JPS63196856A - 改良ペプチド組成物およびｈｔｌｖ−３に対する抗体の検出方法 - Google Patents

Abstract

(57)【要約】本公報は電子出願前の出願データであるた
め要約のデータは記録されません。

Description

【発明の詳細な説明】 ［産業上の利用分野］ 本発明は、ペプチド組成物、およびＡＩＤＳ（後天性免
疫不全症候群）ＡＲＣ（ＡＩＤＳ関連コンプレックス）
およびプレＡＩＤＳ条件の診断のための高感度で正確な
信頼できるＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体の検出方法に
関する。ペプチド組成物はＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗
体の生成を刺激することによってＡ　Ｉ　ＤＳ、ＡＲＣ
，またはプレＡＩＤＳ条件に対するワクチンとして使用
され、人間を含む健康な哺乳類のＨＴＬＶ−ｍまたはＬ
ＡＶによる感染に対して保護を与える。ペプチド組成物
は、約３５のアミノ酸を有する合成ペプチドおよびペプ
チド混合物を包含する。ペプチド組成物で有用なペプチ
ドのアミノ酸配列と各ペプチドは化学的に合成され、エ
ンベロープ（ｅｎｖｅｌｏｐｅ）タンパク質、ｐ４１、
の切片、およびＨＴＬＶ−■のギャグ（ｇａｇ）タンパ
ク質、ｐ２４、の切片に相当する。本発明のペプチド組
成物は、Ａ　ＩＤＳ、ＡＲＴ、およびプレＡＩＤＳ条件
の患者の漿液中の抗体に対して高免疫反応性出あること
が見出だされた。

特に、本発明は、ペプチドまたは化学的に合成されたペ
プチドの混合物であって、所定の配列で、約３５のアミ
ノ酸（以降３５マー　ペプチドと称する）の切片を含有
する１つのペプチド、約２１のアミノ酸（以降２１マー
　ペプチドと称する）の切片を含有する１つのペプチド
、１９のアミノ酸（以降１９マー　ペプチドと称する）
の切片を含有する第３ベブド、および１１のアミノ酸（
以降１１マー　ペプチドと称する）の切片を含有する第
４ペプチドを包含するペプチドの使用に関する。３５７
−　ペプチド、または２１マー　ベプチドと１９マー　
ペプチドと任意に１１７−　ペプチドとの混合物は、Ａ
ＩＤＳ、ＡＲＣ，またはプレＡＩＤＳ患者の体液中のＨ
ＴＬＶ−ＩＩＩウィルスに対する抗体の検出に有用であ
る。ここで示されるアミノ酸はペプチドの免疫抗原構造
が保存される限り前記アミノ酸の類似物による置換を含
む。

検出方法は、酵素−結合免疫吸着検査 （ＥＬ　Ｉ　ＳＡ）　、免疫放射線量検査（Ｉ　ＲＭＡ
）、およびニトロセルローズ紙を使用する酵素免疫プロ
ッティングや抗原としてペプチド組成物を使用する血球
凝集反応のような免疫検査工程の他の方法を包含する。

発明の背景 後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ）は、最近多くの国で
知られている。患者への圧倒的効力と、病気が急速に広
がっているため、病気の原因を明らかにし、識別する努
力がなされている。免疫学的データによれば、ＡＩＤＳ
は親密な接触や血液またはある血液生成物にさらされる
ことによって水平に移動するような伝染力によって生じ
ると考えられる。

１９８３年、Ｉ　ｎ５ｔｉｔｕｔｅ　ｏｆ　　Ｐ　ａｓ
ｔｕｒｅのＦ　、　　Ｂ　ａｒｒｅ　−Ｓ　１ｎｏｕｓ
ｓ１他は、ＡＩＤＳの危険にある患者からＴ−リンパ向
性レトロウィルスの単離を報告した。レトロウィルスは
ヒトＴ細胞白血病ウィルス（ＨＴＬＶ）科の一員である
ことが明らかとなった。しかしながら、免疫学的応答は
既知のＨＴＬＶ−１またはＨＴＬＶ−ＩＩとは区別され
るｏＦ　、　Ｂ　ａｒｒｅ　−Ｓ　１ｎｏｕｓｓ１他、
Ｓ　ｃｌｅｎｃｅｓ２２０．８６８頁、（１９８３年５
月）。

Ｎ　ａｔｉｏｎａｌ　　Ｃａｎｃｅｒ　　Ｉ　ｎ５ｔ１
ｔｕｔｅのＲ，Ｃ。

Ｇａ１ｌｏ等によればまた、ＨＴＬＶ−ｍと命名された
同様のウィルスも自由なＴ細胞系Ｈ９との共培養によっ
て多くのＡＩＤＳまたはＡＲＣ患者の血液サンプルから
単離された。Ｐ　ｏｐｏｖｉｃ、　Ｍ　、他、頁、（１
９８４年）を参照。

Ｃｅｎｉｅｒ　ｆｏｒ　Ｄ　１ｓｅａｓｏ　　Ｃ０ｎ１
ｒＯ１ｓ　Ａ　１ｌａｎｌａｓＧ　ｅｏｒｇｌａのＶ　
、　　Ｓ　、Ｋ　ａｌｙａｎａｒａｍａｎ他は１ＡＩＤ
Ｓ患者のリンパ節症関連ウィルス（ＬＡＶ）の単離と、
ＬＡＶの主コアタンパク質、ｐ２５、を使用する放射線
免疫沈澱反応検査の発展を報告した。これらの検査工程
では、血液リンパ球の最初の培養で成長し培養されたＬ
ＡＶを使用する。

ｐ２５のコアタンパク質は培養されたウィルスから単離
され　１１２５で標識した標的抗原として使用された。

この標識抗原は漿液に添加され、この標識抗原の少なく
とも１５％の沈澱が陽性と見なされるＯＶ　、　　Ｓ　
、　　Ｋ　ａｌｙａｎａｒａｍａｎ他、５ｅＬｅｎｅｅ
ｓ２２５．３２１頁（１９８４年７月）を参照。しかし
ながら、報告結果に基づいて、試験はＡＩＤＳ患者の４
１％に対してのみ陽性であり、ＡＲＣとして既知のリン
パ節症（ＬＡＳ）の患者に対して７２％が陽性であった
。これは、この工程がＡＩＤＳウィルスに対する抗体の
存在に対する漿液検査の検出および診断手段として使用
するには感度と正確さが十分ではないことを意味する。

ＬＡｖおよびＨＴＬＶ−ｍ、およびＡＩＤＳ患者から隔
離された関係するレトロウィルスの多種の菌株は、多数
の重要な特性を有する。Ｆ　ｅｏｒｌｎｅ。

８４０頁、１９８４年を参照。これらには、イン４工と
インビトロの０ＫＴ４＋ヒトＴ細胞白血球のウィルス復
製；悪化したＴ細胞増殖との関連、細胞変性効果の現れ
；　（Ｍ　ｏｎｔａｇｎｌｅｒ他、ＨｕｓａｎＴ　　Ｃ
ｅ１ｌ　Ｌｅｕｋｅｓｉａ　Ｖｉｒｕｓｓ　３６３頁、
Ｃｏ１ｄ　Ｓ　ｐｒｌｎｇ　Ｈａｒｂｏｒ　Ｌａｂｏｒ
ａｔｏｒｙ　、　１９８４年；　Ｐ　０１）ＯＶＯＣ％
　Ｍｓ他、ｏｐ、　ｃｔｔ、、およ　　びＫ　ＩａｔＺ
ｌａｎｎ％　Ｄ　、他、Ｓ　ｃｉｅｎｃｅ、　２２５．
５９頁、１９８４年を参照）、およびＡＩＤＳとＡＲＣ
患者の漿液中の抗体による認識が含まれる。

Ｍ　ｏｎｔａｇｎ１ｅｒ他、　ｏｐ、ｃｉｔ、　　：　
Ｌｅｖｙ　Ｊ　、他％ムｃｔｔ、、Ｓ　ａｒｎｇａｄｈ
ａｒａｎ、　Ｍ　、他、Ｓ　ｃｉｅｎｃｅｓ　２２４．
５０５頁、１９８４年；　Ｓ　ａｆａｌ、Ｂ、他、Ｌａ
ｎｃｅｔ、土、１４３８頁、１９８４年ＨＢｒｕｎ−Ｖ
　ｅＺｉｒｌｔ、　Ｆ　、他、Ｌａｎｃｅｔ　、　ｔ、
１２５３頁、１９８４年；　Ｂ　ｒｕｎ　−Ｖ　ｅｚｉ
ｎｅｔ、　Ｆ　、他、Ｓ　ｃｉｅｎｃｅ　　２２６．４
５３頁、１９８４年；Ｇｏｌｄｂｅｒｔ　ＳＪ　、他、
Ｌａｎｃｅｔ　、　ＩＬ　７１１頁、１９８４年：およ
びＬ　ａｕｒｅｎｃｅＪ　、他、ＮｅｗＥｎｇｌａｎｄ
　　Ｊ　、　Ｍｅｄ、　３１１．１２６９頁、１９８４
年１１月を参照。

１９８４年１１月、Ｌ　、　Ｗ、Ｋ　１ｔｃｈｅｎ他は
、Ｈ９／ＨＴＬＶ−ｍ構成ＨＴＬＶ−ｍ感染系を使用す
る血友病患者のＡＩＤＳの場合の試験を報告した。方法
には、リン酸塩緩衝剤中の２％のパラホルムアルデヒド
によるウィルスの不活性化、および不活性化細胞を使用
して血友病患者が輸血によって不注意にもＡＩＤＳウィ
ルスにさらされるか否かを決定することを含む。５０の
血友病患者からの漿液を使用したデータによれば、生命
を延ばすのに輸血の必要があるために、これら患者がＡ
ＩＤＳに接触する危険性が増加する。Ｌ、Ｗ。

Ｋ　１ｔｃｈｅｎ他、Ｎａｔｕｅｒ　、　　３１２．３
６７頁、１９８４年１１月。これは、ＡＩＤＳウィルス
で汚染された血液サンプルを隔離するため血液銀行に集
められる前に安全で信頼できる感度のよい検査を行って
、輸血を受けなければならない。たとえば、血友病患者
や外科の患者にＡＩＤＳが不注意に広がらないようにす
る緊急な必要がある。

１９８４年１１月および１９８５年１月、Ｎａｔｉｏｎ
ａｌ　　Ｃａｎｃｅｒ　　Ｉ　ｎ５ｔｉｔｕｔｅのＲ，
Ｃ，Ｇａ１ｌ。

のグループと、極の共同研究者は、ＨＴＬＶ−Ｉｌｌが
ＡＩＤＳの原因剤であることを積極的に結論し、ＨＴＬ
Ｖ−ｍのヌクレオチド配列を報告した。

Ｂ　ｅａｔｒｌｃｅ　Ｈａｈｎ他、Ｎａｔｕｒｅ　、　
３１２．１６６頁、１９８４年１１月、Ｇｅｏｒｇｅ　
、　Ｍ、　５ｈａｖ他、２７７頁、１９８５年１月を参
照。

その間、３つの他のグループがＡＩＤＳウィルスの完全
なヌクレオチドａを報告した。

Ｍｕｅｓｔ１ｇ他、Ｎａｔｕｒｅ　、　　３１３．４５
０頁、１９８５年２月；　Ｓ　ａｎｃｈｅｚ　−Ｐ　ｅ
ｓｃａｄｏｓ　、　Ｒ、他・１９８５年１月を参照。こ
れら報告は、ＤＮＡレベルとプロジエクィドタンパク質
レベルの両方でＨＴＶＬ−ｍウィルスの構造を示し、さ
らに、ＨＴＬＶ−ＩＩＩに存在する異なるエピトープの
血清学的研究を行った。

同時に、Ｉ　ｎ５ｔｉｔｕｔｅ　　Ｐ　ａｓｔｅｕｒの
グループは１ＬＡＶがＡＩＤＳの原因剤であることを示
し、ＨＴＬＶ−ｍと同一であると考えられると報告した
。このグループが使用した検査工程は、健康な人体の１
４＋細胞中のＬＡＶを成長させることを含む。ウィルス
抗体は次いで、１５分間３７℃で０．５％のナトリウム
　ドデシル　サルフェート中で濃縮され非活性化された
。漿液サンプルは次いで基質としてオルトフェニレン　
ジアミンによる酵素免疫検査中の抗原に対して試験を行
った。

漿液中の抗体の存在は６８％のＡＩＤＳ患者、１００％
のカボシ肉腫患者、および１００％のプレＡＩＤＳ患者
に見出だされた。ＪｅｆｆｒｅｙＬ　ａｕｒｅｎｃｅ他
、ｏｐ、ｃｌｔ、　。

最近、Ｒ，Ｃ，Ｇａ１ｌｏ他の発表した米国特許第４．
５２０，１１３号明細書は、酵素連結免疫吸着検査（Ｅ
Ｌ　Ｉ　ＳＡ）　、またはウェスタンプロット技術また
は間接的免疫蛍光検査方法に基づいたストリップ放射免
疫検査で、抗原として、Ｈ９／ＨＴＬＶ−ｍと命名され
た構成細胞系の溶解産物を使用することによってＡＩＤ
ＳおよびプレＡＩＤＳ患者の漿液中の抗体検出方法を開
示する。

この方法は、約８５％正確である。Ｇａ１ｌｏの特許ハ
サらに、）ＩＴＬＶ−ｍ、ｐ６５、（ＭＷ６５゜０００
）　、ｐ６０．（ＭＷ６０，０００）、ｐ５５　（ＭＷ
５５，０００）　、ｐ２４　（ＭＷ２４゜０００）およ
びｐ４１　（ＭＷ４１．０００）からの多数の抗体が、
ＡＩＤＳ患者、同性愛者、ヘロイン常用者からの漿液中
の抗体によって認識されることを示した。これらの中で
、主要な免疫反応性または特異性、ＨＴＬＶ−Ｈのエン
ベロープ抗原を構成するタンパク質、ｐ４１に関係する
。この特許はさらに、ｐ４１をさらに純化し精製するこ
とによってＥＬ　Ｉ　ＳＡ検査の感度が高くなると思わ
れると記載した。これに基づいて、試薬として適切な抗
原はＨ９細胞系中で培養されたＨＴＬｖ−■から得られ
たｐ４１の切片であることが見出だされた。

さらに、Ｒｏｂｅｒｔ　Ｃ、Ｇ　ａｌｌｏ他、Ｓ　ｃｉ
ｅｎｃｅｓ２２８．９３頁、１９８５年４月では、Ｅ。

Ｃｏｌｉの結合されたクーロニングおよび発現システム
がＡＩＤＳ患者からの漿液中の抗体と免疫学的に反応す
るＨＴＬＶ−ＩＩＩコード化ペジペプチド定するのに使
用したことを報告した。クーロンＨＴＬＶ−ｍ　　ＤＮ
Ａは断片に分けられ、発現ベクターに挿入された。挿入
されたＤＮＡは次いでＥ、　　Ｃｏ１１　　）ランスフ
ォーマントに発現された。

試験された３００クーロンのうちの２０はＡＩＤＳ患者
からの漿液と特定の反応を示した。

２０クーロンが分析され、ＨＴＬＶ−ｍ（７）（ＲＦ切
片からの切片を含むことが見出だされ、クーロン１７５
．１９１．１３・、３１．１６２．１１３．１２１、お
よび１２７と固定された。８のクーロンのうち、ＯＲＦ
クーロン１１３．１２１、および１２７は、ＨＴＬＶ−
ｍ感染細胞によって生成された。ｅｎｖ−１ｏｒ領域の
部分によってコード化されたタンパク質を規定し、すべ
てがＡＩＤＳ患者ではない場合に抗体生成を最も誘発す
る。

Ｔ、Ｗ、Ｃｈａｎｇ他、Ｂ　ｉｏｔｅｃｈｎｏｌｏｇｙ
、　　３　％９０５頁、１９８５年１０月は、ＨＴ　Ｌ
　Ｖ　−ｍ　ｌ：対する抗体の検出°のために免疫検査
で有用なウィルス抗体ペプチドから得られたりコンビナ
ンドＥ、　Ｃｏ１１　、の使用を報告した。抗原ペプチ
ドは１５．０００ダルトンの分子重量を有するペプチド
１２１と示される。

Ｃ、Ｄ　、　Ｃａｂｒａｄｌｌｌａ他、Ｂ　ｉｏｔｅｃ
ｈｎｏｌｏｇｙ、　４１１２５頁、１９８６年２月はま
た、ＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体の血清診断のための
１０２のアミノ酸を有する細菌的に合成された＋３ｎＶ
ポリペプチドの使用を説明する。

Ｃｏｓａｎｄは、１９８６年１２月１６日に発行された
米国特許第４．６２９．７８３号明細書に軸、ＨＴＬＶ
−ＩＩＩに対する抗体との免疫反応を有し、ウィルスに
対してヒト宿主がさらされたか否かを決定する試薬とし
て有用な担体に接合された化学的に合成されたペプチド
の使用を説明した。７のペプチドが説明され、そのうち
の２つはここで説明されるペプチドと同様の配列を有す
る。１つは、１３のアミノ酸を有するペプチドであり、
アセチル化することによって担体タンパク質に接合され
、以下のアミノ酸配列を有する。

Ｙ−Ａｒｇ　−１１ｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌ
ｕ−Ａｒｇ−Ｔ　ｙｒ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｙｓ　−Ａ
　ｓｐ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｚ　−ＸＸは、Ｏ
ＨまたはＮＨ，、Ｙは、担体へのペプチドの結合、Ｎ−
末端アセチル化、およびタンパク質がヒト宿主に存在す
る抗体に通常結合しない少なくとも５，０００分子量の
タンパク質またはペプチドに結合を行うためのアミノ酸
である。他は、以下のアミノ酸配列を有する担体タンパ
ク質にアセチル化され接合された２６のアミノ酸を有す
るペプチドである。

−Ａ　Ｉｇ　−１１ｅ　−Ｌ　ｅｕ　−Ａ　Ｉａ　−Ｖ
　ａｌ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　ｒｇ　−Ｔ　ｙｒ　−Ｌ　
ｅｕ　−Ｌ　ｙｓ　−Ａ　ｓｐ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　Ｉ
ｎ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｇ　Ｉｙ　−１１ｅ　
−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　Ｉｙ　−Ｃｙｓ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｇ
ｌｙ−Ｌｙｓ−Ｌｅｕ　−１１ｅ−Ｃｙｓ−ＸＸはＯＨ
またはＮＨ２、Ｎ−末端アセチル化およびペプチドまた
はタンパク質がヒト宿主に存在する抗体に通常結合しな
い少なくとも５．０００分子重量のペプチドまたはタン
パク質との結合である。Ｃｏｓａｎｄはまた、 Ｙ−Ａｓｐ　−Ｃｙｓ７　Ｌｅｐ−Ｔｈｒ　−１１ｅ　
−Ｌｅｙ　−Ｌｙｓ−Ａ　ｌａ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｇ　Ｉ
ｙ　−Ｐ　ｒｏ　−Ａ　Ｉａ　−Ａ　ｌａ　−Ｔ　ｈｒ
　−Ｌｅｕ−Ｇｌｕ−Ｇｌｕ−Ｍｅｔ−Ｍｅｔ−Ｔｈｒ
−Ａｌａ　−Ｃｙｓ−Ｘ に相当するアミノ酸配列を有するポリペプチドの混合物
を説明した。

ＹとＸは前述のように規定され、２６のアミノ酸を有し
、２６のアミノ酸のみを有する複合ポリペプチドより強
い免疫反応を有する複合ポリペプチドである。

ＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体検出、およびＡＩＤＳま
たはプレＡＩＤＳ条件診断のための報告された検査工程
の多くは、ＨＴＬＶ−ｍまたはＬＡＶウィルスの使用を
含む。他の検査工程は、現在までは十分に試験されなか
った。１００％正確な工程はない。これは、血液銀行で
漿液検査を行うときに使用するには望ましくない。試験
の正確性が１００％に満たないことで、汚染された漿液
が検出から逃れ、それを使用する血液享受者に輸血によ
って深刻な損害を与える。さらに１試験剤としての使用
は、健康な実験室作業員に危険であり、試薬を生成する
ために調整工程中にさらされる機会を逃れるために非常
な警戒が必要である。

さらに、非活性化ウィルスは前記工程のいくつかで使用
されるが、非活性化ウィルスにさらされると健康な作業
員に抗体を生成させるＡＩＤＳ。

ＡＲＣ，またはプレＡＩＤＳ条件と誤診される可能性が
ある。さらに、試験剤中のＨ９細胞またはＥ、Ｃｏ１１
からの細胞性材料の存在は、Ｅ。

Ｃｏ１１またはＨ９細胞に対する抗体を有する個人から
のＨＴＬＶ−Ｉ［［抗体検査で誤って陽性を示すことも
あり得る。これら誤った陽性反応は健康な個人とその家
族を非常に心配させ、健康な個人はＡＩＤＳを有すると
誤診された健康な個人は結果として通常の社会活動から
隔離されることもこともあり得る。

Ｃｏｓａｎｄの米国特許第４．６２９．７８３号明細書
で報告された試験の数は非常に少ない。２６のアミノ酸
との複合ポリペプチドは非活性化ウィルスはど良くない
という結果が示された。さらに、Ｃｏｓａｎｄは本発明
のペプチド組成物を説明していない。

さらに、本発明に至るまで、Ａ　Ｉ　ＤＳＳＡＲＣ。

またはプレＡＩＤＳ条件に対するＨＴＬＶ−ＩＩＩに対
して保護を与えるような有用なワクチンまたは方法はな
い。非活性化ウィルスの使用は病気との接触の恐れがあ
り、またその受容性と使用が妨げられる。

同様に、哺乳類のＨＴＬＶ−ＩＩＩに対するモノクーロ
ンおよびポリクーロン抗体の成長には免疫原としてＨＴ
ＬＶ−ｍを使用しなければならず、これによって工程中
に同様の危険が生ずる。

米国特許出願節７７４，６４４号明細書、第８３７．５
６６号明細書、および第８４７，１０２号明細書では、
ＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体の検出のために感度の高
い試薬として、ＡＩＤＳウィルスに対する保護、および
ＡＩＤＳウィルスに対するモノクーロンおよびポリクー
ロン抗体生成のためのワクチンとして２１のアミノ酸を
有する２１マー　ペプチドを説明している。これら明細
書はここに引用し挿入する。

多くの血液銀行や研究所で行われた２１７−ペプチドに
よる広範囲の臨床的試験によれば、はとんどがＡＩＤ後
期であり、ウェスタン　プロット分析によって陽性とさ
れたものの少数が、つまり漿液の４４９中の１２、また
は約２．６７％が、２１マー　ペプチドに対して試験し
たときには陰性結果を示した。率は小さいが、これは欠
点である、つまり個人に感染の可能性がある漿液が検出
から洩れ、輸血や外科手術で使用される可能性があると
いうことである。

それ故、本発明の目的は、ＨＴＬＶ−ＩＩＩにさらされ
たまたは感染された全ての個人のＨＴＬＶ−■に対する
抗体の検出を保証するような検出および診断をさらに完
全にすることである。

さらに本発明の目的は、非常に高感度のまた１００％正
確な試験工程、つまり誤って陽性または陰性結果を示さ
ない試験工程を発展させることである。

本発明の詳細な説明 本発明によれば、３５のアミノ酸のペプチド、２つのペ
プチド、および任意に第３ペプチドの混合物をＨＴＬＶ
−ＩＩＩに対する抗体の検出のための免疫原試薬として
包含するペプチド組成物が提供される。ペプチド組成物
は、３５のアミノ酸のペプチド、約２１のアミノ酸のペ
プチドと、約１９のアミノ酸のペプチドと、および任意
に約１１のアミノ酸の第３ペプチドとの混合物を包含す
る。

ペプチドは、固相ペプチド合成によって生成された。ペ
プチド組成物は、漿液および体液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩ
に対する抗体検出およびＡＩＤＳ。

ＡＲＣ，またはプレＡＩＤＳ条件の診断のための高感度
で正確な方法において有用であることが見出だされた。

ペプチド組成物はＢａ１ｂ／ｃマウスのような健康な哺
乳類のＨＴＬＶ−ｍまたはＬＡＶに対する抗体の生成を
促進するのに有用である。

本発明によれば、 Ａ、以下のアミノ酸配列−Ａ　ｒｇ　−１１ｅ　−Ｌ　
ｅｕ　−Ａ　Ｉａ　−Ｖ　ａｌ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａ　ｒ
ｇ　−Ｔ　ｙｒ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｙｓ　−Ａ　ｓｐ
　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｅｕ　
−Ｇ　Ｉｙ　−１１ｅ　−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　Ｉｙ　−Ｃ
ｙｓ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｇ　Ｉｙ　−Ｌ　ｙｓ　−Ｌ　ｅ
ｕ　−１１ｅ　−Ｃｙｓ　−Ｔ　ｈｒ　−Ｔ　ｈｒ　−
Ａ　ｌａ　−Ｖ　ａｌ　−Ｐ　ｒｏ　−Ｔ　ｒｐ　−Ａ
　ｓｎ　−Ａ　Ｉａ　−Ｓ　ｅｒ−１その類似物および
切片を有するペプチド、 または、 Ｂ、（ｉ）約１０乃至９５重量部の−Ａｒｇ−１１ｅ−
Ｌ　ｅｕ　−Ａ　Ｉａ　−Ｖ　ａｌ　−Ｇ　Ｉｕ　−Ａ
　ｒｇ　−Ｔ　ｙｒ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｙｓ　−Ａ　
ｓｐ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｅ
ｕ　−Ｇ　Ｉｙ　−１１ｅ　−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　Ｉｙ　
−Ｃｙｓ　−Ｓ　ｅｒ−１その類似物または切片 （１１）約５乃至９０重量部の−Ｉ　Ｉｅ　−Ｔ　ｒｐ
　−Ｇ　Ｉｙ−Ｃｙｓ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｌ
　ｙｓ　−Ｌ　ｅｕ　−１１ｅ　−Ｃｙｓ　−Ｔ　ｈｒ
　−Ｔ　ｈｒ　−Ａ　ｌａ　−Ｖ　ａｌ　−Ｐ　ｒｏ　
−Ｔ　ｒｐ　−Ａ　ｓｎ　−Ａｌａ−８ｅｒ−５その類
似物および切片および任意に、 （１１１）約５乃至５０重量部の一１１ｅ−Ｖａｌ−Ａ
ｒｇ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−５ｅｒ−Ｐｒｏ−Ｔｈｒ−８ｅ
ｒ−！１６−Ｌｅｕ−１その類似物および切片との混合
物を包含する漿液または体液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩに対
する抗体の検出およびＡＩＤＳ。

ＡＲＣ，またはプレＡＩＤＳ条件の診断のために有用な
ペプチド組成物が提供される。

３文字コードが命名されたアミノ酸に対応して使用され
たことを理解されたい。

Ａｌａ−アラニン Ａｒｇ−アルギニン Ａｓｎ−アスパラギン Ａｓｐ−アスパラギン酸 Ｇｌｎ−グルタミン Ｇｌｕ−グルタミン酸 ｃ＋ｙ−グリシン Ｌｅｕ−ロイシン Ｌｙｓ−リジン １１ｅ−イソロイシン Ｐｒｏ−プロリン Ｍｅｔ−メチオニン Ｓｅｒ目セクセ リンｒ−）レオニン Ｔｒｐ−トリプトファン Ｔｙｓ−チロシン Ｖａｌ■バリン Ｃｙｓ−システィン 体液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体の検出およびＡ
　Ｉ　ＤＳ、ＡＲＣ，またはプレＡＩＤＳ条件の診断の
ための感度の高く正確な方法は以下の工程を包含する。

Ａ、ａ、以下のアミン酸配列−Ａ　ｒｇ　−１ｌｅ　−
Ｌ　ｅｕ−Ａ　ｌａ　−Ｖａｌ　−Ｇ　Ｉｕ　−Ａｒｇ
　−Ｔｙｒ　−Ｌｅｕ　−Ｌｙｓ　−Ａ　ｓｐ　−Ｇ　
Ｉｎ　−Ｇ　！ｎ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｇ　Ｉ
ｙ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｃｙｓ　
−Ｓ　ｅｒ　−Ｇ　Ｉｙ　−Ｌ　ｙｓ　−Ｌ　ｅｕ　−
１ｌｅ　−Ｃｙｓ　−Ｔ　ｈｒ　−Ｔ　ｈｒ　−Ａ　Ｉ
ａ　−Ｖ　ａｌ　−Ｐ　ｒｏ　−Ｔ　ｒｐ　−Ａ　ｓｎ
　−Ａ　ｌａ　−Ｓ　ｅｒ−１その類似物および切片を
有するペプチド、または す、（ｉ）約１０乃至９５重量部の−Ａｒｇ−１１ｅ−
Ｌ　ｅｕ　−Ａ　ｌａ　−Ｖ　ａｌ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａ
　ｒｇ　−Ｔ　ｙｒ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｙｓ　−Ａ　
ｓｐ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｅ
ｕ　−Ｇ　ｌｙ　−１１ｅ　−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　ｌｙ　
−Ｃｙｓ　−Ｓ　ｅｒ　−１その類似物および切片、 （１１）約５乃至９０重量部のＩ　Ｉｅ　−Ｔ　ｒｐ　
−Ｇ　１ｙ−Ｃｙｓ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｇ　Ｉｙ　−Ｌ　
ｙｓ　−Ｌ　ｅｕ　−１１ｅ　−Ｃｙｓ　−Ｔ　ｈｒ　
−Ｔ　ｈｒ　−Ａ　ｌａ　−Ｖ　ａｌ　−Ｐ　ｒｏ　−
Ｔ　ｒｐ　−Ａ　ｓｎ　−Ａｌａ−８ｅｒ−１その類似
物および切片、および任意に、 （１１１）約５乃至５０重量部の一１１ｅ−Ｖａｔ　−
Ａ　ｒｇ　−Ｍ　ｅｔ　−Ｔ　ｙｒ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｐ
　ｒｏ　−Ｔ　ｈｒ　−Ｓ　ｅｒ　−１１ｅ−Ｌｅｕ−
１その類似物および切片との混合物とから選択されたペ
プチド組成物を調製する工程、 Ｂ、免疫検査工程中抗原としてペプチド組成物の１試験
につき約０．１ｕｇ乃至約２０ｕｇを使用する工程。

さらに、本発明によれば、タンパク質または重合体担体
に結合された場合、または重合体形態の場合のペプチド
が人間を含む健康な哺乳類のＨＴＬＶ−ＩＩＩまたはＬ
ＡＶに対する抗体の生成を促進するために使用すること
ができる。この方法は、有効量のペプチド組成物の導入
を包含し、各ペプチドは、腹腔内注射または皮下注射に
よる健康な哺乳類の体に入れるヒトの漿液アルブミンの
ようにタンパク質に複合される。

発明の詳細な説明 本発明によれば、ペプチド組成物は体液中のＨＴＬＶ−
ＩＩＩに対する抗体の検出、健康な哺乳類のＨＴＬＶ−
ｍまたはＬＡＹの抗体生成を刺激することによる健康な
哺乳類の種痘、および哺乳類のＨＴＬＶ−ＩＩＩに対す
るモノクーロンおよびポリクーロンの成長のためのＡ　
Ｉ　ＤＳ、ＡＲＣ，およびプレＡＩＤＳ診断のために化
学的に合成され調製された。

ペプチド組成物は、 Ａ、ａ、以下のアミノ酸配列−Ａ　ｒｇ　−１１ｅ　−
Ｌ　ｅｕ−Ａ　１ａ−Ｖ　ａｌ　−Ｇ　Ｉｕ　−Ａ　ｒ
ｇ　−Ｔ　ｙｒ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｙｓ　−Ａ　ｓｐ
　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｅｕ　
−Ｇ　ｌｙ　−Ｉ　ｌｅ　−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　Ｉｙ　−
Ｃｙｓ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｌ　ｙｓ　−Ｌ　
ｅｕ　−１１ｅ　−Ｃｙｓ　−Ｔ　ｈｒ　−Ｔ　ｈｒ　
−Ａ　ｌａ　−Ｖ　ａｌ　−Ｐ　ｒｏ　−Ｔ　ｒｌ）　
−Ａ　Ｓｎ　−Ａ　ｌａ　−Ｓ　ｅｒ−１その類似物お
よび”切片を有するペプチド、または ８．２つのペプチドの混合物： （ｉ）以下の配列を有する約２１のアミノ酸、その類似
物または切片のの約１０乃至９５重量部のペプチド −Ａｒｇ　−Ｉ　Ｉｅ−Ｌｅｕ−Ａｌａ−Ｖａｌ−Ｇｌ
ｕ−Ａｒｇ　−Ｔ　ｙｒ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｙｓ　−
Ａ　ｓｐ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ
　ｅｕ　−Ｇ　ｌｙ　−１１ｅ　−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　ｌ
ｙ　−Ｃｙｓ　−Ｓ　ｅｒ　−（ｌｉ）以下の配列を有
する約１９のアミノ酸、その類似物または切片の約５乃
至９０重量部のペプチド −Ｉ　Ｉｓ　−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　Ｉｙ　−Ｃｙｓ　−Ｓ
　ｅｒ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｌ　ｙｓ　−Ｌ　ｅｕ　−１１
ｅ　−Ｃｙｓ　−Ｔｈｒ　−Ｔｈｒ　−Ａ　ｌａ　−Ｖ
ａｌ　−Ｐ　ｒｏ　−Ｔ　ｒｐ　−Ａ　ｓｎ　−Ａ　ｌ
ａ　−Ｓ　ｅｒ　−を包含する。

混合物はさらに、以下の配列を有する約１１のアミノ酸
、その類似物または切片の５乃至５０重量部のペプチド
を包含し得る。

−Ｉ　Ｉｅ−Ｖａｔ−Ａｒｇ−Ｍｅｔ−Ｔｙｒ−８ｅｒ
−Ｐｒｏ　−Ｔ　ｈｒ　−Ｓ　ｅｒ　−１１ｅ　−Ｌ　
ｅｕ　−各ペプチドは、前記配列の末端アミノ酸に付加
されたより多くのアミノ酸、または各ペプチドのいずれ
かの末端からより少ない末端アミノ酸を有することによ
ってより短いまたはより長いペプチド鎖を包含し得る。

ＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する優性抗体によって認識できる
３つのペプチドの３次元構造が保持される限り、合成ペ
プチド組成物は前記配列のアミノ酸の類似物を包含し得
ると思われる。“類似物°と言う贋は、全ペプチド、タ
ンパク質、その部分、アミノ酸基の置換物を含有するペ
プチド、アミノ酸の挿入および／または消去、またはペ
プチドの重合体形態を含む。これら類似物は、ＨＴＬＶ
−ＩＩＩに対する抗体の生成を検出および／または示す
ために使用できる。

体液中のＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体の検出およびＡ
ＩＤＳＳＡＲＣ，およびプレＡＩＤＳ条件の診断のため
の試薬として有用なペプチド組成物中の３５マー、２１
マー、および１９マー　ペプチドのアミノ酸配列は、ｐ
４１として指定されたＨＴＬＶ−ｍウィルスのアミノ酸
配列の部分的切片、ｐ１６０の一部、ＬＯＲ（ロング　
オーブンリーディング）切片に対応するように調製され
、ＨＴＬＶ−ｍウィルスのエンベロープタンパク質を規
定する。１１７−　ペプチドのアミノ酸配列は、ｐ２４
として指定されたＨＴＬＶ−ｍウィルスコアタンパク質
のアミノ酸配列の部分切片、つまりギャグ切片に対応す
るように調製される。

ＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体検出のための固相吸着剤
として有用なペプチドは、以下の略図によって同相ペプ
チド合成の“古典的”メリフィールド（Ｍｅｒｒｌｆｉ
ｅｌｄ　）方法によって合成された。

前記略図に従うと、Ｂｏｃ−アミノ酸はレジンに付加さ
れ、３５マー　ペプチド、２１７−　ペプチド、１９マ
ー　ペプチド、および１１マー　ペプチドを調製する。

各ペプチドの類似物は、所望のＢｏａ−アミノ酸を加え
るまたは削除することによって前記配列を変化させるこ
とによって調製できる。

レジンの所望のブロックされたペプチドの組合わせを完
成させると、ペプチド−レジンは無水フッ化水素酸で処
理され、ペプチドを解放するためにペプチドに結合する
ベンジル　エステルを分割する。合成の間にベンジル誘
導プロブキング基によってブロックされるアミノ酸の側
鎖官能基もまたペプチドから同時に分割される。遊離の
ペプチドは次いで、逆相高圧液体クロマトグラフィ　（
ＨＰＬＣ）によって分析され精製され、アミノ酸分析に
よって生化学的に特徴付けられる。

同様に、Ｃ−末端のアミド基を有する各ペプチドの合成
は、以下の略図によって４−メチルベンズヒドリルアミ
ン　レジンを使用することによって行われる。

前記工程によって合成されたペプチド組成物はＨＴＬＶ
−ＩＩＩに対する抗体に非常に反応し、ＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉに対する抗体の検出のための感度の高い、正確な、信
頼できる、特有の免疫吸着剤として使用できる。本発明
によるペプチド組成物から得られた結果は、ＡＩＤＳ診
断の基準的方法であるウェスタン　プロット法より体液
中のＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体に感度がよく特有で
あることことを示す。表１１■、および■を参照。

表■からは、３５マー　ペプチドが最も高い免疫反応を
有することがわかる。しかしながら、長鎖ペプチドを合
成するのは非常に困難で高価であるため、３５マー　ペ
プチドと重なるアミノ酸配列を有する２１マーおよび１
９マー　ペプチドの混合物を使用することが好ましい。

これは、ペプチドのが長さが増加すると合成工程の収率
が低くなるためである。

ＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体の免疫反応の本発明によ
るペプチド組成物の感度と特性の程度に基づいて、Ａ　
Ｉ　ＤＳ、ＡＲＣ，またはプレＡＩＤＳ条件に対するワ
クチンとしてまた哺乳類のＨＴＬＶ−■に対するモノク
ーロンおよびポリクーロンの両方の成長のための免疫原
として有用であると思われる。３５マー　ペプチドとし
ての、またはペプチドそれ自体の混合物としての、また
はタンパク質または重合体担体に結合された場合のペプ
チド組成物は、ＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体の生成を
促進し健康な個人のＨＴＬＶ−ｍまたはＬＡＹによる感
染に対する保護を与えるために通常の患者に使用される
。本発明によるペプチド組成物はウィルスから生化学的
に得られないため、ワクチン投与しなければならない通
常の患者を病気にさらす危険がない。

担体タンパク質としてヒトの漿液アルブミン（Ｉ　Ｓ　
Ａ）に接合された２１マー　ペプチドは健康なりａｌｂ
／ｃマウスに腹腔内注射および皮下注射すると、ＨＴＬ
Ｖ−ｍと密接に反応する２１７−　ペプチドに対する抗
体がＢａ１ｂ／ｃマウスによって生成された。特許出願
第８４７．１０２号明細書および表■を参照。

得られた結果は、２１マー　ペプチドもまた哺乳類のＨ
ＴＬＶ−ＩＩＩに対してモノクーロンおよびポリクーロ
ンの両方の成長のための免疫原として有用であることを
示す。

２１マー　ペプチドから得られた結果に基づいて、ペプ
チド組成物はＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体の生成を促
進し、健康な個人のＨＴＬＶ−ｍまたはＬＡＶによって
感染に対して保護を与えると思われる。また、ペプチド
組成物は哺乳類のＨＴＬＶ−ＩＩＩに対するモノクーロ
ンおよびポリクーロン抗体の両方の成長のための抗原と
しても有用であると思われる。特許出願第８４７．１０
２号明細書、例７および表■を参照。

本発明によるペプチド組成物を使用する利点は多数ある
。

ペプチド組成物は、化学的に合成される。これは、試験
薬またはワクチン製造工程の間にＨＴＬＶ−ｍウィルス
が関与しないということである。ワクチン調製またはワ
クチン注射工程の間、製造作業員、衛生関係の健康な人
間やワクチンなる危険性はない。同様に、哺乳類のＨＴ
ＬＶ−ＩＩＩに対するモノクーロンまたはポリクーロン
抗体の成長のためにペプチド組成物を使用するときにＨ
ＴＬＶ−ＩＩＩにさらされる危険性はない。さらに、試
薬を漿液または体液のサンプルにさらすＨＴＬＶ−ＩＩ
Ｉに対する抗体を検出するための最終試験工程まで、実
験作業員がＨＴＬＶ−ウィルスにさらされる危険性はな
い。また、この最終段階でのこの様な危険は、試験され
る漿液または体液のサンプルを３０分間６０℃で加熱す
ることによって存在し得るライスルを非活性化する予防
段階を取ることによって阻止することができる。

もう一つの問題は、ＨＴＬＶ−ｍと共純化されたＨ９細
胞または発現ウィルス断片と共純化されたタンパク質か
ら得られたＥ　−Ｃｏｉｌからの抗原材料の存在によっ
て誤って陽性結果を示す可能性があるということである
が、この問題も本発明の工程によって解決される。ある
通常の個人はＥ。

Ｃｏ１ｔまたはヒト白血球抗原、たとえば、Ｈ９細胞か
らの抗原材料とクロス反応性であるＨＬＡに対する抗体
を有することがある。これら通常の個人からの漿液サン
プルはＨＴＬＶ−Ｉｌｌに対して暴露されなくても、Ｅ
ＬＩＳＡまたはＩ　ＲＭＡ試験で陽性反応を示す可能性
がある。このタイプの誤った陽性反応に基づいてＡＩＤ
Ｓと診断されるとその人とその家族に酷い心配をさせ、
通常の社会活動から排斥されなければならない。これら
問題はすべて試薬として本発明のペプチドを使用するこ
とによって阻止することができる。

この問題と関連した第３の問題は誤って陰性反応を示す
可能性があることである。２１マー　ペプチドのみを使
用する結果は約９８％で正確であるが抗原としてペプチ
ド組成物を使用する結果は以下のような切断点を使用し
て１００％正確になる。

切断点−０，ｌＸＡ４９２　　（ＲＣ）＋ｌＸＡ４９□
（ＮＲＣ） Ａ４９２　　（ＲＣ）は反応対照に対する吸収度表示で
あり、Ａ４９□　（ＮＲＣ）は非反応対照の吸収度表示
である。

実際に、ある場合に本発明のペプチド組成物を使用する
ＥＬ　Ｉ　ＳＡ方法は、標準的ウェスタンプロット試験
が陰性結果を示したにもかかわらず医療診断によって確
定された陽性を示した。これは、本方法がウェスタン　
プロット試験より正確であることを示す。

Ｂ型肝炎ワクチン検査のために本来的に選択された１９
７９年の後期から１９８２の間にニューヨーク市の健康
な同性愛者から集められた１４０の漿液変換標本を用い
て広範な臨床的試みが行われた。これら漿液サンプルは
ウェスタン　プロット試験と本発明のＨＴＬＶ−ｎＩＥ
Ｌ　Ｉ　ＳＡ試験を特徴付けた。試験の結果は、本発明
のペプチド組成物を使用するＥＬＩＳＡ方法の感度がウ
ェスタン　プロット分析より高いことを示した。さらに
、ウェスタン　プロット試験を用いてｐ２４、ｐ５５、
およびｐ１７の帯が現れる前にペプチド組成物を用いた
ＥＬ　Ｉ　ＳＡ方法を使用して１１人の個人に陽性の可
能性が示された。同様に、本発明のペプチド組成物のＥ
ＩＳＡ方法は、現在市販されているＥＬ　Ｉ　ＳＡ試験
キットより感度が高く早い診断結果を示した。

さらに、適切なアミノ酸類似物置換物を用いて、前記ア
ミノ酸配向に基づいた多数のペプチド類似物がＨＴＬＶ
−ｍ抗体スクリーニング検査に有用な固相に対して低い
バックグランド表示またはよい吸収能力を与える特性と
合成できると思われる。

前記アミノ酸配列に基づいた多数のペプチド類似物が調
製された。これら類似物とＡＩＤＳおよびＡＲＣ患者の
漿液中に存在する抗ＨＴＬＶ−ｍ抗体との反応は、例８
と表■で説明される。各ペプチドの同重量／容量に対す
るＥＬＩＳＡ試験の反応は、１００の反応を割当てられ
た２１マーペプチドの反応性と比較された。

Ｎ−末端から−Ａｒｇ−または一１１ｅ−１またはＣ−
末端から−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｃｙｓ　−Ｓ　ｅ
ｒ−の単なる削除、または−Ｌｙｓ−とＡｓｐ−との間
でこのペプチドを分割して１０および１１の２個のアミ
ノ酸を形成することがすべて２１マー　ペプチドによっ
て与えられた抗原性が大幅に喪失することになるという
点で、本発明の２１マー　ペプチドはその大きさと連鎖
がユニークである。さらに、Ｃ−末端から１２位置の−
Ｌｙｓ−が重要である、つまり−Ｌｙｓ−を１１のアミ
ノ酸を有する前記ペプチドに付加すると抗原性を十分に
回復する。同様に、−１１ｅ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ−Ｃｙｓ
−３ｅｒ−のようなＣ−末端アミノ酸もまた、抗原性に
おいて抗体−抗原反応に対して重要な役割を果たす。表
■、ペプチド４および６を参照。

１９マー　ペプチドの類似物は調製され、同様の結果を
生じた。表■を参照。１９７−　ペプチドもまた、１１
ｅ　−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｃｙｓ　−Ｓ　ｅｒの
アミノ酸配列をＮ−末端で２１マー　ペプチドと共有す
る。これはまた、この領域の重要性を明らかに示すもの
である。１９７−からの切片の削除によって抗原性が完
全に失われた。

１１マー　ペプチドは、ギャグ　タンパク質の切片に対
応するアミノ酸配列を有する。固相免疫吸着剤として１
１マー　ペプチドを使用したＥＬＩＳＡの結果とウェス
タン　プロット結果との比較によると、１１マー　ペプ
チドは非常に免疫反応することが分る。１５９のサンプ
ルが９２４で陽性を示し、１０７がウェスタン　プロッ
トによってｐ２４で陰性を示した全部で２６６のサンプ
ルを使用して、１１マー　ペプチドは１５９のうちの１
１４．１０７のうちの１０５に対応する結果を示した。

例１０およびＶを参照。

さらに、本発明のペプチドは合成して調製されたため、
品質を制御でき、結果として試験結果の再現性を保証で
きる。また各試験工程には非常に少量のペプチドが必要
であるだけで、ペプチド調製の価格は比較的低いことか
ら、ＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体の体液検査とＡ　Ｉ
　ＤＳ、ＡＲＣ，またはプレＡＩＤＳ診断、およびワク
チンの調製は比較的低価である。

本発明によって調製されたペプチド組成物は試薬として
酵素連結免疫吸着検査（ＥＬＩＳＡ）、酵素免疫斑点検
査、血球凝集検査または放射免疫放射線量検査（Ｉ　Ｒ
ＭＡ）を使用することにょうてＨＴＬＶ−ｍ感染の検出
、オヨヒＡ　Ｉ　ＤＳ。

ＡＲＣ，およびプレＡＩＤＳ条件の診断のために使用で
きるが、ＥＬＩＳＡが好ましい。２１マーおよび１９マ
ー　ペプチドの混合物を使用するＥＬ　Ｉ　ＳＡ技術は
例１に示され、２１マー　ペプチド、１９マー　ペプチ
ドおよび１１マー　ペプチドの混合物を使用するＥＬＩ
ＳＡ方法は例２に示される。

以下の方法では、０．２５重量％のグルタルデヒドを被
覆緩衝剤に添加して、プレートまたはビードによいペプ
チド結合を構成することに注意されたい。さらに、ホー
スラディツシュ　ペルオキシダーゼ接合マウス　七ツク
ーロン抗ヒトＩｇＧ抗体を第２抗体トレーサとしてホー
スラディツシュ　ペルオキシダーゼ接合山羊抗ヒトＩｇ
Ｇの代わりに使用できる。これら工程で有用なゼラチン
は牛皮ゼラチン、豚皮ゼラチン、魚ゼラチン、または既
知の入手できるゼラチンタンパク質を含むことができる
、またはアルブミンタンパク質を代用することができる
。

以下の例は本発明を説明し本発明の技術的範囲内にある
。

例１ 酵素結合免疫吸着検査による）ＩＴＬＶ−ＩＩＩに対す
る抗体検出 前述のように合成された１０：１の重量比の２１マーと
１９マー　ペプチドの混合物が調製された。

９６ウエル　プレートのウェルは１００ｕｌの０．１　
　Ｍ　　ＮａＨＣＯｉ緩衝剤、ｐＨ９，５中の１．Ｏｕ
ｇ／ウェルで２１マー　ペプチドおよび１９マー　ペプ
チドの混合物で１時間３７℃で被覆された。ウェルはフ
ォスフェート緩衝塩水（Ｐ　Ｂ　Ｓ）で３度洗浄し、次
いで、ＰＢＳ中で３７℃で１時間２５０ｕｌの３重量％
のゼラチンで培養し、不特定のタンパク質結合座をブロ
ックし、次いで０．０５容量％のツイーン（Ｔ　ｖｅｅ
ｎ）　２０を含有するＰＢＳでさらに３度洗浄した。試
験漿液（人間の患者または通常の個人から得られた血液
）は、２０容量％の通常の山羊漿液、１重量％のゼラチ
ン、および０．０５容量％のツイーン２０を含有するＰ
ＢＳ中で、容量対容量が１：２０の希釈でそれぞれ希釈
された。２００ｕｌの希釈漿液を各ウェルに添加し、３
７℃で１５分間反応させた。ウェルは次いで不結合抗体
を取除くためにＰＢＳ中で０．０５容量％ツイーン２０
で６度洗浄した。ホースラディツシュ　ペルオシダーゼ
接合山羊抗ヒトＩｇＧが第２抗体トレーサとして使用さ
れ、陽性ウェルで形成されたＡＩＤＳ抗体−抗原コンプ
レックスと結合させた。１容量％の正常な山羊漿液、Ｐ
ＢＳ中の０．０５容量％のツイーン２０中で１　：　３
０００希釈で１００ｕｌのペルオキシダーゼ積置山羊抗
ヒトＩｇＧが各ウェルに添加され、３７℃でもう１５分
間培養された。

ウェルはＰＢＳ中の０．０５容量％のツイーン２０で６
度洗浄して不結合抗体を取除き、ｐＨ５のナトリウム　
シトレート緩衝剤中で０．０４重量％のオルトフェニレ
ンジアミン（ＯＰＤ）と０．０１２容量％の過酸化水素
を含有する１００ｕ１の基質混合物と反応させた。混合
物は３７″で１５分間培養された。この基質混合物は、
着色生成物を形成することによってペロキシダーゼ標識
を検出するために用いられた。反応は１００ｕｌの２、
Ｎ　　Ｈ２ＳＯａの添加によって止められ、４９２　ｎ
ｓで色の量を測定する（つまりＯＤは４９２ｎＩＩＩに
測定された）ＥＬＩＳＡリーダーを試用して色の収率を
測定した。検査は、１：２０希釈で行った。正常な漿液
サンプルが非反応対照として試用された。ＡＩＤＳと診
断された個体から得られた通常の漿液サンプルは反応対
照として含まれる。以下の式に従って決定された切断吸
着以上の吸着性は陽性であった。

切断点−〇、ＩＸＡ４Ｇ□　（ＲＣ）　＋Ｉ　ＸＡ４９
２（ＮＲＣ） Ａ４９２　　（ＲＣ）は反応対照に対する吸着炭表示で
あり、Ａ４ｇ□　（ＮＲＣ）は非反応対照に対する吸着
炭表示である。結果は表Ｉに示される。

表　　Ｉ 患者の診断名　　　　　　　　　　　　　　　　ＥＬＩ
ＳＡ　　ウェスタンプロット 後天性免疫不全症候群　　　　　　　　　　　　１８７
　／１８７　１８Ｂ　／１８７小児性Ａ　Ｉ　Ｄ　Ｓ　
　　　　　　　　　　　　　　　１１／１１　　　１１
／１１ＡＩＤＳ関連コンプレツクス　　　　　　　　　
　ｌｉＢ　／１１８　１１Ｂ　／１１Ｂ持続性の一般的
リンパ節症　　　　　　　　　　２９／２９　　　２９
／２９リンパ腺症　　　　　　　　　　　　　　　　　
６／７　　　８／’１健康な同性愛者　　　　　　　　
　　　　　　　４８１５７　　　４ｇ１５７トランスセ
クシヤル　　　　　　　　　　　　　１／１　　　１／
１バイセクシヤル　　　　　　　　　　　　　　　０７
８　　　０／３静脈注射による麻薬常用者　　　　　　
　　　　２０／２１　　　２０／２１ＡＩＤＳ患者の性
交相手　　　　　　　　　　　１２／１，８　　　１２
／１Ｂ血友病　　　　　　　　　　　　　　　　　　　
８／８　　　　Ｂ／８輸血　　　　　　　　　　　　　
　　　　　　　３／３　　　３／３特発性血少板減少紫
斑　　　　　　　　　　　　１／１　　　１／１非ＡＩ
ＤＳカポシ肉腫　　　　　　　　　　　０／３　　　　
Ｇ／３衛生関係作業員（はとんどは針を使う仕事）　　
　Ｏ／１４　　　０／１４急性骨髄性白血病　　　　　
　　　　　　　　　０　／１２　　　　Ｇ　／１２慢性
骨髄性白血病　　　　　　　　　　　　　　０／２　　
　０／２急性リンパ球性白血病　　　　　　　　　　　
　　０／８　　　　Ｇ／８慢性Ｂ型リンフ勺求性白血病
　　　　　　　　　　　　０　／３２　　　０　／８２
慢性Ｔ型リンパ球性白血病　　　　　　　　　　　　０
／２　　　　　Ｇ／２非ホジキンリンパ！！Ｉ　　　　
　　　　　　　　　　　Ｏ／４　　　　Ｇ／４ホジキン
病　　　　　　　　　　　　　　　　０／ｌ　　　　Ｏ
／１菌状息肉ｍ　　　　　　　　　　　　　　　　　　
Ｏ／１　　　０／１共通変化免疫不全、低ガンマグロブ
リン症　　　０　／２５　　　０　／２５および胸腺腫
を含む初期免疫不全 ガンマグロブリン調製　　　　　　　　　　　　　０／
１　　　　　Ｇ／ＩＨＴＬＶ−ｍ感染に関係しない他の
病気ウィルス感染　　　　　　　　　　　　　　　　　
１／６　　　１／６サーコイドシス　　　　　　　　　
　　　　　　　０／２　　　　Ｇ／２乳頭腫患者　　　
　　　　　　　　　　　　　　０／１　　　　Ｇ／１非
ＡＩＤｓ　　　　　　　　　　　　　　　　　Ｏ／３　
　　０／３正常の対照　　　　　　　　　　　　　　　
　　０　／３８　　　０　／３ＢＡＩＤＳ患者の兄弟　
　　　　　　　　　　　　０／ｌ　　　　Ｏ／ＩＡＩＤ
Ｓ患者の娘　　　　　　　　　　　　　　０／１　　　
０／ＩＡＩＤＳ患者の妻　　　　　　　　　　　　　　
１／２　　　１／２ＡＩＤＳ患者の幼児　　　　　　　
　　　　　　０／ｌ　　　　Ｏ／１アボット試験による
繰返し反応　　　　　　　　　７１５４　　　７１５４
４５０　／６’１４　４４９　／６７４６４７の漿液サ
ンプルを用いた本発明のＥＬＩＳＡ試験工程の表１の結
果は、本方法が非常に正確で特性が高いことを示す。Ａ
ＩＤＳまたはＡＲＣに感染していないと識別された通常
の人間または患者には免疫反応が見出だされなかった。

実際に、ＥＬＩＳＡの結果によってウェスタンプロット
分析で見逃したＡＩＤＳの医療診断が確定された。

切断点吸収度表示が非常に厳格であることに注意された
い。多くの臨床的試験データ１０，０００以上）に基づ
いて統計的に決定された。

例２ ウェルプレートが１０：１：１の重量比の２１７−　ペ
プチド、１９マー　ペプチド、および１１マー　ペプチ
ドの混合物で予め被覆された以外は例１の工程は例１と
同じ漿液サンプルを使用して繰返された。結果は表■に
示される。

表　　■ 患者の診断名　　　　　　　　　　　　　　　　ＥＬＩ
ＳＡ　　ウェスタンプロット 後天性免疫不全症候群（ＡＩＤＳ／ＫＳ、　　　　１８
７／１８７　１８Ｂ／１８７ＡＩＤＳ／ＩＶＤＡ、ＡＩ
ＤＳ／ＨＤ。

ＡＩＤＳｌｏｌ等） 小児性Ａ　Ｉ　Ｄ　Ｓ　　　　　　　　　　　　　　　
　１１／１１　　　１１／１１ＡＩＤＳ関連フンブレツ
クス　　　　　　　　　　１１６　／１１８　１１Ｂ　
／１１Ｂ持続性の一般的リンパ節症　　　　　　　　　
　２９／２９　　　２９／２７リンパ腺症　　　　　　
　　　　　　　　　　　　６／７　　　　Ｂ／７健康な
同性愛者　　　　　　　　　　　　　　　　４Ｂ１５７
　　　４８１５７トランスセクシヤル　　　　　　　　
　　　　　　ｌ／１１／ｌ−パイセクシャル　　　　　
　　　　　　　　　　０／３　　　０／１静脈注射によ
る麻薬常用者　　　　　　　　　　２０／２１　　　２
０／２１ＡＩＤＳ患者の性交相手　　　　　　　　　　
　１２／１８　　　１２／ｌｇ血友病　　　　　　　　
　　　　　　　　　　１３７６　　　６／６輸血　　　
　　　　　　　　　　　　　　　　　３／３　　　３／
３特発性血少板減少紫斑　　　　　　　　　　　　１／
ｌ　　　　１／１非ＡＩＤＳカポシ肉！ｉ　　　　　　
　　　　　　　０／３　　　０／３衛生関係作業員（は
とんどは針を使う仕事）Ｏ／１４　　　０／１４急性骨
髄性白血病　　　　　　　　　　　　　　　０　／１２
　　　０　／１２急性リンパ球性白血病　　　　　　　
　　　　　　０／８　　　０／８慢性Ｂ型リンパ球性白
血病　　　　　　　　　　　　０　／１２　　　０　／
３２慢性Ｔ型リンノ９求性白鯛　　　　　　　　　　　
　　０／２　　　　０／２非ホジキンリンパ腫　　　　
　　　　　　　　　０／４　　　０／４ホジキン病　　
　　　　　　　　　　　　　　０／ｌ　　　　Ｏ／１毛
状細胞白血病　　　　　　　　　　　　　　　　１／２
　　　１／２マクログロブリン血病　　　　　　　　　
　　　　０／１　　　　０／１菌状息肉腫　　　　　　
　　　　　　　　　　０／１　　　　Ｇ／１共通変化免
疫不全、低ガンマグロブリン症　　　０　／２５　　　
０　／２５および胸腺腫を含む初期免疫不全 ガンマグロブリン調製　　　　　　　　　　　　　　０
／１　　　　０／ＩＨＴＬＶ−ｍ感染に関係しない他の
病気ウィルス感染　　　　　　　　　　　　　　　　　
１／８　　　１／８サーコイドシス　　　　　　　　　
　　　　　　　Ｏ／２　　　０／２乳頭腫患者　　　　
　　　　　　　　　　　　　０／１　　　０／１非ＡＩ
ＤＳ　　　　　　　　　　　　　　　　Ｏ／８　　　　
Ｇ／３正常の対照　　　　　　　　　　　　　　　　　
０　／８８　　　０　／３ｇＡＩＤＳ患者の兄弟　　　
　　　　　　　　　　１／１　　　１／ＩＡＩＤＳ患者
の娘　　　　　　　　　　　　　　０／１　　　０／Ｉ
ＡＩＤＳ患者の妻　　　　　　　　　　　　　　１／２
　　　１／２ＡＩＤＳ患者の幼児　　　　　　　　　　
　　　０／１　　　０／１アボツト試験による繰返し反
応　　　　　　　　　７１５４　　　７１５４前記結果
によれば、１１マー　ペプチドもまた免疫検査工程に含
まれることができ、２１７−および１９マー　ペプチド
の混合物に対して示されたような結果を示す。

例３ ９６ウエルのフレキシブル−ポリビニルクロライド（Ｐ
ＶＣ）プレートのウェルは前述のように調整された１０
：１：１の重量比の２１マー　ペプチド、１９マー　ペ
プチド、および１１マーペプチドの混合物で１００ｕｌ
の０．１ＭＮａＨＣＯｓ緩衝剤、ｐＨ９，５中でで１．
Ｏｕｇ／ウェルで３７℃で被覆された。ウェルはフォス
フェート緩衝塩水（Ｐ　Ｂ　Ｓ）で３度洗浄し、次いで
３７℃で１時間ＰＢＳ中で２５０ｕｌの３重量％のゼラ
チンで培養し非特定タンパク質結合座をブロックし、０
．０５容量％のツイーン２０を含有するＰＢＳでさらに
３度洗浄する。試験漿液（人間の患者または通常の個人
から得られた血）は２０容量％の通常の山羊の漿液、１
重量％のゼラチン、および０．０５容量％のツイーン２
０を１＝２０（容量：容量）の希釈比で希釈する。２０
０ｕｌの希釈漿液が、各ウェルに添加され、１５分間３
７℃で反応させる。ウェルは次いで不結合抗体を取除く
ためにＰＢＳ中で０．０５容量％のツイーン２０で６度
洗浄した。ｌ　１２５標識親和性精製山羊抗ヒトＩｇＧ
（Ｆｃ）が陽性ウェルで形成された抗体−抗原コンプレ
ックスと結合する第２抗体トレーサとして使用される。

１容量％の通常の山羊漿液、ＰＢＳ中０．０５容量％の
ツイーン２０中の１００ｕｌの１１２う標識山羊抗ヒト
ＩｇＧの５０゜０００−２００．０００Ｃｐ−をウェル
に添加して、３７℃で１５分間培養された。

ウェルはＰＢＳ中０．０５容量％のツイーン２０で６度
洗浄し不結合第２抗体を取除き乾燥させた。ウェルは切
断されガンマ−シンチレーション　カウンタによって計
数される。１：２０の容量：容量の希釈で検査が行われ
る。陰性対照としての通常の漿液サンプルが同時に試験
された。通常の漿液サンプル＋４３Ｄ（標識偏差）の平
均表示より高いＣｐ−表示を陽性とする。

例４ １１の完全に洗浄されたヒト血液細胞、雄牛の赤血細胞
、ゼラチン粒子、またはポリスチレンラテックス　ピー
ドを２１マー　ペプチドと１９７−　ペプチドの１０：
１重量比の混合物で１　ｕｇ／■ｌ乃至ＩＢ／ｍｌの濃
度で被覆する。被覆細胞、粒子、またはビードは次いで
多重ウェルＵ形または格子形マイクロプレートのウェル
で連続して希釈された漿液サンプルで培養する。約１時
間室温で放置した後、底部の凝集反応パターンを読み、
陽性反応を示す最も大きい希釈を記録する。

これは、漿液または生物の体液を含む標本の抗−ＨＴＬ
Ｖ−ＩＩＩ抗体の存在の定性および定量分析の両方に使
用できる１段階検査である。

帆ｊ ＨＴＬＶ−ｍ抗体検出に対すルＡ　Ｉ　ＤＳ。

ＡＲＣ，およびプレＡＩＤＳ特定試験キットを構成でき
る。試験キットは、１００ｕｌ、ｐＨ９，５０、１Ｍ　
　ＨａＨＣＯ３緩衝剤／ウェル中の本発明のペプチド組
成物のｌｏｇで使用する前に被覆された多重９６ウエル
プレートを含む区分した囲いを包含する。キットはさら
に、１）正常の人間の漿液（非反応対照として）、２）
熱不活性化ＮＰ４０可溶化ＡＩＤＳ漿液（反応対照とし
て）、３）正常山羊漿液、４）ペルオキシダーゼ標識山
羊抗ヒトＩｇＧ、および５）フォスフェート　シトレー
ト緩衝剤中のオルトフェニレンジアミン（ＯＰＤ）およ
び過酸化水素からなる色変化表示体、からなる別々の密
閉容器中の酵素検出のための材料を包含する。例１で説
明された工程は以下の通りである。

この試験キットでは、本発明のペプチドで予め被覆され
た９６−ウェルはポリスチレン　ビード、ラテックス粒
子、または孔サイズを制御したガラスビードで充填され
た多重ミニカラム、または固相免疫吸着として使用され
る本発明のペプチドで予め被覆されたニトロセルローズ
紙小片と代用できる。

例６ 免疫放射線量検査（Ｉ　ＲＭＡ）を使用する抗体検出の
ための第２の試験キットは、１００ｕｌのｐＨ９，５０
，１Ｍ　　ＮａＨＣＯ３緩衝剤／ウェルの濃度で、本発
明によるペプチド組成物で予め被覆された多重９６−ウ
ェル屈曲性ポリビニルクロライド（ＰＶＣ）プレートを
含有する区分した囲いおよび１）正常の人間の漿液（非
反応対照として、２）熱井活性化ＮＰ４０可溶化ＡＩＤ
Ｓ漿液（反応対照として）、３）正常の山羊漿液、およ
び４）■＋２５標識被覆抗ヒトＩｇＧを含む放射線免疫
検査のための材料を包含する。例３で説明された工程に
従って行われた。

この試験キットでは、本発明のペプチドで予め被覆され
た９６−ウェルＰｖＣプレートは固相免疫吸着剤として
使用される本発明のペプチドで予め被覆されたポリスチ
レンで代用できる。

例７ 血球凝集検査を使用するＨＴＬＶ−ｍ抗体検出のための
第３の試験キットは、（１）１びんのヒトＯ型赤血細胞
、雄牛の毒血細胞、１０：１：１の重量比のペプチド組
成物の混合物で予め被覆されたゼラチン粒子またはラテ
ックス　ポリスチレン　ビード、（２）正常の人間の漿
液（非反応対照として）、および（３）熱弁活性化ＮＰ
４０可溶化ＡＩＤＳ陽性漿液（反応対照として）を含む
血球凝集検査のための材料、および多重Ｕ形または格子
形マイクロプレートを含む区分した囲いを包含した。例
４で説明された工程に従って行われた。

例８ ３５マー　ペプチド、１９マー　ペプチド、１１マー　
ペプチド、および２１マー　ペプチドの８の類似物、お
よびオーバーラツプ１９マーペプチドが前述の古典的メ
リフィールド方法によってアミド形で調製された。各類
似物のアミノ酸配列は表■に示される。

１　ｕｇ／ウェル　レベルの多種のペプチドの免疫反応
性は、プールしたＡＩＤＳ漿液サンプルを使用して試験
された。各ペプチドの反応性は、１００％に設定された
２１マー　ヘプチドの反応性と比較された。

例９ ２１マー　ペプチドと１９マー　ペプチドの混合物の変
化量 例１で説明された工程に従って、１０：１：２５乃至４
：１の多数の重量比の１９マー　ペプチドと２１マー　
ペプチドとの混合物が免疫吸着剤として使用された。ウ
ェルは１ｕｇの混合物で被覆された。使用された漿液サ
ンプルはＡＩＤＳに対して陽性と診断された患者からの
２つのサンプルと、自己免疫病の患者からの２つのサン
プルであった。２つのＡＩＤＳ陽性サンプルは、５００
のＨＴＬＶ−ｍ陽性ＡＩＤＳ漿液標本に対して検査され
、免疫吸着剤として２１マー　ペプチドのみを使用した
ＥＬＩＳＡで陰性を示していた。結果は表■に示される
。結果は、２１７−　ペプチドと１９マー　ペプチドが
２１７−　ペプチドのみより正確な結果を与えることを
示す。

例１０ １　ｕｇの１１マー　ペプチドを９６−ウェル　プレー
トの各ウェルを被覆するために使用した。例１の工程に
従った。２６６の漿液サンプルが１１７−被覆プレート
で検査された。結果は表Ｖに示される。ウェスタンプロ
ット分析によって漿液−陽性を示した１５９のサンプル
のうち、１１マーペプチドは１１４のサンプルと反応を
示した。

ウェスタンプロット分析によって漿液−陰性と示された
１０７のサンプルのうち、１１マー　ペプチドは１０５
のサンプルと非反応性を示した。

結果は、１１マー　ペプチドがＨＴＬＶ−ＩＩＩに対す
る抗体と免疫反応することを示す。

表　　Ｖ １１７−　ペプチドを使用するＥＬＩＳＡとウェスタン
プロット方法との比較 ＥＬＩＳＡ　　　　　　　　　　　　　ウェスタンプロ
ットｐ２４””　　ｐ２４”’　　　　　　　　　ｐ２
４“　　ｐ２４−（ａ）　−ｐ２４　　陽性 （ｂ）　−ｐ２４　　陰性 例１１ 以下のアミノ酸配列を有する類似ペプチドはＨＴＬＶ−
ｍの多種の細胞株の膜内外領域の既知のアミノ酸配列に
基づいて合成された。

１　、　Ａｒｇ　−Ｖａｌ　−Ｌｅｕ　−Ａ　Ｉａ　−
Ｖａｔ　−Ｇ　ｌｕ　−Ａｒｇ−Ｔ　ｙｒ　−Ｌ　ｅｕ
　−Ａ　ｒｇ　−Ａ　ｓｐ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｇ　Ｉｎ　
−Ｌ　ｅｕ　−Ｌ　ｅｕ　−Ｇ　Ｉｙ　−１１ｅ　−Ｔ
　ｒｐ　−Ｇ　Ｉｙ　−Ｃｙｓ　−Ｓ　ｅｒ’はＡＲＶ
−雰離体に基づく。

２、　　Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｌｅｕ−Ａ　Ｉａ−Ｖａｌ−
Ｇ　ｌｕ−Ａｒｇ−Ｔ　ｙｒ−Ｌ　ｅｕ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ
　ｓｐ−Ｇ　Ｉｎ−Ａ　ｒｇ−Ｌ　ｅｕ−Ｌｅｕ−Ｇｌ
ｙ−Ｍｅｔ−Ｔｒｐ−Ｇｌｙ　−Ｃｙｓ　−Ｓｅｒはザ
イールからのＭＡＬ単離体に基づく。

３、　Ａｌａ−Ａｒｇ−Ｖａｌ−Ｔｈｒ−Ａｌａ　−１
１ｅ−Ｇｌｕ−Ｌ　ｙｓ　−Ｔ　ｙｒ　−Ｌ　ｅｕ　−
Ｇ　Ｉｎ　−Ａ　ｓｐ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ａ　Ｉａ　−Ａ
　ｒｇ　−Ｌ　ｅｕ　−Ａ　ｓｎ　−Ｓ　ｅｒ　−Ｔ　
ｒｐ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｃｙｓ　−Ａ　Ｉａ　−Ｐ　ｈｅ
　−Ａ　ｒｇ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ｖ　ａｌ　−Ｃｙｓ　−
Ｈｉｓ　−Ｔ　ｈｒ　−Ｔ　ｈｒ　−Ｖ　ａｌ　−Ｐ　
ｒｏ　−Ｔ　ｒｐ−はＨＴＬＶ−ｍの西アフリカ単離体
に基づく。

合成ペプチド（１）と（２）　ハＨＴ　Ｌ　Ｖ　−ｍ　
Ｉ：対する抗体に対して陽性であることが既知の漿液合
成できることを示す。

に対して試験された。結果は、ペプチド（１）と（２）
がＨＴＬＶ−ＩＩＩに対する抗体に対して免疫反応性で
あることを示した。

ペプチド（３）はＨＴＬＶ−Ｈの西アフリカ単離体に対
する抗体に対して陽性であることが見出だされた漿液に
対して試験された。結果は、ペプチド（３）がＨＴＬＶ
−Ｈの西アフリカ単離体に対する抗体に対して免疫反応
性であることを示した。

以下のアミノ酸配列 Ａ　ｒｇ　−Ｖ　ａｌ　−Ｔ　ｈｒ　−Ａ　ｌａ　−１
１ｅ　−Ｇ　Ｉｕ　−Ｌ　ｙｓ　−Ｔ　ｙｒ　−Ｌ　ｅ
ｕ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ａ　ｓｐ　−Ｇ　Ｉｎ　−Ａ　Ｉａ
　−Ａ　ｒｇ　−Ｌ　ｅｕ　−Ａ　ｓｎ　−Ｓ　ｅｒ　
−Ｔ　ｒｐ　−Ｇ　ｌｙ　−Ｃｙｓ　−Ａ　Ｉａ　−を
有する合成ペプチドはＨＴＬＶ−ＩＩＩの西アフリカ単
離体に対して免疫反応性であることが実験的に決定され
た。

Claims (10)

【特許請求の範囲】
1. （１）アミノ酸配列、 【アミノ酸配列があります】、または 少なくとも１つのその類似物または切片を有する少なく
   とも１つのペプチドを包含することを特徴とする体液中
   のＨＴＬＶ−IIIに対する抗体の検出およびＡＩＤＳ、
   ＡＲＣまたはプレＡＩＤＳ条件の診断のためのペプチド
   組成物。
2. （２）（ｉ）アミノ酸配列 【アミノ酸配列があります】、 またはその類似物または切片を有する約２１のアミノ酸
   のペプチドの約１０乃至約５重量部と、（１１）アミノ
   酸配列、 【アミノ酸配列があります】、 またはその類似物または切片を有する約１９のアミノ酸
   のペプチドの約５乃至約９０重量部と、 また場合により （ｉｉ）アミノ酸配列 【アミノ酸配列があります】、 またはその類似物または切片を有する約１１のアミノ酸
   のペプチドの約５乃至約５０重量部と との混合物を包含することを特徴とする体液中のＨＴＬ
   Ｖ−IIIに対する抗体の検出およびＡＩＤＳ、ＡＲＣＮ
   またはプレＡＩＤＳ条件の診断ためのペプチド組成物。
3. （３）（Ａ）特許請求の範囲第１項または第２項記載の
   ペプチド組成物を調製し、 （Ｂ）免疫検査でＨＴＬＶ−IIIに対する抗体を検出す
   るために被覆抗原として有効量の該ペプチド組成物を使
   用する ことを包含することを特徴とするＨＴＬＶ−IIIに対す
   る抗体検出およびＡＩＤＳ、ＡＲＣ、またはプレＡＩＤ
   Ｓ条件の診断のための免疫検査方法。
4. （４）免疫検査はＥＬＩＳＡまたはＩＲＭＡである特許
   請求の範囲第３項記載の方法。
5. （５）各免疫検査に対して、１試験につき約０．１乃至
   約２０ｕｇのペプチドを抗原として使用する、または１
   試験につきｐＨ約７乃至約１０の緩衝剤中の約１ｕｇの
   ペプチド組成物を抗原として使用する特許請求の範囲第
   ４項記載の方法。
6. （６）免疫吸着剤は１試験につき特許請求の範囲第１項
   または第２項記載のペプチド組成物であることを特徴と
   するＨＴＬＶ−IIIに対する抗体検出およびＡＩＤＳ、
   ＡＲＣ、またはプレＡＩＤＳ条件診断のための試験キッ
   ト。
7. （７）特許請求の範囲第１項記載のアミノ酸配列または
   少なくとも１つのその類似物または切片を有する少なく
   とも１つのペプチドを包含する、または （ｉ）特許請求の範囲第２項記載のアミノ酸配列または
   その類似物または切片を有する約２１のアミノ酸のペプ
   チド （ｉｉ）特許請求の範囲第２項記載のアミノ酸配列また
   はその類似物または切片を有する約１９のアミノ酸のペ
   プチド （ｉｉｉ）特許請求の範囲第２項記載のアミノ酸配列ま
   たはその類似物または切片を有する約１１のアミノ酸の
   ペプチド との混合物を包含することを特徴とする哺乳類のＨＴＬ
   Ｖ−IIIに対する抗体生成を引出すワクチン、または哺
   乳類のＨＴＬＶ−IIIに対するモノクーロンまたはポリ
   クーロン抗体成長のための免疫原。
8. （８）ペプチド組成物はタンパク質または重合体に結合
   されるか、または重合体である特許請求の範囲第７項記
   載のワクチンまたは免疫原。
9. （９）タンパク質はヒト漿液アルブミンである特許請求
   の範囲第８項記載のワクチンまたは免疫原。
10. （１０）特許請求の範囲第７項乃至第９項のいずれか１
    項記載の免疫原を使用することを包含することを特徴と
    する哺乳類のＨＴＬＶ−IIIに対するモノクーロンまた
    はポリクーロン抗体の生成方法。