JPH0215098A - Ｈｉｖ−１感染検出用合成ペプチド杭原、その組成物およびその使用方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 （産業上の利用分ｇｆ） 本発明はＨＩＶ−１タンパク領域に対応する配列の合成
ペプチド抗原と、抗ＨＩ’！−１抗体の検出用診断試薬
としてのその使用方法に関するものである。またこのペ
プチドは人間を含む動物においてＨＩＶ−１に対する抗
体産生を誘発する組成物の免疫原（ｉｍｍｕｎｏｇｅｎ
）としても使用でき、本発明は該ペプチドを含有するＨ
ＩＶ−１抗体産生誘発組成物及びＨＩＶ−１抗体産生誘
発方法に関するものでもある。

（発明の背景） ＨＩＶ−１（ヒト免疫不全ウィルス−１；ｈｕｍａｎｉ
ｍｍｕｎｏｄｅｆｉｃｉｅｎｃｙ　ｖｉｒｕｓ−１）は
、ヒトの後天性免疫不全症候群（Ａ　Ｉ　Ｄ　Ｓ）の病
原体として最初に分離された非常に密接な関連性を有す
る１群のウィルスに与えられた名前である。ＨＩＶ−１
は別名）ＩＴＬＶ−ＩＩＩ　（ヒト細胞親和性ウィルス
）、ＬＡＶ　（リンパ節症関連ウィルス）及びＡＲＶ（
ＡＩＤＳ関連ウィルス）としても知られており、助界的
な健康上の大問題となっているものである。ＨＩＶ−１
はＡＩＤＳ病原体として最初に分離されたものであり、
このウィルス自体の研究、ＡＩＤＳ発症機構の研究、及
びウィルス被曝又は感染を検出する診断検査の開発研究
が相当に進んでいる。

ＨＩＶ−１感染の検出方法は、血液、血清や血液製剤中
のＨＩＶ−１抗原に対する抗体を検出・定量してウィル
ス被曝を測るというのが一般的である。このような方法
によって、ＡＩＤＳやＡＲＣ（ｘイズ関連症候群；　Ａ
ＩＤＳ−Ｒｅｌａｔｅｄ　Ｃｏ＋１ｌｐｌｅｘ）の診断
、またＨＩＶ−１に被曝した血液や血液製剤のスクリー
ニングが容易となる。

ＨＩ　Ｖ　−１感染の診断や、ＨＩＶ−１被曝血液のス
クリーニングは、通常、検査試料中のＨＩＶ−１の免疫
学的成分に対する抗体の有無を検出するために酵素結合
免疫吸収測定法（ＥＬＩＳＡ。

Ｅｎｚｙｍｅ−ｌｉｎｋｅｄ　１ｍｍｕｎｏｓｏｒｂｅ
ｎｔ　Ａｓ５ａｙ　）を用いて行なわれている。他の方
法として、検査試料中のＨＩＶ−１特異抗体を検出する
ウェスタンブロッティング法（Ｓｃｈｏｒｒ　ｅｔ　ａ
ｌ、、　Ｎ、　Ｅｎｇｌ、　Ｊ、　Ｍｅｄ。

（１９８５）　３１３：　３８４−３８５　）を用いて
もよい。通常、ラジオイムノアッセイのような既知のイ
ムノアッセイは殆どどれでも適用でき、特異試薬を用い
さえすれば、ＨＩＶ−１及びその抗体を検出することが
できる。

これら第１批代のアッセイに使用する抗原供給源はＨ９
（Ｐｏｐｏｖｉｃ　ｅｔ　ａｌ、、　５ｃｉｅｎｃｅ　
（１９８４）２２４：　４９７−５００；　Ｇａ１ｌｏ
　ｅｔ　ａｌ、、　５ｃｉｅｎｃｅ　（１９８４）２２
４：５００−５０３　）のようなヒトヘルパーＴリンパ
芽球様細胞（Ｔ−１ｙｍｐｈｏｂｌａｓｔｏｉｄ　ｃｅ
ｌりの産生するＨＩＶ−１から得られる抗原性タンパク
が一般的であった。これら第１獣代のＨＩＶ−１用ＥＬ
ＩＳＡテストは非常に感度がよく特異性に優れているが
、生きたウィルスから得られた抗原を用いているので幾
つかの重大な欠点がある。

まず継代セルラインにおけるＨＩＶ−１産生自体が、不
運にもウィルスに曝されることになるかもしれない研究
者の危険を考慮して、ハイリスクな（Ｐ３レベル）実験
室内で行なわなければならない。またウィルス抗原全体
を使ったＥＬＩＳＡテストでは数値が誤って高くでて偽
陽性となったり、低くでて偽陰性となる。エレクトロプ
ロットしたウィルス抗原全体を用いるウェスタンプロッ
ト分析法では、特異性がより大きくなるが、ＥＬＩＳＡ
テストよりも実験室的な手法でありまた詩間がかかる。

さらにまたＨｌや他のＨＩＶ−１産生廁胞はヒト細胞ラ
インであるから、これらのセルラインから得られるウィ
ルス抗原調製物は、完全に精製しなければ、例えばＨＬ
Ａ抗原のような正常細胞の抗原を夾雑して含むことにな
り、ＥＬＩＳＡテストでは偽の陽性を反応を示すことに
なろう（Ｋｕｈｎｌ　ｅｔ　ａｌ、、Ｌａｎｃｅｔ　Ｉ
　　（１９８５）：　１２２２−１２２３；　Ｈｕｎｔ
ｅｒ　ｅｔ、　ａｌ、、　Ｌａｎｃｅｔ　ＩＩ　　（１
９８５）：３９７、）　。

一方セルラインからのウィルス抗原を完全に精製すれば
、免疫学的に重要なタンパクの免疫原性が破壊されたり
、あるいは抗原が不活化されたりし、これらから作られ
た試薬は偽陰性反応を生じることになる。またインタク
トなウィルス標品由来の抗原を用いた場合には、反応混
合物中の他の抗原や抗体の存在が反応をブロックするた
め、抗体がその特異抗原と反応できないという立体障害
が生じ、このため偽陰性反応を示すかもしれない。

ＨＩＶ−１感染検出用ＥＬＩＳＡテストの第２計代とし
て、ＨＩＶ−１ゲノム領域をバクテリア内でクローニン
グして産生させた免疫学的重要なウィルスタンパクを用
いることがなされている。

種々の供給源からのＡＩＤＳのウィルス病原体（例えば
、従来ＨＴＬＶ−［、ＬＡＶ及びＡＲＶと名付けられて
いたウィルス）が分離されており、その決定ヌクレオチ
ド配列がクローニングされている（Ｐｏｐｏｖｉｃ　ｅ
ｔ　ａｌ、、　５ｃｉｅｎｃｅ　（１９８４）　２２４
：４９７；　Ｇａ１ｌｏ　ｅｔ　ａｔ、、　５ｃｉｅｎ
ｃｅ　（１９８４）　２２４：　５００；５ｃｈｕｐｂ
ａｃｈ　ｅｔ　ａｌ、、　５ｃｉｅｎｃｅ　（１９８４
）　２２４：　５０３；Ｓｈａｗ　ｅｔ　ａｌ、、　５
ｃｉｅｎｃｅ　（１９８４）　２２Ｂ：１１６５；　Ｂ
ａｒｒｅ−５ｉｎｏｕｓｓｉ　ｅｔ　ａｌ、、　５ｃｉ
ｅｎｃｅ　（１９８３）　２２０：　８６８；Ｌｅｖｙ
　ａｔ　ａｔ、、　５ｃｉｅｎｃｅ　（１９８４）　２
２５：　８４０；　Ｒａｔｎｅｒａｔ　ａｔ、、　Ｎａ
ｔｕｒｅ　（１９８５）　３１３：　２７７；阿ｕｅｓ
ｉｎｇ　ａｔａｌ、、　Ｎａｔｕｒｅ　（１９８５）　
３１３：　４５０；　Ｗａｉｎ−Ｈｏｂｓａｒ＋　ｅｔ
ａｌ、、　Ｃｅ１ｌ　（１９８５）　４０：　９；　５
ａｎｃｈｅｚ−ＰｅＳｃａｄｏｒ　ｅｔａｔ、、　５ｃ
ｉｅｎｃｅ　（１９８５）　２２７：　４８４；　　Ｓ
ｈａｗ　ａｔ　ａｌ、。

Ａｄｖ、Ｉｎｔｅｒｎ、Ｍｅｄ、　（１９８４）　３０
：　１）　。

第１図に示すように、ＨＩＶ−１は比較的複雑なレトロ
ウィルスであり、少くとも７つの遺伝子を持っている。

ｇａｇ、ｐｏｌ及びｅｎｖと命名されているウィルス構
造遺伝子はそれぞれ、ウィルスコアタンパク、逆転写酵
素及びウィルスエンベロープ糖タンパクを順にコードし
ている。第１図に示される他の遺伝子はウィルス複製に
関係する修Ｉ！Ｉｌｌ遺伝子（ａｃｃｅｓａｒｙ　ｇｅ
ｎｅｓ）である、ｇａｇ及びｅｎｖｙ伝子は、ポリタン
パク即ちこれら各遺伝子から翻訳・合成された後幾つか
の小さなタンパクに開裂するポリタンパクをコードして
いる。従来の研究によると、ｇａｇ及びｅｎｖ遺伝子産
物に対する抗体がＡＩＤＳ患者やＡＲＣ患者の血清中に
見つけられており、ｇａｇと特にＨＩＶ−１ゲノムのｅ
ｎｖ領域とでコードされたタンパクが免疫学的に重要で
あるとみられている。

ｅｎｖ遺伝子は見かけの分子量的１６０，００（ｌダル
トンの糖タンパク（ｇｐｔｓｏ）をコードしている。こ
の糖タンパクｇｐｔｅｏは合成後に開裂して、２つの糖
タンパクｇｐ１２０とｇｐ４１になる。その分子量はそ
れぞれ順に１２０，０００　、４１，０００である。糖
タンパクｇｐ１２０はウィルスエンベロープの外殻タン
パクであり、ｇｐ４１は膜内外（ｔｒａｎｓｍｅｍｂｒ
ａｎｅ　）タンパクであるらしい。ｇｐ１２０とｇｐ４
１は両方とも免疫原としての性質を有し、ＡＩＤＳやＡ
ＲＣ患者血清からこれら両タンパクに対する抗体が容易
に検出できる０ｇｐ１２０及びｇｐ１６０に対する抗体
は無症状性保菌者ばかりでなくＡＩＤＳやＡＲＣ思者の
血清中においてウィルスの結合を中和、即ち阻害するか
ら、ｇｐ１２０、ｇｐ１６０またはその対応領域がサブ
ユニットワクチンの候補となる。トランスメンブレンン
糖タンパクｇｐ４１はＡＩＤＳ及びＡＲＣ思者血清中の
抗体によって最も矛盾することなく認識されるＨＩＶ−
１抗原である（Ａｌｌａｎｅｔ　ａｔ、、　５ｃｉｅｎ
ｃｅ　（１９８５）　２２８：　１０９１−１０９４；
　Ｂａｒｉｎｅｔ　ａｌ、、　５ｃｉｅｎｃｅ　（１９
８５）　２２８：　１０９４−１０９６）　、なお患者
血清中の抗体はｇａｇ遺伝子でコードされたウィルスコ
アタンパクのエピト−プをも認識している。

ＨＩＶ−１抗原は診断や有効なワクチン組成物として使
用するのに免疫学的に重要であり、細菌、酵母またはワ
クチニアウィルスのような種々の発現系でＨＩＶ−１ゲ
ノム部分をクローニングすることにより調製することが
できる（参照例、Ｃａｂｒａｄｉｌｌａ　ｅｔ　ａｌ、
、　Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　（１９１１６）　４
＋＋２８−１３３；　　Ｃｈａｎｇ　　ｅｔ　　ａｌ、
、Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ　　（１９８５）４：　
　９０５−９０９；　　Ｐｕｔｎｅｙ　　ｅｔ　　ａｌ
、、５ｃｉｅｎｃｅ　　（１９８６）２３４：　　１３
９２−＋３９５；　　Ｋｉｅｎｙ　　ｅｔ　　ａｌ、、
Ｂｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ（１９８６）　４：　７９
０−７９５　）　、　　Ｌかしながら、組換ＤＮＡ技術
により生産されるＨＩＶ−１抗原は、ＨＩＶ−１抗原調
製物に夾雑する発現系の抗原と反応するいずれかの抗体
によりＥＬＩ　ＳＡテストで誤って偽陽性反応を示すこ
とがないように、なお完全な精製をしなければならない
。また精製過程でＨＩＶ−１抗原が変性すれば重要な抗
原活性は消失する可能性がある。

例えば上記のｃｈａｎｇらや上記Ｃａｂｒａｄｉ　Ｉ　
Ｉａらは組換ＤＮＡ技術によりｇｐ４１部分を製造し、
ＥＬＩ　ＳＡでＡＩＤＳ／ＡＲＣ思者血清中の抗体の存
在を検出するのに用いている。どちらの研究結果でも偽
陰性反応を報告しており、Ｃｈａｎｇらでは１３２検体
中２検体、Ｃａｂｒａｄｉｌｌａらでは１２７検体中２
検体が偽陰性反応であった。両研究はヒトセルライン由
来抗原に基づ＜ＥＬＩ　ＳＡテストでの偽陰性反応や偽
陽性反応の割合を人さく進歩させるものであるが、ＡＩ
ＤＳという病気の特殊性を考慮すると、できるだけ１０
０％正確な診断がさらに望まれており、またこの達成を
可能にするため他の試薬の開発が進められている。

タンパク抗原には、特異抗体の結合サイトを構成するタ
ンパク領域であるエピトープすなわち抗原決定基が多数
存在する。一般に、タンパク抗原は５〜ｌＯ個のエピト
ープを有し、エピトープそれぞれは６個から８個のアミ
ノ酸の配列を有している。エピトープは、６〜８個のア
ミノ酸が線形配列で存在している連続的なものも、或い
はこれらのアミノ酸がタンパク質の３次元折畳み構造形
成によってエピトープを形成するような不連続なもので
もどちらでもあり得る。たとえ一つのエピトープが比較
的僅かのアミノ酸から構成されているとしても、抗体へ
の反応性はそのエピトープを囲むタンパクのアミノ酸に
よって影響を受けている。

タンパクの抗原部位すなわちエピトープの地図作製（マ
ンピング）を目的とする研究は、目的り〉′バクの多種
多様な領域に対応する合成ペプチドを用いることにより
助けられている（参照の例：Ｌｅｒｎｅｒ　ｅｔ　ａｌ
、、　ｒＴｈｅ　Ｂｉｏｌｏｇ７　ｏｆ　Ｉｍｍｕｎｏ
ｌｏｇｉｃａｌＤｉｓｅａｓｅ：　Ａ　Ｈｏ５ｐｉｔａ
ｌ　Ｐｒａｃｔｉｃｅ　ＢｏｏｋＪ（１９８３）Ｄｉｘ
ｏｎ、　Ｆｉｓｈｅｒ共著、、ｐｐ、　３３１−３３８
；　Ｌｅｒｎｅｒ。

Ａｄｖ、　Ｉｍｍｕｎｏｌ、　（１９８４）３６：　１
）、合成ペプチドはエピトープ地図作成の研究に有用な
ものであるが、これにもまして重要なことは、その合成
ペプチドがタンパク中の主たる抗原決定基を含むもので
あるなら、その合成ペプチドはワクチンや診断試薬とし
て有効であるということである。合成ペプチド抗原は特
異抗体の産生及びその反応性に関して幾つかの利点があ
る。合成ペプチドの配列は、タンパクのアミノ酸配列を
実際に決定して得られたアミノ酸配列か、またはタンパ
クをコードしているＤＮＡ配列から推定したアミノ酸配
列から選択することが出来る。このようにして特異的な
合成ペプチドを用いれば、特異抗体の生産や特異抗体の
アッセイにおいて全長タンパクを使う必要がな（なる。

さらにまたＭｅｒｒｉｆｉｅｌｄらの固相ペプチド合成
法を用いれば、木質的に無限量の目的合成ペプチドを化
学合成することができるようになる（参照例；　Ｅｒ１
ｃｋｓｏｎ　ａｎｄ　Ｍｅｒｒｉｒｉｅｌｄ　ｒＴｈａ
　Ｐｒ。

ｔｅｉｎｓＪ第３版（１９７６）第２巻、第３章、Ａｃ
ａｄｅｍｉｃＰｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ　Ｙｏｒｋ　）　、
自動ペプチド合成装Δを利用すればこのような技術はさ
らに進歩することになる。

幾つかの文献では、ＨＩＶ−１抗原タンパクに対するも
のから選んで合成したペプチドが免疫反応性を示すとい
うデータが提供されている。ある研究では、ＨＩＶ−１
のアミノ酸残基７３５−７５２に対応するアミノ酸配列
Ｔｙｒ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ｐ　ｒｏ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１
ｙ−Ｔ　１ｅ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１ｕ−Ｇ　１
７−Ｇ　１ｙ−Ｇｌｕ−Ａ　ｒｇ−Ａｓｐ−Ａｒｇ−Ａ
ｓｐ−Ａｒｇ−５ｅｔ−Ｇ１１−Ｃｙｇのペプチドが合
成されている（　Ｋｅｎｎｄｙ　ｅＬ　ａｌ、、　５ｃ
ｉｅｎｃｅ　（１９８６）２３１：　１５５６−１５５
９）　、このペプチドはｇｐ４１の一部分に対応するも
ので、ＨＩＶ−１に反応する中和抗体を誘発する試みの
ため家兎の免疫に使われた。さらにまた抗ｇｐ４１抗体
を含むことが確認されている幾つかのＡ　Ｉ　Ｄ　Ｓ　
、ｔｇ者血清はこのペプチドと弱く反応した。このよう
に、このペプチドは天然ｇｐ１６０／ｇｐ４１に対する
抗体によっである程度認識される少くとも１つのエピト
ープを含んでいることが示された。

最近の研究はＡＩＤＳ診断用の合成ペプチドの提供さら
にワクチン組成物の開発を指向して行なわれいる。Ｗ　
ａ　Ｉｔ　ｇらはアミノ酸配列Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ
−Ａ　１ａ−Ｖａ　Ｉ　−Ｇ　１ｕ−Ａ　ｒｇ−Ｔｙ　
ｒ−Ｌｅｕ　−Ｌ　ｙｓ−Ａｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ｇ　Ｉｎ
Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃ
：ｙｓ−Ｓｅｒの５Ｍ２８４と呼ばれる２１アミノ酸ベ
ブヂドを合成している（Ｗａｎｇ　ｅｔ　ａｌ、、　Ｐ
ｒｏｃ、　Ｈａｔ、、　Ａｃａｄ、　Ｓｃｉ、　（１９
８６）８３：　６１５９−６１６３　）。このペプチド
はｇｐ１６０のアミノ酸５８６−６０６に対応しｇｐ４
１の抗原性セグメントを構成するものであり、ＥＬＩＳ
Ａ及びウェスタンプロット法でＡＩＤＳ診断用、Ｃ患者
のＨＩＶ−１陽性血清と反応した。この５Ｍ２８４ペプ
チドはＥＬＩＳＡでのＨＩＶ−１抗体検出の点でＨＩＶ
−１山来タンパクと匹敵する有望なものであった。例え
ば、５Ｍ２８４を用いたＥＬＩＳＡは血清試料中の抗体
を、ＡＩＤＳ／ＡＲＣ患者のものについては９６．５％
、鰺康な無症状性保菌者で発症の危険が大きい者のもの
については３４．６％で検出できた。コントロール（対
照群）からの３８７血清では偽陽性を示さなかった。

５Ｍ２８４ペプチド及びその類縁ペプチドの血清学的及
び化学的分析は、このペプチドの抗体−抗原相互作用に
おいて成るアミノ酸が他のアミノ酸よりもより重要であ
るらしいことを示している。このペプチドから１位のＡ
ｒｇ、２位のＩｌｅ及び１０位のＬｙｓを除去すると、
血清学的反応性は顕著に減少または消失する。他方、こ
のペプチドのカルボキシ末端のＴｒｙ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
−Ｓｅｒ残基を除去しても、血清学的反応性の減少は穏
やかであった。このことは免疫反応ではペプチドのアミ
ノ末端部分の方がカルボキシ末端部分よりも明らかに重
要であるということを示している。

１９８６年１２月１６日付でＣ０５ａｎｄに特許された
米国特許４．６２９．７８３号はＡＩＤＳ及びＡＩＤＳ
関連病の検出用として、ＨＩＶ−１タンパクの幾つかの
領域に対応する免疫学的反応性を有する合成ペプチドを
幾つか提供している。この中で特に注目されるのは、Ｈ
ＩＶ−１ゲノムＩｉ！基対（ｂｐ）７５１６−７５９３
でコードされるｇｐ４１の一領域に対応するもので、Ａ
ｒｇｌ　１ｅ、−Ｌｅｕ−Ａ　１ａ−Ｖａ　Ｉ−ＧＩｕ
−Ａｒｇ−Ｔｙｒ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−ＧＩｎ−
Ｇ　Ｉｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｉ　１ｅ−Ｔ
　ｒｐ−Ｇ　Ｉ　ｙ−Ｃｙｓ−３ｅ　ｒ−Ｇ　ＩＹ−Ｌ
ｙｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｘ　　（式中、ＸはＯ
ＨまたはＮＨ２である）の配列を有するペプチドＶ（３
９）である、このペプチドＶ（３８）はＨＩＶ−１感染
確認済の患者の血清試料２４例中２３例（すなわち９５
．８％）と反応した。

（発明の目的） 本発明は、このような状況下なされたものであり、ＨＴ
Ｖ−１感染検出診断において非常に優れた特異・選択性
でかつ高感度で使用できる、抗原性ＨＩＶ−１タンパク
に対応する幾つかの新規合成ペプチドを提供することを
第一の目的とする。

また本発明はこの新規合成ペプチドを直接使用したＨＩ
Ｖ−１抗体検出方法を提供することを第２の目的とする
。

さらに本発明は、この新規合成ペプチドを含有するＨＩ
Ｖ−１抗体産生誘発組成物を提供することを第３の目的
とする。

さらにまた本発明はこの新規合成ペプチドを直接使用し
てＨＩＶ−１抗体産生誘発を可能にするＨＩＶ−１抗体
産生誘発方法を提供することを第４の目的とする。

（発明の構成） 本発明のこのような第１の目的は、式 ％式％ Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇ
ｌｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−３ｅｔ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅ
ｕ−Ｙ−Ｚ または Ｘ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｃ：ｙｓ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌ
ｎ−Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕｌ　１ｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ
−Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇ　１ｕ−Ａ　Ｉａ−Ｌｅｕ−Ａｓ
ｐ−Ｌｙｓ−Ｉｌｅ−Ｙ−Ｚ。

（式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ２基のＨ原子、
あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ酸
であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進する
ために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；Ｚ
はＯＨまたはＮＨ２である）で表わされる何れかのペプ
チドより達成される。

また本発明の第２の目的は、これらのペプチド群より選
ばれる少くとも１以上の抗原性ペプチドに、試料中に存
在する抗ＨＩＶ−ｉ抗体と前記ペプチドの間で免疫学的
結合物が形成される条件下で、試料を接触させ、前記免
疫学的結合物の形成を測定して試料中のＨＩＶ−１抗体
の存在を確認するＨＩＶ−１抗体検出方法により達成さ
れる。

本発明の第３の「１的は、これらのペプチド群より選ば
れる少くとも１以上の抗原性ペプチドであって免疫学的
有効９の抗原性ペプチドと、生理学的許容量のキャリア
とからなり、ヒトを含む動物でのＨＩＶ−１抗体産生を
誘発するＨＩＶ−１抗体産生誘発組成物により達成され
る。

本発明の第３の目的は、これらのペプチド群より選ばれ
る少くとも１以上の抗原性ペプチドであって免疫学的有
効量の抗原性ペプチドと、生理学的許容量のキャリアと
を投与して、ヒトを含む動物体内でＨＩＶ−１抗体産生
を誘発するＨＩＶ−１抗体産生誘発方法により達成され
る。

すなわち本発明は、ＨＩＶ−１ｅｎｖ遺伝子でコードさ
れた糖タンパクｇｐ４１領域に対応する新規合成ペプチ
ド抗原と、ＨＩＶ−１ｇａｇ遺伝子でコードされたタン
パク産物とをここに見いだしたことによりなされたもの
で、これらのペプチドはＨＩＶ−１感染により潜伏患者
のＡＩＤＳの診断や、血液や血液製剤中の）（ＩＶ−１
被曝ののスクリーニグについて高信頼性、高特異性でか
っ誤った結果が極めて少なくなる方法に用いるものとし
て有用である。

本ペプチドは試料中の抗ＨＩＶ−１抗体を検出する方法
にも使用することが出来る。まず試料を本ペプチド抗原
と接触させ、本ペプチドと試料中のＨＩＶ−１特異抗体
との間で抗原抗体複合物を形成させる。次いで適当な検
出装置を用いてこの複合物形成を測定すれば、試料中の
Ｉ（ＩＶ−１抗体の有無がわかる。

木新規ペプチドはまた、ＨＩＶ−１感染を防ぐための免
疫ワクチン組成物の免疫原としても用いることができ、
ＨＩＶ−１抗原に対するＨＩＶ−１特異抗体の動物内で
の産生にも用いることができる。

（実施態様の説明） 本発明は完全ＨＩＶ−１ｇａｇ遺伝子産物のタンパク領
域に対応するものであって、ＨＩＶ−１のｇｐ４１と対
応する１５〜２７個のアミノ酸からなる多数のペプチド
を提供するものであり、米国、英国、イスラエル、アフ
リカ及びスエーデンで得られたＨＩＶ−１陽性血清試料
との免疫反応性を調べるために合成されテストされたも
のである。これらの新規ペプチドはＨＩＶ−１感染やウ
ィルス被曝の有無の診断に有用であり、また動物やヒト
でのＨＩＶ−１抗体産生を誘発する組成の免疫原として
も有用である。ＧＰ１２０等の他の免疫学的に重要なＨ
ＩＶ−１抗原性タンパクに比べ菌株による変異が非常に
少ないという理由から、ｇａｇタンパク、特にｇｐ４１
に対応するペプチドを選んで合成した０本発明に含まれ
るペプチドは、ＨＩＶ−１特異抗体と反応する連続（線
形）エピトープを構成する配列を含むアミノ酸配列を有
するオリゴペプチドからなる。

このように本発明は、免疫反応性を有する−群のペプチ
ド、及びその機能的に同等な一群の変異体（ｖａｌｉａ
ｎｔｓ）であってＨＩＶ−１のｅｎｖｉｆｉ伝子（第１
図）によりコードされたｇｐ４１に対応するペプチドの
抗原性に悪影響を与えることないもの含むものである。

各ペプチドに対応するｇｐ４１の各領域は第２図に詳細
に示されている。このペプチドは公知の固相ペプチド合
成法により合成された（参照例；　　Ｍｅｒｒｉｆｉｅ
ｌｄ　ａｎｄ　Ｂａ１ａｎｙ。

ｒＴｈｅ　ＰｅｐｔｉｄｅＳ：　Ａｓｎａｌｙｓｉｓ、
　５２ｎｔｈｅｓｉｓ、　ＢｉｏｌｏｇｙＪ（１９８０
）、第１巻、第１章、　Ｇｒｏｓｓ、Ｍｅｉｎｅｎｈｏ
ｆｅｒ共著、Ａｃａｄｅｍｉｃ　Ｐｒｅｓｓ、　Ｎｅｗ
　Ｙｏｒｋ）　、元のタンパクの配列にはない１〜２個
のアミノ酸を本ペプチドのＮＨ２末端あるいはＣ０ＯＨ
末端に付加して合成を行なってもよい、このようなアミ
ノ酸の付加により、タンパクのペプチド、大きなキャリ
アタンパクや支持体と、本ペプチドとを結合することが
できる。こうした目的のために有用なアミノ酸には、チ
ロシン、リジン、グルタミン酸、アスパラギン酸、シス
ティン及びこれらの誘導体がある。さらにタンパク修飾
法により、例えばＮＨ２末端のアセチル化や、Ｃ０ＯＨ
末端のアミＦ化などにより、本ペプチドが他のタンパク
やペプチド分子あるいは支持体と結合する一Ｌ段を付加
することもｉ１能である。

ｇｐ４１に対応する各新規ペプチド配列は下記の通りで
ある。

Ｈ２−４１Ａ５ Ｘ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−５ｅｔ−Ｇｌｙ−
Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−［１ｅ（：ｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａ
ｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｙ−Ｚ。

式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ２基のＨ原子、あ
るいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ酸で
あって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進するた
めに選択された付加アミノ酸、Ｙは無１．かＣｙｓ；Ｚ
はＯＨまたはＮＨ２である。

ペプチドｇｐ４１Ａ５は、ｅｎｖ遺伝子に対応するＨＩ
Ｖ−１ゲノムの約ｂｐ７５６３〜７６３２でコードされ
るアミノ酸５９６〜６１８に対応するものであり（番号
は前記Ｗ　ａ　ｎ　ｇらによる）、本発明の特に好まし
い態様のものである。

ペプチドｇｐ４１Ａ５は前記ＸがＨ，ＹがＣｙｓ、Ｚが
ＯＨであるものが特に好ましい。

ｇ　ｐ　４１　ＣＴ４ ペプチドｇｐ４１ｃＴ４は、ＨＩＶ−１ゲノムの約ｂｐ
８１７３〜８２３８コードされるｇｐ４１タンパク領域
に対応するものであり、下記の式％式％ Ｘ、Ｙ、及びＺは上記と同じ定義である。

ｇｐ４１ｃＴ３ ペプチドｇｐ４１ｃＴ３は、ＨＩＶ−１ｅｎｖ遺伝子の
約ｂｐ８２２０〜８２８０でコードされるｇｐ４１タン
パク領域に対応するものであり、下記の式で表わされる
。

Ｘ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ
−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−
Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔ
ｈｒＡｓｐ−Ｙ−２゜ Ｘ、Ｙ、及びＺは」１記と同じ定義である。

ｐ４１Ｂ１ ペプチドｇｐ４１Ｂ１は、ＨＩＶ−１ｅｎｖ遺伝子の約
ｂｐ７６１４〜７６８６でコードされるｇｐ４１タンパ
ク領域に対応するものであり、下記の式で表わされる。

Ｘ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ
−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−
Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｉ　１ｅ−Ｔｒｐ−
Ａｓｎ＾５ｎ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ｙ−
ＺＸ、Ｙ、及び２はＥ記と同じ定義である。

ｐ４１Ｂ３ ペプチドｇｐ４１Ｂ３は、ＨＩＶ−１ゲ／ムの約ｂｐ７
７０５〜７７７３でコートされるｇＰ４１タンパク領域
に対応するものであり、下記の式％式％ ５ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇ
ｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−ＧｌｎＧｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ
−Ｇｌｕ−Ｙ−Ｚ。

Ｘ、Ｙ、及びＺは上記と同じ定義である。

本発明はさらに、ＨＩＶ−１のＧＡＧ遺伝子（第１図）
でコードされるタンパク産物の幾つかの領域に対応する
免疫反応性を有する幾つかのペプチド及びその機能的に
同等な変異体を含むものである。これらの新規ペプチド
を下記に示す。

ＡＧ　　２ ペプチドＧＡＧ２は、ＨＩＶ−１のｇａｇ遺伝子の約ｂ
ｐ７７９〜８４Ｃ１ｒ＝＋−ドされるｇａｇ遺伝子産物
領域に対応するものあり、下記の式で表わされる。

Ｘ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ
−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−
Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｕＶａｌ−Ｙ−Ｚ。

Ｘ、Ｙ、及び２は上記と同じ定義である。

ペプチドＧＡＧ３は、ＨＩＶ−１（７）ｇａｇ遺伝子の
約ｂｐ８１Ｏ〜８７０でコードされるｇａｇ遺伝子産物
領域に対応するものあり、下記の式で表わされる。

Ｘ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ
−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−
Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇ
ｌｕ−Ｇｌｙ−Ｙ−Ｚ。

Ｘ、Ｙ、及びＺはＬ記と同じ定義である。

ＡＧ１４ ペプチドＧＡＧ　１４は、ＨＩＶ−Ｌｇａｇ遺伝子の約
ｂｐ１３６８〜１４３０でコードされるｇａｇ遺伝子産
物領域に対応するものあり、下記の式で表わされる。

Ｘ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｃ７ｓ
−Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−ＶａｌＧｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇ
ｌｙ−）＋ｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｌ
ｅｕＡｌａ−Ｇｌｕ−Ｙ−Ｚ。

Ｘ、Ｙ、及びＺは上記と同じ定義である。

ペプチドＰ１７−Ｄは、ＨＩＶ−１ｇａｇ遺伝子の約ｂ
　ｐ　４９５〜５６０　テｍｌ−ドされるｇａｇ遺伝子
産物領域に対応するものあり、下記の式で表わされる。

Ｘ−Ｓｅｒ−ＧＸ−５ｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−
Ａｒ　１ｅ−Ｌｅｕ−ＧＩｙ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ
−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌａｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−
Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｙ−Ｚ。

Ｘ、Ｙ、及びＺは上記と同じ定義である。

１７−Ｆ ペプチドＰ１７−Ｆは、ＨＩＶ−１ｇａｇ遺伝子の約ｂ
　ｐ　５８８〜６４７−ｃ’コードされるｇａｇ遺伝子
産物領域に対応するものあり、下記の式で表わされる。

Ｘ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｇｙｓ−ＶａｌＨｉｓ−Ｇｌｎ−
Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−Ｔ
ｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇ　Ｉｕ−Ａ　１ａ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−
Ｌｙｓｌｌｅ−Ｙ−２ Ｘ、Ｙ、及びＺは上記と同じ定義である。

これらのペプチドはＨＩＶ−１抗原あるいはＨＩＶ−１
会合・結合抗原に対する抗体検出方法に用いることが出
来る。試料中のＨＩＶ−１特異抗体の存在を検出するた
めに本ペプチドを用いるこの方法では、本ペプチド抗原
と試料中のＨＩＶ−１抗体との間で免疫学的複合体（抗
原抗体結合物）を形成し得る条件下で、本ペプチドを試
料と接触させるのが望ましい、抗原抗体結合物がたとえ
僅かでも形成されるのであれば、試料中にＨＩＶ−１抗
体が存在することがわかり、適当な手段によって検出・
測定できる。

このような方法として、ラジオイムノアッセイ（ＲＩＡ
）、ＥＬＩＳＡやウェスタンプロット分析法等のような
ホモジニアス（均一）あるいはへテロジニアス（不均一
）パインディングイムノアッセイがある。さらにこの新
規ペプチドを用いるアッセイプロトコルは競争的又は非
競争的結合方法によっても出来る。

本ペプチドはアッセイ方法に応じて標識物でラベルして
もよい。ペプチドに結合するラベルは公知のものを用い
ることができ、例えば、酵素、放射性アイソトープ、蛍
光色素、発色色素基質、コファクタ、ビオチン／アビジ
ン、金コロイド、磁性粒子などがある。また本新規ペプ
チドを化学修飾すれば、公知手段によって、キャリアタ
ンパクやキャリアペプチドあるいは公知の支持体に結合
することができる。このような支持体としては例えば、
ポリスチレンやポリビニル製のマイクロタイタープレー
ト、ガラス管やガラスピーズ、また紙、セルロース、セ
ルロース誘導体やシリカのようなりロマトグラフィ用支
持体も用いることができる。

これらアッセイ法の内、特に患者血清や血液或いは血液
製剤などを大規模に臨床スクリーニングするには、ＥＬ
ＩＳＡまたはウェスタンプロット法が好適である。上述
のペプチドを用いたＥＬＩＳＡテストは、ヒト細胞由来
の、或いは組換ＤＮＡ由来のＨＩＶ−１タンパク又はそ
の抗原部位を用いて行なう最近の方法である。これらの
アッセイで試薬として使うためには、各ペプチドをマイ
クロタイターのウェル内壁に結合しておくのが便利であ
る。このペプチドはマイクロタイターのウェルに直接結
合することができるが、ウェルにペプチドを最大に結合
させるにはペプチド添加前にウェルをポリリジンで前処
理しておくのがよいことがわかっている。さらにこれら
新規ペプチドをＢＳＡ　Ｃ牛血清アルブミン）などのキ
ャリアタンパクに既知方法で共有結合させ、得られた結
合物をウェルのコートに用いてもよい、良いΔｌｆｔｌ
ｆｔ全結果のに５００μｇ　／　ｍ　１以上必要とする
ペプチドもあるが、通常、これらのペプチドは１０　Ｎ
１００　ｇｍｇ／ｍ　１ｃ７）６度でコーティングする
。

次に試料をこれらのペプチドをコートしたウェルに滴丁
する。試料内にＨＩＶ−１抗体が有れば、このウェル内
で抗原抗体結合物が形成されることになる。この際、信
号発生手段（ラベル）を加えて、結合物形成を検出しや
すくしておいてもよい。試料がＨ！Ｖ−１特異抗体を含
んでいれば、ラベルの信号が出て検出できる。

本発明は以下の実施例によりより詳細に説明されるが、
このような実施例によって本発明の範囲は何等限定され
るものではない。

（実施例１） ペプチドはすべてアプライド・バイオシステムズ社製ペ
プチドシンセサイザ、モデル４３０Ａにより合成した。

また各合成にはＰ−メチルベンジルヒドロアミノ固相支
持レジン（米国ケンタラキー州ルイズビル、ペブタイズ
・インターナショナル社製）を用いた。各ペプチドはｒ
Ｔｈｅ　Ｕ、ｓｅｒｓＭａｎｕａｌ　ｆｏｒ　Ｐｅｐｔ
ｉｄｅ　５ｙｎｔｈｅｓｉｚｅｒ　Ｍｏｄｅｌ　４３０
Ａ　Ｊ（アプライド拳バイオシステムズ社１９８６）に
従って合成した。　各合成に使用したアミノ酸は全て、
α−アミノ基を保護マスクするｔ−ブチル−カルボ で、スイス、ノババイオケムＡＧ社より得た。アミノ酸
の反応性側鎖は別の保護基でマスクして不必要で望まし
くない側鎖反応が起きるのを防止した．各ペプチド合成
に用いた保護基を有する各アミノ酸を次の第１表に示す
。

第 ペプチド合成に使用したアミノ酸 Ｈｏｅ−Ａ　ｌａ−ＯＨ Ｂｏｃ−Ａｒｇ（Ｔｏｓ）−０Ｈ Ｂｏｃ−Ａｓｎ−ＯＨ Ｂｏｃ−Ｇｌｕ（ＯＢｚｌ）−０Ｈ Ｂｏｃ−ＧＩｒ＋−ＤＨ Ｂｏｃ−Ｇ　ｌ　ｙ−ＯＨ Ｂｏｃ−Ｈｉｓ（Ｔｏｓ）−０Ｈ Ｂｏｃ−Ｉｌｅ−ＯＨ・ｉ／２Ｈ２０ Ｂｏｃ−Ｌｅｕ−ＯＨ・Ｈ２Ｏ Ｂｏｃ−Ｌｙｓ（２−ＣＩ−Ｚ）−０ＨＢｏｃ−Ｍｅｔ
−ＯＨ Ｂｏｃ−Ｐｈｅ−０）Ｉ Ｂｏａ−Ｐｒｏ−ＯＨ （結晶） Ｂｏｃ−Ｖａ　ｌ−ＯＨ −ＢｒＺ ＝カルポベンゾキシブロミ）・ 合成完了後、スカベンジャとして１０％アニソールと１
０％ジメチルイオウとを混合した無水フッ化水素酸（Ｈ
Ｆ）でＯ″Ｃ下処理することにより、合成ペプチドから
保護基を除去し、固相支持体レジンからこのペプチドを
脱離させた。システィン含有ペプチドの合成では、２％
千オクレゾールをさらに添加した。脱離後、試料中のＨ
ＦをＮ２気流下で除去し、ざらに０℃真空下に置いて残
存ＨＦを完全に除去した。このレジンをトリフロロ酢酸
（ＴＦＡ）処理してペプチドを抽出した。ここで用いた
ＴＦＡは室温下蒸発させて取り除いた。この後ペプチド
を無水エーテルで沈澱させ、さらに無水エーテルで洗浄
した。

目的とするアッセイに用いる前に、必要なら、逆相高速
液体クロマトグラフィ（ＨＰ　Ｌ　Ｃ）により、このペ
プチドはさらに精製純化することができる。このような
精製に特に好適なカラムには逆相Ｖｙｄｅｋ　　Ｃ−１
８（商品名）カラムがあり、溶出液には水（ＴＦＡ）−
アセトニトリル（ＴＦＡ）グラデイエンドを用いる。

（実施例２） Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｉ
ｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙ
ｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−↑ｈｒ−Ｔｈｒ−Ａ　１
ａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−ＯＨの
アミノ酸配列を有するペプチドｇｐ４１Ａ５を実施例１
により合成し、ＥＬＩＳＡテストに使用してその免疫反
応性を１１１１１定した。

１　ｍ　ｇ　／　ｍ　ｌ　９度のポリリジンをマイクロ
タイタープレートに滴下して、３０分間インキュベート
した。ポリリジンを捨て、１０〜１１００ＪＬ／ｍｌｅ
度のペプチドｇｐ４１Ａ５をプレートの各ウェルに加え
て、コーティングした。ペプチドがウェルに結合するの
に十分な時間でウェル内でペプチドをインキュベートし
た後、ペプチド溶液を除去し、グルグルアルデヒド溶液
を１５分間添加してウェルに対するペプチドの付着を安
定化させた。グルグルアルデヒド溶液を取り除き、各ウ
ェルを緩衝液で洗浄した。その後、グリシンと牛血清ア
ルブミン（Ｂ　Ｓ　Ａ）との混合溶液を各ウェルに加え
、ウェルの非結合部位をブロックすることによりＥＬＩ
ＳＡアッセイ中に生じる抗体の非特異的結合が最少限と
なるようにした。最後の洗浄を行なった後、このマイク
ロタイタープレートを使用に供した。調製されたペプチ
ドコートしたマイクロタイタープレートは、ウェル上の
ペプチドＧＰ４Ａ５の抗原性を少しも損なうことなく数
月間保存することができる。

上記のように作製されたマイクロタイタープレートを用
いて公知ＥＬＩＳＡの簡便法を行なった。被検者より採
取した血清試料を、０．０５％ポリオキシエチレン−ソ
ルビタンモノラウリル酸（Ｔｗｅｅｎ２０）と１％ＢＳ
Ａとを含むＰＢＳ（リン酸緩衝生理食塩水）でｌ：５０
に希釈し、各ウェルに滴下して、３７℃、加湿雰囲気中
で９０分間インキュベートした。その後プレートより希
釈血清試料を取り除き、各ウェルを０．０５％Ｔｗｅｅ
ｎ　　２０含有ＰＢＳで３回洗浄した。

共役（ｃｏｎｊｕｇａｔｅｄ）抗ヒトＩｇ抗体を各ウェ
ルに加え、９０分間インキュベートした。この共役抗ヒ
トＩｇ抗体はヤギまたは家兎で産生されたちので、ヒト
ＩｇＧ、ＩｇＭ、イムノグロブリン短鎖あるいはこれら
の混合物に対する特異性を有するものである。望ましく
は、アルカリフォスファターゼと共役結合した抗ヒトＩ
　ｇ　Ｇ　（Ｄａｋｏｐａｔｔｓより入毛）を、使用時
に０．０５％Ｔｗｅ　ｅ　ｎ２０．１％ＢＳＡ含有ＰＢ
Ｓで１　：　５００に希釈したものをＥＬＩＳＡに用い
るのがよい。この共役抗体をヒト抗体と結合反応するに
十分な時間インキュベートした後、プレートを上記と同
様３回洗浄した。抗原として用いられたペプチドｇｐ４
１Ａ５と反応する（すなわち陽性反応する）にト血清中
の抗ＨＩＶ−１抗体を検出するため、炭酸ナトリウム／
ＭｇＣｌ２緩衝液で溶解しｌｐｇ／ｍｌ濃度に調整した
発色色素基質であるアルカリフォスファターゼ基質（シ
グマ社、カタログ番号ｉ０４．錠剤）を添加した。この
アルカリフォスファターゼ基質は、抗ヒｌ−ＩｇＧに結
合している酵素によって開裂して、呈色物質を生じる。

室温下約４０分間インキュベート後、陽性反応を示し、
試料中に抗原と反応する抗体が存在することを示した。

各ウェルが陽性反応を示す黄色から橙色、赤茶色は、分
光光度計で４０５ｎｍで読取り、その反応量を測定した
。分光光度計の読みはバックグラウンド反応の値を差引
いて修正した。

第３図は抗原としてｇｐ４１Ａ５を使用して４つの別の
ＥＬＩ　ＳＡ測測定より得られた抗体値を示すヒストグ
ラムである。ＡＩＤＳ及びＡＲＣ患者より得た１０１検
体の真陽性血清（ウェスタンプロット法により確認）と
、真陰性血清とをＥＬＩＳＡでｇｐ４１Ａ５と反応させ
た。陽性反応に対する平均カットオフ（陽性と判断でき
る閾値）はＯ，Ｄ、４０５＝０．３７６と決定された。

第３図は、ｇｐ４１Ａ５が真陽性血清に対して陽性が１
００％（１０１／１０１）で、真陰性血清に対しては陽
性は０％（０／　ｌ　７９）であることはっきり示して
いる。

（実施例３） 新規ペプチドと比較するため、Ｃｏ５ａｎｄのペプチド
Ｖ（３９）を米国特許番号第４，６２９．７８３号に開
示されたアミノ酸配列に従い実施例１と同様に合成した
。このペプチドのｇｐ４１内での相対的位置を第２図に
示す。第２図はまたｇｐ４１Ａ５の相対的な配列位置及
びＨＩＶ−１のｇｐ４１に対応する他の目的タンパクの
相対的な配列位置を与えている。Ｃｏ５ａｎｄは、ペプ
チドＶ（３９）は確認陽性血清２４検体中２３検体（９
５，８％）と反応する（すなわち偽陰性はｌ検体）と報
告している。このペプチドＶ（３９）を実施例２で述べ
たＥＬＩ　ＳＡにおいてｇｐ４１Ａ５の代りに用いて使
用した。

ペプチドＶ（３９）は既知ＨＩＶ−１陽性血清試料と２
３３検体中２２１検体（９４，８％）との間で陽性反応
を示した。第２表に示すように、１２検体で偽陰性反応
が見られた。またペプチドＶ（３９）は確認清除性血清
１０２検体中１検体（０，９８％）の偽陽性反応を与え
た。血清試料陽性及び陰性はＨＩＶ−１タンパクを用い
たウェスタンプロット分析により確認した。偽陽性反応
及び偽陰性反応は全てウェスタンプロット分析によりそ
のとおりであることが確認された。

第２図にさらに示されるように、ｇｐ４１Ａ５はＷ　ａ
　ｎ　ｇら（Ｐｒｏｃ、Ｎａｔ、ＡｃａｄｙＳｃｉ、（
１９８６）　８３：６１５９−６１６３）（７）ペプチ
ド５Ｍ２８４及びＣｏ５ａｎｄのペプチドＶ（３９）と
部分的に重複するアミノ酸配列を有している。このよう
にｇｐ４１Ａ５は２つの既知ペプチドのカルボキシ末端
部分のアミノ酸配列と、ペプチド５Ｍ２８４やペプチド
Ｖ（３９）のカルボキシ末端側に付加されたｇＰ４１領
域に対応する配列とを含んでいる。従来論じられてきて
いたように、Ｗ　ａ　ｎ　ｇらはペプチド５Ｍ２８４の
カルボキシ末端部分は、ペプチド５Ｍ２８４のアミノ末
端部分と比較すると免疫学的には重要性が低いと考えて
いた。しかしながら、Ｗ　ａ　ｎ　ｇらの考えとは逆に
、ｇｐ４１Ａ５の配列をｇｐ４１Ａ５のカルボキシ末端
に延伸していくと、ペプチドはヒト血清中のＡＩＤＳ−
特異抗体検出において優れた抗原性を示していた。この
ペプチドは、ＥＬＩＳＡにおいてもウェスタンプロット
においても、ペプチドＶ（３９）と５Ｍ２８４とのどち
らよりも高い反応性と大きな特異性を示した。

第２表はまたｇｐ４１Ａ５が確認法ＨＩＶ−１陽性血清
の２３３検体全て（１００％）と反応していることをは
っきりと示している。この実験結果は、１２検体の偽陰
性反応を生じたベブチｌ”　Ｖ（３９）についてテスト
されたものと同じ２３３血清について得られたものであ
る。ＥＬＩＳＡテストにおける陽性反応に対する平均カ
ットオフ値はＯ、０、４０５で約０．３であった。０．
３以下の数値は陰性反応と考えられる。血清試料番号７
．１９，４０，４４，４８，６０，１０１゜４８２．５
１１．３２４，３７５．及び３９３はペプチドＶ（３９
）とは反応性を示さないが、ｇｐ４１Ａ５とは優れた反
応性を示しているのがはっきりとしていることが容易に
わかるであろう。

第３表はｇｐ４１Ａ５の優れた免疫学的反応性をＣｏ５
ａｎｄのペプチドＶ（３９）とさらに比較したものであ
る。第２表中で示された２３３検体の血清試料中の３８
検体がウェスタンプロット解析により陽性であると確認
された。これら陽性血清と８検体の陰性血清試料（ウェ
スタンプロットにより確認）とは平行して行なわれたＥ
ＬＩＳＡテストにおいてペプチドｇｐ４１Ａ５と反応し
、Ｏ、Ｄ　、　４０５で約０．３よりいくらかでも大き
い陽性反応を示した。なお非ＨＩ　Ｖ　−１抗原（抗原
無し）を対照（コントロール）として用１．Ｘだ。

第 表（その１） 第 表（その２） 第 表（その３） 第 表（その４） １．７９３ 表（その５） ０．６６０ １．０８１１ ！、１８７ １．４６２ ０．６５１ １．７８３ １．５８３ １．５９２ ２．１０２ ２．６７０ ２．７９６ ２．８１２ ２．７６９ 表（その６） ０．３６９ １．１４３ ０．５９３ ０．７９１ ２．４９８ １．９２３ ０．６４３ ２．６４４ 第 表（その１） 血清ガ゛１番号 ９ρ４１Ａ５ Ｖ　　（３９１ 非抗原・・ ０．４０７ 第 表（その２） 血清試刺番号 ｐ４１Ａ５ Ｖ　　１３９１ 非抗原゛・ 分光光度計の読み、Ｏ、Ｄ　、　４（＋５ＨＩＶ−１抗
原ナシ カットオフ−陰性血清の０ ０　、４０５平均値＋３×標準偏差 Ｂ ＨＩＶ ■抗原によるウェスタンプロット （実施例４） ｇｐ４１Ａ５のカルボキシ末端部分が失われているペプ
チドＡ５−Ｔｒｕｎｃ　（ａ）（第２図参照）について
も実施例１で述べたようにして合成し、実施例２で述べ
たような（但しｇｐ４１Ａ５をペプチドＡ５−Ｔｒｕｎ
ｃ　（ａ）に置換えて）ＥＬＩＳＡテストに使用して抗
原性を測定した。

第４表に表わされたＥＬＩＳＡの結果より容易に解るよ
うに、ｇｐ４１Ａ５のカルボキシ末端部分は明らかに本
ペプチドｇｐ４１Ａ５の高反応性高特異性に必要とされ
るものであった。

第 表（そのｌ） 第 表（その２） 番号 讐Ｂ Ｐ４１Ａ５ Ｖ　　（３９１ Ａｓ−ＴｒｕｎＣ（ａｌ 非抗原・・ 分光光度計の読み、Ｏ、Ｄ　、　ａｏｓＨＩＶ−１抗原
ナシ カットオフ−陰性血清のＯ、０、４０５平均値＋３×標
準偏差カツトオフＡ５　　＝Ｏ，＋５１　＋３Ｘ０．０
５３　＝０．３１０　（０、０、４０５）カットオフＶ
（３９）＝Ｏ，＋５２　＋　３　Ｘｏ、０５（１＝０．
３０２　（０、Ｄ　、　４０５　）カフトオ７　Ａ　５
−Ｔｒｕｎｃ（ａ）＝Ｏ，１５２＋　３Ｘ０．０５０　
＝０．３０２　（０、Ｄ　、　４０５　）Ｂ ＨＩＶ−１抗原によるウエスタンプロット（７１′施例
５） 前述のアミノ酸配列を有するｇｐ４１ｃＴ４を実施例１
で述べたようにして合成し、実施例２で述べたような（
但しｇｐ４１Ａ５をペプチドｇｐ４１ＣＴ４に置換えて
）ＥＬＩＳＡテストにおいて１０５検体のＨＩＶ−１陽
性血清（ｇｐ４１Ａ５と反応する全ての検体である）に
対してテストした。このペプチドを１０から１００　ｇ
　ｇ　／　ｍの間のｌ：ｉ度で、実施例２に述べたよう
にしてマイクロタイタープレートにコートした。第５表
に示されるように５このペプチドは陽性血清１０５検体
１１．６８検体（６４，８％）と反応した。このペプチ
ドを２８検体の確認済瞼性血清についてテストしたが偽
陽性は見られなかった。

（実施例６） 前述のアミノ酸配列を有するｇｐ４１ｃＴ３を実施例１
で述へたようにして合成し、実施例２で述べたようにし
て（但しｇｐ４１Ａ５をペプチドｇｐ４１ｃＴ３に置換
えて）マイクロタイタープレー　トにコー］・シた。第
５表に示されるように、ｇ　ｐ　４１．　ＣＴ　３は実
施例２，３で述べたようなＥＬＩＳＡアッセイで陽性血
清８０検体中３８検体（４８，８％）と反応した。この
ペプチドを２０検体の確認清除性血清についてテストし
たが偽陽性反応は僅か１検体であった。

（実施例７） 実施例１と同様に合成したペプチドｇｐ４１Ｂ１を１０
から１００ｇｇ／ｍｌの濃度で前述のようにマイクロタ
イタープレートにコートし実施例２と同じように（但し
ｇｐ４１Ａ５をｇｐ４１Ｂｌに置換えて）ＥＬＩＳＡに
使用した。このペプチドはＨＴＶ−１陽性確認済血清９
５検体中、４５検体（４７，４％）と反応した（第５表
）。

陰性血清２検体とは偽陽性反応は見られなかった。

（実施例８） 実施例１と同様に合成したペプチドｇ　ｐ　４１．　Ｂ
３を１０から１００　ｇ　ｇ　／　ｍ　ｌの濃度でマイ
クロタイタープレートにコートした。実施例２．３と同
様なＥＬＩＳＡにおいて、ＨＩＶ−１陽性確認済血ｌ＋
’ｉ　３２検体中、２２検体（６８，８％）が陽性反応
を小した。陽性反応をと反応した（第５表）。陰性血清
２検体とは偽陽性反応は見られなかった。

表（その１） 第 表（その２） 表（その３） 第 表（その４） 陰性反応 （＋）＝ 弱陽性反応 強陽性反応 （実施例９） 実施例１と同様にして、ペプチドＧＡＧ２、ＧＡＧ３及
びＧＡＧ　１４を合成した。各ペプチドを１０から１０
０μｇ　／　ｍ　ｌの濃度でマイクロタイタープレート
にコートし、実施例２と同しようにＥＬＩＳＡに使用１
７た。但しｇｐ４１Ａ５の代りにＧＡＧ２．ＧＡＧ３及
びＧＡＧ　１４を抗原として用いた。ペプチドＧＡＧ２
はＨＩＶ−２陽性血清に対するアッセイについても行な
った。アンセイ結果を第６表に示す。

（実施例１０） ペプチドＰ１７−Ｄ及びＰＩ３−Ｆを実施例１と同様に
合成し、各ペプチドで実施例２と同様に５００１Ｌｇ　
／　ｍ　ｌ　ｅ度でマイクロタイターブレーＩ・をコー
トし、ＥＬＩＳＡに使用した。但しｇｐ４１Ａ５の代り
にＧａＯ２、ＧａＯ３及びＧａＯ１４を抗原として用い
た。これらのペプチドについてもＨＩＶ−２陽性血清に
対するアッセイを併て行なった。実験結果を第７表に示
す。

ＨＩＶ−２はＨＩＶ−１と近縁するが同一ではないレト
ロウィルスであり、ＨＩＶ−１抗原を用いたＥＬＩＳＡ
テストにおいて陰性を示す西アフリカのＡＩＤＳ患者よ
り最近分離されたものである。

実施例９．１０のデータを示す第６表及び第７表から、
ペプチドＧＡＧ２、ＰＩ３−Ｄ及びＰＩ７−Ｆはそれツ
レ、ＨＩＶ−１及びＨＩ　Ｖ−２（７）両者に対する抗
体によって認識されるエピトープを含んでいることが理
解できる。このようにこれら３つのペプチドはＨＩＶ−
１及びＨＩＶ−２感染の両者に対する診断用として又ワ
クチン組成物として使用できる。

以上の結果から明らかなように、ここで説明してきた新
規合成ペプチド群は、ＨＩＶ−１の免疫学的に重要なタ
ンパク領域、例えばｇｐ４１やｇａｇの遺伝子産物に対
応するものであり、ＨＩＶ−１抗体の有無を検出する優
れた高感度かつ高選択性のアッセイを提供するものであ
る。

【図面の簡単な説明】

第１図はＨＩＶ−１遺伝子を表現する図、第２図は本発
明により合成した相重複するペプチド及びｇｐ４１に対
応する従来ペプチドを比較のため示す図、第３図はｇｐ
４１Ａ５を抗原として使用した場合のＥＬＩ　ＳＡ値の
ヒストグラム図である。 特許出願人　アンデルス・ヴアールネ （ほか４名） 代　理　人　弁理士　山　１）文　雄 （ほか１名）

Claims (17)

【特許請求の範囲】
1. （１）下記の式の抗原性ペプチド； Ｘ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
   −Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙー
   Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａ
   ｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｙ−Ｚ （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
   、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
   酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
   るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；
   ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）。
2. （２）前記抗原性ペプチドが、 Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｉ
   ｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙ
   ｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｌａ
   −Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−ＯＨであ
   る特許請求の範囲第１項記載の抗原性ペプチド。
3. （３）下記の式の抗原性ペプチド： Ｘ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ
   −Ａｓｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−
   Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｓ
   ｅｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｙ−Ｚ （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
   、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
   酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
   るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；
   ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）。
4. （４）下記の式の抗原性ペプチド； Ｘ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ
   −Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−
   Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔ
   ｈｒ−Ａｓｐ−Ｙ−Ｚ （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
   、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
   酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
   るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；
   ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）。
5. （５）下記の式の抗原性ペプチド； Ｘ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ
   −Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−
   Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａ
   ｓｎ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ｙ−
   Ｚ（式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原
   子、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミ
   ノ酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進
   するために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ
   ；ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）。
6. （６）下記の式の抗原性ペプチド； Ｘ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓｅｒ
   −Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−
   Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ−Ｇ
   ｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｙ−Ｚ （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
   、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
   酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
   るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；
   ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）。
7. （７）下記の式の抗原性ペプチド； Ｘ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ
   −Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−
   Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇ
   ｌｕ−Ｖａｌ−Ｙ−Ｚ （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
   、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
   酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
   るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；
   ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）。
8. （８）下記の式の抗原性ペプチド； Ｘ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ
   −Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−
   Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇ
   ｌｕ−Ｇｌｙ−Ｙ−Ｚ （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
   、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
   酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
   るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；
   ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）。
9. （９）下記の式の抗原性ペプチド； Ｘ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｃｙｓ
   −Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
   Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｌ
   ｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｙ−Ｚ （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
   、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
   酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
   るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ：
   ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）。
10. （１０）下記の式の抗原性ペプチド； Ｘ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ
    −Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−
    Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓ
    ｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｙ−Ｚ （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
    、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
    酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
    るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；
    ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）。
11. （１１）下記の式の抗原性ペプチド； Ｘ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ
    −Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−
    Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌ
    ｙｓ−Ｉｌｅ−Ｙ−Ｚ （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
    、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
    酸であって、キヤリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
    るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；
    ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）。
12. （１２）式、 Ｘ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
    −Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−
    Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａ
    ｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｙ−Ｚ、Ａｓ
    ｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ
    −Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−ＣｙＳ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−
    Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｖ
    ａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−ＯＨ、Ｘ−Ａ
    ｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ａｓ
    ｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ
    −Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−
    Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｙ−Ｚ、 Ｘ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ
    −Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−
    Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔ
    ｈｒ−Ａｓｐ−Ｙ−Ｚ、 Ｘ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ
    −Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−
    Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａ
    ｓｎ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ｙ−
    Ｚ、Ｘ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓ
    ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌ
    ｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ
    −Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｙ−Ｚ、
    Ｘ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ
    −Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−
    Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇ
    ｌｕ−Ｖａｌ−Ｙ−Ｚ、 Ｘ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ
    −Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−
    Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇ
    ｌｕ−Ｇｌｙ−Ｙ−Ｚ、 Ｘ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｃｙｓ
    −Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
    Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｌ
    ｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｙ−Ｚ、 Ｘ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ
    −Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−
    Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓ
    ｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｙ−Ｚ、 及び Ｘ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ
    −Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−
    Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌ
    ｙｓ−Ｉｌｅ−Ｙ−Ｚ、 （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
    、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
    酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
    るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；
    ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）で表わされる−群のペ
    プチドより選ばれる少くとも１以上の抗原性ペプチドに
    、 試料中に存在する抗ＨＩＶ−１抗体と前記ペプチドの間
    で免疫学的結合物が形成される条件下で、試料を接触さ
    せ、 前記免疫学的結合物の形成を測定して試料中のＨＩＶ−
    １抗体の存在を確認するＨＩＶ−１抗体検出方法。
13. （１３）前記抗原性ペプチドが、 Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｉ
    ｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−ＧｌｙーＬｙ
    ｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｌａ
    −Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−ＯＨであ
    る特許請求の範囲第１２項記載のＨＩＶ−１抗体検出方
    法。
14. （１４）式 Ｘ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
    −Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−
    Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａ
    ｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｙ−Ｚ、Ａｓ
    ｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ
    −Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｒ−Ｌｙｓ−
    Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｖ
    ａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−ＯＨ、Ｘ−Ａ
    ｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ａｓ
    ｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ
    −Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−
    Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｙ−Ｚ、 Ｘ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ
    −Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−
    Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔ
    ｈｒ−Ａｓｐ−Ｙ−Ｚ、 Ｘ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ
    −Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙｓ−
    Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ａ
    ｓｎ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−Ｙ−
    Ｚ、Ｘ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ−Ｓ
    ｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌ
    ｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇｌｎ
    −Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｙ−Ｚ、
    Ｘ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａｌａ
    −Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−
    Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇ
    ｌｕ−Ｖａｌ−Ｙ−Ｚ、 Ｘ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ
    −Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−
    Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−ＳｅＴ−Ｇ
    ｌｕ−Ｇｌｙ−Ｙ−Ｚ、 Ｘ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｃｙｓ
    −Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｒ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−
    Ｇｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｌ
    ｅｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｙ−Ｚ、 Ｘ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ
    −Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−
    Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓ
    ｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｙ−Ｚ、 及び Ｘ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ
    −Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−
    Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌ
    ｙｓ−Ｉｌｅ−Ｙ−Ｚ、 （式中、Ｘはペプチドのアミノ末端ＮＨ＿２基のＨ原子
    、あるいはペプチドのアミノ末端に結合する付加アミノ
    酸であって、キャリア蛋白へのペプチドの結合を促進す
    るために選択された付加アミノ酸；Ｙは無しかＣｙｓ；
    ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である）で表わされる一群のペ
    プチドより選ばれる少くとも１以上のペプチドであって
    免疫学的有効量の抗原性ペプチドと、生理学的許容量の
    キャリアとからなり、ヒトを含む動物でのＨＩＶ−１抗
    体産生を誘発するＨＩＶ−１抗体産生誘発組成物。
15. （１５）前記ペプチドが、 Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｉ
    ｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙ
    ｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｌａ
    −Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−ＯＨであ
    る特許請求の範囲第１４項記載のＨＩＶ−１抗体産生誘
    発組成物。
16. （１６）式 Ｘ−Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ
    −Ｉｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−
    Ｌｙｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａ
    ｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｙ−Ｚ、Ａｓ
    ｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｉｌｅ
    −Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙｓ−
    Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｖ
    ａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−ＯＨ、Ｘ−Ａ
    ｌａ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｔｒｐ−Ａｓ
    ｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｔｙｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ
    −Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｅｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｓｅｒ−
    Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｙ−Ｚ、Ｘ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ
    −Ｓｅｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−
    Ａｓｎ−Ａｌａ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｉｌｅ−Ａｌａ−Ｖ
    ａｌ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｇｌｙ−Ｔｈｒ−Ａｓｐ−Ｙ−
    Ｚ、Ｘ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａ
    ｓｎ−Ａｌａ−Ｓｅｒ−Ｔｒｐ−Ｓｅｒ−Ａｓｎ−Ｌｙ
    ｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｔｒｐ
    −Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ｔｒｐ−Ｍｅｔ−
    Ｙ−Ｚ、Ｘ−Ｉｌｅ−Ａｓｎ−Ａｓｎ−Ｔｙｒ−Ｔｈｒ
    −Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｈｉｓ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ−
    Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｎ−Ａｓｎ−Ｇ
    ｌｎ−Ｇｌｎ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｓｎ−Ｇｌｕ−Ｙ−
    Ｚ、Ｘ−Ｐｒｏ−Ａｒｇ−Ｔｈｒ−Ｌｅｕ−Ａｓｎ−Ａ
    ｌａ−Ｔｒｐ−Ｖａｌ−Ｌｙｓ−Ｖａｌ−Ｖａｌ−Ｇｌ
    ｕ−Ｇｌｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ
    −Ｇｌｕ−Ｖａｌ−Ｙ−Ｚ、Ｘ−Ｖａｌ−Ｇｌｕ−Ｇｌ
    ｕ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−Ｐｒｏ−Ｇｌｕ
    −Ｖａｌ−Ｉｌｅ−Ｐｒｏ−Ｍｅｔ−Ｐｈｅ−Ｓｅｒ−
    Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｒ−Ｙ−Ｚ、Ｘ
    −Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ−Ａｌａ−Ｃｙｓ−
    Ｇｌｎ−Ｇｌｙ−Ｖａｌ−Ｇｌｙ−Ｇｌｙ−Ｐｒｏ−Ｇ
    ｌｙ−Ｈｉｓ−Ｌｙｓ−Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｌｅ
    ｕ−Ａｌａ−Ｇｌｕ−Ｙ−Ｚ、Ｘ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇ
    ｌｙ−Ｃｙｓ−Ａｒｇ−Ｇｌｎ−Ｉｌｅ−Ｌｅｕ−Ｇｌ
    ｙ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｇｌｎ−Ｐｒｏ−Ｓｅｒ−Ｌｅｕ
    −Ｇｌｎ−Ｔｈｒ−Ｇｌｙ−Ｓｅｒ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−
    Ｌｅｕ−Ｙ−Ｚ、及び Ｘ−Ｌｅｕ−Ｔｙｒ−Ｃｙｓ−Ｖａｌ−Ｈｉｓ−Ｇｌｎ
    −Ａｒｇ−Ｉｌｅ−Ｇｌｕ−Ｉｌｅ−Ｌｙｓ−Ａｓｐ−
    Ｔｈｒ−Ｌｙｓ−Ｇｌｕ−Ａｌａ−Ｌｅｕ−Ａｓｐ−Ｌ
    ｙｓ−Ｉｌｅ−Ｙ−Ｚ、（式中、Ｘはペプチドのアミノ
    末端ＮＨ＿２基のＨ原子、あるいはペプチドのアミノ末
    端に結合する付加アミノ酸であって、キャリア蛋白への
    ペプチドの結合を促進するために選択された付加アミノ
    酸；Ｙは無しかＣｙｓ；ＺはＯＨまたはＮＨ＿２である
    ）で表わされる一群のペプチドから選ばれる少くとも１
    以上のペプチドであって免疫学的有効量の抗原性ペプチ
    ドと、生理学的許容量のキャリアとを投与して、ヒトを
    含む動物体内でＨＩＶ−１抗体産生を誘発するＨＩＶ−
    １抗体産生誘発方法。
17. （１７）前記抗原性ペプチドが、 Ａｓｐ−Ｇｌｎ−Ｇｌｎ−Ｌｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌｙ−Ｉ
    ｌｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ−Ｓｅｒ−Ｇｌｙ−Ｌｙ
    ｓ−Ｌｅｕ−Ｉｌｅ−Ｃｙｓ−Ｔｈｒ−Ｔｈｒ−Ａｌａ
    −Ｖａｌ−Ｐｒｏ−Ｔｒｐ−Ａｓｎ−Ｃｙｓ−ＯＨであ
    る特許請求の範囲第１６項記載のＨＩＶ−１抗体産生誘
    発方法。