FI101452B - Menetelmä tonsilliitin ennalta ehkäisyyn ja/tai hoitoon tarkoitetun fa rmaseuttisen valmisteen valmistamiseksi - Google Patents

Description

101452

Menetelmä tonsilliitin ennalta ehkäisyyn ja/tal hoitoon tarkoitetun farmaseuttisen valmisteen valmistamiseksi - För-farande för framställning av ett farmaceutlskt preparat av· sett för profylax och/eller behandllng av tonsllllt 5 Tämä. keksintö koskee menetelmää sellaisen farmaseuttisen valmisteen valmistamiseksi, joka on tarkoitettu S-streptokokin aiheuttaman tonsilliitin ennalta ehkäisyyn ja/tai hoitoon.

10

Tonsilliitti eli kitarisatulehdus on yleinen terveysongelma. Arvion mukaan Ruotsissa likimain 300 000 ihmistä sairastaa vuosittain akuutin tonsilliitin. Noin 30-50 % näistä tapauksista on β-streptokokin aiheuttamia. Tonsilliittia hoidetaan 15 tavallisesti penisilliinillä, esimerkiksi fenoksimetyylipeni-silliinillä, mutta noin 10-25 %:ssa tapauksista hoito on tehoton ja potilas sairastuu toistuvasti tonsilliittiin. Tonsilliitti on erityisen yleinen päiväkodeissa, kouluissa ja myös perheissä, joissa ihmiset ovat läheisessä kosketuksessa 20 toisiinsa ja tartunnan mahdollisuuksia on useita. Seurauksena ovat toistuvat lääkehoidot, lääkärintodistukset ja penisil-:.· · liinihoito, jotka eivät ole ainoastaan suuri terveydellinen, U' vaan myös taloudellinen ongelma.

25 Syiden suhteellisen usein toistuviin tehottomiin hoitoihin • · oletetaan olevan potilaan vastustuskyvyn paikallisten puut-teiden ja yleisen vastustuskyvyn puutteen ohella riittämät- • · · tömässä antibioottivaikutuksessa infektiokohdassa. Viimeksi . . mainittuun sisältyy sellaisia tekijöitä kuten potilaan so- • · « *·];' 30 veltuvuus lääkitykseen, penisilliinin kysymykseen tuleva an- • · · *·* ’ nostus, annosten lukumäärä ja lääkkeen huono absorboituminen.

·;··· Myös penisilliinin inaktivoituminen β-laktamaasia tuottavien bakteerien vaikutuksesta, jolloin penisilliinin konsentraatio infektiopesäkkeessä on riittämätön, on mainittu. Muita β-35 streptokokkitonsilliitin tehottomiin hoitoihin liittyviä te- 1 I II t ' ‘ kijöitä ovat normaaliflooran häiriöt, joista on seurauksena lisääntynyt alttius streptokokki-infektioille ja ryhmän A β-streptokokin vastustuskyky penisilliiniä kohtaan.

2 101452

Tiedetään, että nielun flooran bakteerien interferenssillä saattaa olla tärkeä merkitys tonsilliitissa. On osoitettu, että eräät streptokokkikannat inhiboivat tavallista infektiota aiheuttavien S-streptokokkien kasvua. Tämä koskee eri-5 tyisesti tiettyjä a-streptokokkeja. Ihmisiltä, joilla on edellä mainittuja toistuvia infektioita, puuttuu usein normaalista nielufloorasta inhiboivat a-streptokokit, kun taas ihmiset, joilla näitä a-streptokokkeja on, sairastuvat harvoin tonsilliittiin.

10

Sanders ym. (Sanders, C., Nelsen, G., Sanders, E.; Bacterial interference, II. Epidemiological determinants of the antagonistic activity of the normal throat flora against group A streptococci. Infection and Immunity 1977, 16:599-603) ovat 15 osoittaneet, että tietyt Streptococcus viridans -kannat inhiboivat ryhmän A streptokokkien (GAS) kasvua. Sanders osoitti myös normaalisti esiintyvien a-streptokokkien inhiboivan vaikutuksen GAS:ää vastaan infektoituneissa lapsissa.

20 a-streptokokkien suojaavan vaikutuksen nielun β-streptokokki-infektioita vastaan ovat osoittaneet myös Grahn ja Holm 4 : : : (Grahn, E., Holm, S.E.: Bacterial interference in the throat flora during a streptococcal tonsillitis outbreak in an apartment house area. Zentralblatt fur Bakteriologie, Mikrobiologie 25 und Hygiene A 1983, 256:72-79) ja Roos ym. (Roos, K., Grahn, • · ....: E., Holm, S.E.: Evaluations of betalactamase activity and • · φ·;.# microbial interference in treatment failures of acute strepto- • · « coccal tonsillitis. Scandinavian Journal of Infectious .. Diseases 1986, 18:313-19). He ovat selvittäneet, että interfe- • · · *·|·* 3 0 roivien a-streptokokkien puuttuminen on eräs pääsyy strepto- '·* * kokkien aiheuttaman tonsilliitin usein tehottomaan hoitoon.

• · ' : Edelleen Beck (Interference by an α-hemolytic streptococcus t of β-hemolytic pathogenic streptococci, Inflammation, 3:463- ·' 35 465, 1979) on löytänyt erään Streptococcus viridans -kannan, ' 1 jolla on erittäin voimakas estokyky GAS:ää vastaan ja hän on ehdottanut tämän kannan "istuttamista" ihmisiin, jotka sairastuvat toistuvasti streptokokkitonsilliittiin. Samanlaisen 3 101452 raportin ovat aikaisemmin esittäneet Sprunt ym. (Sprunt, K., Leidy, G., Redman, W.: Abnormal colonisation of neonates in an ICU: Conversion to normal colonisation by pharyngeal implantation of alpha-hemolytic streptococcus strain 215. Pe-5 diatr Res 14:308-313, 1980), jotka istuttivat erään α-strep-tokokkikannan 22 lapsen, joiden oli arvioitu olevan tartuntavaarassa, nenänieluun. Istutus osoittautui onnistuneeksi 16 lapsessa ja se aiheutti normaalitlooran muutoksen 7 lapsessa siinä suhteessa, että istutettu kanta oli ainoa a-strepto-10 kokkikanta, joka oli löydettävissä 4-18 vuorokautta istutuksen jälkeen.

Normaalitlooran bakteerit estävät sisään tulevia bakteereja eri tavoin ja sen takana olevia tekijöitä ovat esimerkiksi 15 kilpailu tärkeistä kasvutekijöistä, pH:n muutokset, kuona-aineiden kerääntyminen, peroksidin, bakteeritoksiinien ja -entsyymien muodostuminen ja myös bakteriosiineina tunnettujen aineiden tuotanto. Tunnetut bakteriosiinit ovat hyvin samankaltaisia antibioottien kanssa, mutta eroavat niistä sii-20 nä, että niillä on erittäin selektiivinen vaikutus eivätkä ne häiritse erittäin tärkeätä anaerobista bakteeriflooraa. a-· streptokokkien β-streptokokkeihin kohdistuvan estovaikutuksen on osoitettu riippuvan suuressa määrin a-streptokokkien tuot-tamien bakteriosiinien läsnäolosta. Tarvittaisiin tehokas 25 farmaseuttinen valmiste β-streptokokin aiheuttaman tonsillii- • · ....: tin ennalta ehkäisyyn ja hoitoon.

• · · « · ·

Keksinnön mukaisesti on näin ollen aikaansaatu β-streptokok- . . kitonsilliitin ennalta ehkäisyyn ja/tai hoitoon tarkoitettu • « · 30 farmaseuttinen valmiste, joka valmistetaan siten, että elin- • · · ’·] * kelpoisia mikro-organismikantoja eristetään a-streptokokeis- ·:··: ta, kasvatetaan ja testataan β-streptokokkeja vastaan, minkä

jälkeen tehokkaimmat kannat valitaan, jotka kannat on valittu ryhmästä, jonka muodostavat Streptococcus sanguis II -kannat, '···' 35 joiden talletusnumerot ovat NCIB 40104, NCIB 40105 ja NCIB

40106, Streptococcus mitis -kanta, jonka talletusnumero on NCIB 40107, ja Streptococcus sanguis ja Streptococcus mitis -kannat, joilla on olennaisesti sama kyky inhiboida β-strep- 4 101452 tokokkeja kuin talletetuilla kannoilla, ja sitten ainakin yksi valittu kanta lisätään johonkin farmaseuttisesti hyväksyttävään väliaineeseen, jossa mikro-organismit säilyttävät elinkelpoisuutensa, jolloin kutakin streptokokkikantaa on 4 10 5 valmisteessa läsnä konsentraationa 10 -10 CFU/ml, mieluiten 105-109 CFU/ml.

Edellä mainittua valmistetta käytetään tonsilliitin ennalta ehkäisyyn ja/tai hoitoon, mahdollisesti penisilliinikuurin 10 jälkeen.

Tämän keksinnön mukaisesti valmistetun farmaseuttisen valmisteen on havaittu olevan erittäin tehokas β-streptokokin aiheuttaman tonsilliitin ennalta ehkäisyssä ja hoidossa. Tuonnem-15 pana kuvatuissa kokeissa keksinnön erään suositeltavan toteutusmuodon mukaisen valmisteen, jossa kaikki neljä eri a-streptokokkikantaa ovat läsnä samanaikaisesti, todettiin eliminoivan 95-98 % β-streptokokeista, jotka oli eristetty kolmella paikkakunnalla Ruotsissa. Eri määrien kombinaatiot mai-20 nituista mikro-organismikannoista ovat nekin tehokkaita, mutta ehdottomasti paras teho on tähän mennessä saatu kaikkien neljän kannan ollessa läsnä. Erityisesti NCIB 40104 -kanta on erittäin tehokas yksinään, kun taas muut 3 kantaa eivät ole yksinään yhtä tehokkaita kuin NCIB 40104.

25 • ·

Farmaseuttisesti hyväksyttävänä väliaineena on mieluiten NaCl, kuorittu maito tai Nutramigen (rekisteröity tavara- « · · merkki, maaliskuu 13, 1981, rekisteröintinumero 175669, hal-. . tija Mead Johnson & Company, Evansville, Ind., USA), mutta *·[· 30 muitakin farmaseuttisesti hyväksyttäviä väliaineita, joissa '·’ * mikro-organismien elinkelpoisuus säilyy, voidaan käyttää.

·;··: Keksinnön erään toteutusmuodon mukaan käytetään fysiologista ; keittosuolapuskuriliuosta, jonka tehtävänä on muodostaa iso toninen koostumus, jonka pH on neutraali.

Kutakin mikro-organismia on valmisteessa läsnä mainitussa väliaineessa 104-1010 CFU/ml (pesäkkeen muodostavia yksikkö-jä/ml), suositeltavimmin 105-109 CFU/ml.

35 5 101452

Neljän mikro-organismikannan, joista kolme kuuluu sukuun Streptococcus sanguis II (tästedes nimellä a89a, a502 ja a.505) ja neljäs sukuun Streptococcus mitis (tästedes nimellä (X7213) vastineita tavataan useimpien ihmisten nielun normaa-5 lifloorassa. Kanta a89a vastaa kantaa NCIB 40104 ja kannat a502, a505 ja a7213 vastaavat kantoja NCIB 40105, NCIB 40106 ja NCIB 40107, vastaavassa järjestyksessä.

Keksinnön mukaisessa valmisteessa olevat neljä edellä mainit-10 tua kantaa eristettiin seuraavan menettelytavan mukaisesti. Noin 200 henkilöstä eristettiin kustakin viisi a-streptokok-kikantaa eli kaikkiaan noin 1000 kantaa. Näitä kantoja testattiin eri tyyppisiä β-streptokokkeja vastaan in vitro seu-raavalla tavalla.

15

Kaikkia α-streptokokkikantoja kasvatettiin ensiksi TY-liha-liemessä, pestiin ja laimennettiin optiseen tiheyteen 0,3 500 nm:llä (Viatron). Tämä vastasi 104-105 CFU/ml. Minitippoja näitä kantoja (sisälsivät 10-100 CFU/ml) siirrostettiin veri-20 agarmaljoihin (25 kantaa kuhunkin maljaan) Steersin neula-siirrostimella (ks. Steers, E., Foltz, E.L., Graves, B.S., Riden, J.: An inocula replicating apparatus for routine testing of bacterial susceptibility to antibiotics. Antibiot Chemother 9:307-311, 1959) ja niiden annettiin kuivua 10-15 25 minuuttia. Tässä kokeessa käytettyjen agarmaljojen valmis- • · tusaineena oli BBL Colombia Agar Base (Div. Becton Dickinson • · & Co, Cockeysville, MD 21030, USA) ja 5 % steriili defibri-noitu hevosen veri. pH oli 7,49-7,57.

*·*·" 30 Eri β-streptokokkikannat levitettiin heti kunkin a-strepto- • · · *·* ' kokkikannan viereen ja maljoja inkuboitiin 5 % CC^issa ·;··· 37°C:ssa. Joitakin maljoja inkuboitiin anaerobisissa olosuh teissa peroksidituotannon eliminoimiseksi. Sen jälkeen re-kisteröitiin α-kantojen inhiboiva vaikutus β-streptokokkei- 6 101452 hin tutkimalla kysymyksessä olevia kasvunestomalleja, jotka voitiin lukea agarmaljoilta.

Parhaita inhiboivia kantoja tutkittiin edelleen eri kombi-5 naatioina β-streptokokki-interferenssin kannalta ja välit-ti in neljä kaikkein tehokkainta kantaa. Näitä neljää kantaa eli a89a, «502, «505 ja a7213 viljeltiin sitten erikseen TY-1ihaliemessä, joka sisälsi 0,2 % glukoosia, 37ct):ssa yön yli, pestiin ja lietettiin suolaveteen. Neljää valittua kantaa 10 testattiin sitten 100 eri β-streptokokkikantaa vastaan, jotka oli saatu Umeästa, Uppsalasta ja Göteborgista, ja 80 %, 92 % ja 89 % näistä kannoista vastaavassa järjestyksessä inhiboi tui.

15 Keksinnön mukaisessa valmisteessa olevat neljä mikro-orga-nismikantaa voidaan suspendoituna johonkin farmaseuttisesti hyväksyttävään väliaineeseen jäädyttää -20it:een tai pakas-tuskuivata säilytystä varten. Potilaalle annossa voidaan sopivasti käyttää pumppusumutintä, jolla sulatettu nestemäi-20 nen valmiste voidaan antaa suun kautta ja/tai nenään.

Keksinnön erään toteutusmuodon mukaan sumutin voi sisältää g α-streptokokkisuspension, joka sisältää 10 CFU/ml 5 ml:ssa fysiologista keittosuolaliuosta. Jokainen sumutinannos si-25 sältää 10 CFU, mikä vastaa noin 0,01 ml.

• ·

Keksinnön mukaisen valmisteen sisältämät mikro-organismikan- • · · nat on talletettu National Collection of Industrial & Marine , Bacteria Ltd'iin (NCIMB), Torry Research Station, PO Box 31, 30 135 Abbey Road, Aberdeen AB9 8DG, Iso-Britannia, 3. helmi-

*·* * kuuta 1989, ja niillä on tai letusnumerot NCIB 40104, NCIB

40105, NCIB 40106 ja NCIB 40107. Mainitut organismikannat • · tulkitaan tai luokitellaan API 20 -järjestelmän mukaisesti • · · ·. (API-system - La Balme les Grottes - 38390 Montalieu - Ver- ··· 35 cieu, Ranska). Tulkintataulukko ja tulkintatulokset esite- ‘ * tään seuraavilla sivuilla.

101452 Ή •Ρ +j (0 0 -~4 (ύ

«-Η 4-* (ö »-H

o e ρ ρ ••Η 3 Μ Ο ·Η ·Ρ ρ §> +> 3 ρ ·ρ ρ C Ρ ρ \2 d Μ ρ (D ρ ρ

C C Τ >WQ)CO)(U

S*H 0 CS *"—v C H H 1—4 i—< d e p d 3 o e o o β C '»H w H L| «H Ή ·ι—Ι Ή •H 3 fi w *-j O > W > > > <g Cm ·< (Q <d <Ö •pH ·Η fj M ·Μ Ή (rt ρ p io e p d d p ρ p <D S g d p ρ ^ 3 i "3 <u I 5§3 ie ö C d ρ 3 _d S C 3

Cl· 3 > v H T X pp e -p e >

£ g S r M

9 d e -p d ¢01¾ MP d d _ e e ° -pis:Qc e -p O Ό T— H L S 4J Ή ·Ρ ·<ύ «ρ O <D d N -P :d " P :d -Ρ 3 \ d «f ς ^ £ -ρ -P W -p "p -p p

H <N -PC-P:Oqq+^-PM -P -P P -P

h φ Ρ P d d :[d p e -pp >h P

& fl e g -h ί ® λ; > m kaiutu ? O "p pH1—11—' CD Lh C e Q) p ρ

e \cp;ddd5:g)Q ;ö :ö 0 -pO

Oi + Z p t> d d >< Φ -p e ρ ρ -ρ -ρ a} -ρ ö MW >> NPdd p -P d > p > > ^ d^c - -P :(3 :¾ ^ S C § •pQ.c a> δ d e d > > e at ;ö ® ··* ? ö ·-· a +J *U w :0 «-h 4J ^ +> 4J id -H w 4J > 4J <Ö *H d <d *h (d <d -h ·h *h (d l cd jt J > (ö C ^ m |j Z > C Ρ Ό at o > > :u ppi u p S-H e £ 3 v I j 6 > , j g

Ή ·Η -»H

3 0 -p M

d p p >i d ρ ρ e >i d

(dc (d M ·Η ·ιΗ *pH 4J

p>ip dwWWd

β> O -ρ ρ d d d P

•p M 3 W ipdddM

Λ! ρ p ro >1 Ό Τ3 Ό O

ρ e d >1 -ρ ·ρ ·ρ m 3 0 ö ·ρ τί e i860- h \ ·ρ w -p ö o p o e P C >1 W 'U-ppgp®

O -ρ >1 n -p W Λ! 3 j4 C

-ρ -ρ 1—1 p ro ® ,£j ro -p P 003 0 d p 3 p p ρ H ρ UTjdPdd • · 1 Ilf ε-g ? p r 3 ... K <ffica CUdweacart! • · * • » ·

• P

Ό

I Ή *H

—» W -μ

• H Q ·Η Ή 4J

·;··: SS ρ Ό d 1 S d p 1 ρ d

··· ρ Ό p >1 Md I Q M

·.· * S-ρ d n. ib S e e o ρ -ρ S e floio id p .·,·. Ρ Ρ Ρ -Ρ 8ρΛ5§^ρ^ι p 3 ΐ S S SS-iS-i-SSB1 δ .··. »4 ro H -p pp £d pp pp p ; : p > 3 p OM-iontocnpi^p ··· W 3 e. 3 ^d PI dd d

• Λ S 5ä ShÖCQQPJQZp Z

• 3 > ρ ΊΑ >iiidiid 1

<·· CO CU S U CL. <N Ip*l 2 ca CNÖ1 <N

• · « ·

.»,1! *P

ί & s 1 I I 8 i i 8 101452 (ti

•H

5 1§gggg§ss§ c o +>CCÖÖCCCCC _ o r—I Ή ·Η -Ή -H ·<Η -"H · -H - .H β (0 ^rrororororororororo S (Xl

> CN-P-P-PPPPPPP C

i—I rH rH r—I »-H i-H 1 pH (H 1 «H J2 (« q φφφφφφφφφ ro £ q -h --.3 ««««««««« -p n Φ ·-< M C ”φ <ti

I I 3 2 ggggggggg "S

-S — 3 £3 roqqqqqqqqq 3 < • H Τ’" flj O CU 1 Ή - «Ή ·Η 1H -«-I ·Η ·1Η Ή ·Η Ή (ο · +J wp c 4->(ti(ti<ti(ti<ti(ti<ti(ti(ti ^ S ti -w g+j^^j-p-p-p-p-p-p ^ St) 8--(> ρφφφφφφφφφ -h o ft -P « Ρ β

P -h 'iN SNSNSSVS -π E

^ M - ·—I ·Η Ή -Η -Η ·Η Ή Η ·Η [Π Q

loi !! 111 L L il

r-( T- -H ^ -P

5 ®:§ ggggggggg .5 2 ς (tiSqeScqqqq x:

Sh φ ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η Ή ·Η Ή ·Η Η '»Η ·Η (/) ^ISSlillll I ^:e,s

•5 ft, (ti C C p ti ® S

S ,|J ;Q ·Η ^ ·Η >H ·Η 'H ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η 0 (0 Q) --( W -P <ti H -h g S' -S > 1 (tiÖÖöÖÖoÖÖÖ q B. I Jl z xj ip i q S ^2 e 1 g g g g g g g g g 'ro lei m +»qqqqqqqqq s .¾ ο Λ

Q H ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η ·Η Ή ·Η 3 (H

^ :R1 -2 '3 Μ ·Η ·Η ·1-Ι (ti

j ι §« I

- - - «il I Ξ £ -¾ 31 c gsggggggs S "iq H Ct3 qqqqqqqqq q q 3 ·1 \ (ti -rH >H ·Η ·Η ·Η ·Η «»H ·Η ·Η ·Η Η 4-1 (ϋ * 1 -2 ·5 ,^.p.pjjppppp -ρ §§

... +J 1·η β ΡΡΡΡΡΡΡΡΡ -Ρ +1 U C

ν · iS 9 'S §,§,§,§,§·§,§,§, & §· a aa &&&$&&$& & ä " -1 (β p q q ·η -h o ro (ti ε ·:··: Jti ι -w ro p ..· ro Λ p I t ι 0 V 1 ι --· --. q q ö.

• fS Ό -h es Φ o ro . . ρ ι 2 B w M1 · · -h -h g o ·Η ”1 . -q -q T3

*·1·· ro .51 '3 8 - - -h 8 -a 8 S. δ i p S

:...· 2 9 fc q 8 -9 s -¾ 8 ro Ξ .5 5 [ 2.Ϊ ..:· I as a 3 s h s n s In ....; p -h ® • · 4j E-· ή h 9 101452

Streptokokkikantojen tulkinnassa saadut tulokset

Testi «89a «502 «505 «7213 5 VP - HIP - ESC - PYRA - «GAL + + + - 10 BGUR - BGAL - PAL + + + + LAP + + + + ADH + + + + 15 RIB - ARA - MAN - SOR - LAC + + + + 20 TRE (+) - - + INU - . ,i'. RAF + + + + , , AMD + + + + GLYG - 25 hemolyysi - kaikilla «- ; . hemolyysi (tuore [ ’ hemolyys i) • · · # · · 30 S.sanguis II S.sanguis II S.mitis

S. sanguis II

• · • · · • · « • · · • · • · · • · · • · 1 · · • · » · • · · ίο 101452

Kokeet

Seuraavien kokeiden tarkoituksena oli rekolonisoida potilaat, joilla oli toistuvia tonsi11iitteja, käyttämällä keksinnön mukaista valmistetta, joka sisältää neljä CC-strepto-5 kokkikantaa ja joka valmiste inhiboi potilaiden GAS:n, ja analysoida uuden flooran suojaamiskyky toistuvia GAS-tonsil-liitteja vastaan.

Perhe A (vanhemmat ja kolme lasta) oli sairastanut 25 akuut-10 tia tonsi11iittia vuoden 1986 viimeisen 3,5 kuukauden aikana. Toistuvat nielunäytteiden viljelyt olivat osoittaneet, että perheen kaikilla jäsenillä oli β-streptococcus GAS T-tyyppi 12. Heille oli annettu vuorotellen fenoksimetyy1ipe-nisilliiniä (12,5 mg kehon painokiloa kohti kahdesti päiväs-15 sä 10 vuorokauden ajan) ja erytromysiiniä (120 mg kehon painokiloa kohti kahdesti päivässä 10 vuorokauden ajan), mutta paraneminen oli vain väliaikaista.

Perheellä B (vanhemmat ja kaksi lasta) oli ollut 11 akuuttia 20 streptokokkitonsi11iittia (GAS T-tyyppi 12) vuoden 1986 viimeisen 3 kuukauden aikana. Kuten perhettä A kaikkia perheenjäseniä oli hoidettu fenoksimetyy1ipenisi11iini 1lä ja erytromysi ini 1 lä. Eräät perheestä B eristetyt B-streptokokit olivat resistenttejä erytromysiini 1 le [MIC (pienin bakteere-25 ja tappava konsentraatio) suurempi kuin 8 ml/1]. Streptokok- a kitonsi11iit in esiintyminen näissä kahdessa perheessä on *:··; esitetty taulukossa 1 .

• · · • · · • · ·

Molempien perheiden kaikkiaan yhdeksästä potilaasta eriste-30 tyiltä «-streptokokeilta puuttui kasvua estävä kyky heidän • · ... omaa GAS:äänsä vastaan. Menetelmää kasvun estymisen eli bak- • · · • · · *. teerien yhteisvaikutuksen osoittamiseksi GAS:ää vastaan ovat « · kuvanneet Grahn ym. (Grahn, E., Holm, S.E., Roos, K., Eke- « « · ί : dahl, C.: Interference of ai fa-haemolytie streptococci iso- 35 lated from tonsillar surface, on beta-haemolytic streptococ- *”*. ci, Streptococcus pyogenes - a methodological study. Zent- • · ralblatt ftir Bakteriologie, Mikrobiologie und Hygiene A 1983, 254:459-468).

101452 11

Helmikuussa 1987 molempien perheiden kaikkia jäseniä hoidettiin tämän keksinnön mukaisella valmisteella. Valmistet- η ta, joka sisälsi noin 10 CFU/ml kutakin 4 «-streptokokkia farmaseuttisesti hyväksyttävässä väliaineessa, sumutettiin 5 nenän kautta nenänieluun ja suun kautta nielun ja kita- risojen alueelle yhdeksälle potilaalle. Tämä prosessi toistettiin kerran päivässä neljän päivän ajan, sitten kerran viikossa kuukauden ajan ja sitten kerran kuukaudessa seuraa-van kahden/kolmen kuukauden ajan. Potilaat tarkastettiin 10 viljelemällä nielunäytteitä toistuvasti 8 kuukauden ajan hoidon alkamisesta lähtien. Aloitettaessa keksinnön mukaisen valmisteen valittujen «-streptokokkien rekolonisointia kaikilta yhdeksältä potilaalta puuttui heidän omaa GAS:äänsä vastaan vaikuttavia «-streptokokkeja. Perheessä A kaikki jä-15 senet kantoivat GAS:ä ennen hoitoa, kun taas toisaalta kellään perheen B jäsenistä ei esiintynyt GAS:ä. Kenelläkään kummastakaan perheestä A ja B ei ollut kliinisiä infektion merkkejä. Neljä kuukautta viimeisen hoitojakson jälkeen ainoastaan yksi potilas kantoi edelleen alkuperäistä GAS-kan-20 taa ja tältä henkilöltä puuttuivat myös inhiboivat «-streptokokit. Kaikissa muissa potilaissa todettiin voimakasta an-, nettujen α-streptokokkien kasvua. Tämän kasvun vahvistivat tyypillinen kasvunestomal1i eri GAS-kantoja vastaan ja potilaiden biokemialliset reaktiot. Kuten taulukosta 2, joka _ 25 esittää hoidon frekvenssiä ja mikrobi tul oksi a GAS: ä inhi- • ·' hoivien α-streptokokkien annon jälkeen, voidaan havaita, ' * perheen B lapset joutuivat päiväkodissaan alttiiksi GAS:lie • ·· · ja kantoivat mainittuja bakteereita, mutta eivät saaneet infektiota. Saman perheen vanhemmat eivät edes kantaneet ♦;··: 30 näitä bakteereja saman aikajakson aikana.

• · · • · · • « ·

Taulukko 3 esittää streptokokki tonsi 11 i i t in esiintymistä • · · ennen ja jälkeen «-streptokokkien rekolonisaat ion. GAS:ä • · ’···* inhiboivien «-streptokokkien rekolonisoinnin jälkeen ja kah- ··· 35 deksan kuukauden seuranta-ajan aikana kenessäkään kummankaan • · « « ....j perheen potilaista ei esiintynyt streptokokki tonsi 11 i itin kliinisiä oireita. Tosin eräät perheiden jäsenistä olivat 12 101452 tänä aikana GAS:n kantajia, mutta kukaan ei sairastunut ton-silliittiin.

Kuten tämä koe osoittaa, tämän keksinnön mukaista valmistet-5 ta voidaan erittäin menestyksekkäästi käyttää sekä strepto-kokkitonsi11iit in ennalta ehkäisyyn että sen hoitoon. Mainittua valmistetta voidaan käyttää rinnan optimaalisesti annostetun penisilliinikuurin loppuvaiheen kanssa silloin, kun tarvitaan tonsilliitin erittäin voimaperäistä ja teho-10 kasta hoitoa.

Taulukko 1 15 Streptokokkitonsi11iitin esiintyminen. M tarkoittaa miespuolista ja F naispuolista potilasta.

Sukupuoli/Ikä

Perhe A M 30 1 2 1 2 20 F 27 1 2 1 3 4 M 7 1 1 ***** M41 1 ***** fi 1 1 1 ***** 25 Perhe B M 36 1 p 33 ***** • · m 4 1 • · ... Rl 1 1 1 1

• · · C I

• · · kesä heinä elo syys loka marras joulu tammi ....: 30 1986 ♦ · ··· • · · ♦ · · • · « · · • · · • 1 • « · » · * · · · · 2 » · · 1 3 • · · · · 4 « · „ 101452

Taulukko 2

Mikrobiologisten tulosten esiintyminen keksinnön mukaisen valmisteen, joka sisältää GAS:ä inhiboivia tt-streptokokkeja, 5 annon jälkeen. + tarkoittaa GAS:n läsnäoloa.

Sukupuo1i/Ikä

Perhe A M 30 *** 1 - - - - p 27 1 1 1 _ _ _ _ 1 _ _ 10 M 7 1-- - - - - M 4 2- - - - - p 1 *** _ _ _ _

Perhe B M 36 --- - - 15 F 33 _______ M 4 ___ 1 1 1 _ 1 1 P1 ___ 1 1 1 1 _ _ helmi maalis huhti touko----syyskuu 1987 t » « m • • · · • · · • 00 • t ♦ · · * · » • 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 0 • · · * · • « • 1 · 1 · 1 · 2 • · 14 101452 c 0 id —I -¾ -P 0

id G —I

id Φ I

w φ I

•Ή X I

CJ C >—I I

φ 0 =ld —I

w * * *γλ ε

<H 0 '—I

id λ; φ x φ x

G PS

ε * -* g ε >o * * * # ε g * (d G * -P c~ --1 * 00 W * * * * σ» X * 3 (1) * * --h X 3 * * * * # 0 G * τι a) # * * * * * a) w .ϋ id *-H ·Χ· Jh

:<d C * U

•n 0 * * * id ή ε id -p -r-ι iti Id ro id -p * G W 0 * id

0 (1> X

X G C -P * 0 ^ CO id ^ G 0) —I id

* 0 M

3 Μ id >< φ g w Η φ G 0 >· .G -h * * # * >t

--1 C 0 W

p Φ x w 't φ x u ε >. o c o -p x φ >-* COG φ

—' -P G

h a ω . . w Φ • · 0) μ =<d

. * -P G

:: cw # •H I Φ ,*:*c -p » * x

» · - -H

' H G

rH Φ

r—H -H ill ID

. -H £ :(0 * W 00 W :iti JuJ φ <31 G -P m * X r- »·· 0 —1 s ::: -p :«

• -H M rH

* jd —· o o r-~ ίο <o .MM 3 <o cn r- -ο* T- co co O' 1- ·.·,· 0 ft ... .MG 3 Σ ft S Z ft Z ft Σ ft :: ο φ x

... -P Φ G

• ft -P W SC (0 .:. φ w : u — φ φ ·*·· -p ε x x ....: ui r-< u u • · I (d Φ φ <a > ft ft 101452 _ 15 ___ MICROORGANISMS ~~ 4 14

OofeoftAl £M m ci«wd»»« with tfw inter» orpMMwo i>*NT>4 »· M * >"· ·* IN Ν·Λβ« * JL IDCMTIFICATIOM OF DtrOSTT ·

FuttJwr <»wln on MontNtod on an oddOonaJ »hoot Π*

Man» of Mftiitvy Income»* 4

The National Collection of Industrial & Karine Bacteria Ltd (NC1MB)

Amat ·> mtiiar inMtutian (McMini »ml CO»· M uwili)) *

Torry Research Station, P.0. Box 31, 135 Abbey Road, Aberdeen AB9 80S,

Great Britain H»*"*·*· Aee—nNwnhw· NCIB 40104> NCIB 40105t 3 February 1989 (03.02.89) NCIB 40106, NCIB 40107

·. ADDITIONAL INDICATIONS < |lwn btaftt M net tpplicaM·). TNi InlonMhon la contmind an a aaaarata anarhap altaat Q

In respect of those designations in which a European patent is sought, a sample of the deposited microorganism will be made available until the publication of the mention of the grant of the European patent or until the date on which the application has been refused or withdrawn or is deemed to be withdrawn, only by the issue of such a sample to an expert nominated by the person requesting the sample. (Rule 28(4) EPC).

C. DESIGNATED STATU SON WHICH INDICATIONS A ICE ΗΛΟΙ · (I* th* Indication· in not lir il IwroH Ststm)

• I I I

D. SIFARATI FURNISHING OF INDICATIONS · (k^vi toftk H not >»pUc*M«) TM trvd<cttion« baud b+l&m will b« lubmltM Ift the ImcmarDOAAl Swroou loner * f&poctty th· perwrcl nevrp ll the NlcSNft> «.#.* 4 - Accession humocr cl Deposit") • · • · · • · · * · · • · « · · • · « • · · ·- ' . ' “ '* —. I >m.

• L Qj Tltlt inmt >u ncarr*d with th* Intimtboml ipphcmoii wtioA Mod It· h* chochod hr th· mcaMnf Offlca) • · * V.:* _ • (AHthpi^id OStM) • · · .! . Q Th· Hit H ncdpt ttron th* applicint) hr th* ImamatteMl liweih >· • · · · ni — - . —--- - |Aiih«UM OStcoi) f*m hermoni· umutnr t»«)

Claims (2)

1β 101452