RU2005106238A - Способ выделения кишечного белка, связывающего холестерин - Google Patents

Claims (21)

1. Способ выделения белка, в котором

a) получают биологический материал;

b) биологический материал из a) инкубируют с фотореактивным 2-азетидиноновым соединением, которое является радиоактивно меченым и способно специфически связываться с указанным белком;

c) солюбилизируют данный биологический материал и удаляют клеточный дебрис;

d) добавляют супернатант в устройство, содержащее агарозу с лектином пшеничных ростков;

e) элюат агарозы с лектином пшеничных ростков из d) вносят на колонку с гидроксилапатитом;

f) радиоактивно меченые фракции из e) загружают на препаративный SDS-PAGE;

g) радиоактивно меченые фракции собирают и при необходимости осаждают.

2.Способ по п.1, в котором биологический материал представляет собой кишечную ткань, или клетки из кишечной клеточной культуры, или клетки щеточной каймы подвздошной кишки человека, крысы, мыши или кролика.

3. Способ по п.1, в котором фотореактивное 2-азетидиноновое соединение имеет следующую структуру формулы I:

где R выбран из одной из следующих групп a)-e):

4.Способ выделения белка, связывающего холестерин, в котором

a) получают биологический материал;

b) биологический материал из a) инкубируют с фотореактивным ингибитором захвата холестерина, который является радиоактивно меченым или биотин-меченым;

c) солюбилизируют биологический материал из b) и удаляют клеточный дебрис;

d) супернатант подвергают хроматографическим процедурам или добавляют в стрептавидин-агарозу;

e) добавляют элюат в SDS-PAGE;

f) белки, соответствующие диапазону размеров 140-150 кДа, удаляют, элюируют и при необходимости осаждают.

5.Способ по п.4, в котором биологический материал представляет собой ткань кишечника, или клетки из кишечной клеточной культуры, или клетки щеточной каймы подвздошной кишки человека, крысы, мыши или кролика.

6. Способ по п.5, в котором фотореактивный ингибитор захвата холестерина, являющийся биотин-меченым, имеет следующую структуру:

7. Белок, обладающий способностью специфически связывать ингибиторы абсорбции холестерина, который выделяют способом по пп.1-6.

8. Белок по п.7, в котором данный белок имеет размер от 140 до 150 кДа.

9. Белок по п.8, в котором данный белок имеет размер 145 кДа.

10. Белок по п.8, в котором данный белок гликозилирован.

11. Комплекс, образованный белком по пп.7-10 и соединением формулы I

где R выбран из одной из следующих групп a)-e):

12. Комплекс, образованный белком по пп.7-10 и соединением, имеющим структуру

13. Фармацевтическая композиция, содержащая белок по пп.7-10 и фармацевтически приемлемые соединения для получения лекарственного средства.

14. Фармацевтическая композиция, содержащая комплекс по п.11 или 12 и фармацевтически приемлемые соединения для получения лекарственного средства.

15.Применение белка по пп.7-10 для производства фармацевтической композиции по п.13 для лечения заболевания, которое связано с повышенными уровнями холестерина.

16. Применение комплекса по пп.11 и 12 для производства фармацевтической композиции по п.14 для лечения заболевания, которое связано с повышенными уровнями холестерина.

17. Применение белка по пп.7-10 для идентификации соединения, ингибирующего вторичный захват холестерина, в котором

a) получают биологический материал, который содержит белок по пп.7-10;

b) обеспечивают соединение;

c) осуществляют взаимодействие биологического материала из a) и соединения из b);

d) определяют количество холестерина, захваченного биологическим материалом из c);

e) результат из d) сравнивают с результатами контрольного эксперимента, в котором определяют захват холестерина биологическим материалом, который имеет такую же видовую и/или тканевую специфичность как биологический материал из a), но не приведен в контакт с соединением из b);

f) результаты из e) определяют соединение, ингибирующее вторичный захват холестерина, в случае пониженного захвата холестерина клетками, которые приведены в контакт с соединением из b).

18. Лекарственное средство, содержащее соединение, которое идентифицировано способом по п.17, а также фармацевтически приемлемые эксципиенты, для лечения заболевания, которое связано с повышенными уровнями холестерина.

19. Лекарственное средство по п.18, в котором молекулярная масса соединения составляет от 100 до 50000 Да.

20. Лекарственное средство по п.19, в котором молекулярная масса соединения составляет от 100 до 5000 Да.

21. Лекарственное средство по п.18, в котором соединение представляет собой аналог холестерина, или белок, или пептид, или соединение, содержащее жирную кислоту.