CS74890A2 - Pharmaceutical for tonsilitis prophylaxis and/ or therapy - Google Patents

Description

- 2 -

Tento vynáleXz se týká farmaceutickéhoprostředku k profylaxi a/nebo ošetřování tonsilitidy vy-volané (^-streptokoky.

Tonsilitida, to znamená zánět mandlí, je ši-roce rozšířený zdravotní problém. Je odhadováno, že veŠvédsku je přibližně 300 000 lidí postiženo každýmrokem akutním zánětem mandlí. Přibližně 30 až 50 % těch-to případů je způsobeno /^-streptokoky. Tonsilitidase obvykle ošetřuje penicilinem, například fenoxymethyl-penicilinem, ale okolo 10 až 25 % případů je neúčinnýcha pacient je opakovaně zasažen zánětem mandlí. Tonsilitidaje zvláště běžná ve střediscích péče o děti, ve školácha také v rodinách, kde jsou lidé v úzkém vzájemnémkontaktu a kde nastává řada možností infekce. Následkemtoho jsou opakující se lékařská ošetření, hlášení ne-mocí a ošetřování penicilinem, co vyvolává nejen velkézdravotní problémy, ale také problémy ekonomické. Příčiny relativně vysoké četnosti neúčinnýchošetření jsou podle předpokladu závislé na neadekvátnímantibiotickém účinku v místě infekce, nehledě na lokál-ní nedostatečnosti v imunitní obranné schopnosti organit-mu pacienta a obecnou imunologickou nedostatečnost.Neadekvátní antibiotický účinek zahrnuje takové okolnosti, 3 jako je ochota pacienta k léčení, zvláště dávkovánípenicilinu, počet dávek a zhoršená absorpce léčiva.

Také byla zmíněna inaktivace penicilinu bakteriemi pro-dukujícími P-laktamázu, výsledkem čehož je nedostatečnákoncentrace penicilinu v ohnisku infekce. Další fak-tory související s neúčinností ošetření tonsilitidyvyvolané /L streptokoky souvisejí s narušením normálníflory, které je výsledkem zvýšené citlivosti k strepto-kokálním infekcím a tolerance skupiny A /^-streptokoků ? kpenicilinu.

Je známo, že bakteriální infekce, mezi jinýmbakterie krční flory, mohou hrát důležitou roli při zá-nětech mandlí. Bylo doloženo, že určité kmeny streptokokůzabraňují růstu běžné infekce vytvářené £-streptokoky.Tento poznatek se v praxi používá zvláště u určitých -streptokoků. Lidé trpící svrchu uvedenými opakující-mi se infekcemi mají často nedostatek inhibujícíchO^-streptokoků ve své normální krční floře, ž»íípí-.· Lidé,u kterých se zřídka vyskytují tyto dC-streptokoky, jsoupostihovány tonsilitidou.

Sanders a kol. (C. Sanders, G. Nelsen a E.Sanders: Bacterial interference, II. Epidemiologicaldeterminanta of the antagonistic activity of the normál 4 throat flora against group A streptocooci. Infectionand Imminity 1977, 16, 599-603) doložil, že určité kme-ny Streptococcus viridansinhibují růst streptokoků zeskupiny A (GAS). Saaders a kol· také doložili inhibičníúčinek běžně se vyskytujících cř-streptokoků protistreptokokům ze skupiny A u infikovaných dětí.

Positivní roli ©f-streptokoků proti ^-strepto-kokům u krčních infekcí také doložili Grahn a Holm(E. Grahn a S. E. Holm: Bacterial interference in thethroat flora during a streptococcal tonsillitis outbreakin an apartment house area, Zentralblatt fur Bakterio-logie, Mikrobiologie and Hygiena A, 1983, 256: 72 - 79)a Roos a kol. (K. Roos, E. Grahn a S. E. Holm:

Evaluations of beta-lactamase activity and microbialinterference in treatment failures of acute streptococcaltonsillitis. Scandinavian Journal of InfectiousDiseases 18, 313-319 /1986/)· Tito autoři objasnili, ženedostatek blokujících ©f-streptokoků je jednou z hlav-ních příčin časté neúčinnosti ošetření zánětu mandlí, kte-rý je způsoben streptokoky.

Purther a Beck (Purther a Beck: Interference byan ©C-hemolytic streptococcus of |3i-hemolytic pathogenicatreptococci. Inflamaation 3, 463-465 /1979/) nalezli - 5 - kmen Streptococcus viridans s vysokou inhibičníschopností proti streptokokům ze skupiny A a navrhli"implantaci” tohoto kmene na lidi s opakující se ton-silitidou vyvolanou streptokoky· Podobná zpráva byladříve předložena Spruntem a kol. (K. Sprint, G. Leidy aW. Redman: Abnormal colonisation of neonates in anICU: Conversion to normál colonisation by pharyngealimplantation of alpha-hemolytic streptococcus strain215. Pediatr· Res. 14, 308-313 /1980/), kteří implanto-vali kmen ^-streptokoku do nosohltanu 22 dětí, u kte-rých se očekává^nebezpečí infekce. Implantace se uká- změny k žala úspěšnou u 16 dětí a je příčinou/normální flor£ u7 dětí v tom smyslu, že implaatovaný kmen byl jako jedinýkmen oC-streptokoků nalezen čtyři až osmnáct dní poimplantaci.

Bakterie v normální floře inhibují narušujícíbakterie různými cestami a okolnosti, které způsobujízpoždění, jsou například boj o důležité růstové faktory,změny hodnoty pH, hromadění odpadních produktů, tvorbaperoxidu, bakteriálních toxinů a enzymů a také produlceznámých látek, jako jsou bakteriociny. Známé bakterio-ciny jsou velmi podobné antibiotikům, ale odlišují sev tom, že mají velmi selektivní účinek a narušují velmidůležitou anaerobní bakteriální floru. Bylo ukázáno, - 6 - že inhibiční účinek pf-streptokoků na /^-streptokokyzávisí ve vysokém stupni na přítomnosti bakteriocinů pro-dukovaných ^-streptokoky. Existuje potřeba účinnéhofarmaceutického prostředku pro profylaxi a ošetřování ton-silitidy vyvolané -streptokoky.

Jedním znakem tohoto vynálezu je získání far-maceutického prostředku k profylaxi a/nebo ošetřovánítonsilitidy vyvolané fi-streptokoky, který se vyznačujetím, že obsahuje alespoň jeden životaschopný kmen mik-roorganizmu, vybraný ze souboru zahrnujícího kmenyStreptococcus sanguis II s depositními čísly NCIB40 104, NCIB 40 105 a NCIB 40 106, kmen Streptococcusmitis s depositním číslem NCIB 40 107 a kmeny streptokokůs inhibiční schopností pro /b-streptokoky, která jev podstatě stejná jako u deponovaných kmenů, ve farmaceu-ticky přijatelném prostředí, ve kterém si mikroorgamizmyuchovají svějí životaschopnost.

Jiným znakem tohoto vynálezu je použití pros-tředku uvedeného svrchu k profylaxi a/nebo ošetřovánítonsilitidy, popřípadě po léčení penicilinem. Další cha-rakteristické znaky vynálezu jsou zřejmé z připojenéhopředmětu vynálezu. - 7 -

Další znak vynálezu se týká způsobu výrobyprostředku zmíněného svrchu·

Bylo nalezeno, že farmaceutický prostředekpodle tohoto vynálezu je zvláště účinný při profylaxi aošetřování tonsilitidy vyvolané βχ-streptokoky. V pří-kladech popsaných dále je prostředek podle vynálezu vý-hodným provedením, ve kterém jsou současně přítomnyvšechny čt£ři rozdílné kmeny o(-streptokoků· Bylo zjištěno,že prostředek podle vynálezu eliminuje 95 až 98 % -streptokoků izolovaných na 3 místech Švédská· Stejnětak jsou účinné kombinace různého počtu zmíněných kme-nů mikroorganizmů, ale rozhodně nejlepšího účinku se do-sáhne, pokud jsou přítomny všechny čtyři kmeny. Zvláštěkmen NCIB 40 104 je sám velmi účinný, zatímco zbývající3 kmeny odděleně nejsou tak účinné, jako kmen NCIB40 104.

Farmaceuticky přijatelné prostředí/ tvoří s vý-hodou chlorid sodný, pleíové mléko nebo Nutramijígen R(registrovaná ochranná známka ze dne 13. března 1981,registrační číslo 175 669» vlastník Mead Johnson andCompany, Evansville, Ind., USA), ale mohou se také používatjiná farmaceuticky přijatelná prostředí, ve kterých seudržuje životaschopnost mikroorganizmu. Při jednom - 8 - provedení tohoto vynálezu se používá pufrovaného fyziolo-gického roztoku určeného k tomu, aby poskytl isotonickousměsí heuKa&ti-u*.

Každý z mikroorganizmů je v prostředku přítomenv prostředí v koncentraci 10^ až ΙΟ^θ CPU/ral (jednotek 'tvořících kolonii/ml), s výhodou 10^ až 10^ CPU/ml.

Doplňkyiá ke čtyřem kmenům mikroorganizmů, z nichžtři náležejí k rodu Streptococcus sanguis II (napříštěoznačované jako ^89a, eQ>02 a ^505) a čtvrtý k roduStreptococcus mitis (napříště označovaný jako <^7213)byly nalezeny v normální krční floře většiny lidí. Kmendfe9a odpovídá NCIB 40 104 a kmeny </502, c/505 a0^7213 odpovídají NCIB 40 105, NCIB 40 1.0$ a NCIB40 107. Čtyři svrchu zmíněné kmeny obsažené v prostřed-ku podle tohoto vynálezu byly izolovány dále popsanýmpostupem.

Od každých zhruba 200 lidí se izolovalo 5 kmenů-streptokoků s rozdílným vzhledem kolonie, to znamená, že se izolovalo asi 1000 kmenů celkem. Tyto kmeny setestovaly proti rozdílným typůmfestreptokoků in vitro dále po 9 - psaným způsobem· Všechny kmeny of-streptokoků se nejprve pěstb- . ✓* vjLty v TY—Hsujónu, promyjí a zředí na optimální hustotu0,3 při 500 nm'(Viatron), co odpovídá 10^ až 10^ CPU/ml. Minikapičky těchto kmenů (obsahující 10 až 100CPU) se přenesou na agarové desky s krví (25 kmenů nakaždou desku) pomocí Stee2%va replikátoru (viz E.

Steers, E. L. Poltz, B· S· Graves a J. Riden: An inoculareplicating apparatus for routine testing of bacterialsusceptibility to antibiotics· Antibiot.Chemother. 9»307-311 /1959/) a nechá se schnout po dobu 10 až 15minut· Agarové desky použité při tomto experimentu jsouzhotoveny BBL Colombia Agar Base (Div. BectonDickinson and Co., Cockeyville, MD 21 030, USA) a opatřeny5 % steřilní defibrinované koňské krve. Jejich hodnota pHčiní 7,49 až 7,57.

Rozdílné kmeny β-streptokoků se okamžitěaplikují v sousedství každého kmene ^-streptokoku a des-ky se inkubují v 5 % oxidu uhličitého za teploty37 °C. Některé desky se inkubují za anaerobních podmínek,aby se vyloučila produkce peroxidu. Potom se zaznamenáinhibiční účinekc<-kmenů na β-streptokoky, po studiuspecifického růstu inhibičních vzorků, který se dá zjistitna agarových deskách. - 10

Hejlepší inhibiční kmeny se dále hodnotí v roz-s ohledem na a dílných kombinacích'bránicí účinek proti P-streptokokůma vyberou se čtyři kmeny, které jsou nejúčinnšjší. Ty-to čtyři kmeny, to jest ©C89a, of502, «C5O5 a ©C7213se potom odděleně kultivují v TY-bujónu obsahujícím 0,2% glukózy za teploty 37 °G přes noc, promyjí a suspen-dují v'nasyceném roztoku chloridu sodného· Čtyři vybranékmeny se potom testují proti 100 rozdílných kmenůβ -streptokoků z měst Ume8, Uppsala a Gothenburg veŠvédsku· Tyto kmeny vykazují 80%, 92% a 89% inhibici· Čtyři kmeny mikroorganizmů v prostředku podletohoto vynálezu, suspendované ve farmaceuticky přijatel-ném prostředí, se mohou vymrazit na -20 °G nebo lyo-filizovat za účelem konzervace· Při podávání pacientovise účelně může použít čerpadlového rozstřikovače, kte-rým se rozmražený, kapalný prostředek může podávat per-orální a/nebo nasální cestou. Při jednom provedení tohoto vynálezu postřikmůže obsahovat suspenzi^-streptokoků v množství 10^CPU/ml v objemu 5 Bil fyziologického roztoku (roztokuchloridu sodného)· Každá postřiková dávka poskytuje 10?CPU, což odpovídá asi 0,01 ml. - 11

Kmeny mikroorganizmů v prostředku podletohoto vynálezu jsou uloženy ve. sbírce National Collectionof Industrial and Marině Bacteria Ltd. (NCIMB), TorryResearch Station, PO Box 31, 135 Abbey Road, Aberdeen AB98 DG, Velká Británie ode dne 3· února 1989 a mají deposit-ní čísla NCIB 40 104, NCIB 40 105, NCIB 40 106 a NCIB40 107· Zmíněné kmeny organizmů jsou klasifikovány podlesystému API 20 (systém API: La Balme les Grottes, 38 390Montalieu - Vercieu, Francie). Klasifikační tabulka a vý-sledky klasifikace jsou uvedeny dále. •’-v ->*·'

I CMr—)

I 0}Atr-134>3+> >o

ojA!•rl«Η♦rl03OJr·IM oj A4

rH 3 4>

OJ

Eh 1 1 1 • 1 1 '>» 1 Έ», o «!•Η I 43 'S B Φ 3 . 'H . <M >o 1 Φ | \ 1 > , 'S I 3 1 3 | M 3 Φ xJ 3 1 •rl >o 1 o 1 > , B 1 . a . •rl | >0) | '>s -P O ř> . o > •H | i—1 o 1 > 1 •rl 01 >ta 3 43 *3 o I O ·? I S 1 Φ PM . xí 3 3 +» . •Φ >03 3 1 '3 > 1 o rH 1 'i>3 XJ '3 -P 0) 1 AI 1 o 1 3 t—1 Φ xf rH 03 1 >O I '>» I >n 'S O o 3 '!>> > 1 1 3 xJ 1 > φ '3 o 3 rH 1 CM ř> B 1 3 -P '3 Λ 43 >Φ 1 P4 1 AI φ 1 P > ř> © r-1 ’Φ © 03 1 1 >O •p 1 CM 43 + O >φ 'S 1 5» 1 •P rH \ m 3 Ή I &amp; 1 rH fi . (3 'S. H 'S 'S >ta > I > > l S > 1 > •H 3 3 3 φ -p 1 3 | 3 i 3 rH OJ , 43 43 43 -P ho I N | ta | 43 N >Φ 0) « - © > &amp; 1 43 1 43 1 *Φ 43 01 1 •H o •P 1 1 3 ca s I Φ 1 I '3 >> o xJ ta 3 1 Ή 3 3 OQ Φ 1 Φ 1 ta 1 o \ O . 'S . Ad Φ 1 Ad I rH 1 3 o 3 O rH AI 1 x3 1 H 1 h0 3 O -3 1 Φ « 1 3 1 £ P 1 '3 -P 1 •P . 3 3 1 '3 1 '3 1 Ή -P > . El rH a 1 3 i 3 I 3 43 {3, . Ad 3 | £> 1 iH 1 a W 3r 43 φ 1

-P o

<D světle šedý &amp;

H

W £

Tabulka 1 - pokračování t » < , · • 1 1 • • 1 . a • 1 • I 'P • 1 1 q • • 1 > • 1 1 •rl · • 1 CO • 1 1 q • • 1 o • 1 1 -P • • 1 q • 1 1 I •P • I • 1 Ή 0) 1 • 1 • q 1 o • 1 I > . OJ > • • •Η I CO • o 1 > 1 P •P >co • o • •P i q • q 1 P 1 03 Γ“í o cO • cO 0 o 1 P • q I ’P 1 44 Ph o o • «Ρ • 0) 1 q 44 • I 1 Tá •P 03 0 • o I a xS • I 1 I—1 • • ra j o •t • 1 I I '>s P 'P P • • > 1 43 • >0) 1 1 O > • • 1 >q • 03 1 1 +> • • 1 a o • Ή 1 1 a a • • 1 tSJ « • P 1 ! co 0) • • I + a· > 1 1 03 0) • 0 I Ό r—1· o 1 1 -P • o 1 a 'TJ >φ· 03 I 1 q > q > • • Ή I ISO 44 03· O 1 1 B . o 'í>s >N 9 • > 1 a « ► q 1 > •P q cO • q • p I • co q 1 cO 1 co 43 o • 43 • bO 1 • CO 1 co 1 Φ 03 03 • 03 0 I 1 • 43 P I 1 30 1 1 I I I I 1 1 1 1 P 1 cO 1 co 1 q 1 'cO 1 ca Ťí S 1 P I •P 1 >> 03 CO 1 q I O 1 q o P o 1 tJ 1 44 ! \ •P CO CO o P co 1 γΉ 1 o O 'cd cfl 44 1 q nd 1 bO 1 cO q •P 1 03 1 a I qe 1 « 1 Λ cO 1 o 1 ! 1 1 1 1 1 1 1 1 P >ϊ 1 CM I >> 1 1 P o 1 rp I <P P 1 >> xJ cO 44 q •P I q cO 1 o a 1 P P 1 ná C0 1 CM : CO 1 'CO •P P 1 bO xS q rp >> a 1 •P 1 P O P o O 03 m 1 q <P I q 1 O 1 4> q cO 43 vz q 3 1 >» q 1 1 Q co 1 co 1 o, 1 1 MD 1 q 1 1 i P 1 P <; «=4 03 1 K 1 O 1 0) EH 1 Ph 1 1 fbGUR naftol-AS-BI-β- |>glukuronidáza bezbarvý modrý -D-glukurohát

I Ή fl >

•H +»

•H

>Oi—I

B

M fl > Ή

N

R

<D

-P '>» ř> o

>tSJ 01 cd © © © 44 o I Ή 1 •H I o R M A <R d O ná I 1 1 d © •H <—1 1 1 1 H R © o 1 I 1 1 H t> +> -P fl O 1 >© 1 >© 1 Ή 44 > > a © 1 01 1 © 1 o 1 •rl 1 •H 1 H ·* s s ''x M 1 rM 1 <-1 1 Xi © © © 1 > 1 > 1 >A s P 1 A 1 o 1 o Xi XS N A 1 © I © 1 © R 'S. R + a Ή 1 > 1 > I © R , o 'h o <4 © H ► 1 > Η 1 r-l 1 •rs P > •H A © . R © § >© R +» 1 © •H | © •Η 1 > © 0} Xi «R xa Ά CSJ © © X> W) | N 1 tSJ 1 44 © © © © © O © &amp; 1 rO r-l I XI Η 1 A X>

I 1 1 © '© 1 44 | O 1 -Η 1 © r-I '© I '© 1 © 1 Td 44 •rl a 1 «Η 1 rM 1 a © © © N I O H R +» © >» © 1 44 I n I fl -x. © '© © © © 1 H 1 -p > 1 R O © . Λ o •H 44 1 hO 1 'H 44 I O © © 1 dL· © 1 o o I 3 © « X3 t—1

I

M 4a > o >o «

R 44 o

A

I © 44

rH 3 ,a

CO

A 1 © 1 r—1 1 © I . ? i •P 1 1 1 s1 £ . A '© © I 1 η© I <A 1 R 1 •á. © O i Λ | o <R 1 P 1 H fl 1 r-1 1 Ř '© rP d . >» •a R 1 +» R 1 -P I © P «Ρ Ά 3 m 1 © A 1 © 1 © xa . o O . fl . r-l © 1 1 +» I 1 L w CM 1 44 CM 1 A 1 1 -P © 1 O ! A 1 A © EH I e 1 p5 i 3 tt

•H ADH arginin arginindihydroláza žlutý červený

I

I

I ΙΑ

rH

I 1 1 1 '>» '>> '>» '>» '>» I 1 '>» 1 Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ 1 43 3 a 3 3 3 3 3 3 β I Η Η Η Η Η Η Η Η Η I st- >ν >Ν >Ν >Ν >Ν >Ν >Ν >Ν >Ν | I IM 1 'S 'S 'S '>> '>» '!>» '>» . Ρ 1 ρ -Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ Ρ ρ 1 3 Μ 3 3 3 3 3 3 3 3 3 ι—1 β 1 rH i—1 Η <—1 i—1 γ4 Η Η Η I >Ν > . >Ν >tS >Ν >Ν >Ν >Ν >Ν >Ν >β •Η I \ I >Φ Ρ '>> '!>» '>» •Η I > > > > ϊ> > > > > 1 Ή 3 Ο Ο ο Ο Ο Ο Ο Ο ο >β ο I >Ν >Ν >Ν >0 >« >Ν >ν >0 >Ν | '3 44 Α g C S β g A g g g . Ν ο 43 3 3 3 3 3 3 3 3 ι τ3 Μ h Α Ρ β β β β β . Φ 1 st ο ο ο Ο ο ο Ο ο ο ι ι-l 0} 'S '>» '>> 'S '>> 'S. 'S '>» I '£> β β 3 β 53 β β β β . > 1 Φ Φ Φ φ Φ φ φ φ Φ 1 > ► ► > > > > > > 1 Ρ Í4 Η Ρ β β β β β 1 Φ φ Γ« φ Φ φ φ φ φ > 1 >Ο >ο >0 >ο >0 >ο >ο >0 >ο I Ο >Ν 1 '>> 'r-S 'S '>» I β > > > > > ί- ► > > 3 I Ο ο ο ο Ο ο ο ο ο I β >Ν >Ν >Ν >Ν >tS3 >Ν >Ν >tSJ >« Ο 1 43 β β g g β β β β 1 3 3 3 3 3 0) 3 03 3 Ο 1 st- &amp; h ρ β β β 54 β ! 43 el ο ο ο ο Ο Ο Ο ο Φ Ή 1 g. ο 1 β '>» '>» 'S '>» '>» '>» '>> '>» 1 '>> •Η β β β η β β β β β , β ρ I φ φ φ φ φ φ φ φ φ 1 Φ 3 > > > > > > ► > > . > W 1 43 (4 Ρ Ρ ρ β β β β β 1 β φ φ φ φ φ φ φ φ φ φ Φ &amp; 1 1 1 s}· >ο >0 >ο >0 >0 >0 >ο >ϋ >ο | 1 1 >Ο

1 ! ε ι >5 , Ν | § 1 > 1 3 1 1 · 05 Ή β Φ 1—1 Φ 3 £ ο Ή β Φ Γ—1 Φ 3 >j 44 Ο Ή β φ t—1 φ 3 >> 44 Ο Μ β Φ Γ—1 Φ 3 £ ο Μ β ΦΓ—I© 3 5 ο Μ β Φι—1 Φ 3 ί>> 44 Ο μ β φ ι—1φ 3 £ Ο Μ β Φ γΗ Φ 3 >s 44 Ο 1 1 1 1 Μ β 1 φ Γ—t 1 φ S»1 44 Iο 1 ΉβΦγ4. Φ3ί>» 44 Ο Μ 1 | 1 1 | > Ο 1 1 >0 3 3 1 Ν 1 β *Ο * 3 44 -ρ 1 β Η ι—1 3 ei | β Ο '3 •Η ο Ο 3 *Ο / Φ Α β I 3 43 Ρ Ρ 0 Η β *Ο hO Ρ 0 3 •Η •Η *Ο .3 •Η β 43 Ο 1 3 1 Ό .β β 43 Ρ 43 Η •Η Ο | 44 45 43 3 3 β 44 Φ 3 «Ρ Ρ . >» γ-Ί 3 I •Η 1 •3 Ο 3 !4 β 3 44 I γΗ rrt W β μβ S 3 γ-1 Ρ •Η Ρ >0J ε»ο CO 44 1 1 r—1 -ρ 1 1 3 3 ο 43 φ 1 F0 <4 }25 05 Ο a Ρμ Q | ' >Η 3 ΕΗ Η « Ο <4 05 <4 9 μβ A I 05 <1 ϊ» W μβ a Η « <4 1 CJ

Tabulka 1 - pokračování φ Ή > β '3 G ε •Η β Ο φ Β Ν Φ Φ 03 •Γ-3 3 > Ρ Φ 3 •ο Ο ο § ρ Ή η >01 φ • > ΕΗ »3 ο Í4 • 34 •Η C- 3 Ο Φ >1 33 'Φ eq Ο Η Φ '>> >Ν Ο ‘rl ε <} •r-3 φ 3 •1-5 § 3 φ 1S3 ε ο ο φ Φ Ρ 33 •Η 3 Ο φ 34 Β ·Γ3 « Φ ♦Η b0 34 Φ Φ Λ Φ •Ο ο (4 '3 >03 Β >» Φ •Η β Β •3 3 Ο 3 Μ 33 •Η >03 >?4 33 •"4· Φ <\ι ι—) >» 01 ο r—1 • Λ >» 3 Ο 33 33 Ρ Ή Φ 01 Β 33 > φ Φ Ο '3 >ο Ο 'S Ο !4 > φ β Φ •Γ-3 3 Ρ Ρ Ο 34 φ 3 33 33 Ο > Ο Ο 3 Β 33 Ρ 34 'φ «* >03 Λ 33 33 3 Ο Μ 'Φ >» β 3 34 33 φ ε > ι—1 ·· Φ 3 Φ φ ε >Φ 01 34 33 3 ε 5>» ► >Φ 34 34 •Η PQ Ν φ Ο r—1 Ρ Η» > 00 ο χ—χ >» ι—1 CM !> χ—χ - 17

Tabulka 2 Výsledky získané při vyhodnocení kmenů streptokoků

Test c<89a ©C5O2 oC505 rf7: VP - - - HIE - - - - ESC - - - *· PYRA - - - - <*GAL + + 4- - f> GUR - «· - - β GAL - - - - PAL + + + + LAP + + + + ADH + + 4- RIB «· - MB - ARA - - - - MAN - - - - SOR - - - LAC + + + TRE (+) - - 4- INU - «> - RAP 4" + + «a AMD + + +

Tabulka 2 - pokračování

Teat ^B9a <<502 oC5O5 oC7213

GLYG hemolýza vždy qC-

S.sanguis II

S.sanguis II

-hemolýza(zelená he-molýza)S*aanguis II S.mitis - 19 -

Pokusy Předmětem dále popsaných pokusů bylo reko-lonizovat pacienty s opakující se tonsilitidou za pou-žití prostředku podle tohoto vynálezu, který obsahuječtyři kmeny ^-streptokoků a kterýžto prostředek inhibujrůst streptokoků ze skupiny A u pacientů, a analýzovatochrannou schopnost proti tonsilitidě vyvolané strepto-koky ze skupiny A, která se opakovaně vrací, u novéflory.

Rodina A (rodiče a tři děti) prodělala 25akutních tonsilitid během posledních 3,5 měsíce roku1986. Opakovanými kultivacemi vzorků odebraných z krkubyla zjištěna přítomnost A-streptokoků GAS T-typu12 u všech členů rodiny. Členové rodiny alternativně dostávali fenoxymethylpenicilin (12,5 mg/kg tělesnéhmotnosti dvakrát denně po dobu 10 dní) a erythromycin(20 mg/kg tělesné hmotnosti dvakrát denně po dobu 10dní) , ale nastalo pouze přechodné zlepšení.

Rodina B (rodiče a dvě děti) prodělala 11akutních tonsilitid vyvolaných streptokoky (GAS T-typ12) během posledních # měsíců roku 1986. Jako v případěrodiny A, všichni členové rodiny B byli ošetřenifenoxymethylpenicilinem a erythroiny činem. Určité A-strej - 20 tokokální izoláty od rodiny B byly resistentní protierythromycinu [minimální inhibiční koncentrace MICbyla větší než 8 mg/1]. Výskyt tonsilitidy vyvolanéstreptokoky u obou rodin je uveden v tabulce I.

Izolované ^C-streptokoky od celkem devítipacientů z obou rodin vždy postrádaly růstovou inhibiční}schopnost proti vlastním GAS. Metoda použitá pro dolo-žení inhibice růstu, to znamená bránění růstu bakterií,proti GAS byla popsána Grahnem a kol· (E. Grahn, S. E. Holm, K. Roos a C. Ekedahl: Interference of alpha--haemolytic streptococci isolated from tonsillarsurface, on beta-haemolytic streptococci, Streptococcuspyogenes - a raethodological study. Zentralblatt furBakteriologie, Mikrobiologie und Hygiene A 1983, 254:459-468). V únoru 1987 všichni členové obou rodin byliošetřeni prostředkem podle tohoto vynálezu. Všemdevíti pacientům byl prostředek v množství asi 10? CPU/mlpro každý ze 4 ©{-streptokoků ve farmaceuticky přija-telném prostředí nastříkán nosem na epipharynx aústy do pharyngotonsilární krajiny. Tento postup se opa-koval jednou denně po dobu 4 dnů, potom jednou týdněpo dobu jednoho měsíce a posléze jednou měsíčně po dobudvou nebo tří dalších měsíců. Pacienti byli kontrolování - 21 pomocí kultivace vzorků odebraných z krku opakovaněběhem 8 měsíců od začátku ošetřování. Na začátku reko-lonizace vybranými <jf-střeptokoky z prostředku podletohoto vynálezu všech devět pacientů nebylo schopnobránit růstu svých vlastních GAS pomocí &amp;-streptokoků. V rodině A byli všichni členové nosiieži GAS předošetřením, zatímco naproti tomu v rodině B nebyl žádnýnosič GAS. Žádný z rodiny A ani z rodiny B neměl jakékoliklinické příznaky infekce. Čtyři měsíce po poslednímobdobí ošetřování byl pouze jeden pacient stále nosičempůvodního kmene GAS a ten stejně tak individuálně post-rádal inhibující «f-streptokoky. U všech zbývajícíchpacientů byl zjištěn výrazný růst podávaných «f-strepto-koků. Tento růst byl potvrzen typickým růstem inhibu-jících vzorků proti rozdílným kmenům GAS a jejich bio-chemickými reakcemi. Jak je zřejmé z tabulky II, kteráukazuje četnost ošetřování a mikrobiální výsledky popodání ^-streptokoků inhibujících GAS, děti z rodiny Bpřicházely do styku s GAS v místě, kde se o ně pečovaloa byly nosiči těchto bakterií, ale nebyly zasaženyinfekcí. Rodiče v této rodině během stejného č^asovéhoobdobí nebyli rovněž nosiči.

Tabulka^ ukazuje výskyt tonsilitidy vyvolané strepto- 22 koky před. a po rekolonizaoi ^streptokoky. Po rekoloni-zaci ef-streptokoky inhibujícími GAS a během následujícíhoobdobí 8 měsíců žádný z pacientů z obou rodi/nemělklinické příznaky tonsilitidy vyvolané streptokoky. Jepravda, že někteří členové rodiny během této doby bylinosiči GAS, ale žádný z nich nebyl zasažen tonsilitidou.

Jak provedené pokusy,dokládají, prostředekpodle tohoto vynálezu se může velmi úspěšně používat jakpři profylaxi, tak při ošetřování tonsilitidy vyvolané streptokoky. Prostředek se muže používat souběžně s ukon-čením zvolené aplikace léčby penicilinem v případě, kdyje žádoucí velmi silné a účinné ošetřování tonsilitidy. 23

Tabulka I Výskyt tonsilitidy vyvolané streptokoky

Rodina Pohlaví Věk Měsíc roku 1986 VII VIII IX X XI XII 1987 I VI A mužské 30 X X X X ženské 27 X X X XXX X mužské 7 X X X X X X X mužské 4 x X X X X X X ženské 1 x X X X X X X X B mužské 36 X ženské 33 X X X X X mužské 4 X ženské 1 x x

X X 24

Tabulka II

Výskyt mikrobiologických výsledků po podání prostředkupodle vynáleau obsahujícího oř-streptokoky inhibující GAS

Rodina Pohlaví Věk Měsíc roku 1987

II III IV V-------VIII

A mužské 30 +++ + - - - - - ženské 27 +++ M — - + - - mužské 7 4-—— - - - - «· - mužské 4 ++"· M Μ M - - - M ženské 1 +++ - - - - - - «» B mužské 36 MMM - - - - - - ženské 33 MMM M . - - - «· - mužské 4 MMMM + + + - + + ženské 1 + + + + M M

Vysvětlivka:

+ znamená přítomnost GAS £

Z y ')

I LPt

CM

I

H

H

H OSAdr—| 3 £> ctí

EM 3

Ad X) Φ

>ÍH

P

Cl o q

A

•P

O

Ctí « •a q o i—i o

Ad © q o

PM X! &amp;

O

Ad

O

P ft Φ q

P 03

I % •rl

O 05 63

•P

S

O t—1 o

Ad © q

O 04 03

tJ Φ

>ÍH 04 £

O

Ad

O

P 04 0) q

P

Cl 1 «£_

t>cocr>r-I 3

AI

O q o

'P 03 >®

H

H X!

H X! 'Φ o > >» > %

•P

P •rl 03 q

O

P

P X»

Ad

Dl £

X X X X

X X X X X

* X X X X

X

X X X X X

'P

O B3 C3 •rl q o Γ-1 o

Ad

O h

•rS Φ >q pq M3

CO CTi

rP 3

Ad

O q o

'P

Dl >Φ xd

H

H

H

H > 3 63 0)

rP 'Ctí >Φ 1 o X- C- P" fp kD ΙΛ p- rP q ř* CM ΠΊ γ*Λ >» J > 'rl > 1 'Φ '© 'Φ 'Φ 'Φ 'Φ 'Φ 'Φ 'Φ o ctí . Ad Ad Ad AJ Ad AJ Ad Ad AJ P iP 1 Dl 03 Dl 03 03 01 03 03 03 o 43 >63 q >63 >63 q >63 q >63 q 43 O i 3 φ 3 3 φ 3 φ 3 φ O pq ε >63 B s >63 S >63 ε >63 Φ

rP

Ttí

O 04

Ctí q •rl T3

(S w

Claims (9)

I 4α-, ADVOKÁTNÍ POftMMA?. 10 115 04 PRAHA lyŽ^ná 25 - 26 - PAT-ENTOVÉ NÁROKY

1, Farmaceutický prostředek k profylaxi - tA- iS 3 * 80 0 1 a/nebo ošetřování tonsilitidy vyvolané pstrepllokoky, I vyznačující se tím, že obsahuje alespoň j°^*>4_ζ·ΐ·ν<ππΗ - Jti '*-·· · schopný kmen mikroorganizmu, vybraný ze souboru zahrnují-cího kmeny Streptococcus sanguis II s depositními čís- ly NCIB 40 104, NCIB 40 105 a NCIB 40 106 a kmenStreptococcus mitis s depositním číslem NCIB 40 107 ;a kmeny streptokoků s v podstatě stejnou schopností in-hibovat β-streptokoky, jako mají deponované kmeny,ve farmaceuticky přijatelném prostředí, ve kterém se mik-roorganizmům uchová životaschopnost.

2. Farmaceutický prostředek podle bodu 1.,.,vyznačující se tím, že každý kmen streptokoků je v pros-tředku přítomen v koncentraci od 10^ do 10^%FU/ml, s výhodou od 105 do 109 CFU/ml.

3. Farmaceutický prostředek podle bodu 1 nebo 2, vyznačující se tím, že farmaceuticky přijatelným pros- tředím je fyiiologický ^roztok chloridu sodného, pleío-R vé mléko nebo Nutramigen .

4· Farmaceutický prostředek podle některého 27 - z předcházejících bodů, vyznačující se tím, že je veforma postřiku pro nasální a/nebo perorální podání.

5· Farmaceutický prostředek podle některéhoz předcházejících bodů, vyznačující se tím, že obsahujevšechny čtyři kmeny mikroorganizmů.

6. Použití farmaceutického prostředku obsahu-jícího alespoň jeden životaschopný kmen mikroorganizmu,vybraný ze souboru zahrnujícího kmeny Streptococcussanguis II s depositnírai čísly NCIB 40 104, NCIB40 105 a NCIB 40 106, kmen Streptococcus mitis s depo-sitním číslem NCIB 40 107 a kmeny streptokoku s v pod-statě stejnou schopností inhibovat /^-streptokoky,jako mají.deponované kmeny, ve farmaceuticky přijatelnémprostředí, ve kterém si mikroorganizmy uchovají života-schopnost, k profylaxi a/nebo ošetřování tonsilitidy vyvo-lané$3treptokoky»

7· Použití podle bodu 6, vyznačující se tím,že se používá na konci léčebné kúry penilicinu.

8. Způsob výroby farmaceutického prostředkuk profylaxi a/nebo ošetřování tonsilitidy vyvolanéto-streptokoky, vyznačující se tím, že se alespoň jeden 28 životaschopný kmen mikroorganizmu, zvolený ze souboruzahrnujícího kmeny Streptococcus sanguis II s depositními-čísly NCIB 40 104, NCIB 40 105 a NCIB 40 106 a kmenStreptococcus raitis s depositním číslem NCIB 40 107 akmeny streptokoků s v podstatě stejnou schopnostíinhibovat Φ-streptokoky, jako mají deponované kmeny, při-dá k farmaceuticky přijatelnému prostředí, ve kterémmikroorganizmy uchovají svou životaschopnost·

9· Způsob podle bodu 8, vyznačující se tím,ža farmaceuticky přijatelné prostředí^/tvoří fyziologickýroztok chbridu sodného·