RS57723B1 - Jak1 inhibitori za lečenje mijelodisplastičnog sindroma - Google Patents

Description

Opis

[0001] Ova prijava ima prioritet prioritetne U.S. Priv. prij. br.61/946,124, podnete 28 februara, 2014.

TEHNIČKA OBLAST

[0002] Ovaj pronalazak se odnosi na JAK1 selektivne inhibitore i njihovu upotrebu u lečenju mijelodipslastičnog sindroma (MDS).

[0003] Mijelodisplastični sindromi (MDS), ranije poznati kao dismijelopoetski sindromi ili preleukemija, su heterogeni i klonski hematopoetski poremećaji koji su karakterisani sa neefikasnim hematopoiezama na jednom ili više glavnih mijeloidnih ćeliskih linija. Mijelodisplastični sindromi su u vezi sa otkazivanjem koštane srži, citopenijama periferne krvi, i sklonošću da se napreduje do akutne mijeloidne leukemije (AML). Pored toga, klonske citogenetske abnormalnosti mogu biti detektovane u oko 50% slučajeva sa MDS. U opštoj populaciji, MDS se javlja u 5 na 100,000 i povećanje javljanja sa godinama, doseže do oko 22 do 45 na 100,000 kod pojedinaca starijih od 70 godina (Greenberg, "The myelodysplastic syndromes" in Hoffman, et al, eds. Hematology: Basic Principles and Practice (3rd ed.), Churchill Livingston; 2000:1106-1129; Liesveld and Lichtman, Chapter 88. "Myelodysplastic Syndromes (Clonal Cytopenias and Oligoblastic Myelogenous Leukemia)", in Prchal et al, eds. Williams Hematology. 8th ed., New York: McGraw-Hill; 2010). Uprkos prednostima nauke u našem znanju patofiziologije MDS, postoji nekoliko terapeutskih opcia dosupnih i uglavnom su palijativne, naročito kada pogađaju pacijente koji nisu kandidati za transplanataciju hematopoetskih stem ćelija (HSCT).

[0004] Standardi nege za MDS uključuju negu podrške koja obuhvata posmatranje i kliničko praćenje, psihološku podršku, i napore da se poboljša kvalitet života QOL (Cheson, et al, Blood 2000;96:3671-3674; Venugopal et al. Cancer Treat Res 2001;108:257-265; Greenberg, Int J Ped Hem-Onc 1997;4:231-238). Pored toga, potebne su transfuzije crvenih krvnih zrnaca za sistemsku anemiju i transfuziju trombocita za epizode krvarenja od trombocitopenije. Pacijenti sa mijelodisplastičnim sindormom kojima su potrebne transfuzije crvenih krvnih zrnaca mogu razviti komplikacije uključujući razvijanje aloantitela koje zahteva povećanu učestlost transfuzije, i preopterećenje gvožđem sa oštećenjem krajnjeg organa do jetre, srca i endokrinih organa koji zahtevaju helataciju gvožđa da bi se održao serumski feritin na < 1000 μg/L (Venugopal et al 2001 (supra), Greenberg 1997 (supra)). U slučajevima sa refraktorom simpromatskom citopenijom, potrebana je hematopoetska podrška citokina, kao što je uporeba rekombinantnog humanog faktora stimulacije kolonija granulocita (G CSF) ili granulocita-monocita CSF (GM-CSF) za neutropenijske MDS sa infektivnim komplikacijma, i stimulišuće sredstvo eritropoeze (ESA) za simtomatsku anemiju (Cheson et al 2000 (supra), Jädersten et al, Blood 2005;106:803-811; Schiffer, Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2006:205-210). U ranom stadijumu MDS, tj, niski IPSS i IPSS Intermedijer-1, simptomatska anemija je najuobičajeni razlog zahtevanja terapeutskih intervencija. Od ESA ima koristi samo deo ovih pacijenata sa najvišim viđenim odgovorom kod pacijenata koji nisu zavisni od transfuzije crvenih krvnih zrnaca ili oni sa najnižim endogenim EPO nivoom (< 500 IU) (Cheson et al 2000 (supra), Jädersten et al 2005 (supra), Schiffer 2006 (supra), Fenaux, et al., Lancet Oncol 2009;10:223-232). Eventualno, pacijenti prestaju da odgovaraju na ESA terapiju i zahtevaju podršku transfuzije crvenih krvnih zrnaca, mada ESA se tipično nastavlja čak kada su potrebne transfuzije crvenih krvnih zrnaca i nizak je broj retikulocita. Zahtevi transfuzije mogu varirati i mogu biti pod uticajem pratećih medicinskih stanja u kojima je potreban viši nivo Hgb kao što je angina, razvitak aloantitela na crvena krvna zrnca, splenomegalija, i okultna gastrointestinalna krvarenja usled trombocitopenije ili disfukcije trombocita (Venugopal et al2001 (supra), Greenberg 1997 (supra), Fenaux et al 2009 (supra)).

[0005] Terapije niskog intenziteta uključuju upotrebu hemoterapije niskog intenziteta ili modifikatora biološkog odgovora (BRM). Sredstva za hipometilaciju kao što su DNK metiltransferazni inhibitori 5 azacitidina i decitabina (5-aza-2’-deoksicitidina) je pokazano sa smanjuju rizik od leukemijskih transformacija u nasumišnim ispitivanjima faze 3 i poboljšavaju celokupno preživljavanje dela pacijenata (Fenaux et al 2009 (supra), Silverman, J Clin Oncol 2002;20:2429-2440; Silverman, J Clin Oncol 2006;24:3895-3903). Slično, decitabin je pokazao viši odnos odgovora bolesti, trajanja remisije, vrema za AML progresiju, i koristi od preživljavanja kod MDS pacijenata sa srednjim rizikom i visokim rizikom od bolesti. Pored toga, decitabin pokazuje značajno poboljšanje kod pacijenata sa zabeleženim QOL (based on The European Organisation for Research and Treatment of Cancer [EORTC QLQ C30]) za dimenzije umora i fizičkog funkcionisanja (Kantarjian, et al., Cancer 2006;106:1794-1803; Lübbert, et al., Br J Haematol 2001;114:349-357; Lübbert, et al., J Clin Oncol 2011;29:1987-1996). Oba 5-azacitidin i decitabin su odobreni za MDS lečenje i specifično obezbeđuju kliničku korist i preporučeni su od NCCN MDS komisije za pacijente sa IPSS srednjim 2 i visoko rizičnom MDS (National Comprehensive Cancer Network (NCCN). Myelodysplastic Syndromes Guidelines Version 1.2012. www.nccn.org/professionals/physician gls/f guidelines.asp).

[0006] Inflamatorni molekuli su pokazani kao regulatorni motivi koji vode proliferaciju i apoptotsku smrt hematopoetskih progenitora u MDS. Hronična imuna stimulacija, kuplovana sa promenama zavisnim od godina u oba hematopoetskim stem/progenitorskim ćelijama (HSPC) i BM mikrookolinima se veruje da je kritična za patogenezu bolesti. Rastući dokazi ukazuju na aktivaciju urođenog imunog signaliziranja u kod hematopoetskog starenja i kod patobiologije MDS (Chen et al., 2014). Kao takvi, imuni modifikatori koji uključuju inihbitore T ćelija kao što su antitimocitni globulin (ATG), ciklosporin, i talidomid i njeov analog lenalidomid (Molldrem, et al., Br J Haematol 1997;99:699-705; Sloand, et al., J Clin Oncol 2008;26:2505-2511; Raza, et al., Blood 2008; 111:86-93; Fenaux, et al., Blood 2011;118:3765-3776; List, et al., N Engl J Med 2005;352:549-557) su korišćeni kao sredstva sa niskim intenzitetom MDS. Visoko intenzivna terapija za MDS uključuje intenzivnu indukovanu hemoterapiju, kao što se koristi u lečenju AML i HSCT. Različite intenzivni hemoterapeutski režimi su testirani da li imaju potencijal za menjanje prirodnog toka bolesti i uporedna ispitivanja nisu uspela da pokažu korist; ovaj prilaz ostaje za ispitivanje i moguća je opcija za MDS pacijente sa bolešću visokog rizika. Alogenski HSCT, jedini modalitet lekovitog tretmana za MDS i poželjno od odgovarajućeg srodnog donora, je poželjna opcija za pacijente sa visokorizičnim MDS pacijentima, ali nedostatak pogodnog donora i komorbiteti u vezi sa poodmaklim godinama često isključuju ove pacijente iz podvrgavanja ovim postupcima (NCCN 2012 (supra); Larson, Best Pract Res Clin Hematol 2006;19:293-300; Schiffer, Best Pract Res Clin Hematol 2007;20:49-5 A. Eghtedar et al. discloses the treatment of myelodysplastic syndrome with the JAK inhibitor ruxolitinib (Blood, 2012; 119(2): 4614-4618).

[0007] Prema tome, postoji potreba za razvijanjem novih terapija za lečenje mijelodisplastičnih simptoma. Ova prijava se odnosi na ovu potrebu i ostale.

SUŠTINA PRONALASKA

[0008] Prikazana prijava obezbeđuje selektivni inhibitor JAK1 kao što je definisan u zahtevima za upotrebu u postupku lečenja mijelodisplastičnog sindorma kod pacijenta kome je to potrebno.

DETALJNI OPIS

[0009] Obim pronalaska je definisan patentim zahtevima. Bilo koji predmet koji spada van opsega patentih zahteva je obezbeđen samo za svrhe informisanja. Bilo koje pozivanje u opisu na postupke lečenja odnosi se na jedinjenja, farmaceutske kompozicije i lekove prema prikazanom pronalasku za upotrebu u postupku lečenja tela čoveka (ili životinje) terapijom. U ovde opisanim postupcima se korsite JAK1 selektivni inhibitori. JAK1 selektivni inhibitor je jedinjenje koje inhibira aktivnost JAK1 u odnosu na ostale Janus kinaze. JAK1 igra centralnu ulogu u brojnim putevima signalizacije citokina i faktora rasta koji, kada su disregulisani, mogu dovesti do ili doprinositi bolesnim stanjima. Na primer, IL-6 nivoi su povećani u reumatoidnom artritisu, bolesti u kojoj je sugeriosano da ima štetne efekte (Fonesca, et al., Autoimmunity Reviews, 8:538-42, 2009). Zbog toga što IL-6 signali, barem delom, preko JAK1, antagoniziraju IL-6 direktno ili indirektno preko JAK1 inhibicije očekuje se da obezbeđuju kliničku korist (Guschin, et al Embo J 14:1421, 1995; Smolen, et al. Lancet 371:987, 2008). Pored toga, kod nekih kancera JAK1 mutira dovodeći do konstituitivnog neželjenog rasta i preživljavanja ćelija tumora (Mullighan, Proc Natl Acad Sci U S A. 106:9414-8, 2009; Flex, J Exp Med. 205:751-8, 2008). Kod drugih autoimunih bolesti i povećanih nivoa inflamatornih citokina u vezi sa kancerom koji aktiviraju JAK1 mogu takođe doprinostiti bolesti i/ili simptomima u vezi sa bolešću. Prema tome, pacijenti sa takvim bolestima mogu imati koristi od inhibicije JAK1. Selektivni inhibitori JAK1 mogu biti efikasni dok se izbegavaju nepotrebni i poencijalno nepoželjni efekti inihbicije drugih JAK kinaza.

[0010] Selektivni inhibitori JAK1, u odnosu na druge JAK kinaze, mogu imati višestruke terapeutske prednosti u odnosu na manje selektivne inhibitore. U odnosu na slektivnost naspram JAK2, brojni signali važnih citokina i faktora rasta preko JAK2 uključuju, na primer, eritropoetin (Epo) i trombopoetin (Tpo) (Parganas, et al. Cell.93:385-95, 1998). Epo je ključni glavni faktor za proizvodnju ćelija crvenih krvnih zrnaca; s obzirom da slabost Epo-zavisnog signaliziranja može da dovede do smanjenog broja ćelija crvenih krvnih zrnaca i anemije (Kaushansky, NEJM 354:2034-45, 2006). Tpo, još jedan primer faktora rasta zavisnog od JAK2, igra centralnu ulogu u kontroli i proliferaciji i zrenju megakaritocita – ćelija iz kojih se dobijaju krvne pločice (Kaushansky, NEJM 354:2034-45, 2006). Kao takva, smanjena Tpo signalizacija će smanjiti broj megakariocita (megakariocitopenija) i smanjiti broj krvnih poločica u krvotoku (trombocitopenija). Ovo može dovesti do neželjenog i/ili nekontrolisanog krvarenja. Smanjena inhibicija drugih JAKs, kao što su JAK3 i Tyk2, može takođe biti poželjna kod ljudi kojima nedostaje funkcionalna verzija ovih kinaza koji pate od mnogih bolesti kao što su ozbiljna kombinovana imunodeficijencija ili sindrom hiperimunoglobulina E (Minegishi, et al. Immunity 25:745-55, 2006; Macchi, et al. Nature, 377:65-8, 1995). Prema tome JAK1 inhibitor sa smanjenim afinitetom za druge JAKs bi imao značajne prednosti u odnosu na manje selektivni inhibitor u odnosu na smanjena neželjena dejstva koja obuhvataju imunosupresiju, anemiju i trombocitopeniju.

[0011] Inflamatorni citokini igraju značajnu ulogu u patogenezi MDS, koja dovodi do citopenija i displastičnih hematopoeza. Hipoteza je da ograničavanje aktivnosti ovih inflamatornih citokina će pospeštiti normalnu hematopoezu i osloboditi prekursore iz srži od prevremene apoptoze. Inflamatorni citokini posreduju u nishodnim efektima JAK aktivacijom koja obuhvata jukstapozicioniranje JAKs od dimerizacije receptora posedovanih ligandom i trans/autofosforilacije. Dobijeni JAK heterodimeri, sadrže JAK1 i JAK2 ili JAK1 i JAK3, prenosne signale i posredovane ćelijske odgovore ovih citokina. Pored toga, JAK homodimeri, sadrže samo JAK2, prenosne signale iz faktora rastva koštane srži kao što je EPO, koji je odgovoran za stimulaciju eritropoeze, i TPO, koji je odgovoran za stimulaciju tromopoeze. Prema tome, selektivni JAK1 inhibitor će dovesti do ukidanja signalizacije inflamatornih citokina bez inhibiranja JAK2-posredovane eritropoeze i trombopoeze, što dovodi do ponovnog uspostavljanja normalne hematopoeze i ublažavanja mijeloidne citopenije.

[0012] Uprokos naučnim prednostima u našem saznanju o patofiziologiji MDS, postoji nekoliko terapeutskih opcija koje su dostupne i uglavnom su palijativne, naročito kada ugroženi pacijenti nisu kandidati za HSCT. Brojna istraživanja imaju pokazatelje da je MDS klonska bolest i pokazuje da je ekspandirani klon bio posledica prekomerne proliferacije hamatopoetskih progenitora u koštanoj srži. Paradoks hiperproliferativnog stanja u koštanoj srži koji vodi do periferenih citopenija je istraživan i otkriveno je da postoji prekomerna količina intramedularno programiranih ćelijskih smrti ili apoptoze hematopoetskih ćelija. Ova apoptoza je viđena kod pacijenata sa svim FAB kategorijama ali smanjena kod pacijenata sa povećanim brojem blasta. Ustanovljeno je da klonska populacija progresivno postaje otporna na apoptozu i postignuta je proliferativna prednost u odnosu na normalne hematopoetske prekursore koji vode do porasta u broju blasta i evoluciji do AML. Takođe postaje jasno da prekomerna apoptoza je u velikoj meri posredovani brojnim proinflamatornim citokinima koji su prekomerno eksprimovani u koštanoj srži pacijenata sa MDS. Citokini na koje je ukazano u patobiologiji MDS uključuju alfa faktor tumor nekroze (TNF-α), interferon-gama (IFN γ) i IL 1β. Visoke koncentracije u plazmi TNF-α, klasičnog proapoptotičnog citokina, je primećeno u perifernoj krvi i koštanoj srži pacijenata sa MDS i višoj ekspresiji TNF receptora i informacione ribonukleinske kiseline (mRNA) je primećeno u koštanoj srži mononuklearnih ćelija koje potiču od MDS pacijenata. Slično, povećana količina IFN γ i IL 1β je nađena u mononukelarnim ćelijama koštane srži MDS i IL-1β je impliciran u razvijanju AML iz MDS. IL-1β ima promenjivie regulatorne efekte na hematopoetske ćelije jer simuliše GM-CSF i IL-3, gde su više koncentracije koje su viđene u inflamatornim stanjma, vode do supresije hematopoeze indukovanjem TNF α i prostaglandina E2, poslednji je jak supresor proliferacije mijeloidnih stem ćelija. Pored toga, visoki nivoi IL-6, faktora rasta fibroblasta, faktora rasta hepatocita, i transformišućeg faktora rasta β je viđen u mijeloidnim ćelijama pacijenata sa MDS. Povrh toga, sami citokini koji suprimuju normalnu homatopoetsku proliferaciju i zrenje ne uspevaju da pokažu ovaj proapoptotski efekat na razvijanje abnormalnog klona koji dovodi do selektivne proliferacije ovih abnormalnih ćelija. Postoji dokaz da izvor ovih proinflamatornih citokina je izmenjeno mikrookruženje koštane srži koje normalno hrani normalne hematopoetske ćelije da se razmnožavaju i diferenciraju, i mogu takođe biti razlog za infiltraciju imunih regulatorskih ćelija i angiogeneze koja doprinosi patobiologiji MDS (Raza, et al., Blood 1995;86:268-276; Raza, et al, Int J Hematol 1996a;63:265-278; Raza, et al., Leuk Res 1996b;20:881-890; Mundle, et al. Am J Hematol 1999;60:36-47; Claessens, et al., Blood 2002;99:1594-1601).

[0013] Koncept da je proinflamatorno stanje posredovano citokinima odgovorno za etiologiju MDS je vodilo do novog pristupa terapijom anticitokinima da bi se poboljšala citopenija u MDS zaštitom različitih hematopoetskih ćelija iz preuranjenje apoptoze. Bila je demonstracija da anti-TNF-a sredstva kao talidomid i njegov analog lenalidomid, infliksimab, i etanercept su bili efikasni u poboljšanju citopenija kod MDS pacijenata (NCCN 2012 (supra), Larson 2006 (supra), Schiffer 2007(supra)). U ispitivanju 14 MDS pacijenata, etanercept je pokazao eritroidno hematolološko poboljšavnja kod 25% pacijenata sa poboljšanjem u broju krvnih pločica i ANC kod 12.5% procenjivanih pacijenata. Dodatno kombinovanjem sa naizmenično etanercepta sa ATG dovodi do višeg eritroidnog hematološkog poboljšanja i 5 od 14 MDS pacijenata kod kojih je bila potrebna transfuzija postali su nezavisni od transfuzije crvenih krvnih zrnaca i trombocita što je trajalo preko 2 godine. Prilikom ispitivanja talidomida u MDS, 83 pacijenta koji su uključeni u ispitivanje, 51 je završilo 12 nedelja terapije i 16 pacijenata je pokazačo hematološko poboljšanje sa 10 pacijenata ranije zavisnih od transfuzije koji su postali nezavisni od transfuzije i najviše odnih koji su reagovali su u kategoriji ili sa niskim rizikom IPSS ili srednjim rizikom 1 (NCCN 2012 (supra)). Pored toga, pacijenti u kategoriji visokog rizika, naročito sa visokim procentom blasta, teže da prekinu tretman ranije. Još jedan prilaz smanjenju efekata proinflamatornih citokina je da inhibiraju njihove ćelijske odgovore. Značajan broj receptora citokina i faktora rasta koristi JAK famiiju receptora koji nisu TYKs za prenošenje vezivanja ekstracelularnog liganda u ćelijski odgovor preko siglnalizacije STAT transkripcionog faktora.

[0014] Postoji 4 člana JAKs: JAK1, JAK2, JAK3, i TYK2. JAKs su konstitutivno u vezi sa receptorima citokinima i faktora rasta i postaju aktivirani kao trenutne posledice dimerizacije receptora izazvane ligandom, JAK aktivacija se javlja posle sledećeg jukstapozicioniranja JAKs i trans/autofosforilacije konzervisanog tirozina nađenih u aktivacionoj petlji JAK katalitičkog domena. Posle fosforilacije ovih tirozina, JAKs ulazi u stanje visoke aktivnosti i zatim je sposoban da fosforilira specifične tirozniske ostatke na receptorima citokina, koji služe kao mesta za vezivanje višestrukih proteina, uključujući STAT proteine. JAKs su glavna familija kinaza u vezi sa STAT aktivacijom. Aktivirani STATs translociraju do nukleusa, gde funkcionišu kao transkripcioni faktori i vode ekspresiju višestrukih gena važnu za ćelijsku aktivaciju, lokalizaciju, preživljavanje i proliferaciju.

[0015] Ruksolitinib, JAK1 i JAK2 inhibitor su pokazali značajno smanjenje u veličini slezine pacijenata sa mijelofibrozom i poboljšanja simptoma. Ova poboljšanja su očigledna kod subjekata sa ili bez prisustva V617F mutacije u JAK2 i verovatno su povezani sa inhibicijom proinflamatornih citokina. Primarna neželjena dejstava (AEs) primećena sa reuksolitinibom su trombocitopenija i anemija; oba su bila ne često uzrok prekida ispirivanja u dvostruko slepim, placebo kontrolisanim ispitivanjima faze 3, i obe su usled bar delom JAK2posredovane mijelosupresije. Prema tome, hipoteza je sa selektivna inhibicija JAK1 će pokazati koristan efekat inhibiranja proinflamatornih citokina kod pacijenata sa MDS i dovesti do ublažavanja citopenije koja je rezultat preuranjenje apoptoze hematopoetskih prekursora. Pored toga, čuvanje JAK2 aktivnosti će omogućiti fiziološku aktivnost hematopoetskih citokina, naime EPO i TPO da bi se dozvolila fiziološka proliferacija i diferencijacija normalnih hematopoetskih ćelija.

[0016] Dalje, preopterećenje gvožđem javlja se kod MDS pacijenata, sa skorašnjim podacima koji sugerišu uticaj na celokupno preživljavanje i preživljavanje bez leukemije. Pretpostavka je da izmenjena proizvodnja hepcidina, skoro otkrivenog ključnog hormona koji reguliše homeostazu gvožđa, može igrati ulogu u ovom pogledu i biti regulisana sa imflamatornim citokinima kao IL6.

Skoro je pokazano da u MDS i hepcidin i CRP, kao markeri opšte inflamacije su povećani. Santini, et al., PLoS One, 6(8), e23109, pages 1-8 (2011). Ovi podaci sugerišu da JAK inhibicija, koja može biti smanjiti CRP i nivoe hepcidina, može preokrenuti inflamaciju i preopterećenje gvožđem koje se javlja kod MDS.

[0017] Prema tome, prikazana prijava obezbeđuje, inter alia, postupak tretiranja mijelodisplatičnog sindroma kod pacijenta kome je to potrebno, koji obuhvata davanje pomenutom pacijentu terapeutski efikasne količine selektivnog inhibitora JAK1, ili njene farmaceutski prihvatljive soli. Kako je ovde korišćeno, mijelodisplastični sindrom se odnosi na klasifikaciju MDS predloženu od strane Svetske zdravstvene organizacije u 2008 (videti npr., Tabela 1). Naročito, u 1997, Svetska zdravstvena organizacija (WHO) zajedno sa Društom hematopatologije (SH) i Evropske asocijacije hemaotpatologije (EAHP) predlažu nove klasifikacije za hematopoetske neoplazme (Harris, et al., J Clin Oncol 1999;17:3835-3849; Vardiman, et al., Blood 2002;100:2292-2302). Za MDS, WHO koristi ne samo morfološke kriterijume za Francusku-Američko-Britansku (FAB) klasifikaciju, ali takođe obuhvata dostupne genetske, biološke i kliničke karateristike da se definiše podset od MDS (Bennett, et al., Br J Haematol 1982;51:189-199). U 2008, WHO klasifikacija MDS (Tabela 1) je dalje rafinisano da bi se omogućila precizna i prognostički relevantna podklasifikacija unilinearne displazije inkorporisanjem nove kliničke i naučne informacije (Vardiman, et al., Blood 2009;114:937-951; Swerdlow, et al., WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. 4th Edition. Lyon France: IARC Press; 2008:88-103; Bunning and Germing, "Myelodysplastic syndromes/neoplasms" in Chapter 5, Swerdlow, et al, eds. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. (ed.4th edition): Lyon, France: IARC Press;2008:88-103).

Tabela 1: 2008 WHO Klasifikacija za De Novo mijelodisplastični sindrom

[0018] U nekim izvođenjima, JAK1 selektivni inhibotor je selektivan za JAK1 u odnosu na JAK2, JAK3, i TYK2. Na primer, ovde opisana jedinjenja, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, preferencijalno inhibiraju JAK1 u odnosu na jedan ili više JAK2, JAK3, i TYK2. U nekim izvođenjima, jedinjenja inhibiraju JAK1 preferencijalno u odnosu na JAK2 (npr., imaju JAK1/JAK2 ICso odnos >1). U nekim izvođenjima, jedinjenja ili soli su oko 10-struko više selektivni za JAK1 u odnosu na JAK2. U nekim izvođenjima, jedinjenja ili soli su oko 3-struko, oko 5-struko, oko 10struko, oko 15-struko ili oko 20-struko više selektivni za JAK1 u odnosu na JAK2 što je izračunato merenjem IC50pri 1 mM ATP (npr., videti primer A). Prema prikazanom pronalasku, JAK1 selektivni inhibitor je jedinjenje iz tabele 2, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so.

Tabela 2

[0019] U nekim izvođenjima, selektivni inhibitor JAK1 je so {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril adipinske kiseline.

[0020] U nekim izvođenjima, selektivni inhibitor JAK1 je izabran između (R)-3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, (R)-3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, (R)-4-[(4-{3-cijano-2-[4-(7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila, (R)-4-[(4-{3-cijano-2-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila, ili (R)-4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorophenoksi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitrila; ili bilo koje farmaceutski prihvatljive soli gore pomenutih.

[0021] U nekim izvođenjima, selektivni inhibitori JAK1 je izabran između (S)-3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, (S)-3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila, (S)-4-[(4-{3-cijano-2-[4-(7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila, (S)-4-[(4-{3-cijano-2-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitrila, ili (S)-4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorophenoksi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitrila; ili bilo koje farmaceutski prihvatljive soli gore pomenutih. U aspektima za koje nije tražena zaštita ovog opisa, selektivni inhibitor JAK1 je GLPG0634 (Galapagos).

[0022] U nekim izvođenjima, jedinjenja iz Tabele 2 su dobijena sintetskim postupcima opisanim u US objavi patenta br. 2010/0298334, podnete 21 maja, 2010, US objavi patenta br. 2011/0059951, podnete 31, avgusta 2010, US objavi patenta br. 2011/0224190, podnetoj 9 marta, 2011, US objavi patenta br. 2012/0149681, podnetoj 18 novembra, 2011, US objavi patenta br. 2012/0149682, podnetoj 18. novembra, 2011, US patentnoj objavi 2013/0018034, podnetoj 19. juna, 2012, US objavi patenta br. 2013/0045963, podnetoj 17 avgusta 2012, i US objavi patenta br. 2014/0005166, podnetoj 17 maja, 2013. U nekim aspektima, JAK1 inhibitor je izabran između jedinjenja US objave patenta br. 2010/0298334, podnetoj 21. maja, 2010, US objavi patenta br. 2011/0059951, podnetoj 31 avgusta, 2010, US objavi patenta br.2011/0224190, podnetoj 9 marta, 2011, US objavi patenta br.

2012/0149681, podnetoj 18 novembra, 2011, US objavi patenta br. 2012/0149682, podnetoj 18. novembra, 2011, US patentnoj objavi.2013/0018034, podnetoj 19. juna, 2012, US objavi patenta br.

2013/0045963, podnetoj 17avgusta , 2012, i US objavi patenta br.2014/0005166, podnetoj 17. maja, 2013. U nekim izvođenjima, mijelodisplastični sindrom je refraktorna citopenija sa unilinearnom dispalzijom (RCUD).

[0023] U nekim izvođenjima, mijelodisplastični sindrom je refraktorna anemija sa pstenastim sideroblastima (RARS).

[0024] U nekim izvođenjima, mijelodisplastični sindrom je refraktorna citopenija sa multilinearnom displazijom.

[0025] U nekim izvođenjima, mijelodisplastični sindrom je refraktorna anemija sa viškom blasta-1 (RAEB-1).

[0026] U nekim izvođenjima, mijelodisplastični sindrom je refraktorna anemija sa viškom blasta-2 (RAEB-2).

[0027] U nekim izvođenjima, mijelodisplastični sindrom je neklasifikovani mijelodisplastični sindrom (MDS-U).

[0028] U nekim izvođenjima, mijelodisplastični sindrom je mijelodisplastični sindrom u vezi sa izolovanom del(5q).

[0029] U nekim izvođenjima, mijelodisplastični sindrom je refraktoran na eritropoetski stimulišuća sredstva (ESAs). U nekim izvođenjima, refraktorna na ESAs označava da nema poboljšanja u Hgb bar 1.5 g/dL posle 8 nedelja bar 40,000 IU/nedeljno eritropoietina (EPO) (ili ekvivalenta).

[0030] U nekim izvođenjima, pacijent je zavisan od transfuzije crvenih krvnih zrnaca (RBC- red blood cell). U nekim izvođenjima, zavisnost od transfuzije crvenih krvnih zrnaca označava pacijenta kome je potrebno bar 4 jedinice spakovanih RBCs za Hgb od < 9 g/dL u toku 8 nedelja pre lečenja.

[0031] U nekim izvođenjima, pacijent ima povišeni nivo hepcidina u serumu u poređenju sa kontrolnom grupom zdravih pojedinaca . U nekim izvođenjima, pacijent ima povećanu koncentraciju C-reaktivnog proteina (CRP) u serumu u poređenju sa kontrolnom grupom zdravih pojedinaca. U nekim izvođenjima, povećana koncentracija CRP u serumu je ona koja je jednaka ili veća od oko 10 μg/mL. U nekim izvođenjima, zdravi pojedinci su definisani u Santini, et al., PLoS One, 6(8), e23109, pages 1-8 (2011). U nekim izvođenjima, pacijent ima modifikovani rezultat Glazgov prognoze od 1 ili 2. Modifikovani rezultat Glazgov prognoze (GPS) je opisan u McMillian, Cancer Treatment Reviews, 39 (5):534-540 (2013) (i naročito, rezultati su prikazani u tabeli 1).

[0032] U nekim izvođenjima, prikazani pronalazak obezbeđuje ovde opisana jedinjenja, ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, kako je opisano ovde u bilo kom od izvođenja, za upotrebu u postupcima lečenja bilo kog od bolesti ili poremećaja ovde opisanih. U nekim izvođenjima, prikazani pronalazak obezbeđuje upotrebu ovde opisanog jedinjenja ili njihovih farmaceutski prihvatljivih soli , kao što je ovde opisano u bilo kom od izvođenja, za pripremanje leka za upotrebu u postupku lečenja bilo koje ovde opisane bolesti ili stanja.

[0033] Selektivni inhibitori JAK1 takođe uključuju farmaceutski prihvatljive soli ovde opisanih jedinjenja. Kako je ovde korišćeno, "farmaceutski prihvatljive soli" odnose se na derivate opisanih jedinjenja u kojima osnovno jedinjenje je modifikovano pretvaranjem postojećeg kiselinskog ili baznog dela u njegov oblik soli. Primeri farmaceutski prihvatljivih soli uključuju, ali bez ograničenja, mineralne ili organske soli baznih ostataka kao što su amini; alkalne ili organske soli kiselih ostataka kao što su karboksilne kiseline; i slično. Farmaceutski prihvatljive soli uključuju netoksične soli osnovnog jedinjenja obrazovanog, na primer, iz netoksičnih neorganskih ili organskih kiselina. Farmaceutski prihvatljive soli mogu biti sintetisane iz osnovnog jedinjenja koje sadrži bazni ili kiselinski deo sa konvencionalnim hemijskim postupcima. Generalno, takve soli mogu biti pripreljene reagovanjem slobodnog oblika kiseline ili baze ovih jedinjenja sa stehiometrijskom količinom odgovarajuće baze ili kiseline u vodi ili u organskom rastvaraču, ili smeši dva; generalno, nevodenom mediju kao što je etar, etil acetat, alkoholi (npr., metanol, etanol, izopropanol, ili butanol) ili acetonitril (ACN) su poželjni. Lista pogodnih soli je neđena u Remington’s Pharmaceutical Sciences, 17th ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., 1985, p. 1418 and Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977). U nekim izvođenjima, ovde opisana uključuju N-oksidne oblike.

[0034] Ovde opisana jedinjenja mogu biti asimetrična (npr., imaju jedan ili više sterocentara). Svi steroiomeri, kao što su enantiomeri i diasteroizomeri su obuhvaćeni ukoliko nije drugačije navedeno. Ovde opisana jedinjenja koja sadrže asimetrične supstituisane ugljenikove atome mogu biti izolovani u optički aktivnim ili racemskim oblicima. Postupci kako se dobijaju optički aktivni oblici inaktivnog polaznog materijala su poznati u ovoj oblasti, kao što je razdvajanje racemskih smeša ili stereoselektivna sinteza. Mnogo geometrisjskih izomera oledina, C=N dvostrukih veza, i slično mogu biti prikazani u ovde opisanim jedinjenjima i svi takvi stabilni izomeri su uzeti u obzir u prikazanom pronalasku. Cis i trans geometrijski izomeri jedinjenja prema prikazanom pronalasku su opisani i mogui biti izolovani kao smeše izomera ili kao izdvojeni izomerni oblici.

[0035] Razdvajanje racemskih oblika jedinjenja može biti izvedeno bilo kojim od brojnih postupaka poznatih u stanju tehnike. Primer postupka obuhvata frakcionu rekristalizaciju u kojoj se korsti hiralno razdvajanje kiseline koja je optički aktivna, obrazovanje soli organske kiseline. Pogodna sredstva za razdvanja za postupke frakcione kristalizacije su, na primer, optički aktivne kiseline kao što su D i L oblici tartarne kiseline, diacetiltartarne kiseline, dibenzoiltartarne kiseline, bademove kiseline, jabučne kiseline, mlečne kiseline ili različitih optički aktivnih kamforsulfonskih kiselina kao što je β-kamphorsulfonska kiselina. Druga sredstva za razdvajanje pogodna za postupke frakcione kristalizacije uključuju stereoizomerno čiste oblike α-metilbenzilamina (npr., S i R oblike, ili diasteroizomerno čiste oblike), 2-fenilglicinol, norefedrin, ephfedrin, N-metilefedrin, cikloheksiletilamin, 1,2-diaminocikloheksan, i slično.

[0036] Razdvajanje racemskih smeša može takođe biti izvedeno eluiranjem na koloni spakovanoj sa optički aktivnim sredstvom za razdvajanje npr., dinitrobenzoilfenilglicin). Pogodno kompozicija sredstva za eluiranje može biti određena od strane osobe iz struke.

[0037] Ovde opisana jedinjenjae takođe obuhvataju tautomerne oblike. Tautomerni oblici su posledica zamene jednostruke veze sa susednom dvostrukom vezom zajedno sa pratećom migracijom protona. Tautomerni oblici obuhvataju prototropne tautomere koji su izomerna protonovana stanja koja imaju istu empirijsku formuli i ukupno naelektrisanje. Primer prototropnih tautomera uključiju keton –enolne parove, amid –imidne kiselinske parove, laktam –laktimske parove, enamin –iminske parove, i prstenaste oblike, gde proton može zauzimati dva ili više položaja heterocikličnog sistema, na primer, 1H-i 3Himidazol, 1H-, 2H-i 4H-1,2,4-triazol, 1H-i 2H-izoindol, i 1H-i 2H-pirazol. Tautomerni oblici mogu biti u ravnoteži ili sterno zaključani u jednom obliku sa odgovarajućom supstitucijom.

[0038] Jedinjenja prema pronalasku mogu takođe uključivati sve izotope atome koji se javljaju u intermediejrima ili krajnjim jedinjenjima. Izotopi uključuju one atome koji imaju isti atomski broj, ali različite masene brojeve. Na primer, izotopi vodonika uključuju deuterijum.

[0039] Izraz, "jedinjenje," koji je ovde korišćen se smatra da uljučuje sve stereoizomere, geometrijske izomere, tautomere i izotope prikazanih struktura. Dalje, ovde identifikovana jedinjenja prema imenu ili strukturi kao određeni tautomerni oblik smatra se da obuhvataju druge tautomerne oblike osim ako nije drugačije navedeno.

[0040] Sva jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, mogu se naći zajedno sa drugim supstancama kao što su voda i rastvarači (npr., hidrati ili solvati) ili mogu biti izolovani.

[0041] U nekim izvođenjima, ovde opisana jedinjenja, ili njihove soli, su suštinaski izolovane. Pod "suštinski izolovane" se misli da je jedinjenje bar delom ili suštinski odvojeno iz okoline u kojoj je nastalo ili je detektovano. Parcijalno odvajanje može uključivati, na primer, kompoziciju koja je obogaćena jedinjenjima prema pronalasku. Suštinsko odvajanje može uključivati kompozicije koje sadrže bar oko 50%, bar oko 60%, bar oko 70%, bar oko 80%, bar oko 90%, bar oko 95%, bar oko 97%, ili bar oko 99% u odnosu na masu jedinjenje prema pronalasku, ili njene soli. Postupci za izolovanje jedinjenjenja i njihovih soli su rutisnki u stanju tehnike.

[0042] Ovde korišćen izraz "pojedinac" ili "pacijent," je korišćen zamenjivo, odnosi se na bilo koju životinju, uključujući sisare, poželjno miševe, pacove, druge glodare, zečeve, pse, mačke, svinje, goveda, ovce, konje ili primate i najpoželjnije ljude.

[0043] Ovde korišćena fraza "terapeutski efikasna količina" odnosi se na količinu aktivnog jedinjenja ili njegovog farmaceutski prihvatljivog sredstva koje izaziva biološki ili medicinski odgovor koji se vidi u tkivu, sistemu, životinji, pojedincu ili čoveku od strane isptraživala, veterinara, lekara ili drugog kliničara. U nekim izvođenjima, terapeutksi efikasna količina je 1 mg do oko 100 mg, oko 1 mg do oko 20 mg, oko 4 mg do oko 10 mg, oko 5 mg do oko 1000 mg, ili oko 10 mg do oko 500 mg. U nekim izvođenjima, terapeutski efikasna količina je 4 mg, 6 mg, ili 10 mg QD.

[0044] Fraza "farmaceutski prihvatljiv" se ovde koristi kada se odnosi na jedinjenja, materijale, kompozicije i/ili dozne oblike koju su, u okviru obima dobre medicinske prakse, pogodni za upotrebu u kontraktu sa tkivima ljudi i životinja bez prekomerne toksičnosti, iritacije, alergijskog odgovora ili drugih problema i komplikacija, proporcionalan sa racionalnim odnosom korist/rizik.

[0045] Ovde korišćeni izraz "lečenje" ili "tretman" odnosi se na jedan ili više navedenih (1) sprečavanje bolesti; na primer, sprečavanje bolesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji može biti predisponiran za bolest, stanje ili poremećaj, ali još uvek nema simptome ili ne pokazuje patologiju ili simptomatologiju bolesti; (2) zaustavljanje bolesti; na primer, zaustavljanje bolesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji ima ili pokazuje patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (tj., zaustavljanje daljeg razvijanja patologije i/ili simptomatologije); i (3) ublažavanje bolesti; na primer, ublažavanje blesti, stanja ili poremećaja kod pojedinca koji ima ili pokazuje patologiju ili simptomatologiju bolesti, stanja ili poremećaja (tj., preokretanje patologije i/ili simptomatologije) kao što je smanjivanje ozbiljnosti bolesti.

Kombinovane terapije

[0046] Ovde opisani postupci mogu dalje obuhvatati davanje jednog ili više dodatnih terapeutskih sredstava. Jedno ili više dodatnih terapeutskih sredstava može biti davano pacijentu simultano ili sekvencionalno.

[0047] U nekim izvođenjima, postupak dalje obuhvata davanje dodatnog terapeutskog sredstva izabranog između IMiDs, anti-IL-6 sredstvom, anti-TNF-α sredstvom, hipometilacionim sredstvom i modifikatorom biološkog odgovora (BRM).

[0048] Generalno, BRM je supstanca napravljena iz živih organizama za lečenje bolesti, koja se može naći u prirodi za lečenje bolesti, koja se može prirodno naći u telu ili može biti napravljena u laboratoriji. Primeri BRMs uključuju IL-2, interferon, različite tipove faktora koji stimulišu kolonije (CSF, GM-CSF, G-CSF), monoklonalnih antitela kao što su abciksimab, etanercept, infliksimab, rituksimab, trasturzumab, i visoke doze askorbata.

[0049] U nekim izvođenjima, anti-TNF-a sredstvo je infliksimab, i etanercept.

[0050] U nekim izvođenjima, hipometilaciono sredstvo je inhibitor DNK metiltransferaze. U nekim izvođenjima, inhibitor DNK metiltransferaze je izran između 5 azacitidina i decitabina.

[0051] Generalno, IMiDs su imunomodulatorna sredstva. U nekim izvođenjima, IMiD je izrab između talidomida, lenalidomida, pomalidomida, CC-11006, i CC-10015.

[0052] U nekim izvođenjima, postupak dalje obuhvata davanje dodatnog terapeutskog sredstva izabranog između globulina anti-timocita, stimulišućeg faktora rekombinantih humanih kolonija granulacita (G CSF), granulocitni-monocitni CSF (GM-CSF), eritropoetki stimulišuće sredstvo- (ESA), i ciklosporin.

[0053] U nekim izvođenjima, postupak dalje obuhvata davanje dodatnog inhibitora JAK pacijentu. U nekim izvođenjima, dodatni inhibitor JAK je tofacitinib ili ruksolitinib.

[0054] Jedno ili više dodatnih terapeutskih sredstava može uključivati hemoterapeutike, antiinflamatorna sredstva, stereoide, imunosupresive, kao i Bcr-Abl, Flt-3, RAF i FAK kinazne inhibitore kao što su, na primer, oni opisani u WO 2006/056399, ili druga sredstva mogu biti korišćena u kombinaciji sa ovde opisanim jedinjenjima.

[0055] Primeri hemoterapeutika uključuju inhibitore proteozoma (npr., bortezomib), talidomid, revlimid, i sredstva koja oštećuju DNK kao što su melfalan, doksorubicin, ciklofosfamid, vinkristin, etoposid, karmustin, i slično.

[0056] Primeri stereoida uključuju kortikosteroide kao što su deksametazon ili prednison.

[0057] Primer Bcr-Abl inhibitora uključuju jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli, vrsta i rodova opisanih u U.S. Pat. br. 5,521,184, WO 04/005281, i U.S. Ser. No. 60/578,491. Primer pogodnih Flt3 inhibitora uključuje jedinjenja i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kako je opisano u WO 03/037347, WO 03/099771, i WO 04/046120. Primeri pogodnih RAF inhibitora uključuju jedinjanje i njihove farmaceutski prihvatljive soli kako je opisano u WO 00/09495 i WO 05/028444. Primeri pogodnih FAK inhibitora uključuju jedinjenja, i njihove farmaceutski prihvatljive soli, kako je opisano u WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, i WO 01/014402. U nekim izvođenjima, jedno ili više jedinjenja prema pronalasku mogu biti korišćeni u kombinaciji sa jednim ili više drugih kinaznih inhibitora uključujući imatinib, naročito za lečenje pacijenata koji su otporni na imatinib ili druge kinazne inhibitore.

[0058] U nekim izvođenjima, pogodna terapeutska sredstva mogu biti izabrana iz antimetaboličkih sredstava, inhibitora topoizomeraze 1, analoga platine, taksana, antraciklina, i EGFR inhibitora, i njihove kombinacije.

[0059] U nekim izvođenjima, antimetabolitska sredsta obuhvataju kapecitabin, gemcitabin, i fluorouracil (5-FU).

[0060] U nekim izvođenjima, taksani uključuju paclitaksel, Abraxane® (čestice paclitaksela vezane za protein za injektibilnu suspenziju), i Taxotere® (docetaksel).

[0061] U nekim izvođenjima, platinski analozi uključuju oksaliplatin, cisplatin, i karboplatin.

[0062] U nekim izvođenjima, inhibitori topoizomeraze obuhvataju irinotekan i topotekan.

[0063] U nekim izvođenjima, antraciklini obuhvataju doksorubicin ili lipozomalne formulacije doksorubicina.

[0064] U nekim izvođenjima, hemoterapeutik FOLFIRINOX (5-FU, lekovorin, irinotekan i oksaliplatin). U nekim izvođenjima, hemoterapeutsko sredstvo je gemcitabin i Abraxane® (čestice paclitaksela vezane za protein za injektibilne rastvore).

[0065] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je melfalan, melfalan plus prednison [MP], doksorubicin, deksametazon, i Velcade (bortezomib). Druga dodatna sredstva korišćena u lečenju višestrukog mijeloma obuhvataju Bcr-Abl, Flt-3, RAF i FAK kinazne inhibitore. Sredstva mogu biti kombinovana sa prikazanim jedinjenjima u pojedinačnim ili kontinualnom doznom obliku, ili sredstva mogu biti davana simultano ili sekvencionalno kao odvojeni dozni oblici.

[0066] U nekim izvođenjima, kortikosteroidi kao što je deksametazon se daju pacijentu u kombinaciji sa bar jednim JAK1 selektivnim inhibitorom, gde je deksametazon davan povremeno naspurot kontinuiranom.

[0067] U nekim drugim izvođenjima, kombinacije jednog ili više JAK1 selektivnih inhibitora sa drugim terapeutskm sredstvima mogu biti davane pacijentima pre, u toku i/ili posle transplantacije koštane srži ili transplantacije stem ćelija.

[0068] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je fluocinolon acetonid (Retisert®), ili rimeksolon (AL-2178, Vexol, Alcon).

[0069] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je ciklosporin (Restasis®).

[0070] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je kortikosteroid. U nekim izvođenjima, kortikosteroid je triamcinolon, deksametazon, fluocinolon, kortizon, prednisolon, ili flumetolon.

[0071] U nekim izvođenjima, dodano terapeutsko sredstvo je izabrano između Dehydrex™ (Holles Labs), Civamide (Opko), natrijum hijaluronata (Vismed, Lantibio/TRB Chemedia), ciklosporin (ST-603, Sirion Therapeutics), ARG101(T) (testosteron, Argentis), AGR1012(P) (Argentis), natrijum ekabet (Senju-Ista), gefarnat (Santen), 15-(s)-hidroksieikosatetraenska ksielina (15(S)-HETE), cevilemin, doksiciklin (ALTY-0501, Alacrity), minociklin, iDestrin™ (NP50301, Nascent Pharmaceuticals), ciklosporin A (Nova22007, Novagali), oksitetratraciklin (Duramycin, MOLI1901, Lantibio), CF101 (2S,3S,4R,5R)-3,4-dihidroksi-5-[6-[(3-jodofenil)metilamino]purin-9-il]-N-metil-oksolan-2-karbamil, Can-Fite Biopharma), voclosporin (LX212 ili LX214, Lux Biosciences), ARG103 (Agentis), RX-10045 (sintetički analog resolvina Resolvyx), DYN15 (Dyanmis Therapeutics), rivoglitazon (DE011, Daiichi Sanko), TB4 (RegeneRx), OPH-01 (Ophtalmis Monaco), PCS101 (Pericor Science), REV1-31 (Evolutec), Lacritin (Senju), rebamipid (Otsuka-Novartis), OT-551 (Othera), PAI-2 (University of Pennsylvania and Temple University), pilokarpin, takrolimus, pimekrolimus (AMS981, Novartis), loteprednol etabonat, rituksimab, dikvafosol tetranatrijum (INS365, Inspire), KLS-0611 (Kissei Pharmaceuticals), dehidroepiandrosteron, anakinra, efalizumab, natrijum mikofenolat, etanercept (Embrel®), hidroksihlorohin, NGX267 (TorreyPines Therapeutics), actemra, gemcitabin, oksaliplatin, L-asparaginaza, ili talidomid.

[0072] U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je anti-angiogensko sredstvo, holinergični agonist, modulator TRP1 receptora, blokator kalcijumovog kanala, mucin sekretagog, MUC1 stimulant, kalcineurinski inhibitor, kortikosteroid, agonist P2Y2 receptor, agonist muskarinskog receptora, mTOR inhibitor, drugi JAK inhibitor, Bcr-Abl kinazni inhibitor, Flt-3 kinazni inhibitor, RAF kinazni inhibitor, i FAK kinazni inhibitor kao što je, na primer, oni opisani u WO 2006/056399. U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo je tetraciklinski derivat (npr., minociklin ili doksiclin). U nekim izvođenjima, dodatno terapeutsko sredstvo se vezuje za FKBP12.

[0073] U nekim izvođenjima, dodatno teraputsko sredstvo je alkilaciono sredstvo ili sredstvo za umrežavanje DNK; anti-metabolit/demetilaciono sredstvo (npr., 5-flurouracil, capecitabin ili azacitidin); anti-hormonska terapija (npr., antagonisti hormonskih receptora, SERMs, ili aromotatni inhibitor); mitotički inhibitor (npr. vinkristin ili paclitaksel); inhibitor topoizomeraze (I ili II) (npr. mitoksantron i irinotekan); induktori apoptoze (npr. ABT-737); terapija nukleinskim kiselinama (npr. antisense ili RNAi); ligandi nuklearni receptora (npr., agonisti i/ili antagonisti: sve transretinske kiseline ili beksaroten); epigeneska ciljajuća sredstva kao što su inhibitori histon deacetilaze (npr. vorinostat), hipometilaciona sredstva (npr. decitabin); regulatori stabilnosti proteina kao što su inhibitori Hsp90 , konjigacioni ili dekonjugacioni molekuli slični ubikvitinu i/ili ubikvitinu; ili EGFR inhibitor (erlotinib).

Farmaceutske formulacije i dozni oblici

[0074] Kada su korišćeni kao farmaceutici, selektivni inhibitori JAK1 mogu biti davani u obliku farmaceutskih kompozicija. Ove kompozicije mogu biti pripremljene na način dobro poznat u oblasti farmaceutika i mogu biti davani različitim putevima, u zavisnosti da li poželjno lokalno ili sistemsko lečenje i od oblasti koja se leči. Davanje može biti lokalno (uključujući transdermalno, epidermalno, oftalmološko i na mukozne membrane uključujući intranazalno, vaginalno i rektalno davanje), pulmonarno (npr., inhalacijom ili insufacijom praha ili aerosola, uključujući nebulizer; intratratekalno ili intranazalno), oralno ili parenteralno. Parenteralno davanje obuhvata intravensko, intraarterijsko, subkutanozno, intraperitonealno, intramuskularno ili injekcijom ili infuzijom; ili intrakranijalno, npr., intratekalno ili intraventirikularno, davanje. Parenteralno davanje može biti u obliku pojedinačne bolusne doze, ili može biti, naprimer, kontinualnom perfuzionom pumpom. Farmaceutske kompozicije za lokalno davanje mogu sadržati transdermalne flastere, masti, losione, kreme, gelove, kapi, supozitorije, sprejeve, tečnosti i prahove. Konvencionalni farmaceutski nosači, vodeni, prahovi ili uljane baza, zgušnjivači i slično mogu biti neophodni ili poželjeni.

[0075] Ovaj pronalazak takođe obuhvata farmaceutske kompozicije koje sadrže, kao aktivni sastojak, JAK1 selektivni inhibitor koji je ovde opisan, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, u kombinaciji sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosača (ekscipijenata). U nekim izvođenjima, kompozicija je pogodna za lokalno davanje. U pripremanju kompozicija, aktivni sastojak je tipično pomešan sa ekscipijentom, razblaženim sa ekscipijentom ili uključen u takav nosač u obliku, na primer kapsulu, kesicu, papir ili drugi sud. Kada ekscipijent služi kao razblaživač, može biti čvrst, polu-čvrst ili tečni materijal, koji deluje kao sredstvo, nosač ili medijum za aktivni sastojak. Prema tome, kompozicije mogu biti u obliku tableta, pilula, praha, lozengi, kesica, obeležene tablete, eliksira, suspenzija, emulzija, rastvora, sirupa, aerosola (kao čvrstih ili tečnih medijuma), masti koje sadrže na primer, do 10% mase aktivnog jedinjenja, meke i tvrde želatisnke kapsule, supozitorije, sterilne injektibilne rastvore i sterilne spakovane prahove.

[0076] U pripremanju formulacije, aktivno jedinjenje može biti samleveno da bi se obezbedile odgovarajuće veličine čestica pre kombinovanja sa drugim sastojcima. Ukoliko je aktivno jedinjenje u suštini nerastvorno, može biti samleveno do veličine čestica manje od 200 meša. Ukoliko aktivno jedinjenje je u suštini n u vodi, veličina čestica može biti prilagođena mlevenjem da bi se obezbedila suštiniski jednoobrazana raspodela u formulaciji, npr. oko 40 meša.

[0077] JAK1 selektivni inhibitori mogu biti samleveni pomoću poznatih postupaka za mlevenje kao što su vlažno mlevenje da bi se dobila veličina čestica odgovarajuća za obrazovanje tablete i za druge tipove formulisanja. Lepo izdeljeni (nanočestični) preparati JAK1 selektivnih inhibitora mogu biti pripremljeni u postupcima poznatim i ovoj oblasti, npr., videti međunarodna prijava br. WO 2002/000196.

[0078] Neki priemri pogodnih ekscipijenta uključuju lakotzu, dekstrozu, saharozu, sorbitol, manitol, skrobove, guma akacija, kalcijum fosfat, alginate, tragakant, želatin, kalcijum silikat, mikrokristalna celuloza, polivinilpirolidon, celuloza, voda, sirup i metil celuloza. Formulacije mogu biti dodatno uključivati: lubrikante kao što su talk, magnezijum stearat i mineralna ulja; sredstva za kvašenje; sredstva za emulgovanje i suspendovanje; sredstva za održavanje kao što su metil- i propilhidroksibenzoati; zaslađivači; i skoregense ukusa. Kompozicije mogu biti formulisane tako da obezbeđuju brzo, održanim ili odloženim oslobađanje aktivnog sredstva posle davanja pacijentu korišćenjem poznatih postupaka u ovoj oblasti.

[0079] U nekim izvođenjima, farmaceutska kompozicija sadrži mikrokristalnu celulozu (SMCC) i bar jedno ovde opisano jedinjenja, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so. U nekim izvođenjima, silifikovana mikrokristalna celuloza sadrži oko 98% mikrokristalne celuloze i oko 2% silicijum dioksida mas./mas.

[0080] U nekim izvođenjima, kompozicija je sa održanim oslobađanjem sadrži bar jedan JAK1 selektivni ihnibitor ovde opisani ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i bar jedan farmaceutski prihvatljiv nosač. U nekim izvođenjima, kompozicija sadrži bar jedan JAK1 selektivni inibitor koji je ovde opisan, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i bar jedna komponenta je izabrana između mirkokristalne celuloze, laktoza monohidrata, hidroksipropil metilceluloze, i polietilen oksida. U nekim izvođenjima, kompozicija sadrži bar jedan selektivni inhibitor JAK1 koji je ovde opisan, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so, i mikrokristalnu celulozu, laktoza monohidrat i hidroksipropil metilcelulozu. U nekim izvođenjima, kompozicija sadrži bar jedan ovde opisan selektivni inhibitor JAK1, ili njegovu farmaceutski prihvatljivu so i mikroistalnu celulozu, monohidrat laktoze i polietilen oksid. U nekim izvođenjima, kompozicija dalje sadrži magnezijum stearat ili silicijum dioksid. U nekim izvođenjima, mikrokristalna celuloza je Avicel PH102™. U nekim izvođenjima, monohidrat laktoze je Fast-flo 316™. U nekim izvođenjima, hidroksipropil metilceluloza je hidroksipropil metilceluloza 2208 K4M (npr., Methocel K4 M Premier™) i/ili hidroksipropil metilceluloza 2208 K100LV (npr., Methocel K00LV™). U nekim izvođenjima, polietilen oksid je polietilen oksid WSR 1105 (npr., Polyox WSR 1105™).

[0081] U nekim izvođenjima, postupak vlažne granulacije je korišćen da bi se dobije kompozicija. U nekim izvođenjima, postupak suve granulacije je korišćen da se dobije kompozicija.

[0082] Komozicije mogu formulisati u jediničnim doznim oblicima, svaki dozni oblik sadrži od oko 5 do oko 1,000 mg (1 g), uobičajenije oko 100 mg do oko 500 mg, aktivnog sastojka. U nekim izvođenjima, svaki dozni oblik sadrži oko 10 mg aktivnog sredstva. U nekim izvođenjima, svaki dozni oblik sadrži oko 50 mg aktivnog sredstva. U nekim izvođenjima, svaki dozni oblik sadrži oko 25 mg aktivnog sredstva. Izraz "jedinični dozni oblici" odnosi se na fizički diskretne jedinice pogodne za jedinične oblike za humane subjekte i druge sisare, od kojih svaki sadrži prethodno određenu količinu aktivnog materijala izračunatog da proizvodi željeni terapeutski efekat u vezi sa pogodnih farmaceutskih ekscipijentom.

[0083] U nekim izvođenjima, kompozicije sadrže od oko 2 mg do oko 10 mg, ili oko 5 mg do oko 50 mg aktivnog sredstva. Osoba sa prosečnim znanjem iz ove oblasti će znati da predmetna jedinjenja ili kompozicije sadrže oko 2 mg do oko 10 mg, 5 mg do oko 10 mg, oko 10 mg do oko 15 mg, oko 15 mg do oko 20 mg, oko 20 mg do oko 25 mg, do oko 25 mg do oko 30 mg, oko 30 mg do oko 35 mg, oko 35 mg do oko 40 mg, oko 40 mg do oko 45 mg, ili oko 45 mg do oko 50 mg aktivni sastojak.

[0084] U nekim izvođenjima, kompozicije sadrže od oko 50 mg do oko 500 mg aktivnog sastojka. Osoba sa prosečnim znanjem iz ove oblasti će znati da prikazana jedinjenja ili kompozicije sadrže oko 50 mg do oko 100 mg, oko 100 mg do oko 150 mg, oko 150 mg do oko 200 mg, oko 200 mg do oko 250 mg, oko 250 mg do oko 300 mg, oko 350 mg do oko 400 mg, ili oko 450 mg do oko 500 mg aktivnog sastojka.

[0085] U nekim izvođenjima, kompozicije sadrže od oko 500 mg do oko 1,000 mg aktivnog sredstva. Osoba sa prosečnim znanjem iz ove oblasti će znati da predmetna jedinjenje ili kompozicije koje sadrže oko 500 mg do oko 550 mg, oko 550 mg do oko 600 mg, oko 600 mg do oko 650 mg, oko 650 mg do oko 700 mg, oko 700 mg do oko 750 mg, oko 750 mg do oko 800 mg, oko 800 mg do oko 850 mg, oko 850 mg do oko 900 mg, oko 900 mg do oko 950 mg, ili oko 950 mg do oko 1,000 mg aktivnog sastojka.

[0086] Aktivno jedinjenje može biti efikasno u odnosu na široki dozni opseg i generalno je davano u farmaceutski prihvatljivoj količini. Razume se, međutim, da količina u stvari datog jedinjenja će uglavnom biti određena od strane lekara, prema relevantim okolnostima, uključujući uslove koji se leče, izabranog puta davanja, stvarnog davanog jedinjenja, godina, mase i odgovora pojedinačnog pacijenta, ozbiljnosti simptoma pacijenata, i slično.

[0087] Za dobijanje čvrstih kompozicija kao što su tablete, glavni aktivni sastojak je pomešan sa farmaceutskih ekscipijentom da bi se dobila čvrsta kompozicija preformulacije koja sadrži homogenu smešu ovde opisanog jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli. Kada se poziva na ove kompozicije preformulacija kao homogene, aktivni sastojak je tipično dispergovan jednoobrazno kroz kompoziciju tako da kompozicija može biti lako podeljena u jedinične dozne oblike kao što su tablete, pilule i kapsule. Ova čvrsta preformulacija je zatim podeljena u jedinične dozne oblike ovde opisanog tipa koji sadrži od, na primer, oko 0.1 do oko 1000 mg aktivnog sastojka prema prikazanom pronalasku.

[0088] Tablete ili pilule mogu biti obložene ili na drugi način formulisane da bi se obezbedili dozni oblici koji daju prednosti u odnosu na produženo dejstvo. Na primer, tablete ili pilule mogu sadržati unutrašnju doznu i spoljašnju doznu komponentu, poslednja je u obliku omotača u odnosu na prethodnu. Dve komponene mogu biti odvojene sa entero slojem koji služi da se odupre raspadanju u stomaku i dozvoljava unutrašnjoj komponenti da prođe netaknuta u duodenum ili da bude odloženo oslobađanje . Različiti materijali mogu biti korišćeni za takve entero slojeve ili obloge, kao što su materijali koji sadrže brojne polimerene kiseline ili smeše polimernih kiselina sa takvim materijalima kao što je šelak, cetil alkohol, i celulozni acetat.

[0089] Tečni oblici u kojima jedinjenja i kompozicije mogu biti uključeni za davanje oralno ili injekcijom uključuju vodene rastvore, pogodno aromatizovane sirupe, vodene ili uljane suspenzije, i aromatizovane emulzije sa jestivim uljma kao što su ulje semena pamuka, susamovo ulje, kokosovo ulje, ili kikirikijevo ulje, kao i eliksiri i slična farmaceutska sredstva.

[0090] Kompozicije za inhalaciju ili insulfaciju uključuju rastvore i suspenzije u farmaceutski prihvatljivim, vodenim ili organskim rastvaračima, ili njihovim smešama i prahovima. Tečne ili čvrste kompozicije mogu sadržati pogodne farmaceutski prihvatljive ekscipijente kao što je opisano supra. U nekim izvođenjima, kompozicije su davane oralnim ili nazalim respiratornim putem za lokalni ili sistemski efekat. Kompozicije mogu biti nebulizirane upotrebom inertnih gasova. Nebulizirani gasovi mogu biti udisani direktno iz uređaja za nebuliziranje ili uređaj za nebuliziranje može biti vezan sa maskom za lice ili mašinom za disanje sa povremenim pozitivnim pritiskom. Kompozicije rastvora, suspenzija ili prahova mogu biti davana oralno ili nazalno iz uređaja koji daje formulaciju na odgovarajući način.

[0091] Lokalne formulacije mogu sadržati jedan ili više konvencionalnih nosača. U nekim izvođenjima, masti mogu sadržati vodu i jedan ili više hidrofobnih nosača izabranih između tečnog parafina, polioksietilen alkil etra, propilen glikola, belog vazelina, i slično. Kompozicije nosača krema mogu biti zasnovane na vodi u kombinaciji da glicerolom i jednim ili više drugih komponenti, npr. glicerinemonostearata, PEG-glicerinemonostearata i cetilstearil alkohola. Gelovi mogu biti formulisani pomoću izopropil alkohola i vode, pogodno u kombinaciji sa drugim komponentama kao što je, na primer, glicerol, hidroksietil celuloza, i slično. U nekim izvođenjima, lokalne formulacije sarže bar oko 0.1, bar oko 0.25, bar oko 0.5, bar oko 1, bar oko 2, ili bar oko 5 mas. % ovde opisanog jedinjenja, ili njegovih farmaceutski prihvatljivih soli. Lokalne formulacije mogu biti pogodno spakovena u tube, na primer od 100 g koje su opciono zajedno sa uputstvom za lečenje odabranih indikacija, npr., psorijaza ili druga kožna stanja.

[0092] Količina jedinjenje ili kompozicije koja se dalje pacijentu će varirati u zavisnosti od toga šta se daje, svrhe davanja, kao što je profilaksa ili terapeija, stanja pacijenta, načina davanja i slično. Pri terapeutskim primenama, kompozicije mogu biti davane pacijentu koji već pati od bolesti u količini dovoljnoj da izleči ili bar delom zaustavi simptome bolesti i njihove komplikacije. Efikasne doze će zavisiti od stanja bolesti kao i od odluke nadležnog kliničara zaviseći od faktora kao što su ozbiljnost bolesti, godine, masa i generalno stanje pacijenta i slično.

[0093] Davane kompozicije pacijentu mogu biti u obliku gore opisanih farmaceutskih kompozicija. Ove kompozicije mogu biti sterilizovane sa konvencionalnim sterilizacionim tehnikama, ili mogu biti sterilno proceđene. Vodeni rastvori mogu biti spakovani za upotrebu kao takvi, ili liofilizovani, liofilizovani preparati su kombinovani sa sterilnom vodenim nosačima pre davanja. pH preparata sa jedinjenjima tipično će biti između 3 i 11, poželjnije od 5 do 9 i najpoželjnije od 7 do 8. Razume se da upotreba izvesnim gore navedenih ekscipijenata, nosača ili stabilizatora će dovesti do obrazovanja farmaceutskih soli.

[0094] Terapeutska doza ovde opisanog selektivnog inhibitora JAK1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, može varirati prema, na primer, naročitoj upotebi za koji je napravljen tretman, načina davanja jedinjenja, zdravlja i stanja pacijenta i odluke doktora koji je prepisao tretman. Odnos ili koncentracija ovde opisanog jedinjenja, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli, u farmaceutskoj kompoziciji može varirati u zavisnosti od brojnih faktora koji uključuju dozu, hemijske karakteristike (npr., hidrofobičnost), i način davanja. Na primer, selektivni inhibitor JAK1 može biti obezbeđen u vodenom fiziološkom puferisanom rastvoru koji sadrži oko 0.1 do oko 10% mas/v jedinjenja za parenteralno davanje. Neki dozni opsezi su od oko 1 μg/kg do oko 1 g/kg telesne mase po danu. U nekim izvođenjima, dozni opsezi su od oko 0.01 mg/kg do oko 100 mg/kg telsene mase po danu. Doza verevatno zavisi od takvih varijabli kao što je tip i koraken napredovanja bolesti ili poremećaja, celokupnog zdravstvenog statusa određenog pacijenta, relativne biološke efikasnosti odabranog jedinjenja, formulacije ekscipijenta, i njegovog načina davanja. Efikasne doze mogu biti ekstrapolisane iz kirva doza-odgovor koje potičo od in vitro ili sistema testiranja na životinjsom modelu.

[0095] Kompozicije prema pronalasku mogu dalje uključivati jedno ili više dodatnih farmaceutskih sredstava kao što su hemoterapeutici, steroidi, antiinflamatorna jedinjenja ili imunosupresivi, čiji primeri su gore dati.

Kitovi

[0096] Prikazani pronalazak takođe obuhvata farmaceutske kitove korisne, na primer, u lečenju ili prevenciji mijelodipslastičnog sindroma, koji uključuje jedan ili više sudova koji sadrže farmaceutsku kompoziciju koja sadrži farmacetuski efikasnu količinu ovde opisanog jedinjenja, ili njene farmaceutski prihvatljive soli. Takvi kitovi mogu dalje obuhvatati, ukoliko je potrebno, jedan ili više različitih konvencionalnih kitova farmaceutskih komponenti, kao što su na primer, kontejneri sa jednim ili više farmaceutski prihvatljivih nosala, dodatni kontejneri itd., koji će biti očigledni stručnjacima iz ove oblasti. Uputstva, ili kao umetci ili nalepnice, koja ukazuju na količine jedinjenja koja se daju, uputstva za davanje i/ili uputstva za mešanje komponenti, mogu biti takođe uključena u kit.

PRIMERI

[0097] Pronalazak će biti opisan većim delom kroz specifične primere. Sledeći primere su dati samo kao ilustracija. Stručnjak iz ove oblasti će lako prepoznati različite nekritične parametre koji mogu biti menjani ili modifikovani da bi se u suštini dobli isti rezultati. Jedinjenja iz primera je ustanovljeno da su inhibitori JAK prema bar jednom ovde opisanom testu.

Primer 1. 3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril (izolovana dva različita enantioemra)

[0098]

Korak 1. benzil 3-{2-cijano-1-[4-(1-{[2-(trimetilsilyil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]etil}pirolidin-1-karboksilat

[0099] Benzil 3-[2-cijanovinil]pirolidin-1-karboksilat (4.3 g, 0.017 mol, smeša E i Z izomera pripemljana kao što je opisano u WO 2007/070514 pr.742) je rastvorna u acetonitrilu (270 mL). 1,8-Diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (5.02 mL, 0.0336 mol) je dodat, a zatim 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin (5.6 g, 0.017 mol, pripremljen kako je opisano u WO 2007/070514, pr.65). Smeša je mešana na ST u toku noći. Rastvarač je uklonjen na rotacionom uparivač, i ostatak je ponovo rastvoren u etil acetatu. Rastvor je ispran sukcesivno sa IN HCl, vodom, zasićenim natrijum bikarbonatom, i rastvorom soli, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan u vakuumu. Proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni od silikagela, eluiranjem sa gradijentom od 0-100% etil acetata u heksanima da bi se dobio dijastereomer 1 (koji eluira prvi) (3.5g, 36%) i diastereomer 2 (koji eluira drugi) (2.5g, 25%). LCMS (M+H)<+>: 572.2.

Korak 2. 3-pirolidin-3-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril

[0100] Benzil 3-{2-cijano-1-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]etil}pirolidin-1-karboksilat (3.5 g, 6.1 mmol) (diastereomer 1 iz primera 1, korak 1) je rastvoren u 100 mL metanola, i dodata je katalitička količina 10% Pd-C. Smeša je mućkana pod 50 psi vodonika u toku 24 h. Smeša je zatim proceđena i rastvarač je uklonjen in vacuo. Proizvod je korišćen bez daljeg prečišćavanja. LCMS (M+H)<+>: 438.2.

Korak 3. 3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4il)-1H-pirazol-1-il]propannitril

[0101] Smeša 3-pirolidin-3-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitrila (150 mg, 0.27 mmol) i 2,6-dihloropiridina (48.7 mg, 0.329 mmol) u NMP (1.6 mL) i N,N-diizopropiletilamina (96 microL, 0.55 mmol) je zagrejana na 135°C u toku 20 min u mikrotalasnoj. Prečišćavanjem fleš hromatografijom na koloni od silikagla, eluiranjem sa gradijentom od 0-80% etil acetata u heksanima, dobijen je naslovni proizvod (28 mg, 18%).<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.85 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.41 (d, 1H), 7.37 (dd, 1H), 6.79 (d, 1H), 6.57 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.45 (dt, 1H), 3.91 (dd, 1H), 3.57-3.46 (m, 3H), 3.39-3.29 (m, 2H), 3.24 (dd, 1H), 3.13-3.01 (m, 1H), 3.01 (dd, 1H), 1.98-1.88 (m, 1H), 1.82-1.69 (m, 1H), 0.95-0.88 (m, 2H), -0.06 (s, 9H); LCMS (M+H)<+>: 549.1.

[0102] Ovaj racemski proizvod je odvojen na njegove enantiomere hiralnim HPLC (Chiral Technologies Chiralcel OJ-H, 5 μ, 30 x 250mm, 45% EtOH/Heksani, 20 μL/min) da bi se dobio enantioemr 1 (koji prvi eluria, retenciono vreme 40.7 min) i enantiomer 2 (koji drugi eluira, retenciono vreme 51.6 min), sa kojih je odvojeno skinuta zaštita u koracima 4a/4b.

Korak 4a. 3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril (enantiomer 1)

[0103] 3-[1-(6-Hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril (enantiomer 1 iz koraka 3) je mešan u rastvoru koji sadrži 1:1 TFA/DCM (2 mL) u toku 2 h, i zatim koncentrovan. Ostatak je rastvoren u 1 mL MeOH, i dodato je 0.2 mL EDA. Prečišćavanjem pomoću preparativne -HPLC/MS (C18 kolona eluiranje sa gradijentom ACN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH) dobijen je proizvod.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.44 (br s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.37 (s, 2H), 7.39 (dd, 1H), 7.38 (dd, 1H), 6.79 (dd, 1H), 6.58 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 4.46 (dt, 1H), 3.92 (dd, 1H), 3.55-3.48 (m, 1H), 3.39-3.31 (m, 2H), 3.25 (dd, 1H), 3.13-3.02 (m, 1H), 3.02 (dd, 1H), 2.00-1.88 (m, 1H), 1.84-1.71 (m, 1H); LCMS (M+H)<+>: 419.1.

Korak 4b. 3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril (enantiomer 2)

[0104] Pripremljeno kao u koraku 4a, pomoću enantiomera 2 iz Koraka 3:<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 9.59 (br s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.37 (s, 2H), 7.40 (dd, 1H), 7.38 (dd, 1H), 6.79 (dd, 1H), 6.58 (d, 1H), 6.22 (d, 1H), 4.46 (dt, 1H), 3.92 (dd, 1H), 3.55-3.48 (m, 1H), 3.39-3.31 (m, 2H), 3.25 (dd, 1H), 3.14-3.02 (m, 1H), 3.02 (dd, 1H), 1.99-1.90 (m, 1H), 1.83-1.72 (m, 1H); LCMS (M+H)<+>: 419.1.

Primer 2. 3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol1-il]propannitril (izolovan jedan enantiomer)

[0105]

Korak 1. 3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril

[0106] Oksazolo[5,4-b]piridine-2(1H)-tion (1.17 g, 7.68 mmol, pripremljen kao u primeru 33 US 2010/0298334, korak 4) i 3-pirolidin-3-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril (2.80 g, 6.40 mmol iz primera 15, korak 3) u 1,4-dioksanu (30 mL) je zagrejan na 70 °C u toku 2 h. Rastavarč je uklonjen u vakuumu. Sirov proizvod je rekonstruisan u etanolu (40 mL) i tretiran sa srebro nitratom (3 g, 15 mmol) i vodenim amonijum hidroksidom (6 mL) u porcijama u toku 20 h. U reakciju je dodata voda, IN NaOH i rastvor soli. Nerastvorni materijal je uklonjen ceđenjem. Slojevi su proceđeni i odvojeni. Vodeni sloj je ekstrahovan sa tri porcije etil acetata. Ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, dekantovani i koncentrovani. Sirvi proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu, eluiranjem sa 10% MeOH/DCM da bi se dobio proizvod kao beličasta pena (2.84 g, 80%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.83 (s, 1H), 8.37 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 7.92 (dd, 1H), 7.57 (dd, 1H), 7.40 (d, 1H), 7.13 (dd, 1H), 6.78 (d, 1H), 5.67 (s, 2H), 4.52 (dt, 1H), 4.05 (dd, 1H), 3.82 (ddd, 1H), 3.67-3.44 (m, 4H), 3.25 (dd, 1H), 3.24-3.09 (m, 1H), 2.98 (dd, 1H), 2.06-1.74 (m, 2H), 0.97-0.88 (m, 2H), -0.06 (s, 9H); LCMS (M+H)<+>: 556.1.

Korak 2. 3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril

[0107] 3-(1-[1,3]Oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril (5.35 g, 9.63 mmol, pripremljen postupkom iz koraka 1) je mešan u smeši 2:1 DCM i TFA (60 mL) u toku 6 h. Rastvarači su uklonjeni u rotacionom uparivaču . Sirovi ostatak je rastvoren u metanolu (50 mL) koji sadrži EDA (5.15 mL, 77.0 mmol) i mešan je u toku noći. Posle uklanjanja rastvarača, proizvod je prečišćen fleš hromatografijom na silikagelu, eluiranjem sa gradijentom od 0-15% MeOH/DCM (3.59 g, 88%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.72 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 8.34 (s, 1H), 7.89 (dd, 1H), 7.54 (dd, 1H), 7.36 (d, 1H), 7.12 (dd, 1H), 6.75 (d, 1H), 4.56 (dt, 1H), 4.01 (dd, 1H), 3.80 (ddd, 1H), 3.60 (ddd, 1H), 3.48 (dd, 1H), 3.26 (dd, 1H), 3.21-3.06 (m, 1H), 3.02 (dd, 1H), 2.03-1.76 (m, 2H); LCMS (M+H)<+>: 426.1.

Primer 3. 4-[(4-{3-cijano-2-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitril trifluoroacetatna so (izolovan je pojedinačni enantiomer )

[0108]

Korak 1. (R)- i (S)-terc-butil 4-{3-cijano-2-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]propil}piperazin-1-karboksilat

[0109] 1,8-Diazabiciklo[5.4.0]undec-7-en (5.5 mL, 0.037 mol) je dodat u rastvor (E)- i (Z)-terc-butil 4-(3cijanoalil)piperazin-1-karboksilata (11.1 g, 0.0441 mol, pripremljenog kao u primeru 1 US 2011/0059951, Koraci 1-2) i 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidina (11.6 g, 0.0368 mol, pripremljenog kako je opisano u WO2007/070514, primer 65) u acetonitrilu (70 mL). Smeša je mešana na 50 °C u toku 15 sati. Rastvarači su uklonjeni in vacuo. Ostatak je rastvoren u etil acetatu, ispran sa vodom (3 puta), rastvorom soli (jednom), osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Fleš hromatografijom na koloni, praćenom sa preparativnom HPLC-MS (eluiranje sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH) dobijen je proizvod kao bela pena (8.20 g, 39%).

[0110] Hiralni HPLC je korišćen za odvajanje racemske smeše u pojedinačene enantiomere (Phenomenex Lux-Cellulose2, 21.2 x 250 mm, 5 μm, eluiranjem sa 30%EtOH/70%Heksani, pri 20mL/min). Signal 1 (prvi eluira): 4.0 g i signal 2 (drugi eluira): 4.0 g.<1>H NMR Signal 1 (400 MHz, CDCl3): δ 8.84 (s, 1H), 8.33 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.70-4.62 (m, 1H), 3.58-3.51 (m, 2H), 3.44-3.35 (br m, 4H), 3.16 (dd, 1H), 3.10 (dd, 1H), 2.99 (dd, 1H), 2.89 (dd, 1H), 2.50-2.40 (br m, 4H), 1.44 (s, 9H), 0.95-0.89 (m, 2H), -0.06 (s, 9H); LCMS (M+H)<+>: 567.3.<1>H NMR Signal 2 (400 MHz, CDCl3): δ 8.84 (s, 1H), 8.32 (s, 1H), 8.31 (s, 1H), 7.40 (d, 1H), 6.79 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.70-4.62 (m, 1H), 3.58-3.51 (m, 2H), 3.45-3.34 (br m, 4H), 3.16 (dd, 1H), 3.10 (dd, 1H), 2.99 (dd, 1H), 2.90 (dd, 1H), 2.50-2.40 (br m, 4H), 1.44 (s, 9H), 0.95-0.89 (m, 2H), -0.06 (s, 9H); LCMS (M+H)<+>: 567.3.

Korak 2. 4-piperazin-1-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitril hidrohloridna sot

[0111] terc-Butil 4-{3-cijano-2-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]propil}piperazin-1-karboksilat (4.0 g, 7.0 mmol; signal 2 iz koraka 1) je rastvoren u 1,4-dioksanu (40 mL), i dodata je 4.0 M HCl u dioksanu (25 mL, 100 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 80 min. Rastvarač je uklonjen in vacuo da bi se dobio proizvod kao hidrohloridna so. LCMS (M+H)<+>: 467.3.

Korak 3. 4-[(4-{3-cijano-2-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitril trifluoroacetatna so

[0112] Smeša 4-cijano-2-fluorobenzoeve kiseline (138 mg, 0.836 mmol, Alfa Aesar), N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronium heksafluorofosfata (254 mg, 0.669 mmol) i trietilamina (0.466 mL, 3.34 mmol) u THF (10.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u toku 15 minuta. Dodat je 4-piperazin-1-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7Hpirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitril hidrohlorid (0.33 g, 0.56 mmol; iz koraka 2). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u toku jednog sata. Reakcija je razblažena sa etil acetatom i vodom. Slojevi su odvojeni i organski sloj je ispran uzastopno sa vodom, 0.1N NaOH i rastvorom soli, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak je rastvoren u smeši 2:1 DCM:TFA, mešanoj u toku 3 sata, koncentrovan, zatim smeša 8 mL metanola u koju je dodat 0.8 mL etilendiamin. Posle mešanja u toku jednog sata, proizvod je prečišćen sa HPLC-MS, eluiranjem sa gradijentom MeCN i H2O koji sadrži 0.2% TFA. Eluent je zamrznut i liofilizovan da bi se dobio beli prah (200 mg, 47%).<1>H NMR (400 MHz, d6-dmso): δ 12.64 (br s, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.51 (s, 1H), 7.99 (dd, 1H), 7.82-7.76 (m, 2H), 7.61 (t, 1H), 7.15-7.11 (m, 1H), 5.13 (br m, 1H), 3.82-2.37 (br, 12H);<19>F NMR (400 MHz, d6-dmso): δ -74.97 (s, 7.2 F), -114.49 (br s, 1F); LCMS (M+H)<+>: 484.2.

Primer 4. 4-[(4-{3-cijano-2-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]3-fluorobenzonitril trifluoroacetatna so (izolovan pojedinačni izomer)

[0113]

Korak 1. terc-butil 4-{3-cijano-2-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1il]propil}piperazin-1-karboksilat

[0114] U smešu (E)-i (Z)-terc-butil 4-(3-cijanoalil)piperazin-1-karboksilata (4.0 g, 0.016 mol; pripremljenog kao u primeru 1 US 2011/0059951, Koraci 1-2) i 4-(1H-pirol-3-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3d]pirimidin (4.2 g, 0.013 mol, pripremljen kao u WO2009/114512, primer 82) u N,N-dimetilformamidu (25 mL) dodat je kalijum karbonat (5.540 g, 0.0401 mol). Smeša je mešana na 60 °C u toku 17 sati. Dodatni (E)-i (Z)-terc-butil 4-(3-cijanoalil)piperazin-1-karboksilat (4.0 g, 0.016 mol) je dodat i reakcija je mešana na 60 °C u toku 24 sata. Dodata je još jedana porcija (E)-i (Z)-terc-butil 4-(3-cijanoalil)piperazin-1-karboksilata (4.0 g, 0.016 mol). Posle 3 noći grejanja, većina polaznog materijala je pretvorena u željeni proizvod kako je određeno sa LCMS. Smeša je zatim proceđena, razblažena sa EtOAc, isprana sa vodom (3 puta), rastvorom soli (jednom), osušena iznad natrijum sulfata, dekantovana i koncentrovana.

Prečišćavanjem pomoću preparativne HPLC-MS (eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH) dobijena je braon pena (4.20 g, 55%).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ 8.81 (s, 1H), 7.66 (t, 1H), 7.34 (d, 1H), 6.97 (dd, 1H), 6.89 (t, 1H), 6.84 (d, 1H), 5.66 (s, 2H), 4.47-4.36 (m, 1H), 3.57-3.50 (m, 2H), 3.45-3.37 (m, 4H), 3.06 (dd, 1H), 3.00-2.90 (m, 2H), 2.83 (dd, 1H), 2.57-2.35 (m, 4H), 1.45 (s, 9H), 0.96-0.86 (m, 2H), -0.06 (s, 9H); LCMS (M+H)<+>: 566.3.

[0115] Hiralni HPLC je korišćen da se odvojeni racemat u pojedinačne enantiomere (Chiral Technologies ChiralPAK IA 20x250mm, 5 μm, mobilna faza 30%EtOH/70%heksani, brzina protoka 12mL/min). Signal 1 (prvi eluirani enantiomer), 1.8 g; signal 2 (drugi eluirani enantiomer): 1.9 g.

Korak 2. 4-piperazin-1-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]butannitril hidrohloridna so

[0116] U rastvor terc-butil 4-{3-cijano-2-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-karboksilata (1.9 g, 0.0034 mol; signal 2 iz koraka 1) u 1,4-dioksanu (20 mL) dodat je 4.0 M HCl u p-dioksanu (12 mL, 48 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku u toku 80 minuta. Rastvarač je uklonjen in vacuo, da bi se dobio proizvod kao svetlo žuta čvrsta supstanca (1.90 g, 100%). LCMS (M+H)<+>: 466.3.

Korak 3. 4-[(4-{3-cijano-2-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitril trifluoroacetatna so

[0117] Smeša 4-cijano-2-fluorobenzoeve kiseline (44 mg, 0.26 mmol, Alfa Aesar), N,N,N’,N’-Tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1-il)uronium heksafluorofosfata (93 mg, 0.24 mmol) i trietilamina (171 uL, 1.22 mmol) u THF (2.4 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u toku 15 minuta. Dodat je 4-Piperazin-1-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]butannitril hidrohloridna so (110 mg, 0.20 mmol; iz koraka 2). Reakcija je mešana u toku 2 sata. Dodati su etil acetat i voda. Slojevi su odvojeni i organski soj je ispran uzastopno sa vodom, IN NaOH i rastvorom soli, osušen iznad natrijum sulfata i koncentrovan. Ostatak prvo rastvoren u smeši 1:1 DCM:TFA u toku 1 sata, je koncentrovan, zatim mešan u metanolu (2 mL) koji sarži etilendiamin (0.2 mL) u toku jednog sata. Prečišćavanje pomoću preparativne HPLC-MS (eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.1% TFA dajući proizvod kao 3.3xTFA so (84 mg, 48%).<1>H NMR (300 MHz, d6-dmso): δ 13.22 (br s, 1H), 8.90 (s, 1H), 8.38 (s, 1H), 8.00 (dd, 1H), 7.97-7.93 (m, 1H), 7.80 (dd, 1H), 7.61 (t, 1H), 7.35 (s, 2H), 7.18-7.13 (m, 1H), 5.00-4.80 (m, 1H), 3.75-3.49 (br m, 2H), 3.35-2.33 (m, 10H);<19>F NMR (300 MHz, d6-dmso): δ -74.82 (s, 10F), -114.53 (s, IF); LCMS (M+H)<+>: 483.2.

Primer 5. {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0118]

Korak A: terc-Butil 3-Oksoazetidin-1-karboksilat

[0119] U smešu terc-butil 3-hidroksiazetidin-1-karboksilat (10.0 g, 57.7 mmol), dimetil sulfoksid (24.0 mL, 338 mmol), trietilamin (40 mL, 300 mmol) i metilen hlorid (2.0 mL) je dodat kompleks sumpor trioksid-piridina (40 g, 200 mmol) u procijama na 0 °C. Smeša je mešana u toku 3 sata, zaustavljena sa rastvorom soli, i ekstrahovana sa metilen hloridom. Spojeni ekstrakti su osušeni iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđeni, i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen na koloni od silikagela (0-6% etil acetat (EtOAc) u heksanima) da bi se dobio terc-butil 3oksoazetidin-1-karboksilat (5.1 g, 52% prinos).

Korak B: terc-Butil 3-(Cijanometilen)azetidin-1-karboksilat

[0120] U sušnici osušen 4-grli balon sa okruglim dnom od 1 L snabdeven sa mešalicom, otvorom, ulazom za azot, kapalicom od 250 ml i termoparom je napunjen sa natrijum hidridom (5.6 g, 0.14 mol) i tetrahidrofuranom (THF) (140 mL) u atmosferi azota. Smeša je ohlađena na 3 °C, i zatim napunjena sa dietil cijanometilfosfonatom (22.4 mL, 0.138 mol) u kapima pomoću šprica u toku 20 minuta. Rastvor je postao svetlo žuta suspenzija. Reakcija je zatim mešana u toku 75 minuta dok je zagrevana u toku 18.2 °C. Rastvor terc-butil 3-oksoazetidin-1-karboksilata (20 g, 0.1 mol) u tetrahidrofuranu (280 mL) je pripremljen u balonu sa okruglim dnom osušenim u sušnici, napunjen u kapalicu pomoću cevčice, zatim dodat u reakcionu smešu u kapima u toku 25 minuta. Reakcioni rastvor je posao crven. Omogućeno je da se reakcija meša u toku noći. Reakcija je proverena posle 24 sata sa TLC (70% heksan/EtOAc) i ustanovljeno je da je završena. Reakcija je razblažena sa 200 mL 20% rastvora soli i 250 mL EtOAc. Rastvor je razdeljen i vodena faza je ekstrahovana sa 250 mL EtOAc. Spojene organske faze su osušene iznad MgSO4i proceđene, uparene pod sniženim pritiskom, i prečišćene fleš hromatografijom (0% do 20% EtOAc/heksani, 150 g fleš kolona) da bi se dobio željeni proizvod, terc-butil 3-(cijanometilen)azetidin-1-karboksilat (15 g, 66.1% prinos).

Korak C: 4-Hloro-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin

[0121] U suspenziju natrijum hidrida (36.141 g, 903.62 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (118 mL) na -5 °C (kupatilo led/so) dodat je tamni rastvor 4-hloropirolo[2,3-d]pirimidina (119.37 g, 777.30 mmol) u N,N-dimetilacetamidu (237 mL) polako. Balon i kapalica su isprani sa N,N-dimetilacetamidom (30 mL). Velika količina gasa je trenutno razvijena. Smeša je poslatla blago zamućena narandžasta smeša. Smeša je mešana na 0 °C u toku 60 min da bi se dobila svetlo braon mutna smeša. U smešu je polako dodat [2-(trimetilsilil)etoksi]metil hlorid (152.40 g, 914.11 mmol) i reakcija je mešana na 0 °C u toku 1 h. Reakcija je zaustavljena dodavanjem polako 12 mL H2O. Dodato je još vode (120 mL) praćeno sa metil terc-butil etrom (MTBE) (120 mL). Smeša je mešana u toku 10 min. Organski sloje je odvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan sa još jednom porcijom MTBE (120 mL). Organski ekstrakti su sakupljeni, isprani sa rastvorom soli (120 mL x 2) i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod 4-hloro-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidina tamnog ulja. Prinos: 85.07 g (97%); LC-MS: 284.1 (M+H)<+>. U sledećoj reakciji je korišćen bez prečišćavanja.

Korak D: 4-(1H-Pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin

[0122] Balon sa okruglim dnom od 1000 mL napunjen je sa 4-hloro-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3d]pirimidinom (10.00 g, 35.23 mmol), 1-butanolom (25.0 mL), 1-(1-etoksietil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2-dioksaborolan2-il)-1H-pirazolom (15.66 g, 52.85 mmol), vodom (25.0 mL) i kalijum karbonatom (12.17 g, 88.08 mmol). Ovaj rastvor je degasiran 4 puta, punjenjem sa azotom svaki put. U rastvor, dodat je tetrakis(trifenilfosfin)paladijum(0) (4.071 g, 3.523 mmol). Rastvor je 4 puta, napunjen sa azotom svaki put. Smeša je mešana u toku noći na 100 °C. Posle hlađenja na sobnu temperaturu, smeša je proceđena kroz sloj celita i celit je ispran sa etil acetatom (42 mL). Filtrat je sakupljen i organski sloj je odvojen. Vodeni sloj je ekstrahovan sa etil acetatom. Organski ekstrakti su spojeni i koncentrovani pod vakuumom sa temperaturom kupatila od 30-70 °C da bi se dobilo krajnje jedinjenje 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3d]pirimidin. Prinos: 78%. LC-MS: 316.2 (M+H)<+>.

Korak E: terc-Butil 3-(Cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilat

[0123] Balon sa okruglim dnom od 2 L sa mešalicom, otvorom i uvodnikom za azot je napunjen sa terc-butil 3-(cijanometilen)azetidin-1-karboksilatom (9.17 g, 0.0472 mol), 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidinom (14.9 g, 0.0472 mol) i acetonitrilom (300 mL). Dobijeni rastvor je heterogeni. U rastvor je dodat 1,8-diazabiciklo[5.4.0]undek-7-en (8.48 mL, 0.0567 mol) u porcijama pomoću šprica u toku 3 min na sobnoj temperaturi. Rastvor je polako posatao homogen i žut po boji. Reakciona smeša je omogućeno da se meša na sobnoj temperaturi u toku 3 h. Reakciona smeša je analizirana sa HPLC i LC/MS i koncentrovana je rotacionim uparavanjem da bi se uklonio acetonitril (∼150 mL). EtOAc (100 mL) je polako dodat, a zatim 100 ml 20% rastvora soli. Dve faze su razdeljene. Vodena faza je ekstrahovana sa 150 mL EtOAC. Spojene organske faze su osušene iznad MgSO4, proceđene i koncentrovane da bi se dobilo narandžasto ulje. Prečišćavanjem fleš hromatografijom (150 grama silicijumdioksida, 60% EtOAc/heksana, nanetog na CH2Cl2) dobijeno je naslovno jedinjenje terc-butil 3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilat kao žuto ulje (21.1 g, 88% prinos). LC-MS:

[M+H]<+>= 510.3.

Korak F: {3-[4-(7-{[2-(Trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorid

[0124] U rastvor terc-butil 3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-karboksilata (2 g, 3.9 mmol) u 10 mL THF dodato je 10 mL 4 N HCl u dioksanu. Rastvor je mešan na sobnoj temperaturi u toku 1 sat i koncentrovan in vacuo da bi se dobilo 1.9 g (99%) naslovnog jedinjenja kao belog praha čvrste supstance, koja je korišćena u sledećoj reakciji bez prečišćavanja. LC-MS: [M+H]<+>= 410.3.

Korak G: terc-Butil 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-karboksilat

[0125] U rastvor {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorida (2.6 g, 6.3 mmol), terc-butil 4-okso-1-piperidinekarboksilat (1.3 g, 6.3 mmol) u THF (30 mL) dodati su N,N-diizopropiletilamin (4.4 mL, 25 mmol) i natrijum triacetoksiborohidrid (2.2 g, 10 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Posle dodavanja 20 mL rastvora soli, rastvor je ekstrahovan sa EtOAc. Ekstrakt je osušen iznad anhidrovanog Na2SO4i koncentrovan. Ostatak je prečišćen sa kombifleš kolonom eluiranjem sa 30-80 % EtOAc u heksanima da se vidi željeni proizvod, terc-butil 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-karboksilat. Prinos: 3.2 g (86%); LC-MS: [M+H]<+>= 593.3.

Korak H: {1-Piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorid

[0126] U rastvor tert-butil 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidin-1-karboksilata (3.2 g, 5.4 mmol) u 10 mL THF dodato je 10 mL 4 N HCl dioksana. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. Uklanjanjem rastvarača pod sniženim pritiskom dobijeno je 3.25 g (100%) {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorid kao bele praškaste čvrste supstance, koja je korišćena direktno u sledećoj reakciji. LC-MS: [M+H]<+>= 493.3.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 9.42 (s 1H), 9.21 (s, 1H), 8.89 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 7.97 (s, 1H), 7.39 (d, 1H), 5.68 (s, 2H), 4.96 (d, 2H), 4.56 (m, 2H), 4.02-3.63 (m, 2H), 3.55 (s, 2H), 3.53 (t, 2H), 3.49-3.31 (3, 3H), 2.81 (m, 2H), 2.12 (d, 2H), 1.79 (m, 2H), 0.83 (t, 2H), -0.10 (s, 9H).

Korak I: {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoyl]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0127] Smeša {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (1.22 g, 2.03 mmol), 3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinske kiseline (460 mg, 2.2 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (1.07 g, 2.42 mmol), i trietilamina (2.0 mL, 14 mmol) u dimetilformamidu (DMF) (20.0 mL) je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. LS-MS je pokazao da je reakcija završena. EtOAc (60 mL) i zasićeni vodeni rastvor NaHCO3(60 mL) su dodati u reakcionu smešu. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 10 minuta, organska faza je odvojena i vodeni sloj je ekstrahovan sa EtOAc tri puta. Spojene organske faze su isprane sa rastvorom soli, osušene iznad anhidrovanog Na2SO4, proceđene i uparene pod sniženim pritiskom. Prečišćavanjem fleš hromatografijom dobijen je željeni proizvod {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoyl]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril. LC-MS: 684.3 (M+H)<+>.

Korak J: {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0128] U rastvor {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (56 mg, 0.1 mmol) u metilen hloridu (1.5 mL) dodata je trifluorosirćetna kiselina (1.5 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 2 sata. Posle uklanjanja rastvarača u vakuumu, ostatak je rastvoren u rastvoru metanola koji sadrži 20% etilendiamina. Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku 1 sat, rastvor je prečišćen sa HPLC (postupak B) da bi se dobilo naslovno jedinjenje. LC-MS: 554.3 (M+H)<+>;<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): 9.71 (s, 1H), 8.82 (s, 1H), 8.55 (d, J=4.6 Hz, 1H), 8.39 (s, 1H), 8.30 (s, 1H), 7.52 (t, J=4.6 Hz, 1H), 7.39 (dd, J1=3.4 Hz, J2=1.5 Hz, 1H), 6.77 (dd, J1=3.6 Hz, J2=0.7 Hz, 1H), 4.18 (m, 1H), 3.75 (m, 2H), 3.63 (dd, J1=7.8 Hz, J2=3.7 Hz, 2H), 3.45 (m, 2H), 3.38 (s, 2H), 3.11 (m, 1H), 2.57 (m, 1H), 1.72 (m, 1H), 1.60 (m, 1H), 1.48 (m, 1H), 1.40 (m, 1H).

Primer 6. 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid

[0129]

Korak A: 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid

[0130] U rastvor {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1Hpirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril trihidrohlorida (500 mg, 1 mmol) u tetrahidrofuranu (30 mL) dodati su trietilamine (0.29 g, 2.8 mmol) i 4-fluoro-1-izocijanato-2-(trifluorometil)benzen (190 mg, 0.95 mmol). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 1 sat. Rastvarač je uklonjen pod sniženim pritiskom. Prečišćen sa kombi-fleš pomoću 30-100% EtOAc/heksani dobijeno je 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid kao prah. LC-MS: 698.1 (M+H)<+>.

Korak B: 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid

[0131] 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid (210 mg, 0.3 mmol) je rastvoren u 50 M rastvora trifluorosirćetne kiseline u metilen hloridu (20 mL). Pošto je mešan na sobnoj temperaturi u toku jedan sat, rastvarači su uklonjeni pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u metanolu (20 mL) i etilendiaminu (1.0 g, 17 mmol). Posle mešanja na sobnoj temperaturi u toku jedan sat, smeša je prečišćena sa HPLC (postupak B) da bi se dobilo 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamida kao belog praha. LC-MS: 568.1 (M+H)<+>.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.10 (s, 1H), 8.76 (s, 1H), 8.63 (s, 1H), 8.36 (s, 1H), 8.18 (s, 1H), 7.55 (d, J=3.6 Hz, 1H), 7.50 (m, 1H), 7.43 (m, 1H), 7.34 (m, 1H), 7.01(d, J=3.6 Hz, 1H), 3.79 (m, 2H), 3.67 (d, J=8 Hz, 2H), 3.51 (m, 4H), 2.92(m, 2H), 2.38 (m, 1H), 1.62 (m, 2H), 1.09 (m, 2H).

Primer 7. [3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il]acetonitril

[0132]

[0133] Naslovno jedinjenje je dobijeno postupkom analognim onome korišćenom za dobijenje u primeru 5. LC-MS (M+H)+: 537.2.

Primer 8. [trans-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-3-(4-{[2-(trifluorometil)pirimidin-4il]karbonil}piperazin-1-il)ciklobutil] acetonitril

[0134]

[0135] Smeša 2-(trifluorometil)pirimidine-4-karboksilne kiseline (0.225 g, 1.17 mmol, dobijene hidrolizom metil estera dobijenog iz Apollo kao što je opisano u WO2006/067445), N,N,N’,N’-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1il)uronium heksafluorofosfata (0.29 g, 0.76 mmol, Aldrich), i trietilamina (0.26 mL, 1.9 mmol) u tetrahidrofuranu (6 mL) je prethodno mešana u toku 15 minuta, a zatim je dodat {trans-3-piperazin-1-il-1-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril (0.188 g, 0.380 mmol, pripremljen kao u primeru 1b US 2012/0149681, Korak 1) u tetrahidrofuranu (10 mL). Reakcija je mešana u toku noći. THF je uklonjen in vacuo. Ostatak je razdeljen između zasićenog natrijum bikarbonata i etil acetata. Vodeni deo je ekstrahovan ukupno tri puta. Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, dekontovane i koncentrovane. Fleš hromatografijom, eluiranjem sa gradijentom od 0-10% MeOH u DCM je korišćen da se prečisti SEM-zaštićeni intermedijer. Skidanje zaštite je postignuto prvo mešanjem sa trifluorosirćetnom ksielinom (10 mL) u metilen hloridu (10 mL) u toku 2 sata, a zatim uparavanjem rastvarača in vacuo, zatim mešanjem sa metanolom (6 mL, 200 mmol) koji sadrži etilenediamin (0.5 mL, 7 mmol) u toku noći. Reakciona smeša je razdeljena između vode i etil acetata, i vodeni sloj je ekstrahovan dalje dva puta sa etil acetatom. Spojeni ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, proceđeni i koncentrovani. Fleš hromatografija je korišćena za prečišćavanje proizvoda, eluiranjem sa gradijentom od 0-10% MeOH u DCM. Proizvod je ponovo prečišćen preparativnom HPLC-MS (C18, eluiranjem sa gradijentom H2O/MeCN koji sadrži 0.1% TFA). Acetonitril je uklonjen iz eluenta koji sadrži željenu masu pomoću rotacionog uparivača, a zatim preostali vodeni rastvor je neutralizovan uz dodavanje natrijum bikarbonata i ekstrahovan sa etil acetatom nekoliko puta. Spojeni organski ekstrakti su osušeni iznad natrijum sulfata, proceđeni i koncentrovani. Proizvod je ponovo prečišćen preparativnom HPLC-MS (C18, eluiranjem sa gradijentom H2O/MeCN koji sadrži 0.15% NH4OH). Eluent koji sadrži željenu masu je zamrznut i liofilizovan da bi se dobio proizvod kao slobodna baza (99 mg, 48%).<1>H NMR (300 MHz, CD3OD): δ 9.13 (d, 1H), 8.71 (s, 1H), 8.66 (s, 1H), 8.39 (s, 1H), 7.88 (d, 1H), 7.50 (d, 1H), 6.98 (d, 1H), 3.89-3.81 (m, 2H), 3.59-3.52 (m, 2H), 3.34 (s, 2H), 3.13-3.03 (m, 2H), 2.97 (tt, 1H), 2.59-2.42 (m, 6H);<19>F NMR (282 MHz, CD3OD): δ-72.43 (s, 3F); LCMS (M+H)<+>: 537.0.

Primer 9. {trans-3-(4-{[4-[(3-hidroksiazetidin-1-il)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril

[0136]

[0137] Korišćen je postupak iz primera 153 iz US 2012/0149681, sa N,N-diizopropiletilaminom (64 mL, 0.37 mmol) i azetidin-3-ol hidrohloridom (30 mg, 0.3 mmol, Oakwood) u koraku premeštanja. Posle mešanja u toku noći na sobnoj temperaturi, dodat je metanol (0.20 mL) da bi se dobio homogeni rastvor, koji je mešan dalje 2,5 sata na sobnoj temperaturi i tretiran je u uslovima skidanja zaštite i prečišćavanja koji su dati u primeru 153 iz US 2012/0149681 da bi se dobio proizvod kao slobodna baza (9.7 mg, 44%).<1>H NMR (400 MHz, dmso) δ 12.12 (br s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.59 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.29 (s, 1H), 7.06 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.93 (s, 1H), 5.34 (d, J = 6.4 Hz, 1H), 5.05 -4.77 (m, 1H), 4.19 (h, J = 6.1 Hz, 1H), 3.60 (s, 2H), 3.50 (td, J = 6.1, 2.0 Hz, 2H), 3.40 (s, 2H), 3.06 -2.92 (m, 2H), 2.86 -2.71 (m, 3H), 2.68 -2.53 (m, 2H), 2.38 -2.22 (m, 2H), 2.22-2.07 (br m, 2H), 2.05-1.95 (br m, 2H), 1.75 -1.48 (m, 2H);<19>F NMR (376 MHz, dmso) δ-67.36 (s); LCMS (M+H)<+>: 608.2.

Primer 10. {trans-3-(4-{[4-{[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril

[0138]

[0139] Korišćen je postupak iz primera 158 iz US 2012/0149681, osim što je premeštanje meizilata sa aminom izvedeno pomoću (2S)-pirolidin-2-ilmetanola (20 mL, 0.2 mmol, Aldrich), na sobnoj temperaturi u toku noći (8.3 mg, 59%).<1>H NMR (500 MHz, DMSO) δ 12.09 (br s, 1H), 8.81 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.41 (s, 1H), 7.59 (d, J = 3.5 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.06 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 5.00 (tt, J = 8.4, 3.9 Hz, 1H), 4.48 (s, 1H), 4.12 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.45 (d, J = 15.0 Hz, 1H), 3.41 (s, 2H), 3.42-3.25 (m, 2H), 3.06 -2.97 (m, 2H), 2.87 -2.77 (m, 2H), 2.69 -2.62 (m, 2H), 2.59 (dddd, J = 5.8, 5.8, 5.8, 8.1 Hz, 1H), 2.41 -2.31 (m, 2H), 2.22 -2.09 (m, 3H), 2.08 -1.95 (m, 2H), 1.83 (dddd, J = 8.1, 8.1, 8.3, 12.2 Hz, 1H), 1.75 -1.46 (m, 5H);<19>F NMR (376 MHz, dmso) δ-67.24 (s); LCMS (M+H)<+>: 636.3.

Primer 11. {trans-3-(4-{[4-{[(2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril

[0140]

[0141] Koriščen je postupak iz primera 158 iz US 2012/0149681, osim što je premeštanje mezilata sa aminom izvedeno pomoću (2R)-pirolidin-2-ilmetanola (20 mL, 0.2 mmol, Aldrich) na sobnoj temperaturi u toku noći (8.3 mg, 59%).<1>H NMR (400 MHz, dmso) δ 12.14 (br s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.60 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.39 (s, 1H), 7.08 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.03 (s, 1H), 5.04 4.94 (m, 1H), 4.52 (t, J = 5.4 Hz, 1H), 4.12 (d, J = 14.9 Hz, 1H), 3.52 -3.22 (m, 5H), 3.09 -2.92 (m, 2H), 2.86 -2.73 (m, 2H), 2.70 -2.53 (m, 3H), 2.42 -2.27 (m, 2H), 2.22 -2.09 (m, 3H), 2.06 -1.87 (m, 2H), 1.82 (dddd, J = 8.0, 8.0, 8.4, 11.9 Hz, 1H), 1.77 -1.37 (m, 5H);<19>F NMR (376 MHz, dmso) δ -67.24 (s); LCMS (M+H)<+>: 636.3.

Primer 12. 4-(4-{3-[(Dimetilamino)metil]-5-fluorophenoksi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitril (hiralni)

[0142]

Korak 1.3-Fluoro-5-hidroksibenzaldehid

[0143] U suspenziju 3-fluoro-5-hidroksibenzonitrila (1.00 g, 7.29 mmol) u toluenu (60.0 mL na -78 °C dodat je 1.0 M diizsobutilaluminijum hidrid u toluenu (18.2 mL, 18.2 mmol). Dobijena smeša je mešana na -78 °C u toku 1 sata i omogućeno je da se zagreje na sobnoj temperaturi u toku noći. Smeša 1:1 metanola i vode (10 mL) je dodata i mešana u toku 35 minuta. Čvrsta supstanca je proceđena i isprana sa etil acetatom. Filtrat je ispran sa vodom i rastvorom soli iznad Na2SO4, proceđen, i koncentrovan. Sirovi proizvod je prečišćen na koloni od silikagela (eluiran sa 10-50% etil acetat/heksanima) i dobijen je željeni proizvod (0.77 g, 75%).<1>H NMR (DMSO-d6) δ 10.49 (s, 1H), 9.88 (s, 1H), 7.10 (m, 2H), 6.87 (d, 1H).

Korak 2.3-[(Dimetilamino)metil]-5-fluorofenol

[0144] U smešu dimetilamin hidrohlorida (160 mg, 1.96 mmol) i 3-fluoro-5-hidroksibenzaldehida (250.0 mg, 1.784 mmol) u metilen hloridu (9.0 mL) je dodat trietilamin (323 mL, 2.32 mmol) i smola natrijum triacetoksiborohidrida (1.1 g, 2.7 mmol). Dobijena smeša je mešana u toku noći i zatim proceđena i koncentrovana. Sirova supstanca je prečišćena na koloni od silikagela (eluiranjem sa 0-15% metanol/DCM) da bi se dobio željeni proizvod (0.21 g, 70%).<1>H NMR (DMSO-d6) δ 6.55 (m, 2H), 6.42 (d, 1H), 2.15 (s, 6H), 1.89 (s, 2H). LCMS (M+H)<+>: 170.1.

Korak 3. 4-(4-{3-[(Dimetilamino)metil]-5-fluorofenoksi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitril

[0145] U smešu 3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorofenola (158 mg, 0.934 mmol) u metilen hloridu (9 mL) dodata je smola trifenilfosfina (578 mg, 1.37 mmol) i di-terc-butil azodikarboksilata (229 mg, 0.996 mmol). Smeša je mešana u toku 20 minuta pre dodavanja rastvora 4-(4-hidroksipiperidin-1-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitrila (300 mg, 0.6 mmol) u metilen hloridu (2 mL). Reakcija je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Dodatna smola trifenilfosfina (0.5 g), diterc-butil azodikarboksilata (0.23g), i DCM (8mL) su dodate i mešane u toku dodatna 2 sata. Fiola i smola su isprane sa DCM i proceđene. Filtrati su isprani sa 10% vod. NaOH rastvorom. Organski sloj je osušen iznad MgSO4, proceđen, i koncentrovan. Sirova supstanca je prečišćena na koloni od silikagela (eluiranog sa 0-15% metanol/DCM) da bi se dobio SEM zaštićeni proizvod. LCMS (M+H)<+>: 633.5. U prečišćeni proizvod je dodat metilen hlorid (1.5 mL) i trifluorosirćetna kiselina (1.5 mL, 19 mmol) i mešani su u toku 2 sata Rastvarači su upareni pre dodavanja metanola (3.5 mL) i etilendiamina (0.70 mL, 10 mmol). Dobijena smeša je mešana u toku 1 sata i zatim koncentrovana. Koncentrat je sakupljen u DCM i ispran sa vodom, osušen iznad Na2SO4, proceđen, i koncentrovan da bi se dobio sirovi proizvod koji je prečišćen hiralnim prep-HPLC (Chiralcel OJ-H kolona, 4.6 x 250mm, 5 μ, 60% etanol/Hex, 0.5 ml/min) da bi se dobila 2 enantiomera.

enantiomer 1 (prvi eluira): LCMS (M+H)<+>: 503.3.

enantiomer 2 (drugi eluira):<1>H NMR (DMSO-d6) δ 8.78 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.35 (s, 1H), 7.59 (d, 1H), 6.96 (d, 1H), 6.64 (t, 3H), 4.94 (m, 1H), 4.36 (m, 1H), 3.39 (m, 2H), 3.19 (d, 3H), 2.77 (m, 3H), 2.60 (m, 1H), 2.32 (m, 2H), 2.10 (s, 6H), 1.83 (m, 2H), 1.54 (m, 2H). LCMS (M+H)<+>: 503.3.

Primer 13. 5-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-izopropilpirazin-2-karboksamid

[0146]

Korak 1: metil 5-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol1-il]azetidin-1-il}pirazin-2-karboksilat

[0147] (R)-(+)-2,2’-Bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftil (0.065 g, 0.10 mmol) je dodat u smešu {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorida (0.50 g, 1.0 mmol), metil 5-hloropirazin-2-karboksilata (0.18 g, 1.0 mmol) (Ark Pharm, Inc., Cat. #: AK23920), i cezijum karbonata (1.0 g, 3.1 mmol) u toluenu (15.0 mL) pod azotom, a zatim paladijum acetat (0.023 g, 0.10 mmol). Reakciona smeša je mešana na 120°C u toku3 h. Posle hlađenja na st., reakciona smeša je proceđena kroz sloj celita, ispran sa etil acetatom. Filtrat je koncentrovan pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatografijom na koloni od silkagela sa etil acetatom u dihlorometanu (0-70%) da bi se dobio željeni proizvod (0.31 g, 55%). LCMS (M+H)<+>: m/z = 546.3.

Korak 2: 5-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-1-il}pirazin-2-karboksilna kiselina

[0148] Smeša metil 5-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]-metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pirazin-2-karboksilata (0.31 g, 0.57 mmol), litijum hidroksid monohidrata (0.060 g, 1.4 mmol) u metanolu (6.0 mL) i vodi (2.5 mL) je mešana na 30°C u toku noći. Smeša je prilagođena na pH = 4 sa vodenim HCl, i koncentrovana pod sniženim pritiskom da se ukloni MeOH. Dobijena čvrsta supstanca je proceđena, isprana sa vodom i etrom, i zatim osušena u vakuumu da bi se dobio željeni proizvod (0.25 g, 83%). LCMS (M+H)<+>: m/z = 532.3

Korak 3: 5-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-isopropilpirazin-2karboksamid

[0149] Trietilamin (15 μL, 0.11 mmol) je dodat u smešu 5-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pirazin-2-karboksilne kiseline (19.4 mg, 0.0365 mmol) i benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (19 mg, 0.044 mmol) i 2-propanamina (3.2 mg, 0.055 mmol) u metilen hloridu (1.3 mL). Reakciona smeša je mešana na s.t. u toku noći. Reakciona smeša je sakupljena sa vodenim NaHCO3, i ekstrahovana sa metilen hloridom (2 x 2 mL). Spojeni organski slojevi su isprani sa vodom (1 mL) i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je korišćen u sledećem koraku bez daljeg prečišćavanja. LCMS (M+H)<+>: m/z = 573.3.

[0150] Metilen hlorid (1.3 mL) i trifluorosirćetna kiselina (0.6 mL) su dodati u gornji intermedijer. Reakciona smeša je mešana na s.t. u toku 1.5 h. Smeša je koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvoren u metanolu (1.3 mL). U rastvor je dodat etilendiamin (0.086 mL). Reakciona smeša je mešana na s.t. u toku 2 h., i prečišćena sa RP-HPLC (pH = 10) da bi se dobio željeni proizvod. LCMS (M+H)<+>: m/z = 443.2.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.15 (br, 1H), 8.97 (s, 1H), 8.68 (s, 1H), 8.63 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 8.46 (s, 1H), 8.12 (d, = 8.4 Hz, 1H), 7.97 (d, J = 1.2 Hz, 1H), 7.60 (dd, J = 3.3, 2.4 Hz, 1H), 7.07 (dd, J = 3.4, 1.7 Hz, 1H), 4.81 (d, J = 9.8 Hz, 2H), 4.53 (d, J = 9.6 Hz, 2H), 4.13-4.02 (m, 1H), 3.78 (s, 2H), 1.14 (d, J = 6.8 Hz, 6H).

Primer 14. 4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid

[0151]

Korak 1: 4-hloro-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid

[0152] 4-Hloro-2,5-difluorobenzoil hlorid (29.6 mg, 0.140 mmol) (Oakwood, Cat.#: 001628) je dodat u smešu (2S)-1,1,1-trifluoropropan-2-amin hidrohlorida (20.0 mg, 0.134 mmol) (SynQuest Lab, Cat.#: 3130-7-S1) i diizopropiletilamina (58 mL, 0.33 mmol) u dihlorometilenu (4.0 mL) na 0 °C. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 30 min., obrađena sa zasićenim vodenim NaHCO3, i ekstrahovana sa dihlorometilenom (3x10 mL). Spojeni organski slojevi su isprani sa rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, proceđeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio željeni proizvod koji je direktno korišćen u sledećem koraku reakcije bez daljeg prečišćavanja. LCMS (M+H)<+>: m/z = 288.0/290.0.

Korak 2: 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid

[0153] (R)-(+)-2,2’-Bis(difenilfosfino)-1,1’-binaftil (8.3 mg, 0.013 mmol) je dodat u smešu {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorida (65 mg, 0.13 mmol), 4-hloro-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida (0.14 mmol), i cezijum karbonata (0.13 g, 0.40 mmol) u toluenu (4.0 mL) pod N2, a zatim i paladijum acetat (3.0 mg, 0.013 mmol). Reakciona smeša je mešana na 130 °C u toku 5 h. Pošto je reakciona smeša ohlađena na sobnu temperaturu, smeša je obrađena sa vodom i ekstrahovana sa etil acetatom (3x10 mL). Spojeni organski slojevi su isprani sa rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, proceđeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom da bi se dobio sirovi proizvod koji je direktno korišćen u sledećem koraku rekacije bez daljeg prečišćavanja. LCMS (M+H)<+>: m/z = 661.2.

Korak 3: 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid

[0154] Bor trifluorid eterat (0.051 mL, 0.40 mmol) je dodat u rastvor 4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida u acetonitrilu (1.0 mL) na 0 °C pod N2. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 3 h. (LCMS (M+H)<+>: m/z = 561.3). Zatim je smeša ohlađena na 0 °C, dodata je voda (0.13 mL). Posle 30 min, polako je dodat 5.0 M amonijum hidroksid u vodi (0.2 mL, 1 mmol) na 0 °C u toku 5 min. Reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći i prečišćena sa RP-HPLC (pH = 10) da bi se dobio željeni proizvod. LCMS (M+H)<+>: m/z = 531.0.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.62 (br, 1H), 9.07 (s, 1H), 8.84 (s, 1H), 8.55 (s, 1H), 8.51 (dd, J = 8.8, 1.2 Hz, 1H), 7.78 (br, 1H), 7.35 (dd, J = 12.6, 6.5 Hz, 1H), 7.23 (d, J = 1.9 Hz, 1H), 6.65 (dd, J = 11.9, 7.3 Hz, 1H), 4.76 (m, 1H), 4.70 (d, J = 9.3 Hz, 2H), 4.44 (d, J = 9.2 Hz, 2H), 3.76 (s, 2H), 1.30 (d, J = 7.1 Hz, 3H).

Primer 15. 5-{3-(Cijanometil)-3-[4-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-izopropilpirazin-2-karboksamid

[0155]

Korak 1: metil 5-{3-(cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1il]azetidin-1-il}pirazin-2-karboksilat

[0156] N,N-Diizopropiletilamin (1.0 mL, 6.0 mmol) je dodat u smešu {3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorida (0.96 g, 2.0 mmol) i metil 5-hloropirazin-2-karboksilata (0.34 g, 2.0 mmol) u 1,4-dioksanu (15 mL). Reakciona smeša je mešana na 120 °C u toku noći. Smeša je obrađena sa zasićenim vodenim NaHCO3, i ekstrahovana sa dihlorometilenom (3x 20 mL). Spojeni organski slojevi su isrpani sa rastvorom soli, osušeni iznad MgSO4, proceđeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je prečišćen fleš hromatogradijom na koloni od silikagela sa etil acetatom u heksanima (0-60%) da bi se dobio željeni proizvod (0.13 g, 12%). LCMS (M+H)<+>: m/z = 545.2.

Korak 2: 5-{3-(cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pirazin-2-karboksilne kiseline

[0157] Reakciona smeša metil 5-{3-(cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pirazin-2-karboksilata (0.13 g, 0.24 mmol), litijum hidroksid monohidrata (0.025 g, 0.60 mmol) u metanolu (4.0 mL), THF (2.0 mL) i vode (1.0 mL) je mešana na 40 °C u toku 3 h. Smeša je podešana na pH = 4 sa 2.0 N HCl vodenim rastvorom, i koncentrovana pod sniženim pritiskom da bi se uklonio MeOH i THF. Obrazovani talog je proceđen, ispran sa vodom i etrom i osušen u vakuumu da bi se dobio željeni proizvod (0.100 g, 79%). LCMS (M+H)<+>: m/z = 531.4.

Korak 3: 5-{3-(cijanometil)-3-[4-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-isopropilpirazin-2karboksamid

[0158] N,N-Diizopropiletilamin (19 mL, 0.11 mmol) je dodat u smešu 5-{3-(cijanometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pirazin-2-karboksilen kiseline (19.4 mg, 0.0365 mmol), benzotriazol-1-iloksitris(dimetilamino)fosfonijum heksafluorofosfata (19 mg, 0.044 mmol) i 2-propanamina (3.2 mg, 0.055 mmol) u DMF (1.0 mL). reakciona smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku noći. Reakciona smeša je obrađena sa zasićenim vodenim NaHCO3, i ekstrahovana sa dihlorometilenom (3x20 mL). Spojeni organski slojevi su isprani sa rastvorom soli,. osušeni iznad MgSO4, proceđeni i koncentrovani pod sniženim pritiskom. Ostatak je tretiran sa metilen hloridom (1.3 mL) i TFA (1.3 mL). Smeša je mešana na sobnoj temperaturi u toku 1.5 h., i koncentrovana pod sniženim pritiskom. Ostatak je rastvorenu metanolu (1.3 mL), i tretiran sa etilendiaminom (0.086 mL, 1.3 mmol). Dobijana smeša je mešana na sobnoj temperatri u toku 2 h, i zatim prečišćena sa RP-HPLC (pH = 10) da bi se dobijen željeni proizvod. LCMS (M+H)<+>: m/z = 442.1.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-d6): δ 12.19 (br, 1H), 8.99 (s, 1H), 8.66 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 8.47 (s, 1H), 8.32 (d, J = 5.7 Hz, 1H), 8.14 (d, J = 8.4 Hz, 1H), 8.00 (d, J = 1.4 Hz, 1H), 7.67 (dd, J = 3.2, 2.7 Hz, 1H), 7.54 (d, J = 5.5 Hz, 1H), 7.09 (dd, J = 3.5, 2.7 Hz), 4.82 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 4.56 (d, J = 10.0 Hz, 2H), 4.10 (m, 1H), 3.79 (s, 2H), 1.17 (d, J = 6.4 Hz, 6H).

Primer 16: {1-(cis-4-{[6-(2-hidroksietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril tris(trifluoroacetat)

[0159]

Korak 1: Dietil [6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-8-iloksi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4il]malonat

[0160] U smešu tetrahidrofurana (40 mL) i NaH u mineralnom ulju (1.1 g, 28 mmol) na 0 °C je dodat etil malonat (4.2 mL, 28 mmol), kap po kap. Zatim je dodat 4-hloro-6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dek-8-iloksi)-2-(trifluorometil)pirimidin (opisan u primeru 1 US 2013/0045963, Korak 1) (3.75 g, 11.1 mmol). Reakciona smeša je mešana na 64 °C. Posle 3 sata, HPLC & LCMS analize su pokazale 70% završenu reakciju. Zagrevana je još 6 sati, i zatim ohlađena na 20 °C. Obrazovan je samo u tragovima proizvod dekarboksilacije. Reakcija je razblažena sa vodenim bikarbonatom i ekstrahovana sa EtOAc. Ekstrakt EtOAc je ispran sa rastvorom soli, osušen iznad Na2SO4, i uparen u vakuumu da bi se dobilo 8.5 g ulja (obuhvata višak etil malonata i mineralno ulje). Sirovi proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni od 120 g silikagela, pomoću rastvarača A= heksan; rastvarača B= EtOAc; protok 60 mL/min; A, 3 min; gradijenta do 40%B u 40min; detektora podešenog na 254nm; sakupljenih frakcija od 47 mL; vremena zadržavanja, 28 min. Spojene frakcije su uparene da bi se dobilo 4.6 g, bezbojnog ulja, 90 % prinos.<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ7.05 (s, 1H); 5.30 (m, 1H, OCH); 4.85 (s, 1H, CH); 4.25 (m, 2H, OCH2); 3.95 (s, 4H, OCH2); 1.6-2.1 (m, 8H); 1.28 (t, 3H, CH3).

Korak 2: Etil [6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dek-8-iloksi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]acetat

[0161] Dietil [6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dek-8-iloksi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]malonat (4.60 g, 9.95 mmol), je rastvoren u etanoli (46 mL). Dodata je voda (18 μL, 1.0 mmol) i 21% natrijum etoksid u etanolu (0.37 mL, 1.0 mmol). Reakciona smeša je mešana na 75 °C u toku 1 sata. HPLC & LCMS analize su pokazale 60% dekarboksilaciju. Zagrevanje je nastvljeno u toku još 2 sata (završena reakcija). Reakcija je razblažena sa vodenim bikarbonatom i ekstrahovana sa EtOAc. Ekstrakt EtOAc je ispran sa rastvorom soli, zatim osušen (Na2SO4), i uparen in vacuo do 3.4 g ulja (88% prinos). LCMS, HPLC, & NMR su pokazali da je dovoljno čist da se dalje koristi.<1>H NMR (400 MHz, DMSO-D6): δ7.20 (s, 1H); 5.20 (m, 1H, OCH); 4.10 (q, 2H, OCH2); 3.89 (s, 2H, CH2); 3.85 (s, 4H, OCH2); 1.5-2.0 (m, 8H); 1.15 (t, 3H, CH3). HPLC pokazalo da ima UVmax222 & 252nm.

Korak 3: 2-[6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-8-iloksi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]etanol

[0162] Etil [6-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-8-iloksi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]acetat (3.0g) je rastvoren u tetrahidrofuranu (40 mL), i ohlađen u ledenom kupatilu. Dodat je natrijum tetrahidroborat (884 mg, 23.4 mmol), a zatim metanol (4.8 mL, 120 mmol), u porcijama. Reakciona smeša je mešana u toku 20 min, uklonjeno je ledeno kupatilo i mešana je na 21 °C u toku 0.5 sati. HPLC & LCMS su pokazali da nije preostao estar, i pokazale su konverziju u željeni M+H 349; i takođe su pokazali nekoliko proizvoda prekomerne redukcije (od kojih bar jedan nema UV absorbancu). Reakciona smeša je zaustavljena sa vodom i uparena. Reakciona smeša je razblažena sa vodenim bikarbonatom i EtOAc, i mešana u toku 0.5 sata. EtOAc sloj je ispran sa rastvorom soli, osušen (Na2SO4), i uparen da bi se dobilo 3.0 g ulja. Proizvod je prečišćen hromatografijom na koloni od 120 g silikagela, pomoću rastvarača A= heksan; rastvarača B= 3%iPA/EtOAc; protoka 60 mL/min; A, 3 min; gradijen do 50%B u 30 min, zatim 50%B u toku 15 min; detektor je podešen na 254 nm; sakupljene frakcije od 47 mL; retenciono vreme, 34 min. uparavanja da bi se dobilo 1.5 g, svetlo žuto viskozno ulje, 56% prinos.<1>H NMR (300 MHz, DMSO-D6): δ7.10 (s, 1H); 5.20 (m, 1H, OCH); 4.71 (t, 1H, OH); 3.85 (s, 4H, OCH2); 3.72 (q, 2H, OCH2); 2.85 (t, 2H, CH2); 1.5-2.0 (m, 8H).

Korak 4: 4-{[6-(2-hidroksietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]oksi}cikloheksanon

[0163] 2-[6-(1,4-Dioksaspiro[4.5]dek-8-iloksi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]etanol je rastvoren u acetonu (60 mL, 900 mmol), i dodat je 5.0 M hlorovodonik u vodi (20 mL, 98 mmol) i mešan u toku 17 sati. LCMS i HPLC analize su pokazale gotovo potpunu konverziju do M+H 305. Dodat je vodeni bikarbonat i reakciona smeša je mešana, i zatim koncentrovana. Ova smeša je ekstrahovana sa EtOAc. EtOAc je osušen (Na2SO4), i uparen u vakuumu da bi se dobilo 1.3 g svetlo žutog viskoznog ulja (korišćenog u sledećoj reakciji bez daljeg prečišćavanja).<1>H NMR (300 MHz, CDCl3): δ6.80 (s, 1H); 5.60 (m, 1H, OCH); 4.06 (t, 2H, OCH2); 3.04 (t, 2H, CH2); 2.61 (m, 2H); 2.45 (m, 2H); 2.25 (m, 2H).

Korak 5:{1-(4-{[6-(2-hidroksietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0164] {3-[4-(7-{[2-(Trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorid (1.9 g, 3.9 mmol), i 4-{[6-(2-hidroksietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]oksi}cikloheksanon (1.3 g, 4.3 mmol), u suvom tetrahidrofuranu (36 mL) su mešani u toku 15 min pod azotom. Zatim je dodat natrijum triacetoksiborohidrid (1.7 g, 8.2 mmol). Smeša je mešana na 20 °C u toku 16 sati. HPLC i LCMS analize pokazuju jasno konverziju trans i cis proizvode (M+H 698; 1:1 ratio). Reakcija je zaustavljena sa vodom, koncentrovana mešana sa 20% KHCO3i ekstrahovana sa etil acetatom, osušena (Na2SO4), proceđena i uparena da bi se dobilo 2.8 g. Izomerni proizvodi su odvojeni sa LCMS pomoću Waters instrumenta i 30mmx100mm Xmost C18 kolana; 60mL/min; 55% CH3CN-H2O (0.1%NH4OH); 0.5min; 4.5 gradijent do 72%; 24 kruga; retenciono vreme trans izomera, 4.6 min; cis isomer, 5.4 min. Izolovani cis izomer sadrži <1% zaostalog trans izomera. Prinos 1.00 g cis izomer, 37% prinos.<1>H NMR (500 MHz, CDCl3; takođe COSY, HSQC, i HMBC): δ8.83 (s, 1H); 8.40 (s, 1H); 8.28 (s, 1H); 7.40 (m, 1H); 6.80 (m, 1H); 6.67 (s, 1H); 5.64 (s, 2H, SEM); 5.17 (m, 1H, OCH); 4.01 (t, 2H, OCH2); 3.74 (s, 2H, NCH); 3.59 (m, 2H, NCH); 3.55 (t, 2H, SEM); 3.38 (s, 2H, CH2CN); 2.95 (t, 2H, CH2); 2.30 (m, 1H, NCH); 2.15 (m, 2H); 1.84 (m, 2H); 1.50 (m, 2H); 1.30 (m, 2H); 0.90 (t, 2H, SEM); -0.92 (s, 9H, SEM).

Korak 6: {1-(cis-4-{[6-(2-hidroksietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril tris(trifluoroacetat)

[0165] {1-(4-{[6-(2-Hidroksietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrilni izomer je rastvoren u metilen hloridu (18 mL) i trifluorosirćetnoj kiselini (TFA, 18 mL, 230 mmol) i mešan je u toku 1.0 sat. Rastvor je koncentrovan da se ukloni TFA. LCMS je pokazao pretvaranje hidroksimetil intermedijera, M+H 598, nešto njega kao TFA estar, M+H 694, i <5% zaostalog SEM. Ostatak je rastvoren u metanolu (36 mL) i dodat je 15.0 M amonijum hidroksid u vodi (9.0 mL, 130 mmol). Rastvor je mešan na 21 °C u toku 18 sati. HPLC & LCMS je pokazalo da ne postoji zaostali M+H 598 signal ili TFA estar. Rastvor je uparen. Amonijum trifluoroacetat je uklonjen dodavanjem vodenog bikarbonata i ekstrahovanjem proizvoda sa EtOAc. Spojeni EtOAc ekstrakti su upareni i dobijeno je 0.96 g. Ovo je rastvoreno u 70 mL 10% H2O/ACN koji sadrži 1.5 ekv. TFA (180 mL). Proizvod je izolovan sa prep. LCMS pomoću Waters Fraction-Linx instrumenta i 30mmx100mm Sunfire C18 kolone; 60 mL/min; 15% ACN-H2O (0.1%TFA), 0.5 min; 4.5 min gradijenta do 33%; detektora podešenog na m/z 568; 14 krugova; retenciono vreme 5.0 min. HPLC pokazuje UV224, 252, 294, i 318 nm. Spojene frakcije su osušene mržnjenjem. Prinos 1.0 g bela čvrsta supstanca (80% maks. prinos). NMR je pokazao da je bila 2.5 TFA so.<1>H NMR (500 MHz, CD3CN; takođe COSY, HSQC, i HMBC): δ10.84 (s, 1H, NH); 9.00 (s, 1H); 8.90 (s, 1H); 8.56 (s, 1H); 7.66 (m, 1H); 7.10 (m, 1H); 6.86 (s, 1H); 5.39 (m, 1H, OCH); 4.86 (brs, 2H, NCH); 4.66 (m, 2H, NCH); 3.90 (t, 2H, OCH2); 3.78 (s, 2H, CH2CN); 3.39 (m, 1H, NCH); 2.92 (t, 2H, CH2); 2.20 (m, 2H); 1.92 (m, 2H); 1.76 (m, 4H).<19>F NMR (400 MHz, DMSO-D6): δ-69.8 (s); -74.8 (s, TFA); LCMS izračunato za C27H29F3N9O2(M+H)<+>: m/z =568.24

Primer 17: {1-(cis-4-{[4-[(etilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril tris(trifluoroacetat)

[0166]

Korak 1: [2-[(cis-4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}cikloheksil)oksi]-6-(trifluorometil)piridin-4-il]metil metanesulfonat

[0167] {1-(cis-4-{[4-(Hidroksimetil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril (iz primera 64 US 2013/0045963, 145.0 mg, 0.2124 mmol) je rastvoren u metilen hloridu (2.93 mL) i je ohlađen na 0 °C. U to dodat je N,N-diizopropiletilamin (60.5 μL, 0.347 mmol) a zatim metansulfonil hlorid (23 μL, 0.30 mmol). Reakcija je mešana na 0 °C u toku 1 sat. Zatim je reakciona smeša obrađena sa EtOAc i korišćena u sledećoj reakciji. MS(ES):761(M+1).

Korak 2:(1-(cis-4-{[4-[(etilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril tris(trifluoroacetat)

[0168] [2-[(cis-4-{3-(Cijanometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}cikloheksil)oksi]-6-(trifluorometil)piridin-4-il]metil metansulfonat (50 mg, 0.06571 mmol) je rastvoren u 1,4-dioksanu (2.5 mL) i, dodat je 2.0 M etilamin u THF (300 μL, 0.6 mmol). Reakcija je mešana na 25 °C u toku 16 sati za koje vreme LCMS analiza pokazala uglavnom glavni proizvod. Proizvod je prečišćen sa LC, uparen i skinuta je zaštita kao u primeru 1 US 2013/0045963 i prečišćena sa LC da bi se dobio proizvod.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.08 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.58 (s, 1H), 7.78 (d, 1H), 7.50 (s, 1H), 7.25 (d, 1H), 7.13 (s, 1H), 5.38 (m, 1H), 5.08 (d, 2H), 4.80 (d, 2H), 4.27 (s, 2H), 3.74 (s, 2H), 3.50 (m, 1H), 3.16 (q, 2H), 2.24 (m, 2H), 2.01 (m, 2H), 1.76 (m, 4H), 1.34 (t, 3H).<19>F NMR (376 MHz, CD3OD) δ-70.52 (s), -77.49 (s). MS(ES):580(M+1).

Primer 18: {1-(cis-4-{[4-(1-hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il] oksi} cikloheksil)-3-[4-(7Hpirolo [2,3-d] pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril bis(trifluoroacetat)

[0169]

Korak 1: 2-hloro-6-(trifluorometil)izonikotinska kiselina

[0170] 2-Hloro-6-(trifluorometil)piridin (1.0 g, 5.51 mmol, Oakwood Products) je rastvoren u tetrahidrofuranu (20 mL) i 1.0 M litijum hlorid -hloro(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)magnezijum (1:1) u THF (6.610 mL, 6.610 mmol, Aldrich Co.) je dodat na 25 °C. Reakcija je mešana na 25 °C u toku 1 sat i ohlađena je na -78 °C. Reakcija je mešana na -78 °C u toku 1 sat i omogućeno je da se zagreje na sobnu temperaturu, zaustavi sa vodom i razdeli između IN NaOH i etra. Faze su odvojene i vodena faza je isprana sa dodatnim etrom i zakišeljena sa koncentrovanom HCl do pH∼1 i ekstrahovana sa etrom. Spojene organska faza je isprana sa vodom, zasićenim NaCl, osušena iznad MgSO4, proceđena, i uparena do suvog da bi se dobio sirovi proizvod. NMR analiza je pokazala da je konzistentna sa ∼2:1 smešom para i meta karbocikličnih kiselina. Smeša je preneta u sledeću reakciju. 440 MHz NMR(CDCl3) δ 8.17 (s, 1H), 8.11 (s, 1H).

Korak 2: etil 2-hloro-6-(trifluorometil)izonikotinat i etil 2-hloro-6-(trifluorometil)nikotinat

[0171] U fioli, su 2-hloro-6-(trifluorometil)nikotinska kiselina (0.98 g, 4.4 mmol) i 2-hloro-6-(trifluorometil)izonikotinska kiselina (1.85 g, 8.2 mmol) rastvoreni u etil ortoformijatu (5.0 mL, 30.1 mmol) i zagrejani na 120 °C u toku 5 sati za koje vreme je TLC analiza pokazala da je većina polaznog materijala potrošena i obrazovan je proizvod . Reakciona smeša je uparena u vakuumu i ostatak je prečišćen hromatografijom na silkagelu pomoću 10% EtOAc/heksani da bi se dobila dva proizvoda etil estra.<1>H NMR (400 MHz, CDCl3): δ 8.14 (s, 1H), 8.08 (s, 1H), 4.47 (q, 2H), 1.44 (t, 3H).

Korak 3: 2-[2-hloro-6-(trifluorometil)piridin-4-il]propan-2-ol

[0172] Etil 2-hloro-6-(trifluorometil)izonikotinat (0.35 g, 1.4 mmol) je rastvoren u tetrahidrofuranu (13.8 mL) i ohlađen je na -78 °C, zatim je dodat 3.0 M metilmagnezijum bromid u etru (1.4 mL, 4.1 mmol). Reakcija je mešana na -78 °C u toku 3 sata za koje vreme LCMS analiza je pokazala da polazni materijal više nije prisutan. Reakcija je zaustavljena sa zasićenim NH4Cl i razdeljena između voda/1 N HCl i EtOAc, faze su odvojene i vodena faza je isprana sa dodatnim EtOAc. Spojena organska faza je isprana sa vodom, zasićenim NaCl, osušena iznad MgSO4, proceđena i uparena do suvog da bi se dobio sirovi proizvod. NMR analiza je pokazala da se sastoji od ∼1:1 smeše alkohola i intermedijera metil ketona. Korišćen je sirovi materijal u sledećoj reakciji bez prečišćavanja. NMR 400 MHz NMR(CDCl3): δ 7.70 (s, 1H), 7.63 (s, 1H), 1.60 (s, 6H)

Korak 4: 2-[2-(1,4-dioksaspiro[4.5]dec-8-iloksi)-6-(trifluorometil)piridin-4-il]propan-2-ol

[0173] 1,4-Dioksaspiro[4.5]dekan-8-ol (0.25 g, 1.58 mmol) i 2-[2-hloro-6-(trifluorometil)piridin-4-il]propan-2-ol (0.2 g, 0.835 mmol) su rastvoreni u tetrahidrofuranu (2 mL) i ohlađen na 0 °C i dodata je 60% smeša natrijum hidrida (70.0 mg, 1.75 mmol) u mineralnom ulju i reakcija je mešana u toku 30 minuta na 0 °C i na 25 °C u toku 60 sati za koje vreme TLC analiza je pokazala na prisustvo nekog proizvoda. Reakcija je zaustavljena sa vodom i zatim je ekstrahovana sa etil acetatom i organski ekstrakti su isprani sa vodom, zasićenim NaCl, osušeni (MgSO4), i upareni u vakuumu. Ostatak je prečišćen sa LC (pH 2) da bi se dobio proizvod. MS(ES):362 (M+1).

Korak 5: 4-{[4-(1-hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksanon

[0174] 2-[2-(1,4-Dioksaspiro[4.5]dec-8-iloksi)-6-(trifluorometil)piridin-4-il]propan-2-ol (0.049 g, 0.14 mmol) je rastvoren u acetonu (3.7 mL). Rastvor 12.0 M hlorovodonika u vodi (0.43 mL, 5.2 mmol) je dodat i mešan na 25 °C u toku 16 sati za koje vreme je LCMS pokazao da je oko 70% reakcije završeno. Dodatni 12.0 M hlorovodonik u vodi (0.43 mL, 5.2 mmol) je dodat i mešan je u toku 3 sata; LCMS je pokazao da je ∼90% reakcije završeno i zaustavljen je viškom NaHCO3, ekstrahovan sa EtOAc i organski ekstrakt je uparen da bi se dobio proizvod. On je korišćen u sledećoj reakciji bez prečišćavanja. MS(ES):318 (M+1).

Korak 5: {1-(cis-4-{[4-(1-hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril

[0175] {3-[4-(7-{[2-(Trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril dihidrohlorid (55.3 mg, 0.115 mmol) i 4-{[4-(1-hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2il]oksi}cikloheksanon su rastvoreni u suvom 1,2-dihloroetanu (1.38 mL) i mešani su u toku 5 min i dodat je natrijum triacetoksiborohidrid (86.1 mg, 0.406 mmol). Reakciona smeša je mešana na 25 °C u toku 16h, za koje vreme je LCMS analiza pokaza uglavnom dva diastereoizomerna proizvoda. Reakcija je zaustavljena sa vodom, neutralizovana sa NaHCO3i ekstrahovana sa etil acetatom i rastvarač je uparen . Ostatak je prečišćen sa LCMS (pH 10) i frakcije koje sadrže drugu eluiranu supstancu su spojene i uparene da bi se dobio {1-(cis-4-{[4-(1-hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril. Prva eluirana supstanca je takođe izolovana da bi se dobio {1-(trans-4-{[4-(1hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril. MS(ES): 712(M+1).

Korak 6: {1-(cis-4-{[4-(1-hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril bis(trifluoroacetat)

[0176] Skinuta je zaštita sa {1-(cis-4-{[4-(1-Hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila kao što je opisano u primeru 1 iz US 2013/0045963 i prečišćen je tečnom hromatografijom (pH 2) da bi se dobio 1-(cis-4-{[4-(1hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril bis(trifluoroacetat. Na sličan način {1-(trans-4-{[4-(1-hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril bis(trifluoroacetat) je dobijen i karakterisan.<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 9.07 (s, 1H), 8.87 (s, 1H), 8.59 (s, 1H), 7.78 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.44 (s, 1H), 7.24 (d, J = 3.7 Hz, 1H), 7.05 (s, 1H), 5.35 (s, 1H), 5.09 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 4.82 (d, J = 12.2 Hz, 2H), 3.72 (s, 2H), 3.5 (m, 1H), 2.27 (m, 2H), 2.0 (m, 2H), 1.74 (m, 4H), 1.50 (s, 6H). MS(ES): 581(M+1).

Primeri 19 i 20 dole su dobijeni analogno prema postupcima iz primera 17.

[0177]

Primer 21. {trans-3-(4-{[4-({[(1S)-2-hidroksi-1-metiletil]amino}metil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril

[0178]

[0179] N,N-Diizopropiletilamin (9.4 μL, 0.054 mmol) i anhidrid metanesulfonske kiseline (7.9 mg, 0.045 mmol) su dodati u rastvor {trans-3-(4-{[4-(hidroksimetil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitrila (10.0 mg, 0.018 mmol, prva eluirana supstanca 1 iz intermedijera primera A2 iz US 2014/0005166, Korak F) u metilen hloridu (0.30 mL), i obrazovan je mezilat mešanjem u toku 30 minuta. Rastvarač je uklonjen u vakuumu i ostatak je ponovo rastvoren u smeši tetrahidrofurana (0.30 mL) i dodat je metanol (0.10 mL) i (2S)-2-aminopropan-1-ol (20. mL, 0.27 mmol, Acros). Reakciona smeša je mešana na 40 °C u toku noći. Rastvarač je uklonjen in vacuo i skidana je zaštita sa sirovog proizvoda mešanjem sa 1:1 TFA:DCM u toku 1 sata, zatim je koncentrovana i mešana sa etilenediaminom (0.10 mL) u metanolu (1.0 mL) do potpunog skidanja zaštite što je određeno sa LCMS. Proizvod je prečišćen pomoću preparativne HPLC-MS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH). Eluent je zamrznut i liofilizovan da bi se dobio proizvod kao slobodna baza (6.0 mg, 54%).<1>H NMR (400 MHz, CD3OD) δ 8.74 (s, 1H), 8.67 (s, 1H), 8.40 (s, 1H), 7.51 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.37 (s, 1H), 7.00 -6.97 (m, 2H), 5.23 -5.00 (m, 1H), 3.90 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.81 (d, J = 14.8 Hz, 1H), 3.50 (dd, J = 10.9, 4.9 Hz, 1H), 3.41 (dd, J = 10.9, 6.9 Hz, 1H), 3.31 (s, 2H), 3.16 -3.05 (m, 2H), 2.95 (p, J = 7.5 Hz, 1H), 2.83 -2.63 (m, 3H), 2.56 -2.42 (m, 2H), 2.39 -2.23 (m, 2H), 2.19 -2.04 (m, 2H), 1.93 -1.75 (m, 2H), 1.05 (d, J = 6.4 Hz, 3H).<19>F NMR (376 MHz, CD3OD) δ -70.30 (s). LCMS (M+H)<+>: 610.3

Primer 22. {trans-3-(4-{[4-({[(2R)-2-hidroksipropil]amino}metil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril

[0180]

[0181] Praćen je postupak iz primera 9 iz US 2014/0005166 , pri čemu je korišćen (2R)-1-aminopropan-2-ol (12 mL, 0.15 mmol, Aldrich) u koraku premeštanja, koji je izveden na 50 °C u toku 2 sata. Dobijen je proizvod kao slobodna baza (8.7 mg, 46%).<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 12.13 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.60 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.08 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 5.11 -4.90 (m, 1H), 4.49 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.76 (s, 2H), 3.67 (tt, J = 10.3, 5.6 Hz, 1H), 3.42 (s, 2H), 3.11 -2.96 (m, 2H), 2.81 (p, J = 7.5 Hz, 1H), 2.74 -2.56 (m, 2H), 2.46 -2.25 (m, 4H), 2.24 -2.09 (m, 2H), 2.09 -1.90 (m, 2H), 1.81 -1.51 (m, 2H), 1.03 (d, J = 6.2 Hz, 3H).<19>F NMR (376 MHz, d6-DMSO) δ -67.29 (s). LCMS (M+H)<+>: 610.3.

Primer 23. {trans-3-(4-{[4-({[(2S)-2-hidroksipropil]amino}metil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril

[0182]

[0183] Praćen je postupak iz primer 9 iz US 2014/0005166, pri čemu je korišćen (2S)-1-aminopropan-2-ol (12 mL, 0.15 mmol, Aldrich) u koraku premeštanja, koji je izveden na 50 °C u toku 2 sata (7.9 mg, 42%).<1>H NMR (400 MHz, d6-DMSO) δ 12.13 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.60 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.42 (s, 1H), 7.08 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.04 (s, 1H), 5.27 -4.71 (m, 1H), 4.49 (d, J = 4.4 Hz, 1H), 3.76 (s, 2H), 3.72 -3.62 (m, 1H), 3.42 (s, 2H), 3.09 -2.96 (m, 2H), 2.81 (p, J = 7.4 Hz, 1H), 2.72 -2.55 (m, 2H), 2.43 -2.25 (m, 4H), 2.25 -2.08 (m, 2H), 2.08 -1.96 (m, 2H), 1.78 -1.57 (m, 2H), 1.03 (d, J = 6.2 Hz, 3H).<19>F NMR (376 MHz, d6-DMSO) δ -67.29 (s). LCMS (M+H)<+>: 610.3.

Primer 24. {trans-3-(4-{[4-(2-hidroksietil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril

[0184]

[0185] Skidana je zaštita sa {trans-3-(4-{[4-(2-hidroksietil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etoksi]metil}-7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitrila (9.0 mg, 0.013 mmol, druga eluirana supstanca 2 iz intermedijera iz primera A4 iz US 2014/0005166, Korak 3) i prečišćena mešanjem u smeši metilen hlorida (0.50 mL) i trifluorosirćetne kiseline (0.50 mL) u toku jednog sata. Rastvarači su uklonjeni in vacuo i ostatak je mešan u metanolu (0.1 mL) koji sadrži etilendiamin (0.1 mL). Prečišćavanjem pomoću preparativne HPLCMS (C18 eluiranjem sa gradijentom MeCN/H2O koji sadrži 0.15% NH4OH) dobijen je proizvod kao slobodna baza (5.8 mg, 79%).<1>H NMR (300 MHz, d6-DMSO) δ 12.12 (s, 1H), 8.83 (s, 1H), 8.69 (s, 1H), 8.42 (s, 1H), 7.60 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 7.34 (s, 1H), 7.08 (d, J = 3.6 Hz, 1H), 6.95 (s, 1H), 4.99 (tt, J = 8.2, 4.1 Hz, 1H), 4.73 (t, J = 4.9 Hz, 1H), 3.66 (q, J = 5.9 Hz, 2H), 3.42 (s, 2H), 3.11 -2.95 (m, 2H), 2.90 -2.71 (m, 3H), 2.71 -2.56 (m, 2H), 2.44 -2.30 (m, 2H), 2.15 (t, J = 9.2 Hz, 2H), 2.09 -1.82 (m, 2H), 1.83 -1.58 (m, 2H).<19>F NMR (282 MHz, d6-DMSO) δ -67.26 (s). LCMS (M+H)<+>: 567.2.

Primer A: In vitro JAK kinazni test

[0186] Ovde su jedinjenja testirana na inhibitoru aktivnost JAK meta prema sledećem in vitro testu opisanom u Park et al., Analytical Biochemistry 1999, 269, 94-104. Katalitički domeni humanog JAK1 (a.a. 837-1142), JAK2 (a.a. 828-1132) i JAK3 (a.a. 781-1124) sa krajnjim N-terminalnim His obeleživačem su eksprimovani pomoću bakulovirusa u ćelijama insekata i prečišćeni. Katalitička aktivnost JAK1, JAK2 ili JAK3 je procenjivana merenjem fosforilacije biotinilovanih peptida. Fosforilovani peptid je detektovan pomoću vremenski homogene fluorescence (homogenous time resolved fluorescence-HTRF). IC50Sjedinjenja je meren za svaku kinazu u reakcijama 40 mikroL koje sadrže enzim, ATP i 500 nM peptida u 50 mM Tris (pH 7.8) pufera sa 100 mM NaCl, 5 mM DTT, i 0.1 mg/mL (0.01%) BSA. za 1 mM IC50meranja, koncentracija ATPa u reakcijama je bila 1 mM. Reakcije su izvedene na sobnoj temperaturi u toku 1 sat i zatim zaustavljene sa 20 μL 45 mM EDTA, 300 nM SA-APC, 6 nM Eu-Py20 u puferu za testiranje (Perkin Elmer, Boston, MA). Vezivanjem za antitelo obeleženo europijumom je trajalo 40 minuta i HTRF signal je meren na čitaču Fusion ploča (Perkin Elmer, Boston, MA). Pogledati tabelu 2 radi podataka za jedinjenja iz primera testiranih testom iz primera A pri 1 mM ATP.

Primer B: Ćelijski testovi

[0187] Ćelijske linije kancera zavisne od citokinaza i stoga JAK/STAT signalna transdukcija, za rast, može biti zasejan pri 6000 ćelija po bunarčiću (format ploče sa 96 bunarčića) u RPMI 1640, 10% FBS, i 1 nG/mL odgovarajućeg citokina. Jedinjenja mogu biti dodata u ćelije u DMSO/medijum (krajnja koncentracija 0.2% DMSO) i inkubiran u toku 72 sata na 37 °C, 5% CO2. Efekat jedinjenja na vijabilnost ćelija je porocenjen pomoću CellTiter-Glo Luminescent Cell Viability testa (Promega) zatim kvantifikaciju sa TopCount (Perkin Elmer, Boston, MA). Potencijalni ’off-target’ efekti jedinjenja su mereni paraleno pomoću ne-JAK vođenih ćelijskih linija sa istim očitavanjem testova. Svi eksperimeti su tipično izvedeni u duplikatu.

[0188] Gornje ćelijske linije mogu takođe biti korišćene za ispitivanje efekata jedinjenja na fosforilaciju JAK kinaza ili potencijalne nishodne supstrate kao što su STAT proteini, Akt, Shp2, ili Erk. Ovi eksperimenti mogu biti izvedeni posle prekonoćnog nedostatka citokina, praćenim sa kratkom preinkubacijom sa jedinjenjem (2 sata ili manje) i stimulacijom citokina od približno 1 sat ili manjom. Proteini su zatim ekstrahovani iz ćelija i analizirani sa tehnikama koje su slične onim školskim u ovoj oblasti uključujući Zapadno blotovanja ili ELISAs pomoću antitela koja se mogu razlikovati između fosforilovanih i ukupnih proteina. Ovi eksperimeti mogu koristiti normalne ćelije ili ćelije kancera da bi se ispitala aktivnost jedinjenja na biologiju preživaljavanje ćelija tumora ili na medijatore inflamatornih bolesti. Na primer, u vezi sa poslednjim, citokini kao IL-6, IL-12, IL-23, ili IFN mogu biti korišćeni da stimulišu JAK aktivaciju dovodeći do fosforilacije STAT proteina i potencijalno do transkripcionih profila (procenjenim sa ’array’ ili ’qPCR’ tehnologijom) ili proizvodnjom i/ili sekrecijom proteina, kao što su IL-17. Sposobnost jedinjenja da inhibira ove citokinima posredovane efekte može biti merena pomoću tehnika uobičajenih onima iz ove oblasti.

[0189] Jedinjenja mogu biti takođe testirana ćelijskim modelima napravljenim za procenjivanje njihove jačine aktivnosti i aktivnosti naspram mutanta JAKs, na primer, JAK2V617F mutacije nađene u mijeloidnim proliferativnim poremećajima. Ovi eksperimeti često koriste ćelije zavisne od citokina hematološke linije (npr. BaF/3) u koje divlji tip ili mitant JAK kinaza su ektopijski eksprimovani (James, C., et al. Nature 434:1144-1148; Staerk, J., et al. JBC 280:41893-41899). Krajnje tačke uključuju efekte jedinjenja na ćelijsko preživljavanje, proliferaciju i fosforilovane JAK, STAT, Akt, ili Erk proteine.

[0190] Ovde izvesna jedinjenja mogu biti procenjena na njihovu aktivnost da inhibiraju proliferaciju T-ćelija. Takav test se može smatrati drugim testom proliferacije vođene citokinima (tj. JAK) i takođe simplikovanim testom imune supresije ili inhibicije imune aktivacije. Sledi kratak opis kako takvi eksperimenti mogu biti izvedeni. Periferne mononuklearne ćelije krvi (PBMCs) su pripremljene iz uzoraka celokupne krvi pomoću Ficoll Hypaque postupka odvajanja i T-ćelija (frakcija 2000) može biti dobijena iz PBMCs elutriacijom. Sveže izolovane humane T-ćelije mogu biti održavane u medijumu za kulture (RPMI 1640 obogaćenim sa 10% fetalnim goveđim serumom, 100 U/ml penicillin, 100 mg/ml streptomicin) pri gustini od 2 x 10<6>ćelija/ml na 37 °C u toku do 2 dana. Za IL-2 stimulisanu analizu ćelijske proliferacije , T-ćelije su prvo tretirane sa fitohemaglutininom (PHA) na krajnjoj koncentraciji od 10 mg/mL u toku 72 sata. Posle ispiranja jednom sa PBS, 6000 ćelija/bunarčiću su zasejane na ploče sa 96-bunarčića i tretirane sa jedinjenjeima u različitim koncentracijama u medijumu za kulture u prisustvu 100 U/mL human IL-2 (ProSpec-Tany TechnoGene; Rehovot, Israel). Ploče su inkubirane na 37 °C u toku 72h i proliferacioni indeks je procenjivan pomoću CellTiter-Glo Luminescentnih reagenasa prema protokolu sugerisanom od proizvođača (Promega; Madison, WI).

Test C. Model S100A9 transgenog miša

[0191] Ranije je pokazano da S100A9 transgeni miš pokazuje akumulaciju MDSC koštane srži zajedno sa razvojem progresivne multilinearne citopenije i citološke displazije slične MDS. Dalje, rano izazvano sazrevanje MDSC sa ili tretmanom all-trans-retinskom kiselinom ili prekidom aktivacije motiva aktivnog imunoreceptora na bazi tirozina (ITAM-bearing) proteina adaptera (DAP12) CD33 signalizacije spašava hematološki fenotip i ublažava bolest. Ovaj sistem može biti koristan za testiranje efekata na JAK1 inhibiciju na bolesti slične MDS na predkliničkom modelu. J. Clin. Invest., 123(11):4595-4611 (2013). Prema tome, JAK1 selektivni inhibitor je doziran oralnom gavažom. Praćena je sposobnost jedinjenja da redukuje citopeniju i citološku displaziju primećeni su kod S100A9 transgenog miša.

Claims (33)

Patentni zahtevi

1. Selektivni inhibitor JAK1 izabran između:

3-[1-(6-hloropiridin-2-il)pirolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril; 3-(1-[1,3]oksazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propannitril;

4-[(4-{3-cijano-2-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitril;

4-[(4-{3-cijano-2-[3-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirol-1-il]propil}piperazin-1-il)karbonil]-3-fluorobenzonitril;

{1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoyl]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril;

4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1-karboksamid;

[3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il]acetonitril;

[trans-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-3-(4-{[2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]karbonil}piperazin-1-il)ciklobutil]acetonitril;

{trans-3-(4-{[4-[(3-hidroksiazetidin-1-il)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril;

{trans-3-(4-{[4-{[(2S)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril;

{trans-3-(4-{[4-{[(2R)-2-(hidroksimetil)pirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril;

4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorophenoksi}piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butannitril;

5-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-izopropilpirazin-2-karboksamid;

4-{3-(cijanometil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamid;

5-{3-(cijanometil)-3-[4-(1H-pirolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-izopropilpirazin-2-karboksamid;

{1-(cis-4-{[6-(2-hidroksietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitril;

{1-(cis-4-{[4-[(etilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitril;

{1-(cis-4-{[4-(1-hidroksi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitril;

{1-(cis-4-{[4-{[(3R)-3-hidroksipirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7Hpirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril;

{1-(cis-4-{[4-{[(3S)-3-hidroksipirolidin-1-il]metil}-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}cikloheksil)-3-[4-(7Hpirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril;

{trans-3-(4-{[4-({[(1S)-2-hidroksi-1-metiletil]amino}metil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril;

{trans-3-(4-{[4-({[(2R)-2-hidroksipropil]amino}metil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril;

{trans-3-(4-{[4-({[(2S)-2-hidroksipropil]amino}metil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi}piperidin-1-il)1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril; i

{trans-3-(4-{[4-(2-hidroksietil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]oksi} piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciklobutil}acetonitril;

ili njihove farmaceutski prihvatljive soli, za upotrebu u postupku lečenja mijelodisplastičnog sindroma kod pacijenta kome je to potrebno, postupak obuhvata davanje pomenutom pacijentu terapeutski efekansne količine selektivnog inhibitora JAK1, ili njegove farmaceutski prihvatljive soli.

2. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1, gde selektivni inhibitor JAK1 je selektivan za JAK1 u odnosu na JAK2, JAK3, i TYK2.

3. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, gde pomenuti mijelodisplastični sindrom je refraktorna citopenija sa nelinearnom displazijom (RCUD).

4. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, gde pomenuti mijelodisplastični sindrom je refraktorna anemija sa prstenastim sideroblastima (RARS).

5. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, gde pomenuti mijelodisplastični sindrom je refraktorna citopenija sa multilinearnom dispelazijom.

6. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, gde pomenuti mijelodisplastični sindrom je refraktorna anemija sa viškom blasta-1 (RAEB-1).

7. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, gde pomenuti mijelodisplastični sindrom je refraktorna anemija sa viškom blasta-2 (RAEB-2).

8. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, gde pomenuti mijelodisplastični sindrom je mijelodisplastični sindrom, neklasifikovani (MDS-U).

9. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, gde pomenuti mijelodisplastični sindrom je mijelodisplastični sindrom u vezi sa izolovanom del(5q).

10. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1 ili 2, gde pomenuti mijelodisplastični sindrom je refraktorni prema eritropoetski-stimulišućim sredstvima.

11. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1 do 10, gde je pomenuti pacijent zavisan od transfuzije crvenih krvnih zrnaca.

12. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 1 do 11, gde postupak dalje obuhvata davanje dodatnog terapeutskog sredstva izabranog između IMiD, anti-IL-6 sredstva, anti-TNF-a sredstva, hipometilacionog sredstva ili modifikatora biološkog odgovora (BRM).

13. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 12, gde pomenuto anti-TNF-a sredstvo je izabrano između infliksimaba i etanercepta.

14. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 12, gde je pomenuto hipometilaciono sredstvo inhibitor DNK metiltransferaze.

15. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 14, gde pomenuti inhibitor DNK metil transferaze je izabran između 5 azacitidina i decitabina.

16. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 12, gde je pomenuti IMiD izabran između talidomida, lenalidomida, pomalidomida, CC-11006, i CC-10015.

17. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema bilo kom od zahteva 1 do 11, gde postupak dalje obuhvata davanje dodatnog terapeutskog sredstva izabanog između antitimocitnog globulina, stimulišućeg faktora kolonija rekombinantnih humanih granulocita (G CSF), granulocitni-monocitni CSF (GM-CSF), eritropoetski-stimulišuće sredstvo (ESA), i ciklosporin.

18. Selektivni inhibitor AJAK1 koji je {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)izonikotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitril, ili njegova farmaceutski prihvatljiva so , za upotrebu u postupku lečenja mijelodisplastičnog sindroma kod pacijena kome je to potrebno.

19. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 18, gde mijelodisplastični sindrom je refraktorna citopenija sa nelinearnom displazijom (RCUD).

20. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 18, gde mijelodisplastični sindrom je refraktorna anemija sa prstenastim sideroblastima (RARS).

21. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 18, gde mijelodisplastični sindrom je refraktorna citopenija sa multilinearnom displazijom.

22. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 18, gde mijelodisplastični sindrom je refraktorna anemija sa viškom blasta-1 (RAEB-1).

23. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 18, gde mijelodisplastični sindrom je refraktorna anemija sa viškom blasta-2 (RAEB-2).

24. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 18, gde mijelodisplastični sindrom je mijelodisplastični sindrom, neklasifikovani (MDS-U).

25. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 18, gde mijelodisplastični sindrom je mijelodisplastični sindrom u vezi sa izolovanom del(5q).

26. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 18, gde mijelodisplastični sindrom je refraktorno do eritropoietsko –stimulišuće sredstvo.

27. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema bilo kom od zahteva 18 do 26, gde pomenuti pacijent je zavisan od transfuzije crvenih krvnih zrnaca.

28. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema bilo kom od zahteva 18 do 27, gde postupak dalje obuhvata davanje dodatnog terapeutskog sredstva izabranog između IMiD, anti-IL-6 sredstva, anti-TNF-a sredstva, hipometilacionog sredstva, ili modifikatora biološkog odgovora (BRM).

29. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 28, gde pomenuto anti-TNF-a sredstvo je izabrano između infliksimaba i etanercepta.

30. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 28, gde je pomenuto hipometilaciono sredstvo inhibitor DNK metiltransferaze.

31. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 30, gde pomenuti inhibitor DNK metil transferaze je izabran između 5 azacitidina i decitabina.

32. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema zahtevu 28, gde je pomenuti IMiD izabran između talidomida, lenalidomida, pomalidomida, CC-11006, i CC-10015.

33. Selektivni inhibitor JAK1, ili njegova farmacetuski prihvatljiva so, za upotrebu prema bilo kom od zahteva 18 do 27, gde postupak dalje obuhvata davanje dodatnog terapeutskog sredstva izabranog između antitimocitnog globulina, stimulišućeg faktora kolonija recombinantnih humanih granulocita (G CSF), granulocitno-monocitnog CSF (GM-CSF), eritropoetskog-stimulišućeg sredstva (ESA), i ciklosporina.

Izdaje i štampa: Zavod za intelektualnu svojinu, Beograd, Kneginje Ljubice 5