RU1836353C

RU1836353C - Способ получени замещенных 2-окси-3-/1-(1н-имидазол-4-ил)алкил/-бензамидов или их нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот

Info

Publication number: RU1836353C
Application number: SU904743506A
Authority: RU
Inventors: Коссман Эрик; Жерт Жан-Пьер; Гобер Жан; Мишель ФИЛИПП; Вульферт Эрнст
Original assignee: Юцб С.А.
Priority date: 1988-04-28
Filing date: 1990-04-05
Publication date: 1993-08-23
Also published as: RU1830063C; UA12835A1; US4923865A; RU1814647C; PT90368B; NZ228897A; EP0341231B1; PH25461A; HUT51257A; NO173331C; CY1758A; IE891360L; ZA893140B; LTIP827A; BR1100064A; FI101791B; FI101791B1; PL161362B1; LT3671B; NO891760D0

Abstract

Использование: в качестве препарата, обладающего мочегонной, противовоспалительной и гипотонической активностью. Сущность изобретени ; продукт общей формулы О ОН R, Н,М-С1 &amp; Н 1 N Н где RI - водород или С1 С4-алкил. Выход 70%, Реагент I: соответствующий 2-окси-З- 1-(1Н-имидазол-4-ил-алкил -бензонитрил. Гидролиз в кислой среде. Выделение в свободном виде или в виде нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот. 2 пр. 9 табл.

Description

сл С

Изобретение относитс к способу получени новых замещенных 2-окси-3- 1Н- имидазол-4-ил)алкил -бензамидов, а также их нетоксичных, фармацевтически приемлемых солей кислот, которые могут использоватьс в терапии, общей формулы I

ОН R,

где RI - водород или Ci-C/j-алкил.

Известен способ получени амидов гидролизом нитрилов.

Цель изобретени - синтез новых бен- замидов с использованием известной реакции получени амидов гидролизом нитрилов, обладающих мочегонной, противовоспалительной и гипотонической активностью и значительно превосход щих по своей активности препарат пропранолол.

Ц ель достигаетс предлагаемым способом получени соединении общей формулы I гидролизом в кислой среде 2-окси-3- 1-(1 Н- имидазол-4-ил)алкил -бензонитрила общей формулы II

ОН R,

ЫнС

Н

N

Ъ

N Н

где RI имеет указанные значени .

Пример. Получение исходных 2-ок- си-3- 1-(1Н-имидазол-4-ил)алкйл -бенэонит рилов формулы.

1.. 2-Окси-3-(1 Н-имидэзол-4-и/))метил - бензонитрил.

1а. Этил-4-бензилокси-2-(1Н-имидазол- 4-ил)метил -3-оксо-бутаноат.

00 OJ

о

CJ

сл

А

со

При 10°С добавл ют за один раз 182 г (0,77 моль)4-бензилокси-3-оксо-бутаноата в раствор 16,9 г (0,735 моль) натри в 590 мл абсолютного этанола. Смесь перемешивают в течение 45 мин при температуре окружающей среды, затем охлаждают до -45°С и добавл ют в нее за один раз раствор 53,6 г (0,35 моль) хлоргидрата 4-хлорметил-1Н- имидазола в 300 мл абсолютного этанола. Смесь довод т до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 1 ч. Затем выпаривают суспензию досуха, Осадок поглощают раствором 35 мл концентрированной хлористоводородной кислоты в 900 мл воды и экстрагируют несколько раз диэтилоеым эфиром. Водную фазу нейтрализуют раствором 18 г гидроокиси натри в 200 мл воды и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натри . Высушивают на сульфате натри и выпаривают при пониженном давлении . Получают 107 г практически чистого этил-4-бензилокси-2-(1Н-имидазол-4-ил)ме- тил -3-оксо-бутаноата,

Выход 97%.

ЯМР-спектр (DMSO): 1, 11 (ЗН, t). 2,98 (2Н. т), 4,05(2H,q), 4,08(1Н,т), 4.25(2Н, dd). 4,47 (2Н . S), 6,75 (1Н. S), 7,25-7,39 (5Н, т), 7,47 (1H,d).

1 б. Этил-4-бензилокси-3-окси-2-(1 Н- имидазол-4-ил)метил -бутаноат.

В раствор 101,2 г (0,32 моль)этил-4-бен- зилокси-2-(1Н-имидазол-4-ил)метил -3-ок- со-бутаноата в 600 мл этанола, охлаждение-. го до -20°С, добавл ют за один раз лед ной раствор 6,03 г(0,16.моль)боргидрида натри в 25 мл воды. Довод т раствор до температуры окружающей среды и перемешивают в течение 1 ч. Затем добавл ют25 мл ацетона. Выпаривают раствор досуха и поглощают осадок посредством 500 мл воды. Экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натри . Высушивают на сульфате натри и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Осадок очищают хроматографией на силикагеле (элюант: смесь дихло(5метан:метанол:аммиак в объемном соотношении 93,5:6:0,5. Получают 95,8 г этил-4-бензилокси-3-окси-2-(1 Н-имидазол -4-ил)метил -бутаноала (смесь диастереои- зомеров). Выход 94%.

ЯМР-спектр (CDCIa): дельта 1.15 и 1,16 (ЗН, 2t); 2,90-3,05 (ЗН, т); 3,51-3,58 (2Н. т); 3,96-4,11 (ЗН, 2q + 1т): 4,51 и4.53(2Н. 2S): 6,73-6,75 (1Н, 2S); 7,25-7,36 (5Н, т).

1в. Хлоргидрат 4 -окси-3-(1 Н-имидазол- 4-ил)метил -дигидро-2(3)-фу района.

Гидрогенизируют 93,9 г (0,295 моль), этил-4-бензилокси-3-окси-2-(1Н-имидазол- -4-ил -бутаноата в растворе в 500 мл абсолютного этанола и 65 мл раствора хлористоводородной кислоты 6,8 н. в этаноле в присутствии 5 г 10%-ного паллади на угле и при давлении 3,5 бар. Затем фильтруют катализатор и удал ют растворитель при 65°С при пониженном давлении. Получают

67,1 г хлоргидрата 4-окси-3-(1 Н-имидазол- 4-ил)метил -дигидро-2(ЗН)-фуранона (смесь диастереоизомеров). Практически количественный выход.

Соединение используют в чистом виде

5 на следующем этапе.

1г. Н-Имидазол-4-ил)метил -2(5Н)- фуранон.

Нагревают в течение 75 мин при 160°С, при давлении 0,0013 мбар 67,1 г (0,295 моль)

0 хлоргидрата 4-окси-3-(1 Н-имидазол-4- ил)метил -дигидро-2(ЗН)-фуранона. Охлаждают и поглощают посредством 125 мл абсолютного этанола. Нейтрализуют путем добавлени 70 мл раствора аммиака 5 н. в

5 этаноле. Фильтруют суспензию и удал ют растворитель при пониженном давлении. Осадок очищают хроматографией на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:мета- нол:аммиак в объемном соотношении

0 91,5:8:0,5), После рекристаллизации в аце- тонитриле получают 27,5 г ЗН(1 Н-имидазол- 4-ил)метил -2(5Н)-фуранона. Выход 53% (рассчитанный вместе по этапам 1в и 1г). Точка плавлени 123°С.

5

ЯМР-спектр (CDCIa): дельта 3,63 (2Н, q); 4,79 (2Н, q); 6,90 (1Н, d); 7,25 (1Н, квинтуп- лет):7.52(1Н, d).

1д. 2-окси-3-(1 Н-имидазол-4-ил)-ме0 тил -бензонитрил,

В суспензию 24,6 г(0,15моль)3-(Н-ими- дазол-4-ил)метил -2(5)-фуранона в 225 мл безводного акрилонитрила последовательно добавл ют 63 мл (0,45 моль) безводного

5 триэтиламина и 57 мл (0,45 моль) триметил- хлорсилана. Смесь нагревают в рефлюксе (72-74°С) в течение 4 ч. Затем выпаривают при пониженном давлении. Осадок обрабатывают за один раз посредством 75 мл кон0 центрированного бромистого водорода и выдерживают при 80°С в течение 2 мин. Затем раствор выливают на лед, разбавл ют путем добавлени 300 мл этилацетата и 300 мл воды и нейтрализуют твердым бикар5 бонатом натри . Фильтруют на цеолите, а фильтрат экстрагируют несколько раз этилацетатом . Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натри , затем высушивают на сульфате натри и выпаривают при пониженном

давлении. Полученный осадок истирают в порошок в диэтиловом эфире. Получают 22,8 г 2-окси-3-(1Н-имидазол-4-ил)метил - бензонитрила. Выход 76%.

ЯМР-спектр (DMSO): дельта 3,90 (2Н, S); 6,88 (1Н, t); 7,06 (1Н, S); 7,41 (1Н, dd): 7.47 (1Н, dd); 7,99(1 H.d).

Его хлоргидрат плавитс при 245°С.

2. 2-окси-3- 1-(1Н-имидазол-4-ил) бензонитрил,

2а. Этил-4-бензилокси-2-{1-(1 Н-имида- зол-4-ил)этил -3-оксо-бутаноат,

Это соединение получают, как в примере 1а из этил-4-бензилокси-3-окср-бутзноа- та и 4-(1-хлррэтил)-1Н-имидазола.

Выход 68% (смесь диастереоизомеров).

ЯМР-спектр (CDCb): дельта 1,10 и 1,22 (ЗН, 2t); 1,33 и 1,36 (ЗН, 2d): 3,60-3,72 (1Н, т); 3.93-4,20 (ЗН, т); 4.47 и 4,55 (1Н, 2S); 6,70 и 6,74 (1 Н, 2S); 7,26-7,35 (5Н, т); 7,41 и 7.45 (1H.S + d).

26. Этил-4-бензилокси-3-окси-2- 1-(1 Н- имидазол-4-ил)этил -этилбутаноат.

Это соединение получают, как в примере 16, путем восстановлени этил-4-бензи- локси-2- 1-(1Н-имидазол-4-ил)этил -3-оксо- этилбутаноата. Выход 91% (смесь диастеро- изомеров).

Масс-спектр:

332 (М+). 314. 287, 211.181. 135. 95. 91.

2в. Хлоргидрат 4-окси-3- 1-(1Н-имида- зол-4-ил)этил)-дигидро-2(ЗН)-фуранон.

Это соединение получают, как в примере 1в, путем гидрогенолиза этил-4-бензи- локси-3-окси-2- 1-(1Н-имидазол-4-ил) бутаноата. Практически количественный выход. Получают смесь диастереоизомеров, которую используют в чистом виде на следующем этапе.

2г. (1Н-имидазол-4-ил)(5Н)- фуранон.

Нагревают в течение 1 ч при 170°С, при давлении 13.3 мбар 75,1 т (0.32 моль) хлор- гидрата 4-окси-3- 1-(1 Н-имидазол-4- ил) дигидро-2(ЗН)-фуранона в 30 мл этиленгликол . Затем удал ют растворитель при давлении 0,0013 мбар. Осадок поглощают в 300 мл абсолютного этанола и нейтрализуют путем добавлени 63,2 мл раствора аммиака 5 н.. в этаноле. Фильтру- ют суспензию и выпаривают растворитель при пониженном давлении. Осадок очищают путем хроматографии на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:метанол:амми- ак в объемном соотношении 91,5:8:0,5). После рекристаллизации в ацетонитриле получают 41,9 г Зт.1-(1 Н-имидазол-4- ил)(5Н)-фуранона. Выход 74% (рассчитанный совместно по этапам 2в и 2г). Точка плавлени 127-129°С.

ЯМР-спектр (DMSO): дельта 1,40(3H.d); 3,72 (1Н, q); 4.84 (2Н, t); 6,80(1Н. t); 7,35 (Ж, q);7,51 (1H. S).

2д, 2-Окси-3- 1-(1Н-имидазол-4ил )этил -бензонитрил. .

В суспензию 17,8 г (0,1 моль) 3-{1-(1Н- имидазол-4-ил)(5Н)-фуранона Ф 150 мл безводного акрилонитрила последовательно добавл ют 56 мл (0,4 моль) безводно0 го тризтиламина и 50,7 мл (0,4 моль) триметилхлорсилана. Смесь нагревают в ре- флюксе в течение 3,5 ч. Затем выпаривают реакционную смесь при пониженном давлении . Осадок обрабатывают за один раз по5 средством 50 мл концентрированной хлористоводородной кислоты и выдерживают при 80°С в течение 2 мин. Затем раствор выливают на лед, нейтрализуют насыщенным водным раствором бикарбоната на0 три и экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы промывают водой и насыщенным водным раствором хлорида натри , затем высушивают на сульфате натри и выпарива5 ют при пониженном давлении. Осадок очищают путем хроматографии на силикагеле (элюант: смесь дихлорметан:мета- нол:аммиак в объемном соотношении 93,5:6:0,5 . Получают 17,6 г 2-ркси-3- Ч1Н0 имидазол-4-ил)этил -бензонитрила практически в чистом виде. Выход 83%, Точка плавлени 172°С.

ЯМР-спектр (DMSO): дельта 1,52 (ЗН, d); 4,21 (1 H.q); 6.86 (1Н, t); 7,02(1 Н, S); 7.41(1Н,

5 dd); 7,44 (1H,dd); 7,85 (1H.S).

3. 2-окси-3- 1-(1Н-имидазол-4-ил)пен- тил -бензонитрил.

Это соединение получают как в примере 2 из этил-4-бензилокси-З-оксо-бутаноата и

0 4-(1-хлорпентил)-1Н-имидазола. Полученное соединение используют в чистом виде на следующем этапе.

; П р и м е р 2. Получение 2-окси-3- 1-(1 Н- имидазол-:4-ил)алкил -бензамидов формулы

5 I путем гидролиза 2-окси-3- 1 -(1 Н-имидазол- 4-ил)алкил -бензонитрилов формулы II.

1. 2-Окси-3-{(1 Н-имидазол-4-ил)метил - бензамид.

Перемешивают до полного растворени

0 13,1 г (66 ммоль) 2-окси-3-(1 Н-имидазол-4- ил)метил -бензонитрила (полученного по примеру 1.1) в 50 мл водного раствора 80%- ной серной кислоты (об,). Затем нагревают до 65°С в течение 3 ч. Реакционную смесь

5 выливают на лед и нейтрализуют бикарбонатом натри , фильтруют и многократно экстрагируют фильтрат этилацетатом.

Органические фазы промывают насыщенным водным раствором хлорида натри , высушивают на сульфате натри и выпаривают при пониженном давлении. Осадок очищают путем хроматографии на силикагале (элюант: смесь дихлорметан:метанол:аммиак в объемном соотношении 84:15:1. Получают 9,8 г 2-окси-3-{(1Н-имидазол-4-и )метил}-бензами- да. Выход 68%. Точка плавлени 197,6°С,. .. Анализ дл СпНпМзОз, %: расчетный: С 60,83; Н 5,07; N 19,35. фактический: С 60,91; Н 5,06; N 19,32.

2,Хлоргидрат 2 окси-3-(1 Н-имидазол- 4-ил)метил -бензамид.

Добавл ют 2г2-окси-3-(1 Н-имидазол-4- ил)метил -бензонитрила (полученного по примеру 1.1) и 4 мл воды в 40 мл метанола, предварительно насыщенного при-10°С газообразным потоком хлористоводородной кислоты. Смесь перемешивают в течение 24 ч при температуре окружающей среды. Затем концентрируют раствор при пониженном давлении и нагревают осадок при 75°-С в течение 3 ч. Затем осадо к- дважды рекристалли- |уют в воду. Получают 1,5 г хлоргидрата 2-оксй-3-(1Н-имидазол-4-ил)метил -бензами- да. Выход 59%. Точка плавлени 287,8°С.

Анализ дл CiiCnN302 -HCI, %:

расчетный: С 52,07; Н 4,73; N 16,57; С 14,0.

фактический: С 52,04; Н 4,76; N 16,54; СГ 13,94.

3.Хлоргидрат 2-окси-3- 1-(1Н-имида- зол-4-ил)этил -бензамид.

Перемешивают при 65°С в течение 3 ч суспензию 1,07,г (5 ммоль) 2-окси-3- 1-(1Н- имидазол-4-ил)этил -бензонитрила (полученного по примеру 1.2) в 4 мл водного раствора 80%-ной серной кислоты (об). Затем реакционную смесь выливают на лед и нейтрализуют бикарбонатом натри . Экстрагируют несколько раз этилацетатом. Органические фазы высушивают на сульфате натри , а растворитель выпаривают при пониженном давлении . Осадок поглощают посредством 50 мл водного раствора хлористоводородной кислоты 6 н. и затем нейтрализуют посредством водного раствора гидроокиси натри 1 н. Образовавшийс осадок фильтруют, промывают водой и диэтиловым эфиром и высушивают в вакууме. Получают 0,7 г 2-окси-3- 1-(1Н-ими- дазол-4-ил)этил -бензамида (В) в практически чистом виде. Выход 70%.

Полученное соединение преобразуют в хлоргидрат в этаноловом растворе хлористоводородной кислоты в присутствии диэти- лового эфира. Точка плавлени 240-243°С,

Анализ дл Ci2Hi3N302-HCI, %:

расчетный: С 53.83: Н 4.86; N 15.70: СГ 13,27.

фактический: С 54,0; Н 4,88; N 15,73; СГ 13,17.

4.Хлоргидраты (+) -2-окси-3- 1-(1Н-ими- дазол-4-ил)этил -бензамида и (-) -2-окси-З- (1-(1Н-имидазол-4-ил)этил -бензамида.

Рацемический 2-окси-3- 1-(1Н-имида- зол-4-ил)этил бензамид (полученный в п.З) разлагают на его два энантиомера путем хроматографии на хиральной фазе альфа- гликопротеин (элюант: изопропиловый спйрт:фосфатный буферный раствор 0,02 моль; рН 7; в объемном соотношении 1:99. Затем преобразуют каждый энантимер амида в соответствующей хлоргидрат указанным способом. Таким образом получают в почти равных количествах: а) хлоргидрат гидратированного (+)-2- окси-3- 1 -(1 Н-имидазола-4-ил)этил -бенза - мида.Точка плавлени 107,8 С (вода). +82,04° (с) 1, метанол). ЯМР-спектр-(ОМЗО): дельта 1,57(ЗН, d); 3,30 (5Н (5Н, т); 4,56 (1Н, q); 6,83(1 Н, t); 7,23 (1 Н, dd); 7,40(1 Н, S); 7,82 (1Н, dd); 7,92 (1 Н, т); 8,51 (1Н, т); 8,98(1 H,d), 13,5-14.5 (2Н, т).

б) хлоргидрат гидратированного (-)-2- окси-3- 1-(1 Н-имидазол-4-ил)этил -бензами- да. Точка плавлени 107,4°С(вода). ф25 -79,13° (с 1, метанол). ЯМР-спектр: идентичен предыдущему.

5.Хлоргидрат 2-окси-3- 1-(1Н-имидазол- 4-ил)пентил -бензамид.

Это соединение получает, как в п. 1 из 2-окси-3- 1-(1 Н-ймидазол-4 Ил)пентил -бен- зонитрила (полученного по примеру 1.3),

Полученный таким образом 2-окси-3-{1- (1 Н-имидазол-4-ил)пентил -бензамид раство- р ют в растворе хлористоводородной кислоты 2,5 н. в этаноле, а хлоргидрат 2-ок- си-3-{1-(1Н-имидазол-4-ил)пентил -бенза- мида осаждают путем добавлени диэтилового эфира.

ЯМР-спектр (DMSO): дельта 0,83 (ЗН, t); 1,08-1,34 (4Н, т); 3-3-3,5 (2Н, т); 4,44 (1 Н, t); 6,82 (1Н, t); 7,37-7,40 (2Н. S + d); 7,82 (1Н, d); 8,97. (1H.S):..

Фармакологическим испытани м под- вергались следующие соединени , полученные согласно изобретению:

хлоргидрат 2-окси-3-(1 Н-имидазол-4- ил)метил -бензамид (соединение А),

хлоргидрат 2-окси-3- 1-(1 Н-имидазол-4- ил)этил -бензамид (соединение В);

хлоргидрат (+) -2-окси-3- 1-(1Н-имида- зол-4-ил)этил -бензамид (соединение С).

1. Противоишемическа сердечна активность .

а). Модель острой коронарной недостаточности у живой собаки.

У живой собаки, снабженной приспособлени ми (пневматическа манжетка вокруг нижней и исход щей коронарной ар

терпи и внутрисердечные электроды), на 6 мин перекрываетс коронарна артери посредством пневматической манжеты, что вызывает миокардную ишемию/котора отражаетс на электрокардиограмме посредством повышени лини S т. Противо- ишемическое действие соединени выражаетс в уменьшении повышени сегмента S г,

В табл. 1 показано, что соединени , подвергшиес испытанию при дозе DEao, ммоль/кг, и введенные внутривенно группам из 10 животных, вызывают среднее уменьшение, по меньшей мере на 20% повышени линии Sr у всех животных. В качестве контрольного соединени используют 1-(изопропил-аминоэ-3-(1-нафти- локси)-2-пропинол (или пропанолол).

Из табл. 1 видно, что соединени , полученные согласно изобретению, обладают поразительной противоишемической активностью .

б). Испытание на бегущей дорожке. Использована группа из по меньшей мере 4 собак, снабженных приспособлени ми (внутрисердечные электроды), .которые имеют на уровне коронарной артерии органический стеноз. Он вызывает нарушение равновеси между потребностью и притоком кислорода, когда от животного требуетс нагрузка. Это нарушение равновеси отражаетс на электрокардиограмме путем повышени линии ST.

При испытании собака бежит со скоростью 12 км/ч по бегущей дорожке с уклоном 15° в течение 1 мин. При испытании регистрируетс повышение линии Зги естественное повышение частоты биени сердца. Эксперимент повтор ют по меньшей мере 4 раза, а среднее из полученных значений принимаетс за контрольное значение (100%) дл группы животных. Затем животное оставл ют в покое как минимум 24 ч перед новым испытанием под действием изучаемого соединени .

Изучаемое соединение медленно вводитс (за 1 мин) внутривенно за 5 мин перед новым испытанием усили . В ходе испытани регистрируютс те же самые параметры . В табл. 2 приводитс дл указанной дозы среднее наблюдаемое уменьшение ли- -нии Sr (в%) и снижение частоты биени сердца (биение/мин) по отношению к значени м частоты, получаемым в ходе первоначального испытани .

Из табл. 2 видно, что соединение А обладает хорошей противоишемической активностью , подтвержденной сильным уменьшением линии Sr , что также отмечаетс при использовании пропранолола, но

только при намного увеличенной дозе. Кроме того, в противоположность пропрано- лолу, который одновременно вызывает сильное снижение сердечного ритма в течение испытани , что нежелательно и вредно дл поддержани усили , соединение А не преп тствует естественному повышению частоты биени сердца в ходе испытани . Следовательно, оно способствует правильной адаптации частоты биени сердца по отношению к усилию с одновременным пре- п тствованием ишемии.

2. Противоишемическа мозгова активность

а). Обща перманентна мозгова ишеми у крыс.

Самцы крыс (рода Вистар (масса 200- 250 г) анестезируютс путем ингал ции га- лотана (1-5%), содержащегос в смеси N02-02

(70:30). Обе общие сонные артерии одновременно перев зываютс вблизи перекрестка внутренней сонной артерии и наружной сонной артерии по технологии, описанной М.Лё Понсэн-Лафит и др. Фармакологический журнал (Париж). 14, (1983), 99-102.

Тестируемое соединение вводитс внутрибрюшинным путем первый раз за 30 мин перед перев зыванием и затем через 30 и 270 мин после перев зывани .

На следующий день и через день определ ют неврологический дефицит у выживших животных по известному методу. В ходе этой оценки принимаютс во внимание следующие сенсорно-моторные функции:

самопроизвольна подвижность, рефлекс схватывани , зрительна реакци и реакци на потерю опоры, рефлекс сгибани лап, рефлекс выпр млени , тест подвешивани за хвост. Минимально возможное количест

во очков дл животного, не подверженного

ишемии, составл ет 17.

В табл. 3 приводитс применительно к соединению А, введенному внутрибрющин- но при дозе 0,76 мг/кг (3,2 нмоль), среднее значение неврологических очков, определенных дл всех выживших животных контрольной группы и обработанной группы, зарегистрированных через 2 дн после перев зываний . Статистическое значение (Р) разницы между этими средними значени ми определ етс по тесту Ман-Витне .

Из табл. 3 видно, что соединение А при очень слабой дозе значительно см гчает у обработанных животных неврологический дефицит, вызванный ишемией.

б) Односторонн многочасова мозгова ишеми у крыс.

У .самцов крыс Спрага - Доуле (SPF), возрастом 8-9 недель вызывают посто нную Одностороннюю церебральную ишемию (или эмболизацию) путем введени в правую сонную артерию 2000 микросфер диаметром (58 ± 2) мкм после перев зывани правой артерии птеригопалатины.

Исследуемое соединение ввод т в первый раз за 30 мин до и второй раз после через 30 мин после эмболизации, а контрольной группе животных ввод т только физиологическую сыворотку. Затем крыс оставл ют в покое, У выживших животных через 6 дней после восстановлени измер ют:

1)остаточный неврологический дефиците помощью теста положени тела и походки животных (тест А, максимальное количество очков 4).

В этом тесте оцениваютс анормальное положение задних лап; контралэтеральный наклон тела при передвижении; гомолате- ральное продольное сгибание тела и анормальна походка.

2)сенсорно-моторные функции (самопроизвольна подвижность, рефлекс схватывани , зрительна реакци и реакци на потерю опоры (тест В , максимальное количество очков 10), (С.Калдевиль,... см. выше).

3)латеризованна сенсорно-моторна ответна реакци (контралатеральна сторона ) (тест С, максимальное количество очков 3). Она оцениваетс в комбинации измерений зрительной реакции, рефлекса ориентации головы к боковому сенсорному раздражителю и кожно-подошвенного рефлекса ..

4)ос зательное отмирание с левой стороны (тест D, максимальное количество очков 300). В противоположность другим указанным тестам, дл которых дефицит тем больше см гчаетс , тем больше счет, здесь дефицит тем больше, чем ближе счет к 300.

На седьмой день измер ют еще отек, имеющийс в различных гомолатеральных мозговых структурах.

В табл. 4 приводитс дл соединени А, введенного внутрибрюшинным путем при дозе 0,76 jur/кг (3,2 нмоль/кг), результаты , полученные в тестах A-D, т.е. среднее значение неврологических очков, определенных по всем выжившим животным контрольной группы и обработанной группы через 6 дней. В ней указано также среднее изменение массы тела, измеренной на седьмой день.

Статистическое значение (Р) разницы между средними значени ми, рассчитанными /л контрольных животных и обработанных животных, определ етс по тесту Ман - Витне .

Из табл. 4 видно, что соединение А значительно см гчает неврологический дефицит и поведение, вызываемое ишемией, и улучшает ход изменени массы обработанных животных.

В табл. 5 указано количество воды, удержанное в различных гомолатеральных

мозговых структурах и у контрольных животных , и у выживших обработанных животных на 7-й день после вынесени болезни. Полученные результаты показывают, что обработка соединением А значительно

уменьшает гомолатеральный отек в различных изучени х мозговых структурах.

3. Агонистической а2-адренергическое свойство.

а). Сравнительна фиксаци с радиолигандом .

Целью экспериментов по сравнительной фиксации вл етс измерение сродства , которое имеет соединение, полученные согласно изобретению, дл с -адренергических рецепторов. Эти эксперименты вы вл ют сравнительное фиксации на адренергических рецепторах, с одной стороны , изучаемого соединени и, с другой стороны, радиолиганда, который с этом частном случае о&-адренергических рецепторов , вл етс Н клонидином, известным как избирательный 02-адренергический агонист.

Кривые смещени фиксации 3Н клонидина определ ют при дев ти концентраци х соединени А, составл ющих моль/л, и с трем различными мембрзнны.-. ми составами мозга крысы. Образцы инкубируют в течение 30 мин, затем фильтруют

в вакууме на фильтре Ватман GF/B. Фибти- пы промывают три раза посредством 5 мл буферного раствора трис-HCI (рН 7,5 - при 0°С), затем высушивают в течение 1 мин. Радиоактивность измер ют в среде эконофтор (-NENCorp.) Использующийс 3Н клонидин (25,5 Cl/ммоль) представл етс фирмой Амерхэм.

Сродство соединени А дл Ой-адре- нергических рецепторов рассчитывают из

кривых перемещени Н клонидина. Оно выражаетс концентраций (ICso в моль/л) соединени А, необходимой дл получени 50%-ного торможени фиксации радиолиганда на рецепторах. Полученные результаты показывают, что соединение А имеет значительное сродство дл сф-адренергиче- ских рецепторов:

СбО (8,90±0,72) х моль/л.

б). Раздражение выделенного предсерди морской свинки.

Выделение норадреналина на уровне нервных окончаний регулируетс механизмом ретроконтрол пресинаптическими ОЈ-адренергическими рецепторами. Этот механизм на предсердии морской свинки.

Электрическое раздражение выделенного предсерди морской свинки приводит к выделению норадреналина, которое выражаетс в повышении частоты биени сердца (тахикарди ), что тормозитс 02-агонистом, таким, как, например, клонидин, в пропорции , котора зависит от использованной дозы агониста.

Действие %-агониста может ограничиватьс в присутствии од-специфического антагониста , такого, как альфа-йохимбин. Активность In vitro соединений, полученных согласно изобретению, по отношению к пресинаптическим сг2-адренергическим рецепторам определ ют на выделенном предсердии морской свинки с электрическим раздражением по известному методу. Исследуемое соединение тестируют при увеличивающихс концентраци х 10 моль/л. Определ ют концентрацию (Сзо в; моль/л), котора вызывает 30%-ное снижение максимальной тахикардии , исходно полученной при электрическом раздражении предсерди при отсутствии тестируемого соединени .

В табл. 6 показаны.концентрации Сзо (в моль/л), полученные дл соединений, согласно изобретению, а также дл клониди- на.

И-з табл. 6 следует, что соединени , полученные согласно изобретению, противодействуют тахикардии, вызванной электрическим раздражением, при очень небольших концентраци х.

Кроме того, при концентрации альфа- йохимбина моль/л концентраци соединени А, необходима дл получени 30%-ногр снижени тахикардии, превышает 10 моль/л. Эти результаты доказывают, что соединени , полученные согласно изобретению , действуют посредством специфического механизма через О2-агонистическое воздействие.

в). Раздражение подвздошной кишки морской свинки.

Фрагменты продольных мышц, св занных с индикатором изометрического усили , погружают в раствор тирода и нат гивают с усилием 1г.

Электрическое раздражение парасимпатических нервов, привод щих в фрагменты подвздошной кишки, вызывает

сокращение мцшцы. Это сокращение уменьшаетс в присутствии пресинаптиче- ского «2- агониста, а уменьшение зависит от концентрации использованного агониста.

Это действие антагонизируетс одновременным наличием oz-антагонистического соединени , такого, как альфа-йохимбин.

Изучаемые соединени тестируютс при возрастающих концентраци х от

до моль/л.

Определ ют концентрацию (ICso в моль/л), котора уменьшает на 50% интенсивность сокращени мышцы.

В табл. 7 привод тс концентрации

ICso (в моль/л), полученные дл соединений, полученных согласно изобретению. Эти результаты показывают, что эти соединени вл ютс активными при очень небольших концентраци х.

В присутствии альфа-йохимбина при концентраци х моль/л концентраци соединений, например, А или Б, котора необходима дл 50%-ного уменьшени интенсивности сохранени мышцы, вл етс

более высокой и превышает ТО моль/л, что дополнительно подтверждает тот факт, что соединени , полученные согласно изобретению , действительно действуют на уровне пресинаптических о -адренергических рецепторов .

4.Диуретическа активность. Диуретическа активность соединений,

полученных согласно изобретению, определ ют на гончих собаках (6 кобелей и 6 сук)

посредством изучени случайных перекрестных перестановок, рандомизированных по 6 пут м.

Изучаемое соединение вводитс внутривенно в увеличивающихс дозах 2; 6,5; 20;

65 и 200 fir/кг. В течение первых 3 ч после инъекции измер ют объем выделенной мочи .

В табл. 8 дл соединени А приводитс среднее относительное увеличение (в %) выделенной мочи по сравнению с группой животных , не получивших соединение.

Результаты показывают, что минимальна активна доза, вызывающа сравнительное статистическое увеличени (Р

0,05) мочевыделени составл ет у кобелей 6,, а у сук - 2 fir/кг.

5.Токсичность.

Токсичность соединений, полученных согласно изобретению, определ ют на сам- цах мышей NMRI посредством теста Ирвина .

Возрастающие дозы изучаемого соединени ввод т внутрибрюшинно группам из трех мышей до достижени смертельной дозы (доза, вызывающа смерть двух животных из трех в течение 48 ч).

В таблице 9 указана смертельна доза, отмеченна дл соединений, полученных согласно изобретению.

Из табл. 9 следует, что соединени , полученные согласно изобретению, вл ютс слаботоксичными.

Claims

Формула изобретени

Способ получени замещенных 2-окси- 3-{1-(1Н-имидазол-4-ил)алкил -бензамидов общей формулы ф n

Yf-tT

п.- число выживших животных.

Средние неврологические счета по истечении 6 дней после внесени

болезни

п - число выживших животных в каждой группе.

0

где Ri - водород или С1 С4-алкил или их нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот, отличающийс тем. что гидролизуют в кислой среде 2-окси-3- 1-(1Н- имидазол-4-ил)алкил -бензонитрил общей формулы

ОН R,

Н

N

)

N Н

где R.i имеет указанные значени , с выделением целевого продукта в свободном виде или в виде нетоксичных фармацевтически приемлемых солей кислот.

Таблица1

Таблица 2

ТаблицаЗ

Таблица 4

Количество воды в различных, гомолатеральных мозговых структурах

(среднее, %)

Снижение тахикардии

п- число испытаний

Торможение сокращени подвздошной кишки морской

свинки

Анализ вариантности: ХР 0,05;.

хх Р 0,01

Таблица 5

Таблица 6

Таблица 7

Таблица 8