PT787191E - Sequências nucleotídicas de antigénios retroviraisde vih do tipo (ou sub-tipo) o - Google Patents

Description

SEQUÊNCIAS NUCLEOTÍDICAS DE ANTIGÉNIOS RETROVIRAIS DE VIH DO TIPO (OU SUB-TIPO) O A presente invenção tem por objecto antigénios obtidos por expressão de sequências nucleotidicas ou pela síntese química por exemplo utilizando sintetizadores da marca Applyed-Biosystems presentes nas variantes de VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 e particularmente os antigénios que correspondem aos que se podem isolar de partículas virais. A titulo de exemplo de vírus VIH-1 do subgrupo 0, refere-se o isolado VIH-15¾¾¾ assim como o isolado VIH-I^®-

Lembremos que a designação HIV utilizada neste texto corresponde à designação VIH igualmente utilizada. A presente invenção tem igualmente por objecto os anticorpos policlonais ou monoclonais induzidos por estes antigénios. A presente invenção tem igualmente por objecto sequências de ADNs clonados quer apresentando uma analogia de sequência, quer uma complementaridade com o ARN genómico de preparação destas sequências de ADNs clonados. A presente invenção tem igualmente por objecto os poli-péptidos que contêm as sequências de aminoácidos codificados pelas sequências de ADNs clonados.

Além disso, a presente invenção tem por objecto as aplicações dos antigénios mencionados antes para a detecção in vitro, no homem, da potencialidade de certas formas de SIDA e, no que respeita a alguns deles, à produção de composições imunogénicas e composições gue servem de vacina contra este retrovírus. Do mesmo modo, a presente invenção tem por objecto as aplicações com o mesmo fim dos referidos anticorpos e, para alguns dentre eles, a sua aplicação na produção de princípios activos de medicamentos contra a SIDA em seres humanos. A presente invenção tem igualmente por objecto a aplicação das sequências de ADNs clonades e de polipéptidos obtidos a partir destas sequências como sondas ou iniciadores para a amplificação génica em kits de diagnósticos. A presente invenção tem igualmente por objecto composições de antigénios que podem ser obtidas por síntese química ou por expressão num hospedeiro celular recombinan-te e que permitam o diagnóstico de uma infecção devida a um retrovírus humano do tipo VIH independentemente do sub-tipo ser VIH-1 ou VIH-2. Essas composições compreendem pelo menos um péptido escolhido entre os péptidos antigénicos comuns aos vírus VIH-i, VIH 2, VXB··'!s e ou variantes destes péptidos antigénicos que possuam caracte-rísticas imunogénicas semelhantes. A presente invenção visa igualmente composições que permitem o diagnóstico especifico de uma infecção devida a um retrovírus humano do tipo VIH-1, mais particularmente o VIH-1, do grupo M, - o VIH-2 ou o VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 e contendo' pelo' menos um péptido antigénico específico do vírus VIH-1, um péptido antigénico específico do vírus VIH-2 e um péptido antigénico específico do vírus VIH-1 do -grupo (ou do subgrupo) 0 ou variantes destes péptidos antigénicos que possuam caracteristicas imunogénicas semelhantes. Mais particularmente, os péptidos antigénicos derivam da proteína da cápsula do virus VIH-1, do gt-Xpo M, do VIH-2 ou do VIH-1 do grupo (ou do .svbfrugp-) o. ,ώ: A presente invenção descreve ainda um péptido que permite uma detecção de anticorpos anti-VIH que os péptidos da técnica anterior nem sempre permitiam detectar, com base, nomeadamente, na descoberta de uma nova estirpe de VIH-1: VIH-1 DUR. 0 anti-soro dirigido contra ela nem sempre apresenta reactividade com os péptidos do VIH de consenso tal como é utilizado hoje em dia. A expressão 'VIH de consenso" refere-se às regiões conservadas entre isolados e cuja evidência é essencial para a concepção de vacinas ou de reagentes de diagnóstico e cujas mutações conferem resistência aos medicamentos anti-virais. O termo "péptido" utilizado no presente texto define tanto oligo-péptidos como polipéptidos.

Estado da técnica Já foram isolados e caracterizados dois tipos de vírus da irnunodeficiência humana (VIH) com responsabilidade no desenvolvimento de um SLA ou da SIDA. Isolou-se um primeiro vírus denominado LAV-1 ou VIH-1 e foi descrito no pedido de patente de invenção britânica GB 8324.800 e no pedido de patente de invençãç europeia EP 84401.834 de 14/0911984. Este vírus foi igualmente descrito por F. Barré-Sinoussi et al em Science (1983), 220, 868-871. O retrovírus VIH de tipo 2 pertence a uma classe distinta e tem apenas um parentesco imunológico reduzido com os retrovírus VIH do tipo 1. Os retrovírus de VIH-2 foram descritos no pedido de patente de invenção europeia EP n° 87.400.151.4 publicado com o número 239.425. O retrovírus VIH-1 é o mais corrente e a sua presença é predominante em várias regiões do mundo. Quanto ao retrovírus VIH-2, encontra-se na maioria das vezes na África Ocidental, embora a sua propagação fora desta região tenha sido recentemente documentada por Grez et al, (1994) J. Virol. 68, 2161-2168. O conjunto dos lentivirus da imunodeficiência dos primatas, incluindo os virusdo tipo 1 e do tipo 2 da imunode-ficiência humana assim como vários outros tipos de vírus de primatas não humanos, aumenta em dimensão e em complexidade. 0 mais corrente destes vírus, o VIH-1, dissemina-se actualmente sob a forma de epidemia mundial e é responsável por um problema relevante de saúde pública. Pouco depois da identificação e da caracterização molecular deste vírus, foi reconhecido como sendo muito variável e compreendendo actualmente vários sub-tipos (Myers, 1994, Louwagie, et al. 1993, Louwagie, et al. 1992, Myers, G. (1994) VIH-1 subtypes and phylogenetics trees. Em: Human Retrovirus and AIDS 1994; Myers, G., Korber, B., Wain-Hobson, S., Smith, R. F. e Pavlakis, G. N., eds. Los Alamos National Laboratory, Los Alamos, NM. III-2 - III-9.). Esta distinção de sub-tipos baseia-se sobretudo na divergência dos gçnes gag e env. Foram identificados pelo menos 6 sub-tipos, designados de A a F, mas é ainda possível que vão emergir vários do inquérito mundial que está em curso sobre os isolados do VIH-1. Foi verificado que estes diferentes sub-tipos são equidistantes uns dos outros, num perfil filogenético dito filogenia em estrela, o que sugere que os diferentes sub-tipos do VIH-1 teriam evoluído e divergido de maneira síncrona a partir de um antepassado comum.

Recentemente, isolaram-se e caracterizaram-se dois vírus distintos deste grupo de vírus VIH-1. Estes dois vírus foram obtidos de pacientes que vivem nos Camarões, na África do Centro Africano (Gurtler, et al. 1994, Vanden Heasevelde, et al. 1994). A sua sequência, mais particular- mente a sequência do seu gene env (envelope ou cápsula), mostra claramente que estes virus pertencem a uma categoria distinta de virus aparentados com o VIH-1, designado por VIH-1 do grupo O (NKENGASONG et al., 1993).

Contudo, a diversidade dos isolados no interior deste grupo de virus aparentados com o VIH-1 não é conhecida e a sua propagação fora de África não foi documentada.

Um constrangimento geral na realização de ensaios se-rológicos de HIV está em evitar tanto as reacções falsamente positivas (ou falsamente negativas) conservando ou melhorando a sensibilidade que os ensaios anteriores permitem na detecção da seropositividade.

Os ensaios que se baseiam na utilização de péptidos de consenso, essencialmente derivados do gene "env", foram considerados como uma solução quase ideal até à descoberta da variante VIH-1-0 que fez antever a possibilidade de resultados falsamente negativos (Genomic cloning and complete sequence analysis of a highly divergent African human immuno-deficiency virus isolate. J. Virai. 1994; 68: 1586-96; a new subtype of human immuno-deficiency virus type 1 (MPV-51 00) de Cameroon. J. Virai. 1994; 68: 1581-85) - A não reactividade de certos ensaios com o antigénio peptidico «env», em pacientes ss® apresentam mesmo assim alguns sindromas clínicos característicos da SIDA ou sindromas linfadénopáticos que algumas vezes os precedem e que nesse caso são por vezes imputados a uma infecção do grupo VIH-1-0 (HIV-l/HIV-2 seronegativity in VIH-1 subtype O infected patients, Lancet 1994; 343: 1393-94; New VIH-1 subtype in Switzerland. Lancet 1994; 344: 270-71).

Descrição da invenção A presente invenção tem por objecto pôr à disposição laboratórios de diagnóstico, meios, nomeadamente péptidos específicos que permitem uma detecção de anticorpos anti-HIV, que eram ate agora susceptiveis de serem injectáveis. 0 presente pedido de patente de invenção descreve igualmente misturas de péptidos derivados de VIH-1 DUR e de péptidos correspondentes a outros VIHs, de modo a evitar resultados potencialmente "falsos negativos".

Além disso, tem por objecto um processo de detecção e de discriminação numa amostra biológica entre anticorpos caracteristicos de um retrovírus do tipo VIH-l-M e anticorpos caracteristicos de um retrovírus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0. A presente invenção decorre das observações feitas numa mulher seropositiva, que viveu nos Camarões e que revelou uma reactividade serológica atípica durante vários ensaios de despistagem da infecção por VIH, sendo estes últimos confirmados por técnicas de "Western blot" 0. A partir do facto desta reactiviade serológica atípica, em particular da falta de reactividade em gertos ensaios de terceira geração, mesmo modificadas pelo tipo 0, os requerentes julgaram interessante realizar a sequencia-ção de certas partes do genoma desta estirpe VIH-1 DUR, mais especificamente dos genes GAG e env.

Contudo, as amplificações genicas por RCP (reacção em cadeia de polimerase) com a ajuda de iniciadores retirados do grupo M e de iniciadores conhecidos do grupo 0 não deram resultado para as partes que codificam o anel V3 de gpl20 e para a região imuno-dominante de pg41. Apenas a região GAG foi amplificável com a ajuda de iniciadores conhecidos na técnica anterior (Loussert-Ajaka I., Lancet 1994; 343: 1393) . Um outro objecto da presente invenção é, por consequência, a determinação de iniciadores susceptíveis de resolver este problema. Estes iniciadores poderão ser designados indiferentemente, a seguir por "primers".

Determinaram-se as sequências parciais das glicoprõ-teinas gp41 e gpl20 assim como das proteínas da cápside (gene GAG) a partir de ADN linfocitário e de culturas virais, indicando que esta estirpe VIH DUR pertence por um lado ao grupo VIH-1-0 e que difere de forma significativa do grupo M, mais particularmente pela gp 41 e pela gp 120.

Assim, pôde-se pôr em evidência, mais particularmente a propósito da sequência GAG de a existência de sequências de consenso no grupo 0, em várias zonas, distintas das sequências de consenso do grupo M nas mesmas zonas. A clonagem das seguências que codificam os fragmentos de GAG, gp 41 e gp 120 de VXH-I(dor) foi efectuada num plasmido Bluescript® contendo um sítio PST1. Os produtos de amplificação foram clonados quer segundo as técnicas clássicas utilizando os iniciadores universais T3 e T7, quer sequenciados directamente por meio da utilização de iniciadores da amplificação precedente. As sequências foram em seguida determinadas pelo dispositivo automático de sequenciação Applied Biosystems 373A (ESGS Montigny le Bretonneux, França).

No contexto da presente invenção, os requerentes isolaram e sequenciaram o gene env de um isolado do grupo Ο, ο obtido de uma paciente francesa que nunca tinha viajado para fora da Europa e que morreu de SIDA em 1992. Segundo a sequência do envelope, o ¥XH~1#$0! é aparentado com dois virus camaroneses VlSaim e recentemente caracterizados. A análise filogenética das sequências env revela q e os três virus parecem constituir um grupo distinto, que será aqui chamado por VIH-1 grupo 0. O isolamento do desta paciente indica igualmente que uma certa propagação dos por VIH-1 do grupo O já se produziu fora de África.

Isolamento do virus VIH-1 O foi isolado em 1992 de uma paciente francesa com a idade de 41 anos, atingida com SIDA. Esta paciente apresentava em 1986 uma leuco-netropénia severa associada a um carcinoma do colo do útero. Contudo, ela apresentou progressivamente sinais de infecções oportunistas, com un abaixamento do número de células T CD4+ circulantes e ela morreu de SIDA em 1992. Os anticorpos anti-VIH-1 foram primeiro detectados por ELISA (Elavia, SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR, e Teste ABBOTT) em 1990. A paciente nunca tinha viajado para fora da Europa, não tinha utilizado medicamentos por via intravenosa e não tinha sido submetida a nenhuma transfusão de sangue conhecida. Não se lhe identificou nenhum parceiro sexual de origem africana. Ela deu à luz uma criança de boa saúde em 1971, mas um filho nascido em 1980 morreu com a idade de um ano no seguimento de um episódio clinico muito sugestivo de SIDA neo-natal. O seu terceiro filho, nascido em 1983 e o seu marido estão actualmente de boa saúde e não estão infectados. 0 isolamento do vírus foi realizado da seguinte forma: as células CD8+ presentes nos PBMC (linfócitos sanguíneos sintéticos) da paciente foram eliminadas com a ajuda de esferas revestidas de anticorpos IOTB (Immunotech) . As PBMC restantes foram estimuladas com PHA, depois foram postas em cultura conjunta com as PBMC enfraquecidas em CD8~ provenientes de um dador são e estimuladas com PHA. 0 crescimento virai na co-cultura foi seguido por uma dosagem da actividade da transcriptase inversa [TI) do sobrenadante e pelo teste ELISA da P24 do VIH-1 (caixa de diagnóstico comercializada pela DuPont de Nemours). 0 vírus obtido da co-cultura inicial foi submetido a várias passagens nas culturas de PBMC enfraquecidas em CD8 e estimuladas com PHA. Fizeram-se várias tentativas para infectar com VIH-IíWs diversas linhas de células transformadas, entre elas as células MT4 (Harada, et al. 1985) e CEM (Rey, et al. 1989), assim como a linha P4-2 de células Hela-CD4-LTRLacZ (Clave) et Chameau 1994).

Caracterização biológica do

Duas semanas após a cultura conjunta das PBMC da paciente, enfraquecidas em CD8 e estimuladas com PHA, com células semelhantes de um dador são, a produção de vírus foi detectada sob a forma de um pico de actividade de TI no sobrenadante da cultura. Este vírus podia então ser submetido a passagens em série por PBMC normais, enfraquecidas em CD8 e estimuladas com PHA. Na figura 1, o painel A representa a produção de em sobrenadantes de culturas de PBMC infectadas, controladas pela dosagem da TI (círculos a cheio) e ELISA de captura do antigénio p24 VIH-1 (círculos vazios). A concentração de p24 VIH-1 está expressa em ng/mL e a actividade da TI em cpm/pL. No painel B, efectuou-se a mesma experiência com um isolado primário padrão do VIH-1 de um paciente atingido com SIDA.

Embora o crescimento de tenha sido facilmente detectado com a ajuda da dosagem da TI, a detecção de vírus no sobrenadante de cultura com a ajuda do ensaio ELISA p24 VIH-1 (DuPont) foi nitidamente menos sensível. A figura 1 mostra a comparação entre os perfis de infecção produtiva das PBMC quer com quer com um isolado primário do VIH-1 de um paciente com SIDA, doseados na TI ou p24. Para quantidades equivalentes de partículas, determinadas pela dosagem da actividade da TI nos sobrenadantes doseados, detectou-se aproximadamente 25 vezes menos p24 para o do que para o isolado VIH- 1. A diferença pode ser consecutiva ao facto de o anticorpo monoclonal especifico da p24 do VIH-1, que é utilizada para revestir as placas ELISA, tem apenas uma baixa afinidade para os produtos gag do

Fizeram-se várias tentativas negativas para propagar o VIH-1 {sá®) em linhas de células T humanas transformadas, sensíveis ao VIH-1. Em particular, estas co-culturas entre as PBMC infectadas pelo fII**!$*$5 e quer células MT4, quer células CEM não conduziram a propagação do virus. Verificou-se igualmente que este virus não era capaz de infectar células HeLa CD4+ (P4-2) (Clavel e Chameau 1994) portadoras dum gene lacZ indutível pelo gene tat. Do mesmo modo, não se pôde detectar nenhuma replicação do nos linfócitos sanguíneos periféricos activados de vários chimpanzés. A análise da sequência do envelope de que será descrita em detalhe a seguir e a sua comparação com a dos dois isolados de camaroneses descritos recentemente, indicam que os três vírus pertencem ao mesmo grupo de vírus aparentados com VIH-1. Além disso, esta comparação indica que estas três variantes do virus são aproximadamente equidistantes umas das outras, sob o ponto de vista filogenético. Por consequência, cada uma das três variantes do vírus constitui em si um sub-tipo, distinto do seu grupo, que é agora designado por VIH-1 grupo 0. Este grupo é distinto do grupo dos outros isolados de VIH-1, identificados até aqui, que os requerentes designam aqui por VIH-1, grupo M. 0 aparecimento deste novo grupo põe a questão da sua origem: será que o grupo 0 evoluiu a partir dos virus do grupo M (ou inversamente) ou será que grande grupo tem um passado distinto? Os requerentes pensam que na medida em que o grupo M e o grupo 0 apresentam um perfil de divergência interna semelhante, é provável que cada um deles corresponda à diversificação de antecedentes distintos de virus em populações humanas distintas. Não se pode verificar, a partir dos dados filogenéticos e virológicos actualmente disponíveis se o progenitor de um ou de outro dos dois grupos afectava os seres humanos de maneira natural ou se foi introduzido nos seres humanos a partir de outras espécies. 0 único vírus próximo do VIH-1 presente num primata não humano é o isolado SNCPZGAB (Huet, et al. 1990), isolado a partir de um chimpanzé aparentemente infectado de forma natural, que é claramente distinto quer do grupo M, quer do grupo 0 e para o qual não foi encontrado nenhum equivalente humano. E provável que os virus do grupo 0 tinham evoluído recentemente a partir de um virus de chimpanzé na medida em que ο VInão conseguiu replicar-se nos linfócitos de chimpanzés.

Porque é que a epidemia do grupo 0 só aparece agora, cerca de 15 a 20 anos mais tarde que a do grupo M? Há três explicações possíveis: em primeiro lugar, a introdução do antepassado dos virus do grupo O nos seres humanos ter-se-ia produzido mais recentemente do que o do grupo M; em segundo lugar, poder-se-ia ter permitido ao grupo M propagar-se mais cedo do que o grupo O por causa das diferentes condições sociais na sua região de origem; e em terceiro lugar, os vírus do grupo 0 teriam uma capacidade de transmissão mais reduzida, comparada com a dos vírus do grupo M. rol proposto que essa propriedade explica a ausência de propagação mundial significativa do VIH-2, para a qual uma carga virai mais baixa nos indivíduos infectados está ligada a uma transmissibilidade reduzida (De Cock, et al. 1993) . Sob este ponto de vista, embora os requerentes não tenham nenhum dado sobre a carga virai em pacientes infectados por VIH-1 do grupo O, sendo que o poder patogénico destes virus não parece ser diferente do do VIH-1. A paciente em quem se isolou o morreu de SIDA, assim como o paciente em quem se obteve o isolado de VIH-1 do grupo 0.

Contudo, a história natural da infecção da paciente com fli**!*^ não está clara, mas existem várias indicações que esta paciente foi infectada antes de 1980, como o sugere a morte nesta data do seu segundo filho atingido por um síndroma semelhante à SIDA. A presente invenção tem por objecto qualquer variante das sequências de ácido nucleico do vírus ou de qualquer equivalente do vírus do grupo 0, contendo proteínas de estrutura que apresentam as mesmas propriedades imunológicas que as proteínas de estruturas codificadas pelo gene env compreendem a sequência descrita na figura 6 e denominada "vau", designada ainda pela SEQ ID N° 5. A presente invenção tem igualmente por objecto composições que contêm quer antigénios de acordo com a presente invenção, quer uma mistura de antigénios.se..acorda, com a presente invenção, associados a extractos com origem em um ou vários VIH-1 do grupo 0 ou outras variantes de vírus, por um lado e um ou vários VIH-2 e/ou VIH-1, por outro lado, sendo estas composições eventualmente marcadas. Pode-se utilizar todos os tipos de marcadores apropriados: enzímáticos, fluorescentes, radioactivos, etc. Ácidos nucleicos A presente invenção tem por objecto os ADN ou os fragmentos de ADN, mais particularmente ADN e fragmentos de ADN clonados, obtidos a partir do ARN, do ADNc ou de iniciadores utilizáveis em RCP ou outros processos de amplificação genica derivados do ARN ou do ADN do retrovíus 0 presente pedido de patente de invenção descreve igualmente ADNs equivalentes, que apresentam, nomeadamente, homologias de sequência com o ADN do VIH-1 (vau) f em particular com a sequência que codifica a região env da estirpe que. compreende a sequência correspondente à SEQ ID N° 5 representada na figura 6 e designada por 'vau". A homologia com o VIH-1 do grupo M é pelo menos igual a 50 %, de preferência a 70 % e com mais vantagem ainda próxima de 90 %. De uma maneira geral, o pedido de patente de invenção descreve qualquer ADN (ou ARN) equivalente capaz de se hibridar com o ADN ou o ARN de um retrovírus VIH-1 do grupo 0. A presente invenção tem por objecto também as sequências de ARN correspondentes às sequências de ADN definidas antes. 0 pedido de patente de invenção divulga igualmente o gene da integrase do vírus que compreende a sequência identificada pela designação SEQ ID N° 7 ou que híbrida com a SEQ ID S" 7 e também os ARN correspondendo ao ADN descrito antes. A presente invenção tem também por objecto composições que contêm os péptidos ou polipéptidos codificados pelo ADN referido antes ou fragmentos de ADN.

Os oligonucleótidos derivados da sequência VAU ou ainda do gene da integrase do vírus particularmente oligonucleótidos que compreendem pelo menos 9 nucleótidos, podendo ser utilizados para a detecção de sequências de ADN ou de ARN do vírus VIH-1 do grupo O em levantamentos biológicos, culturas celulares ou extractos de células, pela técnica da RCP ou qualquer outra técnica de amplificação genica. Estas sequências poderiam ser utilizadas quer como iniciadores de amplificação génica quer como sondas com vista à detecção especifica dos produtos de amplificação genica. São também utilizáveis como sonda de hibridação, os produtos de amplificação ou a sua sequência sintética correspondente, obtidos por síntese química (Applied Bíosystems). A presente invenção cobre igualmente qualquer fragmento com pelo menos 100 nucleótidos utilizável como sonda em reacções de hibridação e capazes de permitir uma reacção com uma parte do genoma de uma variante de em condições de hibridação muito severas.

Clonagem e sequenciação do gene env Vllf-Ui .y&.v.

Para a amplificação inicial por RCP do ADN do VIH-1 í o ADN total foi extraído das PBMC infectadas pelo e um segmento do gene pol (região integrase) foi amplificado com a ajuda de iniciadores degenerados:

Iniciador 4506 : § (&/?} ;

Seq. ID N°1;

Iniciador 5011: 5'ACTGC(C/T)CCTTC(NC/T)CCTTTCCA3';

Seq. ID N°2; O meio de reacção inclui KCl 50 mM, Tris-HCl 10 mM (PH 8,9), MgCl2 1,5 mM, gelatina 0,1 mg/mL, dNTP0,2 mM, Taq Polimerase 1 U (Amersham). Efectuou-se a RCP durante 43 ciclos térmicos a 92 °C durante 10 segundos, a 50 °C, durante 1 minuto, a 72 durante 40 segundos. O produto de amplificação resultante foi clonado num vector pBluescrípt, engendrando o clone ph4 depositado na CNCM em 20 de Outubro de 1994 com o n° 1-1486 que foi posteriormente utilizado como sonda para rastrear um banco de ADN lambda de baixo peso molecular, diferido por EcoRI, retirado de células infectadas pelo * Em resumo, as PBMC infectadas pelo foram postas em cultura conjunta durante 24 horas com as PBMC novas estimuladas com PHA e enfraquecidas em células iUíf, depois do que foi bem visível um efeito citõpatogénico (ECP) significativo. Extraiu-se então o ADN de baixo peso molecular seguindo o processo de Hirt (Hírt 1967) e digerido com a enzima EcoRI. Uma análise de "Southern blot" precedente deste ADN mostrou bem que o genoma 1¾¾ continha um único sitio EcoRI,

permitindo a clonagem de espécies de ADN circular não integrado representado a totalidade do genoma virai. O produto de digestão resultante foi submetido a uma electroforese em gel de agarose e a população de fragmentos de ADN com uma dimensão de 8-12 kb aproximadamente foi purificada e ligada ao ADN lambda Zap digerido por EcoRI (Stratagene). Após encapsidação, exposição e crivação por hibridação com o 11ADN ph4 marcado com -Kb identificou-se um clone, h H34, como sendo positivo e amplificado. A inserção Eco RI foi purificada e clonada por "shotgun" no vector M13mpl8 tratado com fosfatase, digerido com a enzima 'SrcíalSéqúénciàram-sé cento e cinquenta dos clonés obtidos num sequenciador de ADN 373A (Applied Biosystems) e as sequências resultantes foram juntas numa única sequência com a ajuda do software de análise de ADN GCG-Wisconsin. A análise desta sequência revelou numerosos codões anti-paralelos em todos os quadros de leitura, o que é muito sugestivo de um genoma hipermutado (Vartanian, et al. 1991). Sendo esta sequência inutilizável, foi por isso decidido amplificar por RCP o gene env do com a ajuda do ADN total de PBMC infectadas pelo VIH-1(vau e iniciadores oligonucleotidicos derivados da sequência ÀH34:

iniciador TH2 51GCTCTAGATGGGGATCTCCCATGGCAGG31 Seq. ID 11* 3; iniciador UH2 5 T GCTCTAGATCAGGGAAGAATCCCTGAGTGT3'. Seq. ID N* 4. A amplificação por RCP foi efectuada durante 35 ciclos térmicos a 92 °C durante 15 segundos, a 52 °C durante 1 minuto, a 60 °C durante 2 minutos e a 72 °C durante 2 minutos. O produto de amplificação resultante, com uma dimensão de 3,5 kb, foi clonado no vector Ml3mpl8 e sequenciado por meio de reacções sucessivas, utilizando primeiro o iniciador universal de sequenciação M13, depois os iniciadores deduzidos das sequências a montante. A análise das sequências nucleotidicas e peptidicas foi efectuada com a ajuda do software de análise de ADN GCG-Wisconsin. o gene env do codifica 877 aminoácidos no total, incluindo o péptido de sinal. A sequência nucleotidica do gene env do ¥!Β·'ν·2..^5· corresponde à Seq. ID N° 5 (ver figura 3).

Utilização de ácidos nucleicos a titulo de sondas A presente invenção tem também naturalmente por objecto a utilização dos ADN, ADNc, ou dos seus fragmentos ou de plasmidos recombinantes ou outros vectores equivalentes contendo estes fragmentos, enquanto sondas, para a detecção da presença ou não do vírus ¥ΙΙ!·ν11· em amostras de soro ou outros líquidos ou tecidos biológicos obtidos a partir de pacientes que se suspeita serem portadores do virus , Estas sondas são eventualmente marcadas (marcadores radioactivos, enzimáticos, fluorescentes, etc.) As sondas particularmente interessantes para a montagem do processo de detecção do vírus VIH-ií-apii ou de uma variante do V - 1 podem ser caracterizadas pelo facto de compreenderem a totalidade ou uma fracção do ADN complementar do genoma do virus VIH-I ou ainda nomeadamente os fragmentos contidos em diversos clones. As sondas caracterizadas por compreenderem uma fracção do ADNc do que contêm toda ou parte da região env fazem parte da presente invenção.

As sondas utilizadas neste processo de detecção do virus VIH-I(vau) ou nos kits do diagnóstico, não estão de nenhuma forma limitadas às sondas descritas antes. Compreendem todas as sequências nucleotidicas resultantes do genoma do vírus VSIHlgvxsy ou de uma variante do ou de um virus próximo da sua estrutura, desde que elas permitam a detecção, a partir de fluidos biológicos de pessoas susceptíveis de ter SIDA, de um vírus VIH-1 do grupo 0, em particular o vírus VXBKtjsacj por hibridação com o ADN ds> vírus VIH-1 ,

Particularmente vantajosas são as sondas que, aquando da hibridação com o VIH-1, fazem uma reacção forte com os VIH que pertencem ao grupo 0 e uma reacção fraca com os VIH- 1 que pertencem ao grupo Μ. A titulo de exemplo não limitativo, uma sonda fabricada a partir da sequência do gene da integrase do virus (SEQ ID N°7 ; Figura 7) dá, quando está hibridada com o VIH- 1 em condições de hibridação tal como as descritas na patente de Invenção europeia EP 178.978, uma reacção forte com os VIH do grupo 0 e uma reacção fraca com os VIH- 1 do grupo M. A detecção pode ser realizada de qualquer maneira conhecida, nomeadamente: pondo em contacto estas sondas quer com os ácidos nucleicos obtidos a partir de células contidas em fluidos biológicos (por exemplo liquido céfalo-raquidiano, saliva, etc.), quer com os próprios fluidos, desde que os seus ácidos nucleicos se tenham tornado acessíveis a hibridação com estas sondas e em condições que permitam a hibridação entre estas sondas e os ácidos nucleicos. e por uma detecção da hibridação eventualmente produzida. 0 referido diagnóstico que põe em jogo reacções de hibridação pode igualmente ser realizado com a ajuda de misturas de sondas derivadas, respectivamente, do VIH-Xímsií do VIH-1 e do VIH-2, desde que não seja necessário fazer a distinção entre os tipos de vírus VIH pesquisados. A invenção tem ainda por objecto vectores de expressão contendo a sequência que codifica para as proteínas do envelope de VIH- 1; o pedido de patente de invenção descreve igualmente vectores de expressão contendo as sequências que codificam a integrase. A presente invenção compreende composições para a detecção da presença ou não do vírus em amostras de soro ou outros líquidos ou tecidos biológicos obtidos a partir de pacientes susceptíveis de serem portadores do vírus VIH-1 (vau) - Estas composições são caracterizadas por compreenderem pelo menos uma sonda obtida a partir de uma sequência nucleotídica resultante ou derivada do vírus VIH-Iftwsií particularmente um fragmento de ADN de VIH-1 contendo a região ou uma parte da região que codifica a proteína env do vírus ¥IM~1 ou de uma variante de VIH- 1 (VAU) .

Com vantagem, a composição descrita antes compreende igualmente uma sonda obtida a partir de uma sequência nucleotídica resultante de VIH- I ou de VIH-2.

Outras composições de diagnóstico compreendem os iniciadores da invenção que se utilizam na amplificação dos genes de retrovírus do subgrupo 0 ou variantes destes retrovírus.

Antigenes, nomeadamente proteínas e glicoproteinas A invenção tem por objecto uma proteína de retrovírus VIH - 1 do grupo (ou subgrupo 0) ou polipéptido ou péptido natural ou sintético que compreende pelo menos uma parte da dita proteína, susceptíveis de serem reconhecidas por anticorpos que se podem isolar a partir de soro obtido depois de uma infecção por uma estirpe de VIH-1 do grupo 0, VAU. A invenção tem por objecto uma proteína do envelope externo do retrovirus codificado pelo gene que compreende a sequência correspondendo à SEQ ID N° 5. Segundo um modo de realização preferido da invenção, esta proteína é além disso caracterizada por compreender a sequência de aminoácidos correspondendo à seq ID n° 6 representada na figura 3 e comportando os resíduos de aminoácidos 1 a 526. A invenção tem também por objecto qualquer polipéptido ou variante, derivado da referida sequência, tendo um epítopo susceptível de sere reconhecido por anticorpos induzidos pelo vírus A referida proteína pode ser obtida sob a forma glicosilada e não glicosilada. A invenção tem também por objecto uma proteína da transmembrana do envelope que compreende a cadeia de aminoácidos da SEQ ID N° 8 representada na figura 3 entre os resíduos de aminoácidos 527 e 877. Esta proteína da transmembrana, no quadro da invenção, está sob a forma glicosilada ou não. A invenção tem por objecto todos os antigénios, nomeadamente proteínas, glicoproteínas, polipéptidos ou péptidos, obtidos por expressão de sequências de codificação do genoma do V I - 1 e com propriedades imunológicas equivalentes as do ¥11'-Diz-se que os antigénios são equivalentes, no quadro da presente invenção, desde que sejam reconhecidos pelos mesmos anticorpos, nomeadamente anticorpos isoláveis a partir de soro obtido de um paciente que tenha sido infectado por um %M“*Í(vru! .

Em particular, a invenção tem por objecto péptidos ou polipéptidos sintetizados quimicamente e cuja sequência de aminoácidos está contida na das proteínas do envelope de VIH-1 (vau)'/ representada na figura 3 ou péptidos ou polipéptidos equivalentes.

Deve ainda incluir-se, entre os péptidos, polípéptí-dos, proteínas ou glicoproteínas equivalentes, os fragmentos dos antigénios gue precedem e os péptidos preparados por síntese química ou por engenharia genética, desde que dêem lugar a reacções imunológicas cruzadas com os antigénios de gue eles derivam. Por outras palavras, a invenção tem por objecto gualquer péptido ou polipéptido com epítopos idênticos ou semelhantes aos epítopos dos referidos antigénios, susceptíveis de serem reconhecidos pelos mesmos anticorpos. Fazem parte deste último tipo de polipéptidos os produtos de expressão de sequências de ADN correspondentes às sequências dos ADN que codificam os polipéptidos ou antigénios referidos.

Mais particularmente, os antigénios obtidos a partir do virus ou produzidos por engenharia genética ou síntese química clássica e que apresentam o maior interesse no contexto da presente invenção são os antigénios que permitem estabelecer uma distinção clara entre os vírus VXÍ~X^sjs$ da presente invenção e os virus dos grupos VIH-1 e VIH-2. Sob este ponto de vista, observaram-se diferenças consideráveis ao nível da prót-é;:is& do envelope do vírus assim como ao nível do epítopo imuno-dominante da porção externa da proteína PM. Parece que as proteínas gag e pol apresentam mais semelhança com o vírus VIH-1 do que a proteína do envelope. A presente invenção também tem por objecto péptidos ou polipéptidos idênticos à região imuno-dominante da glico-proteína da transmembrana do envelope do VXK^l ; Esta região está representada na figura 3.

Os polipéptidos preferidos desta região são, por exemplo, os que contêm a sequência CKNRLIC ou correspondente a esta sequência. Pode tratar-se também de polipéptidos ou péptidos que respondem a sequência RLLALETFIQNWWLLNLWGCKKRLIC ou que compreendem esta sequência.

Um outro péptido preferido identificado a seguir pela designação de "péptido VAU" responde à sequência que se segue ou compreende esta sequência ou qualquer parte desta sequência susceptível de ser reconhecida por anticorpos dirigidos contra o retrovírus vIM-"1(vau) RARLLALE TFIQNQQLLNLWGCKNRLICYT SVKWNKT.

Os polipéptidos variantes desta sequência são, por exemplo, os polipéptidos representados na figura 4 para os isolados e vih-1 mmi * Estes polipéptidos podem também derivar dos anteriores por inserção e/ou eliminação e/ou substituição, por exemplo, substituição conservadora por resíduos de aminoácidos. 0 presente pedido de patente de invenção divulga um péptido resultante do vírus VIH-1-0 DUR depositado em 23 de Fevereiro de 1995 no CNCM com a referência 1-1542, ou um péptido cuja sequência se distingue da do precedente por substituição, eliminação ou adição de aminoácidos, embora este péptido distinto conserve as caracteristicas antigéni-cas do precedente.

Outros péptidos descritos no presente pedido de patente de invenção estão definidos a seguir.

Assim, um péptido preferido é um péptido que comporta pelo menos 4 aminoácidos consecutivos contidos na sequência GAG representada na figura 8 ou de uma sequência GAG semelhante, sob o ponto de vista imunológico, obtida de uma variante do vírus VIH-1-0 DUR, sendo a referida sequência semelhante, sob o ponto de vista imunológico, reconhecida por anticorpos que reconhecem também de maneira especifica pelo menos uma das sequências AHPQQA, LWTTRAGNP contidas na sequência GAG da figura 8.

Preferencialmente, este péptido consiste num péptido cuja sequência em aminoácidos está contida quer numa das sequências seguintes: SPRTLNAWVKAVEEKAFNPEIIPMFMLSEGA (1) MLNAIGGHQGALQVLKEVIN (2). GPLPPGQIREPTGSDIAGTTSTOQEQI (3) IPVGDIYRKWIVLGLNKMVKMYSPVSILDI (4) QGPKEPE'RDYVDRFYKTKLAE (5) AHPQQA (5 bis) LWTTRAGNP (5ter), quer numa sequência imunologicamente semelhante correspondente, comportando este péptido pelo menos 4 aminoácidos consecutivos de uma das ditas sequências.

Preferencialmente ainda, este péptido consiste num péptido cuja sequência em aminoácidos está contida quer numa das sequências que se seguem: SPRTLNAWVK (6) GSDIAGTTST (7) QGPKEPFRDYVDRF (8) quer numa sequência imunoloqicamente semelhante correspondente, comportando este péptido pelo menos 4 aminoácidos consecutivos de uma das ditas sequências.

Os péptidos particularmente preferidos são os péptidos que contêm: - a sequência de aminoácidos NPEI (9) ou - a sequência de aminoácidos AVEEKAFNPEIIPMFM (10), e mais particularmente os péptidos cuja sequência em aminoácidos está contida quer numa das sequências que se sequem: IGGHQGALQ (23) REPTGSDI (24) quer numa sequência imunologicamente semelhante correspondente, comportando este péptido pelo menos 4 aminoácidos consecutivos de uma das ditas sequências, assim como o péptido cuja sequência em aminoácidos está contida na sequência de aminoácidos que se segue: INDEAADWD (25) quer numa sequência imunologicamente semelhante correspondente, comportando este péptido pelo menos 4 aminoácidos consecutivos da dita sequência. O presente pedido de patente de invenção divulga as sequências de ácidos nucleicos que codificam os péptidos (23), (24) e (25) assim como as sequências de ácidos nucleicos que codificam as sequências semelhantes sob o ponto de vista imunológico assim como as composições que compreendem pelo menos um desses ácidos nucleicos. 0 presente pedido' de patente de invenção descreve igualmente a utilização de pelo menos um desses ácidos nucleicos para a detecção e a discriminação entre as estirpes VIH-1 grupo M e HIV-1 grupo 0. 0 presente pedido de patente de invenção descreve igualmente um péptido resultante do vírus VIH-1-0 DUR definido antes, comportando o referido péptido pelo menos 4 aminoácidos consecutivos, do anel V3 de gp 120 representado na figura 9 ou da sequência correspondente, semelhante sob o ponto de vista imunológico, resultante de uma variante do vírus VIH-1-0 DUR, sendo a referida sequência, semelhante sob o ponto de vista imunológico, reconhecida pelos anticorpos que reconhecem também de maneira especifica pelo menos uma das sequências: KEIKI (12), EREGKGAN (13), CVRPGNNSVKEIKI (14), QIEREGKGANSR (15).

Preferencialmente, este péptido contém: a) quer a sequência CVRPGNNSVIOE'IOGPMAWVSMQIEREGKGA-NSRTAFC (11) ou uma parte desta sequência que contém pelo menos 4 aminoácidos b) quer uma sequência de aminoácidos distinta da sequência de a) na qual um ou vários aminoácidos estão substituídos por um ou vários aminoácidos sob reserva de que 0 péptido conserve a sua reactividade com um anti-soro contra o referido péptido. c) quer uma sequência de aminoácidos distinta da sequência de a) ou b) na qual um ou vários aminoácidos foram suprimidos ou adicionados sob reserva de que 0 péptido conserve a sua reactividade com um anti-soro contra o péptido da a) . d) quer uma sequência ou parte de uma sequência correspondente semelhante sob o ponto de vista imunológico.

Ainda preferencialmente, este péptido contém quer a sequência KEIKl (12), quer a sequência EREGKGAN (13), quer a sequência GPMAWYSM (16).

De maneira particularmente preferida, um péptido conforme definido antes contém a sequência de aminoácidos CVRPGNNSVKEIK1 (14), ou a sequência QIEREGKGANSR (15). 0 presente pedido de patente de invenção divulga igualmente um péptido resultante do vírus VIH-1-0 DUR tal como ficou definido antes, comportando o referido péptido pelo menos 4 aminoácidos consecutivos, cuja sequência inteira está contida na sequência da região imuno-dominante da gp 41 representada na figura 9 ou numa sequência correspondente, semelhante sob o ponto de vista imunológico, resultante de uma variante do vírus VIH-1-0 DUR, sendo a referida sequência, semelhante sob o ponto de vista imunológico, reconhecida por anticorpos que re-conhecem também de maneira especifica pelo menos uma das sequências: RLLALETLMQNQQL (17), LNLWGCRGKAICYTSVQWNETWG (18), CRGKAI (.19), SVQWN (20) , RLLALETLMONQQLLNLWGCRGKAICYTS {%l\ #' QNQQLLNLWGCRGKAICYTSVQWN (22) .

De uma forma preferida, este péptido é um péptido contendo a sequência RLLALETLMQNQQL (17) ou LNLWGGRGKAICY-TSVQWNETWG (18) ou parte deste péptido (18) contendo: a) quer a sequência CRGKAI (19), quer a sequência SVQWN (20) na qual Q, se for caso disso, está substituído por um aminoácido diferente, embora também diferente de K, ou as duas sequências ao mesmo tempo, b) quer uma sequência de aminoácidos distinta da sequência de a) na qual um ou vários aminoácidos estão substituídos por dois aminoácidos sob reserva de que o péptido conserve a sua reactividade com um anti-soro contra o péptido de a). c) quer uma sequência de aminoácidos distinta da sequência de a) ou b) na qual um ou vários aminoácidos foram suprimidos ou adicionados sob reserva de que o péptido conserve a sua reactividade com um anti-soro contra o péptido da a). d) quer uma sequência ou parte de uma sequência correspondente semelhante sob o ponto de vista imunológico.

Preferencialmente ainda, este péptido possui uma ou outra das características seguintes: - a sua sequência do terminal N, que contém pelo menos 8 aminoácidos, não é reconhecida, sob o ponto de vista imunolóqico, pelos anticorpos formados contra a sequência RILAVERY contida na região imuno-dominante da gp41 da estirpe VIH-l-LAI. - ele não é reconhecido pelos anticorpos formados contra o péptido SGKLIC da estirpe VIH-l-LAI. - contém uma das duas sequências seguintes: RLLALETLMONQQLLNLWGCRGKAICYTS (21) QNQQLLNLWGCRGKAICYTSVOWN (22)

Síntese de péptidos VAU

Preparou-se um péptido VAU pela técnica clássica de síntese peptídica em fase sólida pelo processo Fmoc em "fluxo contínuo". Preparou-se o péptido com a ajuda de um sintetizador Milligen 9050 PEP utilizando a resina "Millipore" PEG PAL, substituída pelo primeiro resíduo de aminoácido do terminal C. As cadeias laterais dos aminoácidos estão protegidas pelos grupos seguintes: Pmc para a arginina; Trt para a asparagina, a glutamina e a cisteína; Boc para a lisina; éster de tBu para o ácido glutâmico; éter de tBu para a serina, a treonina e a tirosina. Os grupos temporários Ftnoc são eliminados por uma solução de piperidina a 20 % em DMF. As reacções de acoplamento de cada aminoácido são realizadas com 6 equivalentes de DIPCDI e de HOBT. Alguns resíduos necessitam de um duplo acoplamento nomeadamente as argininas 1 e 23, as cisteínas 19 e 26, a asparagina 11, as glutaminas 10, 12 e 13, a alanina 4, a isoleucina 9, as leucinas 2, 3, 14 e 15.

Após o acoplamento, a resina é seca em vácuo. O péptido é clivado do suporte pelo reagente K durante 4 horas a temperatura ambiente, 0 péptido impuro precipita e é lavado com éter etílico. 0 produto é purificado por cromatografia liquida a alta pressão (CLAP) num equipamento WATERS LC prep 4000 com cartuchos WATERS Delta Pak C18 da WATERS de 40x100 mm, débito de 30 mL/mn, gradiente de acetonitrilo/TFA a 0,1%. Juntam-se as fracções que contêm o péptido, concentram-se num evaporador rotativo e depois são liofilizadas.

Ciclização O péptido é dissolvido (0,025 mM) numa solução de acetato de amónio 10 mM. Leva-se o pH a 8,5 com uma solução de amoníaco 1 M. Reajusta-se o pH passadas 3 ou 4 horas. A ciclização é seguida de CLAP a 214 nm e 280 nm, coluna Delta Pak C18 5μ da WATERS, gradiente acetonitrilo/TFA a 0,1 %. A ciclização termina ao fim de 15 horas. O pH é levado a 6 com a ajuda de ácido acético a 97-100 %, a solução é liofilizada e depois purificada nas mesmas condições que para o péptido impuro. O péptido é controlado por CLAP e por espectrometria de massa segundo a técnica de electro-pulverização (espectrofotómetro VG Trio 2000 da FISON).

Fmoc : Fluoroenil-9 metiloxicarbonilo Pmc : Pentanemetil-8 cromano- sulfonil-6 Trt : Tritrilo

Boc : Terc-butiloxicarbonilo tBU : terc butilo DMF : Dimetilformamida DIPCDI : Di-isopropil- carbodi-imida HOBT : Hidroxi-1 benzotriazole TFA : ácido trifluoroacético

Reagente K : 2,5 mL/2,5 mL/2,5 ml/1,5 mL/41 mL.

Comparação da sequência de aminoácidos do envelope VIH-com a sequência correspondente de outros virus VIH. A análise por Western-blot (transferência anticor-po/proteína) de uma série de amostras séricas provenientes de uma paciente infectada pelo ¥11^1 í^í está representada na figura 2. Fez-se a incubação de tiras de nitrocelulose, comportando proteínas separadas por electroforese e provenientes de partículas purificadas de HIV (LAV BLOT, SAN0F1 DIAGNOSTICS PASTEUR), com amostras de soro e avaliou-se a sua reactividade de acordo com protocolos recomendados pelo fabricante. Os resultados obtidos são os seguintes: Tira 1: proteínas especificas de VIH-2, que se faz reagir com uma amostra de soro obtida da paciente com em Fevereiro de 1992. Tiras 2-7: soros positivos a VIH-1; soros da paciente com : 2 obtido em

Novembro de 1990; 3: obtido em Dezembro de 1990; 4: em Fevereiro de 1991; 5: em Fevereiro de 1992; 6: testemunho negativo; 7: testemunho positivo (soro de um indivíduo infectado pelo VIH-1). Os nomes e as dimensões das proteínas (em kD) estão indicados na margem. A figura 3 mostra um alinhamento da sequência de aminoácidos do envelope de com a sequência correspondente do isolado de referência VIH-1 LAI (Wain-Hobson, et al. 1985) . Os péptidos de sinal, o anel V3 e o epítopo muno-dominante gp41 estão evidenciados pelos rectângulos a tracejado. O sítio de clivagem entre a glicoproteína do envelope externo gp 120 e da gp 41 da transmembrana está indicado por setas. As linhas verticais entre as letras dos aminoácidos indicam uma identidade completa, os dois pontos (:) indicam uma forte homologia e os pontos (.) indicam uma homologia limitada entre aminoá-cídos individuais. 0 alinhamento foi efectuado utilizando o programa GAP do software GCG-Wisconsin. A versão original (1.0) dos programas GAP e BESTFET foi escrita por Paul Haeberli a partir de um estudo detalhado das publicações de Needleman e Vunsch (J. Mol. biol. 48, 443-453 (1970) e de Smith e Waterman (Adv. Appt. Math. 2; 482-489 (1981). Os alinhamentos limitados foram realizados por Paul Haeberli e adicionados ao software para constituir a versão 4.0. As penalidades de ausência de intervalo no alinhamento das proteínas foram modificadas tal como sugerido por Rechid, Vingron e Argos (CABIOS 5; 107-113 (1989) . 0 alinhamento da figura 3 revela numerosas zonas de divergência significativa com alguns domínios conservados aqui e acolá. Estas regiões conservadas correspondem grosseiramente aos domínios igualmente conservados nos isolados clássicos de VIH-1 (Alizon, et al. 1986, Benn, et al. 1985) . Entre os domínios divergentes, o anel V3, chamado também determinante principal de neutralização (Javaherian, et al. 1990, Javaherian, et al. 1989, Matsushita, et al. 1988) é claramente um dos mais divergentes, embora as duas cisteínas que definem o anel estejam conservadas. A sequência que recobre o anel, GPGRAF para o VIH-1 LAI é a GPMAWY no Este elemento da é Idêntico ao do isolado do grupo O do camaronês (Van den Heasevelde, et al. 1994), mas é diferente do do outro isolado do grupo 0, HIVMVP5180 (Gurtler, et al. 1994), para o qual o elemento é GPMRWR.

No conjunto do envelope, identificaram-se no total 29 sítios potenciais de N-glicosilação, dos quais 13 estão conservados comparativamente com outras proteínas do envelope de VIH-1. Encontrou-se também 19 cisteínas conservadas no total, o que indica que a arquitectura global de dobragem da proteína está conservada, mas encontraram-se 5 cisteínas não conservadas. A figura 4 mostra o alinhamento múltiplo dos péptidos imuno-dominantes no segmento extarcelular da glicoproteína do envelope da transmembrana de diferentes isolados de VIH-1. Todas as sequências estão comparadas com a sequência de referência de VIH-1 LAI. Os traços de união indicam uma identidade com VIH-1 LAI. 0 alinhamento foi efectuado com a ajuda do programa PILEVP do software GCG-Wisconsin.

No programa PILEVP, a estratégia de junção representada pelo dendrograma é designada por UPGMA, que significa em inglês «Unweighted pair-group method using arithmetic averages» (Smith, P. Η. A. Sokal, R. R. (1973) em Numerical Taxonomy (p.p. 230-234), W. H. Freemanand Company, São Francisco, Califórnia, EUA). Cada alinhamento em pares do PILEVP utiliza o processo de Needleman e Wunsch (Journal of Molecular Biology 48; 443-453 (1970)).

Como mostra a figura 4, a sequência de aminoácidos do epitopo imuno-dominante da porção externa da proteína TM (Gnann, et al. 1987) é sensivelmente diferente da de outros isolados de VIH-1 e VIH-2. Contudo, conservou a maior parte dos aminoácidos que se mostraram conservados entre os virus

Verificou-se que certos aminoácidos particulares não estavam conservados a não ser os vírus do grupo 0: tal é o caso da lisina na posição 21 num péptido de 26 aminoácidos, da treonina na posição 7 e da asparagina na posição 11. Estas diferenças poderiam explicar a ausência de detecção de antigénios do envelope de VIH-1 clássicos por um dos soros da paciente com 5¾ e igualmente, provável mente, por o dos pacientes infectados com outros virus do grupo 0. Globalmente, a comparação entre as sequências do envelope de VIH-1 LAI e V5 - l.ívstn mostrou uma identidade de 50 %. A sequência do envelope de foi igualmente comparada com a de outros representantes de VIH como nos dois membros do grupo O do VIH-1 descritos e sequenciados: e VIH-1 e VIS. Os resultados desta análise, apresentados no quadro 1, estabelecem que o pertence ao grupo 0. 0 envelope de é idêntico em 70 % ao envelope de e idêntico em 71 % ao de VIH— 1 Entre os sub-tipos de VIH-1 mais correntes, a identidade ao nível do envelope é comparável, indo de 74 %

VIH-1 eu 77 ra^isai 76 80 75 74 76 VIScpzcab 61 62 63 63 li· :ά· 38 39 39 40 39 37 37 38 38 38 74 VISagmtyo 37 36 37 38 40 46 47 51 52 52 52 53 33 32 HIVmvp5180 51 52 54 51 52 36 33 íLiVvau 50 51 52 51 54 35 34 VIH- IiaiVIH-Ιεπ VIH-liai VIH- 1U4 55 VI v IH - 2rop ás VIS

A relação entre VIH-1 outros membros da filogenia de VIH-1 e os dois vírus recentemente descritos do grupo O foi analisada por construção de uma árvore filogenética de parcimónia não ponderada com a ajuda da sequência nucleotidica da região da transmembrana env. 0 resultado desta análise está representado na figura 5 na qual os números indicam o número de alterações nucleotidicas. A figura 5 mostra que o é praticamente equidistante dos dois outros virus do grupo 0 e que, globalmente, estes três virus parecem estar aproximadamente equidistantes uns dos outros. Com efeito, o número de alterações nucleotidicas entre o e o ¥11» 1·$^ é de 218 no segmento de genoma analisado, enquanto a distância é de 183 entre o e o e de 213 entre o UXlmén e 0 *·«*'·

Este perfil de divergência é muito semelhante ao que se encontra no conjunto dos outros sub-tipos de VIH-1 em que o número de alterações nucleotidicas que se encontra entre dois sub-tipos distintos vai de 157 (sub-tipo E ao sub-tipo F) a 219 (sub-tipo A ao sub-tipo D). 0 quadro 1 mostra a comparação das sequências de envelope dos diferentes virus aparentados com o VIH-1. Os números indicam a percentagem de identidade em aminoácidos entre as sequências do envelope, tal como foram calculadas com a ajuda do programa GAP do software GCG-Wisconsin. *! para o KTViàm* utilizando-se apenas a proteína do envelope externo na comparação.

Composição que compreende antigénios de

De um modo geral, a invenção tem por objecto qualquer composição que se possa utilizar na detecção in vitro da presença, num fluido biológico, nomeadamente de pessoas que estiveram em contacto com o VIH-1 {Vad) ou de anticorpos contra um pelo menos dos antigénios de V I - 1 . Esta composição pode ser aplicada ao diagnóstico selectivo da infecção por um VIH-1 do grupo 0, montando técnicas de diagnóstico tal como as que estão descritas nos pedidos de patentes de invenção europeias EP 84401.834 e EP 87400.151.4. No contexto da presente invenção, utiliza-se qualquer constituinte que compreenda determinantes ãntigénico'S' capazes de serem reconhecidos'por anticorpos-produzidos contra o vil* 1 .> por exemplo antigénios ou péptidos recombinantes ou péptidos sintetizados quimicamente definidos a partir da sequência do envelope de VIH-lsW. Sob este ponto de vista, a invenção tem por objecto, mais particularmente, composições que contêm uma pelo menos das proteínas do envelope do virus YX#*1-Mencionar-se-á, a titulo de exemplos de composições, as que contêm proteínas, glicoproteínas ou péptidos da proteína do envelope que corresponde ao conjunto da região 590-620 da proteína gp41 do VXH.~1 ou às partes desta região específicas do ¥Xirl{«&?] tal como os péptidos -TFIQN- ou -WGCKNR-. A invenção tem igualmente por objecto composições que associam proteínas e/ou glicoproteínas e/ou péptidos de VIH-I(vao)/ recombinantes ou sintéticos, com proteínas e/ou glicoproteínas e/ou péptidos de VIH-1 e VIH-2 e/ou de um outro VIH-1 do grupo O obtidos por extracção ou nos lisados ou por recombinação ou por síntese química e/ou de péptidos derivados dês proteínas ou glicoproteínas e susceptíveis de serem reconhecidos por anticorpos induzidos pelo vírus VIH-1 e/ou VIH-2 e/ou VIH-1, grupo O.

As composições de diagnóstico que contêm determinantes antigénicos capazes de ser reconhecidos por anticorpos dirigidos contra o VIH-1 (Vao)/ em particular composições peptídicas, podem ser incluídas ou associadas a composições ou o kits já disponíveis para a detecção da infecção por retrovírus VIH-1 e/ou VIH-2, de modo a ampliar o espectro de detecção de kits à detecção dos retrovírus VIH-1 do grupo O. A título de exemplos não limitativos: - quer proteínas do núcleo, particularmente as proteínas gag, pol, VIH-1 e VIH-2 ou péptidos destes e proteínas ou péptidos do envelope de - quer glicoproteínas do envelope de VIH-1, glicoproteínas do envelope de VIH-2 e glicoproteínas do envelope de VIM-i (vmj) t - quer misturas de proteínas e/ou glicoproteínas de VIH-1, de proteínas e/ou glicoproteínas de VIH-2 e/ou de proteínas e/ou glicoproteínas de VIH-1. É importante notar que, embora os anticorpos de pacientes infectados pelo vírus VIH-1 do tipo 0 reajam fortemente com os antigénios gag e pol do vírus VIH-1 do tipo M, a sua reactividade é praticamente nula com antigénios do envelope de vírus do grupo M. É por isso importante que a composição da presente invenção compreenda uma proteína ou um péptido do envelope de ¥Χ1~:Χρ^# de modo a que o vírus possa ser detectada com certeza.

Essas composições, utilizadas em diagnóstico, ajudam, por consequência, no diagnóstico da SIDA ou nos sintomas que lhes estão associados, que se estendem num largo espectro dos agentes etiológicos responsáveis. Não se pode deixar de dizer que a utilização de composições de diagnóstico que não contêm proteínas e/ou glicoproteínas do envelope de não é menos útil para a detecção mais selectiva da categoria de retrovirus que pode ser considerada como responsável pela doença.

Processos e kits de diagnóstico de infecções causadas nomeadamente pelo virus VIIM A presente invenção diz respeito a um processo de diagnóstico in vitro da infecção pelos VIH, agentes etiõlógicos da SIDA e de síndromas aparentados, que compreendem pôr em contacto um soro ou um outro «xo biológico, proveniente de um paciente ou de um indivíduo que constitui objecto de diagnóstico, com uma composição contendo pelo menos uma proteína, uma glicoproteína ou um péptido do e a detecção de uma reacção imunoló- gica eventual. Exemplos dessas composições já foram descritos antes.

Os processos preferidos envolvem, por exemplo, reacções imuno-enzimátícas do tipo ELISA ou de imuno-fluorescência. As detecções podem ser feitas por imuno-fluorescência directa ou indirecta ou dosagens imuno-enzimáticas directas ou indirectas.

Tais detecções compreendem, por exemplo: - o depósito de quantidades determinadas do extracto ou composições antigénicas visadas conformes com a presente invenção nas cavidades de uma microplaca; - a introdução em cada cavidade de soro diluído ou não, susceptível de conter os anticorpos cuja presença deve ser detectada in vitro; - a incubação da microplaca; a lavagem cuidadosa da microplaca com um tampão apropriado; - a introdução nas cavidades da microplaca de anicorpos marcados específicos de anti-lmunoglobulina humana, sendo a marcação feita por uma enzima escolhida entre as que são capazes de hidrolisar um substrato de tal modo que este último sofre então uma modificação da sua absorção das radiações, pelo menos numa banda com um comprimento de onda determinado e - a detecção, de preferência de maneira comparativa em relação a um testemunho, da importância da hidrólise do substrato enquanto medição dos riscos potenciais ou da presença efectiva da infecção. A presente invenção diz igualmente respeito o kits ou kits de diagnóstico da infecção pelo que compreendem, nomeadamente: - um extracto, uma fracção mais purificada ou um antigénio sintético derivada dos tipos de vírus indicados antes, esta fracção de extracto ou antigénio marcado, por exemplo, de maneira radioactiva, enzimática, fluorescente ou outra, - anticorpos anti-imunológicos humanos ou uma proteína A (fixados de forma vantajosa num suporte insolúvel em água) tal como esferas por exemplo de agarose) ou cavidades de microplacas, etc.), - eventualmente uma amostra de fluido biológico ou células obtidas a partir de um testemunho negativo de um indivíduo; - tampões e, se for caso disso, substratos para a visualização da marcação. A invenção tem também por objecto composições imunogénicas capazes de induzir a formação de anticorpos que reconhecem antigénios que podem ser obtidos por síntese química ou por recombinação.

Serologia A capacidade dos anticropos séricos da paciente infectada pelo VIH-1(Vau) para reagir com preparações antigénicas de VIH-1 foi avaliada com a ajuda de diversas kits disponíveis no comércio: SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR, (GENELAVIA MIXT) ABBOTT, WELLCOME, e BEHRING. A reactivi-dade destes anticorpos com diferentes proteínas de VIH-1 foi examinada com a ajuda do kit de Westwen-blot de SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR, seguindo os protocolos recomendados pelo fabricante.

Mais precisamente, o soro da paciente foi examinado várias vezes com a ajuda de kits de ELISA específicos para VIH-1. Primeiro fez-se a sua análise e verificou-se que era positivo em 1990, sendo classificado com 7,33 (este número corresponde a relação da DO medida em relação à DO do ruído de fundo) com o kit da SANOFI DIAGNOSTICS PASTEUR, 3,50 com o kit da ABBOTT e 2,70 com o kit da WELLCOME. Aquando da utilização dos reagentes específicos simultaneamente para VIH-1 e VIH-2, o soro foi classificado com 1,.42 com o kit da Behring e 4,40 com o kit da WELLCOME. A capacidade do soro da paciente para reagir em datas diferentes com diferentes proteínas da estrutura de VIH-1 foi estudada com a ajuda do doseamento por imunoimpressão LAV BLOT VI H-l, teste comercializado por SANOFl DIAGNOSTICS PASTEUR. Como mostra a figura 5 com todas as suas amostras de soro analisadas, apenas se notou uma reactividade muito fraca do soro com as proteínas env de VIH-1 gpl60 e gpl20. Contudo, o soro reagiu fortemente com as proteínas gag do VIH-1 p55 (precursora de gag) e p24 (CA) e com os produtos pol p66 (FIT) e p34 (IN) . Na imunoimpressão de VIH-2, não se detectou senão uma reactividade muito baixa com a p26 gag.

Isto ilustra que a detecção do anticorpo específico do grupo 0 com os kits de diagnóstico sérico disponíveis no comércio, deve ser cuidadosamente controlada. Embora os anticorpos séricos de pacientes infectados por virus do grupo 0 apresentem fortes reacções cruzadas com os antigénios gag e pol do grupo M, eles apresentam poucas ou nenhumas reacções com os antigénios do envelope do grupo M. Com efeito, num estudo preliminar recente de vários soros de pacientes infectados pelo grupo 0, verificou-se que a capacidade de detectar anticorpos específicos do grupo 0 era muito diferente consoante o kit de detecção utilizada (Loussert-Ajaka, I., Ly, T. D., Chaix, M. L., Ingrand, D., Saragosti, S., Courroucé, A. M., Brun-Vézinet, F. e Simon, F. (1994) . VIH-l/VIH-2 seronegativity m VIH-1 subtype 0 infected patients. Lancet. 343, 1393-1394.). Isto implica que é necessário um estudo cuidadoso e alargado da reactividade de um grande número de soros do grupo 0 com todos os kits de diagnóstico disponíveis no mercado.

Composições que compreendem anticorpos policlonais ou monoclonais preparados a partir de antigénios recombinantes ou sintéticos do vírus VIH-1 (vau) A invenção tem por objecto um soro susceptível de ser produzido em animais por inoculação do VIH-1 particu- mais lamente os epítopos antigénicos do VIH-1 e, particularmente, os epítopos antigénicos da proteína do envelope do virus VIH-1 „ A invenção tem por objecto, mais particularmente, os anticorpos policlonais mais especificamente orientados contra cada um dos antigénios, nomeadamente proteínas e glicoproteínas do virus. Tem também por objecto anticorpos monoclonais produzidos por diferentes técnicas, estando estes anticorpos monoclonais orientados respectivamente mais especificamente contra as diferentes proteínas do VIH-1 , particularmente as proteínas do envelope do VIH-1

Estes anticorpos policlonais ou monoclonais são utilizáveis diferentes aplicações. Pode-se mencionar essencialmente a sua utilização para neutralizar as proteínas correspondentes, leia-se para inibir a infecti- gMMÉÉSÊe ser utilizados por exemplo, para pôr em evidência os antigénios virais nas preparações biológicas ou para realizar operações de purificação das proteínas e/ou glicoproteínas correspo-dentes, por exemplo, aquando da utilização em colunas de cromatografia de afinidade. A título de exemplo, anticorpos anti-envelope ou anticorpos anti-gag são reagentes utilizáveis em diagnóstico, em particular para a detecção de partículas de VIH-1 do grupo 0 por ELISA de captura de antigénio. A invenção tem por objecto anticorpos dirigidos contra um dos antigénios do vírus VIH-1 produzidos a partir de sequências de aminoácidos do VIH-1 * As técnicas de obtenção de anticorpos a partir de epítopos antigénicos semelhantes aos epítopos antigénicos do vírus VIH-1 da presente invenção já foram descritas antes. A técnica de preparação de anticorpos descrita na publicação de ULMER et al., 1993 pode ser utilizada por especialistas na matéria para preparar os anticorpos da presente invenção, permitindo as modificações adaptar esta técnica aos antigénios da presente invenção fazendo parte dos conhecimentos dos especialistas na matéria.

Estudo da imunoreactividade do péptido vau A imunoreactividade do péptido vau foi verificada, depois de ter preparado placas ELISA experimentais, segundo um protocolo estabelecido por um ensaio de avaliação dos anticorpos anti-HIV. Este ensaio baseia-se na detecção de uma fase sólida preparada com o péptido que simula o epitopo imuno-dominante da glicoproteína de envelope do virus do grupo (ou subgrupo) 0, isolado VAU. A montagem do teste foi decalcada do protocolo proposto pelo kit GENELAVIAB MIXT, com os reagentes deste kit.

Os dados experimentais reunidos nos dois quadros das figuras 21 e 22 demonstram que: a) os quatro soros recolhidos em pacientes contaminados pelo virus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) O são muito reactivos no péptido vau; b) os dez soros recenseados em pacientes contaminados pelo virus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) O, entre os 19 soros transmitidos pelo Institut Pasteur de Yacoundé são igualmente fortemente reactivos no mesmo péptido; c) os soros (4 amostras) recolhidos em pacientes contaminados pelo vírus VIH-1 do sub-tipo B (em fase aguda) não são reactivos no péptido vau; d) os soros recolhidos de dadores de sangue assintomáticos (48 amostras ensaiadas) não são reactivos no péptido vau. Estes dados experimentais, embora limitados (ver a paupicidade das amostras positivas em anticorpos de VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 atestam da sensibilidade e da especificidade do péptido seleccionado.

Do que precede, resulta que o pedido de patente de invenção descreve também a detecção do vírus VIH-1 ou de uma variante graças à preparação dos anticorpos descritos antes num processo com diferentes etapas, estando estas etapas especificamente previstas para fazer aparecer as propriedades características do vírus VIH-1 , A presente invenção tem também por objecto a detecção do vírus VIH-1 s;=i?s,í!i por hibridação molecular.

De uma maneira geral, este processo de detecção do vírus VIH-1 ççspj ou de uma variante nestas amostras de soro ou outros líquidos biológicos ou tecidos, obtidos a partir de pacientes susceptíveis de serem portadores do vírus VIH-1 compreende as etapas s-eguintes: - o fabrico de pelo menos uma sonda eventualmente marcada; - pelo menos uma etapa de hibridação realizada em condições que permitam a hibridação por meio de se pôr em contacto ácido nucleico da amostra do paciente suspeito com a referida sonda marcada e eventual mobilização do complexo formado num suporte sólido apropriado, - se for caso disso, lavagem do referido suporte sólido com uma solução de lavagem adequada, - a detecção do referido complexo e portanto da presença ou não do por um processo apropriado de detecção conhecido dos especialistas na matéria.

Num outro modo de realização preferido do processo de acordo com a invenção a hibridação citada antes é realizada em condição não severas e a lavagem do suporte (membrana) é realizada em condições adaptadas as da hibridação.

Utilizando uma serologia ou uma técnica de amplificação genica tal como a reacção em cadeia de polimerase (RCP) especifica, sendo a importância da epidemia do grupo 0 avaliada com precisão. Verificou-se que 5 a 10 % de pacientes infectados por um VIH-1 nos Camarões estão na realidade infectados por vírus do grupo 0. Contudo, a parte o isolado do vírus aqui descrito, a propagação do vírus do grupo O não foi documentada fora da África do Centro Ocidental. A paciente em que se isolou o VIH-1 viveu sempre em França e nunca viajou para a África. Até aqui não havia nenhuma prova precisa respeitante à origem da sua infecção, mas este caso indica que já se produziu uma certa propagação dos vírus do grupo O na Europa. O pedido de patente de invenção tem por objecto, ainda, um processo de detecção e de discriminação, numa amostra biológica, entre anticorpos característicos de um retrovírus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) O e anticorpos característicos de um retrovírus do tipo VIH-l-M caracterizado por se pôr em contacto esta amostra biológica com um péptido que não reagisse aos anticorpos característicos de um retrovírus do tipo VIH-l-M, nomea-damente um escolhido entre os péptidos Çl>, (2), (3), (4), (5bis), (5ter), (9) e (10) descritos antes.

Igualmente divulga-se um processo de detecção e de discriminação, numa amostra biológica, entre anticorpos característicos de un retrovírus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) O e anticorpos característicos de um retrovírus 44 do tipo VIH-l-M caracterizado por se pôr em contacto esta amostra biológica com um péptido resultante de um dos virus VIH-1 M considerados nas figuras 8 e 9 homólogo de um péptido escolhido entre os péptidos (l!f (2), (3), (4), (5bis), (5ter), (9) e (10), sendo a sequência deste péptido homólogo resultante dè ' alinhamentos verticais dos seus' próprios aminoácidos sucessivos, eles próprios contidos na sequência peptídica pertinente relativa ao virus VIH-l-M correspondente e representada na figura 8 ou 9 com os aminoácidos sucessivos da sequência do péptido escolhido, tal como decorre também da figura 8 ou 9. 0 processo de detecção e de discriminação entre infecções por um retrovirus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) O e um retrovirus do tipo VIH-l-M é caracterizado por se pôr em contacto soro resultante de pessoas submetidas a um ensaio de diagnóstico de SIDA, nomeadamente com o péptido RILAVERY.

Além disso, o processo de detecção da infecção devida quer a um retrovirus VIH-1 do subgrupo O, quer a VIH-1 do subgrupo M, é caracterizado pela "utilização de misturas de duas categorias de péptidos, correspondendo os da primeira categoria aos péptidos (1), (2), (3), (4), (5bis), (5ter), (9) e (10).

Além disso, o processo de discriminação entre uma infecção devida a um retrovirus VIH-1-0 DUR e uma infecção devida a um outro tipo de retrovirus VIH-1-0, é caracterizado por se pôr em contacto a amostra biológica estudada com um qualquer dos péptidos (11) a (15) ou os péptidos (17) a (20).

Alternativamente trata-se de um processo de discriminação entre uma infecção por um retrovirus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 e um retrovirus VIH-1 do subgrupo M produzindo uma serina protease cuja acção de clivagem efectua-se ao nivel de um di-péptido SR e compreendendo a detecção de uma clivagem ou de uma não clivagem do anel V3 da gp 120 do retrovirus segundo o gue este retrovirus é um retrovirus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 ou um retrovirus VIH-1 do subgrupo M. O pedido de patente de invenção, tem por objecto, ainda, uma composição para a detecção e a discriminação, numa amostra biológica, entre um retrovirus VIH-1 do subgrupo M e um retrovirus do tipo VIH-1 do grupo (ou subgrupo) O compreendendo uma mistura de duas categorias de péptidos, sendo a primeira nomeadamente as identificadas (].?;. (2), (3), (4), (Ster), (9) e (10). São igualmente descritos os anticorpos monoclonais específicos das sequências de cada um dos péptidos (1) a O pedido de patente de invenção, tem por objecto, ainda, um plasmido escolhido entre os que foram depositados na CNCM em 24 de Fevereiro de 1995 com as referências I-1548, 1-1549 e 1-1550 e tem ainda por objecto ácidos nucleicos contendo uma sequência codificando cada um dos péptidos (1) a (20) definidos na presente invenção.

Entre as sequências de ácidos nucleicos preferidas vai-se escolher, nomeadamente as sequências nucleotídicas representadas nas figuras 10, 11 ou 12. O pedido de patente de invenção tem igualmente por objecto os vectores que contêm um ácido nucleico tal como foi definido antes e descreve igualmente as células susceptíveis de conter um qualquer dos ditos ácidos nucleicos ou dos referidos vectores. 0 presente pedido de patente de invenção tem igualmente por objecto um virus tal como o depositado em 23 de Fevereiro de 1995 na CNCM sob a referência 1-1542.,..

Um virus divulgado no pedido de patente de invenção é um virus do mesmo grupo que o anterior, caracterizado pelo facto de os péptidos de consenso deste virus serem reconhecidos por anticorpos que reconhecem especificamente um polipéptido ou um péptido definido recentemente. 0 ARN genómico deste virus também é divulgado, assim como um kit de detecção de anticorpos no soro ou qualquer outra amostra biológica de um paciente susceptível de ser infectado por um retrovirus humano do tipo VIH, caracterizado pelo facto de compreender: pelo menos um polipéptido ou um péptido tendo nomeadamente como sequência uma das sequências (1) a (20) descritas antes. - meios que permitem a reacção de formação do complexo imunológico entre o(s) polipéptido(s) ou o(s) péptido(s) e os anticorpos eventualmente presentes na amostra biológica a ensaiar, por exemplo, se for necessário, um ou vários tampões de incubação, - uma amostra testemunho negativa, meios de revelação do complexo antigénio/anticorpo formado.

Este kit contém, além disso, pelo menos um polipéptido ou um péptido de consenso derivado de uma outra estirpe de VIH ou de um polipéptido ou de um péptido que compreendam: - quer uma sequência de aminoácidos distinta da sequência deste polipéptido ou péptido na qual um ou vários aminoácidos estejam substituídos por outros aminoácidos sob a reserva que o polipéptido ou o péptido conservam a sua reactividade com um anti-soro contra o polipéptido ou o péptido de consenso, - quer uma sequência de aminoácidos na qual um ou vários aminoácidos são suprimidos ou adicionados sob a reserva que o polipéptido ou o péptido conservam a sua reactividade com um anti-soro contra o polipéptido ou o péptido de consenso.

Preferencialmente, um kit conterá, além disso, pelo menos um polipéptido ou um péptido derivado de uma outra estirpe de VIH, de preferência a estirpe HIV-LAI.

Divulga-se igualmente uma composição polipeptidica para o diagnóstico in vitro de uma infecção devida a um retrovírus de acordo com a presente invenção ou a uma das suas variantes, efectuando-se este diagnóstico numa amostra biológica susceptível de conter os anticorpos formados após a referida infecção. Esta composição é caracterizada pelo facto de compreender pelo menos um dos péptidos (1) a (20) . A amostra biológica pode ser constituída nomeadamente por sangue, plasma, soro ou qualquer outro extracto biológico. As composições anteriores utilizam-se para a detecção de anticorpos numa das amostras biológicas referidas antes. O pedido de patente de invenção divulga igualmente um processo de diagnóstico in vitro de uma infecção devida especificamente a um retrovírus do tipo VIH, caracterizado pelas etapas de: - pôr era contacto uma amostra biológica susceptivel de conter os anticorpos produzidos no seguimento de uma infecção por um retrovirus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0, com um péptido tal como definido precedentemente ou com uma composição peptidica tal como a definida precedentemente, em condições apropriadas que permitem a formação de um complexo imunológico do tipo antigénio/anticorpo, - detecção da eventual presença do complexo.

Está descrita também uma composição imunogénica, caracterizada pelo facto de compreender pelo menos um péptido em associação com um veiculo aceitável sob o ponto de vista farmacêutico para a constituição de vacinas, A presente invenção tem igualmente por objecto um processo de preparação das proteínas de cápside e as glicoproteínas gp41 e gpl20 de uma estirpe retroviral de acordo com a presente invenção, sendo o processo caracterizado pelas etapas seguintes: - lise das células infectadas por um retrovirus VIH-1 de acordo com a presente invenção e separação do sobrenadante e das células infectadas ou lise das bases virais preparadas por centrifugação, - deposição do extracto celular e/ou do extracto virai num imuno-adsorvente contendo anticorpos purificados, obtidos a partir de um soro de um indivíduo infectado por um retrovirus de acordo com a presente invenção e fixados, com vantagem, num suporte adaptado, tendo o referido soro de um indivíduo infectado a capacidade de reagir com as proteínas do envelope do vírus, de acordo com a invenção, - incubação na presença de um tampão e durante um tempo suficientemente longo para se obter a formação de um complexo imunológico antigénio/anticorpo. - lavagem do imuno-adsorvente com um tampão para eliminar as moléculas não retidas no suporte, - recuperação das proteínas antigénicas pesquisadas.

Segundo um primeiro modo de realização deste processo de separação, faz-se a separação e a recuperação das proteínas da cápside e das glicoproteínas gp41 e gpl20 do VIH-1 DUR por electroforese e por electroredução das proteínas.

Segundo um outro modo de realização deste processo de separação, a recuperação das proteínas é obtida por: eluição das proteínas fixadas no imuno-adsorvente anterior, - purificação dos produtos assim eluídos numa coluna de cromatografia contendo, fixados no suporte de separação, anticorpos que reconhecem as proteínas de cápside e as glicoproteínas gp41 e gpl20 do VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 DUR.

Entra igualmente no quadro da presente invenção um processo de produção de um polipéptido ou de um péptido de acordo com a presente invenção, sendo este polipéptido ou péptido obtido - quer pela expressão de um ácido nucleico da invenção, - quer por síntese química, por adição de aminoácidos até à obtenção deste polipéptido ou péptido.

Os princípios e os processos clássicos de engenharia genética podem ser aqui utilizados («Molecular cloning», Sambrook, Fritsch, Maniatis, CSH 1989). . .

Entra igualmente no quadro da invenção um processo de produção de um ácido nucleico definido precedentemente, podendo ser produzido quer por isolamento a partir de um vírus da invenção, quer por síntese química, quer utilizando as técnicas de amplificação ín vitro dos ácidos nucleicos a partir de iniciadores específicos.

Os iniciadores oligonucleotídicos, igualmente de acordo com a presente invenção, têm uma sequência consistente com pelo menos oito nucleótidos consecutivos das sequências nucleotídicas seguintes: ATT CCA ATA GAC TAT TGT GCT CCA -3' AAA GAA TTC TCC ATG ACT GTT AAA -3' GGT ATA GTG CAA CAG CAG GAC AAC-3' AGA GGC CCA TTC ATC TAA CTC.3'

Estes iniciadores podem ser utilizados fora de um processo de amplificação dos genes, por exemplo por RCP ou uma técnica equivalente, de uma sequência de nucleótidos que codifica para um péptido da presente invenção. Os ensaios efectuados com estes iniciadores forneceram resultados concludentes. A presente invenção tem igualmente por objecto um kit que permite a amplificação por RCO ou por uma técnica equivalente descrita antes.

Descreve igualmente um processo de detecção da presença, numa amostra biológica de ácido(s) nucleico(s) caracte-rísticos de um retrovirus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 DUR, incluindo um retrovirus de acordo com a presente invenção. Este processo compreende pôr em contacto um ADNc formado a partir de ARN(s) contido(s) nesta amostra biológica, em condições que permitam a hibridação deste ADNc com o genoma retroviral e a realização de uma amplificação genica nesta amostra virai. 0 pedido de patente de invenção divulga igualmente um lisato virai tal como se obtém por lise das células infectadas por um virus de acordo com a presente invenção.

Descreve-se igualmente um extracto proteico de uma estirpe VIH-1 (DUR) (ou VIH-1 mm) contendo nomeadamente um polipéptido ou um péptido tal como foi também previamente descrito antes. 0 pedido de patente de invenção refere péptidos particulares resultantes da estrutura do VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 DUR ou de variantes do retrovirus e que permitem quer discriminar, consoante o caso, - de uma forma geral, entre os VIH-1 que pertencem à categoria 0 dos VIH-1 que pertencem à categoria M, - ou mais especificamente entre os virus que pertencem ao subgrupo caracteristico do VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 DUR e outros virus do subgrupo 0, quer, pelo contrário, reconhecer a maior parte, se não todos os retrovirus, ao mesmo tempo, do grupo (ou subgrupo) 0 e do subgrupo M.

Estão igualmente englobados os péptidos correspondentes e resultantes de proteínas de estrutura correspondente de outros vírus VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 ou VIH-1 do subgrupo M, em particular estes dois derivados das proteínas de estruturas GAG, gpl20 e gp41 cujas partes estão indicadas nos desenhos, decorrendo estes péptidos homólogos do seu alinhamento, como resulta também dos desenhos com os péptidos resultantes do VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 DUR, mais particularmente identificados no presente texto.

Por via da simetria, podem-se produzir alguns péptidos homólogos em dois ensaios que permitem proceder as discriminações referidas antes, sendo então entendido que eles são então utilizados em vez dos péptidos correspondentes, resultantes das proteínas de estruturas GAG, gpl20

Determinação de oligonucleótidos específicos do grupo 0.

Com a aluda da sequência VAU e da sua correlação com as sequências MVP5180 e ANT70, definiram-se iniciadores oligonucleotidicos tentando que sejam específicos do subgrupo O em toda a sua integridade para a região V3 e a região gp41. Estas permitiram amplificar a estirpe DUR e em consequência deu-se uma solução ao problema de amplificação encontrado. A posição, assrm como a sequência destes iniciadores VIH-1 do grupo O estão representadas na figura 13. Estes iniciadores permitem a obtenção de uma banda de amplificação visível por coloração com brometo de etidio com uma única etapa de 30 ciclos de RCP. Obtiveram-se sequências parciais: - GAG: 513 pares de bases (171 aminoácidos) = Seq ID N° 9 - gp 120 ansa V3 : 525 pares de bases (175 aminoácidos) = Seq ID fil - gp41 região imuno-dominante: 312 pares de bases (104 aminoácidos) = Seq ID N° 11.

As comparações nucleotidicas (figura 15) e protidicas (figura 16) das sequências DUR com as sequências MVP5180, ANT e VAU para o subgrupo O, LAI para o VIH-1 de consenso, MAL sequência representativa de VIH-1 africano e CPZ para o CIV de chimpanzé gabonês, mostram que DUR está tão afastado dos outros VIH-1 do grupo (ou subgrupo) O publicados como estes estão entre eles.

As diferenças são menores na região GAG e máximas na região do anel V3 de gp 120, em que a comparação proteica atinge 40 % de diferença (figura 16) . As árvores filo- génicas confirmam por um lado que a estirpe DUR faz parte do subgrupo O e, por outro lado, a importância das diferenças entre as diversas estirpes O descritas, embora não se distingam nitidamente as ramificações dos sub-tipos (figura 17) .

Comparação das sequências GAG;

Aquando da comparação da sequência GAG obtida nas duas outras estirpes O publicadas ANT70 e MVP5180 assim como com as sequências representativas do grupo M (figura 8), pôde-se constatar que existe um consenso O em várias zonas, distintos do consenso M nas mesmas zonas. Pode-se também revelar duas zonas hiper-variáveis, mais variáveis para O que para M e algumas diferenças pontuais para uma ou outra estirpe. Contudo, as regiões SPRT....SEGA, MLNAI...KEVIN, GPLPP.... CQEQI, VGD.... SPV parecem discriminativas do consenso O versus o consenso M.

As regiões QQA e LWTTRAGNP são regiões hiper-variáveis. A estirpe VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 DUR evidencia-se em três posições face ao consenso M e 0 (L para 1 e 2 vezes para E) e produz um aminoácido especifico em três posições hiper-variáveis isoladas V na posição L9; Ana posição A77; L na posição ,110.

Além disso, é possível definir, na região GAG, segmentos comuns ao grupo O e ao grupo M, tais como PRTLNAWVK, GSDIAGTTST e QGPKEPFRDYVDRF.

Comparação das seguências do anel V3

Este estudo comparativo revelou diferenças consideráveis atingindo 56 % de diferenças proteicas com o consenso VIH-1 do subgrupo M e de 35 a 42 % com os outros VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0.

Os alinhamentos de sequências peptídicas das regiões do anel V3 de gp 120 e da região imuno-dominante de gp41 estão indicados na figura 9. A sequência do interior do anel V3 da estirpe DUR difere substancialmente da do consenso VIH-1 do grupo M. Partilha o elemento GPMAWYSM com as estirpes VAU e ANT7 0 mas não com a estirpe MVP que apresenta duas substituições: R para A e R para Y.

As partes esquerda e direita para o remanescente do anel são nitidamente diferentes de todos os VIH conhecidos não deixando antever outras reactividades cruzadas. Além disso, o anel V3 de DUR tem mais um aminoácido do que as outras sequências 0, elas próprias mais longas, com mais um aminoácido do que as sequências do grupo VIH-1 M.

Comparação dos alinhamentos respeitantes à região imuno-dominante da _2EÍ1 0 'mini anel" da estirpe DUR, de sequência CRGKAIC, revelou-se muito específico desta estirpe: constituiria um epítopo (ver figura 9) . Além disso, esta sequência seria susceptível de intervir na modificação das condições de desdobragem da glicoproteína gp41 e, em consequência, da capacidade de infecção da estirpe.

Uma longa sequência de 11 aminoácidos que flanqueia à esquerda este anel é idêntica à sequência VAU. Pode-se notar um polimorfismo da estirpe DUR para uma posição S ou T consoante os clones analisados.

Estão igualmente representados na figura 9 os péptidos correspondentes originários de outras estirpes retrovirais conhecidas. A estirpe DUR permite igualmente definir um consenso de VIH do subgrupo 0 da região gp41 de que se poderiam utilizar várias regiões homólogas suficientemente longas. Estas regiões homólogas são, entre outras: RL*ALET,QNQQ, LWGC, CYTV (* representando um aminoácido variável) .

Correlações serológicas: 0 anti-soro anti-DUR não reage com os péptidos do anel V3 do consenso VIH-M, do V1H-1 MAL, do VIH-1 CPZ ou do VIH-1 do grupo (ou subgrupo) 0 MVP5180, mas reage contudo com o péptido do anel V3 do VIH-I-0 ANT70. No que respeita â região imuno-dominante gp 41, ele não reage com o consenso VIH-1 do subgrupo M "clássico", mas reage contudo, de forma fraca, mas de forma surpreendente com o VIH-1 do subgrupo M que se estende à direita.

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Harada, S., Koyanagi, Y. e Yamamoto, N. (1985). Infection of HTLV-III/LAV in HTLV-I-carrying cells MT-2 and MT-4 and application rn a plaque assay (Infecção de HTLV-III/LAV nas células MT-2 e MT-4 portadoras de HTLVI e aplicação num ensaio em placa). Science. 229, 563-566.

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Javaherian, K, Langlois, A. J., LaRosa, G. J., Profy, A. T., Bolognesi, D. P., Herlihy, W. C., Putney, S. D. e Matthews, T. J. (1990). Broadly neutralizing antibodies elicited by the hypervariable neutralizing déterminant of VIH-1 (Anticorpos que neutralizam um largo espectro induzido pelo determinante de neutralização hipervariável de VIH-1). Science. 250, 1590-1593.

Javaherian, K, Langlois, A. J., Mc Danai, C., Ross, K L., Eckler. L. I., Jellis, C. L, Profy, A. T., Rusche, J. R., Bolognesi, D. P., Putney, S. D. e Matthews, T. J. (1989). Principal neutralizing domain of the human immunodeficiency virus type 1 envelope protein (Domínio neutralizante principal da proteína de envelope do vírus da imunodeficiência humana de tipo 1) . Proc. Natl. Acad. Sei. EUA. 86, 6768-6772.

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Louwagie, J., McCutchan, F., Van der Groen, G.,

Peeters, M., Fransen, K, Piot, P., Gershy-Damet, G.,

Roelants, G., Van Heuverswyn, II. e Eddy, G. (1992). Genetic comparison of VIH-1 isolates from África, Europe, and North America (Comparação genética de isolados de VIH-1 da África, da Europa e da América do Norte). AIDS Res Hum Retroviruses. 8, 1467-9.

Matsushita, S. M., Robert-Guroff, M., Rusche, J.,

Koito, A, Hattori, T., Hoshino, H., Javaherian, K, Takatsuki, K e Putney, S. (1988) . Characterization of a Human immunodeficiency virus neutralizing monoclonal antibody and mapping of the neutralizing epitope. (Caracterização de um anticorpo monoclonal que neutraliza o virus da imunodeficiêcia humana e mapea-mento do epítopo neutralizante). J. Virol 62, 2107- 2114. NKENGASONG, J.N. et al., AIDS 1993, Vol. 7, N° 11, pp. 1536-1538.

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Vartanian, J.-P., Meyerhans, A., Asjé, B. e Wain-Hobson, S. (1991). Selection, recombination, and G-A hypermutation of VIH-1 genomes (Selecção, recombinação, e hipermutatção G-A de genomas de VIH-1). J. Virol. 65, 1779-1788.

Wain-Hobson, S., Sonigo, P., Danos, 0., Cole, S. e Alizon, M. (1985). Nucleotide sequence of the AIDS virus, LAV (Sequência nucleotidica do virus da SIDA, LAV). Cell 40, 9-17.

LISTA DE SEQUÊNCIAS (i) REQUERENTE:

(A) NOME: INSTITUT PASTEUR (B) RUA: 25-28 Rue du Docteur Roux

(C) CIDADE: PARIS (E) PAÍS: FRANÇA (fl CÓDIGO POSTAL: 75724 CEDEX 15 (ii) TÍTULO DA INVENÇÃO: SEQUÊNCIAS NUCLEOTÍDICAS QUE CODIFICAM OS ΑΝΤΙGÉNIOS RETROVIRAIS VIH-1 DO GRUPO (OU DO SUBGRUPO) 0, DE PÉPTIDOS DA TRANS-

MEMBRANA DO ENVELOPE E DE PROTEÍNA DA CÁPSIDE DE RETROVÍRUS E PÉPTIDÓS tiili StMERiè m SgOOtiCIASí 1D3 (iv) FORMA LISÍVEL EM COMPUTADOR: (A) TIPO DE SUPORTE: Floppy disk

(B) COMPUTADOR: compatível com IBM PC

(C) SISTEMA DE EXPLORAÇÃO: PC-DOS/MS-DOS (D) SOFTWARE: Patentln Release #1.0, Versão #1.30 (v) DADOS DO ACTUAL PEDIDO DE PATENTE: NÚMERO DO PEDIDO DE PATENTE: PCT/FR 95/01391 (vi) DADOS DO PEDIDO DE PATENTE ANTERIOR: (A) NÚMERO DO PEDIDO DE PATENTE: FR 9412554 (B) DATA DE DEPÓSITP: 20-OUT-1994 (vi) DADOS DO PEDIDO DE PATENTE ANTERIOR: (A) NÚMERO DO PEDIDO DE PATENTE: FR 9502526 (B) DATA DE DEPÓSITO: 03-MAR-1995 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 1: ui -m mmimm (A) COMPRIMENTO: 23 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: Outro ácido nucleico (A) DESCRIÇÃO: /desc = "oligonucleótido" (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 1: AGTGGATWYA TAGAAGCAGA AGT 23 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 2: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 20 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (G) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: Outro ácido nucleico (A) DESCRIÇÃO: /desc = "oligonucleótido" (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 2: ACTGCYCCTT CHCCTTTCCA 20 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 3: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 28 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: Outro ácido nucleico (A) DESCRIÇÃO: /desc = "oligonucleótido" (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 3: GCTCTAGATG GGGATCTCCC ATGGCAGG 28 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 4: (i) CARAÇTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES-: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: Outro ácido nucleico (A) DESCRIÇÃO: /desc = "oligonucleótido" (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 4: GCTCTAGATC AGGGAAGAAT CCCTGAGTGT 30 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 5: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 7 aminoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA; SEQ ID NO: 5:

Cis Lis Asn Arg Leu Ile Cis 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 6: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO 26 arninoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 6:

Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Fen Ile Gin Asn Trp Trp Leu Leu Asn 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Lis Asn Arg Leu Ile Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PAR A SEQ ID NO: 7: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 arninoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO': linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 7:

Arg Ala Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Fen Ile Gin Asn Gin Gin Leu 1 5 10 15

Leu Asn Leu Trp Gli Cis Lis Asn Arg Leu Ile Cis Tir Tre Ser Vai 20 25 30

Lis Trp Asn Lis Tre 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 8: m amiiTmtmmpã » riqoIncia; (A) COMPRIMENTO 6 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 8

Ala His Pro Gin Gin Ala 1 5 ípi idfo>mçOs:o a siq xo nqj ft ti) SR 11'vUúir':Aí (A) COMPRIMENTO: 9 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 9

Leu Trp Tre Tre Arg Ala Gli Asn Pro 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 10: (i) CARATERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 32 aminoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 10:

Lis Ala 15 Gli Ala

Ser Pro Arg Tre Leu Asn Ala Trp Vai Lis Ala Vai Glu Glu 15 10

Fen Asn Pro Glu Ile Ile Pro Met Fen Met Ala Leu Ser Glu 20 25 30 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 11: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 20 aminoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 11:

Met Leu Asn Ala Ile Gli Gli His Gin Gli Ala Leu Gin Vai Leu Lis .$ íá i*;

Glu Vai Ile Asn 20 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 12: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 27 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 12:

Gli Pro Leu Pro Pro Gli Gin Ile Arg Glu Pro Tre Gli Ser Asp Ile 15 10 5

Ala Gli Tre Tre Ser Tre Gin Gin Glu Gin Ile 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 13: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 30 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (G) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 13:

Ile Pro Vai Gli Asp Ile Tir Arg Lis Trp Ile Vai Leu Gli Leu Asn 15 10 15

Lis Met Vai Lis Met Tir Ser Pro Vai Ser Ile Leu Asp Ile 20 25 30 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 14: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 21 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (G) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 14:

Gin Gli Pro Lis Glu Pro Fen Arg Asp Tir vai Asp Arg Fen Tir "Lis 15 10 15

Tre Lis Leu Ala Glu 20 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 15: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 15:

Ser Pro Arg Tre Leu Asn Ala Trp Vai Lis 15 10 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 16: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 10 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (íi) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 16:

Gli Ser Asp Ile Ala Gli Tre Tre Ser Tre 15 10 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ 1$ NO: 17: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 14 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES': simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 17:

Gin Gli Pro Lis Glu Pro Fen Arg Asp Tir Vai Asp Arg Fen 15 10 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 18: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 4 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 18:

Asn Pro Glu Ile (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 19: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 16 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptído (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 19:

Ala Vai Glu Glu Lis Ala Fen Asn Pro Glu Ile Ile Pro Met Fen Met 15 10 15 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 20: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 9 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 20:

Ile Gli Glí His Gin Gli Ala Leu Gin 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 21: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 8 arninoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (li) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 21

Arg Glu Pro Tre Gli Ser Asp Ile (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 22: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 9 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 22

Ile Asn Asp Glu Ala Ala Asp Trp Asp 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 23: (í) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 5 aminoácidos (B) TIPO: aminácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 23:

Lis Glu Ile Lis Ile I S (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 24: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 8 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 24:

Glu Arg Glu Gli Lis Gli Ala Asn 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 25: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 14 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 25:

Cis Vai Arg Pro Gli Asn Asn Ser Vai Lis Glu Ile Lis Ile 1 5 10 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 26: (A) COMPRIMENTO: 12 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 26:

Gin Ile Glu Arg Glu Gli Lis Gli Ala Asn Ser Arg 15 10 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 27: (i) CARACTERISTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 38 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 27:

Cis Vai Arg Pro Gli Asn Asn Ser Vai Lis Glu Ile Lis Ile Gli Pro 15 10 15

Met Ala Trp Tir Ser Met Gin Ile Glu Arg Glu Gli Lis Gli Ala Asn 20 25 30

Ser Arg Tre Ala Fen Cis 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEÇ ID NO: 28: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 8 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEÇ ID NO: 28:

Gli Pro Met Ala Trp Tir Ser Met 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEÇ ID NO: 29: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 14 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 29:

Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Leu Met Gin Asn Gin Gin Leu 15 10 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEÇ ID NO: 30: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 23 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 30:

Leu Asn Leu Trp Gli Cis Arg Gli Lis Ala Ile Cis Tir Tre Ser Vai 15 10 15

Gin Trp Asn Glu Tre Trp Gli 20 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 31: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 6 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 31:

Cis Arg Gli Lis Ala Ile 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 32: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 5 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 32:

Ser Vai Gin Trp Asn 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 33:

/*·». ·λ /••‘v’' iNrt Φ w :*· ϊ; In llvb. 1 ;C> 1 ,1 ‘w.-Ãib (A) COMPRIMENTO: 28 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (11) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 33:

Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Leu Met Asn Gin Gin Leu Leu Asn Leu 1 5 10 15

Trp Gli Cis Arg Gli Lis Ala Ile Cis Tir Tre Ser 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 34: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 24 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 34:

Gin Asn Gin Gin Leu Leu Asn Leu Trp Gli Cis Arg Gli Lis Ala Ile 15 10 15

Cis Tir Tre Ser Vai Gin Trp Asn 20 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 35: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 8 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 35:

Arg Ile Leu Ala Vai Glu Arg Tir 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 36: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 6 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 36:

Ser Gli Lis Leu Ile Cis 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 37: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 6 arninoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 37

Gli Pro Gli Arg Ala Fen 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 38: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 6 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 38

Gli Pro Met Ala Trp Tir 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 39: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 6 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 39

Gli Pro Met Arg Trp Arg 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 40: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO 5 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 40

Tre Fen Ile Gin Asn 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 41: (A) COMPRIMENTO: 6 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 41:

Trp Gli Cis Lis Asn Arg 1 5 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 42: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 24 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: Outro ácido nucleico (A) DESCRIÇÃO: /desc = "oligonucleótido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 42: ATTCCAATAC ACTATTGTGC TOCA 24 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 43: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 24 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: Outro ácido nucleico (A) DESCRIÇÃO: /desc - "oligonucleótido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 43: AAAGAATTCT CCATGACTGT TAAA 24 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 44: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 24 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: Outro ácido nucleico (A) DESCRIÇÃO: /desc = "oligonucleótido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 44: GGTATAGTGC AACAGCAGGA CRAC 24 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 45: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 21 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: Outro ácido nucleico (A) DESCRIÇÃO: /desc = "oligonucleótido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 45: AGAGGCCCAT TCATCTAACT C 21 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 46: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 526 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 46:

Met Tre Ala Ile Met Lis Ala Met Gli Lis Arg Asn Arg Lis Leu Gli 15 10 15

Ile Trp Cis Leu Ile Leu Ala Leu Ile Tle Pro Cis Leu Ser Cis Asn 20 25 30

Gin Leu Tir Ala Tre Vai Tir Ser Gli Vai Pro Vai Trp Glu Asp Ala 35 40 45

Lis Pro Tre Leu Fen Cis Ala Ser Asp Ala Asn Leu Tre Ser Tre Glu 50 55 60

Gin His Asn ile Trp Ala Tre Gin Ala Cis Vai Pro Tre Asp Pro Ser 65 70 75 80

Pro Asn Glu Tir Glu Leu Lis Asn Vai Tre Gli Lis Fen Asn Ile Trp 85 90 95

Lis Asn Tir ile Vai Asp Gin Met His Glu Asp Ile Ile Asp Leu Trp 100 105 110

Asp Gin Ser Leu Lis Pro Cis Vai Gin Met Tre Fen Leu Cis Vai Gin 115 120 125

Met Asn Cis Tre Asp Ile Lis Asn Ser Ile Asn Tre Tre Asn Ser Pro 130 135 140

Leu Asn Ser Asn Asn Tre Lis Glu Vai Lis Gin Cis Asp Fen Asn vai

Tre Tre Vai Leu Lis Asp Lis Gin Glu Lis Lis Gin Ala Leu Fen Tir 165 170 175

Vai Tre Asp Leu Vai Lis Ile Asn Ala Tre Ser Asn Glu Tre Met Tir

Arg Leu Ile Asn Cis Asn Ser Tre Tre Ile Arg Gin Ala Cis Pro Lis 195 200 205

Vai Ser Fen Glu Pro Ile Pro Ile His Tir Cis Ala Pro Ala Gli Cis 210 215 220

Ala Ile Fen Lis Cis Asn Glu Tre Gli Fen Asn Gli Tre Gli Leu Cis 225 230 235 240

Lis Asn Vai Tre Vai Vai Tre Cis Tre His Gli Ile Lis Pro Tre Vai 245 250 255

Ser Tre Gin Leu Ile Leu Asn Gli Tre Leu Ser Lis Gli Asn Ile Tre 260 265 270

Ile Met Gli Lis Asn Ile Ser Asp Ser Gli Glu Asn Ile Leu Ile Tre 275 280 285

Leu Asn Tre Asn Ile Tre Ile Ala Cis Glu Arg Pro Gli Asn Gin Tre 290 295 300

Ile Gin Lis Ile Met Ala Gli Pro Met Ala Trp Tir Ser Met Ala Leu 305 310 315 320

Ser Asn Tre Lis Gli Asp Tre Arg Ala Ala Tir Cis Asn Tir Ser Ala 325 330 335

Tre Asp Trp Asn Lis Ala Leu Lis Asn Ile Tre Glu Arg Tir Leu Glu 340 345 350

Leu Vai Glu Tir Asn Gin Tre Asp Vai Tre Met Lis Fen Gli Asn His 355 . 360 365

Ser Gli Glu Asp Ala Glu Vai Tre Asn Fen Fen Fen Asn Cis His Gli 370 375 380

Glu Fen Fen Tir Cis Asn Tre Asn Arg Leu Fen Asn His Tre Fen Ser 385 390 395 400

Cis Lis Lis Asn Met Tre Asn Asn Lis lie Asn Cis Tre Asn lie Ser 405 410 415

Asn Asn Ser Asn Gli Tre Gin Ala Ile Pro Cis Arg Leu Arg Gin Vai 420 425 430

Vai Arg Asp Trp Met Arg Gli Gli Ser Gli Leu Tir Ala Pro Pro Ile 435 440 445

Pro Gli Asn Leu Vai Cis Arg Ser Asn Ile Tre Gli Met Ile Leu Gin 450 455 460

Leu Asp Tre Pro Trp Asn Lis Tre His Pro Asn Ser Tre Tre Leu Arg 465 470 475 480

Pro Gli Gli Gli Asp Met Lis Asp Ile Trp Arg Tre Gin Leu Fen Lis 485 490 495

Tir Lis Vai Vai Arg Vai Lis Pro Fen Ser Vai Ala Pro Tre Lis Ile 500 505 510

Ala Arg Pro Tre Ile Gli Tre Arg Ser His Arg Glu Lis Arg 515 520 525 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 47: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 351 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína m (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 47:

Ala Ala Gli Leu Ala Met Leu Fen Leu Gli Ile Leu Ser Ala Ala Gli 15 10 15

Ser Tre Met Gli Ala Ala Ala Tre Ala Leu Tre Vai Arg Tre Gin His 20 25 30

Leu Ile Lis Gli Ile Vai Gin Gin Gin Asp Asn Leu Leu Arg Ale Ile 35 40 45

Gin Ala Gin Gin His Leu Leu Arg Pro Ser Vai Trp Gli Ile Arg Gin 50 55 60

Leu Arg Ala Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Fen Ile Gin Asn Gin Gin 65 70 75 80

Leu Leu Asn Leu Trp Gli Cis Lis Asn Arg Leu Ile Cis Tir Tre Ser 85 90 95

Vai Lis Trp Asn Lis Tre Trp Gli Gli Asp Asn Glu Ser Ile Trp Asp 100 105 110

Glu Leu Tre Trp Gin Gin Trp Asp Gin Gin Ile Asn Asn Vai Ser Ser 115 ISO 1J5

Fen Ile Tir Glu Lis Ile Gin Glu Ala Gin Glu Gin Gin Glu Lis Asn 15v XS5

Glu Lis Glu Leu Leu Glu Leu Asp Glu Trp Ala Ser Ile Trp Asn Trp 145 150 155 160

Leu Asp Ile Tre Lis Trp Leu Trp Tir Ile Lis lie Ala Ile Ile Ile 165 170 175

Vai Gli Ala Leu ile Gli Vai Arg Vai Vai Met ile Vai Leu Asn Leu 180 185 190

Vai Lis Asn Ile Arg Gin Gli Tir Gin Pro Leu Sez Leu Gin Ile Pro 195 200 205

Ile Gin Gin Gin Ala Glu Vai Gli Tre Pro Gli Gli Tre Gli Glu Gli 210 215 220

Gli Gli Asp Glu Asp Arg Arg Arg Trp Tre Pro Leu Pro Gin Gli Fen 225 230 235 240

Leu His Leu Leu Tir Tre Asp Leu Arg Tre Ile He Leu Trp IleTir 2ϊΐίδ

His Leu Leu Ser Asn Leu Ala Ser Glu Ile Gin Lis Leu Ile Arg His 260 265 270

Leu Gli Leu Gli Leu Trp Ile Ile Gli Gin Arg Tre Ile Glu Ala Cis 275 280 285

Arg Leu Fen Lis Ala Ile Ile Gin Tir Trp Leu Gin Glu Leu Gin Tre 290 295 300

Ser Ala Tre Asn Leu Leu Asp Tre Vai Ala Vai Ala Vai Ala Asn Trp 305 310 315 320

Tre Asp Ser Tre Ile Leu Gli Ile Gin Ser Ile Gli Arg Gli Ile Leu 325 330 335

Asn Ile Pro Arg Arg Ile Arg Gin Gli Leu Glu Arg Leu Leu Leu 340 345 350 (2) INFORAMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 48: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 516 aminoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 48:

Met Arg Vai Lis Glu Lis Tir Gin His Leu Trp Arg Trp Gli Trp Lis 15 10 15

Trp Gli Tre Met Leu Leu Gli Ile Leu Met Ile Cis Ser Ala Tre Glu 20 25 30

Lis Leu Trp· Vai Tre V'ál Tir Tir Gli Vai Pro Vai Trp Lis Glu A.M 35 40 45

Tre Tre Tre Leu Fen Cis Ala Ser Asp Ala Lis Ala Tir Asp Tre Glu 50 55 60

Vai His Mi Vai Trp Ala Tre His Ala Cis Vai Pro Tre Asp Pro Asn 65 70 75 80

Pro Gin Glu Vai Vai Leu vai Asn vai Tre Glu Asn Fen Asn Met Trp 85 90 95

Lis Asn Asp Met Vai Glu Gin Met His Glu Asp Ile Ile Ser Leu Trp 100 105 110

Asp Gin Ser Leu Lis Pro Cis Vai Lis Leu Tre Pro Leu Cis Vai Ser 115 120 125

Leu Lis Cis Tre Asp Leu Gli Asn Ais Tre Asn Tre Asn Ser Ser Asn 130 135 140

Tre Asn Ser Ser Ser Gli Glu Met Met Met Glu Lis Gli Glu Ile Lis 145 150 155 160

Asn Cis Ser Fen Asn Ile Ser Tre Ser Ile Arg Gli Lis Vai Gin Lis 165 170 175

Glu Tir Ala Fen Fen Tir Lis Leu Asp Ile Ile Pro Ile Asp Asn Asp 180 185 190

Tre Tre Ser Tir Tre Leu Tre Ser Cis Asn Tre Ser Vai Ile Tre Gin 195 200 205

Ala Cis Pro Lis Vai Ser Fen Glu Pro Ile Pro Ile His Tir Cis Ala 210 215 220 .19

Pro Ala Gli Fen Ala Ile Leu Lis Cis Asn Asn Lis Tre Fen Asn Gli 225 230 235 240

Tre Gli Pro Cis Tre Asn Vai Ser Tre Vai Gin Cis Tre His Gli Ile 245 250 255

Arg Pro Vai Vai Ser Tre Gin Leu Leu Leu Asn Gli Ser Leu Ala Glu 260 265 270

Glu Glu Vai Vai Ile Arg Ser Ala Asn Fen Tre Asp Asn Ala Lis Tre 275 280 285

Ile Ile Vai Gin Leu Asn Gin Ser Vai Glu Ile Asn Cis Tre Arg Pro 290 295 300

Asn Asn Asn Tre Arg Lis Ser Ile Arg Ile Gin Arg Gli Pro Gli Arg 305 310 315 320

Ala Fen Vai Tre Ile Gli Lis Ile Gli Asn Met Arg Gin Ala His Cis 325 330 335

Asn Ile Ser Arg Ala Lis Trp Asn Ala Tre Leu Lis Gin Ile Ala Ser 340 345 350

Lis Leu Arg Glu Gin Fen Gli Asn Asn Lis Tre Ile Ile Fen Lis Gin 355 360 365

Ser Ser Gli Gli Asp Pro Glu Ile Vai Tre His Ser Fen Asn Cis Gli 370 375 380

Gli Glu Fen Fen Tir Cis Asn Ser Tre Gin Leu Fen Asn Ser Tre Trp 385 390 395 400

Fen Asn Ser Tre Trp Ser Tre Glu Gli Ser Asn Asn Tre Glu Gli Ser 405 410 415

Asp Tre Ile Tre Leu Pro Cis Arg Ile Lis Gin Fen Ile Asn Met Trp 420 425 430

Gin Glu Vai Gli Lis Ala Met Tir Ala Pro Pro Ile Ser Gli Gin Ile 435 440 445

Arg Cis Ser Ser Asn Ile Tre Gli Leu Leu Leu Tre Arg Asp Gli Gli 450 455 460

Asn Asn Asn Asn Gli Ser Glu Ile Fen Arg Pro Gli Gli Gli Asp Met 465 470 475 480

Arg Asp Asn "Trp 'Arg Ser Glu 'LeuTir 'Lis Tir Lis S?M Vai Lis Ile 485 490 495

Glu Pro Leu Gli Vai Ala Pro Tre Lis Ala Lis Arg Arg Vai Vai Gin

SâS MO

Arg Glu Lis Arg 515 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 49: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 345 aminoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 49:

Ala Vai Gli Ile Gli Ala Leu Fen Leu Gli Fen Leu Gli Ala Ala Gli 15 10 15

Ser Tre Met Gli Ala Arg Ser Met Tre Leu Tre Vai Gin Ala Arg Gin 20 25 30

Leu Leu Ser Gli Ile Vai Gin Gin Gin Asn Asn Leu Leu Arg Ala Ile 35 40 45

Glu Ala Gin Gin His Leu Leu Gin Leu Tre Vai Trp Gli Ile Lis Gin 50 55 60

Leu Gin Ala Arg Ile Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Lis Asp Gin Gin 65 70 75 80

Leu Leu Gli Ile Trp Gli Cis Ser Gli Lis Leu Ile Cis Tre Tre Ala 85 90 95

Vai Pro Trp Asn Ala Ser Trp Ser Asn Lis Ser Leu Glu Gin Ile Trp 100 105 110

Asn Asn Met Tre Trp Met Glu Trp Asp Arg Glu Ile Asn Asn Tir Tre 115 120 125

Ser Leu Ile His Ser Leu Ile Glu Glu Ser Gin Asn Gin Gin Glu Lis 130 135 140

Asn Glu Gin Glu Leu Leu Glu Leu Asp Lis Trp Ala Ser Leu Trp Asn 145 150 155 160

Trp Fen Asn Ile Tre Asn Trp Leu Trp Tir Ile Lis Ile Fen Ile Met 165 170 175

Ile Vai Gli Gli Leu Vai Gli Leu Arg Ile vai Fen Ala Vai Leu Ser 180 185 190

Ile Vai Asn Arg Vai Arg Gin Gli Tir Ser Pro Leu Ser Fen Gin Tre 195 200 205

His Leu Pro Tre Pro Arg Gli Pro Asp Arg Pro Glu Gli Ile Glu Glu 210 215 220

Glu Gli Gli Glu Arg Asp Arg Asp Arg Ser Ile Arg Leu Vai Asn Gli 225 230 235 240

Ser Leu Ala Leu Ile Trp Asp Asp Leu Arg Ser Leu Cis Leu Fen Ser 245 250 255

Tir His Arg Leu Arg Asp Leu Leu Leu Ile Vai Tre Arg Ile V&1 Glu 260 265 270

Leu Leu Gli Arg Arg Gli Trp Glu Ala Leu Lis Tir Trp Trp Asn Leu 275 280 285 92

Leu Gin Tir Trp Ser Gin Glu Leu Lis Asn Ser Ala Vai Ser Leu Leu 290 295 300

Asn Ala Tre Ara Ile Ala Vai Ala Glu Gli Tre Asp Arg Vai Ile Glu 305 310 315 320

Vai Vai Gin Gli AI 'Cis'ArgAla Ile Arg-His Ile Pro Arg Arg Ile 325 330 335

Arg Gin Gli Leu Glu Arg Ile Leu Leu 340 345 (2) XKFOBM&ÇÕBS ¥MA â SEQ ID No: 50: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (li) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 50:

Arg Ile Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Lis Asp Gin Gin Leu Leu Gli 15 10 15

Ile Trp Gli Cis Ser Gli Lis Leu Ile Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES DA SEQ ID NO: 51: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 51:

Arg Ile Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Lis Asp Gin Gin Leu Leu Gli 15 10 15

Ile Trp Gli Cis Ser Gli Lis Ile Ile Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 52: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEO ID NO: 52:

Arg Ile Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Lis Asp Gin Gin Leu Leu Gli 15 10 15

Ile Trp Gli Cis Ser Gli Lis His Ile Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 53: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 53:

Arg Vai Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Lis Asp Gin Gin Leu Met G1 15 10 15

Ile Trp Gli Cis Ser Gli Lis Leu Ile Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 54: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 arninoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 54:

Arg Vai Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Arg Asp Gin Gin Leu Leu Gli 15 10 15

Ile Trp Gli Cis Ser Gli Lis Leu Ile Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 55: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 55:

Arg Vai Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Arg Asp Gin Gin Leu Leu Gli 15 10 15

Ile Trp Gli Cis Ser Gli Arg His Ile Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 56: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 56:

Arg Vai Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Gin Asp Gin Arg Leu Leu Gli 15 10 15

Met Trp Gli Cis Ser Gli Lis His Ile Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 57: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 57:

Arg Leu Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Gin Asp Gin Gin IIe Leu Gli 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Ser Gli Lis Ala Vai Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 58: m sioúlitxiu (A) COMPRIMENTO: 26 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 58:

Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Fen Ile Gin Asn Gin Gin Leu Leu As 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Lis Asn Arg Leu Ile Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 59: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 59:

Arg Leu Gin Ala Leu Glu Tre Leu Ile Gin Asn Gin Gin Arg Leu Asn 1 10 15

Leu Trp Gli Cis Lis Gli Lis Leu Ile Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 60: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 60:

Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Leu Leu Gin Asn Gin Gin Leu Leu Ser 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Lis Gli Lis Leu Vsà Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 61: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 61:

Arg Vai Tre Ala Ile Glu Lis Tir Leu Gin Asp Gin Ala Arg Leu Asn

Ser Trp Gli Cis Ala Fen Arg Gin Vai Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 62: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 26 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 62:

Arg Vai Tre Ala Ile Glu Lis Tir Leu Lis Asp Gin Ala Gin Leu Asn 15 10 15

Ser Trp Gli Cis Ala Fen Arg Gin Vai Cis 20 25 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 63: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 2621 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (p) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 63: ATGACAGCGA TTATGAAAGC AATGGGGAAG AGGAACAGGA AGTTAGGGAT CTGGTGCTTG £0 ATTTTGGCTT TGATAATCCC ATGTTTGAGC TGTAACCAAC TATATGCCAC AGTCTATTCT 120 GGGGTACCTG TATGGGAAGA TCCAAGACCA ACATTGTTCT GTGCTTCAGA TGCTAACTTG 433

ACAAGCACTG AACAGCATAA TATTTGGGCA ACACAAGCCT GTGTTCCCAC AGACCCCAGT CCAAATGAAT ATGAGCTAAA AAATGTGACA GGTAAATTCA ATATATGGAA AAATTATATA 303 GTAGACCAAA TGCACGAAGA CAGTATAGAT TTGTGGGACC AGAGTTTAAA ACATTGTTTT ME· CAAATGACTT TCTTGTGTGT ACAAATGAAT TGTACAGATA TCAAAAATAG TATTAATACC 423 ACAAACAGTC CCTTAAACTC AAACAATACA AACGAGGTGA AACAGTGTGA CTTTAATGTA 433 ACTACAGTGC TCAAAGACAA ACAGGAGAAA AAACAGGCTC TATTCTATGT GACAGATTTG 444 GTTAAGATTA ACGCCACATC AAATGAAACA ATGTATAGAT TAATTAATTG TAACTCCACA 403 ACCATCAGGC AGGCCTGTCC AAAGGTATCT TTTGAGCCCA TTCCCATACA CTATTGTGCT 443 CCAGCGGGAT GTGCCATCTT TAAGTGTAAT GAAACAGGAT TTAATGGAAC AGGTCTCTGT 433 AAAAACGTTA CAGTAGTTAC TTGTACACAT GGCATCAAAC CAACAGTAAG TACCCATCTA 220 ATACAATATG GGACACTCTC TCAAGAAAAT ATAACAATCA TGGGAAAGAA TATTTCAGAC 343 AGTGGGGAGA ACATCCTAAT AACCCTAAAT ACTAATATAA CAATAGCATG TGAGAGACCA 303 GGAAATCAGA CAATACAAAA GATAATGGCA GGTCCAATGG CTTGGTACAG CATGGCCCTT 323 AGTAATACAA AGGGGGATAC AAGGGCAGCT TATTGTAATT ATAGTGCCAC TGACTGGAAC 1033 AAAGCCTTAA AAAACATAAC TGAAAGATAT TTAGAACTTG TAGAATATAA TCAAACTGAT 1043 GTTACCATGA AATTCGGTAA TCACAGTGGT GAAGATGCAG AAGTAACAAA TTTCTTTTTT 014Õ AACTGTCATG GAGAATTCTT TTATTGTAAC ACAAATCGGC SGTTTAATCA TACCTTTTCC .1303 TGCAAGAAGA ATATGACCAA TAACAAGATC AATTGTACTA ATATTAGCAA TAATAGCAAT 1243 GGCACTCAGG CAATACCTTG CAGGTTGAGA CAAGTAGTAA GGGACTGGAT TCGGGACTTT 1320 ATGCACCTCC CATCCCAGGA AACCTAGTAT GCAGGTCAAA CATAACTGGA ATGATTCTAC 1220 AATTGGATAC GCCATGGAAT AAAACACATC CTAACAGCAC CACCCTTAGA CCAGGAGGGG 1443

GAGATATGAA AGATATATGG AGAACTCAAT TGTTCAAATA TAAAGTAGTA AGAGTAAAAC i OOO CTTTTAGTGT AGCACCAACA AAAATTGCAA GGCCAACTAT AGGAACTAGA TCTCATAGAG 1303 AGAATAGAGC AGCAGGTTTG GCAATGCTAT TCTTGGGGAT TCTAAGTGCA GCAGGAAGCA 1023 '

CTATGGGCGC AGCGGCAACA GCGCTGACGG TACAGACCCA GCATCTGATA AAGGGTATCG XSgO

TGCAACAGCA GGATAACCTG CTAAGAGCAA TACAGGCCCA GCAACACTTG CTGAGGCCAT VÕ1S CTGTATGGGG TATTAGACAA CTCCGAGCTC GCCTGCTACC CTTAGAAACC TTTATACAGA 1302 ATCAGCAACT CCTTAACCTG TGGGGCTGCA AGAATAGACT AATCTGCTAC ACATCAGTAA 13# AGGGGAATAA AACATGGGGA GGAGATAATG AATCAATTTG GGATGAGTTA ACATGGCAGC 4M0

AGTGGGATCA ACAGATAAAC AACGTAAGCT CCTTCATATA TGAAAAAATA CAAGAGGCAC IgSS AAGAACAACA GGAGAAAAAT GAGAAAGAAT TGCTGGAGTT AGATGAATGG GCCTCTATTT 2340 GGAATTGGCT TGACATAACT AAATGGTTGT GGTATATAAA AATAGCTATA ATCATAGTAG OiOÔ GAGCACTAAT AGGTGTAAGA GTAGTTATGA TAGTACTTAA TCTAGTAAAG AACATTAGGC 01,40 AGGGATATCA ACCCCTCTCG TTACAGATCC CCATCCAACA ACAAGCGGAA GTAGGAACGC 2110 CAGGAGGAAC AGGAACTGGA GGTGGAGACG AAGACAGGCG CAGGTGGACT CCATTGCCGC 3220 AAGGGTACTT GCATCTGTTG TACACGCACC TCAGGACAAT AATCTTGTGG ATTTACCACC 2243 TCTTGAGCAA CTTAGCCTCA GAGATCCAGA AGTTGATCAG ACACCTGGGA CTTGGACTAT 2420 GGATCATAGG GCAGAGGACA ATTGAAGCTT GCAGACTCTT TAAAGCTATA ATACAATACT 24 33 GGCTACAAGA ATTGCATACT AGTGCTACAA ATCTACTAGA TACTGTTGCA GTGGCAGTTG 2423 CTAATTGGAC TGACAGCAGA ATCTTAGGCA TACAAAGCAT AGGGAGAGGG ATTCTTAACA 2313

TACCAAGAAG GATTAGACAG GGCCTTGAAC GACTCCTGTT A MU (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 64: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 453 pares de bases (B} TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear

Lii) TIPO DE MOLÉCULA: KXc (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEC ID NO: 64:

GCAGAGACAG GACAGGAAAC TGCCTACTTC CTGTTAAAAT TAGCAGCAAG ATGGCCTATT 60 AAAATACTAC ATACAGACAA TGGGCCTAAC TTTACAAGTG CAGCCATGAA AGCTGCATGT 120 TGGTGGACAA ACATACAACA TGAGTTTGGA ATACCATACA ATCCACAAAG TCAAGGAGTA 180 GTAGAAGCCA TGAACAAGGA ATTAAAATCA ATCATACAGG TGAGGGACCA AGCAGAGCAC 240 TTAAGGACAG CAGTACAAAT GGCAGTATTT GTTCACAATT TTAAAAGAAA AGGGGGGATT 300 GGGGGGTACA CTGCAGGAGA GAGATTAATA GACATATTAG CATCACAAAT ACAAACAACA 360 GAACTACAAA AACAAATTTT AAAAATTCAA AATTTTCGGG TCTATTACAG AGACAGCAGA 420 GACCCTATTT GGAAAGGACC GGCACAGCTC CTG 41S (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 65: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUENCIA: (A) COMPRIMENTO: 170 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 65:

Gin Gli Gin Met Vai His Gin Ala Leu Ser Pro Arg Tre Leu Asn Ala 1 10 15

Trp Vai Lis Ala Vai Glu Glu Lis Ala Fen Asn Pro Glu Ile Ile Pro 20 25 30

Met Fen Met Ala Leu Ser Glu Gli Ale Vai Pro Tir Asp Ile Asn Vai 35 40 45

Met Leu Asn Ala Ile Gli Gli His Gin Gli Ala Leu Gin Vai Leu Lis 50 55 60

Glu Vai Ile Asn Asp Glu Ala Ala Asp Trp Asp Arg Ala His Pro Gin 65 70 75 80

Gin Ala Gli Pro Leu Pro Pro Gli Gin Ile Arg Glu Pro Tre Gli Ser 85 90 95

Asp Ile Ala Gli Tre Tre Ser Tre Gin Gin Glu Gin Ile Leu Trp Tre 100 105 110

Tre Arg Ala Gli Asn Pro Ile Pro Vai Gli Asp Ile Tir Arg Lis Trp 115 120 125

Ile Vai Leu Gli Leu Asn Lis Met Vai Lis Met Tir Ser Pro Vai Ser 130 135 140

Ile Leu Asp Ile Arg Gin Gli Pro Lis Glu Pro Fen Arg Asp Tir Vai 145 150 155 160

Asp Arg Fen Tir Lis Tre Lis Leu Ala Glu (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 66: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 170 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NUMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 66:

Gin Gli Gin Met Vai His Gin Ala Ile Ser Pro Arg Tre Leu Asn Ala 15 10 15

Trp Vai Lis Ala Vai Glu Glu Lis Ala Fen Asn Pro Glu Ile Ile Pro

$SÍ 25 'VI

Met Fen Met Ala Leu Ser Glu Gli Ala Ile Ser Tir Asp Ile Asn Tre 35 40 45

Met Leu Asn Ala Ile Gli Gli His Gin Gli Ala Leu Gin Vai Leu Lis 50 55 60

Glu Vai Ile Asn Glu Glu Ala Vai Glu Trp Asp Arg Tre His Pro Pro 65 70 75 80

Pro Vai Gli Pro Leu Pro Pro Gli Gin Ile Arg Glu Pro Tre Gli Ser 85 90 95

Asp Ile Ala Gli Tre Tre Ser Tre Gin Gin Glu Gin Ile His Trp Tre 100 105 110

Tre Arg Pro Asn Gin Pro Ile Pro Vai Gli Asp Ile Tir Arg Lis Trp 115 120 125

Ile Vai Leu Gli Leu Asn Lis Met Vai Lis Met Tir Ser Pro Vai Ser 130 135 140

Ile Leu Asp Ile Lis Gin Gli Pro Lis Glu Pro Fen Arg Asp Tir Vai 145 150 155 160

Asp Arg Fen Tir Lis Tre Lis Leu Ala Glu 165 170 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 67: (1) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 170 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NUMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii)TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 67:

Gin Gli Gin Met Val His Gin Ala 1 5 Trp Val Lis Ala Val Glu Glu Lis 20 Met Fen Met Ala Leu Ser Glu Gli 35 40 Met Leu Asn Ala Ile Gli Gli His 50 55 Glu Val Ile Asn Glu Glu Ala Ala 65 70 Ala Met Gli Pro Leu Pro Pro Gli 85 Asp Ile Ala Gli Tre Tre Ser Tre 100 Tre Arg Gli Ala Asn Ser Ile Pro 115 120 ile Val Leu Gli Leu Asn Lis Met 130 135 Ile Leu Asp Ile Arg Gin Gli Pro 145 150 Asp Arg Fen Tir Lis Tre Lis Leu

Ile Ser Pro Arg Tre Leu Asn Ala 10 15

Ala Fen Asn Pro Glu Ile Ile Pro 25 30

Ala Val Pro Tir Asp Ile Asn Tre 45

Gin Gli Ala Leu Gin Val Leu Lis 60

Glu Trp Asp Arg Tre His Pro Pro 75 80

Gin Ile Arg Glu Pro Tre Gli Ser 90 95

Gin Gin Glu Gin Ile Ile Trp Tre 105 110

Val Gli Asp He Tir Arg Lis Trp 125

Val Lis Met Tir Ser Pro Val Ser 140

Lis Glu Pro Fen Arg Asp Tir Val 155 160

Ala Glu 170 104 165 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 68: (i) CARACTERÍ STICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 169 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 68:

Gin Gli Gin Met Vai His Gin Ala Ile Ser Pro Arg Tre Leu Asn Ale 15 10 15

Trp Vai Lis Vai Vai Glu Glu Lis Ala Fen Ser Pro Glu Vai Ile Pro 20 25 30

Met Fen Ser Ala Leu Ser Glu Gli Ala Tre Pro Gin Asp Leu Asn Tre 35 40 45

Met Leu Asn Tre Vai Gli Gli His Gin Ala Ala Met Gin Met Leu Lis 50 55 60

Glu Tre Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu Trp Asp Arg Vai His Pro Vai 65 70 75 80

His Ala Gli Pro Ile Ala Pro Gli Gin Met Arg Glu Pro Arg Gli Ser 85 90 95

Asp Ile Ala Gli Tre Tre Ser Tre Leu Gin Glu Gin Ile Gli Trp Met 100 105 110

Tre Asn Asn Pro Pro Ile Pro Vai Gli Glu Ile Tir Lis Arg Trp Ile 115 120 125

Ile Leu Gli Leu Asn Lis Ile Vai Arg Met Tir Ser Pro Tre Ser Ile 130 135 140

Leu Asp lie Arg Gin Gli Pro Lis Glu Pro Fen Arg Asp Tir Vai Asp 145 150 155 160

Arg Fen Tir Lis Tre Lis Leu Ala Glu 165 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 69: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 169 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 69:

Gin Gli Gin Met Ile Xis Gin Ala lie Ser Pro Arg Tre Leu Asn Ala 15 10 15

Trp Vai Lis Vai Ile Glu Glu Lis Ala Fen Ser Pro Glu Vai Ile Pro 20 25 30

Met Fen Ser Ala Leu Ser Glu Gli Ala Tre Pro Gin Asp Leu Asn Met 35 40 45

Met Leu Asn Ile Vai Gli Gli His Gin Ala Ala Met Gin Met Leu Lis 50 55 60

Asp Tre Ile Asn Glu Glu Ala Ala Asp Trp Asp Arg Vai His Pro Vai 65 70 75 80

His Ala Gli Pro Ile Pro Pro Gli Gin Met Arg Glu Pro Arg Gli Ser 85 90 95

Asp Ile Ala Gli Tre Tre Ser Tre Leu Gin Glu Gin Ile Gli Trp Met 100 105 110

Tre Ser Asn Pro Pro Ile Pro Vai Gli Asp Ile Tir Lis Arg Trp Ile 115 120 125

Ile Leu Gli Leu Asn Lis Ile Vai Arg Met Tir Ser Pro Vai Ser Ile 130 135 140

Leu Asp Ile Arg Gin Gli Pro Lrs Glu Pro Fen Arg Asp Trr Vai Asp 145 150 155 160

Arg Fen Fen Lis Tre Lis Leu Ala Glu (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 70: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 169 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 70:

Gin Gli Gin Met Vai His Gin Ala Ile Ser Pro Arg Tre Leu Asn Ala 15 10 15

Trp Vai Lis Vai Vai Glu Glu Lis Ala Fen Ser Pro Glu Vai Ile Pro 20 25 30

Met Fen Ser Ala Leu Ser Glu Gli Ala Leu Pro Gin Asp Vai Asn Tre 35 40 45

Met Leu Asn Ala Vai Gli Gli His Gin Gli Ala Met Gin Vai Leu Lis 50 55 60

Glu Vai Ile Asn Glu Glu Ala Ala Glu Trp Asp Arg Leu His Pro Tre 65 70 75 80 10?

His Ala Gli Pro Ile Ala Pro Gli Gin Leu Arg Glu Pro Arg Gli Ser 85 90 95

Asp Ile Ala Gli Tre Tre Ser Tre Leu Gin Glu Gin Ile Gli Trp Tre 100 105 110

Tre Ala Asn Pro Pro Ile Pro Vai Gli Asp Vai Tir Arg Arg Trp Vai 115 120 125

Ile Leu Gli Leu Asn Lis Vai Vai Arg Met Tir Cis Pro Vai Ser Ile 130 135 140

Leu Asp Ile Arg Gin Gli Pro Lis Glu Pro Fen Arg Asp Tir Vai Asp 145 150 155 160

Arg Fen Tir Lis Tre Lis Leu Ala Glu 165 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 71: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA:

(A) COMPRIMENTO: 35 aminoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ iD

Cis Tre Arg Pro Tir Lis Asn Tre Arg Gin Arg Tre Gli Ile Gli Pro 15 10 15

Gli Gin Ala Leu Tir Tre Tre His Arg Ile Ile Gli Asp Ile Arg Gin 20 25 30

Ala His Cis 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 72: (i) CARACIERÍSIICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO 37 aminoácidos (B) ’ TIPO: aminoacido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 72:

Arg Vai Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Gin Asp Gin Gin Leu Leu Gli 15 10 15

Ile Trp Gli Cis Ser Gli Lis His Ile Cis Tre Tre Tre Vai Pro Trp 20 25 30

Asn Ser Ser Trp Ser 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 73: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 36 aminoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 73: 15 10

Cis Tre Arg Pro Asn Asn Asn Tre Arg Lis Ser Ile Arg Ile Gin Arg 1 5

Gli Pro Gli Arg Ala Fen Vai Tre Ile Gli Lis Ile Gli Asn Met Arg 20 25 30

Gin Ala His Cis 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 74: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 74:

Arg Ile Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Lis Asp Gin Gin Leu Leu Gli 15 10 15

Ile Trp Gli Cis Ser Gli Lis Leu Ile Cis Tre Tre Ala Vai Pro Trp m- as 3$

Asn Ala Ser Trp Ser 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 75: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 75:

Cis Tre Arg Pro Asn Asn Asn Tre Arg Asn Arg Ile Ser Ile Gin Arg 15 10 15

Gli Pro Gli Arg Ala His Vai Tre Tre Lis Gin Ile Ile Gli Asp Ile 20 25 30

Arg Gin Ala His Cis 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 76: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 76:

Arg Vai Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Lis Asp Gin Gin Leu Leu Gli 15 10 15

Ile Trp Gli Cis Ser Gli Lis Leu Ile Cis Tre Tre Tre Vai Pro Trp 20 25 30

Asn Ala Ser Trp Ser 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 77: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 34 arninoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEO ID NO: 77:

Cis Ala Arg Pro Tir Gin Asn Tre Arg Gin Arg Tre Pro Ile Gli Leu 15 10 15

Gli Gin Ser Leu Tir Tre Tre Arg Ser Arg Ser Ile Ile Gli Gin Ala 20 25 30

His Cis (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 78: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO.: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 78:

Arg Ile Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Lis Asp Gin Gin Leu Leu Gli 15 10 15

Ile Trp Gli Crs Ser Gli Lis His Ile Cis Tre Tre Asn Vai Pro Trp 20 25 30

Asn Ser Ser Trp Ser 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 79: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 33 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples w CONFIGURAÇÃO: linear (li) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 79:

Cis Tre Arg Pro Gli Asn Asn Tre Arg Arg Gli Ile His Fen Gli Pro 15 10 15 611 Gin Ala Leu Tir Tre Tre Gli Vai Gli Asp Ile Arg Arg Ala Tir 20 25 30

Cis (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 80: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 80:

Arg Vai 1-¾¾ Ala Vai Glu Arg Tir Leu Gin Asp Gin Arg Leu Leu Gli 15 10 15

Met Trp Gli Cis Ser Gli Lis His Ile Cis Tre Tre Fen Pro Trp 20 25 30

Asn Ser Ser Trp Ser 35 s): eãrã m». bi% (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 36 arninoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCÚLA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 81:

Cis Ser Arg Pro Tir Asn Tre Arg Lis Asn Ile Arg Arg Tir Ser Ile 15 10 15

Glí Ser Gli Gin Ala Fen Tir Vai Tre Gli Lis Ile Gli Asp Ile Arg 20 25 30

Gin Ala His Cis 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 82: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 arninoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 82: 10 15

Arg Vai Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Gin Asp Gin Gin Leu Leu Gli 1 5 I1e Trp Gli Cis Ser Gli Lis Leu Ile Cis Tre Tre Tre Vai Pro Trp 20 25 50

Asn Ser Ser Trp Ser 35 '(2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 83: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 35 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 83:

Cis His Arg Pro Gli Asn Asn Tre Arg Gli Glu Vai Gin Ile Gli Pro 15 10 15

Gli Met Tre Fen Tir Asn Ile Glu Asn Vai Vai Gli Asp Tre Arg Ser 20 25 30

Ala Tir Cis 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 84: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 84:

Arg Leu Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu Gin Asp Gin Gin Ile Leu Gli 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Ser Gli Lis Ala Vai Cis Tir Tre Tre Vai Pro Trp 20 25 30

Asn Asn Ser Trp Pro 55 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 85: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 36 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 85:

Cis Glu Arg Pro Gin Ile Asp Ile Gin Glu Met Arg Ile Gli Pro Met 15 10 15

Ala Trp Tir Ser Met Gli Ile Gli Gli Tre Ala Gli Asn Ser Ser Arg 20 25 50

Gin Ala Tir Cis 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 86: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 86:

Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Leu Leu Gin Asn Gin Gin Leu Leu Ser 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Lis Gli Lis Leu Vai Cis Tir Tre Ser Vai Lis Trp 20 25 30

Asn Arg Tre Trp Ile 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 87: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 36 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 87:

Cis Ile Arg Glu Gli Ile Ala Glu Vai Gin Asp Ile Tir Tre Gli Pro 15 10 15

Met Arg Trp Arg Ser Met Tre Leu Ile Arg Ser Asn Asn Tre Ser Arg 20 25 30

Vai Ala Tir Cis 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 88: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: ir (A) COMPRIMENTO: 37 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 88:

Arg Leu Gin Ala Leu Glu Tre Leu Ile Gin Asn Gin Gin Arg Leu Asn 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Lis Gli Lis Leu Ile Cis Tir Tre Ser Vai Lis Trp 20 25 30

Asn Arg Tre Trp Ile 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 89: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 89:

Cis Glu Arg Pro Gli Asn Gin Tre Ile Gin Lis Ile Met Ala Gli Pro 15 10 15

Met Ala Trp Tir Ser Met Ala Leu Ser Asn Tre Lis Gli Asp Tre Ser 20 25 30

Arg Ala Ala Tir Cis 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 90: (A) COMPRIMENTO: 37 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 90:

Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Fen Ile Gin Asn Gin Gin Leu Leu Asn 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Lis Asn Arg Leu Ile Cis Tir Tre Ser Vai Lis Trp 20 25 30

Asn Lis Tre Trp Gli 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 91: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 40 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 91:

Cis Xaa Arg Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Ile Xaa Xaa Xaa Xaa 15 10 15

Gli Pro Met Xaa Trp Xaa Ser Met Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa 20 25 30

Xaa Xaa Ser Arg Xaa Ala Xaa Cis 35 40 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 92: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 37 aminoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 92:

Arg Leu Xaa Ala Leu Glu Tre Xaa Xaa Gin Asn Gin Gin Xaa Leu Xaa 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Xaa Xaa Xaa Xaa Xaa Cis Tir Tre Ser Vai Xaa Trp 20 25 30

Asn Xaa Tre Trp Xaa 35 (2) INFORMAÇÕES POUR LA SEQ ID NO: 93: " (i) €ÁSdflRÍStl;CAgi' D A "SEQUENCIA: (A) COMPRIMENTO: 38 aminoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 93:

Cis Vai Arg Pro Gli Asn Asn Ser Vai Lis Glu Ile Lis Ile Gli Pro 1 5 10 15

Met Ala Trp Tir Ser Met Gin Ile Glu Arg Glu Gli Lis Gli Ala Asn 20 25 30

Ser Arg Tre Ala Fen Cis 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 94: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA; (A) COMPRIMENTO: 37 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear 'Cii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 94:

Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Leu Met Gin Asn Gin Gin Leu Leu Asn 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Arg Gli Lis Ala Ile Cis Tir Tre Ser Vai Gin Tzp 20 25 30

Asn Glu Tre Trp Gli 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 95: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 513 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear ( ii} TIF© DF MOLÉèto í (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 95: CGGGGACAAA TGGTACATCA GGCCATCTCC CCCAGAACTT TATATGTATG GGTAPAGGCA 60 GTAGAAGAAA AGGCCTTTAA CCCTGAAATT ATCCCTATGT TTATGGCACT ATCAGAAGGA 120 GCTGTTCCCT ATGATATCAA TGTTATGCTA AATGCCATAG GAGGACACCA AGGGGCTTTA 180 CAAGTATTAA AAGAAGTAAT CAATGATGAA GCAGCAGACT GGGATAGAGC TCACCCACAA 240 CAGGCAGGGC CGTTACCACC AGGGCAGATA AGGGAACCAA CAGGAAGTGA CATTGCTGGA 300 ACAACTAGCA CACAGCAAGA GCAAATTCTC TGGACTACTA GGGCAGGTAA CCCTATCCCA 360 GTTGGAGACA TCTATAGGAA ATGGATAGTG TTGGGTCTAA ACAAAATGGT AAAAATGTAT 420 AGTCCAGTGA GCATCTTAGA TATTAGGCAG GGACCAAAAG AACCATTTAG AGATTATGTA 480 513

GACAGGTTCT ACAAAACATT AAGAGCTGAG CAG (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 96: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 171 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 96:

Gin Gli Gin Met Vai His Gin Ala Leu Ser Pro Arg Tre Leu Asn Ala 15 10 15

Trp Vai Lis Ala Vai Glu Glu Lis Ala Fen Asn Pro Glu Ile Ile Pro 20 25 30 Met Fen Met Ala Leu Ser Glu Gli Ala Vai Pro Tir Asp Ile Asn Vai 35 40 45 Met Leu Asn Ala Ile Gli Gli Ris Gin Gli Ala Leu Gin Vai Leu Lis 50 55 60

Glu Vai Ile Asn Asp Glu Ala Ala Asp Trp Asp Arg Ala His Pro Gin 65 70 75 80

Gin Ala Gli Pro Leu Pro Pro Gli Gin Ile Arg Glu Pro Tre Gli Ser 85 90 95

Asp Ile Ala Gli Tre Tre Ser Tre Gin Gin Glu Gin Ile Leu Trp Tre 100 105 110 Tre Arg Ala Gli Asn Pro ile Pro Vai Gli Asp ile Tir Arg Lis Trp 115 120 125 Ile Vai Leu Gli Leu Asn Lis Met Vai Lis Met Tir Ser Pro Vai Ser 130 135 140

Ile Leu Asp Ile Arg Gin Gli Pro Lis Glu Pro Fen Arg Asp Tir Vai 145 150 155 160

Asp Arg Fen Tir Lis Tre Leu Arg Ala Glu Gin 165 170 IO; (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 525 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: 1 inear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 97: ATTCCAATAC ACTATTGTGC TCCAGCAGGA TATGCTATCT TTAAATGCAA CAACGAGGAG 60 TTTACTGGAA AGGGCCAATG TAACAACATT TCAGTAGTTA CCTGTACACA GGGTATCAAG 120 CCAACAGTAA GCACTCATCT AATATTCAAT GGGACAATCT CTGMAGAAA AATAAGAATT 180 ATGGGAAAGA ACATCTCGAG CAACTCAGGT AATATCCTAG TGACCCTAAA TTCTACTATA 240 AACATGACCT GTGTGAGGCC AGGAAATAAT TCAGTACAGG AGATAAAAAT AGGTCCAATG 300 GCTTGGTACA GTATGCAAAT TGAGCGAGAG GGAAAAGGAG CATATTCAAG AACAGCTTTT 360 TGTACCTATA ATGCCACGGA CTGGAGAAAA ACCTTGCAAG GGATAGCTGA AAGGTATTTA 420 GAACTTGTAA ATAAAACAAG TCCGACTGAA ATAATGTTCA ATAAAAGCAA TGGTGGAGAT 480 GCAGAAATAA CCCGTTTGCA TTTTAACTGT CATGGAGAAT TCTTT 525 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 98: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 175 aminoácidos {B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 98:

Ile Pro Ile His Tir Cis Ala Pro Ala Gli Tir Ala Ile Fen Lis Cis 1 5 10 15 Asn Asn Glu Glu Fen Tre Gli Lis Gli Pro Cis Asn Asn ile Ser Vai 20 25 90 Vai Tre Cis Tre Gin Gli Ile Lis Pro Tre Vai Ser Tre His Leu ile 95 40 45

Fen Asn Gli Tre Ile Ser Glu Arg Lis Ile Arg Ile Met Gli Lis Asn 50 55 60 Ile Ser Ser Asn Ser Gli Asn Ile Leu Vai Tre Leu Asn Ser Tre Ile 65 70 75 80 Asn Met Tre Cis Vai Arg Pro Gli Asn Asn Ser Vai Gin Glu Ile Lis 85 90 95 Ile Gli Pro Met Ala Trp Tir Ser Met Gin Ile Glu Arg Glu Gli Lis 100 105 110 Gli Ala Asn Ser Arg Tre Ala Fen Cis Tre Tir Asn Ala Tre Asp Trp 115 120 125 Arg Lis Tre Leu Gin Gli Ile Ala Glu Arg Tir Leu Glu Leu vai Asn 130 135 140 LiS Tre Ser Pro Tre Glu Ile Met Fen Asn Lis Ser Asn Gli Gli Asp 145 150 155 160 Ala Glu Ile Tre Arg Leu Mis Fen Asn Ser Cis Gli Glu Fen Fen 165 170 175 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 99: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 312 pares de bases (B) TIPO: nucleótido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: ADNc (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 99: 60 120 180 240 300

ATAGTGCAAC AGCAGGACAA CCTGCTGAGA GCAATACAGG CCCAGCAACA TCTGCTGAGG TTATCTGTAT GGGGTATTAG ACAACTCCGA GCTCGCCTGC TAGCCTTAGA AACCCTTATG CAGAATCAGC AACTCCTAAA CCTGTGGGGT TGTAGAGGAA AAGCAATCTG CTACACATCA GTACAATGGA ATGAAACATG GGGAGGAAAT GACTCAATTT GGGACAGGTT AACATGGCAG CAATGGGATC AACAGATAGC CAATGTAAGC TCTTTTATAT ATGACAAATT ACAAGAAGCA CAAGAACAAC AA (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 100: 312 (A) COMPRIMENTO: 104 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NUMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO': linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 100: lie Vai Gin Gin Gin Asp Asn Leu Leu Arg Ala Ile Gin Ala Gin Gin 1 5 10 15 His Leu Leu Arg Leu Ser Vai Trp Gli ile Arg Gin Leu Arg Ala Arg 20 25 30 Leu Leu Ala Leu Glu Tre Leu Met Gin Asn Gin Gin Leu Leu Asn Leu 3 5 40 45 Trp Gli Cis Arg Gli Lis Ala Ile Cis Tir Tre Ser Vai Gin Trp Asn 50 55 60 Glu Tre Trp Gli Gli Asn Asp Ser Ile Trp Asp Arg Leu Tre Trp Gin 65 70 75 80 Gin Trp Asp Gin Gin ile Ala Asn Vai Ser Ser Fen Ile Tir Asp Lis 85 90 95 Ile Gin Glu Ala Gin Glu Gin i Gin 100 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 101: 30 (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 35 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples 35 (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: péptido (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 101:

Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Fen Ile Gin Asn Gin Gin Leu Leu Asn 15 10 15

Leu Trp Gli Cis Lis Asn Arg Leu Ile Cis Tir Tre Ser Vai Lis Trp 20 25 30

Asn Lis Tre 35 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 102: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 877 arninoácidos (B) TIPO: arninoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 102:

Met Tre Ala Ile Met Lis Ala Met Gli Lis Arg Asn Arg Lis Leu Gli 1 5 10 15 Ile Trp Cis Leu Ile Leu Ala Leu Ile Ile Pro Cis Leu Ser Cis Asn 20 25 30 Gin Leu Tir Ala Tre Vai Tir Ser Gli Vai Pro Vai Trp Glu Asp Ala 35 40 45 Lis Pro Tre Leu Fen Cis Ala Ser Asp Ala Asn Leu Tre Ser Tre Glu 50 55 60 Gin His Asn Ile Trp Ala Tre Gin Ala Cis Vai Pro Tre Asp Pro Ser 65 70 75 80 Pro Asn Glu Tir Glu Leu Lis Asn Vai Tre Gli Lis Fen Asn Ile Trp 85 90 95 Lis Asn Tir Ile Vai Asp Gin Met His Glu Asp Ile Ile Asp Leu Trp 100 105 110 Asp Gin Ser Leu Lis Pro Cis Vai Gin Met Tre Fen Leu Cis Vai Gin 115 120 125 Met Asn Cis Tre Asp Ile Lis Asn Ser Ile Asn Tre Tre Asn Ser Pro 130 135 140 Leu Asn Ser Asn Asn Tre Lis Glu Vai Lis Gin Cis Asp Fen Asn Vai 145 150 155 160 ) 26

Tre Tre Vai Leu Lis Asp Lis Gin Glu Lis Lis Gin Ala Leu Fen Tir 165 170 175 Vai Tre Asp Leu Vai LÍS Ile Asn Ala Tre Ser Asn Glu Tre Met Tir 180 185 190 Arg Leu Ile Asn Cis Asn Ser Tre Tre Ile Arg Gin Ala Cis Pro Lis 195 200 205 Vai Ser Fen Glu Pro Ile Pro Ile His Tir Cis Ala Pro Ala Gli Cis 210 215 220 Ala Ile Fen Lis Cis Asn Glu Tre Gli Fen Asn Gli Tre Gli Leu Cis 225 230 235 240 Lis Asn Vai Tre Vai Vai Tre Cis Tre His Gli Ile Lis Pro Tre Vai 245 250 255 Ser Tre Gin Leu Ile Leu Asn Gli Tre Leu Ser Lis Gli Asn Ile Tre 260 265 270 Ile Met Gli Lis Asn Ile Ser Asp Ser Gli Glu Asn Ile Leu ile Tre 275 280 285 Leu Asn Tre Asn Ile Tre Ile Ala Cis Glu Arg Pro Gli Asn Gin Tre 290 295 300 Ile Gin Lis Ile Met Ala Gli Pro Met Ala Trp Tir Ser Met Ala Leu 305 310 315 320 Ser Asn Tre Lis Gli Asp Tre Arg Ala Ala Tir Cis Asn Tir Ser Ala 325 330 335 Tre Asp Trp Asn Lis Ala Leu Lis Asn Ile Tre Glu Arg Tir Leu Glu 340 345 350 Leu Vai Glu Tir Asn Gin Tre Asp Vai Tre Met Lis Fen Gli Asn His 355 360 365 Ser Gli Glu Asp Ala Glu Vai Tre Asn Fen Fen Fen Asn Cis His Gli 370 375 380 Glu Fen Fen Tir Cis Asn Tre Asn Arg Leu Fen Asn His Tre Fen Ser 385 390 395 400 Cis Lis Lia Asn Met Tre Asn Asn Lis Ile Asn Cis Tre Asn Ile Ser 405 410 415 Asn Asn Ser Asn Gli Tre Gin Ala Ile Pro Cis Arg Leu Arg Gin Vai 420 425 430 Vai Arg Asp Trp Met Arg Gli Gli Ser Gli Leu Tir Ala Pro Pro Ile 435 440 445 Pro Gli Asn Leu Vai Cis Arg Ser Asn Ile Tre Gli Met Ile Leu Gin 450 455 460 Leu Asp Tre Pro Trp Asn Lis Tre His Pro Asn Ser Tre Tre Leu Arg 465 470 475 480

Pro Gli Gli Gli Asp Met Lis Asp Ile Trp Arg Tre Gin Leu Fen Lis 485 490 495 Tir Lis Vai Vai Arg Val Lis Pro Fen Ser Val Ala Pro Tre Lis Ile 500 505 510 Ala Arg Pro Tre Ile Gli Tre Arg Ser gis Arg Glu Lis Arg Ala Ala 515 520 525 Gli Leu Ala met Leu Fen Leu Gli Ile Leu Ser Ala Ala Gli Ser Tre 530 535 540 Met Gli Ala Ala Ala Tre Ala Leu Tre Val Arg Tre Gin His Leu Ile 545 550 555 560 Lis Gli ile Val Gin Gin Gin Asp Asn Leu Leu Arg Ala Ile Gin Ala 565 570 575 Gin Gin His Leu Leu Arg Pro Ser Val Trp Gli Ile Arg Gin Leu Arg 580 585 590 Ala Arg Leu Leu Ala Leu Glu Tre Fen Ile Gin Asn Gin Gin Leu Leu 595 600 605 Asn Leu Trp Gli Cis Lis Asn Arg Leu ile Cis Tir Tre Ser Val Lis 610 615 620 Trp Asn Lis Tre Trp Gli Gli Asp Asn Glu Ser Ile Trp Asp Glu Leu 625 630 635 640 Tre Trp Gin Gin Trp Asp Gin Gin Ile Asn Asn Val Ser Ser Fen Ile 645 650 655 Tir Glu Lis Ile Gin Glu Ala Gin Glu Gin Gin Glu Lis Asn Glu Lis 660 665 670 Glu Leu Leu Glu Leu Asp Glu Trp Ala Ser Ile Trp Asn Trp Leu Asp 675 680 685 Ile Tre Lis Trp Leu Trp Tir Ile Lis Ile Ala Ile Ile Ile Val Gli 690 695 700 Ala Leu Ile Gli Val Arg Val Val Met Ile Val Leu Asn Leu Val Lis 705 710 715 720 Asn Ile Arg Gin Gli Tir Gin Pro Leu Ser Leu Gin Ile Pro Ile Gin 725 730 735 Gin Gin Ala Glu Val Gli Tre Pro Gli Gli Tre Gli Glu Gli Gli Gli 740 745 750 Asp Glu Asp Arg Arg Arg Trp Tre Pro Leu Pro Gin Gli Fen Leu His 755 760 765 Leu Leu Tir Tre Asp Leu Arg Tre Ile Ile Leu Trp Ile Tir His Leu 770 775 780 Leu Ser Asn Leu Ala Ser Glu Ile Gin Lis Leu Ile Arg His Leu Gli 785 790 795 800

Leu Gli Leu Trp ile ile Gli Gin Arg Tre ile Glu Ala Cis Arg Leu 805 810 815 Fen Lis Ala Ile Ile Gin Tir Trp Leu Gin Glu Leu Gin Tre Ser Ala 820 825 830 Tre Asn Leu Leu Asp Tre Vai Ala Vai Ala Vai Ala Asn Trp Tre Asp 835 840 845 Ser Tre Ile Leu Gli Ile Gin Ser Ile Gli Arg Gli Ile Leu A§n Il'e 850 855 860

Pro Arg Arg Ile Arg Gin Glí Leu Glu Arg Leu Leu Leu 865 870 875 (2) INFORMAÇÕES PARA A SEQ ID NO: 103: (i) CARACTERÍSTICAS DA SEQUÊNCIA: (A) COMPRIMENTO: 861 aminoácidos (B) TIPO: aminoácido (C) NÚMERO DE HÉLICES: simples (D) CONFIGURAÇÃO: linear (ii) TIPO DE MOLÉCULA: proteína (xi) DESCRIÇÃO DA SEQUÊNCIA: SEQ ID NO: 103:

Met Arg Vai Lis Glu Lis Tir Gin His Leu Trp Arg Trp Gli Trp Lis 1 5 10 15 Trp Gli Tre Met Leu Leu Gli Ile Leu Met Ile Cis Ser Ala Tre Glu 20 25 30 Lis Leu Trp Vai Tre Vai Tir Tir Gli Vai Pro Vai Trp Lis Glu Ala 35 40 45 Tre Tre Tre Leu Fen Cis Ala Ser Asp Ala Lis Ala Tir Asp Tre Glu 50 55 60 Vai His Asn Vai Trp Ala Tre His Ala Cis vai Pro Tre Asp Pro Asn 65 70 75 80 Pro Gin Glu Vai Vai Leu Vai Asn Vai Tre Glu Asn Fen Asn Met Trp 85 90 95 Lis Asn Asp Met Vai Glu Gin Met His Glu Asp Ile ile Ser Leu Trp 100 105 110 Asp Gin Ser Leu Lis Pro Cis Vai Lis Leu : rre Pro Leu Cis Vai Ser 115 120 125

Leu Lis Cis Tre Asp Leu Gli Asn Ala Tre Asn Tre Asn Ser Ser Asn 130 135 140 Tre Asn Ser Ser Ser Gli Glu Met Met Met Glu Lis Gli Glu Ile Lis 145 150 155 160 Asn Cis Ser Fen Asn Ile Ser Tre Ser Ile Arg Gli Lis Vai Gin Lis 165 170 175 Glu Tir Ala Fen Fen Tir Lis Leu Asp Ile Ile Pro Ile Asp Asn Asp 180 185 190 Tre Tre Ser Tir Tre Leu Tre Ser Cis Asn Tre Ser vai Ile Tre Gin 195 200 205 Ala Cis Pro Lis Vai Ser Fen Glu Pro Ile Pro Ile His Tir Cis Ala 210 215 220 Pro Ala Gli Fen Ala Ile Leu Lis Cis Asn Asn Lis Tre Fen Asn Gli 225 230 235 240 Tre Gli Pro Cis Tre Asn Vai Ser Tre Vai Gin Cis Tre His Gli Ile 245 250 255 Arg Pro Vai Vai Ser Tre Gin Leu Leu Leu Asn Gli Ser Leu Ala Glu 260 265 270 Glu Glu Vai Vai Ile Arg Ser Ala Asn Fen Tre Asp Asn Ala Lis Tre 275 280 285 Ile Ile Vai Gin Leu Asn Gin Ser vai Glu Ile Asn Cis Tre Arg Pro 290 295 300 Asn Asn Asn Tre Arg Lis Ser Arg Ile Gin Arg Gli Pro Gli Arg 305 310 315 320 Ala Fen Vai Tre Ile Gli Lis iig Gli Asn Met Arg Gin Ala His Cis 325 330 335 Asn Ile Ser Arg Ala Lis Trp Asn Ala Tre Leu Lis Gin Ile Ala Ser 340 345 350 Lis Leu Arg Glu Gin Fen Gli Asn Asn Lis Tre Ile Ile Fen Lis Gin 355 360 365 Ser Ser Gli Gli Asp Pro Glu Ile Vai Tre His Ser Fen Asn Cis Gli 370 375 380 Gli Glu Fen Fen Tir Cis Asn Ser Tre Gin Leu Fen Asn Ser Tre Trp 385 390 395 400 Fen Asn Ser Tre Trp Ser Tre Glu Gli Ser Asn Asn Tre Glu Gli Ser 405 410 415 Asp Tre Ile Tre Leu Pro Cis Arg Ile Lis Gin Fen Ile Asn Met Trp 420 425 430

Gin Glu Vai Gli Lis Ala Met Tir Ala Pro Pro Ile Ser Gli Gin Ile 435 440 445

Arg Cis Ser Ser Asn Ile Tre Gli Leu Leu Leu Tre Arg Asp Gli Gli 450 455 460 m

Asn Asn Asn Asn Gli Ser Glu Ile ] Fen Arg Pro Gli Gli Gli Asp Met 465 470 475 480 Arg Asp Asn Trp Arg Ser Glu Leu Tir Lis Tir Lis Vai Vai Lis Ile 485 490 495 Glu Pro Leu Gli Vai Ala Pro Tre Lis Ala Lis Arg Arg Val Val Gin 500 505 510 Arg Glu Lis Arg Ala Vai Gli Ile Gli Ala Leu Fen Leu Gli Fen Leu 515 520 525 Gli Ala Ala Gli Set Tre Met Gli Ala Arg Ser Met Tre Leu Tre Val 530 535 540 Gin Ala Arg Gin Leu Leu Ser Gli Ile Vai Gin Gin Gin Asn Asn Leu 545 550 555 560 Leu Arg Ala Ile Glu Ala Gin Gin His Leu Leu Gin Leu Tre Val Trp 565 570 575 Gli Ile Lis Gin Leu Gin Ala Arg Ile Leu Ala Vai Glu Arg Tir Leu 580 585 590 Lis Asp Gin Gin Leu Leu Gli Ile Trp Gli Cis Ser Gli Lis Leu Ile 595 600 605 Cis Tre Tre Ala Vai Pro Trp Asn Ala Ser Trp Ser Asn Lis Ser Leu 610 615 620 Glu Gin Ile Trp Asn Asn Met Tre Trp Met Glu Trp Asp Arg Glu Ile 625 630 635 640 Asn Asn Tir Tre Ser Leu ile His Ser Leu ile Glu Glu Ser Gin Asn 645 650 655 Gin Gin Glu lis Asn Glu Gin Glu Leu Leu Glu Leu Asp Lis Trp Ala 660 665 670 Ser Leu Trp Asn Trp Fen Asn Ile Tre Asn Trp Leu Trp Tir Ile Lis 675 680 685 Ile Fen Ile Met Ile Vai Gli Gli Leu Vai Gli Leu Arg Ile Val Fen 690 695 700 Ala Vai Leu Ser Ile Vai Asn Arg Vai Arg Gin Gli Tir Ser Pro Leu 705 710 715 720 Ser Fen Gin Tre His Leu Pro Tre Pro Arg Gli Pro Asp Arq Pro Glu 725 730 735 Gli Ile Glu Glu Glu Gli Gli Glu Arg Asp Arg Asp Arg Ser Ile Arg 740 745 750 Leu Vai Asn Gli Ser Leu Ala Leu Ile Trp Asp Asp Leu Arg Ser Leu 755 760 765 Cis Leu Fen Ser Tir His Arg Leu Arg Asp Leu Leu Leu Ile Val Tre 770 775 780 Arg Ile Vai Glu Leu Leu Gli Arg Arg Gli Trp Glu Ala Leu Lis Tir 785 790 795 800

Trp Trp Asn Leu Leu Gin Tir Trp Ser Gin Glu Leu Lis Asn Ser Ala 805 810 815

Vai Ser Leu Leu Asn Ala Tre Ala Ile Ala Vai Ala Glu Glí Tre Asp 820 825 830

Arg Vai Ile Glu Vai Vai Gin Gli Ala Cis Arg Ala Ile Arg His Ile 835 840 845

Pro Arg Arg Ile Arg Gin Gli Leu Glu Arg Ile Leu Leu 850 855 860

Lisboa, 27 de Novembro de 2007

Claims (17)

1. Ácido nucleico caracterizado pelo facto de permitir a detecção do virus que compreende a sequência SEQ ID NO 5 tal como representada na figura 6. 2. Ácido nucleico caracterizado pelo facto de se poder utilizar como uma sonda consistindo num fragmento de pelo menos 100 pares de bases da sequência SEQ ID NO 5 de um ácido nucleico de acordo com a reivindicação 1. 3. Ácido nucleico caracterizado pelo facto de se poder utilizar como uma sonda, de acordo com a reivindicação 2, que se escolhe no grupo constituído por i) uma sequência amplificada no gene env de VIH-Ivau com a ajuda dos iniciadores situados nas posições 640 a 663 (5'-ATT CCC ATA CAC TAT TGT GCT CCA-3') e 1138 a 1161 (5V-AAA GAA TTC TCC ATG ACA GTT ΆΑΑ-50 3') do gene env de VIH-lvAUf e (iij uma sequência amplificada no gene env de com a ajuda dos iniciadores situados nas posições 1684 a 1707 (5'-GGT ATA GTG CAA CAG CAG GAT AAC-3') e 2026 a 2046 (5'-AGA GGC CCA TTC ATC TAA CTC-3') do gene env de VIH-Ivao· 4. Ácido nucleico caracterizado pelo facto de se poder utilizar como uma sonda, de acordo com a reivindicação 1, que consiste numa sequência amplificada no genoma de VIH-Ivau com a ajuda dos iniciadores Th2 (5'-GCT CTA GAT GGG GAT CTC CCA TGG CAG G-3') e UH2 (5'-GCT CTA GAT CAG GGA AGA ATC CCT GAG TGT-3 ' ) . 5. Ácido nucleico caracterizado pelo facto de se poder utilizar como uma sonda, de acordo com a reivindicação 2 ou 3, que se obtém por síntese química. 6. Ácido nucleico caracterizado pelo facto de se poder utilizar como uma sonda consistindo num fraqmento de um ácido nucleico de acordo com a reivindicação 1 e que codifica para um polipéptido da proteína do envelope, escolhida no qrupo constituído por sequências que contêm ou que correspondem: (i) a sequência CKNRLIC; (ii) à sequência RLLALETFIQNQQLLNLWGCKNRLIC; (iii) à sequência RARL LALE TFIQNQQLLNLWGCKNRLICYT SVKWNKT; (iv) ao anel V3 da sequência CERPGNQKfMAGPMAWYSMALSNTKGDTRAAYC; (v) a sequência TFIQN; (vi) a sequência WGCKNR; (vil) aos aminoácidos 1 a 526 da SEQ ID NO: 6 tal como representada na Figura 3; e (viii) aos aminoácidos 527 à 877 da SEQ ID NO: 6 tal como representada na Figura 3. 7 Ácido nucleico que se pode utilizar como uma sonda, de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 6, caracterizado pelo facto de estar marcado, nomeadamente com marcadores radioactivos, enzimáticos ou fluorescentes. 8. Ácido nucleico, de acordo com a reivindicação 1, caracterizado pelo facto de se tratar de ARN.

9. Composição apropriada para a detecção da presença ou não de um retrovírus em amostras de soro ou de outros líquidos ou tecidos biológicos obtidos a partir de pacientes susceptíveis de serem portadores de um retrovírus VIJMwáfí sendo a referida composição caracterizada por compreender pelo menos uma sonda de acordo com uma qualquer das reivindicações 2 a 8.

10. Péptido ou polipéptido caracterizados por se escolherem no grupo constituído por: - um polipéptido que consiste na SEQ ID NO 6 tal como está representada na figura 3 e codificado por um ácido nucleico que consiste na sequência SEQ ID NO 5 tal como está representada na figura 6, - uma parte da proteína env da SEQ ID NO 6 tal como está representada na figura 3, codificada por um ácido nucleico que consiste num fragmento de pelo menos 100 pares de bases da sequência SEQ ID NO 5 tal como está representada na figura 6 e - um polipéptido (i) de sequência CKNRLIC; (ii) de sequência RLLALETFIQNQQLLNLWGCKNRLIC; (iii) de sequência RARLLALE TFIQNQQLLNLWGCKNRLICYT SVKWNKT; (iv) de sequência CERPGNQKI MAG PMAWY SMAL SNTKG DT-RAAYC; (v) de sequência TFIQN; (vi) de sequência WGCKNR; (vii) que consiste nos aminoácidos 1 a 526 da SEQ ID NO: 6 tal como representada na Figura 3; ou (viii) os aminoácidos 527 à 877 da SEQ ID NO: 6 tal como representada na Figura 3.

11. Proteína do envelope do retrovírus VIH-1Vau, caracterizada pelo facto de se obter pela expressão num hospedeiro celular de um ácido nucleico correspondente à SEQ ID NO 5 tal como está representada na figura 6 e em que a referida proteína compreende quer a sequência de aminoácidos compreendida entre os resíduos 1 a 526 da SEQ ID NO: 6 tal como representada na Figura 3, quer a sequência de aminoácidos compreendeida entre os resíduos 527 à 877 da SEQ ID NO: 6 tal como representada na Figura 3.

12. Polipéptido ou péptido cuja sequência está contida na das proteínas do envelope de WX&^lms* de acordo com a reivindicação 11, caracterizados pelo facto de compreenderem um epítopo susceptível de ser reconhecido por anticorpos induzidos pelo vírus VIH-Ivau-

13. Polipéptido ou péptido, de acordo com a reivindicação 12, caracterizados pelo facto de compreenderem uma sequência escolhida entre as sequências seguintes: (i) a sequência CKNRLIC; (ii) a sequência RLLALETFIQNQQLLNLWGCKNRLIC, ou (iii) a sequência RARLLALETFIQNQQLLNLWGCKNRUC- YTSVKWNKT.

14. Polipéptido derivado do polipéptido de acordo com a reivindicação 13 (ii) por substituição conservadora dos aminoácidos desde que o referido polipéptido conserve as mesmas características antigénicas, caracterizado pelo facto de se escolher no grupo constituído por: (i) a sequência RLLALETFIQNWWLLNLWGCKNRLIC; e (ii) a sequência RLLALETLLQNQQLLSLWGCKGKLVC.

15. Péptido ou polipéptido de acordo com uma qualquer das reivindicações 12 a 14, caracterizados pelo facto de se tratar de um péptido sintético. 4

16. Composição apropriada para a detecção in vitro da presença de uma amostra biológica humana de anticorpos anti-VIH-lvAo, compreendendo a referida composição pelo menos um antigénio que compreende um polipéptido ou um péptido da proteína do envelope de um retro-vírus νΐΉ-1'vAUí tal como definido em uma qualquer das reivindicações 10 a 15.

17. Composição de acordo com a reivindicação 16, caracte- rizada pelo facto de compreender ainda um antigénio tal como uma proteína, uma glicoproteina, um polipéptido ou um péptido de um vírus VIH-1 que não pertence ao grupo O e/ou de um vírus VIH-2 ou um péptido derivado de um vírus VIH-1 que não pertence ao grupo O e/ou de um vírus VIH-2 comportando um epitopo susceptível de ser reconhecido pelos anticorpos induzidos pelo virus VIH-1 que não pertence ao grupo O e/ou o vírus VIH-2.

18. Composição de acordo com a reivindicação 17, caracte- rizada pelo facto de as proteínas e/ou as glico- proteínas de VIH-1 que não pertencem ao grupo O e/ou de VIH-2 serem proteínas GAG, POL ou fragmentos das proteínas GAG ou POL.

19. Composição de acordo com a reivindicação 17, caracterizada pelo facto de as proteínas e/ou as gli-coproteínas de VIH-1 que não pertencem ao grupo O e/ou a VIH-2 serem glicoproteínas do envelope.

20. Composição de acordo com uma qualquer das reivindicações 16 a 19, apropriada para a detecção in vitro da presença, numa amostra biológica humana, de anticorpos anti-VIH-lvADf caracterizada pelo facto de a referida composição compreender uma sequência peptí-dica correspondente ao conjunto da região 590-620 da proteina gp41 de ou a uma parte desta região. Composição de acordo com a reivindicação 20, caracterizada pelo facto de a referida sequência peptídica ser a sequência TFIQN, CKNRLIC ou WGCKNR. Anticorpo susceptível de reconhecer uma proteína, um péptido ou um polipéptido de acordo com uma das reivindicações 10 a 15. Processo de diagnóstico in vitro de uma infecção causada pelo vírus sendo o referido processo caracterizado pelo facto de compreender: - o contacto de um soro ou de um outro meio biológico proveniente de um doente que é objecto do diagnóstico, com pelo menos uma proteína, um péptido ou um polipéptido de acordo com uma das reivindicações 10 a 15 ou uma composição de acordo com uma qualquer das reivindicações 16 a e - a detecção de uma reacção imunológica. Reagente necessário a reacção de "Western blot" ou de ELISA caracterizado pelo facto de comportar uma proteína, um péptido ou um polipéptido de acordo com uma das reivindicações 10 a 15 ou uma composição de acordo com uma qualquer das reivindicações 16 a 21. Sequência nucleotidica, de acordo com a reivindicação 1, caracterizada pelo facto de se destinar a ser utilizada na indução in vivo da síntese de anticorpos dirigidos contra o antigénio codificado pela referida sequência.

26. Composição de acordo com uma qualquer das reivindicações 16 a 21, caracterizada pelo facto de ser capaz de induzir anticorpos em animais.

27. Kit de detecção in vitro, numa amostra biológica, de um retrovírus caracterizado pelo facto de compreender como sonda eventualmente marcada, pelo menos uma sequência nucleotídica de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 7 ou uma composição de acordo com a reivindicação 9 e, eventualmente, uma outra sonda de acordo com a reivindicação 9, eventualmente imobilizada num suporte sólido.

28. Kit de acordo com a reivindicção 27, caracterizado pelo facto de compreender igualmente os reagentes necessários para realizar uma hibridação.

29. Processo de detecção da presença ou não do vírus VIH“1vau em amostras de soro ou de outros líquidos ou tecidos biológicos obtidos a partir de pacientes susceptíveis de serem portadores do virus caracterizado pelo facto de compreender: - o contacto de uma sonda de acordo com uma das reivindicações 2 a 7 quer com ácidos nucleicos obtidos a partir de células contidas nos fluidos biológicos, quer com os próprios fluidos, desde que os seus ácidos nucleicos se tornem acessíveis à hibridação com esta sonda e em condições que permitam a hibridaçao entre esta sonda e estes ácidos nucleicos e a detecção da hibridação eventualmente produzida. Processo de produção de um antigénio, polipéptido ou péptido caracterizado pelo facto de se realizar por expressão de um ácido nucleico de acordo com uma qualquer das reivindicações 1 a 7. Oligonucleótidos da sequência env de VIH-1vmj de sequência (i) 5'-ATT CCC ATA CAC TAT TGT GCT CCA-3' (ii) 5'-AAA GAA TTC TCC ATG ACA GTT AAA-3' (iii) 5'-GGT ATA GTG CAA CAG CAG GAT AAC-3' (iv) 5'-AGA GGC CCA TTC ATC TAA CTC-3'. Composição apropriada para a detecção da presença ou não de um retrovirus VIH-1Vao numa amostra biológica, sendo a referida composição caracterizada pelo facto de compreender pelo menos dois oligonucleótidos escolhidos entre: (i) ou oligonucleótidos (i) e (ii) da reivindicação 31, ou (ii) os oligonucleótidos (iii) e (iv) da reivindicação 31. Processo de detecção de um virus VIH-1 do grupo 0 em amostras biológicas, culturas celulares ou extractos de células que compreendem a amplificação das sequências contidas nas referidas amostras, culturas ou extractos, por técnicas de RCP (reacção em cadeia de polimerase) ou outras técnicas de amplificação géni-ca, com uma composição de acordo com a reivindicação 32. Lisboa, 27 de Novembro de 2007