021126015A
Application number: RU2021126015A
Authority: RU
Inventors: Йоханнес Гайгер; Мартин ТРЕМЛЬ
Original assignee: Этрис Гмбх
Priority date: 2019-02-11
Filing date: 2020-02-11
Publication date: 2023-03-14

Claims

1. Способ очистки молекул иРНК, где указанный способ включает

(Iа) очистку осажденных молекул иРНК из суспензии, включающей осажденные молекулы иРНК, с использованием первого раствора,

(Iб) промывку и растворение очищенных осажденных молекул иРНК, полученных на стадии (Iа), с использованием второго раствора,

(IIа) очистку молекул иРНК из растворенных молекул иРНК, полученных на стадии (Iб), с использованием третьего раствора, включающего хелатирующий агент, а затем

(IIб) промывку очищенных молекул иРНК, полученных на стадии (IIа) с использованием четвертого раствора,

где стадии (Iа)-(IIб) проводят с использованием фильтрации в тангенциальном потоке.

2. Способ по п. 1, где хелатирующим агентом является ЭДТА.

3. Способ по п. 1 или 2, где значение рН третьего раствора находится в интервале от 1 до 10.

4. Способ по любому из предшествующих пунктов, где третий раствор включает буферное вещество MOPS.

5. Способ по любому из предшествующих пунктов, где стадии (Iа)-(IIб) проводят при температуре от 0°С до 25°С.

6. Способ по любому из предшествующих пунктов, где перед стадией (Iа) указанную суспензию получают с использованием ацетата аммония для осаждения молекул иРНК, и где первый раствор содержит ацетат аммония.

7. Способ по любому из предшествующих пунктов, где второй раствор представляет собой воду или где четвертый раствор представляет собой воду или включает хлорид и/или цитрат натрия.

8. Способ по любому из предшествующих пунктов, где молекулы иРНК содержатся в концентрате после фильтрации в тангенциальном потоке.

9. Способ по п. 8, где концентрат, полученный на стадии (Iа), используют в качестве питающего потока раствора для фильтрации в тангенциальном потоке на стадии (Iб), концентрат, полученный на стадии (Iб), используют в качестве питающего потока раствора на стадии (IIа), и концентрат, полученный на стадии (IIа), используют в качестве питающего раствора на стадии (IIб).

10. Способ по любому из предшествующих пунктов, где молекулы иРНК, содержащиеся в суспензии, получают транскрипцией in vitro.

11. Способ по любому из предшествующих пунктов, где способ дополнительно включает дефосфорилирование и/или полиаденилирование и/или пост-кэппинг молекул иРНК.

12. Способ по п. 11, где способ включает дефосфорилирование молекул иРНК, полученных на стадии (Iб), с последующим выполнением этапов (Iа)-(IIб), с последующим полиаденилированием полученных молекул мРНК, с последующим выполнением стадий (Iа)-(IIб).

13. Способ по любому из предшествующих пунктов, где в случае стадии (Iа) для фильтрации в тангенциальном потоке используют фильтрационную мембрану с пределом отсечения по молекулярной массе от 300 кДа до 0,65 мкм, и/или где в случае стадий (Iб) и (IIб) используют фильтрационную мембрану с пределом отсечения по молекулярной массе 1 кДа до 0,65 мкм, и/или в случае стадии (IIа) используют фильтрационную мембрану с пределом отсечения по молекулярной массе по меньшей мере 70 кДа.

14. Способ по любому из предшествующих пунктов, где объем диафильтрации любого первого, второго, третьего и/или четвертого раствора составляет 1-кратный объем суспензии на стадии (Iа).

15. Способ получения фармацевтической композиции, включающий

(а) очистку молекул иРНК способом по любому из пп 1-14, и

(б) переработку полученных таким образом молекул иРНК в фармацевтическую композицию.