PT90990B

PT90990B - Processo para a preparacao de fraccoes oligomericas de procianidol

Info

Publication number: PT90990B
Application number: PT90990A
Authority: PT
Inventors: Enrico Frangi; Giuseppe Mustich; Marco Bertani; Gianfranco Tuccini
Original assignee: Tecnofarmaci Spa
Priority date: 1988-06-28
Filing date: 1989-06-27
Publication date: 1994-12-30
Also published as: ES2052819T3; EP0348781B1; NO892673L; EP0348781A3; FI92976B; NO179894C; ATE81014T1; DE68903056D1; EP0348781A2; FI893117A0; JPH0248593A; JP2799734B2; PT90990A; DE68903056T2; FI893117A; CA1337565C; IT1219732B; NO179894B; FI92976C; NO892673D0

Description

A presente invenção diz respeito a novas fracções oligoméricas de procianidol extraídas de vegetais, aos processos para a sua preparação e a composições farmacêuticas que as contêm.

Os extractos de grainhas de uvas de Vitis vinifera que contêm os referidos oligómeros, têm sido usados em terapia, particularmente como vasoprotectores no tratamento de perturbações da circulação da retina ou da coróide e de insuficiências venolinfáticas; de facto, eles aumentam a resistência dos vasos e dos capilares e diminuem a sua permeabilidade.

Os oligómeros de procianidol são polifenóis que derivam de flavanóis que resultam de condensações oxidantes de várias unidades f1 avanó1icas, que podem ser iguais ou diferentes, particularmente da condensação de (+)-catequina, epicatequina e ga locatequina . Estão presentes em diversas plantas tais como grainhas de uva de videiras, macieiras, pinheiros marítimos, pilriteiros, cinchonas, eucaliptos.

Verificou-se que os extractos preparados de acordo com os processos da técnica anterior, particularmente, os referidos nas patentes de invenção francesas números FR-A-2 092 743 e

FR-A-2 372 823 referentes a Vitis vini fera e os mencionados na patente de invenção francesa FR 1 427 100 e na patente de invenção norte-americana US 4 698 360 relativas ao pinheiro marítimo, continham, além dos oligómeros de polimerização do grau 2 a 5 , derivados de condensação de maiores pesos moleculares não obstante o tratamento com uma solução aquosa saturada de cloreto de sódio e, sobretudo, monómeros nas proporções não desprezáveis de 20 a 30% em peso. Estes últimos são considerados como substâncias indesejáveis.

Os extractos de acordo com a presente invenção, que resultam de um tratamento prévio apropriadamente escolhido dos extractos da técnica anterior, contêm menos do que 1,5% em peso de monómeros e possuem uma maior actividade farmacológica do que a dos extractos de partida, visto que se encontram enriquecidos nas fracções oligoméricas de procianidol.

Muito embora um certo número de processos para a extracção de oligómeros flavanólicos ou substâncias semelhantes presentes no material vegetal já tenha sido descrito (vejam-se, por exemplo, as patentes de invenção francesas números FR 968 589,1 036 922 e 1 427 100 e a patente de invenção britânica número GB 1 541 469), não é obvio que se obtenham extractos à escala industrial e com rendimentos economicamente aceitáveis quase completamente isentos de monómeros, sem se verificarem perdas importantes ou alterações dos dímeros e dos outros oligómeros, cujas características fisíco-químicas são claramante semelhantes: o processo de acordo com a presente invenção resolve este problema pela primeira vez.

De acordo com a presente invenção, os monómeros são separados ou por ultrafiltração de uma solução aquosa dos extractos obtidos de acordo com processos convencionais, usando membranas com intervalo de corte de 600 a 3 000, ou por extracção selectiva dos extractos citados antes com um éter, como por exemplo éter -metil -terc.-butílico ou com uma mistura imiscível com água de um éster alifático, tal como acetato de etilo ou acetato de amilo, ou um éter, tal como éter meti1-terc.-butί1ico, com um hidrocarboneto aromático tal como benzeno ou tolueno.

Falando geralmente, os processos de acordo com a presente invenção caracterizam-se pelo facto de compreenderem as seguintes operações:

A) extracção do material vegetal com misturas de água com acetona, metanol ou outros álcoois, até à exaustão dos derivados de catequina; utiliza-se acetona aquosa a 80?ó como a mistura dissolvente de escolha preferencial;

B) concentração do dissolvente por evaporação do dissolvente sob vazio até um peso aproximadamente igual a 50°á do peso de partida do material vegetal;

C) filtração do concentrado obtido na operação B), opcionalmente depois de se deixar em repouso no frigorífico durante 24 horas para eliminar quaisquer resíduos oleaginosos e poliméricos de taninos;

D) ultrafiltração do concentrado resultante da operação C ) , sob uma atmosfera de azoto, através de membranas tubulares ou capilares de intervalo de corte de 100 000 a 1 000;

E) ultrafiltração do permeado da operação D), do qual se removeram as substâncias de peso molecular elevado, através de membranas enroladas em bobinas espirais de intervalo de corte de 3 000 a 600; e

F) opcionalmente, outro fraccionamento do permeado proveniente da operação E) por ultrafiltração, limitando os intervalos de corte das membranas, de acordo com as maneiras de proceder mencionadas antes na presente memória descritiva ou submetendo o permeado a fraccionamento com dissolventes orgânicos selectivos .

permeado proveniente da operação D) referida anteriormente, antes da realização das purificações finais (qualquer que seja a maneira como são realizadas) contém ainda substâncias monoméricas: no caso de Vitis vinifera (+)-catequina e (-)-epicatequina e, em quantidades menores, substâncias poliméricas indesejadas. A fim de se obter um bom grau de desmonomerização, o processo mais conveniente compreende uma outra ultrafi1tração com membranas enroladas em espiral de intervalo de corte de 600 a 3 000 e contra-extracção do concentrado com acetato de etilo; o produto final desmonomerizado e destaninizado é obtido evaporando a fase orgânica até um volume reduzido e insolubilizando o concentrado com clorofórmio ou outros dissolventes clorados, tais como cloreto de metileno, dicloroetano, etc. Como variante, a solução aquosa proveniente da operação C) pode ser extraída directamente com acetato de etilo e o resíduo da fase orgânica, depois da substituição com água, ou ser submetido aos processos de filtração em membrana das operações D) e/ou E); a solução aquosa proveniente da operação C), ajustada a uma concentração compreendida entre 10 e 'bíK pode ser extraída com misturas de dissolventes consistindo em acetato de etilo/tolueno ou outros hidrocarbonetos aromáticos, em proporções de 5 a 9 partes do primeiro dissolvente para 5 a 1 partes do segundo; a extracção com as mencionadas misturas prossegue até à exaustão com as substâncias monoméricas. Depois de se ter atingido uma proporção apropriada entre os dois dissolventes, com base nos coeficientes de distribuição, a fase orgânica é contra-extraída com água para se recuperar a quantidade de compostos diméricos que tenha sido possível extrair acidentalmente por co-solubilização; as fases aquosas depois de combinadas são extraídas com acetato de etilo puro, a fase orgânica é evaporada sob vazio até se obter um volume final reduzido e precipita-se o concentrado num dissolvente clorado.

Como variante, as misturas de acetato de etilo com hidrocarbonetos podem vantajosamente ser substituídas por outros ésteres tais como, por exemplo, acetato de isopropilo, acetato de amilo, formato de etilo, etc. ou éteres alifáticos, de que se prefere o éter metil-terc.-butilico. Os ésteres, assim como os éteres, eliminam selectivamente fracções monoméricas indesejáveis, além de quaisquer materiais lipofílicos que estão usualmente presentes nos extractos vegetais; a extracção subsequente com acetato de etilo é selectiva para as substâncias oligoméricas em relação às poliméricas de maneira que, de acordo com os processos citados antes, se pode obter um produto quase isento de monómeros, que podem ser alergénicos, assim como também de polímeros que têm acção tanante e que são irritantes para as mucosas.

Tirando vantagem da selectividade dos dissolventes e das suas misturas referidos anteriormente, podem-se preparar extractos que têm as mesmas características químicas realizando o frac cionamento por meio de uma matriz sólida, que absorve selectivamente os derivados de fenol, e que podem ser re-eluídos das mencionadas matrizes por classes homogéneas.

Como matriz sólida pode usar-se uma resina de poliestireno tal como uma das resinas de absorção de Amberlite ou preferi7

V.e 1 m e n t e Duolite S-761. De acordo com esta maneira de proceder, faz-se passar a solução proveniente da operação C) através de uma coluna que contém a resina escolhida, usando cerca de 0,5 litro de suporte por cada 10 gramas de resíduo seco; quando a absorção da solução de partida está completa, a resina é lavada cuidadosamente com água para eliminar completamente sais, açucares, ácidos orgânicos e fracções poliméricas pesadas, que são excluídas devido ao seu impedimento estérico; continua-se a lavagem da resina com uma mistura de acetato de etilo e hidrocarbonetos alifáticos ou aromáticos, preferivelmente numa proporção de 7:3, até que as substâncias monoméricas sejam completamente eliminadas. 0 extracto de acordo com a presente invenção é obtido por eluição subsequente com metanol aquoso ou acetona aquosa, sendo o eluído resultante concentrado misturado com água. 0 concentrado aquoso é extraído de acordo com as maneiras de proceder citadas antes com acetato de etilo e o resíduo, após concentração, é precipitado por meio de dissolventes clorados.

extracto obtido de acordo com os processos referidos antes apresenta, em comparação com os da técnica anterior, uma perfeita to 1erabi1idade e uma muito boa actividade em relação a estados patológicos ligados com o sistema cardiovascular e com a circulação superficial e profunda. Este extracto é apropriado para incorporação em todas as formulações farmacêuticas líquidas e sólidas usuais.

Os seguintes exemplos não limitativos ilustram a invenção mais pormenorizadamente.

EXEMPLO 1

Preparação do extracto desmonomerizado a partir de grainhas de uva de Vitis vinifera secas'

A temperatura ambiente, embebem-se 100 Kg de grainhas de uva de Vitis vinifera em 150 litros de acetona contendo 20% de água. Filtra-se o solvente da extracção e repete-se a extracção 4 vezes'mais ou até à exaustão completa dos derivados de fenol, verificando com EeClg uma parte aliquota do último extracto e verificando que o resíduo seco contém menos do que 0,05%. Combinam-se as soluções em água-acetona e evapora-se a acetona mediante destilação sob vazio até o dissolvente orgânico ser completamente eliminado; durante a concentração final, forma-se um precipitado abundante que, depois de se deixar em repouso no frigorífico a 4°C durante 24 horas, se centrífuga; este sólido compreende produtos iipofílicos e material de tanino fortemente polimerizado. Ajusta-se a solução aquosa (43 litros) a pH 6 com NaOH a 40%, sob atmosfera de azoto e ultra filtra-se com uma membrana tubular de corte igual a 100 000 ENICHEM (UE-100F), a uma temperatura inferior a 20°C, e submete-se a diálise com 57 litros de água. 0 líquido permeado, de que foram eliminados os polímeros, é acidulado com HgSO^ a 25 por cento até pH 3,5 e concentrado por osmose inversa com uma membrana enrolada em espiral Desal B241-111 até se obter um resíduo 30 por cento seco. Extrai-se o concentrado aquoso continuamente com uma mistura de acetato de etilo:tolueno na proporção de 8:2 (volume/volume) por meio de um separador centrífugo 1íquido/1íquido até à exaustão das substâncias monoméricas; a solução exausta é extraída continuamente com acetato de etilo até à exaustão dos oligómeros. Concentra-se a fase orgânica sob vazio até se obter 1,5 litros e precipita-se com 4,5 litros de cloreto de metileno. Centrifuga-se o produto que, após secagem durante 24 horas a 50°C sob vazio, pesava 0,42 Kg. Este extracto purificado contém as substâncias monoméricas em uma quantidade < 1 por cento.

EXEMPLO 2

Extraem-se 100 Kg de grainhas de uvas de Vi tis vinifera de acordo com a maneira de proceder que se descreveu no Exemplo 1 0 líquido permeado, depois de realizada a u1trafi1tração com uma membrana tubular com o corte de 100 000 (Enichem UE-100F) é acidulado até pH 3,5 e ultrafiltrado com uma membrana enrolada em espiral Desal U20-G20 e dialisa-se a solução com 20 volumes de água em relação ao volume da solução de partida. 0 concentrado (de que se eliminaram as substâncias monoméricas) é concentrado seguidamente até um resíduo 30% seco. Extrai-se o concentrado aquoso com acetato de etilo até 'a exaustão dos oligómeros; a fase orgânica, após concentração até 1,5 litros, é despejada em 4,5 litros de cloreto de metileno. Os oligómeros precipitados

são filtrados e secos a 50° C durante 24 horas para se obter

0,45 quilograma do mesmo produto final que no Exemplo 1.

EXEMPLO 3

Extraem-se 100 Kg de grainhas de uva de Vitis vinifera procedendo de acordo com a maneira de proceder que se descreveu no Exemplo 1. A solução aquosa, depois da centrifugação das substâncias poliméricas indesejáveis, é extraída continuamente com acetato de etilo num separador centrífugo líquido/líquido, até àexaustão das substâncias fenólicas que podem ser extraídas. Concentra-se a fase orgânica, adicionando-se água desmineralizada para eliminar o dissolvente, de maneira a obter-se um volume final de 150 litros.

A solução aquosa a pH 3,5 pode ser submetida ou ao tratamento que se descreveu no Exemplo 1, usando membranas tubulares de corte igual a 100 000 e osmose inversa, ou a um tratamento de acordo com a maneira de proceder que se descreveu no Exemplo 2, com uma membrana de corte igual a 100 000 e uma membrana enrolada em espiral Desal U20-G20. As soluções aquosas concentradas são tratadas de acordo com as maneiras de proceder que foram descritas nos Exemplos 1 e 2.

EXEMPLO 4

Extraem-se 100 quilogramas de grainhas de uva de Vitis .vinifera procedendo de acordo com a maneira de proceder que se descreveu no Exemplo 1. A solução aquosa, depois de se separar por filtração a fracção polimérica indesejada, é extraída continuamente com acetato de etilo até à exaustão dos polifenóis que podem ser extraídos com o referido dissolvente; concentra-se a fase orgânica até se obter uma consistência pastosa e dissolve-se o resíduo em 20 litros de água, sendo o dissolvente residual eliminado sob vazio. A solução aquosa é absorvida numa coluna contendo 30 litros da resina de poliestireno Duolite S-761 , continuando-se a eluição até se obter água quase descorada. Em seguida, continua-se a eluição com uma mistura de acetato de etilo/tolueno na proporção de 7:3 até se efectuar a remoção completa das substâncias monoméricas, controlando o progresso da reacção por cromatografia em camada fina, usando uma mistura de acetato de butilo/ácido acético/ácido fórmico/água nas proporções em volume de 8:1:1:1 como eluente e ácido clorossulfónico em ácido acético como revelador. Obtém-se a fracção oligomérica mediante eluição contínua com acetato de etilo quase puro. Concentra-se a solução orgânica que contém principalmente substâncias diméricas, triméricas e tetraméricas até se obter o volume final de 1 litro e despeja-se em 3 litros de cloreto de metileno. Depois de se filtrar e secar, obtêm-se 210 gramas de um produto que contém monómeros em uma quantidade menor do que 0,1 °á .

Como variante, a coluna é lavada com metanol em vez de o

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ser com acetato de etilo puro; concentra-se a fase alcoólica até se obter um pequeno volume e dilui-se o resíduo com 30 litros de água; contra-extrai-se a fase aquosa com acetato de etilo, seguindo as maneiras de proceder que se descreveram nos Exemplos 1 e 2 para se obter o produto final. Neste caso, obtêm-se 405 gramas de produto que é aproximadamente igual aos que se descreveram antes.

EXEMPLO 5

Extraem-se 100 quilogramas de grainhas de uvas de Vitis vinifera, procedendo de acordo com a maneira de proceder que se descreveu no Exemplo 1. Depois de se proceder à centrifugação das substâncias poliméricas, dilui-se a solução aquosa que contém cerca de 8% de resíduo sólido de maneira a obter-se um teor igual a 5% de resíduo seco e submete-se a cromatografia numa coluna que contém 50 litros de Duolite S-761, lavando-se cuidadosamente com cerca de 500 litros de água de maneira a eliminar completamente os sais e os acúcares que se encontram presentes abundantemente no extracto. Em seguida, realiza-se a purificação dos oligómeros procedendo como se descreveu no Exemplo 4, lavando a coluna em primeiro lugar com acetato de etilo/to lueno e em seguida com metanol; depois da precipitação com cloreto de etileno, obtêm-se 423 gramas de uma fracção oligomérica que é semelhante à dos outros Exemplos.

EXEMPLO 6

Extraem-se 100 Kg de grainhas de uva de Vitis vini fera procedendo de acordo com a maneira de proceder que se descreveu no Exemplo 1; a solução aquosa, depois de se separar o material polimérico mediante filtração, é extraída com 10 porções de 50 litros de uma mistura de acetato de etilo/tolueno na proporção de 8:2; a fase orgânica contendo materiais gordos e os monómeros é contra-lavada com 20 litros de água; as fases aquosas reunidas são extraídas 10 vezes com porções de 50 litros de acetato de etilo saturado com água; a fase orgânica é concentrada até à obtenção de uma consistência pastosa e o resíduo é retomado em 7 litros de água, sendo o dissolvente residual evaporado sob vazio. A solução aquosa ligeiramente turva é tratada com 750 gramas de NaCl; forma-se um precipitado que se filtra depois de se deixar a solução em repouso no frigorífico durante 24 horas Extrai-se o filtrado com 10 porções de 7 litros de acetato de etilo; a solução orgânica é concentrada até perfazer 1 litro e o concentrado é despejado em 3 litros de cloreto de metileno. Depois de se filtrar e secar de acordo com as maneiras de proceder descritas nos Exemplos referidos antes, obtêm-se 402 gramas de um produto final que é o mesmo que já se descreveu antes.

EXEMPLO 7

Extraem-se 100 Kg de grainhas de uvas de Vitis vinifera

- 14 p.rocedendo de maneira análoga à que se descreveu no Exemplo 2.

líquido permeado proveniente da membrana enrolada em espiral Desal U2O-G2O do Exemplo 2 e/ou a solução aquosa obtida a partir da mistura de acetato de etilo/tolueno na proporção de 8:2 procedendo de acordo como se descreveu no Exemplo 1, após concentração £té.obtenção de um resíduo pastoso e substituição do dissolvente por água, são ultrafiltrados com uma membrana enrolada em espiral U2O-G5. A solução aquosa concentrada, depois de submetida a diálise, fica quase isenta de monómeros e contém os oligómeros que são extraídos com acetato de etilo. A solução orgânica é concentrada até perfazer o volume de 0,1 litro e precipitada com 0,5 litro de cloreto de metileno.

Obtém-se 3,81 gramas de um produto que contém 38% de subs tâncias diméricas e cerca de 1 °á de catequinas monoméricas.

Claims

Reivindicaçoes

1.- Processo para a preparação de oligómeros de procianidol, extraídos de vegetais, contendo não mais do que 1,5 % em peso de monómeros flavanólicos, caracterizado pelo facto de se isentarem extractos vegetais obtidos por métodos conhecidos das substâncias de peso molecular elevado mediante precipitação em água e subsequente ultrafiltração em membranas de intervalo de corte compreendido entre 1000 e 100 000 e, em seguida de se isentarem dos monõmeros por ultrafiltração em membranas de corte inferior a 3 000.
2. - Processo de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se empregarem membranas de corte compreendido entre
3 000 e 600 para eliminar os monómeros.

3. - Processo de acordo com as reivindicações 1 e 2, caracterizado pelo facto de, para a ultrafiltração, se usarem membra-16nas tubulares, capilares, enroladas em espiral ou planas.
4.- Processo de acordo com as reivindicações 1 a 3, caracterizado pelo facto de se submeter o permeado resultante da ultrafiltração em membranas de intervalo de corte compreendido entre

3 000 e 600 a uma ultrafiltração ulterior em membranas com um intervalo de corte mais apertado.
5. - Processo de acordo com as reivindicações 1 a 4, caracterizado pelo facto de se concentrar o permeado proveniente da ultraf iltração , de se submeter depois a extracção de esgotamento com acetato de etilo e, finalmente, de se recuperarem os oligómeros da fase orgânica por concentração da referida fase e precipitação com hidrocarbonetos clorados.
6. - Processo para a preparação de oligómeros de procianidol, extraídos de vegetais, contendo menos do que 1,5 % em peso de monómeros flavanólicos, caracterizado pelo facto de se isentarem extractos vegetais obtidos por métodos conhecidos , das substâncias de peso molecular elevado mediante precipitação com água e ultrafiltração subsequente com membranas de intervalo de corte compreendido entre 100 000 e 1000 e, depois, de se isentar dos monómeros de flavanol por extracção selectiva com uma mistura imiscível com água de um éster alifático com um hidrocarboneto aromático ou com um éter apropriado.
7.- Processo de acordo com a reivindicação 6, caracterizado pelo facto de o dissolvente de extracção consistir em 5 a 9 partes em volume de acetato de etilo e 5 a 1 parte em volume de tolueno.
8.- Processo de acordo com as reivindicações 6 e 7, caracterizado pelo facto de se realizar a extracção eluindo o extrato de flavanol depositado numa coluna de cromatografia com o dissolvente mencionado anteriormente,

Lisboa, 27 de Junho de 1989