BR112016019511B1 - Uso de inibidores de jak1 para o tratamento de síndromes mielodisplásicas - Google Patents

Abstract

USO DE INIBIDORES DE JAK1 PARA O TRATAMENTO DE SÍNDROMES MIELODISPLÁSICAS. A presente invenção está relacionada a inibidores seletivos de JAK1, particularmente, pirrolopirimidina e derivados de pirrolopiridina e seu uso no tratamento de síndromes mielodisplásicas (SMD).

Description

[001] Este pedido reivindica o benefício de prioridade do pedido provisório US n° 61/946.124, depositado em 28 de fevereiro de 2014, que está aqui integralmente incorporado, por referência.

CAMPO TÉCNICO

[002] Esta invenção está relacionada a inibidores seletivos de JAK1 e seu uso no tratamento de síndromes mielodisplásicas (SMD). ANTECEDENTES

[003] As síndromes mielodisplásicas (SMD), conhecidas anteriormente como síndromes dismielopoiéticas ou pré-leucemia, são distúrbios hematopoiéticos heterogêneos e clonais que são caracterizados por hematopoese ineficaz em uma ou mais das principais linhagens de células mieloides. As síndromes mielodisplásicas estão associadas com insuficiência da medula óssea, citopenias do sangue periférico e uma propensão para progredir para leucemia mieloide aguda (LMA). Além disso, anormalidades citogenéticas clonais podem ser detectadas em cerca de 50% dos casos com SMD. Na população geral, a SMD ocorre em 5 por 100.000 e a incidência aumenta com a idade, atingindo cerca de 22 a 45 por 100.000 em indivíduos com mais de 70 anos (Greenberg, "The myelodysplastic syndromes" in Hoffman, et al., eds. Hematology: Basic Principles and Practice (3a ed.), Churchill Livingston; 2000:1106-1129; Liesveld e Lichtman, capítulo 88. "Myelodysplastic Syndromes (Clonal Cytopenias and Oligoblastic Myelogenous Leukemia)", em Prchal et al., eds. Williams Hematology. 8a ed., New York: McGraw-Hill; 2010). Apesar dos avanços científicos em nosso conhecimento sobre a patofisiologia da SMD, há poucas opções terapêuticas disponíveis e elas são predominantemente paliativas, especificamente quando os pacientes afetados não são candidatos para o transplante de células tronco hematopoiéticas (HSCT).

[004] O padrão de tratamento para a SMD inclui tratamento de suporte que envolve a observação e o monitoramento clínico, suporte psicossocial, e esforços para melhorar o QOL (Cheson, et al., Blood 2000;96:3671-3674; Venugopal et al. Cancer Treat Res 2001;108:257- 265; Greenberg, Int J Ped Hem-Onc 1997;4:231-238). Além disso, transfusões de eritrócitos (red blood cells, RBC) para anemia sintomática e transfusões de plaquetas para episódios de sangramento por trombocitopenia são necessárias. Os pacientes com síndrome mielodisplásica que precisam de transfusões de RBC podem desenvolver complicações incluindo o desenvolvimento de aloanticorpos que exigem o aumento da frequência das transfusões e sobrecarga de ferro com lesão de órgão terminal ao fígado, coração, e órgãos endócrinos o que exige quelação por ferro para manter a ferritina sérica em < 1.000 μg/L (Venugopal et al. 2001 (supra), Greenberg 1997 (supra)). Em casos com citopenia sintomática refratária, o suporte com citocinas hematopoiéticas é necessário, como o uso de granulócitos (G CSF) humano recombinante ou fator estimulante de colônia de granulócitos-monócitos (GM-CSF) para SMD neutropênica com complicações infecciosas, e agente estimulante da eritropoiese (AEE) para anemia sintomática (Cheson et al. 2000 (supra), Jadersten et al., Blood 2005;106:803-811; Schiffer, Hematology Am Soc Hematol Educ Program 2006:205-210). Na SMD inicial, i.e, IPSS baixo e IPSS intermediário-1, a anemia sintomática é a razão mais comum que exige intervenção terapêutica. O AEE beneficia apenas uma fração destes pacientes com a resposta mais elevada vista em pacientes que não são dependentes da transfusão de RBC ou aqueles com um baixo nível de EPO endógeno (< 500 IU) (Cheson et al. 2000 (supra), Jadersten et al. 2005 (supra), Schiffer 2006 (supra), Fenaux, et al., Lancet Oncol 2009;10:223-232). Eventualmente, os pacientes param de responder à terapia com AEE e exigem suporte por transfusão de RBC, embora o AEE seja tipicamente continuado mesmo quando as transfusões de RBC são necessárias e as contagens de reticulócitos são baixas. A necessidade de transfusão pode variar e pode ser influenciada por problemas médicos concomitantes que exigem um maior teor de Hgb como angina, desenvolvimento de aloanticorpos contra RBC, esplenomegalia e hemorragia gastrointestinal oculta por trombocitopenia ou disfunção plaquetária (Venugopal et al. 2001 (supra), Greenberg 1997 (supra), Fenaux et al. 2009 (supra)).

[005] A terapia de baixa intensidade inclui o uso de quimioterapia de baixa intensidade ou modificadores da resposta biológica (BRM). Foi mostrado que agentes hipometilantes como inibidores da DNA metiltransferase 5 azacitidina e decitabina (5-aza-2’-desoxicitidina) reduzem o risco de transformação leucêmica em estudos de fase 3 randomizados e melhoram a sobrevida global em uma proporção de pacientes (Fenaux et al. 2009 (supra), Silverman, J Clin Oncol 2002;20:2429-2440; Silverman, J Clin Oncol 2006;24:3895-3903). De modo similar, a decitabina demonstrou uma maior taxa de resposta da doença, duração da remissão, tempo até progressão para LMA, e benefício de sobrevida em pacientes com SMD com doença de risco intermediário e de alto risco. Além disso, a decitabina demonstrou um aprimoramento significativo na qualidade de vida relatada pelo paciente (com base na Organização Europeia para Pesquisa e Tratamento de Câncer [European Organisation for Research and Treatment of Cancer, EORTC QLQ C30]) para as dimensões de fadiga e funcionamento físico (Kantarjian, et al., Cancer 2006;106:1794-1803; Lübbert, et al., Br J Haematol 2001;114:349-357; Lübbert, et al., J Clin Oncol 2011;29:1987-1996). Tanto a 5-azacitidina quanto a decitabina são aprovadas para o tratamento de SMD e fornecem, especificamente, benefícios clínicos e são recomendadas pelo painel de SMD da NCCN para pacientes com SMD de IPSS intermediária 2 e de alto risco (National Comprehensive Cancer Network (NCCN). Myelodysplastic Syndromes Guidelines, versão 1. 2012. www.nccn.org/professionals/physician gls/fguidelines. asp).

[006] As moléculas inflamatórias foram implicadas como sinais reguladores que direcionam a proliferação e a morte apoptótica dos progenitores hematopoiéticos na SMD. Acredita-se que a estimulação imune crônica acoplada com alterações dependentes da senescência nas células tronco /progenitoras hematopoiéticas (HSPC) e no microambiente de BM tenha importância crítica na patogênese da doença. Evidências crescentes implicam a ativação da sinalização imune inata na senescência hematopoiética e na patobiologia da SMD (Chen et al., 2014). Desta forma, modificadores imunes que incluem inibidores de células T como globulina antitimócito (ATG), ciclosporina, e talidomida e seu análogo lenalidomida (Molldrem, et al., Br J Haematol 1997;99:699-705; Sloand, et al., J Clin Oncol 2008;26:2505- 2511; Raza, et al., Blood 2008;111:86-93; Fenaux, et al., Blood 2011;118:3765-3776; List, et al., N Engl J Med 2005;352:549-557) são usados como agentes de baixa intensidade para a SMD. A terapia de alta intensidade para SMD inclui quimioterapia de indução intensa, tal como é usado para o tratamento de LMA e transplante de células tronco hematopoiéticas (HSCT). Diferentes regimes quimioterápicos intensos foram testados já que eles têm o potencial de alterar a história natural da doença e estudos comparativos falharam em mostrar benefício; esta abordagem permanece em investigação e uma possível opção para pacientes com SMD com doença de alto risco. O HSCT alogênico, a única modalidade de tratamento curativo para a SMD e, de preferência, de um doador irmão compatível, é uma opção preferida para pacientes com SMD de alto risco, mas a falta de doador adequado e as comorbidades relacionadas com a idade avançada frequentemente impedem que estes pacientes sejam submetidos a este procedimento (NCCN 2012 (supra); Larson, Best Pract Res Clin Hematol 2006;19:293-300; Schiffer, Best Pract Res Clin Hematol 2007;20:49-55).

[007] Consequentemente, existe uma necessidade de se desenvolver novas terapias para o tratamento de síndromes mielodisplásicas. Este pedido aborda esta necessidade e outras.

SUMÁRIO

[008] O presente pedido fornece métodos de tratamento de uma síndrome mielodisplásica (SMD) em um paciente que necessita do mesmo, que compreende administrar ao dito paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor seletivo de JAK1 ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo.

[009] O presente pedido fornece ainda um inibidor seletivo de JAK1 para o tratamento de uma síndrome mielodisplásica em um paciente que necessita do mesmo.

[0010] O presente pedido fornece também o uso de um inibidor seletivo de JAK1 para a fabricação de um medicamento para uso no tratamento de uma síndrome mielodisplásica em um paciente que necessita do mesmo.

DESCRIÇÃO DETALHADA

[0011] Os métodos aqui descritos utilizam inibidores seletivos de JAK1. Um inibidor seletivo de JAK1 é um composto que inibe a atividade de JAK1, de preferência, em relação a outras Janus quinases. A JAK1 desempenha uma função central em várias vias de sinalização de citocinas e fatores de crescimento que, quando desreguladas, podem resultar ou contribuir para estados de doença. Por exemplo, os níveis de IL-6 estão elevados na artrite reumatoide, uma doença em que foi sugerido que ele tem efeitos prejudiciais (Fonesca, et al., Autoimmunity Reviews, 8:538-42, 2009). Pelo fato de a IL-6 sinalizar, ao menos em parte, através de JAK1, antagonizando a IL-6 diretamente ou indiretamente através de JAK1, espera-se que a inibição forneça benefício clínico (Guschin, et al. Embo J 14:1421, 1995; Smolen, et al. Lancet 371:987, 2008). Além disso, em alguns cânceres, a JAK1 é mutada, resultando em crescimento e sobrevivência da célula tumoral indesejáveis e constitutivas (Mullighan, Proc Natl Acad Sci U S A.106:9414-8, 2009; Flex, J Exp Med. 205:7518, 2008). Em outras doenças autoimunes e cânceres, os níveis sistêmicos elevados de citocinas inflamatórias que ativam a JAK1 podem também contribuir para a doença e/ou sintomas associados. Portanto, pacientes com estas doenças podem se beneficiar da inibição de JAK1. Os inibidores seletivos de JAK1 podem ser eficazes enquanto evitam os efeitos desnecessários e potencialmente indesejáveis de inibir outras JAK quinases.

[0012] Os inibidores seletivos de JAK1, em relação a outras JAK quinases, podem ter múltiplas vantagens terapêuticas em relação aos inibidores menos seletivos. Com relação à seletividade contra JAK2, várias citocinas e fatores de crescimento importantes sinalizam através de JAK2 incluindo, por exemplo, eritropoietina (Epo) e trombopoietina (Tpo) (Parganas, et al. Cell. 93:385-95, 1998). A Epo é um fator de crescimento chave para a produção de eritrócitos; portanto, uma escassez de sinalização dependente de Epo pode causar números reduzidos de eritrócitos e anemia (Kaushansky, NEJM 354:2034-45, 2006). A Tpo, um outro exemplo de um fator de crescimento dependente de JAK2, desempenha uma função central no controle da proliferação e maturação dos megacariócitos - as células a partir das quais as plateletas são produzidas (Kaushansky, NEJM 354:2034-45, 2006). Desta forma, a sinalização de Tpo reduzida diminuiria os números de megacariócitos (megacariocitopenia) e as contagens de plaquetas circulantes (trombocitopenia). Isto pode resultar em sangramento indesejável e/ou incontrolável. A inibição reduzida de outras JAKs, como JAK3 e Tyk2, pode, também, ser desejável já que foi mostrado que seres humanos sem uma versão funcional destas quinases sofrem de várias doenças como imunodeficiência combinada grave ou síndrome da hiperimunoglobulina E (Minegishi, et al. Immunity 25:745-55, 2006; Macchi, et al. Nature, 377:65-8, 1995). Portanto, um inibidor de JAK1 com menor afinidade por outras JAKs teria vantagens significativas em relação a um inibidor menos seletivo no que diz respeito aos efeitos colaterais reduzidos envolvendo supressão imune, anemia e trombocitopenia.

[0013] As citoquinas inflamatórias desempenham uma função significativa na patogênese da SMD, que resulta em citopenias e hematopoese displásica. Acredita-se na hipótese de que a restrição da atividade destas citoquinas inflamatórias irá promover hematopoese normal e aliviar os precursores da medula de apoptose prematura. As citocinas inflamatórias medeiam os efeitos a jusante pela ativação de JAK que envolve a justaposição de JAKs a partir da dimerização e trans/autofosforilação do receptor mediada pelo ligante. Os heterodímeros de JAK resultantes compreendidos de JAK1 e JAK2 ou JAK1 e JAK3 transduzem sinais e medeiam as respostas celulares destas citocinas. Além disso, os homodímeros de JAK compostos apenas de JAK2 transduzem sinais de fatores de crescimento da medula óssea, como EPO, que é responsável por estimular a eritropoiese, e TPO, que é responsável por estimular a trombopoiese. Portanto, um inibidor de JAK1 seletivo resultaria em interrupção da sinalização de citocinas inflamatórias sem inibir a eritropoiese e a trombopoiese mediadas por JAK2 resultando no reestabelecimento da hematopoese normal e alívio das citopenias mieloides.

[0014] Apesar dos avanços científicos em nosso conhecimento sobre a patofisiologia da SMD, há poucas opções terapêuticas disponíveis e elas são predominantemente paliativas, especificamente quando os pacientes afetados não são candidatos para o HSCT. Vários estudos indicaram que a SMD é uma doença clonal e demonstraram que o clone expandido foi um resultado de proliferação excessiva dos progenitores hematopoiéticos na medula óssea. O paradoxo de um estado hiperproliferativo na medula que leva a citopenias periféricas foi investigado e foi revelado que havia uma quantidade excessiva de morte celular programada ou apoptose intramedular das células hematopoiéticas. Esta apoptose foi vista em pacientes com todas as categorias de FAB, mas foi diminuída em pacientes com contagens de blastos aumentadas. Parece que uma população clonal se tornou progressivamente resistente à apoptose e ganhou uma vantagem proliferativa em relação aos precursores hematopoiéticos normais que levaram ao aumento nas contagens de blastos e à evolução para LMA. Também ficou evidente que a apoptose excessiva foi amplamente mediada por várias citocinas pró- inflamatórias que estão superexpressas nas medulas de pacientes com SMD. As citocinas que foram implicadas na patobiologia da SMD incluem o fator de necrose tumoral-alfa (TNF-α), o interferon-gama (IFN Y) e a IL 1β. Elevada concentração plasmática de TNF-α, uma citocina pró-apoptótica clássica, foi observada no sangue periférico e na medula óssea de pacientes com SMD e uma expressão mais elevada dos receptores de TNF e do ácido ribonucleico mensageiro (mRNA) foi observada em células mononucleares da medula óssea derivadas de pacientes com SMD. De modo similar, uma quantidade aumentada de IFN y e IL 1β foi encontrada em células mononucleares da medula óssea de SMD e a IL-1β foi implicada na evolução da LMA a partir de SMD. A IL-1β tem efeitos regulatórios variáveis sobre as células hematopoiéticas já que ela estimula o GM-CSF e a IL-3, enquanto que em maiores concentrações, conforme visto em estados inflamatórios, ela leva à supressão da hematopoese pela indução de TNF α e prostaglandina E2, a última sendo um potente supressor da proliferação de células-tronco mieloides. Além disso, altos teores de IL-6, de fator de crescimento de fibroblasto, fator de crescimento de hepatócito, e fator de crescimento de transformação β foram vistos em células mieloides de pacientes com SMD. Além disso, as únicas citocinas que suprimem a proliferação e a maturação hematopoiéticas normais falham em exercer este efeito pró apoptótico no clone anormal em desenvolvimento que resulta na proliferação seletiva destas células anormais. Há evidências de que a fonte destas citocinas pró- inflamatórias é o microambiente alterado da medula óssea que normalmente nutre as células hematopoiéticas normais a proliferar e se diferenciar, e pode, também, ser a razão para a infiltração das células reguladoras imunes e angiogênese que contribuem para a patobiologia da SMD (Raza, et al., Blood 1995;86:268-276; Raza, et al., Int J Hematol 1996a;63:265-278; Raza, et al., Leuk Res 1996b;20:881-890; Mundle, et al. Am J Hematol 1999;60:36-47; Claessens, et al., Blood 2002;99:1594-1601).

[0015] O conceito de que o estado pró inflamatório mediado por citocinas é responsável pela etiologia da SMD levou à nova abordagem de terapia anticitocinas para melhorar as citopenias na SMD por proteger as células hematopoiéticas em diferenciação da apoptose prematura. Houve demonstração de que agentes antitNF-α como talidomida e seus análogos lenalidomida, infliximabe, e etanercept foram eficazes na melhora das citopenias em pacientes com SMD (NCCN 2012 (supra), Larson 2006 (supra), Schiffer 2007(supra)). Em um estudo de 14 pacientes com SMD, o etanercept mostrou aprimoramento hematológico eritroide em 25% dos pacientes junto com aprimoramento nas contagens de plaquetas e ANC em 12,5% dos pacientes avaliáveis. Adicionalmente, a combinação de etanercept intermitente com ATG resultou em um maior aprimoramento hematológico eritroide e 5 dos 14 pacientes com SMD que precisavam de transfusão se tornaram independentes de transfusão de RBC e plaquetas que durou mais de 2 anos. Em um estudo investigando a talidomida em SMD, dos 83 pacientes incluídos, 51 completaram 12 semanas de terapia e 16 pacientes mostraram aprimoramento hematológico com 10 pacientes anteriormente dependentes de transfusão se tornando independentes de transfusão e a maior parte dos indivíduos responsivos estava na categoria de risco IPSS de baixo risco ou de risco intermediário 1 (NCCN 2012 (supra)). Além disso, os pacientes em categorias de risco mais elevadas, especialmente com uma alta porcentagem de blastos, tenderam a descontinuar o tratamento precocemente. Uma abordagem para conter os efeitos das citocinas pró-inflamatórias é inibir suas respostas celulares. Um número considerável de receptores de citocinas e de fatores de crescimento utiliza a família JAK de TYKs não receptoras para transmitir a ligação ao ligante extracelular em uma resposta celular através da sinalização por STAT do fator de transcrição.

[0016] Há 4 membros de JAKs: JAK1, JAK2, JAK3, e TYK2. As JAKs são constitutivamente associadas a receptores de citocinas e de fatores de crescimento e se tornam ativadas como uma consequência imediata da dimerização do receptor induzida pelo ligante, a ativação de JAK ocorre mediante a justaposição subsequente das JAKs e da trans/autofosforilação das tirosinas conservadas encontradas na alça de ativação do domínio catalítico de JAK. Mediante fosforilação destas tirosinas, as JAKs entram em um estado de alta atividade e são, então, capazes de fosforilar resíduos de tirosina específicos nos receptores de citocina que servem como sítios de atracamento para múltiplas proteínas, incluindo as proteínas STAT. As JAKs são a principal família de quinases associadas à ativação de STAT. As STATs ativadas se translocam para o núcleo onde funcionam como fatores de transcrição e direcionam a expressão de múltiplos genes importantes para a ativação, localização, sobrevivência, e proliferação celular.

[0017] O ruxolitinibe, um inibidor de JAK1 e de JAK2, demonstrou redução acentuada no tamanho do baço em pacientes com mielofibrose e aprimoramento dos sintomas. Estes aprimoramentos foram evidentes em indivíduos com e sem a presença da mutação V617F em JAK2 e estão provavelmente relacionados à inibição das citocinas pró-inflamatórias. Os eventos adversos primários (AEs) observados com ruxolitinibe são trombocitopenia e anemia; com pouca frequência ambos foram a causa de descontinuação do estudo em um estudo de fase 3, duplo cego, controlado por placebo e ambos são causados ao menos em parte à mielossupressão mediada por JAK2. Acredita-se, portanto, na hipótese de que a inibição selevativa de JAK1 exerceria um efeito salutar de inibição as citocinas pró- inflamatórias em pacientes com SMD e resultaria na melhora das citopenias resultantes da apoptose prematura dos precursores hematopoiéticos. Além disso, poupar a atividade de JAK2 permitiria a atividade fisiológica das citoquinas hematopoiéticas, especificamente EPO e TPO, para permitir a proliferação e a diferenciação fisiológicas das células hematopoiéticas normais.

[0018] Adicionalmente, sobrecarga de ferro ocorre frequentemente em pacientes com SMD, com dados recentes sugerindo um impacto tanto na sobrevida global quanto na sobrevida livre de leucemia. Postulou-se que uma produção alterada de hepcidina, o hormônio chave recentemente descoberto que regula a homeostase do ferro, pode desempenhar um papel neste sentido e pode ser regulado por citoquinas inflamatórias como a IL-6. Foi recentemente mostrado em SMD que tanto a hepcidina quanto a proteína C-reativa, como um marcador de inflamação geral, estão elevados. Santini, et al., PLoS One, 6(8), e23109, páginas 1-8 (2011). Estes dados sugerem que a inibição de JAK, que pode reduzir os níveis de proteína C-reativa e de hepcidina, pode reverter a inflamação e a sobrecarga de ferro que ocorre na SMD.

[0019] Consequentemente, o presente pedido fornece, entre outros, um método de tratar uma síndrome mielodisplásica em um paciente que necessita do mesmo, que compreende administrar ao dito paciente uma quantidade terapeuticamente eficaz de um inibidor seletivo de JAK1, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Como usado aqui, uma síndrome mielodisplásica se refere à classificação da SMD proposta pela Organização Mundial de Saúde em 2008 (consulte, por exemplo, a Tabela 1). Em particular, em 1997, a Organização Mundial de Saúde (OMS) em conjunto com a Sociedade para Hematopatologia (Society for Hematopathology, SH) e a Associação Europeia de Hematopatologia (European Association of Hematopathology, EAHP) propuseram novas classificações para as neoplasias hematopoiéticas (Harris, et al., J Clin Oncol 1999;17:3835- 3849; Vardiman, et al., Blood 2002;100:2292-2302). Para a SMD, a OMS utilizou não apenas os critérios morfológicos da classificação francesa-americana-britânica (FAB), mas também incorporou as características genéticas, biológicas, e clínicas disponíveis para definir subconjuntos de SMD (Bennett, et al., Br J Haematol 1982;51:189- 199). Em 2008, a classificação da OMS de SMD (Tabela 1) foi adicionalmente refinada para permitir uma subclassificação precisa e prognosticamente relevante de displasia unilinhagem pela incorporação de novas informações clínicas e científicas (Vardiman, et al., Blood 2009;114:937-951; Swerdlow, et al., WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues 4a edição Lyon, França: IARC Press; 2008:88-103; Bunning and Germing, "Myelodysplastic syndromes/neoplasms" no capítulo 5, Swerdlow, et al., eds. WHO Classification of Tumours of Haematopoietic and Lymphoid Tissues. (ed. 4a edição): Lyon, França: IARC Press;2008:88- 103). Tabela 1: Classificação da OMS de 2008 para síndrome mielodisplásica de novo

[0020] Em algumas modalidades, o inibidor seletivo de JAK1 é seletivo para JAK1 em detrimento de JAK2, JAK3, e TYK2. Por exemplo, os compostos aqui descritos, ou um sal farmaceuticamente aceitável dos mesmos, inibem, de preferência, JAK1 em relação a um ou mais dentre JAK2, JAK3 e TYK2. Em algumas modalidades, os compostos inibem JAK1 preferencialmente a JAK2 (por exemplo, têm uma razão deIC50 de JAK1/JAK2 >1). Em algumas modalidades, os compostos ou sais são cerca de 10 vezes mais seletivos para JAK1 do que JAK2. Em algumas modalidades, os compostos ou sais são cerca de 3 vezes, cerca de 5 vezes, cerca de 10 vezes, cerca de 15 vezes, ou cerca de 20 vezes mais seletivos para JAK1 do que JAK2 conforme calculado mediante a medição da IC50 a 1 mM de ATP (por exemplo, consulte o Exemplo A).

[0021] Em algumas modalidades, o inibidor seletivo de JAK1 é um composto da Tabela 2, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. + significa <10 nM (veja o exemplo A para as condições do ensaio) a Dados para o enantiômero 1 b Dados para o enantiômero 2

[0022] Em algumas modalidades, o inibidor seletivo de JAK1 é o sal de ácido adípico de {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil] pi- peridin-4-il}-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitrila.

[0023] Em algumas modalidades, o inibidor seletivo de JAK1 é selecionado dentre (R)-3-[1-(6-cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4-(7H- pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila, (R)-3-(1-oxazolo piridin-2-ilpirrolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]propanonitrila, (R)-4-[(4-{3-ciano-2-[4-(7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il] propil}piperazin-1-il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila, (R)-4-[(4- {3-ciano-2-[3-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirrol-1-il]propil}piperazin-1- il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila, ou (R)-4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5- fluorofenóxi} piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]butanonitrila; ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer um dos supracitados.

[0024] Em algumas modalidades, o inibidor seletivo de JAK1 é selecionado dentre (S)-3-[1-(6-cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4-(7H- pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila, (S)-3-(1- oxazolopiridin-2-ilpirrolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol- 1-il]propanonitrila, (S)-4-[(4-{3-ciano-2-[4-(7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il] propil}piperazin-1-il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila, (S)-4-[(4- {3-ciano-2-[3-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirrol-1-il]propil}piperazin-1- il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila, ou (S)-4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5- fluorofenóxi} piperidin-1-il)-3-[4-(7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]butanonitrila; ou um sal farmaceuticamente aceitável de qualquer um dos supracitados.

[0025] Em algumas modalidades, o inibidor seletivo de JAK1 é GLPG0634 (Galapagos).

[0026] Em algumas modalidades, os compostos da Tabela 2 são preparados pelos procedimentos sintéticos descritos na publicação de patente US n° 2010/0298334, depositada em 21 de maio de 2010, publicação de patente US n° 2011/0059951, depositada em terça-feira, 31 de agosto de 2010, publicação de patente US n° 2011/0224190, depositada em quarta-feira, 9 de março de 2011, publicação de patente US n° 2012/0149681, depositada em sexta-feira, 18 de novembro de 2011, publicação de patente US n° 2012/0149682, depositada em sexta-feira, 18 de novembro de 2011, publicação de patente US 2013/0018034, depositada em 19 de junho de 2012, publicação de patente US n° 2013/0045963, depositada em 17 de agosto de 2012 e publicação de patente US n° 2014/0005166, depositada em 17 de maio de 2013, cada uma das quais está aqui incorporada, a título de referência em sua totalidade.

[0027] Em algumas modalidades, o inibidor de JAK1 é selecionado a partir dos compostos da publicação de patente US n° 2010/0298334, depositada em 21 de maio de 2010, publicação de patente US n° 2011/0059951, depositada em terça-feira, 31 de agosto de 2010, publicação de patente US n° 2011/0224190, depositada em quarta- feira, 9 de março de 2011, publicação de patente US n° 2012/0149681, depositada em sexta-feira, 18 de novembro de 2011, publicação de patente US n° 2012/0149682, depositada em sexta-feira, 18 de novembro de 2011, publicação de patente US 2013/0018034, depositada em 19 de junho de 2012, publicação de patente US n° 2013/0045963, depositada em 17 de agosto de 2012 e publicação de patente US n° 2014/0005166, depositada em 17 de maio de 2013, cada uma das quais está aqui incorporada, a título de referência em sua totalidade.

[0028] Em algumas modalidades, a síndrome mielodisplásica é citopenia refratária com displasia unilinhagem (RCUD).

[0029] Em algumas modalidades, a síndrome mielodisplásica é anemia refratária com sideroblastos em anel (RARS).

[0030] Em algumas modalidades, a síndrome mielodisplásica é citopenia refratária com displasia multilinhagem.

[0031] Em algumas modalidades, a síndrome mielodisplásica é anemia refratária com excesso de blastos-1 (RAEB-1).

[0032] Em algumas modalidades, a síndrome mielodisplásica é anemia refratária com excesso de blastos-2 (RAEB-2).

[0033] Em algumas modalidades, a síndrome mielodisplásica é síndrome mielodisplásica, não classificada (MDS-U).

[0034] Em algumas modalidades, a síndrome mielodisplásica é síndrome mielodisplásica associada à del(5q) isolada.

[0035] Em algumas modalidades, a síndrome mielodisplásica é refratária a agentes estimulantes da eritropoiese (ESAs). Em algumas modalidades, refratário a ESAs significa que não há melhora no Hgb de ao menos 1,5 g/dL após 8 semanas de ao menos 40.000 IU/sema- na de eritropoietina (EPO) (ou equivalente).

[0036] Em algumas modalidades, o paciente é dependente de transfusão de eritrócitos (RBC). Em algumas modalidades, dependente de transfusão de eritrócitos significa que o paciente exige ao menos 4 unidades de concentrado de eritrócitos para um Hgb de < 9 g/dL ao longo das 8 semanas antes do tratamento.

[0037] Em algumas modalidades, o paciente tem níveis elevados de hepcidina sérica em comparação com um grupo de controle de indivíduos saudáveis. Em algumas modalidades, o paciente tem uma concentração elevada de proteína C-reativa (PCR) sérica em comparação com um grupo de controle de indivíduos saudáveis. Em algumas modalidades, uma concentração sérica elevada de PCR é uma que é igual a ou maior que cerca de 10 μg/mL. Em algumas modalidades, os indivíduos saudáveis são como definidos em Santini, et al., PLoS One, 6(8), e23109, páginas 1-8 (2011), que está aqui integralmente incorporado, por referência.

[0038] Em algumas modalidades, o paciente tem um escore prognóstico de Glasgow modificado de 1 ou 2. O escore prognóstico de Glasgow modificado (Glasgow Prognosis Score, GPS) é descrito em McMillian, Cancer Treatment Reviews, 39 (5):534-540 (2013), que está aqui integralmente incorporado, por referência (e, em particular, os escores mostrados na Tabela 1).

[0039] Em algumas modalidades, a presente invenção fornece um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme descrito em qualquer uma das modalidades da presente invenção, para uso em um método para tratamento de qualquer uma das doenças ou distúrbios aqui descritos. Em algumas modalidades, a presente invenção fornece o uso de um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, conforme descrito em qualquer uma das modalidades da presente invenção, para a preparação de um medicamento para uso em um método de tratamento de qualquer uma das doenças ou distúrbios aqui descritos.

[0040] Os inibidores seletivos de JAK1 incluem também sais farmaceuticamente aceitáveis dos compostos aqui descritos. Como usado aqui, "sais farmaceuticamente aceitáveis" se refere a derivados dos compostos revelados em que o composto original é modificado por conversão de uma porção ácida ou básica existente em sua forma de sal. Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis incluem, mas não se limitam a, sais de ácido orgânico ou mineral de resíduos básicos como aminas; sais alcalinos ou orgânicos de resíduos ácidos como ácidos carboxílicos; e similares. Os sais farmaceuticamente aceitáveis incluem os sais não tóxicos do composto original formado, por exemplo, de ácidos orgânicos ou inorgânicos não tóxicos. Os sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser sintetizados a partir do composto original que contém uma porção básica ou ácida por métodos químicos convencionais. De modo geral, estes sais podem ser preparados pela reação das formas de ácido ou base livres destes compostos com uma quantidade estequiométrica da base ou ácido adequado em água ou em um solvente orgânico, ou em uma mistura dos dois; de modo geral, meios não aquosos como éter, acetato de etila, álcoois (por exemplo, metanol, etanol, iso-propanol, ou butanol) ou acetonitrila (ACN) são preferenciais. Listas de sais adequados são encontradas no documento Remington's Pharmaceutical Sciences, 17a ed., Mack Publishing Company, Easton, Pa., EUA, 1985, p. 1418 e Journal of Pharmaceutical Science, 66, 2 (1977), cada um dos quais está aqui incorporado, a título de referência em sua totalidade. Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos incluem as formas de N-óxido.

[0041] Os compostos aqui descritos podem ser assimétricos (por exemplo, tendo um ou mais estereocentros). Todos os estereoisômeros, como enantiômeros e diastereômeros, são pretendidos, exceto onde indicado em contrário. Os compostos aqui descritos que contêm átomos de carbono substituídos assimetricamente podem ser isolados em formas opticamente ativas ou racêmicas. Os métodos sobre como preparar formas opticamente ativas a partir de materiais de partida opticamente inativos são conhecidos na técnica, como por resolução das misturas racêmicas ou por síntese estereosseletiva. Muitos isômeros geométricos de olefinas, ligações duplas C=N, e similares também podem estar presentes nos compostos aqui descritos, e todos estes isômeros estáveis são contemplados na presente invenção. Os isômeros geométricos cis e trans do composto da presente invenção são descritos e podem ser isolados como uma mistura de isômeros ou como formas isoméricas separadas.

[0042] A resolução de misturas racêmicas de compostos pode ser executada por qualquer um dentre vários métodos conhecidos na técnica. Um exemplo de método inclui recristalização fracionada com o uso de um ácido de resolução quiral que é um ácido orgânico formador de sal opticamente ativo. Os agentes de resolução adequados para os métodos de recristalização fracionada são, por exemplo, ácidos opticamente ativos, como as formas D e L de ácido tartárico, ácido diacetiltartárico, ácido dibenzoiltartárico, ácido mandélico, ácido málico, ácido lático ou os vários ácidos canforsulfônicos opticamente ativos como ácido e-canforsulfônico. Outros agentes de resolução adequados para os métodos de cristalização fracionada incluem as formas estereoisomericamente puras de α-metilbenzilamina (por exemplo, as formas S e R, ou formas diastereomericamente puras), 2- fenilglicinol, norefedrina, efedrina, N-metilefedrina, ciclo-hexiletilamina, 1,2-diaminociclo-hexano, e similares.

[0043] A resolução de misturas racêmicas também pode ser executada por eluição em uma coluna empacotada com um agente de resolução opticamente ativo (por exemplo, dinitrobenzoilfenilglicina). A composição de solvente de eluição adequada pode ser determinada por um versado na técnica.

[0044] Os compostos aqui descritos incluem também formas tautoméricas. As formas tautoméricas resultam da troca de uma ligação simples por uma dupla ligação adjacente junto com a migração concomitante de um próton. As formas tautoméricas incluem tautômeros prototrópicos que são estados de protonação isoméricos com a mesma fórmula empírica e carga total. Exemplos de tautômeros prototrópicos incluem pares cetona - enol, pares amida - ácido imídico, pares lactama - lactima, pares enamina - imina, e formas anulares onde um próton pode ocupar duas ou mais posições de um sistema heterocíclico, por exemplo, 1H- e 3H-imidazol, 1H-, 2H- e 4H- 1,2,4- triazol, 1H- e 2H- isoindol, e 1H- e 2H-pirazol. As formas tautoméricas podem estar em equilíbrio ou estericamente presas em uma forma por substituição adequada.

[0045] Os compostos da invenção podem também incluir todos os isótopos de átomos que ocorrem nos intermediários ou compostos finais. Os isótopos incluem os átomos que têm o mesmo número atômico, mas diferentes números de massa. Por exemplo, isótopos de hidrogênio incluem deutério.

[0046] O termo, "composto," como usado aqui, destina-se a incluir todos os estereoisômeros, isômeros geométricos, tautômeros, e isótopos das estruturas mostradas. Adicionalmente, os compostos da presente invenção identificados pelo nome ou estrutura como uma forma tautomérica específica pretendem incluir outras formas tautoméricas exceto onde especificado em contrário.

[0047] Todos os compostos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis podem ser encontrados juntamente com outras substâncias como água e solventes (por exemplo, hidratos e solvatos) ou podem ser isolados.

[0048] Em algumas modalidades, os compostos aqui descritos, ou seus sais, são substancialmente isolados. Por "substancialmente isolado" entende-se que o composto é ao menos parcialmente ou substancialmente separado do ambiente no qual ele foi formado ou detectado. A separação parcial pode incluir, por exemplo, uma composição enriquecida nos compostos da invenção. A separação substancial pode incluir composições contendo ao menos cerca de 50%, ao menos cerca de 60%, ao menos cerca de 70%, ao menos cerca de 80%, ao menos cerca de 90%, ao menos cerca de 95%, ao menos cerca de 97%, ou ao menos cerca de 99%, em peso dos compostos da invenção, ou sal do mesmo. Os métodos para isolar os compostos e seus sais são rotineiros na técnica.

[0049] Como usado aqui, o termo "indivíduo" ou "paciente," usado de forma intercambiável, se refere a qualquer animal, inclusive mamíferos, de preferência, camundongos, ratos, outros roedores, coelhos, cães, gatos, porcos, gado, ovelha, cavalos, ou primatas e, com a máxima preferência, seres humanos.

[0050] Como usado aqui, a expressão "quantidade terapeuticamente eficaz" se refere à quantidade de composto ativo ou agente farmacêutico que gera a resposta biológica ou medicinal que está sendo buscada em um tecido, sistema, animal, indivíduo ou ser humano por um pesquisador, veterinário, médico ou outro clínico. Em algumas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz é de cerca de 1 mg a cerca de 100 mg, cerca de 1 mg a cerca de 20 mg, cerca de 4 mg a cerca de 10 mg, cerca de 5 mg a cerca de 1.000 mg, ou cerca de 10 mg a cerca de 500 mg. Em algumas modalidades, a quantidade terapeuticamente eficaz é 4 mg, 6 mg, ou 10 mg QD.

[0051] A expressão "farmaceuticamente aceitável" é empregada na presente invenção para se referir aos compostos, materiais, composições, e/ou formas de dosagem que são, no escopo do bom julgamento médico, adequadas para uso em contato com os tecidos de seres humanos e animais sem toxicidade excessiva, irritação, resposta alérgica, ou outro problema ou complicação, proporcionalmente a uma relação risco/benefício razoável.

[0052] Como usado aqui, o termo "tratar" ou "tratamento" se refere a um ou mais dentre (1) evitar a doença; por exemplo, evitar uma doença, condição ou distúrbio em um indivíduo que pode estar predisposto à doença, condição ou distúrbio, mas ainda não experimenta ou apresenta a patologia ou sintomatologia da doença; (2) inibir a doença; por exemplo, inibir uma doença, condição ou distúrbio em um indivíduo que experimenta ou apresenta a patologia ou sintomatologia da doença, condição ou distúrbio (isto é, parando o desenvolvimento adicional da patologia e/ou sintomatologia); e (3) atenuar a doença; por exemplo, atenuar uma doença, condição ou distúrbio em um indivíduo que está experimentando ou apresentando a patologia ou sintomatologia da doença, condição ou distúrbio (isto é, revertendo a patologia e/ou sintomatologia), como reduzindo a severidade da doença.

Terapias de combinação

[0053] Os métodos aqui descritos podem compreender adicionalmente administrar um ou mais agentes terapêuticos adicionais. O um ou mais agentes terapêuticos adicionais podem ser administrados a um paciente simultaneamente ou sequencialmente.

[0054] Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar um agente terapêutico adicional selecionado dentre IMiDs, um agente anti-IL-6, um agente anti-TNF-α, um agente hipometilante e um modificador da resposta biológica (biologic response modifier, BRM).

[0055] De modo geral, um BRM é uma substância feita a partir de organismos vivos para tratar uma doença, que pode ocorrer naturalmente no corpo ou pode ser produzida no laboratório. Os exemplos de BRMs incluem IL-2, interferon, diversos tipos de fatores estimuladores de colônia (CSF, GM-CSF, G-CSF), anticorpos monoclonais como abciximabe, etanercept, infliximabe, rituximabe, trasturzumabe, e ascorbato em alta dose.

[0056] Em algumas modalidades, o agente anti-TNF-α é infliximabe, e etanercept.

[0057] Em algumas modalidades, o agente hipometilante é um inibidor de DNA metiltransferase. Em algumas modalidades, o inibidor de DNA metiltransferase é selecionado dentre 5 azacitidina e decitabina.

[0058] De modo geral, os IMiDs são como agentes imunomoduladores. Em algumas modalidades, o IMiD é selecionado dentre talidomida, lenalidomida, pomalidomida, CC-11006, e CC10015.

[0059] Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente administrar um agente terapêutico adicional selecionado dentre globulina antitimócito, fator estimulante de colônia de granulócitos (G CSF) e fator estimulante de colônia de granulócitos e monócitos CSF (GM-CSF) humanos recombinantes, um agente estimulante da eritropoiese (ESA), e ciclosporina.

[0060] Em algumas modalidades, o método compreende adicionalmente a administração de um inibidor de JAK adicional ao paciente. Em algumas modalidades, o inibidor de JAK adicional é tofacitinibe ou ruxolitinibe.

[0061] Um ou mais agentes terapêuticos adicionais podem incluir quimioterápicos, agentes anti-inflamatórios, esteroides, imunossupressores, bem como inibidores das quinases Bcr-Abl, Flt-3, RAF e FAK como, por exemplo, aqueles descritos em WO 2006/056399, que está aqui integralmente incorporado, por referência, ou outros agentes podem ser usados em combinação com os compostos aqui descritos.

[0062] Exemplos de quimioterápicos incluem inibidores de proteossoma (por exemplo, bortezomibe), talidomida, revlimida, e agentes de dano ao DNA como melfalana, doxorrubicina, ciclofosfamida, vincristina, etoposídeo, carmustina, e similares.

[0063] Exemplos de esteroides incluem corticoesteroides como dexametasona ou prednisona.

[0064] Exemplos de inibidores de Bcr-Abl incluem os compostos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, dos gêneros e espécies revelados na patente US n° 5.521.184, no documento WO 04/005281, e na patente US n° de série 60/578.491, todos os quais estão aqui incorporados a título de referência na íntegra.

[0065] Exemplos de inibidores de Flt-3 adequados incluem os compostos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, como revelados em WO 03/037347, WO 03/099771, e WO 04/046120, todos os quais estão aqui incorporados a título de referência na íntegra.

[0066] Exemplos de inibidores de Raf adequados incluem os compostos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, como revelados em WO 00/09495 e WO 05/028444, ambos os quais estão aqui incorporados a título de referência na íntegra.

[0067] Exemplos de inibidores de FAK adequados incluem os compostos e seus sais farmaceuticamente aceitáveis, como revelados no WO 04/080980, WO 04/056786, WO 03/024967, WO 01/064655, WO 00/053595, e WO 01/014402, todos os quais estão aqui incorporados a título de referência na íntegra.

[0068] Em algumas modalidades, um ou mais dos compostos da invenção podem ser usados em combinação com um ou mais outros inibidores da quinase incluindo imatinibe, particularmente para o tratamento de pacientes resistentes ao imatinibe ou outros inibidores da quinase.

[0069] Em algumas modalidades, um agente quimioterápico adequado pode ser selecionado dentre agentes antimetabólitos, inibidores da topoisomerase 1, análogos de platina, taxanos, antraciclinas, e inibidores de EGFR, e combinações dos mesmos.

[0070] Em algumas modalidades, os agentes antimetabólitos incluem capecitabina, gencitabina, e fluorouracila (5-FU).

[0071] Em algumas modalidades, os taxanos incluem paclitaxel, Abraxane® (partículas ligadas à proteína do paclitaxel para suspensão injetável), e Taxotere® (docetaxel).

[0072] Em algumas modalidades, os análogos de platina incluem oxaliplatina, cisplatina, e carboplatina.

[0073] Em algumas modalidades, os inibidores da topoisomerase 1 incluem irinotecano e topotecano.

[0074] Em algumas modalidades, as antraciclinas incluem doxorrubicina ou formulações lipossomais de doxorrubicina.

[0075] Em algumas modalidades, o quimioterápico é FOLFIRINOX (5-FU, lecovorina, irinotecano e oxaliplatina). Em algumas modalidades, o agente quimioterápico é gencitabina e Abraxane® (partículas ligadas à proteina do paclitaxel para suspensão injetável).

[0076] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é melfalana, melfalana mais prednisona , doxorrubicina, dexametasona, e Velcade (bortezomibe). Os agentes adicionais usados no tratamento de mieloma múltiplo incluem inibidores das quinases Bcr-Abl, Flt-3, RAF e FAK. Os agentes podem ser combinados com os presentes compostos em uma forma de dosagem única ou contínua ou os agentes podem ser administrados simultaneamente ou sequencialmente como formas de dosagem separadas.

[0077] Em algumas modalidades, um corticoesteroide como dexametasona é administrado a um paciente em combinação com ao menos um inibidor seletivo de JAK1, onde a dexametasona é administrada de modo intermitente e não continuamente.

[0078] Em algumas modalidades adicionais, as combinações de um ou mais inibidores seletivos de JAK1 com outros agentes terapêuticos podem ser administradas a um paciente antes, durante, e/ou após um transplante de medula óssea ou transplante de células- tronco.

[0079] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é acetonida de fluocinolona (Retisert®), ou rimexolona (AL-2178, Vexol, Alcon).

[0080] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é ciclosporina (Restasis®).

[0081] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um corticoesteroide. Em algumas modalidades, o corticoesteroide é triancilonola, dexametasona, fluocinolona, cortisona, prednisolona, ou flumetolona.

[0082] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é selecionado dentre Dehydrex™ (Holles Labs), Civamide (Opko), hialuronato de sódio (Vismed, Lantibio/TRB Chemedia), ciclosporina (ST-603, Sirion Therapeutics), ARG101(T) (testosterone, Argentis), AGR1012(P) (Argentis), ecabet sódico (Senju-Ista), gefarnato (Santen), ácido 15-(s)-hidroxieicosatetraenoico (15(S)-HETE), cevilemina, doxiciclina (ALTY-0501, Alacrity), minociclina, iDestrin™ (NP50301, Nascent Pharmaceuticals), ciclosporina A (Nova22007, Novagali), oxitetraciclina (Duramycin, MOLI1901, Lantibio), CF101 (2S,3S,4R,5R)-3,4-di-hidróxi-5-[6-[(3-iodofenil)metilamino]purin-9-il]-N- metil-oxolano-2-carbamila, Can-Fite Biopharma), voclosporina (LX212 ou LX214, Lux Biosciences), ARG103 (Agentis), RX-10045 (análogo sintético da resolvina, Resolvyx), DYN15 (Dyanmis Therapeutics), rivoglitazona (DE011, Daiichi Sanko), TB4 (RegeneRx), OPH-01 (Ophtalmis Monaco), PCS101 (Pericor Science), REV1-31 (Evolutec), Lacritina (Senju), rebamipida (Otsuka-Novartis), OT-551 (Othera), PAI- 2 (University of Pennsylvania and Temple University), pilocarpina, tacrolimus, pimecrolimus (AMS981, Novartis), etabonato de loteprednol, rituximabe, diquafosol tetrassódico (INS365, Inspire), KLS- 0611 (Kissei Pharmaceuticals), desidroepiandrosterona, anakinra, efalizumabe, micofenolato sódico, etanercept (Embrel®), hidroxicloroquina, NGX267 (TorreyPines Therapeutics), actemra, gencitabina, oxaliplatina, L-asparaginase, ou talidomida.

[0083] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente antiangiogênico, agonista colinérgico, modulador do receptor de TRP-1, um bloqueador do canal de cálcio, um secretagogo de mucina, estimulante de MUC1, um inibidor de calcineurina, um corticoesteroide, um agonista do receptor P2Y2, um agonista do receptor muscarínico, um inibidor de mTOR, outro inibidor de JAK, inibidor de quinase Bcr-Abl, inibidor de Flt-3 quinase, inibidor de RAF quinase, e inibidor de FAK quinase como, por exemplo, aqueles descritos em WO 2006/056399, que está aqui integralmente incorporado, por referência. Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um derivado de tetraciclina (por exemplo, minociclina ou doxiclina). Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional se liga ao FKBP12.

[0084] Em algumas modalidades, o agente terapêutico adicional é um agente alquilante ou agente de reticulação de DNA; um agente antimetabólito/de desmetilação (por exemplo, 5-flurouracila, capecitabina ou azacitidina); uma terapia anti-hormônio (por exemplo, antagonistas de receptores hormonais, SERMs, ou inibidor de aromatase); um inibidor mitótico (por exemplo, vincristina ou paclitaxel); um inibidor de topoisomerase (I ou II) (por exemplo, mitoxantrona e irinotecano); um indutor apoptótico (por exemplo, ABT- 737); uma terapia com ácido nucleico (por exemplo, antissenso ou RNAi); ligantes de receptor nuclear (por exemplo, agonistas e/ou antagonistas: ácido all-trans retinoico ou bexaroteno); agentes de direcionamento epigenético como inibidores da histona desacetilase (por exemplo, vorinostat), agentes de hipometilação (por exemplo, decitabina); reguladores da estabilidade da proteína como inibidores de Hsp90, moléculas de conjugação ou desconjugação de ubiquitina e/ou semelhante à ubiquitina; ou um inibidor de EGFR (erlotinibe).

Formulações farmacêuticas e formas de dosagem

[0085] Quando empregados como fármacos, os inibidores seletivos de JAK1 podem ser administrados sob a forma de composições farmacêuticas. Estas composições podem ser preparadas de uma forma bem conhecida na arte farmacêutica, e podem ser administradas por uma variedade de rotas, dependendo de se tratamento local ou sistêmico é desejado e sobre a área a ser tratada. A administração pode ser tópica (inclusive transdérmica, epidérmica, oftálmica e às membranas mucosas incluindo aplicação intranasal, vaginal e rectal), pulmonar (por exemplo, por inalação ou insuflação de pós ou aerossóis, inclusive por nebulizador; intratraqueal ou intranasal), oral ou parenteral. A administração parenteral inclui administração intravenosa, intra-arterial, subcutânea, intraperitoneal, intramuscular ou injeção ou infusão; ou intracraniana, por exemplo, intratecal ou intraventricular. A administração parenteral pode estar sob a forma de uma única dose em bolus ou pode ser, por exemplo, por uma bomba de perfusão contínua. As composições e as formulações farmacêuticas para administração tópica podem incluir emplastros transdérmicos, pomadas, loções, cremes, géis, gotas, supositórios, aspersões, líquidos e pós. Veículos farmacêuticos convencionais, bases aquosas, em pó ou oleosas, espessantes e similares podem ser necessários ou desejáveis.

[0086] Esta invenção inclui também composições farmacêuticas que contém, como o ingrediente ativo, o inibidor seletivo de JAK1 aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em combinação com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitáveis (excipientes). Em algumas modalidades, a composição é adequada para administração tópica. Ao fazer as composições, o ingrediente ativo é tipicamente misturado com um excipiente, diluído por um excipiente ou encerrado dentro de tal veículo sob a forma de, por exemplo, uma cápsula, sachê, papel, ou outro recipiente. Quando o excipiente serve como um diluente, ele pode ser um material sólido, semissólido ou líquido que age como um veículo, carreador ou meio para o ingrediente ativo. Dessa forma, as composições podem estar sob a forma de comprimidos, pílulas, pós, pastilhas, sachés, cachets, elixires, suspensões, emulsões, soluções, xaropes, aerossóis (como um sólido ou em um meio líquido), pomadas contendo, por exemplo, até 10%, em peso do composto ativo, cápsulas de gelatina macias e duras, supositórios, soluções injetáveis estéreis, e pós embalados estéreis.

[0087] Ao preparar uma formulação, o composto ativo pode ser triturado para fornecer o tamanho de partícula adequado antes da combinação com os outros ingredientes. Se o composto ativo for substancialmente insolúvel, ele pode ser triturado até um tamanho de partícula menor que 200 mesh. Se o composto ativo for substancialmente solúvel em água, o tamanho de partícula pode ser ajustado por moagem para fornecer uma distribuição substancialmente uniforme na formulação, por exemplo, cerca de 40 mesh.

[0088] Os inibidores seletivos de JAK1 podem ser triturados com o uso de procedimentos de moagem conhecidos como moagem a úmido para obter um tamanho de partícula adequado para a formação do comprimido e para outros tipos de formulação. Preparações finamente divididas (nanoparticuladas) dos inibidores seletivos de JAK1 podem ser preparadas por processos conhecidos na técnica, por exemplo, veja o pedido internacional n° WO 2002/000196.

[0089] Alguns exemplos de excipientes adequados incluem lactose, dextrose, sacarose, sorbitol, manitol, amidos, goma de acácia, fosfato de cálcio, alginatos, tragacanto, gelatina, silicato de cálcio, celulose microcristalina, polivinilpirrolidona, celulose, água, xarope, e metilcelulose. As formulações podem incluir ainda: agentes lubrificantes como talco, estearato de magnésio, e óleo mineral; agentes umectantes; agentes de emulsificação e de suspensão; agentes conservantes como metil- e propil-hidoxibenzoatos; agentes adoçantes; e agentes flavorizantes. As composições podem ser formuladas de modo a fornecer liberação rápida, prolongada ou retardada do ingrediente ativo após administração ao paciente pelo emprego de procedimentos conhecidos na técnica.

[0090] Em algumas modalidades, a composição farmacêutica compreende celulose microcristalina silicificada (SMCC) e ao menos um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Em algumas modalidades, a celulose microcristalina silicificada compreende cerca de 98%, em peso, de celulose microcristalina e cerca de 2%, em peso, de dióxido de silício.

[0091] Em algumas modalidades, a composição é uma composição de liberação sustentada que compreende ao menos um inibidor seletivo de JAK1 aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ao menos um veículo farmaceuticamente aceitável. Em algumas modalidades, a composição compreende ao menos um inibidor seletivo de JAK1 aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e ao menos um componente selecionado dentre celulose microcristalina, mono-hidrato de lactose, hidroxipropilmetilcelulose, e poli(óxido de etileno). Em algumas modalidades, a composição compreende ao menos um inibidor seletivo de JAK1 aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e celulose microcristalina, mono-hidrato de lactose, e hidroxipropilmetilcelulose. Em algumas modalidades, a composição compreende ao menos um inibidor seletivo de JAK1 aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, e celulose microcristalina, mono-hidrato de lactose, e poli (óxido de etileno). Em algumas modalidades, a composição compreende adicionalmente estearato de magnésio ou dióxido de silício. Em algumas modalidades, a celulose microcristalina é Avicel PH102™. Em algumas modalidades, o mono-hidrato de lactose é Fast-flo 316™. Em algumas modalidades, a hidroxipropilmetilcelulose é hidroxipropilmetilcelulose 2208 K4M (por exemplo, Methocel K4 M Premier™) e/ou hidroxipropilmetilcelulose 2208 K100LV (por exemplo, Methocel K00LV™). Em algumas modalidades, o poli(óxido de etileno) é poli (óxido de etileno) WSR 1105 (por exemplo, Polyox WSR 1105™).

[0092] Em algumas modalidades, um processo de granulação a úmido é usado para produzir a composição. Em algumas modalidades, um processo de granulação a seco é usado para produzir a composição.

[0093] As composições podem ser formuladas em uma forma de dose unitária, cada dosagem contendo de cerca de 5 a cerca de 1.000 mg (1 g), mais usualmente de cerca de 100 mg a cerca de 500 mg, do ingrediente ativo. Em algumas modalidades, cada dosagem contém cerca de 10 mg do ingrediente ativo. Em algumas modalidades, cada dosagem contém cerca de 50 mg do ingrediente ativo. Em algumas modalidades, cada dosagem contém cerca de 25 mg do ingrediente ativo. O termo "formas de dose unitária" se refere a unidades fisicamente distintas adequadas como dosagens unitárias para pacientes humanos e outros mamíferos, cada unidade contendo uma quantidade predeterminada de material ativo calculada para produzir o efeito terapêutico desejado, em associação com um excipiente farmacêutico adequado.

[0094] Em algumas modalidades, as composições contêm de cerca de 2 mg a cerca de 10 mg, ou cerca de 5 mg a cerca de 50 mg do ingrediente ativo. Um versado na técnica apreciará que isto engloba compostos ou composições contendo cerca de 2 mg a cerca de 10 mg, 5 mg a cerca de 10 mg, cerca de 10 mg a cerca de 15 mg, cerca de 15 mg a cerca de 20 mg, cerca de 20 mg a cerca de 25 mg, cerca de 25 mg a cerca de 30 mg, cerca de 30 mg a cerca de 35 mg, cerca de 35 mg a cerca de 40 mg, cerca de 40 mg a cerca de 45 mg, ou cerca de 45 mg a cerca de 50 mg do ingrediente ativo.

[0095] Em algumas modalidades, as composições contêm de cerca de 50 mg a cerca de 500 mg do ingrediente ativo. Um versado na técnica apreciará que isto engloba compostos ou composições contendo cerca de 50 mg a cerca de 100 mg, cerca de 100 mg a cerca de 150 mg, cerca de 150 mg a cerca de 200 mg, cerca de 200 mg a cerca de 250 mg, cerca de 250 mg a cerca de 300 mg, cerca de 350 mg a cerca de 400 mg, ou cerca de 450 mg a cerca de 500 mg do ingrediente ativo.

[0096] Em algumas modalidades, as composições contêm de cerca de 500 mg a cerca de 1.000 mg do ingrediente ativo. Um versado na técnica apreciará que isto engloba compostos ou composições contendo cerca de 500 mg a cerca de 550 mg, cerca de 550 mg a cerca de 600 mg, cerca de 600 mg a cerca de 650 mg, cerca de 650 mg a cerca de 700 mg, cerca de 700 mg a cerca de 750 mg, cerca de 750 mg a cerca de 800 mg, cerca de 800 mg a cerca de 850 mg, cerca de 850 mg a cerca de 900 mg, cerca de 900 mg a cerca de 950 mg, ou cerca de 950 mg a cerca de 1.000 mg do ingrediente ativo.

[0097] O composto ativo pode ser eficaz ao longo de um amplo intervalo de dosagens e é, geralmente, administrado em uma quantidade farmaceuticamente eficaz. Será compreendido, entretanto, que a quantidade do composto realmente administrada será geralmente determinada por um médico, de acordo com as circunstâncias relevantes, inclusive a condição a ser tratada, a via de administração escolhida, o composto real administrado, a idade, o peso, e a resposta do paciente individual, a severidade dos sintomas do paciente, e similares.

[0098] Para preparar composições sólidas como comprimidos, o ingrediente ativo principal é misturado com um excipiente farmacêutico para formar uma composição de pré-formulação sólida contendo uma mistura homogênea de um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Quando essas composições de pré-formulação são chamadas de homogêneas, o ingrediente ativo é disperso de maneira uniforme por toda a composição para que a composição possa ser prontamente subdividida em formas de dosagem igualmente eficazes como os comprimidos, as pílulas e as cápsulas. Esta pré-formulação sólida é então subdividida em formas de dose unitária do tipo descrito acima contendo, por exemplo, de cerca de 0,1 mg a cerca de 1000 mg do ingrediente ativo da presente invenção.

[0099] Os comprimidos ou as pílulas podem ser revestidos ou, de outro modo, compostos para proporcionar uma forma de dosagem que obtenha a vantagem de uma ação prolongada. Por exemplo, o comprimido ou a pílula pode compreender um componente de dosagem interna e de dosagem externa, sendo que o segundo está sob a forma de um envelope sobre o primeiro. Os dois componentes podem ser separados por uma camada entérica que serve para resistir à desintegração no estômago e permite que o componente interno passe intacto pelo duodeno, ou até seja liberado de maneira retardada. Uma variedade de materiais pode ser usada nessas camadas ou revestimentos entéricos, tais materiais incluindo inúmeros ácidos poliméricos e misturas de ácidos poliméricos com materiais tais como goma-laca, álcool cetílico e acetato de celulose.

[00100] As formas líquidas nas quais os compostos e as composições podem ser incorporadas para administração oral ou por injeção incluem soluções aquosas, xaropes adequadamente flavorizados, suspensões aquosas ou oleosas, e emulsões flavorizadas com óleos comestíveis como óleo de semente de algodão, óleo de gergelim, óleo de coco ou óleo de amendoim, bem como elixires e veículos farmacêuticos similares.

[00101] Composições para inalação ou insuflação incluem soluções e suspensões em solventes aquosos ou orgânicos farmaceuticamente aceitáveis ou misturas dos mesmos, e pós. As composições líquidas ou sólidas podem conter excipientes farmaceuticamente aceitáveis adequados conforme descrito acima. Em algumas modalidades, as composições são administradas pela via respiratória oral ou nasal para efeito local ou sistêmico. As composições podem ser nebulizadas pelo uso de gases inertes. As soluções nebulizadas podem ser aspiradas diretamente do dispositivo de nebulização ou o dispositivo de nebulização pode ser preso a uma tenda de máscara facial, ou máquina de respiração de pressão positiva intermitente. Composições em solução, suspensão, ou pó podem ser administradas por via oral ou nasal a partir de dispositivos que fornecem a formulação em uma forma adequada.

[00102] As formulações para uso tópico podem conter um ou mais veículos convencionais. Em algumas modalidades, as pomadas podem conter água e um ou mais veículos hidrofóbicos selecionados, por exemplo, dentre parafina líquida, éter alquílico de polioxietileno, propilenoglicol, Vaselina branca, e similares. As composições carreadoras de cremes podem ser à base de água em combinação com glicerol e um ou mais outros componentes, por exemplo, monoestearato de glicerina, PEG-monoestearato de glicerina e álcool cetil estearílico. Os géis podem ser formulados com o uso de álcool isopropílico e água, adequadamente em combinação com outros componentes como, por exemplo, glicerol, hidroxietilcelulose, e similares. Em algumas modalidades, as formulações para uso tópico contêm ao menos cerca de 0,1, ao menos cerca de 0,25, ao menos cerca de 0,5, ao menos cerca de 1, ao menos cerca de 2, ou ao menos cerca de 5% em peso do composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. As formulações para uso tópico podem ser adequadamente embaladas em tubos, por exemplo, de 100 g que são opcionalmente associados a instruções para o tratamento da indicação selecionada, por exemplo, psoríase ou outra condição de pele.

[00103] A quantidade de composto ou composição administrada a um paciente irá variar dependendo do que está sendo administrado, do propósito da administração, como profilaxia ou terapia, do estado do paciente, da forma de administração, e similares. Em aplicações terapêuticas, as composições podem ser administradas a um paciente que já sofre de uma doença em uma quantidade suficiente para curar ou ao menos parar parcialmente os sintomas da doença e suas complicações. As doses eficazes dependerão do problema de saúde sendo tratado bem como do discernimento do médico responsável, dependendo de fatores como a severidade da doença, a idade, o peso e a condição geral do paciente, e similares.

[00104] As composições administradas a um paciente podem estar sob a forma das composições farmacêuticas descritas acima. Estas composições podem ser esterilizadas por técnicas de esterilização convencionais, ou podem ser filtradas de forma estéril. As soluções aquosas podem ser embaladas para uso tal como são, ou podem ser liofilizadas, sendo a preparação liofilizada combinada com um veículo aquoso estéril antes da administração. O pH das preparações de composto será tipicamente de 3 a 11, com mais preferência, de 5 a 9 e com a máxima preferência, de 7 a 8. Será compreendido que o uso de certos dos excipientes, veículos, ou estabilizantes anteriormente mencionados resultará na formação de sais farmacêuticos.

[00105] A dosagem terapêutica de um inibidor seletivo de JAK1 aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, pode variar de acordo, por exemplo, com o uso específico para o qual o tratamento é feito, a forma de administração do composto, a saúde e condição do paciente, e o discernimento do médico prescritor. A proporção ou concentração de um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, em uma composição farmacêutica pode variar dependendo de vários fatores incluindo a dosagem, as características químicas (por exemplo, hidrofobicidade), e a via de administração. Por exemplo, o inibidor seletivo de JAK1 pode ser fornecido em uma solução tampão aquosa fisiológica contendo cerca de 0,1 a cerca de 10% peso por volume do composto para administração parenteral. Alguns intervalos de dosagem típicos são de cerca de 1 μg/kg a cerca de 1 g/kg de peso corporal por dia. Em algumas modalidades, o intervalo de dosagem é de cerca de 0,01 mg/kg a cerca de 100 mg/kg de peso corporal por dia. A dosagem provavelmente dependerá de variáveis como o tipo e a extensão de progressão da doença ou distúrbio, do estado de saúde geral do paciente específico, da eficácia biológica relativa do composto selecionado, da formulação do excipiente, e de sua via de administração. As dosagens eficazes podem ser extrapoladas destas curvas de resposta à dosagem derivadas dos sistemas de teste de modelo de animal ou in vitro.

[00106] As composições da invenção podem incluir, ainda, um ou mais agentes farmacêuticos adicionais como um composto quimioterapêutico, esteroide, anti-inflamatório, ou imunossupressor, cujos exemplos estão citados anteriormente neste documento.

Kits

[00107] A presente invenção inclui, também, kits farmacêuticos úteis, por exemplo, no tratamento ou prevenção de uma síndrome mielodisplásica, que incluem um ou mais recipientes contendo uma composição farmacêutica que compreende uma quantidade terapeuticamente eficaz de um composto aqui descrito, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo. Estes kits podem incluir, ainda, se desejado, um ou mais dentre vários componentes de kits farmacêuticos convencionais, como, por exemplo, recipientes com um ou mais veículos farmaceuticamente aceitável, recipientes adicionais, etc., como será prontamente evidente aos versados na técnica. Instruções, como bulas ou rótulos, indicando as quantidades dos componentes a serem administradas, instruções para administração, e/ou instruções para mistura dos componentes, também podem ser incluídas no kit. Exemplos

[00108] A invenção será descrita em mais detalhes por meio de exemplos específicos. Os exemplos a seguir são oferecidos para fins ilustrativos e não se destinam a limitar a invenção de nenhuma forma. O versado na técnica reconhecerá prontamente uma variedade de parâmetros não críticos que podem ser mudados ou modificados para produzir essencialmente os mesmos resultados. Foi observado que os compostos dos exemplos são inibidores de JAK de acordo com ao menos um ensaio aqui descrito. Exemplo 1. 3-[1-(6-Cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila (dois enantiômeros diferentes isolados) Etapa 1. 3-{2-ciano-1-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]etil}pirrolidina-1-carboxilato de benzila

[00109] 3-[2-Cianovinil]pirrolidina-1-carboxilato de benzila (4,3 g, 0,017 mol, mistura de isômeros E e Z preparada conforme descrito em WO 2007/070514 Ex.742), foi dissolvido em acetonitrila (270 mL). 1,8- Diazabicicloundec-7-eno (5,02 mL, 0,0336 mol) foi adicionado, seguido de 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidina (5,6 g, 0,017 mol, preparada conforme descrito em WO 2007/070514, Ex.65). A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. O solvente foi removido por evaporação rotativa, e o resíduo foi redissolvido em acetato de etila. A solução foi lavada sucessivamente com HCl 1 N, água, bicarbonato de sódio saturado, e salmoura, seca com sulfato de sódio e concentrada a vácuo. O produto foi purificado por cromatografia de média pressão (flash) em gel de sílica, eluindo com um gradiente de 0 a 100% de acetato de etila em hexanos para produzir o diastereômero 1 (primeiro a eluir) (3,5 g, 36%) e o diastereômero 2 (segundo a eluir) (2,5 g, 25%). LCMS (M+H)+: 572,2. Etapa 2. 3-pirrolidin-3-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila

[00110] 3-{2-Ciano-1-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopiri- midin-4-il)-1H-pirazol-1-il]etil}pirrolidina-1-carboxilato de benzila (3,5 g, 6,1 mmol) (diastereômero 1 do exemplo 1, etapa 1) foi dissolvido em 100 mL de metanol, e uma quantidade catalítica de Pd-C a 10% foi adicionada. A mistura foi agitada em 1,0 MPa (50 psi) de hidrogênio durante 24 h. A mistura foi então filtrada e o solvente removido a vácuo. O produto foi usado sem purificação adicional. LCMS (M+H)+: 438,2. Etapa 3. 3-[1-(6-Cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi] metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila

[00111] Uma mistura de 3-pirrolidin-3-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi] metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila (150 mg, 0,27 mmol) e 2,6-dicloropiridina (48,7 mg, 0,329 mmol) em NMP (1,6 mL) e N,N-di-isopropiletilamina (96 microL, 0,55 mmol) foi aquecida até 135°C durante 20 min no micro-ondas. A purificação por cromatografia em coluna rápida em gel de sílica, eluindo com um gradiente de 0 a 80% de acetato de etila em hexanos, forneceu o produto do título (28 mg, 18%). 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8,85 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 7,41 (d, 1H), 7,37 (dd, 1H), 6,79 (d, 1H), 6,57 (d, 1H), 6,22 (d, 1H), 5,68 (s, 2H), 4,45 (dt, 1H), 3,91 (dd, 1H), 3,57-3,46 (m, 3H), 3,39-3,29 (m, 2H), 3,24 (dd, 1H), 3,13-3,01 (m, 1H), 3,01 (dd, 1H), 1,98-1,88 (m, 1H), 1,82-1,69 (m, 1H), 0,95-0,88 (m, 2H), -0,06 (s, 9H); LCMS (M+H)+: 549,1.

[00112] Este produto racêmico foi separado em seus enantiômeros por HPLC quiral (Chiral Technologies Chiralcel OJ-H, 5 μ, 30 x 250 mm, 45% EtOH/hexanos, 20 mL/min) para produzir o enantiômero 1 (primeiro a eluir, tempo de retenção 40,7 min) e o enantiômero 2 (segundo a eluir, tempo de retenção 51,6 min), que foram desprotegidos separadamente nas etapas 4a/4b. Etapa 4a. 3-[1 -(6-Cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila (enantiômero 1)

[00113] 3-[1-(6-Cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila (enantiômero 1 da etapa 3) foi agitada em uma solução contendo 1:1 TFA/DCM (2 mL) durante 2 h e, então, concentrada. O resíduo foi dissolvido em 1 mL de MeOH, e 0,2 mL de EDA foi adicionado. A purificação através de HPLC preparativo/MS (coluna C18 eluindo com um gradiente de ACN/H2O contendo 0,15% de NH4OH) forneceu o produto. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 9,44 (br s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,37 (s, 2H), 7,39 (dd, 1H), 7,38 (dd, 1H), 6,79 (dd, 1H), 6,58 (d, 1H), 6,22 (d, 1H), 4,46 (dt, 1H), 3,92 (dd, 1H), 3,55-3,48 (m, 1H), 3,39-3,31 (m, 2H), 3,25 (dd, 1H), 3,13-3,02 (m, 1H), 3,02 (dd, 1H), 2,00-1,88 (m, 1H), 1,84-1,71 (m, 1H); LCMS (M+H)+: 419,1. Etapa 4b. 3-[1 -(6-cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila (enantiômero 2)

[00114] Feito tal como na etapa 4a, com o uso do enantiômero 2 da etapa 3: 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 9,59 (br s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,37 (s, 2H), 7,40 (dd, 1H), 7,38 (dd, 1H), 6,79 (dd, 1H), 6,58 (d, 1H), 6,22 (d, 1H), 4,46 (dt, 1H), 3,92 (dd, 1H), 3,55-3,48 (m, 1H), 3,39-3,31 (m, 2H), 3,25 (dd, 1H), 3,14-3,02 (m, 1H), 3,02 (dd, 1H), 1,99-1,90 (m, 1H), 1,83-1,72 (m, 1H); LCMS (M+H)+: 419,1. Exemplo 2. 3-(1-Oxazolopiridin-2-ilpirrolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirrolopirimi- din-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila (um enantiômero isolado) Etapa 1. 3-(1-oxazolopiridin-2-ilpirrolidin-3-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi] metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila

[00115] Oxazolopiridina-2(1H)-tiona (1,17 g, 7,68 mmol, preparada tal como no exemplo 33 de US 2010/0298334, etapa 4) e 3-pirrolidin-3- il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol- 1-il]propanonitrila (2,80 g, 6,40 mmol do exemplo 15, etapa 3) em 1,4- dioxano (30 mL) foi aquecida até 70°C durante 2 h. O solvente foi removido a vácuo. O produto bruto foi reconstituído em etanol (40 mL) e tratado com nitrato de prata (3 g, 15 mmol) e hidróxido de amônio aquoso (6 mL) em porções ao longo do período de 20 h. Na reação adicionou-se água, NaOH 1 N e salmoura. O material insolúvel foi removido por filtração. As camadas do filtrado foram separadas. A porção aquosa foi extraída com três porções de acetato de etila. Os extratos foram secos com sulfato de sódio, decantados e concentrados. O produto bruto foi purificado por cromatografia de média pressão (flash) em gel de sílica, eluindo com 10% de MeOH/DCM para fornecer o produto como uma espuma branco-suja (2,84 g, 80%). 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 8,83 (s, 1H), 8,37 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 7,92 (dd, 1H), 7,57 (dd, 1H), 7,40 (d, 1H), 7,13 (dd, 1H), 6,78 (d, 1H), 5,67 (s, 2H), 4,52 (dt, 1H), 4,05 (dd, 1H), 3,82 (ddd, 1H), 3,67-3,44 (m, 4H), 3,25 (dd, 1H), 3,24-3,09 (m, 1H), 2,98 (dd, 1H), 2,06-1,74 (m, 2H), 0,97-0,88 (m, 2H), -0,06 (s, 9H); LCMS (M+H)+: 556,1. Etapa 2. 3-(1-oxazolopiridin-2-ilpirrolidin-3-il)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin- 4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila

[00116] 3-(1-Oxazolopiridin-2-ilpirrolidin-3-il)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] propanonitrila (5,35 g, 9,63 mmol, preparado pelo método da etapa 1) foi agitada em uma mistura 2:1 de DCM e TFA (60 mL) durante 6 h. Os solventes foram removidos por evaporação rotativa. O resíduo bruto foi dissolvido em metanol (50 mL) contendo EDA (5,15 mL, 77,0 mmol) e foi agitado de um dia para o outro. Após remoção do solvente, o produto foi purificado por cromatografia de média pressão (flash) em gel de sílica, eluindo com um gradiente de 0 a 15% de MeOH/DCM (3,59 g, 88%). 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 8,72 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 8,34 (s, 1H), 7,89 (dd, 1H), 7,54 (dd, 1H), 7,36 (d, 1H), 7,12 (dd, 1H), 6,75 (d, 1H), 4,56 (dt, 1H), 4,01 (dd, 1H), 3,80 (ddd, 1H), 3,60 (ddd, 1H), 3,48 (dd, 1H), 3,26 (dd, 1H), 3,21-3,06 (m, 1H), 3,02 (dd, 1H), 2,03-1,76 (m, 2H); LCMS (M+H)+: 426,1. Exemplo 3. Sal de trifluoroacetato de 4-[(4-{3-ciano-2-[4-(7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)carbonil]-3-fluo- robenzonitrila (único enantiômero isolado) Etapa 1. 4-{3-ciano-2-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazina-1-carboxilato de (R)- e (S)-terc-butila

[00117] 1,8-Diazabicicloundec-7-eno (5,5 mL, 0,037 mol) foi adicionado a uma solução de (E)- e (Z)-4-(3-cianoalil)piperazina-1- carboxilato de terc-butila (11,1 g, 0,0441 mol, preparada tal como no exemplo 1 de US 2011/0059951, etapas 1 a 2) e 4-(1H-pirazol-4-il)-7- {[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidina (11,6 g, 0,0368 mol, preparada conforme descrito em WO2007/070514, exemplo 65) em acetonitrila (70 mL). A mistura foi agitada a 50°C durante 15 horas. Os solventes foram removidos a vácuo. O resíduo foi dissolvido em acetato de etila, lavado com água (3 vezes), salmoura (uma vez), seco com sulfato de sódio e concentrado. Cromatografia de média pressão (flash), seguida de HPLC-MS preparativa (eluindo com um gradiente de MeCN/H2O contendo 0,15% de NH4OH) forneceu o produto como uma espuma branca (8,20 g, 39%).

[00118] HPLC quiral foi usada para separar a mistura racêmica em enantiômeros isolados (Lux-celulose-2 fenomenex, 21,2 x 250 mm, 5 μm, eluindo com 30% de EtOH/70% de hexanos, a 20 mL/min). Pico 1 (primeiro a eluir): 4,0 g e pico 2 (segundo a eluir): 4,0 g. 1H RMN Pico 1 (400 MHz, CDCl3): δ 8,84 (s, 1H), 8,33 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,40 (d, 1H), 6,79 (d, 1H), 5,68 (s, 2H), 4,70-4,62 (m, 1H), 3,58-3,51 (m, 2H), 3,44-3,35 (br m, 4H), 3,16 (dd, 1H), 3,10 (dd, 1H), 2,99 (dd, 1H), 2,89 (dd, 1H), 2,50-2,40 (br m, 4H), 1,44 (s, 9H), 0,95-0,89 (m, 2H), -0,06 (s, 9H); LCMS (M+H)+: 567,3. 1H RMN Pico 2 (400 MHz, CDCl3): δ 8,84 (s, 1H), 8,32 (s, 1H), 8,31 (s, 1H), 7,40 (d, 1H), 6,79 (d, 1H), 5,68 (s, 2H), 4,70-4,62 (m, 1H), 3,58-3,51 (m, 2H), 3,45-3,34 (br m, 4H), 3,16 (dd, 1H), 3,10 (dd, 1H), 2,99 (dd, 1H), 2,90 (dd, 1H), 2,50-2,40 (br m, 4H), 1,44 (s, 9H), 0,95-0,89 (m, 2H), -0,06 (s, 9H); LCMS (M+H)+: 567,3. Etapa 2. Sal de cloridrato de 4-piperazin-1-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butanonitrila

[00119] 4-{3-Ciano-2-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopiri- midin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazina-1-carboxilato de terc-butila (4,0 g, 7,0 mmol; pico 2 da etapa 1) foi dissolvido em 1,4-dioxano (40 mL), e 4,0 M de HCl em dioxano (25 mL, 100 mmol) foi adicionado. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 80 min. O solvente foi removido a vácuo para fornecer o produto como o sal de cloridrato. LCMS (M+H)+: 467,3. Etapa 3. Sal de trifluoroacetato de 4-[(4-{3-ciano-2-[4-(7H-pirrolopi- rimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propil}piperazin-1-il)carbonil]-3-fluorobenzo- nitrila

[00120] Uma mistura de ácido 4-ciano-2-fluorobenzoico (138 mg, 0,836 mmol, Alfa Aesar), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O- (7-azabenzotriazol-1-il)urônio (254 mg, 0,669 mmol) e trietilamina (0,466 mL, 3,34 mmol) em THF (10,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos. Cloridrato de 4-piperazin-1-il-3-[4-(7-{[2- (trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butanoni- trila (0,33 g, 0,56 mmol; da etapa 2) foi adicionado. A reação foi agitada à temperatura ambiente durante uma hora. A reação foi diluída com acetato de etila e água. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada sucessivamente com água, NaOH 0,1 N e salmoura, secas com sulfato de sódio e concentradas. O resíduo foi dissolvido em uma mistura 2:1 de DCM:TFA, agitado durante 3 horas, concentrado e, então, em uma mistura de 8 mL de metanol à qual 0,8 mL de etilenodiamina foi adicionado. Após agitação durante uma hora, o produto foi purificado através de HPLC-MS, eluindo com um gradiente de MeCN e H2O contendo 0,2% de TFA. O eluente foi congelado e liofilizado para produzir um pó branco (200 mg, 47%). 1H RMN (400 MHz, d6-dmso): δ 12,64 (br s, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,51 (s, 1H), 7,99 (dd, 1H), 7,82-7,76 (m, 2H), 7,61 (t, 1H), 7,157,11 (m, 1H), 5,13 (br m, 1H), 3,82-2,37 (br, 12H); 19F RMN (400 MHz, d6-dmso): δ -74,97 (s, 7,2 F), -114,49 (br s, 1F); LCMS (M+H)+: 484,2. Exemplo 4. Sal de trifluoroacetato de 4-[(4-{3-ciano-2-[3-(7H-pir- rolopirimidin-4-il)-1H-pirrol-1-il]propil}piperazin-1-il)carbonil]-3-fluoro- benzonitrila (único enantiômero isolado) Etapa 1. 4-{3-Ciano-2-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimi- din-4-il)-1H-pirrol-1-il]propil}piperazina-1-carboxilato de terc-butila

[00121] A uma mistura de 4-(3-cianoallil)piperazina-1-carboxilato de (E)- e (Z)-terc-butila (4,0 g, 0,016 mol; preparada tal como no exemplo 1 de US 2011/0059951, etapas 1-2) e 4-(1H-pirrol-3-il)-7-{[2-(trimetil- silil) etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidina (4,2 g, 0,013 mol, preparada tal como em WO2009/114512, exemplo 82) em N,N-dimetilformamida (25 mL) adicionou-se carbonato de potássio (5,540 g, 0,0401 mol). A mistura foi agitada a 60°C durante 17 horas. 4-(3-cianoalil)piperazina- 1-carboxilato de (E)- e (Z)-terc-butila adicional (4,0 g, 0,016 mol) foi adicionado e a reação foi agitada a 60°C durante 24 horas. Uma porção adicional de 4-(3-cianoalil)piperazina-1-carboxilato de (E)- e (Z)-terc-butila (4,0 g, 0,016 mol) foi adicionada. Após 3 noites de aquecimento, a maior parte do material de partida havia sido convertida no produto desejado como determinado por LCMS. A mistura foi então filtrada, diluída com EtOAc, lavada com água (3 vezes), salmoura (uma vez), seca com sulfato de sódio, decantada e concentrada. A purificação através de HPLC preparativa-MS (eluindo com um gradiente de MeCN/H2O contendo 0,15% de NH4OH) forneceu uma espuma castanha (4,20 g, 55%). 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 8,81 (s, 1H), 7,66 (t, 1H), 7,34 (d, 1H), 6,97 (dd, 1H), 6,89 (t, 1H), 6,84 (d, 1H), 5,66 (s, 2H), 4,47-4,36 (m, 1H), 3,57-3,50 (m, 2H), 3,45-3,37 (m, 4H), 3,06 (dd, 1H), 3,00-2,90 (m, 2H), 2,83 (dd, 1H), 2,57-2,35 (m, 4H), 1,45 (s, 9H), 0,96-0,86 (m, 2H), -0,06 (s, 9H); LCMS (M+H)+: 566,3.

[00122] HPLC quiral foi usada para separar o racemato em enantiômeros individuais (Chiral Technologies ChiralPAK IA 20x250 mm, 5 μm, fase móvel 30% de EtOH/70% de hexanos, vazão 12 mL/min). Pico 1 (primeiro enantiômero a eluir), 1,8 g; pico 2 (segundo enantiômero a eluir): 1,9 g. Etapa 2. Sal de cloridrato de 4-piperazin-1-il-3-[3-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirrol-1-il]butanonitrila

[00123] A uma solução de 4-{3-ciano-2-[3-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi] metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirrol-1-il]propil}piperazina-1-carboxi- lato de terc-butila (1,9 g, 0,0034 mol; pico 2 da etapa 1) em 1,4-dio- xano (20 mL) adicionou-se 4,0 M de HCl em p-dioxano (12 mL, 48 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 80 minutos. O solvente foi removido a vácuo, para produzir o produto como um sólido amarelo claro (1,90 g, 100%). LCMS (M+H)+: 466,3. Etapa 3. Sal de trifluoroacetato de 4-[(4-{3-ciano-2-[3-(7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirrol-1-il]propil}piperazin-1-il)carbonil]-3-fluorobenzo- nitrila

[00124] Uma mistura de ácido 4-ciano-2-fluorobenzoico (44 mg, 0,26 mmol, Alfa Aesar), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(7- azabenzotriazol-1-il)urônio (93 mg, 0,24 mmol) e trietilamina (171 uL, 1,22 mmol) em THF (2,4 mL) foi agitada à temperatura ambiente durante 15 minutos. Sal de cloridrato de 4-piperazin-1-il-3-[3-(7-{[2-(tri- metilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirrol-1-il]butanonitrila (110 mg, 0,20 mmol; da etapa 2) foi adicionado. A reação foi agitada durante 2 horas. Acetato de etila e água foram adicionados. As camadas foram separadas e a camada orgânica foi lavada sucessivamente com água, NaOH 1 N e salmoura, secas com sulfato de sódio e concentradas. O resíduo foi dissolvido primeiro em uma mistura a 1:1 de DCM:TFA durante 1 hora, foi concentrado e, então, foi agitado em metanol (2 mL) contendo etilenodiamina (0,2 mL) durante uma hora. A purificação através de HPLC-MS preparativa (eluindo com um gradiente de MeCN/H2O contendo 0,1% de TFA forneceu o produto como o sal de TFA 3,3x (84 mg, 48%). 1H RMN (300 MHz, d6- dmso): δ 13,22 (br s, 1H), 8,90 (s, 1H), 8,38 (s, 1H), 8,00 (dd, 1H), 7,97-7,93 (m, 1H), 7,80 (dd, 1H), 7,61 (t, 1H), 7,35 (s, 2H), 7,18-7,13 (m, 1H), 5,00-4,80 (m, 1H), 3,75-3,49 (br m, 2H), 3,35-2,33 (m, 10H); 19F RMN (300 MHz, d6-dmso): δ -74,82 (s, 10F), -114,53 (s, 1F); LCMS (M+H)+: 483,2. Exemplo 5. {1-{1 -[3-Fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3- [4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila Etapa A: 3-Oxoazetidina-1-carboxilato de terc-butila

[00125] A uma mistura de 3-hidroxiazetidina-1-carboxilato de terc- butila (10,0 g, 57,7 mmol), sulfóxido de dimetila (24,0 mL, 338 mmol), trietilamina (40 mL, 300 mmol) e cloreto de metileno (2,0 mL) foi adicionado complexo de trióxido de enxofre e piridina (40 g, 200 mmol) em porções a 0°C. A mistura foi agitada durante 3 horas, resfriada rapidamente com salmoura, e extraída com cloreto de metileno. Os extratos combinados foram secos com Na2SO4 anidro, filtrados e concentrados sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por coluna de gel de sílica (0 a 6% de acetato de etila (EtOAc) em hexanos) para fornecer 3-oxoazetidina-1-carboxilato de terc-butila (5,1 g, 52% de rendimento). Etapa B: 3-(cianometileno)azetidina-1-carboxilato de terc-butila

[00126] Um frasco de fundo redondo de 1 L com 4 bocas seco em forno, equipado com uma barra de agitação, septos, entrada de nitrogênio, funil de adição de 250 ml e termopar foi carregado com hidreto de sódio (5,6 g, 0,14 mol) e tetra-hidrofurano (THF) (140 mL) sob uma atmosfera de nitrogênio. A mistura foi resfriada até 3°C e, então, carregada com cianometilfosfonato de dietila (22,4 mL, 0,138 mol) por gotejamento através de uma seringa ao longo de 20 minutos. A solução se tornou uma pasta fluida amarelo clara. A reação foi, então, agitada durante 75 minutos com aquecimento até 18,2°C. Uma solução de 3-oxoazetidina-1-carboxilato de terc-butila (20 g, 0,1 mol) em tetra-hidrofurano (280 mL) foi preparada em um frasco de fundo redondo seco em forno carregada ao funil de adição através de uma cânula e, então, adicionada à mistura de reação por gotejamento ao longo de 25 minutos. A solução de reação ficou vermelha. A reação foi deixada em agitação de um dia para o outro. A reação foi verificada após 24 horas por TLC (70% de hexano/EtOAc) e estava completa. A reação foi diluída com 200 mL de 20% de salmoura e 250 mL de EtOAc. A solução foi particionada e a fase aquosa foi extraída com 250 mL de EtOAc. A fase orgânica combinada foi seca com MgSO4 e filtrada, evaporada sob pressão reduzida, e purificada por cromatografia de média pressão (flash) (0% a 20% EtOAc/hexanos, coluna flash 150 g) para fornecer o produto desejado, 3- (cianometileno)azetidina-1-carboxilato de terc-butila (15 g, 66,1% de rendimento). Etapa C: 4-Cloro-7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidina

[00127] A uma suspensão de hidreto de sódio (36,141 g, 903,62 mmol) em N,N-dimetilacetamida (118 mL) a -5°C (banho de gelo/sal) adicionou-se lentamente uma solução escura de 4-cloropirrolopirimi- dina (119,37 g, 777,30 mmol) em N,N-dimetilacetamida (237 mL). O frasco e o funil de adição foram enxaguados com N,N-dimetila- cetamida (30 mL). Uma grande quantidade de gás foi imediatamente liberada. A mistura se tornou uma mistura alaranjada ligeiramente turva. A mistura foi agitada a 0°C durante 60 min para fornecer uma mistura turva marrom clara. À mistura adicionou-se lentamente cloreto de [2-(trimetilsilil)etóxi]metila (152,40 g, 914,11 mmol) e a reação foi agitada a 0°C durante 1 h. A reação foi resfriada rapidamente pela adição lenta de 12 mL de H2O Mais água (120 mL) foi adicionada seguido de metil éter terc-butílico (MTBE) (120 mL). A mistura foi agitada durante 10 min. A camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com outra porção de MTBE (120 mL). Os extratos orgânicos foram combinados, lavados com salmoura (120 mL x 2) e concentrados sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto 4- cloro-7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidina como um óleo escuro. Rendimento: 85,07 g (97%); LC-MS: 284,1 (M+H)+. Ele foi levado para a reação seguinte sem purificação. Etapa D: 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopiri- midina

[00128] Um frasco de fundo redondo de 1000 mL foi carregado com 4-cloro-7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidina (10,00 g, 35,23 mmol), 1-butanol (25,0 mL), 1-(1-etoxietil)-4-(4,4,5,5-tetrametil-1,3,2- dioxaborolan-2-il)-1H-pirazol (15,66 g, 52,85 mmol), água (25,0 mL) e carbonato de potássio (12,17 g, 88,08 mmol). Esta solução foi degaseificada 4 vezes, enchendo com nitrogênio a cada vez. À solução adicionou-se tetraquis(trifenilfosfina)paládio(0) (4,071 g, 3,523 mmol). A solução foi degaseificada 4 vezes, enchendo com nitrogênio a cada vez. A mistura foi agitada de um dia para o outro a 100 °C. Após ser resfriada até a temperatura ambiente, a mistura foi filtrada através de um leito de celite e o celite foi enxaguado com acetato de etila (42 mL). O filtrado foi combinado, e a camada orgânica foi separada. A camada aquosa foi extraída com acetato de etila. Os extratos orgânicos foram combinados e concentrados sob vácuo com uma temperatura do banho de 30-70°C para fornecer o composto final 4-(1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidina. Rendimento: 78%. LC-MS: 316,2 (M+H)+. Etapa E: 3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidina-1-carboxilato de terc-butila

[00129] Um frasco de fundo redondo de 2 L equipado com agitação suspensa, septos e entrada de nitrogênio foi carregado com 3-(ciano- metileno)azetidina-1-carboxilato de terc-butila (9,17 g, 0,0472 mol), 4- (1H-pirazol-4-il)-7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidina (14,9 g, 0,0472 mol) e acetonitrila (300 mL). A solução resultante era heterogênea. À solução adicionou-se 1,8-diazabicicloundec-7-eno (8,48 mL, 0,0567 mol) em porções através de uma seringa ao longo de 3 min à temperatura ambiente. A solução lentamente se tornou homogênea e amarela. A reação foi deixada em agitação à temperatura ambiente durante 3 h. A reação foi completada por HPLC e LC/MS e foi concentrada por evaporação rotativa para remover a acetonitrila (~150 mL). EtOAc (100 mL) foi adicionado seguido de 100 ml de 20% de salmoura. As duas fases foram particionadas. A fase aquosa foi extraída com 150 mL de EtOAC. As fases orgânicas combinadas foram secas com MgSO4, filtradas e concentradas para produzir um óleo alaranjado. A purificação por cromatografia de média pressão (flash) (150 gramas de sílica, 60% EtOAc/hexanos, carregada com CH2Cl2) produziu o composto do título 3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2- (trimetilsilil)etóxi] metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidina- 1-carboxilato de terc-butila como um óleo amarelo (21,1 g, 88% de rendimento). LC-MS: + = 510,3. Etapa F: Dicloridrato de {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[00130] A uma solução de 3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidina-1-car- boxilato de terc-butila (2 g, 3,9 mmol) em 10 mL de THF adicionou-se 10 mL de 4 N HCl em dioxano. A solução foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora e concentrada a vácuo para fornecer 1,9 g (99%) do composto do título como um sólido em pó branco, que foi usado durante a reação seguinte sem purificação. LC-MS: + = 410,3. Etapa G: 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi]metil}-7H-pir- rolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidina-1-carboxilato de terc-butila

[00131] Na solução de dicloridrato de {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi] metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (2,6 g, 6,3 mmol), 4-oxo-1-piperidinacarboxilato de terc-butila (1,3 g, 6,3 mmol) em THF (30 mL) foram adicionados N,N-di-isopropile- tilamina (4,4 mL, 25 mmol) e triacetoxiboroidreto de sódio (2,2 g, 10 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Após adição de 20 mL de salmoura, a solução foi extraída com EtOAc. O extrato foi seco com Na2SO4 anidro e concentrado. O resíduo foi purificado por coluna combiflash eluindo com 30 a 80% de EtOAc em hexanos para fornecer o produto desejado, 4-{3-(ciano- metil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pi- razol-1-il]azetidin-1-il}piperidina-1-carboxilato de terc-butila. Rendimento: 3,2 g (86%); LC-MS: + = 593,3. Etapa H: Tricloridrato de {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi] metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[00132] A uma solução de 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}piperidi- na-1-carboxilato de terc-butila (3,2 g, 5,4 mmol) em 10 mL de THF adicionou-se 10 mL de HCl 4 N em dioxano. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente por 2 horas. A remoção dos solventes sob pressão reduzida forneceu 3,25 g (100%) de tricloridrato de {1- piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila como um sólido em pó branco, que foi usado diretamente na reação seguinte. LC-MS: + = 493,3. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 9,42 (s 1H), 9,21 (s, 1H), 8,89 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 7,97 (s, 1H), 7,39 (d, 1H), 5,68 (s, 2H), 4,96 (d, 2H), 4,56 (m, 2H), 4,02-3,63 (m, 2H), 3,55 (s, 2H), 3,53 (t, 2H), 3,49-3,31 (3, 3H), 2,81 (m, 2H), 2,12 (d, 2H), 1,79 (m, 2H), 0,83 (t, 2H), -0,10 (s, 9H). Etapa I: {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3-[4- (7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] azetidin-3-il}acetonitrila

[00133] Uma mistura de tricloridrato de {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2- (trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] azetidin- 3-il}acetonitrila (1,22 g, 2,03 mmol), ácido 3-fluoro-2-(trifluorometil) isonicotínico (460 mg, 2,2 mmol), hexafluorofosfato de benzotriazol-1- iloxitris(dimetilamino)fosfônio (1,07 g, 2,42 mmol), e trietilamina (2,0 mL, 14 mmol) em dimetilformamida (DMF) (20,0 mL) foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. LS-MS mostrou que a reação estava completa. EtOAc (60 mL) e solução aquosa de NaHCO3 saturada (60 mL) foram adicionados à mistura de reação. Após agitação à temperatura ambiente durante 10 minutos, a fase orgânica foi separada e a camada aquosa foi extraída com EtOAc três vezes. A fase orgânica combinada foi lavada com salmoura, seca com Na2SO4 anidro, filtrada e evaporada sob pressão reduzida. A purificação por cromatografia de média pressão (flash) forneceu o produto desejado {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(tri- metilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il} acetonitrila. LC-MS: 684,3 (M+H)+. Etapa J: {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3-[4- (7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[00134] Em uma solução de {1-{1-[3-fluoro-2-(trifluorometil) isonicotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (56 mg, 0,1 mmol) em cloreto de metileno (1,5 mL) adicionou-se ácido trifluoroacético (1,5 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 2 horas. Após remoção dos solventes em vácuo, o resíduo foi dissolvido em uma solução de metanol contendo 20% de etilenodiamina. Após ser agitada à temperatura ambiente durante 1 hora, a solução foi purificada por HPLC (método B) para fornecer o composto do título. LC-MS: 554,3 (M+H)+; 1H RMN (400 MHz, CDCl3): 9,71 (s, 1H), 8,82 (s, 1H), 8,55 (d, J=4,6 Hz, 1H), 8,39 (s, 1H), 8,30 (s, 1H), 7,52 (t, J=4,6 Hz, 1H), 7,39 (dd, J1=3,4 Hz, J2=1,5 Hz, 1H), 6,77 (dd, J1=3,6 Hz, J2=0,7 Hz, 1H), 4,18 (m, 1H), 3,75 (m, 2H), 3,63 (dd, J1=7,8 Hz, J2=3,7 Hz, 2H), 3,45 (m, 2H), 3,38 (s, 2H), 3,11 (m, 1H), 2,57 (m, 1H), 1,72 (m, 1H), 1,60 (m, 1H), 1,48 (m, 1H), 1,40 (m, 1H). Exemplo 6. 4-{3-(Cianometil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidina-1-carboxamida Etapa A: 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pir- rolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorome- til) fenil]piperidina-1-carboxamida

[00135] A uma solução de tricloridrato {1-piperidin-4-il-3-[4-(7-{[2- (trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] azetidin- 3-il}acetonitrila (500 mg, 1 mmol) em tetra-hidrofurano (30 mL) adicionou-se trietilamina (0,29 g, 2,8 mmol) e 4-fluoro-1-isocianato-2- (trifluorometil)benzeno (190 mg, 0,95 mmol). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1 hora. O solvente foi removido sob pressão reduzida. A purificação por combi-flash com o uso de 30 a 100% de EtOAc/hexanos gerou 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2- (trimetilsilil)etóxi] metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin- 1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidina-1-carboxamida como um pó. LC-MS: 698,1 (M+H)+. Etapa B: 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidina-1-carboxami- da

[00136] 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirro- lopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil) fenil]piperidina-1-carboxamida (210 mg, 0,3 mmol) foi dissolvida em uma solução a 50 M de ácido trifluoroacético em cloreto de metileno (20 mL). Após ser agitada à temperatura ambiente durante uma hora, os solventes foram removidos sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (20 mL) e etilenodiamina (1,0 g, 17 mmol). Após ser agitada à temperatura ambiente durante uma hora, a mistura foi purificada por HPLC (método B) para fornecer 4-{3-(cianometil)-3-[4- (7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(tri- fluorometil)fenil]piperidina-1-carboxamida como um pó branco. LC-MS: 568,1 (M+H)+. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,10 (s, 1H), 8,76 (s, 1H), 8,63 (s, 1H), 8,36 (s, 1H), 8,18 (s, 1H), 7,55 (d, J=3,6 Hz, 1H), 7,50 (m, 1H), 7,43 (m, 1H), 7,34 (m, 1H), 7,01(d, J=3,6 Hz, 1H), 3,79 (m, 2H), 3,67 (d, J=8 Hz, 2H), 3,51 (m, 4H), 2,92(m, 2H), 2,38 (m, 1H), 1,62 (m, 2H), 1,09 (m, 2H). Exemplo 7. [3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[2-(tri- fluorometil)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)azetidin-3-il]acetonitrila

[00137] O composto do título foi preparado por um método análogo ao usado para preparar o exemplo 5. LC-MS (M+H)+: 537,2. Exemplo 8. [trans-1-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-3-(4-{[2- (trifluorometil)pirimidin-4-il]carbonil}piperazin-1-il)ciclobutil]acetonitrila

[00138] Uma mistura de ácido 2-(trifluorometil)pirimidina-4-carbo- xílico (0,225 g, 1,17 mmol, preparada por hidrólise do éster metílico obtido a partir de Apollo conforme descrito em WO2006/067445), hexafluorofosfato de N,N,N',N'-tetrametil-O-(7-azabenzotriazol-1- il)urônio (0,29 g, 0,76 mmol, Aldrich), e trietilamina (0,26 mL, 1,9 mmol) em tetra-hidrofurano (6 mL) foi pré-agitada durante 15 minutos, seguido de adição de {trans-3-piperazin-1-il-1-[4-(7-{[2- (trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]ciclobutil}acetonitrila (0,188 g, 0,380 mmol, preparada tal como no exemplo 1b de US 2012/0149681, etapa 1) em tetra-hidrofurano (10 mL). A reação foi agitada de um dia para o outro. O THF foi removido a vácuo. O resíduo foi particionado entre bicarbonato de sódio saturado e acetato de etila. A porção aquosa foi extraída um total de três vezes. Os extratos orgânicos combinados foram secos com sulfato de sódio, decantados e concentrados. Cromatografia de média pressão (flash), eluindo com um gradiente de 0 a 10% de MeOH em DCM foi usada para purificar o intermediário protegido por SEM. A desproteção foi feita primeiro agitando-se com ácido trifluoroacético (10 mL) em cloreto de metileno (10 mL) durante 2 horas, seguido de evaporação do solvente a vácuo e, então, agitação com metanol (6 mL, 200 mmol) contendo etilenodiamina (0,5 mL, 7 mmol) de um dia para o outro. A mistura de reação foi particionada entre água e acetato de etila, e a porção aquosa foi extraída mais duas vezes com acetato de etila. Os extratos combinados foram secos com sulfato de sódio, filtrados e concentrados. Cromatografia de média pressão (flash) foi usada para purificar o produto, eluindo com um gradiente de 0 a 10% de MeOH em DCM. O produto foi repurificado por HPLC-MS preparativa (C18, eluindo com um gradiente de H2O/MeCN contendo 0,1% de TFA). A acetonitrila foi removida do eluente contendo a massa desejada através de evaporação rotativa e, então, a solução aquosa remanescente foi neutralizada mediante a adição de bicarbonato de sódio e extraída com acetato de etila várias vezes. Os extratos orgânicos combinados foram secos com sulfato de sódio, filtrados e concentrados. O produto foi repurificado por HPLC-MS preparativa (C18, eluindo com um gradiente de H2O/MeCN contendo 0,15% de NH4OH). O eluente contendo a massa desejada foi congelado e liofilizado para produzir o produto como a base livre (99 mg, 48%). 1H RMN (300 MHz, CD3OD): δ 9,13 (d, 1H), 8,71 (s, 1H), 8,66 (s, 1H), 8,39 (s, 1H), 7,88 (d, 1H), 7,50 (d, 1H), 6,98 (d, 1H), 3,893,81 (m, 2H), 3,59-3,52 (m, 2H), 3,34 (s, 2H), 3,13-3,03 (m, 2H), 2,97 (tt, 1H), 2,59-2,42 (m, 6H); 19F RMN (282 MHz, CD3OD): δ -72,43 (s, 3F); LCMS (M+H)+: 537,0. Exemplo 9. {trans-3-(4-{[4-[(3-Hidroxiazetidin-1-il)metil]-6-(trifluorometil) piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]ciclobutil}acetonitrila

[00139] O procedimento do exemplo 153 de US 2012/0149681 foi seguido usando N,N-di-isopropiletilamina (64 μL, 0,37 mmol) e cloridrato de azetidin-3-ol (30 mg, 0,3 mmol, Oakwood) na etapa de deslocamento. Após agitação de um dia para o outro à temperatura ambiente, metanol (0,20 mL) foi adicionado para produzir uma solução homogênea, que foi agitada por mais 2,5 horas à temperatura ambiente e tratada de acordo com as condições de desproteção e purificação dadas no exemplo 153 de US 2012/0149681 para fornecer o produto como a base livre (9,7 mg, 44%). 1H RMN(400 MHz, dmso) δ 12,12 (br s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,59 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,29 (s, 1H), 7,06 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,93 (s, 1H), 5,34 (d, J = 6,4 Hz, 1H), 5,05 - 4,77 (m, 1H), 4,19 (h, J = 6,1 Hz, 1H), 3,60 (s, 2H), 3,50 (td, J = 6,1, 2,0 Hz, 2H), 3,40 (s, 2H), 3,06 - 2,92 (m, 2H), 2,86 - 2,71 (m, 3H), 2,68 - 2,53 (m, 2H), 2,38 - 2,22 (m, 2H), 2,22-2,07 (br m, 2H), 2,05-1,95 (br m, 2H), 1,75 - 1,48 (m, 2H); 19F RMN (376 MHz, dmso) δ -67,36 (s); LCMS (M+H)+: 608,2. Exemplo 10. {trans-3-(4-{[4-{[(2S)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-il]metil}-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila

[00140] O método do exemplo 158 de US 2012/0149681 foi seguido, exceto que o deslocamento do mesilato com amina foi executado com o uso de (2 S )-pirrolidin-2-ilmetanol (20 μL, 0,2 mmol, Aldrich), à temperatura ambiente de um dia para o outro (8,3 mg, 59%). 1H RMN (500 MHz, DMSO) δ 12,09 (br s, 1H), 8,81 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,41 (s, 1H), 7,59 (d, J = 3,5 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,06 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,03 (s, 1H), 5,00 (tt, J = 8,4, 3,9 Hz, 1H), 4,48 (s, 1H), 4,12 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 3,45 (d, J = 15,0 Hz, 1H), 3,41 (s, 2H), 3,423,25 (m, 2H), 3,06 - 2,97 (m, 2H), 2,87 - 2,77 (m, 2H), 2,69 - 2,62 (m, 2H), 2,59 (dddd, J = 5,8, 5,8, 5,8, 8,1 Hz, 1H), 2,41 - 2,31 (m, 2H), 2,22 - 2,09 (m, 3H), 2,08 - 1,95 (m, 2H), 1,83 (dddd, J = 8,1, 8,1, 8,3, 12,2 Hz, 1H), 1,75 - 1,46 (m, 5H); 19F RMN (376 MHz, dmso) δ -67,24 (s); LCMS (M+H)+: 636,3. Exemplo 11. {trans-3-(4-{[4-{[(2R)-2-(hidroximetil)pirrolidin-1-il]metil}-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila

[00141] O método do exemplo 158 de US 2012/0149681 foi seguido, exceto que o deslocamento de mesilato com amina foi executado com o uso de (2 R )-pirrolidin-2-ilmetanol (20 μL, 0,2 mmol, Aldrich) à temperatura ambiente de um dia para o outro (8,3 mg, 59%). 1H RMN (400 MHz, dmso) δ 12,14 (br s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,60 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,39 (s, 1H), 7,08 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,03 (s, 1H), 5,04 - 4,94 (m, 1H), 4,52 (t, J = 5,4 Hz, 1H), 4,12 (d, J = 14,9 Hz, 1H), 3,52 - 3,22 (m, 5H), 3,09 - 2,92 (m, 2H), 2,86 - 2,73 (m, 2H), 2,70 - 2,53 (m, 3H), 2,42 - 2,27 (m, 2H), 2,22 - 2,09 (m, 3H), 2,06 - 1,87 (m, 2H), 1,82 (dddd, J = 8,0, 8,0, 8,4, 11,9 Hz, 1H), 1,77 - 1,37 (m, 5H); 19F RMN (376 MHz, dmso) δ -67,24 (s); LCMS (M+H)+: 636,3. Exemplo 12. 4-(4-{3-[(Dimetilamino)metil]-5-fluorofenóxi}piperidin-1-il)- 3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butanonitrila (quiral) Etapa 1.3-Fluoro-5-hidroxibenzaldeído

[00142] A uma suspensão de 3-fluoro-5-hidroxibenzonitrila (1,00 g, 7,29 mmol) em tolueno (60,0 mL a -78°C adicionou-se hidreto de di- isobutilalumínio a 1,0 M em tolueno (18,2 mL, 18,2 mmol). A mistura resultante foi agitada a -78°C durante 1 hora e deixada para aquecer naturalmente até temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura a 1:1 de metanol e água (10 mL) foi adicionada e agitada durante 35 minutos. O sólido foi filtrado e lavado com acetato de etila. Os filtrados foram lavados com água e salmoura e então secos com Na2SO4, filtrados e concentrados. O produto bruto foi purificado com coluna de gel de sílica (eluída com 10 a 50% de acetato de etila/hexanos) para fornecer o produto desejado (0,77 g, 75%). 1H RMN (DMSO-d6) δ 10,49 (s, 1H), 9,88 (s, 1H), 7,10 (m, 2H), 6,87 (d, 1H). Etapa 2. 3-[(Dimetilamino)metil]-5-fluorofenol

[00143] A uma mistura de cloridrato de dimetilamina (160 mg, 1,96 mmol) e 3-fluoro-5-hidroxibenzaldeído (250,0 mg, 1,784 mmol) em cloreto de metileno (9,0 mL) adicionou-se trietilamina (323 μL, 2,32 mmol) e resina de triacetoxiboroidreto de sódio (1,1 g, 2,7 mmol). A mistura resultante foi agitada de um dia para o outro e então filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica (eluindo com 0 a 15% de metanol/DCM) para fornecer o produto desejado (0,21 g, 70%). 1H RMN (DMSO-d6) δ 6,55 (m, 2H), 6,42 (d, 1H), 2,15 (s, 6H), 1,89 (s, 2H). LCMS (M+H)+: 170,1. Etapa 3. 4-(4-{3-[(Dimetilamino)metil]-5-fluorofenóxi}piperidin-1-il)-3-[4- (7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1 -il]butanonitrila

[00144] A uma mistura de 3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorofenol (158 mg, 0,934 mmol) em cloreto de metileno (9 mL) adicionou-se resina de trifenilfosfina (578 mg, 1,37 mmol) e azodicarboxilato de di-terc-butila (229 mg, 0,996 mmol). A mistura foi agitada durante 20 minutos antes da adição de uma solução de 4-(4-hidroxipiperidin-1-il)-3-[4-(7-{[2-(tri- metilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butanonitrila (300 mg, 0,6 mmol) em cloreto de metileno (2 mL). A reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. Resina adicional de trifenilfosfina (0,5 g), azodicarboxilato de di-terc-butila (0,23 g), e DCM (8 mL) foram adicionados e agitados por mais 2 horas. O frasco e a resina foram lavados com DCM e filtrados. Os filtrados foram lavados com solução de NaOH aq. a 10%. A camada orgânica foi seca com MgSO4, filtrada e concentrada. O produto bruto foi purificado por coluna de gel de sílica (eluída com 0 a 15% de metanol/DCM) para fornecer o produto protegido por SEM. LCMS (M+H)+: 633,5. Ao produto purificado adicionou-se cloreto de metileno (1,5 mL) e ácido trifluoroacético (1,5 mL, 19 mmol) e agitou-se durante 2 horas. Os solventes foram evaporados antes da adição de metanol (3,5 mL) e etilenodiamina (0,70 mL, 10 mmol). A mistura resultante foi agitada durante 1 hora e então concentrada. O concentrado foi colocado em DCM e lavado com água, seco com Na2SO4, filtrado e concentrado para fornecer o produto bruto que foi purificado por prep- HPLC quiral (coluna Chiralcel OJ-H, 4,6 x 250 mm, 5 μ, 60% etanol/Hex, 0,5 ml/min) para fornecer 2 enantiômeros.

[00145] Enantiômero 1 (primeiro a eluir): LCMS (M+H)+: 503,3.

[00146] Enantiômero 2 (segundo a eluir): 1H RMN (DMSO-d6) δ 8,78 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,35 (s, 1H), 7,59 (d, 1H), 6,96 (d, 1H), 6,64 (t, 3H), 4,94 (m, 1H), 4,36 (m, 1H), 3,39 (m, 2H), 3,19 (d, 3H), 2,77 (m, 3H), 2,60 (m, 1H), 2,32 (m, 2H), 2,10 (s, 6H), 1,83 (m, 2H), 1,54 (m, 2H). LCMS (M+H)+: 503,3. Exemplo 13. 5-{3-(Cianometil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol- 1 -il]azetidin-1-il}-N-isopropilpirazina-2-carboxamida Etapa 1: 5-{3-(Cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pirazina-2-carboxilato de metila

[00147] (R)-(+)-2,2'-Bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftila (0,065 g, 0,10 mmol) foi adicionado a uma mistura de dicloridrato de {3-[4-(7-{[2-(trimetil- silil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}ace- tonitrila (0,50 g, 1,0 mmol), metil 5-cloropirazina-2-carboxilato (0,18 g, 1,0 mmol)(Ark Pharm, Inc., n° de Catálogo: AK-23920), e carbonato de césio (1,0 g, 3,1 mmol) em tolueno (15,0 mL) sob nitrogênio, seguido de acetato de paládio (0,023 g, 0,10 mmol). A mistura de reação foi agitada a 120 °C durante 3 h. Após ser resfriada até a temperatura ambiente, a mistura de reação foi filtrada através de um bloco de Celite e lavada com acetato de etila. O filtrado foi concentrado sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de média pressão (flash) em uma coluna de gel de sílica com acetato de etila em diclorometano (0 a 70%) para produzir o produto desejado (0,31 g, 55%). LCMS (M+H)+: m/z = 546,3. Etapa 2: Ácido 5-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H- pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pirazina-2-carboxílico

[00148] Uma mistura de 5-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi]-metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il} pirazina-2-carboxilato de metila (0,31 g, 0,57 mmol), mono-hidrato de hidróxido de lítio (0,060 g, 1,4 mmol) em metanol (6,0 mL) e água (2,5 mL) foi agitada a 30°C de um dia para o outro. A mistura foi ajustada para pH = 4 com HCl aquoso, e concentrada sob pressão reduzida para remover o MeOH. O sólido resultante foi filtrado, lavado com água e éter e, então, seco a vácuo para produzir o produto desejado (0,25 g, 83%). LCMS (M+H)+: m/z = 532,3. Etapa 3: 5-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-1-il}-N-isopropilpirazina-2-carboxamida

[00149] Trietilamina (15 μL, 0,11 mmol) foi adicionada a uma mistura de ácido 5-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}- 7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pirazina-2- carboxílico (19,4 mg, 0,0365 mmol) e hexafluorofosfato de benzotriazol-1-iloxitris (dimetilamino)fosfônio (19 mg, 0,044 mmol) e 2- propanamina (3,2 mg, 0,055 mmol) em cloreto de metileno (1,3 mL). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura de reação foi processada com NaHCO3 aquoso, e extraída com cloreto de metileno (2 x 2 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com água (1 mL) e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi usado para a etapa seguinte sem purificação adicional. LCMS (M+H)+: m/z = 573,3.

[00150] Cloreto de metileno (1,3 mL) e ácido trifluoroacético (0,6 mL) foram adicionados ao intermediário acima. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h. A mistura foi concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (1,3 mL). À solução adicionou-se etilenodiamina (0,086 mL). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h, e purificada por RP-HPLC (pH = 10) para fornecer o produto desejado. LCMS (M+H)+: m/z = 443,2. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,15 (br, 1H), 8,97 (s, 1H), 8,68 (s, 1H), 8,63 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 8,46 (s, 1H), 8,12 (d, = 8,4 Hz, 1H), 7,97 (d, J = 1,2 Hz, 1H), 7,60 (dd, J = 3,3, 2,4 Hz, 1H), 7,07 (dd, J = 3,4, 1,7 Hz, 1H), 4,81 (d, J = 9,8 Hz, 2H), 4,53 (d, J = 9,6 Hz, 2H), 4,13-4,02 (m, 1H), 3,78 (s, 2H), 1,14 (d, J = 6,8 Hz, 6H). Exemplo 14. 4-{3-(Cianometil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol- 1 -il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil] benzami- da Etapa 1. 4-cloro-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzami- da

[00151] Cloreto de 4-cloro-2,5-difluorobenzoíla (29,6 mg, 0,140 mmol) (Oakwood, n° de Catálogo: 001628) foi adicionado a uma mistura de cloridrato de (2S)-1,1,1-trifluoropropan-2-amina (20,0 mg, 0,134 mmol) (SynQuest Lab, n° de Catálogo: 3130-7-S1) e di- isopropiletilamina (58 μL, 0,33 mmol) em diclorometileno (4,0 mL) a 0°C. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min., processada com NaHCO3 aquoso saturado, e extraída com diclorometileno (3x10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para produzir o produto desejado que foi usado diretamente na etapa de reação seguinte sem purificação adicional. LCMS (M+H)+: m/z = 288,0/290,0. Etapa 2. 4-{3-(Cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirro- lopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1 -il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2- trifluoro-1-metiletil]benzamida

[00152] (R)-(+)-2,2'-Bis(difenilfosfino)-1,1'-binaftila (8,3 mg, 0,013 mmol) foi adicionada a uma mistura de dicloridrato de {3-[4-(7-{[2-(tri- metilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3- il}acetonitrila (65 mg, 0,13 mmol), 4-cloro-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2- trifluoro-1-metiletil]benzamida (0,14 mmol), e carbonato de césio (0,13 g, 0,40 mmol) em tolueno (4,0 mL) sob N2, seguido de acetato de paládio (3,0 mg, 0,013 mmol). A mistura de reação foi agitada a 130°C durante 5 h. Após a mistura de reação ter resfriado até a temperatura ambiente, a mistura foi processada com água, e extraída com acetato de etila (3 x10 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida para fornecer o produto bruto que foi usado diretamente na etapa de reação seguinte sem purificação adicional. LCMS (M+H)+: m/z = 661,2. Etapa 3. 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida

[00153] Eterato de trifluoreto de boro (0,051 mL, 0,40 mmol) foi adicionado a uma solução de 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil) etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}-2,5- difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1-metiletil]benzamida em acetonitrila (1,0 mL) a 0 °C sob N2. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h. (LCMS (M+H)+: m/z = 561,3). A seguir, a mistura foi resfriada para 0°C e água (0,13 mL) foi adicionada. Após 30 min, hidróxido de amônio a 5,0 M em água (0,2 mL, 1 mmol) foi adicionado lentamente a 0°C ao longo de 5 min. A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro, e purificada por RP-HPLC (pH = 10) para fornecer o produto desejado. LCMS (M+H)+: m/z = 531,0. 1H RMN (400 MHz, DMSO-d6): δ 12,62 (br, 1H), 9,07 (s, 1H), 8,84 (s, 1H), 8,55 (s, 1H), 8,51 (dd, J = 8,8, 1,2 Hz, 1H), 7,78 (br, 1H), 7,35 (dd, J = 12,6, 6,5 Hz, 1H), 7,23 (d, J = 1,9 Hz, 1H), 6,65 (dd, J = 11,9, 7,3 Hz, 1H), 4,76 (m, 1H), 4,70 (d, J = 9,3 Hz, 2H), 4,44 (d, J = 9,2 Hz, 2H), 3,76 (s, 2H), 1,30 (d, J = 7,1 Hz, 3H). Exemplo 15. 5-{3-(Cianometil)-3-[4-(1H-pirrolopiridin-4-il)-1H-pirazol-1 - il]azetidin-1-il}-N-isopropilpirazina-2-carboxamida Etapa 1: 5-{3-(Cianometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H-pirrolo- piridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1 -il}pirazina-2-carboxilato de metila

[00154] N,N-Di-isopropiletilamina (1,0 mL, 6,0 mmol) foi adicionada a uma mistura de dicloridrato de {3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H- pirrolopiridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (0,96 g, 2,0 mmol) e 5-cloropirazina-2-carboxilato de metila (0,34 g, 2,0 mmol) em 1,4-dioxano (15 mL). A mistura de reação foi agitada a 120°C de um dia para o outro. A mistura foi processada com NaHCO3 aquoso saturado e extraída com diclorometileno (3x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi purificado por cromatografia de média pressão (flash) em uma coluna de gel de sílica com acetato de etila em hexanos (0 a 60%) para produzir o produto desejado (0,13 g, 12%). LCMS (M+H)+: m/z = 545,2. Etapa 2. Ácido 5-{3-(cianometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-1H- pirrolopiridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pirazina-2-carboxílico

[00155] Uma mistura de reação de 5-{3-(cianometil)-3-[4-(1-{[2-(tri- metilsilil)etóxi]metil}-1H-pirrolopiridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pi- razina-2-carboxilato de metila (0,13 g, 0,24 mmol), mono-hidrato de hidróxido de lítio (0,025 g, 0,60 mmol) em metanol (4,0 mL), THF (2,0 mL) e água (1,0 mL) foi agitada a 40°C durante 3 h. A mistura foi ajustada para pH = 4 com solução aquosa de HCl a 2,0 N e concentrada sob pressão reduzida para remover o MeOH e o THF. O precipitado formado foi filtrado, lavado com água e éter, e seco a vácuo para produzir o produto desejado (0,100 g, 79%). LCMS (M+H)+: m/z = 531,4. Etapa 3. 5-{3-(cianometil)-3-[4-(1H-pirrolopiridin-4-il)-1H-pirazol-1-il] azetidin-1-il}-N-isopropilpirazina-2-carboxamida

[00156] N,N-Di-isopropiletilamina (19 μL, 0,11 mmol) foi adicionada a uma mistura de ácido 5-{3-(cianometil)-3-[4-(1-{[2-(trimetilsilil)etóxi] metil}-1H-pirrolopiridin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il}pirazina-2-car- boxílico (19,4 mg, 0,0365 mmol), hexafluorofosfato de benzotriazol-1- iloxitris(dimetilamino)fosfônio (19 mg, 0,044 mmol) e 2-propanamina (3,2 mg, 0,055 mmol) em DMF (1,0 mL). A mistura de reação foi agitada à temperatura ambiente de um dia para o outro. A mistura de reação foi processada com NaHCO3 aquoso saturado e extraída com diclorometileno (3x 20 mL). As camadas orgânicas combinadas foram lavadas com salmoura, secas com MgSO4, filtradas e concentradas sob pressão reduzida. O resíduo foi tratado com cloreto de metileno (1,3 mL) e TFA (1,3 mL). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 1,5 h., e concentrada sob pressão reduzida. O resíduo foi dissolvido em metanol (1,3 mL), e tratado com etilenodiamina (0,086 mL, 1,3 mmol). A mistura resultante foi agitada à temperatura ambiente durante 2 h e, então, purificada por RP-HPLC (pH = 10) para produzir o produto desejado. LCMS (M+H)+: m/z = 442,1. 1H RMN (400 MHz, DMSO- d6): δ 12,19 (br, 1H), 8,99 (s, 1H), 8,66 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 8,47 (s, 1H), 8,32 (d, J = 5,7 Hz, 1H), 8,14 (d, J = 8,4 Hz, 1H), 8,00 (d, J = 1,4 Hz, 1H), 7,67 (dd, J = 3,2, 2,7 Hz, 1H), 7,54 (d, J = 5,5 Hz, 1H), 7,09 (dd, J = 3,5, 2,7 Hz), 4,82 (d, J = 10,0 Hz, 2H), 4,56 (d, J = 10,0 Hz, 2H), 4,10 (m, 1H), 3,79 (s, 2H), 1,17 (d, J = 6,4 Hz, 6H). Exemplo 16: Tris(trifluoroacetato) de {1-(cis-4-{[6-(2-hidroxietil)-2- (trifluorometil)pirimidin-4-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila Etapa 1:[6-(1,4-Dioxaspirodec-8-ilóxi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4il] malonato de dietila

[00157] A uma mistura de tetra-hidrofurano (40 mL) e NaH em óleo mineral (1,1 g, 28 mmol) a 0°C adicionou-se malonato de etila (4,2 mL, 28 mmol), por gotejamento. 4-Cloro-6-(1,4-dioxaspirodec-8-ilóxi)-2- (trifluorometil)pirimidina (descrita no exemplo 1 de US 2013/0045963, etapa 1) (3,75 g, 11,1 mmol), foi, então, adicionada. A mistura de reação foi agitada a 64°C. Após 3 horas, a análise de HPLC & LCMS mostrou 70% de término da reação. Ela foi aquecida por mais 6 horas e, então, resfriada até 20°C. Apenas um traço de produto de descarboxilação foi formado. A reação foi diluída com bicarbonato aquoso, e extraída com EtOAc. O extrato de EtOAc foi lavado com salmoura, seco com Na2SO4, e evaporado a vácuo para fornecer 8,5 g de óleo (inclui malonato de etila em excesso e óleo mineral). O produto bruto foi purificado por cromatografia em uma coluna de 120 g gel de sílica, com o uso de solvente A= hexano; solvente B= EtOAc; fluxo de 60 mL/min; A, 3 min; gradiente para 40%B em 40 min; detector ajustado a 254 nm; frações de 47 mL coletadas; tempo de retenção, 28 min. As frações combinadas foram evaporadas para produzir 4,6 g, óleo sem cor, 90% de rendimento. 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 7,05 (s, 1H); 5,30 (m, 1H, OCH); 4,85 (s, 1H, CH); 4,25 (m, 2H, OCH2); 3,95 (s, 4H, OCH2); 1,6-2,1 (m, 8H); 1,28 (t, 3H, CH3). Etapa 2: [6-(1,4-Dioxaspirodec-8-ilóxi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il] acetato de etila

[00158] [6-(1,4-Dioxaspirodec-8-ilóxi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il] malonato de dietila (4,60 g, 9,95 mmol), foi dissolvida em etanol (46 mL). Água (18 μL, 1,0 mmol) e 21% de etóxido de sódio em etanol (0,37 mL, 1,0 mmol) foram adicionados. A mistura de reação foi agitada a 75°C durante 1 hora. A análise de HPLC & LCMS mostrou 60% de descarboxilação. O aquecimento foi continuado por mais 2 horas (reação completa). A reação foi diluída com bicarbonato aquoso e extraída com EtOAc. O extrato de EtOAc foi lavado com salmoura e, então, seco (Na2SO4), e evaporado a vácuo até 3,4 g de óleo (88% de rendimento). LCMS, HPLC, & RMN mostraram que ele está suficientemente limpo para prosseguir. 1H RMN (400 MHz, DMSO-D6): δ 7,20 (s, 1H); 5,20 (m, 1H, OCH); 4,10 (q, 2H, OCH2); 3,89 (s, 2H, CH2); 3,85 (s, 4H, OCH2); 1,5-2,0 (m, 8H); 1,15 (t, 3H, CH3). HPLC mostrou que ele tem UVmax de 222 & 252 nm. Etapa 3: 2-[6-(1,4-dioxaspirodec-8-ilóxi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il] etanol

[00159] [6-(1,4-Dioxaspirodec-8-ilóxi)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il] acetato de etila (3,0 g) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (40 mL) e resfriado em um banho de gelo. Tetra-hidroborato de sódio (884 mg, 23,4 mmol) foi adicionado seguido de metanol (4,8 mL, 120 mmol), em porções. A mistura de reação foi agitada durante 20 min, removida do banho de gelo, e agitada a 21°C durante 0,5 hora. HPLC & LCMS não mostraram éster remanescente, e mostraram conversão ao M+H 349 desejado; e também mostraram vários outros produtos de redução (ao menos um dos quais não tem absorbância de UV). A mistura de reação foi resfriada rapidamente com água e evaporada. A mistura de reação foi diluída com bicarbonato aquoso e EtOAc, e agitada por 0,5 hora. A camada de EtOAc foi lavada com salmoura, seca (Na2SO4) e evaporada para fornecer 3,0 g de óleo. O produto foi purificado por cromatografia em uma coluna de gel de sílica de 120 g, com o uso do solvente A= hexano; solvente B= 3%iPA/EtOAc; fluxo de 60 mL/min; A, 3 min; gradiente até 50% de B em 30 min e, então, 50% de B durante 15 minutos; detector ajustado a 254 nm; frações de 47 mL coletadas; tempo de retenção de 34 min., evaporado para produzir 1,5 g de um óleo viscoso amarelo claro, 56% de rendimento. 1H RMN (300 MHz, DMSO-D6): δ 7,10 (s, 1H); 5,20 (m, 1H, OCH); 4,71 (t, 1H, OH); 3,85 (s, 4H, OCH2); 3,72 (q, 2H, OCH2); 2,85 (t, 2H, CH2); 1,5-2,0 (m, 8H). Etapa 4: 4-{[6-(2-hidroxietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]óxi}ciclo-he- xanona

[00160] 2-[6-(1,4-Dioxaspirodec-8-ilóxi)-2-(trifluorometil) pirimidin-4- il]etanol foi dissolvido em acetona (60 mL, 900 mmol), e cloreto de hidrogênio a 5,0 M em água (20 mL, 98 mmol) foi adicionado e agitado durante 17 horas. Análises por LCMS e por HPLC mostraram conversão quase completa em M+H 305. Bicarbonato aquoso foi adicionado e a mistura de reação foi agitada e, então, concentrada. Esta mistura foi extraída com EtOAc. O EtOAc foi seco (Na2SO4), e evaporado a vácuo para fornecer 1,3 g de óleo viscoso amarelo claro (usado na reação seguinte sem purificação). 1H RMN (300 MHz, CDCl3): δ 6,80 (s, 1H); 5,60 (m, 1H, OCH); 4,06 (t, 2H, OCH2); 3,04 (t, 2H, CH2); 2,61 (m, 2H); 2,45 (m, 2H); 2,25 (m, 2H). Etapa 5:{1-(4-{[6-(2-hidroxietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]óxi} ciclohexil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[00161] Dicloridrato de {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (1,9 g, 3,9 mmol), e 4-{[6-(2-hidroxietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]óxi}ciclo-hexanona (1,3 g, 4,3 mmol), em tetra-hidrofurano seco (36 mL) foram agitados durante 15 minutos sob nitrogênio. Triacetoxiboroidreto de sódio (1,7 g, 8,2 mmol) foi, então, adicionado. A mistura foi agitada a 20°C durante 16 horas. As análises por HPLC e LCMS mostraram conversão aos produtos trans e cis (M+H 698; razão 1:1). A reação foi resfriada rapidamente com água, concentrada, agitada com 20% de KHCO3 e extraída com acetato de etila, seca (Na2SO4), filtrada, e evaporada para fornecer 2,8 g. Os produtos isoméricos foram separados por LCMS prep com o uso de um instrumento Waters e uma coluna C18 de 30 mm*100 mm Xbridge; 60 mL/min; 55% CH3CN- H2O (0,1% de NH4OH); 0,5 min; 4,5 gradientes até 72%; 24 passagens; tempo de retenção do isômero trans de 4,6 min; isômero cis 5,4 min. O isômero cis isolado continha < 1% de isômero trans residual. Rendimento 1,00 g de isômero cis, 37% de rendimento. 1H RMN (500 MHz, CDCl3; também COSY, HSQC, e HMBC): δ 8,83 (s, 1H); 8,40 (s, 1H); 8,28 (s, 1H); 7,40 (m, 1H); 6,80 (m, 1H); 6,67 (s, 1H); 5,64 (s, 2H, SEM); 5,17 (m, 1H, OCH); 4,01 (t, 2H, OCH2); 3,74 (s, 2H, NCH); 3,59 (m, 2H, NCH); 3,55 (t, 2H, SEM); 3,38 (s, 2H, CH2CN); 2,95 (t, 2H, CH2); 2,30 (m, 1H, NCH); 2,15 (m, 2H); 1,84 (m, 2H); 1,50 (m, 2H); 1,30 (m, 2H); 0,90 (t, 2H, SEM); -0,92 (s, 9H, SEM). Etapa 6. Tris(trifluoroacetato) de {1-(cis-4-{[6-(2-hidroxietil)-2-(trifluo- rometil)pirimidin-4-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pi- razol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[00162] O isômero de {1-(4-{[6-(2-hidroxietil)-2-(trifluorometil) pirimidin-4-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila foi dissolvido em cloreto de metileno (18 mL) e ácido trifluoroacético (TFA, 18 mL, 230 mmol) e foi agitado durante 1,0 hora. A solução foi concentrada para remover o TFA. LCMS mostrou conversão ao intermediário de hidroximetila, M+H 598, algum do seu éster de TFA, M+H 694, e <5% de SEM residual. O resíduo foi dissolvido em metanol (36 mL) e hidróxido de amônio a 15,0 M em água (9,0 mL, 130 mmol) foi adicionado. A solução foi agitada a 21°C durante 18 horas. HPLC & LCMS não mostraram pico de M+H 598 ou éster de TFA remanescentes. A solução foi evaporada. Trifluoroacetato de amônio foi removido pela adição de bicarbonato aquoso e extração do produto com EtOAc. O extrato de EtOAc combinado foi evaporado para fornecer 0,96 g. Isto foi dissolvido em 70 mL de 10% H2O/ACN contendo 1,5 equiv de TFA (180 μL). O produto foi isolado por LCMS prep com o uso de um instrumento Waters Fraction-Linx e uma coluna C18 Sunfire de 30 mm*100 mm; 60 mL/min; 15% ACN-H2O (0,1%TFA), 0,5 min; gradiente de 4,5 min até 33%; detector ajustado a m/z 568; 14 passagens; tempo de retenção de 5,0 min. A HPLC mostrou UVmáx 224, 252, 294, e 318 nm. As frações combinadas foram secas por congelamento. Rendimento de 1,0 g de sólido branco (80% de rendimento). A RMN mostrou que ele era o sal de TFA 2,5. 1H RMN (500 MHz, CD3CN; também COSY, HSQC, e HMBC): δ 10,84 (s, 1H, NH); 9,00 (s, 1H); 8,90 (s, 1H); 8,56 (s, 1H); 7,66 (m, 1H); 7,10 (m, 1H); 6,86 (s, 1H); 5,39 (m, 1H, OCH); 4,86 (brs, 2H, NCH); 4,66 (m, 2H, NCH); 3,90 (t, 2H, OCH2); 3,78 (s, 2H, CH2CN); 3,39 (m, 1H, NCH); 2,92 (t, 2H, CH2); 2,20 (m, 2H); 1,92 (m, 2H); 1,76 (m, 4H). 19F RMN (400 MHz, DMSO-D6): δ- 69,8 (s); - 74,8 (s, TFA); LCMS calculada para C27H29F3N9O2 (M+H)+: m/z = 568,24 Exemplo 17: tris (trifluoroacetato) de {1-(cis-4-{[4-[(Etilamino)metil]-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila Etapa 1: Metanossulfonato de [2-[(cis-4-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(tri- metilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il] azetidin-1- il}ciclo-hexil)óxi]-6-(trifluorometil)piridin-4-il]metila

[00163] {1-(Cis-4-{[4-(hidroximetil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]óxi}ci- clo-hexil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (do exemplo 64 de US 2013/0045963, 145,0 mg, 0,2124 mmol) foi dissolvida em cloreto de metileno (2,93 mL) e foi resfriada até 0°C. A isto, N,N-di-isopropiletilamina (60,5 μL, 0,347 mmol) foi adicionada seguido de cloreto de metanossulfonila (23 μL, 0,30 mmol). A reação foi agitada a 0°C durante 1 hora. Então, a mistura de reação foi processada com EtOAc e usada na reação seguinte. MS(ES):761(M+1). Etapa 2: Tris(trifluoroacetato) de {1-(cis-4-{[4-[(etilamino)metil]-6-(tri- fluorometil)piridin-2-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[00164] Metanossulfonato de [2-[(cis-4-{3-(cianometil)-3-[4-(7-{[2-(tri- metilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-1-il} ciclo-hexil)óxi]-6-(trifluorometil)piridin-4-il]metila (50 mg, 0,06571 mmol) foi dissolvido em 1,4-dioxano (2,5 mL) e etilamina 2,0 M em THF (300 μL, 0,6 mmol) foi adicionada. A reação foi agitada a 25°C durante 16 horas e neste tempo a análise de LCMS mostrou principalmente o produto. O produto foi purificado por LC, evaporado e desprotegido tal como no exemplo 1 de US 2013/0045963 e purificado por LC para fornecer o produto. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 9,08 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,58 (s, 1H), 7,78 (d, 1H), 7,50 (s, 1H), 7,25 (d, 1H), 7,13 (s, 1H), 5,38 (m, 1H), 5,08 (d, 2H), 4,80 (d, 2H), 4,27 (s, 2H), 3,74 (s, 2H), 3,50 (m, 1H), 3,16 (q, 2H), 2,24 (m, 2H), 2,01 (m, 2H), 1,76 (m, 4H), 1,34 (t, 3H). 19F RMN (376 MHz, CD3OD) δ -70,52 (s), -77,49 (s). MS(ES):580(M+1). Exemplo 18: Bis(trifluoroacetato) de {1-(cis-4-{[4-(1-hidróxi-1-metiletil)- 6-(trifluorometil)piridin-2-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila Etapa 1: Ácido 2-cloro-6-(trifluorometil)isonicotínico

[00165] 2-Cloro-6-(trifluorometil)piridina (1,0 g, 5,51 mmol, Oakwood Products) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (20 mL) e cloreto de lítio a 1,0 M - cloro(2,2,6,6-tetrametilpiperidin-1-il)magnésio (1:1) em THF (6,610 mL, 6,610 mmol, Aldrich Co.) foi adicionado a 25°C. A reação foi agitada a 25°C durante 1 hora e foi resfriada até-78°C. A reação foi agitada a -78°C durante 1 hora e deixada para aquecer naturalmente até a temperatura ambiente, resfriada rapidamente com água, e foi particionada entre NaOH 1 N e éter. As fases foram separadas e a fase aquosa foi lavada com éter adicional e acidificada com HCl concentrado até pH~1 e extraída com éter. A fase orgânica combinada foi lavada com água, NaCl saturado, seca com MgSO4, filtrada, e evaporada até secura para fornecer o produto bruto. A análise por RMN mostrou que ela consistia em uma mistura ~2:1 dos ácidos para e meta carboxílicos. A mistura foi levada para a reação seguinte. 440 MHz RMN(CDCl3) δ 8,17 (s, 1H), 8,11 (s, 1H). Etapa 2: 2-Cloro-6-(trifluorometil)isonicotinato de etila e 2-cloro-6-(tri- fluorometil)nicotinato de etila

[00166] Em um frasco, ácido 2-cloro-6-(trifluorometil)nicotínico (0,98 g, 4,4 mmol) e ácido 2-cloro-6-(trifluorometil)isonicotínico (1,85 g, 8,2 mmol) foram dissolvidos em ortoformiato de etila (5,0 mL, 30,1 mmol) e aquecidos para 120°C durante 5 horas e neste tempo a análise de CCF mostrou que a maior parte do material de partida havia sido consumida e os produtos foram formados. A mistura de reação foi evaporada a vácuo e o resíduo foi purificado por cromatografia em gel de sílica com o uso de 10% de EtOAc/hexanos para fornecer os dois produtos de éster etílico. 1H RMN (400 MHz, CDCl3): δ 8,14 (s, 1H), 8,08 (s, 1H), 4,47 (q, 2H), 1,44 (t, 3H). Etapa 3: 2-[2-cloro-6-(trifluorometil)piridin-4-il]propan-2-ol

[00167] 2-Cloro-6-(trifluorometil)isonicotinato de etila (0,35 g, 1,4 mmol) foi dissolvido em tetra-hidrofurano (13,8 mL) e foi resfriado até - 78°C e, então, brometo de metilmagnésio a 3,0 M em éter (1,4 mL, 4,1 mmol) foi adicionado. A reação foi agitada a -78°C durante 3 horas e neste tempo a análise de LCMS mostrou ausência de material de partida. A reação foi resfriada rapidamente com NH4Cl saturado e foi particionada entre água/HCl 1 N e EtOAc, as fases foram separadas e a fase aquosa foi lavada com EtOAc adicional. A fase orgânica combinada foi lavada com água, NaCl saturado, seca com MgSO4, filtrada e evaporada até secura para fornecer o produto bruto. A análise por RMN mostrou que ela consistia em uma mistura ~1:1 do álcool e do intermediário de metilcetona. O material bruto foi usado na reação seguinte sem purificação. RMN 400 MHz RMN(CDCl3): δ 7,70 (s, 1H), 7,63 (s, 1H), 1,60 (s, 6H) Etapa 4: 2-[2-(1,4-dioxaspirodec-8-ilóxi)-6-(trifluorometil)piridin-4-il] pro- pan-2-ol

[00168] 1,4-Dioxaspirodecan-8-ol (0,25 g, 1,58 mmol) e 2-[2-cloro-6- (trifluorometil)piridin-4-il]propan-2-ol (0,2 g, 0,835 mmol) foram dissolvidos em tetra-hidrofurano (2 mL) e resfriados até 0°C e uma mistura a 60% de hidreto de sódio (70,0 mg, 1,75 mmol) em óleo mineral foi adicionada e a reação foi agitada durante 30 minutos a 0°C e a 25°C durante 60 horas e neste tempo a análise por CCF indicou a presença de algum produto. A reação foi resfriada rapidamente com água, e foi extraída com acetato de etila e os extratos orgânicos foram lavados com água, NaCl saturado, secos (MgSO4) e evaporados a vácuo. O resíduo foi purificado por LC (pH 2) para fornecer o produto. MS (ES):362 (M+1). Etapa 5: 4-{[4-(1-Hidróxi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]óxi}ciclo- hexanona

[00169] 2-[2-(1,4-Dioxaspirodec-8-ilóxi)-6-(trifluorometil)piridin-4- il]propan-2-ol (0,049 g, 0,14 mmol) foi dissolvido em acetona (3,7 mL). Uma solução de cloreto de hidrogênio a 12,0 M em água (0,43 mL, 5,2 mmol) foi adicionada e foi agitada a 25 °C durante 16 horas e neste tempo LCMS mostrou que cerca de 70% de reação estava completa. Mais cloreto de hidrogênio a 12,0 M em água (0,43 mL, 5,2 mmol) foi adicionado e foi agitado durante 3 horas; LCMS mostrou que ~90% da reação estava completa e ela foi resfriada rapidamente em NaHCO3 em excesso, extraída com EtOAc e o extrato orgânico foi evaporado para fornecer o produto. Isto foi usado na reação seguinte sem purificação. MS(ES):318 (M+1). Etapa 5: {1 -(cis-4-{[4-(1 -hidróxi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il] óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4- il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[00170] Dicloridrato de {3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolo pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila (55,3 mg, 0,115 mmol) e 4-{[4-(1-hidróxi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il] óxi}ciclo- hexanona foram dissolvidos em 1,2-dicloro-etano seco (1,38 mL) e foram agitados durante 5 minutos e triacetoxiboroidreto de sódio (86,1 mg, 0,406 mmol) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 25°C durante 16 h, e neste tempo a análise por LCMS mostrou principalmente os dois produtos diastereoméricos. A reação foi resfriada rapidamente com água, neutralizada com NaHCO3 e extraída com acetato de etila e o solvente foi evaporado. O resíduo foi purificado por LCMS (pH 10) e as frações contendo o segundo pico foram combinadas e evaporadas para fornecer {1-(cis-4-{[4-(1-hidróxi- 1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7-{[2- (trimetilsilil)etóxi] metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin- 3-il}acetonitrila. O primeiro pico também foi isolado para fornecer {1- (trans-4-{[4-(1-hidróxi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]óxi}ciclo- hexil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H- pirazol-1-il] azetidin-3-il}acetonitrila. MS(ES): 712(M+1). Etapa 6: Bis(trifluoroacetato) de {1-(cis-4-{[4-(1-hidróxi-1-metiletil)-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila

[00171] {1-(Cis-4-{[4-(1-hidróxi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2- il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin- 4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila foi desprotegida conforme descrito no exemplo 1 de US 2013/0045963 e foi purificada por cromatografia líquida (pH 2) para fornecer bis(trifluoroacetato) de 1- (cis-4-{[4-(1-hidróxi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]óxi}ciclo- hexil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3- il}acetonitrila. De forma similar, {1-(trans-4-{[4-(1-hidróxi-1-metiletil)-6- (trifluorometil) piridin-2-il]óxi}ciclo-hexil)-3-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila bis(trifluoroacetate) foi preparado e caracterizado. 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 9,07 (s, 1H), 8,87 (s, 1H), 8,59 (s, 1H), 7,78 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 7,44 (s, 1H), 7,24 (d, J = 3,7 Hz, 1H), 7,05 (s, 1H), 5,35 (s, 1H), 5,09 (d, J = 12,2 Hz, 2H), 4,82 (d, J = 12,2 Hz, 2H), 3,72 (s, 2H), 3,5 (m, 1H), 2,27 (m, 2H), 2,0 (m, 2H), 1,74 (m, 4H), 1,50 (s, 6H). MS(ES): MS(ES):581(M+1).

[00172] Os Exemplos 19 e 20 abaixo foram preparados analogamente ao procedimento do Exemplo 17. Exemplo 21. {trans-3-(4-{[4-({[(1S)-2-hidróxi-1-metiletil]amino}metil)-6- (trifluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1 -[4-(7H-pirrolo pirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila

[00173] N,N-Di-isopropiletilamina (9,4 μL, 0,054 mmol) e anidrido metanossulfônico (7,9 mg, 0,045 mmol) foram adicionados a uma solução de {trans-3-(4-{[4-(hidroximetil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]óxi} piperidin-1-il)-1-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila (10,0 mg, 0,018 mmol, pico 1 a partir do intermediário do exemplo A2 de US 2014/0005166, etapa F) em cloreto de metileno (0,30 mL) e o mesilato formado foi agitado durante 30 minutos. O solvente foi removido a vácuo e o resíduo foi redissolvido em uma mistura de tetra-hidrofurano (0,30 mL) e metanol (0,10 mL) e (2S)-2-aminopropan-1-ol (20,0 μL, 0,27 mmol, Acros) foi adicionado. A mistura de reação foi agitada a 40 °C de um dia para o outro. O solvente foi removido a vácuo e o produto cru foi desprotegido por agitação com 1:1 TFA:DCM durante uma hora e, então, concentrado e agitado com etilenodiamina (0,10 mL) em metanol (1,0 mL) até a desproteção estar completa, como determinado por LCMS. O produto foi purificado com o uso de HPLC-MS preparativa (C18 eluindo com um gradiente de MeCN/H2O contendo 0,15% de NH4OH). O eluente foi congelado e liofilizado para fornecer o produto como a base livre (6,0 mg, 54%). 1H RMN (400 MHz, CD3OD) δ 8,74 (s, 1H), 8,67 (s, 1H), 8,40 (s, 1H), 7,51 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,37 (s, 1H), 7,00 - 6,97 (m, 2H), 5,23 - 5,00 (m, 1H), 3,90 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 3,81 (d, J = 14,8 Hz, 1H), 3,50 (dd, J = 10,9, 4,9 Hz, 1H), 3,41 (dd, J = 10,9, 6,9 Hz, 1H), 3,31 (s, 2H), 3,16 - 3,05 (m, 2H), 2,95 (p, J = 7,5 Hz, 1H), 2,83 - 2,63 (m, 3H), 2,56 - 2,42 (m, 2H), 2,39 - 2,23 (m, 2H), 2,19 - 2,04 (m, 2H), 1,93 - 1,75 (m, 2H), 1,05 (d, J = 6,4 Hz, 3H). 19F RMN (376 MHz, CD3OD) δ -70,30 (s). LCMS (M+H)+: 610,3 Exemplo 22. {trans-3-(4-{[4-({[(2R)-2-hidroxipropil]amino}metil)-6-(tri- fluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila

[00174] O procedimento do exemplo 9 de US 2014/0005166 foi seguido, com o uso de (2R)-1-aminopropan-2-ol (12 μL, 0,15 mmol, Aldrich) na etapa de deslocamento, que foi executada a 50°C durante 2 horas. O produto foi obtido como a base livre (8,7 mg, 46%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ 12,13 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,60 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,08 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,04 (s, 1H), 5,11 - 4,90 (m, 1H), 4,49 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,76 (s, 2H), 3,67 (tt, J = 10,3, 5,6 Hz, 1H), 3,42 (s, 2H), 3,11 - 2,96 (m, 2H), 2,81 (p, J = 7,5 Hz, 1H), 2,74 - 2,56 (m, 2H), 2,46 - 2,25 (m, 4H), 2,24 - 2,09 (m, 2H), 2,09 - 1,90 (m, 2H), 1,81 - 1,51 (m, 2H), 1,03 (d, J = 6,2 Hz, 3H). 19F RMN (376 MHz, d6-DMSO) δ -67,29 (s). LCMS (M+H)+: 610,3. Exemplo 23. {trans-3-(4-{[4-({[(2S)-2-hidroxipropil]amino}metil)-6-(tri- fluorometil)piridin-2-il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol- 1 -il]ciclobutil}acetonitrila

[00175] O procedimento do exemplo 9 de US 2014/0005166 foi seguido, com o uso de (2S)-1-aminopropan-2-ol (12 μL, 0,15 mmol, Aldrich) na etapa de deslocamento, que foi executada a 50 °C durante 2 horas (7,9 mg, 42%). 1H RMN (400 MHz, d6-DMSO) δ 12,13 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,60 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,42 (s, 1H), 7,08 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,04 (s, 1H), 5,27 - 4,71 (m, 1H), 4,49 (d, J = 4,4 Hz, 1H), 3,76 (s, 2H), 3,72 - 3,62 (m, 1H), 3,42 (s, 2H), 3,09 - 2,96 (m, 2H), 2,81 (p, J = 7,4 Hz, 1H), 2,72 - 2,55 (m, 2H), 2,43 - 2,25 (m, 4H), 2,25 - 2,08 (m, 2H), 2,08 - 1,96 (m, 2H), 1,78 - 1,57 (m, 2H), 1,03 (d, J = 6,2 Hz, 3H). 19F RMN (376 MHz, d6-DMSO) δ -67,29 (s). LCMS (M+H)+: 610,3. Exemplo 24. {trans-3-(4-{[4-(2-Hidroxietil)-6-(trifluorometil)piridin-2- il]óxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolopirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobu- til} acetonitrila

[00176] {trans-3-(4-{[4-(2-hidroxietil)-6-(trifluorometil)piridin-2-il]óxi} piperidin-1-il)-1-[4-(7-{[2-(trimetilsilil)etóxi]metil}-7H-pirrolopirimidin-4-il)- 1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila (9,0 mg, 0,013 mmol, pico 2 do intermediário do exemplo A4 de US 2014/0005166, etapa 3) foi desprotegida e purificada por agitação em uma mistura de cloreto de metileno (0,50 mL) e ácido trifluoroacético (0,50 mL) durante uma hora. Os solventes foram removidos a vácuo e o resíduo foi agitado em metanol (0,1 mL) contendo etilenodiamina (0,1 mL). A purificação através de HPLC-MS preparativa (C18 eluindo com um gradiente de MeCN/H2O contendo 0,15% de NH4OH) forneceu o produto como a base livre (5,8 mg, 79%). 1H RMN (300 MHz, d6-DMSO) δ 12,12 (s, 1H), 8,83 (s, 1H), 8,69 (s, 1H), 8,42 (s, 1H), 7,60 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 7,34 (s, 1H), 7,08 (d, J = 3,6 Hz, 1H), 6,95 (s, 1H), 4,99 (tt, J = 8,2, 4,1 Hz, 1H), 4,73 (t, J = 4,9 Hz, 1H), 3,66 (q, J = 5,9 Hz, 2H), 3,42 (s, 2H), 3,11 - 2,95 (m, 2H), 2,90 - 2,71 (m, 3H), 2,71 - 2,56 (m, 2H), 2,44 - 2,30 (m, 2H), 2,15 (t, J = 9,2 Hz, 2H), 2,09 - 1,82 (m, 2H), 1,83 - 1,58 (m, 2H). 19F RMN (282 MHz, d6-DMSO) δ -67,26 (s). LCMS (M+H)+: 567,2. Exemplo A: Ensaio de JAK quinase in vitro

[00177] Os compostos da presente invenção foram testados para a atividade inibitória de alvos de JAK de acordo com o seguinte teste in vitro descrito em Park et al., Analytical Biochemistry 1999, 269, 94104. Os domínios catalíticos de JAK1 humana (a.a. 837-1142), JAK2 (a.a. 828-1132) e JAK3 (a.a. 781-1124) com uma etiqueta His N- terminal foram expressos com o uso de baculovírus em células de inseto e purificados. A atividade catalítica de JAK1, JAK2 ou JAK3 foi testada mediante a medição da fosforilação de um peptídeo biotinilado. O peptídeo fosforilado foi detectado por fluorescência separada no tempo homogênea (homogenous time resolved fluorescence, HTRF). As IC50s dos compostos foram medidas para cada quinase nas reações de 40 microL que contém a enzima, ATP e peptídeo a 500 nM em tampão Tris a 50 mM (pH 7,8) com NaCl 100 mM, DTT 5 mM, e 0,1 mg/mL de (0,01%) de BSA. Para as medições de IC50 de 1 mM, a concentração de ATP nas reações foi de 1 mM. As reações foram executadas à temperatura ambiente durante 1 hora e, então, paradas com 20 μL de EDTA 45 mM, SA-APC 300 nM, Eu- Py20 6 nM em tampão de ensaio (Perkin Elmer, Boston, MA, EUA). A ligação ao anticorpo marcado com európio ocorreu durante 40 minutos e o sinal de HTRF foi medido em um leitor de placa de fusão (Perkin Elmer, Boston, MA, EUA). Consulte a Tabela 2 para dados para os compostos dos exemplos, conforme testado pelo ensaio do exemplo A em ATP 1 mM. Exemplo B: Ensaios celulares

[00178] As linhagens de células de câncer dependentes de citoquinas e, portanto, da transdução de sinal de JAK/STAT, para crescimento, podem ser plaqueadas a 6000 células por poço (formato de placa de 96 poços) em RPMI 1640, 10% de SFB, e 1 nG/mL da citocina adequada. Os compostos podem ser adicionados às células em DMSO/meio (concentração final de 0,2% de DMSO) e incubados por 72 horas a 37°C, 5% de CO2. O efeito do composto sobre a viabilidade celular é avaliado com o uso do ensaio de viabilidade celular luminescente CellTiter-Glo (Promega) seguido de quantificação em TopCount (Perkin Elmer, Boston, MA, EUA). Os potenciais efeitos fora do alvo dos compostos são medidos em paralelo com o uso de uma linhagem celular não JAK direcionada com a mesma leitura do ensaio. Todos os experimentos são tipicamente realizados em duplicata.

[00179] As linhagens celulares acima podem também ser usadas para examinar os efeitos dos compostos sobre a fosforilação de JAK quinases ou os potenciais substratos a jusante como proteínas STAT, Akt, Shp2, ou Erk. Estes experimentos podem ser feitos após uma inanição de citocina de um dia para o outro, seguido de uma breve pré-incubação com o composto (2 horas ou menos) e estimulação com citocina de aproximadamente 1 hora ou menos. As proteínas são, então, extraídas das células e analisadas por técnicas familiares aos versados na técnica, inclusive Western blotting ou ELISAs com o uso de anticorpos que podem diferenciar entre a proteína fosforilada e a total. Estes experimentos podem usar células normais ou de câncer para investigar a atividade dos compostos sobre a biologia da sobrevivência da célula tumoral ou sobre os mediadores da doença inflamatória. Por exemplo, com relação a este último, citocinas como IL-6, IL-12, IL-23, ou IFN podem ser usadas para estimular a ativação de JAK resultando em fosforilação de proteína(s) STAT e, potencialmente, em perfis transcricionais (avaliados por arranjo ou tecnologia de qPCR) ou produção e/ou secreção de proteínas, como IL-17. A capacidade de os compostos inibirem estes efeitos mediados por citocina pode ser medida com o uso de técnicas comuns aos versados na técnica.

[00180] Os compostos da presente invenção podem também ser testados em modelos celulares projetados para avaliar sua potência e atividade contra JAKs mutantes, por exemplo, a mutação JAK2V617F encontrada em distúrbios proliferativos mieloides. Estes experimentos frequentemente utilizam células dependentes de citocina da linhagem hematológica (por exemplo, BaF/3) nas quais as JAK quinases de tipo selvagem ou mutantes são expressas ectopicamente (James, C., et al. Nature 434:1144-1148; Staerk, J., et al. JBC 280:41893-41899). Os desfechos incluem os efeitos dos compostos sobre a sobrevivência da célula, a proliferação, e as proteínas JAK, STAT, Akt ou Erk fosforiladas.

[00181] Certos compostos da presente invenção podem ser avaliados por sua atividade de inibição da proliferação de células T. Tal ensaio pode ser considerado um segundo ensaio de proliferação direcionado por citocina (isto é, JAK) e também um ensaio simples da supressão imune ou inibição da ativação imune. A seguir é dado um breve esboço de como estes experimentos podem ser feitos. Células mononucleares de sangue periférico (CMSPs) são preparadas a partir de amostras de sangue total humano com o uso do método de separação de Ficoll Hypaque e as células T (fração 2000) podem ser obtidas a partir de CMSPs por elutriação. As células T humano recém isoladas podem ser mantidas em meio de cultura (RPMI 1640 suplementado com 10% de soro fetal bovino, 100 U/mL de penicilina, 100 μg/ml de estreptomicina) a uma densidade de 2 x 106 células/ml a 37 °C durante até 2 dias. Para a análise de proliferação celular estimulada por IL-2, as células T são primeiro tratadas com fitoemaglutinina (PHA) em uma concentração final de 10 μg/mL durante 72 horas. Após lavagem uma vez com PBS, 6000 células/poço são plaqueadas em placas de 96 poços e tratadas com os compostos em diferentes concentrações no meio de cultura na presença de 100 U/mL de IL-2 humana (ProSpec-Tany TechnoGene; Rehovot, Israel). As placas são incubadas a 37 °C durante 72 h e o índice de proliferação é avaliado com o uso dos reagentes luminescentes CellTiter-Glo de acordo com o protocolo sugerido pelo fabricante (Promega; Madison, WI, EUA). Ensaio C. Modelo de camundongo transgênico S100A9

[00182] Foi mostrado anteriormente que camundongos transgênicos S100A9 apresentam acúmulo de medula óssea de MDSC acompanhado pelo desenvolvimento de citopenias multilinhagem progressivas e displasia citológica similar à SMD. Adicionalmente, a maturação forçada precoce de MDSC por tratamento com ácido all-trans-retinoico ou pela interrupção pela proteína adaptadora DAP12 ativa que contém o motivo de ativação baseado no imunoreceptor que contém tirosina (contém ITAM) da sinalização de CD33 resgatou o fenótipo hematológico e mitigou a doença. Este sistema pode ser útil para testar os efeitos sobre a inibição de JAK1 em doença semelhante à SMD em um modelo pré- clínico. J. Clin. Invest., 123(11):4595-4611 (2013), Consequentemente, um inibidor seletivo de JAK1 é administrado por alimentação forçada oral. A capacidade do composto de reduzir as citopenias e displasia citológica observada nos camundongos transgênicos S100A9 é monitorada.

[00183] Todas as patentes, pedidos de patente, artigos de revista e livros estão aqui incorporadas a título de referência em suas totalidades.

Claims (33)

1. Uso de um inibidor seletivo de JAK1, selecionado dentre 3-[1-(6-cloropiridin-2-il)pirrolidin-3-il]-3-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila; 3-(1-[1,3]oxazolo[5,4-b]piridin-2-ilpirrolidin-3-il)-3-[4-(7H- pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]propanonitrila; 4-[(4-{3-ciano-2-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]propil}piperazin-1-il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila; 4-[(4-{3-ciano-2-[3-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirrol-1- il]propil}piperazin-1-il)carbonil]-3-fluorobenzonitrila; {1-{1-[3-Fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3-[4- (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila; 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol- 1-il]azetidin-1-il}-N-[4-fluoro-2-(trifluorometil)fenil]piperidin-1- carboxamida; [3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-1-(1-{[2- (trifluorometil)pirimidin-4-il]carbonil}piperidin-4-il)azetidin-3- il]acetonitrila; [trans-1-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]-3-(4- {[2-(trifluorometil)pirimidin-4-il]carbonil}piperazin-1- il)ciclobutil]acetonitrila; {trans-3-(4-{[4-[(3-hidróxiazetidin-1-il)metil]-6- (trifluorometil)piridin-2-il]oxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila; {trans-3-(4-{[4-{[(2S)-2-(hidróximetil)pirrolidin-1-il]metil}-6- (trifluorometil)piridin-2-il]oxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila; {trans-3-(4-{[4-{[(2R)-2-(hidróximetil)pirrolidin-1-il]metil}-6- (trifluorometil)piridin-2-il]oxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila; 4-(4-{3-[(dimetilamino)metil]-5-fluorofenóxi}piperidin-1-il)-3-[4- (7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]butanenitrila; 5-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol- 1-il]azetidin-1-il}-N-isopropilpirazina-2-carboxamida; 4-{3-(cianometil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol- 1-il]azetidin-1-il}-2,5-difluoro-N-[(1S)-2,2,2-trifluoro-1- metiletil]benzamida; 5-{3-(cianometil)-3-[4-(1H-pirrolo[2,3-b]piridin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-1-il}-N-isopropilpirazina-2-carboxamida; {1-(cis-4-{[6-(2-hidróxietil)-2-(trifluorometil)pirimidin-4- il]oxi}ciclohexil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-3-il}acetonitrila; {1-(cis-4-{[4-[(etilamino)metil]-6-(trifluorometil)piridin-2- il]oxi}ciclohexil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-3-il}acetonitrila; {1-(cis-4-{[4-(1-hidróxi-1-metiletil)-6-(trifluorometil)piridin-2- il]oxi}ciclohexil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]azetidin-3-il}acetonitrila; {1-(cis-4-{[4-{[(3R)-3-hidróxipirrolidin-1-il]metil}-6- (trifluorometil)piridin-2-il]oxi}ciclohexil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin- 4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila; {1-(cis-4-{[4-{[(3S)-3-hidróxipirrolidin-1-il]metil}-6- (trifluorometil)piridin-2-il]oxi}ciclohexil)-3-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin- 4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila; {trans-3-(4-{[4-({[(1S)-2-hidróxi-1-metiletil]amino}metil)-6- (trifluorometil)piridin-2-il]oxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila; {trans-3-(4-{[4-({[(2R)-2-hidróxipropil]amino}metil)-6- (trifluorometil)piridin-2-il]oxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila; {trans-3-(4-{[4-({[(2S)-2-hidróxipropil]amino}metil)-6- (trifluorometil)piridin-2-il]oxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]ciclobutil}acetonitrila; and {trans-3-(4-{[4-(2-hidróxietil)-6-(trifluorometil)piridin-2- il]oxi}piperidin-1-il)-1-[4-(7H-pirrolo[2,3-d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1- il]ciclobutil}acetonitrila; ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para preparação de uma composição ou medicamento para tratar uma síndrome mielodisplásica em um paciente que necessita do mesmo.

2. Uso, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo fato de que o inibidor seletivo de JAK1 é seletivo para JAK1 em relação à JAK2, JAK3, e TYK2.

3. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é citopenia refratária com displasia unilinhagem (RCUD).

4. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é anemia refratária com sideroblastos em anel (RARS).

5. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é citopenia refratária com displasia multilinhagem.

6. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é anemia refratária com blastos-1 em excesso (RAEB-1).

7. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é anemia refratária com excesso de blastos-2 (RAEB-2).

8. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é síndrome mielodisplásica, não classificada (SMD-U).

9. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é síndrome mielodisplásica associada à del(5q) isolada.

10. Uso, de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é refratária a agentes estimulantes de eritropoiese.

11. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 10, caracterizado pelo fato de que o dito paciente é dependente de transfusão de eritrócitos.

12. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar um agente terapêutico adicional selecionado dentre um IMiD, um agente anti-IL-6, um agente anti-TNF-α, um agente hipometilante, ou um modificador da resposta biológica (BRM).

13. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o dito agente anti-TNF-α é selecionado dentre infliximabe e etanercept.

14. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o dito agente hipometilante é um inibidor da DNA metiltransferase.

15. Uso, de acordo com a reivindicação 14, caracterizado pelo fato de que o dito inibidor de DNA metiltransferase é selecionado dentre 5 azacitidina e decitabina.

16. Uso, de acordo com a reivindicação 12, caracterizado pelo fato de que o dito IMiD é selecionado dentre talidomida, lenalidomida, pomalidomida, CC-11006 e CC-10015.

17. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 1 a 11, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar um agente terapêutico adicional selecionado dentre globulina antitimócito, fator estimulante de colônia de granulócito (G CSF) humano recombinante, CSF de granulócitos e monócitos (GM- CSF), um agente estimulante de eritropoiese (ESA) e ciclosporina.

18. Uso de um inibidor seletivo de JAK1, que é {1-{1-[3- Fluoro-2-(trifluorometil)isonicotinoil]piperidin-4-il}-3-[4-(7H-pirrolo[2,3- d]pirimidin-4-il)-1H-pirazol-1-il]azetidin-3-il}acetonitrila, ou um sal farmaceuticamente aceitável do mesmo, caracterizado pelo fato de ser para preparação de uma composição ou medicamento para tratar uma síndrome mielodisplásica em um paciente que necessita do mesmo.

19. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é citopenia refratária com displasia unilinhagem (RCUD).

20. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é anemia refratária com sideroblastos em anel (RARS).

21. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é citopenia refratária com displasia multilinhagem.

22. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é anemia refratária com blastos-1 em excesso (RAEB-1).

23. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é anemia refratária com excesso de blastos-2 (RAEB-2).

24. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é síndrome mielodisplásica, não classificada (SMD-U).

25. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é síndrome mielodisplásica associada à del(5q) isolada.

26. Uso, de acordo com a reivindicação 18, caracterizado pelo fato de que a dita síndrome mielodisplásica é refratária a agentes estimulantes de eritropoiese.

27. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 26, caracterizado pelo fato de que o dito paciente é dependente de transfusão de eritrócitos.

28. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 17 a 27, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar um agente terapêutico adicional selecionado dentre um IMiD, um agente anti-IL-6, um agente anti-TNF-α, um agente hipometilante, ou um modificador da resposta biológica (BRM).

29. Uso, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o dito agente anti-TNF-α é selecionado dentre infliximabe e etanercept.

30. Uso, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o dito agente hipometilante é um inibidor da DNA metiltransferase.

31. Uso, de acordo com a reivindicação 30, caracterizado pelo fato de que o dito inibidor de DNA metiltransferase é selecionado dentre 5 azacitidina e decitabina.

32. Uso, de acordo com a reivindicação 28, caracterizado pelo fato de que o dito IMiD é selecionado dentre talidomida, lenalidomida, pomalidomida, CC-11006 e CC-10015.

33. Uso, de acordo com qualquer uma das reivindicações 18 a 27, caracterizado pelo fato de que compreende adicionalmente administrar um agente terapêutico adicional selecionado dentre globulina antitimócito, fator estimulante de colônia de granulócito (G CSF) humano recombinante, CSF de granulócitos e monócitos (GM- CSF), um agente estimulante de eritropoiese (ESA) e ciclosporina.