RS65362B1 - Vakcina protiv neisseria meningitidis - Google Patents

Vakcina protiv neisseria meningitidis

Info

Publication number
RS65362B1
RS65362B1 RS20240387A RSP20240387A RS65362B1 RS 65362 B1 RS65362 B1 RS 65362B1 RS 20240387 A RS20240387 A RS 20240387A RS P20240387 A RSP20240387 A RS P20240387A RS 65362 B1 RS65362 B1 RS 65362B1
Authority
RS
Serbia
Prior art keywords
polysaccharide
conjugate
carrier protein
group
vaccine
Prior art date
Application number
RS20240387A
Other languages
English (en)
Inventor
Richard David Kensinger
Steven L Hauser
Original Assignee
Sanofi Pasteur Inc
Priority date (The priority date is an assumption and is not a legal conclusion. Google has not performed a legal analysis and makes no representation as to the accuracy of the date listed.)
Filing date
Publication date
Application filed by Sanofi Pasteur Inc filed Critical Sanofi Pasteur Inc
Publication of RS65362B1 publication Critical patent/RS65362B1/sr

Links

Classifications

    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/02—Bacterial antigens
    • A61K39/095—Neisseria
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K39/385—Haptens or antigens, bound to carriers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/06—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite
    • A61K47/16—Organic compounds, e.g. natural or synthetic hydrocarbons, polyolefins, mineral oil, petrolatum or ozokerite containing nitrogen, e.g. nitro-, nitroso-, azo-compounds, nitriles, cyanates
    • A61K47/18—Amines; Amides; Ureas; Quaternary ammonium compounds; Amino acids; Oligopeptides having up to five amino acids
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/30—Macromolecular organic or inorganic compounds, e.g. inorganic polyphosphates
    • A61K47/36—Polysaccharides; Derivatives thereof, e.g. gums, starch, alginate, dextrin, hyaluronic acid, chitosan, inulin, agar or pectin
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/64—Drug-peptide, drug-protein or drug-polyamino acid conjugates, i.e. the modifying agent being a peptide, protein or polyamino acid which is covalently bonded or complexed to a therapeutically active agent
    • A61K47/6415—Toxins or lectins, e.g. clostridial toxins or Pseudomonas exotoxins
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K47/00—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient
    • A61K47/50—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates
    • A61K47/51—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent
    • A61K47/62—Medicinal preparations characterised by the non-active ingredients used, e.g. carriers or inert additives; Targeting or modifying agents chemically bound to the active ingredient the non-active ingredient being chemically bound to the active ingredient, e.g. polymer-drug conjugates the non-active ingredient being a modifying agent the modifying agent being a protein, peptide or polyamino acid
    • A61K47/65—Peptidic linkers, binders or spacers, e.g. peptidic enzyme-labile linkers
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P31/00—Antiinfectives, i.e. antibiotics, antiseptics, chemotherapeutics
    • A61P31/04—Antibacterial agents
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61P—SPECIFIC THERAPEUTIC ACTIVITY OF CHEMICAL COMPOUNDS OR MEDICINAL PREPARATIONS
    • A61P37/00—Drugs for immunological or allergic disorders
    • A61P37/02—Immunomodulators
    • A61P37/04—Immunostimulants
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/555—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by a specific combination antigen/adjuvant
    • A61K2039/55511—Organic adjuvants
    • A61K2039/55583—Polysaccharides
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/60—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characteristics by the carrier linked to the antigen
    • A61K2039/6031—Proteins
    • A61K2039/6037—Bacterial toxins, e.g. diphteria toxoid [DT], tetanus toxoid [TT]
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/62—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier
    • A61K2039/627—Medicinal preparations containing antigens or antibodies characterised by the link between antigen and carrier characterised by the linker
    • A—HUMAN NECESSITIES
    • A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
    • A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
    • A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
    • A61K2039/70—Multivalent vaccine
    • Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
    • Y02—TECHNOLOGIES OR APPLICATIONS FOR MITIGATION OR ADAPTATION AGAINST CLIMATE CHANGE
    • Y02A—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE
    • Y02A50/00—TECHNOLOGIES FOR ADAPTATION TO CLIMATE CHANGE in human health protection, e.g. against extreme weather
    • Y02A50/30—Against vector-borne diseases, e.g. mosquito-borne, fly-borne, tick-borne or waterborne diseases whose impact is exacerbated by climate change

Landscapes

  • Health & Medical Sciences (AREA)
  • Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
  • Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Public Health (AREA)
  • Medicinal Chemistry (AREA)
  • Pharmacology & Pharmacy (AREA)
  • Animal Behavior & Ethology (AREA)
  • General Health & Medical Sciences (AREA)
  • Veterinary Medicine (AREA)
  • Immunology (AREA)
  • Epidemiology (AREA)
  • Engineering & Computer Science (AREA)
  • Bioinformatics & Cheminformatics (AREA)
  • Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
  • Chemical Kinetics & Catalysis (AREA)
  • General Chemical & Material Sciences (AREA)
  • Mycology (AREA)
  • Microbiology (AREA)
  • Organic Chemistry (AREA)
  • Nuclear Medicine, Radiotherapy & Molecular Imaging (AREA)
  • Oncology (AREA)
  • Communicable Diseases (AREA)
  • Inorganic Chemistry (AREA)
  • Oil, Petroleum & Natural Gas (AREA)
  • Toxicology (AREA)
  • Molecular Biology (AREA)
  • Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
  • Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
  • Medicinal Preparation (AREA)

Description

Opis
I. UVOD I SAŽETAK
[0001] Neisseria meningitidis (N. meningitidis) je glavni uzročnik bakterijskog meningitisa i sepse širom sveta. Serogrupe A, C, Y i W-135 bakterije Neisseria meningitidis (MenA, MenC, MenY i MenW, respektivno; pod zajedničkim nazivom MenACYW) odgovorne su za značajan deo meningokoknih bolesti širom sveta. Trenutno postoji šest tipova vakcina za zaštitu od N. meningitidis – četvorovalentne meningokokne konjugovane vakcine kao što je Menactra<®>Nimenrix<®>(Assaf-Casals et al., Meningococcal quadrivalent tetanus toxoid conjugate vaccine (MenACWY-TT, Nimenrix™): A review of its immunogenicity, safety, coadministration, and antibody persistence. Hum Vaccin Immunother.2016 Jul; 12(7): 1825-1837) i Menveo<®>(Papaevangelou et al., MenACWY-TT vaccine for active immunization against invasive meningococcal disease. Expert review of Vaccines, 11(5):523-37) ; meningokokna polisaharidna vakcina kao što je Menomune<®>, meningokokna vakcina serogrupe C kao što su Neisvac-C<®>, Menjugate<®>i Menitorik<®>, meningokokna vakcina serogrupe A kao što je MenAfriVac<®>, meningokokne vakcine serogrupa C i Y MenHibrix<®>i meningokokna vakcina serogrupe B kao što je Baxsero<®>i Trumenba<®>. Takođe se proučavaju meningokokne konjugovane vakcine serogrupe X (WO2013114268).
[0002] Epidemiologija N. meningitidis se može opisati kao složena, nepredvidiva, geografski promenljiva i koja se menja tokom vremena. Zbog toga postoji potreba za razvojem poboljšanih vakcina protiv N. meningitidis. Konkretno, postojeće polisaharidne konjugovane vakcine možda nisu pogodne za primenu kod odojčadi, male dece, adolescenata i/ili starijih odraslih osoba, ili mogu dovesti do slabog ili neotkrivenog sero odgovora kod nekih primalaca.
[0003] U nekim otelotvorenjima, kompozicije, metode i/ili upotrebe koje su ovde otkrivene obezbeđuju jednu ili više koristi, ili bar pružaju javnosti koristan izbor. Takve koristi mogu uključiti jednu ili više poboljšane imunogenosti protiv jedne, dve, tri ili sve četiri serogrupe, MenA, MenC, MenY i MenW; imunogenost kod dvoje, troje ili četvoro odojčadi, male dece, adolescenata i starijih odraslih osoba; i dovoljnu stabilnost da omogući dugotrajno skladištenje u obliku tečne formulacije, na primer, više godina u frižideru (npr.2,5, 3, 3,5, 4 ili 4,5 godine) ili više meseci na sobnoj temperaturi (npr.2, 3, 4 , 5 ili 6 meseci).
[0004] Shodno tome, opisana su sledeća otelotvorenja. Otelotvorenje 1 je kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis koja sadrži: a) prvi konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; b) drugi konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; c) treći konjugat MenW-135 kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; i d) četvrti konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; pri čemu je drugi konjugat populacija koja sadrži konjugovane polisaharide sa dvostrukim krajem i konjugovane polisaharide vezane na jednom kraju koji su oba vezana za protein nosač preko sekundarnog amina, a polisaharidi drugog konjugata imaju nivo O-acetilacije od 0,3 µmol/mg polisaharida do 1,6 µmol/mg polisaharida. Nivo O-acetilacije može biti veći ili jednak 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1 ili 1,2 µmol/mg polisaharida. Nivo O-acetilacije može biti manji ili jednak 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4 ili 1,5 µmol/mg polisaharida. Na primer, nivo može da se kreće od 0,6 do 1,5 µmol/mg polisaharida ili 0,8 do 1,4 µmol/mg polisaharida. Sadržaj O-acetila se može meriti Hestrinovim postupkom (Hestrin et. al., J. Biol. Chem.1949, 180, str.249).
[0005] Pokazalo se da nivoi O-acetilacije meningokoknog polisaharida A nemaju uticaja na imunogenost četvorovalentne meningokokne konjugovane vakcine (Lupisan et al., Meningokokni polisaharid A Nivoi O-acetilacije ne utiču na imunogenost kvadrivalentne meningokokalne vakcine na bazi tetanus toksoid konjugata: Rezultati randomizovane, kontrolisane studije faze III na zdravim odraslim osobama uzrasta od 18 do 25 godina, Clin Vaccine Immunol.2013 Oct; 20(10): 1499-1507).
[0006] Otelotvorenje 2 je kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis koja sadrži: a) prvi konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; b) drugi konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; c) treći konjugat MenW-135 kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; i d) četvrti konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; pri čemu je drugi konjugat populacija koja sadrži konjugovane polisaharide vezane na jednom kraju koji su vezani za protein nosač preko sekundarnog amina, pri čemu jednostrano povezani konjugovani polisaharidi imaju terminalni nevezani saharid, pri čemu terminalni saharid ima primarni hidroksil ili sekundarnu aminsku vezu na poziciji 7, ili pri čemu je redukcioni kraj modifikovan sa (2hidroksi)etoksi ili sekundarnom aminskom vezom. Druga populacija konjugata može dalje da obuhvata konjugate sa dvostrukim krajem koji imaju proteine nosače povezane sa oba kraja polisaharida, na primer, preko sekundarnog amina.
[0007] Otelotvorenje 3 je kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis koja sadrži: a) prvi konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; b) drugi konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; c) treći konjugat MenW-135 kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; i d) četvrti konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; pri čemu je kapsularni polisaharid MenA vezan za protein nosač preko linkera koji sadrži karbamat, spejser i amid, pri čemu je spejser između karbamata i amida i sadrži 2-10 linearnih ugljenika, a prvi konjugat ima odnos mase polisaharida i proteina nosača od 0,3 do 1,5. Prvi konjugat može imati odnos mase polisaharida i proteina nosača od, npr.0,3 do 0,4, 0,4 do 0,5, 0,5 do 0,6, 0,6 do 0,7, 0,7 do 0,8, 0,8 do 0,9, 0,9 do 1,0, 1,0 do 1,1.1,1 do 1,2, 1,2 do 1,3, 1,3 do 1,4 ili 1,4 do 1,5.
[0008] Otelotvorenje 4 je kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis koja sadrži: a) prvi konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; b) drugi konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; c) treći konjugat MenW-135 kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; i d) četvrti konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; pri čemu je kapsularni polisaharid MenA vezan za protein nosač preko linkera koji sadrži karbamat, spejser i amid, pri čemu je spejser između karbamata i amida i sadrži 2-10 linearnih ugljenika, i pri čemu sunC, MenW-135 i MenY kapsularni polisaharidi povezani na protein nosač preko sekundarnog amina; i najmanje jedan od konjugata ima prosečnu masu molekske mase u opsegu od 300 kDa do 1500 kDa.
[0009] Otelotvorenje 5 je kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis koja sadrži: a) prvi konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; b) drugi konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; c) treći konjugat MenW-135 kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; i d) četvrti konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; pri čemu je protein nosač tetanus toksoid; jedan ili više od prvog, drugog, trećeg i četvrtog konjugata ima prosečnu molekulsku masu u rasponu od 300 kDa do 1500 kDa; i kompozicija sadrži manje od 20% slobodnog polisaharida težinskih u odnosu na ukupan polisaharid. Najmanje jedan, dva, tri ili četiri konjugata u kompoziciji mogu imati prosečnu molekulsku masu u rasponu od 300 kDa do 1500 kDa. Prosečna molekulska masa najmanje jednog, dva, tri ili četiri konjugata u kompoziciji može biti veća ili jednaka 400 kDa, 500 kDa, 600 kDa, 700 kDa, 800 kDa, 900 kDa, 1000 kDa , ili 1100 kDa. Prosečna molekulska masa najmanje jednog, dva, tri ili četiri konjugata u kompoziciji može biti manja ili jednaka 600 kDa, 700 kDa, 800 kDa, 900 kDa, 1000 kDa, 1100 kDa, 1200 kDa, 1300 kDa, ili 1400 kDa. Najmanje jedan konjugat može imati molekulsku masu u opsegu 700-800, 800-900, 900-1000, 1000-1100, 1100-1200, 1200-1300, 1300-1400, ili 1400-1500 kDa. Konjugat MenA može imati molekulsku masu u opsegu 700-800, 800-900, 900-1000, 1000-1100, 1100-1200, 1200-1300, 1300-1400 ili 1400-1500 kDa. Konjugat MenC može imati molekulsku masu u opsegu 700-800, 800-900, 900-1000, 1000-1100, 1100-1200, 1200-1300, 1300-1400, ili 1400-1500 kDa. Konjugat MenY može imati molekulsku masu u opsegu 700-800, 800-900, 900-1000, 1000-1100, 1100-1200, 1200-1300, 1300-1400, ili 1400-1500 kDa. Konjugat MenW-135 može imati molekulsku masu u opsegu 700-800, 800-900, 900-1000, 1000-1100, 1100-1200, 1200-1300, 1300-1400 ili 1400-1500 kDa.
[0010] Otelotvorenje 6 je kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis koja sadrži: a) prvi konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; b) drugi konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; c) treći konjugat MenW-135 kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; i d) četvrti konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; pri čemu je protein nosač tetanus toksoid; jedan ili više od prvog, drugog, trećeg i četvrtog konjugata imaju odnos mase polisaharida i proteina nosača od 0,3 prema 1,5; i kompozicija sadrži manje od 20% slobodnog polisaharida težinskih u odnosu na ukupan polisaharid. Prvi konjugat može imati odnos mase polisaharida i proteina nosača od, npr.0,3 do 0,4, 0,4 do 0,5, 0,5 do 0,6, 0,6 do 0,7, 0,7 do 0,8, 0,8 do 0,9, 0,9 do 1,0, 1,0 do 1,1.1,1 do 1,2, 1,2 do 1,3, 1,3 do 1,4 ili 1,4 do 1,5. Drugi konjugat može imati odnos mase polisaharida i proteina nosača od, npr.0,3 do 0,4, 0,4 do 0,5, 0,5 do 0,6, 0,6 do 0,7, 0,7 do 0,8, 0,8 do 0,9, 0,9 do 1,0, 1,0 do 1,1.1,1 do 1,2, 1,2 do 1,3, 1,3 do 1,4 ili 1,4 do 1,5. Treći konjugat može imati odnos mase polisaharida i proteina nosača od, npr.0,3 do 0,4, 0,4 do 0,5, 0,5 do 0,6, 0,6 do 0,7, 0,7 do 0,8, 0,8 do 0,9, 0,9 do 1,0, 1,0 do 1,1.1,1 do 1,2, 1,2 do 1,3, 1,3 do 1,4 ili 1,4 do 1,5. Četvrti konjugat može imati odnos mase polisaharida i proteina nosača od, npr.0,3 do 0,4, 0,4 do 0,5, 0,5 do 0,6, 0,6 do 0,7, 0,7 do 0,8, 0,8 do 0,9, 0,9 do 1,0, 1,0 do 1,1.1,1 do 1,2, 1,2 do 1,3, 1,3 do 1,4 ili 1,4 do 1,5.
[0011] Otelotvorenje 7 je kompozicija vakcine bilo kojeg od prethodnih otelotvorenja, pri čemu su prvi, drugi, treći i/ili četvrti konjugati populacija koja sadrži molekule sa molekulskom masom u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa ili 800 kDa do 1300 kDa. Prvi i drugi konjugati mogu biti populacija koja sadrži molekule sa molekulskom masom u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa ili 800 kDa do 1300 kDa. Prvi i treći konjugati mogu biti populacija koja sadrži molekule sa molekulskom masom u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa ili 800 kDa do 1300 kDa. Prvi i četvrti konjugati mogu biti populacija koja sadrži molekule sa molekulskom masom u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa ili 800 kDa do 1300 kDa. Drugi i treći konjugati mogu biti populacija koja sadrži molekule sa molekulskom masom u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa ili 800 kDa do 1300 kDa. Drugi i četvrti konjugati mogu biti populacija koja sadrži molekule sa molekulskom masom u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa ili 800 kDa do 1300 kDa. Treći i četvrti konjugati mogu biti populacija koja sadrži molekule sa molekulskom masom u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa ili 800 kDa do 1300 kDa.
[0012] Otelotvorenje 8 je kompozicija vakcine protiv Neisseria meningitidis koja sadrži konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem, pri čemu je konjugat populacija koja se sastoji od konjugovanih polisaharida vezanih na dvostruki kraj i konjugovanih polisaharida vezanih na jednom kraju i oba su vezana za protein nosač kroz sekundarni amin, a polisaharidi konjugata MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem imaju nivo O-acetilacije u rasponu od 0,3 µmol/mg polisaharida do 1,6 µmol/mg polisaharida. Nivo O-acetilacije može biti veći ili jednak 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1 ili 1,2 µmol/mg polisaharida. Nivo O-acetilacije može biti manji ili jednak 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4 ili 1,5 µmol/mg polisaharida. Npr. nivo može da se kreće od 0,6 do 1,5 µmol/mg polisaharida ili 0,8 do 1,4 µmol/mg polisaharida. Sadržaj O-acetila se može meriti Hestrinovim postupkom (Hestrin et. al., J. Biol. Chem. 1949, 180, str.249).
[0013] Otelotvorenje 9 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 8, pri čemu konjugat (a) ima prosečnu molekulsku masu u rasponu od 300 kDa do 1500 kDa; ili (b) je populacija koja sadrži molekule koji imaju molekulsku masu u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa ili 800 kDa do 1300 kDa.
[0014] Otelotvorenje 10 je kompozicija vakcine bilo kojeg od otelotvorenja 4, 5, 7 ili 9, pri čemu je molekulska masa određena rasejanjem svetlosti u više uglova (MALS).
[0015] Otelotvorenje 11 je kompozicija vakcine bilo kojeg od prethodnih otelotvorenja, pri čemu MenC polisaharid ima stepen O-acetilacije u rasponu od 0,6 do 1,5 µmol/mg polisaharida ili 0,8 do 1,4 µmol/mg polisaharida.
[0016] Otelotvorenje 12 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 11, pri čemu je stepen O-acetilacije veći ili jednak 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1 ili 1,2 µmol/mg polisaharida.
[0017] Otelotvorenje 13 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 11, pri čemu je stepen O-acetilacije manji ili jednak 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3 ili 1,4 µmol/mg polisaharida.
[0018] Otelotvorenje 14 je kompozicija vakcine bilo kojeg od prethodnih otelotvorenja, pri čemu je konjugat koji sadrži MenC polisaharid populacija koja sadrži konjugovane polisaharide povezane sa dvostrukim krajem i konjugovane polisaharide vezane na jednom kraju.
[0019] Otelotvorenje 15 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 14, pri čemu polisaharidi drugog konjugata vezani na jednom kraju sadrže terminalni nevezani saharid, pri čemu konjugovani polisaharidi vezani na jednom kraju imaju terminalni nevezani saharid, pri čemu terminalni saharid ima primarni hidroksil na poziciji 7, ili pri čemu je redukcioni kraj modifikovan sa (2-hidroksi)etoksi.
[0020] Otelotvorenje 16 je kompozicija vakcine bilo kojeg od prethodnih otelotvorenja, pri čemu konjugat koji sadrži MenC polisaharid sadrži jednu ili više modifikacija izabranih od (i) primarnog hidroksila na poziciji 7, (ii) (2-hidroksi)etoksi na redukujućem kraju, i (iii) konjugaciju sa proteinom nosačem, pri čemu su modifikacije prisutne na najmanje 25 nmol/mg polisaharida.
[0021] Otelotvorenje 17 je kompozicija vakcine bilo kojeg od prethodnih otelotvorenja, koja sadrži konjugat MenW-135 i/ili MenY polisaharida koji sadrži jednu ili više modifikacija izabranih od (i) primarnog hidroksila na poziciji vicinalnog diola u prirodnom MenW-135 ili MenY polisaharidu i (ii) konjugacije sa proteinom nosačem, pri čemu su modifikacije prisutne na najmanje 60 nmol/mg polisaharida.
[0022] Otelotvorenje 18 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 16 ili 17, pri čemu su modifikacije prisutne u količini manjoj od 200 nmol/mg polisaharida, manjoj od 150 nmol/mg polisaharida, manjoj od 150 nmol/mg manjoj od 100 nmol/mg polisaharida, ili manjoj od 80 nmol/mg polisaharida.
[0023] Otelotvorenje 19 je kompozicija vakcine bilo kojeg od prethodnih otelotvorenja, pri čemu je MenC polisaharid smanjen u veličini za 3x-8x u odnosu na prirodni MenC polisaharid.
[0024] Otelotvorenje 20 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od prethodnih otelotvorenja, koja sadrži konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem koji ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,5 prema 1,5. Otelotvorenje 20A je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 20, koja sadrži konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem koji ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,7 prema 1,4.
[0025] Otelotvorenje 21 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 20, pri čemu konjugat MenA ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,8 prema 1,3.
[0026] Otelotvorenje 22 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od prethodnih otelotvorenja, koja sadrži konjugat MenC i/ili MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem koji ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,3 prema 1,1.
[0027] Otelotvorenje 23 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 22, pri čemu konjugat MenC ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,4 prema 0,8.
[0028] Otelotvorenje 24 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od prethodnih otelotvorenja, koja sadrži konjugat MenW-135 kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem koji ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,3 prema 1,3.
[0029] Otelotvorenje 25 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 24, pri čemu konjugat MenW-135 ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,6 prema 1,3.
[0030] Otelotvorenje 26 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od prethodnih otelotvorenja, koja sadrži konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem koji ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,5 prema 1,3.
[0031] Otelotvorenje 27 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 26, pri čemu konjugat MenY ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,5 prema 0,9.
[0032] Otelotvorenje 28 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od prethodnih otelotvorenja, pri čemu kompozicija sadrži manje od 20% težinskih slobodnog polisaharida.
[0033] Oteleotvorenje 29 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 28, pri čemu kompozicija sadrži manje od 10% težinskih slobodnog polisaharida, manje od 5% težinskih slobodnog polisaharida, ili suštinski nema slobodnih polisaharida.
[0034] Otelotvorenje 30 je kompozicija vakcine bilo kojeg od prethodnih otelotvorenja, pri čemu je polisaharid konjugata MenA, MenC, MenW-135 ili MenY vezan za protein nosač preko linkera.
[0035] Otelotvorenje 31 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 30, pri čemu linker sadrži 2-10 linearnih ugljenika.
[0036] Otelotvorenje 32 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 30 i 31, pri čemu je linker prisutan u MenA, MenC, MenW-135 ili MenY konjugatu u odnosu od jednog linkera na 10-100 ponovljenih jedinica saharida.
[0037] Otelotvorenje 33 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 30 i 31, pri čemu je linker prisutan u MenA, MenC, MenW-135 ili MenY konjugatu u odnosu od jednog linkera na 20-60 ponovljenih jedinica saharida.
[0038] Otelotvorenje 34 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 30 i 31, pri čemu linker sadrži spejser između prvog karbonila i drugog karbonila, a spejser sadrži 4-8 ugljenika.
[0039] Otelotvorenje 35 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od otelotvorenja 30-34, pri čemu linker konjugata MenA sadrži ostatak dihidrazida.
[0040] Otelotvorenje 36 je kompozicija vakcine prema otelotvorenju 35, pri čemu linker konjugata MenA sadrži ostatak dihidrazida adipinske kiseline.
[0041] Otelotvorenje 37 je kompozicija vakcine bilo kojeg od prethodnih otelotvorenja, pri čemu je polisaharid konjugata MenA, MenC, MenW-135 i/ili MenY vezan za protein nosač preko linkera iz fomule I:
pri čemu PS označava vezivanje za polisaharid, a PR označava vezivanje za protein nosač.
[0042] Otelotvorenje 38 je kompozicija vakcine bilo kojeg od otelotvorenja 30-37, pri čemu je linker konjugat MenA.
[0043] Otelotvorenje 39 je kompozicija vakcine bilo kojeg od otelotvorenja 30-37, pri čemu je linker konjugat MenC.
[0044] Otelotvorenje 40 je kompozicija vakcine bilo kojeg od otelotvorenja 30-37, pri čemu je linker konjugat MenW-135.
[0045] Otelotvorenje 41 je kompozicija vakcine bilo kojeg od otelotvorenja 30-37, pri čemu je linker konjugat MenY.
[0046] Otelotvorenje 42 je kompozicija vakcine bilo kojeg od prethodnih otelotvorenja, pri čemu je polisaharid konjugata MenA, MenC, MenW-135 i/ili MenY vezan za protein nosač kao što je prikazano u formuli II: PR-NH-CH2-PS (II) pri čemu PS označava vezivanje za polisaharid, a PR označava vezivanje za protein nosač.
[0047] Otelotvorenje 43 je kompozicija vakcine prema otelotvorenju 42, pri čemu je polisaharid konjugata MenA sadrži povezan za protein nosač kao što je prikazano u formuli II.
[0048] Otelotvorenje 44 je kompozicija vakcine prema otelotvorenju 42, pri čemu je polisaharid konjugata MenC vezan za protein nosač kao što je prikazano u formuli II:
[0049] Otelotvorenje 45 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 42, pri čemu je polisaharid konjugata MenW-135 vezan za protein nosač kao što je prikazano u formuli II.
[0050] Otelotvorenje 46 je kompozicija vakcine prema otelotvorenju 42, pri čemu je polisaharid konjugata MenY sadrži povezan za protein nosač kao što je prikazano u formuli II.
[0051] Otelotvorenje 47 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od prethodnih otelotvorenja, pri čemu protein nosač sadrži ili se sastoji od rekombinantnog egzoproteina A (rEPA), toksoida difterije ili B-fragmenta toksina difterije, CRM197, toksoida tetanusa ili C-fragmenta toksina tetanusa.
[0052] Otelotvorenje 48 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od prethodnih otelotvorenja, pri čemu je protein nosač tetanus toksoid.
[0053] Otelotvorenje 49 je postupak za proizvodnju konjugata kapsularnog polisaharida Neisseria meningitidis sa proteinom nosačem, koji obuhvata: a) aktiviranje polisaharida sa aktivacionim agensom koji može da formira karbamatnu vezu pri čemu je aktivacioni agens prisutan u molarnom višku u odnosu na polisaharid od 20 do 50 puta; b) delimično gašenje aktiviranog polisaharida i derivatizovanje aktiviranog polisaharida dihidrazidnim linkerom dodatim u molskom odnosu od 0,3 do 1,0 u odnosu na ponavljajuće jedinice polisaharida, pri čemu se polisaharid derivatizuje u odnosu jedan dihidrazidni linker na 10-100 ponavljajući jedicina saharida; c) konjugovanje derivatizovanog polisaharida sa proteinom nosačem hemijom karbodiimida, pri čemu je polisaharid prisutan na početku reakcije konjugacije u težinskom odnosu od 3:1 do 5:1 u odnosu na protein nosač, čime se formira konjugat.
[0054] Otelotvorenje 50 je postupak iz otelotvorenja 49, pri čemu se dihidrazidni linker dodaje u molskom odnosu od 0,4 do 0,6 u odnosu na ponavljajuće jedinice polisaharida.
[0055] Otelotvorenje 51 je postupak otelotvorenja 49, koji sadrži dalje korake za gašenje reakcije glicerolom.
[0056] Otelotvorenje 52 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 51, pri čemu je dihidrazidni linker dihidrazid adipinske kiseline.
[0057] Otelotvgorenje 53 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 51, pri čemu je derivatizovani polisaharid u početnoj koncentraciji od 10 g/l do 20 g/l u reakciji konjugacije.
[0058] Otelotvorenje 54 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 51, pri čemu agens za aktiviranje sadrži karbonil vezan za dva N-vezana heteroarila kao što su CDI (1,1'-karbonildiimidazol) i CDT (1,1'-karbonil-di-(1,2,4-triazol), ili druge odgovarajuće odlazeće grupe.
[0059] Otelotvorenje 55 je postupak iz otelotvorenja 54, pri čemu je agens za aktiviranje karbonil diimidazol.
[0060] Otelotvorenje 56 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 51, pri čemu je agens za aktiviranje prisutan u koraku aktivacije u molarnom višku u odnosu na polisaharid od 35 do 45 puta.
[0061] Otelotvorenje 57 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 51, pri čemu korak konjugacije obuhvata reakciju proteina nosača sa N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil) karbodiimidom.
[0062] Otelotvorenje 58 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 51, pri čemu je polisaharid MenA kapsularni polisaharid.
[0063] Otelotvorenje 59 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 51, pri čemu je polisaharid MenC kapsularni polisaharid.
[0064] Otelotvorenje 60 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 51, pri čemu je polisaharid MenW-135 ili MenY kapsularni polisaharid.
[0065] Otelotvorenje 61 je postupak za proizvodnju konjugata kapsularnog polisaharida Neisseria meningitidis sa proteinom nosačem, koji obuhvata: a) delimično de-O-acetilovanje polisaharida alkalnom hidrolizom; b) aktiviranje polisaharida tretmanom perjodatom, čime se dioli pretvaraju u aldehide do nivoa od najmanje 20 nmol aldehida po mg polisaharida; c) konjugovanje aktiviranog polisaharida sa proteinom nosačem reduktivnom aminacijom, pri čemu je polisaharid prisutan u reakciji konjugacije u težinskom odnosu od 1:1 do 5:1 u odnosu na protein nosač, čime se formira konjugat.
[0066] Otelotvorenje 62 je postupak iz otelotvorenja 61, pri čemu je polisaharid prisutan u reakciji konjugacije u težinskom odnosu od 1,5 do 3:1 u odnosu na protein nosač.
[0067] Otelotvorenje 63 je postupak otelotvorenja 61, pri čemu de-O-acetilacija smanjuje početnu količinu O-acetilacije u polisaharidu za 40% do 70%, ili 50% do 60%.
[0068] Otelotvorenje 64 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 61 do 63, pri čemu nakon de-O-acetilacije polisaharid ima stepen O-acetilacije u rasponu od 0,6 µmol/mg polisaharida do 1,5 µmol/mg polisaharida ili od 0,8 do 1,4 µmol/mg polisaharida.
[0069] Otelotvorenje 65 je postupak otelotvorenja 64, pri čemu je stepen O-acetilacije veći ili jednak 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1 ili 1,2 µmol/mg polisaharida.
[0070] Otelotvorenje 66 je postupak otelotvorenja 64, pri čemu je stepen O-acetilacije manji ili jednak 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3 ili 1,4 µmol/mg polisaharida.
[0071] Otelotvorenje 67 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 61 do 66, pri čemu je aktivirani polisaharid u početnoj koncentraciji od 20 g/l do 50 g/l u reakciji konjugacije.
[0072] Otelotvorenje 68 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 61 do 66, pri čemu je polisaharid MenC kapsularni polisaharid.
[0073] Otelotvorenje 69 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 61 do 66, pri čemu je polisaharid MenA kapsularni polisaharid.
[0074] Otelotvorenje 70 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 61 do 66, pri čemu je polisaharid MenW-135 ili MenY kapsularni polisaharid.
[0075] Otelotvorenje 71 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 61 do 66, pri čemu je polisaharid redukovan po veličini na 30 do 150 kDa ili na 50 do 100 kDa pre reakcije konjugacije
[0076] Otelotvorenje 72 je postupak za proizvodnju konjugata kapsularnog polisaharida Neisseria meningitidis sa proteinom nosačem, koji obuhvata: a) aktiviranje polisaharida tretmanom perjodatom, čime se dioli pretvaraju u aldehide do nivoa od najmanje 50 nmol aldehida po mg polisaharida; b) konjugovanje aktiviranog polisaharida sa proteinom nosačem reduktivnom aminacijom, pri čemu je polisaharid prisutan u reakciji konjugacije u težinskom odnosu od 1:1 do 5:1 u odnosu na protein nosač, čime se formira konjugat.
[0077] Otelotvorenje 73 je postupak iz otelotvorenja 72, pri čemu je polisaharid prisutan u reakciji konjugacije u težinskom odnosu od 1,5 do 3:1 u odnosu na protein nosač.
[0078] Otelotvorenje 74 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 72 i 73, pri čemu je polisaharid MenW-135 ili MenY kapsularni polisaharid.
[0079] Otelotvorenje 75 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 72 i 73, pri čemu je polisaharid MenC kapsularni polisaharid.
[0080] Otelotvorenje 76 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 72 i 73, pri čemu je polisaharid MenA kapsularni polisaharid.
[0081] Otelotvorenje 77 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 72 do 76, pri čemu je polisaharid redukovan po veličini na 100 do 200 kDa ili na 125 do 175 kDa pre reakcije konjugacije
[0082] Otelotvorenje 78 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49, 61 i 72, pri čemu je polisaharid redukovan po veličini kiselom hidrolizom ili toplotom.
[0083] Otelotvorenje 79 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49, 61 i 72, pri čemu je polisaharid redukovan po veličini oksidativnim cepanjem.
[0084] Otelotvorenje 80 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 72 do 79, pri čemu redukciona aminacija obuhvata redukciju imina u amine korišćenjem cijanoborohidrida, ili drugih redukcionih reagensa kao što su piridin boran (C5H8BN) i kompleks pikolin bora (C6H7N · BH3).
[0085] Otelotvorenje 81 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 72 do 79, koji dalje obuhvata pretvaranje neizreagovanih aldehida u konjugatu u alkohole sa redukcionim reagensom.
[0086] Otelotvorenje 82 je postupak otelotvorenja 81, pri čemu je redukcioni reagens borohidrid.
[0087] Otelotvorenje 83 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 72 do 79, pri čemu se perjodat dodaje u koncentraciji od 1 mM do 4 mM ili 1,5 mM do 3 mM da bi se aktivirao polisaharid.
[0088] Otelotvorenje 84 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 83, koji dalje obuhvata prečišćavanje konjugata hromatografijom hidrofobne interakcije.
[0089] Otelotvorenje 85 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 83, koji dalje obuhvata prečišćavanje konjugata hromatografijom na smoli u mešanom režimu.
[0090] Otelotvorenje 86 je postupak prečišćavanja konjugata kapsularnog polisaharida Neisseria meningitidis do proteina nosača iz smeše koja sadrži konjugat, so i slobodni polisaharid, koji obuhvata: a) dovođenje u kontakt smole za hromatografiju hidrofobne interakcije sa smešom, pri čemu konjugat vezuje smolu; b) eluiranje slobodnog polisaharida iz smole; i c) eluiranje konjugata iz smole vodenom tečnošću, pri čemu vodena tečnost ne sadrži soli ili sadrži manje soli od smeše, čime se dobija kompozicija koja sadrži prečišćeni konjugat.
[0091] Otelotvorenje 87 je postupak otelotvorenja 86, pri čemu so sadrži amonijum sulfat.
[0092] Otelotvorenje 88 je postupak otelotvorenja 86 ili otelotvorenja 87, pri čemu smeša sadrži so u količini u rasponu od 0,5 do 1,5 M ili 0,8 do 1,2 M.
[0093] Otelotvorenje 89 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 86 do 88, pri čemu vodena tečnost sadrži manje od 0,2, 0,1 ili 0,05 M soli.
[0094] Otelotvorenje 90 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 86 do 89, pri čemu je vodena tečnost voda.
[0095] Otelotvorenje 91 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 86 do 90, pri čemu kompozicija sadrži manje od 20% težinskih slobodnog polisaharida, manje od 10% težinskih slobodnog polisaharida, manje od 5% težinskih slobodnog polisaharida, ili suštinski nema slobodnih polisaharida.
[0096] Otelotvorenje 92 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 86 do 91, pri čemu je smola za hromatografiju hidrofobne interakcije fenil, propil ili butil smola.
[0097] Otelotvorenje 93 je postupak bilo kojeg od otelotvorenja 49 do 92, pri čemu je protein nosač tetanus toksoid.
[0098] Otelotvorenje 94 je konjugat proizveden u skladu sa postrupkom bilo kog od otelotvorenja 49 do 85.
[0099] Otelotvorenje 95 je kompozicija vakcine koja sadrži: a) prvi konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; b) drugi konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; c) treći konjugat MenW-135 kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; i d) četvrti konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; pri čemu su konjugat jedan, dva, tri ili svi prvi, drugi, treći i četvrti konjugati proizvedeni u skladu sa postupkom bilo kog otelotvorenja 49 do 85.
[0100] Otelotvorenje 96 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od otelotvorenja 1-48 ili 95, koja ne sadrži adjuvans.
[0101] Otelotvorenje 97 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od otelotvorenja 1-48 ili 95-96, koja dalje sadrži farmaceutski prihvatljiv pufer.
[0102] Otelotvorenje 98 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 97, koja sadrži acetatni pufer sa pH od 5,5 do 6,5.
[0103] Otelotvorenje 99 je kompozicija vakcine prema bilo kojem od otelotvorenja 1-48 ili 95-98, koja dalje sadrži farmaceutski prihvatljivu so.
[0104] Otelotvorenje 100 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 99, pri čemu je farmaceutski prihvatljiva so natrijum hlorid.
[0105] Otelotvorenje 101 je kompozicija vakcine iz otelotvorenja 99 ili 100, pri čemu je farmaceutski prihvatljiva so prisutna u količini od 0,45% do 0,9% rastvora ili 0,5% rastvora do 0,85% rastvora.
[0106] Otelotvorenje 102 je kompozicija vakcine u bilo kojem od otelotvorenja 1-48 ili 95-101, pri čemu najmanje jedan, dva, tri ili sva četiri konjugata, prvi, drugi, treći i četvrti sadrže više tačaka vezivanja između polisaharida i proteina nosača.
[0107] Otelotvorenje 103 je kompozicija vakcine bilo kog od otelotvorenja 1-48 ili 95-102, formulisana za intramuskularnu primenu.
[0108] Otelotvorenje 104 je pojedinačna jedinična doza kompozicije vakcine bilo kog od otelotvorenja 1-48 ili 9495-103, koja sadrži od 6 µg do 15 µg svakog od MenA, MenC, MenW-135 i MenY polisaharida.
[0109] Otelotvorenje 105 je pojedinačna jedinična doza otelotvorenja 104, pri čemu je protein nosač prisutan u količini od 50 µg do 80 µg.
[0110] Otelotvorenje 106 je pojedinačna jedinična doza otelotvorenja 104 ili 105, koja se nalazi u špricu.
[0111] Otelotvorenje 107 je pojedinačna jedinična doza otelotvorenja 106, pri čemu špric ne sadrži silikon.
[0112] Otelotvorenje 108 je pojedinačna jedinična doza otelotvorenja 106 ili 107, pri čemu je špric upakovan za komercijalnu prodaju ili distribuciju.
[0113] Otelotvorenje 109 je postupak vakcinacije ispitanika protiv bakterije Neisseria meningitidis koji se sastoji od davanja doze kompozicije vakcine bilo kog od otelotvorenja 1-48 ili 95-103 ispitaniku. Otelotvorenje 109A je kompozicija vakcine bilo kog od otelotvorenja 1-48 ili 95-103 za upotrebu u postupku vakcinacije ispitanika protiv Neisseria meningitidis koji obuhvata davanje doze kompozicije vakcine ispitaniku.
[0114] Otelotvorenje 110 je upotreba kompozicije vakcine bilo kog od otelotvorenja 1-48 ili 95-103 ili pojedinačne jedinične doze bilo kog od otelotvorenja 104-108 za imunizaciju subjekta protiv Neisseria meningitidis. Otelotvorenje 110A je kompozicija vakcine bilo kog od otelotvorenja 1-48 ili 95-103 ili pojedinačna jedinična doza bilo kog od otelotvorenja 104-108 za upotrebu u imunizaciji ispitanika protiv Neisseria meningitidis.
[0115] Otelotvorenje 111 je upotreba kompozicije vakcine bilo kog od otelotvorenja 1-48 ili 95-103 ili pojedinačne jedinične doze bilo kog od otelotvorenja 104-108 za proizvodnju leka za imunizaciju ispitanika protiv Neisseria meningitidis. Otelotvorenje 111A je kompozicija vakcine bilo kog od otelotvorenja 1-48 ili 95-103 ili pojedinačna jedinična doza bilo kog od otelotvorenja 104-108 za upotrebu kao lek za imunizaciju ispitanika protiv Neisseria meningitidis.
[0116] Otelotvorenje 112 je postupak, upotreba ili kompozicija bilo kojeg od otelotvorenja 109-111A, pri čemu se vakcina primenjuje intramuskularno.
[0117] Otelotvorenje 113 je postupak, upotreba ili kompozicija bilo kojeg od otelotvorenja 109-112, pri čemu je ispitanik starosti od 6 nedelja do 3 godine.
[0118] Otelotvorenje 114 je metoda, upotreba ili kompozicija iz otelotvorenja 113, pri čemu je ispitanik star 2 meseca, 6 meseci, 12 meseci ili 15 meseci.
[0119] Otelotvorenje 115 je postupak, upotreba ili kompozicija bilo kojeg od otelotvorenja 109-112, pri čemu je ispitanik starosti 50 godina ili više, 55 godina ili više, 60 godina ili više, ili 65 godina ili više.
[0120] Otelotvorenje 116 je postupak, upotreba ili kompozicija bilo kog od otelotvorenja 109-115, pri čemu se vakcina daje kao doza od 0,5 ml.
[0121] Otelotvorenje 117 je postupak, upotreba ili kompozicija iz otelotvorenja 116, pri čemu vakcina sadrži 4-10 µg svake od serogrupa: A, C, Y i W-135.
[0122] Otelotvorenje 118 je postupak, upotreba ili kompozicija iz otelotvorenja 116, pri čemu vakcina sadrži 50-80 µg proteina toksoida tetanusa.
[0123] Otelotvorenje 119 je postupak, upotreba ili kompozicija otelotvorenja 116, pri čemu vakcina sadrži 4-10 µg svake od serogrupa: A, C, Y i W-135, i 50-80 µg proteina toksoida tetanusa.
[0124] Otelotvorenje 120 je postupak, upotreba ili kompozicija bilo kog od otelotvorenja 109-119, koji dalje obuhvata davanje vakcine koja nije usmerena na Neisseria meningitidis u isto vreme, ali ne u istoj injekciji kao, MenACYW-TT vakcina.
[0125] Otelotvorenje 121 je metoda, upotreba ili kompozicija iz otelotvorenja 120, pri čemu je vakcina koja nije Neisseria meningitidis usmerena na prevenciju varičele, difterije, Hib, hepatitisa b, malih boginja, zauški, velikog kašlja, dečije paralize, pneumokoka, rotavirusa, infekcije rubeolom ili tetanusom.
[0126] Otelotvorenje 122 je postupak, upotreba ili kompozicija otelotvorenja 120, gde je vakcina nije Neisseria meningitidis već je DTaP5, Hib, HepB, DTap5-IPV/Hib, DTap5-IPV/Hib, HepB, MMR, IPV, PCV7, PCV13, RV1 ili RV5.
[0127] Otelotvorenje 123 je postupak, upotreba ili kompozicija bilo kojeg od otelotvorenja 109-122, pri čemu je ispitanik prethodno primio kapsularnu saharidnu konjugatnu vakcinu protiv Neisseria meningitidis.
[0128] Otelotvorenje 124 je postupak, upotreba ili kompozicija iz otelotvorenja 123, pri čemu je ispitanik primio kapsularnu saharidnu konjugatnu vakcinu protiv Neisseria meningitidis četiri meseca do deset godina ranije. Otelotvorenje 124A je postupak, upotreba ili kompozicija iz otelotvorenja 123, pri čemu je ispitanik primio kapsularnu saharidnu konjugatnu vakcinu protiv Neisseria meningitidis dva meseca do deset godina ranije.
[0129] Otelotvorenje 125 je postupak, upotreba ili kompozicija bilo kojeg od otelotvorenja 109-122, pri čemu je ispitanik nije prethodno primio saharidnu konjugatnu kapsularnu vakcinu protiv Neisseria meningitidis
[0130] Pronalazak je izložen kao što je definisano u skupu patentnih prijava.
II. KRATAK OPIS SLIKA
[0131]
Slika 1A prikazuje šemu konjugata proteina vezanog za polisaharid-ADH serogrupe A. Polisaharidi serogrupe A 10 sa ostacima reaktivnog mesta 11 formiranim aktivacijom sa karbonil diimidazolom (CDI) i opciono derivatizacijom sa dihidrazidom adipinske kiseline (ADH) na hidroksilnim grupama polisaharida i reakcijom sa proteinom (npr. tetanus toksoid (TT)). Aktivirani/derivatizovani polisaharid je unakrsno vezan za protein 13 preko veze 12 direktno ili indirektno na grupe 14. Na primer, direktne veze mogu da koriste primarne amine proteina, na primer, formiranjem karbamatne veze (npr. izvedene iz CDI). Indirektne veze mogu biti izvedene iz ADH i N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)karbodiimida (EDAC), koji aktivira karboksile proteina.
Slika 1B ilustruje pripremu aktivnog intermedijera O-acilizuree proteina nosača (npr. TT) korišćenjem N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)karbodiimida (EDAC), koji reaguje sa karboksilnim grupama (npr. na asparaginsku kiselinu ili bočni lanci glutaminske kiseline, ili C-terminus) proteina. Ovaj intermedijer je pogodan za spajanje sa aminskim grupama aktiviranog derivatizovanog polisaharida (nije prikazano).
Slika 1C ilustruje opštu šemu za proizvodnju aktiviranog derivatizovanog polisaharida serogrupe A, koji se može koristiti za proizvodnju konjugata polisaharid-ADH serogrupe A vezanog za protein nosač (npr. TT). U ovom otelotvorenju, polisaharidi se aktiviraju na hidroksilnim grupama sa CDI, formirajući aktivni intermedijer sa imidazol karbamatom, koji se dalje derivatizuje sa ADH. ADH-derivatizovani polisaharid serogrupe A je pogodan za kovalentno vezivanje za protein nosač preko spajanja amina primarnih aminskih grupa na ADH linkeru na aktivni O-acilizurea intermedijer proteina nosača (nije prikazano).
Slika 1D prikazuje opštu šemu za proizvodnju polisaharida serogrupe A povezanog sa konjugatom tetanus toksoida preko karbamata. Polisaharidi (PS) se aktiviraju na hidroksilnim grupama sa CDI, formirajući intermedijer sa aktivnim imidazol karbamatom. Aktivni intermedijer zatim reaguje sa proteinskim nosačem (PR).
Karbamatna veza se formira reakcijom nukleofilne supstitucije u kojoj primarni amin proteina napada ugljenik karbamata, što dovodi do gubitka imidazola i formiranja karbamatne veze između polisaharida i proteina.
Slike 1E-F prikazuju strukturu polisaharida serogrupe A (E) nakon CDI-aktivacije i (F) nakon CDI-aktivacije i derivatizacije sa ADH.
Slika 1G ilustruje proizvodnju serogrupe A polisaharid-ADH konjugata povezanog sa proteinom nosačem (npr. TT) iz aktiviranog derivatizovanog polisaharida i aktivnog intermedijera O-acilizureje formiranog od proteina nosača tetanus toksoida i N-etil-N'-(3-dimetilaminopropil)karbodiimid (EDAC). Primarni amin aktiviranog derivatizovanog polisaharida zamenjuje izoureu, koja služi kao odlazeća grupa, dajući proizvod u kome je protein vezan za polisaharid preko amidne veze, ostatka ADH i karbamatne veze, u kojoj je karbonil izveden iz CDI. Eliminisani nusproizvod uree nije prikazan.
Slika 1H prikazuje proizvod reakcije na Sl.1F sa strukturom povezane ponavljajuće jedinice polisaharida (uključujući ADH ostatak) izvučenom.
Slika 2A prikazuje šemu konjugata polisaharid-protein serogrupe A. Polisaharidi serogrupe C 20 su vezani za protein (npr. tetanus toksoid) 21 na svojim terminusima.
Slika 2B ilustruje aktivaciju polisaharida serogrupe C (prikazano konvencionalnim numerisanjem ugljenika u jedinici ponavljanja polisaharida) korišćenjem natrijum metaperiodata. Tretiranje natrijum metaperiodatom dovodi do cepanja između 7 i 8 ugljenika, oksidativno depolimerizujući polisaharid u odgovarajuće terminalne aldehide.
Slika 2C ilustruje formiranje konjugata serogrupe C polisaharid-protein (npr. TT) putem reduktivne aminacije. Primarni amin proteina (PR) (npr., bočni lanac lizina ili N-terminus) reaguje sa terminalnim aldehidom depolimerizovanog, aktiviranog polisaharida serogrupe C (PS) da bi se formirao intermedijer Šifove baze (nije prikazan), koji je redukovan (npr., korišćenjem piridin borana, pikolin borana ili cijanoborohidrida) da bi se dobila sekundarna aminska veza. Polisaharidni deo je krajem vezan za protein. Pojedinačni molekuli proteina mogu da reaguju sa više od jednog polisaharida i neki polisaharidni terminusi mogu da ne reaguju (nije prikazano; videti ilustraciju na Slici 2A). Nereagovani aldehidi se mogu zatvoriti, tj. redukovati u alkohole, korišćenjem odgovarajućeg redukcionog sredstva kao što je natrijum borohidrid nakon redukcije Šifove baze (nije prikazano).
Slika 2D prikazuje proizvod reakcije na Sl.2C sa izvučenom strukturom ponavljajuće jedinice povezanog polisaharida. Moguće je povezivanje proteina sa dodatnim polisaharidima (nije prikazano).
Slika 3 prikazuje šemu konjugata polisaharid-protein serogrupe W-135 ili serogrupe Y. Polisaharidi serogrupe W-135 ili serogrupe Y 31 su vezani za jedan ili više proteina (npr. tetanus toksoid) 30 na jednoj ili više pozicija.
Slika 4A ilustruje depolimerizaciju i aktivaciju polisaharida serogrupe W-135.
Polisaharid se depolimerizuje korišćenjem, na primer, povišene temperature, a zatim se aktivira tako što se tretira natrijum metaperiodatom, koji cepa vicinalne diole kao što je, na primer, između ugljenika 7 i 8 sijalinske kiseline i oksiduje ih u aldehide.
Slika 4B ilustruje formiranje konjugata serogrupe W-135 polisaharid-protein (npr. TT) putem reduktivne aminacije. Primarni amin proteina (PR) (npr. bočni lanac lizina ili N-terminus) reaguje sa aldehidom depolimerizovanog, aktiviranog polisaharida serogrupe W-135 (PS) da bi se formirao intermedijer Šifove baze (nije prikazan). Intermedijer se redukuje pomoću natrijum cijanoborohidrida da bi se dobila sekundarna aminska veza. Pojedinačni proteinski molekuli mogu da reaguju sa više od jednog polisaharida i obrnuto (nije prikazano; videti ilustraciju na Slici 3).
Nereagovani aldehidi se mogu zatvoriti, tj. redukovati u alkohole, korišćenjem odgovarajućeg redukcionog sredstva kao što je natrijum borohidrid nakon redukcije Šifove baze (nije prikazano).
Slika 4C prikazuje proizvod reakcije na Sl.4B sa izvučenom jednom mogućom strukturom ponavljajuće jedinice povezanog polisaharida. Moguće je povezivanje proteina sa dodatnim polisaharidima ili obrnuto (nije prikazano; videti ilustraciju na Slici 3).
Slika 5A ilustruje depolimerizaciju i aktivaciju polisaharida serogrupe Y. Polisaharid se depolimerizuje korišćenjem, na primer, povišene temperature, a zatim se aktivira tako što se tretira natrijum metaperiodatom, koji cepa vicinalne diole kao što je, na primer, između ugljenika 7 i 8 sijalinske kiseline i oksiduje ih u aldehide.
Slika 5B ilustruje formiranje konjugata polisaharid-protein (npr. TT) serogrupe Y putem reduktivne aminacije. Primarni amin proteina (PR) (npr. bočni lanac lizina ili N-terminus) reaguje sa aldehidom depolimerizovanog, aktiviranog polisaharida serogrupe Y (PS) da bi se formirao intermedijer Šifove baze (nije prikazan).
Intermedijer se redukuje (npr. korišćenjem piridin borana, pikolin borana ili cijanoborohidrida) da bi se dobila sekundarna aminska veza. Pojedinačni proteinski molekuli mogu da reaguju sa više od jednog polisaharida i obrnuto (nije prikazano; videti ilustraciju na Slici 3). Nereagovani aldehidi se mogu zatvoriti, tj. redukovati u alkohole, korišćenjem odgovarajućeg redukcionog sredstva kao što je natrijum borohidrid nakon redukcije Šifove baze (nije prikazano).
Slika 5C prikazuje proizvod reakcije na Sl.5B sa izvučenom jednom mogućom strukturom ponavljajuće jedinice povezanog polisaharida. Moguće je povezivanje proteina sa dodatnim polisaharidima ili obrnuto (nije prikazano; videti ilustraciju na Slici 3).
Slika 6 prikazuje procenat ispitanika u Grupama 1-4 koji su postigli hSBA titre veće ili jednake od 1:8 za serogrupe A, C, Y i W 30 dana (D30) nakon poslednje primene vakcine.
Slika 7 prikazuje procenat ispitanika u Grupama 1-4 koji su postigli rSBA titre veće ili jednake 1:8 za serogrupe A, C, Y i W na D30 nakon poslednje primene vakcine.
Slika 8 prikazuje kumulativni procenat učesnika koji su prijavili jednu ili više prikupljenih reakcija na mestu injekcije u roku od 7 dana nakon primene MenACYW-TT vakcine.
Slika 9 prikazuje procenat ispitanika sa prikupljenim sistemskim reakcijama u roku od 7 dana od davanja bilo MenACYW-TT vakcine plus rutinske vakcine bilo samo rutinskih vakcina.
Slika 10 prikazuje procenat ispitanika koji su postigli hSBA titre ≥1:8 za različite serogrupe na D30 nakon davanja bilo MenACYW-TT bilo Menomune<®>-A/C/Y/W-135 (MPSV4) vakcine.
Slika 11 prikazuje rezime hSBA geometrijskih srednjih titara (GMT) na D30 nakon davanja bilo MenACYW-TT bilo MPSV4 vakcine.
Slika 12 pokazuje procenat ispitanika koji su postigli rSBA titre ≥1:8 za različite serogrupe na D30 nakon davanja bilo MenACYW-TT bilo MPSV4 vakcine.
Slika 13 pokazuje procenat ispitanika sa prikupljenim reakcijama na mestu injekcije prema tipu i stepenu nakon davanja bilo MenACYW-TT bilo MPSV4 vakcine.
Slika 14 prikazuje procenat ispitanika sa prikupljenim sistemskim reakcijama po tipu i stepenu nakon davanja bilo MenACYW-TT bilo MPSV4 vakcine.
Slika 15 prikazuje procenat ispitanika koji su postigli sero odgovor hSBA vakcine na D30 nakon davanja bilo MenACYW-TT bilo MCV4-TT vakcine.
Slika 16 prikazuje geometrijske sredine hSBA nakon vakcinacije nakon davanja bilo MenACYW-TT ili MCV4-TT vakcine.
Slika 17 prikazuje prikupljene reakcije na mestu injekcije na D0-D7 nakon davanja bilo MenACYW-TT ili MCV4-TT vakcine.
Slika 18 prikazuje tražene sistemske reakcije na D0-D7 nakon primene bilo MenACYW-TT ili MCV4-TT vakcine.
III. DETALJAN OPIS OTELOTVORENJA PRONALASKA
[0132] U nastavku će biti detaljnije opisana određena otelotvorenja pronalaska, čiji su primeri ilustrovani u pratećim crtežima. Iako će pronalazak biti opisan u vezi sa ilustrovanim otelotvorenjima, podrazumeva se da oni nemaju nameru da ograniče pronalazak na ta otelotvorenja. Naprotiv, pronalazak je namenjen da pokrije sve alternative, modifikacije i ekvivalente, koji mogu biti uključeni u pronalazak kako je definisano u priloženim patentnim zahtevima.
[0133] Pre detaljnog opisa predmetnih učenja, treba uzeti u obzir da otkrivanje nije ograničeno na određene kompozicije ili korake procesa, jer isti mogu varirati. Treba napomenuti da, kako se koristi u ovoj specifikaciji i priloženim patentnim zahtevima, oblici jednine uključuju i množinu osim ako kontekst jasno ne nalaže drugačije. Tako, na primer, pozivanje na „konjugat“ uključuje mnoštvo konjugata, a pozivanje na „ćeliju“ uključuje mnoštvo ćelija i slično.
[0134] Numerički rasponi uključuju brojeve koji definišu raspon. Izmerene i merljive vrednosti se smatraju približnim, uzimajući u obzir značajne cifre i grešku povezanu sa merenjem. Takođe, upotreba izraza „sadrži“, „ima“, „uključuje“, i „uključujući“ nije ograničena. Podrazumeva se da su i prethodni opšti opis i detaljni opis samo primeri i objašnjenja i ne ograničavaju učenja.
[0135] Osim ako nije posebno navedeno u gornjoj specifikaciji, otelotvorenja u specifikaciji koja navode "sadrži" različite komponente treba takođe tumačiti kao "sastoji se od" ili "suštinski se sastoji od" navedenih komponenti; otelotvorenja u specifikaciji koja navode "sastoji se od" različitih komponenti takođe treba tumačiti kao "sadrži" ili "suštinski se sastoji od" navedenih komponenti; i otelotvorenja u specifikaciji koja navode "suštini se sastoji od" različitih komponenti takođe treba tumačiti kao "sastoje se od" ili "sadrže" navedene komponente (ova zamenljivost se ne primenjuje na upotrebu ovih termina u patentnim zahtevima).
[0136] Naslovi odeljaka koji se ovde koriste služe samo u organizacione svrhe i ne treba ih tumačiti kao ograničavanje željene teme na bilo koji način. U slučaju da je bilo koja literatura uključena pozivanjem na nju u suprotnosti sa bilo kojim terminom definisanim u ovoj specifikaciji, ova specifikacija kontroliše. Iako su predmetna učenja opisana u vezi sa različitim otelotvorenima, nije namera da se ova učenja ograničavaju na takva otelotvorenja. Naprotiv, ova učenja obuhvataju različite alternative, modifikacije i ekvivalente, kao što mogu da procene stručnjaci iz ove oblasti.
A. Definicije
[0137] Osim ako nije drugačije navedeno, sledeći izrazi i fraze kako se ovde koriste imaju sledeća značenja:
Termin "ili njihove kombinacije" kako se ovde koristi odnosi se na sve permutacije i kombinacije navedenih termina koji prethode terminu. Na primer, „A, B, C ili njihove kombinacije“ treba da uključi najmanje jedno od: A, B, C, AB, AC, BC ili ABC, a ako je redosled važan u određenom kontekstu, takođe BA, CA, CB, ACB, CBA, BCA, BAC ili CAB. Nastavljajući sa ovim primerom, izričito su uključene kombinacije koje sadrže ponavljanja jedne ili više stavke ili termina, kao što su BB, AAA, AAB, BBC, AAABCCCC, CBBAAA, CABABB i tako dalje. Stručnjak će razumeti da tipično ne postoji ograničenje broja stavki ili termina u bilo kojoj kombinaciji, osim ako nije drugačije očigledno iz konteksta.
[0138] Kako se ovde koristi, termin "komplet" se odnosi na upakovani skup srodnih komponenti, kao što su jedno ili više jedinjenja ili kompozicija i jedan ili više srodnih materijala kao što su rastvarači, rastvori, puferi, uputstva ili sredstva za sušenje.
[0139] „Ili“ se koristi u inkluzivnom smislu, tj. ekvivalentno je sa „i/ili“, osim ako kontekst ne zahteva drugačije.
[0140] Termini "linker" i "veza" se koriste naizmenično i označavaju hemijski deo koji sadrži lanac atoma koji kovalentno vezuje, ili je vezan za stavke kao što su protein nosač ili polisaharid.
[0141] "Povezujući deo" označava hemijski reaktivnu grupu, supstituent ili deo, npr. nukleofil ili elektrofil, sposoban da reaguje sa drugim molekulom da formira vezu kovalentnom vezom.
[0142] "Alkil" označava zasićeni ili nezasićeni, razgranati, ravnolančani, razgranati ili ciklični ugljovodonični radikal koji se dobija uklanjanjem jednog atoma vodonika sa jednog atoma ugljenika matičnog alkana, alkena ili alkina. Tipične alkil grupe se sastoje od 1 do 12 zasićenih i/ili nezasićenih ugljenika, uključujući, ali bez ograničenja, metil, etil, propil, butil i slično.
[0143] "Ponavljajuća jedinica" je mono- ili oligosaharidni ostatak koji je polimerizovan u polisaharid. Ponavljajuće jedinice MenA i MenC su monosaharidi (N-acetil manozamin i sijalinska kiselina, respektivno), a ponavljajuće jedinice MenW-135 i MenY su disaharidi (sijalinske kiseline i glukoze za MenY, ili sijalinske kiseline i galaktoze za MenW-135). Ponavljajuće jedinice mogu varirati od jedne do druge u odnosu na bočne lance (npr. O-acetilacija) i/ili modifikacije kao što su one koje su ovde otkrivene.
[0144] MenA, MenC, MenW-135 i MenY se koriste kao skraćenice za Neisseria meningitidis serogrupe A, C, W-135 ili Y, respektivno, ili njihov kapsularni polisaharid (kao u slučaju, npr. „MenC konjugata“ što znači konjugat kapsularnog polisaharida Neisseria meningitidis serogrupe C sa proteinom nosačem).
B. Ogledne kompozicije vakcine
[0145] U nekim otelotvorenjima, data je kompozicija vakcine U nekim otelotvorenjima, kompozicija vakcine sadrži konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem. Kompozicija vakcine opisana ovde sadrži konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem. Kompozicija vakcine opisana ovde sadrži konjugat MenW-135 kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem. Kompozicija vakcine opisana ovde sadrži konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem. U nekim otelotvorenjima, kompozicija vakcine sadrži najmanje dva, najmanje tri ili najmanje četiri konjugata kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem. Najmanje dva, najmanje tri ili najmanje četiri konjugata kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem mogu biti konjugati kapsularnih polisaharida iz različitih serogrupa Neisseria mengingitidis, na primer, konjugati MenA, MenC, MenY i MenW kapsularnog polisaharida i proteina nosača, pri čemu je protein nosač tetanus toksoid.
[0146] Kapsularni polisaharidi se mogu pripremiti u skladu sa postupkom opisanim u US 2003/0068336 Primer 1. Kapsularni polisaharidi se takođe mogu pripremiti korišćenjem medijuma i postupaka opisanih u US 6,933,137, na primer.
[0147] Ovde su otkriveni konjugati koji sadrže proteine nosače. Primeri proteinskih nosača su diskutovani u, npr. Pichichero ME. Protein carriers of conjugate vaccines: Characteristics, development, and clinical trials. Humane vakcine Imunotherapeutics. 2013;9(12):2505-2523. doi:10.4161/hv.26109. Kao što je ovde opisano, protein nosač sadrži ili se sastoji od rekombinantnog egzoproteina alfa (REPA), toksoida difterije, CRM197, tetanus toksoida ili C-fragmenta tetanus toksina. U nekim otelotvorenjima, proteinski nosač je tetanus toksoid.
[0148] U nekim otelotvorenjima, tetanus toksoid (TT) se priprema ekstrakcijom, prečišćavanjem amonijum sulfatom i inaktivacijom toksina formalinom iz kultura Clostridium tetani (Harvardski soj) uzgajanih u Mueller-Miller medijumu ili modifikovanom Mueller-Miller medijumu. U nekim otelotvorenjima, TT se obrađuje da bi se smanjio rezidualni formaldehid, koncentruje se u natrijum hloridu i steriliše filterom. U nekim otelotvorenjima, TT se prečišćava hromatografijom, a ne prečišćavanjem amonijum sulfatom. U nekim otelotvorenjima, modifikovani Mueller-Miller medijum ne sadrži infuziju goveđeg srca. U nekim otelotvorenjima, Clostridium tetani se uzgaja u medijumu opisanom u WO2006/042542 u tabeli 3, strana 16.
[0149] Određena otelotvorenja koja se razmatraju u nastavku uključuju karakteristike, kao što je hemijski deo (npr. hidroksil ili O-acetilacija) ili konjugacija sa proteinom nosačem, koji je prisutan u datoj količini po jedinici mase polisaharida. Na primer, određena karakteristika ili kombinacija karakteristika može biti prisutna na nivou kao na primer ne manjem od 25 nmol/mg polisaharida. To znači da se u 1 mg polisaharida karakteristika ili kombinacija karakteristika javlja najmanje 15 × 10<15>puta (gde je 25 nmol = 25 × 10<-9>mol × (6,02 × 10<23>jedinica/mol) = 15 × 10<15>jedinica).
[0150] U nekim otelotvorenjima, polisaharidi konjugata MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem imaju nivo O-acetilacije u rasponu od 0,3 µmol/mg polisaharida do 1,6 µmol/mg polisaharida. U nekim otelotvorenjima nivo O-acetilacije je veći ili jednak 0,4, 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1 ili 1,2 µmol/mg polisaharida. U nekim otelotvorenjima nivo O-acetilacije je manji ili jednak 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4 ili 1,5 µmol/mg polisaharida. Npr. nivo može da se kreće od 0,6 do 1,5 µmol/mg polisaharida ili 0,8 do 1,4 µmol/mg polisaharida. Sadržaj O-acetila se može meriti Hestrinovim postupkom (Hestrin et. al., J. Biol. Chem.1949, 180, str.249).
[0151] U nekim otelotvorenjima najmanje jedan konjugat u kompoziciji može imati prosečnu molekulsku masu u rasponu od 300 kDa do 1500 kDa. U nekim takvim otelotvorenjima, prosečna molekulska težina je veća ili jednaka 400 kDa, 500 kDa, 600 kDa, 700 kDa, 800 kDa, 900 kDa, 1000 kDa ili 1100 kDa. U nekim takvim otelotvorenjima, prosečna molekulska težina je manja ili jednaka 600 kDa, 700 kDa, 800 kDa, 900 kDa, 1000 kDa, 1100 kDa, 1200 kDa, 1300 kDa ili 1400 kDa. Prosečna molekulska težina se može odrediti metodama poznatim u tehnici, na primer, rasejanje svetlosti u više uglova (MALS). U nekim otelotvorenjima, najmanje jedan konjugat u kompoziciji sadrži (tj. je populacija molekula koja sadrži) molekule koji imaju molekulsku težinu u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa. Treba napomenuti da neki molekuli populacije mogu imati težinu u opsegu bez obzira da li je prosečna težina ili prosečan broj molekulske mase u tom opsegu ili ne. Na primer, populacija molekula sa prosečnom molekulskom težinom od 600 kDa ili 1500 kDa verovatno će sadržati molekule sa molekulskom težinom u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa. U nekim otelotvorenjima, najmanje jedan konjugat u kompoziciji sadrži molekule koji imaju molekulsku težinu u opsegu od 800 kDa do 1300 kDa. U nekim otelotvorenjima najmanje jedan konjugat u kompozicije sadrži molekule koji imaju molekulsku masu u opsegu 700-800, 800-900, 900-1000, 1000-1100, 1100-1200, 1200-1300, 1300-1400, ili 1400-1500 kDa. U nekim otelotvorenjima konjugat MenA ima molekularnu masu kao što je opisano gore. U nekim otelotvorenjima konjugat MenC ima molekularnu masu kao što je opisano gore. U nekim otelotvorenjima konjugat MenW-135 ima molekularnu masu kao što je opisano gore. U nekim otelotvorenjima konjugat MenY ima molekularnu masu kao što je opisano gore. U nekim otelotvorenjima, molekularna mase se određuje korišćenjem rasejanja svetlosti sa više uglova (MALS). U nekim otelotvorenjima , molekularna masa je određena korišćenjem hromatografije visokih performansi sa isključenjem veličine (HPSEC).
[0152] Kao što je ovde opisano, konjugat, kao što je konjugat MenC, je populacija koja sadrži konjugovane polisaharide povezane sa jednim krajem, polisaharide povezane sa dvostrukim krajem ili njihovu kombinaciju. Konjugovani polisaharid povezan jednim krajem vezan je na jednom kraju za protein nosač. Konjugovani polisaharid vezan na dva kraja vezan je na oba kraja za protein nosač. Krajnje povezani konjugovani polisaharidi mogu da se formiraju, na primer, cepanjem i aktiviranjem vicinalnih diola u polisaharidnoj okosnici da bi se izložili aktivirani krajevi, kao što je tretman perjodatom. Na primer, MenC polisaharid ima 7,8 vicinalni diol u svojoj ponavljajućoj jedinici sijalinske kiseline do te mere da pozicije 7 i 8 nisu O-acetilovani u istoj ponavljajućoj jedinici. Ovaj vicinalni diol nalazi se u okosnici polisaharida jer njegovo cepanje odvaja jedan saharid od drugog, tj. vicinalni diol nije deo bočnog lanca. Nakon aktivacije, aktivirani krajevi mogu zatim da reaguju sa proteinom nosačem (ili sa linkerom koji će tada biti ili je već vezan za protein nosač), da bi se formirao konjugat polisaharida vezanog na kraju. Konjugat je jednokrajno vezan ako je samo jedan od krajeva (terminalnih saharidnih ostataka) polisaharida vezan za protein nosač (uključujući vezivanje preko linkera ako je primenljivo). Konjugat vezan na dva kraja ima proteine nosače vezane na oba kraja polisaharida. Uopšteno govoreći, korišćenje više stehiometrije polisaharida u odnosu na protein nosač ili niže ukupne koncentracije reaktanata će usmeriti reakcije konjugacije ka proizvodima vezanim za jedan kraj. Nasuprot tome, niža stehiometrija polisaharida u odnosu na protein nosač ili viša ukupna koncentracija reaktanata će uticati na reakciju konjugacije ka proizvodima sa vezanim na dva kraja.
[0153] U nekim otelotvorenjima, konjugovani polisaharidi vezani jednim krajem (npr. MenC konjugati) imaju terminalni nevezani saharid u kome se nalazi primarni hidroksil na poziciji 7, ili je redukcioni kraj modifikovan sa (2-hidroksi)etoksi. Ovo može biti rezultat aktivacije polisaharida koji sadrži 7,8 vicinalnih diola sa perjodatom (koji daje terminalne aldehide), konjugacije na jednom kraju i redukcije neizreagovanog aldehida na drugom kraju, na primer, sa borohidridnim reagensom. Primarni hidroksil na poziciji 7 može se smatrati krajem skraćenog ostatka sijalinske kiseline. Redukcioni kraj koji je modifikovan sa (2-hidroksi)etoksi može se smatrati ostatkom sijalinske kiseline vezan na svom redukcionom kraju za fragment od 9 i 8 ugljenika drugog ostatka i njihovih povezanih kiseonika.
[0154] Kao što je ovde opisano, konjugat je MenW-135 i/ili MenY polisaharid koji sadrži jednu ili više modifikacija izabranih od (i) primarnog hidroksila na poziciji vicinalnog diola u prirodnom MenW-135 ili MenY polisaharidu i (ii) konjugacije sa proteinom nosačem, pri čemu su modifikacije prisutne na najmanje 60 nmol/mg polisaharida. Modifikacije se mogu formirati perjodatnom oksidacijom praćenom konjugacijom sa proteinom nosačem i redukcijom neizreagovanih aldehida. Cepanje saharidnih ostataka izazvano perjodatom može se desiti na vicinalnim pozicijama diola kao što su položaji 7,8 ili 8,9 sijalinske kiseline i takođe potencijalno u heksoznom prstenu ponavljajuće jedinice, posebno tamo gde su dioli u cis rasporedu. U nekim otelotvorenjima modifikacije su prisutne u količini manjoj od 200 nmol/mg polisaharida, manjoj od 150 nmol/mg polisaharida, manjoj od 150 nmol/mg manjoj od 100 nmol/mg polisaharida, ili manjoj od 80 nmol/mg polisaharida.
[0155] U nekim otelotvorenjima, polisaharid je vezan za protein nosač preko sekundarnog amina. U nekim otelotvorenjima, polisaharid je vezan za protein nosač kao što je prikazano u formuli II:
PR-NH-CH2-PS (II)
pri čemu PS označava vezivanje za polisaharid, a PR označava vezivanje za protein nosač. Takva sekundarna aminska veza može se formirati, na primer, reduktivnom aminacijom u kojoj primarni amin na proteinu (npr. N-terminus ili amino grupa bočnog lanca lizina) napada aktiviranu grupu (npr. aldehid) na polisaharidu, formirajući Šifovu bazu koja se zatim redukuje da bi se formirao sekundarni amin. Redukcija se može izvesti korišćenjem odgovarajućeg redukcionog reagensa kao što je cijanoborhidrid (npr. natrijum cijanoborhidrid) ili boran (npr. piridin boran ili pikolin boran).
[0156] U nekim realizacijama, konjugat MenC polisaharida je smanjen u veličini za 3x-8x u odnosu na prirodni MenC polisaharid, npr.3x-4x, 4x-5x, 5x-6x, 6x-7x, ili 7x-8x. Cepanje perjodata razdvaja susedne ponavljajuće jedinice i na taj način obezbeđuje smanjenje veličine polisaharida. Veličina se može dalje smanjiti tretmanom kao što je toplota i/ili kiselina, na primer, pre tretmana perjodatom. Mogu se koristiti i drugi poznati tretmani za smanjenje veličine, kao što je sonikacija ili mikrofludizacija.
[0157] U nekim otelotvorenjima, konjugat polisaharida MenA ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,3 do 1,5, npr.0,3 do 0,4, 0,4 do 0,5, 0,5 do 0,6, 0,6 do 0,7, 0,7 do 0,8, 0,8 do 0,9, 0,9 do 1,0, 1,0 do 1,1.1,1 do 1,2, 1,2 do 1,3, 1,3 do 1,4 ili 1,4 do 1,5. U nekim otelotvorenjima, konjugat polisaharida MenA ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,5 prema 1,5.
[0158] U nekim realizacijama, konjugat MenC polisaharida ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,3 do 1,1, npr.0,3 do 0,4, 0,4 do 0,5, 0,5 do 0,6, 0,6 do 0,7, 0,7 do 0,8, 0,8 do 0,9, 0,9 do 1,0 ili 1,0 do 1,1.
[0159] U nekim otelotvorenjima, konjugat polisaharida MenW-135 ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,3 do 1,3, npr.0,3 do 0,4, 0,4 do 0,5, 0,5 do 0,6, 0,6 do 0,7, 0,7 do 0,8, 0,8 do 0,9, 0,9 do 1,0, 1,0 do 1,1.1,1 do 1,2 ili 1,2 do 1,3.
[0160] Konjugat polisaharida MenY kako je opisan ovde ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,5 do 1,3, npr.0,3 do 0,4, 0,4 do 0,5, 0,5 do 0,6, 0,6 do 0,7, 0,7 do 0,8, 0,8 do 0,9, 0,9 do 1,0, 1,0 do 1,1, 1,1 do 1,2 ili 1,2 do 1,3,
[0161] U nekim otelotvorenjima, kompozicija vakcine koja je ovde data sadrži manje od 20% težinskih slobodnog polisaharida, na primer, sadrži manje od 10% težinskih slobodnog polisaharida, manje od 5% težinskih slobodnog polisaharida, ili suštinski nema slobodnih polisaharida. „Značajno nema slobodnih polisaharida“ znači da je nivo slobodnog polisaharida ispod granice detekcije testa taloženja deoksiholata u kome se polisaharid konjugovan sa proteinom precipitira sa deoksiholatom, a polisaharid preostalo u rastvoru se ispituje, npr., kao što je opisano u Lei et al. , "Quantification of free polysaccharide in meningococcal polysaccharide-diphtheria toxoid conjugate vaccines," Dev Biol (Basel). 2000; 103:259-64 (PMID: 11214246).
[0162] U nekim otelotvorenjima, polisaharid je vezan za protein nosač preko linkera koji sadrži 2-10 linearnih ugljenika, npr.2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 ugljenika. "Linearni ugljenici" su ugljenici duž lanca koji vodi od polisaharida do proteina nosača i ne uključuju ugljenike na grani ovog lanca. Kao što je ovde opisano, linker sadrži spejser između prvog karbonila i drugog karbonila, a spejser sadrži 4-8 ugljenika (npr.4, 5, 6, 7 ili 8 ugljenika), koji mogu biti linearni ugljenici. Prvi karbonil može biti deo karbamata. Drugi karbonil može biti deo amida. Prvi karbonil može biti proksimalno od polisaharida i distalno od proteina nosača. Drugi karbonil može biti proksimalno od proteina nosača i distalno od polisaharida. Linker može da sadrži ostatak dihidrazida, kao što je dihidrazid adipinske kiseline (ADH). U nekim otelotvorenjima, polisaharid je vezan za protein nosač preko linkera iz formule I:
pri čemu PS označava vezivanje za polisaharid, a PR označava vezivanje za protein nosač. Pojedinačni polisaharid može biti vezan za jedan ili više od jednog proteina nosača (na različitim pozicijama), i obrnuto.
[0163] U nekim otelotvorenjima, linker je prisutan u konjugatu u odnosu od jednog linkera na 10-100 ponavljajućih jedinica saharida, npr.20-60. Ovo uključuje linkere za koje su vezani i protein nosač i polisaharid, kao i linkere vezane samo za polisaharid, tj. koji nisu formirali vezu sa proteinom nosačem.
[0164] U nekim otelotvorenjima, obezbeđen je konjugat kapsularnog polisaharida Neisseria meningitidis sa proteinom nosačem preko linkera u kome je linker prisutan u količini od 1 linkera na 10-100 ponavljajućih jedinica polisaharida, npr.1 linker na 10- 20 ponavljajućih jedinica, 1 linker na 20-30 ponavljajućih jedinica, 1 linker na 30-40 ponavljajućih jedinica, 1 linker na 40-50 ponavljajućih jedinica, 1 linker na 50-60 ponavljajućih jedinica ili 1 linker na 60-70 ponavljajućih jedinica. U nekim otelotvorenjima, polisaharid MenA je vezan za protein nosač preko linkera kao što je gore opisano. U nekim otelotvorenjima, polisaharid MenC je vezan za protein nosač preko linkera kao što je gore opisano.
[0165] U nekim otelotvorenjima, kompozicija konjugata polisaharida prema otkriću ima poboljšanu stabilnost u odnosu na postojeće formulacije. U nekim otelotvorenjima, stabilnost se testira da bi se utvrdilo da li nivoi slobodnih polisaharida koji odgovaraju svakom konjugovanom polisaharidu ostaju ispod 40% nakon perioda skladištenja na 2°C-8°C, npr.
2,5, 3, 3,5, 4 ili 4,5 godine. U nekim otelotvorenjima, stabilnost se testira u smislu da li nivoi slobodnih polisaharida koji odgovaraju svakom konjugovanom polisaharidu ostaju ispod 40% nakon perioda skladištenja na 23°C-27°C, npr.2, 3, 4, 5 ili 6 meseci. Određene kvadrivalentne MenACYW polisaharidne konjugatne vakcine zahtevaju liofilizaciju ili druge mere konzerviranja, barem delimično, kao rezultat niske stabilnosti tečnih formulacija u odnosu na jedan ili više konstitutivnih konjugata. Liofilizacija komplikuje i proizvodnju i administraciju u odnosu na jednu tečnu formulaciju. U nekim otelotvorenjima, polisaharid je vezan za protein nosač u više tačaka. Vezivanje sa više tačaka je generalno posledica hemije konjugacije, npr. aktivacije perjodata praćene reduktivnom aminacijom, ili spajanjem na bazi karbonil diimidazola (opciono sa linkerom) koje može da formira rešetku proteina nosača i polisaharida, zajedno sa odgovarajućim odnosim veličine i opterećenja polisaharida. Za detaljnu diskusiju o takvoj primernoj hemiji, pogledajte Primere u nastavku. Ogledna veličina polisaharida i odnosa opterećenja koji su kompatibilni sa formiranjem protein-polisaharidne rešetke koja uključuje više tačaka vezivanja su najmanje 30 kDa (i ogledni rasponi veličina o kojima se raspravljalo gore) i odnosi polisaharid-protein od 0,3 do 1,5 (i primeri opsega o kojima se govori iznad). Bez želje da budemo vezani određenom teorijom, obezbeđivanje konjugata sa više tačaka vezivanja između polisaharida i proteina nosača može doprineti dugoročnoj stabilnosti konjugata jer bi bilo potrebno više događaja cepanja (npr. hidrolitički) za oslobađanje polisaharidnih fragmenata od proteina nosača. Ovaj doprinos dugoročnoj stabilnosti može biti posebno relevantan za polisaharid MenA, koji ima fosfodiestarske veze koje mogu biti labilnije tokom skladištenja u tečnosti od glikozidnih veza. U nekim otelotvorenjima, kompozicija sadrži MenA polisaharid sa više tačaka vezivanja za protein nosač. U nekim otelotvorenjima, kompozicija sadrži MenC polisaharid sa više tačaka vezivanja za protein nosač. U nekim otelotvorenjima, kompozicija sadrži MenY polisaharid sa više tačaka vezivanja za protein nosač. U nekim otelotvorenjima, kompozicija sadrži MenW-135 polisaharid sa više tačaka vezivanja za protein nosač. U nekim otelotvorenjima, kompozicija sadrži MenA, MenC, MenY i MenW-135 polisaharide od kojih svaki ima više tačaka vezivanja za protein nosač.
[0166] U nekim otelotvorenjima, ovde opisana kompozicija vakcine je obezbeđena kao tečna formulacija u špricu, npr. prethodno napunjenom špricu i/ili špricu bez silikona. U nekim otelotvorenjima, takav špric je komercijalno upakovan za prodaju i/ili distribuciju.
C. Ogledni postupci za proizvodnju konjugata i vakcina
[0167] Ovde su dati postupci za proizvodnju i/ili prečišćavanje konjugata kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem.
[0168] Smatra se da je reagens (kao što je agens za aktiviranje) prisutan u datoj količini u koraku (npr. korak aktiviranja) ako je prisutan u takvoj količini u bilo kom trenutku tokom relevantnog koraka ili reakcije (npr. prilikom pokretanja reakcije).
[0169] Dat je postupak za proizvodnju konjugata polisaharida sa proteinom nosačem.
Polisaharid se može de-O-acetilovati, na primer, alkalnom hidrolizom. Na primer, može se koristiti hidroksid kao što je NaOH ili KOH, na primer, u koncentraciji između 50-150, 60-140, 70-130, 80-120, 90-110 ili 95-100 mM. Hidroksid može biti u koncentraciji od 50, 60, 70, 80, 90 ili 100 mM. Hidroksid može biti u koncentraciji od 100 mM. De-O-acetilacija se može izvesti u vremenu i na temperaturi dovoljnim da de-O-acetiluje polisaharid za 40% do 70%, ili 50% do 60% u poređenju sa početnom količinom. De-O-acetilacija se može izvesti u vremenu i na temperaturi dovoljnim da de-O-acetiluje polisaharid za 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90 ili 100% u poređenju sa početnom količinom. Nakon de-O-acetilacije, polisaharid može imati stepen O-acetilacije od 0,6 µmol/mg polisaharida do 1,5 µmol/mg polisaharida ili 0,8 do 1,4 µmol/mg polisaharida. Stepen O-acetilacije može biti veći ili jednak 0,5, 0,6, 0,7, 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 1,6, 1,7, 1,8, 1,9 ili 2,0 µmol/mg polisaharida.
[0170] U nekim otelotvorenjima, stepen O-acetilacije je manji ili jednak 0,8, 0,9, 1,0, 1,1, 1,2, 1,3 ili 1,4 µmol/mg polisaharida.
[0171] Polisaharid se može depolimerizovati, na primer, toplotom, tretmanom kiselinom, sonikacijom, mikrofluidizacijom ili njihovom kombinacijom, kao što su toplota i kiselina. Na primer, polisaharid se može zagrejati na 40°C-80°C (npr.45°C, 50, 55, 60, 65, 70 ili 75) i/ili biti izložen blago kiselom pH kao što je 5, 5,5, 6, ili 6,5 ili više. Polisaharid se može depolimerizovati do prosečne molekulske težine, na primer, od 50 kDa do 200 kDa, kao što je 50, 75, 100, 125, 150, 175 ili 200.
[0172] Neki postupci koriste sredstvo za aktiviranje koje može da formira karbamatnu vezu, čiji su primeri poznati u predmetnoj oblasti. Aktivator koji može da formira karbamatnu vezu može biti jedinjenje koje ima karbonil vezan za dve dobre odlazeće grupe, kao što su N-vezani heteroarili, kao što su imidazol, piridin, pirimidin, purin, triazin, pirazin, tiazin, tiazol, itd. U nekim otelotvorenjima, agens za aktiviranje je karbonil diimidazol. Aktivirajući agens može biti prisutan u molarnom višku u odnosu na polisaharid od 20 do 50 puta, npr.20 puta do 25 puta, 25 puta do 30 puta, 30 puta do 35 puta, 35 puta do 40 puta, 40 puta do 45 puta ili 45 puta do 50 puta.
[0173] Linker kao što je dihidrazidni linker može da reaguje sa aktiviranim polisaharidom, na primer, u molskom odnosu od 0,3 do 1,0 u odnosu na ponavljajuće jedinice polisaharida, kao što su 0,3 do 0,4, 0,4 do 0,5, 0,5 do 0,6, 0,6 do 0,7, 0,7 do 0,8, 0,8 do 0,9 ili 0,9 do 1,0. U nekim otelotvorenjima, dihidrazidni linker je dihidrazid adipinske kiseline. U nekim otelotvorenjima, polisaharid je derivatizovan linkerom tako da sadrži jedan linker na 10-100 ponavljajućih jedinica, npr., jedan linker na 10-20, 20-30, 30-40, 40-50, 50-60, 60 -70, 70-80, 80-90 ili 90-100 ponavljajućih jedinica. U nekim realizacijama, polisaharid je derivatizovan linkerom tako da sadrži jedan linker na 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14,15,16, 17, 18, 19, 20, 21, 22, 23, 24, 25, 26, 27, 28, 29, 30, 31, 32, 33, 34, 35, 36, 37, 38, 39, 40, 41, 42, 43, 44, 45, 46, 47, 48, 49, 50, 51, 52, 53, 54, 55, 56, 57, 58, 5960, 61, 62, 63, 64, 65, 66, 67, 68, 69, 70, 71, 72, 73, 74, 75, 76, 77, 78, 79, 80, 81, 82, 83, 84, 85, 86, 87, 88, 89, 90, 91, 92, 93, 94, 95, 96, 97, 98, 99 ili 100 ponavljajućih jedinica.
[0174] Polisaharid se može aktivirati tretmanom oksidatorom, kao što je perjodat, npr., natrijum metaperjodat (takođe poznat kao natrijum perjodat). Oksidator reaguje sa polisaharidom i formira aldehide. Aldehidi se mogu formirati na bočnim lancima polisaharida, na primer, za MenW-135 i MenY polisaharide. Aldehidi se mogu formirati cepanjem polisaharidne okosnice i formiraju se na terminusima, na primer, za MenC polisaharide. Oksidacioni tretman se može izvesti korišćenjem oksidatora na oko 2 mM, npr.
1,5 do 3 mM. Oksidacioni tretman se može izvesti na 1.5, 1.6, 1.7, 1.8, 1.9, 2.0, 2.1, 2.2, 2.3, 2.4, 2.5, 2.6, 2.7, 2.8, 2.9 ili 230 mM. Oksidacioni tretman se može izvesti na temperaturi i u vremenu koje je dovoljno da proizvede najmanje 20 nmol/mg polisaharida, npr.20-30, 20-40, 20-50, 20-60, 20-70, 20-80, 20-90, 20-100, 20-150, 20-160, 20-170, 20-180, 20-190, ili 20-200 nmol/mg. Oksidacioni tretman se može obaviti na temperaturi i u vremenu dovoljnim da proizvede najmanje20, 30, 40, 50, 60, 70, 80, 90, 100, 110, 120, 130, 140, 150, 160, 170, 180, 190, ili 200 nmol/mg polisaharida. Oksidacioni tretman može biti pri vrednosti pH u rasponu od 6,5 do 9,5, ili može da ima pH 6,0, 6,5, 7,0, 7,5, 8,0, 8,5, 9,0 ili 9,5. Oksidacioni tretman se može izvesti u tečnom rastvoru ispod sobne temperature, na primer, ispod 20°C, 15°C, 10°C ili 5°C.
[0175] Tamo gde se konjugacija vrši putem reduktivne aminacije, Šifove baze se mogu redukovati odgovarajućim redukcionim agensom kao što je cijanoborhidrid (npr. NaCNBH3) ili boran kao što je piridin boran ili pikolin boran.
[0176] Nakon konjugacije, gde su prisutni neizreagovani aldehidi, konjugat se može stabilizovati redukcijom ili aminacijom aldehida. Borhidrid kao što je NABH4je pogodan redukcioni reagens. Amonijak, metilamin, glicin, alanin i slično su pogodni za aminiranje neizreagovanih aldehida.
[0177] Konjugacija se može prečistiti. Jedan postupak za prečišćavanje, koji uključuje ultrafiltraciju u prisustvu amonijum sulfata, opisan je u U.S. Pat. br.6146902. Alternativno, konjugati se mogu prečistiti od neizreagovanog proteina i polisaharida bilo kojom od standardnih tehnika uključujući, između ostalog, hromatografiju sa isključivanjem veličine, centrifugiranje u gradijentu gustine, hromatografiju hidrofobnih interakcija, hromatografiju smole mešovitog režima ili frakcionisanje amonijum sulfata. Videti, npr. P. W. Anderson, et. al. (1986). Immunol. 137: 1181-1186. Videti takođe H. J. Jennings i C. Lugowski (1981) J. Immunol. 127: 1011-1018.
[0178] Može se izvesti hromatografija hidrofobnih interakcija (HIC). Može se koristiti smola kao što je fenil, heksil, heptil, oktil, nonil ili decil smola. Smeša se može staviti na smolu da bi se prečistio konjugat od slobodnog polisaharida. Mešavina sadrži so, kao što je amonijum sulfat. pH smeše koja se stavlja je podešen tako da se pH približi neutralnoj vrednosti. pH smeše koja se puni jeste ili je podešena da ima vrednost 5,5-8,5, 6-8, 6,5 do 7,5 ili 7. So može biti prisutna u koncentraciji od, npr., 0,5 M do 1,5 M, kao što je 0,5 M do 0,7 M, 0,7 M do 0,9 M, 0,9 M do 1,1 M, 1,1 M do 1,3 M ili 1,3 M do 1,5 M. Nakon punjenja, smola se može isprati rastvorom soli, npr. koji sadrži amonijum sulfat, u kome koncentracija soli može biti, na primer, kao što je naznačeno u prethodnoj rečenici. Smola može biti u koloni i ispiranje je najmanje dve, tri, četiri, pet ili šest zapremina kolone, npr. do 7, 8, 9 ili 10 zapremina kolone. Smola se može isprati u serijama rastvora soli, na primer, dve ili više serija sa kumulativnom zapreminom serija koje imaju zapreminu najmanje 2, 3, 4, 5, 6 ili 7 puta veću od zapremine smeše pre punjenja. Konjugat može jače da interaguje sa smolom, na primer, pri velikoj jonskoj snazi, a slobodan polisaharid može da se ispere. Konjugat se može eluirati iz smole nakon ispiranja korišćenjem eluenta niske jonske snage, kao što je voda, npr. voda za ubrizgavanje (eng. water for injection - WFI). Alternativno, može se koristiti rastvor sa malo soli, npr. koji ima koncentraciju soli (npr. acetatna so, kao što je natrijum acetat) manju ili jednaku 0,2, 0,1, 0,05, 0,02, 0,01 ili 0,005 M. Eluat može da sadrži manje od 20% težinskih slobodnog polisaharida, npr. sadrži manje od 10% težinskih slobodnog polisaharida, manje od 5% težinskih slobodnog polisaharida, ili da suštinski nema slobodnog polisaharida.
[0179] Kao što je ovde opisano, postupak za proizvodnju konjugata kapsularnog polisaharida Neisseria meningitidis sa proteinom nosačem obuhvata
a) aktiviranje polisaharida pomoću aktivacionog agensa koji može da formira karbamatnu vezu (npr. karbonil diimidazol) pri čemu je aktivacioni agens prisutan u molarnom višku u odnosu na polisaharid od 20 do 50 puta;
b) gašenje aktivacionog agensa (npr. upotrebom vode) i derivatizacija aktiviranog polisaharida dihidrazidnim linkerom dodatim u molskom odnosu od 0,3 do 1,0 u odnosu na ponavljajuće jedinice polisaharida, pri čemu se polisaharid derivatizuje u odnosu od jednog dihidrazidnog linkera na 10 -100 ponavljajućih jedinica saharida;
c) konjugovanje derivatizovanog polisaharida sa proteinom nosačem hemijom karbodiimida, pri čemu je polisaharid prisutan na početku reakcije konjugacije u težinskom odnosu od 3:1 do 5:1 u odnosu na protein nosač, čime se formira konjugat.
[0180] Kao što je ovde opisano, postupak za proizvodnju konjugata kapsularnog polisaharida Neisseria meningitidis sa proteinom nosačem, obuhvata
a) delimično de-O-acetilovanje polisaharida alkalnom hidrolizom;
b) aktiviranje polisaharida tretmanom perjodatom, čime se dioli pretvaraju u aldehide do nivoa od najmanje 10, 15, 20, 25, 30, 35, 40 ili 50 nmol aldehida po mg polisaharida;
c) konjugovanje aktiviranog polisaharida sa proteinom nosačem reduktivnom aminacijom, pri čemu je polisaharid prisutan u reakciji konjugacije u težinskom odnosu od 0,5-1 do 5:1 u odnosu na protein nosač, čime se formira konjugat.
[0181] Kao što je ovde opisano, postupak za proizvodnju konjugata kapsularnog polisaharida Neisseria meningitidis sa proteinom nosačem obuhvata
a) aktiviranje polisaharida tretmanom perjodatom, čime se dioli pretvaraju u aldehide do nivoa od najmanje 25, 30, 35, 40, 45, 50, 55, 60, 65, 70 ili 75 nmol aldehida po mg polisaharida; i
b) konjugovanje aktiviranog polisaharida sa proteinom nosačem reduktivnom aminacijom, pri čemu je polisaharid prisutan u reakciji konjugacije u težinskom odnosu od 1:1 do 5:1 u odnosu na protein nosač, čime se formira konjugat.
[0182] Kao što je ovde opisano, postupak prečišćavanja može dalje da obuhvata prečišćavanje konjugata hromatografijom hidrofobnih inerakcija (HIC).
A. Ogledne formulacije vakcine
[0183] Formulisanje kompozicija vakcine iz ovog pronalaska može se postići korišćenjem postupaka priznatih u predmetnoj oblasti. Kompozicije/formulacije vakcine iz predmetnog pronalaska mogu takođe da sadrže jedan ili više adjuvanasa. Adjuvansi uključuju, u smislu primera a ne kao ograničenje, aluminijumske adjuvanse, Frojndov adjuvans, BAY, DC-chol, pcpp, monofoshoril lipid A, CpG, QS-21, toksin kolere i formil metionil peptid. Videti, npr., Vaccine Design, the Subunit and Adjuvant Approach, 1995 (M. F. Powell and M. J. Newman, eds., Plenum Press, N.Y.). Adjuvans, ako je prisutan, može biti aluminijumski adjuvans, kao što je aluminijum hidroksid ili aluminijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, kompozicije i formulacije vakcine, npr. MenACWY-TT vakcina, ne sadrži adjuvans. U nekim otelotvorenjima, kompozicije i formulacije vakcine, npr. MenACWY-TT vakcina sadrži adjuvans.
[0184] Kompozicije i formulacije vakcine (npr. konjugovane vakcine/MenACWY-TT vakcina) predmetnog pronalaska mogu se davati kao pojedinačna doza ili u nizu (tj. sa „pojačivačem” ili „pojačivačima”), ili kao pojačavač nakon ranijeg davanja druge vakcine protiv Neisseria meningitidis, kao što je kapsularna saharidna konjugatna vakcina protiv Neisseria meningitidis. Na primer, dete bi moglo da primi jednu dozu rano u životu, a zatim da dobije dodatnu dozu do deset godina kasnije, kao što se trenutno preporučuje za druge vakcine za prevenciju dečjih bolesti. U nekim otelotvorenjima, doza vakcine koja je ovde opisana se daje dva meseca do deset godina nakon prethodno date kapsularne saharidne konjugirane vakcine protiv Neisseria meningitidis, kao na primer dva do četiri meseca, četiri do šest meseci, šest do dvanaest meseci, 1 godina do 2 godine, 2 godine do 3 godine, 3 godine do 4 godine, 4 godine do 5 godina, 5 godina do 6 godina, 6 godina do 7 godina, 7 godina do 8 godina, 8 godina do 9 godina ili 9 godina do 10 godina nakon prethodno primenjene kapsularne saharidne konjugatne vakcine protiv Neisseria meningitidis.
[0185] Dopunska doza pojačivača će generisati antitela iz pripremljenih B-ćelija, tj. anamnestički odgovor. To jest, kompozicije i formulacije vakcine, na primer, MenACWY-TT vakcina, izazivaju visok primarni (tj., nakon jedne primene vakcine) funkcionalni odgovor antitela kod mlađih i starijih populacija, i sposobne su da izazovu anamnestički odgovor (tj. nakon davanja dopunske doze), pokazujući da je zaštitni imunski odgovor izazvan kompozicijama i formulacijama vakcine, npr. MenACWY-TT vakcine iz ovog pronalaska, dugovečan.
[0186] U nekim otelotvorenjima, davanje je intramuskularna injekcija. Kao što je ovde opisano, davanje može biti subkutano, intradermalno, intraperitonealno, parenteralno ili intravensko. Kompozicije i formulacije mogu biti u mešavini sa pogodnim nosačem, razblaživačem ili ekscipijensom kao što je puferovani slani rastvor natrijum acetata, sterilna voda, fiziološki rastvor ili slično. Kompozicije/formulacije mogu takođe da budu liofilizovane. Kompozicije/formulacije mogu da sadrže pomoćne supstance kao što su agensi za vlaženje ili emulgatori, pH puferski agensi, aditivi za želiranje ili povećanje viskoziteta, konzervansi i slično, u zavisnosti od načina primene i željenog preparata. Mogu se konsultovati standardni tekstovi, kao što je "REMINGTON'S PHARMACEUTICAL SCIENCE", 17. izdanje, 1985, da bi se pripremili odgovarajući preparati, bez nepotrebnog eksperimentisanja.
[0187] U nekim otelotvorenjima, kompozicija/formulacija vakcine je tečni preparat. U nekim otelotvorenjima, kompozicija/formulacija vakcine, npr. MenACWY-TT vakcina, je tečna kompozicija koja se daje injekcijom životinjama, deci, posebno maloj deci, starijim odraslima, npr. starijim od 55, 60, 65, 70, 75, 80 ili 90 godina.
[0188] Izbor odgovarajućih nosača i drugih aditiva zavisiće od tačnog puta davanja i prirode određenog oblika doziranja.
[0189] U jednom otelotvorenju, kompozicije i formulacije vakcine, na primer, MenACYW-TT vakcina, sadrže farmaceutski prihvatljiv konzervans, nosač, pufer ekscipijent ili slično. U jednom otelotvorenju, farmaceutski prihvatljiv konzervans, nosač ili ekscipijent povećava ili produžava vek trajanja kompozicija. U nekim otelotvorenjima, vakcina sadrži pufer. U nekim otelotvorenjima, pufer je natrijum acetat. U nekim otelotvorenjima, pufer je natrijum fosfat. U nekim otelotvorenjima, pufer je prisutan u koncentraciji u rasponu od 10 mM do 100 mM, na primer, 10 mM do 70 mM, 15 mM do 45 mM, 20 mM do 40 mM, 40 mM do 60 mM ili 60 mM 100 mM. U nekim otelotvorenjima, pufer ima pH od 4,5 do 7,5, od 4,5 do 7,0, od 4,5 do 6,5, od 4,5 do 6,0, od 4,5 do 5,5 ili od 4,5 do 5,0. U nekim otelotvorenjima, pufer ima pH u rasponu od 5,5 do 7,0, na primer, od 5,75 do 6,25, ili od 6,25 do 6,75. U nekim otelotvorenjima, pufer ima pH od 5,5 do 6,5. U nekim otelotvorenjima, pufer ima pH od 5 do 6. U nekim otelotvorenjima, kompozicija vakcije sadrži farmaceutski prihvatljivu so. U nekim otelotvorenjima, kompozicija/formulacija vakcine sadrži fiziološki rastvor. U nekim otelotvorenjima, fiziološki rastvor sadrži ili je NaCl. NaCl može biti prisutan u koncentraciji od 0,45% do 0,9% rastvora, kao što je 0,5% do 0,85% rastvora, ili 0,6% do 0,8% rastvora, ili 0,6%, 0,67%, 0,75%, 0,8 %, 0,85% ili 0,9%.
[0190] U jednom otelotvorenju, svaka komponenta kompozicije je hemijski inertna u odnosu na konjugate N. meningitidis polisaharid-protein nosač.
[0191] U nekim otelotvorenjima, kompozicije i formulacije vakcine, na primer, MenACWY-TT vakcina, su formulisane kao pojedinačna jedinična doza. U nekim otelotvorenjima, pojedinačna jedinična doza sadrži od 6 µg do 15 µg svakog od MenA, MenC, MenW-135 i MenY polisaharida. U nekim otelotvorenjima, pojedinačna jedinična doza sadrži 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ili 15 µg svakog od MenA, MenC, MenW-135 i MenY polisaharida. U nekim otelotvorenjima, protein nosač je prisutan u količini od 50 µg do 80 µg u pojedinačnoj jediničnoj dozi. U nekim otelotvorenjima, protein nosač je prisutan u količini od 45, 50, 55, 60, 65, 70, 75 ili 80 µg u pojedinačnoj jediničnoj dozi.
[0192] U nekim otelotvorenjima, kompozicije i formulacije vakcine, npr. MenACWY-TT vakcina je formulisana kao doza od 0,5 ml u natrijum acetatu, fiziološkom rastvoru puferovanom natrijum acetatom ili sličnom puferu. U nekim otelotvorenjima, doza od 0,5 ml sadrži 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9, 10, 11, 12, 13, 14 ili 15 µg svake od serogrupa A, C, Y i W-135 konjugovane sa 50, 55, 60, 65, 70, 80, 85 ili 90 µg proteina toksoida tetanusa. U nekim otelotvorenjima, ova doza od 0,5 ml se primenjuje intramuskularno.
B. Primeri postupaka i upotrebe
[0193] U nekim otelotvorenjima, postupak vakcinacije subjekta protiv Neisseria meningitidis obuhvata davanje kompozicija ili formulacija vakcine, npr. MenACWY-TT vakcine, koja je ovde opisana. Takođe je otkrivena upotreba kompozicije ili formulacije vakcine opisane ovde za imunizaciju ispitanika protiv Neisseria meningitidis. Takođe je otkrivena upotreba kompozicije ili formulacije vakcine koja je ovde opisana za proizvodnju leka za imunizaciju ispitanika protiv Neisseria meningitidis.
[0194] U nekim otelotvorenjima, ispitanik je bio star 12 meseci ili više kada je vakcinisan. U nekim otelotvorenjima, ispitanik je bio starija odrasla osoba kada je vakcinisan. U nekim otelotvorenjima, starija odrasla osoba je imala 50, 55, 60, 65, 70, 75, 80, 85, 90 ili 100 godina kada je vakcinisana.
[0195] U nekim otelotvorenjima, ispitanik je bio star od 6 nedelja do 3 godine kada je vakcinisan. Ispitanik može biti 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 nedelja star kada je vakcinisan. U nekim otelotvorenjima, ispitanik je imao 2 meseca, 4 meseca, 6 meseci, 12 meseci i/ili 15 meseci kada je vakcinisan. U nekim otelotvorenjima, ispitanik je vakcinisan na osnovu starosti. U nekim otelotvorenjima, ispitaniku se daju tri doze kompozicija ili formulacija vakcine, npr., MenACWY-TT vakcine, opisane ovde, u 6-8, 10-12 i 14-16 nedelja.
[0196] U nekim otelotvorenjima, ispitanik je vakcinisan više od jednom tokom života. U nekim otelotvorenjima, ispitanik prima dodatnu dozu 3 godine ili duže nakon prve doze. U nekim otelotvorenjima, ispitanik prima dodatnu dozu 4 godine ili duže nakon prve doze. U nekim otelotvorenjima, ispitanik se vakciniše do tri puta pre svog prvog rođendana, i jednom oko ili posle svog prvog rođendana. Prva vakcinacija može biti u uzrastu od 2, 3, 4, 5, 6, 7, 8, 9 ili 10 nedelja. U nekim otelotvorenjima, prva ili druga vakcinacija je u dobi od 3, 4 ili 5 meseci. U nekim otelotvorenjima, prva ili druga vakcinacija je u dobi od 5, 6 ili 7 meseci. U nekim otelotvorenjima, prva, druga, treća ili četvrta vakcinacija je u dobi od 11, 12, 13, 14 ili 15 meseci. U nekim otelotvorenjima, prva, druga, treća ili četvrta vakcinacija je u dobi od 14, 15, 16, 17 ili 18 meseci. U nekim otelotvorenjima, prva vakcinacija je u dobi od 6, 7, 8 ili 9 meseci, a druga vakcinacija se daje u dobi do 24 meseca. U nekim otelotvorenjima, ispitanik je vakcinisan kao starija odrasla osoba, bez obzira na to da li je prethodno primio MenACWY-TT ili drugu vakcinu protiv Neisseria meningitidis. U nekim otelotvorenjima, subjekt je imao 50 godina ili više, 55 godina ili više, 60 godina ili više, ili 65 godina ili više kada je vakcinisan sa kompozicijama ili formulacijama vakcine, npr. MenACWY-TT vakcinom, koja je ovde opisana.
[0197] U nekim otelotvorenjima, kompozicije ili formulacije vakcine, npr. MenACWY-TT vakcina, opisane ovde, daju se istovremeno sa drugim rutinskim vakcinama. U nekim otelotvorenjima, rutinske vakcine uključuju, na primer, Pentacel<®>(DTaP5-IPV/Hib), Prevnar<®>(PCV7), Prevnar 13<®>(PCV13), RotaTeq<®>(RV5), ROTARIX<®>(RV1), ENGERIX-B<®>(HepB), RECOMBIVAX HB<®>(HepB), M-M-R<®>(MMR), M-M-R<®>II(MMR), i VARIVAX<®>(V) vakcine. U nekim otelotvorenjima, rutinske vakcine uključuju, na primer, Adacel<®>(Tdap5) i Gardasil (HPV4). U nekim otelotvorenjima, rutinske vakcine uključuju DTaP5-IPV/HibHepB. Druge rutinske vakcine su poznate u predmetnoj oblasti i mogu se dati ispitaniku u isto vreme, pre ili posle kompozicija ili formulacija vakcine, npr. MenACWY-TT vakcine, opisane ovde.
IV. PRIMERI
[0198] Slede primeri postupaka, upotreba i kompozicija koje su ovde otkrivene.
Podrazumeva se da se mogu praktikovati razna druga otelotvorenja, uzimajući u obzir opšte i detaljne opise date gore. Sledeći primeri su dati u svrhu ilustracije ovog učenja i neće se tumačiti kao ograničenje obima otkrića ili patentnih zahteva.
1. Priprema konjugata grupe A
Primer 1A
[0199] Prečišćeni kapsularni polisaharid grupe A je rastvoren u 10 % težinskih tetrabutilamonijum hlorida (TBAC) u dimetilsulfoksidu (DMSO) do ciljne koncentracije od 8 mg/ml. Rastvor se meša dok se polisaharid potpuno ne rastvori na 19-25°C. Rastvoreni polisaharid se aktivira dodavanjem ciljne koncentracije od 35-45 molarnog viška karbonildiimidazola (CDI) po ponavljajućoj jedinici N-acetilmannozamin fosfata (PS RU), i meša se 50 do 70 minuta na 19-25°C (Sl.1C, prva reakcija; proizvod prikazan na Sl.1E). Rastvor polisaharida je razblažen 1:2 sa WFI (50% zapreminskih) da bi se podesila koncentracija aktiviranog polisaharida na 4 mg/ml u 50% DMSO. Rastvor je derivatizovan dodavanjem dihidrazida adipinske kiseline (ADH) (1,0 mol ADH na 1-3 mol PS RU) (Slika 1C, druga reakcija; proizvod prikazan na Slici 1F) i mešan preko noći na sobnoj temperaturi. Reakcija daje takvu količinu derivatizacije da postoji jedan vezani ADH na 10 do 100 ponavljajućih jedinica polisaharida, npr. jedan vezani ADH na 20, 30, 40, 50 ili 60 ponavljajućih jedinica polisaharida. Aktivirani polisaharid se koncentriše ultrafiltracijom na 10kDa MWCO PES membrani, a zatim se dijafiltrira na 12-18 zapreminskih razmena fiziološkog rastvora. Ciljna koncentracija je približno 30 mg/ml. Aktivirani polisaharid se filtrira i čuva na 1-5°C.
[0200] Prečišćeni protein tetanus toksoid (TT) se filtrira kroz membranu od 0,2 mikrona i čuva na 1-5°C. Derivatizovani polisaharid i koncentrovani protein tetanusa su pomešani zajedno, u odnosu 0,5:1, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1 ili 5:1. Tačno određeni deo (alikvot) od 100 mg/ml agensa za unakrsno povezivanje 1-etil-3-(dimetilaminopropil) karbodiimida (EDAC) u 1,0 M MES puferu, pH 5,7 dodat je u smešu polisaharida i proteina tako da je konačna koncentracija EDAC 10 mg/ml i MES je 100 mM. Dodat je fiziološki rastvor da bi se dobile ciljne koncentracije od 16 mg/ml polisaharida i 4 mg/ml TT. Konačni pH je podešen na 5,5 -5,9 i reakcija je mešana na 15,6 - 23,9°C tokom 16-24 sata. Tokom ovog vremena, EDAC i TT reaguju da bi formirali O-acilizurea intermedijer (Slika 1B). Intermedijer O-acilizuree i derivatizovani polisaharid zatim formiraju konjugat (Slika 1G; proizvodi prikazani na SL.1H i SL.1A).
[0201] Amonijum sulfat je dodat u reakciju konjugata da bi se dobila koncentracija amonijum sulfata od 1 M. pH se podešava na 7 i meša se dok se ne rastvori na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša konjugata se nanosi na HIC kolonu napunjenu fenil smolom. Nekonjugovani polisaharid je eluiran sa 2 do 7 zapremina kolone 1 M rastvora amonijum sulfata. Konjugat je eluiran sa WFI. U ovom i narednim primerima, HIC prečišćavanje konjugata može da obezbedi proizvod u kome je manje od 20% masenih polisaharida slobodni (nekonjugovani) polisaharid. Eluat konjugata je dijafiltriran na 10 zamena zapremine 50 mM natrijum acetata, pH 6.0, korišćenjem 100 kDa MWCO PES membrane. Konačna filtracija prečišćenog konjugata se izvodi pomoću membrane od 0,2 mikrona i konjugat se čuva na 1-5°C.
Primer 1B
[0202] Prečišćeni kapsularni polisaharid grupe A je rastvoren u tetrabutilamonijum hloridu (TBAC)/dimetilsulfoksidu (DMSO) po težini do ciljne koncentracije od 6 mg/ml. Rastvor se meša 16-24 sati na 19-25°C. Rastvoreni polisaharid se aktivira dodavanjem ciljne koncentracije od 35-45 molarnog viška karbonildiimidazola (CDI) po ponavljajućoj jedinici N-acetilmannozamin fosfata (PS RU), i meša se 50 do 70 minuta na 19-25°C (Sl.1C, prva reakcija; proizvod prikazan na Sl.1E). Rastvor polisaharida je razblažen 1:2 sa WFI (45 -55% zapreminskih) tako da aktivirani polisaharid bude u ciljnoj koncentraciji od 3 mg/ml u 50% DMSO.
[0203] Prečišćeni protein tetanus toksoid (TT) se filtrira kroz membranu od 0,2 mikrona i čuva na 1-5°C. Tetanus protein se dodaje do konačne koncentracije od 1 mg/ml. Tokom ovog vremena, aktivirani polisaharid i TT reaguju da bi formirajli konjugat sa karbamatnom vezom (SL. 1D). Reakcija se nastavlja tokom noći na sobnoj temperaturi.
[0204] Amonijum sulfat je dodat u reakciju konjugata da bi se dobila koncentracija amonijum sulfata od 1 M. pH se podešava na 7 i meša se dok se ne rastvori na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša konjugata se nanosi na HIC kolonu napunjenu fenil smolom. Nekonjugovani polisaharid je eluiran sa 2 do 7 zapremina kolone 1 M rastvora amonijum sulfata. Konjugat je eluiran sa WFI. U ovom i narednim primerima, HIC prečišćavanje konjugata može da obezbedi proizvod u kome je manje od 20% masenih polisaharida slobodni (nekonjugovani) polisaharid. Eluat konjugata je dijafiltriran na 10 zamena zapremine 50 mM natrijum acetata, pH 6.0, korišćenjem 100 kDa MWCO PES membrane.
Konačna filtracija prečišćenog konjugata se izvodi pomoću membrane od 0,2 mikrona i konjugat se čuva na 1-5°C.
2. Priprema konjugata grupe C
Primer 2A
[0205] Prečišćeni kapsularni polisaharid grupe C je rastvoren u fiziološkom rastvoru do ciljne koncentracije od 10 mg/ml. Rastvor se zatim meša dok se ne rastvori. Temperatura rastvora polisaharida je podešena na 37°C i dodat je natrijum hidroksid (NaOH) do ciljne konačne koncentracije od 100 mM NaOH. Rastvor se meša i inkubira 20 minuta, obezbeđujući delimičnu de-O-acetilaciju tako da će polisaharid u konačnom konjugatu imati nivo O-acetilacije od 0,8 do 1,4 µmol OAc/mg polisaharida i/ili smanjenje od 50% do 60% u odnosu na nivo O-acetilacije polaznog materijala. Prirodni MenC polisaharid ima dve potencijalne pozicije O-acetilacije po ponavljajućoj jedinici monosaharida i generalno ima ukupan nivo O-acetilacije od 40-45% za sva moguća mesta O-acetilacije. Smanjenje O-acetil grupa od 50% u odnosu na početni materijal će dati ukupan nivo O-acetilacije (od svih mogućih O-acetilacionih mesta) manji od 25%.
[0206] pH se podešava na 6 i temperatura se snižava na 15°C. Rastvoreni polisaharid se aktivira dodavanjem natrijum metaperjodata (Slika 2B) tako da je ciljna koncentracija 2 mM. pH se podešava na 6 i rastvor se meša na 15°C. Perjodat oksidira i cepa se na susednim pozicijama diola, dajući lance sa terminalnim aldehidom. Reakcija se meša dok se srednja veličina molekula ne smanji na između 50.000 i 100.000 Daltona, kao što je određeno HPSEC. Redukciona aktivnost (koja odražava količinu aldehida) je 40 do 100 nmol/mg polisaharida. Reakcija je ugašena dodavanjem glicerola u količini od 0,5 ml glicerola po gramu polisaharida i mešanjem najmanje 5 minuta. Polisaharid je inicijalno koncentrovan ultrafiltracijom korišćenjem 5 kDa MWCO regenerisanog celuloznog filtera, a zatim dijafiltriran na 8 - 12 zapreminskih razmena 50 mM natrijum acetatnog pufera, pH 6,0.
Materijal se dalje koncdentruje do ciljne koncentracije od 50 mg/ml.
Depolimerizovani/aktivirani polisaharid se filtrira i čuva.
[0207] Prečišćeni protein tetanus toksoid je koncentrisan na 10 kDa MWCO PES membrani do ciljne konačne koncentracije do 100 mg/ml, a zatim propušten kroz filter od 0,2 mikrona.
Filtrirani rastvor proteina se čuva na 1-5°C. Depolimerizovani/aktivirani polisaharid i koncentrovani tetanus protein su pomešani zajedno, u masenom odnosu 0,5:1, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1 ili 5:1 (polisaharid:protein). Alikvot od 100 mg/ml natrijum cijanoborhidrida u 2,0 M fosfatnom puferu je dodat u smešu polisaharida i proteina tako da je natrijum cijanoborhidrid u količini od 10 mg/ml i fosfatni pufer 200 mM, pH 8,0. Dodaje se fiziološki rastvor da se podese koncentracije, npr. do cilja od 15-50 mg/ml za polisaharid. Reakcija (Slika 2C) je mešana na 37°C tokom 16-30 sati. Reakcija je razblažena 1:2 sa 6 mM fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom (PBS). Alikvot od 100 mg/ml natrijum borhidrida u 6 mM PBS dodat je u reakcionu smešu da bi se dobila ciljna količina od 0,5 mg natrijum borhidrida po ml reakcione zapremine. Reakcija se meša najmanje 15 minuta na sobnoj temperaturi. Natrijum borohidrid zatvara nereagovane aldehide tako što ih redukuje u alkohole, dajući terminalni nevezani saharid sa primarnim hidroksilom na poziciji 7, ili pri čemu je redukcioni kraj modifikovan sa (2-hidroksi)etoksi. Proizvodi (terminalni saharidi nisu prikazani) su ilustrovani na SL.2D i SL.2A. Rastvor konjugacije je dijafiltriran na 10 zamena zapremine 6 mM PBS na 50 kDa MWCO PES membrani. Rastvor se čuva na 1-5°C.
[0208] Amonijum sulfat je dodat u reakciju konjugata da bi se dobila koncentracija amonijum sulfata od 1 M. pH se podešava na 7 i meša se dok se ne rastvori na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša konjugata se nanosi na HIC kolonu napunjenu fenil smolom. Nekonjugovani polisaharid je eluiran sa 2 do 7 zapremina kolone 1 M rastvora amonijum sulfata. Konjugat je eluiran sa WFI. U ovom i narednim primerima, HIC prečišćavanje konjugata može da obezbedi proizvod u kome je manje od 20% masenih polisaharida slobodni (nekonjugovani) polisaharid. Eluat konjugata je dijafiltriran na 10 zamena zapremine 50 mM natrijum acetata, pH 6.0, korišćenjem 100 kDa MWCO PES membrane. Konačna filtracija prečišćenog konjugata se izvodi pomoću membrane od 0,2 mikrona i konjugat se čuva na 1-5°C.
Primer 2B
[0209] Prečišćeni kapsularni polisaharid grupe C je rastvoren u fiziološkom rastvoru do ciljne koncentracije od 10 mg/ml. Rastvor se zatim meša dok se ne rastvori. pH se podešava na 6,0 i temperatura se menja na 15°C. Rastvoreni polisaharid se aktivira dodavanjem natrijum metaperjodata (Slika 2B) tako da je ciljna koncentracija 2 mM. Reakcija se meša dok srednja veličina molekula ne bude između 50.000 i 100.000 Daltona, kao što je određeno HPSEC. Reakcija je ugašena dodavanjem glicerola u količini od 0,5 ml glicerola po gramu polisaharida i mešanjem najmanje 5 minuta. Polisaharid je inicijalno koncentrovan ultrafiltracijom korišćenjem 5 kDa MWCO regenerisanog celuloznog filtera, a zatim dijafiltriran na 8 - 12 zapreminskih razmena 50 mM natrijum acetatnog pufera, pH 6,0.
Materijal se dalje koncdentruje do ciljne koncentracije od 50 mg/ml.
Depolimerizovan/aktivirani polisaharid se filtrira i čuva na 1-5°C.
[0210] Prečišćeni protein tetanus toksoid je koncentrisan na 10 kDa MWCO PES membrani do ciljne konačne koncentracije do 100 mg/ml, a zatim propušten kroz filter od 0,2 mikrona. Filtrirani rastvor proteina se čuva na 1-5°C. Depolimerizovani/aktivirani polisaharid i koncentrovani tetanus protein su pomešani zajedno, u molskom odnosu 0,5:1, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1 ili 5:1 (polisaharid:protein). Alikvot od 100 mg/ml natrijum cijanoborhidrida u 2,0 M fosfatnom puferu je dodat u smešu polisaharida i proteina tako da je natrijum cijanoborhidrid u količini od 10 mg/ml i fosfatni pufer 200 mM, pH 8,0. Dodaje se fiziološki rastvor da se podese koncentracije, npr. do cilja od 15-50 mg/ml za polisaharid. Reakcija (Slika 2C) je mešana na 37°C tokom 16-30 sati. Reakcija je razblažena 1:2 sa 6 mM fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom (PBS). Alikvot od 100 mg/ml natrijum borhidrida u 6 mM PBS dodat je u reakcionu smešu da bi se dobila ciljna količina od 0,5 mg natrijum borhidrida po ml reakcione zapremine. Reakcija se meša najmanje 15 minuta na sobnoj temperaturi. Natrijum borohidrid zatvara nereagovane aldehide tako što ih redukuje u alkohole, dajući terminalni nevezani saharid sa primarnim hidroksilom na poziciji 7, ili pri čemu je redukcioni kraj modifikovan sa (2-hidroksi)etoksi. Proizvodi (terminalni saharidi nisu prikazani) su ilustrovani na SL.2D i SL.2A. Rastvor konjugacije je dijafiltriran na 10 zamena zapremine 6 mM PBS na 50 kDa MWCO PES membrani. Rastvor se čuva na 1-5°C.
[0211] Amonijum sulfat je dodat u reakciju konjugata da bi se dobila koncentracija amonijum sulfata od 1 M. pH se podešava na 7 i meša se dok se ne rastvori na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša konjugata se nanosi na HIC kolonu napunjenu fenil smolom. Nekonjugovani polisaharid je eluiran sa 2 do 7 zapremina kolone 1 M rastvora amonijum sulfata. Konjugat je eluiran sa WFI. U ovom i narednim primerima, HIC prečišćavanje konjugata može da obezbedi proizvod u kome je manje od 20% masenih polisaharida slobodni (nekonjugovani) polisaharid. Eluat konjugata je dijafiltriran na 10 zamena zapremine 50 mM natrijum acetata, pH 6.0, korišćenjem 100 kDa MWCO PES membrane.
Konačna filtracija prečišćenog konjugata se izvodi pomoću membrane od 0,2 mikrona i konjugat se čuva na 1-5°C.
3. Priprema konjugata grupa W-135 i Y
[0212] Prečišćeni kapsularni polisaharid grupe W-135 je rastvoren u natrijum acetatu do ciljne koncentracije od 10 mg/ml. Rastvor se zatim meša dok se ne rastvori. Rastvor polisaharida se zagreva na 50 - 70°C pomoću izmenjivača toplote sa omotačem. pH je podešen na 4,5. Reakcija (Slika 4A, korak 1) je ostavljena da se meša sve dok srednja veličina molekula ne bude 150,000 Daltona, kao što je određeno HPSEC. Reakciona smeša je ohlađena na 1-5°C. Natrijum metaperjodat se dodaje u rastvor polisaharida tako da ciljna koncentracija metaperjodata bude 2 mM (Slika 4A, korak 2). pH je podešen na 6,0 i rastvor je mešan 60 minuta između 0 i 5°C. Perjodat oksidira i cepa se na susednim pozicijama diola, dajući aldehide, npr., na poziciji 7 ostatka sijalinske kiseline kao što je prikazano na Sl.4A. Redukciona aktivnost (koja odražava količinu aldehida) je 60 do 150 nmol/mg polisaharida. Reakcija je ugašena dodavanjem 0,5 ml glicerola po gramu polisaharida i mešanjem najmanje 5 minuta. Polisaharid je koncentrovan ultrafiltracijom korišćenjem 10 kDa MWCO regenerisanog celuloznog filtera, a zatim dijafiltriran na 10 zapreminskih razmena 50 mM natrijum acetatnog pufera, pH 6,0. Materijal se dalje koncdentruje do ciljne koncentracije od 50 mg/ml. Depolimerizovan/aktivirani polisaharid se filtrira i čuva se na 1-5°C.
[0213] Prečišćeni protein toksoida tetanusa se koncentriše na 10 kDa MWCO PES membrani do ciljne konačne koncentracije do 100 mg/ml, a zatim se propušta kroz filter od 0,2 mikrona i čuva na 1-5°C. Depolimerizovani/aktivirani polisaharid i koncentrovani tetanus protein se mešaju zajedno u masenom odnosu 0,5:1, 1:1, 2:1, 3:1, 4:1 ili 5:1 (polisaharid:protein).
Alikvot od 100 mg/ml natrijum cijanoborhidrida u 2,0 M fosfatnom puferu je dodat u smešu polisaharida i proteina tako da je natrijum cijanoborhidrid u količini od 10 mg/ml i fosfatni pufer 200 mM, pH 9,0. Dodaje se fiziološki rastvor da bi se podesila ciljna koncentracija, npr. do cilja od 15-50 mg/ml za polisaharid. Reakciona smeša (SL.4B) je mešana na sobnoj temperaturi preko noći.
[0214] Reakcija je razblažena 1:2 sa 6 mM fiziološkog rastvora puferovanog fosfatom (PBS). Alikvot od 100 mg/ml natrijum borhidrida u 6 mM PBS dodat je u reakcionu smešu da bi se dobila ciljna količina od 0,5 mg natrijum borhidrida po ml reakcione zapremine. Reakcija se meša najmanje 15 minuta na sobnoj temperaturi. Natrijum borohidrid zatvara neizreagovane aldehide redukujući ih u alkohole. Proizvodi su prikazani na Sl.4C i Sl.3.
[0215] Amonijum sulfat je dodat u reakciju konjugata da bi se dobila koncentracija amonijum sulfata od 1 M. pH se podešava na 7 i meša se dok se ne rastvori na sobnoj temperaturi. Reakciona smeša konjugata se nanosi na HIC kolonu napunjenu fenil smolom. Nekonjugovani polisaharid je eluiran sa 2 do 7 zapremina kolone 1 M rastvora amonijum sulfata. Konjugat je eluiran sa WFI. Eluat konjugata je dijafiltriran na 10 zamena zapremine 50 mM natrijum acetata, pH 6.0, korišćenjem 100 kDa MWCO PES membrane. Konačna filtracija prečišćenog konjugata se izvodi pomoću membrane od 0,2 mikrona i konjugat se čuva na 1-5°C. Isti proces može se koristiti za prečiščeni kapsularni polisaharid grupe Y.
4. Formulacija kvadrivalentne vakcine
Primer 4A
[0216] Kvadrivalentna MenACYW-TT konjugovana vakcina je formulisana od 4 monovalentna konjugata PS-proteina pripremljena kao što je opisano u Primerima 1A, 2A i 3-4 i razblažena u fiziološkom rastvoru puferovanom natrijum acetatom do konačne koncentracije od 10 µg PS/serogrupa/0.5 ml. To jest, doza od 0,5 ml MenACYW konjugovane vakcine sadrži 10 µg svake od meningokoknih PS serogrupa A, C, Y i W-135, konjugovanih sa 45 do 80 µg ukupnog proteina tetanus toksoida (stvarna količina proteina tetanus toksoida zavisi od određenog odnosa PS-proteina u serijama monovalentnog koncentrata koji se koristi u formulacijama).
[0217] Svaka doza od 0,5 ml MenACYW konjugovane vakcine je formulisana u 30 mM fiziološkom rastvoru pH 6,0 puferovanom natrijum acetatom.
Primer 4B
[0218] Kvadrivalentna MenACYW-TT konjugovana vakcina je formulisana od 4 monovalentna konjugata PS-proteina pripremljena kao što je opisano u Primerima 1A, 2B i 3-4 i razblažena u fiziološkom rastvoru puferovanom natrijum acetatom do konačne koncentracije od 10 µg PS/serogrupa/0.5 ml. To jest, doza od 0,5 ml MenACYW konjugovane vakcine sadrži 10 µg svake od meningokoknih PS serogrupa A, C, Y i W-135, konjugovanih sa 45 do 80 µg ukupnog proteina tetanus toksoida (stvarna količina proteina tetanus toksoida zavisi od određenog odnosa PS-proteina u serijama monovalentnog koncentrata koji se koristi u formulacijama).
[0219] Svaka doza od 0,5 ml MenACYW konjugovane vakcine je formulisana u 30 mM fiziološkom rastvoru pH 6,0 puferovanom natrijum acetatom.
Primer 4C
[0220] Kvadrivalentna MenACYW-TT konjugovana vakcina je formulisana od 4 monovalentna konjugata PS-proteina pripremljena kao što je opisano u Primerima 1B, 2B i 3-4 i razblažena u fiziološkom rastvoru puferovanom natrijum acetatom do konačne koncentracije od 10 µg PS/serogrupa/0.5 ml. To jest, doza od 0,5 ml MenACYW konjugovane vakcine sadrži 10 µg svake od meningokoknih PS serogrupa A, C, Y i W-135, konjugovanih sa 45 do 80 µg ukupnog proteina tetanus toksoida (stvarna količina proteina tetanus toksoida zavisi od određenog odnosa PS-proteina u serijama monovalentnog koncentrata koji se koristi u formulacijama).
[0221] Svaka doza od 0,5 ml MenACYW konjugovane vakcine je formulisana u 30 mM fiziološkom rastvoru pH 6,0 puferovanom natrijum acetatom.
5. Osobine i imunogenost oglednih konjugata
[0222] MenA konjugat je pripremljen generalno kao što je gore opisano bez ADH linkera, osim što je koncentracija polisaharida korišćena u reakciji konjugacije sa tetanus toksoidom bila 12 mg/ml. Konjugat je imao maseni odnos polisaharida/proteina (PS/PR) od 0,3.
Utvrđeno je da je nivo O-acetilacije 3,0 µmol/mg polisaharida.
[0223] MenA konjugat je pripremljen generalno kao što je gore opisano sa ADH linkerom, osim što je koncentracija polisaharida korišćena u reakciji konjugacije sa tetanus toksoidom bila 12 mg/ml. Konjugat je imao maseni odnos PS/PR 1,0. Utvrđeno je da je nivo O-acetilacije 2,8 µmol/mg polisaharida. Pripremljeno je nekoliko dodatnih serija konjugata MenA sa ADH linkerom u kojima je koncentracija polisaharida korišćena u reakciji konjugacije sa toksoidom tetanusa bila ili 12 mg/ml ili 16 mg/ml. Izmerene vrednosti masenih odnosa PS/PR za ove serije bile su 1,0, 1,1, 1,2 i 1,3, a izmerene vrednosti nivoa O-acetilacije u µmol/mg polisaharida 2,5, 2,8, 2,9 i 3,0. Neke vrednosti su primećene više puta.
[0224] Potvrđeno je da je svaka od serija konjugata MenA imunogena (tj. izazvana anti-MenA antitela izmerena serumskim baktericidnim testom i/ili ELISA) u barem značajnom i statistički značajnom delu primalaca u odnosu na uzorke pre tretmana i/ili neimunizovane kontrole) kada se daje u četvorovalentnoj formulaciji kod ljudi, miševa i/ili zamoraca koji nisu bili vakcinisani protiv MenA.
[0225] Konjugat MenC pripremljen je generalno kao što je opisano gore. Konjugat je imao maseni odnos polisaharida/proteina (PS/PR) od 0,6. Utvrđeno je da je nivo O-acetilacije 2,4 µmol/mg polisaharida. Pripremljeno je nekoliko dodatnih serija konjugata MenC. Izmerene vrednosti masenih odnosa PS/PR za ove serije bile su 0,4, 0,6 i 0,7, a izmerene vrednosti nivoa O-acetilacije u µmol/mg polisaharida 0,8, 1,2, 1,3, 1,4, 1,5, 2,2 i 2,3. Neke vrednosti su primećene više puta.
[0226] Potvrđeno je da je svaka od serija konjugata MenC imunogena (tj. izazvana anti-MenC antitela izmerena serumskim baktericidnim testom i/ili ELISA) u barem značajnom i statistički značajnom delu primalaca u odnosu na uzorke pre tretmana i/ili neimunizovane kontrole) kada se daje u četvorovalentnoj formulaciji kod ljudi, miševa i/ili zamoraca koji nisu bili vakcinisani protiv MenC.
[0227] Konjugat MenW-135 pripremljen je generalno kao što je opisano gore. Konjugat je imao maseni odnos polisaharida/proteina (PS/PR) od 0,9. Utvrđeno je da je nivo O-acetilacije 1,6 µmol/mg polisaharida. Pripremljeno je nekoliko dodatnih serija konjugata MenW-135. Izmerene vrednosti masenih odnosa PS/PR za ove serije bile su 0,6, 0,7, 0,8, 0,9 i 1,2, a izmerene vrednosti nivoa O-acetilacije u µmol/mg polisaharida 0,7, 0,8 i 1,3. Neke vrednosti su primećene više puta.
[0228] Potvrđeno je da je svaka od serija konjugata MenW-135 imunogena (tj. izazvana anti-MenW-135 antitela izmerena serumskim baktericidnim testom i/ili ELISA) u barem značajnom i statistički značajnom delu primalaca u odnosu na uzorke pre tretmana i/ili neimunizovane kontrole) kada se daje u četvorovalentnoj formulaciji kod ljudi, miševa i/ili zamoraca koji nisu bili vakcinisani protiv MenW-135.
[0229] Konjugat MenY pripremljen je generalno kao što je opisano gore. Konjugat je imao maseni odnos polisaharida/proteina (PS/PR) od 1,0. Utvrđeno je da je nivo O-acetilacije 1,3 µmol/mg polisaharida. Pripremljeno je nekoliko dodatnih serija konjugata MenY. Izmerene vrednosti masenih odnosa PS/PR za ove serije bile su 0,6, 0,7, 0,8 i 0,9, a izmerene vrednosti nivoa O-acetilacije u µmol/mg polisaharida 0,8, 0,9, 1,0, 1,1 i 1,3. Neke vrednosti su primećene više puta.
[0230] Potvrđeno je da je svaka od serija konjugata MenY imunogena (tj. izazvana anti-MenY antitela izmerena serumskim baktericidnim testom i/ili ELISA) u barem značajnom i statistički značajnom delu primalaca u odnosu na uzorke pre tretmana i/ili neimunizovane kontrole) kada se daje u četvorovalentnoj formulaciji kod ljudi, miševa i/ili zamoraca koji nisu bili vakcinisani protiv MenY.
[0231] Sve gore opisane serije konjugata bile su populacije molekula konjugata sa prosečnom molekulskom težinom u opsegu od 300 do 1500 kDa.
6. Klinička ispitivanja
[0232] Kvadrivalentni MenACYW-TT konjugat, kako je ovde opisan, korišćen je u kliničkim studijama za procenu bezbednosti i imunogenosti različitih rasporeda vakcinacije kod odojčadi i male dece (starosti od 6 nedelja i više) i odraslih od 56 godina i starijih.
a) Faza I/II kliničko ispitivanje 1 – Bezbednost i imunogenost različitih formulacija sličnih MenACYW-TT datih zdravoj deci koja nisu dobila meningokoknu vakcinu (12 meseci /- 21 dan)
[0233] Ova studija faze I/II procenjivala je bezbednost i imunogenost pojedinačne doze različitih formula konjugata kvadrivalentnog meningokoknog polisaharida-tetanus toksoida u vezi sa MenACYW-TT datim intramuskularno maloj deci uzrasta 12 meseci /- 21 dan (grupe 1-5). NeisVac-C<®>(potpuno de-O-acetilovani meningokokni polisaharid-tetanus toksoid konjugat grupe C, koji se ovde pominje kao "MenC-TT", licencirana monovalentna meningokokna konjugovana vakcina, data je kontrolnoj grupi (grupa 6).
[0234] Formulacija 1A je sadržala 4 µg polisaharida svakog od četiri polisaharida (tj.
MenACYW) i 22,1 µg TT po dozi od 0,5 ml. Svi su imali prirodne nivoe O-acetilacije i bili su konjugovani preko aktivacije perjodata i reduktivne aminacije (MenCYW) ili korišćenjem karbonil diimidazola i dihidrazida adipinske kiseline (MenA) suštinski kao što je gore opisano.
[0235] Formulacija 1B je sadržala po 10 µg MenA i MenW polisaharida i po 4 µg MenC i MenY polisaharida i 36,6 µg TT po dozi od 0,5 ml. Inače je bila identična formulaciji 1A.
[0236] Formulacija 1C je sadržala 10 µg svakog od četiri polisaharida i 54,8 µg TT po dozi od 0,5 ml. Inače je bila identična formulaciji 1A.
[0237] Formulacija 2A je sadržala 4 µg polisaharida svakog od četiri polisaharida i 33,9 µg TT po dozi od 0,5 ml. Polisaharidi MenC, Y i W su delimično de-O-acetilovani alkalnim tretmanom i konjugovani su perjodatnom aktivacijom i reduktivnom aminacijom suštinski kao što je gore opisano. Polisaharid MenA je imao prirodni nivo O-acetilacije i napravljen je kao neoglikokonjugat korišćenjem hemije konjugacije suštinski kao što je opisano u US2005/0002957 Primeru 5.
[0238] Formulacija 2B je sadržala 10 µg svakog od četiri polisaharida i 84,8 µg TT po dozi od 0,5 ml. Inače je bila identična formulaciji 2A.
[0239] Sve gore navedene formulacije su sadržale 0,67% NaCl i bile su puferovane sa natrijum fosfatom na pH 6.
[0240] Šest studijskih grupa sumirano je i okarakterisano u tabeli 1.
Tabela 1: Studijske grupe za kliničko ispitivanje 1 faze I/II
Grupa n Lečenje Populacija analize po protokolu
[0241] Unutar grupa za lečenje, odnos muškaraca i žena je varirao, pri čemu je ekrtremna vrednos bila u grupi 2, 39,3% prema 60,7% i grupi 5, 62,3% prema 37,7%. Raspon starosti u svim grupama bio je od 11,0 do 12,0 meseci; srednja vrednost u grupama kretala se od 11,5 do 11,7 meseci.
[0242] Podaci o bezbednosti kao neprijavljeni neželjeni događaji (AE) prikupljeni su do 30-37 dana nakon doze vakcine. Interval za prijavljene neželjene reakcije bio je između D0 i D7 (tj. 0 do 7 dana nakon davanja leka). Prikupljanje Prijavljene reaktogenosti uključivalo je osetljivost na mestu injekcije, crvenilo i otok, kao i groznicu, povraćanje, gubitak apetita, abnormalni plač, pospanost i razdražljivost.
[0243] Svi vakcinisani ispitanicu su završili studiju, ali je 56 vakcinisanih ispitanika (sve grupe) isključeno iz analize zbog odstupanja u protokolu, a najčešći razlog je nedavanje uzorka krvi dana 30-37 u okviru dozvoljenog vremenskog okvira.
[0244] Dva ispitanika su iskusila trenutne neprijavljene neželjene efekte, od kojih se jedan smatrao povezanim sa vakcinacijom (učestalost osipa kod ispitanika Grupe 1).
[0245] Prikupljene reakcije na mestu injekcije između dana 0 i dana 7: Većina ispitanika u svim grupama doživela je prikupljene reakcije. Sve u svemu, stope prikupljenih reakcija bile su uporedive između grupa. Procenat primalaca Grupe 1-5 koji su prijavili reakciju na mestu injekcije bio je sličan onom uočenom kod ispitanika koji su primili kontrolnu vakcinu (Grupa 6).
[0246] Nije postojala očigledna korelacija između stopa reakcija na mestu injekcije i količine tetanus toksoida sadržanog u svakoj formulaciji vakcine.
[0247] Najčešća reakcija na mestu injekcije bila je osetljivost, sa stopama u rasponu od 25,4% u grupi 1 do 39,3% u grupi 5; sledeći je bio eritem, koji se kretao od 29,5% u grupi 2 do 39,3% u grupi 5; a najmanje uobičajena reakcija je bio otok, koji se kretao od 13,6% u grupi 4 do 23,0% u grupi 3. Većina prikupljenih reakcija na mestu injekcije imala je intenzitet stepena jedan, počele su i rešene u roku od 3 dana nakon vakcinacije i nisu zahtevale nikakvu intervenciju. Nisu primećeni grupni trendovi u smislu intenziteta, vremena početka, trajanja ili preduzetih radnji.
[0248] Prikupljene sistemske reakcije između dana 0 i dana 7: Kao i kod reakcija na mestu injekcije, ukupne stope sistemskih reakcija kao što su groznica, povraćanje, abnormalni plač, pospanost, gubitak apetita i razdražljivost bile su uporedive u grupama 1-5 i slične onima koje su primećene kod kontrolne vakcine. Najčešća sistemska reakcija u svim grupama bila je razdražljivost, koja se kretala od 54,2% u Grupi 4 do 70,5% u Grupi 2 i Grupi 5. Sledeći najčešći (za sve osim Grupe 2) bio je abnormalni plač, u rasponu od 34,4% u Grupi 2 do 48,4% u Grupi 6, praćen gubitkom apetita (što je bila druga najčešća reakcija u Grupi 2), u rasponu od 27,9 % u grupi 6 do 46,8% u grupi 6. Stope povraćanja su se kretale od 18,6% u grupi 4 do 32,3% u grupi 6; a temperatura je bila najmanje prijavljena reakcija, u rasponu od 11,1% u grupi 1 do 25,8% u grupi 6. Većina prikupljenih sistemskih reakcija imala je intenzitet stepena jedan, počele su i rešene u roku od 3 dana nakon vakcinacije i nisu zahtevale nikakvu intervenciju. Nisu primećeni grupni trendovi u smislu intenziteta, vremena početka, trajanja ili preduzetih radnji.
[0249] Prikupljeni neželjeni događaji između 0. i 30. dana: Ukupno je prijavljen 931 neprikupljeni neželjeni događaj kod 327 ispitanika. Smatra se da je ukupno 107 neprijavljenih neželjenih događaja povezano sa vakcinacijom i identifikovano je kao neželjene reakcije (eng. adverse reactions - AR). Najčešći AR su bili u klasama sistema organa (eng. System Organ Class - SOC) od 1) opštih poremećaja i stanja na mestu primene (25); 2) infekcije i infestacije i poremećaji kože i potkožnog tkiva (po 20), i; i 3) gastrointestinalni poremećaji i respiratorni, torakalni i medijastinalni poremećaji (po 16). Nije bilo očigledne povezanosti između broja AR i primljene vakcine. Ukupno 4 sistemska AR su prijavljena kao 3. stepena intenziteta: Po 1 u grupama 1 i 4, i 2 u grupi 5.
[0250] Ozbiljne neželjene reakcije (eng. Serious Adverse Reactions - SAE): Nije bilo smrtnih slučajeva. Ukupno 7 SAE se dogodilo kod 7 ispitanika tokom studije: 2 kod ispitanika Grupe 1, 1 kod ispitanika Grupe 2, 2 kod ispitanika Grupe 3 i 2 kod ispitanika Grupe 4. U grupama 5 i 6 nisu prijavljeni SAE. Jedan od ovih SAE, reaktivni artritis koji je doživeo jedan ispitanik u Grupi 3, smatralo se da je povezan sa vakcinacijom. Ispitanik se potpuno oporavio 23 dana kasnije.
[0251] Zaključci o bezbednosti su da se pojedinačna doza dobro podnosi u svim grupama i da nema značajnih razlika u bezbednosnom profilu.
[0252] Funkcionalna antitela na meningokokne serogrupe A, C, Y i W-135 merena su serumskim baktericidnim testom korišćenjem humanog komplementa (SBA-HC) i komplementa beba zeca (SBA-BR) da bi se odredilo sledeće: 1) Stopa ispitanika sa SBA-HC titrom ≥1:8 i ≥1:4, ili SBA-BR titrom ≥1:8; 2) geometrijski srednji titar (GMT); 3) krive reverzne kumulativne distribucije (RCDC); i 4) distribucija titara. Pored toga, titri antitela na tetanus toksoid prisutan u vakcinama su procenjeni ELISA testom. Testovi su izvedeni na uzorcima krvi uzetim pre vakcinacije („Pre“ u tabelama 2 i 3) i 30-37 dana nakon vakcinacije („Posle“ u tabelama 2 i 3).
[0253] Tabele 2 i 3 prikazuju rezultate SBA-HC. U tabelama 2 i 3, 95% intervala poverenja su procenti.
Tabela 2: Broj i procenat ispitanika sa titrom ≥1:8 na početku i nakon vakcinacije, SBA-HC test (Populacija po protokolu)
Serogrupa Vremenska Grupa 1 Grupa 2 Grupa 3 Grupa 4 Grupa 5 Grupa 6 tačka (N=54) (N=51) (N=51) (N=48) (N=51) (N=51)
Tabela 2: Broj i procenat ispitanika sa titrom ≥1:8 na početku i nakon vakcinacije, SBA-HC test (Populacija po protokolu)
Serogrupa Vremenska Grupa 1 Grupa 2 Grupa 3 Grupa 4 Grupa 5 Grupa 6 tačka (N=54) (N=51) (N=51) (N=48) (N=51) (N=51)
[0254] Kao što se može videti iz tabela, titri pre vakcinacije su bili niski za sve serogrupe. Za serogrupu A, većina ispitanika u svim grupama imala je titre od 8 ili manje; za ostale tri serogrupe, praktično svi ispitanici su imali vrednosti <4. U grupama 1-5 nakon vakcinacije, za serogrupu A, većina vrednosti titra bila je između 8 i 128; za serogrupu C, između 16 i 1024; za serogrupu Y, između <4 i 128; i za serogrupu W-135, između <4 i 64. Za kontrolnu grupu vrednosti za serogrupe A, Y i W-135 bile su uglavnom između <4 i 4, dok je za serogrupu C većina vrednosti bila između 256 i 1024. Postojao je trend većeg odgovora antitela u grupama sa visokim dozama u poređenju sa grupama sa niskim dozama.
[0255] U SBA-BR testovima, GMT pre doze su bili uporedivi u lečenim grupama, i bile su u rasponu od 4,22 do 5,26 za serogrupu A; od 4,00 do 6,26 za serogrupu C; i od 6.01 do 8.45 za serogrupu W-135. Uočena je veća varijabilnost u serogrupi Y, čije su se vrednosti kretale od 17,36 (Grupa 5) do 35,92 (Grupa 1).
[0256] U grupama 1-5, vrednosti nakon vakcinacije su se kretale od 336,91 (Grupa 1) do 759,35 (Grupa 5) za serogrupu A; vrednost za kontrolnu grupu bila je 5,66. Vrednosti za serogrupu C kretale su se od 145,53 (Grupa 1) do 636,37 (Grupa 5). Vrednost za kontrolnu grupu bila je 1290,16. Vrednosti za serogrupu Y kretale su se od 586,54 (Grupa 3) do 713,70 (Grupa 4). Vrednost za kontrolnu grupu bila je 23,41. Vrednosti za serogrupu W-135 kretale su se od 912,28 (Grupa 4) do 1518,71 (Grupa 5). Vrednost za kontrolnu grupu bila je 8,57.
b) Faza II kliničkog ispitivanja 1 - Bezbednost i imunogenost MenACYW-TT kod odojčadi i male dece
[0257] Faza II, randomizovano, otvoreno, multicentrično kliničko ispitivanje sprovedeno je na 580 dece u Sjedinjenim Državama. Ispitivanje je osmišljeno da proučava profile bezbednosti i imunogenosti MenACYW-TT vakcine koja se daje prema različitim rasporedima i istovremeno sa rutinskom pedijatrijskom vakcinacijom. Studija je takođe imala za cilj da opiše profile imunogenosti MenACYW-TT vakcine i odabranih licenciranih pedijatrijskih vakcina (Pentacel<®>(DTaP-IPV/Hib), Prevnar<®>(PCV7) ili Prevnar<®>13 (PCV13), M-M-R<®>II (MMR) Varivax<®>(V), ENGERIX-B<®>ili RECOMBIVAX HB<®>(HepB), Rotarix<®>(RV1), i Rotateq<®>(RV5) kada se daju istovremeno sa MenACYW-TT vakcinom.
[0258] Učesnici su primili ili MenACYW-TT vakcinu uporedo sa rutinskim vakcinama (istraživačke grupe; grupe 1-5 iz tabele 1) ili su primale samo rutinske pedijatrijske vakcine (kontrolne grupe; grupe 6-7).
[0259] Dvomesečne bebe nasumično su raspoređene u 3 istraživačke grupe (grupe 1-3) i 2 kontrolne grupe (grupe 6 i 7), kao što je prikazano u tabeli 1. Mala deca u ispitivanim grupama 1-3 su primila 3 ili 4 doze MenACYW-TT vakcine (istovremeno sa rutinskim vakcinama) kao što je opisano u tabeli 4.
[0260] Tabela 4 daje sažetak dizajna kliničkog ispitivanja.
Tabela 4: Dizajn studije i vakcine dobijene u ovom kliničkom ispitivanju
Raspored ispitivanja (godine starosti)
[0261] Šestomesečne bebe koje su primila 2 doze MenACYW-TT vakcine (istovremeno sa rutinskim vakcinama) u dobi od 6 i 12 meseci (Grupa 4), i deca od 12 meseci koja su primila 1 dozu MenACYW-TT vakcine (istovremeno sa rutinskim vakcinama) u dobi od 12 meseci (grupa 5).
[0262] Serumski baktericidni testovi sa humanim (hSBA) i zečjim (rSBA) komplementom su korišćeni za merenje antitela protiv meningokoknih serogrupa A, C, Y i W na početku i 30 dana nakon poslednje doze odojčeta i malog deteta. Donja granica kvantifikacije (LLOQ) oba testa bila je 1:4. Videti, npr., Maslanka et al, Standardization and a Multilaboratory Comparison of Neisseria meningitidis Serogroup A and C Serum Bactericidal Assays, Clinical and Diagnostic Laboratory Immunology, Mar.1997, p.156-167, i Goldschneider Gotschlich, and Artenstein, Immunity to Meningococcus, The Role of Humoral Antibodies, the Journal of Experimental Medicine, 1969.
[0263] Podaci o bezbednosti su prikupljeni do 6 meseci nakon poslednje doze vakcine.
Interval za prikupljene neželjene događaje (AE) bio je između D0 i D7 (tj.0 do 7 dana nakon primene). Prikupljanje tražene reaktogenosti obuhvatalo je dnevno merenje telesne temperature i crvenila i otoka na mestu uboda, kao i beleženje intenziteta bola na mestu injekcije, glavobolje, mijalgije i malaksalosti. Neprikupljeni neželjeni efekti i ozbiljni neželjeni događaji (SAE) su takođe prikupljani tokom studije. Sve statističke analize su bile deskriptivne.
[0264] Demografski podaci su analizirani za skup bezbednosnih analiza, koji je definisan kao ispitanici koji su primili najmanje jednu dozu ispitivane ili kontrolne vakcine i za koje su podaci o bezbednosti bili dostupni. Prosečna starost pri uključivanju u studiju u Grupe 1, 2, 3, 6 i 7 bila je 2,19, 2,20, 2,24, 2,18 i 2,20 meseca, respektivno. Raspon uzrasta je bio od 1,57 do 2,97 meseci u grupi 1, 1,57 do 2,90 meseci u grupi 2, 1,53 do 3,00 meseca u grupi 3, 1,53 do 2,87 meseci u grupi 6 i od 1,70 do 2,97 meseci u grupi 7 (kriterijum za uključivanje je 2 meseca [ 42 do 89 dana]). U Grupi 4, srednja starost je bila 6,23 meseca, a raspon starosti bio je od 5,63 meseca do 6,50 meseci (kriterijumi uključivanja 6 meseci [180 dana ± 14 dana]). U Grupi 5, srednja starost je bila 12,4 meseca, a raspon starosti od 12,2 do 12,7 meseci (kriterijumi za uključivanje 12 meseci [365 dana 14 dana]).
[0265] Nakon završetka serije odojčadi i primanja dodatne doze MenACYW-TT vakcine u drugoj godini života (grupe 1-4), većina učesnika studije je postigla zaštitne titre od 1:8 (91%-100% za humani komplement [hSBA] i 80 %-100% za komplement za bebe zeca [rSBA]) za sve 4 serogrupe (ACYW) uključene u MenACYW-TT vakcinu, bez obzira na broj doza primljenih tokom prve godine života. Za učesnike koji su primili jednu dozu u dobi od 12 meseci (Grupa 5), zaštitni titri ACYW od 1:8 bili su između 47,5% -90% (hSBA) i 62%-100% (rSBA). Dakle, MenACYW-TT konjugovana vakcina pokazuje snažan imunogeni odgovor nakon dodatne doze u drugoj godini života, bez obzira na primarni raspored primljen u prvoj godini života.
[0266] Slika 6 daje procenat ispitanika sa nivoima hSBA većim ili jednakim 1:8 za svaki od serotipova A, C, Y i W za Grupe 1-4. Slika 7 daje slične rSBA rezultate za ove iste grupe.
[0267] Imunski odgovori na hSBA nakon jedne doze MenACYW-TT vakcine date u dobi od 12 meseci (Grupa 5) bili su slični odgovorima uočenim u seriji od 3 doze (Grupa 3) za serogrupu C (90%), ali niži za serogrupe Y (47,5%), A (75%) i W-135 (54%). Videti tabelu 5, koja prikazuje titre hSBA i rSBA za ispitanike koji su primili jednu dozu MenACYW-TT vakcine u dobi od 12 meseci (Grupa 5).
Tabela 5. Procenat ispitanika koji su postigli hSBA i rSBA titre ≥1:8 na D30 nakon MenACYW-TT vakcine (ispitanici koji su primili samo jednu dozu u drugoj godini
[0268] Nije bilo dokaza o smetnji sa pedijatrijskim rutinskim vakcinama koje su davane istovremeno sa vakcinom MenACYW-TT (podaci nisu prikazani).
[0269] Učestalost traženih reakcija na mestu injekcije nije se povećavala sa ponovljenim dozama vakcine. Videti, Sliku 8, koja predstavlja kumulativni procenat učesnika koji su prijavili jednu ili više traženih reakcija na mestu injekcije u roku od 7 dana od primanja MenACYW-TT vakcine. Kumulativni procenat učesnika koji su prijavili ≥1 tražene reakcije na mestu injekcije u roku od 7 dana nakon primanja vakcine MenACYW-TT bio je najveći u grupama koje su primile 4 doze (grupe 1 i 2, 80,0%-80,8%), a zatim u grupama koje su primile 2 doze (Grupa 4, 75,3%) ili 3 doze (Grupa 2, 74,0%) doze, a najmanja je bila u grupi koja je primila 1 dozu (Grupa 5, 57,4%).
[0270] Slika 9 prikazuje tražene sistemske reakcije u roku od 7 dana od davanja bilo MenACYW-TT vakcine plus rutinske vakcine bilo samo rutinskih vakcina.
[0271] Uglavnom blaži neželjeni događaji (eng. non-serious adverse effect - NSAE) su prijavljeni nakon vakcinacije bilo sa MenACYW-TT vakcinom bilo rutinskim vakcinama, a ni jedan od prijavljenih NSAE stepena 3 nije bio povezan sa ispitivanim vakcinama. Nije bilo ozbiljnih neželjenih događaja vezanih za vakcinu.
[0272] I MenACYW-TT vakcina i rutinske vakcine su bile imunogene kada su se davale istovremeno (tj. istog dana, kao odvojene vakcine), u poređenju sa davanjem rutinske vakcine bez MenACYW-TT vakcine u kontrolnim grupama, što ukazuje da nije bilo negativne interakcije između MenACYW-TT vakcine i rutinskih vakcina.
[0273] Ukratko, MenACYW-TT vakcina je bila bezbedna i dobro se podnosila kod novorođenčadi i male dece bez obzira na raspored imunizacije i broj primenjenih doza.
Bezbednosni profil MenACYW-TT vakcine je u celini sličan onom u kontrolnim grupama, bez obzira na raspored imunizacije i broj primenjenih doza.
[0274] Stoga je ispitivana vakcina MenACYW-TT bila dobro tolerisana i imunogena. Svi rasporedi vakcinacije koji su uključivali doze u prvoj i drugoj godini života izazvali su snažne imunske odgovore za sve 4 vakcine N. meningitidis serogrupe A, C, Y i W, i bile su praćene prihvatljivim bezbednosnim profilom.
c) II faza kliničkog ispitivanja 2 – Bezbednost i imunogenost MenACYW-TT koja je data odraslim osobama starim 56 godina i više
[0275] Godine starosti i osnovne hronične bolesti su važni faktori rizika za meningokoknu bolest, tako da su starije osobe pod povećanim rizikom. Sprovedena je klinička studija da bi se procenila bezbednost i imunogenost MenACYW-TT vakcine u poređenju sa Menomune<®>-A/C/Y/W-135, licenciranom četvorovalentnom meningokoknom običnom polisaharidnom vakcinom (MPSV4) kod odraslih osoba od 56 godina ili starijih.
[0276] Faza II, randomizovana, otvorena, multicentrična studija sprovedena je na 301 zdravoj odrasloj osobi u Sjedinjenim Državama, staroj 56 i više godina. Učesnici u 12 centara istraživanja su nasumično raspoređeni da prime jednu dozu ili MenACYW-TT ili MPSV4 (Menomune<®>- A/C/Y/W-135). Pacijenti su bili stratifikovani prema godinama u dva podskupa: 1) 56 do 64 godine i 2) 65 godina i više
[0277] Četiri studijske grupe su formirane na sledeći način. Grupa 1a (n=101, starosti 56-64 godine) i grupa 1b (n=100, ≥65 godina) su primile MenACYW-TT. Grupa 2a (n=50, starosti 56-64 godine) i grupa 2b (n=50, ≥65 godina) primile su vakcinu MPSV4. „Grupa 1“ se odnosi na Grupu 1a plus Grupu 1b. „Grupa 2“ se odnosi na Grupu 2a plus Grupu 2b.
Demografski rezultati su rezimirani u Tabeli 6.
Tabela 6: Dizajn studije i vakcine dobijene u ovom kliničkom ispitivanju
Studijska grupa (broj učesnika u Primljene vakcine (raspon godina učesika u
[0278] Serumski baktericidni testovi (SBA) sa humanim komplementom (hSBA) i komplementom bebe zeca (rSBA), kao što je gore opisano, korišćeni su za merenje antitela protiv meningokoknih serogrupa A, C, Y i W na početku i 30 dana nakon primene vakcine. Donja granica kvantifikacije (LLOQ) za oba testa bila je 1:4.
[0279] Podaci o bezbednosti su prikupljeni do 30 dana nakon davanja leka. Interval za prijavljene neželjene reakcije bio je između D0 i D7 (tj.0 do 7 dana nakon davanja leka). Prikupljanje tražene reaktogenosti obuhvatalo je dnevno merenje telesne temperature i crvenila i otoka na mestu uboda, kao i beleženje intenziteta bola na mestu injekcije, glavobolje, mijalgije i malaksalosti. Neprikupljeni neželjeni efekti i ozbiljni neželjeni događaji (SAE) su takođe prikupljani tokom studije. Sve statističke analize su bile deskriptivne.
[0280] Demografski podaci su analizirani za skup bezbednosnih analiza, koji je definisan kao ispitanici koji su primili najmanje jednu dozu ispitivane ili kontrolne vakcine i za koje su podaci o bezbednosti bili dostupni. Prilikom upisa, srednje godine starosti ispitanika su bile slične i u Grupi 1 i u Grupi 2 (66,1 ± 7,13 godina, odnosno 65,8 ± 6,58 godina). Pored toga, godine starosti su bile slične za grupe koje su imale ispitanike od 56-64 godine i one sa ispitanicima od ≥65 godina (60,3 ± 2,52 godine u grupi 1a, 60,8 ± 2,59 godina u grupi 2a, 71,9 ± 5,28 godina u grupi 1b i 70,8 ± 5,45 godina u grupi 2b).
[0281] I u Grupi 1 i u Grupi 2 bilo je nešto više ženskih ispitanika (60,8% [121/199] i 55,0% [55/100], respektivno) nego muškaraca (39,2% [78/199] i 45,0% [45/ 100], respektivno). Ista tendencija je primećena i u podgrupama, sa izuzetkom Grupe 2b gde je bio jednak broj ženskih i muških ispitanika (50,0% [25/50]).
[0282] Procenti učesnika u studiji sa titrima hSBA ≥1:8 u odnosu na serogrupe A, C, Y i W-135 su značajno povećani 30. dana u poređenju sa početnom linijom za sve podgrupe. U dva starosna pod-stratuma (56 do 64 godine starosti i ≥ 65 godina starosti) rezultati su bili generalno slični unutar svake grupe vakcinacije kao što je prikazano u tabeli 7.
Tabela 7. Procenat ispitanika koji su postigli hSBA titre ≥1:8 na D30
Serogrupe Grupa 1a Grupa 1b Grupa 2a Grupa 2b
[0283] Slika 10 prikazuje procenat ispitanika koji su postigli nivoe hSBA ≥1:8 na D30 za serogrupu A, C, Y i W koristeći podatke svih pacijenata (tj. kombinovane starosne grupe).
Procenat pojedinaca sa titrima hSBA ≥1:8 nakon primanja MenACYW-TT bio je uporediv sa titrima nakon primanja MPSV4 za serogrupe A i C. Procenat pojedinaca sa titrima hSBA ≥ 1:8 nakon primanja MenACYW-TT bio je veći od titra primanja MPSV4 za serogrupe Y i W.
[0284] Slika 11 daje geometrijske srednje titre (GMT) za različite serogrupe na D30 za obe vakcine. GMT sa MenACYW-TT su bili veći ili jednaki GMT sa MPSV4 za sve serogrupe.
[0285] Procenti učesnika sa titrima rSBA većim ili jednakim 1:8 bili su uporedivi između primalaca MenACIV-TT i primalaca MPSV4 za sve četiri grupe vakcina. Videti Sliku 12.
[0286] Reakcije na mestu injekcije (Slika 13) i tražene sistemske reakcije (Slika 14) u roku od 7 dana od davanja MenACYW-TT bile su slične kao za vakcinu MPSV4.
[0287] Sve u svemu, profil reaktogenosti i za MenACYW-TT i za MPSV4 vakcinu je bio sličan. Većina neželjenih događaja imala je intenzitet stepena 1 ili stepena 2. Nije bilo neposrednih reakcija preosetljivosti niti prekida zbog neželjenih efekata ili SAE. Nije primećeno povećanje reaktogenosti kod starijih primalaca vakcine. Nisu prijavljeni ozbiljni neželjeni događaji.
[0288] MenACYW-TT se dobro podnosio i bio je imunogen kada je davan odraslima starosti 56 godina i više. Stoga, MenACYW-TT predstavlja alternativnu vakcinu za prevenciju invazivne meningokokne bolesti, uključujući i delove sveta gde su trenutno dostupne samo obične polisaharidne vakcine, kao što je MPSV4, za imunizaciju starijih osoba.
d) Faza II kliničkog ispitivanja 3 – Bezbednost i imunogenost MenACYW-TT primenjene na zdravu malu decu koja nisu primala meningokoknu vakcinu (12-23 meseca)
[0289] MenACYW-TT konjugovana vakcina je namenjena za upotrebu kod osoba starijih od 6 nedelja. Ova studija je procenila bezbednost i imunogenost pojedinačne doze kod male dece koristeći Nimenrix<®>, licenciranu četvorovalentnu meningokoknu konjugovanu vakcinu (MCV4-TT) kao kontrolu.
[0290] Randomizovana, otvorena studija faze II na 188 male dece koji nisu bili vakcinisani protiv menigokoka (12-23 meseca starosti) sprovedena je u Finskoj. Učesnici su nasumično raspoređeni da prime jednu dozu ili MenACYW-TT vakcine ili MCV4-TT. Serumski baktericidni testovi sa humanim (hSBA) i zečjim (rSBA) komplementom su korišćeni za merenje antitela protiv meningokoknih serogrupa A, C, W i Y na početku i 30 dana nakon doze. LLOQ oba baktericidna testa bio je 1:4. Takođe su mereni odgovori antitela protiv tetanusa.
[0291] Podaci o bezbednosti su prikupljeni do 30 dana nakon doze. Interval za tražene neželjene događaje (AE) bio je između DO i D7. Prikupljanje tražene reaktogenosti obuhvatalo je dnevno merenje telesne temperature i crvenila i otoka na mestu uboda, kao i beleženje intenziteta bola na mestu injekcije, glavobolje, mijalgije i malaksalosti. Spontano prikupljeni neželjeni događaji (AE) i ozbiljni neželjeni događaji (SAE) su takođe prikupljani tokom studije. Sve analize su bile deskriptivne.
[0292] Tabela 8 daje podatke o dizajnu studije i rasporedu ispitanika u ispitivanju.
Tabela 8: Dizajn studije i raspored ispitanika
MenACYW-TT MCV4-TT Svi ispitanici, konjugovana vakcija, n kontrolna vakcija, n (%)
[0293] Demografske analize su izvršene na setu bezbednosnih analiza. Set bezbednosnih analiza je definisan kao ispitanici koji su primili najmanje jednu dozu ispitivane ili kontrolne vakcine i za koje su podaci o bezbednosti bili dostupni. U skupu bezbednosne analize bilo je ukupno 98 (52,1%) muških i 90 (47,9%) ženskih ispitanika; ukupan odnos ispitanika muško/žensko bio je 1,09. U MenACYW-TT grupi bilo je više muškaraca nego žena (odnos muškaraca/žena bio je 1,54). U grupi MCV4-TT bilo je više žena nego muškaraca (odnos muškaraca i žena bio je 0,77). Uzrast ispitanika je bio uporediv u 2 grupe. Prosečna starost ispitanika pri upisu bila je 1,44 ± 0,302 godine u grupi MenACYW-TT i 1,47 ± 0,314 godina u grupi MCV4-TT.
[0294] Procenat subjekata sa hSBA serološkim odgovorom na vakcinu sa MenACYW-TT vakcinom bio je uporediv sa onim sa MCV4-TT za serogrupe A, W i Y [opseg 96,7% do 98,9% (MenACYW-TT) i 91,9% do 98,8% (MCV4-TT) )] (Slika 15). Serološki odgovor hSBA na vakcinu je definisan na sledeći način: ako je titar bio <1:8 na početku sa titrom posle vakcinacije ≥1:8 ili ako je titar bio ≥1:8 na početku sa povećanjem od ≥4 puta nakon vakcinacije.
[0295] Procenat ispitanika sa serološkim odgovorom za serogrupu C bio je veći kod MenACYW-TT (100,0%) nego kod MCV4-TT (86,0%). Trend za serogrupu C bio je sličan kada se koristi rSBA.
[0296] Podaci o procentu ispitanika koji su postigli titre hSBA >= 8 (>=1:8) na D30 nakon vakcinacije prikazani su u tabeli 9.
Tabela 9: Procenat pacijenata koji su dostigli hSBA titre ≥8
Tabela 9: Procenat pacijenata koji su dostigli hSBA titre ≥8
Serogrupe Procenat ispitanika koji su postigli titre serumske baktericidne analize
[0297] MenACYW-TT je izazvao uporedive imunske odgovore na serogrupe A, W i Y i više za serogrupu C, kada se procenjuje korišćenjem hSBA geometrijskih srednjih titara i procenta subjekata koji imaju hSBA titre posle vakcinacije ≥8 (≥1:8) (slika 16 i tabela 10). Slika 16 i Tabela 10 prikazuju iste podatke, osim što su podaci u Tabeli 10 konvertovani u log2 skalu kao što je prikazano na slici 16.
[0298] U studiji je takođe procenjena bezbednost. Profil reaktogenosti je uporediv između obe vakcine. Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 traženu reakciju na mestu injekcije bili su uporedivi između obe vakcine (48,9% i 53,2%). Podaci o eritemu, osetljivosti i otoku na mestu injekcije prikazani su na slici 17. Većina reakcija na mestima injekcije imala je intenzitet stepena 1 ili 2, sve su počele između D0 i D03, a većina je trajala 1 do 3 dana.
[0299] Nekoliko ispitanika prijavilo je tražene reakcije na mestu injekcije stepena 3: 3,2% ispitanika u MenACYW-TT grupi i 4,3% ispitanika u MCV4-TT grupi.
[0300] Tražene sistemske reakcije su takođe bile slične između ove dve grupe (Slika 18).
[0301] Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 spontano prijavljeni blaži neželjeni dogažaj (AE) neželj događaj bili su uporedivi između studijskih grupa. Većina neželjenih događaja imala je intenzitet stepena 1 ili stepena 2. Nije bilo neposrednih spontano prijavljenih AE ni u jednoj grupi. Nije bilo neposrednih SAE, uključujući bilo kakve anafilaktičke ili po život opasne događaje. Dva prijavljena ozbiljna neželjena događaja smatraju se nepovezanima.
[0302] Ispitivana vakcina MenACYW-TT je bila dobro tolerisana i imunogena. Pojedinačna doza vakcine MenACYW-TT pokazala je odličan potencijal da bude alternativna opcija vakcine za malu decu koja prvi put primaju vakcinaciju protiv meningokoka.
e) Faza II kliničkog ispitivanja 4 – Bezbednost i imunogenost MenACYW-TT primenjene na zdravu adolescente koji nisu primali meningokoknu vakcinu (10-18 godina)
[0303] Ova studija faze II procenjivala je bezbednost i imunogenost pojedinačne doze (10 µg polisaharida po serogrupi, konjugovanih sa ukupno 65 µg TT, u 0,67% NaCl/30 mM puferovanom natrijum acetatom pri pH 6,0) MenACYW-TT primenjene intramuskularno adolescentima starim 10-18 godina. Menveo<®>(meningokokna (grupe A, C, Y i W-135) oligosaharidna konjugovana vakcina protiv difterije CRM197, koja se ovde pominje kao "MenACYW-CRM197", licencirana četvorovalentna meningokokna konjugatna vakcina davana je kontrolnoj grupi (grupa 2). Efekat istovremene primene MenACYW-TT sa Tdap/Adacel<®>i HPV/Gardasil<®>(grupa 3) je takođe upoređen sa primenom samo Tdap/Adacel<®>i HPV/Gardasil<®>(grupa 4). Kontrolna vakcina i Tdap/Adacel<®>i HPV/Gardasil<®>vakcine su davane u skladu sa uputstvima na etiketi. Četiri studijske grupe su sumirane i okarakterisane u tabeli 11.
[0304] Ukupno 74 ispitanika (4,3%) nije završilo ispitivanje: 10 (2,0%) u grupi 1, 7 (1,4%) u grupi 2, 27 (6,7%) u grupi 3, i 30 (10,0%) u grupi 4. Najčešći prijavljeni razlozi za prekid su bili: dobrovoljno povlačenje koje nije uzrokovano neželjenim događajima, izostalo je praćenje i nepoštovanje protokola. Nije bilo prevremenih prekida zbog SAE ili drugih AE.
[0305] Serumski baktericidni testovi sa humanim komplementom (hSBA) korišćeni su za merenje antitela protiv meningokoknih serogrupa A, C, W i Y na početku i 30 dana nakon doze. LLOQ baktericidnih testova bio je 1:4. hSBA podaci su prikupljeni za 463 člana grupe 1, 464 člana grupe 2 i 360 članova grupe 3. hSBA rezultati dati su u tabeli 12, u kojoj % ispitanika ukazuje na procenat ispitanika sa pozitivnim serološki odgovor, tj. hSBA nakon vakcinacije. ≥1:8 za subjekte sa titrima hSBA pre vakcinacije <1:8, ili najmanje 4 puta povećanje titara hSBA od pre do posle vakcinacije za subjekte sa titrima pre vakcinacije ≥ 1:8. Veći procenat ispitanika pokazao je pozitivan serološki odgovor sa MenACYW-TT nego sa MenACIV-CRM197za sve četiri serogrupe.
Table 12. hSBA Rezultati za Fazu II kliničkog ispitivanja 4
[0307] Razlika u učestalosti sero odgovora između grupa 1 i 3 nije bila značajna sa pouzdanošću od 95%, što je u skladu sa zaključkom da na efikasnost MenACYW-TT ne utiče istovremeno davanje sa Tdap/Adacel<®>i HPV/Gardasil<®>.
[0308] Tabela 14 prikazuje rezultate hSBA izražene kao geometrijske srednje titre (GMT) na dan 0 (DO) i dan 30 (D30), zajedno sa intervalima poverenja od 95%.
Tabela 14 Geometrijski srednji titar za hSBA
[0309] Imunski odgovori na difteriju i tetanus su upoređeni za sve grupe. Rezultati su prikazani u tabeli 15, izraženi kao srednja geometrijska koncentracija (GMC); % ispitanika sa ≥ 0,1 IU/ml; i % ispitanika sa ≥1,0 IU/ml koncentracije antitetanus i anti-difterija antitela.
[0310] Rezultati su bili u skladu sa zaključkom da istovremena primena MenACYW-TT sa Tdap/Adacel<®>, kao u grupi 3, nije uticala na imunogenost poslednjeg (uporedi rezultate grupe 4).
[0311] Odgovori na vakcinu su takođe okarakterisani u odnosu na sledeće antigene: pertusis toksin (PT), pertusis filamentni hemaglutinin (FHA), pertusis pertaktin (PRN) i pertusis fimbrijalni antigen (FIM). Videti tabelu 16.
[0312] Sledeće je posmatrano u vezi sa bezbednošću: pojava, priroda, trajanje, intenzitet i odnos sa vakcinacijom svih spontano prijavljenih sistemskih neželjenih događaja (AE) prijavljenih u periodu od 30 minuta nakon vakcinacije; pojava, vreme do početka, broj dana pojave, intenzitet, preduzeta radnja i da li je reakcija dovela do ranog prekida studije, tražene reakcije na mestu injekcije koje su se javile do 7 dana nakon D0 od vakcinacije; pojava, vreme do početka, broj dana pojave, intenzitet, preduzete mere i da li je reakcija dovela do prevremenog prekida studije, tražene sistemskie reakcije koje su se javile do 7 dana nakon D0 od vakcinacije; pojava, priroda, vreme do pojave, trajanje, intenzitet, preduzeta radnja, veza sa vakcinacijom (samo za sistemske neželjene reakcije) i da li je događaj doveo do prevremenog prekida studije, sponano prijavljeni neželjeni događaji do 23-37 dana nakon vakcinacije(a) D0; i pojava, priroda, vreme do početka, trajanje, kriterijume ozbiljnosti, odnos sa vakcinacijom, ishod i da li je ozbiljan neželjeni događaj (SAE) doveo do prevremenog prekida studije, SAE tokom ispitivanja do 180 dana (Grupa 1 i Grupa 2) ili 210 dana (Grupa 3 i Grupa 4) nakon D0 vakcinacije. Tražene sistemske reakcije uključivale su groznicu, mijalgiju i glavobolju. Tražene reakcije na mestu injekcije uključivale su bol, eritem i otok.
[0313] Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 traženu reakciju između D0 i D07 bili su uporedivi između MenACYW-TT konjugirane vakcine i MENVEO<®>: 63,5% (315/496) ispitanika u grupi 1 i 64,2% (316/492) u grupi 2, respektivno. Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 traženu reakciju bili su uporedivi između subjekata koji su primili MenACYW-TT konjugovanu vakcinu istovremeno sa Tdap i HPV u odnosu na samo Tdap i HPV: 88,9% (345/388) u grupi 3 i 89,0% (258/290) u grupi 4, respektivno. Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 traženu reakciju na mestu injekcije bili su uporedivi između Grupe 1, Grupe 2 i Grupe 3: 46,6% (231/496), 45,7% (225/492) i 49,0% (190/388), respektivno. Nije primećeno povećanje lokalne reaktogenosti za MenACYW-TT konjugovanu vakcinu kada je MenACYW-TT konjugatna vakcina davana istovremeno sa Tdap i HPV (Grupa 3) u odnosu na situacije kada je MenACYW-TT konjugovana vakcina davana sama (Grupa 1).
[0314] Najčešće prijavljivana reakcija na mestu injekcije bila je bol, koju je prijavilo 45,2% (224/496) ispitanika u grupi 1, 42,5% (209/492) ispitanika u grupi 2 i 47,2% (183/388) ispitanika u grupi Grupa 3, praćena eritemom na mestu injekcije koji je prijavilo 5,0% (25/496) ispitanika u Grupi 1, 7,5% (37/491) ispitanika u Grupi 2 i 3,9% (15/388) ispitanika u Grupi 3, i otok na mestu injekcije koji je prijavilo 5,4% (27/496) ispitanika u grupi 1, 6,5% (32/491) ispitanika u grupi 2 i 4,4% (17/388) ispitanika u grupi 3. Većina reakcija na mestu injekcije MenACYW-TT konjugovane vakcinie ili MENVEO<®>vakcine imala je intenzitet stepena 1 ili stepena 2, i počele su između D0 i D03 i trajale su 1 do 3 dana. Procenti ispitanika sa bilo kojom reakcijom stepena 3 na mestu injekcije MenACYW-TT konjugirane vakcine ili mestu injekcije MENVEO<®>iznosili su 1,8% (9/496) u grupi 1, 2,2% (11/492) u grupi 2 i 2,8% ( 11/388) u grupi 3. Procenti ispitanika sa stepenom 3 bola na mestu injekcije MenACYW-TT konjugovane vakcine ili MENVEO<®>iznosili su 1,4% (7/496) u grupi 1, 1,0% (5/492) u grupi 2 i 2,3% (9/388 ) u grupi 3. Procenti ispitanika sa eritemom 3. stepena iznosili su 0,4% (2/496) u grupi 1, 1,2% (6/491) u grupi 2 i 0,5% (2/388) u grupi 3. Procenti ispitanika sa otokom stepena 3 iznosili su 0,2% (1/496) u grupi 1, 0,4% (2/491) u grupi 2 i 0,3% (1/388) u grupi 3. Ocene intenziteta generalno imaju sledeća značenja. Stepen 1: Nema ometanja aktivnosti. Stepen 2: Delimično ometanje aktivnosti. Stepen 3: Značajno; sprečava svakodnevnu aktivnost.
[0315] Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 traženu sistemsku reakciju nakon vakcinacije bili su uporedivi između Grupe 1 (52,0% [258/496]) i Grupe 2 (51,0%
[251/492]). Mijalgija je bila najčešće prijavljena tražena sistemska reakcija praćena glavoboljom i malaksalošću sa vrlo retkim izveštajima o groznici. Mijalgija je prijavljena kod 35,3% (175/496) ispitanika u grupi 1 i 35,2% (173/492) ispitanika u grupi 2. Glavobolja je prijavljena kod 30,2% (150/496) ispitanika u grupi 1 i 30,9% (152/492) ispitanika u grupi 2. Malaksalost je prijavljena kod 26,0% (129/496) ispitanika u grupi 1 i 26,4% (130/492) ispitanika u grupi 2. Groznica je prijavljena kod 1,4% (7/494) ispitanika u grupi 1 i 1,2% (6/488) ispitanika u grupi 2.
[0316] Procenti ispitanika sa najmanje 1 traženom sistemskom reakcijom nakon vakcinacije bili su uporedivi između Grupe 3 (70,6% [274/388]) i Grupe 4 (65,9% [191/290]). Mijalgija je bila najčešće prijavljena tražena sistemska reakcija: 61,3% (238/388) ispitanika iz grupe 3 i 55,4% (160/289) ispitanika iz grupe 4. Glavobolja je prijavljena kod 33,8% (131/388) ispitanika u grupi 3, i 29,0% (84/290) ispitanika u grupi 4. Malaksalost je prijavljena kod 29,1% (113/388) ispitanika u Grupi 3 i 27,9% (81/290) ispitanika u Grupi 4. Groznica je prijavljena kod 1,6% (6/387) ispitanika u grupi 3 i 0,7% (2/286) ispitanika u grupi 4.
Uopšteno, najčešće tražene sistemske reakcije imale su intenzitet stepena 1 ili 2, počele su između D0 i D03 i trajale su 1 do 3 dana.
[0317] Uopšteno, procenti ispitanika koji su prijavili sistemske reakcije stepena 3 bili su uporedivi između Grupe 1 (3,8% [19/496]) i Grupe 2 (4,3% [21/492]). Procenti ispitanika koji su prijavili tražene sistemske reakcije stepena 3 bili su uporedivi između Grupe 3 (7,5% [29/388]) i Grupe 4 (5,5% [16/290]). Najčešće prijavljivana tražena sistemska reakcija stepena 3 bila je mijalgija praćena slabošću i glavoboljom. Procenti ispitanika koji su prijavili mijalgiju stepena 3 bili su uporedivi između Grupe 1 (1,6% [8/496]) i Grupe 2 (1,8% [9/492]) i između Grupe 3 (4,6% [18/388]) i Grupe 4 (3,8% [11/289]). Procenti ispitanika koji su prijavili malaksalost stepena 3 bili su uporedivi između Grupe 1 (2,2% [11/496]) i Grupe 2 (2,8% [14/492]). Malaksalost je prijavljivana češće u Grupi 3 (2,6% [10/388]) nego u Grupi 4 (1,7% [5/290]). Procenti ispitanika koji su prijavili glavobolju stepena 3 bili su isti za Grupu 1 (1,8% [9/496]) i Grupu 2 (1,8% [9/492]). Glavobolja je prijavljena češće u grupi 3 (2,8% [11/388]) nego u grupi 4 (1,7% [5/290]).
[0318] Uopšteno, procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 neželjenu AE između D0 i D30 bili su uporedivi kroz sve 4 studijske grupe: 22,9% (115/503) ispitanika u grupi 1, 25,7% (129/501) u grupi 2, 26,0% (102/392) u grupi 3 i 22,6% (67/296) ispitanika u grupi 4.
Nekoliko ispitanika je prijavilo trenutne neželjene efekte: 0,6% (3/503) ispitanika u grupi 1, 0,2% (1/501) ispitanika u grupi 2, 0,8% (3/392) ispitanika u grupi 3 i 0,7% (2/296) ispitanika u grupi 4. Nije bilo neposrednih SAE, uključujući bilo kakve anafilaktičke ili po život opasne događaje. Dvanaest neposrednih neželjenih efekata prijavljeno je kod 9 ispitanika u periodu od 23-37 dana. Jedan ispitanik je prijavio 1 neposredan spontano prijavljen neželjeni događaj šest meseci nakon vakcinacije D0.
[0319] Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 neželjeni blagi AR na mestu injekcije nakon vakcinacije D0 bili su uporedivi između Grupe 1 i Grupe 2: 1,4% (7/503) i 1,6% (8/501), respektivno; postojao je brojčano veći procenat ispitanika koji su prijavili najmanje 1 neželjenu blagu AR na mestu injekcije u grupi 3 nego u grupi 4: 4,3% (17/392) i 2,0% (6/296), respektivno. Najčešće prijavljivana neželjena reakcija na mestu injekcije bio je pruritus, prijavljen kod 14 ispitanika, praćen modricama, prijavljenim kod 13 ispitanika. Ove spontano prijavljene reakcije na mestu injekcije mogu se javiti nakon bilo koje vakcinacije uopšte.
[0320] Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 neželjenu blagu AR na mestu injekcije na MenACYW-TT konjugovanoj vakcini ili MENVEO<®>mestima su uporedivi: 1,4% (7/503) u grupi 1, 1,6% (8/501) u grupi 2 i 1,8% (7/392) u grupi 3. Jedan ispitanik u Grupi 2 prijavio je 1 spontano prijavljenu blagu AR stepena 3 na mestu ubrizgavanja u vidu toplote na mestu injekcije koja je počela na D01, trajala je 4 dana i spontano se povukla. Ništa nije preduzeto. Nijedna blaga neželjena reakcija stepena 3 nije prijavljena na mestu injekcije u grupi 1 ili na mestu injekcije MenACYW-TT konjugovane vakcine u grupi 3.
[0321] Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 spontano prijavljeni blagi AE u roku od 30 dana bili su uporedivi kroz sve 4 studijske grupe: 22,7% (114/503) ispitanika u grupi 1, 25,5% (128/501) ispitanika u grupi 2, 26,0% (102/392) ispitanika u grupi 3 i 22,3% (66/296) ispitanika u grupi 4. Najčešće prijavljivane su infekcije i infestacije (7,2% [36/503] ispitanika u grupi 1, 8,0% [40/501] ispitanika u grupi 2, 8,2% [32/392] ispitanika u grupi 3, 6,1%
[ 18/296] ispitanika u grupi 4); najčešći tip je bila infekcija gornjih disajnih puteva.
[0322] Šesnaest ispitanika je prijavilo SAE tokom perioda ispitivanja; 4 ispitanika su prijavila SAE u roku od 30 dana od vakcinacije na D0. Nijedan se nije smatrao povezanim sa vakcinom, i nijedan nije dovelo do prekida studije. Svi ispitanici su se oporavili. Tokom perioda istraživanja nisu prijavljeni smrtni slučajevi.
[0323] Utvrđeno je da je vakcinacija MenACYW-TT konjugovanom vakcinom među adolescentima bezbedna, bez uočenih bezbednosnih problema kada se daje sama ili istovremeno sa Tdap i HPV vakcinama. Bezbednosni profil MenACYW-TT konjugovane vakcine bio je uporediv sa profilom licencirane MENVEO<®>vakcine.
f) Kliničko ispitivanje 1 faze 3 – Imunogenost i bezbednost dodatne doze MenACYW-TT kod adolescenata i odraslih
[0324] Ova studija procenjivala je bezbednost i imunogenost pojedinačne doze (10 µg polisaharida po serogrupi, konjugovanog sa ukupno 65 µg TT, u 0,67% NaCl/30 mM puferovanom natrijum acetatom pri pH 6,0) MenACYW-TT primenjene intramuskularno (≥15 do < 18 godina) i odrasli (18-59 godina). Ispitanici su primili jednu dozu četvorovalentne meningokokne konjugovane vakcine („priming vakcina“) 4-10 godina pre primene MenACYW-TT (grupa 1; n= 402).
[0325] Menactra<®>(meningokokna (grupe A, C, Y i W-135) kapsularna konjugatna Saccharide Diphtheria Toxoid vakcina, koja se ovde pominje kao "MenACYW-DT", licencirana četvorovalentna meningokokna konjugatna vakcina, data je kontrolnoj grupi (grupa 2; n = 407). Ispitanici u grupi 2 su takođe dobili jednu dozu primarne vakcine 4-10 godina ranije.
[0326] U obe grupe, primarna vakcina je bila MenACYW-DT (86,3% svih ispitanika), MenACYW-CRM197(11,25% svih ispitanika; MenACIV-CRM197je diskutovano iznad u odnosu na kliničko ispitivanje 4) ili nepoznato (2,45% svih ispitanika; 9 u grupi 1 i 10 u grupi 2). Demografski podaci o studijskoj grupi prikazani su u Tabeli 17.
[0327] Baktericidni testovi hSBA i zečjeg seruma (rSBA) sprovedeni su 30 dana nakon lečenja. hSBA testovi su takođe sprovedeni 6. dana. Procenat ispitanika koji su pokazali pozitivan serološki odgovor dat je u tabeli 18. Za rezultate hSBA, pozitivan serološki odgovor je bio ili titar posle vakcinacije ≥ 1:16 kada je osnovni titar bio <1:8, ili četvorostruko povećanje nakon vakcinacije kada je osnovni titar bio ≥1:8.384 ispitanika grupe 1 i 389 ispitanika grupe 2 imalo je validne rezultate hSBA 30. dana. Za rezultate rSBA, pozitivan serološki odgovor je bio ili titar posle vakcinacije ≥1:32 kada je osnovni titar bio <1:8, ili četvorostruko povećanje posle vakcinacije kada je osnovni titar bio ≥1:8.
[0328] Procenat ispitanika koji su pokazali titar hSBA ≥ 1:830. dana bio je ≥99% za sve serogrupe i nije značajno varirao u zavisnosti od identiteta prethodno primenjene vakcine (podaci nisu prikazani).
[0329] Tabela 19 prikazuje geometrijske srednje titre (GMT) na dan 0 (pre tretmana) i dan 30 mereno pomoću hSBA i rSBA. Za 30. dan, hSBA rezultati su predstavljeni za grupe kao celinu i podgrupe koje su prethodno dobile MenACYW-DT i MenACYW-CRM197.
Tabela 19. Geometrijski srednji titar
[0330] Gore predstavljeni rezultati pokazuju da je procenat ispitanika koji su pokazali sero odgovor nakon primene MenACYW-TT bio veći od MenACYW-DT za sve 4 serogrupe 30. dana nakon davanja dodatne doze upotrebom hSBA testa. GMT nakon vakcinacije prema hSBA takođe su bili brojčano viši za MenACYW-TT vakcinu u odnosu na MenACYW-DT za sve 4 serogrupe.
[0331] Štaviše, primena jedne doze MenACYW-TT kod odraslih i adolescenata koji su primili jednu dozu MenACYW-DT ili MenACYW-CRM197pre 4-10 godina), dobro se tolerisala i nije izazvala nikakve nove probleme u pogledu bezbednosti ili bezbednosti. signali. Sledeće je posmatrano u vezi sa bezbednošću: pojava, priroda, trajanje, intenzitet i odnos sa vakcinacijom svih spontano prijavljenih sistemskih neželjenih AE prijavljenih u periodu od 30 minuta nakon vakcinacije; pojava, vreme do početka, broj dana pojave, intenzitet, preduzeta radnja i da li je reakcija dovela do ranog prekida studije, tražene reakcije na mestu injekcije koje su se javile do 7 dana nakon vakcinacije; pojava, vreme do početka, broj dana pojave, intenzitet, preduzete mere i da li je reakcija dovela do prevremenog prekida studije, tražene sistemskie reakcije koje su se javile do 7 dana nakon vakcinacije; pojava, priroda, vreme do pojave, trajanje, intenzitet, preduzeta radnja, veza sa vakcinacijom (samo za sistemske neželjene reakcije) i da li je događaj doveo do prevremenog prekida studije, spontano prijavljeni neželjeni događaji do D30 (+14 dana nakon vakcinacije(a)); i pojava, priroda, vreme do početka, trajanje, kriterijume ozbiljnosti, odnos sa vakcinacijom, ishod i da li je ozbiljan neželjeni događaj (SAE) doveo do prevremenog prekida studije, SAE tokom ispitivanja. Zatraženi neželjeni efekti su u suštini bili kao što je gore opisano za Fazu II kliničkog ispitivanja 4.
[0332] Uopšteno, procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 traženu reakciju bili su uporedivi između Grupe 1 i Grupe 2: 64,3% (256/398) ispitanika u grupi 1 i 65,4% (263/402) ispitanika u grupi 2, respektivno. Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 traženu reakciju stepena 3 bili su uporedivi između Grupe 1 i Grupe 2: 5,0% (20/398) ispitanika u grupi 1 i 5,5% (22/402) ispitanika u grupi 2, respektivno. Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 traženu reakciju na mestu injekcije bili su uporedivi između Grupe 1 i Grupe 2: 46,5% (185/398) ispitanika u grupi 1 i 49,3% (198/402) ispitanika u grupi 2, respektivno. Najčešće prijavljivana reakcija na mestu injekcije bila je bol koju je prijavilo 44,7% (178/398) ispitanika u Grupi 1 i 48,8% (196/402) ispitanika u Grupi 2. Eritem i otok su prijavljeni manje često. Eritem i otok su prijavljeni češće u grupi 1 (5,0% [20/398] i 4,0% [16/398], respektivno) nego u grupi 2 (1,5% [6/402] i 0,7% [3/402] ], redom). Većina je bila intenziteta stepena 1; procenti ispitanika koji su prijavili eritem i otok stepena 2 bili su uporedivi između Grupe 1 (0,5% [2/398] i 0,8% [3/398], respektivno) i Grupe 2 (0,2%
[1/402] i 0,5% [ 2/402], respektivno). Ni u jednoj grupi nije zabeležen eritem ili otok stepena 3. Većina reakcija na mestu injekcije MenACYW konjugovane vakcinie ili Menactra<®>vakcine imala je intenzitet stepena 1 ili stepena 2, i većina je počele između D0 i D03 i trajale su 1 do 3 dana. Nekoliko ispitanika prijavilo je tražene reakcije na mestu injekcije stepena 3: 1,0% (4/398) ispitanika iz grupe 1 i 2,0% (8/402) ispitanika iz grupe 2 prijavilo je bol 3. stepena Nijedan ispitanik ni u jednoj grupi nije prijavio eritem ili otok stepena 3.
[0333] Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 traženu sistemsku reakciju bili su uporedivi između Grupe 1 i Grupe 2: 55,3% (220/398) ispitanika u grupi 1 i 54,2% (218/402) ispitanika u grupi 2, respektivno. Mijalgija i glavobolja su bile najčešće prijavljene tražene sistemske reakcije: mijalgiju je prijavilo 36,7% (146/398) ispitanika u Grupi 1 i 38,8% (156/402) ispitanika u Grupi 2; glavobolju je prijavilo 37,9% (151/398) ispitanika u grupi 1 i 33,3% (134/402) ispitanika u grupi 2. Malaksalost je prijavilo 27,6% (110/398) ispitanika u grupi 1 i 26,9% (108/402) ispitanika u grupi 2. Groznica nije prijavljena u Grupi 1 (0,0%
[0/390]) i prijavljena je kod 0,5% (2/395) ispitanika u Grupi 2. Uopšteno, najčešće tražene sistemske reakcije imale su intenzitet stepena 1 ili 2, počele su između D0 i D30 i trajale su 1 do 3 dana. Nekoliko ispitanika prijavilo je tražene sistemske reakcije stepena 3: Procenti ispitanika koji su prijavili sistemsku reakciju stepena 3 bili su slični između Grupe 1 i Grupe 2 za groznicu (0,0% [0/390] i 0,3% [1/395], respektivno), glavobolju (2,3% [9/398] i 3,5% [14/402], respektivno), malaksalost (2,8% [11/398] i 3,5% [14/402], respektivno) i mijalgiju (2,0% [8/398] i 2,2% [9/402] ], redom).
[0334] Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 spontano prijavljeni blagi AE između D0 i D30 bili su uporedivi između Grupe 1 (26,1% [105/402]) i Grupe 2 (25,3% [103/407]). Broj spontano prijavljenih blagih neželjenih reakcija bio je isti u grupi 1 (n=164 neželjena dejstva) i u grupi 2 (n=164 neželjena dejstva). Smatra se da je mali i uporediv procenat spontano prijavljenih blagih neželjenih događaja povezan sa vakcinom datom na DO: 3,0% (12/402) ispitanika iz grupe 1 i 2,9% (12/407) ispitanika iz grupe 2. Većina ovih događaja imala je intenzitet stepena 1 ili stepena 2
[0335] Dva ispitanika (0,5%) u grupi 1 i nijedan ispitanik (0,0%) u grupi 2 prijavili su najmanje 1 neposredan spontano prijavljen neželjeni događaj (vrtoglavica kod oba ispitanika).
[0336] Ukupno 5 ispitanika (1,2%) u Grupi 1 i 6 ispitanika (1,5%) u Grupi 2 prijavilo je najmanje 1 spontano prijavljenu blagu AR na mestu injekcije. Modrice na mestu injekcije prijavljene su kod 2 ispitanika (0,5%) u grupi 1 i kod 3 ispitanika (0,7%) u grupi 2. Svrab na mestu injekcije prijavljen je kod 2 ispitanika (0,5%) u grupi 1 i kod 1 ispitanika (0,2%) u grupi 2. Toplota na mestu injekcije prijavljena je kod 1 ispitanika (0,2%) u grupi 1. Promena boje na mestu injekcije i urtikarija na mestu injekcije su prijavljeni kod po 1 ispitanika (0,2%) u Grupi 2. Diskoloracija na mestu injekcije bila je 3. stepena i bila je u toku na kraju studije.
[0337] Infekcije i infestacije su najčešći spontano prijavljeni blagi sistemski neželjeni efekti (7,5% [30/402] ispitanika u grupi 1 i 6,6% [27/407] ispitanika u grupi 2). Često prijavljeni tip infekcija ili infestacija su bili nazofaringitis, koji je prijavilo 1,7% (7/402) ispitanika u Grupi 1 i 1,7% (7/407) ispitanika u Grupi 2; i infekcije gornjih disajnih puteva, koje je prijavilo 1,0% (4/402) ispitanika u Grupi 1 i 1,7% (7/407) ispitanika u Grupi 2. U klasama sistema organa su takođe često prijavljivani respiratorni, torakalni i medijastinalni poremećaji: 6,0% (24/402) ispitanika u grupi 1 i 6,6% (27/407) ispitanika u grupi 2, uključujući kašalj i orofaringealni bol. Većina spontano prijavljenih blagih neželjenih dejstava u roku od 30 dana od injekcije vakcine bila je intenziteta stepena 1 ili 2. Procenti ispitanika koji su prijavili najmanje 1 stepen 3 spontano prijavljenog blagog sistemskog AE bili su uporedivi između obe grupe: 3,7% (15/402) ispitanika iz grupe 1 i 4,2% (17/407) ispitanika iz grupe 2.
[0338] Spontano prijavljeni blagi neželjeni događaji najčešće su prijavljivani u klasifikaciji opštih poremećaja i stanja na mestu davanja, što je prijavilo 2,2% (9/402) ispitanika u grupi 1 i 1,7% (7/407) ispitanika u grupi 2. Najčešće spontano prijavljen blagi sistemski neželjeni događaj u ovoj klasifikaciji bio je umor, koju je prijavilo 0,5% (2/402) ispitanika u grupi 1 i 0,2% (1/407) ispitanika u grupi 2. Samo 1 ispitanik u Grupi 2 prijavio je 2 spontano prijavljena blaga sistemska neželjena reakcija 3. stepena: Mučnina 3. stepena u SOC klasifikaciji gastrointestinalnih poremećaja i umor 3. stepena u klasifikaciji opštih poremećaja i stanja na mestu davanja. Oba su počela na D0 i trajala su 2 dana. Uzimani su lekovi protiv mučnine; za umor nije preduzeto ništa.
[0339] Nije bilo neželjenih događaja i neželjenih reakcija koje su dovele do prekida studije ni u jednoj grupi. Tri ispitanika su imala ozbiljno neželjeno dejstvo u prvih 30 dana nakon vakcinacije: bilateralna plućna embolija kod 1 ispitanika u grupi 1 i veliki depresivni poremećaj i bol u grudima kod 1 ispitanika u grupi 2. Istraživač nije smatrao da ni jedan od ovih ozbiljnih neželjenih događaja nije povezano sa vakcinom i ni jedan nije doveo do prekida studije.
[0340] Šest ispitanika (4 u grupi 1 i 2 u grupi 2) iskusilo je ukupno 6 ozbiljnih neželjenih dejstava nakon D30 tokom 6-mesečnog praćenja: 4 ispitanika (1,0%) u grupi 1 imala su 4 ozbiljna neželjena dejstva, a 2 ispitanika (0,5%) u grupi 2 imala su 2 ozbiljna neželjena dejstva. Nijedan od ozbiljnih neželjenih dejstava nije smatrano povezanim sa vakcinom i nijedno nije dovelo do prekida studije. Tokom studije nisu prijavljeni smrtni slučajevi.
[0341] Utvrđeno je da je vakcinacija dodatnom dozom MenACYW konjugovane vakcine kod adolescenata prajmovanih kvadrivalentnom meningokoknom konjugovaniom vakcinom i odraslih sa minimum15 godina starosti bezbedna, bez identifikovanih bezbednosnih problema. Sve u svemu, bezbednosni profil MenACXYW konjugovane vakcine bio je uporediv sa profilom licencirane vakcine, Menactra<®>.
7. Stabilnost tečne formulacije MenACYW-TT
[0342] Neke ili sve komponente postojećih meningokoknih polisaharidnih konjugovanih vakcina kao što su MenACWY-CRM197/Menveo<®>(kvadrivalentni konjugat sa CRM197, u kojem je MenA konjugat liofilizovan) i MCV4-TT/Nimenrikophi<®>(potpuno izolovani konjugat sa TT) ne čuvaju se dugo kao tečne formulacije. Menactra<®>(kvadrivalentni konjugat sa TT) se čuva kao tečna formulacija, ali njen vek trajanja je 24 meseca. U nedavnoj publikaciji, Beresford et al. su okarakterisali stabilnost različitih postojećih vakcina i primetili depolimerizaciju i gubitak imunogenosti pod određenim uslovima, što ih je navelo da preporuče da za „sve novorazvijene MenACWY saharid-protein konjugovane vakcine, ključna preporuka bi bila da se razmotri liofilizacija finalnog proizvoda kako bi se sprečila štetna degradacija koja bi uticala na imunogenost." Beresford et al., Vaccine 2017 Jun 16;35(28):3598-3606 at Abstract.
[0343] Tečne formulacije su korisne barem zato što ne zahtevaju korak liofilizacije tokom proizvodnje, ne zahtevaju korak rekonstitucije pre primene i izbegavaju rizik od mogućih grešaka povezanih sa rekonstitucijom. Naravno, ove prednosti su irelevantne ako sam proizvod podleže degradaciji koja ugrožava imunogenost. Shodno tome, bilo bi poželjno da MenACYW konjugovana vakcina bude stabilna kao tečna formulacija više od 24 meseca. Stabilnost MenACYW-TT prema ovom pronalasku je okarakterisana na sledeći način.
[0344] MenACYW-TT je čuvan u 0,67% NaCl/30 mM puferovan natrijum acetatom na pH 6,0 tokom 54 meseca na 2°C-8°C i testiran na stabilnost u vremenskim tačkama odabranim od 0, 1, 3, 6, 9, 12, 18, 24, 30, 36, 42, 48 i 54 meseca (videti tabelu 20). Mereni parametri su uključivali vizuelni izgled, sterilnost, odsustvo abnormalne toksičnosti, ukupan polisaharid svake serogrupe, % slobodnog polisaharida, molekulsku težinu, polidisperznost, pH i imunogenost.
[0345] Ubrzano testiranje stabilnosti MenACYW-TT je takođe izvedeno čuvanjem formulacije na 23°C-27°C. Testovi su obavljeni u jednoj ili više od 1 nedelje, 3 meseca i 6 meseci (videti tabelu 21).
[0346] Što se tiče vizuelnog izgleda, rastvor je ostao bistar tokom čitavog perioda od 54 meseca na 2°C-8°C i 6 meseci na 23°C-27°C i nisu zabeleženi nikakvi defekti (testirane su sve vremenske tačke navedene gore).
[0347] Odsustvo abnormalne toksičnosti je utvrđeno posmatranjem glodara (miševi ili zamorci) nakon primene doze MenACYW-TT. U svim testovima, sve životinje su preživele testni period od 28 dana nakon primene; nije bilo nespecifičnih ili neočekivanih odgovora; a životinje nisu izgubile na težini tokom perioda ispitivanja. Ispitivanje abnormalne toksičnosti je obavljeno u vremenskim tačkama od 0, 12, 24, 36, 42, 48 i 54 meseca.
[0348] pH je bio 6,1 na 0 meseci i sva merenja su bila u opsegu od 6,1 do 6,3 tokom vremenskog perioda (vremenske tačke za pH bile su 0, 1, 6, 12, 24, 36, 42, 48 i 54 meseca na 2°C-8°C i 6 meseci na 23°C-27°C). Nije primećen rast ni u jednoj od ispitivanih vremenskih tačaka uključujući 54 meseca (vremenske tačke za sterilitet su bile 0, 12, 24, 36, 42, 48 i 54 meseca na 2°C-8°C i 6 meseci na 23°C -27°C).
[0349] Ukupni polisaharid je meren Dionex<™>hromatografijom. % slobodnog polisaharida je meren Dionex<™>hromatografijom i taloženjem deoksiholata. Molekularna težina i polidisperznost mereni su hromatografijom isključivanja veličine/rasejanjem svetlosti sa više uglova (SEC/MALS).
[0350] Rezultati za 2°C-8°C su u tabeli 20, a rezultati za 23°C-27°C su u tabeli 21.
Tabela 20: Rezultati testa stabilnosti za skladištenje na 2°C do 8°C.
[0351] Rezultati su pokazali dobru stabilnost tokom čitavih perioda od 54 meseca na 2°C-8°C i 6 meseci na 23°C-27°C. Konkretno, na 2°C-8°C, za sve četiri serogrupe, došlo je do minimalnog gubitka konjugacije polisaharida sa TT (0-3% povećanje u % slobodnog polisaharida) i imunogenost je značajno održavana u svim vremenskim tačkama osim 24 meseca, u kojima se čini da su niske vrednosti van granica i/ili da su rezultat tehničkog problema na osnovu zapažanja nakon 36 meseci i kasnije, koja su sličnija merenjima za 0 i 12 meseci. Na 23°C-27°C, došlo je do povećanja slobodnog polisaharida za MenA, MenY i MenW za šest meseci, ali su nivoi ostali ispod prihvatljive granice od 40%. Imunogenost je i dalje bila prisutna nakon šest meseci.
[0352] Iz ovih rezultata može se zaključiti da se MenACYW-TT može dugoročno održavati kao tečna formulacija u uslovima hlađenja, na primer, tokom pakovanja, distribucije i skladištenja, i da su liofilizacija ili druge mere za očuvanje nepotrebne.
[0353] Iako je prethodni pronalazak detaljno opisan ilustracijama i primerima radi jasnoće razumevanja, primeri ne bi trebalo da se tumače kao ograničavajući obim pronalaska.

Claims (14)

  1. Patentni zahtevi 1. Kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis sadrži: a) prvi konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; b) drugi konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; c) treći konjugat MenW-135 kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; i d) četvrti konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem; naznačeni time što: (i) drugi konjugat je populacija koja se sastoji od konjugovanih polisaharida vezanih dva kraja i konjugovanih polisaharida vezanih na jednom kraju, a polisaharidi drugog konjugata imaju nivo O-acetilacije od 0,3 µmol/mg polisaharida do 1,6 µmol/mg polisaharida, i pri čemu jednostrano povezani konjugovani polisaharidi imaju terminalni nevezani saharid; (ii) MenA kapsularni polisaharid je vezan za protein nosač preko linkera koji sadrži karbamat, spejser i amid, pri čemu se spejser nalazi između karbamata i amida i sadrži 2-10 linearnih ugljenika, a prvi konjugat ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,3 do 1,5; (iii) kapsularni polisaharidi MenC, MenW-135 i MenY su vezani za protein nosač preko sekundarnog amina i najmanje jedan od konjugata ima prosečnu molekulsku težinu u rasponu od 300 kDa do 1500 kDa; (iv) protein nosač je toksoid tetanusa, i kompozicija sadrži manje od 20% masenih slobodnog polisaharida u odnosu na ukupan polisaharid.
  2. 2. Vakcina protiv bakterije Neisseria meningitidis je kompozicija vakcine iz patentnog zahteva 1, naznačena time što su prvi, drugi, treći i/ili četvrti konjugati populacija koja sadrži molekule sa molekulskom masom u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa ili 800 kDa do 1300 kDa.
  3. 3. Kompozicija vakcine protiv Neisseria meningitidis koja sadrži konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem, naznačena time što je konjugat populacija koja se sastoji od konjugovanih polisaharida vezanih na dvostruki kraj i konjugovanih polisaharida vezanih na jednom kraju i oba su vezana za protein nosač kroz sekundarni amin, a polisaharidi konjugata MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem imaju nivo O-acetilacije u rasponu od 0,3 µmol/mg polisaharida do 1,6 µmol/mg polisaharida, pri čemu je nosač protein tetanus toksoid.
  4. 4. Kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis prema patentnom zahtevu 3, naznačena time što konjugat MenC kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem: (a) ima prosečnu molekularnu težinu u rasponu od 300 kDa do 1500 kDa; ili (b) je populacija koja se sastoji od molekula koji imaju molekularnu težinu u opsegu od 700 kDa do 1400 kDa ili 800 kDa do 1300 kDa.
  5. 5. Kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 4, naznačena time, što kompozicija vakcine protiv Neisseria meningitidis ne sadrži adjuvans i/ili sadrži acetatni pufer sa pH od 5,5 do 6,5.
  6. 6. Kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 5, naznačena time što MenC kapsularni polisaharid ima stepen O-acetilacije u rasponu od 0,6 do 1,5 µmol/mg polisaharida ili 0,8 do 1,4 µmol/mg polisaharida.
  7. 7. Kompozicija vakcine Neisseria meningitidi iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 6, naznačena time što konjugat koji sadrži MenC polisaharid sadrži jednu ili više modifikacija izabranih od (i) primarnog hidroksila na poziciji 7, (ii) (2-hidroksi)etoksi na redukujućem kraju, i (iii) konjugaciju sa proteinom nosačem, pri čemu su modifikacije prisutne na najmanje 25 nmol/mg polisaharida.
  8. 8. Kompozicija vakcine Neisseria meningitidi iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1 do 7, naznačena time što je MenC kapsularni polisaharid smanjen u veličini za 3x-8x u odnosu na prirodni MenC polisaharid.
  9. 9. Kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis prema patentnim zahtevima 1, 2 i 5 do 8, naznačena time što: (i) prvi konjugat ima maseni odnos MenA kapsularnog proteina i proteina nosača od 0,5 do 1,5 ili 0,7 do 1,4; (ii) drugi konjugat ima maseni odnos MenC kapsularnog proteina i proteina nosača od 0,3 do 1,1; (iii) četvrti konjugat ima maseni odnos MenY kapsularnog proteina i proteina nosača od 0,3 do 1,1; i/ili (iv) treći konjugat ima maseni odnos MenW-135 kapsularnog proteina i proteina nosača od 0,3 do 1,3.
  10. 10. Kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis prema patentnom zahtevu 3 ili 4, koja dalje sadrži konjugat MenA kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem koji ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,5 do 1,5; konjugat MenW-135 polisaharidnog kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem koji ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,3 do 1,3; i konjugat MenY kapsularnog polisaharida sa proteinom nosačem koji ima maseni odnos polisaharida i proteina nosača od 0,5 do 1,3.
  11. 11. Kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis prema patentnom zahtevu 10, naznačena time što (i) MenA kapsularni polisaharid je vezan za protein nosač preko linkera koji sadrži karbamat, spejser i amid, pri čemu se spejser nalazi između karbamata i amida i sadrži 2-10 linearnih ugljenika, a konjugat ima maseni odnos MenA kapsularnog polisaharida i proteina nosača od 0,3 do 1,5; (ii) kapsularni polisaharidi MenW-135 i MenY su vezani za protein nosač preko sekundarnog amina i konjugata ima prosečnu molekulsku težinu u rasponu od 300 kDa do 1500 kDa; i (iii) kompozicija sadrži manje od 20% masenih slobodnog polisaharida u odnosu na ukupan polisaharid.
  12. 12. Kompozicija vakcine Neisseria meningitidis iz bilo kojeg od patentnih zahteva 1, 2 i 5 do 11, naznačena time što je MenA kapsularni polisaharid povezan na protein nosač preko linkera iz formule (I):
    pri čemu PS označava vezivanje za polisaharid, a PR označava vezivanje za protein nosač.
  13. 13. Kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis prema patentnom zahtevu 1, naznačena time što a) MenA kapsularni polisaharid je vezan za protein nosač toksoida tetanusa preko linkera formule (I):
    naznačeno time što PS označava vezivanje za polisaharid, a PR označava vezivanje za protein nosač, i pri čemu je maseni odnos MenA kapsularnog polisaharida prema tetanus toksoidu proteina nosača 0,5 do 1,5; i/ili b) MenC kapsularni polisaharid je vezan za protein nosač toksoida tetanusa preko sekundarnog amina, naznačeno time što je drugi konjugat populacija koja se sastoji od konjugovanih polisaharida povezanih sa dva kraja i konjugovanih polisaharida povezanih jednim krajem, pri čemu polisaharidi imaju nivo O-acetilacije od 0,3 µmol/mg polisaharida do 1,6 µmol/mg polisaharida, pri čemu drugi konjugat ima prosečnu molekulsku težinu u rasponu od 300 kDa do 1500 kDa, pri čemu je MenC kapsularni polisaharid smanjen u veličini u 3x-8x u odnosu na prirodni MenC polisaharid i pri čemu je maseni odnos kapsularnog polisaharida MenC prema proteinu nosaču toksoida tetanusa 0,3 do 1,1; i/ili c) kapsularni polisaharid MenW-135 je vezan za protein nosač toksoida tetanusa preko sekundarnog amina, i naznačeno time što je odnos mase kapsularnog polisaharida MenW-135 prema proteinu nosača toksoida tetanusa 0,3 do 1,3; i/ili d) MenY kapsularni polisaharid je vezan za protein nosač toksoida tetanusa preko sekundarnog amina, i naznačeno time što je maseni odnos MenY kapsularnog polisaharida i proteina nosača toksoida tetanusa 0,5 do 1,3; i kompozicija sadrži manje od 20% masenih slobodnog polisaharida u odnosu na ukupan polisaharid.
  14. 14. Kompozicija vakcine protiv bakterije Neisseria meningitidis prema bilo kom od patentnih zahteva 1 do 13 za upotrebu u postupku vakcinacije ispitanika protiv bakterije Neisseria meningitidis, naznačena time što se vakcina poželjno primenjuje intramuskularno, i/ili naznačena time što je ispitanik poželjno starosti od 6 nedelja do 3 godine ili starosti 50 godina ili više.
RS20240387A 2016-09-02 2017-09-01 Vakcina protiv neisseria meningitidis RS65362B1 (sr)

Applications Claiming Priority (5)

Application Number Priority Date Filing Date Title
US201662383279P 2016-09-02 2016-09-02
US201762468695P 2017-03-08 2017-03-08
US201762505525P 2017-05-12 2017-05-12
PCT/US2017/049856 WO2018045286A1 (en) 2016-09-02 2017-09-01 Neisseria meningitidis vaccine
EP17765045.4A EP3506935B1 (en) 2016-09-02 2017-09-01 Neisseria meningitidis vaccine

Publications (1)

Publication Number Publication Date
RS65362B1 true RS65362B1 (sr) 2024-04-30

Family

ID=59846741

Family Applications (1)

Application Number Title Priority Date Filing Date
RS20240387A RS65362B1 (sr) 2016-09-02 2017-09-01 Vakcina protiv neisseria meningitidis

Country Status (24)

Country Link
US (4) US11147866B2 (sr)
EP (2) EP3506935B1 (sr)
JP (3) JP6764021B2 (sr)
KR (2) KR102692762B1 (sr)
CN (2) CN118236477B (sr)
AU (2) AU2017321863B2 (sr)
BR (1) BR112019003992A2 (sr)
CA (1) CA3033364A1 (sr)
DK (1) DK3506935T3 (sr)
ES (1) ES2974992T3 (sr)
FI (1) FI3506935T3 (sr)
HR (1) HRP20240433T1 (sr)
HU (1) HUE066007T2 (sr)
LT (1) LT3506935T (sr)
MX (1) MX2019002489A (sr)
PH (1) PH12019500399B1 (sr)
PL (1) PL3506935T3 (sr)
PT (1) PT3506935T (sr)
RS (1) RS65362B1 (sr)
SA (1) SA519401227B1 (sr)
SG (1) SG11201901394XA (sr)
SI (1) SI3506935T1 (sr)
WO (1) WO2018045286A1 (sr)
ZA (1) ZA201901402B (sr)

Families Citing this family (7)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
CA2611960C (en) * 2005-06-27 2015-05-05 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic compositions comprising n.meningitidis capsular saccharide conjugates
SG11201901394XA (en) 2016-09-02 2019-03-28 Sanofi Pasteur Inc Neisseria meningitidis vaccine
EP3632465A1 (en) 2018-10-03 2020-04-08 Sanofi Pasteur Inc. Combined immunization against meningococcal disease and human papillomavirus
MX2022006054A (es) 2019-11-22 2022-06-24 Glaxosmithkline Biologicals Sa Dosificacion y administracion de una vacuna de glucoconjugados de sacaridos bacterianos.
AU2022223712A1 (en) 2021-02-19 2023-10-05 Sanofi Pasteur Inc. Meningococcal b recombinant vaccine
WO2023200704A1 (en) 2022-04-11 2023-10-19 Sanofi Pasteur Inc. Protein-saccharide conjugation with sodium cyanoborohydride
TW202423477A (zh) 2022-08-03 2024-06-16 美商賽諾菲巴斯德公司 針對腦膜炎奈瑟氏菌b的含佐劑免疫原性組成物

Family Cites Families (137)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
US5097020A (en) 1983-07-05 1992-03-17 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4882317A (en) 1984-05-10 1989-11-21 Merck & Co., Inc. Covalently-modified bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers and methods of preparing such polysaccharides and conjugataes and of confirming covalency
US4695624A (en) 1984-05-10 1987-09-22 Merck & Co., Inc. Covalently-modified polyanionic bacterial polysaccharides, stable covalent conjugates of such polysaccharides and immunogenic proteins with bigeneric spacers, and methods of preparing such polysaccharides and conjugates and of confirming covalency
US5371197A (en) 1991-09-24 1994-12-06 Merck & Co., Inc. Protein-dimeric polysaccharide conjugate vaccine
FR2682388B1 (fr) 1991-10-10 1995-06-09 Pasteur Merieux Serums Vacc Procede de preparation d'un oligoside par depolymerisation d'un polyoside issu d'un agent pathogene, oligoside ainsi obtenu et son utilisation notamment comme agent vaccinal.
US5425946A (en) 1992-08-31 1995-06-20 North American Vaccine, Inc. Vaccines against group C Neisseria meningitidis
DE69331495T2 (de) * 1992-08-31 2002-10-31 Baxter Healthcare S.A., Wallisellen Impfstoffe gegen neisseria meningitidis gruppe c
NZ304715A (en) 1995-03-22 1999-07-29 Jackson H M Found Military Med Production of immunogenic constructs using organic cyanylating reagents to activate carbohydrates and then coupling the carbohydrate to a protein, peptide or hapten
US20030157129A1 (en) 1995-06-23 2003-08-21 Smithkline Beecham Biologicals S.A. Vaccine comprising a polysaccharide antigen - carrier protein conjugate and free carrier protein
US6309646B1 (en) 1996-05-09 2001-10-30 The Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Protein-polysaccharide conjugate vaccines and other immunological reagents prepared using homobifunctional and heterobifunctional vinylsulfones, and processes for preparing the conjugates
US5965714A (en) 1997-10-02 1999-10-12 Connaught Laboratories, Inc. Method for the covalent attachment of polysaccharides to protein molecules
US7018637B2 (en) 1998-02-23 2006-03-28 Aventis Pasteur, Inc Multi-oligosaccharide glycoconjugate bacterial meningitis vaccines
US6645503B1 (en) 1998-03-10 2003-11-11 Wyeth Holdings Corporation Antigenic conjugates of conserved lipopolysaccharides of gram negative bacteria
CA2264970A1 (en) 1998-03-10 1999-09-10 American Cyanamid Company Antigenic conjugates of conserved lipolysaccharides of gram negative bacteria
KR100704826B1 (ko) 1998-08-19 2007-04-09 박스터 헬쓰케어 에스.에이. Ｎ-아크릴로일화된 폴리사카라이드를 사용하여 제조된백신으로서 사용하기에 적합한 면역원성β-프로피온아미도-결합 폴리사카라이드 단백질 컨쥬게이트
US6585973B1 (en) 1998-10-29 2003-07-01 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Method for preparing solid phase conjugated vaccine
US6146902A (en) 1998-12-29 2000-11-14 Aventis Pasteur, Inc. Purification of polysaccharide-protein conjugate vaccines by ultrafiltration with ammonium sulfate solutions
FR2791895B1 (fr) 1999-03-23 2001-06-15 Pasteur Merieux Serums Vacc Utilisation de trehalose pour stabiliser un vaccin liquide
EP2270174A1 (en) 1999-05-19 2011-01-05 Novartis Vaccines and Diagnostics S.r.l. Combination neisserial compositions
US6309633B1 (en) 1999-06-19 2001-10-30 Nobex Corporation Amphiphilic drug-oligomer conjugates with hydroyzable lipophile components and methods for making and using the same
GB9928196D0 (en) 1999-11-29 2000-01-26 Chiron Spa Combinations of B, C and other antigens
DE10012370A1 (de) 2000-03-14 2001-09-27 Chiron Behring Gmbh & Co Adjuvans für Vakzinen
US20030180316A1 (en) 2000-06-29 2003-09-25 Dominique Boutriau Multivalent vaccine composition
US6673905B2 (en) 2000-08-09 2004-01-06 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Conjugation of biomolecules using Diels-Alder cycloaddition
GEP20053691B (en) 2001-01-23 2005-12-12 Pasteur Multivalent Meningococcal Polysaccharide-Protein Conjugate Vaccine
GB0115176D0 (en) 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
CN100350972C (zh) 2001-07-26 2007-11-28 启龙股份公司 含有铝佐剂和组氨酸的疫苗
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
CU23031A1 (es) 2002-01-24 2005-02-23 Ct Ingenieria Genetica Biotech Antigeno de superficie del virus de la hepatitis b como inmunopotenciador mucosal, formulaciones resultantes
DK1490409T3 (da) 2002-03-26 2009-03-23 Novartis Vaccines & Diagnostic Modificerede saccharider med forbedret stabilitet i vand
AU2002309259A1 (en) 2002-05-09 2003-11-11 Massimo Porro Improved polysaccharide and glycoconjugate vaccines_____________
AU2003299501A1 (en) 2002-05-16 2004-05-04 Aventis Pasteur, Inc. Animal component free meningococcal polysaccharide fermentation and seedbank development
WO2004011027A1 (en) 2002-07-30 2004-02-05 Baxter International Inc. Chimeric multivalent polysaccharide conjugate vaccines
GB0220198D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Modified saccharides,conjugates thereof and their manufacture
KR101058978B1 (ko) 2002-11-01 2011-08-23 글락소스미스클라인 바이오로지칼즈 에스.에이. 면역원성 조성물
CN102302776B (zh) 2003-01-30 2014-06-18 诺华疫苗和诊断有限公司 抗多种脑膜炎球菌血清组的可注射性疫苗
BRPI0410341B8 (pt) 2003-05-07 2021-05-25 Sanofi Pasteur Inc conjugados de polissacarídeo-proteína derivatizados de meningococos multivalentes e vacina
US6933137B2 (en) 2003-05-16 2005-08-23 Aventis Pasteur Animal component free meningococcal polysaccharide fermentation and seedbank development
WO2005000347A1 (en) 2003-06-23 2005-01-06 Baxter International Inc. Vaccines against group y neisseria meningitidis and meningococcal combinations thereof
JP4764820B2 (ja) 2003-06-23 2011-09-07 バクスター・インターナショナル・インコーポレイテッド ワクチン用担体タンパク質
US8048432B2 (en) 2003-08-06 2011-11-01 The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Polysaccharide-protein conjugate vaccines
EP2366404B1 (en) 2003-08-06 2014-11-19 The Government of The United States of America, as represented by The Secretary, Department of Health and Human Services Polysaccharide-protein conjugate vaccines
ES2735809T3 (es) 2003-08-12 2019-12-20 Lipoxen Tech Limited Derivativos del ácido siálico para la derivatización y conjugación de proteínas
CA2885040C (en) 2003-10-02 2018-10-30 Novartis Vaccines And Diagnostics S.R.L. Liquid vaccines for multiple meningococcal serogroups
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
CU23236A1 (es) 2003-12-03 2007-09-26 Ct Ingenieria Genetica Biotech PROTEINA NMB0928 Y SU USO EN FORMULACIONES FARMACéUTICAS P
SI1740217T1 (sl) 2004-04-30 2011-10-28 Novartis Ag Konjugirano meningokokno cepljenje
GB0500787D0 (en) 2005-01-14 2005-02-23 Chiron Srl Integration of meningococcal conjugate vaccination
GB0409745D0 (en) 2004-04-30 2004-06-09 Chiron Srl Compositions including unconjugated carrier proteins
GB0413868D0 (en) 2004-06-21 2004-07-21 Chiron Srl Dimensional anlaysis of saccharide conjugates
EP3184551A1 (en) 2004-08-12 2017-06-28 Lipoxen Technologies Limited Sialic acid derivatives
CA2577920A1 (en) 2004-08-30 2006-03-09 Sanofi Pasteur, Inc. Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine
EP2345422A1 (en) 2004-09-21 2011-07-20 Sanofi Pasteur, Inc. Multivalent meningococcal derivatized polysaccharide-protein conjugates and vaccine
WO2006042542A2 (en) 2004-10-19 2006-04-27 Statens Serum Institut Production of tetanus, diphtheria, and pertussis toxins and toxoids using fermentation media containing no components of animal or soy origin
GB0505518D0 (en) 2005-03-17 2005-04-27 Chiron Srl Combination vaccines with whole cell pertussis antigen
EP1885734B1 (en) 2005-05-06 2015-01-14 Novartis AG Immunogens for meningitidis-a vaccines
CA2611960C (en) 2005-06-27 2015-05-05 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic compositions comprising n.meningitidis capsular saccharide conjugates
GB0513069D0 (en) * 2005-06-27 2005-08-03 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
GB0513071D0 (en) * 2005-06-27 2005-08-03 Glaxosmithkline Biolog Sa Immunogenic composition
AU2012203419B2 (en) * 2005-06-27 2014-06-26 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Immunogenic composition
EP1931380A2 (en) 2005-09-01 2008-06-18 Novartis Vaccines and Diagnostics GmbH & Co. KG Multiple vaccination including serogroup c meningococcus
ES2353516T3 (es) 2005-09-05 2011-03-02 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Ensayo bactericida del suero para antisueros específicos de n. meningitidis.
EP1963522A4 (en) 2005-12-22 2010-05-12 Sanofi Pasteur Inc MULTIVALENT MENINGOCOCCAL DERIVATIVE POLYSACCHARIDE-PROTEIN CONJUGATES AND VACCINE
PL3017827T3 (pl) 2005-12-22 2019-04-30 Glaxosmithkline Biologicals Sa Szczepionka z koniugatem polisacharydu pneumokokowego
CA2636983A1 (en) 2006-01-13 2007-07-26 Baxter International Inc. Method for purifying polysaccharides
CA2644724C (en) 2006-03-17 2016-05-24 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary Of The Department Of Health And Human Services Methods for preparing complex multivalent immunogenic conjugates
TR201807355T4 (tr) 2006-03-22 2018-06-21 Glaxosmithkline Biologicals Sa Meningokokkal konjugatlarla immünizasyon rejimleri.
CU23575A1 (es) 2006-03-31 2010-09-30 Ct Ingenieria Genetica Biotech Composición farmacéutica que comprende la proteína nmb0606
CU23572A1 (es) 2006-03-31 2010-09-30 Ct Ingenieria Genetica Biotech Composición farmacéutica que comprende la proteína nmb0938
TW200806315A (en) 2006-04-26 2008-02-01 Wyeth Corp Novel formulations which stabilize and inhibit precipitation of immunogenic compositions
EP2032160B2 (en) 2006-06-12 2013-04-03 GlaxoSmithKline Biologicals S.A. Vaccine
US7491517B2 (en) 2006-07-19 2009-02-17 Jeeri R Reddy Method of producing meningococcal meningitis vaccine for Neisseria meningitidis serotypes A,C,Y, and W-135
DK2056871T3 (en) 2006-08-07 2018-02-26 Harvard College PROTEIN MATRIX VACCINES AND PROCEDURES FOR THE PREPARATION AND ADMINISTRATION OF SUCH VACCINES
GB0700135D0 (en) * 2007-01-04 2007-02-14 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
GB0700136D0 (en) 2007-01-04 2007-02-14 Glaxosmithkline Biolog Sa Process for manufacturing vaccines
GB0700562D0 (en) 2007-01-11 2007-02-21 Novartis Vaccines & Diagnostic Modified Saccharides
WO2008129559A2 (en) 2007-04-23 2008-10-30 Serum Institute Of India Ltd Antigenic polysaccharides and process for their preparation
EP2152302B1 (en) 2007-06-04 2015-10-07 GlaxoSmithKline Biologicals SA Formulation of meningitis vaccines
AU2008265767B2 (en) 2007-06-20 2014-11-13 Pfizer Ireland Pharmaceuticals Modified polysaccharides for conjugate vaccines
EP2173759A4 (en) 2007-07-03 2014-01-29 Childrens Hosp & Res Ct Oak OLIGOSIAL INSERTS, PROCESS FOR THEIR PREPARATION AND ITS IMMUNOLOGICAL USE
GB0713880D0 (en) 2007-07-17 2007-08-29 Novartis Ag Conjugate purification
DK2200642T3 (da) 2007-10-19 2012-07-16 Novartis Ag Meningococvaccinepræparater
BRPI0909820A2 (pt) 2008-03-05 2015-08-11 Sanofi Pasteur Processo para estabilização de composição de vacina contra gripe, para estabilização de composição de vacina contendo adjuvante e para preparação de vacina, composições de vacina, kit de vacina e método de estocagem de uma matéria prima
GB0810894D0 (en) 2008-06-13 2008-07-23 Novartis Vaccines & Diagnostic Conjugated saccharide
BRPI0916365A2 (pt) 2008-07-21 2018-05-02 Brigham & Womens Hospital Inc métodos e composições relacionados aos oligossacarídeos de glicosina beta-1,6 sintéticos
GB0822633D0 (en) 2008-12-11 2009-01-21 Novartis Ag Formulation
CA2756170C (en) 2009-03-23 2019-04-02 The Brigham And Women's Hospital, Inc. Glycoconjugate vaccines
EP3017828A1 (en) 2009-08-27 2016-05-11 GlaxoSmithKline Biologicals SA Hybrid polypeptides including meningococcal fhbp sequences
CA2779816A1 (en) 2009-10-27 2011-05-05 Novartis Ag Modified meningococcal fhbp polypeptides
ES2707778T3 (es) 2009-12-30 2019-04-05 Glaxosmithkline Biologicals Sa Inmunógenos polisacáridos conjugados con proteínas portadoras de E. coli
GB201003922D0 (en) 2010-03-09 2010-04-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
EP2585106A1 (en) * 2010-06-25 2013-05-01 Novartis AG Combinations of meningococcal factor h binding proteins
US9120848B2 (en) 2010-09-23 2015-09-01 Harvey Kaplan Non-aqueous synthesis of polysaccharide-protein conjugates for vaccines
EP2680885B8 (en) * 2011-03-02 2018-07-25 GlaxoSmithKline Biologicals SA Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
GB201103836D0 (en) 2011-03-07 2011-04-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Conjugation process
CA2836251C (en) 2011-05-18 2017-07-04 Matrivax, Inc. Protein matrix vaccine compositions including polycations
CN103917245B (zh) 2011-09-14 2017-06-06 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 用于制备糖‑蛋白质糖缀合物的方法
CN104080479B (zh) 2011-11-07 2019-11-05 葛兰素史密丝克莱恩生物有限公司 包括spr0096和spr2021抗原的运载体分子
GB2495341B (en) 2011-11-11 2013-09-18 Novartis Ag Fermentation methods and their products
IN2012MU00206A (sr) * 2012-01-20 2013-08-09
BR112014018815B1 (pt) 2012-01-30 2022-07-12 Serum Institute Of India Ltd. Composição imunogênica compreendendo conjugado proteína-polissacarídeo x de n. meningitidis
CN104334187B (zh) 2012-03-09 2017-04-05 辉瑞公司 脑膜炎双球菌组合物及其方法
EP2852414B9 (en) 2012-05-22 2020-12-09 GlaxoSmithKline Biologicals SA Meningococcus serogroup x conjugate
US9427476B2 (en) 2012-05-24 2016-08-30 The United States Of America, As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services Multivalent meningococcal conjugates and methods for preparing conjugates
NZ703260A (en) 2012-05-30 2017-07-28 The Brigham And Women’S Hospital Inc Polysaccharide compositions and methods of use
WO2014009971A2 (en) 2012-07-07 2014-01-16 Bharat Biotech International Limited Non-alcoholic vaccine compositions free from animal- origin and process for preparation thereof
ES2700824T3 (es) 2012-08-16 2019-02-19 Pfizer Procedimientos y composiciones de glucoconjugación
CN102809656B (zh) 2012-08-26 2014-09-03 云南沃森生物技术股份有限公司 一种脑膜炎球菌多糖结合疫苗成品各群游离多糖含量的测定方法
JP6324961B2 (ja) * 2012-09-06 2018-05-16 ノバルティス アーゲー 血清群ｂ髄膜炎菌とｄ／ｔ／ｐとの組み合わせワクチン
WO2014053521A2 (en) 2012-10-02 2014-04-10 Novartis Ag Nonlinear saccharide conjugates
NZ708523A (en) 2012-11-21 2018-09-28 Serum Institute Of India Pvt Ltd Production of high yields of bacterial polysaccharides
CA2943263C (en) 2012-12-20 2018-12-04 Pfizer Inc. Glycoconjugation process
ITMI20130142A1 (it) 2013-01-31 2014-08-01 Biosynth Srl Vaccini glicoconiugati comprendenti unita' di base di un costrutto molecolare esprimente epitopi multipli incorporati
PT2976101T (pt) 2013-03-18 2020-11-12 Glaxosmithkline Biologicals Sa Método de tratamento
BR112015029051A2 (pt) 2013-05-20 2017-07-25 Shantha Biotechnics Private Ltd processos para a purificação de um conjugado de proteínas de polissacarídeos e para a fabricação de uma vacina
EP3013347B1 (en) 2013-06-27 2019-12-11 Academia Sinica Glycan conjugates and use thereof
EA201690205A1 (ru) 2013-07-11 2016-12-30 Новартис Аг Сайт-специфические химико-ферментативные модификации белков
WO2015052684A2 (en) 2013-10-11 2015-04-16 Msd Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt. Ltd. Polysaccharide-protein conjugates with enhanced immunogenicity and rapid high yielding process thereof
WO2015084846A1 (en) 2013-12-02 2015-06-11 Brandeis University High temperature selection of nucleotide-supported carbohydrate vaccines and resulting glycosylated oligonucleotides
JP2017505792A (ja) 2014-02-14 2017-02-23 ファイザー・インク 免疫原性糖タンパク質コンジュゲート
MY186874A (en) 2014-02-25 2021-08-26 Msd Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt Ltd A novel downstream process for purifying polysaccharides
JP6526692B2 (ja) 2014-02-25 2019-06-05 エムエスディー ウェルカム トラスト ヒルマン ラボラトリーズ プライベート リミテッドＭｓｄ Ｗｅｌｌｃｏｍｅ Ｔｒｕｓｔ Ｈｉｌｌｅｍａｎ Ｌａｂｏｒａｔｏｒｉｅｓ Ｐｖｔ．Ｌｔｄ． 髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｘの新規の合成オリゴマー及びその調製方法
WO2015158898A2 (en) 2014-04-17 2015-10-22 Medizinische Hochschule Hannover Means and methods for producing neisseria meningitidis capsular polysaccharides of low dispersity
CN104069504B (zh) 2014-05-11 2019-09-24 江苏康泰生物医学技术有限公司 一种增强多糖蛋白结合物免疫原性的方法
WO2015179270A2 (en) 2014-05-19 2015-11-26 Board Of Regents, The University Of Texas System Combinatorial platform for the display of surface adjuvants and antigens
ES2865485T3 (es) 2014-05-24 2021-10-15 Biological E Ltd Nueva vacuna de conjugado meningocócico semisintético
US10105438B2 (en) * 2014-10-09 2018-10-23 Msd Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt. Ltd. Process of conjugation and novel synthetic oligosaccharide-protein conjugates obtained thereof
US10888611B2 (en) 2015-02-19 2021-01-12 Pfizer Inc. Neisseria meningitidis compositions and methods thereof
JP6882193B2 (ja) 2015-04-28 2021-06-02 バイオロジカル イー リミテッド 微生物莢膜多糖類からタンパク質および他の不純物を分離するための方法
CN104998255B (zh) 2015-06-30 2018-08-28 北京祥瑞生物制品有限公司 新型acyw135群脑膜炎球菌结合疫苗及其制备方法
MY183392A (en) 2015-07-04 2021-02-18 Bharat Biotech Int Ltd Polysaccharide vaccine formulations and processes for industrial production of bacterial polysaccharides
CN105061629A (zh) 2015-08-31 2015-11-18 成都欧林生物科技股份有限公司 A群脑膜炎球菌荚膜粗多糖纯化工艺
EP3377613A1 (en) 2015-11-17 2018-09-26 Pfizer Inc Media and fermentation methods for producing polysaccharides in bacterial cell culture
MX2018010920A (es) 2016-03-15 2019-03-06 Msd Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt Ltd Nuevos conjugados de polisacarido-proteina, y procedimiento para obtener los mismos.
SG11201901394XA (en) 2016-09-02 2019-03-28 Sanofi Pasteur Inc Neisseria meningitidis vaccine
WO2018156467A1 (en) 2017-02-24 2018-08-30 Merck Sharp & Dohme Corp. Methods for improving filterability of polysaccharide-protein conjugate reactions

Also Published As

Publication number Publication date
WO2018045286A1 (en) 2018-03-08
JP2019526573A (ja) 2019-09-19
HRP20240433T1 (hr) 2024-07-05
US20190175718A1 (en) 2019-06-13
AU2017321863A1 (en) 2019-04-11
JP7329087B2 (ja) 2023-08-17
SG11201901394XA (en) 2019-03-28
CN118236477B (zh) 2025-04-25
US11147866B2 (en) 2021-10-19
AU2017321863B2 (en) 2024-07-11
US20250152693A1 (en) 2025-05-15
JP7028932B2 (ja) 2022-03-02
BR112019003992A2 (pt) 2019-05-28
FI3506935T3 (fi) 2024-04-17
JP2022065099A (ja) 2022-04-26
US11707514B2 (en) 2023-07-25
CA3033364A1 (en) 2018-03-08
JP6764021B2 (ja) 2020-09-30
DK3506935T3 (en) 2024-04-02
SI3506935T1 (sl) 2024-06-28
SA519401227B1 (ar) 2022-02-28
CN109890413A (zh) 2019-06-14
PT3506935T (pt) 2024-04-01
US20230310567A1 (en) 2023-10-05
HUE066007T2 (hu) 2024-07-28
CN118236477A (zh) 2024-06-25
AU2024223993A1 (en) 2024-10-24
US20210401964A1 (en) 2021-12-30
KR102692762B1 (ko) 2024-08-08
EP3506935A1 (en) 2019-07-10
CN109890413B (zh) 2024-04-16
MX2019002489A (es) 2019-10-21
PH12019500399A1 (en) 2019-05-20
EP3506935B1 (en) 2024-01-10
KR20230135178A (ko) 2023-09-22
ZA201901402B (en) 2024-06-26
KR20190044663A (ko) 2019-04-30
PH12019500399B1 (en) 2024-05-15
EP4309670A2 (en) 2024-01-24
PL3506935T3 (pl) 2024-06-10
LT3506935T (lt) 2024-04-25
EP4309670A3 (en) 2024-07-17
JP2021001182A (ja) 2021-01-07
ES2974992T3 (es) 2024-07-02

Similar Documents

Publication Publication Date Title
US20250009864A1 (en) Immunogenic compositions comprising conjugated capsular saccharide antigens, kits comprising the same and uses thereof
US11707514B2 (en) Neisseria meningitidis vaccine
AU2018328036B2 (en) Pneumococcal polysaccharides and their use in immunogenic polysaccharide-carrier protein conjugates
EP3576759B1 (en) Methods for production of capsular polysaccharide protein conjugates from streptococcus pneumoniae serotype 19f
KR20200051005A (ko) 폐렴구균 폴리사카라이드 및 면역원성 폴리사카라이드-담체 단백질 접합체에서의 그의 용도
AU2018225099A1 (en) Enhancing immunogenicity of Streptococcus pneumoniae polysaccharide-protein conjugates
HK40005680A (en) Neisseria meningitidis vaccine
HK40005680B (en) Neisseria meningitidis vaccine
EA040960B1 (ru) Вакцина против neisseria meningitidis
US20220031829A1 (en) Combined immunization against meningococcal disease and human papillomavirus
WO2024241172A2 (en) Methods for eliciting an immune response to respiratory syncycial virus and streptococcus pneumoniae infection