PT99130A - Processo de preparacao de derivados nucleosidos, dos seus intermediarios e de composicoes farmaceuticas - Google Patents

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Ingemar Sven-Anders Kvarnstrom
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Description

73 172
Hel/MR 31600 -3-
MEMQRIA DESCRITIVA
Campo do invento 0 presente invento refere-se ao processo de preparação de novos compostos químicos e a seus sais farmaceuticamente aceitáveis, que podem ser utilizados no tratamento terapêutico e profilático do síndrome da imunodeficiência adquirida(SIDA) e de infecções causadas por vírus que requerem transcriptase inversa para replicação, tais como vírus da imunodeficiência humana e vírus da hepatite B, e também para o tratamento de outras doenças virais, tais como as provocadas pelos vírus do herpes, doenças essas que incluem tanto infecções comuns como doenças neoplásicas, i.e. cancro.
Antecedentes do invento
Os efeitos dos vírus nas funções corporais são o resultado final de alterações que ocorrem aos níveis celular e subcelular. As alterações patogénicas ao nível celular são diferentes para diferentes combinações de vírus e células hospedeiras. Enquanto que alguns vírus causam uma destruição geral (morte) de certas células, outros podem transformar células num estado neoplásico.
Infecções virais comuns importantes incluem dermatite de herpes (incluindo herpes labial), queratite de herpes, herpes genital, herpes zoster, encefalite de herpes, mononucleose infecciosa e infecções causadas por citomegalovírus, todas elas causadas por vírus pertencentes ao grupo do vírus do herpes. Outras doenças virais importantes são a gripe A e B, causadas pelos vírus da gripe A e B respectivamente. Outra doença virai comum importante é a hepatite virai, em especial as infecções virais causadas pelo vírus da hepatite B que estão largamente espalhadas. São necessários agentes antivirais eficazes e selectivos para o tratamento destas doenças, bem como de outras doenças causadas por vírus.
Mostrou-se que vários vírus diferentes, tanto do tipo ADN —4—
Hel/MR 31600 como do tipo ARN, causam tumores em animais. O efeito de compostos químicos carcinogénicos pode resultar, em animais, na activação de vírus de tumor latentes. É possível que vírus de tumor estejam envolvidos em tumores humanos. Os casos humanos, mais prováveis, conhecidos até agora são leucemias, sarcomas, carcinomas da mama, linfomas de Burkitt, carcinomas nasofaríngicos e cancros cervicais, em que estão envolvidos vírus de ARN de tumor e vírus de herpes. Isto torna a procura de inibidores selectivos de vírus tumorogénicos e das suas funções, um importante ponto de partida nos esforços para tratar o cancro.
No fim dos anos setenta foi noticiada uma nova doença, subsequentemente referida como síndrome da imunodeficiência adquirida (SIDA). É hoje geralmente aceite que um retrovírus denominado HIV(vírus de imunodeficiência humana), anteriormente conhecido como vírus linfotrófico de células T humanas (HTLV-III) ou vírus associado a linfadenopatia (LAV), desempenha um papel essencial na etiologia da SIDA. Foram encontrados diferentes tipos de HIV, tais como HIV-1 e HIV-2, e mais serão provavelmente isolados. A SIDA é caracterizada por uma imunodeficiência profunda devida a baixos números de um subconjunto de células linfócito T auxiliares, que são um alvo da infecção por HIV. A profunda imunodeficiência nos pacientes de SIDA torna-os altamente susceptíveis a uma variedade de infecções oportunistas de etiologia bacteriana, fúngica, protozoária ou virai. Os agentes etiológicos, de entre as infecções virais oportunistas, pertencem frequentemente ao grupo do vírus do herpes, i.e. vírus Herpes Simplex (HSV), vírus Varicela Zoster(VZV), Vírus Epstein--Barr(EBV) e, especialmente, citomegalovírus(CMV). Outros retrovírus que afectam humanos são o HTLV-I e II e exemplos de retrovírus que afectam animais são o vírus de leucemia de felinos e o vírus de anemia infecciosa de equinos. Doenças humanas tais como esclerose múltipla, psoríase, paresia espasmódica tropical e doença de Kawasaki, foram também referidas como estando associadas a infecções causadas por retrovírus. 73 172 Hel/MR 31600 -5-
As infecções causadas pelo vírus da hepatite B provocam doenças graves, tais como hepatite aguda, hepatite crónica, hepatite fulminante, num número considerável de pessoas. 0 número de pacientes no mundo com infecção crónica de hepatite B está estimado em 200 milhões. Um número considerável de casos crónicos progride para cirrose do fígado e tumores de fígado. Nalguns casos, as infecções da hepatite tomam um rumo rápido e grave, como no caso da hepatite B fulminante, com cerca de 90% de mortalidade. Presentemente não se conhece nenhum tratamento eficaz contra infecções da hepatite B. A replicação do vírus da hepatite B é semelhante à de retrovírus e contém a mesma actividade essencial de transcriptase inversa virai.
Descrição geral do invento
Um grande número de análogos de nucleósidos exibe algumas actividades antimetabólicas. Eles fazem-no substituindo ou competindo com os nucleósidos que ocorrem naturalmente. Foram descritos recentemente análogos de nucleósidos que inibem, em cultura de células, a multiplicação do vírus da imunodeficiência humana(HIV, também conhecido como HTLV-III, LAV), que é o agente causador da SIDA e do complexo relacionado com SIDA(ARC). Os análogos de nucleósidos descritos que inibem a multiplicação de HIV, possuem todos a configuração j8-D-furanosilo.
Verificámos agora que análogos de nucleósidos em que o radical 2/-hidroxilo ou 3,-hidroxilo substituído por um grupo metilo ou hidroximetileno ou outro derivado metilénico, exibem actividades para inibição da multiplicação do HIV. A porção furanosilo pode ter uma configuração-D ou configuração-L.
Arte anterior
Alguns dos compostos e intermediários do presente invento já foram descritos.
Em J. Med. Chem. Vol 22, 1979, 518-525 descreve-se a síntese de 2,3-didesoxi-3-C-(hidroximetil) -β-D-eritro-pentafuranósido de metilo, bem como do correspondente derivado dibenzilo e dibenzoílo. 0 derivado clorado, cloreto de 5-0-benzoil-3-C-[(ben-
73 172
Hel/MR 31600 -6-zoiloxi)metil]-2,3-didesoxi-D-eritro-pentafuranosilo foi acoplado com 2-acetamido-6-cloropurina. 0 produto foi posteriormente processado de forma a originar os dois anómeros de 2-amino-9-[2,3-didesoxi-3-C-3-(hidroximetil)-D-eritro-pentafura-nosil]-9H-purina-6(lH)-tiona, os quais foram testados quanto a actividade antitumor. A síntese de 2',37-didesoxi-37(R)-hi-droximetiluridina foi descrita em Nucleosides & Nucleotides 1 (1982) 263-273. A uridina foi convertida em l-(3-amino-2,3-dide-soxi-/3-D-glucopiranosil)uracilo, por meio de uma sequência de passos múltiplos, o qual foi posteriormente feito reagir por meio de contracção do anel, epimerização e redução, para originar 27,37-didesoxi-37(R)-hidroximetiluridina.
Os compostos anómeros a de fórmula
em que X é 0, S ou CH2; Y é OH ou NH2 e é H, CH3, CH2CH3, CH2CH2CH3, CH(CH3)2, CH=CH2, C=CH ou CH=CH-CH3, e os seus anómeros β, é descrito no International Patent Application No. PCT/SE88/00169, (publicação No. W0 88/08001).
Descricão do invento
0 presente invento refere-se a novos compostos de fórmula IA
ou 1B
(\ R3 χ R1
1B em que X é 0, S, S0; S02 ou CH2? R1 é OH, 0P0(0H)2,
OU OPO(OH)-O-PO(OH)2, 0P0(OH)-0-P0(OH)-0-P0(OH)2
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Hel/MR 31600 7- (CH2)nOCH2PO(OH)2 em que n é 0-2; R2 é H e R3 é CH3f CH20H, CH2OCH3# CH2SHf CH2F ou CH2N3; ou R3 é H*e R2 é CH3f CH20H, CH2OCH3/ CH2SHf CH2F ou CH2N3;
em que Y é OH, NH2 e R5 é CH=CH2, C^CH, CH=CH-CH3, C=C-CH3, tien-2-ilo, tien-3-ilo, H, CH3, C2H5, n-C3H7 ou i-C3H7; R^ e R^ são iguais ou diferentes e são H, F, Cl, OH, NH2 ou SH; e seus sais farmaceuticamente aceitáveis.
Na fórmula IA o açúcar tem a configuração α-D ou β-Ό.
lAb Configuração β-Ό
lAa Configuração a-D
Na fórmula 1B o açúcar tem a configuração α-L ou β-Ό
lBa Configuração a-L lBb Configuração β-Ό
Verificou-se que os compostos acima descritos inibem a 73 172 Hel/MR 31600 -8-
multiplicação do vírus da imunodeficiência humana (HIV). 0 presente invento refere-se também consequentemente, aos compostos de fórmulas IA e 1B para uso em terapia. Os compostos de fórmulas IA e 1B são úteis como agentes terapêuticos e/ou profiláticos no controlo e tratamento de infecções pelo vírus HIV no Homem. Num aspecto mais geral, os compostos de fórmulas IA e 1B são úteis como agentes terapêuticos e/ou profiláticos no controlo e tratamento de infecções causadas por retrovírus e vírus de hepatite B, em mamíferos e no Homem.
Todos os retrovírus, incluindo HIV, requerem a enzima transcriptase inversa para a replicação. O vírus da hepatite B(HBV) é um vírus de ADN com um genoma único de ADN circular de cadeia dupla, o qual é parcialmente de cadeia simples. Ele contém uma ADN-polimerase específica, necessária para a replicação virai. Esta ADN-polimerase actua também como uma transcriptase inversa durante a replicação do ADN de HBV, através de um intermediário de ARN.
Outros usos possíveis para os compostos de fórmulas IA e 1B são como compostos antimetabólicos e antineoplásicos e como compostos para tratamento de outros vírus.
Um uso possível para os compostos de fórmulas IA e 1B consiste no tratamento de infecções pelo vírus do herpes. De entre os vírus do herpes podem mencionar-se o herpes simplex tipo 1 e 2, varicela(herpes zoster), vírus que causa mononucleose infecciosa (i.e. vírus Epstein-Barr), citomegalovírus e vírus herpes tipo 6 humano. Doenças importantes causadas por vírus de herpes incluem a dermatite de herpes (incluindo herpes labial), herpes genital, queratite de herpes, encefalite de herpes e herpes zoster.
Uma outra área possível para o uso dos compostos do presente invento consiste no tratamento de cancro e de tumores, particularmente os causados por vírus. Este efeito pode ser 73 172 Hel/MR 31600 -9-
conseguido de diferentes formas, i.e. inibindo a proliferação dos vírus de células transformadas para outras células normais e travando o crescimento de células transformadas por vírus.
Uma outra área possível para o uso dos compostos do presente invento consiste no tratamento de infecções parasitárias. Os parasitas possuem normalmente uma actividade enzimática específica para o metabolismo de nucleósidos, permitindo assim a terapia com análogos de nucleósidos. De entre os parasitas podem mencionar-se as famílias Schistosoma, Dipetalonema, Trypanosoma, Leishmania, Trichomonas Emereia, Plasmodium e Toxoplasma. A este respeito um importante membro dos Protozoários é a Pneumocvstis carinii. que causa infecção oportunista grave em pacientes de SIDA.
Adicionalmente, o presente invento proporciona:
Uma composição farmacêutica que compreende um composto de fórmulas IA e 1B como ingrediente activo e um veículo farmaceuticamente aceitável, incluindo lipossomas; e um método para o tratamento terapêutico e/ou profilático de infecções virais num hospedeiro animal ou humano, necessitado de tratamento, compreendendo a administração de uma quantidade eficaz de um composto de fórmulas IA e 1B. É um aspecto preferido do invento o tratamento de infecções causadas por vírus que necessitam de transcriptase inversa para a replicação, incluindo os vírus da imunodeficiência humana e o vírus da hepatite B. O invento refere-se também à utilização de um composto de fórmulas IA e 1B para o fabrico de um medicamento para o tratamento terapêutico e/ou profilático da síndrome da imunodeficiência adquirida e de infecções causadas por vírus que requerem transcriptase inversa para a replicação.
Preferencialmente, estes podem ser utilizados no tratamento de infecções causadas pelos vírus HIV ou pelo vírus da hepatite B.
73 172
Hel/MR 31600 -10-
Os compostos seguintes, de fórmulas IA, são particularmente úteis em terapia médica:
R R’·
X
R
R lAb em que X é O, S e CH2; R1 é OH; R2 é H e R3 é CH2OH; R3 é H e R2 é CH20H;
Y é NH2 e R5 é Η; Y é OH e R5 é H, CH3, C=CH, CH=CH-CH3; R6 é NH2 e R7 é H, OH, SH ou NH2? R6 é H e R7 é OH, SH ou NH2; R6 é F ou Cl e R7 é OH, SH, ou NH2; R6 é OH e R7 é OH.
Exemplos de sais farmaceuticamente aceitáveis, dos compostos de fórmulas IA e 1B incluem sais de base, e.g. derivados de uma base apropriada, tais como sais de metais alcalinos (e.g. sódio, potássio) de metais alcalino-terrosos (e.g. magnésio), de amónio e de tetralquilamónio. Os sais de ácidos fisiologicamente aceitáveis incluem sais de ácidos carboxílicos orgânicos, tais como os ácidos acético, láctico, glucónico, cítrico, tartárico, maleico, málico, pantoténico, isotiónico, oxálico, lactobiónico e succínico? ácidos sulfónicos orgânicos, tais como os ácidos metanossulfónico, etanossulfónico, benzenossulfónico, p-clorobenzenossulfónico e p-toluenossulfónico e ácidos inorgânicos, tais como os ácidos clorídrico, iodídrico, sulfúrico, fosfórico e sulfâmico.
Estão também incluídos no invento os compostos éster de
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Hel/MR 31600 -limo η ο , di e trifosfato dos compostos do presente invento. Contra-iões dos grupos fosfato farmaceuticamente aceitáveis, incluem contra-iões inorgânicos e orgânicos. Os contra-iões inorgânicos são por exemplo, amónio, sódio, potássio, lítio, magnésio e cálcio. Os contra-iões orgânicos são derivados de bases não tóxicas, tais como aminas primárias, secundárias e terciárias, incluindo aminas que ocorrem naturalmente. Exemplos destas aminas são a dietilamina, trietilamina, isopropilamina, etanolamina, morfolina, 2-dietilaminoetanol, glucosamina, N-metilglucamina, piperazina e diciclo-hexilamina.
Na prática clínica, os análogos de nucleósidos de fórmula I serão normalmente administrados oralmente, por injecção ou por infusão na forma de uma preparação farmacêutica compreendendo o ingrediente activo na forma do composto original ou, opcionalmente, na forma de um seu sal farmaceuticamente aceitável, em associação com um veiculo farmaceuticamente aceitável, o qual pode ser um diluente sólido, semi-sólido ou líquido ou uma cápsula ingerível. O composto pode também ser usado sem o material veículo. Podem mencionar-se como exemplos de preparações farmacêuticas os comprimidos, drageias, cápsulas, granulados, suspensões, elixires, xaropes, soluções, lipossomas, etc. Usualmente, a substância activa constituirá entre 0,05 e 20% das preparações destinadas a injecção e entre 10 e 90% das preparações destinadas a administração oral.
No tratamento de pacientes que sofrem de infecções causadas por retrovírus, especialmente HIV, ou pelo vírus da hepatite B, os compostos serão administrados preferencialmente por qualquer via apropriada, incluindo a via oral, parentérica, rectal, nasal, tópica e vaginal. A via parentérica inclui administração subcutânea, intramuscular, intravenosa e sublingual. A via tópica inclui administração bucal e sublingual. A dosagem à qual os ingredientes activos são administrados, pode variar numa vasta gama e dependerá de vários factores, tais como a gravidade da infecção, a idade do paciente, etc., e poderá ter que ser ajustada individualmente. Como uma gama possível para a quantidade dos compostos do presente invento, ou de um seu sal 73 172
Hel/MR 31600 -12-fisiologicamente aceitável, a ser administrada diariamente,pode mencionar-se de cerca de 10 mg a cerca de 10000 mg, preferencialmente 50-500 mg para administração intravenosa e preferencialmente 50-3000 mg para administração oral.
Os compostos de fórmulas IA e 1B podem cooperar sinérgica ou aditivamente com uma grande gama de outros agentes terapêuticos, aumentando assim o potencial terapêutico de ambos os agentes sem adição dos efeitos tóxicos, aumentando portanto a razão terapêutica.
Deste modo, pode utilizar-se um composto de fórmulas IA e 1B ou um seu derivado farmaceuticamente aceitável, em terapia de combinação, na qual os dois agentes activos estão presentes numa razão que resulta numa razão terapêutica óptima. Esta pode ser conseguida através de um efeito sinérgico contra a infecção virai e/ou por um decréscimo na toxicidade, mantendo o efeito terapêutico, aditivo ou sinérgico.
Verifica-se a razão terapêutica óptima quando os dois agentes estão presentes numa razão 500:1 a 1:500, preferencialmente 100:1 a 1:100, particularmente 20:1 a 1:20 e especialmente 10:1 a 1:10.
As combinações referidas podem ser convenientemente administradas em conjunto, por exemplo, numa formulação farmacêutica unitária ou separadamente, por exemplo, como uma combinação de comprimidos e injecções, administradas ao mesmo tempo ou a tempos diferentes, de forma a obter o efeito terapêutico desejado.
Os compostos de fórmulas IA e 1B são potenciados por interferões, outros agentes antivirais, tais como foscarnet, AZT, fluorotimidina, didesoxiinosina, didesoxididesidrotimidina, 9-[4-hydroxi-(2-hidroximetil)butil]guanina, aciclovir, inibidores de protease de HIV, imunomoduladores, indutores de interferão e factores de crescimento.
Tipos de interferão particularmente preferidos são os
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Hel/MR 31600 -13- indutores de interferão a, b e q.
Outras combinações adequadas para utilização de acordo com o presente invento, incluem aquelas em que o segundo agente é, por exemplo, interleucina II; ésteres de foscarnet; inibidores de protease de HIV, tais como pepstatina; ésteróides; medicamentos, tais como levamisol ou timosina, para aumentar o número e/ou função dos linfócitos, como seja apropriado; ou G-CSF e outros factores que regulam as funções celulares.
Processos de preparação
Os compostos do presente invento podem ser preparados como descrito em seguida, contudo o invento não está limitado a estes processos. Os compostos podem também ser preparados por outros processos descritos na arte conhecida. A síntese de IA, em que R·*· é OH, é H, R^ é CH2OH e R^ é uracil-l-ilo foi previamente descrita em Nucleosides e Nucleotides, vol 1, 1982, 263-273. Este derivado, apropriadamente protegido, pode ser convertido noutros derivados de nucleósido por processos conhecidos na arte, tais como transglicosação de bases púricas ou pirimídicas, adequadamente derivadas ou por transformações químicas do uracilo. A síntese de metil-2,3-didesoxi-3-C(hidroximetil)-j8-D-eri-tro-pentafuranósido e de metil-5-0-benzoil-3-C-[(ben-zoiloxi )metil ] -2,3-didesoxi-/J-D-eritro-pentafuranósido, a partir de D-glucose, é descrita em J. Med. Chem., vol. 22, 1979, 518-525.
Este último composto foi convertido em cloreto de 5-0-benzoil-3-C-[(benzoiloxi)metil]-2,3-didesoxi-D-eritro-pentafu-ranosilo, o qual foi glicosilado com 2-acetamido-6-cloropurina sililada. A parte hidrato de carbono do composto de fórmula IA pode também ser preparada a partir de uma 2,3-didesoxi-D-glice-ro-penta-2-eno-l,4-lactona protegida, através de uma adição tipo Michael 1,4, utilizando um nucleófilo de carbono apropriado, de
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Hel/MR 31600 -14- uma forma análoga à descrita em Carbohydr. Res. Vol. 261-275 e em J. Org. Chem., Vol. 53, 1988, 4780-4786.
Um composto de fórmula
IA em que X, R3·, R2, R3 e R4 são definidos como na reivindicação 1, pode ser preparado através da condensação de um glicósido, como compreendido na fórmula, à posição N-l de um derivado pirimídico ou à oposição N-9 de um derivado púrico:
1A em que Z é Cl, Br, I, aciloxi ou alcoxi, e R1*, R2*, e R3/, são respectivamente, R3-, R2 e R3 definidos como anteriormente ou com a condição de que quando R1 ou R2 são OH então 0 tem que ter um grupo protector, R4' é R4 definido como anteriormente, contendo um grupo protector sililo, acilo ou alquilo.
Um composto de fórmula
em que X, R1, R2 e R3 são definidos como na reivindicação 1, pode, do mesmo modo, ser preparado através da condensação de um glicósido, como compreendido na fórmula, na oposição N-l de um 73 172 Hel/MR 31600 -15-
derivado pirimídico ou na oposição N-9 de um derivado púrico:
+ R
1B em que Z é Cl, Br, I, aciloxi ou alquiloxi e R1*, R2/e R3/ são respectivamente, R1, R2 e R3 definidos como anteriormente ou com a condição de que quando R1 ou R2 são OH então 0 tem que ter um grupo protector, R4/ é R4 definido como anteriormente, contendo um grupo protector sililo, acilo ou alquilo.
De acordo com um novo processo, os compostos de fórmula
em que X, R1, R2 e R3 são definidos como na reivindicação 1 e Z é Cl, Br, I, aciloxi ou alcoxi, podem ser preparados fazendo reagir um butano-l,4-diol-2,3-epóxido protegido com um nucleófilo contendo 3 ou 4 átomos de carbono com uma ligação dupla, seguindo-se transformação da ligação dupla e fecho em anel.
Os compostos do tipo IA podem assim ser sintetizados como descrito em seguida no esquema 1 ou como nos esquemas 2-4. (segue Esquema) -16- 73 172
Hel/MR 31600
2 R9 =p-Bromoben z i1o R8=H 3 1 R9=p-Bromobenzilo
R8=H
4 R9 =p-Bromoben z i1o R8=Benzoilo 5 R9 =p-Bromobenzi1o 6 R9=R8=Benzoilo R8=Benzoilo
Esquema 1
Este processo é particularmente útil, uma vez que utilizando um epóxido com a quiralidade enantiomérica relativamente à de 1, é possível sintetizar também os açúcares-L de fórmula 1B. Quando R8 é H preparam-se, selectivamente, compostos com as diferentes funcionalidades de R3.
Os compostos em que X é S são preparados por processos análogos. 0 S pode então ser oxidado a SO e S02.
Os compostos em que X é CH2 podem ser preparados como descrito em seguida (segue Esquema 2)
9
Esquema 2 0 epóxido quiral 1. [(2S,3R)-3-[[(4-bromobenzil)oxi]-me-til]oxirano-2-metanol], em que R9 é p-bromobenzilo e R8 é hidrogénio, pode ser preparado como descrito em J. Org. Chem. Vol. 52, 1987, 2596-2598. R9 e/ou R8 podem ser qualquer grupo protector estável às bases, tal como os grupos protectores benzilo ou alquilo, ou um grupo protector sililo. 0 epóxido 1 pode ser tratado com brometo de alilmagnésio ou com um anião alilo equivalente, de forma a originar uma mistura de 2 e 3, os quais são separados por técnicas convencionais tais como cromatografia ou cristalização. No caso em que R8 é hidrogénio, o hidroxilo livre em 2. está, nesta fase, preferencialmente protegido com um grupo acilo, preferentemente benzoilo. A clivagem oxidativa da ligação dupla e o tratamento do produto com metanol anidro, contendo uma quantidade catalítica de ácido, origina 4.. 0 composto 4. pode ser acoplado a purinas ou pirimidinas sililadas por meio de catálise ácida, de forma a originar o
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Hel/MR 31600 -18-derivado de nucleósido na forma de uma mistura α e β. Em ±, em que R9 e R8 não são ambos benzoilo, 4. é preferencialmente convertido a este derivado por processos convencionais de desbloqueamento e bloqueamento. A mistura anomérica de nucleósidos a e β é preferencialmente desprotegida, procedendo-se em seguida à separação dos anómeros α e β por meio de técnicas convencionais, tais como cromatografia ou cristalização, de forma a originar o composto IA, definido como anteriormente, em que R1 e R3 são respectivamente, hidroxilo e hidroximetilo.
Os compostos do tipo 1B são preparados de forma inteiramente análoga começando com um epóxido correspondente a JL, mas que possui a quiralidade oposta.
Os compostos em que X é CH2 são preparados a partir de 7 (Chem. Pharm. Buli. 1988, .36, 15), protegendo a cetona na forma de um cetal e reduzindo os ésteres a éteres, utilizando hidreto-aluminato de lítio, e hidrolisando o cetal, de forma a originar o composto 8. A reducção da cetona originou o composto 9, o qual foi condensado com um derivado de purina apropriado. A sua desprotecção originou o composto IA. Os compostos do tipo 1B em que X é CH2 foram sintetizados do mesmo modo.
Os compostos do tipo IA em que X é 0 e R2 é CH20H, CH2F ou ΌΗ2Ν3 são preparados a partir de (S)-4-(terc-butildifenilsilil-oxi)-metil-f-butirolactona (11) por meio de acilação com formato de etilo e redução com boro-hidreto de sódio e acilação, de forma a originar o composto 12., após separação por cromatografia em coluna com sílica-gel. A redução com hidreto de dialquilalumínio, seguida de acilação, originou 13. Este composto foi glicosado com derivados de bases nucleosídicas apropriados. (segue Esquema 3) ,10 -19- 73 172
Hel/MR 31600
12
1Λ rIO _ cloreto de terc-butil-difenil-sililo
Esquema 3
BnS \ / SBn
Esquema 4 73 172
Hel/MR 31600 -20-
Os compostos do tipo IA em que X=S são preparados a partir de .14., por tratamento com mercaptano de benzilo e cloreto estânico, de forma a originar 1_5_. 0 fecho em anel de 15 . utilizando trifenilfosfina e tri-iodo-imidazol, originou 16. Uma porção do composto 16. foi condensada com timina sililada. 0 resto do composto 16. foi tratado com acetato mercúrico de forma a originar 17, o qual foi condensado com citosina sililada.
0 que se segue ilustra o princípio e a adaptação do invento, sem contudo ficar a isso limitado. A temperatura é dada em graus Celsius. Realizaram-se as concentrações sob pressão reduzida(1-2 kPa), a uma temperatura de banho não superior a 40°C. Mediram-se os espectros de RMN com um aparelho JEOL GX-270 ou FX-100, utilizando soluções de D20 ou CDC13. Utilizou-se TMS (para CDC13) e TSP ou dioxano (para D20), como padrões internos. Os desvios são indicados em ppm(escala). Registaram-se os espectros de absorção de UV com um espectrofotómetro Perkin-Elmer Lambda 5. Realizou-se CCF em placas Merck 60 F-254 pré-revestidas. As manchas foram visualizadas por luz UV e/ou queimando com ácido súlfurico 8%. Realizou-se cromatografia em coluna utilizando sílica gel 60 (0?040-0,063 MM, Merck). Realizou-se HPLC numa coluna de aço (250 x 25 mm) pré-empacotada utilizando Polygosil 60-7, C-18 (Macherey-Nagel). As fases orgânicas foram secas sobre sulfato de magnésio anidro. Determinaram-se as rotações ópticas com um polarímetro Perkin-Elmer 141. 0 presente invento pode ser ilustrado pelos seguintes exemplos:
Exemplo 1 1- [ 2', 3' -didesoxi-3' -C- (hidroximetil) -jS-D-eritro-pentafurano-sil]-citosina.
Submeteu-se a refluxo, até à obtenção de uma solução limpída, uma suspensão de citosina (120 mg, 1,08 mmol) e de um pequeno cristal de (NH4)2S04, em hexametildisilazano (2 ml) e trimetilcloro-silano (0,2 ml). A solução foi concentrada in vacuo
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Hel/MR 31600 -21 e co-evaporada com xileno seco. Dissolveu-se o resíduo sólido em CH2C12 seco (2 ml) , sob azoto, e adicionou-se metil-5-0-benzoil--3- [ (benzoiloxi)metil] -2,3-didesoxi-D-eritro-pentafuranósido (170 mg, 0,46 mmol), seguido da adição de um triflato de t-butil-dimetilsililo (0,22 ml, 0,96 mmol). Após 24h à temperatura ambiente, a reacção foi terminada pela adição de NaHC03 aquoso (sat.) e a mistura resultante foi agitada durante 30 minutos. A solução foi diluída com CH2C12 e lavada com NaHC03 (sat.), seca, filtrada e concentrada, de forma a originar uma mistura anomérica do nucleósido protegido. Esta mistura foi tratada com amoníaco metanólico (20 ml, sat.) durante 24h à temperatura ambiente. Após concentração, o resíduo foi dissolvido em água e extractado com CH2C12 A fase aquosa foi concentrada até um pequeno volume e aplicada a uma coluna de cromatografia de fase inversa, semi-preparativa, c-18 e eluída com água contendo 2% de metanol. Recolheu-se em primeiro lugar o isómero a, seguido do isómero β. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas de forma a originar 33 mg do anómero a (30%) e 27 mg do anómero β (24%). Anómero a: [a]26D:-54° (c 0,3, H20); UV (H20) Amax: 272 nm (e 10894); 1H-RMN (270 MHz, D20: 1,92 (m, J2'a,2'b=13'5 Hz' J2/a 3 /=9 Hz, J2'a,l/=6'5 Hz' 1H' Η-2'a); 2,5 (m, 1H, H-3') ; 2,7 (m, J2/a 2,b=3"3/~* Hz, J2/a 3r = 8H2, J2/a l7 = ^ Hz, 1H Η-2'b); 3,67, 3,69 (d e q, sobrepostos J6/^3/ = 6,2 Hz, = 12,5 Hz, J4//5/a = 5,3 Hz, 3H, H-6' e Η-5'a); 3,85 (q, J5,a/5/b = 12,5 Hz, J4ff5/b = 3 Hz, 1H, Η-5'b); 4,28 (m, J3//4f = 8 Hz, J4'5'a = 5»3 Hz' J4/,5'b = 3 Hz' 1H» H-4' ) ; 6,1 (d e q, sobrepostos, J5j6 = 7,3 Hz, J/ 2/ = 6,5 Hz, 2H,H-5 e H-l'); 7,8 (d, J5^6 = 7,3 HZ, 1H, H- 6); 13C-RMN (25,05 MHZ, D20): 36,4 (C-2*); 42,3 (C-3'); 62,7, 63,6 (C-5'), C-6')/* 84,4, 88,2 (C-l', C-4f; 96,6 (C-5), 141,9 (C-6); 158,1 (C-2); 166,8 (C-4). Anómero β: [α]26d: +64°C (c 0,27, H20); UV (H20) A max; 272 nm (e 9208); 1 RMN (270 MHZ , d2o) : 2,2- 2, 46 (m, 3H, H-2; H-3 ')? 3,68 (d, J3 ' , 6' ~ 5' 5 Hz, 2H H· -6') ; 3, ,76 (dd, J4 ' ,5'a = 5,5 Hz, J5' a, 5 'b = 12,5 Hz, 1H, H- •5'a) ; 3 ,92 (dd, ',5'b = 2,9 HZ , J5' a,5'b = 12,5 HZ, 1H :, Η-5'b); 4, 01 (m, J3 r , 4' : = 8,1 HZ, J5a i' ,4' = 5 ,5 HZ, ' J5'b,4 / = 2 ,9 HZ, 1H, H -4 7); 6,05 (3, J 5,6 = 7,3 HZ, 1H, H-5) ; 6,n (dd, Jl#,2· a = 7 ,0 HZ / Jl' /2' b = 4,0 HZ, 1H, H-l '); 7 ,91 (d, J5,6 = 7,3 Hz, 1H, H- 6); 13c. -RMN (25 ,05 MHz,
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Hel/MR 31600 D20): 36,1 (C-27); 40,8 (C-37); 62,7, 63,1 (C-57, C-67); 84,7, 87,1 (C-l7, C-47); 96,5 (C- 5); 142,2 (C-6); 158,2 (C-2); 166,8 (C-4).
Exemplo 2 9- [ 27, 37 -didesoxi-37 -C-(hidroximetil) -/3-D-eritro-pentafurano-sil]-adenosina; e
Exemplo 3 9-[27,3'-didesoxi-37-C-(hidroximetil)-a-D-eritro-pentafurano-sil]-adenosina.
Procedeu-se à condensação de 6-cloro-purina (200 mg, 1,3 mmol) com metil-5-0-benzoil-3-[(benzoiloxi)metil]-2,3-di-desoxi-D-eritro-pentafuranósido (280 mg, 0,76 mmol) utilizando o processo descrito nos exemplos l e 2, mas utilizando acetonitrilo como solvente em vez de CH2C12, de forma a originar uma mistura anomérica que, após isolada, foi dissolvida em amoníaco metanólico (5 ml) e aquecida a 100 °C num tubo selado. Após 20 h, removeu-se o solvente e o resíduo foi dissolvido em água e extractado com CH2C12. A camada aquosa foi concentrada até um pequeno volume e aplicada a uma coluna de cromatografia de fase inversa, semi-preparativa, C-18 e eluida com água contendo 8% de metanol. Eluiu-se em primeiro lugar o isómero a, seguido do isómero β. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas, de forma a originar 20 mg do anómero a (Exemplo 3) (10%) e 40 mg do anómero β (Exemplo 2) (20%).
Isómero a: [a]26D: +41° (c 0,23, H20); UV (H20) λ max; 260 nm (e 12864); ΧΗ RMN (270 MHz, D20): 2,45 (m, 1H, H- 27a); 2,6 (m, 1H, H-37) 2,82 (m, J27b,l7 = ® Hz, J27b,37 = Hz, J27b,27a = 14 Hz, 1H, H-27b); 3,72 e 3,74 (q e d, sobrepostos, J^/j^ 41 — 5,5 Hz, J5/b,5/a = 12,5 Hz, J6//3/ = 5,9 Hz, 3H, H-57b e H-67); 3,86 (q, J5/a/4# = 2,9 Hz, J5/a/5/b = 12,5 Hz, 1H, H-57a); 4,31 (m, 1 Η, H- 47); 6,35 (m, 1H, H-l7); 8,19 (s, 1H, H-2); 8,32 (s, 1H, H- 8); 13C-KMN (25,05 MHz, D20): 35,5 (C-27); 42,3 (C-37); 62,5, 63,3 (C-57, C-67); 83,8, 85,3 (C-l7, C-47); 119,4 (C- 5); 140,3 (C-8); 148,9 (C-4), 153,0 (C-2); 155,9 (C-6).
Isómero β: [a]26D: - 17 (c 0,27, H20); UV (H20) Λ max; 260 73 172 Hel/MR 31600 -23- -23-
nm (e 10744); -^H-RMN (270 MHz, D20); 2,5 (m, 1H, H-3'); 2,67 (m, 2H, H-2' ); 3 ,69 (q, J5, a,4' “ 5'1 . Hz ' J5 7a, 5'b = = 12, 5 Hz, 1H, H-5 'a) ? 3,77 (d, J6',3' = 5,5 Hz, 2H, H-6 3,87 (q» J5'b,4' = 2,9 Hz, J5'b, 5'a = 12,5 Hz, 1H, H-í 5'b) 7 4, 13 (m, 1H, H- -4'); 6,34 (m, 1H, H-l' ); 8,18 (S , 1H, H-2) ; 8< , 32 (S, 1H, H-8) . 13c-rmn (25 ,05, MHz °2 ; 0); 3 5 ,7 (C-2') ; 4 1/4 (C -3' ) ; 6 2 ,8, 63,4 (C- 5' ,C- 6'); 85, 0, 85,3 (C-l', C-4 M; 119 ,2 (C-5) ; 14C i,5 (C-8 ); 148 ,7 (C -4); 153 ,0 (C-2) ; 155,8 (C- 6).
Exemplo 4 l- [ 2', 3'—didesoxi—3' -c-(hidroximetil) -/J-D-eritro-pentafurano-sil]-timina.
Procedeu-se à condensação de timina (150 mg, 1,19 mmol) com metil-3-C- [ (benzoiloxi )metil] -5-0-p-bromobenzil-2,3-didesoxi-D-e-ritro-pentafuranósido (205 mg, 0,47 mmol) utilizando o processo descrito nos exemplos 1 e 2, de forma a originar uma mistura anomérica do nucleósido protegido. A mistura foi dissolvida em etanol contendo NaHCO^ (excesso) e hidrogenada sobre Pd (10 % em carbono, 101 kPa) durante 3 horas. Após processamento, o resíduo foi feito reagir com amoníaco metanólico durante 24 horas. Depois de concentrado, o resíduo foi dissolvido em água e extractado com CH2CI2. A camada aquosa foi concentrada até um pequeno volume e submetida a cromatografia de fase inversa, semi-preparativa, C 18, sendo eluída com água contendo metanol 10%. Eluiu-se em primeiro lugar o isómero a, seguido do isómero β. As fracçõess apropriadas foram combinadas e evaporadas, de forma a originar 40 mg do anómero a (33%) e 41 mg do anómero β (33%).
Isómero a: [a]26D: -3,6 (c 0,36, H20); UV (H20) Amax: 268 nm (e 13756); ΧΗ RMN (270 MHz, D20); 1,89 (d, J = 1,1 Hz, 3H, 5-CH3); 1,96 (m, ^2/a,2b/ = 13/2 Hz, '^'2/a,3, = 9Hz, J2/^ 1* = 7,7 Hz, 1H, Η-2'a); 2,47 (m, 1H, H-3'); 2,6 (m, J2'a,2'b' = 13,2 Hz, J2 / b 3* = 8,1 Hz, J2 /b 1' = Hz, 1H, H—2'b); 3,64 e 3,68 (d e q sobrepostos, J5,aí4/ = 5,5 Hz, = 12,1 Hz, J6/j3, = 6,1 HZ, 3H, Η-5'a, H- 6'); 3,81 (q, J5,b/4/ = 2,9 Hz, J5/b,5'a = 12,1 Hz, Η-5'b); 4,24 (m, J3//4/ = 8,4 Hz, J4//5/a = 5,5 Hz, J4',5'b = 2'9 Hz/ 1H/ H_4); 6'n Jl',2'a = 7·Ί Hz/ Jl',2'b = 6,2 Hz, 1H, H-l'); 7,59 (d, J = 1,1 Hz, 1H, H-6); 13C-RMN (25,05
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Hel/MR 31600 -24-
152,4 ( 02); 167,3 (04). Isómero β: [α]260: +17,8 (c 0,41, H20); UV (H20) Λ max: 268
7,73 (d, J = 1,1 HZ, 1H, H- 6). 13C-RMN (25,05 MHz, D20) : 12,5 (5-CH3); 35,4 (C-2'); 40,9 (C-37); 62,8, 62,9 (C-5', C-67); 84,5, 86,1 (C-l7, C- 47) ; 111,7 (C-5); 138,3 (C-6); 152,7 (C-2); 167,5 (C-4).
Nos exemplos 5-10 sintetizaram-se, de forma análoga, os análogos de nucleósidos correspondentes de fórmula 1B, possuindo a configuração L. A estratégia de síntese foi idêntica à delineada no esquema 1 e descrita em detalhe para a preparação dos exemplos 1-4 e dos seus materiais de partida. Nos exemplos 5-10, o material de partida correspondente à fórmula 1 do esquema 1 foi: (2R,3S)-3-[[(4-bromobenzil)oxi]metil]oxirano-2-metanol.
Exemplo 5 1- [ 2 ’, 3' -didesoxi-3' -C-(hidroximetil) -jS-L-eritro-pentafurano-sil]-citosina; e
Exemplo 6 1-[2',3'-didesoxi-3'-C-(hidroximetil)-α-L-eritro-pentafurano-sil]-citosina. 0 anómero α tinha [a]D22: +57,3° (c 0,61, H20); UV (H20) ^max: 273 nm (e 7647); -^H-RMN (270 MHz, D20): 1,92 (m, J2 / a 2 /j^=13,5 Hz, J2/a 2 # = 9 Hz, J2 / a 1,=^ <^ Hz, 1H, H—27a) ; 2,5 (m, 1H, H— 37) J 2,7 (m, J2/a 2/b=^'^,^ Hz, l^2/a,3/ = ^H2, J2/a^]_/ ~ 6 Hz, 1H H- 27b); 3,67, 3,69 (d e dd, sobrepostos, Jç/ 3/ = 6,2 Hz, J5/a/5/b = 12,5 Hz, J4f/5#a = 5,3 Hz, 3H, H-67 e H-5,a); 3,85 73 172 Hel/MR 31600 -25-
(dd, J5/a,5'b = 12,5 Hz' J4/,5/b = 3Hz* 1H* Η-5'b); 4,28 (m, J3/#4/ = 8 Hz, J4//5/a = 5,3 Hz, J4/;5/b = 3Hz, 1H, H-4'); 6,1 (d e t, sobrepostos, J5/6 = 7,3 Hz, J/^' = 6,5 Hz, 2H, H-5 e H-l'); 7,8 (d, J5/6 = 7,3 Hz, 1H, H-6): 13c-RMN (25,05 MHz, D20): 36,4 (C-2' ) ; 42,3 (C-37); 62,7, 63,6 (C-5', C-6'); 84,4, 88,2 (C-l', C-4'); 96,6 (C-5); 141,9 (C-6); 158,1 (C-2); 166,8 (C-4).
Anómero β: [o:]D22: -76,3° (c. 1,14 H20); UV (H20) Amax: 273 nm (e 5333); 1H-RMN (270 MHz, D20): 2,2-2,46 (m, 3H, H-2; H-3'); 3,68 (d, J3//6/ = 5,5 MHz, 2H, H-6'); 3,76 (dd, J4,/5,a = 5,5 Hz, J5/a/5/]3 = 12,5 Hz, 1H, Η-5'a); 3,92 (dd, J4#/5/fo = 2,9 Hz, J57a,5,b = 12/5 Hz/ 1H> Η-5'b); 4,01 (m, J3,/4, = 8,1 Hz, J5a7,4' = 5'5 Hz' J5'b,4' = 2'9 Hz' 1H' H"4')'* 6'05 <3' J5,6 = 7,3 Hz, 1H, H-5); 6,11 (dd, Ji/,2'a = 7'° Hz/ Ji/2'b = 4/0 Hz' 1H, H-l7); 7,91 (d, J5 6 = 7,3 Hz, 1H, H- 6); 13C-RMN (25,05 MHz, D20): 36,1 (C-2'); 40,8 (C-3'); 62,7, 63,1 (C-5', C-6'); 84,7, 87,1 (C-l', C-4'); 96,5 (C- 5); 142,2 (C-6); 158,2 (C-2); 166,8 (C-4).
Exemplo 7 9- [ 2', 3'-didesoxi-3' -C-(hidroximetil) -/3-L-eritro-pentaf urano-sil]-adenosina; e
Exemplo 8
9- [ 2', 3' -didesoxi-3' -C- (hidroximetil) -α-L-eritro-pentafurano-sil]-adenosina. O anómero α : [a]D22: -45,2° (c 0,37, H20); UV (H20) A ·η,3ν: 260 nm (e 10987); 1H-RMN (270 MHz, D20): 2,45 (m, 1H, H- 2'a); 2,6 (m, 1H, H—3') 2,82 (m, ^2'b,l' = ® Hz, ^2'b 3' = Hz, J2'b 2'a = 14 Hz' 1H' Η-2'b); 3,72 e 3,74 (dd e d, sobrepostos, C^5'b,4' = 5,5 Hz, J5/b,5'a == Hz, Ίβ',3' = ~*»9 Hz, 3H, H—5'b e H-6'); 3,86 (q, Ί5'3,4' = 2'^ Hz, Jg/a^ 5'b = Hz, 1H, H-5'a); 4,31 (m, 1H, H- 4'); 6,35 (m, 1H, H-l'); 8,19 (s, 1H, H-2); 8,32 (s, 1H, H- 8); 13C-RMN (25,05 MHz, D20): 35,5 (C-2'); 42,3 (C-3'); 62,5, 63,3 (C-5', C-6'): 83,8, 85,3 (C-l', C-4'); 119,4 (C- 5); 140,3 (C-8); 148,9 (C-4); 153,0 (C-2); 155,9 (C-6).
Anómero β: [a]:D22 +22,5° (c 0,44, H20; UV (H20) Λ max: 260 nm (e 11482); 1H-RMN (270 MHz, D20): 2,5 (m, 1H, H-3'); 2,67 (m,
73 172
Hel/MR 31600 -26 2H, H-2'); 3,69 (dd, J5/a,4' = 5/l Hz/ J5'a,5'b = 12'5 Hz' 1H' Η-5'a); 3,77 (d, J6//3/ = 5'5 Hz/ 2H' H"6'); 3,87 (dd, J5/b/4/ = 2,9 Hz, J5/b/5.a = 12,5 HZ, 1 H, Η-5'b); 4,13 (m, 1H, H-4'); 6,34 (m, 1H, H-l' ) ; 8,18 (S, 1H, H-2); 8,32 (S, 1H, H-8). 13C-RMN (25,05 MHZ D20)7 35,7 (C-2')» 41/4 (C-3')7 62,8 63,4 (05' e C-6'); 85,0, 85,3 (C-l# β C-4'); 119,2 (C-5); 140,5 (C-8); 148,7 (04); 153,0 (02); 155,8 (C-6).
Exemplo 9 1- [ 27,3' -didesoxi-3' -C-(hidroximetil) -jS-L-eritro-pentafurano-si l]-timina e
Exemplo 10 1-[2',3'-didesoxi-3'-C-(hidroximetil)-a-L-eritro-pentafurano-sil]-timina. 0 anómero a tinha [α]ρ22: +8/3° (c 0,48, (H2o); uv (H2o) X max: 268 nrn (e 7976); %-RMN (270 MHz, D20): 1,89 (d, J = 1,1
Hz, 3H, 5-CH3); 1,96 (m,J2'a,2'b=13'2 Hz · J2'a,3'= 9>9 Ez · J2,a l'=7/7 Hz' 1H/ Η-2'a); 2,47 (m, 1H, H-3'); 2,6 (m, J2'a,2,b= 13,2 Hz, J2/b,3' = Z’1 Hz' J2/b,l/ = 6'2 Ez> 1H H" 2'b)? 3»64/ 3,68 (d e dd, sobrepostos, J5/#4/ = 5,5 Hz, J5/a,5/b = 12,1 Hz, Jg, 3, = 6,1 Hz, 3H, Η-6'a e H-6'); 3,81 (dd, J5/b/5/ = 2/9 Hz/ J5'b,5'a = 12'λ Εζ· Η-5'b); 4,24 (itt, J 3,/4, = 8,4 Hz, J4//5/a = 5,5 Hz, J4/f5'b = 2/9 Hz, 1H, H—4); 6,11 (dd, ^i'#2'a = 7»7 Ezt J,1 2,b = 6,2 Hz, 1H, H-l); 7,59 (d, J = 1,1 Hz, 1H, H-6); 13C-RMN (25,05 MHZ, D20): 12,5 (5-CH3) 35,7 (C-2'); 42,7 (03') 62,6, 63,5 (C-5' e 06'); 84,2, 87,3 (C-l' e C-4'); 111,6 (05); 138,1 (C-6); 152,4 ( 02); 167,3 (C-4). 0 anómero β: [a]D22: -21,2° (c 0,32 H20); Kmax: 268 nm (e 8123); 1H-RMN (270 MHz, D20): 1,91 (s, 3H 5-CH3); 2,3 (m, 2H, H-2'); 2,5 (m, = 1H, H-3'); 3,69 (d, J3, 6# = 5,9 Hz, 2H, H-6'); 3,76 (dd, J/5b/5/a = 12'4 Hz' J5'b,4 *= 5'1 Ez · 1H' H" 5'b); 3,9 (dd, J5/aí5/b = 12,4 Hz, J5a,/4, = 2,9 Hz, 1H, H5,a); = 3,99 (m, J4/;5^a = 2,9 Hz, = 5,1 Hz, J4/^3/ = 8/1 Hz, 1H, H-4); 6,14 (dd, = 4*8 Ez · Jl',2'b = 6/6 Hz, 1H, H-l); 7,73 (d, J = 1,1 Hz 1H, H-6). 13C-RMN (25,05 MHZ, D20) J 12,5 (5-CH3), 35,4 (C-2'); 40,9 (C-3'); 62,8, 62,9 (C-5' e C-6'); 84,5, 86,1 (C-l' e C-4'); 111,7 (C-5); 138,3 (C-6); 152,7; 167,5
Hel/MR 31600 -27-
(C-4).
Procedimento geral para as sililações utilizadas nos exemplos 11-16. Submeteu-se a refluxo, até à obtenção de uma solução límpida, uma suspensão consistindo em base (1 mmol) e de um pequeno cristal de sulfato de amónio, numa mistura de hexametildissilazano (2 ml) e trimetilcloro-silano (0,2 ml). As matérias voláteis foram removidas por evaporação e o resíduo foi co-evaporado repetidamente com xileno.
Exemplo 11 1-[27,3'-didesoxi-3'-C-(fluorometil)-a- e 0-D-eritro-pen-tafuranosil]-timina. A timina (150 mg, 1,19 mmol) foi sililada de acordo com o procedimento geral e dissolvida em diclorometano (5 ml) sob azoto. Adicionou-se a esta solução metil-5-0-benzoil-3-C-(fluorometil )-2,3 -didesoxi-D-eritro-pentafuranósido (200 mg, 0,75 mmol), seguido de triflato de terc-butildimetilsililo (0,3 ml, 1,31 mmol). A solução foi agitada durante 24 horas à temperatura ambiente e, em seguida, a reacção foi terminada pela adição de hidrogenocarbonato de sódio aquoso, agitada durante 30 min, diluída com diclorometano, lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso, seca e concentrada, de forma a originar uma mistura anomérica dos nucleósidos protegidos. A mistura foi tratada com amoníaco metanólico (20 ml, saturado) durante 24 horas à temperatura ambiente. Após concentração até à secura, o resíduo foi dissolvido em água e lavado com diclorometano. A camada aquosa foi concentrada até um pequeno volume e a mistura foi separada por cromatografia em coluna (acetato de etilo-metanol 20:1). Eluiu-se em primeiro lugar o anómero /3, seguido do anómero a. As fracções apropriadas foram combinadas e evaporadas, de forma a originar os compostos em título, a (70 mg, 36%) e b (54 mg, 28%). a: [a]22D -13,1° (c 0,82, H20); UV (H20) Amax 269 nm (e 9268); ^ RMN (270 MHz, D20) δ 2,92 (5-CH3), 2,06 (Η-2'a), 2,60-2,82 (m, Η-2'b e H-3'), 3,68 (dd, Η-5'a), 3,85 (dd, Η-5'b), 4,38 (m, H-4), 4,46-4,75 (2 Hl, Η-6'a-b), 6,15 (t, H-l'), 7,60 (d, H-6). Anal. Cale. para cnHi5°4N2F: C, 51,16; H, 5,85; N, 10,85. Encontrado 73 172 *
Hel/MR 31600 -28- C, 50,91; H, 5,78? N, 10,85. j8 [a]22D +16,3° (c 0,6, H20); UV (H20) A max 268 nm (e 8880); XH KMN (270 MHz, D20) δ 1,91 (d, 5-CH3), 2,3 (m, H—27 ) , 2,73 (m, H-37), 3,78 (dd, H-57a), 3,94 (dd, J4//5/b “ 2,9 Hz, H-5 7b) , 4,1 (m, H-4), 4,44-4,73 (2 Itl, H-6/a,b), 6,15 (dd, H-l7), 7,77 (d, J = 1,1 Hz, H-6). Anal. Cale. para c, 51,16; H, 5,85; N, 10,85. Encontrado: C, 51,10; H, 5,76; N, 10,95.
Exemplo 12 1-[27,37 -didesoxi-3 7 -C- (f luorometil) -a- e -0-D-eritro-penta-furanosil]citosina. ^ A citosina(200 mg, 1,8 mmol) foi sililada de acordo com o
procedimento geral e a síntese do composto realizada como descrito acima, de forma a originar os compostos em título, a (38 mg, 38%) e β (26 mg, 26%). a: [a]22D -53,7° (c 0,94, H20); UV (H2°) Amax 272 nm (e 7762); !h RMN (270 MHz, D20) δ 1,98 (m, H-27a), 2,58-2,80 (m, H-27b e H-3'), 3,68 (H-57a), 3,85 (dd, H-5 7b) , 4,37 (m, H-4), 4,39-4,72 (2 m, H-67a,b), 6,04 (d, H-5), 6,12 (t, H-l7), 7,70 (d, H-6). Anal. Cale. para C10H14O3N3F: C, 49,38; H, 5,80. Encontrado: C; Η. β [a]22D +44,8° (c 0,6, H20); UV (H20) Amax 272 nm (e 8515); ^ RMN (270 MHz, D20) δ 2,23 (m, Η-2'a), 2,39 (m, ^27b,37 = 8'5 Ez> H-27b), 2,65 (m, H-37), 3,77 (dd, H-57a), 3,93 (dd, H-57b), 4,11 (m, H-4), 4,43-4,73 (dois m, φ H-67a,b), 6,03 (d, H-5), 6,10 (dd, H-l7), 7,93 (d, H-6). Anal. Cale. para C10H14°3N3F: c' 49,38; H, 5,80. Encontrado C; H.
Exemplo 13 9-[27,37-didesoxi-37-C- (fluorometil)-a- e -/3-D-eritro-pen-tafuranosil]adenina. A 6-cloropurina (120 mg, 0,78 mmol) foi sililada de acordo com o procedimento geral e a síntese do composto realizada como descrito acima, de forma a originar os compostos em título, a (25 mg, 26 %) e β (37 mg, 39%). a: [a]22D 35,2° (c 0,71, H20); UV (H20) Λ max 260 nm (e 10239)? % RMN (270 MHz, D20) 6 2,5 (m, H-27a), 2,70-2,95 (m, H-27b e H-37), 3,73 (dd, H-57a), 3,88 (dd, H-57b), 4,40 (rn, H-4), 4,52-4,78 (2 m, J37,67b = 107° Ez’ H”67a-b), 6,34 (t, H-l7), 8,15 (s, H-2), 8,29 (s, H-8). Anal. Cale. para C11H1402N5F: C, 49,43; H, 5,28.
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Hel/MR 31600 -29-
Encontrado: C; Η. β: [a]22D -24,3° (c 0,9, H20); UV (H20) max 260 nm (e 10364); 1H RMN (270 MHz, D20) δ 2,47-2,48 (2 Itl, H-27a,b), 2,85 (m, H-3'), 3,69 (dd, Η-5'a), 3,87 (dd, Η-5'b), 4,21 (m, H-4) , 4,51-4,78 (2 m, H-6'a,b), 6,24 (dd- H-l')/ 8,04 (s- H-2), 8,25 (s, H-8). Anal. Cale. para C1iH1402N5F; C, 49,43; H, 5,28. Encontrado C,; H,.
Exemplo 14 1-[2',3'-didesoxi-3' -C- (azidometil)-a- e -j8-D-eritro-pen-tafuranosil]-timina. A timina (133 mg, 1,06 mmol) foi sililada de acordo com o procedimento geral e dissolvida em diclorometano (5 ml) sob azoto. Adicionou-se a esta solução metil-3-C-(azidometil)--5-0-(benzoil)-2/,3'-didesoxi-D-eritro-pentafuranósido (154 mg, 0,53 mmol), seguido de triflato de terc-butildimetilsililo (0,25 ml, 1,09 mmol). A solução foi agitada durante 24 horas à temperatura ambiente e, em seguida, a reacção foi terminada pela adição de hidrogenocarbonato de sódio aquoso, agitada durante 30 min, diluída com diclorometano, lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso, seca e concentrada, de forma a originar uma mistura anomérica dos nucleósidos protegidos. A mistura foi tratada com amoníaco metanólico (20 ml, saturado) durante 24 horas à temperatura ambiente. Após concentração até à secura, o resíduo foi dissolvido em água e lavado com diclorometano. A camada aquosa foi concentrada até um pequeno volume e criodessecada, de forma a originar 110 mg (0,39 mmol, 74%) de uma mistura anomérica dos nucleósidos desbloqueados. A mistura foi dissolvida numa mistura de Ν,Ν-dimetilformamida e imidazolo (53 mg, 0,78 mmol), seguida da adição de cloreto de terc-butildimetilsililo (70 mg, 0,46 mmol) e a solução foi agitada durante 3 h à temperatura ambiente. Adicionou-se água (1 ml) e agitou-se a mistura durante 10 min, diluiu-se com diclorometano, lavou-se com ácido clorídrico 1M, ácido carbónico aquoso saturado, secou-se e concentrou-se. Separaram-se os anómeros por cromatografia em coluna (hexano-acetato de etilo 1:1), eluindo-se em primeiro lugar o anómero a, seguido do anómero β. Cada um dos anómeros foi tratado separadamente com fluoreto de tetrabutilamónio (70 mg, -30-
Hel/MR 31600 0,22 mmol), em tetra-hidrofurano (2 ml), durante 24 h, concentrado, o resíduo foi dissolvido em água e lavado com diclorometano. A camada aquosa foi concentrada até um pequeno volume e purificada por HPLC (água-metanol, 80:20, v/v), de forma a originar os compostos em título, a (43 mg, 29%) e β (44 mg, 30 %). a: [a]22D +3,1° (c 1,45, H20); UV (H20) ^max 268 nm (e 9155); 1H RMN (270 MHz, D20) S 1,92 (s, 5-CH3), 2,02 (m, H-27a), 2,50-2,74 (2 m, H-2 7b e H-37) , 3,54 e 3,58 (2 dd, H-67a,b), 3,67 (dd, H-57a), 3,85 (dd, H-57b), 4,25 (m, J4//5/a = 5,1 Hz, H-4), 6,12 (dd, H-l), 7,60 (d, H-6). Anal. Cale. para C-^H-^O^F: C, 51,16; H, 5,85. Encontrado: C.; H,. /3[a]22D 12,5° (c 0,96, H20); UV (H20) λ max 268 nm (e 9434); XH RMN (270 MHz, D20) δ 1,91 (s, 5-CH3), 2,34 (dd, H-2'), 2,59 (m, H-3')/ 3,47-3,61 (2 dd, H-67a,b), 3,78 (dd, Η-5'a), 3,94 (dd, H-5#b), 3,98 (m, H-4), 6,1 (t, H-l), 7,76 (s, 1H, H-6). Anal. Cale. para C^H-j^C^Ng: C, 46,97; H, 5,38. Encontrado: C,; H,.
Exemplo 15 1-[27,3 7-didesoxi-3 7-C-(azidometil)-a- e -0-D-eritro-penta-furanosil]-citosina. A citosina (250 mg, 2,25 mmol) foi sililada de acordo com o procedimento geral e a síntese do composto realizada como descrito acima, de forma a originar os compostos em título, α (84 mg, 43 %) e β (45 mg, 23 %). a: [a]22D -46,1° (c 1,15, H20); UV (H2°) Λ max 272 nm (£ 8320); 1H RMN (270 MHz, D20) δ 1,96 (m, Η-2'a), 2,56 (m, H-3'), 2,74 (m, H-27b), 3,46-3,58 (2 dd, H-6'a,b), 3,68 (dd, H-57a), 3,85 (dd, Η-5'b), 4,25 (m, H-5), 6,09 (t, H-l), 7,79 (d, H-6). Anal. Cale. para cioHl4°3N6: C, 45,10; H, 5,30; N, 31,57. Encontrado; C, 44,87; H, 5,13; N, 31,37. /?[a]22D 55,0° (c 0,99, H20); UV (H20); UV (H20) λ max 272 nm(£ 8209); ^ RMN (270 MHZ, D20) δ 2,22-2,58 (m, H-27 e H-37), 3,48-3,61 (2 dd, H-67), 3,79 (dd, H-57a), 3,94 (dd, H-57b), 4,0 (m, H-47), 6,04 (d, H-5), 6,11 (dd, H-l7), 7,93 (d, H-6). Anal. Cale. para C^QH^403Ng: C, 45,10; H, 5,30. Encontrado C,; H,. 73 172
Hel/MR 31600 -31-
Exemolo 16 9— [2' ,3'-didesoxi-3'-C-(azidometil)-a- e -/3-D-eritro-penta-furanosil]-adenina. A 6-cloropurina (360 mg, 2,33 mmol) foi sililada de acordo com o procedimento geral e a síntese do composto realizada como descrito acima, de forma a originar os compostos em título, a (38 mg, 17%) e β (39 mg, 17%). Através de purificação por HPLC (água-metanol, 70:30, v/v), obteve-se uma amostra analítica de cada um dos anómeros. az [a]22D +58,3° (c 1,0, H20); UV (H20) Λ max 260 nm (e 9353); 1H RMN (270 MHz, D20) <S 2,43 (m, Η-2'a), 2,67 (m, H-3'), 2,84 (m,H-2/b), 3,61 (d, H-6'), 3,73 (dd, Η-5'a), 3,88 (dd,h-5'a), 4,28 (rn, H-4'), 6,28 (t, H-l'), 8,11 (s, H-2), 8,28 (s, H-8). Anal. Cale. para cnHi4°2N8: C, 45,51, Gm 4,86; N, 38.61. Encontrado: C, 45,31; Gm 4,80; N, 38,30. β. [a]22D - 27,6° (C 1,05, H20; UV (H20) Amax 260 nm (e 14102); XH RMN 270 MHz, D20) δ 2,52 (m, H-2'a), 2,75 (m, Η-2'b, H-3'), 3,61 (dd, Η-6'a), 3,64 (dd, J3 6/b = 6,2 Hz, Η-6'b), 3,71 (dd, Η-5'a, 3,88 (dd, Η-5'b), 4,12 (m, H-4'), 6,36 (dd, e 3,0 Hz, H-l'), 8,19 (s, H-2), 8,33 (s, H-8). Anal. Cale. para Ci;lH1402N8: C, 45,51; H, 4,86; N, 38.61. Encontrado: C, 45,28; H, 4,97; N, 38,36.
Exemplo 17 9—[(3S,4S)-3,4-di(hidroximetil)-ciclopentil]—guanosina
Adicionou-se DEAD (azodicarboxilato de dietilo) (0,33 ml, 2,3 mmol) a uma suspensão branca de PPh3 (528 mg, 2,0 mmol) e 2-NH2“6-Cl-purina (342 mg, 2,0 mmol), em THF seco (14 ml), à temperatura ambiente sob azoto, e agitou-se a suspensão amarelada durante 4 h.
Adicionou-se 3,4-dibenzoiloximetil-ciclopentanol (200 mg, 0.57 mmol), em THF seco (5 ml), e agitou-se a mistura durante mais 30 min.
Evaporou-se o solvente e purificou-se o resíduo em bruto por cromatografia em coluna com silica gel (tolueno-acetato de etilo 1:1). Dissolveu-se o produto em bruto em MeOH (2 ml), 73 172 Hel/MR 31600
-32- adicionou-se NaOH aquoso (1M, 2 ml) gota a gota e agitou-se a mistura a 80°C durante 4 h. Após arrefecimento, a mistura reaccional foi neutralizada com HC1 aquoso (2M), a fase aquosa extractada várias vezes com THF-acetato de etilo (1:1) e os solventes evaporados. Purificou-se o produto em bruto por cromatografia em coluna com silica-gel (clorofórmio-metanol, 6:1). A recristalização em água originou o composto em título com um rendimento de 57 g (36 %)
Exemplo 18 1- (2', 3' -didesoxi-2' -C-hidroximetil-/3-D-eritro-pentaf urano-sil)-timina.
Submeteu-se a refluxo uma mistura de timina (253 mg, 2,01 mmol), clorotrimetilsilano (0,300 ml) e alguns cristais de (NH4)2S04, em hexametildi-silazano (4 ml), sob atmosfera de azoto durante 6 horas. A solução límpida foi concentrada e as matérias residuais voláteis co-evaporadas com tolueno (5 ml). Dissolveu-se o resíduo numa mistura de diclorometano-acetonitrilo (9:1, 10 ml) e adicionou-se, na mesma mistura de solventes, de acima (5 ml), uma solução de 2-C-acetoximetil-l-0-acetil-5-0-(terc-butildi-fenil)silil-D-eritro-pentafuranósido (630 mg, l,34mmol). Arrefeceu-se a solução num banho de gelo e adicionou-se, gota a gota, triflato de terc-butildimetilsililo (0,370 ml, 1,16 mmol). Agitou-se a mistura durante 30 min num banho de gelo e, em seguida, durante 15 h à temperatura ambiente. Adicionou-se piridina (2 ml) e filtrou-se a mistura através de uma almofada de silíca-gel. Concentrou-se o filtrado e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (tolueno-acetona 1:1), de forma a originar l-(2'-C-acetoximetil-5'-o-terc-butildifenilsilil--2', 3 ' -didesoxi-jS-D-eritro-pentafuranosil) -timina. Dissolveram-se 100 mg, 0,186 mmol, deste material em fluoreto de tetrabutilamónio x 3 H20 (1M), em THF (9 ml), e agitou-se durante 20 min à temperatura ambiente. Concentrou-se a solução e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (tolueno-acetona 1:1). Dissolveu-se o produto em metanol (4 ml) e adicionou-se metanol saturado com amoníaco (2 ml). A solução foi agitada durante a noite, concentrada e o resíduo foi purificado 73 172
Hel/MR 31600 por cromatografia em coluna (clorofórmio-metanol 9:1), originando o composto em título (38 mg): [a]D +9,1° (c 0,70, H20): 13c RMN (D20, 40°C) 12,3 (CH3, timina) 29,2 (C-37), 46,7 (C-27), 62,4, 63,8 (C-57, C-67), 81,0 (C-4'), 88,8 (C-l7), 112,2 (C-5, 138,6 (C-6) 152,5 (C-4), 167,2); 1H RMN (D20, 40°C) 1,90 (s, 3H, CH3, timina), 2,09 (m, 2H, H-37, H-377), 2,64 (m, 1H, H-27),3,76 (m, 4H, H-57, H-577, H-67, H-677), 4,31 (m, H-47), 5,93 (d, J=5,13 Hz, 1H, H-l7), 7,68 (S, 1H, H-6).
Anal. Cale. para C11H1605N2: C, 51,56; H, 6,29; N, 10,93. Encontrado c, 51,28; H, 6,11; N, io,7l.
Exemplo 19 l-(27,37-didesoxi-27-C-hidroximetil-)3-D-eritro-pentaf urano-sil)-citosina. 0 composto foi sintetizado de forma análoga à descrita no exemplo 12, utilizando citosina em vez de timina, obtendo-se (41 mg): [a]D +31,2° (c 1,20, H20): 13C RMN (D20, 40 0 C) 29,2 (C-3'), 47,6 (C-27), 62,5, 64,0 (C-57, C-67), 81,2 (C-47), 89,8 (C-l7), 96,8 (C-5), 142,6 (C-6). 158,3 (C-4), 166,9 (C-2); 1H RMN (D20, 40eC) 2,04 (m, 2H, H-37, H-377), 2,55 (m, 1H, H- 27 ), 3,77 (m, 4H, H-57, H-5 7 7 , H-67, H-67 7 ), 4,33 (m, 1H, H-47), 5,91 (d, J=4,77 Hz, 1H, H-l7), 6,05 (d, J= 7,32 Hz, 1H, H-5), 7,85 (d, J= 7,32 Hz, 1H, H-6).
Anal. Cale. para C10H1504N3 x H20: C, 46,33; H, 6,61; N, 16,21. Encontrados: C, 46,41; H, 6,31; N, 16,16.
Exemplo 20 27,3 7-didesoxi-27-C-hidroximetiladenosina. O composto foi sintetizado de forma análoga à descrita no exemplo 12, utilizando adenina em vez de timina, obtendo-se (20 mg): [a]D -10,3° (c 0,20, H20): UV (H20) >max 260 nm; 13C RMN (D20, 40°C) 29,4 (C-37), 46,8 (C-27), 62,2, (C-57, C-67), 81,4 (C-47), 88,3 (C-l7), 141,2-169-4 (5ArC); ^H RMN (D20, 40°C) 2,21 (m, 2H, H-37-H-37 7 ) , 3,06 (m, 1H, H-27 ), 3,76 (m, 4H, H-57 7 , H-67, H-6 7 7 ), 4,45 (m, 1H, H-47), 6,07 (d, J= 5,32 Hz, 1H, H-l7), 8,15, 8,30 (s, s, 2H, H-2, H-8).
Anal. Cale. para C11H1503N5: C, 49,81; H, 5,70; N, 26,40. Encontrado: C, 50,01; H, 5,54; N, 26,35. -34- 73 172
Hel/MR 31600
Exemplo 21 l-(27-c-azidometil-27,37-didesoxi-j8-D-eritro-pentaf urano-sil)-timina.
Agitou-se, durante a noite, uma solução de l-( 2 7 -C-acetoximetil-5 7 -O-terc-butildifenil-27,47 -didesoxi-/S-D-eri tro-pentafuranosil)timina (440 mg, 0,820 mmol), em metanol saturado com amoníaco (15 ml). Concentrou-se a mistura e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (tolueno-acetona 1:1). Dissolveu-se o resíduo (170 mg, 344 mmol) em piridina (5 ml) e adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (0,030 ml, 379 mmol). Após 1 h à temperatura ambiente, a solução foi concentrada e o resíduo co-evaporado com tolueno. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (tolueno-acetona 2:1), originando l-(57-0-terc-butildife-nilsilil-27-C-metanosulfonilmetil-27 , 3 7-didesoxi-/?-D-eritro--pentafuranosil)timina, o qual foi dissolvido em DMF (2 ml). Adicionou-se azeto de sódio (72 mg, 1,11 mmol) e agitou-se a suspensão resultante a 60°C durante 3 h. A mistura foi concentrada e purificada por cromatografia em coluna (tolueno-acetona 2:1) (151 mg) (IV(CHC13) 2100 cm"·*·), sendo posteriormente dissolvida em fluoreto de tetrabutilamónio x 3 H20 (1M), em THF (10 ml), à temperatura ambiente. Após 10 min, a mistura foi concentrada e o resíduo purificado por cromatografia em coluna (tolueno-acetona 1:1), originando o composto em título (72 mg), [a] D -31,3° (c 0,76, CHC13): IV (CHCI3) 2100 cm-1 (azida): 13C RMN (CDC13) 12,5 (CH3, timina), 29,6 (C-3'), 44,5 (C-3), 52,0 (C-67), 63,8 (C-57), 79,8 (C-47), 89,0 (C-l7), 111,0 (C-5). 136,6 (C-6), 150,9 (C-4), 164,4 (C-2); XH RMN (CDCI3) 1,89 (S, 3H, CH3, timina), 1,96 (m, 1H, H-37), 2,28 (m, 1H, H-3 7 7 ), 2,61 (m, 1H, H-27 ), 3,53, 3,82 (m, m, 4H, H-57, H-5 7 7 , H-67, H-67 7 ), 4,29 (m, Ih, H-47) 5,81 (d, J=5,50 Hz, 1H, Hl7, 7,56 (s, 1H, H-6), 9,90 (s, 1H, H-3).
Anal. Cale. para ^3.^50^5: C, 46,97; H, 5,38; N, 24,90. Encontrados: C, 46,83; H, 5,21; N, 24,71. 73 172
Hel/MR 31600 -35-
Exemolo 22 2'-C-azidometil-2',3'-didesoxicitidina
Agitou-se durante a noite, à temperatura ambiente, uma solução de 2/-C-acetoximetil-5/-0-terc-butildife-nil-2',3'-didesoxi-citidina (260 mg, 0,489 mmol), em metanol saturado com amoníaco líquido (10 ml).Concentrou-se a mistura e purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (clorofórmio-metanol 9:1), de forma a originar 395 mg do análogo de citidina não substituído com acetilo em O. Adicionou-se cloreto de metanossulfonilo (0,020 ml, 0,250 mmol) a uma solução, agitada, deste material (100 mg, 0,208 mmol), em piridina (3 ml). Após 1 h, a solução foi concentrada e o resíduo co-evaporado com tolueno adicionado. Purificou-se o resíduo por cromatografia em coluna (clorofórmio-metanol 9:1) (HOmg) 13C-RMN (CDC13) 37,3 (CH3), 69,7 (C-6')/‘ ^H-RMN (CDC13) 3,08 (s,3H,CH3), 4,50 (d, J=4,21 Hz, 2H, Η-6,/Η-6,/). Dissolveram-se 100 mg, 0,179 mmol, deste composto em DMF (2 ml) e adicionou-se azeto de sódio (41 mg, 0.628 mmol). A suspensão resultante foi agitada a 60°C durante 3,5 h. A mistura foi concentrada e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (tolueno-acetona 2:1) (84 mg), (IV(CHC13) 2100 cm-1), sendo este posteriormente dissolvido em fluoreto de tetrabutilamónio x 3 H20 1M, em THF (4 ml), à temperatura ambiente. Após 15 min, a mistura foi concentrada e o resíduo purificado por cromatografia em coluna (clorofórmio-metanol 5:1), e depois por HPLC (fase inversa, metanol-água 85:15), de forma a originar o composto em título (36 mg): [« ] D +54,4' • (c 0 ,95, H20): IV(CHC13) 2100 cm’ -1 / (azida): 13C RMN (D20 , 40 °C) 29 ,9 (C -3'), 44,9 (C-2J r), 52 ,6 (C- 6', 64,0 (C-5 80,8 (C-4 90 ,0 (C -1') / 97,1 (C-5) , 142, 6 (c-e i), 158,3 ( C-4 ), 166,í J (c- -2); 1 H RMN (D2 0, 40 eC) 2,0 3 (m , 2H, H-3', H-3 ' 2,61 (m, 1H, H- -2'), 3,56 (m, 2H, H- 6', H- 6 ' 3,75 (m, 2H, H-5 H- 5"), r 4, 33 (m, 1H, H “4 7 ) , 5,92 (d, J = 5,50 Hz, 1H, H-l' ), 6,05 (d, J=7 ,32 Hz, 1H, H-5), 7,82 (d , J=7 ,32 Hz, 1H, H-6) • Anal. Cale. para C10H 14°3N6: 45 ,ii; H, 5, 30 ; n , 31,56.
Encontrados: C, 45,02; H, 5,41; N, 31,28. -36- 73 172
Hel/MR 31600
Exemolo 23 1-[5'-0-benzoil-3'-C-[(benzoiloxi) metil ] -2',3'-didesoxi-4’-tio-α- e -/3-D-eritro-pentafuranosil] timina (18).
Submeteu-se a refluxo, até à obtenção de uma solução límpida, uma suspensão de timina (150 mg, 1,19 mmol) e um pequeno cristal de sulfato de amónio, numa mistura de hexametildis-silazano (2 ml) e trimetilclorossilano (0,2 ml). As matérias voláteis foram removidas por evaporação e o resíduo foi co-evaporado repetidamente com tolueno. Dissolveu-se o xarope resultante em diclorometano (2 ml), sob azoto. Adicionou-se a esta solução o composto 16. (153 mg, 0,32 mmol), seguido da adição de triflato de terc-butildimetilsililo (0,075 ml, 0,33 mmol) e de acetato mercúrico (0,102 g, 0,32 mmol). Agitou-se a solução durante 24 h à temperatura ambiente. A reacção foi terminada pela adição de hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado e a solução foi seca, concentrada e purificada por cromatografia em coluna (clorofórmio-acetato de etilo 1:1), de forma a originar (0,127 g, 87%). O RMN indicou que tinha ocorrido o acoplamento da timina, mas os espectros eram demasiado complexos de analisar sem se separar os anómeros. Removeu-se o grupo benzoílo ligado a O, deste material, utilizando sódio, em metanol, à temperatura ambiente, de forma a originar 1-(37-C-hidroxime-til-2',37-didesoxi-4'-tio-α- e -/3-D-eritro-pentafuranosil)timina.
Exemplo 24 1-[5'-0-benzoil-3·-C-[(benzoiloxi)metil]-2',3'-didesoxi-4'-tio-α- e -/3-D-eritro-pen- tafuranosil]citosina. A citosina (100 mg, 0,901 mmol) foi sililada, seguindo o procedimento descrito no exemplo 18, e dissolvida em acetonitrilo (3 ml) sob azoto. Adicionou-se o composto 17. (119 mg, 0,287 mmol), seguido da adição de triflato de terc-butildimetilsililo (0,13 ml, 0,574 mmol) e agitou-se a solução durante lha 0°C. A reacção foi terminada pela adição de hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado e a solução foi agitada durante 30 min, diluida com diclorometano, lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado, seca, concentrada e purificada por cromatografia em
73 172
Hel/MR 31600 -37- coluna (acetato de etilo-metanol 4:1), de forma a originar uma mistura anomérica do nucleósido 19. protegido (49 mg, 37%). 0 RMN indicou que tinha ocorrido o acoplamento da citosina, mas os espectros eram demasiado complexos de analisar sem se separar os anómeros. Removeu-se o grupo benzoilo ligado a O, deste material, utilizando sódio, em metanol, à temperatura ambiente, de forma a originar l-(3/-C-hidroximetil-2/-3'-didesoxi-4/-tio-a- e -/3-eri-tro-pentafuranosil)citosina.
Procedimento experimental
Os materiais de partida para os compostos nos Exemplos 1-4. foram preparados de acordo com a sequência de reacções a-d seguinte: a) (2S,3R)-l-O-p-bromo-benzil-3-C-(2'-propenil)-1,2,4-butanotriol (composto 2, Esquema 1).
Adicionou-se, gota a gota , uma solução de (2S,3R)-3-[[(4--bromobenzil)-oxi]metil]oxirano-2-metano-l-ol (1.36 g, 5 mmol), em 140 ml de éter dietílico seco, a uma solução fria de brometo de alilmagnésio -50°C (20 ml, 1M), em 100 ml de éter dietílico seco, durante 30 min sob azoto. A mistura foi agitada vigorosamente durante 30 min a -50°C e a reacção terminada pela adição de cloreto de amónio aquoso saturado. Recolheu-se a fase orgânica e extractou-se a fase aquosa com éter dietílico. As fases orgânicas foram combinadas e lavadas com ácido clorídrico (1M) , hidrogenocarbonato de sódio (sat.), secas, filtradas, concentradas e separadas por cromatografia em coluna (tolueno-acetato de etilo, 1:5), de forma a originar 2 (1 g, 64%) [e 3 (0,4 g, 25%)], [a]22D: +1,56 (c 1,03, CHCl3); 1H-RMN (100 MHZ, CDC13): 1,8 (m 1H, H-3); 2,13 (t, J1# 2# = Jl',3 = 6/8 Hz/ 2H, H-l#); 3,3 e 3,0 (largo, 2H, OH-2); 3,59 (m, 4H, H-l, H-4); 4,0 (m, 1H, H-2); 4,48 (S, 2H, ÇH2Ph); 4,94 e 5,09 (m, 2H, Η-3'a, Η-3'b); 5,78 (m, 1H, H-2'); 7,14-7,5 (m, 4H, arom); 13C-RMN (25,05 MHz, CDCI3); 30,6 (C-l'); 42,3 (C-3); 63,3 (C-4); 71,9, 72,3, 72,5 (CH2Ph, C-l, C-2'); 116,4 (C-3'); 121,5, 129,1, 131,3 (C aromático); 136,4 (C-2 e C aromático); 73 172
Hel/MR 31600 -38 b) (2S,3R)—4-O-benzoil-l-O-p-bromobenzil—3—C-(2'-propenil)-1,2,4--butanotriol (composto 4, esquema 1).
Adicionou-se, gota a gota, cloreto de benzoilo (3,21 ml, 27.6 mmol) a uma solução do composto 2 (8.54 g, 27 mmol), em piridina seca (50 ml), a 0°C. A mistura reaccional foi agitada a 0°C durante 15 min. Adicionou-se água (5 ml) e evaporou-se o solvente. 0 resíduo foi dissolvido em diclorometano e lavado com ácido clorídrico (1M), hidrogenocarbonato de sódio aquoso (sat.), seco, concentrado e purificado por cromatografia flash (tolueno-acetato de etilo, 2:1), de forma a originar o composto 4 (9.77 g, 86%). [a]22D: +8,5 (C 0,71, CHCI3); ΧΗ RMN (100 MHZ, CDCI3): 1,95-2,43 (m, 3H, H-3, H-l'); 2,59 (d, ·%(0Η),2 = 3,9 Hz' 1H, OH-2); 3,54 (m, seg. ordem, 2H, H-la, H-lb); 3,95 (m, 1H, H-2); 4,34 (d, J4 3 = 5,1 Hz, 2H, H-4); 4,48 (s, 2H, ÇH2Ph); 5,14 e 5,0 (m, 2H, Η-3'a, Η-3'b); 5,78 (m, 1H, H-2')? 8,1-7,14 (m, 9H, arom.); 13C-RMN (25,05 MHz, CDC13); 31,3 (C-l'); 40,4 (C-3): 70,1 C- 2; 64,0 (C-4); 72,3 (CH2Ph); 72,5 (C-l); 116,3 (C-3'); 121,4-134,7 (arom.); 136,4 (C-2'); 166,1 (ÇOPh). c) metil-3-C-[(benzoiloxi)metil]-5-0-p-bromobenzil-2,3-didesoxi--D-eritro-pentafuranósido(composto 5, esquema 1).
Adicionou-se 0S04, em t-butanol (18 ml, 0,02 M, estab. com TBHP 1%, 0,36 mmol),. a uma mistura, arrefecida em gelo, do composto 4 (7,5 g, 17,9 mmol) e N-metilmorfolina-N-óxido (4,8 g, 35,5 mmol), em tetra-hidrofurano:água (3:1,70 ml). Após alguns minutos removeu-se o banho de gelo e agitou-se a mistura reaccional durante a noite, à temperatura ambiente sob azoto. Adicionou-se NaHSC^ (2 g) e agitou-se a mistura durante 15 minutos. 0 solvente foi removido por evaporação, o resíduo foi diluido com acetato de etilo, lavado com HC1 (1M), NaHCC>3 (sat.), seco, filtrado e concentrado. 0 produto bruto foi dissolvido em tetra-hidrofurano:água (3:1, 200 ml) e tratado com NaI04 (7,65 g, 35,8 mmol). Após 30 minutos à temperatura ambiente, o diol cis encontrava-se completamente clivado. 0 tetra-hidrofurano foi removido por evaporação e o resíduo aquoso saturado com NaCl e extractado com éter dietílico. A fase orgânica foi seca e
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Hel/MR 31600 -39-concentrada. 0 resíduo foi tratado com HC1 metanólico (0,05 %, 50 ml) durante dez minutos, neutralizado com Dowex 2x8 (HC03), filtrado, evaporado e o resíduo purificado por cromatografia flash (tolueno-acetato de etilo, 3:1), de modo a originar uma mistura anomérica do composto 5 (6,63 g, 85%) na forma de um xarope incolor. 1H-RMN (100 MHz, CDCI3): 1,7-2,9 (três m, 3H, H-3, H-2a, H-2b); 3,31, 3,35 (2s, 3H, 0CH3); 3,6 (m, 2H, H-5); 4,1 (m, 1H, H-4); 4,4 (m, 2H, H-6); 4,6 (m, 2H, CH2Ph); 5,1 (m, 1H, H-l); 7,1-8,0 (m, 9H, aromático); 13C- RMN (25,05 MHz, CDCI3): 35,6, 36,4 (C-2); 38,7, 39,3 (C-3); 54,3, 54,5 (OCH3); 65,7, 66,6 (C-6); 71,5, 72,35, 72,37, 73,8 (C-5) (ÇH2Ph); 79,9, 80,1 (C-4); 104,8 (C-l); 121,0-136,4 (aromático); 165,8 (ÇOPh). d) metil-5-0-benzoil-3-C-[(benzoiloxi)metil]-2,3-di-desoxi-D-eri-tro-pentafuranósido (composto 6, esquema 1)
Dissolveu-se uma solução do composto 5 (1 g, 2,3 mmol) em éter dietílico seco (3 ml), em amoníaco (50 ml), num recipiente de Dewar. Adicionou-se sódio (300 mg, 13 mmol), em porções, durante 5 min. A solução foi agitada durante 30 minutos e a reacção terminada com NH4C1 sólido. 0 amoníaco foi evaporado sob uma corrente de azoto e o resíduo sólido diluido com acetato de etilo. O sólido foi removido por filtração e lavado várias vezes com acetato de etilo. 0 filtrado foi concentrado e depois co-evaporado com tolueno seco. Dissolveu-se o resíduo em bruto em piridina seca (30 ml). Adicionou-se cloreto de benzoilo (0.8 ml, 6.9 mmol) e agitou-se a solução durante 40 minutos à temperatura ambiente. Em seguida adicionou-se água (5 ml) e concentrou-se a mistura até à secura, o resíduo foi dissolvido em CH2C12 e lavado com HC1 aquoso (1M) , NaHC03 aquoso (sat.) e seco, filtrado e evaporado até à secura. Realizando cromatografia flash (tolueno-acetato de etilo, 3:1) obteve-se o composto 6 (580 mg, 68%), na forma de uma mistura anomérica. Separou-se uma pequena amostra do composto 6 utilizando silíca-gel. 0 espectro de ^-H-RMN e o p.f. obtidos para o anómero β, estão de acordo com os divulgados anteriormente.
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Os materiais de partida para os compostos nos Exemplos 11-16 e foram preparados de acordo com a sequência de reacções a-e seguinte: a) metil-5-0-(p-bromobenzil)-3-C-(hidroximetil)-2,3-didesoxi-D-eritro-pentafuranósido. O metil-3-C-[(benzoiloxij-5-0-(a-bromobenzil)-2,3-didesoxi-D -eritro-pentafuranósido (1,61 mg, 3,70 mmol) foi tratado com amoníaco metanólico (30 ml, saturado) durante 24 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo purificado por cromatografia flash em coluna (tolueno-acetato de etilo, 1:2), de forma a originar o composto em título (1,14 g, 93%). Anal. Cale. para C-j^H^gO^Br: 50,77; H, 5,78. Encontrado: C, 50,67; H, 5,73. b) metil-5-Ο-(p-bromobenzil)-3-C-(fluorometil)-2,4-didesoxi-D-eritro-pentafuranósido.
Adicionou-se, gota a gota, uma solução de anidrido trifluorometanossulfórico (0,38 ml, 2,26 mmol), em diclorometano (5 ml), a uma solução fria (-15°C) do composto anterior (637 mg, 1,92 mmol), em diclorometano (15 ml) e piridina (0,31 ml, 3,85 mmol), sob azoto. Após agitação durante 10 min a -15°C, a mistura foi diluida com diclorometano (100 ml), lavada com ácido clorídrico 1M, hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado, seca e concentrada, num banho a temperatura não superior a 20°C. 0 resíduo foi tratado com uma solução de fluoreto de tetrabutilamónio anidro, em tetra-hidrofurano (6 ml, 1M), durante 15 min. A mistura foi concentrada e o resíduo submetido a cromatografia flash em coluna (tolueno-acetato de etilo, 9:1), de forma a originar o composto em título (466 mg, 73%). Anal. Cale. para C14H1803BrF: 50,46; H, 5,45. Encontrado: C, 50,28; H 5,35. c) metil-5-p-benzoil-3-C-(fluorometil)-2,3-didesoxi-D-eritro-pen-tafuranósido.
Uma mistura do composto anterior (572 mg, 1,72 mmol), em etanol (40 ml) contendo hidrogenocarbonato de sódio (excesso) e -41- 73 172
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Pd 10%, em carvão activado (50 mg), foi tratada com hidrogénio durante 5 h à pressão ambiente. Os sólidos foram removidos por filtração e o filtrado concentrado. 0 resíduo em bruto foi dissolvido numa mistura de diclorometano (3 ml) e piridina (0,3 ml, 3,7 mmol), seguido da adição de cloreto de benzoilo (0,24 ml, 2,07 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante 15 min. Adicionou-se água (2 ml) e a mistura foi agitada durante 10 min, diluída com diclorometano, lavada com ácido clorídrico 1M, hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado, seca e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna (tolueno-acetato de etilo, 4:1), de forma a originar o composto em título (372 mg, 81%). Anal. Cale. para C14H1704F: C, 62,68; H, 6,39. Encontrado: C, 62,55; H, 6,33. d) metil-3-C-(azidometil)-5-0-(p-bromobenzil)-2,3-didesoxi-D-eri-tro-pentafuranósido.
Adicionou-se tetrabrometo de carbono (1,95 g, 5,89 mmol) a uma mistura de metil-5-0-(p-bromobenzil-3-C-(hidroxi-metil)-2',3'-didesoxi-D-eritro-pentafuranósido (1,95 g, 5,89 mmol), trifenilfosfina (1,6 g, 6,1 mmol) e azida de lítio (1,5 g, 30,6 mmol), em Ν,Ν-dimetilformamida seca (25 ml), à temperatura ambiente. A mistura foi agitada vigorosamente durante 24 h. Adicionou-se metanol(3 ml) e evaporou-se o solvente. A mistura foi diluida com diclorometano, lavada com água, seca e concentrada. 0 resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna (tolueno-acetato de etilo, 4:1), de forma a originar o composto em título (1,99 g, 95%) 2100 cm-1. Anal. Cale. para c14H18°3BrN3: c' 47/20'* H/ 5,09; N, 11,80. Encontrado: C, 47,15; H, 4,98; N, 11,9. e) metil-3-C-(azidometil)-5-0-(benzoil)-2,3-didesoxi-D-eritro--pentafuranósido.
Adicionou-se trióxido de crómio (2,8 g, 28,0 mmol) a uma solução de piridina seca (4,7 ml, 58,3 mmol) e diclorometano (20 ml), com agitação. A mistura foi agitada durante 15 min à temperatura ambiente. Adicionou-se uma solução do composto 73 172 Hel/MR 31600
-42- anterior (1,68 g, 4,72 mmol), em diclorometano (20 ml), seguida da adição de anidrido acético (3,2 ml, 32,0 mmol) e agitou-se a mistura durante 10 min à temperatura ambiente. Fez-se passar a mistura por uma coluna curta de silica-gel, utilizando acetato de etilo como eluente, de forma a originar um produto em bruto, o qual foi tratado com amoníaco metanólico (30 ml, saturado) durante 24 h. 0 solvente foi evaporado e o resíduo purificado por cromatografia flash em coluna (tolueno-acetato de etilo, 1:1) e, em seguida, dissolvido numa mistura de diclorometano (15 ml) e piridina (1 ml, 12,4 mmol), seguido da adição de cloreto de benzoilo (0,55 ml, 4,73 mmol). A mistura reaccional foi agitada durante 15 min. Adicionou-se água (2 ml) e a mistura foi agitada durante 10 min, diluida com diclorometano, lavada com ácido clorídrico 1M, hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado, seca e concentrada. O resíduo foi purificado por cromatografia flash em coluna (tolueno-acetato de etilo, 9:1), de forma a originar o composto em título (1,0 g, 57%). Anal. Cale. para C14H1704N3: C, 57,72; H, 5,88? N, 14,43. Encontrado: C, 57,86; H, 5,74? N, 14,43.
Os materiais de partida para os compostos no Exemplo 17. foram preparados de acordo com a sequência de reacções a-b seguinte: a) (3S,4S)-3,4-di(benzoiloximetil)ciclopentanona (composto 8, esquema 2).
Submeteu-se a refluxo durante 6 h, com uma ratoeira Dean--Stark, uma mistura de (-)(3S,4S)-3,4-di(metoxicarbonil)-ciclo-pentanona (composto 7, esquema 2)(0,93 g, 4,6 mmol), etileno-glicol (6,5 ml, 0,12 mol) e ácido p-toluenossulfónico mono-hi-dratado (25 mg), em tolueno (50 ml). Adicionou-se hidrogenocarbonato de sódio (20 mg) e, após agitação durante 5 min, a mistura foi lavada com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado, seca (MgS04) e concentrada até um cetal-diester em bruto. De acordo com ^-H-RMN o produto estava isento de cetona não reagida. Adicionou-se, gota a gota durante 1 h, o cetal-diester em bruto, em éter dietílico seco (15 ml), a uma mistura, arrefecida
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Hel/MR 31600 -43- em gelo, de hidreto-aluiuinato de lítio (0,35 g, 9,2 mmol), em éter dietílico seco (35 ml), durante uma hora. A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 3 h, antes de se proceder à decomposição do excesso de hidreto-aluminato de litio, por adição sucessiva de água (0,5 ml), NaOH aquoso 3M (0,5 ml) e água (1,5 ml). Após agitação durante 1 h, adicionou-se MgS04 (20 g) e prolongou-se á agitação por 5 min. 0 precipitado e o MgS04 foram removidos por filtração e lavados várias vezes com acetato de etilo. O filtrado foi concentrado, de forma a originar um óleo em bruto do diol. Adicionou-se cloreto de benzoilo (2,3 ml, 20,1 mmol), gota a gota, a uma solução do diol, em piridina (13,5 ml), com agitação. A mistura foi agitada durante 3 h à temperatura ambiente. Adicionou-se água (5 ml) e, após agitação durante 10 min, diluiu-se a mistura com hidrogenocarbonato de sódio aquoso saturado e diclorometano. A camada orgânica foi separada e lavada com hidrogenocarbonato de sódio saturado, seca (MgS04) e concentrada. A cromatografia em coluna (tolueno-EtOAc, 3:1), numa coluna curta de silica-gel, originou um resíduo na forma de xarope, incluindo o cetal dibenzoilado e vestígios da cetona dibenzoilada. 0 xarope foi dissolvido em metanol (92 ml) e HC1 2M aquoso (31 ml), agitado à temperatura ambiente durante 2 h e, em seguida, a 50°C por mais 2 h. A solução foi neutralizada com hidrogenocarbonato de sódio (5,2 g), diluida com água e extractada com diclorometano. A camada orgânica foi seca (MgS04), concentrada e cristalizada em éter dietílico/hexano, de modo a originar o composto em título na forma de agulhas (0,90 g, 55%): p.e. 85-86°C? [a]D-59,l° (c 1,04, clorofórmio); ΧΗ NMR (100 MHz, CDCI3) 6 2,12-2,73 (m, 6H, 2 CH, 2 CH2), 4,50 (d, 4H, 2 CH2-0Bz), 7,36-7,64 e 7,94-8,07 (m, 10H aromático H); 13C NMR (25,05 MHz, CDCI3) δ 38,3 (2 CH2), 41,6 (2 CH) 65,9 (2 CH2-0Bz), 128,2, 128,2 e 133,0 (aromático C), 165,9 e 214,9 (C=0).
Anal. Cale. para Ο2]Η20θ5 (352,4): C, 71,58; H, 5,72. Encontrado: C, 71,34; H, 5,73. b) (3S,4S)-3,4-di(benzoiloximetil)ciclopentanol (composto 9, esquema 2).
Adicionou-se boro-hidreto de sódio (41 mg, 1,10 mmol), em 73 172 Hel/MR 31600 -44-
porções sucessivas, ao composto 8 (193mgf 0,55 mmol), em metanol (10 ml), obtido sob as condições referidas em a). A mistura foi agitada à temperatura ambiente durante 30 min e, em seguida, diluída com água e éter dietílico. A camada orgânica foi lavada com cloreto de sódio aquoso saturado, seca (MgS04) e concentrada até um xarope, o qual foi purificado por cromatografia em coluna com sílica-gel (tolueno-EtOAc, 1:1), de forma a originar o composto em título (189 mg, 97%); [a]D-16,4° (c 1,09, clorofórmio); ΧΗ RMN (100 MHz, CDC13) δ 1,6-2,7 (m, 7H, 2 CH, 2 CH2, OH), 4,41 (t, 4H, 2 CH2-0Bz), 7,34-7,56 e 7,97-8,09 (m, 10H, aromático H); 13C RMN (25,05 MHz, CDCI3) δ 38,3, 39,3, 39,8, 40,0 (2 CH2 2 CH), 67,4, 68,2 (2 CH2-0Bz), 72,5 (CHOH), 128,1, 129,3, 129,8, 132,8 (C aromático), 166,3 (C=0).
Anal. Cale. para C21H22Os (354,4): C, 71,17; H, 6,26. Encontrado: C, 71,05; H, 6,18.
Os materiais de partida para os compostos nos Exemplos 18-22. foram preparados de acordo com a sequência de reacções a-c seguinte: a) (S)-4-(terc-butildifenilsililoxi)metil-(R,S)-2-hidroximetil-- ^-butirolactona (11)
Adicionou-se etanol (28 βΐ, 0,48 mmol) a sódio (280 mg, 12.17 mmol), em éter dietílico seco (5 ml), e agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 2 h. Adicionou-se uma solução de (S)-4-(terc-butildifenilsililoxiJmetil-V-butirolactona (3,50 g, 9,87 mmol) e formato de etilo (980 mg, 13,23 mmol), em éter dietílico (6 ml), e continuou-se a agitação por mais 16 h, à temperatura ambiente. Adicionou-se éter dietílico (20 ml) e NaH2P04 1M (10 ml) e separaram-se as fases. A fase orgânica foi lavada com água, seca e concentrada. Dissolveu-se o resíduo em etanol (10 ml) e adicionou-se uma solução de NaBH4 (500 mg, 13,22 mmol), em etanol (10 ml). Após 5 min, a reacção foi terminada pela adição de algumas gotas de ácido acético 80%. A mistura foi submetida a partição entre acetato de etilo e água. A fase orgânica foi seca e concentrada e o resíduo purificado por cromatografia em coluna (tolueno-acetona, 9:1), originando 11 73 172
m,. 7.34. Encontrado:
Hel/MR 31600 -45- (3.40 g, 90%).
Anal. Cale. para C22H2804Si: c/ 68.71; H, C, 68.58; H, 7.36. b) (S)-2-acetoximetil-(S)-4-terc-butildifenilsililoxi)metil-^--butirolactona (12).
Agitou-se uma solução de 11 (2,00g, 5,20 mmol), em piridina (20 ml) e anidrido acético (10 ml), a 60°C durante 30 min. A solução foi concentrada e o resíduo purificado por cromatografia em coluna (tolueno-acetona,10:1), de forma a originar 12 (1.41 g, 64%); [a]D +22,4° (c 1,00, CHCI3): 13C RMN (CDCI3) δ 29,3 (C, terc), 20,8 (CH3, acetato), 26,9 (3 x CH3), 27,3 (C-3), 39,8 (C-2) , 63,1, 65,7 (CH20Ac, C-5), 78,1 (C-4), 127,9, 128,3-135,7 (ArC), 170,7 (acetato), 176,4 (carbonilo); XH RMN (CDCl3) δ 1,05 (s, 9H, 3 x CH3), 2,07 (s, 3H, CH3, acetato), 2,39 (m, 2H, H-3, H-3') , 3,13 (m, 1H, H-2), 3,79, 4,35 (m, m, 4H, H-5 - H-5', H-6, H-6'), 4,58 (m, 1H, H-4), 7,17-7,72 (m, 10H, ArH).
Anal. Cale. para C24H3005Si; C, 67,57; H, 7,09. Encontrado; C, 67,48; H, 7,15. c) 2-C-acetoximetil-l-0-acetil-5-0(terc-butildifenil)-silil-D--eritro-pentafuranose (13.).
Adicionou-se hidreto de diisobutilalumínio (20% em hexano, 3,00 ml, 2,95 mmol) a uma solução da lactona 12 (500 mg, 1,17 mmol), em tolueno (30 ml), a -78°C. Agitou-se a solução durante 1,5 h, deixou-se aquecer até à temperatura ambiente e adicionou-se metanol (0.5 ml). Adicionou-se acetato de etilo (30 ml) e NaHC03 aquoso sat. (4 ml) à solução. Após agitação durante 2 h, adicionou-se MgS04 seco (2,0 g) e, depois de nova agitação durante 3 h, filtrou-se a mistura. O filtrado foi concentrado, o resíduo foi dissolvido em piridina (6 ml) e anidrido acético (3 ml), e aquecido a 40°C, durante 30 min, concentrado, e o resíduo foi purificado por cromatografia em coluna (tolueno-acetona 10:1), de modo a originar o composto em título (500 mg, 91%) na forma de uma mistura anomérica. 13C-RMN(CDC13, sinais selecionados) δ 19,4 (C, terc.). 20,9, 21,3, 21,4 (CH3, 73 172 Hel/MR 31600 -46-
acetatos), 26,9 (3 x CH3), 28,4 (C—3), 42,3, 44,8 (C-2), 62,8, 63,7, 65,8, 66,8 (C-5 e C-6), 80,0, 81,4 (C-4), 97,6, 100,2 (C-l), 127,8-135-7 (ArC), 170,2, 170,9 (acetatos).
Anal. Cale. para C26H340gSi: C/ 66/35' H, 7,29. Encontrado: C, 66,51; H, 7,28.
Os materiais de partida para os compostos nos Exemplos 23-24. foram preparados de acordo com a sequência de reacções a-c seguinte: a) 5-0-benzoil-3-C-[ (benzoiloxi)metil]-2,3-didesoxi-L-treo-pen-tose-dibenzil-ditioacetal (15). O composto 2Λ. (0,191 g, 0,516 mmol) foi tratado, à temperatura ambiente, com benzil-mercaptano (0,24 ml, 2,07 mmol), em diclorometano (3 ml) contendo uma quantidade catalítica de cloreto estânico, durante 24 horas. A mistura foi em seguida diluída com diclorometano e lavada com hidrogenossulfato de sódio aquoso saturado, seca, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia flash em coluna (tolueno-acetato de etilo 9:1), de modo a originar o composto 15 (0.266 g, 88%) na forma de um xarope incolor: [a]^D-8,l° (c 1,0, CHCI3).^CRMN (25,05 MHz, CDCI3) <5 34,0, 34,6, 34,9 (C-2, CH2Ph), 38,9 (C-3), 47,9 (C-l), 63,2 (C-4), 67,6 (C-5), 69,8 (C-6), 127,1-138,0 (aromático), 166,7 (COPh). b) benzil-5-0-benzoil-3-C-[(benzoiloxi)metil)-2,3-didesoxi-l,4--ditio-o:- e -)3-D-eritro-penta- furanósido (16.).
Adicionou-se trifenilfosfina (0,93 g, 3,55 mmol) e tri-iodo-imidazolo (0.79 g, 1,78 mmol) a uma solução do composto 15 (0,347 g, 0,592 mmol), em tolueno-acetonitrilo (2:1, 9 ml). A mistura foi mantida a 100°C durante a noite. A mistura foi diluida com tolueno e lavada com hidrogenossulfato de sódio aquoso saturado, seca, filtrada, concentrada e purificada por cromatografia em coluna (tolueno-acetato de etilo 50:1), de modo a originar 16. (0,219 g, 77%) na forma de um xarope incolor: [a]22D-4,2° (c 1,0, CHCI3); XH RMN (100 MHz, CDC13) <5 2,0-2,3 (m, 73 172
4,5 (m, 5H,
Hel/MR 31600 -47- 2H, H-2), 2,8 (m, 1H, H-3), 3,8 (m, 3H, CH2Ph, H-4), H-l, H-5, H-6), 7,1-8,1 (m, 15H, aromático). c) acetil-5-0-benzoil-3-C-[(benzoiloxi)metil]-2,3-didesoxi-4--tio-α- e -/3-D-eritro-pentafuranósido (17). o composto 16 (0,182 g, 0,381 mmol) e acetato mercúrico (0,243 g, 0,761 mmol), em ácido acético glacial (5 ml), foram agitados à temperatura ambiente durante 30 min. 0 solvente foi evaporado e co-evaporado com tolueno seco. 0 resíduo foi diluído com diclorometano, filtrado através de celite e concentrado. A cromatografia flash (tolueno-acetato de etilo 9:1) originou o composto 17. (0,156 g, 99%) na forma de um xarope incolor: 1H RMN (100 MHz, CDC13) δ 2,03, 2,07 (2s, 3H, COOCH3), 2,3 (2H, H-2), 3,0 (m, 1H, H-3), 3,8 (m, 1H, H-4), 4,4 (m, 4H, H-5, H-6), 6,2 (m, 1H, H-l), 7,0-7,9 (m, 10H, aromático).
Testes biológicos
Teste I. Efeito dos compostos de fórmula I sobre HIV em células H9
Infeccão de células H9 por HIV
As células H9, 105 células por alvéolo, numa placa de 24 alvéolos, suspensas em 2 ml de meio RPMI contendo soro de vitelo fetal 10%, penicilina 100 mg/ml, sulfato de estreptomicina 10 mg/ml e polibreno 2 mg/ml são expostas a HIV (HTLV-IIIB) e a diferentes concentrações dos compostos em teste. As placas são incubadas a 37°C em co2 5% durante 6-7 dias .0 conteúdo em cada alvéolo é, em seguida, homogeneizado com uma pipeta e transferido para um tubo de centrífuga. Após centrifugação durante 10 min a 1500 rpm, remove-se o sobrenadante e analisa-se a pelota celular, fixando-a em metanol sobre placas de vidro. Adiciona-se soro humano positivo a HIV, diluido 1:80 ou 1:160, e incuba-se durante 30 min a 37°C . Em seguida, lava-se a placa com solução salina tamponada com fosfato (PBS) contendo Ca2+ e Mg2+. Adiciona-se conjugado de carneiro anti-humano (FITC) e, após nova incubação, a placa é novamente lavada com PBS . A coloração de contraste é feita com azul de Evans e, após secagem,
73 172
Hel/MR 31600 -48-determina-se, num microscópio, a frequência de células contendo antigénio HIV .0 resultado do teste está apresentado na tabela 1 .
Tabela 1
Concentração (mH) para 50% de inibição (CI50) da multiplicação do vírus da imunodeficiência humana, em cultura de células
Composto cI50mM 1-[2',3'-Didesoxi-3'-C-(hidroximetil)-/3-D--eritro-pentafuranosil]citosina H O O 1-[2',3'-Didesoxi-3'-C-(hidroximetil)-a-D--eritro-pentafuranosil]citosina 5 1- [ 2·, 3' -Didesoxi-3' -C- (hidroximetil) -β-Ό--eritro-pentafuranosiljtimina 5 1-[2',3'-Didesoxi-3'-C-(hidroximetil)-a-D--eritro-pentafuranosil]timina 10 9-[2',3'-Didesoxi-3'-C-(hidroximetil)-a-D--eritro-pentafuranosil]adenina 10 A tabela 1 mostra que os compostos testados são inibidores activos da multiplicação do vírus HIV.
Teste II . Toxicidade celular
As células H9, 2x10^ células por placa, são incubadas em meio RPMI-1640 contendo soro de vitelo fetal 10%, penicilina 70 mg/1, estreptomicina 100 mg/1 e hepes 10 mM, na ausência ou presença dos compostos em teste. Determina-se o número de células por placa após 48 h. As células incubadas na ausência dos compostos em teste sofreram, então 2 ciclos de divisão celular. -49- 73 172
Hel/MR 31600
As células F5000, que são células de embrião humano, lxlO5 células por placa, são incubadas em meio mínimo essencial de Eagle, suplementadas com sais de Earle, aminoácidos não essenciais, soro de vitelo fetal 10%, hepes lOmM, penicilina 70 mg/1 e estreptomicina 100 mg/1, na ausência ou presença dos compostos em teste. 0 número de células por placa é determinado após 48 h. As células incubadas na ausência dos compostos em teste sofreram um ciclo de divisão celular. Os resultados são dados em % de inibição de multiplicação celular e apresentados na tabela 2.
Tabela 2 .Toxicidade celular em células H9
Composto % Inibição (H9) 1- [ 2', 3 ' -Didesoxi-3' - (hidroximetil) -j3-D--eritro-pentafuranósil]citosina (l mM) 50 A tabela 2 mostra que a concentração à qual o composto exibe toxicidade excede a concentração necessária para 50% de inibição da multiplicação de HIV, tal como é dada na tabela 1.

Claims (14)

  1. 73 172 Hel/MR 31600 -50- REIVINDICACÕES 1 - Processo de preparação de um composto com a fórmula R1-
    R3 it IA na qual x é o, s, so, so2, ch2; R1 é OH, 0-P0(0H)2, 0-P0(0H)-0- -PO(OH)2, 0-P0(0H)-0“P0(0H)-0-P0(0H)2 ou (CH2 )nOCH2PO(OH) 2 , onde n é 0-2? R2 é H e R3 é ch3, ch2oh, ch2och3, ch2sh, ch2f ou ch2n3 OU R3 é H e R2 é CH3, CH20H, CH2OCH3, CH2SH, CH2F ou CH2N3;
    Y é OH, NH2 e R5 é CH=CH2, C^CH, CH=CH-CH3, C=C-CH3, tien-2-ilo, tien-3-ilo, H, CH3, C2H5, CH2CH2CH3 ou CH(CH3)2; R6 e R7 são iguais ou diferentes e são H, F, Cl, OH, NH2 ou SH; na forma de uma mistura de anómeros a e β ou na forma de um anómero a ou β e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, com as condições de: a) na combinação em que X é 0, S; R2 é H e R3 é CH20H, Y é OH, NH2? R5 é ch=ch2, c=ch, ch=chch3, h, ch3, c2h5, ch2ch2ch3, CH(CH3)2, os compostos de fórmula IA estão apenas na forma de anómero j8; b) na combinação em que X é CH2? R2 é Η, e R3 é CH2OH, os compostos de fórmula IA são aqueles em que R4 é
    73 172 Hel/MR 31600 e R6 e R7 são iguais ou diferentes e são H, Cl, OH, NH2 ou SH? caracterizado por compreender a condensação de um glicósido tal como compreendido na fórmula à posição N-l de um derivado pirimídico ou à posição N-9 de um derivado púrico
    H IA onde Z é Cl, Br, I, aciloxi ou alcoxi, R1*, R1' e R3* são, respectivamente R1, R1 e R3, como anteriormente definidos ou com a condição de que quando R1 ou R1 é OH, então 0 tem de ter um grupo protector, R4' é R4 como anteriormente definido, possuindo um grupo protector sililo, acilo ou alquilo.
    na qual X é 0, S, S0, S02, CH2; R1 é OH, 0-P0(0H)2, 0-P0(0H)-0- -P0(0H)2, 0-P0(0H)-0-P0(0H)-0-P0(0H)2 ou (CH2)nOCH2PO(OH)2/ on de n é 0-2; R1 é H e R3 é CH3, CH20H, CH2OCH3, CH2SH, CH2F OU CH2N3; OU R3 é H e R1 é CH3, CH20H, CH2OCH3, CH2SH, CH2F ou CH2N3; (seguem fórmulas) 1 - Processo de preparação de um composto com a fórmula 73 172 Hel/MR 31600 -52-
    v fV .s
    M \ R ou R1 é Y é OH, NH2 e R2 é CH=CH2, C=CH, CH=CH-CH3, C=C-CH3, tíen-2--ilo, tien-3-ilo, H, CH3, C2H5, CH2CH2CH3 ou CH(CH3)2? R6 e R7 são iguais ou diferentes e são H, F, Cl, OH, NH2 ou SH; na forma de uma mistura de anómeros a e β ou na forma de um anómero a ou β; e dos seus sais farmaceuticamente aceitáveis, ca-racterizado por compreender a condensação de um glicósido tal como compreendido na fórmula à posição N-l de um derivado pirimídico ou à posição N-9 de um derivado púrico
    onde Z é Cl, Br, I, aciloxi ou alcoxi, R3-7, R27 e R37 são, respectivamente R1, R2 e R3, definidos como anteriormente ou com a condição de que quando R1 ou R2 é OH, então 0 tem de ter um grupo protector, R1' é R1 definido como anteriormente, possuindo um grupo protector sililo, acilo ou alquilo.
  2. 3 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1-2, caracterizado por X ser 0. 1 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1-2, 2 caracterizado por X ser S, S0 ou S02. -53- 73 172 Hel/MR 31600
  3. 5 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1-2, caracterizado por X ser CH2.
  4. 6 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1-5, caracterizado por R1 ser OH; R2 ser H e R3 ser CH20H; R3 ser H e R2 ser CH20H.
  5. 7 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1-5, caracterizado por R1 ser OH; R2 ser H e R3 ser CH3, CH2S, CH2OCH3, CH2F, CH2N3; R3 ser H e R2 ser CH3, CH2SH, CH2OCH3, ch2f, ch2n3.
  6. 8 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1-5, caracterizado por R3- ser (CH2)n0CH2P0(0H)2 e n ser 0-2.
  7. 9 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1-8, caracterizado por X ser OH, NH2 e R5 ser H, CH3, CH=CH2, C^CH ou ch=ch-ch3.
  8. 10 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1-8, caracterizado por R® ser NH2 quando R7 é H, OH, SH ou NH2.
  9. 11 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1-8, caracterizado por R6 ser H, F ou Cl quando R7 é OH, SH ou NH2.
  10. 12 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1--8, caracterizado por R6 e R7 serem OH.
  11. 13 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações l--12, caracterizado por o composto estar na forma de um anómero a.
  12. 14 - Processo de acordo com qualquer das reivindicações 1--12, caracterizado por o composto estar na forma de um anómero jS.
  13. 15 - Processo de preparação de uma composição farmacêutica, para o tratamento de infecções virais do tipo requerendo trans-criptase inversa para a replicação, incluindo vírus da imunodefi-ciência humana e vírus da hepatite B, ou vírus herpes ou parasi- -54- 73 172 Hel/MR 31600 tas, caracterizado por compreender a associação de um composto de fórmulas IA e 1B, como definidos em qualquer uma das reivindicações 1-14, com um veículo farmaceuticamente aceitável, incluindo lipossomas.
  14. 16 - Processo de preparação de um composto com a fórmula
    na qual X, R1, R2 e R3 são definidos como na reivindicação l e Z é Cl, Br, I, aciloxi ou alcoxi, caracterizado por compreender a reacção de um butan-l,4-diol-2,3 epóxido com um nucleófilo contendo 3 ou 4 átomos de carbono com uma ligação dupla, seguida por transformação de ligação dupla e por fecho do anel. Lisboa, Qyj· jppj Por MEDIVIR AB =0 AGENTE 0FICIAL=
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