JP6324961B2 - 血清群ｂ髄膜炎菌とｄ／ｔ／ｐとの組み合わせワクチン - Google Patents

血清群ｂ髄膜炎菌とｄ／ｔ／ｐとの組み合わせワクチン Download PDF

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Description

本願は、２０１２年９月６日に出願された米国仮特許出願第６１／６９７，７５６号の優先権の利益を請求し、その全ての完全な内容は、本開示によって全ての目的について参照により本開示に組み込まれる。
本発明は、組み合わせワクチン、すなわち、ワクチンを投与することにより対象を２種以上の病原体に対して同時に免疫することができるように、２種以上の病原体由来の混合した免疫原を含有するワクチンの分野にある。
単一用量内に２種以上の病原性生物由来の抗原を含有するワクチンは、「多価」または「組み合わせ」ワクチンとして公知である。ジフテリア、破傷風および百日咳に対する防御のための三価ワクチン、または麻疹、流行性耳下腺炎および風疹に対する防御のための三価ワクチンを含めた種々の組み合わせワクチンのヒトへの使用が認可されている。これらのワクチンにより、特に小児患者において、患者に、注射を受ける回数が減るという利点がもたらされ、これにより、コンプライアンスが上昇するという臨床的な利点が生じ得る（例えば、参考文献１の２９章を参照されたい）。
新しい組み合わせワクチンを提供する際の難点の１つは、混合された成分間に物理的因子または化学的因子に起因し得る有害なワクチン−ワクチン相互作用が起こる可能性があることである。例えば、参考文献２は、抗原を組み合わせた場合の免疫原性の潜在的な変更について論じており、参考文献３は、組み合わせワクチンの開発が、現存する抗原を単純に混合することをはるかに超えるものであることを報告している。同様に、参考文献４では、種々の臨床的に関連する相互作用が総説されており（参考文献５も参照されたい）、参考文献６では、組み合わせワクチンを作製する際に生じる技術的難題が総説されている。
Ｖａｃｃｉｎｅｓ． （ｅｄｓ． Ｐｌｏｔｋｉｎ ＆ Ｏｒｅｎｓｔｅｉｎ）． ４ｔｈ ｅｄｉｔｉｏｎ， ２００４， ＩＳＢＮ： ０−７２１６−９６８８−０． Ｉｎｓｅｌ （１９９５） Ａｎｎ Ｎ Ｙ Ａｃａｄ Ｓｃｉ． ７５４：３５−４７． Ａｎｄｒe （１９９９） Ｖａｃｃｉｎｅ １７：１６２０−１６２７． Ｇｉｚｕｒａｒｓｏｎ （１９９８） ＢｉｏＤｒｕｇｓ ９：４４３−４５３． Ｅｕｒｏｐｅａｎ Ｃｏｍｍｉｓｓｉｏｎ ＣＯＳＴ／ＳＴＤ ｉｎｉｔｉａｔｉｖｅ （１９９６） Ｖａｃｃｉｎｅ １４：６９１−７００． Ｓｋｉｂｉｎｓｋｉ ｅｔ ａｌ． （２０１１） Ｊ Ｇｌｏｂａｌ Ｉｎｆｅｃｔ Ｄｉｓ ３：６３−７０．
本発明の目的は、さらなる改善された組み合わせワクチン、特に血清群Ｂ髄膜炎菌および他の病原体に対して防御することができる組み合わせワクチンを提供することである。
本発明者らは、血清群Ｂ髄膜炎菌抗原をジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドおよび百日咳トキソイド（「ＤＴＰ」）と首尾よく組み合わせて、複数の病原体に対する防御に有効な組み合わせワクチンを提供することができることを示した。種々の異なるアジュバントにより、ならびに小児型ＤＴＰ比および追加免疫型ＤＴＰ比の両方により、これらの組合せが有効である。アジュバントは、組成物が惹起する免疫応答を改善することができる；あるいは、アジュバントを含めることにより、組成物が、抗原の量が比較的低いが、それにもかかわらずアジュバント化していない組み合わせワクチンに匹敵する免疫原性を有することが可能になる。
したがって、本発明は、一般に、（ａ）血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、ならびに（ｂ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および／または百日咳トキソイドのうちの少なくとも１つを含む免疫原性組成物を提供する。組成物は、通常は、アルミニウム塩または水中油エマルションなどのアジュバントも含む。成分（ｂ）はジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイドの３つ全てを含むことが好ましい。一部の実施形態では、成分（ｂ）は（Ｌｆ単位で測定して）破傷風トキソイドよりも多いジフテリアトキソイドを含むが、他の実施形態では、成分（ｂ）はジフテリアトキソイドよりも多い破傷風トキソイドを含む。
第１の実施形態では、本発明は、（ａ）血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、（ｂ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイド、ならびに（ｃ）アジュバントを含む免疫原性組成物を提供する。アジュバントは、アルミニウム塩アジュバント、ＴＬＲアゴニスト、または水中油エマルションのうちの１つまたは複数を含んでよい。
第２の実施形態では、本発明は、（ａ）血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、ならびに（ｂ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイドを含む免疫原性組成物であって、Ｌｆ単位で測定して、ジフテリアトキソイドが破傷風トキソイドと比較して過剰に存在する免疫原性組成物を提供する。この組成物はアジュバントも含んでよく、このアジュバントは、アルミニウム塩アジュバント、ＴＬＲアゴニスト、または水中油エマルションのうちの１つまたは複数を含んでよい。
第３の実施形態では、本発明は、（ａ）血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、ならびに（ｂ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイドを含む免疫原性組成物であって、Ｌｆ単位で測定して、破傷風トキソイドがジフテリアトキソイドと比較して過剰に存在する免疫原性組成物を提供する。この組成物はアジュバントも含んでよく、このアジュバントは、アルミニウム塩アジュバント、ＴＬＲアゴニスト、または水中油エマルションのうちの１つまたは複数を含んでよい。
本発明の組成物は、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイドに加えて、抗原を含んでよく、この抗原は、例えば、Ｈｉｂ莢膜糖（理想的にはコンジュゲートしたもの）、ＨＢｓＡｇ、ＩＰＶ、髄膜炎菌の莢膜糖（理想的にはコンジュゲートしたもの）などを含んでよい。
本願の特定の実施形態においては、例えば以下の項目が提供される。
（項目１）
（ａ）血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、（ｂ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および／または百日咳トキソイドのうちの少なくとも１つ、ならびに（ｃ）（ｉ）アルミニウム塩とＴＬＲアゴニストの組合せまたは（ｉｉ）水中油エマルションから選択されるアジュバントを含む免疫原性組成物。
（項目２）
成分（ｂ）が、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイドの３つ全てを含む、項目１に記載の組成物。
（項目３）
成分（ｂ）が、Ｌｆ単位で測定して、破傷風トキソイドよりも多いジフテリアトキソイドを含む、項目２に記載の組成物。
（項目４）
成分（ｂ）が、Ｌｆ単位で測定して、破傷風トキソイドよりも少ないジフテリアトキソイドを含む、項目２に記載の組成物。
（項目５）
（ａ）血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、ならびに（ｂ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイドを含む免疫原性組成物であって、Ｌｆ単位で測定して、前記ジフテリアトキソイドが破傷風トキソイドと比較して過剰に存在する、免疫原性組成物。
（項目６）
アジュバントを含む、項目５に記載の組成物。
（項目７）
（ａ）血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、ならびに（ｂ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイドを含む免疫原性組成物であって、Ｌｆ単位で測定して、前記破傷風トキソイドがジフテリアトキソイドと比較して過剰に存在する、免疫原性組成物。
（項目８）
アジュバントを含む、項目７に記載の組成物。
（項目９）
前記アジュバントが、（ｉ）１つまたは複数のアルミニウム塩、（ｉｉ）ＴＬＲアゴニスト、または（ｉｉｉ）水中油エマルションを含む、項目６または８に記載の組成物。
（項目１０）
成分（ａ）に髄膜炎菌ｆＨｂｐタンパク質を含む、項目１〜９のいずれかに記載の組成物。
（項目１１）
成分（ａ）に髄膜炎菌ｆＨｂｐタンパク質、ＮＨＢＡタンパク質およびＮａｄＡタンパク質を含む、項目１０に記載の組成物。
（項目１２）
前記ｆＨｂｐが髄膜炎菌小胞に位置する、項目１０に記載の組成物。
血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原
本発明の免疫原性組成物は血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原を含む。ヒト（または適切な動物モデル）に投与すると、免疫原は殺菌性免疫応答を惹起し得る。これらの免疫原は、タンパク質、リポ糖（ｌｉｐｏｓａｃｃｈａｒｉｄｅ）、または小胞であってよい。
種々の血清群Ｂ髄膜炎菌タンパク質免疫原は、これだけに限定されないが、ＢＥＸＳＥＲＯ（商標）製品に見いだされるＮＨＢＡ、ｆＨｂｐおよびＮａｄＡを含め、当技術分野で公知である［７、８］。本発明の組成物に含めることができるさらなるタンパク質免疫原は、ＨｍｂＲ、ＮｓｐＡ、ＮｈｈＡ、Ａｐｐ、Ｏｍｐ８５、ＴｂｐＡ、ＴｂｐＢ、Ｃｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼ、およびＺｎｕＤである。これらの免疫原のさらなる詳細を以下で論じる。
ワクチンは、これらの種々の免疫原のうちの１つまたは複数を含んでよく、例えば、ワクチンは、ＮＨＢＡ、ｆＨｂｐおよびＮａｄＡのそれぞれを含んでよい。ワクチンは、単一の免疫原のバリアント形態も含んでよく、例えば、ワクチンは、髄膜炎菌ｆＨｂｐの２つ以上のバリアント（すなわち、配列が異なる２つのｆＨｂｐタンパク質［１９１、９］）を含んでよい。
血清群Ｂ髄膜炎菌タンパク質免疫原は融合タンパク質として存在してよい。例えば、ＢＥＸＳＥＲＯ（商標）製品は、２つの融合タンパク質を含む：配列番号４はＮＭＢ２０９１とｆＨｂｐの融合物であり、配列番号５はＮＨＢＡとＮＭＢ１０３０の融合物である。有用な融合タンパク質の１つは配列番号１９であり、これはＮＭＢ２０９１およびｆＨｂｐの２つのコピーを含む。
血清群Ｂ免疫原の２つの有用な組合せは、ＮＨＢＡ、例えば配列番号５；ｆＨｂｐ、例えば配列番号４または配列番号１９のいずれか；およびＮａｄＡ、例えば配列番号６を含む。他の有用な組合せは、配列番号５、４、１９および６とはそれぞれ最大で５アミノ酸が異なるが、配列番号５、４、１９および６を認識する抗体を惹起する能力を保持するタンパク質を含む。
少なくとも１つのｆＨｂｐ免疫原を含む組成物、例えば、２つの異なるｆＨｂｐ配列を含有する組成物が好ましい。適切なｆＨｂｐの組合せの詳細を以下で論じる。
したがって、本発明の組成物は、（ａ）参考文献８において「５ＣＶＭＢ」として開示されている３種の血清群Ｂ髄膜炎菌タンパク質免疫原の混合物または（ｂ）参考文献１０において「ｒＬＰ２０８６」として開示されている血清群Ｂ髄膜炎菌タンパク質免疫原の混合物を含むことが有用であり得る。
通常、血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原は、精製された可溶性組換えタンパク質である。しかし、一部の実施形態では、血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原は髄膜炎菌小胞中に存在してよい。したがって、組成物は、髄膜炎菌小胞、すなわち、髄膜炎菌の外膜を破壊して、または髄膜炎菌の外膜からブレブを形成して外膜由来の抗原を保持する小胞を形成することによって得られる任意のプロテオリポソーム性小胞を含んでよい。したがって、この用語は、例えば、ＯＭＶ（時には「ブレブ」と称される）、微小胞（ＭＶ）および「ネイティブなＯＭＶ」（「ＮＯＭＶ」）を含む。種々のそのような小胞が当技術分野で公知であり（例えば、参考文献１１〜２５を参照されたい）、これらはいずれも、本発明の組成物の中に含めることができる。これらの小胞のさらなる詳細が以下に示されている。しかし、一部の実施形態では、組成物は小胞を含まない。
本発明の組成物は投与した後に、血清殺菌アッセイを惹起することができることが好ましい。これらの応答はマウスにおいて都合よく測定され、ワクチンの有効性に関する標準の指標である。血清殺菌活性（ＳＢＡ）では補体によって媒介される細菌の死滅を測定するものであり、ヒトまたは仔ウサギの補体を使用してアッセイすることができる。例えば、組成物により、レシピエントの９０％超でＳＢＡの少なくとも４倍の上昇が誘導され得る。
本発明の組成物は、ヒトにおいて血清群Ｂ髄膜炎菌に対して防御する免疫応答を惹起することができることが好ましい。例えば、ワクチンは、少なくとも、広く入手可能であり（例えばＡＴＣＣ ＢＡＡ−３３５）、参考文献２６において配列決定された株であるＭＣ５８などのプロトタイプ血清群Ｂ株に対して防御する免疫応答を惹起し得る。他の株も使用することができるが、ＭＣ５８に対する応答は容易に試験することができる。
ジフテリアトキソイド
ジフテリアは、胞子を形成しないグラム陽性好気性菌であるＣｏｒｙｎｅｂａｃｔｅｒｉｕｍ ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅによって引き起こされる。この生物は、もはや毒性ではないが抗原性は残っており、注射後に特異的な抗毒素抗体の産生を刺激することができるトキソイドが生じるように処理する（例えばホルムアルデヒドを使用して）ことができる、プロファージにコードされるＡＤＰリボシル化外毒素（「ジフテリア毒素」）を発現する。ジフテリアトキソイドは、参考文献１の１３章においてより詳細に開示されている。好ましいジフテリアトキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されたものである。ジフテリアトキソイドは、Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅを、ウシ抽出物を補充することもある増殖培地（例えばＦｅｎｔｏｎ培地、またはＬｉｎｇｇｏｕｄおよびＦｅｎｔｏｎ培地）で増殖させ、その後、ホルムアルデヒド処理し、限外濾過し、沈殿させることによって得ることができる。次いで、トキソイド化した材料を、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理することができる。
組成物は、少なくとも０．０１ＩＵ／ｍｌの循環ジフテリア抗毒素レベルを惹起するために十分なジフテリアトキソイドを含むべきである。ジフテリアトキソイドの分量は、一般に、１国際単位の抗毒素と混合した際に最適に凝集した混合物が生じる毒素／トキソイドの量と定義される「Ｌｆ」単位（「凝集単位（ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ ｕｎｉｔ）」、または「限界凝集量（ｌｉｍｅｓ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｎｇ ｄｏｓｅ）」、または「凝集の限界（ｌｉｍｉｔ ｏｆ ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ）」）で測定される［２７、２８］。例えば、ＮＩＢＳＣにより、アンプル当たり３００ＬＦを含有する「Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｏｉｄ、Ｐｌａｉｎ」［２９］が供給されており、また、アンプル当たり９００Ｌｆを含有する「Ｔｈｅ １ｓｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ Ｆｏｒ Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｏｉｄ Ｆｏｒ Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ」［３０］も供給されている。組成物中のジフテリアトキソイドの濃度は、凝集アッセイを使用し、そのような参照試薬に対して較正した参照材料と比較することによって容易に決定することができる。
組成物中のジフテリアトキソイドの免疫化の効力は、一般に、国際単位（ＩＵ）で表される。効力は、実験動物（典型的にはモルモット）において組成物によってもたらされる防御を、ＩＵで較正された参照ワクチンと比較することによって評価することができる。ＮＩＢＳＣにより、アンプル当たり１６０ＩＵを含有し、そのようなアッセイを較正するために適した「Ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａ Ｔｏｘｏｉｄ Ａｄｓｏｒｂｅｄ Ｔｈｉｒｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ １９９９」［３１、３２］が供給されている。
ＩＵ系とＬｆ系の間の変換は、特定のトキソイド調製物に依存する。
本発明の組成物は、典型的には、単位用量当たり１〜４０Ｌｆの間のジフテリアトキソイドを含む。小児型組成物では、ジフテリアトキソイドが破傷風トキソイドと比較して過剰に存在し（Ｌｆ単位で）、組成物は、一般に、単位用量当たり１０〜３５Ｌｆの間、例えば１５〜３０Ｌｆの間、１５Ｌｆ、２５Ｌｆまたは３０Ｌｆなどのジフテリアトキソイドを含む。追加免疫型組成物では、破傷風トキソイドがジフテリアトキソイドと比較して過剰に存在し（Ｌｆ単位で）、組成物は、一般に、単位用量当たり１〜４Ｌｆの間、例えば１．５〜３Ｌｆの間、２Ｌｆまたは２．５Ｌｆなどのジフテリアトキソイドを含む。組成物がジフテリアトキソイドとコンジュゲートした糖類抗原（複数可）を含む場合には、そのコンジュゲート（複数可）中の担体タンパク質の量はこれらの量から除外される。
ＩＵ測定値によると、小児型組成物は、一般に、単位用量当たり≧２５ＩＵのジフテリアトキソイドを含み、追加免疫型組成物は、一般に、単位用量当たり１〜３ＩＵを含む。
組成物がアルミニウム塩アジュバントを含む場合には、組成物中のジフテリアトキソイドは、アルミニウム塩アジュバント上に、好ましくは水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着していることが好ましい（完全に吸着していることがより好ましい）。
破傷風トキソイド
破傷風は、胞子を形成するグラム陽性桿菌であるＣｌｏｓｔｒｉｄｉｕｍ ｔｅｔａｎｉによって引き起こされる。この生物は、もはや毒性ではないが抗原性は残っており、注射後に特異的な抗毒素抗体の産生を刺激することができるトキソイドを生じるように処理することができるエンドペプチダーゼ（「破傷風毒素」）を発現する。破傷風トキソイドは、参考文献１の２７章においてより詳細に開示されている。好ましい破傷風トキソイドは、ホルムアルデヒド処理によって調製されたものである。破傷風トキソイドは、Ｃ．ｔｅｔａｎｉを増殖培地（例えばウシカゼインに由来するＬａｔｈａｍ培地）で増殖させ、その後、ホルムアルデヒド処理し、限外濾過し、沈殿させることによって得ることができる。次いで、材料を、滅菌濾過および／または透析を含むプロセスによって処理することができる。
組成物は、少なくとも０．０１ＩＵ／ｍｌの循環破傷風抗毒素レベルを惹起するために十分な破傷風トキソイドを含むべきである。破傷風トキソイドの分量は、一般に、１国際単位の抗毒素と混合した際に、最適に凝集する混合物を生じるトキソイドの量と定義される「Ｌｆ」単位で表される（上記を参照されたい）［２７］。ＮＩＢＳＣにより、アンプル当たり１０００ＬＦを含有する「Ｔｈｅ １ｓｔ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｒｅｆｅｒｅｎｃｅ Ｒｅａｇｅｎｔ ｆｏｒ Ｔｅｔａｎｕｓ Ｔｏｘｏｉｄ Ｆｏｒ Ｆｌｏｃｃｕｌａｔｉｏｎ Ｔｅｓｔ」［３３］が供給されており、それによって測定値を較正することができる。
破傷風トキソイドの免疫化の効力は、国際単位（ＩＵ）で測定され、実験動物（典型的にはモルモット）において組成物によってもたらされる防御を、例えばアンプル当たり４６９ＩＵを含有するＮＩＢＳＣの「Ｔｅｔａｎｕｓ Ｔｏｘｏｉｄ Ａｄｓｏｒｂｅｄ Ｔｈｉｒｄ Ｉｎｔｅｒｎａｔｉｏｎａｌ Ｓｔａｎｄａｒｄ ２０００」［３４、３５］を使用して参照ワクチンと比較することによって評価される。
ＩＵ系とＬｆ系の間の変換は、特定のトキソイド調製物に依存する。
本発明の組成物は、典型的には、単位用量当たり２．５〜２５Ｌｆの間の破傷風トキソイドを含む。小児型組成物では、ジフテリアトキソイドが破傷風トキソイドと比較して過剰に存在し（Ｌｆ単位で）、組成物は、一般に、単位用量当たり４〜１５Ｌｆの間、例えば５〜１０Ｌｆの間、５Ｌｆまたは１０Ｌｆなどの破傷風トキソイドを含む。追加免疫型組成物では、破傷風トキソイドがジフテリアトキソイドと比較して過剰に存在し（Ｌｆ単位で）、組成物は、一般に、単位用量当たり４〜６Ｌｆの間、例えば５Ｌｆの破傷風トキソイドを含む。組成物が破傷風トキソイドとコンジュゲートした糖類抗原（複数可）を含む場合には、そのコンジュゲート（複数可）中の担体タンパク質の量はこれらの量から除外される。
ＩＵ測定値によると、小児型組成物は、一般に、単位用量当たり≧４０ＩＵの破傷風トキソイドを含み、追加免疫型組成物は、一般に、単位用量当たり１５〜２５ＩＵを含む。
組成物がアルミニウム塩アジュバントを含む場合には、組成物中の破傷風トキソイドは、アルミニウム塩上、好ましくは水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着している（時には完全に吸着している）ことが好ましい。
百日咳トキソイド
Ｂｏｒｄｅｔｅｌｌａ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓは、百日咳を引き起こす。本発明の組成物は、百日咳トキソイド（「ＰＴ」）、すなわち、無毒化した形態の百日咳毒素を含む。本発明では、ＰＴ含有全細胞百日咳抗原（「ｗＰ」）を使用することができるが、組成物はｗＰを含まず、その代わりに無細胞（「ａＰ」）ＰＴ含有抗原、すなわち、精製された百日咳抗原の規定された混合物を含むことが好ましい。ａＰ抗原を使用する場合、本発明の組成物は、典型的には、ＰＴに加えて、線維状赤血球凝集素（ＦＨＡ）および／またはパータクチン（「６９キロダルトンの外膜タンパク質」としても公知である）を含む。本発明の組成物は、必要に応じて、２型線毛および３型線毛をも含んでよい。これらの種々のＰａ抗原の調製物は当技術分野において周知である。
ＰＴはホルムアルデヒドおよび／またはグルタルアルデヒドを用いて処理することによって無毒化することができ、ＦＨＡおよびパータクチンも同様に処理することができる。ＰＴの化学的無毒化の代わりに、本発明では、変異誘発によって野生型酵素活性を低下させた変異体ＰＴ、例えば９Ｋ／１２９Ｇ二重変異体［３７］を使用することができる［３６］。そのような遺伝的に無毒化したＰＴを使用することが好ましい。
無細胞百日咳抗原の分量は、通常はマイクログラム数で表される。本発明の組成物は、典型的には、単位用量当たり２〜３０μｇの間のＰＴを含む。小児型組成物では、ＰＴは単位用量当たり５〜３０μｇの間（例えば５μｇ、７．５μｇ、２０μｇまたは２５μｇ）で存在してよく、追加免疫型組成物では、組成物は、一般に、単位用量当たり２〜１０μｇの間（例えば２．５μｇまたは８μｇ）のＰＴを含む。組成物がＦＨＡを含む場合、単位用量当たり２〜３０μｇの間で存在することが典型的である。小児型組成物では、ＦＨＡは、単位用量当たり２．５〜２５μｇの間（例えば２．５μｇ、５μｇ、１０μｇ、２０μｇまたは２５μｇ）で存在してよく、追加免疫型組成物では、ＦＨＡは、単位用量当たり４〜１０μｇの間（例えば５μｇまたは８μｇ）で存在してよい。組成物がパータクチンを含む場合、これは、典型的には単位用量当たり２〜１０μｇの間で存在する。小児型組成物では、パータクチンは、単位用量当たり２．５〜１０μｇの間（例えば２．５μｇ、３μｇ、８μｇまたは１０μｇ）で存在してよく、追加免疫型組成物では、パータクチンは、単位用量当たり２〜３μｇの間（例えば２．５μｇまたは３μｇ）で存在してよい。
組成物は、通常は、単位用量当たり≦８０μｇの総無細胞百日咳抗原を含有する。個々の抗原はそれぞれ、通常、単位用量当たり≦３０μｇで存在する。
通常はＰＴ、ＦＨＡおよびパータクチンのそれぞれが本発明の組成物中に存在する。これらは、種々の比（質量で）で、例えば、２０：２０：３、２５：２５：８、１６：１６：５、５：１０：６、または１０：５：３のＰＴ：ＦＨＡ：ｐ６９比で存在してよい。ＦＨＡとパータクチンがどちらも存在する場合、通常はＦＨＡがパータクチンと比較して質量過剰である。
組成物がアルミニウム塩アジュバントを含む場合には、組成物中のＰＴは、アルミニウム塩上、好ましくは水酸化アルミニウムアジュバント上に吸着している（時には完全に吸着している）ことが好ましい。同様にＦＨＡのいずれもアルミニウム塩に吸着させることができる。パータクチンのいずれもアルミニウム塩アジュバントに吸着させることができるが、パータクチンが存在することは、通常、安定な吸着を確実にするために組成物に水酸化アルミニウムが存在する必要があることを意味する［３８］。
Ｈｉｂコンジュゲート
Ｈａｅｍｏｐｈｉｌｕｓ ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｔｙｐｅ ｂ（「Ｈｉｂ」）は、細菌性髄膜炎を引き起こす。Ｈｉｂワクチンは典型的には莢膜糖抗原に基づき（例えば参考文献１の１４章）、その調製に関しては十分に記録されている（例えば参考文献３９〜４８）。特に小児に関して、Ｈｉｂ糖類の免疫原性を増強するためにＨｉｂ糖類を担体タンパク質とコンジュゲートする。典型的な担体タンパク質は、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイド、ジフテリアトキソイドのＣＲＭ１９７誘導体、または血清群Ｂ髄膜炎菌由来の外膜タンパク質複合体である。破傷風トキソイドは、一般に「ＰＲＰ−Ｔ」と称される製品に使用されている有用な担体である。ＰＲＰ−Ｔは、臭化シアンを使用してＨｉｂ莢膜多糖を活性化し、活性化された糖類をアジピン酸リンカー（（１−エチル−３−（３−ジメチルアミノプロピル）カルボジイミド）など、典型的には塩酸塩）と結合させ、次いで、リンカー−糖類実体を破傷風トキソイド担体タンパク質と反応させることによって作製することができる。ＣＲＭ１９７は本発明の組成物中のＨｉｂコンジュゲートのための別の有用な担体である。
コンジュゲートの糖類部分は、Ｈｉｂ細菌から調製した全長のポリリボシルリビトールリン酸（ＰＲＰ）、および／または全長ＰＲＰの断片を含んでよい。糖類：タンパク質比（ｗ／ｗ）が１：５（すなわち、タンパク質過剰）から５：１（すなわち、糖類過剰）の間、例えば比が１：２から５：１の間、および比が１：１．２５から１：２．５の間のコンジュゲートを使用することができる。しかし、好ましいワクチンでは、糖類と担体タンパク質の重量比は１：２．５から１：３．５の間である。破傷風トキソイドが抗原として、および担体タンパク質としての両方で存在するワクチンでは、コンジュゲートの糖類と担体タンパク質の重量比は１：０．３から１：２の間であってよい［４９］。Ｈｉｂコンジュゲートを投与することにより、≧０．１５μｇ／ｍｌの抗ＰＲＰ抗体濃度がもたらされることが好ましく、≧１μｇ／ｍｌであることがより好ましく、これらは標準の応答閾値である。
Ｈｉｂ抗原の分量は、典型的には、糖類のマイクログラム数で表される。本発明の組成物がＨｉｂ抗原を含む場合には、単位用量当たりの分量は通常５〜１５μｇの間、例えば１０μｇまたは１２μｇである。
組成物がアルミニウム塩アジュバントを含む場合には、Ｈｉｂ抗原はアルミニウム塩アジュバント上に吸着していても吸着していなくてもよい。
Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原
Ｂ型肝炎ウイルス（ＨＢＶ）は、ウイルス性肝炎を引き起こす公知の作用因子の１つである。ＨＢＶビリオンは、外側のタンパク質外被またはカプシドで囲まれた内部のコアからなり、ウイルスのコアは、ウイルスＤＮＡゲノムを含有する。カプシドの主要な成分は、典型的には分子量が約２４ｋＤａの２２６アミノ酸のポリペプチドである、ＨＢＶ表面抗原またはより一般的に「ＨＢｓＡｇ」として公知のタンパク質である。現存するＢ型肝炎ワクチンは全てＨＢｓＡｇを含有し、ワクチン接種を受ける正常な人にこの抗原を投与すると、ＨＢＶ感染に対して防御する抗ＨＢｓＡｇ抗体の産生が刺激される。
ワクチン製造に関して、ＨＢｓＡｇは２つの手段で作製することができる。第１の方法は、ＨＢＶ感染の間に多量のＨＢｓＡｇが肝臓で合成され、血流中に放出されるので、慢性Ｂ型肝炎の保因者の血漿から抗原を粒子の形態で精製することを伴う。第２の手段は、組換えＤＮＡ法によってタンパク質を発現させることを伴う。本発明の方法で使用するためのＨＢｓＡｇは、例えば酵母またはＣＨＯ細胞において組換えによって発現させる。適切な酵母としては、Ｓａｃｃｈａｒｏｍｙｃｅｓ（Ｓ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅなど）またはＨａｎｅｎｓｕｌａ（Ｈ．ｐｏｌｙｍｏｒｐｈａなど）の宿主が挙げられる。
ネイティブなＨＢｓＡｇ（すなわち、血漿から精製された産物などの場合）とは異なり、酵母で発現させたＨＢｓＡｇは、一般に、グリコシル化されておらず、これは、本発明で使用するためのＨＢｓＡｇの最も好ましい形態である。酵母で発現させたＨＢｓＡｇは免疫原性が高く、また、血液製剤コンタミネーションのリスクを伴わずに調製することができる。
ＨＢｓＡｇは、一般に、リン脂質を含む脂質マトリックスを含む実質的に球状の粒子（平均直径が約２０ｎｍ）の形態である。酵母で発現させたＨＢｓＡｇ粒子は、天然のＨＢＶビリオンには見いだされないホスファチジルイノシトールを含み得る。免疫系を刺激するために、粒子は毒性のない量のＬＰＳも含んでよい［５０］。酵母の破壊の間に非イオン性界面活性物質（例えばポリソルベート２０）を使用した場合、これは粒子に保持され得る［５１］。
ＨＢｓＡｇを精製するための好ましい方法は、細胞を破壊した後に、限外濾過；サイズ排除クロマトグラフィー；陰イオン交換クロマトグラフィー；超遠心；脱塩；および滅菌濾過を伴う。細胞を破壊した後、溶解物を沈殿させ（例えばポリエチレングリコールを使用して）、ＨＢｓＡｇは溶液中に残り、限外濾過の準備ができる。
精製後、ＨＢｓＡｇを、ＨＢｓＡｇ調製の間に使用された可能性があるチメロサールなどのいかなる水銀系保存剤も除去するために使用することができる透析（例えばシステインを用いて）に供することができる［５２］。チメロサールを含まない調製物が好ましい。
ＨＢｓＡｇは、ＨＢＶ亜型ａｄｗ２由来であることが好ましい。
ＨＢｓＡｇの分量は、典型的にはマイクログラム数で表される。本発明の組成物がＨＢｓＡｇを含む場合には、単位用量当たりの分量は通常５〜２５μｇの間、例えば１０μｇまたは２０μｇである。
組成物がアルミニウム塩アジュバントを含む場合には、ＨＢｓＡｇはアルミニウム塩アジュバント上に吸着していてよい（リン酸アルミニウムアジュバント上に吸着していることが好ましい）。
不活化ポリオウイルス抗原（ＩＰＶ）
灰白髄炎は、３種類のポリオウイルスのうちの１つによって引き起こされる得る。この３種類は類似しており、同一の症状を引き起こすが、これらの抗原性は全く異なり、１つの型に感染することによって他の型の感染に対する防御はもたらされない。したがって、参考文献１の２４章において説明されている通り、ポリオウイルス１型（例えばＭａｈｏｎｅｙ株）、ポリオウイルス２型（例えばＭＥＦ−１株）、およびポリオウイルス３型（例えばＳａｕｋｅｔｔ株）の３種のポリオウイルス抗原を本発明に使用することが好ましい。これらの株（「Ｓａｌｋ」株）の代わりに、例えば、参考文献５３および５４において論じられている通り、１型〜３型のＳａｂｉｎ株を使用することができる。これらの株は、通常のＳａｌｋ株よりも強力であり得る。
ポリオウイルスは細胞培養物中で増殖させることができる。好ましい培養物では、サル腎臓に由来する継代細胞系統であるＶｅｒｏ細胞系統を使用する。Ｖｅｒｏ細胞は、マイクロキャリアで都合よく培養することができる。ウイルス感染の前およびその間のＶｅｒｏ細胞の培養は、仔ウシ血清などのウシ由来材料の使用、およびラクトアルブミン加水分解産物（例えばラクトアルブミンの酵素による分解によって得られる）の使用を伴ってよい。そのようなウシ由来材料は、ＢＳＥまたは他のＴＳＥを伴わない供給源から得るべきである。
増殖させた後、限外濾過、ダイアフィルトレーション、およびクロマトグラフィーなどの技法を使用してビリオンを精製することができる。患者に投与する前に、ポリオウイルスは不活性化されていなければならず、これは、ウイルスを本発明のプロセスにおいて使用する前にホルムアルデヒドで処理することによって実現することができる。
ウイルスは個別に増殖させ、精製し、不活化し、その後に組み合わせて本発明で使用するためのバルク混合物をもたらすことが好ましい。
ＩＰＶの分量は、典型的には「ＤＵ」単位（「Ｄ抗原単位」［５５］）で表される。ポリオウイルス１型、２型および３型の３種全てが存在する場合、３種の抗原は、それぞれ５：１：４のＤＵ比で、または任意の他の適切な比、例えば、Ｓａｂｉｎ株を使用する場合には１５：３２：４５の比で存在してよい［５３］。単位用量当たりのＳａｌｋ ＩＰＶ株の典型的な量は、１型が４０ＤＵ、２型が８ＤＵおよび３型が３２ＤＵであるが、それよりも低い用量も使用することができる。１型が≦１５ＤＵ、２型が≦５ＤＵ、３型が≦２５ＤＵ（単位用量当たり）である、Ｓａｂｉｎ株由来の少量の抗原が特に有用である。
組成物がアルミニウム塩アジュバントを含む場合には、ＩＰＶ抗原は、多くの場合、製剤化する前にはいかなるアジュバントにも予め吸着させないが、製剤化した後に、アルミニウム塩（複数可）に吸着させることができる。
さらなる抗原
本発明の組成物は、Ｄ抗原、Ｔ抗原、およびＰ抗原を含む。上記の通り、本発明の組成物は、Ｈｉｂ、ＨＢｓＡｇ、および／またはポリオウイルス抗原も含んでよい。本発明の免疫原性組成物は、さらなる病原体由来の抗原を含んでよい。例えば、これらの抗原は、Ｎ．ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ（血清群Ａ、血清群Ｂ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および／または血清群Ｙのうちの１つまたは複数）またはＳ．ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅ由来であってよい。
髄膜炎菌の糖類
組成物がＮｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓ莢膜糖コンジュゲートを含む場合、そのようなコンジュゲートは１つまたは複数存在してよい。典型的には、血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙのうちの２種、３種、または４種が含まれ、例えばＡ＋Ｃ、Ａ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｙ、Ｃ＋Ｗ１３５、Ｃ＋Ｙ、Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５、Ａ＋Ｃ＋Ｙ、Ａ＋Ｗ１３５＋Ｙ、Ａ＋Ｃ＋Ｗ１３５＋Ｙなどが含まれる。ＭＥＮＡＣＴＲＡ（商標）およびＭＥＮＶＥＯ（商標）製品などのように血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙの４種全ての糖類を含む成分が有用である。２種以上の血清群のコンジュゲートが含まれる場合には、これらは、実質的に同等の質量、例えば、各血清群の糖類が互いに±１０％以内の質量で存在してよい。血清群当たりの典型的な分量は、１μｇから２０μｇの間、例えば、血清群当たり２μｇから１０μｇの間、または約４μｇまたは約５μｇまたは約１０μｇである。実質的に同等の比の代わりに、２倍の質量の血清群Ａ糖類を使用することができる。
コンジュゲートを投与することにより、関連する血清群についての血清殺菌性アッセイ（ＳＢＡ）力価が少なくとも４倍、好ましくは少なくとも８倍に増大することが好ましい。ＳＢＡ力価は、仔ウサギ補体またはヒト補体を使用して測定することができる［５６］。
血清群Ａ髄膜炎菌の莢膜糖は、（α１→６）連結したＮ−アセチル−Ｄ−マンノサミン−１−ホスフェートのホモポリマーであり、Ｃ３位およびＣ４位に部分的なＯ−アセチル化を伴う。Ｃ−３位におけるアセチル化は７０〜９５％であり得る。糖類を精製するために使用される条件により、脱Ｏ−アセチル化をもたらすことができるが（例えば塩基性条件下で）、このＣ−３位にＯＡｃを保持することが有用である。一部の実施形態では、血清群Ａ糖類のマンノサミン残基の少なくとも５０％（例えば少なくとも６０％、７０％、８０％、９０％、９５％またはそれ以上）がＣ−３位においてＯ−アセチル化されている。加水分解を防止するためにアセチル基を保護基で置き換えることができ［５７］、それでも、そのような改変された糖類は本発明で意味される血清群Ａ糖類の範囲に入る。
血清群Ｃ莢膜糖は、（α２→９）連結したシアル酸（Ｎ−アセチルノイラミン酸、または「ＮｅｕＮＡｃ」）のホモポリマーである。糖類の構造は→９）−Ｎｅｕ ｐ ＮＡｃ ７／８ ＯＡｃ−（α２→と記載される。大多数の血清群Ｃ株はシアル酸残基のＣ−７および／またはＣ−８にＯ−アセチル基を有するが、臨床分離株の約１５％がこれらのＯ−アセチル基を欠く［５８、５９］。ＯＡｃ基の有無により、独特のエピトープが生じ、糖類への抗体結合の特異性が、Ｏ−アセチル化された（ＯＡｃ−）株および脱Ｏ−アセチル化された（ＯＡｃ＋）株に対するその殺菌活性に影響を及ぼす可能性がある［６０〜６２］。本発明で使用される血清群Ｃ糖類は、ＯＡｃ＋株またはＯＡｃ−株のいずれからも調製することができる。認可されたＭｅｎＣコンジュゲートワクチンとしては、ＯＡｃ−糖類（ＮＥＩＳＶＡＣ−Ｃ（商標））およびＯＡｃ＋糖類（ＭＥＮＪＵＧＡＴＥ（商標）およびＭＥＮＩＮＧＩＴＥＣ（商標））のどちらもある。一部の実施形態では、血清群Ｃコンジュゲートを産生するための株は、例えば血清型１６、血清亜型Ｐ１．７ａ，１などのＯＡｃ＋株である。したがって、Ｃ：１６：Ｐ１．７ａ，１ ＯＡｃ＋株を使用することができる。Ｃ１１株などの血清亜型Ｐ１．１のＯＡｃ＋株も有用である。好ましいＭｅｎＣ糖類は、Ｃ１１株などのＯＡｃ＋株から取得される。
血清群Ｗ１３５糖類は、シアル酸−ガラクトース二糖単位のポリマーである。血清群Ｃ糖類と同様に、血清群Ｗ１３５糖類は可変性Ｏ−アセチル化を有するが、それはシアル酸の７位および９位におけるものである［６３］。構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−α−（２→６）−Ｄ−Ｇａｌ−α−（１→と記載される。
血清群Ｙ糖類は、二糖繰り返し単位がガラクトースの代わりにグルコースを含むこと以外は血清群Ｗ１３５糖類と同様である。血清群Ｗ１３５と同様に、血清群Ｙ糖類は可変性Ｏ−アセチル化をシアル酸の７位および９位に有する［６３］。血清群Ｙの構造は、→４）−Ｄ−Ｎｅｕｐ５Ａｃ（７／９ＯＡｃ）−α−（２→６）−Ｄ−Ｇｌｃ−α−（１→と記載される。
本発明に従って使用される糖類は、上記の通りＯ−アセチル化されていてもよく（例えば、Ｏ−アセチル化パターンがネイティブな莢膜糖において見られるものと同じである）、糖類の環の１つまたは複数の位置で部分的に、または完全に脱Ｏ−アセチル化されていてもよく、ネイティブな莢膜糖と比較して高Ｏ−アセチル化されていてもよい。例えば、参考文献６４には、８０％超が脱Ｏ−アセチル化されている血清群Ｙ糖類の使用が報告されている。
髄膜炎菌コンジュゲートの糖類部分は、髄膜炎菌から調製された全長の糖類を含んでよく、かつ／または、全長の糖類の断片を含んでよい、すなわち、糖類は細菌に見られるネイティブな莢膜糖よりも短くてよい。したがって、糖類を脱重合することができ、脱重合は、糖類を精製する間またはその後であるがコンジュゲート化の前に行う。脱重合により、糖類の鎖長が短縮される。脱重合方法の１つでは過酸化水素の使用が伴う［６５］。過酸化水素を糖類に加え（例えば最終的なＨ２Ｏ２濃度を１％にする）、次いで、混合物を、所望の鎖長の短縮が実現されるまでインキュベートする（例えば約５５℃で）。別の脱重合方法には、酸加水分解が伴う［６６］。他の脱重合方法は当技術分野で公知である。本発明に従って使用するためのコンジュゲートを調製するために使用する糖類は、これらの脱重合方法のいずれによっても得ることができ得る。脱重合は、免疫原性に最適な鎖長をもたらすため、および／または鎖長を短縮して糖類を物理的に扱いやすくするために使用することができる。一部の実施形態では、糖類は以下の範囲の平均重合度（Ｄｐ）を有する：Ａ＝１０〜２０；Ｃ＝１２〜２２；Ｗ１３５＝１５〜２５；Ｙ＝１５〜２５。Ｄｐではなく分子量の単位では、有用な範囲は、全ての血清群について、＜１００ｋＤａ；５ｋＤａ〜７５ｋＤａ；７ｋＤａ〜５０ｋＤａ；８ｋＤａ〜３５ｋＤａ；１２ｋＤａ〜２５ｋＤａ；１５ｋＤａ〜２２ｋＤａである。他の実施形態では、髄膜炎菌血清群Ａ、血清群Ｃ、血清群Ｗ１３５および血清群Ｙのそれぞれ由来の糖類の平均分子量は、５０ｋＤａ超、例えば≧７５ｋＤａ、≧１００ｋＤａ、≧１１０ｋＤａ、≧１２０ｋＤａ、≧１３０ｋＤａなどであってよく［６７］、特にＭＡＬＬＳによって決定して、１５００ｋＤａまでにも至ってよい。例えば、ＭｅｎＡ糖類は、５０〜５００ｋＤａ、例えば６０〜８０ｋＤａの範囲であってよく、ＭｅｎＣ糖類は、１００〜２１０ｋＤａの範囲であってよく、ＭｅｎＷ１３５糖類は、６０〜１９０ｋＤａ、例えば１２０〜１４０ｋＤａの範囲であってよく、かつ／または、ＭｅｎＹ糖類は、６０〜１９０ｋＤａ、例えば１５０〜１６０ｋＤａの範囲であってよい。
成分または組成物がＨｉｂと髄膜炎菌コンジュゲートの両方を含む場合には、一部の実施形態では、Ｈｉｂ糖類の質量は、特定の髄膜炎菌血清群の糖類の質量と実質的に同じであってよい。一部の実施形態では、Ｈｉｂ糖類の質量は、特定の髄膜炎菌血清群の糖類の質量よりも多い（例えば少なくとも１．５倍）。一部の実施形態では、Ｈｉｂ糖類の質量は、特定の髄膜炎菌血清群の糖類の質量よりも少ない（例えば少なくとも１．５分の１）。
組成物が２種以上の髄膜炎菌血清群由来の糖類を含む場合、血清群当たりの平均糖類質量が存在する。各血清群を実質的に同等の質量で使用する場合には、平均質量は個々の質量と同じになり、同等でない質量で使用する場合には、平均は異なり、例えば、ＭｅｎＡＣＷＹ混合物が１０μｇ：５μｇ：５μｇ：５μｇの量であれば、平均質量は血清群当たり６．２５μｇになる。一部の実施形態では、Ｈｉｂ糖類の質量は、血清群当たりの髄膜炎菌の糖類の平均質量と実質的に同じにする。一部の実施形態では、Ｈｉｂ糖類の質量は、血清群当たりの髄膜炎菌の糖類の平均質量よりも多い（例えば少なくとも１．５倍）。一部の実施形態では、Ｈｉｂ糖類の質量は、血清群当たりの髄膜炎菌の糖類の平均質量よりも少ない（例えば少なくとも１．５分の１）［６８］。
肺炎球菌の糖類
Ｓｔｒｅｐｔｏｃｏｃｃｕｓ ｐｎｅｕｍｏｎｉａｅは、細菌性髄膜炎を引き起こし、現存するワクチンは莢膜糖に基づくものである。したがって、本発明の組成物は、担体タンパク質とコンジュゲートした少なくとも１つの肺炎球菌の莢膜糖を含んでよい。
本発明は、１種または複数の異なる肺炎球菌の血清型由来の莢膜糖を含んでよい。組成物が２種以上の血清型由来の糖類抗原を含む場合、これらは、別々に調製し、別々にコンジュゲートし、その後に、組み合わせることが好ましい。肺炎球菌の莢膜糖を精製するための方法は当技術分野で公知であり（例えば、参考文献６９を参照されたい）、２３種の異なる血清型から精製された糖類に基づくワクチンが長年公知である。例えば、参考文献７０に記載されている血清型３についてのもの、または参考文献７１に記載されている血清型１、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆおよび１９Ａについてのものなど、これらの方法に対する改善も記載されている。
肺炎球菌の莢膜糖（複数可）は、典型的には、以下の血清型から選択される：１、２、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、８、９Ｎ、９Ｖ、１０Ａ、１１Ａ、１２Ｆ、１４、１５Ｂ、１７Ｆ、１８Ｃ、１９Ａ、１９Ｆ、２０、２２Ｆ、２３Ｆおよび／または３３Ｆ。したがって、全部で、組成物は、１種、２種、３種、４種、５種、６種、７種、８種、９種、１０種、１１種、１２種、１３種、１４種、１５種、１６種、１７種、１８種、１９種、２０種、２１種、２２種、２３種またはそれ以上の異なる血清型由来の莢膜糖を含んでよい。少なくとも血清型６Ｂ糖類を含む組成物が有用である。
血清型の有用な組合せは、例えば血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆ、および２３Ｆのそれぞれ由来の莢膜糖を含む７価の組合せである。別の有用な組合せは、例えば血清型１、４、５、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆのそれぞれ由来の莢膜糖を含む９価の組合せである。別の有用な組合せは、例えば血清型１、４、５、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆのそれぞれ由来の莢膜糖を含む１０価の組合せである。１１価の組合せは、血清型３由来の糖類をさらに含んでよい。１２価の組合せは、１０価の混合物に、血清型６Ａおよび１９Ａ；６Ａおよび２２Ｆ；１９Ａおよび２２Ｆ；６Ａおよび１５Ｂ；１９Ａおよび１５Ｂ；または２２Ｆおよび１５Ｂを追加してよい。１３価の組合せは、１１価の混合物に：血清型１９Ａおよび２２Ｆ；８および１２Ｆ；８および１５Ｂ；８および１９Ａ；８および２２Ｆ；１２Ｆおよび１５Ｂ；１２Ｆおよび１９Ａ；１２Ｆおよび２２Ｆ；１５Ｂおよび１９Ａ；１５Ｂおよび２２Ｆ；６Ａおよび１９Ａなどを追加してよい。
したがって、有用な１３価の組合せは、例えば参考文献７２〜７５に開示されている通り調製された血清型１、３、４、５、６Ａ、６Ｂ、７Ｆ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９（または１９Ａ）、１９Ｆおよび２３Ｆ由来の莢膜糖を含む。そのような組合せの１つは、血清型６Ｂ糖類を約８μｇ／ｍｌで含み、他の１２糖類をそれぞれ約４μｇ／ｍｌの濃度で含む。別のそのような組合せは、血清型６Ａ糖類および６Ｂ糖類をそれぞれ約８μｇ／ｍｌで含み、他の１１糖類をそれぞれ約４μｇ／ｍｌで含む。
コンジュゲートに適した担体タンパク質としては、細菌の毒素、例えば、ジフテリア毒素もしくは破傷風毒素、またはトキソイドもしくはその変異体が挙げられる。これらは一般にコンジュゲートワクチンに使用される。例えば、ＣＲＭ１９７ジフテリア毒素変異体が有用である［７６］。他の適切な担体タンパク質としては、合成ペプチド［７７、７８］、熱ショックタンパク質［７９、８０］、百日咳タンパク質［８１、８２］、サイトカイン［８３］、リンフォカイン［８３］、ホルモン［８３］、増殖因子［８３］、種々の病原体由来抗原由来の複数のヒトＣＤ４＋Ｔ細胞エピトープを含む人工タンパク質［８４］、例えば、Ｎ１９［８５］、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ由来のタンパク質Ｄ［８６〜８８］、ニューモリシン［８９］またはその無毒性の誘導体［９０］、肺炎球菌の表面タンパク質ＰｓｐＡ［９１］、鉄取り込みタンパク質（ｉｒｏｎ−ｕｐｔａｋｅ ｐｒｏｔｅｉｎ）［９２］、Ｃ．ｄｉｆｆｉｃｉｌｅ由来の毒素Ａまたは毒素Ｂ［９３］、Ｐｓｅｕｄｏｍｏｎａｓ ａｅｒｕｇｉｎｏｓａの組換えエキソプロテインＡ（ｅｘｏｐｒｏｔｅｉｎ Ａ）（ｒＥＰＡ）［９４］などが挙げられる。
肺炎球菌のコンジュゲートワクチンに特に有用な担体タンパク質は、ＣＲＭ１９７、破傷風トキソイド、ジフテリアトキソイドおよびＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅのタンパク質Ｄである。ＣＲＭ１９７はＰＲＥＶＮＡＲ（商標）に使用されている。１３価の混合物では、１３種のコンジュゲートのそれぞれに対してＣＲＭ１９７を担体タンパク質として使用することができ、ＣＲＭ１９７は約５５〜６０μｇ／ｍｌで存在してよい。
組成物が２種以上の肺炎球菌の血清型由来のコンジュゲートを含む場合、別々のコンジュゲートのそれぞれに対して同じ担体タンパク質を使用すること、または異なる担体タンパク質を使用することが可能である。どちらの場合にせよ、異なるコンジュゲートの混合物は、通常、各血清型コンジュゲートを別々に調製し、その後、それらを混合して別々のコンジュゲートの混合物を形成することによって形成する。参考文献９５には、多価の肺炎球菌のコンジュゲートワクチンに異なる担体タンパク質を使用する場合の潜在的な利点が記載されているが、ＰＲＥＶＮＡＲ（商標）製品では、７種の異なる血清型のそれぞれに対して同じ担体が首尾よく使用されている。
担体タンパク質は、肺炎球菌の糖類と、直接またはリンカーを介して共有結合によりコンジュゲートすることができる。種々のリンカーが公知である。例えば、結合はカルボニルを介するものであってよく、これは、改変された糖類の遊離のヒドロキシル基をＣＤＩと反応させ［９６、９７］、その後、タンパク質と反応させてカルバメート結合を形成することによって形成することができる。カルボジイミド縮合を使用することができる［９８］。アジピン酸リンカーを使用することができ、これは、遊離の−ＮＨ２基（例えばアミノ化によって糖類に導入される）をアジピン酸と結合させ（例えば、ジイミド活性化を使用して）、次いで、生じた糖類−アジピン酸中間体にタンパク質を結合させることによって形成することができる［９９、１００］。他のリンカーとしては、β−プロピオンアミド［１０１］、ニトロフェニル−エチルアミン［１０２］、ハロゲン化ハロアシル［１０３］、グリコシド結合［１０４］、６−アミノカプロン酸［１０５］、Ｎ−スクシンイミジル−３−（２−ピリジルジチオ）−プロピオネート（ＳＰＤＰ）［１０６］、アジピン酸ジヒドラジドＡＤＨ［１０７］、Ｃ４〜Ｃ１２部分［１０８］などが挙げられる。
還元的アミノ化を介したコンジュゲート化を使用することができる。糖類をまず過ヨウ素酸を用いて酸化してアルデヒド基を導入することができ、次いでこのアルデヒド基が、例えばリシンのεアミノ基への還元的アミノ化によって担体タンパク質と直接共有結合を形成することができる。糖類が１分子当たりに複数のアルデヒド基を含む場合には、この結合技法により、架橋された生成物が生じ得、複数のアルデヒドが複数の担体アミンと反応する。この架橋コンジュゲート化技法は、少なくとも肺炎球菌の血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１８Ｃ、１９Ｆおよび２３Ｆに対して特に有用である。
肺炎球菌の糖類は、肺炎球菌から調製された全長のインタクトな糖類を含んでよく、かつ／または、全長の糖類の断片を含んでよい、すなわち、糖類は細菌に見られるネイティブな莢膜糖よりも短くてよい。したがって、糖類を脱重合することができ、脱重合は、糖類を精製する間またはその後であるがコンジュゲート化の前に行う。脱重合により、糖類の鎖長が短縮される。脱重合は、免疫原性に最適な鎖長をもたらすため、および／または鎖長を短縮して糖類を物理的に扱いやすくするために使用することができる。２種以上の肺炎球菌の血清型を使用する場合には、各血清型に対してインタクトな糖類を使用すること、各血清型に対して断片を使用すること、または一部の血清型にインタクトな糖類を使用し、他の血清型に断片を使用することが可能である。
組成物が血清型４、６Ｂ、９Ｖ、１４、１９Ｆおよび２３Ｆのいずれか由来の糖類を含む場合、これらの糖類は、インタクトであることが好ましい。対照的に、組成物が血清型１８Ｃ由来の糖類を含む場合、この糖類は、脱重合されていることが好ましい。
血清型３糖類も脱重合することができ、例えば、血清型３糖類を、例えば酢酸を使用して、脱重合するための酸加水分解に供すことができる［７２］。次いで、生じた断片を活性化のために酸化させ（例えば過ヨウ素酸酸化、二価陽イオンの存在下であってよく、例えばＭｇＣｌ２を用いる）、担体（例えばＣＲＭ１９７）と還元性条件下で（例えばシアノ水素化ホウ素ナトリウムを使用して）コンジュゲートし、次いで、（必要に応じて）糖類のあらゆる未反応のアルデヒドにキャップ形成することができる（例えば水素化ホウ素ナトリウムを使用して）［７２］。コンジュゲート化は、例えば、活性化された糖類と担体を一緒に凍結乾燥した後に、凍結乾燥した材料に対して実施することができる。
血清型１糖類は、少なくとも部分的に脱Ｏ−アセチル化することができ、これは、例えば、炭酸水素／炭酸緩衝液を使用することなどによって、アルカリ性ｐＨ緩衝液による処理によって実現される［７３］。そのような（部分的に）脱Ｏ−アセチル化された糖類は、活性化のために酸化し（例えば過ヨウ素酸酸化）、担体（例えばＣＲＭ１９７）と還元性条件下で（例えばシアノ水素化ホウ素ナトリウムを使用して）コンジュゲートし、次いで、（必要に応じて）糖類のあらゆる未反応のアルデヒドにキャップ形成することができる（例えば水素化ホウ素ナトリウムを使用して）［７３］。コンジュゲート化は、例えば、活性化された糖類と担体を一緒に凍結乾燥した後に、凍結乾燥した材料に対して実施することができる。
血清型１９Ａ糖類は、活性化のために酸化し（例えば過ヨウ素酸酸化）、担体（例えばＣＲＭ１９７）とＤＭＳＯ中還元性条件下でコンジュゲートし、次いで、（必要に応じて）糖類のあらゆる未反応のアルデヒドにキャップ形成することができる（例えば水素化ホウ素ナトリウムを使用して）［１０９］。コンジュゲート化は、例えば、活性化された糖類と担体を一緒に凍結乾燥した後に、凍結乾燥した材料に対して実施することができる。
１つまたは複数の肺炎球菌の莢膜糖コンジュゲートは凍結乾燥した形態で存在してよい。
肺炎球菌のコンジュゲートは、関連する糖類に結合する抗莢膜抗体を惹起すること、例えば、≧０．２０μｇ／ｍＬの抗糖類抗体レベルを惹起することができることが理想的である［１１０］。抗体は、酵素イムノアッセイ（ＥＩＡ）および／またはオプソニン活性（ＯＰＡ）の測定によって評価することができる。ＥＩＡ法が広範囲にわたって検証されており、抗体濃度とワクチンの有効性の間には関連性がある。
アジュバント
本発明の組成物は、アジュバント、例えば、（ｉ）水中油エマルション、（ｉｉ）少なくとも１つのアルミニウム塩、または（ｉｉｉ）少なくとも１つのＴＬＲアゴニストを含んでよい。
一部の実施形態では、組成物はアルミニウム塩とＴＬＲアゴニストの混合物を含み、ＴＬＲアゴニストをアルミニウム塩に吸着させてアジュバント効果を改善することができる［１４２］。これにより、よりよい（より強力な、またはより速く実現される）免疫応答をもたらすことができ、かつ／または同等のアジュバント効果を維持しながら組成物中のアルミニウムの量を減少させることを可能にすることができる。
組成物がアルミニウム塩アジュバント（複数可）を含む場合には、組成物中の免疫原のうちの１つから全部が塩（複数可）に吸着していてよい。さらに、以下で論じられている通り、組成物がＴＬＲアジュバントを含む場合には、これも塩（複数可）に吸着していてよい。
組成物がアルミニウム塩アジュバントを含む場合には、水中油エマルションアジュバントは含まないことも好ましい。逆に、組成物が水中油エマルションアジュバントを含む場合には、アルミニウム塩アジュバントは含まないことも好ましい。
水中油エマルションアジュバント
本発明の第２の態様によると、ワクチンも水中油エマルションを用いてアジュバント化する。種々のそのようなエマルションは、例えばＭＦ５９およびＡＳ０３として公知であり、これらはどちらもヨーロッパで認可されている。
有用なエマルションアジュバントは、典型的には、少なくとも１つの油と少なくとも１つの界面活性物質とを含み、その油（複数可）および界面活性物質（複数可）は生分解性（代謝可能）かつ生体適合性である。エマルション中の油滴は、一般に、サブミクロンの直径を有し、これらの小さなサイズは、安定なエマルションをもたらすためにマイクロフルダイザーを用いて、または代替方法、例えば転相によって容易に実現することができる。濾過滅菌に供すことができるので、液滴の少なくとも８０％（数で）の直径が２２０ｎｍ未満であるエマルションが好ましい。
エマルションは、動物性供給源（魚など）および／または植物性供給源由来の油（複数可）を含んでよい。植物油の供給源としては、堅果、種子および穀粒が挙げられる。ピーナッツ油、ダイズ油、ヤシ油、およびオリーブ油が最も一般的に利用可能な堅果油の例である。例えばホホバマメから得たホホバ油を使用することができる。種子油としては、ベニバナ油、綿実油、ヒマワリ種子油、ゴマ種子油などが挙げられる。穀粒群では、トウモロコシ油が最も容易に利用可能であるが、コムギ、エンバク、ライムギ、イネ、テフ、ライコムギなどの他の穀類の穀粒の油も使用することができる。グリセロールおよび１，２−プロパンジオールの炭素６〜１０個の脂肪酸エステルは、種子油中に天然には存在しないが、堅果油および種子油から出発する適切な材料を加水分解し、分離し、エステル化することによって調製することができる。哺乳動物の乳由来の脂肪および油は代謝可能なものであり、したがって、本発明で使用することができる。動物性供給源から純粋な油を得るために必要な分離、精製、鹸化および他の手段の手順は当技術分野で周知である。
大多数の魚は、容易に回収することができる代謝可能な油を含有する。例えば、タラ肝油、サメ肝油、および鯨油、例えば、鯨ろうが、本明細書で使用することができる魚油のいくつかの例である。いくつもの分枝鎖油が、炭素５個のイソプレン単位で生化学的に合成され、一般にテルペノイドと称される。サメ肝油は、スクアレン、２，６，１０，１５，１９，２３−ヘキサメチル−２，６，１０，１４，１８，２２−テトラコサヘキサンとして公知の分枝した不飽和テルペノイドを含有し、これは本発明で使用するために特に好ましい（以下を参照されたい）。スクアレンの飽和型類似体であるスクアランも有用な油である。スクアレンおよびスクアランを含めた魚油は商業的な供給源から容易に入手可能であるか、または、当技術分野で公知の方法によって得ることができる。他の好ましい油はトコフェロールである（以下を参照されたい）。油の混合物を使用することができる。
アジュバントエマルション中の油の好ましい総量（体積％）は、１％から２０％の間、例えば２〜１０％の間である。スクアレンの含有量が５体積％であることが特に有用である。
界面活性物質は、それらの「ＨＬＢ」（親水性／親油性バランス）によって分類することができる。本発明の好ましい界面活性物質のＨＬＢは少なくとも１０、例えば約１５である。本発明では、これだけに限定されないが、ポリオキシエチレンソルビタンエステル界面活性物質（一般にＴｗｅｅｎと称される）、特に、ポリソルベート２０またはポリソルベート８０；商品名ＤＯＷＦＡＸ（商標）の下で販売されているエチレンオキシド（ＥＯ）、プロピレンオキシド（ＰＯ）、および／またはブチレンオキシド（ＢＯ）の共重合体、例えば直鎖状ＥＯ／ＰＯブロック共重合体；反復エトキシ（オキシ−１，２−エタンジイル）基の数が変動し得るオクトキシノール、オクトキシノール−９（トリトンＸ−１００、またはｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール）が特に興味深い；（オクチルフェノキシ）ポリエトキシエタノール（ＩＧＥＰＡＬ ＣＡ−６３０／ＮＰ−４０）；リン脂質、例えばホスファチジルコリン（レシチン）；ノニルフェノールエトキシレート、例えばＴｅｒｇｉｔｏｌ（商標）ＮＰシリーズ；ラウリル、セチル、ステアリルおよびオレイルアルコールに由来するポリオキシエチレン脂肪エーテル（Ｂｒｉｊ界面活性物質として公知である）、例えば、トリエチレングリコールモノラウリルエーテル（Ｂｒｉｊ３０）；ならびにソルビタンエステル（一般にＳｐａｎとして公知である）、例えば、ソルビタントリオレエート（Ｓｐａｎ８５）またはソルビタンモノラウレートなどを含めた界面活性物質を使用することができる。
本発明で使用するエマルションは、非イオン性界面活性物質（複数可）を含むことが好ましい。エマルションに含めるために好ましい界面活性物質は、ポリソルベート８０（ポリオキシエチレンソルビタンモノオレエート；Ｔｗｅｅｎ８０）、Ｓｐａｎ８５（ソルビタントリオレエート）、レシチンまたはトリトンＸ−１００である。界面活性物質の混合物、例えばポリソルベート８０とソルビタントリオレエートの混合物を使用することができる。ポリソルベート８０（Ｔｗｅｅｎ８０）などのポリオキシエチレンソルビタンエステルとｔ−オクチルフェノキシポリエトキシエタノール（トリトンＸ−１００）などのオクトキシノールの組合せも有用である。別の有用な組合せは、ラウレス９と、それに加えてポリオキシエチレンソルビタンエステルおよび／またはオクトキシノールを含む。界面活性物質の混合物を使用する場合には、混合物のＨＬＢは、それらの相対的な重み付け（体積で）に応じて算出され、例えば、好ましいポリソルベート８０とソルビタントリオレエートの体積で１：１の混合物のＨＬＢは８．４である。
アジュバントエマルション中の界面活性物質の好ましい総量（体積％）は、０．１％から２％の間、例えば０．２５〜２％の間である。１体積％の総含有量、例えば、０．５体積％のポリソルベート８０および０．５体積％のソルビタントリオレエートが特に有用である。
有用なエマルションは、公知の技法を使用して調製することができる。例えば、参考文献１３２および１１１〜１１２１１７を参照されたい。
本発明で有用な特定の水中油エマルションアジュバントとしては、これだけに限定されないが、以下が挙げられる：
・スクアレン、ポリソルベート８０、およびソルビタントリオレエートのサブミクロンのエマルション。当該エマルションの組成は、体積で約５％のスクアレン、約０．５％のポリソルベート８０および約０．５％のソルビタントリオレエートであってよい。重量では、これらの比は４．３％のスクアレン、０．５％のポリソルベート８０および０．４８％のソルビタントリオレエートになる。このアジュバントは、参考文献１３１の１０章および参考文献１３２の１２章においてより詳細に記載されている通り、「ＭＦ５９」として公知である［１１８〜１２０］。ＭＦ５９エマルションは、クエン酸イオン、例えば１０ｍＭのクエン酸ナトリウム緩衝液を含むことが好都合である。
・スクアレン、トコフェロール、およびポリソルベート８０のエマルション。当該エマルションはリン酸緩衝生理食塩水を含んでよい。これらのエマルションは、２〜１０％のスクアレン、２〜１０％のトコフェロールおよび０．３〜３％のポリソルベート８０を有してよく、スクアレン：トコフェロールの重量比は、より安定なエマルションをもたらすことができる≦１（例えば０．９０）であることが好ましい。スクアレンおよびポリソルベート８０は約５：２の体積比で、または約１１：５の重量比で存在してよい。したがって、３つの成分（スクアレン、トコフェロール、ポリソルベート８０）は１０６８：１１８６：４８５またはおよそ５５：６１：２５の重量比で存在してよい。このアジュバントは「ＡＳ０３」として公知である。別の有用なこの種類のエマルションは、ヒト用量当たり、０．５〜１０ｍｇのスクアレン、０．５〜１１ｍｇのトコフェロール、および０．１〜４ｍｇのポリソルベート８０を、例えば上記で論じた比で含んでよい［１２１］。
・サポニン（例えばＱｕｉｌＡまたはＱＳ２１）とステロール（例えばコレステロール）がヘリックスミセルとして会合しているエマルション［１２２］。
・０．５〜５０％の油、０．１〜１０％のリン脂質、および０．０５〜５％の非イオン性界面活性物質を有するエマルション。参考文献１２３に記載の通り、好ましいリン脂質成分は、ホスファチジルコリン、ホスファチジルエタノールアミン、ホスファチジルセリン、ホスファチジルイノシトール、ホスファチジルグリセロール、ホスファチジン酸、スフィンゴミエリンおよびカルジオリピンである。サブミクロンの液滴サイズが好都合である。
・スクアレン、水性溶媒、ポリオキシエチレンアルキルエーテル親水性非イオン性界面活性物質（例えば、ポリオキシエチレン（１２）セトステアリルエーテル）および疎水性非イオン性界面活性物質（例えば、ソルビタンモノオレエートまたは「Ｓｐａｎ８０」などのソルビタンエステルまたはマンニドエステル（ｍａｎｎｉｄｅ ｅｓｔｅｒ））を含むエマルション。当該エマルションは、熱可逆性であり、かつ／またはサイズが２００ｎｍ未満の油滴を少なくとも９０％（体積で）有することが好ましい［１２４］。当該エマルションは、アルジトール；凍結保護剤（例えば、ドデシルマルトシドおよび／もしくはスクロースなどの糖）；ならびに／またはアルキルポリグリコシドのうちの１つまたは複数も含んでよい。当該エマルションは、化学構造に糖環が含まれないものなどのＴＬＲ４アゴニストも含んでよい［１２５］。そのようなエマルションは凍結乾燥されていてよい。「ＡＦ０３」製品はそのようなエマルションの１つである。
本発明で使用する好ましい水中油エマルションは、スクアレンおよびポリソルベート８０を含む。
エマルションとＴｄａＰ抗原をワクチン製造の間に混合することもでき、これらを送達時に即座に混合することもできる。したがって、一部の実施形態では、アジュバントおよび抗原は、包装または分配したワクチン中に別々に維持し、使用時に最終的な製剤の準備をすることができる。混合時に（バルク製造の間であるか使用時点であるかにかかわらず）、一般に抗原を水性形態にし、その結果、最終的なワクチンは、２つの液体を混合することによって調製される。混合する２つの液体の体積比は変動し得るが（例えば５：１から１：５の間）、一般に約１：１である。エマルションおよび抗原がキット内で別々に保管される場合には、製品はエマルションを含有するバイアルとして存在してよく、バイアルは、混合してアジュバント化液体ワクチン（単回用量または複数回用量）を提供するための水性抗原を含有する。
本発明の好ましいエマルションとしてスクアレン油が挙げられる。スクアレン油は通常、サメ油から調製されるが、代替の供給源が公知である。例えば、参考文献１２６（酵母）および参考文献１２７（オリーブ油）を参照されたい。参考文献１２８に開示されている通り、スクアレン（ＴＥＱ）１グラム当たり６６１ピコグラム未満のＰＣＢを含有するスクアレンが本発明で使用するために好ましい。エマルションは、参考文献１２９に開示されている通り、例えば２回蒸留によって調製された高純度のスクアレンで構成されることが好ましい。
組成物がトコフェロールを含む場合、α−トコフェロール、β−トコフェロール、γ−トコフェロール、δ−トコフェロール、ε−トコフェロールまたはζ−トコフェロールのいずれも使用することができるが、α−トコフェロールが好ましい。トコフェロールはいくつかの形態、例えば種々の塩および／または異性体の形態をとってよい。塩としては、有機塩、例えば、コハク酸塩、酢酸塩、ニコチン酸塩などが挙げられる。Ｄ−α−トコフェロールおよびＤＬ−α−トコフェロールのどちらも使用することができる。トコフェロールは、エマルションを安定化するために役立ち得る抗酸化特性を有する［１３０］。好ましいα−トコフェロールはＤＬ−α−トコフェロールであり、このトコフェロールの好ましい塩はコハク酸塩である。
アルミニウム塩アジュバント
本発明の組成物は、アルミニウム塩アジュバントを含んでよい。ここで使用されるアルミニウム塩アジュバントは、典型的には、「水酸化アルミニウム」または「リン酸アルミニウム」アジュバントのいずれかをいう。これらは、便宜的な名称であるが、どちらも存在する実際の化学化合物について正確に記載されていない（例えば、参考文献１３１の９章、および参考文献１３２の４章を参照されたい）。本発明では、アジュバントとして有用なあらゆる「水酸化物」または「リン酸」塩を使用することができる。ＴＬＲアゴニストを吸着させることが望まれる場合には、水酸化物イオンを含むアルミニウム塩が好ましい。なぜなら、これらの水酸化物イオンは、ＴＬＲアゴニストを吸着させるためのリガンド交換を容易に行うことができるからである。したがって、ＴＬＲアゴニストを吸着させるために好ましい塩は、水酸化アルミニウムおよび／またはヒドロキシリン酸アルミニウムである。これらは、安定な吸着をもたらすためのリン含有基（例えばリン酸、ホスホン酸）とリガンド交換を容易に行うことができる表面のヒドロキシル部分を有する。したがって、水酸化アルミニウムアジュバントが最も好ましい。
「水酸化アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的には、オキシ水酸化アルミニウム塩であり、通常は少なくとも部分的に結晶性である。オキシ水酸化アルミニウムは、式ＡｌＯ（ＯＨ）で表され、水酸化アルミニウムＡｌ（ＯＨ）３などの他のアルミニウム化合物と、赤外（ＩＲ）分光法によって、具体的には、１０７０ｃｍ−１に吸着バンドが存在し、３０９０〜３１００ｃｍ−１に強力なショルダーが存在することによって区別することができる（参考文献１３１の９章）。水酸化アルミニウムアジュバントの結晶化度は、半分の高さにおける回折バンドの幅（ＷＨＨ）に反映され、結晶性の低い粒子は、微結晶サイズがより小さいことに起因して、より大きな線幅拡大を示す。ＷＨＨが増加するにつれて表面積が増加し、ＷＨＨ値がより大きいアジュバントほど抗原吸着の能力がより大きいと思われる。水酸化アルミニウムアジュバントは典型的には繊維状形態（例えば透過型電子顕微鏡写真で見られるように）であり、例えば、直径が約２ｎｍの針様粒子を有する。水酸化アルミニウムアジュバントのＰＺＣは、典型的には、約１１である、すなわち、アジュバント自体が生理的なｐＨで正の表面電荷を有する。水酸化アルミニウムアジュバントに関しては、吸着容量がｐＨ７．４においてＡｌ＋＋＋１ｍｇ当たりタンパク質１．８〜２．６ｍｇの間であることが報告されている。
「リン酸アルミニウム」として公知のアジュバントは、典型的には、ヒドロキシリン酸アルミニウムであり、多くの場合、少量のサルフェートも含有する。これらは、沈殿によって得ることができ、沈殿の間の反応条件および濃度が塩におけるホスフェートのヒドロキシルとの置換の程度に影響を及ぼす。ヒドロキシホスフェートのＰＯ４／Ａｌモル比は、一般に、０．３から０．９９の間である。ヒドロキシホスフェートは、厳密なＡｌＰＯ４とは、ヒドロキシル基が存在することによって区別することができる。例えば、３１６４ｃｍ−１におけるＩＲスペクトルバンド（例えば２００℃まで加熱した場合）により、構造的なヒドロキシルが存在することが示される（参考文献１３１の９章）。
リン酸アルミニウムアジュバントのＰＯ４／Ａｌ３＋モル比は、一般に、０．３から１．２の間、好ましくは０．８から１．２の間、より好ましくは０．９５±０．１である。リン酸アルミニウムは、特にヒドロキシリン酸塩に関して、一般に非結晶性である。典型的なアジュバントは、１ｍｌあたり０．６ｍｇのＡｌ３＋で含まれる、０．８４から０．９２の間のＰＯ４／Ａｌモル比を有する非結晶性ヒドロキシリン酸アルミニウムである。リン酸アルミニウムは一般に粒子状である。任意の抗原を吸着させた後の典型的な粒子の直径は０．５〜２０μｍの範囲である（例えば約５〜１０μｍ）。リン酸アルミニウムアジュバントに関しては、吸着容量がｐＨ７．４においてＡｌ＋＋＋１ｍｇ当たりタンパク質０．７〜１．５ｍｇの間であることが報告されている。
リン酸アルミニウムのＰＺＣはホスフェートのヒドロキシルとの置換の程度に反比例し、この置換の程度は、沈殿によって塩を調製するために使用する反応条件および反応物の濃度に応じて変動し得る。ＰＺＣは、溶液中の遊離リン酸イオンの濃度を変化させることによっても変わる（リン酸が多いほどＰＺＣがより酸性になる）、またはヒスチジン緩衝液などの緩衝液を加えることによっても変わる（ＰＺＣがより塩基性になる）。本発明に従って使用されるリン酸アルミニウムのＰＺＣは、一般に、４．０から７．０の間、より好ましくは５．０から６．５の間、例えば約５．７である。
溶液中では、リン酸アルミニウムアジュバントと水酸化物アジュバントはどちらも直径１〜１０μｍの安定な多孔質の凝集体を形成する傾向がある［１３３］。
組成物は、水酸化アルミニウムとリン酸アルミニウムの両方の混合物を含んでよく、成分をこれらの塩の一方または両方に吸着させることができる。
本発明の組成物を調製するために使用するリン酸アルミニウム溶液は、緩衝液（例えば、リン酸緩衝液またはヒスチジン緩衝液またはトリス緩衝液）を含有してよいが、これは必要であるとは限らない。リン酸アルミニウム溶液は滅菌されていることおよび発熱物質を含まないことが好ましい。リン酸アルミニウム溶液は、例えば１．０ｍＭから２０ｍＭの間、好ましくは５ｍＭから１５ｍＭの間、より好ましくは約１０ｍＭの濃度で存在する遊離の水性リン酸イオンを含んでよい。リン酸アルミニウム溶液は、塩化ナトリウムも含んでよい。塩化ナトリウムの濃度は、０．１〜１００ｍｇ／ｍｌ（例えば０．５〜５０ｍｇ／ｍｌ、１〜２０ｍｇ／ｍｌ、２〜１０ｍｇ／ｍｌ）の範囲であることが好ましく、約３±１ｍｇ／ｍｌであることがより好ましい。ＮａＣｌが存在することにより、抗原を吸着させる前にｐＨを正しく測定することが容易になる。
本発明の組成物は、単位用量当たり０．８５ｍｇ未満のＡｌ＋＋＋を含むことが理想的である。本発明の一部の実施形態では、組成物は、単位用量当たり０．５ｍｇ未満のＡｌ＋＋＋を含む。Ａｌ＋＋＋の量はこれよりも少なくてよく、例えば、＜２５０μｇ、＜２００μｇ、＜１５０μｇ、＜１００μｇ、＜７５μｇ、＜５０μｇ、＜２５μｇ、＜１０μｇなどであってよい。
本発明の組成物がアルミニウムに基づくアジュバントを含む場合、保管している間に成分の沈降が起こり得る。したがって、患者に投与する前に組成物を振とうするべきである。振とうされた組成物は混濁した白色の懸濁液になる。
ＴＬＲアゴニストとアルミニウム塩の両方が存在する場合、一般に、ＴＬＲアゴニストとＡｌ＋＋＋の重量比は、５：１よりも小さく、例えば４：１未満、３：１未満、２：１未満、または１：１未満である。したがって、例えば、Ａｌ＋＋＋濃度が０．５ｍｇ／ｍｌであれば、ＴＬＲアゴニストの最大濃度は２．５ｍｇ／ｍｌになる。しかし、より高いレベルまたはより低いレベルを使用することができる。例えば、用量当たりＴＬＲアゴニストが１００μｇでありＡｌ＋＋＋が０．２ｍｇであるなど、ＴＬＲアゴニストの質量がＡｌ＋＋＋の質量よりも少ないことが最も典型的であり得る。例えば、ＦＥＮＤＲＩＸ（商標）製品は用量当たり５０μｇの３ｄ−ＭＰＬと０．５ｍｇのＡｌ＋＋＋含む。
ＴＬＲアゴニスト
一部の実施形態では、本発明の組成物は、ＴＬＲアゴニスト、すなわち、Ｔｏｌｌ様受容体に対してアゴニスト作用し得る化合物を含む。ＴＬＲアゴニストはヒトＴＬＲのアゴニストであることが最も好ましい。ＴＬＲアゴニストにより、ＴＬＲ１、ＴＬＲ２、ＴＬＲ３、ＴＬＲ４、ＴＬＲ５、ＴＬＲ６、ＴＬＲ７、ＴＬＲ８、ＴＬＲ９またはＴＬＲ１１のいずれをも活性化することができ、ＴＬＲアゴニストによりヒトＴＬＲ４またはヒトＴＬＲ７を活性化することできることが好ましい。
任意の特定のＴｏｌｌ様受容体に対する化合物のアゴニスト活性は、標準のアッセイによって決定することができる。ＩｍｇｅｎｅｘおよびＩｎｖｉｖｏｇｅｎなどの企業により、ヒトＴＬＲ遺伝子およびＮＦκＢと、それに加えてＴＬＲ活性化経路を測定するための適切なレポーター遺伝子を安定に同時トランスフェクトした細胞系統が供給されている。これらは、高感度の広範な動作範囲ダイナミクスに対して設計されており、ハイスループットなスクリーニングのために使用することができる。そのような細胞系統では、１種または２種の特定のＴＬＲが構成的に発現されていることが典型的である。参考文献１３４も参照されたい。多くのＴＬＲアゴニストが当技術分野で公知であり、例えば、参考文献１３５には、ＴＬＲ２アゴニストである特定のリポペプチド分子が記載されており、参考文献１３６〜１３９には、それぞれ、ＴＬＲ７の小分子アゴニストのクラスが記載されており、参考文献１４０および１４１には、疾患を治療するためのＴＬＲ７アゴニストおよびＴＬＲ８アゴニストが記載されている。
本発明で使用されるＴＬＲアゴニストは、少なくとも１つの吸着性部分を含むことが理想的である。そのような部分をＴＬＲアゴニストに含めることにより、それらを不溶性アルミニウム塩に吸着させ（例えばリガンド交換または任意の他の適切な機構によって）、それらの免疫学的挙動を改善させる［１４２］。リン含有吸着性部分が特に有用であり、そのため、吸着性部分は、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、ホスホナイト、ホスフィナイトなどを含んでよい。
ＴＬＲアゴニストは少なくとも１つのホスホネート基を含むことが好ましい。
したがって、好ましい実施形態では、本発明の組成物は、ホスホネート基を含むＴＬＲアゴニスト（ＴＬＲ７アゴニストなど）を含む。このホスホネート基により、アゴニストを不溶性アルミニウム塩に吸着させることが可能になる［１４２］。
本発明で有用なＴＬＲアゴニストは、単一の吸着性部分を含んでもよく、２つ以上、例えば２〜１５の間の吸着性部分を含んでもよい。典型的には、化合物は１つ、２つまたは３つの吸着性部分を含む。
本発明で有用なリン含有ＴＬＲアゴニストは、式（Ａ１）で表すことができる：
［式中、
ＲＸおよびＲＹは、独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
Ｘは、共有結合、ＯおよびＮＨから選択され、
Ｙは、共有結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、ＳおよびＮＨから選択され、
Ｌは、例えば、Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルケニレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンオキシおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれがハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されているリンカーであり、
各ｐは、独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｑは、１、２、３および４から選択され、
ｎは、１、２および３から選択され、
Ａは、ＴＬＲアゴニスト部分である］。
一実施形態では、式（Ａ１）によるＴＬＲアゴニストは以下の通りである：ＲＸおよびＲＹはＨであり、ＸはＯであり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが１〜２つのハロゲン原子で必要に応じて置換されており、ｐは、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択され、ｎは１である。したがって、これらの実施形態では、吸着性部分は、ホスフェート基を含む。
他の実施形態では、式（Ａ１）によるＴＬＲアゴニストは以下の通りである：ＲＸおよびＲＹはＨであり、Ｘは、共有結合であり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが１〜２つのハロゲン原子で必要に応じて置換されており、ｐは、１、２または３から選択され、ｑは、１または２から選択され、ｎは１である。したがって、これらの実施形態では、吸着性部分は、ホスホネート基を含む。
式（Ａ１）の有用な「Ａ」部分としては、これだけに限定されないが、本明細書において定義されているまたは参考文献１３６、１３７、１３９、１４０、１４２および１７７に開示されている以下の化合物のいずれかの遊離基が挙げられる：
一部の実施形態では、ＴＬＲアゴニスト部分「Ａ」の分子量は１０００Ｄａ未満である。一部の実施形態では、式（Ａ１）のＴＬＲアゴニストの分子量は１０００Ｄａ未満である。
好ましいＴＬＲアゴニストは水溶性である。したがって、これらは、ｐＨ７、２５℃、１気圧において水性緩衝液中で水と混合すると均一な溶液を形成して濃度が少なくとも５０μｇ／ｍｌの溶液を生じ得る。したがって、これらの条件下でのみ難溶性の物質は「水溶性の」という用語から除外される。
有用なＴＬＲアゴニストとしては、下でより詳細に記載されている式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｆ）、（Ｇ）、（Ｈ）、（Ｉ）、（ＩＩ）、（Ｊ）または（Ｋ）を有するＴＬＲアゴニストが挙げられる。他の有用なＴＬＲアゴニストは、参考文献１４２において定義されている化合物１〜１０２である。好ましいＴＬＲ７アゴニストは、下で同定される化合物Ｋ２などの式（Ｋ）を有する。これらは、塩、例えばＫ２のアルギニン塩として使用することができる。
好ましいＴＬＲ４アゴニストは、下でより詳細に記載されているモノホスホリルリピドＡ（ＭＰＬ）の類似体である。例えば、有用なＴＬＲ４アゴニストは、３ｄ−ＭＰＬである。
本発明の組成物は、２種以上のＴＬＲアゴニストを含んでよい。これらの２つのアゴニストは互いとは異なり、同じＴＬＲを標的とするものであっても異なるＴＬＲを標的とするものであってもよい。両方のアゴニストをアルミニウム塩に吸着させることができる。
組成物のＴＬＲアゴニスト（複数可）はいずれも、その少なくとも５０％（質量で）、例えば≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧８５％、≧９０％、≧９２％、≧９４％、≧９５％、≧９６％、≧９７％、≧９８％、≧９９％、さらには１００％がアルミニウム塩（存在する場合）に吸着していることが好ましい。
本発明の組成物が金属塩に吸着したＴＬＲアゴニストを含み、緩衝液も含む場合、高濃度のリン酸イオンにより脱離が引き起こされ得るので、好ましくは、緩衝液中のいずれのリン酸イオンの濃度も５０ｍＭ未満（例えば１〜１５ｍＭの間）であるべきである。ヒスチジン緩衝液を使用することが好ましい。
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）および（Ｈ）−ＴＬＲ７アゴニスト
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、および（Ｈ）のいずれかによる化合物であってよい：
［式中、
（ａ）Ｐ３は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＣＦ３、および−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐＯｓ−および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、Ｐ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリールおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、ただし、Ｐ３およびＰ４のうちの少なくとも一方が−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）であり、
（ｂ）Ｐ５は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、Ｐ６は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択され、それぞれが、Ｃ１〜Ｃ４アルキルおよびＯＨ、および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択される１〜３つの置換基で必要に応じて置換されており、Ｐ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐＯｓ−、−ＮＨＣ１〜Ｃ６アルキルおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、ただし、Ｐ５、Ｐ６およびＰ７のうちの少なくとも１つが−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）であり、
（ｃ）Ｐ８は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＮＨＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、それぞれがＯＨ、および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）で必要に応じて置換されており、Ｐ９およびＰ１０は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、−ＮＨＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、それぞれがＯＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキル、および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）で必要に応じて置換されており、ただし、Ｐ８、Ｐ９またはＰ１０のうちの少なくとも１つが−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）であり、
（ｄ）Ｐ１６および各Ｐ１８は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、Ｐ１７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリール、Ｃ１〜Ｃ６アルキルヘテロアリール、Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリール−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、それぞれがＣ１〜Ｃ６アルキルまたはヘテロシクリルから選択される１〜２つの置換基で必要に応じて置換されている、ただし、Ｐ１６、Ｐ１７またはＰ１８のうちの少なくとも１つが−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）部分を含有し、
ＲＸおよびＲＹは、独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
ＲＣ、ＲＤおよびＲＨは、それぞれ独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
ＸＣは、ＣＨおよびＮから選択され、
ＲＥは、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ（Ｏ）Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ハロゲンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、
ＸＥは、共有結合、ＣＲＥ２ＲＥ３およびＮＲＥ４から選択され、
ＲＥ２、ＲＥ３およびＲＥ４は、独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
ＸＨ１−ＸＨ２は、−ＣＲＨ２ＲＨ３−、−ＣＲＨ２ＲＨ３−ＣＲＨ２ＲＨ３−、−Ｃ（Ｏ）ＣＲＨ２ＲＨ３−、−Ｃ（Ｏ）ＣＲＨ２ＲＨ３−、−ＣＲＨ２ＲＨ３Ｃ（Ｏ）−、−ＮＲＨ４Ｃ（Ｏ）−、Ｃ（Ｏ）ＮＲＨ４−、ＣＲＨ２ＲＨ３Ｓ（Ｏ）２および−ＣＲＨ２＝ＣＲＨ２−から選択され、
ＲＨ２、ＲＨ３およびＲＨ４は、それぞれ独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルおよびＰ１８から選択され、
ＸＨ３は、ＮおよびＣＮから選択され、
Ｘは、共有結合、ＯおよびＮＨから選択され、
Ｙは、共有結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、ＳおよびＮＨから選択され、
Ｌは、共有結合 Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルケニレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンオキシおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれがハロ、ＯＨ、Ｃ１−Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、
ｍは、０または１から選択され、
各ｐは、独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｑは、１、２、３および４から選択され、
ｓは、０および１から選択される］。
式（Ｇ）−ＴＬＲ８アゴニスト
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｇ）による化合物であってよい：
［式中、
Ｐ１１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、ＮＲＶＲＷおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、
Ｐ１２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリールから選択され、−Ｃ（Ｏ）ＮＲＶＲＷ、および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）によって必要に応じて置換されており、
Ｐ１３、Ｐ１４およびＰ１５は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、
ただし、Ｐ１１、Ｐ１２、Ｐ１３、Ｐ１４またはＰ１５のうちの少なくとも１つが−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）であり、
ＲＶおよびＲＷは、独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択されるか、またはそれらが結合する窒素原子と一緒になって４〜７員の複素環を形成し、
ＸＧは、Ｃ、ＣＨおよびＮから選択され、
は、任意選択の二重結合を示し、
が二重結合である場合にはＸＧはＣであり、
ＲＧは、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
Ｘは、共有結合、ＯおよびＮＨから選択され、
Ｙは、共有結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、ＳおよびＮＨから選択され、
Ｌは、共有結合 Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルケニレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンオキシおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれがハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、
各ｐは、独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｑは、１、２、３および４から選択される］。
式（Ｉ）および（ＩＩ）−ＴＬＲ７アゴニスト［１３７］
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｉ）または式（ＩＩ）による化合物であってよい：
［式中、
Ｚは、−ＮＨ２または−ＯＨであり、
Ｘ１は、アルキレン、置換アルキレン、アルケニレン、置換アルケニレン、アルキニレン、置換アルキニレン、カルボシクリレン、置換カルボシクリレン、ヘテロシクリレン、または置換ヘテロシクリレンであり、
Ｌ１は、共有結合、アリーレン、置換アリーレン、ヘテロシクリレン、置換ヘテロシクリレン、カルボシクリレン、置換カルボシクリレン、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、Ｓ（Ｏ）２、−ＮＲ５−、または−Ｏ−である。
Ｘ２は、共有結合、アルキレン、または置換アルキレンであり、
Ｌ２は、ＮＲ５−、−Ｎ（Ｒ５）Ｃ（Ｏ）−、−Ｏ−、−Ｓ−、−Ｓ（Ｏ）−、Ｓ（Ｏ）２、または共有結合であり、
Ｒ３は、Ｈ、アルキル、置換アルキル、ヘテロアルキル、置換ヘテロアルキル、アルケニル、置換アルケニル、アリール、置換アリール、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、ヘテロシクリルアルキル、または置換ヘテロシクリルアルキルであり、
Ｙ１およびＹ２は、それぞれ独立に、共有結合、−Ｏ−または−ＮＲ５−であり、または−Ｙ１−Ｒ１および−Ｙ２−Ｒ２は、それぞれ独立に、−Ｏ−Ｎ＝Ｃ（Ｒ６Ｒ７）であり、
Ｒ１およびＲ２は、それぞれ独立に、Ｈ、アルキル、置換アルキル、カルボシクリル、置換カルボシクリル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、置換ヘテロシクリルアルキル、−アルキレン−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５、−（置換アルキレン）−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５、−アルキレン−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ５、−（置換アルキレン）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｒ５、−アルキレン−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５、または−（置換アルキレン）−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５であり、
Ｒ４は、Ｈ、ハロゲン、−ＯＨ、−Ｏ−アルキル、−Ｏ−アルキレン−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５、−Ｏ−Ｃ（Ｏ）−Ｏ−Ｒ５、−ＳＨ、または−ＮＨ（Ｒ５）であり、
各Ｒ５、Ｒ６、およびＲ７は、独立に、Ｈ、アルキル、置換アルキル、カルボシクリル、置換カルボシクリル、ヘテロシクリル、置換ヘテロシクリル、アルケニル、置換アルケニル、アルキニル、置換アルキニル、アリールアルキル、置換アリールアルキル、ヘテロシクリルアルキル、または置換ヘテロシクリルアルキルである］。
式（Ｊ）−ＴＬＲ２アゴニスト［１４３］
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｊ）による化合物であってよい：
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）−Ｃ７〜Ｃ１８アルキルまたは−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ２は、Ｃ７〜Ｃ１８アルキルであり、
Ｒ３は、Ｃ７〜Ｃ１８アルキルであり、
Ｌ１は、−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−、−ＣＨ２Ｏ−、−ＣＨ２ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であり、
Ｌ２は、−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であり、
Ｒ４は、−Ｌ３Ｒ５または−Ｌ４Ｒ５であり、
Ｒ５は、−Ｎ（Ｒ７）２、−ＯＲ７、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｌ３Ｒ８、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｌ４Ｒ８、−ＯＬ３Ｒ６、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｌ３Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｌ４Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２ＯＲ７、−ＯＳ（Ｏ）２ＯＲ７、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ６アリール、Ｃ１０アリール、Ｃ１４アリール、Ｏ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子を１〜３つ含有する５〜１４員環のヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキルまたはＯ、ＳおよびＮから選択されるヘテロ原子を１〜３つ含有する５〜６員環のヘテロシクロアルキルであり、Ｒ５のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルは、それぞれ置換されていない、またはＲ５のアリール、ヘテロアリール、シクロアルキルおよびヘテロシクロアルキルは、それぞれ、−ＯＲ９、−ＯＬ３Ｒ６、−ＯＬ４Ｒ６、−ＯＲ７、および−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７から独立に選択される１〜３つの置換基で置換されており、
Ｌ３は、Ｃ１〜Ｃ１０アルキレンであり、Ｌ３のＣ１〜Ｃ１０アルキレンは置換されていない、またはＬ３のＣ１〜Ｃ１０アルキレンは１〜４つのＲ６基で置換されている、またはＬ３のＣ１〜Ｃ１０アルキレンは、同じ炭素原子上の２つのＣ１〜Ｃ６アルキル基で置換されており、それらが結合している炭素原子と一緒になってＣ３〜Ｃ８シクロアルキル（cycloakyl）を形成し、
Ｌ４は、−（（ＣＲ７Ｒ７）ｐＯ）ｑ（ＣＲ１０Ｒ１０）ｐ−または−（ＣＲ１１Ｒ１１）（（ＣＲ７Ｒ７）ｐＯ）ｑ（ＣＲ１０Ｒ１０）ｐ−であり、各Ｒ１１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル基であり、それが結合している炭素原子と一緒になってＣ３〜Ｃ８シクロアルキルを形成し、
各Ｒ６は、独立に、ハロ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、１〜２つのヒドロキシル基で置換されたＣ１〜Ｃ６アルキル、−ＯＲ７、−Ｎ（Ｒ７）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ７）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、Ｃ６アリール、Ｃ１０アリールおよびＣ１４アリールから選択され、
各Ｒ７は、独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
Ｒ８は、ＳＲ７、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、ならびにＯおよびＮから選択されるヘテロ原子を１〜３つ含有する５〜６員環のヘテロシクロアルキルから選択され、
Ｒ９は、フェニルであり、
各Ｒ１０は、独立に、Ｈおよびハロから選択され、
各ｐは、独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｑは、１、２、３または４である］。
Ｒ５は、Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｌ３−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）Ｌ４−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、−ＯＬ３−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｌ３−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２、または−Ｃ（Ｏ）ＮＲ７Ｌ４−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ７）２であることが好ましい。
（Ｊ）の一部の実施形態では、Ｒ１はＨである。（Ｊ）の他の実施形態では、Ｒ１は−Ｃ（Ｏ）−Ｃ１５アルキルである。
（Ｊ）の一部の実施形態では、（ｉ）Ｌ１は−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｌ２は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であり、あるいは（ｉｉ）Ｌ１は−ＣＨ２Ｏ−であり、Ｌ２は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であり、あるいは（ｉｉｉ）Ｌ１は−ＣＨ２ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−であり、Ｌ２は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、−ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であり、あるいは（ｉｖ）Ｌ１は−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−であり、Ｌ２は−ＯＣ（Ｏ）−、−Ｏ−、ＮＲ７Ｃ（Ｏ）−または−ＯＣ（Ｏ）ＮＲ７−である。
（Ｊ）の一部の実施形態では、（ｉ）Ｌ１は−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）−であり、Ｌ２は−ＯＣ（Ｏ）−であり、または（ｉｉ）Ｌ１は−ＣＨ２Ｏ−であり、Ｌ２は−Ｏ−であり、または（ｉｉｉ）Ｌ１は−ＣＨ２Ｏ−であり、Ｌ２は−ＮＨＣ（Ｏ）−であり、または（ｉｖ）Ｌ１は−ＣＨ２ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−であり、Ｌ２は−ＯＣ（Ｏ）ＮＨ−である。
（Ｊ）の一部の実施形態では、（ｉ）Ｒ２は−Ｃ１１アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ１１アルキルであり、または（ｉｉ）Ｒ２は−Ｃ１６アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ１６アルキルであり、または（ｉｉｉ）Ｒ２は−Ｃ１６アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ１１アルキルであり、または（ｉｖ）Ｒ２は−Ｃ１２アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ１２アルキルであり、または（ｖ）Ｒ２は−Ｃ７アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ７アルキルであり、または（ｖｉ）Ｒ２は−Ｃ９アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ９アルキルであり、または（ｖｉｉ）Ｒ２は−Ｃ８アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ８アルキルであり、または（ｖｉｉｉ）Ｒ２は−Ｃ１３アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ１３アルキルであり、または（ｉｘ）Ｒ２は−Ｃ１２アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ１１アルキルであり、または（ｘ）Ｒ２は−Ｃ１２アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ１２アルキルであり、または（ｘｉ）Ｒ２は−Ｃ１０アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ１０アルキルであり、または（ｘｉｉ）Ｒ２は−−Ｃ１５アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ１５アルキルである。
（Ｊ）の一部の実施形態では、Ｒ２は−Ｃ１１アルキルであり、Ｒ３は−Ｃ１１アルキルである。
（Ｊ）の一部の実施形態では、Ｌ３はＣ１〜Ｃ１０アルキレンであり、Ｌ３のＣ１〜Ｃ１０アルキレンは置換されていない、または、１〜４つのＲ６基で置換されている。
（Ｊ）の一部の実施形態では、Ｌ４は−（（ＣＲ７Ｒ７）ｐＯ）ｑ（ＣＲ１０Ｒ１０）ｐ−であり、各Ｒ１０は、独立に、ＨおよびＦから選択され、各ｐは、独立に、２、３、および４から選択される。
（Ｊ）の一部の実施形態では、各Ｒ６は、独立に、メチル、エチル、ｉ−プロピル、ｉ−ブチル、−ＣＨ２ＯＨ、−ＯＨ、−Ｆ、−ＮＨ２、−Ｃ（Ｏ）ＯＨ、−Ｃ（Ｏ）ＮＨ２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２およびフェニルから選択される。
（Ｊ）の一部の実施形態では、各Ｒ７は、独立に、Ｈ、メチルおよびエチルから選択される。
ＴＬＲ４アゴニスト
本発明の組成物は、ＴＬＲ４アゴニスト、最も好ましくはヒトＴＬＲ４のアゴニストを含んでよい。ＴＬＲ４は、従来の樹状細胞およびマクロファージを含めた自然免疫系の細胞で発現させる［１４４］。ＴＬＲ４を介した誘発により、ＭｙＤ８８依存性経路とＴＲＩＦ依存性経路の両方を利用するシグナル伝達カスケードが誘導され、それにより、ＮＦ−κＢおよびＩＲＦ３／７それぞれが活性化される。ＴＬＲ４の活性化により、典型的には、ロバストなＩＬ−１２ｐ７０の産生が誘導され、Ｔｈ１型の細胞性免疫応答および液性免疫応答が強力に増強される。
種々の有用なＴＬＲ４アゴニストが当技術分野で公知であり、その多くは内毒素またはリポ多糖（ＬＰＳ）の類似体である。例えば、ＴＬＲ４アゴニストは、以下のものであってよい：
（ｉ）３ｄ−ＭＰＬ（すなわち、３−Ｏ−脱アシル化モノホスホリルリピドＡ；３−ｄｅ−Ｏ−アシル化モノホスホリルリピドＡまたは３−Ｏ−デスアシル−４’−モノホスホリルリピドＡとしても公知である）。この内毒素のモノホスホリルリピドＡ部分の誘導体は、グルコサミンの還元末端の脱アシル化された３位を有する。３ｄ−ＭＰＬは、Ｓａｌｍｏｎｅｌｌａ ｍｉｎｎｅｓｏｔａのヘプトース欠損変異体から調製されており、リピドＡと化学的に類似しているが、酸に不安定なホスホリル基および塩基に不安定なアシル基を欠く。３ｄ−ＭＰＬの調製物は参考文献１４５において最初に記載され、その製品はＣｏｒｉｘａ Ｃｏｒｐｏｒａｔｉｏｎによって製造、販売されている。当該製品は、ＧＳＫの「ＡＳ０４」アジュバント中に存在する。さらなる詳細は、参考文献１４６〜１４９において見いだすことができる。
（ｉｉ）グルコピラノシルリピドＡ（ＧＬＡ）［１５０］またはそのアンモニウム塩：
（ｉｉｉ）アミノアルキルグルコサミニドホスフェート、例えば、ＲＣ−５２９またはＣＲＸ−５２４［１５１〜１５３］。ＲＣ−５２９およびＣＲＸ−５２４は以下の構造を有し、それらのＲ２基が異なる：
（ｉｖ）リン酸含有非環式骨格に結合した脂質を含有する化合物、例えば、ＴＬＲ４アンタゴニストＥ５５６４［１５４、１５５］：
（ｖ）参考文献１５６において定義されている式Ｉ、式ＩＩまたは式ＩＩＩの化合物、またはその塩、例えば、化合物「ＥＲ８０３０５８」、「ＥＲ８０３７３２」、「ＥＲ８０４０５３」、「ＥＲ８０４０５８」、「ＥＲ８０４０５９」、「ＥＲ８０４４４２」、「ＥＲ８０４６８０」、「ＥＲ８０３０２２」、「ＥＲ８０４７６４」または「ＥＲ８０４０５７」。ＥＲ８０４０５７は、Ｅ６０２０としても公知であり、以下の構造を有し：
ＥＲ８０３０２２は以下の構造を有する：
（ｖｉ）参考文献１５７に開示されているポリペプチドリガンドのうちの１つ。
これらのＴＬＲ４アゴニストはいずれも、本発明で使用することができる。
本発明の組成物は、ＴＬＲ４アゴニストが吸着したアルミニウム塩を含んでよい。吸着性の性質を有するＴＬＲ４アゴニストは、典型的には、アルミニウム塩上の表面基と、特に、表面に水酸基を有する塩とのリガンド交換を行うことができるリン含有部分を含む。したがって、有用なＴＬＲ４アゴニストは、ホスフェート、ホスホネート、ホスフィネート、ホスホナイト、ホスフィナイト、ホスフェートなどを含んでよい。好ましいＴＬＲ４アゴニストは、少なくとも１つのリホスフェート基［１４２］、例えば上で列挙されているアゴニスト（ｉ）〜（ｖ）を含む。
本発明で使用するために好ましいＴＬＲ４アゴニストは３ｄ−ＭＰＬである。これは、リン酸アルミニウムアジュバント、水酸化アルミニウムアジュバント、またはその両方の混合物に吸着させることができる［１５８］。
３ｄ−ＭＰＬは、それらのアシル化に関して変動する（例えば、長さが異なり得るアシル鎖を３つ、４つ、５つまたは６つ有する）、関連する分子の混合物の形態をとってよい。２つのグルコサミン（２−デオキシ−２−アミノ−グルコースとしても公知である）単糖は、それらの２位の炭素において（すなわち、２位および２’位において）Ｎ−アシル化されており、３’位にＯ−アシル化も存在する。炭素２に結合している基は、式−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＲ１Ｒ１’を有する。炭素２’に結合している基は、式−ＮＨ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＲ２Ｒ２’を有する。炭素３’に結合している基は、式−Ｏ−ＣＯ−ＣＨ２−ＣＲ３Ｒ３’を有する。代表的な構造は、
である。
Ｒ１基、Ｒ２基およびＲ３基は、それぞれ独立に、−（ＣＨ２）ｎ−ＣＨ３である。ｎの値は、８から１６の間であることが好ましく、９から１２の間であることがより好ましく、１０であることが最も好ましい。
Ｒ１’基、Ｒ２’基およびＲ３’基は、それぞれ独立に、（ａ）−Ｈ；（ｂ）−ＯＨ；または（ｃ）−Ｏ−ＣＯ−Ｒ４であってよく、Ｒ４は−Ｈまたは−（ＣＨ２）ｍ−ＣＨ３のいずれかであり、ｍの値は、８から１６の間であることが好ましく、１０、１２または１４であることがより好ましい。２位では、ｍは、１４であることが好ましい。２’位では、ｍは、１０であることが好ましい。３’位では、ｍは、１２であることが好ましい。したがって、Ｒ１’基、Ｒ２’基およびＲ３’基は、ドデカン酸、テトラデカン酸またはヘキサデカン酸由来の−Ｏ−アシル基であることが好ましい。
Ｒ１’、Ｒ２’およびＲ３’の全てが−Ｈである場合には、３ｄ−ＭＰＬはアシル鎖を３つのみ有する（２位、２’位および３’位のそれぞれにあるもの）。Ｒ１’、Ｒ２’およびＲ３’のうちの２つのみが−Ｈである場合には、３ｄ−ＭＰＬは、アシル鎖を４つ有し得る。Ｒ１’、Ｒ２’およびＲ３’のうちの１つのみが−Ｈである場合には、３ｄ−ＭＰＬはアシル鎖を５つ有し得る。Ｒ１’、Ｒ２’およびＲ３’のいずれも−Ｈではない場合には、３ｄ−ＭＰＬはアシル鎖を６つ有し得る。本発明に従って使用される３ｄ−ＭＰＬは、アシル鎖を３〜６つ有するこれらの形態の混合物であってよいが、特に、アシル鎖が６つの形態が全３ｄ−ＭＰＬの少なくとも１０重量％、例えば≧２０％、≧３０％、≧４０％、≧５０％またはそれ以上を占めることが確実になるように、アシル鎖を６つ有する３ｄ−ＭＰＬを混合物中に含めることが好ましい。アシル鎖を６つ有する３ｄ−ＭＰＬはアジュバント活性が最も高い形態であることが見いだされている。
したがって、本発明で使用するために最も好ましい３ｄ−ＭＰＬの形態は、
である。
３ｄ−ＭＰＬが混合物の形態で使用される場合には、本発明の組成物中の３ｄ−ＭＰＬの量または濃度への言及は、混合物中の複合３ｄ−ＭＰＬ種を指す。
典型的な組成物は、３ｄ−ＭＰＬを、２５μｇ／ｍｌから２００μｇ／ｍｌの間、例えば、５０〜１５０μｇ／ｍｌ、７５〜１２５μｇ／ｍｌ、９０〜１１０μｇ／ｍｌの範囲、または約１００μｇ／ｍｌの濃度で含む。通常は、用量当たり２５〜７５μｇの間の３ｄ−ＭＰＬ、例えば、用量当たり４５〜５５μｇの間、または約５０μｇの３ｄ−ＭＰＬが投与される。
水性条件では、３ｄ−ＭＰＬは、サイズが異なり、例えば直径が＜１５０ｎｍまたは＞５００ｎｍのミセル状の凝集体または粒子を形成し得る。これらのいずれかまたは両方を本発明で使用することができ、よりよい粒子は慣例的なアッセイによって選択することができる。より小さな粒子（例えば、３ｄ−ＭＰＬの清澄な水性懸濁液を生じるために十分に小さい粒子）は、活性が優れているので、本発明に従って使用するために好ましい［１５９］。好ましい粒子の平均直径は、１５０ｎｍ未満、より好ましくは１２０ｎｍ未満であり、さらには１００ｎｍ未満の平均直径であってもよい。しかし、ほとんどの場合、平均直径は５０ｎｍを下回らない。３ｄ−ＭＰＬがアルミニウム塩に吸着している場合には、３Ｄ−ＭＰＬの粒子サイズを直接測定することが可能でない場合があるが、粒子サイズは、吸着が起こる前に測定することができる。粒子の直径は、粒子の直径の平均を明らかにする動的光散乱の慣例的な技法によって評価することができる。粒子の直径がｘｎｍであるといわれる場合、一般に、粒子の分布はおよそこの平均であるが、数で少なくとも５０％（例えば≧６０％、≧７０％、≧８０％、≧９０％、またはそれ以上）の粒子の直径がｘ±２５％の範囲内である。
式（Ｋ）［１６０］
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｋ）による化合物であってよい：
［式中、
Ｒ１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ（Ｒ５）２ＯＨ、−Ｌ１Ｒ５、−Ｌ１Ｒ６、−Ｌ２Ｒ５、−Ｌ２Ｒ６、−ＯＬ２Ｒ５、または−ＯＬ２Ｒ６であり、
Ｌ１は、−Ｃ（Ｏ）−または−Ｏ−であり、
Ｌ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ２〜Ｃ６アルケニレン、アリーレン、ヘテロアリーレンまたは−（（ＣＲ４Ｒ４）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐであり、Ｌ２のＣ１〜Ｃ６アルキレンおよびＣ２〜Ｃ６アルケニレンは、１〜４つのフルオロ基で必要に応じて置換されており、
各Ｌ３は、独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＲ４Ｒ４）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、Ｌ３のＣ１〜Ｃ６アルキレンは、１〜４つのフルオロ基で必要に応じて置換されており、
Ｌ４は、アリーレンまたはヘテロアリーレンであり、
Ｒ２は、ＨまたはＣ１〜Ｃ６アルキルであり、
Ｒ３は、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−Ｌ３Ｒ５、−Ｌ１Ｒ５、−Ｌ３Ｒ７、−Ｌ３Ｌ４Ｌ３Ｒ７、−Ｌ３Ｌ４Ｒ５、−Ｌ３Ｌ４Ｌ３Ｒ５、−ＯＬ３Ｒ５、−ＯＬ３Ｒ７、−ＯＬ３Ｌ４Ｒ７、−ＯＬ３Ｌ４Ｌ３Ｒ７、−ＯＲ８、−ＯＬ３Ｌ４Ｒ５、−ＯＬ３Ｌ４Ｌ３Ｒ５および−Ｃ（Ｒ５）２ＯＨから選択され、
各Ｒ４は、独立に、Ｈおよびフルオロから選択され、
Ｒ５は、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ９）２であり、
Ｒ６は、−ＣＦ２Ｐ（Ｏ）（ＯＲ９）２または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、
Ｒ７は、−ＣＦ２Ｐ（Ｏ）（ＯＲ９）２または−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０であり、
Ｒ８は、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
各Ｒ９は、独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
Ｒ１０は、ＨまたはＣ１〜Ｃ４アルキルであり、
各ｐは、独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｑは、１、２、３または４である］。
式（Ｋ）の化合物は、式（Ｋ’）の化合物であることが好ましい：
［式中、
Ｐ１は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択され、ＣＯＯＨおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）で必要に応じて置換されており、
Ｐ２は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、
ただし、Ｐ１およびＰ２のうちの少なくとも一方が−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）であり、
ＲＢは、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
ＲＸおよびＲＹは、独立に、ＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキルから選択され、
Ｘは、共有結合、ＯおよびＮＨから選択され、
Ｙは、共有結合、Ｏ、Ｃ（Ｏ）、ＳおよびＮＨから選択され、
Ｌは、共有結合 Ｃ１〜Ｃ６アルキレン、Ｃ１〜Ｃ６アルケニレン、アリーレン、ヘテロアリーレン、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンオキシおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、
各ｐは、独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｑは、１、２、３および４から選択される］。
式（Ｋ’）の一部の実施形態では、Ｐ１は、Ｃ１〜Ｃ６アルキルから選択され、ＣＯＯＨおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）で必要に応じて置換されており、Ｐ２は、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、ＲＢは、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｘは、共有結合であり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
好ましい式ＫのＴＬＲ７アゴニストは、３−（５−アミノ−２−（２−メチル−４−（２−（２−（２−ホスホノエトキシ）エトキシ）エトキシ）フェネチル）ベンゾ［ｆ］−［１，７］ナフチリジン−８−イル）プロパン酸であり、本明細書では、化合物「Ｋ２」と称される：
Ｋ２化合物は、アルギニン塩一水和物としても使用することができる。
式（Ｆ）−ＴＬＲ７アゴニスト［１３８］
ＴＬＲアゴニストは、式（Ｆ）による化合物であってよい：
［式中、
Ｘ３は、Ｎであり、
Ｘ４は、ＮまたはＣＲ３であり、
Ｘ５は、−ＣＲ４＝ＣＲ５−であり、
Ｒ１およびＲ２は、Ｈであり、
Ｒ３は、Ｈであり、
Ｒ４およびＲ５は、それぞれ独立に、Ｈ、ハロゲン、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ７、−Ｃ（Ｏ）Ｒ７、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ１１Ｒ１２）、−Ｎ（Ｒ１１Ｒ１２）、−Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＨＮ（Ｒ９）２、−ＳＲ７、−（ＣＨ２）ｎＯＲ７、−（ＣＨ２）ｎＲ７、−ＬＲ８、−ＬＲ１０、−ＯＬＲ８、−ＯＬＲ１０、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケン、Ｃ２〜Ｃ８アルキン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、およびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ４およびＲ５のＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ８アルケン基、Ｃ２〜Ｃ８アルキン基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ基、アリール基、ヘテロアリール基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、およびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基は、それぞれが、独立に、ハロゲン、−ＣＮ、−ＮＯ２、−Ｒ７、−ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｎ（Ｒ９）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−Ｐ（Ｏ）（０Ｒ１０）２．−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１０）２、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９）２、および−ＮＲ９Ｓ（Ｏ）２Ｒ８から選択される１〜３つの置換基で必要に応じて置換されており、
あるいは、Ｒ３とＲ４、またはＲ４とＲ５、またはＲ５とＲ６が近接する環原子上に存在する場合、必要に応じて一緒になって結合して５〜６員環を形成していてもよく、５〜６員環は、Ｒ７で必要に応じて置換されており、
各Ｌは、独立に、結合、−（Ｏ（ＣＨ２）ｍ）ｔ−、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニレンおよびＣ２〜Ｃ６アルキニレンから選択され、ＬのＣ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ２〜Ｃ６アルケニレン、およびＣ２〜Ｃ６アルキニレンは、それぞれが、ハロゲン、−Ｒ８、−ＯＲ８、−Ｎ（Ｒ９）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１０）２、および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１０）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、
Ｒ７は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケン、Ｃ２〜Ｃ８アルキン、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ、およびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ７のＣ１〜Ｃ６アルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ８アルケン基、Ｃ２〜Ｃ８アルキン基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルコキシ基、およびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基は、それぞれが１〜３つのＲ１３基で必要に応じて置換されており、各Ｒ１３は、ハロゲン、−ＣＮ、−ＬＲ９、−ＬＯＲ９、−ＯＬＲ９、−ＬＲ１０、−ＬＯＲ１０、−ＯＬＲ１０、−ＬＲ８、−ＬＯＲ８、−ＯＬＲ８、−ＬＳＲ８、−ＬＳＲ１０、−ＬＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＯＬＣ（Ｏ）Ｒ８、−ＬＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＬＣ（Ｏ）Ｒ１０、−ＬＯＣ（Ｏ）ＯＲ８、−ＬＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ１１、−ＬＣ（Ｏ）ＮＲ９Ｒ８、−ＬＮ（Ｒ９）２、−ＬＮＲ９Ｒ８、−ＬＮＲ９Ｒ１０、−ＬＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、−ＬＳ（Ｏ）２Ｒ８、−ＬＳ（Ｏ）Ｒ８、−ＬＣ（Ｏ）ＮＲ８ＯＨ、−ＬＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＬＮＲ９Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−ＬＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９）２、−ＯＬＳ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９）２、−ＬＮＲ９Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−ＬＣ（Ｏ）ＮＲ９ＬＮ（Ｒ９）２、−ＬＰ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−ＬＯＰ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−ＬＰ（Ｏ）（ＯＲ１０）２および−ＯＬＰ（Ｏ）（ＯＲ１０）２から独立に選択され、
各Ｒ８は、Ｈ、−ＣＨ（Ｒ１０）２、Ｃ１〜Ｃ８アルキル、Ｃ２〜Ｃ８アルケン、Ｃ２〜Ｃ８アルキン、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキルおよびＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシから独立に選択され、Ｒ８のＣ１〜Ｃ８アルキル基、Ｃ２〜Ｃ８アルケン基、Ｃ２〜Ｃ８アルキン基、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシ基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ２〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ヒドロキシアルキル基およびＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシ基は、それぞれが、−ＣＮ、Ｒ１１、−ＯＲ１１、−ＳＲ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１１、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、−ＮＲ９Ｒ１０、−ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｎ（Ｒ９）２、−ＯＲ９、−ＯＲ１０、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ＯＨ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１１、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１１）２、および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１１）２から独立に選択される１〜３つの置換基で必要に応じて置換されており、
各Ｒ９は、Ｈ、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１０、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ１０、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１０、−Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキルおよびＣ３〜Ｃ６シクロアルキルから独立に選択される、または各Ｒ９は、独立に、それが結合しているＮと一緒にＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルを形成するＣ１〜Ｃ６アルキルであり、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル環は、Ｎ、ＯおよびＳから選択される追加的なヘテロ原子を必要に応じて含有しており、Ｒ９のＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル基、Ｃ３〜Ｃ６シクロアルキル基、またはＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基は、それぞれが、−ＣＮ、Ｒ１１、−ＯＲ１１、−ＳＲ１１、−Ｃ（Ｏ）Ｒ１１、ＯＣ（Ｏ）Ｒ１１、−Ｃ（Ｏ）０Ｒ１１、−ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１Ｒ１２、−Ｃ（Ｏ）ＮＲ１１ＯＨ、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、−Ｓ（Ｏ）Ｒ１１、−Ｓ（Ｏ）２ＮＲ１１Ｒ１２、−ＮＲ１１Ｓ（Ｏ）２Ｒ１１、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１１）２および−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１１）２から独立に選択される１〜３つの置換基で必要に応じて置換されており、
各Ｒ１０は、アリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルおよびヘテロアリールから独立に選択され、アリール基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基およびヘテロアリール基は、ハロゲン、−Ｒ８、−ＯＲ８、−ＬＲ９、−ＬＯＲ９、−Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ９ＣＯ２Ｒ８、−ＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８および−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２から選択される１〜３つの置換基で必要に応じて置換されており、
Ｒ１１およびＲ１２は、独立に、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル、アリール、ヘテロアリール、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル、およびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキルから選択され、Ｒ１１およびＲ１２のＣ１〜Ｃ６アルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ヘテロアルキル基、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキル基、アリール基、ヘテロアリール基、Ｃ３〜Ｃ８シクロアルキル基、およびＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル基は、それぞれが、ハロゲン、−ＣＮ、Ｒ８、−ＯＲ８、Ｃ（Ｏ）Ｒ８、ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ８Ｃ（Ｏ）ＯＲ８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、Ｃ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ９Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、Ｃ１〜Ｃ６ハロアルキルおよびＣ１〜Ｃ６ハロアルコキシから独立に選択される１〜３つの置換基で必要に応じて置換されており、
または、Ｒ１１およびＲ１２は、それぞれ独立に、Ｃ１〜Ｃ６アルキルであり、それらが結合しているＮ原子と一緒になって、Ｎ、ＯおよびＳから選択される追加的なヘテロ原子を必要に応じて含有している、必要に応じて置換されているＣ３〜Ｃ８ヘテロシクロアルキル環を形成し、
環Ａは、アリールまたはヘテロアリールであり、環Ａのアリール基およびヘテロアリール基は、１〜３つのＲＡ基で必要に応じて置換されており、各ＲＡは、−Ｒ８、−Ｒ７、−ＯＲ７、−ＯＲ８、−Ｒ１０、−ＯＲ１０、−ＳＲ８、−ＮＯ２、−ＣＮ、−Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ９Ｃ（Ｓ）Ｒ８、−ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ９Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ９ＣＯ２Ｒ８、−ＮＲ９ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ９ＮＲ９Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ９ＮＲ９ＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）ＣＨ２Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−ＣＯ２Ｒ８、−（ＣＨ２）ｎＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｓ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、−Ｃ（Ｓ）Ｎ（Ｒ９）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｎ（Ｒ９）２、−ＯＣ（Ｏ）Ｒ８、−Ｃ（Ｏ）Ｎ（ＯＲ８）Ｒ８、−Ｃ（ＮＯＲ８）Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）２Ｒ８、−Ｓ（Ｏ）３Ｒ８、−ＳＯ２Ｎ（Ｒ９）２、−Ｓ（Ｏ）Ｒ８、−ＮＲ９ＳＯ２Ｎ（Ｒ９）２、−ＮＲ９ＳＯ２Ｒ８、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ８）２、−Ｐ（Ｏ）（ＯＲ１０）２、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＲ１０）２、−Ｎ（０Ｒ８）Ｒ８、−ＣＨ＝ＣＨＣＯ２Ｒ８、−Ｃ（＝ＮＨ）−Ｎ（Ｒ９）２、および−（ＣＨ２）ｎＮＨＣ（Ｏ）Ｒ８から独立に選択される、または環Ａの２つの近接するＲＡ置換基は、最大２つのヘテロ原子を環員として含有する５〜６員環を形成し、
ｎは、独立に、各出現時に、０、１、２、３、４、５、６、７または８であり、
各ｍは、独立に、１、２、３、４、５および６から選択され、
ｔは、１、２、３、４、５、６、７または８である］。
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｇ）および（Ｈ）
上記で論じた通り、ＴＬＲアゴニストは、式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、（Ｇ）または（Ｈ）のＴＬＲアゴニストであってよい。
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）および（Ｈ）の「親」化合物は有用なＴＬＲ７アゴニストであるが（参考文献１３６〜１３９および１６１〜１７７を参照されたい）、本明細書では、リン含有部分を結合させることによって改変されていることが好ましい。
式（Ｃ）、（Ｄ）および（Ｅ）の一部の実施形態では、化合物は、以下に示されている式（Ｃ｀）、（Ｄ｀）および（Ｅ｀）による構造を有する：
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）および（Ｈ）の本発明の実施形態は、式（Ｃ｀）、（Ｄ｀）、（Ｅ｀）および（Ｈ｀）にも当てはまる。
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、および（Ｈ）の一部の実施形態では、ＸはＯであり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
式（Ｃ）の他の実施形態では、Ｐ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＣＦ３、および−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐＯｓ−および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、Ｐ４は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリールおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、ＸＣは、ＣＨであり、Ｘは、共有結合であり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１または２である。
式（Ｃ）、（Ｄ）、（Ｅ）、および（Ｈ）の他の実施形態では、Ｘは、共有結合であり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
式（Ｃ）の他の実施形態では、Ｐ３は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、ＣＦ３、および−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐＯｓ−および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、Ｐ４は、−Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリールおよび−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択され、ＸＣは、Ｎであり、Ｘは、共有結合であり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
式（Ｄ）の他の実施形態では、Ｐ５は、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）から選択される。
式（Ｄ）の他の実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
式（Ｄ）の他の実施形態では、Ｘは、共有結合であり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
式（Ｅ）の他の実施形態では、Ｘは、Ｏであり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
式（Ｅ）の他の実施形態では、Ｘは、共有結合であり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
式（Ｅ）の他の実施形態では、ＸＥは、ＣＨ２であり、Ｐ８は、Ｃ１〜Ｃ６アルコキシであり、−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）で必要に応じて置換されている。
式（Ｅ）の他の実施形態では、Ｐ９は、−ＮＨＣ１〜Ｃ６アルキルであり、ＯＨおよびＣ１〜Ｃ６アルキル、および−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）で必要に応じて置換されている。
一部の実施形態では、式（Ｃ）の化合物は、Ｐ４が−Ｙ−Ｌ−Ｘ−Ｐ（Ｏ）（ＯＲＸ）（ＯＲＹ）である化合物ではない。
一部の実施形態では、式（Ｃ）の化合物において、Ｐ４は、Ｈ、Ｃ１〜Ｃ６アルキル、−Ｃ１〜Ｃ６アルキルアリールから選択される。
式（Ｈ）の一部の実施形態では、ＸＨ１−ＸＨ２は、ＣＲＨ２ＲＨ３であり、ＲＨ２およびＲＨ３は、Ｈであり、ＸＨ３は、Ｎであり、Ｘは、共有結合であり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
式（Ｈ）の一部の実施形態では、ＸＨ１−ＸＨ２は、ＣＲＨ２ＲＨ３であり、ＲＨ２およびＲＨ３は、Ｈであり、ＸＨ３は、Ｎであり、ＸはＯであり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
式（Ｇ）の「親」化合物は、有用なＴＬＲ８アゴニストであるが（参考文献１４０および１４１を参照されたい）、本明細書では、吸着を可能にするために、リン含有部分を結合させることによって改変されていることが好ましい。式（Ｇ）の一部の実施形態では、化合物は式（Ｇ｀）による構造を有する；
式（Ｇ）または（Ｇ｀）の一部の実施形態では、ＸＧは、Ｃであり
は、二重結合を示す。
式（Ｇ）または（Ｇ｀）の一部の実施形態では、Ｘは、共有結合であり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
式（Ｇ）または（Ｇ｀）の一部の実施形態では、ＸはＯであり、Ｌは、Ｃ１〜Ｃ６アルキレンおよび−（（ＣＨ２）ｐＯ）ｑ（ＣＨ２）ｐ−から選択され、それぞれが、ハロ、ＯＨ、Ｃ１〜Ｃ４アルキル、−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２および−Ｐ（Ｏ）（ＯＨ）２から独立に選択される１〜４つの置換基で必要に応じて置換されており、各ｐは、独立に、１、２および３から選択され、ｑは、１および２から選択される。
免疫原性組成物
本発明の組成物は、上記で論じた抗原およびアジュバント成分に加えて、さらなる非抗原性成分（複数可）を含んでよい。これらとしては、担体、賦形剤、緩衝液などが挙げられる。これらの非抗原性成分は、種々の供給源を有してよい。例えば、それらは、製造の間に使用される抗原またはアジュバント材料のうちの１つの中に存在してもよく、それらの成分から別々に添加することもできる。
本発明の好ましい組成物は、１種または複数の医薬担体（複数可）および／または賦形剤（複数可）を含む。
浸透圧を制御するために、ナトリウム塩などの生理学的塩を含めることが好ましい。塩化ナトリウム（ＮａＣｌ）が好ましく、これは１ｍｇ／ｍｌから２０ｍｇ／ｍｌの間で存在してよい。
一般に、組成物の重量オスモル濃度は、２００ｍＯｓｍ／ｋｇから４００ｍＯｓｍ／ｋｇの間、好ましくは２４０〜３６０ｍＯｓｍ／ｋｇの間であり、２８０〜３２０ｍＯｓｍ／ｋｇの範囲内であることがより好ましい。重量オスモル濃度はワクチン接種によって引き起こされる疼痛には影響しないことが以前報告されているが［１７８］、それにもかかわらず重量オスモル濃度をこの範囲に保つことが好ましい。
本発明の組成物は、１種または複数の緩衝液を含んでよい。典型的な緩衝液としては、リン酸緩衝液；トリス緩衝液；ホウ酸緩衝液；コハク酸塩緩衝液；ヒスチジン緩衝液；またはクエン酸緩衝液が挙げられる。緩衝液は、典型的には、５〜２０ｍＭの範囲で含まれる。
本発明の組成物のｐＨは、一般に、６．０から７．５の間である。したがって、製造プロセスは、包装する前に組成物のｐＨを調整するステップを含んでよい。患者に投与される水性組成物のｐＨは、５．０から７．５の間であり得、より典型的には、最適な安定性のために５．０から６．０の間であり、ジフテリアトキソイドおよび／または破傷風トキソイドが存在する場合には、ｐＨは６．０から７．０の間であることが理想的である。
本発明の組成物は、滅菌されていることが好ましい。
本発明の組成物は、非発熱性であることが好ましく、例えば、用量当たり＜１ＥＵ（内毒素単位、標準の尺度；１ＥＵはＦＤＡ参照標準内毒素ＥＣ−２「ＲＳＥ」０．２ｎｇと等しい）、好ましくは用量当たり＜０．１ＥＵを含有する。
本発明の組成物は、グルテンを含まないことが好ましい。
組成物が吸着した成分を含む場合には、組成物は、濁った外観を有する懸濁液であり得る。この外観は、微生物のコンタミネーションを容易に見ることができないことを意味し、そのため、ワクチンは、抗菌剤を含有することが好ましい。これは、ワクチンが複数回用量用の容器に包装される場合には特に重要である。含めるために好ましい抗菌薬は、２−フェノキシエタノールおよびチメロサールである。しかし、本発明のプロセスの間に水銀系保存剤（例えばチメロサール）は使用しないことが好ましい。したがって、プロセスにおいて混合される成分のうちの１つから全てが水銀系保存剤を実質的に含まなくてもよい。しかし、成分を、本発明において使用する前にそのような保存剤で処理した場合には、微量で存在することは避けられない場合がある。しかし、安全性のために、最終的な組成物が含有する水銀は約２５ｎｇ／ｍｌ未満であることが好ましい。最終的なワクチン製品は、検出可能チメロサールを含有しないことがより好ましい。これは、一般に、本発明のプロセスにおいて抗原調製物を添加する前に水銀系保存剤を除去することによって、または組成物を作製するために使用する成分を調製する間のチメロサールの使用を回避することによって実現される。水銀を含まない組成物が好ましい。
本発明の組成物は、通常、水性形態である。
製造の間に、通常、所望の最終濃度にするためにＷＦＩ（注射用水）、または緩衝液を用いた成分の希釈が実施される。
本発明は、患者への投与のためにその後分配することができる個々の用量に包装するために適したバルク材料を提供し得る。上記で論じた濃度は、典型的には、最終的に包装された用量の濃度であり、そのため、バルクワクチン中の濃度はそれよりも高くなり得る（例えば希釈によって最終濃度を低下させる）。
本発明の組成物は、患者に単位用量、すなわち、単一の患者に単回投与で与えられる組成物の量で投与される（例えば単回注射は、単位用量である）。組成物を液体として投与する場合には、単位用量の体積は、典型的には０．５ｍｌである。この体積は、通常の変動、例えば０．５ｍｌ±０．０５ｍｌを含むものと理解されよう。複数回用量の状況では、複数の投薬量を抽出し、単一の容器、例えば、１０用量の複数回用量用の容器に５ｍｌ（または１０％過充填で５．５ｍｌ）を一緒に包装する。
本発明のプロセスによって産生される最終的なワクチン中には、個々の抗原性成分由来の残留材料も微量で存在してよい。例えば、ジフテリア、破傷風および百日咳のトキソイドを調製するためにホルムアルデヒドを使用する場合には、最終的なワクチン製品は、微量（例えば１０μｇ／ｍｌ未満、好ましくは＜５μｇ／ｍｌ）のホルムアルデヒドを保持してよい。ポリオウイルスの調製の間に培地または安定剤が使用されていてもよく（例えば培地１９９）、これらは最終的なワクチンまで持越してよい。同様に、遊離アミノ酸（例えばアラニン、アルギニン、アスパラギン酸、システインおよび／またはシスチン、グルタミン酸、グルタミン、グリシン、ヒスチジン、プロリンおよび／またはヒドロキシプロリン、イソロイシン、ロイシン、リシン、メチオニン、フェニルアラニン、セリン、トレオニン、トリプトファン、チロシンならびに／あるいはバリン）、ビタミン（例えばコリン、アスコルビン酸など）、リン酸二ナトリウム、リン酸一カリウム、カルシウム、グルコース、硫酸アデニン、フェノールレッド、酢酸ナトリウム、塩化カリウムなどが最終的なワクチン中に、それぞれ≦１００μｇ／ｍｌ、好ましくは≦１０μｇ／ｍｌで保持されてよい。抗原調製物由来の他の成分、例えば、ネオマイシン（例えば硫酸ネオマイシン、特に、ポリオウイルス成分由来）、ポリミキシンＢ（例えば硫酸ポリミキシンＢ、特に、ポリオウイルス成分由来）なども、用量当たりナノグラム以下の量で存在してよい。抗原調製物中の起源の最終的なワクチンのさらに考えられる成分は、抗原の精製が完全でないことから生じる。したがって、少量のＢ．ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ、Ｃ．ｄｉｐｈｔｈｅｒｉａｅ、Ｃ．ｔｅｔａｎｉおよびＳ．ｃｅｒｅｖｉｓｉａｅのタンパク質ならびに／またはゲノムＤＮＡが存在し得る。これらの残留成分の量を最小限にするために、抗原を本発明で使用する前に、抗原調製物を処理してこれらの残留成分を除去することが好ましい。
ポリオウイルス成分を使用する場合、それは、一般に、Ｖｅｒｏ細胞で増殖させたものである。最終的なワクチンが含有するＶｅｒｏ細胞のＤＮＡは１０ｎｇ／ｍｌ未満、好ましくは≦１ｎｇ／ｍｌ、例えば≦５００ｐｇ／ｍｌまたは≦５０ｐｇ／ｍｌであること、例えば、長さが≧５０塩基対のＶｅｒｏ細胞のＤＮＡが１０ｎｇ／ｍｌ未満であることが好ましい。
本発明の組成物は、使用するために容器中に提示される。適切な容器としてはバイアルおよび使い捨てのシリンジ（好ましくは滅菌されたもの）が挙げられる。本発明のプロセスは、使用のためにワクチンを容器中に包装するステップを含んでよい。適切な容器としては、バイアルおよび使い捨てのシリンジ（好ましくは滅菌されたもの）が挙げられる。
本発明は、本発明の医薬組成物を含有する、例えば単位用量を含有する送達デバイス（例えばシリンジ、ネブライザー、噴霧器、吸入器、皮膚パッチなど）も提供する。このデバイスを使用して、組成物を脊椎動物対象に投与することができる。
本発明は、本発明の医薬組成物を含有する、例えば、単位用量を含有する滅菌容器（例えば、バイアル）も提供する。
本発明は、本発明の医薬組成物の単位用量も提供する。
本発明は、本発明の医薬組成物を含有する密封容器も提供する。適切な容器としては、例えば、バイアルが挙げられる。
本発明の組成物をバイアルに提示する場合、バイアルは、ガラスまたはプラスチック材料製であることが好ましい。バイアルに組成物を加える前にバイアルを滅菌することが好ましい。ラテックス感受性患者に伴う問題を回避するために、ラテックスを含まない止め栓でバイアルを密封することができる。バイアルは、単一用量のワクチンを含んでもよく、２以上の用量、例えば１０用量を含んでもよい（「複数回用量」バイアル）。複数回用量バイアルを使用する場合、各用量を厳密な無菌条件の下で、滅菌された針およびシリンジを用いて取り出し、バイアルの内容物へのコンタミネーションが回避されるように注意を払うべきである。好ましいバイアルは無色のガラス製である。
バイアルは、充填済みシリンジをキャップに挿入し、シリンジの内容物をバイアル中に出すこと（例えば凍結乾燥した材料をバイアル中に再構成するために）ができ、バイアルの内容物をシリンジに戻すことができるように適合させたキャップ（例えば、ルアーロック）を有し得る。バイアルからシリンジを取り外した後、針を取り付け得、組成物を患者に投与することができる。キャップは、シールまたはカバーの内側に位置させ、キャップに触ることができるようにする前に、シールまたはカバーを取り外さなければならないようにすることが好ましい。
組成物をシリンジ中に包装する場合、通常シリンジに針は取り付けられていないが、組み立て、使用するための独立した針をシリンジと一緒に供給することができる。安全針が好ましい。１インチ２３ゲージ、１インチ２５ゲージおよび５／８インチ２５ゲージの針が典型的である。シリンジは、記録保持を容易にするために、内容物のロット番号および有効期限が印刷されていてよい剥離式ラベルと共に提供することができる。シリンジ中のプランジャーは、吸引中にプランジャーが偶発的に外れることを防止するために止め栓を有することが好ましい。シリンジは、ラテックスゴムキャップおよび／またはプランジャーを有してよい。使い捨てのシリンジは、単一用量のワクチンを含有する。シリンジは、一般に、針を取り付ける前に先端を密封するための先端キャップを有し、先端キャップは、ブチルゴム製であることが好ましい。シリンジおよび針が別々に包装されている場合には、針は、ブチルゴムシールドにフィットすることが好ましい。灰色のブチルゴムが好ましい。好ましいシリンジは、商品名「Ｔｉｐ−Ｌｏｋ」（商標）の下で販売されているシリンジである。
ガラス容器（例えば、シリンジまたはバイアル）を使用する場合には、ソーダ石灰ガラス製の容器よりもホウケイ酸ガラス製の容器を使用することが好ましい。
組成物を容器内に包装した後、容器を分配用の箱、例えば内側がボール紙の箱に封入することができ、箱には、ワクチンの詳細、例えばその商品名、ワクチン中の抗原の一覧（例えば「Ｂ型肝炎組換え体」など）、容器表示（例えば「使い捨ての充填済みＴｉｐ−Ｌｏｋシリンジ」または「１０×０．５ｍｌの単一用量バイアル」）、その用量（例えば「それぞれが０．５ｍｌ用量を１つ含有する」）、警告（例えば「成人使用専用」または「小児使用専用」）、有効期限、指示、特許番号などのラベルが貼られている。各箱は、２個以上の包装されたワクチン、例えば５個または１０個の包装されたワクチン（特にバイアルに関して）を含有してよい。
ワクチンは、ワクチンの詳細、例えば投与の説明書、ワクチン中の抗原の詳細などを含むリーフレットと一緒に（例えば同じ箱の中に）包装されていてよい。説明書は、例えば、ワクチン接種後にアナフィラキシー反応が起こった場合に備えてアドレナリンの溶液を容易に利用可能にしておくことなどの警告も含有してよい。
包装されたワクチンは、２℃から８℃の間で保管することが好ましい。包装されたワクチンは凍結させるべきではない。
ワクチンは、製造後に完全に液体の形態（すなわち、全ての抗原性成分が水性溶液または水性懸濁液中にある状態）で提供することもでき、使用する時／時点で２つの成分を一緒に混合することによってワクチンを即座に調製することができる形態で調製することもできる。そのような２成分の実施形態は、例えば水性材料を凍結乾燥した材料と混合することによる液体／液体混合および液体／固体混合を含む。例えば、一実施形態では、ワクチンは、（ａ）水性抗原および／またはアジュバントを含む第１の成分と、（ｂ）凍結乾燥した抗原を含む第２の成分を混合することによって作製することができる。別の実施形態では、ワクチンは、（ａ）水性抗原および／またはアジュバントを含む第１の成分と、（ｂ）水性抗原を含む第２の成分を混合することによって作製することができる。別の実施形態では、ワクチンは、（ａ）水性抗原を含む第１の成分と、（ｂ）水性アジュバントを含む第２の成分を混合することによって作製することができる。２つの成分は、別々の容器（例えばバイアルおよび／またはシリンジ）に入れられていることが好ましく、また、本発明は、成分（ａ）および（ｂ）を含むキットを提供する。
別の有用な液体／凍結乾燥した形式は、（ａ）アルミニウム塩とＴＬＲアゴニストの水性複合体および（ｂ）１つまたは複数の抗原を含む凍結乾燥した成分を含む。患者に投与するために適したワクチン組成物は成分（ａ）と（ｂ）を混合することによって得られる。一部の実施形態では、成分（ａ）は抗原を含まず、その結果、最終的なワクチン中の全ての抗原性成分は、成分（ｂ）に由来する。他の実施形態では、成分（ａ）は１つまたは複数の抗原を含み、その結果、最終的なワクチン中の抗原性成分は、成分（ａ）と（ｂ）の両方に由来する。
したがって、本発明は、上記の成分（ａ）および（ｂ）を含む組み合わせワクチンを調製するためのキットを提供する。キットの構成要素は、典型的には、バイアルまたはシリンジであり、単一のキットがバイアルとシリンジの両方を含有してよい。本発明は、そのようなキットを調製するためのプロセスであって、以下：（ｉ）上記の水性成分ワクチンを調製するステップと、（ｉｉ）前記水性組み合わせワクチンを第１の容器、例えば、シリンジ中に包装するステップと、（ｉｉｉ）抗原含有成分を凍結乾燥した形態に調製するステップと、（ｉｖ）前記凍結乾燥した抗原を第２の容器、例えば、バイアル中に包装するステップと、（ｖ）第１の容器と第２の容器を一緒にキット中に包装するステップとを含むプロセスも提供する。次いで、キットを医師に分配することができる。
コンジュゲート成分、特に、Ｈｉｂおよび／または髄膜炎菌および／または肺炎球菌のコンジュゲートを含むワクチンは凍結乾燥した形態でより安定であり得るので、液体／凍結乾燥した形式が特に有用である。したがって、コンジュゲートは本発明で使用する前に凍結乾燥されていてよい。
成分が凍結乾燥されている場合、一般に、成分は、凍結乾燥前に添加された活性のない成分、例えば安定剤を含む。含めるために好ましい安定剤は、ラクトース、スクロースおよびマンニトール、ならびにそれらの混合物、例えばラクトース／スクロース混合物、スクロース／マンニトール混合物などである。したがって、凍結乾燥した材料を水を含むように再構成することによって得られる最終的なワクチンは、ラクトースおよび／またはスクロースを含有し得る。凍結乾燥したワクチンを調製する場合には非結晶性の賦形剤および／または非結晶性の緩衝剤を使用することが好ましい［１７９］。
本発明の組成物の大多数は、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドおよび百日咳トキソイドを含む。小児型組成物では、組成物は、破傷風トキソイドと比較してジフテリアトキソイドを過剰に含む（Ｌｆ単位で測定して）。過剰とは、少なくとも１．５：１、例えば、破傷風トキソイド２Ｌｆごとにジフテリアトキソイド５Ｌｆ（すなわち、２．５：１比）であることが理想的である。これらの実施形態は乳児および小児において最も有用である。青年および成人において最も有用である追加免疫型組成物では、組成物は、ジフテリアトキソイドと比較して破傷風トキソイドを過剰に含む（Ｌｆ単位で測定して）。過剰とは、少なくとも１．５：１、例えばジフテリアトキソイド１Ｌｆごとに破傷風トキソイド２Ｌｆ（すなわち、２：１比）であることが理想的である。さらなる実施形態では、等量のジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドを使用する（Ｌｆ単位で）。ジフテリアまたは破傷風の一方が過剰に存在する場合、過剰とは、理想的には、少なくとも１．５倍、例えば２倍または２．５倍であるべきであるが、過剰とは、通常は５倍を超えない。
本発明の組成物は、血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、ならびにジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および／または百日咳トキソイドのうちの少なくとも１つを含む。組成物が血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイドの４種全てを含むことが理想的である。一部の実施形態では、本発明の組成物は、この一覧にあるもの以外の免疫原を含まない。他の実施形態では、本発明の組成物は、この一覧にあるもの以外の免疫原を含む。したがって、例えば、いくつかの組成物は、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイドおよび百日咳トキソイド、１型、２型および３型に対する不活化ポリオウイルス、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原およびＨｉｂコンジュゲートを含む。これらの組成物の抗原性部分は、この一覧中の抗原からなってもよく、追加的な病原体（例えば髄膜炎菌）由来の抗原をさらに含んでもよい。したがって、組成物は、ワクチン自体として使用することもでき、さらなる組み合わせワクチンの成分として使用することもできる。
本発明の特定の実施形態は、免疫原が（ａ）Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＭｅｎＢ；（ｂ）Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＭｅｎＢ−ＩＰＶ；（ｃ）Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＭｅｎＢ−ＨＢｓＡｇ；（ｄ）Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＭｅｎＢ−Ｈｉｂ；（ｅ）Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＭｅｎＢ−ＨＢｓＡｇ−Ｈｉｂ；（ｆ）Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＭｅｎＢ−ＨＢｓＡｇ−ＩＰＶ；（ｇ）Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＭｅｎＢ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ；（ｈ）Ｄ−Ｔ−ａＰ−ＭｅｎＢ−ＩＰＶ−Ｈｉｂ−ＨＢｓＡｇ；（ｉ）Ｄ−Ｔ−ＭｅｎＢからなる組成物を含み、ここで、「Ｄ」はジフテリアトキソイドであり、「Ｔ」は破傷風トキソイドであり、「ａＰ」は無細胞百日咳抗原または混合物であり、ＭｅｎＢは血清群Ｂ髄膜炎菌抗原または混合物であり、「ＩＰＶ」は不活化ポリオウイルス抗原または混合物であり、「ＨＢｓＡｇ」はＢ型肝炎ウイルス表面抗原であり、「Ｈｉｂ」は、コンジュゲートしたＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｔｙｐｅ Ｂ莢膜糖である。
処置方法、およびワクチンの投与
本発明の組成物は、ヒト患者に投与するために適しており、本発明は、本発明の組成物を患者に投与するステップを含む、患者における免疫応答を上昇させる方法を提供する。
本発明は、医薬に使用するための本発明の組成物も提供する。組成物は、例えば一部の実施形態では、乳児には２回の用量以下の組み合わせワクチンを与えることにより、本明細書に多様に記載されている通り投与することができる。
本発明は、患者における免疫応答を上昇させるための医薬の製造における、血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイド（ならびに、必要に応じて、アジュバント）の使用も提供する。医薬は、本明細書の他の箇所に多様に記載されている組成物であることが理想的であり、また、医薬は、本明細書に多様に記載されている通り投与することができる。
これらの方法、使用および組成物によって生じた免疫応答は、防御的なものであることが理想的であり、本発明の免疫原性組成物は、少なくともジフテリア、破傷風、および百日咳の予防において使用するためのワクチンであることが好ましい。ワクチンは、その抗原成分に応じて、細菌性髄膜炎、ポリオ、肝炎などに対しても防御し得る。
有効性を完全にするために、典型的な一次免疫スケジュール（特に、小児用）は、２回以上の投薬を行うことを伴ってよい。例えば、投薬は、０ヶ月および６ヶ月（時間０が最初の投薬になる）；０ヶ月、１ヶ月、２ヶ月および６ヶ月；０日、２１日、次いで、６ヶ月から１２ヶ月の間に３回目の投薬；２ヶ月、４ヶ月、および６ヶ月；３ヶ月、４ヶ月、および５ヶ月；６週間、１０週間および１４週間；２ヶ月、３ヶ月、および４ヶ月；または０ヶ月、１ヶ月、２ヶ月、６ヶ月、および１２ヶ月に行うことができる。
組成物は、例えば生後２年の小児、青年、または成人に対する追加免疫投薬としても使用することができる。
本発明の組成物は、筋肉内注射により、例えば腕または脚に投与することができる。
任意選択の要件および放棄事項［１８０］
一部の実施形態では、本発明は、（ｉ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイド、ならびに（ｉｉ）アルミニウム塩アジュバントを含む単位用量の形態の組成物であって、単位用量中のＡｌ＋＋＋の量が０．２ｍｇ未満である組成物を包含しない。他の実施形態では、組成物が単位用量の形態であり、（ｉ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイド、ならびに（ｉｉ）アルミニウム塩アジュバントを含むが、単位用量中のＡｌ＋＋＋の量が０．２ｍｇ未満である場合には、（ａ）組成物は、Ｌｆ単位で測定して、ジフテリアトキソイドを破傷風トキソイドに対して少なくとも１．５倍過剰で含む；または（ｂ）組成物は、Ｌｆ単位で測定して、破傷風トキソイドをジフテリアトキソイドに対して少なくとも１．５倍過剰で含む；または（ｃ）組成物は、全細胞百日咳抗原ではなく無細胞ＰＴ含有百日咳抗原（ａｃｅｌｌｕｌａｒ ＰＴ−ｃｏｎｔａｉｎｉｎｇ ａｎｔｉｇｅｎ ｐｅｒｔｕｓｓｉｓ ａｎｔｉｇｅｎ）を含む。
一部の実施形態では、本発明は、（ｉ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイド、ならびに（ｉｉ）アルミニウム塩アジュバントを含む組成物であって、Ａｌ＋＋＋の濃度が０．４ｍｇ／ｍｌ未満である組成物を包含しない。他の実施形態では、組成物が（ｉ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイド、ならびに（ｉｉ）アルミニウム塩アジュバントを含むが、単位用量中のＡｌ＋＋＋の濃度が０．４ｍｇ／ｍｌ未満である場合には、（ａ）組成物は、Ｌｆ単位で測定して、ジフテリアトキソイドを破傷風トキソイドに対して少なくとも１．５倍過剰で含む；または（ｂ）組成物は、Ｌｆ単位で測定して、破傷風トキソイドをジフテリアトキソイドに対して少なくとも１．５倍過剰で含む；または（ｃ）組成物は、全細胞百日咳抗原ではなく無細胞ＰＴ含有百日咳抗原を含む。
一部の実施形態では、本発明は、（ｉ）アルミニウム塩アジュバントならびに（ｉｉ）≦８Ｌｆ／ｍｌのジフテリアトキソイド、≦３．５Ｌｆ／ｍｌの破傷風トキソイド、および≦５μｇ／ｍｌの百日咳トキソイドを含む組成物を包含しない。他の実施形態では、組成物が（ｉ）アルミニウム塩アジュバントならびに（ｉｉ）≦８Ｌｆ／ｍｌのジフテリアトキソイド、≦３．５Ｌｆ／ｍｌの破傷風トキソイド、および≦５μｇ／ｍｌの百日咳トキソイドを含む場合には、（ａ）組成物は、Ｌｆ単位で測定して、ジフテリアトキソイドを破傷風トキソイドに対して少なくとも１．５倍過剰で含む；または（ｂ）組成物は、Ｌｆ単位で測定して、破傷風トキソイドをジフテリアトキソイドに対して少なくとも１．５倍過剰で含む；または（ｃ）組成物は、全細胞百日咳抗原ではなく無細胞ＰＴ含有百日咳抗原を含む。
一部の実施形態では、本発明は、（ｉ）水中油エマルションアジュバント（ｉｉ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、およびＨｉｂコンジュゲート、ならびに（ｉｉｉ）Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原および／または不活化ポリオウイルス抗原を含む組成物を包含しない。他の実施形態では、組成物が（ｉ）水中油エマルションアジュバント（ｉｉ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、百日咳トキソイド、およびＨｉｂコンジュゲートを含む場合には、（ａ）組成物は、Ｂ型肝炎ウイルス表面抗原を含まない；または（ｂ）組成物は、不活化ポリオウイルス抗原を含まない；または（ｃ）組成物は、不活化ポリオウイルス抗原もＢ型肝炎ウイルス表面抗原も含まない；または（ｄ）組成物は、Ｌｆ単位で測定して、ジフテリアトキソイドを破傷風トキソイドに対して少なくとも１．５倍過剰で含む；または（ｅ）組成物は、Ｌｆ単位で測定して、破傷風トキソイドをジフテリアトキソイドに対して少なくとも１．５倍過剰で含む；または（ｆ）組成物は、全細胞百日咳抗原ではなく無細胞ＰＴ含有百日咳抗原を含む。
一部の実施形態では、本発明は、Ｈ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｔｙｐｅ ｂ莢膜糖抗原と血清群Ｂ髄膜炎菌由来の外膜タンパク質複合体のコンジュゲートを含む組成物を包含しない。他の実施形態では、本発明の組成物がＨ．ｉｎｆｌｕｅｎｚａｅ ｔｙｐｅ ｂ莢膜糖抗原と血清群Ｂ髄膜炎菌由来の外膜タンパク質複合体のコンジュゲートを含む場合には、当該組成物は、血清群Ｂ髄膜炎菌由来のさらなる免疫原も含まなければならない。
一部の実施形態では、本発明は、アルミニウム塩アジュバントとＴＬＲ４アゴニストの両方を含む組成物を包含しない。
一般
「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」という用語は、「含む（ｉｎｃｌｕｄｉｎｇ）」ならびに「からなる（ｃｏｎｓｉｓｔｉｎｇ）」を包含し、例えば、Ｘを「含む（ｃｏｍｐｒｉｓｉｎｇ）」組成物は、排他的にＸからなってもよく、追加的な何かを含み、例えばＸ＋Ｙであってもよい。
「実質的に」という単語により、「完全に」は排除されず、例えば、Ｙを「実質的に含まない」組成物は、Ｙを完全に含まなくてよい。必要であれば、「実質的に」という単語は本発明の定義から省くことができる。
「約」という用語は、数値ｘとの関連では、例えば、ｘ±１０％を意味する。
特に明記されていなければ、２つ以上の成分を混合するステップを含むプロセスは、いかなる特定の混合の順序も必要としない。したがって、成分を任意の順序で混合することができる。３つの成分が存在する場合には、例えば、２つの成分を互いと組み合わせることができ、次いで、その組合せを、第３の成分と組み合わせることができる。
抗原がアジュバントに「吸着している」と記載されている場合、その抗原の少なくとも５０％（重量で）、例えば５０％、６０％、７０％、８０％、９０％、９５％、９８％またはそれ以上が吸着していることが好ましい。ジフテリアトキソイドおよび破傷風トキソイドの両方が完全に吸着している、すなわち、上清中で検出可能なものがないことが好ましい。ＨＢｓＡｇの完全な吸着を使用することができる。
コンジュゲートの量は、一般に、担体の選択に起因する変動を回避するために糖類の質量に関して示されている（すなわち、全体としてのコンジュゲートの用量（担体＋糖類）は明示されている用量よりも多い）。
本発明で使用される亜リン酸含有基は、周囲環境のｐＨ、例えばそれらが溶解している溶媒のｐＨに応じて、いくつものプロトン化された形態および脱プロトン化された形態で存在してよい。したがって、本明細書では特定の形態が例示されている場合があるが、別段の言及がない限り、これらの例示は、ただ単に代表的なものであり、特定のプロトン化された形態または脱プロトン化された形態に限定するものではないことが意図されている。例えば、ホスフェート基の場合は、これは−ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）２として例示されているが、定義には、酸性条件下で存在し得るプロトン化された形態の−［ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ２）（ＯＨ）］＋および−［ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ２）２］２＋ならびに塩基性条件下で存在し得る脱プロトン化された形態の−［ＯＰ（Ｏ）（ＯＨ）（Ｏ）］−および［ＯＰ（Ｏ）（Ｏ）２］２−が含まれる。本発明は、そのような形態の全てを包含する。
ＴＬＲアゴニストは薬学的に許容される塩として存在してもよい。したがって、当該化合物は、それらの薬学的に許容される塩、すなわち、生理的にまたは毒物学的に許容される塩（適切な場合、薬学的に許容される塩基付加塩および薬学的に許容される酸付加塩を含む）の形態で使用することができる。
本明細書において示されているＴＬＲアゴニストの場合は、互変異性の形態で存在する可能性があり、当該化合物はそのような互変異性の形態の全てで使用することができる。
化合物を身体に組成物の一部として投与する場合には、その化合物は、その代わりに、適切なプロドラッグで置き換えることができる。
動物（特に、ウシ）材料を細胞の培養に使用する場合、当該材料は、伝達性海綿状脳症（ＴＳＥ）を伴わない、特にウシ海綿状脳症（ＢＳＥ）を伴わない供給源から得るべきである。
髄膜炎菌タンパク質免疫原
ＮＨＢＡ（ナイセリアのヘパリン結合性抗原）
ＮＨＢＡ［１８１］は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ２１３２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：７２２７３８８；本明細書では配列番号９）として含まれていた。それ以来、多くの株由来のＮＨＢＡの配列が公開されている。例えば、ＮＨＢＡの対立形質（タンパク質「２８７」と称される）は、参考文献１８２の図５および図１５において、ならびに参考文献１８３の実施例１３および図２１（その中の配列番号３１７９〜３１８４）において見ることができる。ＮＨＢＡの種々の免疫原性断片も報告されている。
本発明で使用するために好ましいＮＨＢＡ抗原は、（ａ）配列番号９に対して５０％以上（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号９の少なくとも「ｎ」個の連続したアミノ酸の断片であって、「ｎ」が７以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号９からのエピトープを含む。
最も有用なＮＨＢＡ抗原は、対象に投与された後に配列番号９のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＮＨＢＡ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
有用なＮＨＢＡ抗原の１つは配列番号４を含み、これは、ＢＥＸＳＥＲＯ（商標）製品に存在するＮＨＢＡとＮＭＢ１０３０の融合物である。
ＮａｄＡ（ナイセリアアドヘシンＡ）
ＮａｄＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ１９９４（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：７２２７２５６；本明細書では配列番号１０）として含まれていた。それ以来、多くの株由来のＮａｄＡ抗原の配列が公開されており、ナイセリアアドヘシンとしてのタンパク質の活性が十分に記録されている。ＮａｄＡの種々の免疫原性断片も報告されている。
本発明で使用するために好ましいＮａｄＡ抗原は、（ａ）配列番号１０に対して５０％以上（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１０の少なくとも「ｎ」個の連続したアミノ酸の断片であって、「ｎ」が７以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１０からのエピトープを含む。
ＮａｄＡは、通常、組成物中にオリゴマー形態、例えば三量体で存在する［１８４］。
最も有用なＮａｄＡ抗原は、対象に投与された後に配列番号１０のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＮａｄＡ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。配列番号６は、ＢＥＸＳＥＲＯ（商標）製品に存在するそのような断片の１つである。
ｆＨｂｐ（Ｈ因子結合性タンパク質）
ｆＨｂｐ抗原は詳細に特徴付けられている。ｆＨｂｐ抗原は、タンパク質「７４１」［参考文献１８３の配列番号２５３５および２５３６］、「ＮＭＢ１８７０」、「ＧＮＡ１８７０」［１８５、１８６、２０７］、「Ｐ２０８６」、「ＬＰ２０８６」または「ＯＲＦ２０８６」［１８７〜１８８］としても公知である。ｆＨｂｐ抗原は天然ではリポタンパク質であり、髄膜炎菌血清群の全てにわたって発現される。ｆＨｂｐのＣ末端の免疫優性ドメイン（「ｆＨｂｐＣ」）の構造は、ＮＭＲによって決定されている［１９０］。当該タンパク質のこの部分は、８本鎖のβバレルを形成し、その鎖は種々の長さのループによって接続されている。バレルの前には短いα−へリックスおよび柔軟なＮ末端尾部がある。
ｆＨｂｐ抗原は、３つの別個のバリアントに入り［１９１］、所与のファミリーに対して生じた血清は同じファミリーの範囲内では殺菌性であるが、他の２つのファミリーのうちの１つを発現する株に対しては活性ではない、すなわち、ファミリー内交差防御は存在するが、ファミリー間交差防御は存在しないことが見いだされている。本発明では、単一のｆＨｂｐバリアントを使用することができるが、バリアントのうちの２つまたは３つに由来するｆＨｂｐを含めることが有用である。
組成物が単一のｆＨＢＰバリアントを含む場合、組成物は、以下のうちの１つを含んでよい：
（ａ）第１のアミノ酸配列を含む第１のポリペプチドであって、第１のアミノ酸配列が、（ｉ）配列番号１に対して少なくともａ％の配列同一性を有するアミノ酸配列および／または（ｉｉ）配列番号１からの少なくともｘ個の連続したアミノ酸の断片からなるアミノ酸配列を含む、第１のポリペプチド；
（ｂ）第２のアミノ酸配列を含む第２のポリペプチドであって、第２のアミノ酸配列が、（ｉ）配列番号２に対して少なくともｂ％の配列同一性を有するアミノ酸配列および／または（ｉｉ）配列番号２からの少なくともｙ個の連続したアミノ酸の断片からなるアミノ酸配列を含む、第２のポリペプチド；
（ｃ）第３のアミノ酸配列を含む第３のポリペプチドであって、第３のアミノ酸配列が、（ｉ）配列番号３に対して少なくともｃ％の配列同一性を有するアミノ酸配列および／または（ｉｉ）配列番号３からの少なくともｚ個の連続したアミノ酸の断片からなるアミノ酸配列を含む、第３のポリペプチド。
ａの値は、少なくとも８０、例えば８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９またはそれ以上である。ｂの値は、少なくとも８０、例えば８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９またはそれ以上である。ｃの値は、少なくとも８０、例えば８２、８４、８６、８８、９０、９２、９４、９５、９６、９７、９８、９９またはそれ以上である。ａ、ｂおよびｃの値は同じであっても異なってもよい。一部の実施形態では、ａ、ｂおよびｃは同一である。
ｘの値は、少なくとも７、例えば８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｙの値は、少なくとも７、例えば８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｚの値は、少なくとも７、例えば８、９、１０、１１、１２、１３、１４、１５、１６、１７、１８、１９、２０、２１、２２、２３、２４、２５、２６、２７、２８、２９、３０、３５、４０、４５、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１２０、１４０、１６０、１８０、２００、２２５、２５０）である。ｘ、ｙおよびｚの値は同じであっても異なってもよい。一部の実施形態では、ｘ、ｙおよびｚは同一である。
断片は、それぞれの配列番号の配列からのエピトープを含むことが好ましい。他の有用な断片は、それぞれの配列番号のＣ末端からの１つもしくは複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５もしくはそれ以上）および／またはそれぞれの配列番号のＮ末端からの１つもしくは複数のアミノ酸（例えば１、２、３、４、５、６、７、８、９、１０、１５、２０、２５もしくはそれ以上）を欠くが、その少なくとも１つのエピトープを保持する。
一部の実施形態では、配列番号１からの少なくともｘ個の連続したアミノ酸の断片は、配列番号２内または配列番号３内にも存在しない。同様に、配列番号２からの少なくともｙ個の連続したアミノ酸の断片は、配列番号１内または配列番号３内にも存在しなくてよい。同様に、配列番号３からの少なくともｚ個の連続したアミノ酸の断片は、配列番号１内または配列番号２内にも存在しなくてよい。一部の実施形態では、配列番号１〜３のうちの１つからの前記断片を連続した配列として他の２つの配列番号に対してアラインメントした場合、当該断片と他の２つの配列番号のそれぞれの間の同一性は、７５％未満、例えば７０％未満、６５％未満、６０％未満などである。
組成物が２つの異なる髄膜炎菌ｆＨＢＰ抗原を含む場合、組成物は、（ｉ）上で定義されている第１のポリペプチドと第２のポリペプチドの組合せ；（ｉｉ）上で定義されている第１のポリペプチドと第３のポリペプチドの組合せ；または（ｉｉｉ）上で定義されている第２のポリペプチドと第３のポリペプチドの組合せを含んでよい。第１のポリペプチドと第３のポリペプチドの組合せが好ましい。組成物が２つの異なる髄膜炎菌ｆＨＢＰ抗原を含む場合、これらはいくつかの共通の配列を共有し得るが、第１のポリペプチド、第２のポリペプチドおよび第３のポリペプチドは異なるｆＨＢＰアミノ酸配列を有する。
第１のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、対象に投与すると、新生の配列番号２０のアミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質（ＭＣ５８）に結合する抗体を含む抗体応答を惹起する。一部の実施形態では、これらの抗体の一部または全部は、新生の配列番号２１のアミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質または新生の配列番号２２のアミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質には結合しない。
第２のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、対象に投与すると、新生の配列番号２１のアミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質（２９９６）に結合する抗体を含む抗体応答を惹起する。一部の実施形態では、これらの抗体の一部または全部は、新生の配列番号２０のアミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質または新生の配列番号２２のアミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質には結合しない。
第３のアミノ酸配列を含むポリペプチドは、対象に投与すると、新生の配列番号２２のアミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質（Ｍ１２３９）に結合する抗体を含む抗体応答を惹起する。一部の実施形態では、これらの抗体の一部または全部は、新生の配列番号２０のアミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質または新生の配列番号２１のアミノ酸配列を有する野生型髄膜炎菌タンパク質には結合しない。
有用な第１のアミノ酸配列は、配列番号１（ＭＣ５８株）に対して少なくとも８５％（例えば＞９５％または１００％）の同一性を有する。別の有用な第１のアミノ酸配列は、配列番号２３（ＣＤＣ１５７３株）に対して少なくとも９５％（例えば＞９８％または１００％）の同一性を有する。
有用な第３のアミノ酸配列は、配列番号３（Ｍ１２３９株）に対して少なくとも８５％（例えば＞９５％または１００％）の同一性を有する。別の有用な第３のアミノ酸配列は、配列番号２５（Ｍ９８−２５０７７１株）に対して少なくとも９５％（例えば＞９８％または１００％）の同一性を有する。
配列番号２３および配列番号２５（またはそれらの近いバリアント）に基づく第１の配列と第３の配列の混合物を含む組合せが特に有用である。したがって、組成物は、配列番号２４のアミノ酸配列を含むポリペプチドおよび配列番号２６のアミノ酸配列を含むポリペプチドを含んでよい。
組成物が２つの髄膜炎菌ｆＨＢＰ抗原を含む場合、これは二価のｆＨＢＰ組成物中にあってもよく、例えば三価または四価のｆＨＢＰ組成物中に３つ以上の異なるｆＨＢＰ抗原が存在してもよい。
本発明に従って使用することができる別の有用なｆＨｂｐは、例えば、参考文献１９２において開示されている、例えばその配列番号２０または配列番号２３を含む改変された形態の１つである。これらの改変された形態は、複数のｆＨｂｐバリアントを認識することにより髄膜炎菌に対して広範に殺菌性である抗体応答を惹起することができる。そのような改変された形態の１つは、本明細書では配列番号２８（参考文献１９２の配列番号２３）であり、これは、参考文献１９３に開示されている非ｆＨｂｐ配列と融合して、例えば、下記の実施例において使用される配列番号１９（ＮＭＢ２０９１および配列番号２８の２つのコピーを含有する）をもたらすことができる。
参考文献１９２からの配列番号７７は、広範な株間反応性をもたらすために使用することができる別の有用なｆＨｂｐ配列である。
一部の実施形態では、ｆＨＢＰポリペプチド（複数可）は、例えばＮ末端システインに脂質付加されている。しかし、他の実施形態では、ｆＨＢＰポリペプチド（複数可）は脂質付加されていない。脂質付加ｆＨＢＰについては、システインに結合した脂質は、通常、パルミトイル残基、例えばトリパルミトイル−Ｓ−グリセリル−システイン（Ｐａｍ３Ｃｙｓ）、ジパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイン（Ｐａｍ２Ｃｙｓ）、Ｎ−アセチル（ジパルミトイル−Ｓ−グリセリルシステイン）などを含む。成熟脂質付加ｆＨＢＰ配列の例は、配列番号２４（配列番号２３を含む）および配列番号２６（配列番号２５を含む）である。ｆＨｂｐタンパク質（複数可）が小胞内に位置する場合には、そのｆＨｂｐタンパク質は通常、脂質付加されている。
ｆＨＢＰの投与により、配列番号１、配列番号２または配列番号３のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体が惹起されることが好ましい。本発明で使用するために都合の良いｆＨＢＰ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
ｆＨＢＰポリペプチドの総量は、通常、単位用量当たり１μｇから５００μｇの間、例えば、単位当たり６０μｇから２００μｇの間である。各ｆＨＢＰポリペプチドについて単位用量当たり１０μｇ、２０μｇ、４０μｇ、５０μｇ、６０μｇ、８０μｇ、１００μｇまたは２００μｇの量がヒトワクチン用量では典型的である。
組成物が異なる髄膜炎菌ｆＨＢＰ抗原を含む場合、これらは上記の通り別々のポリペプチド（例えば、第１のポリペプチドおよび第２のポリペプチド）として存在してもよく、単一の融合ポリペプチドの一部として存在してもよい、すなわち、参考文献１９４において髄膜炎菌抗原について開示されている通り、少なくとも２種（例えば２種、３種、４種、５種、またはそれ以上）のｆＨＢＰ抗原が単一のポリペプチド鎖として発現されていてよい。最も有用には、融合ポリペプチドは、上記で論じた第１の配列、第２の配列および第３の配列、例えば配列番号２７のそれぞれを含んでよい。
ＨｍｂＲ
全長のＨｍｂＲ配列は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ１６６８（本明細書では配列番号７）として含まれていた。参考文献１９５では、種々の株由来のＨｍｂＲ配列（本明細書では配列番号８）が報告されており、参考文献１９６では、さらなる配列が報告されている（本明細書では配列番号１５）。配列番号７と配列番号８は、長さが１アミノ酸分異なり、これらの同一性は９４．２％である。配列番号１５は配列番号７よりも１アミノ酸分短く、これらの同一性は９９％である（１つの挿入、７つの差異）。本発明では、そのようなＨｍｂＲポリペプチドのいずれも使用することができる。
本発明では、全長のＨｍｂＲ配列を含むポリペプチドを使用することができるが、多くの場合、部分的なＨｍｂＲ配列を含むポリペプチドを使用する。したがって、一部の実施形態では、本発明に従って使用されるＨｍｂＲ配列は、配列番号７に対して少なくともｉ％の配列同一性を有するアミノ酸配列を含んでよく、ｉの値は、５０、６０、７０、８０、９０、９５、９９またはそれ以上である。他の実施形態では、本発明に従って使用されるＨｍｂＲ配列は、配列番号７からの少なくともｊ個の連続したアミノ酸の断片を含んでよく、ｊの値は、７、８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上である。他の実施形態では、本発明に従って使用されるＨｍｂＲ配列は、（ｉ）配列番号７に対して少なくともｉ％の配列同一性を有するアミノ酸配列および／または（ｉｉ）配列番号７からの少なくともｊ個の連続したアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含んでよい。
ｊ個のアミノ酸の好ましい断片は、配列番号７からのエピトープを含む。そのようなエピトープは、通常は、ＨｍｂＲの表面に位置するアミノ酸を含む。ＨｍｂＲのヘモグロビンとの結合に関与するアミノ酸を有するエピトープが有用なエピトープとして挙げられる。なぜなら、これらのエピトープに結合する抗体により、細菌が宿主のヘモグロビンに結合する能力を遮断することができるからである。参考文献１９７においてＨｍｂＲのトポロジー、およびその重大な機能性残基が調査された。膜貫通配列を保持する断片は、細菌の表面上、例えば小胞内に提示され得るので、有用である。しかし、可溶性ＨｍｂＲを使用する場合、膜貫通配列が省略されているが、典型的には、細胞外部分由来のエピトープ（複数可）を保持する配列を使用することができる。
最も有用なＨｍｂＲ抗原は、対象に投与された後に配列番号７のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＨｍｂＲ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
ＮｓｐＡ（ナイセリアの表面タンパク質Ａ）
ＮｓｐＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ０６６３（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：７２２５８８８；本明細書では配列番号１１）として含まれていた。この抗原は、以前に参考文献１９８および１９９により公知になった。それ以来、多くの株由来のＮｓｐＡ抗原の配列が公開されている。ＮｓｐＡの種々の免疫原性断片も報告されている。
本発明で使用するために好ましいＮｓｐＡ抗原は、（ａ）配列番号１１に対して５０％以上（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１１の少なくとも「ｎ」個の連続したアミノ酸の断片であって、「ｎ」が７以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１１からのエピトープを含む。
最も有用なＮｓｐＡ抗原は、対象に投与された後に配列番号１１のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＮｓｐＡ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
ＮｈｈＡ（Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｈｉａ相同体）
ＮｈｈＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ０９９２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：７２２６２３２；本明細書では配列番号１２）として含まれていた。例えば参考文献１８２および２００以来、多くの株由来のＮｈｈＡ抗原の配列が公開されており、ＮｈｈＡの種々の免疫原性断片が報告されている。ＮｈｈＡは、Ｈｓｆとしても公知である。
本発明で使用するために好ましいＮｈｈＡ抗原は、（ａ）配列番号１２に対して５０％以上（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１２の少なくとも「ｎ」個の連続したアミノ酸の断片であって、「ｎ」が７以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１２からのエピトープを含む。
最も有用なＮｈｈＡ抗原は、対象に投与された後に配列番号１２のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＮｈｈＡ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
Ａｐｐ（接着および透過タンパク質）
Ａｐｐ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ１９８５（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：７２２７２４６；本明細書では配列番号１３）として含まれていた。それ以来、多くの株由来のＡｐｐ抗原の配列が公開されている。これは、「ＯＲＦ１」および「Ｈａｐ」としても公知である。Ａｐｐの種々の免疫原性断片も報告されている。
本発明で使用するために好ましいＡｐｐ抗原は、（ａ）配列番号１３に対して５０％以上（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１３の少なくとも「ｎ」個の連続したアミノ酸の断片であって、「ｎ」が７以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１３からのエピトープを含む。
最も有用なＡｐｐ抗原は、対象に投与された後に配列番号１３のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＡｐｐ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
Ｏｍｐ８５（８５ｋＤａの外膜タンパク質）
Ｏｍｐ８５抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ０１８２（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：７２２５４０１；本明細書では配列番号１４）として含まれていた。それ以来、多くの株由来のＯｍｐ８５抗原の配列が公開されている。Ｏｍｐ８５に関するさらなる情報は、参考文献２０１および２０２において見いだすことができる。Ｏｍｐ８５の種々の免疫原性断片も報告されている。
本発明で使用するために好ましいＯｍｐ８５抗原は、（ａ）配列番号１４に対して５０％以上（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号１４の少なくとも「ｎ」個の連続したアミノ酸の断片であって、「ｎ」が７以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号１４からのエピトープを含む。
最も有用なＯｍｐ８５抗原は、対象に投与された後に配列番号１４のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＯｍｐ８５抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
ＴｂｐＡ
ＴｂｐＡ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ０４６１（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：７２２５６８７；本明細書では配列番号２３）として含まれていた。それ以来、多くの株由来のＴｂｐＡの配列が公開されている。ＴｂｐＡの種々の免疫原性断片も報告されている。
本発明で使用するために好ましいＴｂｐＡ抗原は、（ａ）配列番号２３に対して５０％以上（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２３の少なくとも「ｎ」個の連続したアミノ酸の断片であって、「ｎ」が７以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２３からのエピトープを含む。
最も有用なＴｂｐＡ抗原は、対象に投与された後に配列番号２３のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＴｂｐＡ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
ＴｂｐＢ
ＴｂｐＢ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ０４６０（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：７２２５６８６；本明細書では配列番号２４）として含まれていた。それ以来、多くの株由来のＴｂｐＢの配列が公開されている。ＴｂｐＢの種々の免疫原性断片も報告されている。
本発明で使用するために好ましいＴｂｐＢ抗原は、（ａ）配列番号２４に対して５０％以上（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２４の少なくとも「ｎ」個の連続したアミノ酸の断片であって、「ｎ」が７以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２４からのエピトープを含む。
最も有用なＴｂｐＢ抗原は、対象に投与された後に配列番号２４のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＴｂｐＢ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
Ｃｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼ
Ｃｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ１３９８（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：７２２６６３７；本明細書では配列番号２５）として含まれていた。それ以来、多くの株由来のＣｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼの配列が公開されている。Ｃｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼの種々の免疫原性断片も報告されている。
本発明で使用するために好ましいＣｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼ抗原は、（ａ）配列番号２５に対して５０％以上（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２５の少なくとも「ｎ」個の連続したアミノ酸の断片であって、「ｎ」が７以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２５からのエピトープを含む。
最も有用なＣｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼ抗原は、対象に投与された後に配列番号２５のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＣｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
ＺｎｕＤ
ＺｎｕＤ抗原は、髄膜炎菌血清群Ｂ株ＭＣ５８の公開されたゲノム配列［２６］に遺伝子ＮＭＢ０９６４（ＧｅｎＢａｎｋ受託番号ＧＩ：１５６７６８５７；本明細書では配列番号２９）として含まれていた。それ以来、多くの株由来のＺｎｕＤの配列が公開されている。例えば、参考文献２０３および２０４を参照されたい。
本発明で使用するために好ましいＺｎｕＤ抗原は、（ａ）配列番号２９に対して５０％以上（例えば６０％、６５％、７０％、７５％、８０％、８５％、９０％、９１％、９２％、９３％、９４％、９５％、９６％、９７％、９８％、９９％、９９．５％またはそれ以上）の同一性を有するアミノ酸配列；および／または（ｂ）配列番号２９の少なくとも「ｎ」個の連続したアミノ酸の断片であって、「ｎ」が７以上（例えば８、１０、１２、１４、１６、１８、２０、２５、３０、３５、４０、５０、６０、７０、８０、９０、１００、１５０、２００、２５０またはそれ以上）であるアミノ酸の断片を含むアミノ酸配列を含む。（ｂ）の好ましい断片は、配列番号２９からのエピトープを含む。
最も有用なＺｎｕＤ抗原は、対象に投与された後に配列番号２９のアミノ酸配列からなる髄膜炎菌ポリペプチドに結合することができる抗体を惹起することができる。本発明で使用するために都合の良いＺｎｕＤ抗原は、対象に投与された後に殺菌性の抗髄膜炎菌抗体を惹起することができる。
髄膜炎菌小胞
本発明は、Ｎｅｉｓｓｅｒｉａ ｍｅｎｉｎｇｉｔｉｄｉｓについて公知のさまざまな種類の小胞と共に使用することができる。
参考文献２２には、６種の異なるＰｏｒＡ亜型を発現するように改変された髄膜炎菌株からの小胞の構成が開示されている。参考文献２０５〜２０７では、ｆＨｂｐ（ＧＮ１８７０としても公知である）を過剰発現させた（また、この過剰発現をＬｐｘＬ１のノックアウトと組み合わせることができる［２０８］）ＯＭＶワクチンの前臨床試験が報告されている。参考文献２０９では、最近、ＰｏｒＡおよびＦｒｐＢをノックアウトし、ＨｓｆおよびＴｂｐＡを過剰発現させたＯＭＶワクチンの５種の製剤の臨床研究が報告された。参考文献２１０では、ｓｙｎＸ遺伝子、ｌｐｘＬ１遺伝子、およびｌｇｔＡ遺伝子を不活化した細菌から調製されたネイティブな外膜小胞ワクチンが報告されている。そのような小胞の全てを本明細書において使用することができる。
ＯＭＶは、遺伝子改変により所望の抗原（複数可）を過剰発現する髄膜炎菌から調製することができる。目的の抗原（複数可）の過剰発現を引き起こす遺伝子改変（複数可）に加えて、細菌は、１つまたは複数のさらなる改変を含んでよい。例えば、細菌は、ｌｐｘＬ１、ｌｇｔＢ、ｐｏｒＡ、ｆｒｐＢ、ｓｙｎＸ、ｌｇｔＡ、ｍｌｔＡおよび／またはｌｓｔのうちの１つまたは複数がノックアウトされていてよい。
細菌は低い内毒素レベルを有してよく、これはＬＰＳ生合成に関与する酵素をノックアウトすることにより実現される［２１１、２１２］。
細菌は、任意の血清型（例えば１、２ａ、２ｂ、４、１４、１５、１６など）、任意の血清亜型、および任意の免疫型（例えばＬ１；Ｌ２；Ｌ３；Ｌ３，３，７；Ｌ１０；など）のものであってよい。小胞は、以下の亜型のうちの１つを有する株から有用に調製することができる：Ｐ１．２；Ｐ１．２，５；Ｐ１．４；Ｐ１．５；Ｐ１．５，２；Ｐ１．５，ｃ；Ｐ１．５ｃ，１０；Ｐ１．７，１６；Ｐ１．７，１６ｂ；Ｐ１．７ｈ，４；Ｐ１．９；Ｐ１．１５；Ｐ１．９，１５；Ｐ１．１２，１３；Ｐ１．１３；Ｐ１．１４；Ｐ１．２１，１６；Ｐ１．２２，１４。
細菌は、高侵襲性（ｈｙｐｅｒｉｎｖａｓｉｖｅ）かつ強毒性（ｈｙｐｅｒｖｉｒｕｌｅｎｔ）の系統、例えば以下の７種の強毒性系統のいずれか：サブグループＩ；サブグループＩＩＩ；サブグループＩＶ−１；ＥＴ−５複合体；ＥＴ−３７複合体；Ａ４クラスター；系統３を含めた任意の適切な系統由来であってよい。これらの系統は、多座酵素電気泳動（ＭＬＥＥ）によって定義されたものであるが、多座位配列タイピング（ＭＬＳＴ）も髄膜炎菌を分類するために使用されており［参考文献２１３］、例えばＥＴ−３７複合体はＭＬＳＴによるとＳＴ−１１複合体であり、ＥＴ−５複合体はＳＴ−３２（ＥＴ−５）であり、系統３はＳＴ−４１／４４などである。
一部の実施形態では、細菌は、参考文献２２６および参考文献２１４〜２１６に開示されているノックアウト変異および／または高発現変異のうちの１つまたは複数を含んでよい。改変に適した遺伝子としては、（ａ）Ｃｐｓ、ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＣ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＧａｌＥ、ＨｔｒＢ／ＭｓｂＢ、ＬｂｐＡ、ＬｂｐＢ、ＬｐｘＫ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡ、および／またはＴｂｐＢ［２１４］；（ｂ）ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＣ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＧａｌＥ、ＨｔｒＢ／ＭｓｂＢ、ＬｂｐＡ、ＬｂｐＢ、ＬｐｘＫ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｈｏＰ、ＰｉｌＣ、ＰｍｒＥ、ＰｍｒＦ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡ、および／またはＴｂｐＢ；（ｃ）ＥｘｂＢ、ＥｘｂＤ、ｒｍｐＭ、ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＤ、ＧａｌＥ、ＬｂｐＡ、ＬｐｂＢ、Ｏｐａ、Ｏｐｃ、ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＡ、ＳｉａＢ、ＳｉａＣ、ＳｉａＤ、ＴｂｐＡ、および／またはＴｂｐＢ；ならびに（ｄ）ＣｔｒＡ、ＣｔｒＢ、ＣｔｒＤ、ＦｒｐＢ、ＯｐＡ、ＯｐＣ、ＰｉｌＣ、ＰｏｒＢ、ＳｉａＤ、ＳｙｎＡ、ＳｙｎＢ、および／またはＳｙｎＣが挙げられる。
細菌は、以下の特性のうちの１つもしくは複数あるいは全てを有してよい：（ｉ）髄膜炎菌ＬＯＳが切断されるようにＬｇｔＢおよび／またはＧａｌＥが下方制御またはノックアウトされていること；（ｉｉ）ＴｂｐＡが上方制御されていること；（ｉｉｉ）ＮｈｈＡが上方制御されていること；（ｉｖ）Ｏｍｐ８５が上方制御されていること；（ｖ）ＬｂｐＡが上方制御されていること；（ｖｉ）ＮｓｐＡが上方制御されていること；（ｖｉｉ）ＰｏｒＡがノックアウトされていること；（ｖｉｉｉ）ＦｒｐＢが下方制御またはノックアウトされていること；（ｉｘ）Ｏｐａが下方制御またはノックアウトされていること；（ｘ）Ｏｐｃが下方制御またはノックアウトされていること；（ｘｉ）ｃｐｓ遺伝子複合体が欠失していること；（ｘｉ）ＮＨＢＡが上方制御されていること；（ｘｉｉ）ＮａｄＡが上方制御されていること；（ｘｉｉｉ）ＮＨＢＡおよびＮａｄＡが上方制御されていること；（ｘｉｖ）ｆＨｂｐが上方制御されていること；（ｘｖ）ＬｐｘＬ１が下方制御されていること。切断されたＬＯＳは、シアリル−ラクト−Ｎ−ネオテトラオースエピトープを含まないものであってよく、例えば、ガラクトース欠損ＬＯＳであってよい。ＬＯＳはα鎖を有さなくてよい。
リポオリゴ糖（ＬＯＳ）が小胞内に存在する場合、そのＬＯＳとタンパク質成分が連結するように小胞を処理することが可能である（「ブレブ内」コンジュゲート化［２１６］）。
小胞は、ＬＯＳを全く欠いてもよく、ヘキサ−アシル化ＬＯＳを欠いてもよく、例えば、小胞内のＬＯＳは、ＬＯＳ分子当たりの二次的なアシル鎖の数が減少していてよい［２１７］。例えば、小胞は、ｌｐｘＬ１欠失またはペンタ−アシル化ＬＯＳの産生をもたらす変異を有する株由来であってよい［２０６、２１０］。株内のＬＯＳは、ラクト−Ｎ−ネオテトラオースエピトープを欠いてよく、例えば、ｌｓｔおよび／またはｌｇｔＢノックアウト株であってよい［２０９］。ＬＯＳは、少なくとも１つの野生型の主要なＯ結合脂肪酸を欠いてよい［２１８］。ＬＯＳは有する。ＬＯＳはα鎖を有さなくてよい。ＬＯＳは、ＧｌｃＮＡｃ−Ｈｅｐ２ホスホエタノールアミン−ＫＤＯ２−リピドＡを含んでよい［２１９］。
上記の上方制御の結果として、改変された髄膜炎菌から調製された小胞は、上方制御された抗原（複数可）をより高レベルで含有する。小胞における発現の増加（対応する野生型株と比較して測定して）は、小胞の単位質量当たりの関連する抗原の質量で測定して少なくとも１０％であることが有用であり、少なくとも２０％、３０％、４０％、５０％、７５％、１００％またはそれ以上であることがより有用である。
抗原の上方制御を引き起こすために使用することができる適切な組換えによる改変としては、これだけに限定されないが、（ｉ）プロモーターの置換；（ｉｉ）遺伝子の付加；（ｉｉｉ）遺伝子の置換；または（ｉｖ）抑制因子のノックアウトが挙げられる。プロモーターの置換では、細菌における抗原の遺伝子の発現を制御するプロモーターを、より高レベルの発現をもたらすプロモーターで置き換える。例えば、遺伝子をハウスキーピング代謝遺伝子由来のプロモーターの制御下に置くことができる。他の実施形態では、抗原の遺伝子を構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターの制御下に置く。同様に、遺伝子を改変して、その発現が相変異に供されないことを確実にすることができる。髄膜炎菌における遺伝子発現の相変異性を低下させるまたは排除するための方法は、参考文献２２０に開示されている。これらの方法は、プロモーターの置換、または遺伝子の相変異性に関与するＤＮＡモチーフの除去もしくは置換を含む。遺伝子の付加では、抗原をすでに発現している細菌は、関連する遺伝子の第２のコピーを受け取る。この第２のコピーは、細菌の染色体に組み込むこともでき、エピソームのエレメント、例えば、プラスミドに置くこともできる。第２のコピーは現存するコピーよりも強力なプロモーターを有し得る。この遺伝子は構成的プロモーターまたは誘導性プロモーターの制御下に置くことができる。遺伝子の付加の効果は、発現される抗原の量が増加することである。遺伝子の置換えでは、遺伝子の付加が起こるが、遺伝子の現存するコピーの欠失が伴う。例えば、参考文献２０７においてこの手法が使用され、そこでは、細菌の内在性染色体ｆＨｂｐ遺伝子を欠失させ、プラスミドにコードされるコピーで置き換えている（参考文献２２１も参照されたい）。置き換えられたコピーからの発現は以前のコピーよりも高く、したがって、上方制御がもたらされる。抑制因子のノックアウトでは、目的の抗原の発現を抑制するタンパク質をノックアウトする。したがって、抑制は起こらず、目的の抗原をより高レベルで発現させることができる。上方制御される遺伝子に対するプロモーターは、ＣＲＥＮを含むことが好都合であり得る［２２２］。
改変された株は、一般に、遺伝子改変以外はその親株と同質遺伝子的である。改変の結果として、改変された株における対象の目的の発現は親株よりも高くなる（同じ条件下で）。典型的な改変は、天然には見いだされないプロモーターの制御下に遺伝子を置くこと、および／または抑制因子をコードする遺伝子をノックアウトすることである。
ＮＨＢＡを上方制御する実施形態では、種々の手法を使用することができる。便宜上、参考文献１８１においてすでに報告されている手法、すなわち、ＮＨＢＡ遺伝子をＩＰＴＧ誘導性プロモーターの制御下に導入することを使用することができる。この手法により、ＮＨＢＡの発現レベルは、培養物に添加するＩＰＴＧの濃度と比例し得る。プロモーターは、ＣＲＥＮを含んでよい。
ＮａｄＡを上方制御する実施形態では、種々の手法を使用することができる。１つの有用な手法は、試験した全ての株においてＮａｄＡをコードする遺伝子を下方制御または抑制する転写抑制因子タンパク質であるＮａｄＲ（ＮＭＢ１８４３）をコードする遺伝子を欠失させることを伴う［２２３］。ＮａｄＲをノックアウトすることにより、ＮａｄＡの高レベルの構成的発現がもたらされる。ＮａｄＡの上方制御を実現するための代替手法は、４−ヒドロキシフェニル酢酸（hydroxyphenylacetic）を培養培地に添加することである。さらなる手法は、ＮａｄＡ遺伝子をＩＰＴＧ誘導性プロモーターの制御下に導入することである。
ＮｈｈＡの上方制御は、すでに参考文献２０９および２２４において報告されている。ＴｂｐＡの上方制御は、すでに参考文献２０９、２２４および２２５において報告されている。ＨｍｂＲの上方制御は、すでに参考文献１９６において報告されている。ＴｂｐＢの上方制御は、すでに参考文献２２５において報告されている。ＮｓｐＡの上方制御は、ｐｏｒＡおよびｃｐｓのノックアウトとの組合せですでに参考文献２２６において報告されている。Ｃｕ，Ｚｎ−スーパーオキシドジスムターゼの上方制御は、すでに参考文献２２５において報告されている。ｆＨｂｐの上方制御は、すでに参考文献２０５〜２０７および２２１において報告されており、また、異なる手法（構成的に活性な変異体ＦＮＲを発現させる）によるものが参考文献２２７および２２８において報告されている。
一部の実施形態では、ＮＨＢＡ、ＮａｄＡおよびｆＨｂｐのそれぞれを上方制御する。これらの３種の抗原は、参考文献８に開示されている「普遍的なワクチン」または「４ＣＭｅｎＢ」の成分である［２２９、２３０］。一実施形態では、ＮＨＢＡの発現を強力なプロモーターによって制御し、ＮａｄＲをノックアウトし、株に構成的に活性な変異体ＦＮＲを発現させる。別の実施形態では、ＮＨＢＡの発現を強力なプロモーターによって制御し、ｆＨｂｐの発現を強力なプロモーターによって制御し、ＮａｄＲをノックアウトする。細菌は、活性なＭｌｔＡ（ＧＮＡ３３）を発現せず、その結果、ＮＨＢＡ、ＮａｄＡおよびｆＨｂｐを含有する小胞を自然に放出する細菌であってもよい。細菌は、ネイティブなＬＰＳを発現しないこと、例えばＬｐｘＬ１の変異体またはノックアウトを有することが理想的である。
小胞は、１つ、２つ以上、または（好ましくは）０のＰｏｒＡ血清亜型を含んでよい。多ＰｏｒＡ ＯＭＶをもたらすための髄膜炎菌の改変は、例えば参考文献２２および２３から公知である。逆に、ＰｏｒＡを除去するための改変も、例えば参考文献２０９から公知である。
小胞は、ＰｏｒＡおよびＦｒｐＢの一方または両方を含まなくてよい。好ましい小胞はＰｏｒＡを含まない。
本発明は、種々の株由来の小胞の混合物と共に使用することができる。例えば、参考文献２４には、使用される国で蔓延している血清亜型を有する髄膜炎菌株に由来する第１の小胞と、使用される国で蔓延している血清亜型を必ずしも有さない株に由来する第２の小胞とを含む多価の髄膜炎菌小胞組成物を含むワクチンが開示されている。参考文献２５にも、種々の小胞の有用な組合せが開示されている。Ｌ２免疫型およびＬ３免疫型のそれぞれの株由来の小胞の組合せを一部の実施形態において使用することができる。
別の有用な小胞の組合せは参考文献２３１および２３２に開示されている。この種類の三価の混合物は、（ａ）ＮａｄＡを過剰発現する第１の株；（ｂ）バリアント１、すなわち、上で定義されている第１のｆＨｂｐポリペプチド配列由来のｆＨｂｐ配列を過剰発現する第２の株；および（ｃ）バリアント２、すなわち、上で定義されている第２のｆＨｂｐポリペプチド配列由来のｆＨｂｐ配列を過剰発現する第３の株のそれぞれから調製された小胞を含んでよい。これらの株は、他の改変、例えば、参考文献２３１に開示されているようにｓｙｎＸおよびＬｐｘＬ１のノックアウトも有してよい。
図１〜８は、（１）破傷風トキソイド；（２）ジフテリアトキソイド；（３）百日咳トキソイド；（４）パータクチン；（５）ＦＨＡ；（６）ＮａｄＡ；（７）ＮＨＢＡ；および（８）ｆＨｂｐに対する血清総ＩｇＧ応答を示す。図がパネル（Ａ）および（Ｂ）を含む場合、パネル（Ａ）のデータは３５日目のものであり、パネル（Ｂ）のデータは４９日目のものである。すべての場合において、ｙ軸の目盛りは０．０１〜１０，０００である。 図１〜８は、（１）破傷風トキソイド；（２）ジフテリアトキソイド；（３）百日咳トキソイド；（４）パータクチン；（５）ＦＨＡ；（６）ＮａｄＡ；（７）ＮＨＢＡ；および（８）ｆＨｂｐに対する血清総ＩｇＧ応答を示す。図がパネル（Ａ）および（Ｂ）を含む場合、パネル（Ａ）のデータは３５日目のものであり、パネル（Ｂ）のデータは４９日目のものである。すべての場合において、ｙ軸の目盛りは０．０１〜１０，０００である。 図１〜８は、（１）破傷風トキソイド；（２）ジフテリアトキソイド；（３）百日咳トキソイド；（４）パータクチン；（５）ＦＨＡ；（６）ＮａｄＡ；（７）ＮＨＢＡ；および（８）ｆＨｂｐに対する血清総ＩｇＧ応答を示す。図がパネル（Ａ）および（Ｂ）を含む場合、パネル（Ａ）のデータは３５日目のものであり、パネル（Ｂ）のデータは４９日目のものである。すべての場合において、ｙ軸の目盛りは０．０１〜１０，０００である。 図１〜８は、（１）破傷風トキソイド；（２）ジフテリアトキソイド；（３）百日咳トキソイド；（４）パータクチン；（５）ＦＨＡ；（６）ＮａｄＡ；（７）ＮＨＢＡ；および（８）ｆＨｂｐに対する血清総ＩｇＧ応答を示す。図がパネル（Ａ）および（Ｂ）を含む場合、パネル（Ａ）のデータは３５日目のものであり、パネル（Ｂ）のデータは４９日目のものである。すべての場合において、ｙ軸の目盛りは０．０１〜１０，０００である。 図１〜８は、（１）破傷風トキソイド；（２）ジフテリアトキソイド；（３）百日咳トキソイド；（４）パータクチン；（５）ＦＨＡ；（６）ＮａｄＡ；（７）ＮＨＢＡ；および（８）ｆＨｂｐに対する血清総ＩｇＧ応答を示す。図がパネル（Ａ）および（Ｂ）を含む場合、パネル（Ａ）のデータは３５日目のものであり、パネル（Ｂ）のデータは４９日目のものである。すべての場合において、ｙ軸の目盛りは０．０１〜１０，０００である。 図１〜８は、（１）破傷風トキソイド；（２）ジフテリアトキソイド；（３）百日咳トキソイド；（４）パータクチン；（５）ＦＨＡ；（６）ＮａｄＡ；（７）ＮＨＢＡ；および（８）ｆＨｂｐに対する血清総ＩｇＧ応答を示す。図がパネル（Ａ）および（Ｂ）を含む場合、パネル（Ａ）のデータは３５日目のものであり、パネル（Ｂ）のデータは４９日目のものである。すべての場合において、ｙ軸の目盛りは０．０１〜１０，０００である。 図１〜８は、（１）破傷風トキソイド；（２）ジフテリアトキソイド；（３）百日咳トキソイド；（４）パータクチン；（５）ＦＨＡ；（６）ＮａｄＡ；（７）ＮＨＢＡ；および（８）ｆＨｂｐに対する血清総ＩｇＧ応答を示す。図がパネル（Ａ）および（Ｂ）を含む場合、パネル（Ａ）のデータは３５日目のものであり、パネル（Ｂ）のデータは４９日目のものである。すべての場合において、ｙ軸の目盛りは０．０１〜１０，０００である。 図１〜８は、（１）破傷風トキソイド；（２）ジフテリアトキソイド；（３）百日咳トキソイド；（４）パータクチン；（５）ＦＨＡ；（６）ＮａｄＡ；（７）ＮＨＢＡ；および（８）ｆＨｂｐに対する血清総ＩｇＧ応答を示す。図がパネル（Ａ）および（Ｂ）を含む場合、パネル（Ａ）のデータは３５日目のものであり、パネル（Ｂ）のデータは４９日目のものである。すべての場合において、ｙ軸の目盛りは０．０１〜１０，０００である。
以下の成分を含有する、免疫原の組合せを調製した：
比較の目的のために、同等であるがＭｅｎＢタンパク質を伴わない組合せを調製した。これらの２つの免疫原の組合せを「ＴｄａＰ−ＭｅｎＢ」および「ＴｄａＰ」と称する。
これらの２つの組合せに、以下を用いてアジュバント化した：
（ａ）水酸化アルミニウム、１ｍｇ／用量（「Ａｌ−Ｈ」）
（ｂ）水酸化アルミニウム、１ｍｇ／用量、１００μｇの「Ｋ２」ＴＬＲ７アゴニストが吸着したもの
（ｃ）水酸化アルミニウム、１ｍｇ／用量、１００μｇの合成ＭＰＬ ＴＬＲ４アゴニストが吸着したもの
（ｄ）ＭＦ５９スクアレン含有水中油エマルション。
ＴｄａＰとＴｄａＰ−ＭｅｎＢのどちらについても組成物（ａ）〜（ｃ）において全ての抗原がＡｌ−Ｈに吸着したが、パータクチンはＭｅｎＢ免疫原を含む組成物中で完全には吸着しなかった。
これらの４対のアジュバント化組成物に加えて、さらなる対はアジュバント化されなかった。これにより、全部で１０種の組成物（Ｃ１）〜（Ｃ１０）が生じた：
さらに、比較のために、２．５Ｌｆのジフテリアトキソイド、５Ｌｆの破傷風トキソイド、および１８．５μｇの無細胞百日咳抗原（精製されたＰＴ、ＦＨＡおよびｐ６９パータクチンの混合物）を含有し（０．５ｍｌ当たり）、リン酸アルミニウムと水酸化物塩の混合物を用いてアジュバント化されたＢＯＯＳＴＲＩＸ（商標）製品も試験した（「Ｃ１１」）。最後に、緩衝液単独の免疫原を含まない陰性対照も調製した（「Ｃ１２」）。
これらの１２種の組成物を、雌のＢａｌｂ／Ｃマウス（６週齢）に、０日目、２１日目および３５日目に１００μｌを筋肉内に投薬した（２×５０μｌ）。各投薬の２週間後に血清を試験し、８種の免疫原のそれぞれに対する特異的なＩｇＧ応答について評価した（Ｃ６〜Ｃ１０およびＣ１２のみは３種のＭｅｎＢ免疫原に対する応答について試験した以外は）。これらの力価が図１〜８に示されている。図１〜５には、３５日目（１Ａ〜５Ａ）および４９日目（１Ｂ〜５Ｂ）のデータが示されており、図６〜８には３５日目のデータのみが示されている。
データにより、ＭｅｎＢ抗原が、２回または３回の投薬後に、ジフテリア抗原、破傷風抗原および無細胞百日咳抗原に対するＩｇＧ応答に悪影響を及ぼさないことが示されている。さらに、ＴＬＲアゴニストをＡｌ−Ｈアジュバントと一緒に含めることにより、全ての抗原に対するＩｇＧ応答が改善された。エマルションアジュバントでも、Ａｌ−Ｈ単独よりもよい結果がもたらされた。しかし、全ての場合において、アジュバントによって抗ＰＴ応答に大きな影響はなかった。
ワクチンの２回目の投薬（２１日目）により、全ての抗原に対するＩｇＧ応答が増大したが、３回目の投薬（３５日目）ではさらなる有意な増大はもたらされなかった。したがって、試験したアジュバントにより、再注射された抗原に対してより急速な応答がもたらされ、これは、追加免疫の状況において非常に有用であり得る。
したがって、Ｄ抗原、Ｔ抗原、ａＰ抗原およびＭｅｎＢ抗原の混合物により、新規の有効な組み合わせワクチンがもたらされる。
本発明は単に例として記載されており、本発明の範囲および精神から逸脱せずに改変を行うことができることが理解されよう。

Claims (2)

  1. （ａ）髄膜炎菌Ｈ因子結合性タンパク質（ｆＨｂｐ）、ナイセリアのヘパリン結合性抗原（ＮＨＢＡ）およびナイセリアアドヘシンＡ（ＮａｄＡ）タンパク質を含む血清群Ｂ髄膜炎菌免疫原、（ｂ）ジフテリアトキソイド、破傷風トキソイド、および百日咳トキソイド、ならびに（ｃ）（ｉ）アルミニウム塩とＴＬＲアゴニストの組合せまたは（ｉｉ）水中油エマルションから選択されるアジュバント、を含む免疫原性組成物であって、Ｌｆ単位で測定して、前記破傷風トキソイドがジフテリアトキソイドと比較して過剰に存在する、免疫原性組成物。
  2. 前記ｆＨｂｐが髄膜炎菌小胞に位置する、請求項１に記載の組成物。
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RU (1) RU2015106930A (ja)
WO (1) WO2014037472A1 (ja)

Families Citing this family (12)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
WO2001031019A2 (en) * 1999-10-29 2001-05-03 Chiron Spa Neisserial antigenic peptides
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
WO2010109323A1 (en) 2009-03-24 2010-09-30 Novartis Ag Adjuvanting meningococcal factor h binding protein
CN102844047B (zh) 2009-09-02 2017-04-05 诺华股份有限公司 含tlr活性调节剂的免疫原性组合物
ES2458355T3 (es) 2010-09-01 2014-05-05 Novartis Ag Adsorción de inmunopotenciadores sobre sales metálicas insolubles
US20140112950A1 (en) 2011-03-02 2014-04-24 Manmohan Singh Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
IN2014CN02152A (ja) * 2011-09-01 2015-09-04 Novartis Ag
AU2013229432A1 (en) 2012-03-08 2014-10-16 Novartis Ag Adjuvanted formulations of booster vaccines
WO2013186753A1 (en) 2012-06-14 2013-12-19 Novartis Ag Vaccines for serogroup x meningococcus
JP6324961B2 (ja) * 2012-09-06 2018-05-16 ノバルティス アーゲー 血清群ｂ髄膜炎菌とｄ／ｔ／ｐとの組み合わせワクチン
SI3506935T1 (sl) * 2016-09-02 2024-06-28 Sanofi Pasteur, Inc. Cepivo proti neisseriji meningitidis
EP3890770A4 (en) * 2018-12-05 2022-09-28 Sanofi Pasteur, Inc. PERTUSSIS BOOST VACCINE

Family Cites Families (135)

* Cited by examiner, † Cited by third party
Publication number Priority date Publication date Assignee Title
US4057685A (en) 1972-02-02 1977-11-08 Abbott Laboratories Chemically modified endotoxin immunizing agent
DE2848965A1 (de) 1978-11-11 1980-05-22 Behringwerke Ag Verfahren zur herstellung von membranproteinen aus neisseria meningitidis und diese enthaltende vaccine
US4673574A (en) 1981-08-31 1987-06-16 Anderson Porter W Immunogenic conjugates
EP0114787B1 (de) 1983-01-25 1991-09-25 Ciba-Geigy Ag Neue Peptidderivate
US4459286A (en) 1983-01-31 1984-07-10 Merck & Co., Inc. Coupled H. influenzae type B vaccine
US4663160A (en) 1983-03-14 1987-05-05 Miles Laboratories, Inc. Vaccines for gram-negative bacteria
US4761283A (en) 1983-07-05 1988-08-02 The University Of Rochester Immunogenic conjugates
US4808700A (en) 1984-07-09 1989-02-28 Praxis Biologics, Inc. Immunogenic conjugates of non-toxic E. coli LT-B enterotoxin subunit and capsular polymers
IT1187753B (it) 1985-07-05 1987-12-23 Sclavo Spa Coniugati glicoproteici ad attivita' immunogenica trivalente
US5204098A (en) 1988-02-16 1993-04-20 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Polysaccharide-protein conjugates
US4912094B1 (en) 1988-06-29 1994-02-15 Ribi Immunochem Research Inc. Modified lipopolysaccharides and process of preparation
NL8802046A (nl) 1988-08-18 1990-03-16 Gen Electric Polymeermengsel met polyester en alkaansulfonaat, daaruit gevormde voorwerpen.
ES2055785T3 (es) 1989-01-17 1994-09-01 Eniricerche Spa Peptidos sinteticos y su uso como vehiculos universales para la preparacion de conjugados inmunogenos aptos para el desarrollo de vacunas sinteticas.
HU212924B (en) 1989-05-25 1996-12-30 Chiron Corp Adjuvant formulation comprising a submicron oil droplet emulsion
JPH04506662A (ja) 1989-07-14 1992-11-19 アメリカン・サイアナミド・カンパニー 接合体ワクチンのためのサイトカイニンおよびホルモンのキヤリヤー
IT1237764B (it) 1989-11-10 1993-06-17 Eniricerche Spa Peptidi sintetici utili come carriers universali per la preparazione di coniugati immunogenici e loro impiego per lo sviluppo di vaccini sintetici.
SE466259B (sv) 1990-05-31 1992-01-20 Arne Forsgren Protein d - ett igd-bindande protein fraan haemophilus influenzae, samt anvaendning av detta foer analys, vacciner och uppreningsaendamaal
EP0471177B1 (en) 1990-08-13 1995-10-04 American Cyanamid Company Filamentous hemagglutinin of bordetella pertussis as a carrier molecule for conjugate vaccines
US5153312A (en) 1990-09-28 1992-10-06 American Cyanamid Company Oligosaccharide conjugate vaccines
IT1262896B (it) 1992-03-06 1996-07-22 Composti coniugati formati da proteine heat shock (hsp) e oligo-poli- saccaridi, loro uso per la produzione di vaccini.
IL102687A (en) 1992-07-30 1997-06-10 Yeda Res & Dev Conjugates of poorly immunogenic antigens and synthetic pepide carriers and vaccines comprising them
US5425946A (en) 1992-08-31 1995-06-20 North American Vaccine, Inc. Vaccines against group C Neisseria meningitidis
PT658118E (pt) 1992-08-31 2002-05-31 Baxter Healthcare Sa Vacinas contra neisseria meningitidis do grupo c
SG48309A1 (en) 1993-03-23 1998-04-17 Smithkline Beecham Biolog Vaccine compositions containing 3-0 deacylated monophosphoryl lipid a
AU5543294A (en) 1993-10-29 1995-05-22 Pharmos Corp. Submicron emulsions as vaccine adjuvants
US5698438A (en) 1994-10-18 1997-12-16 Oregon Health Sciences University Bacterial hemoglobin receptor gene
IL117483A (en) 1995-03-17 2008-03-20 Bernard Brodeur MENINGITIDIS NEISSERIA shell protein is resistant to proteinase K.
US6180111B1 (en) 1995-05-18 2001-01-30 University Of Maryland Vaccine delivery system
CZ390297A3 (cs) 1995-06-07 1998-05-13 Smithkline Beecham Biologicals S. A. Kombinovaná vakcína
US6299881B1 (en) 1997-03-24 2001-10-09 Henry M. Jackson Foundation For The Advancement Of Military Medicine Uronium salts for activating hydroxyls, carboxyls, and polysaccharides, and conjugate vaccines, immunogens, and other useful immunological reagents produced using uronium salts
GB9713156D0 (en) 1997-06-20 1997-08-27 Microbiological Res Authority Vaccines
AU755462B2 (en) 1997-08-21 2002-12-12 De Staat Der Nederlanden Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn, Volksgezonheid En Cultuur Novel mutants of gram negative mucosal bacteria and application thereof in vaccines
US6645503B1 (en) 1998-03-10 2003-11-11 Wyeth Holdings Corporation Antigenic conjugates of conserved lipopolysaccharides of gram negative bacteria
JP5102414B2 (ja) 1998-05-01 2012-12-19 ノバルティス バクシンズ アンド ダイアグノスティックス，インコーポレーテッド 髄膜炎菌抗原および組成物
ATE375803T1 (de) 1998-05-07 2007-11-15 Corixa Corp Adjuvanszusammensetzung und methoden zu deren verwendng
US8007815B1 (en) 1998-05-29 2011-08-30 Novartis Ag Combination meningitidis B/C vaccines
EP1109576B1 (en) 1998-08-19 2009-10-21 Baxter Healthcare SA Immunogenic beta-propionamido-linked polysaccharide protein conjugate useful as a vaccine produced using an n-acryloylated polysaccharide
CA2347849C (en) 1998-10-22 2013-06-25 The University Of Montana Omp85 proteins of neisseria gonorrhoeae and neisseria meningitidis, compositions containing same and methods of use thereof
GB9823978D0 (en) 1998-11-02 1998-12-30 Microbiological Res Authority Multicomponent meningococcal vaccine
CA2348928C (en) 1998-11-03 2010-01-26 De Staat Der Nederlanden, Vertegenwoordigd Door De Minister Van Welzijn,Volksgezondheid En Cultuur Lps with reduced toxicity from genetically modified gram negative bacteria
WO2000033882A1 (en) 1998-12-04 2000-06-15 The Government Of The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services A vi-repa conjugate vaccine for immunization against salmonella typhi
US20030130212A1 (en) 1999-01-14 2003-07-10 Rossignol Daniel P. Administration of an anti-endotoxin drug by intravenous infusion
US6551600B2 (en) 1999-02-01 2003-04-22 Eisai Co., Ltd. Immunological adjuvant compounds compositions and methods of use thereof
HU228499B1 (en) * 1999-03-19 2013-03-28 Smithkline Beecham Biolog Streptococcus vaccine
CA2365914A1 (en) 1999-04-09 2000-10-19 Techlab, Inc. Recombinant clostridium toxin a protein carrier for polysaccharide conjugate vaccines
CN100392082C (zh) 1999-04-30 2008-06-04 启龙股份公司 保守的奈瑟球菌抗原
GB9918319D0 (en) 1999-08-03 1999-10-06 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
US6531131B1 (en) 1999-08-10 2003-03-11 The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services Conjugate vaccine for Neisseria meningitidis
WO2001034642A2 (en) 1999-11-12 2001-05-17 University Of Iowa Research Foundation Control of neisserial membrane synthesis
GB9928196D0 (en) 1999-11-29 2000-01-26 Chiron Spa Combinations of B, C and other antigens
WO2001038350A2 (en) 1999-11-29 2001-05-31 Chiron Spa 85kDa NEISSERIAL ANTIGEN
WO2001041800A2 (en) 1999-12-02 2001-06-14 Chiron Corporation Compositions and methods for stabilizing biological molecules upon lyophilization
JP2003523208A (ja) 2000-01-25 2003-08-05 ザ ユニバーシティ オブ クイーンズランド 髄膜炎菌表面抗原ＮｈｈＡの保存領域を含むタンパク質
GB0007432D0 (en) 2000-03-27 2000-05-17 Microbiological Res Authority Proteins for use as carriers in conjugate vaccines
NO20002828D0 (no) 2000-06-02 2000-06-02 Statens Inst For Folkehelse Proteinholdig vaksine mot Neisseria meningtidis serogruppe samt fremgangsmÕte ved fremstilling derav
MXPA03000822A (es) 2000-07-27 2004-11-01 Childrens Hosp & Res Ct Oak Vacunas para proteccion de espectro amplio contra enfermedades causadas por neisseria meningitidis.
GB0103170D0 (en) 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
RO122761B1 (ro) 2001-01-23 2010-01-29 Aventis Pasteur Vaccin multivalent antimeningococic conţinând polizaharid-proteină
GB0103171D0 (en) 2001-02-08 2001-03-28 Smithkline Beecham Biolog Vaccine composition
US20030035806A1 (en) 2001-05-11 2003-02-20 D'ambra Anello J. Novel meningitis conjugate vaccine
GB0115176D0 (en) 2001-06-20 2001-08-15 Chiron Spa Capular polysaccharide solubilisation and combination vaccines
MX339524B (es) 2001-10-11 2016-05-30 Wyeth Corp Composiciones inmunogenicas novedosas para la prevencion y tratamiento de enfermedad meningococica.
GB0202901D0 (en) 2002-02-07 2002-03-27 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel vaccine
PT1490409E (pt) 2002-03-26 2009-04-03 Novartis Vaccines & Diagnostic Sacáridos modificados possuindo uma estabilidade melhorada em água
GB0213622D0 (en) 2002-06-13 2002-07-24 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine Corporation
WO2004015099A2 (en) 2002-08-02 2004-02-19 Glaxosmithkline Biologicals Sa Vaccine composition comprising lipooligosaccharide with reduced phase variability
GB0220194D0 (en) 2002-08-30 2002-10-09 Chiron Spa Improved vesicles
CA2501812C (en) 2002-10-11 2012-07-10 Mariagrazia Pizza Polypeptide-vaccines for broad protection against hypervirulent meningococcal lineages
GB0227346D0 (en) 2002-11-22 2002-12-31 Chiron Spa 741
BRPI0411815A (pt) 2003-06-23 2006-08-08 Baxter Int vacinas contra neisseria meningitidis do tipo y e suas combinações meningocócicas
GB0316560D0 (en) 2003-07-15 2003-08-20 Chiron Srl Vesicle filtration
GB0323103D0 (en) 2003-10-02 2003-11-05 Chiron Srl De-acetylated saccharides
KR20090051129A (ko) 2004-04-05 2009-05-20 화이자 프로덕츠 인코포레이티드 미세유체화된 수중유 유화액 및 백신 조성물
GB0419627D0 (en) 2004-09-03 2004-10-06 Chiron Srl Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins
GB0424092D0 (en) 2004-10-29 2004-12-01 Chiron Srl Immunogenic bacterial vesicles with outer membrane proteins
HUE033196T2 (en) 2005-01-27 2017-11-28 Children's Hospital & Res Center At Oakland GNA1870-based vesicle vaccines for broad-spectrum protection against diseases caused by Neisseria meningitidis
DK3466982T3 (da) 2005-04-08 2020-08-03 Wyeth Llc Separation af forurenende kontaminanter fra streptococcus pneumoniae-polysaccharid ved ph-manipulation
EP2425855A1 (en) 2005-04-08 2012-03-07 Wyeth LLC Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US7955605B2 (en) 2005-04-08 2011-06-07 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US7709001B2 (en) 2005-04-08 2010-05-04 Wyeth Llc Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
US20070184072A1 (en) 2005-04-08 2007-08-09 Wyeth Multivalent pneumococcal polysaccharide-protein conjugate composition
PT2351578T (pt) 2005-06-27 2017-04-07 Glaxosmithkline Biologicals Sa Processo para o fabrico de vacinas
US8703095B2 (en) 2005-07-07 2014-04-22 Sanofi Pasteur S.A. Immuno-adjuvant emulsion
TWI382019B (zh) 2005-08-19 2013-01-11 Array Biopharma Inc 作為類鐸受體（ｔｏｌｌ-ｌｉｋｅ ｒｅｃｅｐｔｏｒ）調節劑之胺基二氮雜呯
TW200801003A (en) 2005-09-16 2008-01-01 Astrazeneca Ab Novel compounds
JPWO2007034817A1 (ja) 2005-09-22 2009-03-26 大日本住友製薬株式会社 新規アデニン化合物
EP1939201A4 (en) 2005-09-22 2010-06-16 Dainippon Sumitomo Pharma Co NEW ADENINE CONNECTION
US20090192153A1 (en) 2005-09-22 2009-07-30 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. a corporation of Japan Novel adenine compound
TW200745114A (en) 2005-09-22 2007-12-16 Astrazeneca Ab Novel compounds
WO2007034916A1 (ja) 2005-09-22 2007-03-29 Dainippon Sumitomo Pharma Co., Ltd. 新規アデニン化合物
WO2007053455A2 (en) 2005-10-28 2007-05-10 Vaxinnate Corporation Polypeptide ligans for toll-like receptor 4 (tlr4)
GB0522765D0 (en) 2005-11-08 2005-12-14 Chiron Srl Combination vaccine manufacture
LT3017827T (lt) 2005-12-22 2019-01-10 Glaxosmithkline Biologicals S.A. Pneumokokinė polisacharidinė konjuguota vakcina
FR2896162B1 (fr) 2006-01-13 2008-02-15 Sanofi Pasteur Sa Emulsion huile dans eau thermoreversible
MX2008010611A (es) 2006-02-17 2008-11-12 Pfizer Ltd Derivados de 3-desazapurina como moduladores de receptores similares a toll.
EP2357184B1 (en) * 2006-03-23 2015-02-25 Novartis AG Imidazoquinoxaline compounds as immunomodulators
EP2041135A4 (en) 2006-07-05 2010-12-01 Astrazeneca Ab As TLR7 MODULATORS, 8-OXOADENINE DERIVATIVES WORK
WO2008005555A1 (en) 2006-07-07 2008-01-10 Gilead Sciences, Inc. Modulators of toll-like receptor 7
MX2009002560A (es) * 2006-09-07 2009-03-20 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacuna.
ATE473289T1 (de) 2006-10-10 2010-07-15 Wyeth Llc Verbesserte verfahren zur trennung von streptococcus pneumoniae-3-polysacchariden
PT2086582E (pt) 2006-10-12 2013-01-25 Glaxosmithkline Biolog Sa Vacina compreendendo uma emulsão adjuvante óleo em água
GB0622282D0 (en) 2006-11-08 2006-12-20 Novartis Ag Quality control methods
DE602008003764D1 (de) 2007-02-19 2011-01-13 Glaxosmithkline Llc Purinderivate als immunmodulatoren
AR065784A1 (es) 2007-03-20 2009-07-01 Dainippon Sumitomo Pharma Co Derivados de 8-oxo adenina,medicamentos que los contienen y usos como agentes terapeuticos para enfermedades alergicas, antivirales o antibacterianas.
BRPI0811125A2 (pt) 2007-05-08 2017-05-09 Astrazeneca Ab imidazoquinolinas com propriedades imunomoduladoras
CA2695467A1 (en) 2007-08-02 2009-03-26 Children's Hospital & Research Center At Oakland Fhbp- and lpxl1-based vesicle vaccines for broad spectrum protection against diseases caused by neisseria meningitidis
CA2707030A1 (en) 2007-08-03 2009-02-12 Pfizer Limited Imidazopyridinones
PE20091236A1 (es) 2007-11-22 2009-09-16 Astrazeneca Ab Derivados de pirimidina como immunomoduladores de tlr7
US8092813B1 (en) 2007-12-28 2012-01-10 Novartis Ag Polychlorinated biphenyls and squalene-containing adjuvants
EP2245048B1 (en) 2008-02-21 2014-12-31 Novartis AG Meningococcal fhbp polypeptides
WO2009111337A1 (en) * 2008-03-03 2009-09-11 Irm Llc Compounds and compositions as tlr activity modulators
PT2276486E (pt) 2008-03-24 2013-12-04 4Sc Discovery Gmbh Novas imidazoquinolinas substituídas
CN101559223B (zh) * 2008-04-18 2013-02-13 重庆智仁生物技术有限公司 流脑白百破联合疫苗
EP2313111B1 (en) 2008-08-01 2013-09-04 Ventirx Pharmaceuticals, Inc. Toll-like receptor agonist formulations and their use
PL2268823T3 (pl) 2008-08-28 2012-03-30 Novartis Ag Wytwarzanie skwalenu z wykorzystaniem drożdży nadprodukujących skwalen
GB0816447D0 (en) 2008-09-08 2008-10-15 Glaxosmithkline Biolog Sa Vaccine
EA021377B9 (ru) 2008-12-09 2015-09-30 Джилид Сайэнс, Инк. Модуляторы толл-подобных рецепторов
CN102300585A (zh) 2008-12-17 2011-12-28 诺华有限公司 包含血红蛋白受体的脑膜炎球菌疫苗
AU2010288240B2 (en) 2009-08-27 2014-03-27 Novartis Ag Hybrid polypeptides including meningococcal fHBP sequences
CN102844047B (zh) 2009-09-02 2017-04-05 诺华股份有限公司 含tlr活性调节剂的免疫原性组合物
GB0917003D0 (en) 2009-09-28 2009-11-11 Novartis Vaccines Inst For Global Health Srl Purification of bacterial vesicles
WO2011039631A2 (en) 2009-09-30 2011-04-07 Novartis Ag Expression of meningococcal fhbp polypeptides
BR112012013426B8 (pt) 2009-12-03 2021-05-25 Novartis Ag métodos para a fabricação de uma emulsão de óleo-em-água, para preparar uma composição de vacina e para preparar um kit de vacina
CN104688687A (zh) 2009-12-03 2015-06-10 诺华股份有限公司 疫苗佐剂制备中的亲水过滤
KR101523215B1 (ko) 2009-12-03 2015-05-27 노파르티스 아게 에멀션 미세 액화 및/또는 균질화 동안 성분들의 순환
US9365624B2 (en) 2010-03-11 2016-06-14 Glaxosmithkline Biologicals, S.A. Vaccine
BR112012022896A2 (pt) * 2010-03-18 2018-03-27 Novartis Ag vacinas adjuvantes para meningococos do sorogrupo b
EA031379B1 (ru) 2010-03-23 2018-12-28 Новартис Аг Соединения (липопептиды на основе цистеина) и композиции в качестве агонистов tlr2, применяемые для лечения инфекционных, воспалительных, респираторных и других заболеваний
EA027142B1 (ru) 2010-05-12 2017-06-30 Новартис Аг Улучшенные способы получения сквалена
GB201009676D0 (en) 2010-06-10 2010-07-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel process
GB201009673D0 (en) 2010-06-10 2010-07-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel process
GB201009671D0 (en) 2010-06-10 2010-07-21 Glaxosmithkline Biolog Sa Novel process
ES2458355T3 (es) 2010-09-01 2014-05-05 Novartis Ag Adsorción de inmunopotenciadores sobre sales metálicas insolubles
US20140112950A1 (en) 2011-03-02 2014-04-24 Manmohan Singh Combination vaccines with lower doses of antigen and/or adjuvant
JP6324961B2 (ja) * 2012-09-06 2018-05-16 ノバルティス アーゲー 血清群ｂ髄膜炎菌とｄ／ｔ／ｐとの組み合わせワクチン

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