PT93141A - Processo para a preparacao de composicoes farmaceuticas contendo certas estirpes de estreptococos apropriadas para o tratamento de amigdalites - Google Patents

Description

|yi_|lÍsabeth_Gra^n_§_Stíg_Edvín_Fglke_Hglm "PROCESSO PARA A PREPARAÇÃO DE COMPOSIÇÕES FARMACÊUTICAS CONTENDO CERTAS ESTIRPES DE ESTREPTOCOCOS APROPRIADAS PARA O TRATAMENTO DE AMIGDALITES" A presente invenção refere-se a preparações farmacêuticas para a profilaxia e/ou para o tratamento de amtgdal ites |^-e s_ treptocõci cas.

Antecedentes A amigdalite que consiste numa inflamação das amígdalas, e um problema de saúde muito corrente. Calcula-se que aproxima-damente 300.000 pessoas são afectadas cada ano pela amigdalite aguda na Suécia. Cerca de 30 a 50¾ destes casos são causados pie lo jâ-estreptococos. A amigdalite é tratada ftabitualmente com p£ nícilina, por exemplo, fenoximetil-penicilina, mas em cerca de 10 a 25¾ dos casos o tratamento não ê eficaz e o doente ê afectado por amigdalite recorrente. A amigdalite e particularmente correji te nos centros de dia, nas escolas e também nas famílias, onde as pessoas estão em contacto próximo entre si,ocorrendo diversas oportunidades de infecção, As consequências são o tratamento mé dico recorrente, participações da doença e tratamento com penici_ 1ina o que constitui não somente um grande problema de saúde mas também um problema económico.

Os motivos para a frequência reiativamente elevada de tra tamentos: enificazes, supõem-se depender, ã parte as deficiências locais nas defesas de imunidade do doente e deficiências imunolõ-gicas gerais, da actividade antibiótica inadequada no local da infecção. Este último facto inclui factores como a anuência do doente à medicação, a dosagem particular de penicilina, número de doses e a absorção reduzida do fãrmaco. Também tem sido referida a inactivação da penicilina pela p-lactamase produzida pelas bactérias, resultando numa concentração de penicilina insuficiente no foco infeccioso. Outros factores relacionados com tratamentos ineficazes da amigdalite p-estreptocõcica são as pertu_r bações da flora normal resultando numa susceptibilidade acrescida ãs infecções estreptococicas e tolerância à penicilina dos |3-es-treptococicos do grupo A,

Como se sabe, a interferência das bactérias entre si na flora da garganta pode desempenhar um iportante papel na amigdalite. Tem-se demonstrado que certas estirpes de estreptococos inibem o crescimento dos jã-estreptococos produtores da infecção corrente, Este facto aplica-se partieularmente a certos Oc-estre£ tococos. As pessoas atingidas pelas infecções recorrentes mencit) nadas anteriormente têm, frequentemente, fraca inibição dos ^-es-treptococos na flora normal da gargante, embora as pessoas transportadoras destes ^-estreptococos raramente apresentem amigdalite ,

Sanders et al. (_Sanders, C,, Nelsen, 6. Sanders, E., "Bac teria! interference", II. Epidemiological determinants of the antagonistic activity of the normal throat flora against group A -3-

f* streptococci. Infection and Immtníty 16; 1977, p. 599-603, provaram que certas estirpes de Streptococcus viridans inibem o desenvolvimento dos estreptococos do grupo A (EGA). Sanders também demonstrou um efeito inibidor dos Q^-estreptococos que ocorrem normalmente sobre os EGA nas crianças infectadas, 0 papel protector dos^-estreptococos da garganta contra as infecções ^-estreptocõcicas também foi demonstrado por Grahn: e Holm (Grahn, E., Holm, S, E,; Bactéria! interference in the throat flora during a streptococcal tonsillitis out break in an apartment house area, Zentralblatt fur Bakteriologia Mikrobiol£ gia und Hygiene A, 256: 72-79, 1983] e Roos et al. (Roos, K., Grahn, E., Holm, S. E.: Evaluations of betai actamase acttvity and microbial interference in treatment failures of acute streptococcal tonsillitis., "Scandinavian Journal of Infection Diseases", 18; 1986, p. 313-19. Também explicaram que a falta de interfere£ cia do (^.-estreptococos e uma das razões principais do tratamento frequentemente enificaz da amigdalite estreptococica.

Alem disso, Beck (Intereference by an ^d-hemolytic stre_p tococcus of ^-hemolytic pathogenic streptococci, "Inflamation", 3; 1979, 463-465 encontrou uma estirpe de Streptococcus viridans com uma capacidade iniòidora grande sobre os EGA e sugeriu a "im plantação" desta estirpe nas pessoas com amigdalite estreptocõci_ ca recorrente. Também foi apresentado anteriormente um relatório idêntico por Sprunt et al. (Sprunt K,, Leidy G., Redman W.; Abnor mal colonisation of neonates in an ICV: Conversion to normal colo nisation by pharyngeal implantation of alpha-hemolytic streptoco£ cus strain 215 ;"Pediatr Res", 14; 1980, 308-313, que implantou -44 / uma estirpe de ^6-estreptococos na nasofaringe de 22 crianças suspeitas de perigo de infecção, A implantação foi bem sucedida em 16 das crianças e modificou a flora normal em 7 de modo a que a estirpe implantada foi a única estirpe de ^-estreptococos a detectar-se 4 a 18 dias apos a implantação.

As bactérias da flora normal inibem a bactéria invasora de diferntes formas e os factores remanescentes são, por exemplo, a competição por factores de crescimento importantes, as varia^ ções de pH, a acumulação de resíduos, a formação de peróxido, to_ xinas e enzimas, bacterianas e ainda a produção de substâncias conhecidas como bactericidas. Os bactericidas conhecidos são mui to idênticos aos antibióticos, mas diferem pelo facto de terem um efeito muito selectivo e não perturbarem a importante flora bacteriana anerobica. 0 efeito inibidor dos ^-estreptococos so^ bre os ^-estreptococos tem mostrado depender, em grande medida, na presença de bactericidas produzidos por ^4-estreptococos. Existe portanto a necessidade de preparações farmacêuticas efica_ zes para a profilaxia e tratamento da amigdalite ^-estreptococos

Descrição da Invenção

Num aspecto da presente invenção proporcionam-se preparja ções farmacêuticas para a profilaxia e/ou tratamento da amigdali_ te ^-estreptocõcica cuja preparação ê caracterizada por incluir pelo menos uma estirpe de microrganismos viável escolhida no gnj po constituído por estirpes de Streptococcus sanguis II com os números de deposito NCIB 40104, NCIB 40105 e NCIB 40106, a estir pe de Streptococcus mitis com o número de depósito NCIB 40107 e estirpes de estreptococos com essencialmente a mesma capacidade inibidora do ^-estreptococos das estirões depositadas, num meio aceitavel em farmacia em que os microrganismos mantém a sua via bilidade.

Num outro aspecto da presente invenção as preparações ci_ tadas anteriormente são utilizadas para a profilaxia e o tratamento da amigdalite, possivelmente apos um período de penicilina. Outras caracteristicas desta invenção são evidentes a partir das reivindicações seguintes.

Num outro aspecto da presente invenção proporciona-se um processo para a preparação das composições mencionadas anterior-mente .

Verificou-se que as preparações farmacêuticas de acordo com a presente invenção, são particularmente eficazes na profila^ xia e no tratamento da amigdalite ji-estreptocócica, Nas experiências descritas em seguida, as preparações de acordo com a presente invenção, num aspecto preferido em que as quatro estirpes diferentes de ^-estreptococos estão simultaneamente presentes, verificou-se eliminarem entre 9.5 a 98% de ^-estreptococos isolados em tres locais, na Suécia. As associações de diversas estirpes de microrganismos mencionados são igualmente eficazes, mas o melhor efeito definitivo que jã se obteve, foi através da presença simultânea das quatro estirpes. Particularmente, a estirpe NCIB 40104 ê, isoladamente, muito eficaz, enquanto que as tres estirpes restantes não são, separadamente, tão eficazes quari to a NCIB 40104. 0 meio aceitável do ponto de vista farmacêutico consiste, de preferência, em cloreto de sodio, leite desnatado ou Nu-tramigen (marca registada comercial em 13 de Março de 1981, registo n9 1 75 669 , propriedade de Mead Jonfison & Company, Evans ville, Ind., Estados Unidos da América do Norte], mas tamBêm :se podem utilizar outros meios aceitáveis do ponto de vista farmacêutico em que se mantêm a vial ibi1 idade dos microrganismos, Num aspecto da presente invenção utiliza-se solução fisiológica de cloreto de sódio como tampão designada para conferir composição isotonica com pH neutro.

Cada um dos '.microrganismos da preparação está presente ~ 4 10 numa concentração no referido meio entre 10 e 10 UFC/ml (uni- _ 5 dades de formaçao de colonias/ml\, de preferencia entre 10 e IO9 UFC/ml.

As réplicas das quatro estirpes de imixnorganismos, das quais três pertencem ao género Streptococcus sanguis II (a seguir designadas por ^89a, ^.502 e 0^ 505] e a quarta estirpe do género Streptococcus mitis (a seguir designada por V 72131, encontram-se na flora normal da garganta da maior parte das pessoas. A estirpe ^ 89a corresponde a NCIB 40104 e as estirpes ^50.2, <V5Q5 e «V7213 correspondem a NCIB 40105, NCIB 4Q106 e NCIB 4Q10.7, respectivamente.

Microrganismos de acordo com a Presente Invenção

As quatro estirpes mencionadas anteriormente para as pre parações de acordo com a presente invenção foram isoladas de aco£ do com o método seguinte. De cada uma das cerca de 200 pessoas isolaram-se 5 estirpes de ^-estreptococos com colõnias de aspec to diferente, o que totaliza cerca de 1,000 estirões, Ensaiaram--se estas estirpes contra diferentes estirpes de p~estreptococos in vitro da seguinte forma.

Fez-se crescer todas as estirpes de V-estreptococos em caldo Ty, lavaram-se e diluTram-se para uma densidade Õptica de 4 5 0,3 a 500 nm (Viatron). Isto corresponde a 10 -10 UFC/ml. Tran£ feriram-se mini-gotas destas estirpes (contendo 10 a 100 UCF] para placas de agar com sangue (25 estirpes em cada placa} por meio de um replicador de Steers (ver Steers E., Foltz E. L. Graves B, S., Riden J.: An inocula replicating apparatus for routine tes-ting of bactéria! susceptibility to antibiotics., "Antibiot Chemo-tfver"; 1959, 307-311} e deixaram-se a secar durante 1Q a 15 mim£ tos. As placas de agar utilizadas nesta experiência foram prepia radas pela BBL Colombia Agar Base (Div. Becton Dickinson & Co., Cocfceysvi 11 e, MD 21030, Estados Unidos da América do Norte} com sangue de cavalo desfibrinado esterilizado a 5%, 0 pH estava com preendido entre 7,19 e 7,57.

As diferentes estirpes de j^-estreptococos foram rapidamente colocadas adjacentes a cada uma das estirpes de^-estrepto cocos e incubaram-se as placas a temperatura de 37°C e em atmosfera de C02 a 5%. Incubaram-se algumas das placas em condições '8

anaerõbicas a fim de se eliminar a produção de perõxido, Portaji to o efeito inibidor das estirpes sobre os ^-estreptococoe foi registado de acordo com o estudo do comportamento inibidor do de senvolvimento particular que podia ser lido nas placas de agar.

As esdirpes de melhor inibi.ção foram depois investigadas em diferentes associações no que se refere à interferência com j^-estreptococos e foram seieccionadas as quatro estirpes mais efi_ cazes. Estas quatro estirpes, que são ^ 89 a , <V 502, <V 505. e V721 3, foram depois cultivadas separadamente em caldo Ty contendo 0,2% de glucose ã temperatura de 37°C, durante a noite, foram lavadas e fez-se depois uma suspensão em solução saturada de cloreto de sodio. As quatro estirpes seieccionadas foram depois ensaiadas contra 100 diferentes estirpes de p-estreptococos de Umea, Up-psala e Gothenburg, e entre 80%, 92% e 89%, respectivamente destas estirpes foram inibidas.

As quatro estirpes de microrganismos, na preparação de acordo com a presente invenção podem, suspensas em qualquer meio aceitável em farmácia, ser congeladas a-2Q°C ou liofilizadas a fim de serem preservadas. A administração a um doente de um spray pode ser utilizada de um modo adequado pelo qual a prepara_ ção liquida descongelada pode ser aplicada oral e/ou nasalmente,

Num aspecto da presente invenção o spray pode conter uma suspensão de^-estreptococos 10 UFC/ml em 5 ml de solução de soro fisiológico, Cada dose de spray proporciona 10^ UFC correspon dendo a cerca de 0,01 ml. ‘saq.uj.n6as SBUi6ed sbu 3s-lub^.u9S3JcIb 0B5BQ.ajdjsq.u l ap sope^-Lnsau so a oeõe^aJdua^uL ap ojpanb o ‘(eSuBJj ‘πθρλθλ--na.LLnuow 06888 saq.^oj0 sa|. aui|.ea e>uia}sAs-idV) 02 IdV biub^sls O Ui O D ΟρΛΟΟΒ ap SBpBO LJ.LSSB [Ώ no S Bp ΒΡΛ d Λ aq. U L OBq.Sa SBpBUO Louauí souis lubBucuolui ap sadu.L^sa s\/ *Z0L0t?ai3N 9 90 LOt^a I ΟΝ ‘SOLOtaiON *frOLOÍ7013N OBÔB3·Laos ap so-iauinu so uiaq. a 6861 9P ολ.ι.θλθλθ^ ap Z ma ' ByuBiajg-Bug 908 69V usapuaqy ‘pBoy Aaqqv S£L ‘L8 *og Od ‘ uonsqs qojBasay Αλλοι ‘íaWION] ΡΠ euaqoBg buubw ç PM^snp TIi j.o uopoa l [oo [βιιοι^,βμ bu SBpBq.LSOdap osqsa oeòuaAUí Bq.sa iuod ορΛοαε ap 0B5BΛBd^Λd bu souis(.λβΟλολοlui ap εθΰΛρεθ s\/

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RESULTADOS OBTIDOS NA INTERPRETAÇÃO DAS ESTIRPES DE ESTREPTOCOCOS

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S.sanguis II

Experi ênci as 0 objectivo das experiencias que se seguem fot recoloni-zar doentes com amigdalite recorrente mediante a aplicação de uma preparação de acordo com a presente invenção contendo as quatro estirpes ^-estreptocõcicas, preparação que inibe o EGA dos doeii tes e analisa a capacidade protectora contra a amigdalite EGA recorrente da nova flora, A família A, (pais e três crianças} tinha tido 25 amigda^ I i tes agudas nos últimos três meses e meio de 1 986, Culturas re petidas de amostras da garganta tinham revelado a presença de p~ -estreptococos EGA tipo-Tl2 em todos os membros da família, Ti-nha-lh.es sido dado alternativamente fenoximeti 1-penici 1 ina (12,5 mg/kg de massa corporal duas vezes ao dia, durante 10 dias) e eritromicina (20 mg/kg de massa corporal duas vezes ao dia duraji te 10 dias), mas apenas se observou uma melhoria temporária, A família B (pais e duas crianças) tinham experimentado II amigdalites estreptocÕcicas agudas (EGA tipo T12) durante os últimos 3 meses de 1986, Como no caso da famTlia A, todos os membros da família foram tratados com fenoximetil-penicilina e eritromicina. Certos isolados de p-estreptotocos da famTlia B eram resistentes ã eritromicina /CIM (concentração inibidora mínima) superior a 8 mgJ]J . A ocorrência da amigdalite estreptocõ cica das duas famílias está representada no quadro 1,

Os *V.-estreptococos isolados num total de nove doentes das duas famílias apresentavam todos fraca capacidade inibidora -15-

do crescimento contra o seu prÕprio EGA, 0 método utilizado para demonstrar a inibição de desenvolvimento, que e uma interfereji cia bacteriana, contra EGA foi descrito por Grahn et al , (Grahn, E., Holm, S. E., Roos, K., Ekedahl, C,; Interference of alfahae-molytic streptococci isolated from tonsillar surface, on beta-hae^ molytic streptococci, Streptococcus pyogenes. a methodol ogi cal study, "Zentralblatt fur Bakteriologie Mikrobiologie und Hygiene A" , 254, 1983, p. 459-468.

Em Fevereiro de 1987 todos os membros das duas famílias foram tratados com a preparação de acordo com a presente invenção. A preparação, numa quantidade de cerca de 1Q7 UFC/ml de ca da um dos quatro ^-estreptococos, num meio aceitável em farmácia, foi pulverizado através do nariz para a epifaringe e através da boca para a região faringica dos nove doentes. Este processo r£ petiu-se uma vez ao dia durante quatro dias, em seguida uma vez por semana durante um mês e em seguida uma vez por mês durante mais dois ou três meses. Controlaram-se os doentes por culturas de amostras colhidas na garganta repetidamente durante 8 meses a partir do inicio do tratamento. No inTcio da recolonização com os^-estreptococos escolhidos da preparação de acordo com a presente invenção, todos os nove doentes eram deficientes na interferência de estreptococos contra o seu prÕprio EGA, Na f£ mTlia A todos os membros eram veículos do EGA antes do tratamento, embora, por outro lado nenhum membro da famTlia B fosse veiculo de EGA. Nenhuma das famílias AouBmostrou quaisquer sinais clínicos de infecção. Quatro meses apõs o ultimo período de tra tamento somente um doente era ainda portador da estirpe EGA original e este indivíduo também era inibidor insuficiente de^-es-

treptococos. Em todos os doentes restantes se observou um grande desenvolvimento do 0{.-estreptococos administrado, Este deser^ volvimento confirmou-se por um esquema de inibição do desenvolvi^ mento típico para diferentes estirpes EGA e pelas suas reacçóes bioquímicas. Como se pode observar no quadro 2, que mostra a fre quência de tratamento e os resultados microbianos após a administração dos ^.-estreptococos inibidores de EGA, as crianças da fa mília B foram expostas a EGA e no seu centro de cuidados diários e constituTram-se portadores da referida bactéria mas não foram afectados pela infecção. Os pais da mesma família não foram, d£ rante o mesmo período,portadores, 0 quadro 3 mostra a ocorrência de amigdalite estreptocÓ-cica antes e após a recol onização com ^<c-estreptococos, ApÕs a recolonização com o Ή-estreptococos inibidor de EGA e durante um período de "follow up" de oito meses, nenhum dos doentes das duas famílias evidenciou sinais clínicos de amigdalite estrepto-cõcica. É certo que alguns dos membros da famTlia, durante este tempo foram portadores de EGA mas nenhum deles foi afectado por amigdalite.

Como esta experiência demonstra, a preparação de acordo com a presente invenção pode ser utilizada com grande sucesso na profilaxia e no tratamento da amigdalite estreptococica, A preparação referida pode ser utilizada simultaneamente com a terminação de um perTodo de administração de penicilina óptimo nos ca^ sos em que i necessário um tratamento muito poderoso e eficaz da ami gdalite.

Quadro 1

Ocorrência de amigdalite estreptococica. M representa macho e F representa fêmea.

Sexo/Idade

Família A M 30 * * * * F 27 * * * * * * * M 7 * * * * * * * M 4 * * * * * * * F 1 * * * * * * * * * •k k k k k k * * * *

FamTlia B M 36 F 33 M 4 F 1

Junho Julho Agosto Setembro Outubro Novembro Dezembro Janeiro -18-

Quadro 2 invenção

Resultados da incidência microbiolõgica após a administração da preparação de acordo com a presente contendo ^C-estreptococos inibidor de GAS.

+ representa a presença de GAS

Sexo/Idade

Família A M 30 +++ F 27 +++ M 7 +-- M 4 ++- F 1 +++ Família B M 36 — F 33 — M 4 — F 1 _ _ _ + - + + + + + + +

Setembro

Fevereiro Março Abril Maio 1987 -19- ο Icd O (Ο N •r— c o o υ 0) s_ o s_ •i— Φ s_ φ > Φ Lu O S_ •r— OJ c cO Ό t'-.co (O (Λ \o í. ΙΟ Q. X -Ω Q. < ε cd O Φ IcO * X X X X N Φ o Φ CO •X Q U) 1- X Φ c0 X X X 4-> CL * X o c Φ X X s_ CO S- X -O Q. o -X X X X X E CO !cO Φ O CO O- * X X X X > •Γ- c C o u Φ X z \o </> > -X o o c o u •r— O X X X X o -u> o ! cd í. Q. o Φ O X -Q 1 <U o •P cd 3 i s_ -p c W -P co -p Q. Φ •Τ X 3 Φ o> Ο O o φ S_ Φ O s_ 1 -P i- i—’ -σ CQ. c/> CL O O CO Φ u s_ 3 1 cd Φ J2 θ' φ -p y ε %- ε φ •T— o cd •P r— ε u T3 φ cd o X X X X 00 -o υ o c/> CJl -o Φ o •r* o ί p +-> ε Icd ο c ω cd O u < O (d cd cn a> N <c *o •r* φ C -σ X cO o *1— i U O c o (<u Φ “O 5- CJ c co 3 O CD CO CT> Φ Ό cd T3 O s_ ja X o <D co 3 Φ co OJ r^. 1— co oo «3* Γ— 4-> 00 rs Li. s: Lu 2 Lu s: Li- o

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Claims (5)

1. -20-

   R Ε I VINDI CAÇÕES 1.- Processo para a preparação de composições farmacêuticas apropriadas para utilizar na profilaxia e/ou no tratamento de amigdalites Ò-estreptocõcicas após administração de uma penicilina, caracterizado pelo facto de se adicionar, pelo menos, uma estirpe viável de microrganismos escolhida entre o grupo constituído por estirpes de Streptococcus sanguis II com os números de depósito NCIB 40104, NCIB 40105 e NCIB 40106, a estirpe de Streptococcus mitis com o número de depósito NCIB 40107 e estirpes de estreptococos com, essencialmente, capacidade para inibir o D desenvolvimento de p-estreptococos igual a das estirpes depositadas, a um meio aceitável sob o ponto de vista farmacêutico no qual os microrganismos conservam a sua viabilidade.
2. 2, - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se utilizar cada estirpe estreptocõcica numa con- ~ 4 10 centraçao compreendida entre 10 e 10 UFC/ml, de preferência entre 105 e 109 UFC/ml.
3. 3. - Processo de acordo com a reivindicação 1 ou 2, caracterizado pelo facto de se utilizar, como meio aceitável sob o ponto de vista farmacêutico cloreto de sódio ou leite desnatado, de preferência uma solução tamponada de soro fisiológico.
4. 4.- Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto de se adicionar as quatro estirpes de microrganismos.
5. 5.- Processo de acordo com uma qualquer das reivindicações anteriores, caracterizado pelo facto de se adicionar as quatro estirpes de microrganismos. Lisboa, \\. ' 14 de Fevereiro de 1990 v-<? tjficiat '!u hO|.>i k·;1 <;t· M>*io-Jri-.u