PT97201A

PT97201A - Processo para a preparacao de hidroxi-metil-indolizidinas e quinolizidinas

Info

Publication number: PT97201A
Application number: PT97201A
Authority: PT
Inventors: Paul Saiho Liu; Mohinder Singh Kang; Roland Stephen Rogers; Barry Lee Rhinehart
Original assignee: Merrell Dow Pharma
Priority date: 1990-03-30
Filing date: 1991-03-28
Publication date: 1991-11-29
Also published as: HUT57209A; EP0449294B1; DE69120705D1; KR100195422B1; ATE140228T1; AU7381991A; CN1055362A; IL97698A0; NZ237567A; DE69120705T2; JP3019270B2; EP0449294A1; IE911063A1; HU208974B; NO911237D0; KR910016750A; US5028614A; CA2038984A1; FI911510A; HU911039D0

Description

MERRELL' DOW PHARMACEUTTCALS', INC. "Processo para a preparação de hidroxi-metil-indolizidinas e quinolizidinas" ' antecedentes da' invenção

Referem-se na literatura diversos derivados hidroxila dos de indolizidina e de pirrolizidina. Na maioria dos casos, esses compostos foram isolados a partir de fontes naturais e, de entre eles, o que se conhece melhor ê a castanospermina composto também designado por ^*1S-(1^,6^,7^, 8^, 8a^) ./-octa-hidro--1,6,7,8-indolizinatetrol. Foram descritos antes pirrolizidinas que comportam um substituinte carbono (isto ê, um substituinte hidroximetilo) /* ver Nash et al., Tet. Letters, 29_(20) (1988) 2487; Nash et al., Tetrahedron, 4^4,(1988) 5959 J mas admite-se que as indolizidinas e as quinolizidinas identicamente substitui das não tenham sido anteriormente descritas.

Descrição da Presente Invenção A presente invenção visa as indolizidinas e as quinolizidinas hidroxiladas que possuem um substituinte hidroximetilo e refere-se também aos esteres desses compostos. Mais particularmente, a presente invenção refere-se aos compostos que pos suem a formula seguinte: -2Í

na qual o símbolo n representa o inteiro 1 ou 2;

Rl e 1*2 representam, cada um independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo OA^; os símbolos A, Al' A2' A3 e A4 rePresentam» cada um e independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo alcanoilo C1"C18 ou

e os símbolos Y, Y1 e Y1' representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou de halogéneo ou um grupo alquilo C^-C4 ou alcoxi C^-C4 ou os sais farmaceuticamente aceitáveis desses compostos.

Na formula estrutural anterior a linha ondulada signi fica que o segundo anel pode estar fundido com o anel hexagonal (piperidina) representando em qualquer das duas possíveis formas isomêricas. Além disso, no caso de e representarem, cada um, um grupo 0A4, deve notar-se que existe um segundo átomo liga do ao mesmo átomo de carbono do anel e que esse segundo átomo é de hidrogénio. Além disso/ e R2 podem estar em qualquer das duas possíveis configurações em relação I estrutura do anel.

Os grupos alcanoílo C^-C^g, referidos antes podem ser de cadeia linear ou ramificada indicando-se como exemplos os grupos formilo, acetilo, propionilo, butirilo, isobutirilo, he-xanoílO/ octanoílo, decanoílo e hexadecanoílo. Como exemplos de átomos de halogêneo referido antes, indica-se os átomos de flúor, cloro, bromo ou iodo. Os grupos alquilo C^-C4 referidos antes, isolados ou fazendo parte de um grupo alcoxi, podem ser grupos alquilo de cadeia linear ou ramificada, com até 4 átomos de car bono. Como exemplos referem-se os grupos metilo, etilo, propilo, butilo, metoxi, etoxi ou butoxi.

Os sais de adição de ácido de ácidos farmaceuticamente aceitáveis, tal como referido antes, são equivalentes as aminas para os objectivos da presente invenção. A título ilustrativo faz-se referência aos sais de ácidos inorgânicos, tais como, por exemplo, os ácidos clorídrico, bromídrico, sulfúrico, fosfórico e semelhantes; com ácidos carboxílicos orgânicos, tais como, por exemplo, os ácidos acético, propiõnico, glicõlico, láctico, pirú vico, malónico, succínico, fumãrico, mãlico, tartãrico, cítrico, ascõrbico, maleico, hidroximaleico e di-hidroximaleico, benzóico, fenilacético, 4-aminobenzóico, 4-hidroxibenzõico, antranílico, cinâmico, salicílico, 4-amino-salicílico, 2-fenoxibenzoico, 2--acetoxibenzóico, mandélico e semelhantes; e com ácidos sulfóni-cos orgânicos, tais como o ácido metano-sulfónico e o ácido p-to lueno-sulfónico. Esses sais podem ser obtidos recorrendo a proce dimentos normalizados, a partir de uma amina da presente invenção e de um ácido adequado.

Para a preparação dos compostos de indolizidina da pre

%ΰ sente invenção em R^. e R2 representam, ambos átomos de hidrogénio ou grupos -OH, o composto 2,6.-didesoxi-2,6-/~ f (fenilmeto-xi)-carbonilJf-imino ,3,4,5-tetraguis-0-(fenilmetil)-D-gli- cero-L-gulo-heptitol serve como composto inicial básico. A série de reacções específicas utilizadas para converter este composto numa indolizidina hidroxilada encontra-se representada no Esquema A que se segue. Nas :fôrmulas estruturais, representa um grupo fenil-metilo e Z representa um grupo benziloxi-carboni lo ou t-butiloxi-carbonilo. ) /

Τ9

ESQUEMA A

OS VII / / i—6—

Deste modo, o grupo hidroximetilo livre existente no composto inicial é oxidado para se obter o correspondente aldeí do (II). Para esta reacção. ê possível utilizar uma solução de cloreto de oxalilo e de dimetilsulfõxido em cloreto de metileno (oxidação de Swern). A epimerização catalisada por uma base com 1,8-diazabiciclo/''5.4.0 yundec-7-eno ou 1,4-diazabiciclo/* 2.2.2.J octano deu uma mistura de aldeídos epimericos na posição De“ pois faz-se reagir o aldeído com (trifenilfosforanilideno)-acetato de metilo segundo uma condensação de Wittig para expandir o grupo carboxaldeído para um éster acrilato com 3 átomos de carbono na cadeia lateral e para dar um composto de formula geral (ΓΓΙ). A redução catalítica do acrilato utilizando hidrogénio e níquel de Raney proporciona o correspondente éster propionato de fórmula (IV) . A hidrólise do éster utilizando ácido fõrmico dá o correspondente ácido carboxílico, o qual se ciclisa expontaneamente para dar a correspondente lactama de fórmula (V). Depois faz-se a redução da lactama para obter a correspondente amina cíclica de fórmula (VI) utilizando um redutor hidreto, tal como o hidreto de alumínio no seio de um dissolvente inerte, tal como o tetra-hidro furano. Depois removeu-se dos compostos de fórmula VI os grupos protectores benzilo recorrendo a técnicas de hidrogenação normali zadas para se obter o derivado de poliol desejado de fórmula (VII). É possível utilizar o mesmo procedimento geral para se obter a correspondente quinolizidina, com a excepção de se utilizar os reagentes adequados na condensação de Wittig. Ou seja, faz -se reagir o aldeído de fórmula geral II com 3-(trifenil-fosfora-nilideno)-propionato de metilo para dar um composto ao qual corresponda a fórmula III, com a excepção de a cadeia lateral do éster conter quatro átomos de carbono e ser um 3-butenoato em vez -7- de um acrilato. Depois submete-se esse butenoata â mesma serie de reacções anteriormente descritas para dar a quinolizidina que corresponde ã indolizidina de fórmula VII.

Para se obter compostos em que R^ e R2 representam ambos grupos -OH, faz-se uma cis-hidroxilação de um éster de fórmula geral III insaturado ou do correspondente butenoato na ligação dupla, utilizando permanganato de potássio ou tetróxi-do de ôsmio para se obter, após hidrogenação selectiva para a remoção do grupo N-fenil-metoxi-carbonilo, o correspondente ês ) ter a, β -di-hidroxi correspondente i fórmula IV (ou o corres-

,tf-di-hidroxi-butanoato). Depois faz-se reagir esse êster conforme se descreveu antes para se obter o composto he-xa-hidroxi correspondente ã formula VII ou a correspondente qui nolizidina.

As quinolizidinas da presente invenção nas quais R^ representa um átomo de hidrogénio e R2 representa um grupo de fórmula geral OA^ podem ser obtidas a partir do carbamato cícli co de fórmula VIII representada no Esquema B que se segue. Este esquema mostra especificamente a conversão de um composto de fórmula VIII num monoéster de fórmula XVII.

Esquema B

0 H

BnO VIII OBn OBn

IX / -8-

Esquema' B (continuação)

XV XIV 0

Esquema B (Continuação)

Especificamente, trata-se o carbamato cíclico de fórmula VIII com uma base aquosa, tal como o hidróxido de sódio a 50%, para abrir o carbamato e dar o composto de hidroxi-metilo de fórmula IX. Depois faz-se reagir esse álcool com cloreto de benzoílo para dar o éster benzoato de N-benzoilo de fórmula X. A redução do composto de N-benzoilo com um redutor hidreto, tal como o hidreto de alumínio dá o correspondente composto de N-ben zilo, o qual, após hidrólise alcalina, proporciona o composto de N-benzil-hidroxi-metilo de fórmula XI. A oxidação de Swern desse composto de hidroxi-metilo dá um carboxaldeldo de fórmula XII. O carboxaldeído de fórmula XII também pode ser epimerizado por tra tamento com bases impedidas, tais como 1,8-diazabiciclo/’ 5.4.0 .J-undec-7-eno ou 1,4-diazabiciclo/*2.2.2 _/octano. A reacção do aldeído com cloreto de alil-magnêsio proporciona o carbinol de fórmula XIII. Esta reacção origina uma mistura de carbinõis epimeri-cos, a qual é transferida de reacção para reacção conforme indica do, até os isómeros poderem ser separados convenientemente. Depois faz-se reagir esse carbinol com um cloreto de ácido para dar o éster correspondente. Especificamente, representa-se o benzoato / -f-xo- . como sendo o composto, de formula XIV no Esquema B.. 0 tratamento do benzoato insaturado com borano seguindo-se depois a adição de perõxido de hidrogénio dâ o correspondente álcool prima rio de formula (XV). Este procedimento origina também algum 1,4--diol (composto de fórmula XVIII no Esquema C). Depois faz-se reagir o éster derivado de hidroxi de fórmula (XV) com uma solução de ciclo-hexano em metanol e com catalisador de Pearlman para a remoção do grupo N-benzilo. Depois faz-se reagir o composto resultante com cloreto de metano-sulfonilo para realizar a cicli sação e dar o éster de quinolizidina de fórmula XVI. A hidrogena ção catalítica utilizando negro de paládio permite remover os gru pos protectores benzilo para dar o éster de tetra-hidroxi de fórmula XVII.

Por um processo similar, a reacção do carboxaldeído de fórmula XII em vez de cloreto de vinil-magnésio praporeiòna/.o álcool alílico com menos um átomo de carbono na cadeia lateral do que o carbinol de fórmula XIII. Depois submete-se esse álcool alílico ã mesma série de reacções anteriormente descritas para dar compostos de indolizidina correspondentes aos compostos de quinolizidina de fórmula XVII (anterior) e de fórmula XXI (a seguir) . A preparação do composto de penta-hidroxi correspondente à fórmula XVII encontra-se representada no Esquema C que se segue. ... /... f -Ur

ESQUE23A C

Especificamente, faz-se reagir o composto de 1,4-diol de formula (XVIII), obtido conforme anteriormente descrito, com uma solução de ciclo-hexeno em metanol e com catalisador de Pearl man para a remoção do grupo protector N-benzilo dando a piperidi-na de fórmula (XIX). A reacção da piperidina com cloreto de meta- -12- no-sulfonilo origina a ciclisação para dar o quinolizidinol de fórmula (XX). A hidrogenação catalítica deste composto utilizan do negro de paládio remove os grupos protectores benzilo para dar o composto de penta-hidroxi desejado de fórmula (XXI).

Para se obter os ésteres da presente invenção, além daqueles cuja preparação jã foi descrita antes, faz-se reagir um composto de poli-hidroxi da presente invenção com um cloreto ou anidrido de ácido adequado. A mistura de ésteres resultante pode ser separada recorrendo a técnicas cromatográficas para dar I monoisteres e diesteres individuais.

Em alternativa, é possível utilizar um composto de poli-hidroxi da presente invenção e proteger dois dos grupos hidro xi como cetais e fazer reagir o composto protegido resultante com um cloreto ou anidrido de ácido adequado para esterificar um grupo hidroxi livre. Depois remove-se o grupo protector para se obter selectivamente um éster. Especificamente, faz-se reagir 5R-(5<tf, 6^, 7¢(, &β, 8a^) r/Ex±a-hidro-6,7,8-tri-hidroxi-5-hidroxi--metil-indolizina ou 6R-(6^, 7jf, Bg(, 9a^./nona-hidro-7,8,9- -tri-hidroxi-6-hidroxi-metil-quinolizina com 2-metoxi-propeno ou 2,2-dimetoxi-propano para dar um cetal cíclico entre o radical hidroxi do grupo hidroxi-metilo mais reactivo e o radical hidroxi do átomo de carbono do anel adjacente. A reacção deste cetal cíclico com um cloreto de ácido, tal como o cloreto de butirilo ou o cloreto de benzoílo dá preferencialmente a 8-indolizidina esterifiçada ou a 9-quinolizidina esterifiçada. Depois remove-se o grupo protector cetal por tratamento com um ácido, tal como o HC1 em etanol ou com ácido 4-tolueno-sulfõnico para proporcionar o monoêster desejado. 9 -13- /

Em alternativa, pode fazer-se reagir o cetal .cíclico anteriormente obtido com cloreto de carbobenzoxi para se obter os mesmos monoésteres (8- ou 9)-benziloxi-carbonato anteriormen te descritos. Em seguida, pode fazer-se reagir ainda estes éste res com um cloreto de acido, tal como o cloreto de butirilo ou o cloreto de benzoílo para dar o composto 7-indolizidina esteri^ ficada ou 8-quinolizidina esterifiçada. Depois procede-se à hi-drogenação catalítica desse produto para remoção do grupo pro-tector benziloxi-carbonato e depois efectua-se a remoção do gru ) po protector cetal por tratamento com um acido, tal como o acido 4-tolueno-sulfõnico para proporcionar um monoéster (isto é, o 7-monoister da indolizidina ou o 8-monoêster da quinolizidi-na) .

Os compostos da presente invenção são úteis para o tratamento de diabetes. Mais especificamente, podem ser utiliza dos para evitar o desenvolvimento da hiperglicémia que pode ocor rer em certas condições diabéticas no caso de se ingerir um precursor da glucose. Sendo assim, quando se ingere um hidrato de carbono, quer sob a forma de glucose quer sob a forma de mal tose, sacarose ou amido nos alimentos ou nas bebidas, o nível de glucose no soro sobe para concentrações elevadas. Em pessoas sau dáveis este estado hiperglicêmicorapidamente regressa ao normal, sendo a glucose do sangue rapidamente metabolizada e armazenada e/ou utilizada pelo organismo. Contudo, no caso de diabetes melli, tus, a tolerância do paciente â glucose encontra-se diminuida e os níveis de glucose no soro anormalmente elevados que se desenvolvem permanecem elevados durante intervalos de tempo prolongados. Observa-se também noutros animais uma resposta similar à que se observa nos seres humanos, incluindo por exemplo o gado de aba -14

te, as aves criadas em avicultura, nos animais decorativos do lar e em animais de laboratório. XJm estado desse tipo pode ser descrito como hiperglicêmia post-prandial. TJm dos métodos para o tratamento desse estado de saúde consistiria em administrar alguns agentes que pudessem evitar a conversão dos açúcares com plexos em glucose evitando consequentemente o desenvolvimento de níveis excessivos de glucose. Na presente invenção, descobriu-se que nos casos em que os níveis elevados de glucose são o resultado da hidrólise de açúcares complexos, a administração dos compostos actuais inibe a formação inicial de glucose no san gue fazendo com que seja possível evitar os problemas que estariam associados aos níveis elevados prolongados de glucose no so ro. 0 mecanismo que permite alcançar esse resultado ê o que se.dèscreve a seguir embora a utilidade descrita antes não fi que limitada aos pormenores específicos deste mecanismo. As enzi mas que catalisam a hidrólise de hidratos de carbono complexos convertem hidratos de carbono não absorvíveis em açúcares absorvíveis. A acção rápida dessas enzimas conduz a uma elevação inde sejável e aguda da glucose sanguínea nos diabéticos. Os compostos da presente invenção são poderosos inibidores dessas enzimas e quando administrados conjuntamente com uma refeição de hidratos de carbono evitam as excursões desse tipo hiperglicémicas no eivas. Todavia, é desejável que a inibição dessas enzimas hidro-liticas seja limitada âs que se encontram presentes nos intestinos, o que ê verdadeiro para os compostos actuais. Por outro lado, a inibição de glico-hidrolases sistémicas ou a inibição do transporte da glucose podem originar dificuldades na utilização

dos hidratos de carbono intracelulares como fonte de energia e provocar, consequentemente, problemas metabólicos.

Para a demonstração da actividade dos compostos actuais i possível utilizar, o procedimento de ensaio que se segue.

Estudos in vitro. Procedeu-se ao isolamento de glico--hidrolases intestinais provenientes do intestino do rato. Utilizou-se ratos macho pesando 150 a 250 g, os quais foram mantidos em jejum durante a noite e depois foram sacrificados por anestesia com CO2. Removeu-se todo o intestino delgado, limpou--se com 50 a 100 ml de solução salina fria e colocou-se sobre uma placa de vidro arrefecida com gelo. Removeu-se a camada mucosa e homogeneizou-se utilizando uma solução correspondente a cinco vezes o seu volume constituída por NaCl 0,5 M, KC1 0,5 M e EDTA 5 mM, para o valor de pH 7,0. Este homogeneizado foi cen trifugado a 20 OOOxg durante 30 minutos e depois lavou-se a gra nulação com uma suspensão e voltou a centrifugar-se tris vezes em solução salina recente. Finalmente, homogeneizou-se a granulação resultante utilizando 5 vezes o seu volume de uma solução de NaCl a 0,9% e centrifugou-se a 200 g durante 10 minutos. As misturas de incubação continham 10 jil dessa preparação enzimãti ca e ainda 3,3 ^amoles de sacarose e ainda o composto de ensaio, de modo a proporcionar um volume final de 100 ji 1 de tampão de maleato de sódio 0,1M para o valor de pH 5,9. Todas as determinações foram efectuadas em duplicado ou triplicado. Um dos conjuntos de determinações foi realizado em preparações desactiva-das a quente â temperatura de 90°C durante 2 minutos, imediatamente após a adição da enzima. As . outras preparações foram incubadas durante 30 minutos â temperatura de 37°C em banho-ma- -16- / ria e depois aquecidas para provocar a desactivação. Determinou -se as concentrações de glucose por desidrogenase da glucose (Seragen Diagnostics, Indianapolis, IN) . Para cada concentração do composto de ensaio fez-se a comparação na glucose produzida com a quantidade de glucose observável na ausência de fãrmaco.

Ao proceder-se ao ensaio do composto £ 8a0() ,/-octa-hidro-6,7,8-tri-hidroxi-5-hidroximetilindolizi-na, segundo este procedimento, verificou-se um valor CIj-q de aproximadamente 2 jM em função da sacarose. A prática do método proposto pela presente invenção consiste em administrar uma quantidade eficaz de um dos compostos que iniba a hiperglicimia post-prandial, a um mamífero que necessite desse tratamento, por uma via adequada. Para os objec tivos da presente invenção dá-se·preferencia ã administração oral. ► A quantidade eficaz de composto, isto i, a quantidade suficiente para inibir a hiperglicémia post-prandial, depende de diversos factores, tais como as dimensões, o tipo e a idade do animal que se pretende tratar, o composto particular ou o sal farmaceuticamente aceitável utilizado, a frequência de administração, a gravidade do estado de saude e o tempo de administração. De um modo geral, pode afirmar-se que esses compostos serão administrados oralmente em doses compreendidas entre 0,5 mpk e 50 mpk, sendo preferencial uma dose compreendida entre 1,5 mpk e 15 mpk. Mais especificamente, os compostos actuais serão admini£ trados aos seres humanos em doses unitárias simples contendo 100 mg a 1 g de ingrediente activo, sendo essa administração feita três vezes por dia, às refeições.

Os compostos da presente invenção também são. úteis como agentes an ti-vir ais e, ma is particularmente, são. úteis contra rectrovírus, tais como os do tipo HIV. Esta utilidade é determinada pelo facto de os compostos actuais serem inibidores da ^(-glucosidase I e por isso bloquearem o primeiro passo de reac çao num processamento glicoproteico das glicoproteínas da membrana virai. Sem es.te primeiro passo de biossintese os vírus não podem funcionar adequadamente pelo que serão inibidos. Em consequência, verificou-se que os inibidores da ^-glucosidase I serão também úteis como agentes anti-virais e particularmente como inibidores de rectrovírus tais como HIV. £ Sunkara et al. Biochem. Biophys. Res. Commun., 148 (1),(1987) 206-210? Tyms et al.' Lane et,' ii (1987) 1025-1026.^7 A actividade dos compostos actuais como inibidores da ^-glucosidase I pode ser demonstrada pelo seguinte procedimento de ensaio. ~ · 3.

Preparação de um Substrato' Marcado com f —H~ /-glucose O substrato (G^MgN) de oligossacarídeos marcados com /* H /-glucose para a glucosidase I foi preparado marcando meta bolicamente células BHK de crescimento exponencial utilizando / H /galactose, na presença de 200 jig/ml de castanospermina.

As células BHK desenvolvidas como monocamada foram tratadas com 200 jig/ml de castanospermina em DMEM fcj^430-1600) tendo-se feito o seu enriquecimento com 10% de soro de feto de vitela desacti-vado pelo calor e com uma mistura de L-glutamina 2 mM e IX de antibiótico PSN. Após três horas de incubação com castanospermi na, adicionou-se £ 1- H /-galactose (10 jici/ml de meio) âs glicoproteínas marcadas e deixou-se as células desenvolver-se livre mente durante mais 48 horas. No fim do período de marcação pro-cedeu-se ã lavagem das células com PBS frio e efectuou-se a ras pagem com uma espátula de borracha. Aqueceu-se o granulado celu lar durante 10 minutos â temperatura de 100°C e tratou-se exaus tivamente com pronase (normalmente durante 72 horas) em tampão Tris 50 mM, pH 7,5, contendo CaCl2 10 mM e Pronase a 1% sob atmo£ fera de tolueno, para se obter glicopiptidos. Os glicopêptidos foram separados em colunas de Bio-gel P-4. Reuniu-se o máximo de glicopêptidos produzidos pelo tratamento com castanospermina, e depois tratou-se com Endo-H para proporcionar os oligossacarídeos. Os oligossacarídeos obtidos por hidrólise com endo-H foram ligados a uma coluna de ConA previamente lavada com tampão A (50 mM de Tris, pH 7,5 contendo 500 mM de NaCl) e realizou-se o equilíbrio com tampão B (5 mM de tampão de acetato de sódio, pH 5,5 contendo 2 mM de cada um dos compostos CaCl2/ MgCl2 e MnCl2). De pois procedeu-se á eluição desses oligossacarídeos com tampão B contendo 100 mM dep(-metil-manósido. Os oligossacarídeos sujeitos a eluição a partir da coluna de ConA foram ainda purificados e caracterizados numa coluna de Bio-gel P-4 calibrada (1,5 x 200 cm, (-) malha 400). Os oligossacarídeos purificados que possuiam uma estrutura GLc3MangClcNAc foram utilizados como substrato nesses estudos.

Preparação dos Compostos' de Ensaio

Os compostos de ensaio foram dissolvidos em H20 ou DMSO conforme adequado e normalmente adicionou-se o composto numa concentração de 0,02 a 100 jig/ml ã enzima antes do inicio da reacçao com o substrato radioactivo. Para cada experiência re- correu-se a controlos de DMSO nos casos em que se utilizou DMSO para dissolver os compostos.

Ensaio em Placa de Microtitulação para a Actividade da oC-gluco-sidase Ϊ

Lavou-se ConA-sefarose inicialmente com tampão A e de pois com tampão B, conforme se descreveu antes, e preparou-se nova suspensão em tampão B (gel/tampão; 1:1) antes da utilização. Os ensaios enzimãticos íoramefectuados numa microplaca de 96 cavidades, com um volume total de 100 jal, o qual continha 5000 CPM de substrato f H^/G^MgN, 100 mM de tampao de fosfato de potássio de pH 6,8 e ç(-glucosidase I purificada. Incubou-se a mistura reaccional à temperatura de 37°C durante 1 hora para cada experiência e interrompeu-se a reacção adicionando-lhe 25 /11 de ácido acético glacial. Adicionou-se à mistura 175 jil de concanavalina A/sefarose em tampão B (1:1) e procedeu-se â cen trifugação da microplaca a 500 x g durante 5 minutos. Removeu--se uma alíquota de 150 jil de sobrenadante e efectuou-se a con tagem. Quando o composto VII do Esquema A anterior foi testado em conformidade com este procedimento apresentou um valor CIj-q correspondente a 0,3 juM. Quando o composto XVII do Esquema B anterior foi testado em conformidade com este procedimento apre sentou um valor CI^q correspondente a 29 0 composto XXI do

Esquema C anterior apresentou um valor Cl^g correspondente a 0,15 ^aM neste teste.

Inibição da Glhcosidase I em Células F-10

Utilizou-se a acumulação de (G^Mg^ -Asn) nas célu- / -20- las F-10 como medida da inibição de ^(-glucosidase I. Os glico-péptidos obtidos (tal como anteriormente para as células BHK) por digestão com pronase das células F-10 marcadas radioactiva mente na presença de concentrações diferentes de inibidores (normalmente 0,1 a 30 pg/ml) foram submetidos a cromatografia numa coluna de Bio-gel PD-6. Utilizou-se a percentagem relativa de unidades de contagem no pico relativamente ao volume livre (sempre que fez a eluição da radioactividade nos controlos) como medida da actividade inibidora de um composto particular.

Os compostos da presente invenção podem ser utilizados para tratar diversas doenças e estados de saude conhecidos e que sejam provocados por vírus patogênicos incluindo as doen ças e os estados de saude provocados pelo vírus da leucemia dos murinos, pelos vírus da leucemia dos felinos, pelo citomegalo--vírus (CMV), pelo vírus do sarcoma das aves, pelo vírus da imu nodeficiência humana (HIV), HTLV-I e HTLV-II. Os especialistas neste domínio sabem determinar facilmente as circunstâncias que exigem terapia anti-rectroviral. A Requerente considera que a utilização dos compostos da presente invenção para o tratamento de infecções provocadas por HIV em seres humanos ê da maior importância. O termo "paciente" agora utilizado refere-se a mamíferos, tais como os primatas incluindo os seres humanos, e ainda aos animais das espécies dos ovinos, equídeos, bovinos, suínos, cães, gatos, ratos e murganhos. A quantidade de composto da presente invenção que se administra pode variar amplamente de acordo com a unidade de do sagem particular aplicada, o período de tratamento, a idade e o sexo do paciente tratado, a natureza e a gravidade da doença tra -21- tada e ainda com os compostos originais particulares ou com os derivados éster seleccionados. Além disso, esses derivados podem ser utilizados em conjunto com outros agentes (por exemplo AZT) conhecidos pela sua utilidade no tratamento de doenças re trovirais e ainda com agentes conhecidos pela sua utilidade no tratamento de sintomas das complicações associadas com doenças e estados de saúde provocados pelos retrovírus. A quantidade eficaz anti-retroviral de um composto da presente invenção que deve ser administrada variará normalmente entre 15 mg/kg e 500 mg/kg. Uma dose unitária pode conter 25 a 500 mg de composto original ou do seu derivado éster e pode ser administrada uma ou várias vezes por dia. O composto utilizado pode ser admini£ trado com um veículo farmacêutico utilizando formas unitárias de dosagem convencionais para administração oral ou parenteral.

De acordo com a prática dos métodos da presente inven ção, o ingrediente activo ê preferencialmente incorporado numa composição constituída por um veículo farmacêutico e por 5 a 90% em peso de um composto da presente invenção ou de um seu sal farmaceuticamente aceitável. A designação "veículo farmacêutico" significa excipientes farmacêuticos conhecidos, úteis para a for mulação dos compostos farmaceuticamente activos para administração interna aos animais e os quais são substancialmente não tõxi cos e não sensibilizadores nas condições de utilização. As compo sições podem ser preparadas mediante técnicas conhecidas para a preparação de comprimidos, cápsulas, elixires, xaropes, emulsões, dispersões e põs molháveis e efervescentes, e podem conter excipientes adequados conhecidos pela sua utilidade para a preparação do tipo particular de composição desejada. Os veículos farma cêuticos adequados e as técnicas de formulação encontram-se em textos consagrados da especialidade tais como Remington1s Phar maceuticaí Sciences, Easton, Pennsylvania, Mack Publishing Com-pany.

Os exemplos que se seguem têm como objectivo ilustrar a presente invenção. Todavia não devem ser considerados como li mitativos, em nenhum sentido. ‘ EXEMPLO 1 A uma solução de cloreto de oxalilo (2,0 ml; 22 mmo-les) em cloreto de metileno (16 ml) , arrefecida até ã temperatura de -78°C, adicionou-se, gota a gota, uma solução de dime-tilsulfõxido (3,0 ml? 40 mmoles) em cloreto de metileno (8 ml) e agitou-se a mistura resultante durante 15 minutos. Dissolveu -se 2,6-didesoxi-2,6-^f /" (fenilmetoxi) -carbonil J^-imino. J7-l,3, 4,5-tetraquis-O-(fenilmetil)-D-glicero-L-gulo-heptitol (8,2 g; 11,94 mmoles), em 20 ml de cloreto de metileno e adicionou-se, gota a gota, esta solução à mistura anterior e agitou-se durante mais 15 minutos. Adicionou-se trietilamina (8 ml) e deixoú--se a mistura aquecer ate â temperatura de 0°C. Lavou-se a mis, tura com ácido clorídrico IN (50 ml), com uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (2 x 50 ml) e com uma solução salina (50 ml). Após a secagem sobre sulfato de magnésio evapo rou-se a fase organica in vácuo para se obter o aldeído com o aspecto de um óleo amarelo claro (7,7 g? 94%); IV (puro) 1700 cm"1 (C=0). ΕΜΝ^Η (CDC13)£ 3,2-4,7 (m, 15H) , 5,00 (s, 2, COOCH^Ph), 7,2 (m, 25, arilo), 9,60 (s, 1, -CHO). O aldeído de formula (II) impuro obtido foi utilizado sem purificação adicio nal no passo seguinte, numa reacçao de condensação de Wittig.

_ _ jV -23-f / l

A uma solução do aldeído anterior de formula (II) 3,7 g; 5,4 mmoles) em 30 ml de dimetoxietano adicionou-se (tri fenil-fosforanilideno)-acetato de metilo (2,7 g; 8,1 mmoles) e agitou-se a mistura sob atmosfera de azoto ã temperatura ambien te durante 3 dias. Diluiu-se a mistura reaccional com acetato de etilo (50 ml) e filtrou-se. Lavou-se o filtrado com uma solu ção de ácido clorídrico 0,1 N (50 ml), com uma solução saturada de hidrogenocarbonato de sódio (2 x 50 ml) e com uma solução concentrada de cloreto de sódio (50 ml). Após a secagem sobre sulfato de magnésio, evaporou-se a fase orgânica até se obter um resíduo xaroposo e purificou-se por cromatografia rápida (gel de silica; acetato de etilo/hexano a Is3) para se obter o éster (tf -insaturado de fórmula (III) sob a forma de um óleo incolor (3,51 g; 87%); IV (puro) 1712 cm"1 (C=0) . EMN-1!! (CDC13)^3,3 -- 4,9 (m, 18H), 5,1 (s, 2H, -C00eH2Ph), 5,90 (d, 1H, J=16Hz, =ÇH-C02CH3), 7,00 (dd, 1H, -ÇH=CH-C02CH3), 7,2 (m, 25H, arilo). EM (CI-CH4) 742 (MH+). EXEMPLO 2 i A uma solução do composto de fórmula (III) (1,85 g; 2,5 mmoles) em cloreto de metileno (3 ml) adicionou-se 30 ml de uma solução de etanol contendo 1 g de níquel de Raney. Hidroge-nou-se a mistura num aparelho de Parr durante 5 horas â pressão de 1,7 atmosferas de hidrogénio. Filtrou-se a mistura reaccional através de celite e evaporou-se o filtrado até à secura para se obter um resíduo oleoso, que foi novamente dissolvido em acetato de etilo (30 ml) e depois lavado com uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (2 x 40 ml) e com uma

solução salina (40 ml). Secou-se a fase orgânica sobre sulfato de magnésio e evaporou-se para se obter um óleo que depois se dissolveu numa solução de etanol (20 ml) contendo 10 gotas de ácido fórmico a 97%. Aqueceu-se a solução alcoólica sob refluxo durante 6 horas e depois diluiu-se com tolueno (40 ml). Con centrou-se a mistura para se obter um resíduo xaroposo. Dissol veu-se esse resíduo em acetato de etilo (40 ml) e lavou-se a solução orgânica com uma outra solução aquosa saturada de hidro genocarbonato de sódio (50 ml) e com uma solução concentrada de cloreto de sódio (50 ml) e depois secou-se sobre sulfato de magnésio. A evaporação dos dissolventes da fase orgânica proporcionaram a lactama de fórmula (V) sob a forma de um óleo (1,40 g; 97%); IV (nítido) 1686 cm"1 (C0-N<) . ΕΜΝ^Η (CDC13) S 1,9 - 2,6 (m, 4H), 3,4 - 4,0 (m, 6H), 4,3 - 4,7 (m, 9H), 7,1 -7,4 (m, 20H, arilo). EM (CI-CH4) 578 (MH+), 456 (MH+-PhCH2--o-ch3). EXEMPLO 3

Gota a gota, adicionou-se uma solução do composto (V) (1,4 g; 2,4 mmoles) em tetra-hidrofurano (20 ml) a uma massa agitada de hidreto de alumínio (7 mmoles) em tetra-hidrofurano (30 ml) â temperatura de 0°C. Após a adição agitou-se a mistura à temperatura ambiente durante 1 hora. Adicionou-se â mistura reaccional, sucessivamente, agua destilada (5 ml) e uma solu ção de hidróxido de sódio 2N (20 ml). Após a mistura separaram--se as fases e extraiu-se a fase aquosa duas vezes com acetato de etilo (50 ml). Lavou-se a fase orgânica com uma solução aquo sa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (100 ml) e com uma

solução concentrada de cloreto de sõdio (100 ml) e finalmente secou-se sobre sulfato de magnésio. A evaporação dos dissolven tes dos extractos orgânicos deu um composto de formula (VI) sob a forma de um resíduo oleoso (1,30 g; 95%); IV (puro), sem absorvencia a 1650-1700 cm RMN-^H {CDC1^)S 1,6-2,2 (m, 4H) , 3,1-4,2 (m, 9H), 4,4-4,8 (m, 8H) , 7,2-7,4 (m, 20H, arilo). EM (CI-CH4) 564 (MH+), 456 (MH+-PhCH2OH), 442 (MH+-PhCH2OCH3). ' EXEMPLO 4 £ 5R- (5c(t 6/$, Ιοί, 8/4,8aj() Jocta-hidro-6,7 ,8-tri-hidroxi-5-hidroxi--meti1-indoli zina A uma solução do composto de fórmula VI (1,30 g; 2,3 mmoles) em ácido acético glacial (10 ml) adicionou-se Pd/C a 10% (250 mg) e hidrogenou-se a mistura num aparelho de Parr ã pressão de 2,7 atmosferas e ã temperatura de 50°C durante 18 horas. Filtrou-se a mistura através de celite e diluiu-se com 30 ml de xileno. A evaporação dos dissolventes do filtrado deu um resíduo vitreo, o qual foi novamente dissolvido em metanol (5 ml), e depois adicionou-se-lhe éter até a solução ficar li-geiramente turva. Após refrigeração ã temperatura de 4°C obser vou-se a precipitação do composto 5R-(5· ,6^,7^,8(5,83^) ^octa--hidro-6,7,8-tri-hidroxi-5-hidroximetil-indolizina de fórmula (VII) a partir da mistura, no estado sólido e de cor branca, o qual foi posteriormente recolhido (0,35 g? 75%), p.f. 218o--222°C (com decomposição). IV 3600-3200 cm”3-(OH). RMN-^H(D20) S 1,6-2,0 (m, 4H), 2,35-2,85 (m, 2H), 3,2-3,35 (m, 2H), 3,40 (t, 1H), 3,60 (t, 1H), 3,8-3,9 (m, 3H). MS (CI-CH4) 204 (MH+),

186 (ΜΗ+-Η20), 172 (MH+-CH3OH). Este composto possui a fórmula estrutural seguinte:

EXEMPLO 5

Repetindo o procedimento descrito no segundo parãgra fo do Exemplo 1 utilizando 3-(trifenil-fosforanilideno)-propio nato de metilo em vez de (trifenil-fosforanilideno)-acetato de metilO/ obtem-se o correspondente éster β ,ίΓ-butenoato. Depois faz-se reagir ainda este produto de acordo com os procedimentos descritos nos Exemplos 2, 3 e 4 para se obter 7,8,9-tri-hidroxi -6-hidroxi-metil-quinolizidina, composto este que possui a fórmula seguinte:

EXEMPLO 6 A uma suspensão de 2,6-(carboxiimino)-2,6-didesoxi- -3,4,5,7-tetraquis-O-(fenil-metil)-D-glicero-D-ido-heptitol, éster 2,1-instramol de formula (VIII) (9,00 g; 15,5 mmoles) em etanol (40 ml), adicionou-se uma solução de NaOH a 50% (6,3 ml) e agua (6 ml). Depois aqueceu-se a suspensão sob refluxo durante 16 horas. Após arrefecimento ate â temperatura ambiente remo veu-se o dissolvente sob pressão reduzida. Adicionou-se água (10 ml) ao resíduo e extraiu-se a mistura com eter (2 x 70 ml). Secou-se a solução orgânica combinada sobre sulfato de magnésio e evaporou-se o dissolvente sob pressão reduzida. Depois de ter ficado em repouso sob vazio, o composto 2,6-didesoxi-2,6-imino--1,3,4,5-tetraquis-O-(fenilmetil)-P-glicero -L-gulo-heptito1 de fórmula (IX) (8,2 g; 96,1%) cristalizou sob a forma de um sólido branco. Pf 76°-78°C; EM (CI-CH4) 554 (MH+), 446 (MH+-PhCH2OH) IV (KBr) sem absorvência a 1720-1770 cm RMN-^H (CDCl^)& 2,8 (dt, 1H), 3,3-3,4 (m, 1H), 3,4-3,6 (m, 2H), 3,6-3,8 (m, 4H), 3,8-3,9 (dd, 1H), 4,4-4,5 (m, 3H), 4,7 (s, 2H), 4,8-4,9 (m, 3H), 7,2-7,4 (m, 20H). • EXEMPLO 7 A uma solução do álcool de fórmula (IX) (5,80 g? 10,5 mmoles) e de trietilamina (7,3 ml; 52,4 mmoles) em cloreto de metileno (25 ml) â temperatura de 0°C, adicionou-se, gota a gota, cloreto de benzoílo (3,9 ml; 33,5 mmoles) sob atmosfera de azoto seco. Aqueceu-se a mistura reaccional até à temperatura ambiente e agitou-se durante 16 horas. Adicionou-se água destilada (5 ml) e uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (50 ml) e misturou-se muito bem. Separaram-se as fases e extraiu-se a fase aquosa com cloreto de metileno (50 ml). Se-cou-se sobre sulfato de sódio a solução orgânica combinada e eva

<L porou-se o dissolvente. Purificou-se o resíduo impuro resultan- te por cromatografia rápida (gel de silica; acetato de etilo/he xano a 1:4) para se obter benzoato de £ 2P.- (2^,3u,4^,5^,6^) -l-benzoil-3,4,5-tris(fenilmetoxi)-6-£ (fenilmetoxi)-metil ]-2--piperidina-metanol (éster) de formula (X) (7,57g; 94,8%) com o aspecto de um óleo amarelo claro. EM (BAR em MNBA) , 762.3 (MH+) , 654.2 (MH+-PhCH2OH) ; IV (puro) 1720 cm-1 (0=00) , 1647 (Q=C-N) ; ΡΜΝ^Η (CDC13) 6 3,7-4,9 (m, 17H) , 7,1-7,4 (m, 27H) , 7,5 (t, 1H),-7,95 (d, 2H). • EXEMPLO 8

Gota a gota, adicionou-se uma solução do composto de fórmula (X) (7,50g; 9,84 mmoles) em tetra-hidrofurano (10 ml) a uma suspensão de A1H3 (41,3 mmoles) em tetra-hidrofurano (50 ml) â temperatura de 0°C. Aqueceu-se a mistura reaccional sob refluxo durante 18 horas. Após o arrefecimento até à temperatura de 0°C adicionou-se uma mistura de água e tetra-hidrofurano (10 ml; 2:1), seguido de uma solução de NaOH a 50% (80 ml). Extraiu-se a mistura resultante com éter (3 x 50 ml) e depois secou-se sobre sulfato de magnésio a solução orgânica combinada, filtrou-se e evaporou-se para dar um óleo. Purificou-se esse óleo por cromato grafia rápida (gel de silica; acetato de etilo/hexano 1:4) para se obter o composto £ 2R-(2^, 3^,4^5,5/,6^) J-3,4,5-tris (fenilmeto xi)-6~£ (fenilmetoxi)-metil J-l-(fenilmetil)-2-piperidina-meta-nol de fórmula (XI) (5,91g; 91,8%) sob a forma de um óleo incolor e límpido. IV (puro) sem absorvincia a 1650-1720 cm”1; EM (CI-CH4) 644 (MH*) , 536 (MH+-PhCH20H) ; EMN^H (CDC13) 6 3,1 (m, 2H), 3,5-4,0 (m, 7H), 4,2 (d, 1H), 4,4 (d, 2H), 4,6 (m, 2H), 4,7

V*,, (s, 2H) , 4,9 (m, 3H), 7,1-7,5 (m, 25H) . EXEMPL O' 9 A uma solução de cloreto de oxalilo (1,9 ml; 21,4 mmo-les) em cloreto de metileno (30 ml), arrefecida até à temperatura de -78°C, adicionou-se, gota a gota, uma solução de dimetil-sulfõxido (3,1 ml; 42,9 mmoles) em cloreto de metileno (6 ml). Agitou-se a mistura resultante durante 5 minutos, e depois adicio nou-se durante 15 minutos uma solução do composto de formula (XX) (4,6g; 7,14 mmoles) em cloreto de metileno (15 ml). Depois de se ter agitado a mistura durante mais 10 minutos adicionou-se uma solução de trietilamina (10,9 ml; 78,6 mmoles) em cloreto de metileno (5 ml) e aqueceu-se a mistura reaccional até ã temperatura ambiente. Adicionou-se água (15 ml) e separaram-se as fases. Extraiu-se a solução aquosa com cloreto de metileno (30 ml) e se cou-se sobre sulfato de sódio a solução orgânica combinada e eva porou-se o dissolvente sob pressão reduzida. Purificou-se o óleo resultante por cromatografia rápida (gel de silica; acetato de etilo/hexano 1:4) para se obter o ^28-(2^,3^,4^,5^,(^3) .7-3,4,5--tris(fenilmetoxi)-6-/* (fenilmetoxi)-metil J7-!-(fenilmetil) -2-pi peridina-carboxaldeído de fórmula (XII) (4,44g; 96,9%) com o aspecto de um óleo amarelo claro. IV (puro) 1702 cm ^ (C=0); EM (CI-CH4) 642 (MH+) , 612 (MH+-H2C0) ; EMN^H (CDCl3) 6 3,2-4,2 (m, 7H), 4,4 (s, 2H), 4,5-5,0 (m, 8H), 7,1-7,4 (m, 25H), 9,9 (s, 1H). EXEMPLO 10 A uma solução do aldeído de fórmula (XII) (4,00g; 6,23 mmoles) em éter etílico (25 ml), arrefecida até â temperatura de

-78°C adicionou-se uma solução 2M de cloreto de alil-magnésio (7,8 ml; 15,6 mmoles). Manteve-se a mistura reaccional à tempe ratura de -10°C durante 16 horas. Depois aqueceu-se até â temperatura de 0°C, adicionou-se água (2 ml) e uma solução de ãci do clorídrico 3N (30 ml) . Apõs a separação das. fases extraiu--se a fase aquosa com cloreto de metileno (2 x 30 ml). Secou--se sobre sulfato de magnésio a solução orgânica combinada e evaporou-se o dissolvente sob pressão reduzida. Purificou-se o õleo resultante por cromatografia rápida (gel de silica; aceta | to de etilo/hexano a 1:4) para se obter o composto 3,4,5-tris-(fenilmetoxi) -6-/" (fenilmetoxi) -meti 1^/-1- (fenilmetil) -tf(-(2--propenil)-2-piperidina-metanol de fórmula (XIII) (3,0g; 70,4%) sob a forma de um óleo amarelo claro. Neste composto, a estereo química da substituição do anel da piperidina é idêntica â do composto inicial. IV (puro) sem absorvência a 1650-1710 cm EM (BAR-MNBA) 684 (MH+), 612(MH+-C4H7OH); RMN-1H (CDC13)6 2,0 (m, 1H), 2,6 (m, 1H), 2,8 (dd, 1H), 3,2 (m, 1H) 3,5-4,0 (m, 6H), 4,3 (d, 1H), 4,4 (s, 2H), 4,5-5,0 (m, 8H), 5,6-5,8 (m, 1H), 7,1--7,4 (m, 25H). ) EXEMPLO 11 A uma solução do composto de fórmula (XIII) (3,00g; 4,40 mmoles) e de trietilamina (2,4 ml; 17,6 mmoles) em cloreto de metileno (25 ml), arrefecida até à temperatura de 0°C, adicionou-se cloreto de benzoxlo (1,6 ml; 13,2 mmoles). Manteve-se a mistura reaccional a temperatura ambiente durante 16 horas e depois adicionou-se-lhe água (5 ml) e uma solução aquosa satura da de hidrogenocarbonato de sódio (40 ml). Separaram-se as fases e extraiu-se a fase aquosa com cloreto de metileno (30 ml). Secou-se sobre sulfato de sódio a solução orgânica combinada e eva porou-se o dissolvente sob pressão reduzida. Purificou-se o óleo impuro por cromatografia rápida (gel de silica; acetato de eti-lo/hexano a 1:4) para se obter benzoato de 3,4,5-tris(fenilmeto-xi) -6-^" (fenilmetoxi) -metil (fenilmetil) -0Í- (2-propenil) -2-pi peridina-metanol (éster) de fórmula (XIV) (l,92g; 56%) com o aspecto de um óleo incolor e límpido e depois recuperou-se o composto de fórmula (XIII) (0,60g; 0,88 mmole). IV (nítido) 1719 cm-1 (C=0) ; EM (BAE-MNBA) 788 (MH+) , 680 (MH+-PhCH2OH) ; (CDC13) 6 2,4 (m, 1H), 2,9 (dt, 1H), 3,5-4,0 (m, 8H), 4,l(d, 1H)r 4.4 (s, 2H), 4,5-4,9 (m, 9H), 5,4-5,6 (m, 1H), 7,1-7,4 (m, 27H), 7.5 (m, 1H), 8,1 (m, 2H). EXEMPLO 12 A uma solução do composto de fórmula (XIV) (l,80g; 2,29 mrnoles) em tetra-hidrofurano (25 ml), arrefecido até â tem peratura de 0°C, adicionou-se uma solução 1,0M de complexo bora no/sulfureto de dimetilo em tetra-hidrofurano (1,5 ml). Aqueceu -se a mistura reaccional até ã temperatura ambiente e assim se manteve durante 20 horas. Após o arrefecimento até â temperatura de 0°C adicionou-se-lhe uma solução 3N de NaOH (15 ml) contendo 30% de peróxido de hidrogénio (0,5 ml) e depois aqueceu-se a suspensão sob refluxo durante 1 hora. Após o arrefecimento até â temperatura ambiente misturou-se a suspensão com água (10 ml) e extraiu-se com éter (2 x 40 ml). Lavou-se com uma solução satu rada de cloreto de sódio a solução orgânica combinada, secou-se sobre sulfato de magnésio e filtrou-se. Evaporou-se o dissolvente sob pressão reduzida e purificou-se um óleo residual impuro por cromatografia rápida (gel de silica? acetato de etilo/hexa-no a 1:2) para se obter q álcool primário 1-benzoato de 1-/*3# 4,5,-tris(fenilmetoxi)-6-/" (fenilmetoxi)-metil_/-l-(fenilmetil)--2-piperidinil ,/-1,4-butanodiol de fórmula (XV), sob a forma de um óleo incolor e límpido (l,05g; 56,9%) e o 1,4-diol'1-/" 3,4,5--tris(fenilmetoxi)-6-/* (fenilmetoxi)-metil ./-1-(fenilmetil)-2--piperidinil ./-1,4-butanodiol de fórmula (XVIII) sob a forma de um óleo amarelo (0,41g? 24,9%). Composto de fórmula(XV): IV (pu ro) 1720 cm”1 (C=0); EM (BAR-MNBA) 806 (MH+) , 788 (MH+ H20) ; ΕΜΝ_1Η (CDC13)5 1,5-1,9 (m, 2H), 2,8 (t, 1H), 3,4 (t, 2H) , 3,5 (m, 1H), 3,7-4,2 (m, 7H), 4,3-4,4 (m, 1H), 4,4 (s, 2H), 4,5-4,9 (m, 7H), 5,4-5,5 (m, 1H), 7,0-7,4 (m, 27H), 7,5 (m, 1H), 8,1 (m, 2H) . EXEMPLO' 13 A uma solução do composto de fórmula (XV) (0,60g; 0,74 mmoles) e de ciclo-hexeno (5 ml) em metanol (30 ml), adicionou--se catalisador de Pearlman (0,2g) sob atmosfera de azoto. Agitou-se a suspensão â temperatura ambiente durante 18 horas e depois filtrou-se o catalisador através de Celite e lavou-se com metanol (20 ml). Evaporou-se a camada orgânica combinada sob pres são reduzida para se obter um óleo impuro, o qual foi purificado por cromatografia rápida (gel de silica; acetato de etilo/hexano 1:1) para se obter o álcool N-desbenzilado impuro sob a forma de um óleo incolor e límpido (0,34g) e depois recuperou-se o composto de fórmula (XV) (0,10g; 16% de recuperação). Dissolveu-se o ãl cool N-desbenzilado (0,34 g) em piridina (20 ml) e arrefeceu-se ate â temperatura de -10°C e depois adicionou-se cloreto de meta-

no-sulfonilo (0,04 ml) e continuou-se a reacção durante 96 horas. Evaporou-se o dissolvente sob pressão reduzida e adicionou -se ao resíduo uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbona-to de sadio. Após extracção com éter (2 x 60 ml) secou-se sobre sulfato de magnésio a solução orgânica combinada e evaporou-se o dissolvente sob pressão reduzida. Purificou-se o produto impu ro por cromatografia rápida (gel de sílica? acetato de etilo/he xano 1:1) para se obter benzoato de octa-hidro-7,8,9-tris(fenil metoxi)-6-/” (fenilmetoxi)-metil J7-2H-quinolizin-l-ol (éster) de fórmula (XVI) (0,16g? 50%) sob a forma de um óleo incolor. IV (película, a partir de CDC13) 1718 cm"1 (C=0); EM (CI-CH4) 698 (MH+) , 576 (MH+-PhC02H) ; 1001-½ (CDCl-j) 6 1,2 (m, 1H) , 1,6-1,9 (m, 2H), 2,2 (d, 1H), 2,8 (t, 1H), 3,3-3,4 (m, 2H), 3,5-3,7: (m, 3H), 3,8 (m, 1H), 4,1 (t, 1H), 4,3 (d, 1H), 4,4-4,7 (m, 7H), 4,9 (d, 1H), 5,5 (s, 1H), 7,0-7,4 (m, 22H), 7,5 (m, 1H), 8,1 (m, 2H) . EXEMPLO' 14

Preparou-se uma solução do composto de fórmula (XVI) (0,16g; 0,24 mmole) em ácido acético glacial (15 ml) e hidroge-nou-se â pressão de 3,7 atmosferas na presença de negro de pala dio (0,02g) durante 68 horas. Filtrou-se a mistura através de Celite e lavou-se a almofada de Celite com ácido acético glacial (10 ml). Evaporou-se sob pressão reduzida a solução ácida combinada. Dissolveu-se novamente o resíduo resultante em xileno e evaporou-se sob pressão reduzida para se obter um resíduo averme lhado. Após a dissolução em metanol e tratamento com Norit (0,10 g) deixou-se o resíduo cristalizar para se obter 9-benzoato de

C IS- (1// 2β,3β(, 4β, 9tf, 9a.fi /-octa-hidro^- (hidroximetil) -2H-qui nolizina-l,2,3,9-tetrol de fórmula (XVII) (0,07g; 85%) sob a forma de um sólido higroscõpico e de cor branca. IV (película) 1714 cm"1 (C=0); EM (CI-CH4) 338 (MH+), 216 (MH+-PhC02H)? KMN--½ (CD3OD) $ 1/3 (m, 1H) , 1,7-2/0 (m, 2H) , 2,2 (dt, 1H) , 2/8 (κι, 1H)/ 3/3-4,0 (m, 8H) , 5,5 (m, 1H) , 7,8 (m, 2H) , 7,9 (m, 1H) , 8,2 (m, 2H). EXEMPLO 15 A uma solução do composto de fórmula (XVTII), anterior mente obtido na síntese do composto de fórmula (XV) (0,4g; 0,57 mmole) e de ciclo-hexeno (10 ml) em metanol (20 ml) adicionou--se catalisador de Pearlman (0,05g) e agitou-se a suspensão sob atmosfera de azoto durante 20 horas. Filtrou-se o catalisador re correndo â Celite e depois lavou-se com metanol (50 ml). Evaporou-se a solução metanólica sob pressão reduzida e purificou-se o óleo resultante por cromatografia rápida (gel de sílica; aceta to de etilo/hexano a 1:1) para se obter o l-/-3,4,5-tris(fenilme toxi)-6-£ (fenilmetoxi)-metil_/-2-piperidinil J-l,4-butanodiol de fórmula (XIX) (0,26g; 75%) sob a forma de um óleo amarelo cia ro. IV (película, a partir de CDC13) 3412 cm 1 (-OH); EM (CI-CH4) 612 (MH+), 522 (MH+-PhCH2· + H*)? EMN-1H (CDC13)£ 1,1-1,5 (m, 4H), 2,8-3,1 (m, 2H), 3,3-3,9 (m, 6H), 4,0-4,3 (m, 2H), 4,3-4,9 (m, 8H), 7,1-7,4 (m, 20H). EXEMPLO 16 A uma solução do composto de fórmula (XIX) (0,22g; 0,36 mmole) em piridina (15 ml) arrefecida até a temperatura de -10°C, / ι / adicionou-se cloreto de metano-sulfonilo (0,03 ml; 0,39 mmole)« Decorridos 6 dias evaporou-se a mistura sob pressão reduzida. Tratou-se o õleo resultante com água (5 ml) e com uma solução aquosa saturada de hidrogenocarbonato de sódio (20 ml) e depois extraiu-se com éter (2 x 30 ml) . Secou-se sobre sulfato de magnésio a solução orgânica combinada e evaporou-se o dissolvente sob pressão reduzida. A trituração do õleo resultante com éter deu o £ lS-(l*í,6^,7íf,8y$,9/,9a/l) _7-octa-hidro-7,8,9-tris(fenil-metoxi)-6-/* (fenilmetoxi)-metil_/-2H-quinolizin-l-ol de fórmula (XX) sob a forma de cristais brancos (0,13 g; 60,8%); p.f. 103°-5°C; IV (KBr) sem absorvenciaal650-1770 cm EM (CI-CH^) 594 (MH+), 486 (MH+-PhCH2OH); (CDC13)6 1,2 (m, 1H), 1,4- -1,6 (m, 3H), 1,8-2,0 (m, 2H), 2,6-2,8 (t, 1H) , 3,0-3,1 (d, 1H), 3,2-3,3 (m, 1H), 3,5-3,9 (m, 4H), 4,2-5,0 (m, 9H), 7,1-7,4 (m, 20H) . • EXEMPLO 17

Preparou-se uma solução do composto de fórmula (XX) (0,12 g; 0,20 mmole) em ácido acético glacial (10 ml) e hidroge nou-se â pressão de 3,3 atmosferas (H2) utilizando negro de paládio (0,04 g) como catalisador. Decorridas 72 horas filtrou-se o catalisador sobre uma almofada de Celite e lavou-se com ácido acético glacial (10 ml). Evaporou-se a solução ácida combinada sob pressão reduzida para dar um õleo avermelhado. Dissolveu-se esse óleo em xileno (30 ml) e evaporou-se novamente sob pressão reduzida. Dissolveu-se o resíduo resultante em metanol (30 ml) e tratou-se com carvão activado (0,08 g) durante 10 minutos. Filtrou-se a mistura e lavou-se o filtrado com metanol (15 ml). ( \

Condensou-se a solução metanôlica sob pressão reduzida e adicio nou-se-lhe uma solução de acido clorídrico seco em metanol (2 ml). Apôs a adição de eter obteve-se o cloridrato de /* 2β,30(,4β,90(,9afl) j7~octa-hidro-4-(hidroximetil) -2H-quinolizina--1,2,3,9-tetrol de fõrmula (XXI), sob a forma de um solido cris talino e de cor branca (0,007 g; 14,9%); p.f. 152-154°^ (com de composição); IV (KBr) 3100-3600 cm”1 (br); EM (CI-CH4) 234 (MH+), 216 (MH+-H20), 202 (MH+-CH3OH) ; EMN-1!! (CD3OD) 6 1,6-2,2 (m, 4H) , 3,1 (m, 1H), 3,4 (dd, 1H), 3,5 (dd, 1H), 3,7-3,8 (m, 2H), 3,9 (m, 1H), 4,0-4,2 (m, 2H), 4,25 (t, 1H), 4,5 (m, 1H).

Claims

Processo para a preparação de compostos de fórmula

qual n representa 1 ou e; Rl e R2 representam, cada um, independentemente, um ít

átomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula geral OA; A, A1, A2, A3 e A4 representam, cada um, indepen-dentemente, um átomo de hidrogénio, um grupo alca-nollo C^-C^g ou um grupo de fórmula geral

e Y, Y' e Y" representam, cada um, independentemen te, um' átomo de hidrogénio ou de halogéneo ou um grupo alquilo C^-C4 ou alcoxi C^-C4, ou dos seus sais aceitáveis sob o ponto de vista farmacêutico, caracterizado pelo facto: a) de se reduzir uma lactama de fórmula geral 0

na qual representa um grupo fenilmetilo; Rg representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de fórmula geral 0A4, e m representa o número 1 ou 2,

com um agente redutor â base de hidreto seguindo-se uma hidroge, nação para remover os grupos protectores fenilmetilo para se ob ter os compostos em que A, A^, A2, A^ e A^ representam, cada um, um átomo de hidrogénio e opcionalmente, em seguida, de se tratar com um cloreto de ácido ou com um anidrido adequados para se obter o éster correspondente, ou BrtO

08n OH b) de se fazer reagir um álcool de fórmula geral SnO na qual Bn representa um grupo fenilmetilo e p representa o número 1 ou 2, com cloreto de meta-no-sulfonilo para ciclizar o segundo anel e de se submeter a uma hidrogenação para remover os grupos protectores fenilmetilo para se obter os compostos em que A, A^, A2, A^ e A^ representam, cada um, um átomo de hidrogénio e opcionalmente, em seguida, de se tratar com um cloreto de ácido ou com um anidrido adequados para se obter o éster correspondente.
2.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral I

na qual n representa os números 1 ou 2? e e R2 representam, cada um, independentemente, átomo de hidrogénio ou um grupo OH, caracterizado pelo facto de se reduzir uma lactama de fórmula um se

) na qual representa um grupo fenilmetilo;· representa um átomo de hidrogénio ou um grupo de formula geral OA^, e m representa os números 1 ou 2, com um agente redutor à base de hidreto, e, em seguida, de se hidrogenar para remover os grupos protectores fenilmetilo.
3.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de compostos de fórmula geral

na qual n representa os números 1 ou 2, caracterizado pelo facto de se fazer reagir um álcool de- fórmula geral

na qual Bn representa um grupo fenilmetilo e p representa 1 ou 2, com cloreto de metano-sulfonilo para ciclizar o segundo anel e, em seguida, de se hidrogenar para remover os grupos protectores fenilmetilo.
4.- Processo de acordo com a reivindicação 1, para a preparação de [5R-{50£, 6p, 70t, 8^, 8a0£ )]-octahidro-6,7,8--tri-hidroxi-5-hidroxi-metil-indolizina, caracterizado pelo fac /-« to de se reduzir a lactama de fórmula geral o II

> com hidreto de alumínio e, em seguida, de se hidrogenar sobre um catalisador de negro de paládio. de acordo com a reivindicação 1, para a 2ft, 34& , 9 Qt f 9a ft) ] -octahidro-4-
5.- Processo preparação de [IS- (1¾, - (hidroxi-metil) -2H-quinolizina-l ,2,3,9-tetrol, caracterizado pe lo facto de se fazer reagir l-[3,4,5-tris-(fenilmetoxi)-6-[ (fe-nilmetoxi) -metil] -2-piperidinil] -1,4-butanodiol com cloreto de metano-sulfonilo e, em seguida, de se hidrogenar sobre um catali sador de negro de paládio.
6.- Método para tratar uma infecção retroviral, diabe tes ou hiperglicêmia num paciente, caracterizado pelo facto de se administrar ao paciente doses unitárias compreendidas entre 100 mg elg de um composto de fórmula geral -43-

na qual n representa 1 ou 2; ^ e R2 representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou um grupo de formula geral QA4 A, A^, A2, A^ e A^ representam, cada um, independen temente, um átomo de hidrogénio, um grupo alcanoílo C1-C18 ou um grupo de fórmula geral )

e Y, Y', Y" representam, cada um, independentemente, um átomo de hidrogénio ou de halogéneo ou um grupo alquilo C^-C^ ou alcoxi C^-C4; ou um seu sal farmaceuticamente aceitável.
7.- Método de acordo com a reivindicação 6, caracte- rizado pelo facto de o composto utilizado ser [5R-(5Q6, 6p>, 7o£, 8 ^ , 8a tC) ] -o.cta-hidro-6 , 7,8-tri-hidroxi-5-hidroxi-metil-indolizi-dina.
8.- Método de acordo com a reivindicação 6, caracteri zado pelo facto de o composto utilizado ser 9-benzoato de [1S-— (l^C, 2 , 3¾ , 4^ , 9 tt, 9a ) I-octa-hidro-4-(hidroxi-metil) - -2H-quinolizina-l,2,3,9-tetrol.
9.- Método de acordo com a reivindicação 6, caracteri zado pelo facto de o composto utilizado ser cloridrato de [1S-- (1¾., 2 p , 3 06, 4 ^, 9 OC, 9a ^ ) ] -octa-hidro-4- (hidroxi-metil) --2H-quinolizina-l,2,3,9-tetrol. Lisboa, 28 de Março de 1991