JP6526692B2

JP6526692B2 - 髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｘの新規の合成オリゴマー及びその調製方法

Info

Publication number: JP6526692B2
Application number: JP2016554647A
Authority: JP
Inventors: ジル，ダビンダー; ハラレ，キショア; クマールチッカラ，マノジュ
Original assignee: MSD Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt Ltd
Current assignee: MSD Wellcome Trust Hilleman Laboratories Pvt Ltd
Priority date: 2014-02-25
Filing date: 2015-02-24
Publication date: 2019-06-05
Anticipated expiration: 2035-02-24
Also published as: JP2017512203A; AU2015221820B2; EP3110825A1; US10183962B2; CN106061986A; US20170066794A1; KR20160124802A; CA2939887A1; WO2015128797A1; CN106061986B; AU2015221820A1; EP3110825B1

Description

本発明は新規オリゴマーの合成及びその調製方法に関する。特に本発明は、髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｘ（以後、Ｍｅｎ−Ｘ）のオリゴマーの化学合成、さらに詳しくは、Ｍｅｎ−Ｘの感染が原因で生じる細菌性髄膜炎に対する結合型ワクチンの開発にための候補としての四量体及びその使用に関する。

細菌性髄膜炎は年間およそ１，７００，０００の死亡例の原因となっており、先進国では少なくとも５〜１０％の症例が致死性であり、途上国では２０％の症例が致死性である。肺炎連鎖球菌（Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ）、インフルエンザ菌（Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ）ｂ型（Ｈｉｂ）及び髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）が世界中の細菌性髄膜炎の症例のほとんどに関与している。

合計１３の異なる血清型において、すなわち、髄膜炎菌のＡ、Ｂ、Ｃ、Ｄ、２９Ｅ、Ｈ、Ｉ、Ｋ、Ｌ、Ｗ１３５、Ｘ、Ｙ及びＺが今までに特定されているが、感染の約９０％は血清型Ａ、Ｂ、Ｃ、Ｙ及びＷ１３５による。その一方で、髄膜炎菌の血清型Ｘ（Ｍｅｎ−Ｘ）が最近、公衆衛生の実質的な脅威として出現した。血清型Ｘの発生は北アメリカ、ヨーロッパ、オーストラリア及び西アフリカで報告された。

ワクチン接種は感染性疾患の広がりを制御する最も有効な方法であると見なされている。髄膜炎菌の血清型Ａ、Ｃ、Ｙ及びＷを防御する幾つかの髄膜炎菌ワクチンがあるが、現在のところ、血清型Ｘが原因で生じる髄膜炎から保護することができる認可されたワクチンは市場にはない。そこで、血清型Ｘを防御するさらに広い保護を提供することができるさらに包括的なワクチンを開発するニーズがある。

現在のところ、結合型ワクチンは、好ましくは同じ微生物に由来するキャリアタンパク質に弱（多糖類）抗原を共有結合することによって創り出される多糖類抗原に対して高い保護を提供し、それによって、結合させた抗原上でＴ細胞依存性の免疫応答を介してキャリアの免疫的特質を付与するように開発される。

オリゴ糖または多糖類の合成における進歩及び生物学研究で開発された新しい技法は糖質ワクチンの設計に新しい道を開いている。天然に存在する糖質及び合成で作出される糖質の双方を含む多数の有望な糖質系のワクチン候補が近年調製されている。

天然に存在する糖質はワクチンの形成において重要な成分であることが判明しているが、それらは多数の欠点を有する。天然に存在する糖質に関連する主な欠点は、それ自体非常に難題であるその単離及び精製である。さらに、後に残される生物学的混入物または工程不純物によって種々の質的な保証の課題が出てくる。さらに、多糖類の質の一貫性の無さ及び多糖類のサイズ分布の課題はバッチの不具合をもたらす。細菌性の多糖類はそれが結合に使用され得る前に修飾されることが求められるということは、種々の程度でエピトープに損傷をもたらす。

その上、合成糖質に基づくワクチンは、それらの明確に定義された化学構造を含む天然に存在する糖質よりも多数の利点を有する。また、生物学的混入の機会が少ないのでさらに良好な安全性特性を提供する。さらに、合成分子は、結合の間での収率を高めるという要件の通りに、及びオリゴ糖分子に連結された内蔵のリンカーによって結合過程の間での免疫原性エピトープの損傷を出来るだけ抑えるという要件の通りに合成の間に修飾することができる。

Ｍｅｎ−Ｘ疾患の発生の増加を考慮して、天然の多糖類を模倣することができる合成Ｍｅｎ−Ｘオリゴ糖を調製するために幾つかの方法が展開されている。たとえば、「髄膜炎菌ワクチンのための合成オリゴ糖」と題する国際特許出願番号ＰＣＴ／ＵＳ２０１１／０３７３６４は、オリゴ糖及びその結合体の化学合成のための方法を開示している。その発明はさらに髄膜炎菌が原因で生じる感染を診断する、治療する及び予防するための免疫原性で免疫防御性の組成物及びその抗体を提供している。また、ＬａｕｒａＭｏｒｅｌｌｉ及びＬｕｉｇｉＬａｙ；Ｖｏｌｕｍｅ，２０１３，Ｉｓｓｕｅ，２，ＡＲＫＩＶＯＣによる「髄膜炎菌Ｘの莢膜多糖類断片の合成」と題する公開された文献は３つの結合可能なＭｅｎ−Ｘの莢膜多糖類断片の合成を開示している。

オリゴ類合成で使用される現在存在するシステムには、細菌性Ｍｅｎ−Ｘ多糖類を合成するための煩雑な製造及び精製の手順が関与する。方法は、時間がかかるか、または異なるサイズのオリゴマーの混合物を生じるかのいずれかである。一連のオリゴ糖の調製に関する総論はあるが、Ｍｅｎ−Ｘの四量体及びさらに高次のＭｅｎ−Ｘオリゴマーの調製に関する実現可能な程度の開示はない。上記で開示された従来技術はＭｅｎ−Ｘの二量体及び三量体の莢膜多糖類の化学合成を教示している。それらは四量体の形成を開示していないし、高い収率の二量体及び三量体を製造することはできない。

Ｂｅｉｌｓｔｅｉｎ，Ｊ．Ｏｒｇ．Ｃｈｅｍ．２０１４，１０，２３６７−２３７６にて報告された三量体の結合体は良好な免疫原性を提供することができない。また、従来技術は、合成の最初の工程における塩化Ｏ−テキシルジメチルシリル（ＯＴＤＳ）の脱保護に−４０℃を使用し、α−リン酸化に８〜９日を必要とするのに対して、本発明は、０℃〜室温で実施され、はるかに短い時間で完了する。さらに、従来技術は２４〜４８時間の水素化反応を開示しているのに対して、本発明は水素化反応に少ない時間を要する。

本発明の目的
従って、本発明の主な目的は新規のＭｅｎ−Ｘ莢膜オリゴマー、好ましくはＭｅｎ−Ｘ四量体の合成である。

本発明の別の目的は、新規のＭｅｎ−Ｘ莢膜オリゴマー、好ましくはＭｅｎ−Ｘ四量体の合成のための方法を提供することである。

本発明のさらに別の目的は、特定の鎖長の精製した糖を用いた合成経路を提供することである。

本発明のさらに別の目的は、髄膜炎菌に対する高い有効性を持つ結合型ワクチンで使用することができる合成Ｍｅｎ−Ｘ莢膜オリゴマーを提供することである。

本発明のさらに別の目的は、純度のための物理化学的な品質基準を満たす合成Ｍｅｎ−Ｘ莢膜オリゴマーの調製のための方法を提供することである。

本発明のさらに別の目的は、その費用対効果、高い有効性及び改善された保存可能期間である。

発明の要約
従って、本発明は、新規のＭｅｎ−Ｘ莢膜オリゴマーの合成、及びＭｅｎ−Ｘオリゴ糖の主鎖の構築のために２つの構成要素を組み合わせることによって前記Ｍｅｎ−Ｘ莢膜オリゴマーを合成する方法に関する。２つの構成要素は増殖ユニットと末端ユニットと名付けられる。増殖ユニットはいずれかの末端で鎖を終結させる末端ユニットに付加される。

増殖ユニットの合成に使用される出発物質は、豊富で安価な出発物質である塩酸グルコサミンを含む糖単糖類である。

一実施形態では、この合成における決定的な工程は、糖ホスホン酸のαまたはβのアノマー、好ましくはαアノマーの調製である。

合成全体の順序は、それがほんのわずかな工程にカラム精製を含むような方法にてグラムの規模で最適化される。グリコシド化は、リンカー部分に結合されたβアノマーと共にαアノマーの形成を生じる。カラムクロマトグラフィを用いてアノマー混合物を脱保護し、分離する結果として、αまたはβのリンカーの立体化学による末端基を製造する。前記精製された形態は^１Ｈ−ＮＭＲ解析によって確認される。

塩化ピバロイルのようなカップリング試薬を用いて増殖ユニットと末端ユニットを結合し、その後、ヨウ素を用いて酸化することによって二量体を調製する。二量体から三量体を調製するために、二量体の酢酸塩基のような保護基を脱保護し、二量体の生成に類似する条件を用いて増殖ユニットに結合させる。

酢酸塩の脱保護とカップリングの繰り返しは四量体ユニットを提供することになる。最終工程には、アジド基のＮＨＡｃへの一工程変換と、必要に応じて酢酸塩のような保護基の除去が続き、塩基処理によるベンジル及びＣｂｚの脱保護及び水素化は、四量体、五量体、六量体等（リンカー含む）を含む所望のＭｅｎ−Ｘ高次オリゴマーを提供することになる。

本発明は結果的に、非常に短い持続時間で新規の高次オリゴマーの合成を生じる。

本発明は、結合の間に柔軟性を提供することによって立体障害を出来るだけ抑えるという結果になるオリゴマーとの６Ｃリンカーの連結を可能にする。

また、本発明の６Ｃリンカーは、従来技術の場合におけるリン酸塩を介した連結の代わりに糖環に直接連結される。リンカーのこの位置決めは、好適に最適化されて結合型ワクチンの収率と同様に免疫原性の向上を結果的に生じ、化合物にさらに良好な安定性を付与するであろう。

新規のアプローチを用いたＭｅｎ−Ｘ莢膜多糖類の合成について考案される説明工程はすべて、オリゴマーのさらに良好な収率、図１に示すような向上した抗原性、及び図７と図１０に示すような９５％を超える純度を生じる。

細菌性多糖類、αリンカー（１）を伴った合成Ｍｅｎ−Ｘ四量体及びα（１−ＴＴ）リンカーを伴ったＭｅｎ−Ｘ四量体−ＴＴ結合体による阻害ＥＬＩＳＡにおける抗Ｍｅｎ−Ｘ抗体の細菌性多糖類への結合の阻害比率を示すグラフである。 αリンカー（１）を有するＭｅｎ−Ｘ四量体の^１ＨＭＲスペクトルを示す図である。１の^１３ＣＮＭＲスペクトルを示す図である。１のＤＥＰＴ−ＮＭＲスペクトルを示す図である。１の２ＤＣＯＳＹＮＭＲスペクトルを示す図である。１の２ＤＨＳＱＣＮＭＲスペクトルを示す図である。１のＨＰＬＣクロマト図である。 β−リンカー（１Ａ）を有するＭｅｎ−Ｘ四量体の^１ＨＭＲスペクトルを示す図である。 αリンカー（１Ａ）の^１３ＣＮＭＲスペクトルを示す図である。１ＡのＨＰＬＣクロマト図である。

従って、本発明は、細菌性髄膜炎及び髄膜炎菌血症のような髄膜炎疾患の他の形態についての原因病原体の１つであるｍｅｎｉｎｇｏｃｏｃｃｕｓ（髄膜炎菌）と呼ばれることが多いＮｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（髄膜炎菌）に対する結合型ワクチンの開発のための髄膜炎菌莢膜多糖類、さらに詳しくはＭｅｎ−Ｘオリゴ糖の化学合成に関する。前記合成は、以下の工程：
（１）スキーム１で示すようなヘミアセタール（化合物１０）の合成と、
（２）スキーム２で示すような増殖ユニット（化合物１２）及び末端ユニット（化合物１４）の合成と
（３）スキーム３で示すような高次オリゴマーの合成とにおいて達成される。

本発明の好まれる実施形態を記載する前に、本発明は、変化しうるので、記載される特定の物質に限定されないと理解される。本明細書で使用される用語は特定の実施形態を記載することのみを目的とするのであって、決して本発明の範囲を限定することを意図するものではないとも理解される。

本明細書で使用されるとき、単数形態「ａ」、「ａｎ」及び「ｔｈｅ」は文脈が明瞭に指示しない限り、複数の参照を含むことが留意されなければならない。

用語「ｃｏｍｐｏｕｎｄ」及び「ｃｏｍｐｄ」は相互交換可能に使用されている。

ヘミアセタールユニットの合成
本発明の実施形態の１つでは、スキーム１はヘミアセタール（１０）の合成を示す。Ｍｅｎ−Ｘ莢膜オリゴ糖類の合成で使用される出発物質はグルコサミンＨＣｌ、さらに具体的には、しかし、それに限定されないＤ（±）グルコサミンＨＣｌ化合物（化合物２）から選択される糖である。
スキーム１．ヘミアセタールユニット（化合物１０）の合成
４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α，β−Ｄ−グルコピラノース

ピリジンの存在下で、たとえば、イミダゾール−１−スルホニルアジド、Ｎａ_２ＣＯ_３、ＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏのような、しかし、これらに限定されないジアゾ転移試薬にグルコサミンＨＣｌを供して化合物３を得る。化合物２を化合物３に変換するのに使用される有機溶媒は、メタノールまたはエタノールまたはそのいずれかと水との組み合わせから選択されるが、これらに限定されない。そのように得られた化合物３を、たとえば、ｐ−チオクレゾールのようなドナー基、三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（ＢＦ_３・ＯＥｔ_２）及び無水ジクロロメタン（ＤＣＭ）と０℃〜室温にて３〜４日間反応させて化合物４を生じる。化合物３を化合物４に変換するのに使用される有機溶媒はジクロロメタン、アセトニトリルまたはクロロホルムから選択される。メタノールまたはエタノールまたはそれらの混合水溶液の組み合わせから選択される有機溶媒の存在下でたとえば、ナトリウムメトキシドのような脱アセチル化剤に、そのように得られた化合物４を０℃〜室温にて３〜７時間、好ましくは４時間供して化合物５を生じる。そのように得られた化合物５を、アセトニトリルまたはジクロロメタンから選択されるが、これらに限定されない有機溶媒の存在下または非存在下で室温にてベンズアルデヒドジメチルアセタール［ＰｈＣＨ（ＯＭｅ）_２］、ｐ−トルエンスルホン酸（ｐ−ＴＳＡ）、アセトニトリルと一晩反応させることによって化合物５にベンジリデン保護を受けさせる。反応は化合物６の形成を生じ、次いでそれを、ジメチルホルムアミド（ＤＭＦ）及びジメチルスルホキシドから選択されるが、これらに限定されない有機溶媒の存在下にて臭化ベンジルと水酸化ナトリウムによる室温での２〜４時間、好ましくは３時間のベンジル保護に供する。上記の反応は化合物７の形成を生じる。次いで化合物７を、無水ジクロロメタン（ＤＣＭ）、クロロホルム、テトラヒドロフランから選択されるが、これらに限定されない溶媒にてトリエチルシラン（Ｅｔ_３ＳｉＨ）及び三フッ化ホウ素ジエチルエーテラート（ＢＦ_３・ＯＥｔ_２）と０℃にて２〜４時間、好ましくは３時間反応させながら、位置選択的な開環に供して化合物８を生じる。化合物８は、ピリジン及びジクロロメタン及び４−ジメチルアミノピリジンから選択されるが、これらに限定されない溶媒の存在下で無水酢酸（Ａｃ_２Ｏ）と０℃にて３．５〜５時間、好ましくは４．５時間反応させながらアシル化を受け、化合物９を生じる。そのように得られた化合物９を、等モル比のアセトン：Ｈ_２Ｏ、ジクロロメタン：Ｈ_２Ｏから選択されるが、これらに限定されない溶媒にてＮ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）と０℃にて１〜３時間、好ましくは２時間反応させながらチオ−トリル脱保護に供し、化合物１０を得る。

前記化合物１０は、増殖ユニット（１２）と同様に２つの末端ユニット、すなわち、１４及び１４Ａを合成するのに共通の中間体として役立つ。

増殖ユニット及び末端ユニットの調製の模式的表示をスキーム２にて以下のように示す。
スキーム２：増殖ユニット（化合物１２）及び末端ユニット（化合物１４と化合物１４Ａ）の合成

スキーム１からそのように得られた化合物１０を、末端水素の置換のためにジフェニルホスフィトピリジンに限定されないホスフィチル化剤、次いでトリエチルアミン（Ｅｔ_３Ｎ−ＴＥＡ）とＨ_２Ｏ（１：１）の等モル混合物に室温（８５％）で２時間、好ましくは１時間供して化合物１１を得、それはα及びβの混合物を含有する単量体ブロックである。化合物１２としての化合物１１のαアノマーを選択的に及び絶対的に受け取るために、そのように得られた化合物１１をリン酸（Ｈ_３ＰＯ_４）及びアセトニトリルと室温で４日間反応させる。そのように得られた化合物１２はＭｅｎ−Ｘ四量体の合成において増殖ユニットとして作用する。

テトラヒドロフラン中にてＮ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）とトリフル酸の存在下で化合物９をリンカー６−（Ｚ−アミノ）−１−ヘキサノールで−５℃にて１時間処理し、化合物１３を生じる。連続した３工程にて、ＮａＯＭｅ、ＭｅＯＨと室温〜５０℃で反応させることによって化合物１３を脱アセチル化に供し、末端ユニットを得る。そのように得られた末端ユニットをシリカゲルカラムクロマトグラフィによる分離に供して、α位に配向する６Ｃリンカーを伴った化合物１４（Ｒ^１＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ、Ｒ^２＝Ｈ）及びβ位に配向する６Ｃリンカーを伴った化合物１４Ａ（Ｒ^１＝Ｈ、Ｒ^２＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ）を得る。

そのように得られた化合物１４及び１４Ａはオリゴマーの合成について末端ユニットとして作用する。

オリゴマーの合成
いったん増殖ユニット及び末端ユニットが調製されると、その後、以下に言及される方法によって及びスキーム３にて示すように、それに続くオリゴマーを調製することができる。

増殖ユニット１２を末端ユニット１４と反応させて化合物１５（Ｒ^１＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ、Ｒ^２＝Ｈ、Ｒ^３＝Ａｃを持つαアノマー）を得ることによって二量体を調製する。同様に、増殖ユニット１２を末端ユニット１４Ａと反応させて二量体化合物１５Ａ（Ｒ^１＝Ｈ、Ｒ^２＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ、Ｒ^３＝Ａｃを持つβアノマー）を得る。二量体を調製する上記の反応は、室温にて３０分間ピリジンにおける塩化ピバロイルカップリング試薬に限定されないカップリング試薬の存在下で実施され、それにピリジン：Ｈ_２Ｏ（９．７５：０．２５）における−４０℃での１．５時間のヨウ素を用いた酸化が続き、良好な収率での二量体の化合物１５（８６％）及び化合物１５Ａ（６９％）を生じる。
スキーム３：高次オリゴマー（二量体、三量体及び四量体）の合成

そのように得られた化合物１５及び１５Ａを、メタノール中でナトリウムメトキシドのような塩基と０℃〜５５℃にて１．５時間反応させることによって脱アセチル化して、それぞれ、化合物１６（定量的）（Ｒ^１＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ、Ｒ^２＝Ｈ、Ｒ^３＝Ｈを持つαアノマー）及び化合物１６Ａ（７８％）（Ｒ^１＝Ｈ、Ｒ^２＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ、Ｒ^３＝Ｈを持つβアノマー）を得る。

その後、それぞれ高い収率で三量体の化合物１７（Ｒ^１＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ、Ｒ^２＝Ｈ、Ｒ^３＝Ａｃを持つαアノマー）及び化合物１７Ａ（Ｒ^１＝Ｈ、Ｒ^２＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ、Ｒ^３＝Ａｃを持つβアノマー）を生成するために、類似のカップリング剤と条件を用いて、増殖ユニット１２に得られた二量体化合物（化合物１６及び化合物１６Ａ）を再び結合させる。

得られた化合物１７及び化合物１７Ａを独立して脱アシル化剤に供して、それぞれ化合物１８（Ｒ^１＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ、Ｒ^２＝Ｈ、Ｒ^３＝Ｈを持つαアノマー）及び化合物１８Ａ（Ｒ^１＝Ｈ、Ｒ^２＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ、Ｒ^３＝Ｈを持つβアノマー）を生じる。

そのように得られた結果的な化合物１８及び１８Ａを反復反応条件に供して、四量体（１及び１Ａ）、五量体、六量体等を含む高次合成オリゴマー（Ｘ及びＸＡ）、さらに好ましくは四量体の化合物１９（Ｒ^１＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚ、Ｒ^２＝Ｈを持つαアノマー）及び化合物１９Ａ（Ｒ^１＝Ｈ、Ｒ^２＝−（ＣＨ_２）_６ＮＨＣｂｚを持つβアノマー）を得る。

そのように得られた化合物１９及び１９Ａを、（ａ）室温でのチオ酢酸とピリジンによる処理に供してアジド基のＮＨＡｃへの変換を生じ、その後、（ｂ）酢酸基の脱保護と（ｃ）水素化によるベンジル及びＣｂｚの脱保護に供して、四量体（１及び１Ａ）、五量体、六量体等を含む高次合成オリゴマー（Ｘ及びＸＡ）を生じる。Ｍｅｎ−Ｘオリゴマーの双方のアノマーエピマーは上述のスキームに従うことによって推測することができる。

そのように得られる四量体（１）及び（１Ａ）は短い持続時間の範囲内で迅速に合成される。前記四量体（１）及び（１Ａ）を合成するのにかかる時間は２２５時間〜２７６時間の範囲、好ましくは２５７時間以内である。

そのように得られるアノマーのオリゴマー、すなわち、Ｍｅｎ−Ｘ四量体１及びＭｅｎ−Ｘ四量体１Ａのいずれか一方または双方は、Ｍｅｎ−Ｘ感染が原因で生じる細菌性髄膜炎に対する結合型ワクチンを開発するための見込みのある候補として使用される。
Ｍｅｎ−Ｘ四量体１

Ｍｅｎ−Ｘ四量体１Ａ

方法の上記の詳細な記載は、非限定の実施例によって説明される。

実施例１：化合物３：ｌ，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−アジド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース（３）の合成

グルコサミン（２０ｇ，９３ミリモル）の撹拌されたメタノール溶液にｌＨ−イミダゾール−ｌ−スルホニルアジド（１９．３ｇ，１１０ミリモル）を加え、その後無水炭酸ナトリウム（１９．７ｇ，１８６ミリモル）を加えた。窒素雰囲気下で１５分間、室温（ｒｔ）で反応混合物を撹拌させておいた。反応混合物にＣｕＳＯ_４・５Ｈ_２Ｏ（９７ｍｇ，９．３ミリモル）を加え、ｒｔで３時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣによってモニターして）、ブフナー漏斗を介して反応混合物を濾過した。固形残留物を１０％のメタノール：酢酸エチル（２００ｍＬ）で洗浄した。粗精製の反応塊２−アジド−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２０ｇ）をそのまま次の工程で使用した。

２−アジド−２−デオキシ−Ｄ−グルコース（２０ｇ，９７ミリモル）の撹拌されたピリジン（１２０ｍＬ）溶液に無水酢酸（８０ｍＬ，７７６ミリモル）を一滴ずつ加えた。反応混合物を０℃で１時間及びｒｔで２時間撹拌させておいた。反応の完了後（ＴＬＣによってモニターして）、減圧下で反応混合物を濃縮した（過剰なピリジンを除くために）。固形残留物をＨ_２Ｏ（２００ｍＬ）で希釈し、３０％酢酸エチル：石油エーテル（２００ｍＬ）で２回抽出した。有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。２工程で９２％の収率にて１６ｇの純粋な生成物３が得られた。

実施例２：化合物４：４−メチルフェニル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アジド−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド（４）の合成

０℃にて窒素雰囲気下で、ｌ，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−アジド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース（３）（１２０ｇ，３２１ミリモル）の撹拌されたＤＣＭ（１．２Ｌ）溶液にｐ−チオクレゾール（７９．８ｇ，６４３ミリモル）を加えた。反応混合物を５分間撹拌し、その後、窒素雰囲気下でＢＦ_３・ＯＥｔ_２（１１９ｍＬ，９６５ミリモル）を３０分かけて一滴ずつ加えた。反応物をｒｔで７２時間撹拌させておいた。最大限の出発物質を消費した後（ＴＬＣによってモニターして）、反応混合物を０℃に冷却し、ｐＨの中和までＮａＨＣＯ_３（１Ｌ）で希釈した。抽出した有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。溶離液として２％酢酸エチル：石油エーテルを用いたフラッシュゲルカラムクロマトグラフィによって粗精製残留物を精製して黄色のシロップの化合物４、８０ｇ、収率６０％を得た。

実施例３：化合物５：４−メチルフェニル２−アジド−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド（５）の合成

０℃にて窒素雰囲気下で過アセチル化チオグリコシド４（８２ｇ，１８７ミリモル）の撹拌されたＭｅＯＨ（１Ｌ）溶液にＮａＯＭｅ（４０．４ｇ，４３７ミリモル）を３０分かけて少しずつ加えた。反応混合物をさらに３時間ｒｔで撹拌させておいた。反応の完了後（ＴＬＣによってモニターして）、反応混合物のｐＨが中性になるまで反応混合物に酢酸を加えた。反応混合物を酢酸エチル（８００ｍＬ）で２回抽出した。分離した有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。１１０ｇの粗精製物をそのまま次の工程で使用した。

実施例４：化合物６：４−メチルフェニル２−アジド−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド（６）の合成

トリオールチオグリコシド５（１１０ｇ，３５３ミリモル）の撹拌されたアセトニトリル（１Ｌ）溶液にベンズアルデヒドジメチルアセタール（１０６ｍＬ，７０７ミリモル）を加え、その後ＰＴＳＡ（６．６ｇ，３５．３ミリモル）を一気に加えた。反応混合物をｒｔで一晩撹拌させておいた。反応の完了後（ＴＬＣによってモニターして）、反応混合物を水（１Ｌ）で希釈し、酢酸エチル（１Ｌ）で２回抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗精製塊をＤＣＭ（５００ｍＬ）で希釈し、その後石油エーテル（２Ｌ）を加えて生成物の沈殿（白っぽい固形物）を生じた。沈殿物をブフナー漏斗で濾過し、淡黄白色の残留物を回収し、乾燥させた。単離された１００ｇ、純度７１％の生成物６。

実施例５：化合物７：４−メチルフェニル２−アジド−４，６−Ｏ−ベンジリデン−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド（７）の合成

ベンジリデンアルコール６（９０ｇ，２２５ミリモル）の撹拌されたＤＭＦ（３００ｍＬ）溶液にｒｔにて窒素雰囲気下でＮａＯＨ（２２ｇ，５６３ミリモル）を加え、その後、触媒量のＴＢＡＩ（４．１ｇ，１１．２５ミリモル）を加えた。反応混合物をｒｔで１５分間撹拌したままにし、その後、臭化ベンジル（５２．２ｍＬ，４５０ミリモル）を３０分かけて一滴ずつ加えた。反応混合物をｒｔでさらに３時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣによってモニターして）、反応混合物を氷冷水（９００ｍＬ）で希釈し、固形物の沈殿を生じた。ワットマン濾紙を介して固形塊を濾別した。固形塊を水（５００ｍＬ）で洗浄し、その後石油エーテル（４５０ｍＬ）で２回洗浄し、残留物を真空で乾燥させた。９１％の収率で純粋な生成物７として得られた１００ｇの淡黄白色の固形物。

実施例６：化合物８：４−メチルフェニル２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド（８）の合成

化合物７（３０ｇ，６１．２７ミリモル）の撹拌されたＤＣＭ（６００ｍＬ）溶液に０℃にて窒素雰囲気下でトリエチルシラン（１１７ｍＬ，７３５ミリモル）を加えた。反応混合物を０℃で１５分間撹拌したままにし、その後、同じ温度で撹拌させておいたＢＦ_３・ＯＥｔ_２（１１．６ｍＬ，９１．９ミリモル）を一滴ずつ加えた。反応の完了後、０℃にて反応混合物を重炭酸ナトリウムの飽和溶液（３００ｍＬ）で希釈し、抽出によって有機層を分離した。水性層をＤＣＭ（３００ｍＬ）でもう１回抽出し、分離した。回収した有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。溶離液として石油エーテル：酢酸エチル（７：３）を用いたフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィによって粗精製の残留物を精製し、白色固形物の化合物８、２８ｇ、収率９５％を得た。

実施例７：化合物９：４−メチルフェニル４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド（９）の合成

ジ−ベンジルアルコール８（９０ｇ，１８３ミリモル）の撹拌されたピリジン（１Ｌ）溶液に０℃にて窒素雰囲気下で無水酢酸（３４．５ｍＬ，３６６ミリモル）を加え、その後、ＤＭＡＰ（触媒）を加えた。反応混合物をｒｔでさらに３時間撹拌させておいた。反応の完了後（ＴＬＣによってモニターして）、反応混合物を減圧下で濃縮した（過剰のピリジンを除くために）。残留物を水（９００ｍＬ）で希釈し、酢酸エチル（９００ｍＬ）で２回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。精製することなく得られた８５ｇ（収率９８％）の純粋な生成物９。

実施例８：化合物１０：４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α，β−Ｄ−グルコピラノース（１０）の合成

化合物９（１０ｇ，１８．７ミリモル）の撹拌されたアセトン：水（７：１）（２４０ｍＬ）溶液に０℃にてＮＢＳ（１３．３ｇ，７４．９ミリモル）を少しずつ加えた。反応混合物を同じ温度で３０分から１時間撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣによってモニターして）、飽和チオスルホン酸ナトリウム（２０ｍＬ）で反応混合物の反応を止め、減圧下で濃縮した。反応塊をＤＣＭ（３００ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機物を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、濃縮した。石油エーテル中１０％の酢酸エチルを用いてシリカ上で粗精製の塊を精製し、淡黄白色固形物としてヒドロキシ化合物７ｇ、収率８５％を得た。

実施例９：化合物１２：４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスホン酸水素の合成

ヘミアセタール化合物１０（４．５ｇ，１０．５ミリモル）をピリジン（４５ｍＬ）に溶解し、亜リン酸ジフェニル（１４．１ｍＬ，７３．７ミリモル）でゆっくり処理した。得られた反応混合物を室温で２時間撹拌した。０℃にて反応混合物をＥｔ_３Ｎ：Ｈ_２Ｏ（１：１、４０ｍＬ）で希釈し、さらに３０分間撹拌させておいた。反応混合物を減圧下で濃縮し、次いでトルエンを用いて２回同時蒸発させた。残留物を飽和Ｎａ_２ＣＯ_３（５０ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（６０×２）を用いて抽出した。有機層を濾過し、無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、減圧下で濃縮した。溶離液としてＭｅＯＨ：ＤＣＭ＋１％ＴＥＡ（０５：９５）を用いたフラッシュゲルカラムクロマトグラフィによって残留物を精製し、淡黄色のシロップのホスホン酸塩（４ｇ、８１％）を得た。無水アセトニトリルにおけるホスホン酸塩（４ｇ、６．６ミリモル）と触媒量のホスホン酸のアノマー混合物の上記で得た生成物を室温で４日間撹拌した。０℃にてトリエチルアミン（２．５ｍＬ）を加えることによって反応を止め、真空下で反応物を濃縮し、飽和Ｎａ_２ＣＯ_３（１００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（１００ｍＬ×２）で抽出した。有機層を乾燥させ（Ｎａ_２ＳＯ_４）、減圧下で濃縮して粗生成物を得、それを、溶離液としてＭｅＯＨ−ＤＣＭ＋１％Ｅｔ_３Ｎ（３：９７）を使用するフラッシュシリカで精製して茶色の濃厚なシロップとして純粋な化合物１２（２ｇ、５０％）を得た。

実施例１０：化合物１４及び１４Ａ：６−（ベンジルオキシカルボニル）アミノヘキシル２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド（１４）及び６−（ベンジルオキシカルボニル）アミノヘキシル２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド（１４Ａ）の合成

４−メチルフェニル４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド（９）（６．８ｇ，１２．７ミリモル）とＮＩＳ（５．７２ｇ，２５．４ミリモル）とベンジルＮ−（６−ヒドロキシヘキシル）カルバメート（３．８ｇ，１５．２ミリモル）とをＴＨＦ（８０ｍＬ）に溶解し、不活性雰囲気下で−５℃にて撹拌し、冷却した。上記混合物にトリフル酸（０．０５ｍＬ）を５分かけて一滴ずつ加え、反応混合物を同じ温度で１時間撹拌した。完了後、Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３とＮａＨＣＯ_３の飽和溶液（それぞれ２００ｍＬ）で反応混合物を希釈した。反応混合物を酢酸エチル（１００ｍＬ）で３回抽出した。合わせた有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。粗精製の反応塊を脱アセチル化に進めた。粗精製の反応塊をメタノール（７０ｍＬ）に溶解し、ＮａＯＭｅ（２．２ｇ）をｒｔで１０分かけて少しずつ加えた。反応混合物を５０℃で１時間加熱した。完了の後、反応混合物を室温に冷却し、中性ｐＨまでＡｍｂｅｒｌｉｔｅＩＲ１２０酸性樹脂によって中和した。ワットマン濾紙を介して反応混合物を濾過し、濾液を減圧下で濃縮した。溶離液として１５〜２０％の酢酸エチル：石油エーテルを用いたフラッシュゲルカラムクロマトグラフィによって粗精製物を精製して黄色の濃厚なシロップとして化合物１４（２．１ｇ、２７％）及び化合物１４Ａ（１．８ｇ、収率１８％）を得た。

実施例１１：化合物１５及び１５Ａ：６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリエチルアンモニウム塩（１５）及び６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，トリエチルアンモニウム塩（１５Ａ）の合成

α−Ｈ−ホスホン酸塩１２（２．８７ｇ，４．８４ミリモル）及びアルコール１４（１．５ｇ，２．４２ミリモル）の混合物を真空下で３回無水ピリジンと共に同時蒸発させた。混合物を無水ピリジン（５０ｍＬ）に溶解し、室温にて窒素雰囲気下で塩化ピバロイル（０．９ｍＬ、１０ミリモル）を一滴ずつ加え、撹拌を３０分間継続した。反応混合物を−４０℃に冷却し、ピリジン：Ｈ_２Ｏ（８ｍＬ、９．７５：０.２５）におけるＩ_２（１.２ｇ、４．８５ミリモル）の溶液を１５分間かけて加え、１時間撹拌した。Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３・５Ｈ_２Ｏ水溶液（２００ｍＬ、１Ｍ）を用いて反応を止めた。反応混合物を水（２００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（３００ｍＬ×２）を用いて抽出した。分離した有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。溶離液としてＭｅＯＨ−ＤＣＭ＋１％Ｅｔ_３Ｎ（４：９６）を用いたフラッシュシリカで粗精製物を精製し濃厚な液体として純粋な化合物１５（２．５ｇ、８６％）を得た。同様に同一の条件下でα−Ｈ−ホスホン酸塩１２を１４Ａと反応させて６９％の収率で１５Ａを得た。

実施例１２：化合物１６及び１６Ａ：６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリエチルアンモニウム塩（１６）及び６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，トリエチルアンモニウム塩（１６Ａ）の合成

０．２５ＭのＣＨ_３ＯＮａにおける二量体化合物１５（２．５ｇ，２．０４ミリモル）のメタノール（２５ｍＬ）溶液を５５℃で１．５時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＩＲ−１２０（Ｈ^＋）樹脂で中和し、ワットマン濾紙を介して濾過し、濃縮した。溶離液としてＭｅＯＨ−ＤＣＭ＋１％Ｅｔ_３Ｎ（４：９６）を用いたフラッシュシリカで粗精製物を精製し茶色のシロップ（２．４ｇ、定量的）として純粋な化合物１６を得た。同様に同一の条件下で化合物１５Ａをナトリウムメトキシドと反応させて７８％の収率で化合物１６Ａを得た。

実施例１３：化合物１７及び１７Ａ：６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，ビス−トリエチルアンモニウム塩（１７）及び６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，ビス−トリエチルアンモニウム塩（１７Ａ）の合成

α−Ｈ−ホスホン酸塩１２（２．５５ｇ，４．２９ミリモル）とアルコール１４（１．７ｇ，１．４３ミリモル）の混合物を真空下で無水ピリジンと共に３回同時蒸発させた。残留物を無水ピリジン（４０ｍＬ）に溶解し、塩化ピバロイル（１．０７ｍＬ，８．５８ミリモル）を１０分かけて一滴ずつ加え、室温にて３０分間撹拌した。反応混合物を−４０℃に冷却し、ピリジン：水（９．７５：０.２５）（１０ｍＬ）中のＩ_２（２．１ｇ，８．５８ミリモル，６当量）の溶液を１５分かけて加えた。冷却を止め、反応混合物をさらに１時間撹拌させておいた。Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３・５Ｈ_２Ｏ（５０ｍＬ）の飽和溶液の添加によって反応を止めた。反応混合物を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（４００ｍＬ）で２回抽出した。分離した有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。溶離液としてＭｅＯＨ−ＤＣＭ＋１％Ｅｔ_３Ｎ（５：９６）を用いたフラッシュシリカで残留物を精製し、黄色のシロップ（１．５ｇ、６０％）として化合物１７を得た。同様に、同一の条件下でα−Ｈ−ホスホン酸塩１２を１６Ａと反応させることによって１７Ａを調製した。

実施例１４：化合物１８及び１８Ａ：６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，ビス−トリエチルアンモニウム塩（１８）及び６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，ビス−トリエチルアンモニウム塩（１８Ａ）の合成

０．２５ＭのＣＨ_３ＯＮａにおける三量体化合物１７（１．５ｇ，０．８５ミリモル）のメタノール（２０ｍＬ）溶液を５５〜６０℃で２時間撹拌した。反応混合物を室温に冷却し、メタノール（２０ｍＬ）で希釈し、ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＩＲ−１２０（Ｈ^＋）樹脂で中和し、ワットマン濾紙を介して濾過し、濃縮した。溶離液としてＭｅＯＨ−ＤＣＭ＋１％Ｅｔ_３Ｎ（５：９６）を用いたフラッシュシリカで粗精製物を精製し、黄色の濃厚なシロップ（１．３ｇ、８９％）として純粋な化合物１８を得た。同様に、同一の条件下でナトリウムメトキシドと反応させることによって６９％の収率で調製された化合物１８Ａ。

実施例１５：化合物１９及び１９Ａ：６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−トリエチルアンモニウム塩（１９）及び６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−トリエチルアンモニウム塩（１９Ａ）の合成

三量体ヒドロキシル化合物１８（１．３ｇ，０．７５ミリモル）とα−Ｈ−ホスホン酸塩１２（１．３ｇ，２．２５ミリモル）の混合物を真空下で無水ピリジンと３回同時蒸発させた。混合物を無水ピリジン（３０ｍＬ）に溶解し、室温にて不活性雰囲気下で塩化ピバロイル（０．６５ｍＬ，５．２５ミリモル）を１０分かけて一滴ずつ加えた。反応混合物を３０分間撹拌させておいた。反応混合物を−４０℃に冷却し、ピリジン：水（９．７５：０.２５、３ｍＬ）におけるＩ_２（１.３ｇ、５．２５ミリモル）の溶液を１５分間かけて加えた。冷却を止め、反応混合物をさらに１時間撹拌させておいた。Ｎａ_２Ｓ_２Ｏ_３・５Ｈ_２０（５０ｍＬ）の飽和溶液の添加によって反応を止めた。反応混合物を室温に冷却し、水（１００ｍＬ）で希釈し、ＤＣＭ（２００ｍＬ）で２回抽出した。分離した有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。溶離液としてＭｅＯＨ−ＤＣＭ＋１％Ｅｔ_３Ｎ（５：９５）を用いたフラッシュシリカゲルカラムクロマトグラフィによって残留物を精製し、黄色の半固形物（０．９ｇ、５３％）として化合物１９を得た。同様に、同一の条件下で化合物１８Ａをα−Ｈ−ホスホン酸塩１２と反応させて８０％の収率で化合物１９Ａを調製した。

実施例１６：化合物ＭｅｎＸ四量体１及び１Ａの合成：６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−トリエチルアンモニウム塩（１）及び６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−トリエチルアンモニウム塩（１Ａ）の合成

四量体アジド化合物１９（０．９ｇ，０．４ミリモル）の撹拌された無水ピリジン（１０ｍＬ）溶液に室温にて不活性雰囲気下でチオ酢酸（３．２ｍＬ，過剰）を１０分かけて一滴ずつ加えた。反応混合物を同じ温度で一晩撹拌した。反応の完了後（ＴＬＣでモニターして）、反応混合物を冷水（３０ｍＬ）、その後、重炭酸ナトリウムの飽和溶液（２０ｍＬ）で希釈した。反応混合物を（７０ｍＬ）のＤＣＭで２回抽出した。分離した有機層を無水硫酸ナトリウム上で乾燥させ、濾過し、減圧下で濃縮した。残留物を最小容量のＤＣＭ（４ｍＬ）で希釈し、次いで石油エーテル（４０ｍＬ）を加えて、生成物の固形沈殿を生じた。有機層を静かに捨て、溶離液として５〜１０％ＭｅＯＨ−ＤＣＭ＋１％ＴＥＡを用いたカラムクロマトグラフィによって残留物を精製して茶色の半固形物としてＮ−アセチル四量体化合物を得た。収量：６００ｍｇ、４５％。同様に、同一条件下でピリジン中にて化合物１９Ａをチオ酢酸と反応させて収率４０％でＮ_３の代わりにＮＨＡＣ持つ化合物を得た。

６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−トリエチルアンモニウム塩、６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アセトアミド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−トリエチルアンモニウム塩

上記工程のＮ−アセチル四量体（６００ｍｇ，０．２５３ミリモル）の撹拌された無水メタノール（２０ｍＬ）溶液に窒素雰囲気下でＮａＯＭｅ（６００ｍｇ、過剰）を５分かけて少しずつ加えた。反応混合物を１．５時間６０℃に加熱した。反応混合物を室温に冷却し、ＡｍｂｅｒｌｉｔｅＩＲ−１２０樹脂を用いて中和した。ワットマン濾紙を介して反応混合物を濾過し、メタノール（５０ｍＬ）を用いて残留物を２〜３回洗浄した。回収した濾液を減圧下で濃縮した。溶離液として１０％ＭｅＯＨ：ＤＣＭ＋１％ＴＥＡを用いたフラッシュゲルカラムによって粗精製の反応塊を精製し四量体ヒドロキシ化合物（５００ｍｇ、８４％）を得た。同様の条件下で、７６％の収率にてβリンカーを持つ四量体を脱アセチル化する。

６−アミノヘキシル（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−ナトリウム塩（Ｍｅｎ−Ｘ四量体１）及び６−アミノヘキシル（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−ナトリウム塩（Ｍｅｎ−Ｘ四量体１Ａ）

上記工程で調製した四量体ヒドロキシ（３００ｍｇ，０．１２８ミリモル）のメタノール：水，１：１（３０ｍＬ）溶液に不活性雰囲気下で室温にてＰｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（２０モル％，６００ｍｇ）を加えた。水素雰囲気下で反応混合物を１０４ｐｓｉにて１５時間撹拌させておいた。反応の完了後（ＴＬＣによってモニターして）、セライト床を介して反応混合物を濾過した。セライト床を３０ｍＬのＨ_２Ｏで３回洗浄した。分離した濾液を減圧下で濃縮した。粗精製の塊を溶媒処理によって精製した。残留物をＤＣＭで洗浄し、その後冷メタノールで（５ｍＬ×２）回洗浄した。得られた白色の固形化合物。単離された収量：１２０ｍｇ、８６％。
ＨＰＳＥＣ純度：９８％．正確な質量：１２３５．８４．観察された質量：（Ｍ−Ｎａ）−１２１２．３４．
ＩＲ：３４３６，２５１７，１６３２，１３８３，１４４３，１２０４．
^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ５．５５−５．４４（ｍ，３Ｈ），４．１０−３．９６（ｍ，４Ｈ），３．９６−３．８３（ｍ，１１Ｈ），３．８２−３．５６（ｍ，１２Ｈ），３．５０（ｔ，Ｊ＝９．８Ｈｚ，１Ｈ），３．４５−３．４２ｍ，１Ｈ），２．９３（ｓ，２Ｈ），２．１０−１．９２（ｍ，１２Ｈ），１．６９−１．４８（ｍ，４Ｈ），１．４３−１．２７（ｍ，４Ｈ）

^1３Ｃ−ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）δ１７４．５，１７４．４，１７４．２，１７１．０，９６．４，９４．４，９４．３，９４．１，９４．０，７４．４，７４．３，７３．８，７３．７，７３．０，７２．０，７１．２，７０．８，７０．７，７０．１，６９．９，６９．４，６８．０，６０．３，６０．２，６０．０，５３．７，５３．６，５３．５，５３．４，３９．４，２８．２，２６．７，２５．３，２４．８，２２．１，２２．０，２１．８

６−アミノヘキシル（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−ナトリウム塩（Ｍｅｎ−Ｘ四量体１）

四量体ヒドロキシ（１００ｍｇ，０．０４２ミリモル）のメタノール：水，７：３（３０ｍＬ）溶液に不活性雰囲気下で室温にてＰｄ（ＯＨ）_２／Ｃ（２０モル％）を加えた。水素雰囲気下で６０ｐｓｉにて６時間、反応混合物を撹拌させておいた。反応の完了後（ＴＬＣによってモニターして）、セライト床を介して反応混合物を濾過した。セライト床を３０ｍＬのＨ_２Ｏで３回洗浄した。分離した濾液を減圧下で濃縮した。粗精製の塊を溶媒処理によって精製した。残留物をＤＣＭで洗浄し、その後冷メタノールで（５ｍＬ×２）回洗浄した。純粋な生成物を次いで、水中（５ｍＬ）にてそれをＤｏｗｅｘ５０ＷＮａ^＋形態（２ｇ）とｒｔで６時間反応させることによってＮａイオン交換に供した。次いでワットマン濾紙を介して反応塊を濾過した。濾液を減圧下で濃縮した。粗精製の塊を真空下で２時間乾燥させ、白色固形物の化合物を提供した。
正確な質量：１２３５．２８；単離された収量：３８ｍｇ，７１％，ＨＰＳＥＣ純度：９８％．
ＩＲ：３４３４，２０６７，１６３４，１３８３，１２２１，１０４３．
^１Ｈ−ＮＭＲ（５００ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δΗ５．４１（ｂｓ，３Ｈ），４．３９（ｂｓ，１Ｈ），３．６３−３．９１（ｍ，２６Ｈ），３．４３（ｂｓ，４Ｈ），２．８６（ｂｓ，２Ｈ），１．９４（ｓ，１２Ｈ），１．４５−１．５３（ｍ，４Ｈ），１．２５（ｂｓ，４Ｈ）．

^１３Ｃ−ＮＭＲ（１２６ＭＨｚ，Ｄ_２Ｏ）：δｃ１７７，１０３．６，９６．９，９６．８，９６．６，７７．４，７６．７，７６．３，７５．４，７４．５，７３．２，７２．８，７２．５，７１．９，６２．９，６２．７，６２．５，５７．９，５５．９−５６．２，４１．９，３０．８，２９．１，２７．７，２７，２４．５．

分析試験
合成Ｍｅｎ−Ｘ四量体（Ｍｅｎ−Ｘ四量体−ＴＴ結合体）を用いて調製されたオリゴマー及び結合体の抗原特性の測定
合成Ｍｅｎ−Ｘ四量体及び破傷風トキソイドとのその結合体（Ｍｅｎ−Ｘ四量体−ＴＴ結合体）の抗原性を競合酵素結合免疫吸着アッセイ（ＥＬＩＳＡ）にて抗原なしの対照に関連して細菌性の多糖類と比較した。このアッセイでは、９６穴のマイクロタイタープレート（プレートＡ）における０．１％ｖ／ｖのＢｒｉｊ３５及び５％ＦＢＳを含有するリン酸緩衝生理食塩水で希釈した１０〜１０００μｇのオリゴ糖にて様々な抗原（すなわち、細菌性多糖類、Ｍｅｎ−Ｘ四量体（１及び１Ａ）及び合成Ｍｅｎ−Ｘ四量体を用いて調製した結合体（１−ＴＴ及び１Ａ−ＴＴ）と共に髄膜炎菌血清型Ｘに対する８０００倍希釈したウサギ抗血清（２２８８０１；ＢＤ）を３７℃で１時間インキュベートした。別のプレート（プレートＢ）をＭｅｎ−Ｘ細菌性多糖類（ＰＳ）とメチル化ヒト血清アルブミン（ｍ−ＨＳＡ）の混合物でコーティングし、その後、２〜８℃での一晩のインキュベートの後、５％ＦＢＳでブロックした。このプレートＢにプレートＡの抗血清／抗原のミックスを加え、３７℃で１時間及び室温で１時間インキュベートした。０．１％Ｂｒｉｊ３５を含有するリン酸緩衝生理食塩水、ｐＨ７．４でプレートを洗浄した。ＰＢＳ、０．１％Ｂｒｉｊ３５及び５％ＦＢＳにおけるペルオキシダーゼ標識した抗ウサギＩｇＧ抗体と共に室温で６０分間プレートをインキュベートした。プレートを再び洗浄し、酢酸ナトリウム緩衝液における１００μＬのペルオキシダーゼ基質、３，３’，５，５’−テトラメチルベンジジン−Ｈ_２Ｏ_２と共に室温で１０分間インキュベートした。５０μＬの２ＭのＨ_２ＳＯ_４を加えることによって反応を止めた。ＥＬＩＳＡリーダー（Ｔｅｃａｎマイクロプレートリーダー）にてＡ_４５０を記録した。各抗原による抗血清における抗体の阻害比率は以下のように算出した。
阻害％＝（ＯＤ_ＮＡＣ−ＯＤ_Ａ）／（ＯＤ_ＮＡＣ−ＯＤ_Ｂ）×１００
式中、ＯＤ_ＮＡＣは抗原なし対照についての光学密度であり、ＯＤ_Ｂはブランクウェルの光学密度である。試験抗原（Ｍｅｎ−Ｘ四量体及びＭｅｎ−Ｘ四量体−ＴＴ結合体）及び陽性対照の光学密度はＯＤ_Ａと呼ばれる。αアノマー（１）についてのデータは図１にて３つ組で行われた測定値の平均値±ＳＤとして提示され、類似のデータがβアノマー（１Ａ）について観察された。

阻害ＥＬＩＳＡの結果は、「抗原なし対照」に比べて合成Ｍｅｎ−Ｘ四量体に基づくＴＴ結合体の抗原性を示した。図１に示すように、合成Ｍｅｎ−Ｘ四量体及びそのＴＴ結合体は、抗血清に存在する髄膜炎菌血清型Ｘ多糖類に特異的な抗体を十分な程度に（それぞれ６８％及び８９％まで）中和することができ、プレート上にコーティングされた細菌性Ｍｅｎ−Ｘ多糖類への抗体の結合を阻害した。

Claims

化学式：

（ｎは３ないし１１である。）
の髄膜炎菌（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ）血清型Ｘオリゴマーの新規の合成法であって、前記方法が、
・化学式：

のヘミアセタール化合物（１０）［４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α，β−Ｄ−グルコピラノース］を合成する工程と、
・前記ヘミアセタール化合物（１０）をホスフィチル化試薬に供して、化学式：

の化合物（１１）を得て、前記化合物（１１）をアノマー化して、化学式：

の増殖ユニット（１２）［４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスホン酸水素］を得、
・化学式：

の末端ユニット（１４）［６−（ベンジルオキシカルボニル）アミノヘキシル２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド］と、末端ユニット（１４Ａ）［６−（ベンジルオキシカルボニル）アミノヘキシル２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド］を合成する工程と、
・カップリング試薬の存在下で、前記増殖ユニット（１２）を前記末端ユニット（１４）に結合し、且つ前記増殖ユニット（１２）を前記末端ユニット（１４Ａ）に結合して、それぞれ化学式：

の化合物（１５）［６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリエチルアンモニウム塩］及び化合物（１５Ａ）［６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，トリエチルアンモニウム塩］を得る工程と、
・前記化合物（１５）及び化合物（１５Ａ）を脱アセチル化試薬と反応させて化学式：

の化合物（１６）［６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリエチルアンモニウム塩］及び化合物（１６Ａ）［６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，トリエチルアンモニウム塩］を得る工程と、
・前記カップリング試薬を用いて前記化合物（１６）を前記増殖ユニット（１２）に結合し、且つ前記化合物（１６Ａ）を前記増殖ユニット（１２）に結合して化学式：

の三量体化合物（１７）［６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，ビス−トリエチルアンモニウム塩］及び三量体化合物（１７Ａ）［６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，ビス−トリエチルアンモニウム塩］を得る工程と、
・脱アセチル化試薬の存在下で前記三量体化合物（１７）と三量体化合物（１７Ａ）を反応させて化学式：

の三量体化合物（１８）［６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，ビス−トリエチルアンモニウム塩］及び三量体化合物（１８Ａ）［６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，ビス−トリエチルアンモニウム塩］を得る工程と、
・前記カップリング試薬の存在下で前記三量体化合物（１８）を前記増殖ユニット（１２）に結合し、前記三量体化合物（１８Ａ）を前記増殖ユニット（１２）に結合し、化学式：

の四量体化合物（１９）［６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−トリエチルアンモニウム塩］及び三量体化合物（１９Ａ）［６−（カルボベンジルオキシ）アミノヘキシル（４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−トリエチルアンモニウム塩］を得る工程と、
・場合により、前記脱アセチル化試薬と前記カップリング試薬の存在下で反復反応を行い、新規の合成高次オリゴマーを得る工程と、
・還元性Ｎ−アセチル化試薬による一工程還元工程、前記脱アセチル化試薬を用いた脱アセチル化工程、及び水素化によるベンジルとＣｂｚの最終的な脱保護工程とを含み、
前記方法が、髄膜炎菌血清型Ｘによる髄膜炎に対する結合型ワクチンの形成に用いられる新規の高次合成オリゴマーを生じる、新規のオリゴマー合成法。
前記新規の高次合成オリゴマーが四量体である請求項１に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記四量体を合成するのにかかる時間が２２５時間〜２７６時間の範囲である請求項２に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記四量体を合成するのにかかる時間が２５７時間である請求項２に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記ヘミアセタール化合物（１０）が
（ａ）化学式：

の化合物（２）［Ｄ（±）グルコサミンＨＣｌ化合物］の糖をジアゾ転移試薬に供し、次いでアセチル化を行って化学式：

の化合物（３）［ｌ，３，４，６−テトラ−Ｏ−アセチル−２−アジド−２−デオキシ−Ｄ−グルコピラノース］を得ることと、
（ｂ）前記化合物（３）をドナー基と反応させて化学式：

の化合物（４）［４−メチルフェニル３，４，６−トリ−Ｏ−アセチル−２−アジド−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド］を得ることと、
（ｃ）有機溶媒にて前記化合物（４）を脱アセチル化試薬と反応させて化学式：

の化合物（５）［４−メチルフェニル２−アジド−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド］を得ることと、
（ｄ）前記化合物（５）をベンジリデン保護反応に供して化学式：

の化合物（６）［４−メチルフェニル２−アジド−４，６−Ｏ−ベンジリデン−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド］を生じることと、
（ｅ）前記化合物（６）をベンジル保護反応に供して化学式：

の化合物（７）［４−メチルフェニル２−アジド−４，６−Ｏ−ベンジリデン−３−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド］を得ることと、
（ｆ）そのように得られた前記化合物（７）を位置選択的なベンジリジン開環試薬に供して化学式：

の化合物（８）［４−メチルフェニル２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド］を得、それをアシル化試薬に供して化学式：

の化合物（９）［４−メチルフェニル４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−ｌ−チオ−α，β−Ｄ−グルコピラノシド］を得ることと、
（ｇ）前記化合物（９）を０℃〜室温にてチオトリル脱保護反応に供して前記ヘミアセタール化合物（１０）を得ることと、
によって合成される、請求項１に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記末端ユニット（１４、１４Ａ）が、
・化学式：

の前記化合物（９）［４−メチルフェニル４−Ｏ−アセチル−２−アジド−３，６−ジ−Ｏ−ベンジル−２−デオキシ−１−チオ−α、β−Ｄ−グルコピラノシド］を化学式：

のリンカー［６−アミノ−１−ヘキサノール］との連結を生じるグリコシド化反応に供して化学式：

の化合物（１３）を得ることと、
・前記化合物（１３）を脱アセチル化試薬と反応させ、既知の方法による精製に供して前記化合物１４及び化合物１４Ａを得ることとによって合成される請求項１に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記カップリング試薬が、ピリジンの存在下での塩化ピバロイル、塩化１−アダマンタンカルボニルから選択される請求項１に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記脱アセチル化試薬が、ナトリウムメトキシド、ナトリウムエトキシドから選択される請求項１、５及び６に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記最終的な脱保護工程に用いられる試薬が、Ｐｄ（ＯＨ）_２−Ｈ_２、炭素−Ｈ_２上のＰｄから選択される請求項１に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記ジアゾ転移試薬が、１Ｈ−イミダゾール−１−スルホニルアジド、トリフルオロメタンスルホニルアジド（ＴｆＮ３）から選択される請求項５に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記ベンジリデン保護反応が、ベンズアルデヒドジメチルアセタール［ＰｈＣＨ（ＯＭｅ）_２］、ベンズアルデヒドから選択される試薬と反応させることによって行われる請求項５に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記ベンジル保護反応が、臭化ベンジル、水酸化ナトリウムから選択される試薬と反応させることによって行われる請求項５に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記位置選択的なベンジリジン開環試薬が、トリエチルシラン［Ｅｔ_３ＳｉＨ］、ＢＦ_３・ＯＥｔ_２、ボランテトラヒドロフラン錯体［ＢＨ_３．ＴＨＦ］及び銅トリフラート［Ｃｕ（ＯＴｆ）_２］の組み合わせから選択される請求項５に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記アシル化試薬が、ピリジン中の無水酢酸［Ａｃ_２Ｏ］、４−ジメチルアミノピリジン（ＤＭＡＰ）である請求項５に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記チオトリル脱保護反応が、Ｎ−ブロモスクシンイミド（ＮＢＳ）、Ｎ−ヨードスクシンイミド（ＮＩＳ）、及び銀トリフラート[ＡｇＯＴｆ]からなる群より選択される試薬と反応させることによって行われる請求項５に記載の新規のオリゴマー合成法。
前記ホスフィチル化試薬が、ジ−フェニルホスフィトピリジン、三塩化リン、イミダゾール、サリチルクロロホスフィト、及び亜リン酸からなる群より選択される請求項１に記載の新規のオリゴマー合成法。
新規の高次合成オリゴマーであって、前記新規の高次合成オリゴマーである化学式：

の高次合成オリゴマー（１）［６−アミノヘキシル（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−ナトリウム塩］及び（１Ａ）［６−アミノヘキシル（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−（２−アセトアミド−２−デオキシ−α−Ｄ−グルコピラノシルホスフェート）−（ｌ→４）−２−アセトアミド−２−デオキシ−β−Ｄ−グルコピラノシド，トリス−ナトリウム塩］が、四量体である高次合成オリゴマー。
前記新規の高次合成オリゴマー（１）及び（１Ａ）が、９５％を超える純度の四量体である請求項１７に記載の新規の高次合成オリゴマー。
前記新規の高次合成オリゴマー（１）及び（１Ａ）の糖環が請求項６に記載の前記リンカーに直接連結されている請求項１７または請求項１８に記載の新規の高次合成オリゴマー。
請求項１に記載の新規のオリゴマー合成法であって、前記オリゴマーが、請求項１７〜１９のいずれかに記載の高次合成オリゴマー（１）及び（１Ａ）であり、前記水素化によるベンジルとＣｂｚの最終的な脱保護工程に要する時間が、前記高次合成オリゴマー（１）については１０時間〜１５時間であり、前記高次合成オリゴマー（１Ａ）については６時間〜８時間である、請求項１記載の新規のオリゴマー合成法。
請求項１７〜１９のいずれかに記載の新規の高次合成オリゴマーであって、前記オリゴマーが、請求項１７〜１９のいずれかに記載の高次合成オリゴマー（１）または（１Ａ）であり、そのまま、または誘導体化された形態で、またはキャリアタンパク質との結合で使用されて、髄膜炎菌血清型Ｘによる髄膜炎に対するワクチンを形成することができる、請求項１７〜１９のいずれかに記載の新規の高次合成オリゴマー。