NO175482B - Peptidblanding for in vitro påvisning av antistoffer mot HTLV-III, anvendelse derav og prövesett for denne - Google Patents
Peptidblanding for in vitro påvisning av antistoffer mot HTLV-III, anvendelse derav og prövesett for denneInfo
- Publication number
- NO175482B NO175482B NO872473A NO872473A NO175482B NO 175482 B NO175482 B NO 175482B NO 872473 A NO872473 A NO 872473A NO 872473 A NO872473 A NO 872473A NO 175482 B NO175482 B NO 175482B
- Authority
- NO
- Norway
- Prior art keywords
- aids
- iii
- peptide
- htlv
- peptide composition
- Prior art date
Links
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 title claims abstract description 116
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title claims abstract description 34
- 238000000338 in vitro Methods 0.000 title claims description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 title abstract description 14
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 title description 3
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 claims abstract description 67
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims abstract description 46
- 238000000034 method Methods 0.000 claims abstract description 37
- 239000000427 antigen Substances 0.000 claims abstract description 17
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 claims abstract description 15
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 claims abstract description 15
- 210000001124 body fluid Anatomy 0.000 claims abstract description 12
- 239000010839 body fluid Substances 0.000 claims abstract description 12
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 claims abstract description 8
- 238000012360 testing method Methods 0.000 claims description 34
- 239000000872 buffer Substances 0.000 claims description 7
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 claims description 2
- 238000000576 coating method Methods 0.000 claims description 2
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 claims 1
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 claims 1
- 238000000099 in vitro assay Methods 0.000 claims 1
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 abstract description 19
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 abstract description 6
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 abstract description 6
- 230000035931 haemagglutination Effects 0.000 abstract description 6
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 abstract description 5
- 241000124008 Mammalia Species 0.000 abstract description 3
- 239000000020 Nitrocellulose Substances 0.000 abstract description 3
- 229920001220 nitrocellulos Polymers 0.000 abstract description 3
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 abstract description 3
- 238000003119 immunoblot Methods 0.000 abstract description 2
- 208000011580 syndromic disease Diseases 0.000 abstract description 2
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 abstract 2
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 35
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 23
- 229940024606 amino acid Drugs 0.000 description 23
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 21
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 21
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 21
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 16
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 16
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 13
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 13
- 108010010803 Gelatin Proteins 0.000 description 12
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 11
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 11
- 229920000159 gelatin Polymers 0.000 description 11
- 235000019322 gelatine Nutrition 0.000 description 11
- 235000011852 gelatine desserts Nutrition 0.000 description 11
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 10
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 10
- 239000008273 gelatin Substances 0.000 description 10
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 10
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 10
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 10
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 description 10
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 description 10
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 9
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 8
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 7
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 7
- 241000588724 Escherichia coli Species 0.000 description 6
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 description 6
- 238000002835 absorbance Methods 0.000 description 6
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 6
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 6
- 239000000463 material Substances 0.000 description 6
- GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 1,2-phenylenediamine Chemical compound NC1=CC=CC=C1N GEYOCULIXLDCMW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 5
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 5
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 5
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 5
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 5
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 5
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 5
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 4
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 4
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 4
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 210000003743 erythrocyte Anatomy 0.000 description 4
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 4
- 239000004816 latex Substances 0.000 description 4
- 229920000126 latex Polymers 0.000 description 4
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 4
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 4
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 4
- 101710094648 Coat protein Proteins 0.000 description 3
- 102100021181 Golgi phosphoprotein 3 Human genes 0.000 description 3
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 3
- 101710141454 Nucleoprotein Proteins 0.000 description 3
- 101710083689 Probable capsid protein Proteins 0.000 description 3
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 3
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 3
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 3
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 3
- 102000013415 peroxidase activity proteins Human genes 0.000 description 3
- 108040007629 peroxidase activity proteins Proteins 0.000 description 3
- 230000008569 process Effects 0.000 description 3
- 239000000700 radioactive tracer Substances 0.000 description 3
- 230000004044 response Effects 0.000 description 3
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000010998 test method Methods 0.000 description 3
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 3
- UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N (4-methylphenyl)-phenylmethanamine Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1C(N)C1=CC=CC=C1 UHPQFNXOFFPHJW-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 description 2
- 108010078791 Carrier Proteins Proteins 0.000 description 2
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N L-asparagine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- HRNLUBSXIHFDHP-UHFFFAOYSA-N N-(2-aminophenyl)-4-[[[4-(3-pyridinyl)-2-pyrimidinyl]amino]methyl]benzamide Chemical compound NC1=CC=CC=C1NC(=O)C(C=C1)=CC=C1CNC1=NC=CC(C=2C=NC=CC=2)=N1 HRNLUBSXIHFDHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M Sodium bicarbonate Chemical compound [Na+].OC([O-])=O UIIMBOGNXHQVGW-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 2
- 208000000389 T-cell leukemia Diseases 0.000 description 2
- 208000028530 T-cell lymphoblastic leukemia/lymphoma Diseases 0.000 description 2
- KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N Valine Chemical compound CC(C)C(N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- 239000012634 fragment Substances 0.000 description 2
- 238000004128 high performance liquid chromatography Methods 0.000 description 2
- 230000000652 homosexual effect Effects 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 2
- 230000000415 inactivating effect Effects 0.000 description 2
- 238000002955 isolation Methods 0.000 description 2
- 125000001360 methionine group Chemical group N[C@@H](CCSC)C(=O)* 0.000 description 2
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 2
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 2
- -1 parts thereof Proteins 0.000 description 2
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 2
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 2
- 241000251468 Actinopterygii Species 0.000 description 1
- 102000009027 Albumins Human genes 0.000 description 1
- 108010088751 Albumins Proteins 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N Asparagine Natural products OC(=O)C(N)CC(N)=O DCXYFEDJOCDNAF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 125000001433 C-terminal amino-acid group Chemical group 0.000 description 1
- 101710113614 DNA primase small subunit PriS Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Natural products NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 1
- GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N Heroin Chemical compound O([C@H]1[C@H](C=C[C@H]23)OC(C)=O)C4=C5[C@@]12CCN(C)[C@@H]3CC5=CC=C4OC(C)=O GVGLGOZIDCSQPN-PVHGPHFFSA-N 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 208000007766 Kaposi sarcoma Diseases 0.000 description 1
- QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N L-alanine Chemical compound C[C@H](N)C(O)=O QNAYBMKLOCPYGJ-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N L-valine Chemical compound CC(C)[C@H](N)C(O)=O KZSNJWFQEVHDMF-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000699666 Mus <mouse, genus> Species 0.000 description 1
- 241000699670 Mus sp. Species 0.000 description 1
- 229930040373 Paraformaldehyde Natural products 0.000 description 1
- 241001494479 Pecora Species 0.000 description 1
- ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N Proline Natural products OC(=O)C1CCCN1 ONIBWKKTOPOVIA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N Serine Natural products OCC(N)C(O)=O MTCFGRXMJLQNBG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M Sodium laurylsulphate Chemical compound [Na+].CCCCCCCCCCCCOS([O-])(=O)=O DBMJMQXJHONAFJ-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000006052 T cell proliferation Effects 0.000 description 1
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N Threonine Natural products CC(O)C(N)C(O)=O AYFVYJQAPQTCCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004473 Threonine Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010015780 Viral Core Proteins Proteins 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000004520 agglutination Effects 0.000 description 1
- 235000004279 alanine Nutrition 0.000 description 1
- 125000003368 amide group Chemical group 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical group 0.000 description 1
- 125000000539 amino acid group Chemical group 0.000 description 1
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000009582 asparagine Nutrition 0.000 description 1
- 229960001230 asparagine Drugs 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000003149 assay kit Methods 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000013060 biological fluid Substances 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 210000000601 blood cell Anatomy 0.000 description 1
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 244000309466 calf Species 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 230000008859 change Effects 0.000 description 1
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 1
- 238000012790 confirmation Methods 0.000 description 1
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- 229960002069 diamorphine Drugs 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 1
- 125000000524 functional group Chemical group 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- 125000000291 glutamic acid group Chemical group N[C@@H](CCC(O)=O)C(=O)* 0.000 description 1
- ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N glutamine Natural products OC(=O)C(N)CCC(N)=O ZDXPYRJPNDTMRX-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000010438 heat treatment Methods 0.000 description 1
- SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N hepatitis b vaccine Chemical compound C([C@H](NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)O)NC(=O)[C@H](CO)NC(=O)[C@H](CC(N)=O)NC(=O)[C@H](CC=1C2=CC=CC=C2NC=1)NC(=O)[C@H](CCC(N)=O)NC(=O)[C@@H](N)CCSC)C(=O)N[C@@H](CC1N=CN=C1)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CCC(N)=O)C(=O)N[C@@H](CC(O)=O)C(=O)N1[C@@H](CCC1)C(=O)N[C@@H](CCCNC(N)=N)C(=O)N[C@@H](C(C)C)C(=O)OC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H]1N(CCC1)C(=O)[C@H](CC=1C=CC=CC=1)NC(=O)[C@H](CC=1C=CC(O)=CC=1)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCNC(N)=N)C1=CC=CC=C1 SPSXSWRZQFPVTJ-ZQQKUFEYSA-N 0.000 description 1
- 229940124736 hepatitis-B vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000028993 immune response Effects 0.000 description 1
- 238000010166 immunofluorescence Methods 0.000 description 1
- 238000001727 in vivo Methods 0.000 description 1
- 238000010348 incorporation Methods 0.000 description 1
- 239000012678 infectious agent Substances 0.000 description 1
- 229960000310 isoleucine Drugs 0.000 description 1
- AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N isoleucine Natural products CCC(C)C(N)C(O)=O AGPKZVBTJJNPAG-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000741 isoleucyl group Chemical group [H]N([H])C(C(C([H])([H])[H])C([H])([H])C([H])([H])[H])C(=O)O* 0.000 description 1
- 125000001909 leucine group Chemical group [H]N(*)C(C(*)=O)C([H])([H])C(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- 210000000265 leukocyte Anatomy 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 210000004698 lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 1
- 125000003588 lysine group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000003550 marker Substances 0.000 description 1
- 238000000691 measurement method Methods 0.000 description 1
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229920002866 paraformaldehyde Polymers 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000007981 phosphate-citrate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000011148 porous material Substances 0.000 description 1
- 238000001556 precipitation Methods 0.000 description 1
- 230000000644 propagated effect Effects 0.000 description 1
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 1
- 238000004451 qualitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000004445 quantitative analysis Methods 0.000 description 1
- 238000011160 research Methods 0.000 description 1
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 1
- 125000003607 serino group Chemical group [H]N([H])[C@]([H])(C(=O)[*])C(O[H])([H])[H] 0.000 description 1
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 1
- 229910000030 sodium bicarbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 235000017557 sodium bicarbonate Nutrition 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 238000001179 sorption measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007480 spreading Effects 0.000 description 1
- 238000003892 spreading Methods 0.000 description 1
- 238000010561 standard procedure Methods 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000001356 surgical procedure Methods 0.000 description 1
- 125000000341 threoninyl group Chemical group [H]OC([H])(C([H])([H])[H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 238000012546 transfer Methods 0.000 description 1
- 208000037918 transfusion-transmitted disease Diseases 0.000 description 1
- 125000000430 tryptophan group Chemical group [H]N([H])C(C(=O)O*)C([H])([H])C1=C([H])N([H])C2=C([H])C([H])=C([H])C([H])=C12 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000001493 tyrosinyl group Chemical group [H]OC1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])C([H])(N([H])[H])C(*)=O 0.000 description 1
- 239000004474 valine Substances 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K16/00—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies
- C07K16/08—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses
- C07K16/10—Immunoglobulins [IGs], e.g. monoclonal or polyclonal antibodies against material from viruses from RNA viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16111—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV env
- C12N2740/16122—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/974—Aids related test
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S436/00—Chemistry: analytical and immunological testing
- Y10S436/811—Test for named disease, body condition or organ function
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/22—Viral peptide or viral protein
- Y10S930/221—Retrovirus related, or human immunodeficiency virus related, or simian immunodeficiency virus related
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Virology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Immunology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Hematology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Pathology (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Nitrogen And Oxygen Or Sulfur-Condensed Heterocyclic Ring Systems (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Investigating Or Analysing Biological Materials (AREA)
Description
Den foreliggende oppfinnelse vedrører en peptidsammensetning for in vitro påvisning av antistoffer mot HTLV-III i kroppsvæsker og diagnostikk av AIDS, ARC eller pre-AIDS tilstander og anvendelse derav for nevnte påvisning og et prøve-sett for bruk deri.
Peptidsammensetningen omfatter et syntetisk peptid som
har omtrent 35 aminosyrer og en blanding av peptider. Aminosyresekvensen av peptidet og hver av peptidene som er anvendbare i peptidsammensetningene blir kjemisk syntetisert for å tilsvare segmentene av kappe-proteinet, p41, og et segment av gag-proteinet, p24, av HTLV-III. Peptidsammensetningen i den foreliggende oppfinnelse er blitt funnet å være sterkt immuno-reaktiv med antistoffer i sera av pasienter med AIDS, ARC og pre-AIDS tilstander.
Mere spesifikt er den foreliggende oppfinnelse rettet mot anvendelsen av en peptidsammensetning som omfatter et peptid som inneholder et segment på omtrent trettifem (35) aminosyrer (heretter referert til som 35mer-peptidet). Dette er anvendbart for påvisning av antistoffer mot HTLV-III viruset i humane kroppsfluider fra AIDS, ARC eller pre-AIDS pasienter. Aminosyrene som er nevnt her inkluderer substitusjoner ved analoge syrer av de preskriberte aminosyrer så lenge som den immunogene struktur av peptidet blir bevart.
Beslektede 2Imer-, 19mer- og llmer-peptider med egenskaper svarende til 3 5mer-peptidet er gjort til gjenstand for avdelt norsk patentsøknad nr. 92.2744.
Påvisningsmetodene inkluderer en enzym-bundet immunosorbent assay (ELISA), en immunoradiometrisk assay (IRMA) og andre fremgangsmåter av immunoassay prosedyrer slik som enzym-immunoblotting på nitrocellulosepapir og hemagglutinering ved å anvende peptidsammensetningenn som antigen. Den foretrukne påvisningsmetode er ved ELISa.
BAKGRUNN FOR OPPFINNELSEN
Ervervet immunsvikt syndrom (AIDS) er nylig blitt oppdaget i flere land. På grunn av dens ødeleggende virkning på pasientene og indikasjoner om at sykdommen sprer seg er mye anstrengelse blitt viet til å belyse og identifisere årsaken til sykdommen. Epidemiologiske data antyder at AIDS er forårsaket av et infeksiøst agent som blir horisontalt overført ved intim kontakt eller utsettelse for blod eller visse blodprodukter.
I 1983 rapporterte F. Barre-Sinoussi et al., fra Pasteur Instituttet isolasjonen av et T-lymfotropt retrovirus fra en pasient som var mistenkt for AIDS. Retroviruset viste seg å være et medlem av den humane T-celle leukemivirus (HTLV) familie. Imidlertid er dets immunologiske respons forskjellig fra kjente HTLV-1 eller HTLV-II. F. Barre-Sinoussi et al., Science, 220, side 868 (mai 1983) .
Et lignende virus, betegnet HTLV-III er også blitt isolert av R.C. Gallo's gruppe ved National Cancer Institute fra blod-prøver av et stort antall AIDS og ARC pasienter ved sam-dyrking med en valgfri T-celle-linje H9. Se Popovic, M. et al., Science, 224, side 500 (1984).
V.S. Kalyanaraman et al., fra Senter for sykdomskontroll, Atlanta, Georgia rapporterte om isolering av et lymfodenopati-assosiert virus (LAV) i pasienter med AIDS og utviklingen av en radioimmuno-presipiterinasassay ved å anvende hovedkierne-proteinet P25 av LAV. Deres testprosedyre involverte anvendelse av LAV viruset propagert i primære kulturer av blodlymfocyter og høstet. p25 kjerneproteinet ble isolert fra den innhøstede virus, merket med I12 5 og anvendt som målantigen. Det merkete antigen ole tilsatt til serum, og presipitering av minst 15 % av det merkete antigen blir sette på som et positivt resultat. Se V.S. Kalyanaraman et al., Science, 225 s. 321 (juli 1984). Imidlertid, basert på de rapporterte resultater, var testen positiv bare for 41 % av AIDS pasientene og 72 % positiv for pasienter med lymfodenopatisk syndrom (LAS), ellers kjent som
ARC. Dette betyr at fremgangsmåten ikke er tilstrekkelig følsom eller nøyaktig til å anvendes som påvisning eller diagnostisk verktøy for kartlegging av serum for tilstedeværelse av antistoffer mot AIDS-viruset.
LAV og HTLV-III, såvel som forskjellige stammer av beslektede retrovirus isolert fra AIDS pasienter har flere viktige karakteristika. Se Feorino, P et al., Science, 225, s.
69 (1984); Levy, J. et al., Science, 225, s. 840 (1984). Disse inkluderer viral replikasjon i OKT4<*> humant T-celle leukocyter, in vivo og in vitro; assosiering med forbedret T-celle prolifirering, fremkomst av cytopatiske virkninger; (se Montagnier et al., Human T Cell Leukemia Virus, s. 363, Cold Spring Harbor Laboratory, 1984; Popovic, M et al., op. eit., og Klatzmann, D. et al., Science, 225, s. 59 (1984)) og påvisning ved antistoffer i sera av AIDS og ARC pasienter. Se Montagnier, et al.. Science, 224, s. 505 (1984); Safai, B. et al., Lancet, i, s. 1438 (1984); Brun Vezinet, F., et al., Lancet, i, s. 1253
(1984); Brun Vezinet, F., et al.. Science, 226, s. 453 (1984); Goldbert, J. et al., Lancet, ii, s. 711 (1984) og Laurence J. et al., New England J. Med., 311, s. 1269 (nov. 1984).
I november 1984 rapporterte L.W. Kitchen et al. anvendelse av en HTLV-III infisert linje, betegnet H9/HTLV-III, for å teste tilfellene av AIDS i hemofile pasienter.. Fremgangsmåten involverte inaktivering av viruset med 2% paraformaldehyd i fosfat-buffer og anvendelse av de inaktiverte celler for å bestemme om hemofile pasienter var blitt uaktsomt utsatt for AIDS virus gjennom blodoverføring. Data som anvender sera-prøver fra 50 hemofile viser at det er en økende risiko for disse pasienter til å pådra seg AIDS, p.g.a. deres behov for blodoverføringer for å opprettholde livet. L.W. Kitchen et al., Nature, 312, s. 367 (nov. 1984). Dette betyr at det er et påtrengende behov for en sikker, pålitelig og følsom prøve for å kartlegge hver blodprøve før dens innlemming i blodbanker for å isolere blodprøver som er blitt forurenset med AIDS-virus, og således unngå den uaktsomme spredning av AIDS blandt pasienter som må motta blodoverføringer, f.eks. hemofile og kirurgiske pasienter.
I november 1984 og januar 1985 konkluderte R. C. Gallo's gruppe ved National Cancer Institute og andre medarbeidere at
HTLV-III er det agent som forårsaker AIDS og rapporterte nukleotidsekvensen av HTLV-III. Se Beatrice Hahn et al., Nature, 312, s. 166 (nov. 1984), George M. Shaw et al., Science, 226, s. 1165 (des. 1984) og Lee Råtner et al., Nature, 313, s. 277 (jan. 1985).
I mellomtiden rapporterte også tre andre grupper om den fullstendige nukleotidsekvens av AIDS-viruset. Se Muesing et al., Nature, 313, s. 450 (feb. 1985); Sanches-Pescados, R. et al., Science, 227, s. 484 (feb. 1985) og Wain-Hobson et al., Cell, 40, s. 9. (jan. 1985). Disse rapporter klarla strukturen av HTLV-III viruset både på DNA nivå og det projiserte protein nivå og tillater videre serologiske studier av de forskjellige epitoper tilstede på HTLV-III viruset.
Samtidig rapporterte gruppen ved Pasteur instituttet at LAV var identifisert som det agent som forårsaker AIDS, og er betraktet å være identisk med HTLV-III. Målingsprosedyren anvendt av denne gruppe involverer propagering av LAV i T4<+ >celler av friske individer. Det virale antigen ble så konsen-trert og deaktivert i 0,5 % natriumdodecylsulfat ved 37°C i 15 minutter. Serumprøver ble så testet mot antigenet i enzym-immunoassay med ortofenylendiamin som substrat. Tilstedeværelse av antistoff i serum ble funnet i 68 % av AIDS pasienter, 100 % av pasienter med Kaposi's sarkom og 100 % av pre-AIDS pasienter. Jeffrey Laurence et al., op. eit.
Nylig ble U.S. Patent 4.520.113 utstedt til R.C. Gallo et al.. Gallo et al. patentet beskriver en fremgangsmåte for påvisning av antistoffer i sera fra AIDS og pre-AIDS pasienter ved å anvende lysater av en cellelinje, betegnet H9/HTLV-III, som antigenet i en enzym-bundet immunosorbent assay (ELISA) eller i en strimmel radioimmunoassay basert på Western Blot teknikken eller en indirekte immunofluoressens metode. Fremgangsmåten er omtrent 85 % nøyaktig. Gallo patentet indikerte videre at flere antigener fra HTLV-III, p65, (MW 65.000), p60 (MW 60.000), p55 (MW 55.000), p24 (MW 24.000) og p41 (MW 41.000) blir gjenkjent av antistoffer i sera fra AIDS pasienter, homoseksuelle og heroinmisbrukere. Av disse er hovedimmunreaktiviteten eller spesifisiteten direkte rettet mot p41, et protein som utgjør kappeproteinet av HTLV-III. Dette patent stadfester videre at det er trodd at tilleggsrensing og foredling av p41 kan føre til en enda mere følsom ELISA assay. Basert på denne stadfestelse er antigenet som er egnet som testreagens, funnet å være et p41 segment oppnådd fra HTLV-III dyrket i H9 cellelinje.
Det er videre rapportert i Robertt C. Gallo et al., Science, 228, s. 93 (april 1985) at et kombinert klonings og ekspresjonssystem i E. Coli er blitt anvendt til å identifisere HTLV-III kodete peptider som reagerer immunologisk med antistoffer i sera fra AIDS pasienter. Klonet HTLV-III DNA ble kuttet i fragmenter og innført i en ekspresjonsvektor. Det innførte DNA ble så uttrykt i E. Coli tranformanter. Av 300 testete kloner viste 20 spesifik reaktivitet med sera fra AIDS pasienter. De 20 kloner ble analysert og funnet å inneholde segmenter fra ORF segmentet av HTLV-III og ble identifisert som kloner, 175, 191, 13, 31, 162, 113, 121 og 127. Av de åtte kloner definerer ORF kloner 113, 121 og 127 proteinet som kodes for av delen av env-lor området produsert av HTLV-III infiserte celler og induserer antistoff produksjon i de fleste om ikke alle AIDS pasienter.
T.W. Chang et al., Biotechnology, 3, s. 905 (oktober 1985) rapporterte anvendelsen av et rekombinant E.Coli utledet viralt antigent peptid som må være anvendbart i en immunoassay for påvisning av antistoffer mot HTLV-III. Det antigene peptid er beskrevet som peptid 121 som har en molekylvekt på 15.000 dalton. CD. Cabradilla et al., Bio technology, 4_, s. 125 (februar 1986) beskriver også anvendelse av et bakterielt syntetisert env polypeptid, som har 102 aminosyrer for serodiagnostik av antistoffer mot HTLV-III.
Cosand, U.S. patent 4.629.783 utstedt 16. desember 1986 beskrev anvendelse av kjemisk syntetiserte peptider konjugert til bærere, som må ha xinmunoreaktivitet med antistoffer mot HTLV-III og anvendbare som reagenser som ? bestemmelse av smitte av en human vert av viruset. Flere peptider ble beskrevet, hvorav 2 har sekvenser som ligner peptidene som er beskrevet her. Et er et peptid som har 13 aminosyrer, konjugert ved acetylering til et bærerprotein og som har den følgende aminosyresekvens.
hvor X er OH eller NH2, Y er en aminosyre for å forenkle binding av peptidet til en bærer, N-terminalt acetylert og bundet til et peptid eller et protein på minst 5.000 molekylvekt, og dette peptid eller protein binder seg normalt ikke til antistoffer tilstede i en human vert. Det andre er et peptid som har 26 aminosyrer, acetylert og konjugert til et bærerprotein som har den følgende aminosyresekvens: hvor X er OH eller NH2, N-terminalt acetylert og bundet til et peptid eller protein på minst 5.000 molekyler, og dette peptid eller protein binder seg normalt ikke til antistoffer tilstede i en human vert. Cosand beskrev også at en blanding av polypeptid som har en aminosyresekvens som tilsvarer:
hvor Y og X har den samme betydning som definert ovenfor og et konjugert polypeptid som har 26 aminosyrer, identifisert ovenfor, som må ha immunoreaktivitet som er sterkere enn det konjugerte polypeptid som har 26 aminosyrer alene.
De fleste av de rapporterte bestemmelsesmetoder for påvisning av antistoffer mot HTLV-III og for diagnostikk av AIDS eller pre-AIDS tilstander medfører anvendelse av HTLV-III eller LAV viruset. De andre målemetoder er ikke blitt testet tilstrekkelig opp til det nåværende. Ingen av prosedyrene er 100% nøyaktige. Dette er uønskelig for anvendelse av kartlegging av sera i blodbanker. Mindre enn 100% nøyaktighet av testene kan tillate at forurenset sera unnslipper påvisning og anvendes i blodoverføringer til alvorlig skade for blodmot-takere.
Videre er anvendelse av HTLV-III viruset som testagent farlig for friske laboratoriearbeidere, og krever ekstreme forsiktighetsregler for å unngå alle sjanser for smitte i løpet av den forberedende prosess for å lage test-reagenser. Videre, selvom det deaktiverte virus anvendes i noen av de publiserte prosedyrer, kan utsettelse for det deaktiverte virus forårsake antistoff-produksjon i friske arbeidere, som så kan bli falsk diagnostisert som å ha AIDS, ARC eller pre-AIDS tilstand. Videre kan tilstedeværelse av cellulære materialer fra H9 celler eller E. Coli i testagenset frembringe en falsk positiv respons i HTLV-III antistoff-kartleggingstestene fra individer som har antistoffer mot E. Coli eller H9 celler. Disse falske positive reaksjoner kan bringe alvorlig frykt til friske individer og deres familier og kan føre til at et friskt individ blir feilaktig diagnostisert som å ha AIDS og bli utelukket fra normale sosiale aktiviteter som en følge.
Antall tester rapportert i Cosand U.S. patent 4.629.783 er veldig lite. Resultatene indikerer at det konjugerte polypeptid med 26 aminosyrer ikke er så godt som det deaktiverte virus. Videre beskriver Cosand ikke peptidsammensetningen av den foreliggende oppfinnelse.
Videre er det frem til idag ingen levende vaksine eller fremgangsmåte for å gi beskyttelse mot HTLV-III blitt rapportert for AIDS, ARC ellere pre-AIDS tilstander. Anvendelse av deaktivert virus fremkaller frykt for å pådra seg sykdommen og ville forhindre dets godkjennelse og anvendelse.
På samme måte involverer utvikling av monoklonale og polyklonale antistoffer mot HTLV-III i pattedyr anvendelse av HTLV-III som immunogen, og dette viser lignende risiko i prosedyren.
I USSN 774.644, 837.566 og 847.102 beskriver søkerne et 21mer-peptid med en-og-tyve (21) aminosyrer som et høyt føl-somt reagens for påvisning av antistoffer mot HLTV-III som en vaksine som en beskyttelse mot AIDS viruset, og for produksjon av monoklonale og polyklonale antistoffer mot AIDS-virus.
Ved utstrakt klinisk testing med 21mer-peptidet ved forskjellige blodbanker og forskningsinstitutter, er det blitt funnet at et lite antall, 12 av 449 eller omtrent 2,67% av serumprøver, for det meste i det senere stadium av AIDS som testet positiv ved Western Blot analyse, ga negative resultater når de ble testet mot 21mer-peptidet. Selvom prosenten er liten, er dette betraktet å være ufordelaktig, i og med at sera av mulig infiserte individer kan unnslippe påvisning og anvendes til overføring i kirurgiske prosedyrer.
Det er derfor et mål for den foreliggende oppfinnelse å videre perfeksjonere en påvisning eller diagnostisk prosedyre som vil sikre påvisning av antistoffer mot HTLV-III i alle individer som kan ha vært utsatt for eller var infisert av
HTLV-III.
Et videre mål er å utvikle en testprosedyre som er meget følsom og 100% nøyaktig, dvs. den vil ikke produsere falske positive eller falske negative resultater.
I henhold til den foreliggende oppfinnelse tilveiebringes en peptidsammensetning som omfatter minst ett peptid som har en aminosyresekvens:
samme egenskaper.
Peptidet ble fremstilt ved fastfase-peptidsyntese.
Peptidsammensetningen er blitt funnet å være anvendbar i en høyt følsom og nøyaktig metode for påvisning av antistoffer mot HTLV-III i sera og kroppsvæsker og diagnostikk av AIDS, APC eller pre-AIDS tilstander. Peptidsammensetningen er anvendbar til stimulering av produksjon av antistoffer mot HTLV-III eller LAV i friske pattedyr slik som Balb/c mus.-Forkortelsene i sammensetningen svarer til følgende aminosyrer:
Ala = alanin
Arg = arginin
Asn = asparagin
Asp = asparaginsyre
Gin = glutamin
Glu = glutaminsyre
Gly = glycin
Leu = leucin
Lys = lysin
Ile = isoleucin
Pro = prolin
Met = metionin
Ser = serin
Thr = treonin
Trp = tryptofan
Tyr = tyrosin
Val = valin, og
Cys = cystein.
En høyt følsom og nøyaktig fremgangsmåte for påvisning av antistoffer mot HTLV-III i kroppsfluider og diagsnostikk av AIDS, ARC eller pre-AIDS tilstander omfatter de følgende trinn:
A. Fremstilling av en peptidsammenseting som omfatter:
et peptid som har den følgende aminosyresekvens
-Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys-Thr-Thr-Ala-Val-Pro-Trp-Asn-Ala-Ser-, eller modifiserte varianter
derav med samme egenskaper.
B. Anvendelse av omtrent 0,1 ug til omtrent 2 0 ug pr. test av peptidsammensetningen som antigen i en in vitro immunoassayprosedyre.
Detaljert beskrivelse av oppfinnelsen
I henhold til den foreliggende oppfinnelse er en peptidsammensetning blitt kjemisk syntetisert og fremstilt for påvisning av antistoffer mot HLTV-III i kroppsfluider og diagnostikk av AIDS, ARC og pre-AIDS tilstand.
Peptidsammensetningen omfatter:
A. et peptid som har den følgende aminosyresekvens: -Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys-Thr-Thr-Ala-Val-Pro-Trp-Asn-Ala-Ser-, analoger av dette og segmenter av dette.
Peptidet kan omfatte en kortere eller lengre peptidkjede ved å ha flere aminosyrer tilsatt til de terminale aminosyrer av sekvensene ovenfor eller ved å ha noen få mindre av de terminale aminosyrer fra hver terminal av hver av peptidene.
Det er forventet at så lenge som de tredimensjonale kon-formasjoner av peptidet som er gjenkjennbart av de dominante antistoffer mot HTLV-III blir bevart, kan den syntetiske peptidsammensetning omfatte modifiserte varianter av de nevnte aminosyrer av sekvensene ovenfor. Betegnelsen "modifiserte varianter" omfatter hver av de hele peptider, deler av disse, peptider som inneholder substitusjoner av aminosyrerester, innførte og/eller delesjoner av aminosyrer, eller polymere former av peptidene. Disse analoger kan også anvendes for å påvise antistoffer mot HTLV-III.
Aminosyresekvensene av 35mer-peptidet i peptidsammensetningen som er anvendbar som testreagens for påvisning av antistoffer mot HTLV-III i kroppsvæsker og diagnostikk av AIDS, ARC og pre-AIDS tilstand, blir fremstilt slik at det tilsvarer et delsegment av aminosyresekvensen av HTLV-III viruset betegnet som p41,m en del av pl60, LOR segmentet (long open reading), som definerer kappeproteinet av HTLV-III viruset.
Peptidet som er anvendbart som fastfase-immunoadsorbent for påvisning av antistoffer mot HTLV-III ble syntetisert ved "klassisk" Merrifield metode av fastfase-peptidsyntese i henhold til det følgende skjema:
Etter skjemaet ovenfor blir Boc-aminosyrer tilsatt til harpiksen for å fremstille 3 5mer-peptidet.
Modifiserte varianter av hvert av peptidene kan fremstilles ved å variere sekvensen ovenfor enten ved å tilsette eller subtrahere ønsked(e) Boc-aminosyre(r).
Etter fullføring av oppsamling av det ønskede blokkerte peptid på harpiksen blir peptidharpiksen behandlet med vannfri fluorsyre for å spalte benzylesteren som binder peptidet til harpiksen for å frigjøre peptidet. Side-kjede funksjonelle grupper av aminosyrer som blir blokkert i løpet av syntesen av benzyl-deriverte blokkerte grupper blir også spaltet fra peptidet samtidig. Det frie peptid blir så analysert og renset ved revers fase høytrykksvæskekromatografering (HPLC) og karakterisert biokjemisk ved aminosyreanalyse.
På samme måte kan syntese av hvert av peptidene som har en amidgruppe på sin C-terminale ende, oppnås ved å anvende en 4-metylbenzhydrylaminharpiks i henhold til det følgende skjema:
Binding av den C-terminale rest til 4-metylbenzhydrylamin-res t
Peptidsammensetningen syntetisert i henhold til den ovenfor beskrevne prosedyre er høyt reaktiv mot antistoffer mot HTLV-III og kan anvendes som en høyt følsom, nøyaktig og pålitelig og spesifikk immunoadsorbent for påvisning av antistoffer mot HTLV-III. Resultater oppnådd med peptidsammensetningen i henhold til foreliggende oppfinnelse viser at den er mer følsom og spesifikk mot antistoffer mot HTLV-III i kroppsfluider enn Western Blot metoden, standardmetode anvendt for diagnostikk av AIDS. Se Tabell III.
Det kan observeres fra Tabell III at 35mer-peptidet har den høyeste immunoreaktivitet.
Fordelene ved å anvende peptidsammensetningen i henhold til oppfinnelsen er mange.
Peptidsammensetningen blir kjemisk syntetisert. Dette betyr at det ikke er noen involvering med HTLV-III viruset på noe tidspunkt i løpet av prosessen for dannelse av testreagens.
Videre er det frem til slutt-trinnet- av testen for å påvise antistoffer mot HTLV-III, hvor testreagenset blir utsatt for prøvene av sera eller kroppsvæske, ingen risiko for smitte av laboratoriearbeidere av HTLV-III viruset. Og risiko for smitte ved dette slutt-trinnet kan unngås ved å ta det forsiktighetstrinn at man deaktiverer ethvert virus som kan være tilstede ved å varme ved 60°C en halv time prøvene av sera eller kroppsvæske som skal testes.
Et annet problem som unngås ved den foreliggende oppfinnelse er muligheten for falske positive resultater forårsaket av tilstedeværelsen av antigent mater-iale fra H9 celler som renses sammen med det HTLV-III virale preparat eller E. Coli deriverte proteiner som renses sammen med uttrykte virale fragmenter. Visse normale individer har antistoffer mot E. Coli eller humane leukocyt-antigener, f.eks. HLA, som er kryssreaktive med de antigene materialer fra H9 celler. Seraprøver fra disse normale individer kan vise en positiv respons i ELISA eller IRMA test selvom de ikke er blitt utsatt for HTLV-III^ En diagnose som sier at en person kan være påført AIDS basert på denne type av falsk positiv respons, kan bringe alvorlig frykt til personen og hans/hennes familie og forårsake at han/hun blir ekskludert fra normale sosiale aktiviteter. Alle disse problemene kan unngås ved å anvende peptidet av den foreliggende oppfinnelse som testreagens.
Et tredje problem som har plaget dette området er muligheten for falske negative resultater. Nøyaktigheten av resultatene ved å anvende 21mer-peptidet alene er omtrent 98 %, mens nøyaktigheten av resultatene ved å anvende peptidsammensetningen som antigen er 100 % idet man anvender det følgende som avskjæringspunkt:
Avsk jæringspunkt = 0,1 x A-i 9 z (RC) + 1 x A492 (NRC)
hvor A492 (RC) er absorbansavlesningen for den reaktive kontroll og A4 9 2(NRC) er absorbansavlesningen for den ikke-reaktive kontroll.
Faktisk ga ELISA metoden ved å anvende peptidsammensetningen av den foreliggende oppfinnelse i visse tilfeller en positiv indikasjon bekreftet ved medisinsk diagnostikk hvor standard Western Blot testen produserte et negativt resultat. Dette indikerer at den foreliggende fremgangsmåte er enda mer nøyaktig enn Western Blot testen.
Utstrakte kxiniske prøver ble utført på 140 sero-konverterte prøver oppsamlet i løpet av perioden fra slutten av 1979 til 1982 fra friske homoseksuelle i New York City opprinnelige selektert for Hepatitt B vaksinestudier. Disse serumprøver ble også karakterisert ved Western Blot analyse og HTLV-III ELISA tester av den foreliggende oppfinnelse. Resultatene av testene viste at følsomheten av ELISA-metoden ved å anvende peptidsammensetningen av den foreliggende oppfinnelse, er mye høyere enn følsomheten av Western Blot analyse. Videre, anvendelse av ELISA-metoden med peptidsammensetningen, produserte positive signaler i 11 individer godt før p245, p55 og pl7 bånd viste seg i Western Blot analysen. På samme måte er ELISA metoden med peptidsammensetningen av oppfinnelsen mere følsom og produserte tidligere diagnostiske resultater enn resultatene fra ELISA-testsett som for øyeblikket er tilgjengelige på markedet.
Videre er det med passende aminosyre-analogsubstitusjoner forventet at forskjellige peptidanaloger basert på de preskriberte aminosyresekvenser, kan syntetiseres med egenskaper som gir opphav til lavere bakgrunnsavlesninger eller bedre adsorb-sjonskapasitet til faste faser som er anvendbare til HTLV-III antistoff kartleggingsmålinger.
Forskjellige peptidanaloger basert på den ovenfor beskrevne aminosyresekvens er blitt fremstilt. Disse analoger og deres reaktiviteter med anti-HTLV-III antistoffene tilstede i sera av AIDS og ARC pasienter, er beskrevet i eksempel 8 og tabell III. Reaktiviteten i en ELISA test for den samme mengde av hvert peptid i vekt pr. volum ble sammenlignet med reaktiviteten av 21mer-peptidet som ble tildelt en reaktivitet på 100.
Videre, fordi peptidene i den foreliggende oppfinnelse fremstilles syntetisk, kan kvaliteten kontrolleres, og som et resultat kan reproduksjonsevne av testresultatene sikres. Også, siden veldig små mengder av peptidene kreves for hver testprosedyre, og utgiftene til fremstilling av peptidet er relativt lave, er omkostningene til kartlegging av kroppsvæske for antistoffer mot HTLV-III og diagnostikk av AIDS, ARC eller pre-AIDS relativt lave.
Peptidsammensetningen fremstilt i henhold til den foreliggende oppfinnelse kan anvendes for å påvise HTLV-III infek-sjon og diagnostisere AIDS, ARC og pre-AIDS tilstand ved å anvende den som testreagens i en enzym-bundet immunosorbent assay (ELISA), en enzymimmunodot assay, en hemagglutinasjonsassay eller en radioimmunoradiometrisk assay (IRMA), for-trinnsvis ELISA.
Det bør legges merke til at i følgende fremgangsmåter kan 0,25 vekt% glutaldehyd tilsettes i belegningsbufferen for å
forenkle bedre peptidbinding på platene eller kulene. Videre kan pepperrot-peroksydase-konjugert musemonoklonalt antihumant IgG antistoff anvendes istedet for pepperrot-peroksydase-konjugert-geite-antihuman IgG som en sekundær antistoff-tracer. Gelatinene som er anvendbare i disse prosesser kan inkludere kalvehudgelatin, grisehudgelatin, fiskegelatin eller ethvert
av de kjente tilgjengelige gelatinproteiner, eller erstattes med albuminproteiner.
De følgende eksempler illustrerer oppfinnelsen.
EKSEMPEL 1
Påvisning av antistoffer mot HTT.v-TTI ved en enzym- bundet immunoadsorbent assa<y >35mer-peptidet ble syntetisert som beskrevet.
Brønner i 96-brønnplater ble belagt ved 37°C i en time med 35mer-peptidet ved 1,0 / ig pr. brønn i 100 ul 0,1 M NaHC03 buffer, pH 9,5. Brønnene ble vasket 3 ganger med fosfatbufret saltvann (PBS) og så inkubert med 250 /il av 3 vekt% gelatin i PBS ved 37"C i 1 time for å blokkere ikke-spesifikke protein-bindingssteder, fulgt av 3 vaskinger til med PBS som inneholdt 0,05 vol% Tween 20.
Testsera (blod tatt fra en human pasient eller et normalt individ) ble fortynnet med PBS som inneholdt 20 vol% normalt geiteserum, 1 vekt% gelatin og 0,05 vol% Tween 20 ved en fortynning på 1:20, henholdsvis volum til volum. 200 pl av de fortynnede sera ble tilsatt til hver brønn og tillatt å reagere i 15 minutter ved 37°C. Brønnene ble så vasket 6 ganger med 0,05 vol% Tween 20 i PBS for å fjerne ubenyttede antistoffer. Pepperrot-peroksydase-konjugert-geite-antihuman IgG ble anvendt som en sekundær antistoff tracer for å binde seg til AIDS antistoff-antigenkomplekset dannet i positive brønner. 100 ul av peroksydasemerket geite-antihuman IgG ved en fortynning på 1:3000 i en volum% normalt geiteserum, 0,05 vol% Tween 20 i PBS ble tilsatt til hver brønn og inkubert ved 37°C i 15 minutter til.
Brønnene ble vasket seks ganger med 0,05 vol% Tween 20 i PBS for å fjerne ubundet antistoff og reagert med 100 pl av substratblandingen som inneholdt 0,04 vekt% ortofenylendiamin (OPD) og 0,012 vol% hydrogenperoksyd i natriumcitratbuffer, pH 5,0. Blandingen ble inkubert ved 37°C i 15 minutter. Denne substratblandingen ble anvendt til å påvise peroksydasemarkøren ved å danne et fargeprodukt. Reaksjoner ble stoppet ved tilsetning av 100 pl 2.N H2S04, og fargeutbyttet målt ved å anvende en ELISA avleser som kvantifiserer fargeavlesningen ved 492nm (dvs. OD målt ved 492nm). Målinger ble utført med 1:20 fortynning. Normale serumprøver ble anvendt som ikke-reaktive kontroller. Seraprøver oppnådd fra et individ som ble diagnostisert til å ha AIDS, er inkludert som reaktive kontroller. Absorbansavlesninger større enn en avskjæringsabsorbansav-lesning bestemt i henhold til den følgende formel ble tatt som positive.
Avskjæringspunkt = 0,1 x A<92 (RC) + 1 x A«92 (NRC)
hvor A4 9 2(RC) er absorbansavlesningen for den reaktive kontroll og A49 2(NRC) er absorbansavlesningen for den ikke-reaktive kontroll.
EKSEMPEL 2
Påvisning av antistoffer mot HTLV-III
ved en immunoradiometrisk assay ( IRMA)
Brønner av 9 6-brønn fleksible-polyvinylklorid (PVC)
plater ble belagt ved 37°C i 1 time med 35mer-peptid, fremstlt som beskrevet, ved 1,0 \ iq pr. brønn i 100 /xl 0,1M NaHC03 buffer, pH 9,5. Brønnene blir vasket tre ganger med fosfatbufret saltvann (PBS) og så inkubert med 250 \ l\ 3 vekt% gelatin i PBS ved 37°C i 1 time for å blokkere ikke-spesifikke proteinbindende steder, fulgt av 3 vaskinger til i PBS som inneholdt 0,05 vol% Tween 20. Testsera (blod tatt fra en human pasient eller et normalt individ) blir fortynnet med PBS som inneholder 2 0 vol% normalt geiteserum, 1 vekt% gelatin og 0,05 voll Tween 2 0 ved en fortynning på 1:20 (volum til volum) henholdsvis. 200 fil av de fortynnede sera blir tilsatt til hver brønn og tillatt å reagere i 15 minutter ved 37°C. Brønnene blir så vasket seks ganger med 0,05 vol% Tween 20 i PBS for å fjerne ubundede antistoffer. I<125> merket affini-tetsrenset geiteantihuman IgG (Fc) blir anvendt som en sekundær antistoff-tracer som binder seg til antistoff-antigenkomplekset dannet i positive brønner. 100 jxl I<125> merket geitehuman IgG på 50.000-200.000 cpm i 1 vol% normalt geiteserum, 0,05 vol% Tween 20 i PBS ble tilsatt til hver brønn og inkubert ved 37°C i 15 minutter.
Brønnene ble vasket 6 ganger med 0,05 vol% Tween 2 0 i PBS for å fjerne ubundet sekundært antistoff og tørket.
Brønnene blir gjennomskåret og tellet ved en gamma-scin-tillasjonsteller. Målinger blir utført i 1:20 fortynning p^ OZ. henholdsvis volum til volum. Normal seraprøve som negative kontroller ble også testet samtidig. Cpm avlesninger større enn de gjennomsnittlige avlesninger av normale seraprøver +4
SA (standardavvik) er tatt som positive.
EKSEMPEL 3
Påvisning av antistoffer mot HTLV-III ved en hemaglutin-eringsassay ved å anvende 10:1 blanding av peptidsammensetning-belagte gelatinpartikler, røde blodceller
fra sau eller latexkuler som fastfase- immunoadsorbent
1 ml grundig vaskede humane blodceller, røde blodceller
fra okse, gelatinpartikler eller polystyren latexkuler blir belagt med 35mer-peptidet ved en konsentrasjon i området på 1Mg/ml til 1 mg/ml. De belagte celler, partikler eller kuler blir så inkubert med serisk fortynnede serumprøver i brønnene av en multibrønn U-formet eller nettverk-formet mikroplate. Etter å ha blitt etterlatt i romtemperatur i omtrent 1 time, blir agglutineringsmønsterne på bunnen avlest, og den største fortynning som viser en positiv reaksjon blir nedtegnet.
Dette er en én-trinns måling som kan anvendes både til kvalitativ og kvantitativ analyse av tilstedeværelse av anti-HTLV-III antistoffer i prøver som inkluderer sera eller biolo-giske fluider.
EKSEMPEL 4
Et diagnostisk AIDS, ARC og pre-AIDS spesifikt testsett for HTLV-III antistoff påvisning kan konstrueres. Testsettet omfatter en beholder som er oppdelt i rom, som inneholder multiple 96-brønn plater på forhånd belagt for anvendelse med 1 Mg av peptidsammensetningen av den foreliggende oppfinnelse i
100 pl pH 9,5 0,1M NaHCC-3 buffer pr. brønn. Settet omfatter videre materialer for enzympåvisning i separate forseglede beholdere som består av: 1) normalt humant serum (som ikke-reaktive kontroll); 2) varmeinaktivert, NP40 solubilisert AIDS-serum (som reaktiv kontroll); 3) normalt geiteserum; 4) peroksydasemerket-geiteantihuman IgG; og 5) en fargeforandringsindikator som består av ortofenylendiamin (OPD) og hydrogenperoksyd i
fosfatcitratbuffer. Fremgangsmåten beskrevet i eksempel 1 må følges.
I dette testsett kan 96-brønnplater, forhåndsbelagt med peptid av den forliggende oppfinnelse, erstattes av polystyren-kuler, latexpartikler eller multiple mini-kolonner fyllt med kontrollerte porestørrelse glasskuler eller nitrocellulosepapir strimmel forhåndsbelagt med peptidet av den foreliggende oppfinnelse for anvendelse som fastfase immunoadsorbent.
EKSEMPEL S
Et annet testsett for påvisning av antistoffer ved å anvende den immunoradiometriske assay (IRMA) omfatter en beholder som er inndelt i mange rom som inneholder multiple 96-brønn bøybare polyvinylklorid (PVC) plater forhåndsbelagt med peptidsammensetningen i henhold til den foreliggende oppfinnelse ved en konsentrasjon på 1 ug av peptidsammensetningen i 100 ul av pH 9,5 0,IM NaHC03 buffer pr. brønn og materialer for radioimmunoassay som inkluderer: 1) normalt humant serum (som ikke-reaktiv kontroll); 2) varmeinnaktivert, NP40 sollubilisert AIDS-serum (som reaktiv kontroll); 3) normalt geiteserum; og, 4) I<1!s> merket belagt antihuman IgG. Prosedyren beskrevet i eksempel 2 må følges.
I dette testsett kan 96-brønn plater forhåndsbelagt med peptidet av den foreliggende oppfinnelse, erstattes av polystyren-kuler forhåndsbelagt med peptidet av den foreliggende oppfinnelse for anvendelse som fastfase immunoadsorbent.
EKSEMPEL 6
Et tredje testsett for påvisning av HTLV-III antistoffer ved å anvende hemagglutinasjonsassay, omfatter en beholder som er oppdelt i rom, som inneholder multiple 96-brønn U-formede eller nettverkformede mikroplater og materialer for hemagglutinerings-assay, inkludert (1) en flase med humane 0 røde blodceller, røde blodceller fra okse, gelatinpartikler eller latexpolystyrenkuler forhåndsbelagt med en blanding av 10:1:1 i vekt av peptidsammensetningen (2) normalt humant serum (som ikke-reaktiv kontroll); og, (3) varmeinnaktivert, NP40 sollubilisert AIDS-positivt serum (som reaktiv kontroll). Fremgangsmåten beskrevet i eksempel 4 må følges.-
EKSEMPEL 7
35mer-peptidet ble fremstilt i sin amidform i henhold til den klassiske Merrifield-metode beskrevet ovenfor. Aminosyresekvensen av hver an analogene er vist i Tabell III.
Immunoreaktiviteten av de forskjellige peptider ved 1 ug pr. brønn nivå ble testet i henhold til en oppsamlet AIDS-serumprøve. Reaktiviteten av hvert peptid ble sammenlignet med reaktiviteten av 21mer-peptidet som ble satt som 100%.
Claims (3)
1. Peptidsammensetning for in vitro påvisning av antistoffer mot HTLV-III i kroppsvæsker og diagnostikk av AIDS, ARC eller pre-AIDS tilstander,
karakterisert ved at den omfatter minst ett peptid som har en aminosyresekvens: -Arg-Ile-Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-Gly-Ile-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ile-Cys-Thr-Thr-Ala-Val-Pro-Trp-Asn-Ala-Ser- eller modifiserte varianter derav med samme egenskaper.
2. Anvendelse av fra 0,1 til 20 ug av peptidsammensetningen ifølge krav 1 pr. prøve som antigen, eller omtrent 1 /ig av peptidsammensetningen pr. prøve, i en buffer ved en pH på 7 til 10, som et belegningsantigen i en immunologisk in vitro bestemmelsesmetode for påvisning av antistoffer mot HTLV-III og diagnostikk av AIDS, ARC eller pre-AIDS tilstander.
3. Prøvesett for in vitro påvisning av antistoffer mot HTLV-III og diagsnostikk av AIDS, ARC eller pre-AIDS tilstander, karakterisert ved at immunoadsorbenten er en peptidsammensetning pr. prøve som definert i krav 2.
Applications Claiming Priority (1)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US07/013,014 US4879212A (en) | 1986-04-02 | 1987-02-10 | Peptide composition and method for the detection of antibodies to HTLV-III |
Publications (4)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| NO872473D0 NO872473D0 (no) | 1987-06-15 |
| NO872473L NO872473L (no) | 1988-08-11 |
| NO175482B true NO175482B (no) | 1994-07-11 |
| NO175482C NO175482C (no) | 1994-10-19 |
Family
ID=21757877
Family Applications (2)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO872473A NO175482C (no) | 1987-02-10 | 1987-06-15 | Peptidblanding for in vitro påvisning av antistoffer mot HTLV-III, anvendelse derav og prövesett for denne |
| NO922744A NO922744D0 (no) | 1987-02-10 | 1992-07-10 | Peptidblanding og fremgangsmaate ved paavisning av antistoffer htlv-iii |
Family Applications After (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| NO922744A NO922744D0 (no) | 1987-02-10 | 1992-07-10 | Peptidblanding og fremgangsmaate ved paavisning av antistoffer htlv-iii |
Country Status (12)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US4879212A (no) |
| EP (1) | EP0278148B1 (no) |
| JP (1) | JP2675009B2 (no) |
| AT (1) | ATE114672T1 (no) |
| CA (1) | CA1280363C (no) |
| DE (1) | DE3750812T2 (no) |
| DK (1) | DK296087A (no) |
| ES (1) | ES2064316T3 (no) |
| HK (1) | HK155795A (no) |
| IL (1) | IL82847A0 (no) |
| NO (2) | NO175482C (no) |
| ZA (1) | ZA874759B (no) |
Families Citing this family (53)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| KR910002374B1 (ko) | 1985-04-29 | 1991-04-20 | 제네틱 시스템즈 코포레이션 | Aids 관련질병의 검출을 위한 합성항원 |
| US4629783A (en) * | 1985-04-29 | 1986-12-16 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| US6130314A (en) * | 1986-03-26 | 2000-10-10 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| US5476765A (en) * | 1987-01-09 | 1995-12-19 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to HTLV and as vaccines |
| US5681696A (en) * | 1987-01-09 | 1997-10-28 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to HTLV |
| WO1988008005A1 (en) * | 1987-04-16 | 1988-10-20 | Johnson & Johnson | Stlv-iii-related polypeptides, diagnostic systems and assay methods |
| JPH0215098A (ja) * | 1987-05-18 | 1990-01-18 | Virovahl Sa | Ｈｉｖ−１感染検出用合成ペプチド杭原、その組成物およびその使用方法 |
| US20030022826A1 (en) * | 1987-09-08 | 2003-01-30 | Duke University | Use of synthetic peptides to induce tolerance to pathogenic T and B cell epitopes of autoantigens or infectious agents |
| SE8704185L (sv) * | 1987-10-28 | 1989-04-29 | Ferring Ab | Nya peptider, artificiella antigener och immunoanalystestsatser |
| JPH01163198A (ja) * | 1987-12-28 | 1989-06-27 | Birobaaru Sa | Ｈｉｖ−２感染検出用合成ペプチド抗原、その組成物およびその使用方法 |
| SE8705197D0 (sv) * | 1987-12-30 | 1987-12-30 | Jonas Blomberg | New peptides, two diagnostic methods using the peptides and a medicament based on the peptides |
| US6210874B1 (en) | 1988-01-27 | 2001-04-03 | Biochem Immunosystems, Inc. | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies |
| US6214537B1 (en) | 1988-01-27 | 2001-04-10 | Biochem Immunosystems, Inc. | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies |
| US6218102B1 (en) * | 1988-01-27 | 2001-04-17 | Biochem Immunosystems, Inc. | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies |
| IL88963A (en) * | 1988-01-27 | 1996-05-14 | Iaf Biochem Int | Circular synthetic peptides and their mixtures for the detection of VIH antibodies and for the formation of vaccines |
| US5241047A (en) * | 1988-12-08 | 1993-08-31 | Biochem Pharma Inc. | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies |
| US5516632A (en) * | 1988-02-08 | 1996-05-14 | Duke University | Synthetic peptides |
| CA1335880C (en) * | 1988-07-14 | 1995-06-13 | Thomas P. O'connor | Detection of an antibody and antigen in an immunoassay |
| CA2003300A1 (en) * | 1988-11-21 | 1990-05-21 | Franklin Volvovitz | Skin test and test kit for aids |
| US5260189A (en) * | 1988-12-20 | 1993-11-09 | Immunodiagnostics, Inc. | Synthetic HIV-like peptides their compositions and uses |
| US5439792A (en) * | 1989-06-02 | 1995-08-08 | Genetic Systems Corporation | Cysteine thiol-protected peptides for use in immunoassays |
| US5882853A (en) * | 1989-09-01 | 1999-03-16 | The United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Method of evaluating HTLV-I-specific T cell responses |
| US6248574B1 (en) | 1989-12-13 | 2001-06-19 | Avigdor Shaffermann | Polypeptides selectively reactive with antibodies against human immunodeficiency virus and vaccines comprising the polypeptides |
| FR2657017B1 (fr) * | 1990-01-16 | 1995-08-18 | Clonatec Sa | Peptides derivant de la glycoproteine d'enveloppe du virus-hiv-1, leurs applications a la detection d'une infection due a ce virus et a la vaccination contre le sida. |
| ATE164853T1 (de) * | 1990-01-16 | 1998-04-15 | Orgenics Ltd | Peptide, von virus-hiv-hüllen-glycoproteinen abstammend, deren verwendung zum nachweis einer infektion dieser viren und für die impfung gegen aids |
| KR940000755B1 (ko) * | 1990-02-16 | 1994-01-29 | 유나이티드 바이오메디칼 인코오포레이티드 | Hcv에 대한 항체 검출, hcv 감염의 진단 및 백신으로서의 그 예방에 특히 적합한 합성 펩티드 |
| US5106726A (en) * | 1990-02-16 | 1992-04-21 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptides specific for the detection of antibodies to HCV |
| US5747239A (en) * | 1990-02-16 | 1998-05-05 | United Biomedical, Inc. | Synthetic peptides specific for the detection of antibodies to HCV, diagnosis of HCV infection and preventions thereof as vaccines |
| US5654401A (en) * | 1990-11-28 | 1997-08-05 | The Johns Hopkins University | Borna disease virus-specific protein and kits |
| ES2138784T3 (es) * | 1990-12-14 | 2000-01-16 | Innogenetics Nv | Antigenos sinteticos para la deteccion de anticuerpos contra el virus de la hepatitis c. |
| US7119182B1 (en) | 1991-02-19 | 2006-10-10 | The Regents Of The University Of California | Recombinant thrombin receptor and related pharmaceuticals |
| US5688768A (en) * | 1991-02-19 | 1997-11-18 | Cor Therapeutics, Inc. | Recombinant thrombin receptor and related pharmaceuticals |
| US6139843A (en) * | 1991-04-02 | 2000-10-31 | Albert Einstein College Of Medicine Of Yeshiva University | Peptide compositions for the treatment of HIV |
| WO1993006843A1 (en) * | 1991-10-08 | 1993-04-15 | Duke University | Peptides corresponding to antigenic determinants of htlv |
| US6709828B1 (en) | 1992-03-06 | 2004-03-23 | N.V. Innogenetics S.A. | Process for the determination of peptides corresponding to immunologically important epitopes and their use in a process for determination of antibodies or biotinylated peptides corresponding to immunologically important epitopes, a process for preparing them and compositions containing them |
| US6667387B1 (en) | 1996-09-30 | 2003-12-23 | N.V. Innogenetics S.A. | HCV core peptides |
| US7094757B2 (en) * | 2001-06-22 | 2006-08-22 | Roche Diagnostics Corporation | Complexes comprising a prion protein and a peptidyl prolyl isomerase chaperone, and method for producing and using them |
| MXPA03011455A (es) | 2001-06-22 | 2004-04-05 | Hoffmann La Roche | Complejo soluble que comprende glucoproteina de superficie retroviral. |
| US7094884B2 (en) * | 2001-06-22 | 2006-08-22 | Roche Diagnostics Corporation | Soluble complexes of amylod β peptide and peptidyl prolyl isomerase chaperone and methods of making and using them |
| US6962982B2 (en) * | 2001-06-22 | 2005-11-08 | Roche Diagnostics Corporation | Soluble complexes of target proteins and peptidyl prolyl isomerase chaperones and methods of making and using them |
| AU2005267607B8 (en) * | 2003-09-11 | 2009-07-16 | Idexx Laboratories, Inc. | Method and device for detecting feline immunodeficiency virus |
| EP1673633B9 (en) * | 2003-09-11 | 2011-03-02 | Idexx Laboratories, Inc. | Method for detecting feline immunodeficiency virus |
| DE602004021724D1 (de) * | 2003-12-18 | 2009-08-06 | Idexx Lab Inc | Verfahren zum nachweis des felinen immunschwächevirus |
| DE602005027326D1 (de) * | 2004-02-19 | 2011-05-19 | Idexx Lab Inc | Verfahren und vorrichtung zum nachweis von katzen-immunschwächevirus |
| WO2006011920A1 (en) * | 2004-06-30 | 2006-02-02 | Idexx Laboratories, Inc. | Method and device for detecting feline immunodeficiency virus (fiv) comprising the use of peptides derived from the v3 region of the fiv env protein |
| FR2874017B1 (fr) * | 2004-08-06 | 2006-11-24 | Bio Rad Pasteur Sa | Peptides vih-1 modifies et leur utilisation en detection d'anticorps anti-vih |
| US7291338B2 (en) * | 2005-03-09 | 2007-11-06 | Idexx Laboratories, Inc. | Method and device for detecting feline immunodeficiency virus |
| EP2147110B1 (en) * | 2007-05-21 | 2011-11-02 | The Gov. Of The USA As Represented By The Secretary Of The Dept. Of Health & Human Services | Novel simian t-cell lymphotropic virus |
| US8809004B2 (en) | 2010-04-02 | 2014-08-19 | Idexx Laboratories, Inc. | Detection of feline immunodeficiency virus |
| CN103134717B (zh) * | 2011-11-30 | 2015-04-08 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 检测乳酸菌饮料中雌二醇含量的前处理方法及检测方法 |
| CN103134715A (zh) * | 2011-11-30 | 2013-06-05 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 检测乳酸菌饮料中催乳素含量的前处理方法及检测方法 |
| CN103134716A (zh) * | 2011-11-30 | 2013-06-05 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 检测乳酸菌饮料中孕酮含量的前处理方法及检测方法 |
| CN103134709A (zh) * | 2011-11-30 | 2013-06-05 | 内蒙古蒙牛乳业（集团）股份有限公司 | 检测原料奶中孕酮含量的前处理方法及检测方法 |
Family Cites Families (14)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US4554101A (en) * | 1981-01-09 | 1985-11-19 | New York Blood Center, Inc. | Identification and preparation of epitopes on antigens and allergens on the basis of hydrophilicity |
| WO1984004372A1 (en) * | 1983-04-20 | 1984-11-08 | Applied Motion Products Inc | An improved magnetic seal assembly |
| JPS62500452A (ja) * | 1984-09-19 | 1987-02-26 | ザ リ−ジエンツ オブ ザ ユニバ−シテイ オブ カリフオルニア | ヒト細胞形質転換に関連するレトロウイルスポリペプチド |
| ATE286132T1 (de) * | 1984-10-18 | 2005-01-15 | Pasteur Institut | Dns-fragmente des gag-gens von lav |
| US4774175A (en) * | 1985-03-01 | 1988-09-27 | Centocor, Inc. | Immunochemical methods for the detection of antibody against HTLV-III |
| IE64785B1 (en) * | 1985-04-08 | 1995-09-06 | Genetic Systems Corp | Expression of immunologically reactive viral proteins |
| US4629783A (en) * | 1985-04-29 | 1986-12-16 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| KR910002374B1 (ko) * | 1985-04-29 | 1991-04-20 | 제네틱 시스템즈 코포레이션 | Aids 관련질병의 검출을 위한 합성항원 |
| JP2702911B2 (ja) * | 1985-09-11 | 1998-01-26 | ユナイテツド・バイオメデイカル・インコ−ポレ−テツド | 合成ペプチド、並びにそれを用いたエイズおよびプリ・エイズの検出方法 |
| GB8525615D0 (en) * | 1985-10-17 | 1985-11-20 | Hoffmann La Roche | Polypeptides |
| ES2054616T3 (es) * | 1985-12-17 | 1994-08-16 | Akzo Nv | Reactivo inmunoquimico. |
| JPS63502904A (ja) * | 1986-03-24 | 1988-10-27 | オ−ソ・フア−マシユ−チカル・コ−ポレ−シヨン | 合成ｈｔｌｖ−３ペプチド、その組成物及び用途 |
| DE3789633T2 (de) * | 1986-05-27 | 1994-08-04 | Hoffmann La Roche | HTLV-III(LAV)Decke-Peptide. |
| DK169582B1 (da) * | 1986-06-23 | 1994-12-12 | Squibb Bristol Myers Co | Humant monoklonalt antistof, der er i stand til at reagere med en epitop på LAV/HTLV-III kappeglycoproteinet gp41, cellelinier, som producerer sådant antistof, farmaceutisk præparat indeholdende antistoffet samt fremgangsmåde til bestemmelse af nærværelsen af LAV/HTLV-III i en biologisk prøve og fremgangsmåde til separering af specifikke antigendeterminanter af LAV/HTLV-III under anvendelse af ant |
-
1987
- 1987-02-10 US US07/013,014 patent/US4879212A/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-10 IL IL82847A patent/IL82847A0/xx not_active IP Right Cessation
- 1987-06-10 DK DK296087A patent/DK296087A/da not_active Application Discontinuation
- 1987-06-15 EP EP87305278A patent/EP0278148B1/en not_active Revoked
- 1987-06-15 ES ES87305278T patent/ES2064316T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-06-15 DE DE3750812T patent/DE3750812T2/de not_active Revoked
- 1987-06-15 NO NO872473A patent/NO175482C/no unknown
- 1987-06-15 AT AT87305278T patent/ATE114672T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-07-01 ZA ZA874759A patent/ZA874759B/xx unknown
- 1987-07-06 JP JP62167117A patent/JP2675009B2/ja not_active Expired - Fee Related
- 1987-08-18 CA CA000544765A patent/CA1280363C/en not_active Expired - Fee Related
-
1992
- 1992-07-10 NO NO922744A patent/NO922744D0/no unknown
-
1995
- 1995-09-28 HK HK155795A patent/HK155795A/xx not_active IP Right Cessation
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO922744D0 (no) | 1992-07-10 |
| CA1280363C (en) | 1991-02-19 |
| ATE114672T1 (de) | 1994-12-15 |
| US4879212A (en) | 1989-11-07 |
| DK296087D0 (da) | 1987-06-10 |
| JPS63196856A (ja) | 1988-08-15 |
| NO175482C (no) | 1994-10-19 |
| EP0278148B1 (en) | 1994-11-30 |
| HK155795A (en) | 1995-10-06 |
| JP2675009B2 (ja) | 1997-11-12 |
| NO872473D0 (no) | 1987-06-15 |
| NO872473L (no) | 1988-08-11 |
| NO922744L (no) | 1988-08-11 |
| DE3750812T2 (de) | 1995-06-22 |
| DE3750812D1 (de) | 1995-01-12 |
| EP0278148A2 (en) | 1988-08-17 |
| EP0278148A3 (en) | 1990-06-06 |
| ZA874759B (en) | 1988-01-05 |
| IL82847A0 (en) | 1987-12-20 |
| DK296087A (da) | 1988-08-11 |
| ES2064316T3 (es) | 1995-02-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| NO175482B (no) | Peptidblanding for in vitro påvisning av antistoffer mot HTLV-III, anvendelse derav og prövesett for denne | |
| EP0214709B1 (en) | Synthetic peptide and process of using same for the detection of antibodies to htlv-iii, diagnosis of aids and pre-aids conditions and as a vaccine | |
| US4735896A (en) | Synthetic peptide and process of using same for the detection and diagnosis of AIDS and pre-AIDS conditions | |
| JP2851278B2 (ja) | Ｈｔｌｖ−ｉに対する抗体の検出のための抗原，ａｔｌのためのワクチンとしてのペプチド組成物およびそれを用いる方法 | |
| US4629783A (en) | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease | |
| KR910002374B1 (ko) | Aids 관련질병의 검출을 위한 합성항원 | |
| EP0396559B1 (en) | Hiv peptides, artificial hiv antigens and immunoassay kits | |
| RU1802871C (ru) | Способ определени антител к Н @ V - 1 | |
| DK174533B1 (da) | Fremgangsmåde til påvisning af antistof mod HIV-virus | |
| EP0247557B1 (en) | HTLV-III(LAV) Envelope peptides | |
| JP2643598B2 (ja) | Ｈｔｌｖ‐▲ｉ▼抗体に対する免疫反応性を有する合成ペプチド組成物 | |
| Sokol et al. | Characterization of HTLV envelope seroreactivity in large granular lymphocyte leukemia | |
| JP2650217B2 (ja) | Ｈｔｌｖ―１感染の診断、治療及び予防接種のためのペプチド | |
| EP0326490B2 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| CA2034611C (en) | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to htlv | |
| CA1341436C (en) | Synthetic antigens for the detection of aids-related disease caused by lav-2 | |
| US5476765A (en) | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to HTLV and as vaccines | |
| JP4166940B2 (ja) | Ｈｉｖウイルスに対して免疫反応性である抗体の検出用の合成抗原 | |
| WO1991007510A1 (en) | A method of detecting htlv-i antibodies in human body fluids | |
| AU627701B2 (en) | Hiv peptides, artificial hiv antigens and immunoassay kits | |
| US5681696A (en) | Synthetic peptide compositions with immunoreactivities to antibodies to HTLV | |
| AU617201B2 (en) | Novel protein and coding sequence for detection and differentiation of siv and hiv-2 group of viruses | |
| CA1341594C (en) | Synthetic peptides and mixtures therof for detecting hiv antibodies | |
| JP2705791B2 (ja) | Ａｉｄｓ関連病の検出のための合成抗原 | |
| NO173034B (no) | Fremgangsmaate og peptider for paavisning av aids-relatert sykdom |