PT97082B

PT97082B - Processo para a preparacao de uma composicao farmaceutica contendo il-4,util para aumentar a resposta imunitaria a agressoes de antigenios infecciosos

Info

Publication number: PT97082B
Application number: PT97082A
Authority: PT
Inventors: Jerome Schwartz; Claude H Nash
Original assignee: Schering Corp
Priority date: 1990-03-21
Filing date: 1991-03-20
Publication date: 1998-07-31
Also published as: PT97082A; FI924215A0; ES2082201T3; DK0521916T3; IL97600A0; IE72204B1; JPH05505799A; AU656889B2; EP0521916A1; OA09672A; DE69116552T2; ATE133074T1; MY108672A; FI924215L; ZA912037B; HUT63062A; AU7469091A; FI924215A7; IE910921A1; CA2078676A1

Description

presente invento diz respeito a composições farmacêuticas que contêm .T.L-4 como ingrediente activo destinada a induzir uma reacção imunológica eficaz a agentes infecciosos crónicos endémicos em mamíferos expostos a estes agentes. 0 presente invento diz igualmente respeito à utilização de IL-4 na preparação de medicamentos destinados a induzir uma reacção imunológica eficaz a agentes infecciosos crónicos endémicos bem como a métodos para induzir uma reacção imunológica eficaz a agentes infecciosos crónicos endémicos em mamíferos expostos a estes agentes mediante a administração de uma quantidade eficaz de interleucina-4 a esses mamíferos.

Introdução

A interleucina-4 Edoravante designada por IL~4” mas também conhecida pela designação de Factor 1 estimulador das Células B CBSF-l, B Cell Stiroulatory Factor 1) foi descrita originalmente por ΙΊ. Howard e outros em J, Exp. Med., vol. Í55, pp. 314 a 923, 1982, como sendo um factor de crescimento derivado de uma célula T, distinto de IL-2, que permitia a cultura histológica a longo prazo de linfócitos B de ratos normais e que interagia coro linfócitos B activados a fim de manter a sua proliferação durante períodos que podem atingir 4 meses. Apesar de já terem sido usados explantes de linfócitos 8 mistos como iniciadores de culturas, os linfócitos B com um fenótipo imaturo parecem ser especificament© realçados por IL-4 em cultura histológica. Leia-se, por exemplo, C. Perchei e outros, J. Immunol., vol. 142, pp. 1558 a 1568, 1989. β. Trenn e outros revelam ainda, em -J. Immunol. , vol. 140, pp. 1101 a 1106, 1388, que a IL-4 estroula o desenvolvimento das células T citotóxicas na

» »ι ζ-;

subpopulação Lyt-2+ de linfócitos T murinemem repouso. H. Spits e outros revelam, em J. Immunol., vol. 139, pp. 1142 a 1147, 1987, que a IL-4 pode actuar como factor de crescimento das células T em células humanas in vitro, distinto de IL-2.

gene da IL-4 murino foi clonado e expressado em células COS-7 Cleia-se o artigo de T. Otsuka e outros, Nuc. Acids Res., vol 15, pp. 333 e 334, 1987). 0 factor clonado apresentava as mesmas actividades em cultura histológica que o factor purificado a partir de sobrenadantes de cultura de células T. A clonagem e a expressão do gene de IL-4 humano foram descritas por N, Arai e outros em -J. Immunol·, vol 142, pp. 274 a 278, 1989 e por T. Yokota e outros em Proc. Natl, Acad. Sei., vol 83, pp 5844 a 5848, 1386, apresentando o factor produzido em células COS-7 actividades semelhantes às da molécula nativa estudada em cultura histológica. No decurso dos estudos sobre a IL-4 em sistemas celulares humanos e murinos puderam atribuir-se à moléculas outras propriedades in vitro; i.) A J.L-4 desempenha um papel importante na indução e regulação da síntese de IgE, um processo que ocorre quando as subpopulaçóes de linfócitos 8 são induzidas a proliferar Cleia-se o artigo de 8. Romagnani e outros em Clin. Immunol. Immunopathol,, vol. 50, pp. 513 a 523, 1989)1 ii) A IL-4 induz receptores Fc<S (CD23) de baixa afinidade em linfócitos 8 humanos em cultura histológica <leia-se o artigo de T. De France e outros em J. Exp. Ned., vol. 165, pp. 1459 a 14567, 1387)1 & iii) A IL-4 interage de modo extremamente preciso com outras linfoquinas, nomeadamente o interferon-gama Cleiam-se os artigos de R. L. Coffman e outros em Immunol, Res., vol 102, pp. 5 a 27, 1988 e de 8. Romagnan e outros, supra) e as células T <leiam-se os artigos de R. L. Coffman e outros, supra, de 8. Romagnani e outros, supra, e de N. D. Widmer e outros em Nature, vol. 326, pp. 795 a 798, 1387) dando origem a uma proliferação e alteração das células 8.

é ainda necessário demonstrar que as actividades in vi tro da IL-4 humana descritas se podem traduzir numa reacçâo imunolôgica maior e melhor, nomeadamente sob a forma de níveis de anticorpos mais elevados, a agentes infecciosos crónicos endémicos em mamíferos expostos a estes agentes.

Sumário do invento

Os presentes inventores descobriram, surpreendentemente, que pode ser induzida uma reacçâo imunolôgica eficaz a agentes infecciosos crónicos endémicos em mamíferos expostos ou reexpostos a estes agentes mediante a administração de uma quantidade eficaz de IL-4 a esses mamíferos, nomeadamente seres humanos, expostos aos referidos agentes.

Em conformidade, o presente invento diz respeito a uma composição farmacêutica, destinada a induzir uma reacçâo imunoló— gica eficaz a agentes infecciosos endémicos em mamíferos expostos a estes agentes, que contém IL-4 como ingrediente activo.

presente invento diz também respeito à utilização da IL-4 na preparação de um medicamento destinado a induzir uma reacçâo imunolôgica eficaz a agentes infecciosos crónicos endémicos em mamíferos expostos a estes agentes.

presente invento diz também respeito a um método para a indução de uma reacçâo imunolôgica eficaz a agentes infecciosos crónicos endémicos em mamíferos expostos a estes agentes, caracterizado por se administrar a esses mamíferos uma quantidade de IL-4 eficaz no que diz respeito a essa indução.

presente invento diz também respeito a um método para a íhducão de níveis de anticorpos eficazes em mamíferos expostos pela primeira vez ou reexpostos a agentes infecciosos crónicos endémicos, caracterizado por se administrar uma quantidade de

IL-4 eficaz no que diz respeito a essa indução, presente invento diz também respeito a um método para o melhoramento de uma reacção imunológica em mamíferos reexpostos a agentes infecciosos crónicos endémicos em que a reacção imunológica, na ausência de IL-4, não é suficientemente forte ou rápida para evitar a recorrência da doença, caracterizado por se administrar a esses mamíferos uma quantidade de IL-4 eficaz no que diz respeito a esse melhoramento.

presente invento diz também respeito a um método para o melhoramento de uma reacção imunológica em mamíferos expostos pela primeira vez a agentes infecciosos crónicos endémicos em que a reaccão imunológica, na ausência de IL-4, não é suficientemente forte ou rápida para evitar a ocorrência da doença, caracterizado por se administrar a esses mamíferos uma quantidade de IL-4 eficaz no que diz respeito a esse melhoramento.

Descrição das figuras

A Figura 1 ilustra o melhoramento da reacção imunológica obtido por administração de IL-4 num modelo símio (macaco verde africano) de uma doença virai humana Cvírus da varicela símia) de acordo com o presente invento.

A Figura 2 ilustra o aparecimento de anticorpos contra a doença virai humana no modelo símio após administração de IL-4 recombinante de acordo com o presente invento.

Descrição pormenorizada do invento objectivo do presente estudo consistia na tradução das múltiplas actividades da J. 1-4 humana observadas em cultura histológica e descritas na literatura da especialidade para um modelo mamífero, isto é, símio in vivo. Para avaliar a activida— de in vivo da IL-4 escolheu-se o modelo símio da infecção pelo vírus da varicela-zona humana. Neste modelo, infectaram-se macacos verdes africanos <Cercopithecus aerthiops) com uma dose quase letal de vírus da varicela símia (SW, simian varicella virus). Ds sobreviventes à infecção manifestaram uma sólida imunidade ã doença após nova infecção com SW, imunidade que resulta, segundo E. D. Roberts e outros, no artigo publicado em Am. J. Vet. Res, 45, pp. 523 a 530, 1934, da presença de anticorpos anti-SW circulantes, resultantes de 1infócitos B fixos e/ou circulantes. Este modelo mamífero in vivo ê tradi c ionalment-e utilizado pelos técnicos especializados como meio d© avaliação de potenciais agentes anti-vírus da varicela-zona. Pormenores sobre este modelo mamífero e exemplos da sua utilidade foram publicados por K. F. Soike e outros em Antimicrob. Ag. Chemother., vol. 29, PP. 20 a 25, 1985, e em Antivirai Res., vol.l, pp. 325 a 337, 1981. D. W. Horohov e outros descreveram em J. Immunol., vol. 141, pp. 4217-4273, 1988, como a alteração, induzida por IL-4, das células do sistema imunitário em cultura histológica provoca a replicação do vírus da gripe. Alguns aspectos da replicação do vírus da leucemia das células T humanas tipo 1 foram descritos por S. Miyatake e outros em Nuc. Acids Res., vol. 15, pp. 5541 a 5556, 1988. Era, portanto, apropriada a avaliação da IL-4 no modelo símio do SW no que dizia respeito aos seus efeitos sobre a produção de anticorpos e a proliferação de células imunitárias.

Os presentes inventores descobriram, surpreendentemente, que os macacos verdes africanos a quem era administrada uma quantidade eficaz de IL-4 recombinante tinham uma reacção imunológica ao SW, após nova infecção ou nova exposição, mais forte e rápida que os macacos a quem não era administrada IL-4 recombinante humana.

A frase indução de uma reacção imunológica eficaz a agentes infecciosos crónicos endémicos em mamíferos expostos a estes agentes abrangei < J.) a indução de um nível eficaz de anticorpos em mamíferos expostos pela primeira vez a estes agentes infecciosos endémicos crónicos,' C2> a indução de um nível eficaz de anticorpos em mamíferos expostos pela segunda vez a agentes infecciosos crónicos endémicos; <3) a intensificação de uma reacção imunológica em mamíferos expostos pela segunda vez a agentes infecciosos crónicos endémicos nos casos em que a reacção imunológica dos referidos mamíferos na ausência de IL-4 não ê suficientemente forte ou rápida para evitar a recorrência da doença; e <4) a intensificação de uma reacção imunológica em mamíferos expostos pela primeira vez a agentes infecciosos crónicos endémicos nos casos em que esta reacção imunológica, na ausência de IL-4, não ê suficientemente forte ou rápida para evitar a ocorrência da doença. Apesar da reacção imunológica dos referidos mamíferos, na ausência de IL-4, não ser suficientemente forte ou rápida para evitar o seu adoecimento, os presentes inventores descobriram um método para evitar o adoecimento dos referidos mamíferos que consiste na administração de uma quantidade eficaz, no que diz respeito aos objectivos a alcançar, de IL-4, de preferência IL-4 recombinante humana, a esses mamíferos.

A expressão agentes infecciosos crónicos endémicos significa aqueles agentes infecciosos que induzem uma reacção imunológica num mamífero e incluem agentes infecciosos virais, tais como o vírus da imunodeficiência humana <HIV, human immune deficiency virus?, isto é, o vírus da SIDA, agentes infecciosos bacterianos, tais como o estafilococos, agentes infecciosos fúngicos, tais como Candida sp, e agentes ínfecciosos protozoários, tais como Trichomonas sp..

Qualquer IL-4 adequada pode ser utilizada no presente invento. ADNs complementares (cDNA) para IL~4 foram recentemente cIonados e sequenciados por diversos laboratórios, tal como descrevem, por exemplo, Yokota e outros em Proc. Natl. Acad. Sei. U.S.A., vol. 83, pp. 5894 a 5898, 1985 (humano); Lee e outros, Proc. Natl. Acad. Sei, U.S.A., vol. 83, pp. 2081 a 2065, 1986 (murino); Noma e outros, Nature, vol. 319, pp. 640 a 646, 1986 (murino); e Genzyme Corporation, Boson, Massachusetts, E.U.A. (humano e murino). A IL~4 não recombinante foi ainda obtida» apôs purificação, a partir de diversos sobrenadantes de culturas, tal como é descrito, por exemplo, por Srabstein e outros em J. Exp. Med,, vol. 163, pp. 1405 a 1413, 1985 (murino); Ohara e outros, J. Immunol., vol. 135, pp. 2518 a 2523, (rato B8P-1). As memórias descritivas de todos estes artigos encontram-se incorporadas, a título de referência, na presente memória descritiva pelos seus ensinamentos acerca do AON e das sequências de aminoácidos e dos métodos para a obtenção de compostos de partida adequados para a IL-4 úteis no processo de acordo com o presente invento.

A IL-4 utilizada no presente invento é preferencialmente a IL-4 humana e, com maior preferência, a versão humana com a sequência descrita por Yokota e outros em Proc. Natl, Acad, Sei. U. S. A., vol. 83, pp. 5894 a 5898, 1986, e no pedido de patente PCT publicado em 21 de Maio de 1987 sob o n.2 87/02990, que é expressa em e isolada a partir de E. coli (pedido de patente nos

E.U.A. depositado em 29 de Julho de 1987 sob o nfí 076 666 e pedido de patente nos E.U.A. depositado em 12 de Julho de 1988 sob o n2 194 799). A produção de IL-4 a partir de células CHO é

- 3 descrita no pedido de patente nos E.U.A. (domínio comum) depositado em 28 de Julho de 1983 sob o n£ de série 386 937. A produção de IL-4 a partir de E. coli é descrita no pedido de patente nos E.U.A. (domínio comum) depositado em 31 de Outubro de 1989 sob o n2 de série 429 588. As memórias descritivas do artigo supracitado, do pedido de patente PCT e dos pedidos de patente nos E.U.A. encontram-se incorporados, a título de referência, na presente memória descritiva.

De acordo com o presente invento administra-se a mamíferos uma quantidade eficaz de uma IL-4 a fim de evitar a ocorrência ou recorrência de uma doença causada por exposição a agentes infecciosos crónicos endémicos, aumentar os níveis de anticorpos e/ou a reacção imunolôgica eficaz após uma primeira exposição e/ou uma segunda exposição a agentes infecciosos crónicos endémicos. Esta quantidade eficaz é definida como qualquer quantidade de IL-4 que aumente significativamente os níveis de anticorpos, sendo considerado significativo um acréscimo de 25%, de preferência 50%, na contagem. De preferência, administra-se uma quantidade de IL-4, preferencialmente IL-4 humana (hJ.L-4) recomhinantemente obtida a partir de células de £. coli ou CHO, compreendida entre 0,25 e 15 qg por kg de peso corporal por dia. Com maior preferência, administra-se aos mamíferos uma quantidade de hIL-4 compreendida entre cerca de 5 e cerca de 15,0 jug por kg de peso corporal por dia e, ainda com maior preferência, administra-se aos mamíferos uma quantidade de hIL-4 compreendida entre cerca de 5 e cerca de 10,0 }J<3 por kg de peso corporal por dia.

A quantidade, frequência e período de administração variarão em função de factores tais como o valor da contagem de neutrófilos e monôcitos (por exemplo a severidade da monocitopenia ou granulocitopenia), a idade do paciente, a nutrição, etc.

Ern geral, a administração será diária inicialmente e poderá prosseguir periodicamente ao longo da vida do paciente. A dosagem e a frequência poderão ser determinadas no decurso dos testes iniciais ds contagem de neutrófilos e de determinação da amplitude do efeito da IL-4 sobre os níveis de anticorpos.

A administração da dose pode realizar-se pelas vias intravenosa, nasal, parentérica, oral, subcutânea, intramuscular, tópica, transdérmica ou por qualquer outro método aceitável. A IL-4 pode ser administrada sob quaisquer formas de dosagem convencionais. As preparações administráveis por via parentérica incluem soluções estéreis ou suspensões. A administração por inalação pode ser efectuada mediante um spay nasal ou oral, ou por insuflação. As formas de dosagem tópicas incluem cremes, unguentos, loções, dispositivos transdérroicos (por exemplo do tipo convencional do reservatório ou emplastro matricial), etc.

As formulações de composições farmacêuticas contempladas pelas formas de dosagem precedentemente descritas são levadas a cabo com o auxílio de excipientes e aditivos farmaceuticamente aceitáveis convencionais, utilizando técnicas convencionais.

Presentemente, a IL-4 é preferencialmente administrada pela via intravenosa. As soluções a administrar podem ser pôs liofilizados reconstituídos e podem conter, adicionalmente, conservantes, tampões, dispersantes, etc.

De preferência, a IL-4 é reconstituída com tampão citrato 10 ml*l e água estéril isenta de conservantes, não devendo a concentração máxima exceder 100 jug/ml, e é administrada por infusão intravenosa continua ou por injecção intravenosa. No caso da infusão continua, a. dose diária pode ser adicionada a 5 ml de solução salina normal e a solução pode ser infusionada mediante uma bomba mecânica ou por acção da gravidade.

efeito da IL-4 sobre a intensificação da reacção imunológica a um agente infeccioso virai, que se traduz, por exemplo, num aumento dos níveis de anticorpos em mamíferos, pode ser avaliado mediante o seguinte protocolo de teste.

Materiais e métodos

A IL-4 humana recombinante utilizada nas duas experiências seguintes era derivada de células CHO e o método para a sua preparação foi o descrito no pedido de. patente nos E.U.A. depositado em 29 de Julho de 1989 sob o n£ de série 388 937.

Realizaram-se duas experiências para avaliar o efeito da IL-4 humana recombinante CrHuIL-4, recombinant human IL-4? produzida em células CHO sobre a reacção em termos de anticorpos a uma reexposição a SVV e o efeito sobre os parâmetros dos glóbulos sanguíneos.

Concepção das experiências

Utilizaram-se nas experiências de reexposição, destinadas a determinar os efeitos da IL-4, macacos verdes africanos tendo sobrevivido a uma doença severa causada por uma infecção experimental inicial com SVV. Administrou-se IL-4 aos animais durante 18 dias,’ os níveis de glóbulos sanguíneos e de anticorpos neutralizadores do SVV no soro foram determinados no dia 0, e a intervalos no decurso e apôs o período de dosagem. Na Experiência 1, descrita adiante, estudou-se o efeito de doses de 30 e 5,0 jug/kg/dia B.I.D. (2 doses diárias? de IL-4 produzida em células

CHO administradas por via intravenosa) na Experiência 2, descrita adiante, est.udou~se o efeito de doses de 5,0, 1,0 e 0,25 xig/kg/dii de IL-4 produzida em células CHO e administradas no mesmo regime que na Experiência 1. Os grupos de teste consistiam em 4 animais distribuídos por cada experiência de modo a que as variações nos níveis de anticorpos neutralizadores do SW observados no dia 0 se distribuíam igualmente pelos grupos.

Macacos

Os macacos verdes africanos C Arcorithecus aethiqps), da Somália, foram adquiridos no estado selvagem a uma fonte comercial. Todos os macacos foram mantidos em quarentena durante um período mínimo de 30 dias antes de serem utilizados nas experiências. Tratava-se de animais capturados no estado selvagem de ambos os sexos e com idades diversas,' os seus pesos estavam compreendidos entre '2 e 5 kg. Tentou-se seleccionar os macacos para os grupos de tratamento de modo que todos os grupos tivessem um peso médio e uma razão entre sexos semelhante.

Vírus e inoculação dos animais

Vírus. 0 vírus da varicela símia (SVV) utilizado nestes estudos foi isolado a partir do macaco patas (Erythocebus patas) naturalmente infectado. Este isolado foi passado em macacos verdes africanos e preparou-se um caldo de vírus. 0 SVV foi isolado em culturas de células Vero a partir de linfôcitos sanguíneos periféricos de um macaco infectado. As culturas infectadas foram expandidas mediante passagens de células infectadas raspadas para culturas Vero recentes numa proporção de 1:3. No quinto nível de passagem as células Vero infectadas foram raspadas da superfície, inoculadas em balões de cultura e suspendidas em meio essencial mínimo Eagle com uma percentagem ponderai ,1 ν de 5% de soro de feto bovino e uma percentagem ponderai de 35% de sorbit-ol. 0 caldo SVV foi introduzido em ampolas e armazenado a -70°C.

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Inoculação dos animais. Os macacos foram infectados com

1,5 ml de. caldo de SVV numa diluição predeterminada, administrados transtraquealmente através da cartilagem cricóide e com outros 1,5 ml administrados sufocutaneamerrte à área abdominal. 0 inoculado foi titulado no que diz respeito a unidades formadoras de placas de vírus em células Vero na altura em que se realizava cada uma das experiências.

Análise de anticorpos. 0 nível de anticorpos neutralizadores do SVV foi determinado no dia O de cada experiência e a intervalos de tempo indicados. Os títulos são expressos como o inverso da diluição mais elevada requerida para neutralizar 80% do vírus, segundo o determinado num teste de formação de placas em células Vero. De um modo resumido, incubaram-se as amostras de soro de macaco durante 60 minutos a 37°C jntamente com 100 a 200 unidades formadoras de placas de SVV. Após a incubacão, a mistura foi colocada sobre as células, incubada durante 60 minutos a 37°C e recoberta com agar. Após um período de incubação de 7 dias a 37°C, as células foram tingidas e o número de placas de SVV restante foi determinado.

Determinação dos parâmetros sanguíneosPar a c ada amostra de soro, determinou-se o número de glóbulos vermelhos, o número total de glóbulos brancos e de subpopulações e o número de plaquetas por ml pelos métodos previamente descritas por E. D. Roberts e outros em Am. Vet. Res., vol. 45. pp. 523 a 530, 2984, e por K. F. Soivie e outros em Antimicro. Ag. Chemother, vol. 29, pp. 20 a 25, 1986, e em Antivirai Res., vol. 1, pp. 325 a 337, 19S1. Efectuaram-se ainda determinações da hemoglobina num

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Ο 'J hematôcrito usando metodologias bem conhecidas dos técnicos especializados.

Resultados. Realizaram-se as duas experiências que se descrevem em seguida a fim de determinar os efeitos da IL-4 produzida em células CHO sobre a reacção imunológica a uma nova infeccão com SVV de macacos verdes africanos.

Experiência 1. Uti1izaram-se macacos verdes africanos tendo sobrevivido a uma infecção severa de SW. Após nova exposição a 8VV, observou-se um rápido aumento de anticorpos. Est.udo.u-se a reexposição na presença de rHuIL-4 administrada diariamente por via intravenosa em dois níveis de dosagem ¢5,0 e 30,0 /jg/kg/dia B.I.D.) e de placebo. Cada grupo continha quatro animais e a administração de IL-4 humana começou no dia 0 e prolongou-se por 15 dias. Os animais forma reexpostos ao 8W no dia 3 do período de administração de rHuIL-4 ou de placebo. Em diversas alturas foram recolhidas amostras de sangue a fim de analisar o aparecimento de anticorpos neutralizadores de SW, determinar o número de glóbulos sanguíneos e medir os outros parâmetros sanguíneos. Os resultados da determinação do aparecimento dos anticorpos neutralizadores de SW é apresentado na Figura 1.

Tanto a dose de 5,0 como a de 30,0 Aig/kg/dia de rHuIL-4 deram origem a uma reacção imunológica superior, traduzida por um nível estatisticamente mais elevado de anticorpos, â reexposição ao SW. A reacção no caso da dose de 5,0 era significativamente superior â do caso da dose de 3,0 jug/kg/dia. A ausência de uma reacção, na caso de administração de uma dose, poderá ser devida à existência de uma dose óptima bem definida de IL-4 t-al como se observou em cultura histológica.

Além disso, os declives calculados teoricamente para o desencadear do aumento dos níveis de anticorpos eram diferentes no caso dos animais a que foi administrada rHuIL-4, indicando que os anticorpos apareciam mais depressa nestes grupos que no grupo a que foi administrado placebo.

Experiência 2. Efectuou-se uma experiência semelhante à Experiência 1. Uti1izaram-se três niveis de dosagem de rHuIL-4 derivada de células CHO. Administraram-se doses de 5,0, 1,0 e 0,25 /jg/kg/dia Β. I.D. por via intravenosa durante um período de 15 dias, de modo semelhante ao da Experiência 1. Havia 4 animais em cada grupo.

Os resultados do aparecimento de anticorpos para o SW são apresentados na Figura 2. Apesar de não existirem diferenças estatisticamente significativas no caso dos níveis de dosagem inferiores, no caso da dose de 5,o jug observou-se uma tendência para um nível de anticorpos superior no dia 22. Os níveis de dosagem inferiores <1,0 e 0,2-5 jug/kg/dia) não foram eficazes no que se refere ã intensificação da reacção imunológica.

Tanto a Experiência 1 como a Experiência 2 demonstraram que ocorre uma produção intensificada de anticorpos para doses de 5,0 jug/kg/dia e superiores em macacos reexpostos a infecções crónicas endémicas tais como as provocadas pelo SW.

Tendo em conta os resultados das precedentes experiências, é expectável que a IL-4, de preferência a rHuIL-4, intensifique a reacção imunológica, após uma primeira exposição ou exposição primária a um agente de infeccão crónica endémica, em mamíferos em que a reacção imunológica não é suficientemente forte ou rápida para evitar a ocorrência da doença.

Claims

REIVINDICAÇÕES lâ - Processo para a preparação de uisa composição farmacêutica para induzir uma resposta imunitária eficaz em relação a agentes infecciosos crónicos endémicos, particularmente agentes infecciosos virais, bacterianos, fúngicos ou protozoários, num mamífero exposto aos referidos agentes, caracterizado por se incluir na referida composição uma quantidade eficaz de II-4 como ingrediente activo, em que a IL-4 é administrada numa gama compreendida entre cerca de 0,25 e cerca 15 microgramas por quilograma de peso corporal/dia.
2ã - Processo para a preparação de uma composição farmacêutica de acordo com a reivindicação 1, caracterizado por o ingrediente activo ser IL-4 humana, de preferência IL-4 humana recombinante derivada de E. coli.
3â - Método para induzir uma resposta imunitária eficaz em relação a agentes infecciosos crónicos endémicos, particularmente agentes infecciosos virais, bacterianos, fúngicos ou protozoârios, em mamíferos expostos aos referidos agentes, caracterizado por compreender a administração aos referidos mamíferos de uma quantidade de IL-4 eficaz para uma tal indução, por exemplo por via intravenosa ou subcutânea, em que a IL-4 é administrada numa gama compreendida entre cerca de 0,25 e cerca 15 microgramas por quilograma de peso corporal/dia.

caracterieficaz de reexpostos aumentar a infecciosos referidos
4â - Método de acordo com a reivindicação 3, zado por a indução compreender(a) induzir um nível anticorpos em mamíferos expostos pela primeira vez ou a agentes infecciosos crónicos endémicos; ou <fo) resposta imunitária em mamíferos reexpostos a agentes crónicos endémicos em que a resposta imunitária dos mamíferos na ausência de IL-4 não é suficientemente forte ou rápida para evitar a re-ocorrência da doença J ou <c) aumentar uma resposta imunitária em mamíferos expostos pela primeira vez a agentes infeccxosos crónicos endémicos em que a resposta imunitária dos referidos mamíferos na ausência de IL-4 não é suficientemente forte ou rápida para evitar a ocorrência da doença.

•5ã - Método de acordo com as reivindicações 3 ou 4, caracterizado por a IL-4 ser IL-4 humana, de preferência IL-4 humana recombinante derivada de E, coli.