RU1802871C - Способ определени антител к Н @ V - 1 - Google Patents
Способ определени антител к Н @ V - 1Info
- Publication number
- RU1802871C RU1802871C SU884355648A SU4355648A RU1802871C RU 1802871 C RU1802871 C RU 1802871C SU 884355648 A SU884355648 A SU 884355648A SU 4355648 A SU4355648 A SU 4355648A RU 1802871 C RU1802871 C RU 1802871C
- Authority
- RU
- Russia
- Prior art keywords
- hjv
- peptide
- peptides
- leu
- ser
- Prior art date
Links
- 238000000034 method Methods 0.000 title description 33
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 abstract description 49
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 abstract description 37
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 abstract description 21
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 abstract description 9
- 238000003745 diagnosis Methods 0.000 abstract description 6
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 description 150
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 description 70
- 241000713772 Human immunodeficiency virus 1 Species 0.000 description 58
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 51
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 51
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 49
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 33
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 description 31
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 28
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 28
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 27
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 24
- 230000009257 reactivity Effects 0.000 description 16
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 15
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 12
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 12
- 241000700605 Viruses Species 0.000 description 11
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 description 11
- 238000001262 western blot Methods 0.000 description 11
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 9
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 9
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 9
- 101800005164 Peptide V Proteins 0.000 description 8
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 7
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 7
- 239000000203 mixture Substances 0.000 description 7
- 238000003786 synthesis reaction Methods 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 6
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 6
- 230000027455 binding Effects 0.000 description 6
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 6
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 5
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 5
- 108090000288 Glycoproteins Proteins 0.000 description 5
- 102000003886 Glycoproteins Human genes 0.000 description 5
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 5
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 description 5
- 108700004026 gag Genes Proteins 0.000 description 5
- 101150098622 gag gene Proteins 0.000 description 5
- 238000004519 manufacturing process Methods 0.000 description 5
- KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N Fluorane Chemical compound F KRHYYFGTRYWZRS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 4
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 description 4
- 108700004025 env Genes Proteins 0.000 description 4
- 101150030339 env gene Proteins 0.000 description 4
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 4
- 238000000746 purification Methods 0.000 description 4
- 238000012216 screening Methods 0.000 description 4
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 4
- 101710177291 Gag polyprotein Proteins 0.000 description 3
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 3
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 3
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 3
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 3
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 3
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 3
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 3
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 description 3
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 3
- 238000003127 radioimmunoassay Methods 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 230000000405 serological effect Effects 0.000 description 3
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 3
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 102000002260 Alkaline Phosphatase Human genes 0.000 description 2
- 108020004774 Alkaline Phosphatase Proteins 0.000 description 2
- IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N Atomic nitrogen Chemical compound N#N IJGRMHOSHXDMSA-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000894006 Bacteria Species 0.000 description 2
- IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N Dimethylsulphoxide Chemical compound CS(C)=O IAZDPXIOMUYVGZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 description 2
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 description 2
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 208000031886 HIV Infections Diseases 0.000 description 2
- 241000282412 Homo Species 0.000 description 2
- 241000713340 Human immunodeficiency virus 2 Species 0.000 description 2
- 241001465754 Metazoa Species 0.000 description 2
- 241000283973 Oryctolagus cuniculus Species 0.000 description 2
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 2
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L Sodium Carbonate Chemical compound [Na+].[Na+].[O-]C([O-])=O CDBYLPFSWZWCQE-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 2
- 101800001690 Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 2
- DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N Trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F DTQVDTLACAAQTR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N anisole Chemical compound COC1=CC=CC=C1 RDOXTESZEPMUJZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000008901 benefit Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 2
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 2
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 2
- 239000003593 chromogenic compound Substances 0.000 description 2
- 238000010367 cloning Methods 0.000 description 2
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 2
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 238000011161 development Methods 0.000 description 2
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 2
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 2
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 2
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 2
- 230000009931 harmful effect Effects 0.000 description 2
- 210000005260 human cell Anatomy 0.000 description 2
- 230000003053 immunization Effects 0.000 description 2
- 238000002649 immunization Methods 0.000 description 2
- 238000003018 immunoassay Methods 0.000 description 2
- 230000002163 immunogen Effects 0.000 description 2
- 238000013507 mapping Methods 0.000 description 2
- QPJSUIGXIBEQAC-UHFFFAOYSA-N n-(2,4-dichloro-5-propan-2-yloxyphenyl)acetamide Chemical compound CC(C)OC1=CC(NC(C)=O)=C(Cl)C=C1Cl QPJSUIGXIBEQAC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 230000003472 neutralizing effect Effects 0.000 description 2
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 2
- 230000004044 response Effects 0.000 description 2
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 2
- JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N toluene-4-sulfonic acid Chemical compound CC1=CC=C(S(O)(=O)=O)C=C1 JOXIMZWYDAKGHI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 2
- JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N (2r,3r,4s)-2-[(1r)-1,2-dihydroxyethyl]oxolane-3,4-diol Chemical compound OC[C@@H](O)[C@H]1OC[C@H](O)[C@H]1O JNYAEWCLZODPBN-JGWLITMVSA-N 0.000 description 1
- ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N (2s)-1-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonyl]pyrrolidine-2-carboxylic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N1CCC[C@H]1C(O)=O ZQEBQGAAWMOMAI-ZETCQYMHSA-N 0.000 description 1
- ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylpropanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC1=CC=CC=C1 ZYJPUMXJBDHSIF-NSHDSACASA-N 0.000 description 1
- SOHLZANWVLCPHK-LBPRGKRZSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-4-oxo-4-phenylmethoxybutanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(=O)OCC1=CC=CC=C1 SOHLZANWVLCPHK-LBPRGKRZSA-N 0.000 description 1
- AJDUMMXHVCMISJ-ZDUSSCGKSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-5-oxo-5-phenylmethoxypentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(=O)OCC1=CC=CC=C1 AJDUMMXHVCMISJ-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- QVHJQCGUWFKTSE-YFKPBYRVSA-N (2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound OC(=O)[C@H](C)NC(=O)OC(C)(C)C QVHJQCGUWFKTSE-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N (2s)-3-(1h-indol-2-yl)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC=C2NC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC2=C1 WXYGVKADAIJGHB-ZDUSSCGKSA-N 0.000 description 1
- DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N (2s)-3-[1-(4-methylphenyl)sulfonylimidazol-4-yl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC(C)=CC=C1S(=O)(=O)N1C=C(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)N=C1 DCLJSEPKYJSEHW-HNNXBMFYSA-N 0.000 description 1
- UYWMYJQSTUVRHR-SFHVURJKSA-N (2s)-3-[4-[(2-bromophenyl)methoxycarbonyloxy]phenyl]-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]propanoic acid Chemical compound C1=CC(C[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)=CC=C1OC(=O)OCC1=CC=CC=C1Br UYWMYJQSTUVRHR-SFHVURJKSA-N 0.000 description 1
- WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N (2s)-5-[amino-[(4-methylphenyl)sulfonylamino]methylidene]azaniumyl-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]pentanoate Chemical compound CC1=CC=C(S(=O)(=O)NC(N)=NCCC[C@H](NC(=O)OC(C)(C)C)C(O)=O)C=C1 WBIIPXYJAMICNU-AWEZNQCLSA-N 0.000 description 1
- VVNYDCGZZSTUBC-LURJTMIESA-N (2s)-5-amino-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-5-oxopentanoic acid Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CCC(N)=O VVNYDCGZZSTUBC-LURJTMIESA-N 0.000 description 1
- 101150084750 1 gene Proteins 0.000 description 1
- 101150028074 2 gene Proteins 0.000 description 1
- LXUNZSDDXMPKLP-UHFFFAOYSA-N 2-Methylbenzenethiol Chemical compound CC1=CC=CC=C1S LXUNZSDDXMPKLP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010067484 Adverse reaction Diseases 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 1
- 108090000565 Capsid Proteins Proteins 0.000 description 1
- 101710132601 Capsid protein Proteins 0.000 description 1
- RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N Diethyl ether Chemical compound CCOCC RTZKZFJDLAIYFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 241000353621 Eilat virus Species 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Natural products OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 1
- 108700010908 HIV-1 proteins Proteins 0.000 description 1
- 101900330621 Human immunodeficiency virus type 1 group M subtype B Transmembrane protein gp41 Proteins 0.000 description 1
- 102000012745 Immunoglobulin Subunits Human genes 0.000 description 1
- 108010079585 Immunoglobulin Subunits Proteins 0.000 description 1
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N L-glutamic acid Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-VKHMYHEASA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N L-lysine Chemical compound NCCCC[C@H](N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N Lysine Natural products NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- 101710125418 Major capsid protein Proteins 0.000 description 1
- FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-asparagine Chemical compound CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)CC(N)=O FYYSQDHBALBGHX-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N N(alpha)-t-butoxycarbonyl-L-leucine Chemical compound CC(C)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)OC(C)(C)C MDXGYYOJGPFFJL-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 1
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 1
- 108010076039 Polyproteins Proteins 0.000 description 1
- 239000004793 Polystyrene Substances 0.000 description 1
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- 101000828148 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Transposon Ty3-G Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 101000790437 Saccharomyces cerevisiae (strain ATCC 204508 / S288c) Transposon Ty3-I Gag polyprotein Proteins 0.000 description 1
- 102100023935 Transmembrane glycoprotein NMB Human genes 0.000 description 1
- 206010046865 Vaccinia virus infection Diseases 0.000 description 1
- 108010015780 Viral Core Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010003533 Viral Envelope Proteins Proteins 0.000 description 1
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 1
- ZAFQHMFHEMVQEB-UHFFFAOYSA-N acetonitrile 2,2,2-trifluoroacetic acid Chemical compound CC#N.OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F ZAFQHMFHEMVQEB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 1
- 230000002378 acidificating effect Effects 0.000 description 1
- 230000006838 adverse reaction Effects 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 230000005875 antibody response Effects 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000012298 atmosphere Substances 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- VWYLMMNTUOUYCT-UHFFFAOYSA-N benzyl carbonobromidate Chemical compound BrC(=O)OCC1=CC=CC=C1 VWYLMMNTUOUYCT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N benzyl chloroformate Chemical compound ClC(=O)OCC1=CC=CC=C1 HSDAJNMJOMSNEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000000051 benzyloxy group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])O* 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 description 1
- 230000001413 cellular effect Effects 0.000 description 1
- 238000004140 cleaning Methods 0.000 description 1
- 239000012459 cleaning agent Substances 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 description 1
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 1
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 1
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 238000001514 detection method Methods 0.000 description 1
- 229940039227 diagnostic agent Drugs 0.000 description 1
- 239000000032 diagnostic agent Substances 0.000 description 1
- 238000002405 diagnostic procedure Methods 0.000 description 1
- KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L disodium;(4-nitrophenyl) phosphate;hexahydrate Chemical compound O.O.O.O.O.O.[Na+].[Na+].[O-][N+](=O)C1=CC=C(OP([O-])([O-])=O)C=C1 KAKKHKRHCKCAGH-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 108010078428 env Gene Products Proteins 0.000 description 1
- 238000001704 evaporation Methods 0.000 description 1
- 230000008020 evaporation Effects 0.000 description 1
- 239000007850 fluorescent dye Substances 0.000 description 1
- -1 for example Substances 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000004220 glutamic acid Substances 0.000 description 1
- PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N gold Chemical compound [Au] PCHJSUWPFVWCPO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000008105 immune reaction Effects 0.000 description 1
- 230000005847 immunogenicity Effects 0.000 description 1
- 230000016784 immunoglobulin production Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 230000000670 limiting effect Effects 0.000 description 1
- 230000004807 localization Effects 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- 238000005259 measurement Methods 0.000 description 1
- 230000007246 mechanism Effects 0.000 description 1
- 210000004779 membrane envelope Anatomy 0.000 description 1
- UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N methoxybenzene Substances CCCCOC=C UZKWTJUDCOPSNM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- QAAQPSNBIGNDII-YDALLXLXSA-N n-cyclohexylcyclohexanamine;(2s)-2-[(2-methylpropan-2-yl)oxycarbonylamino]-3-phenylmethoxypropanoic acid Chemical compound C1CCCCC1NC1CCCCC1.CC(C)(C)OC(=O)N[C@H](C(O)=O)COCC1=CC=CC=C1 QAAQPSNBIGNDII-YDALLXLXSA-N 0.000 description 1
- 239000013642 negative control Substances 0.000 description 1
- 229910052757 nitrogen Inorganic materials 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 1
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 1
- 235000016709 nutrition Nutrition 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 230000036961 partial effect Effects 0.000 description 1
- 230000000737 periodic effect Effects 0.000 description 1
- 239000012071 phase Substances 0.000 description 1
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 description 1
- 229920002223 polystyrene Polymers 0.000 description 1
- 229920000915 polyvinyl chloride Polymers 0.000 description 1
- 239000004800 polyvinyl chloride Substances 0.000 description 1
- 239000013641 positive control Substances 0.000 description 1
- 230000009145 protein modification Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 238000004366 reverse phase liquid chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002441 reversible effect Effects 0.000 description 1
- 238000012163 sequencing technique Methods 0.000 description 1
- 239000000377 silicon dioxide Substances 0.000 description 1
- 229910000029 sodium carbonate Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000007787 solid Substances 0.000 description 1
- 230000004936 stimulating effect Effects 0.000 description 1
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 1
- 230000002194 synthesizing effect Effects 0.000 description 1
- 125000005931 tert-butyloxycarbonyl group Chemical group [H]C([H])([H])C(OC(*)=O)(C([H])([H])[H])C([H])([H])[H] 0.000 description 1
- WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N tfa trifluoroacetic acid Chemical compound OC(=O)C(F)(F)F.OC(=O)C(F)(F)F WROMPOXWARCANT-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002088 tosyl group Chemical group [H]C1=C([H])C(=C([H])C([H])=C1C([H])([H])[H])S(*)(=O)=O 0.000 description 1
- 108091007466 transmembrane glycoproteins Proteins 0.000 description 1
- 108091005703 transmembrane proteins Proteins 0.000 description 1
- 102000035160 transmembrane proteins Human genes 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- 208000007089 vaccinia Diseases 0.000 description 1
- 230000029812 viral genome replication Effects 0.000 description 1
- 230000009385 viral infection Effects 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Substances O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
Landscapes
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- Virology (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
Abstract
Использование: иммунологи , диагностика СПИДа. Сущность изобретени : пред- лагаютс синтетические пептмды, соответствующие област м иммунологиче- ски реактивных белков HJV-1, используемые при дигностике HJV-1-инфекции. 7 табл., 3 ил.
Description
Изобретение относитс к синтетическим пептидным антигенам, последовательности которых соответствуют област м HJV - 1 белков, и к их применению в качестве диагностических реагентов дл определени наличи антител к HJV- 1. Петиды также могут быть использованы в качестве иммуногенов в композици х дл стимул ции продуцировани антител против HJV-1.
HJV - 1 (человеческий вирус иммуноде- фицита-1) вл етс названием данным группе высоки родственных вирусов, которые были идентифицированы как первичный этиологический агент дл синдрома приобретенного иммунодефицита (AIDS) у людей
(СПИДа). HJV - 1, который также известен как HTLY - III, LAV и AKV, вл етс главной проблемой мирового здравоохранени . С тех пор как HJV - 1 был впервые идентифицирован как этиологический агент СПИДа, значительный прогресс был достигнут в исследовани х вируса как такосого и механизмов , с помощью которых вирус вызывает заболевание, и в разработке диагностических тестов дл определени наличи вируса или инфекции.
Методы определени заражени вирусом HJV - 1 в общем заключаетс в измерении наличи вируса путем обнаружени и количественного определени антител к HJV - 1 - антигенам в крови, сыворотке и
ы
веществах, вырабатываемых из крови. Такие методы используют с целью диагностики AIDS (СПИДа)/и ARC (AIDS - родственного комплекса) и дл скрининга крови и продуктов из крови на предшествующее воздействие HJV - 1.
Диагностику HJV - 1 инфекций и скри- нирование крови на наличие HJV-1 обычно осуществл ют с помощью методик иммуно- ферментного анализа (Е LISA), чтобы определить наличие антител к иммуногенным компонентам HJV - 1 в испытуемом образце .
Другие методы включают использование блоттинговых методик Вестерна дл определени HJV - специфических антител в испытуемых образцах. В общем может быть применен почти любой известный им- муноанализ, такой как радиоиммуноанализ, при использовании специфических реагентов дл детектировани HJV - 1 и антител к нему.
Источником антигенов в первой генерации этих анализов обычно вл лись антигенные белки, полученные из HJV - 1, продуцированного лини ми человеческих хелперных Т-лимфобластоидных клеток, таких как Н9. Хот эти первые генерации тестов ELISA на HJV - 1 вл лись достаточно чувствительными и специфическими, использование этих антигенов, полученных из живых вирусных препаратов, вызывает серьезные существенные трудности.
Продуцирование самого.HJV - 1 в непрерывных клеточных лини х может быть осуществлено с высокой степенью (РЗ компонент ) в лаборатори х из-за опасности дл исследователей подвергнутьс вредному воздействию вируса. Кроме того, имеютс четкие ложные отрицательные и ложные положительные результаты, которые были получены в тестах ELISA с использованием целых антигенов вируса.
Блрт-анализ Вестерна с использованием цельных вирусных антигенов обеспечивает более высокую специфичность, но он более трудоемок и требует больших затрат времени, чем ELISA тесты. Кроме того, так как Н9 и другие HJV - 1 продуцирующие клетки вл ютс лини ми человеческих клеток , если они не подвергнуты дорогосто щей очистке, они могут загр знены обычными клеточными антигенами, такими как HLA антигены, которые могут вызвать ложную положительную реакцию в тесте ELISA.
Дорогосто ща очистка вирусных антигенов из клеточных линий также может предположительно разрушать иммуноген- ность иммунологически важных белков или,
другими словами, дезактивировать антигены , в результате чего продуцируютс реагенты , которые привод т к ложным отрицательным реакци м. Дополнительно,
ложные отрицательные реакции с использованием антигенов, полученных из интакт- ных вирусных препаратов, могут встречатьс из-за стерических затруднений, из-за которых антитела к вирусным антиге0 на не могут взаимодействовать со своим специфическим антигеном, потому что реакци заблокирована наличием других вирусных антигенов и антител в реакционной смеси.. ...
5 Во второй генерации тестов ELISA дл определени HJV - 1 инфекции примен ют иммунологически важные вирусные белки, которые могут быть продуцированы клонирующими участками HJ V -1 генома в бакте0 рии. Вирусный этиологический агент AIDS (т.е. вирусы, ранее называемые HTLY-III, LAV и ARV) из различных источников был изолирован, клонирован и была определена нуклеотидна последовательность.
5 Как показано на фиг.1, HJV - 1 вл етс относительно сложным ретровирусом. содержащим по крайней мере семь генов. Вирусные структуральные гены, обозначенные gag, poJ и env соответственно, кодируют
0 белки вирусного дра, обратную транскрип- тазу и вирусные гликопротеины вирусной оболочки. Другие гены, показанные на фиг.1, вл ютс вспомогательными генами, включенными в репликацию вируса Гены
5 gag и env кодируют полипротеины, синтезированные из каждого из этих генов, вл ютс пост-трансл ционно расщепл емыми на несколько малых протеинов. Предыдущие исследовани показали, что белки, кодиро0 ванные gag и особенно env - област ми HJV - t - генома, вл ютс иммунологически важными, так как антитела к продуктам gag и env генов найдены в сыворотке AIDS и ARC пациентов.,
5 env - ген кодирует гликопротеин (д р160) с кажущейс молекул рной массой (Mr) около 160 000 дальтон, который вл етс пост синтетически расщепл емым на два гликопротеина, g р 120 и др 41 с молекул р0 ной массой 120 000 и 41 000 соответствен но. Гликопротеин др 120 вл етс по-видимому наружным белком вирусной оболочки, тогда как др 41 по-видимому вл етс трансмембранным белком. И др 120 и др 41 вл ютс
5 иммуногенными с антителами к обоим белкам , которые легко определ ютс в сыворотке больных AIDS и ARC.
Поскольку антитела к др 120 и др 160 в сыворотке больных AIDS и ARC, а также асимптоматических индивидуумов, зараженных вирусом, вл ютс нейтрализующими , т.е. ингибируют св зывание вируса, др 120, др 160 или их участки вл ютс кандидатами дл субединицы вакцины. Трансмембранный гликопротеин др 41 вл етс HJV - 1 антигеном, более последовательно распознаваемым антителами в сыворотке больных AIDS и ARC (5). Кроме того, антите - ла в сыворотке больного также распознают эпитопы белков дра вируса, кодируемых gag - геном.
Иммунологически важные Н J V -1 антигены дл применени в диагностике и как потенциальные композиции вакцины были приготовлены путем клонировани участков HJV - 1 генома в различных экспрессирую- щйе системы, такие как бактерии, дрожжи или vaccinia, HJV - 1 антигены, продуцированные по методикам рекомбинантной ДНК, однако, должны еще пройти дорогосто щую очистку, чтобы избежать ложных положительных реакций в ELISA из-за реактивности любого антитела к антигенам системы экспрессии, которые могут загр зн ть препарат HJV - 1 антигена. Также денатураци HJV - 1 антигенов во врем очистки может разрушить важную антигенную активность .
Белок антигенов содержит р д зпито- по в или антигенных детерминант, которые вл ютс област ми в белках, которые содержат сайты св зывани дл специфических антител. В общем белковые антигены содержат 5-10 эпитопов, каждый из которых содержит последовательность из 6-8 аминокислот. Эпитопы могут быть или непрерывными , в которых 6-8 аминокислот имеютс в последовательности, или периодическими , в которых аминокислоты, которые образуют эпитоп, св заны вместе трехмерной укладкой белков. Хот эпитоп состоиттолько из относительно небольшого числа аминокислот, их реактивность с антителом находитс под вли нием аминокислот в белке, который окружают эпитоп.
Исследовани , направленные на картирование антигенных сайтов или эпитопов белков, были выполнены с использованием синтетических пептидов, соответствующих различным област м интересующих белков.
Помимо их полезности в исследовани х дл картировани эпитопов синтетические пептиды, если они охватывают основные антигенные детерминанты белка, обладают потенциалом в качестве вакцин и диагностических агентов. Синтетические пептид- ные антигены обладают некоторыми преимуществами в отношении продуцировани специфических антител и реактивности . Последовательность синтезированного пентида может быть выбрана среди аминокислотных последовательностей, которые фактически определены при аминокислот- 5 ном секвенсировании белка, или вывод тс из последовательности ДНК, кодирующей белок. Использование специфических синтетических пептидов устран ет необходимость в использовании белка полной длины
0 при продуцировании или дл анализа спе-. цифических антител. Кроме того, методика синтеза пептидов в твердой фазе позвол ет получать химически практически неограниченные количества интересующего пепти5 да. Доступность автоматизированных синтезаторов пептидов вл етс дополнительным преимуществом таких методик.
В некоторых публикаци х представлены данные, показывающие иммунологиче0 скую реактивность выбранных синтетических пептидов, соответствующих антигенным белкам HJV - 1, В одном исследовании был синтезирован пептид, имеющий аминокислотную последовательность
5 Tyr-Asp-Arg-Pro-Glu-Glu-GIy-lie-Giu-GIu- Gly-Glu-Arg-Asp-Arp-Asp-Arg-Ser-Giy-Cys, котора соответствует ами+юкислотым остаткам 735-752 HJV - 1. Этот пептид, который вл етс частью др 41, использовали
иммунизации кроликов в попытке вызвать нейтрализующий антитела ответ в HJV-1.
Кроме того, несколько сывороток от больных AIDS, про которых было известно,
5 что они содержат анти-др 41 антитела, были мало реактивными с этим пептидом; это указывает , что этот пептид содержит по крайней мере один эпитоп, распознаваемый до некоторой степени антителами к нативному
0 др 160/др4 1.
Недавно вышедша работа относитс к обеспечению синтетических пептидов дл диагностики AIDS в дополнение к разработке композиций вакцины. В одном исследо5 ва нии был синтезирован пептид из 21 аминокислоты, названный SM284, с аминокислотной последовательностью Arg-lle- Leu-Ala-Val-Glu-Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Glu-Le u-Leu-Gly-Ile-Gly-Cys-Ser.
0
Этот пептид, который соответствует аминокислотам 586-606 в др 160 и содержит антигеннь1й сегмент др 41, вл етс реактивным с HJV - 1 положительной сыворот5 кой от больных AIDS/ARC при анализе методами ELISA и блоттиг-анализе Вестерна . SM284 пептид благопри тно выдерживает сравнение с протеинами, происход щим из НJV - 1, при детектирова- нии HJV - 1 антител по методу ELISA.
Например, в методе ELISA с использованием SM284 детектируют антитела D образцах сыворотки у 96,5% больных AIDS/ARC и 34,6% здоровых асимптомати- ческих с высоким риском индивидуумов. Не имелось ложных положительных в 387 сыворотках от контрольных индивидуумов.
Серологический и химический анализы SM284 пе.птйда и родственных пептидов показали , что некоторые аминокислоты по-ви- димому вл ютс более важными, чем другие при взаимодействии антителоанти- ген пептидэ. .
. Делени остатков Arg-1, He-2- n Lys-10 из пептида значительно снижает.или ун ич- тожает серологическую реактивность. Деле- ци ТГУ-GIy-Cys-Ser остатков у карбоксильного конца, пептида, с другой .стороны, приводит в результате к умеренной потере серологической активности, ука- зыва ,.что аминеконцева часть пептида вл етс по-видимому более важной, чем карбоксильна концева часть дл иммуно- логической реактивности.
Предлагаетс несколько иммунологиче- ски реактивных синтетических.пептидов, соответствующих област м HJV - 1 белков .дл детектировани AIDS и AIDS - родственной болезни. Особенно интересным вл етс пептид V (39), имеющий последовательность Arg-lle-Leu-AJa-Val-Glu- Arg-Tyr-Leu-Lys-Asp-Glu-GIu-Leu-Leu-Gly- e-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-Ne-Cys X, где X вл етс ОН или NH2, который соответст- вует участку др 41, кодируемому парами ос- нрваний 7516-7593 HIV- 1 генома. Пептид V (39) реагирует с 23/24(95,8%) образцами сыворотки от больных с достоверной HJV - 1 инфекцией.
В соответствии с насто щим изобрете- нием предлагаютс новые синтетические пептиды, соответствующие антигенным HJV- 1 белкам, которые вл ютс полезными и превышают по селективности диагно,- стические методы дл детектировани HJV - 1 инфекций.
Найдены новые синтетические пептид- ные антигены, соответствующие гликопро- теину др 41, кодированному HJV - 1 env геном.
Эти пептиды используютс дл диагностики AIDS у подозрительных индивидуумов и в методах дл скрининга на воздействие HJV - 1 крови и происход щих из крови продуктов с высокой степенью на- дежности и очень незначительным количе- .ством ложных результатов.
Пептиды могут быть использованы в методах определени антител к HJV - 1 в образцах . Методы включают контактирование
образца с пептидными антигенами в услови х , которые позвол ют образоватьс имму- нологичесокму комплексу между пептидом и любым HJV-1 специфическим антителом в образце. Измерение образовани комплекса с помощью любого детектирующего (Средства указывает на наличие или отсутствие антител к HJV.- 1 в образце.
Также могут быть использованы новые пептиды в качестве иммуногенов в композици х вакцины дл иммунизации против HJV - 1 инфекции или дл продуцировани у животных HJV - 1 специфических антител против HJV - 1 антигенов.
На фиг. 1 схематически представлены гены HJV - 1; на фиг.2 - ген др 41 HJV - 1, изображенный в виде частично перекрывающих пептидов, синтезированных в соответствии с изобретением, и сравнение известных пептидов, соответствующих др 41; на фиг.З - гистограмма, показывающа величины EL ISA, полученные с использованием дР41А5 в качестве антигена.
Изобретение посв щено р ду пептидов длиной 15-27 аминокислот, соответствующих област м белкового продукта целого HJV - 1 gag гена и др 41 HJV - 1, которые были синтезированы и испытаны на имму- нореактивность к HJV - 1 положительным образцам сыворотки, полученным из Соединенных Штатов/Великобритании, Израил , Африки и Швеции. Новые пептиды вл ютс полезными в тестах на диагностику HJV- 1 инфекции или на предшествующее воздействие вируса и в качестве иммуногенов в композици х, чтобы вызвать продуцирование у животных и людей антител против HJV-1. Пептиды, соответствующие gag белкам и в частности др 41 были собраны и синтезированы, потому что эти HJV- t белки показывают меньшую вариацию от штамма к штамму характеристик, чем другие иммунологически важные HJV - 1 антигенные белки, такие как др 120. Пептиды, охватываемые изобретением, включают олигопептиды, имеющие аминокислотные последовательности, содержащие такие последовательности , которые содержат непрерывные (линейные) эпитопы, реактивные с HJV - 1 специфическими антителами .
Следовательно, изобретение охватывает группу иммунологически реактивных пептидов и функционально эквивалентных вариантов их, которые не ухудшают в значительной мере антигенные свойства пептида, соответствующего др 41, кодируемого env геном HJV- 1.
Области др 41, соответствующие каждому пептиду, детально описанному ниже, показаны на фиг.2. Все пептиды синтезированы по известным методикам синтеза пептидов на твердой фазе. Синтез также позвол ет, чтобы одна или две аминокислоты , несоответствующие первоначальной последовательности белка, были добавлены к NH2 - или СООН - концу пептидов. Такие наружные аминокислоты вл ютс полез . ными дл сочетани пептидов друг с другом, дл содержани с. белковым носителем или с подложкой. Аминокислоты, которые вл ютс полезными дл этих целей, включают тирозин, лизин, глютаминовую кислоту, ас- паргиновую кислоту, цистеин и их производные . Могут быть .использованы дополнительные методики модификации белков, например, NH2 - ацетилирование или СООН - концевое змидироваиие, чтобы обеспечить дополнительное средство дл сочетани пептидов с другим белком или
молекулой пептида или подложкой.
Новые пептиды, соответствующие др 41, представлены ниже:
др41А5. X-Asp-Gln-Gln-Leu-Leu-G y-l1e-Trp-G y- Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-l e-Cys-Thr-Thr-Ala-Val
Pro-Trp-Asn-l-Z, где X вл етс или Н концевой амино NHa - группы пептида, или дополнительной аминокислотой, св занной с аминоконцевой NHa - труппой пептида, дополнительную аминокислоту выбирают дл облегчени сочетани пептида с носителем белка; J - отсутствует или вл етс Суз; a..Z вл етс ОН или NH2.
Пептид др41А5, который соответствует аминокислотам 596-618. кодируемым парами оснований (по) 7563 по 7632 HJV - 1 генома, соответствующими env гену вл етс особенно предпочтительным вариантом насто щего изобретени . Пептид др41А5 в котором X вл етс Н2, J вл етс Суз и Z вл етс ОН, вл етс особенно предпочтительным .
др41СТ4
Пептид др41СТ4, который соответству- етобластидр41 белка, кодируемого по при-, мерно от 8173 до 8238 HJV- 1 геиома, имеет формулу: X-AIa-Leu-Lys-Tyr-Trp-Trp-Asn- Leu-Leu-Glu-Tyr-Trp-Ser-Gln-Glu-Leu-Lys-A sn-Ser-Ala-Val-Ser-J-Z, где X, J и Z имеют указанные ранее значени ,
др41СТЗ
Пептид др41СТЗМ, который соответствует области дР41, кодируемой по от примерно 8220 до 8280 Н J V - 1, имеет формулу: X-Lys-Asn-Ser-A a-Val-Ser-Leu-Leu-Asn-Ala
-Thr-Ala-lle-A a-Val-Ala-Glu-GIy-Thr-Asp-J-Z, где X, J и Z имеют указанные ранее значени ,
др41В1
Пептид др41В1, который соответствует области др41, кодируемой от примерно по 7614 до 7686 Н J V -1 генома env гена, имеет формулу; X-Thr-Ala-Val-Pro-Trp-Asn-A a-Ser- 5 Trp-Ser-Asn-Lys-Ser-Leu-GIu-Glu-Ile-Trp-As n-Asn-Met-Trp:Trp-Met-J-Z, где X, J и Z имеют указанные ранее значени .
др41ВЗ.- ...
Пептид др41 ВЗ, который соответствует 0 области дР 41, кодируемой примерно по 7705 до 7773 HJV-1 генома, имеет формулу: X-lle-Asn-Tyr-Thr-Ser-Leu-tie-His-Ser-Leu-ll e-Glu-Glu-Ser-Gin-Asn-Gln-Gln-Glrt-Lys-Asn
-Glu-J-Z, где X, J и Z имеют указанные ранее 5 значени .
Кроме того, изобретение охватывает некоторые иммунологически реактивные пептиды и их функциональные варианты, соответствующие област м белковых про- 0 дуктов, кодируемых gag геном HIV - 1 (фиг.1). Эти новые пептиды представлены1 ниже: . GAG 2 .
Пептид GAG 2, который соответствует
5 области gag генного продукта, кодируемого
по примерно 779 до 840 gag гена H1V - 1,
имеет формулу: X-Pro-Arg-Tlir-Leu-Ash-AlaТф-Val-Val-Glu-Glu-Lys-Ala-Phe-Ser-Pro -Giu
-VaKl-Z, где X, J nZ имеют указанные ранее 0 значени . GAG3
Пептид GAG 3, который соответствует области gag генного белкового продукта, кодируемого по примерно 810 до 870.gag гена, 5 имеет формулу: X-Val-GIu-GIu-Lys-Ala-Phe- Ser-Pro-Glu-Val-IIe- Pro-Met-Phe-Ser-Aia- Leu-Ser-Glu-Giy-J-Z, где X, J и Z имеют . указанные ранее значени .
GAG 14 . .- ; 0- Пептид GAG 14, который соответствует области gag генного продукта, кодируемого по примерно 1368 до 1430 HJV- 1 gag гена, имеет формулу:. X-Glu-Met-Met-Thr-Ala-Cys- Gin-Gly-Val-GIy-Gly-Pro-Giy-His-Lys-Ala-Arg 5 -Val-Leu-Ala-Glu-J-Z, где X, J и Z имеют указанные ранее значени . P17-D
Пептид P17-D, который соответствует
области gag генного белкового продукта, ко0 дируемой по примерно 495 до 560 HJV - 1
оао гена, имеет формулу: X-Ser-Glu-Gly-Cys Arg-Gln-lle-Leu-Gly-Gln-Leu-Gln-Pro-Ser-Leu
-Gln-Thr-Gly-Ser-Gln-Leu-J-Z, гдеХ, J игиме-. ют указанные ранее значен и . 5 P17-F
Пеприд P17-F, который соответствует области оао генного белкового продукта, кодируемой по примерно 588 до 647 HJV - 1 оао гена, имеет формулу: X-Leu-Tyr-Cys-Vai- His-Gln-Arg-lle-Gin-ile-Lys-Asn-Thr-Lys-Glu
-Ala-Leu-Asp-Lys-lle-J-Z, где X, J и Z имеют указанные ранее значени .
Пептиды могут быть использованы в способах детектировани антител к HJV - 1 или ассоциированным HJv - 1 антигенам. Предпочтительно методы, которые используют пептиды дл детектировани наличи HJV - 1 специфических антител в образце, включают контактирование образца с по крайней мере, одним из пептидов в услови х , которые допускают образование имму- нологического комплекса между пептидным антигеном и любыми антителами к HJV - 1, которые могут присутствовать в образце. Образование иммунологического комплекса , если оно происходит, указывает на наличие антител к HJV - 1 в образце, затем оно детектируетс и измер етс подход щими средствами.
Такие методы включают, среди прочих, иммуноанализ гемогенного и гетерогенного св зывани , такой как радиоиммуноанализ (РИА), ELISA, и блот-анализ Вестерна. Кроме того, протоколы анализов с использованием новых пептидов позвол ют провести исследование конкурентного и неконкурентного св зывани .
Пептиды могут быть мечеными (ненери- рующими сигнал) или немеченными в зависимости от типа используемого анализа. Метки, которые могут быть соединены с пептидом, хорошо известны на данном уровне техники и включают, среди прочих, ферменты, радионуклиды, флюорогенные и хромогенные субстраты, кофаткоры, био- тин/авидин, коллоидное золото и магнитные частицы. Модификаци новых пептидов позвол ет сочетать их известными методами с носител ми белков или пептидов или с известными подложками, например, поли- стирольными или поливинилхлоридными плашками дл микротировани , стекл нны-. ми трубками или стекл нными шариками и хроматографическими носител ми, таким как бумага, целлюлоза и производные целлюлозы , и оксид кремни .
Предпочтительной аналитической методикой , особенно дл широко масштабного клинического скрининга сыворотки и крови и происход щих из крови продуктов больных вл ютс ELISA и блот-аналйз Вестерна , особенно предпочтительной вл етс методика ELISA, ELISA тесты, примен ю- ш,ие описанные выше пептиды, основаны обычно на тестах с использованием HJV- 1 белков или их частей, происход щих из че- ,ловеческих клеток или полученных по методике рекомбинатной ДНК, в качестве антигенов. При использовании в качестве реагентов в этих анализах пептиды обычно
св зывают с внешней поверхностью стенок микротитратора. Пептиды могут быть непосредственно св заны со стенкой микротитратора . Однако было обнаружено, что
максимальное св зывание пептидов со стенками может быть осуществлено при предварительной обработке стенок полилизином перед добавлением пептидов.
Дополнительно новые пептиды могут
0 быть ковалентно присоединены с помощью известных средств к белковому носителю, такому как БСА, полученный в результате конъюгат используют дл покрыти стенок. Обычно пептиды используют в концёнтра5 ции между 10 и 100 мкг/мл дл покрыти , хот некоторые пептиды дл успешного анализа имеют концентрации пор дка 500 мкг/мл.
Образцы затем нанос т на покрытые
0 пептидом стенки, где образуетс иммуноло- гический комплекс, если в образце имеютс антитела к HJV- 1. Могут быть добавлены генерирующие сигнал средства, чтобы способствовать определению образовани
5 комплекса. Детектируемый сигнал продуцируетс , если в образце имеютс специфические к HJV-1 антитела.
Изобретение далее иллюстрируетс следующими конкретными примерами, ко0 торые ни в коей мере не должны рассматриватьс как ограничивающие область изобретени .
Пример 1. Дл синтеза всех пептидов используют Эпплайд Биосистем пептидсин5 тезизер Модель 430 А. В каждом синтезе используют п-метилбензилгидриламинную твердую фазу - подложку из смолы Пеп- тидс Интернейшнл Луисвилль, КИ). Пептиды были синтезированы в соотвествии с
0 Инструкцией дл пользовател дл Пептид Синтезизер Модель 430 А, Эпплайд Биоси- стемс, 1986г.
Все аминокислоты дл использовани в синтезе, содержащие трет.-бутилкарбо5 нильную группу (т-Вос), защищающую а - NH2- группу, были получены из Новабиохем АГ, Швейцари , Аминокислоты с реактивными боковыми группами, содержат дополни- тельные защищающие группы дл
0 предотвращени нежелательных и вредных реакций в боковых цеп х.
Индивидуальные защищенные аминокислоты , использованные дл синтезе всех пептидов, приведены в таблице 1| наход 5 щейс в приложении.
После завершени конкретного синтеза удал ют защищающие группы их синтезированного пептида и пептид отщепл ют от смолы твердого носител с помощью обработки безводной фтористоводородной кислотой (HF) при 0°С в сочетании с 10% анизола и 10% диметилсульфоксида в качестве очищающих агентов. Затем прибавл ют 2% Тиокрезола дл цистеин-содержащих пеп- тидов, отдувают током азота HF из образца, удаление любого остаточного YF осуществл ют путем вакуумировани образца при 0°С. Пептиды экстрагируют из смолы при обработке трифторуксусной кислотой (ТФУК), которую затем удал ют выпариванием при комнатной температуре. После удалени ТФУК пептиды осаждают и промывают безводным эфиром.
Таблица1
Аминокислоты, использованные дл синтеза пептидов
Boc-Ala-OH Boc-Arg(Tos)-OH .5 Boc-Asn-OH
Boc-Asp-(OBzl)-OH Boc-Cys(pMeOBzl)-0 Boc-Glu(OBzl)-OH Boc-Gln-OH 10 Bpc-Gly-OH
Boc-His(Tos)-OH .Bqc-lle-OH 1/2 HaO
Boc-Leu-OH H20 . Bqc-Lys(2-OZ)-OH (cryst.) 15 Bqc-Met-OH Boc-Phe-OH Boc-Pro-OH Boc-Ser(Bzl)-OH DCHA Boc-Thr(BzI)-OH 20 Boc-Trp(Formyl)-OH Boc-Tyr(2-Br-z)-OH Boc-Val-QH
То$ тозил или п-толуолсульфонова кислота oBzl бензилокси . pMeoBzl n-метилбензилокси 2-CI-z карбобензоксихлорид 2-Br-z карбобензоксибромид
Перед использованием в конкретном анализе пептиды могут быть дополнительно очищены, при желании, с помоа ю высоко эффективной жидкостной хроматографии с обратимой фазой (HPLC). Особенно пригодной колонкой дл такой очистки вл етс колонка с обратимой фазой Видек С-18, дл элюированм пептидов используют градиент вода (ТФУК) - ацетонитрил (ТФУК).
П р и м е р 2. Синтезируют пептид др41А5, имеющий аминокислотную последовательность Asn-Gln-GIn-Leu-Leu-Gly-ile- Trp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-lle-Cys-Thr-Thr -Ala-Va -Pro-Trp-Axn-Cys-OH, по методике примера 1 и используют его в ELISA дл измерени его иммунологической реактивности .
На плашки дл микротитровани нанос т полилизин в концентрации 1 мг/мл и инкубируют 30 мин. Затем полилизин сбрасывают и на стенки плашки нанос т пептид 5 др41А5 в концентрации от 10 до 100 мкг/мл дл покрыти . После инкубировани пепти- да на стенках в течение периода времени, достаточного дл св зывани со стенкой, удал ют раствор пептида и прибавл ют в
10 течение 15 минут раствор глутарового альдегида , который стабилизирует присоединение пептида к стенкам. Затем удал ют раствор глутарового альдегида, стенки промывают буфером и прибавл ют смесь глици15 на.и бычьего сывороточного альбумина (БСА), который служит дл блокировани несв занных сайтов на стенках и сводит к минимуму нееспецифмческое св зывание антител во врем самого теста ELiSA. После
0 стадии окончательной промывки плашки готовы к использованию. Покрытые пептидом плашки дл микротмтровани могуг хранитьс несколько мес цев без какого-либо снижени энтигенной активности пептида 5 др41А5, покрывающего стенки.
Используют обычный вариант известных методов ELISA с плашками дл микротитровани , приготовленными, как описано выше. Образцы сыворотки от индивидуу0 мов, которые были разбавлены 1:50 в РВ5 (фосфатный буферный солевой раствор), содержащем 0,05% лолиоксиэтиленсорбитан мсзнолаурата (Твин 20), прибавл ют 1 % БСА на каждую стенку и инкубируют 30 мин при
5 37°С во влажной атмосфере. Разбавленные образцы сыворотки затем удал ют из плашек и три раза промывают стенки PBS, содержащим 0,05% Твин 20. Затем прибавл ют конъюгированное анти-челов е0 чес кий Ig антитело на стенки и инкубируют 30 мин. Конъюгированные антитела были получены у коз или кроликов, они вл ютс специфическими дл человеческого IgC, IgM, легких иммуноглобулиновых цепей и их
5 сочетаний. Предпочтительно в ELISA используют коньюгированную щелочную фос- фотазу с анти-человеческим IgC (от Дакопаттс), разбавленную 1:500 дл использовани в PBS, содержащем 0,05% Твин 20
0 и 1% БСА. Затем конъюгат инкубируют в
течение достаточного периода времени,
чтобы прошла реакци со св занными чело веческиМи антителами, плашки три раза
промывают, как указано выше. Дл того,
5 чтобы детектировать антитела к JV - 1 в человеческой сыворотке, котора реагирует с пептидом др41А5, использованным в качестве антигена (т.е. положительна реакци ), прибавл ют хромогениый субстрат субстрата щелочной фосфатазы (Сигма, кат, № 104,
151802871 16
таблетки), раствор ют в натрийкарбонат- реакции были подвергнуты блот-анализом ном (MgCI буфере и довод т концентрацию Вестерна.
до 1 мкл/мл, котора расщепл етс фермен-Кроме того из фиг.2 видно, что др41А5 том, воздействующим на античеловеческий имеет частичное перекрывание в аминокис- д с получением окрашенного продукта. По- 5 лотной последовательности с пептидом SM еле инкубации примерно в течение 40 мин 284 и пептидом (39) Козанда. Следовательно при комнатной температуре положитель- пептид gp 41A5 содержит аминокислотную ные реакции указывают на наличие антител последовательность у карбоксил-концевого в образце, реактивных к антигену. Желтую участка двух известных пептидов плюс до- до оранжевой до красно-коричневой окра- 10 полнительную последовательность, соот- ску на каждой стенке, указывающую на по- ветствующую области дР41 с ложительную реакцию, регистрируют на карбоксил-концевой стороны пептидов спектрофотометре при 405 нмдл количест- 5М284и V(39). Как обсуждалось ранее, Вонг венного определени реакции. Спектрофо- сссотр, рассматривал карбоксил-концевой тометрические показатели регулируют дл 15 участок пептида SM284 как иммунологиче- корректйровки основных реакций. ски менее важный при сравнении с аминоНа фиг.З представлена гистограмма, по- концевым участком пептида р М 284, В казывающа количества антител, получен- противоположность Вонгу с сотрудниками, ные из четырех отдельных ELISA однако, расширение замен др41А5 к карбок- определений с использованием р 41А5 в 20 сильному концу дР41 приводит в результате качестве антигена. 101 истинной положи- к пептиду, имеющему отличные антигенные тельна (по блот-анализу Вестерна) сыво- свойства дл детектировани AJDS-специ- ротка от больных AIDS и ARC и 179 истинно фических антител в человеческой еыворот- отрицательных сывороток ввод т в реакцию ке. Этот пептид показывает как более в системе ELISA с др41А5. Среднее отклоне- 25 высокую степень реактивности, так и более ние дл положительных реакций было опре- высокую специфичность в ELISA ив блот- делено равным О.Д.405 0,376. На фиг.З анализе Вестерна, чем у обоих пептидов V показано, что др41А5 дает положительную (39) и SM 284.
реакцию со 100% (101/101) истинно поло-Таблица 2 показывает, что др41А5 реа- жительных сывороток и 0% (0/179) с истин- 30 гирует со всеми 233 (100%) достоверно по- но отрицательными сыворотками. ложительными HJV - 1 сыворотками. Эти
Пример 3. Дл Сравнени с новыми результаты были получены с теми же 233 лептидами был синтезирован известный сыворотками, испытанными против пептида пептид V (39) Козанда, как описано в.приме- V (39), который дали 12 ложных отрицатель- ре 1, в соответствии с его аминокислотной 35 ных реакций. Среднее отклонение величин последовательностью, описанной в патенте дл положительной реакции в тестах ELISA США N2 4629783. Относительна локализа- составило О.Д.405 примерно 0,3. Любое ци этого пептидз в др41 показана на фиг.2, значение ниже 0,3 рассматриваетс как от- на котором приведена относительна лока- рицательна реакци . Легко видеть, что об- лизаци последовательности др41А5 и дру- 40 разцы сывороток №№ 7, 19, 40, 44t 60, 101, гих пептидов, соответствующих gp41 HJV- 482, 511, 324, 375 и 393 четко показывают 1. Козанд сообщил, что пептид V (39) реаги- отсутствие реактивности с пептидом V (39), рует с 23/24 (95,8%) достоверно положи- но высокую реактивность с дР41А5. Таблица тельными сыворотками (т.е. при одной находитс в приложении. ложной отрицательной реакции). Пептид 45 В таблице 3 приведено дополнительное был использован в ELISA, описанной в при- сравнение более высокой иммунологиче- мере 2, с заменой на пептид V (39) пептида ской реактивности др41А5 по сравнению с др41А5.. пептидом V (39) Козанда. Из 233 образцов
Пептид (V) (39) дает 221/233 (94,8%) по- сывороток, представленных в таблице 2, 38 ложительных реакций с известными HJV-1 50 были удостоверены как положительные по положительными образцами сыворотки. блот-анализу Вестерна. Эти положительные Было отмечено 12 ложных отрицательных сыворотки плюс 8 подтвержденных отрицэ- реакций, как показано в таблице 2. Кроме тельных образцов сыворотки (по блот-ана- того, пептид V (39) дал ложную положитель- лизу Вестерна) ввод т в реакцию с ную реакцию в одной из 102 (0,98%) досто- 55 пептидами др41А5 и V (39) в параллельных верно отрицательных сывороток. Образцы тестах ELISA с положительными реакци ми, сывороток были удостоверены как положи- имеющими О.Д.405 примерно 0.3. тельные и отрицательные с помощью блот-Кроме того, не-HIV- 1 антиген (отрица- анализа Вестерна с HJV - 1 белками. Все тельный антиген) используют в качестве ложные положительные и отрицательные контрол . Легко видеть, что др41А5 не дает
ни ложных отрицательных ни ложных положительных реакций. Следовательно, неожиданно др41А5 дает по методике ELISA результаты, которые вл ютс четко на 100% точными. Диагностическа и скри- нирующа способности в анализах с использованием др41А5 четко выше, чем у обычных используемых в анализе пепти- дов V (39) и SM284 или любого другого HJV- 1 антигена.
П р и м е р 4. Пептид AS-Trun с/а/ с пропущенным карбоксильным концевым участком др31А5 фиг.2 также синтезируют по методике примера 1 и используют в тестах ELISA, как описано в примере 2, не за- менив пептид др41А5 на AS-trunc/a/, дл измерени антигенной активности. Из результатов ELISA, представленных в таблицах 4, легко видеть, что очевидно, что карбоксильна концева часть др41А5 тре- буетс дл высокой степени реактивности и специфичности этого пептида.
П р и м е р 5. Синтезируют по методике примере 1 пептид др41СТ4, имеющий аминокислотную последовательность, пред- ставленную выше, и испытывают в анализе ELISA по методике примера 2 (заменив др41А5 на др41СТ4 против 105 HJV- 1 по- ложительных.сывороток(всеони реагировали с др41А5). Нанос т покрытие на плашки дл микротировани по методике примера 2 при концентрации пептида между 10 и 100 мкг/мл. Как показано в таблице 5, этот пептид реагирует с 68/106 (64,8%) положительными сыворотками. Не наблюдалось ложных положительных реакций при испытании этого пептида против 28 достоверно отрицательных сывороток.
П р и м е р 6. Синтезируют по методике примера 1 пептид др41СТЗ, имеющий ами- нокислотную последовательность, представленную выше, и показывают им плашки дл микротитровани по методике примера 2 (заменив gp41 A5 на др41 СТЗ). Как показано в таблице 5, др41СТЗ реагирует с 38/80 (48,8%) образцами заведомо положитель-. ных сывороток в анализе ELISA, как описано в примерах 2 и 3. Пептид дает только одну ложную положительную реакцию при испытании против 20 заведомо отрицательных сывороток.
П риме р7. Покрывают плашки микро- титраторапептидомдр41В1, синтезированным по методике примера 1, с концентрацией 10-100 мкг/мл, покрытие провод т по поисанной выше методике и используют в анализе ELISA, как описано в примере 2 (заменив др41А5 на др41В1). Этот пептид реагирует с 45/95 (47,4 %) образцов достоверных HJV - 1 положитель-
ных сывороток (таблица 5). Не имелось ложных положительных сывороток (таблица 5), Не имелось ложных положительных реакций с двум отрицательными сыворотками.
Примере. Покрывают пептидом др41ВЗ, синтезированным по методике примера 1, с концентрацией 10-100 мкг/мл плашки микротитратора. Он дает положительные реакции с 22/32 (68,8%) заведомо положительными HJV - 1 образцами сыворотки в анализе ELISA, как описано в примерах 2 и 3 (таблица 5). Не наблюдали ложных положительных реакций с двум заведомо отрицательными сыворотками.
. П р и м е р 9. Синтезируют GAG 2 и GAG 3 и GAG 14пептиды по методике примера 1. Нанос т покрытие на плашки микротитра- тора из каждого пептида при концентрации 10-100 мкг/мл и используют в анализе ELISA, как описано в примере 2, но изменив др41А5 на GAG 2, GAG 3 или GAG 14 как антиген. Пептид GAG 2 также анализируют против HJV - 1 положительных образцов сывороток. Результаты анализов приведены в таблице 6.
ПримерЮ. Синтезируют пептиды P17-D и P17-F по методике примера 1 и покрывают каждый пептидом при концентрации 500 мкг/мл плашки микротитратора, используют в анализе ELISA по. методике примера 2, но заменив др41А5 на P17-D и P17-F в качестве антигена. Эти пептиды также анализируют против HJV - 2 положительных образцов сывороток. Результаты представлены в таблице 7.
НJV - 2, родственных ретровирус, но не идентичный HJV - 1, недавно был выделен у больных AIDS из Западной Африки, кот.о- рый в анализе ELISA дает отрицательный ответ при использовании HIB -1 антигенов.
Из данных таблиц 6 и 7 можно видеть по данным примеров 9 и 10, что пептиды GAG 2, P17-D и P17-F каждый содержит эпитопы, распознаваемые антителами как к HJV - 1, так и к HJV - 2. .Следовательно, эти три пептида могут быть полезными дл диагностики и композиций вакцин при обеих инфекци х HJV - 1 и HJV - 2.
Из приведенных выше результатов очевидно , что новые синтетические пептиды, описанные здесь, которые соответствуют област м иммунологически важных белков HIV - 1, например др41 и оао генным продуктам , обеспечивают более чувствительный и селективный анализ на наличие антител к HJV- 1.
Ф о р м у л а и з о б р е т е н и
Способ определени антител к HJV - 1 путем взаимодействи с антигеном в иммунологмческой реакции, о т л и ч a rout и и с тем, что, с целью повышени точности, в качестве антигена используют один или более полипептидов формулы
X-Asp-Glu-Glu-Leu-Leu-Gly-lle-Trp-Gly-Cy S-Ser-Gly- Lys-LeiHIe-Cys-Tbr-Thr-Ala- Val-Pro-Trp-Asn-Y-, Asp-Gln-Gln-Leu- Leu-Gly-Trp-Gly-Cys-Ser-Gly- Lys-Leu-He-Cys-Thr-Ala-Val-Pro-Trp- Asn-Cys-OH, X-Ala-Leu-Lys-Tyr-Trp- Asn-Leu-Leu-Gln-Tyr- Trp-Ser-Gln- Glu-Leu-Lys-Asn-Ser-Ala-Val-Ser-Y-Z, X-Lys-Asn-Ser-Ala-Val-Ser-Leu-Leu-Asn-A la-Thr- Ala-lle-Ala-Val-Ala-Glu-Gly-Thr- Asp-Y-Z, X-Thr-Ala-Val-Pro-Trp-Asn-Ala- S e r-Trp-Ser-Asn-Lys- Ser-Leu-Glu-Glu-lle-Trp-Asn-Asn-Met-Thr
-Trp-Met-Y-Z, X-lle-Asn-Tyf-Thr-Ser-Leu- lle-Hls-Ser-Leu-lle- Glu-Glu-Ser-Glu-Asn-GIn- G I n - G I u - L y-s - A s n - G I u - Y - Z , X-Pro-Arg-Thr-Leu-Asn-Ala-Trp
-Val-Lys-Val-Val-Gru- Glu-Lys- Ala-Phe-Ser-Pzo-Glu-Val-Y-Z, X-Val-Glu-Gly-Lys-Ala-Phe-Ser-Pro-G lu - Val-lle- Pro-Met-Phe-Ser-Ala-Leu-Ser- Glu-G y-Y-Z, X-Glu-Met-Met-Thr-Ala-Cys- G I n - G I у - V a I - G I у - G I y - Pro-Gly-Hls-Lys-Ala-Arg-Val-Leu-Ala-Glu
-Y-Z, X-Ser-Glu-Gly-Cys-Arg-Gln-lte-Leu- Gly-Gln-Leu-GIn- Pro-Ser-Leu-Gln-Thr-Gly- Ser-Glu-Glu-Leu-Y-Z.
и/или
X-Leu-Tyr-Cys-Val-Hls-Gln-Arg-lle-GI u-lle-Lys- Asp-Thr-Lys-Glu-Ala-Leu-Asp- Lys-lle-Y-Z,
где Х- или Н в аминоконцевой NHa-rpynne пептида, или аминокислота, св занна с аминоконцевой МНа-группой пептида, причем кислота выбрана дл обеспечени св зывани пептида с белковым носителем;
J- или Cys, или отсутствует,
Z - или ОН, или NH2.
Приоритет по признакам
27.03.87 - пептид Asp-GIn-Gln-Leu-Leu- Gly-lle-Tzp-Gly-Cys-Ser-Gly-Lys-Leu-lle-Cys- Thr-Thr-Ala-Val-Pro-Trp-Asn-Cys-OH.
18.05.87 Все другие признаки формулы изобретени .
Таблица2
Иммунологическа реактивность, определенна EL1SA между HIV-1 антителами в 233 образцах достоверно положительных сывороток и синтетическими пелтидными антигенами, соответствующими област м
. 1802871 24
Продолжение табл.2
25
180287126
Продолжение табл. 2
271802871 28
Продолжение табл.2
31
Т а б л и ц а 3
EL1 SA тесты сравнени специфичности и селективности синтетических пептидных антигенов
1802871
32
Продолжение табл.2
33
1802871
It Продолжение табл.3
S5
Спектрофотометрический показатель, О.Д. He-H4V I антиген
Отклонение Среднее 0.Д.отрицательной сыворотки ч+ Зх9Д .
Отклонение AS - 0,151 + 3 х 0,053 « 0,310 (О.ДЧ0 )
Отклонение V(39) -0,152,+ 3 х 0,050 0,302 (О.ДЧв..)
WB блот-аналиэ Вестерна с использованием HIV-I антигенов
Таблица
Реактивность антител в образцах сыворотки с синтетическими пептидными антигенами, соответствующими HIV-I антигенам
1802871
36 Продолжение .З
Отклонение . Среднее 0.Д.отрицательной сыворотки +3 х 8Д Отклонение AS 0,151 + 3 х 0,053 0,ЗЮ Отклонение V(39) 0,152 + 3 х 0,050 0;302 Отклонение AS-Тгипс (а) 0,166 + 3.x 0,033 0,265 В блбт-анализ Вестерна
Спектрофотометрический показател.ь О. He-HIV-I антиген
3 1802871 4°
Т а б л и ц а. 5
Реактивность синтетических пептидов, соответствующих област м HIV-I gp41, с антителами против HIV-I в заведомо положительных сыворотках
41
1802871
0
5
31
32
33
34
35
36
37
38
39
40
41
+ 4- + 44- +
4+ 4- + 4 (+)
4- 4 (+) (+)
05
10
15
42 +
43 4А
45
46
47
48
49
50
51
52
53
54
55
56
57
58
59
60
61
62
63 6V
65
66
+ +
4- 4- 4- + + 4- + 4- 4- 4- 44- 4- 4- 4- 4- 4- 4- 4- 4- 4- 4 (4-) (+)
4 (+)
4- 4- 4 (+) 44 (+) . (+) 4 (f)
42. Продолжение табл.5
44444
4- 4- 4- 4- 4- + 44- 44- + 44 (f)
(+)
43
1802871
0
5
0
5
Ю
5
50
67
68
69
70
71
72
73 7 V
75
76,
77
78
79
80
81
82
83 8k
85
86
87
. 88
89
90
91
92
93
9
95
- 96
97
98
99
100
101
102
103
+
4 4 4 4- 4- 4- 4 4 4- 4- + 4 +
. 4 4- 4- 4 4- 4
4- 4 4 4 4 4 4 4 4
4
4
4
4
4
}
4
(+) (+)
4 (+)
()
44 . Продолжение табл.5
4 4- 4 4 44
44
4
4- 4 4м
4- 4 4
4
4
4
4
4
4
(+)
.,-- „
LLiLliJjd lLd,
Продолжение таб
- отрицательна реакци (+) слаба положительна реакци
f сильна положительна реакци
Иммунологическа реактивность пептидных антигентов,
соответствующих HjV-1 GAG генному продукту
Источник сыворотки
„
lLd,
Продолжение табл.5 8
Таблица б
Иммунблогическа реактивность антител в образцах
сывороток от больных HIV-1 и HIV-2 с пептидами,
соотвбтствующими HIV-1 и HIV-2 генными продуктами
Т а б лица 7
Фиг.1
СТ6
ПТ-Ю
аз. 19А др41
СТ4
Ш
СТ5
стз
СТ1
BAR 20 за
COOH-ferminus SP4-1
Фиг. 2
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| SE8701294A SE468181B (sv) | 1987-03-27 | 1987-03-27 | Hiv-1 gp41 peptid, vaccin och antigen innehaallande peptiden jaemte diagnostiskt test med peptiden |
| US5172687A | 1987-05-18 | 1987-05-18 |
Publications (1)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| RU1802871C true RU1802871C (ru) | 1993-03-15 |
Family
ID=26659756
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| SU884355648A RU1802871C (ru) | 1987-03-27 | 1988-03-25 | Способ определени антител к Н @ V - 1 |
Country Status (9)
| Country | Link |
|---|---|
| EP (1) | EP0284587A3 (ru) |
| AU (1) | AU606928B2 (ru) |
| CA (1) | CA1336473C (ru) |
| DK (1) | DK164088A (ru) |
| ES (1) | ES2013328A6 (ru) |
| FI (1) | FI881418A (ru) |
| NO (1) | NO881151L (ru) |
| NZ (1) | NZ224046A (ru) |
| RU (1) | RU1802871C (ru) |
Families Citing this family (25)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US6210873B1 (en) | 1987-08-28 | 2001-04-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for the priming of specific cytotoxic T-lymphocyte response |
| US5128319A (en) | 1987-08-28 | 1992-07-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Prophylaxis and therapy of acquired immunodeficiency syndrome |
| AU629528B2 (en) * | 1988-01-27 | 1992-10-08 | Biochem Pharma Inc. | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting hiv antibodies |
| US5204259A (en) * | 1988-05-06 | 1993-04-20 | Pharmacia Genetic Engineering, Inc. | Methods and systems for producing HIV antigens |
| ATE134195T1 (de) * | 1988-06-10 | 1996-02-15 | United Biomedical Inc | Peptidfragmente von hiv |
| JPH0292298A (ja) * | 1988-09-30 | 1990-04-03 | Olympus Optical Co Ltd | Ｈｉｖ構成蛋白に対するモノクローナル抗体 |
| SE8900721D0 (sv) * | 1989-03-02 | 1989-03-02 | Blomberg Jonas | Methods for detection of antibodies to |
| GB8918200D0 (en) * | 1989-08-09 | 1989-09-20 | Medical Res Council | The peptide fragments of hiv |
| NZ235538A (en) * | 1989-10-12 | 1992-06-25 | Viral Technologies Inc | Peptides immunoreactive with antibodies to hiv p17; carrier-bound peptides, vaccines, immunoassay and a method for forming antibody enriched sera |
| AU6887591A (en) * | 1989-11-27 | 1991-06-26 | Replico Medical Aktiebolag | New hiv-1 p17 peptides, diagnostic antigens and immunoassay method |
| CA2072351A1 (en) * | 1990-01-05 | 1991-07-06 | Andrew J. Mcmichael | Hiv-1 core protein fragments |
| US5427907A (en) * | 1990-02-23 | 1995-06-27 | Virginia Commonwealth University | Assay for equine infectious anemia virus |
| DE4039925A1 (de) * | 1990-12-14 | 1992-06-17 | Behringwerke Ag | Ausgewaehlte peptide des gruppenspezifischen antigens (gag) von humanem immundefizienzvirus (hiv), ihre herstellung und verwendung |
| US6479055B1 (en) | 1993-06-07 | 2002-11-12 | Trimeris, Inc. | Methods for inhibition of membrane fusion-associated events, including respiratory syncytial virus transmission |
| US5603933A (en) * | 1993-08-31 | 1997-02-18 | Board Of Regents, The University Of Texas | CD4 peptides for binding to viral envelope proteins |
| DE4405810A1 (de) | 1994-02-23 | 1995-08-24 | Behringwerke Ag | Von einem Retrovirus aus der HIV-Gruppe abgeleitete Peptide und deren Verwendung |
| FR2731225B1 (fr) * | 1995-03-03 | 2003-10-31 | Pasteur Institut | Peptides de glycoproteine transmembranaire d'enveloppe et de proteine de capside du retrovirus humain du type hiv-1 et peptides presentant avec eux une parente immunologique |
| JP4278174B2 (ja) * | 1994-10-20 | 2009-06-10 | アンスティテュ・パストゥール | Ｈｉｖ−１のｏグループ（またはサブグループ）レトロウイルス性抗原のヌクレオチド配列 |
| FR2734281B1 (fr) * | 1995-05-18 | 1997-07-25 | Commissariat Energie Atomique | Fragments d'acide nucleique derives du genome du virus vih-1, peptides correspondants et leurs applications en tant que reactifs d'evaluation du risque de transmission materno-foetale du vih-1 |
| EP1131633A2 (en) | 1998-11-16 | 2001-09-12 | Board of Regents, The University of Texas System | Hiv-specific t-cell induction |
| US6824837B2 (en) | 2001-09-04 | 2004-11-30 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Liquid crystal switching mechanism |
| US7807348B2 (en) | 2002-03-20 | 2010-10-05 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Optical imaging of nanostructured substrates |
| US7125592B2 (en) | 2002-04-10 | 2006-10-24 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Detecting interactions at biomimetic interfaces with liquid crystals |
| WO2004044583A1 (en) | 2002-11-08 | 2004-05-27 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Surfaces with gradients in surface topography |
| US7303694B2 (en) | 2003-07-17 | 2007-12-04 | Wisconsin Alumni Research Foundation | Liquid crystals with reduced toxicity and applications thereof |
Family Cites Families (8)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| EP0201540B2 (en) * | 1984-10-18 | 2001-10-31 | Institut Pasteur | Envelope antigens of lymphadenopathy associated virus and their applications |
| US4774175A (en) * | 1985-03-01 | 1988-09-27 | Centocor, Inc. | Immunochemical methods for the detection of antibody against HTLV-III |
| IE64785B1 (en) * | 1985-04-08 | 1995-09-06 | Genetic Systems Corp | Expression of immunologically reactive viral proteins |
| US4629783A (en) * | 1985-04-29 | 1986-12-16 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| DE3650175T3 (de) * | 1985-04-29 | 2007-09-06 | Bio-Rad Laboratories, Inc., Hercules | Synthetische antigene zum nachweis von aids. |
| GB8525615D0 (en) * | 1985-10-17 | 1985-11-20 | Hoffmann La Roche | Polypeptides |
| JPS63502904A (ja) * | 1986-03-24 | 1988-10-27 | オ−ソ・フア−マシユ−チカル・コ−ポレ−シヨン | 合成ｈｔｌｖ−３ペプチド、その組成物及び用途 |
| AU617088B2 (en) * | 1986-06-12 | 1991-11-21 | Biogen, Inc. | Peptides involved in the pathogenesis of hiv infection |
-
1988
- 1988-03-16 NO NO881151A patent/NO881151L/no unknown
- 1988-03-24 FI FI881418A patent/FI881418A/fi not_active Application Discontinuation
- 1988-03-25 RU SU884355648A patent/RU1802871C/ru active
- 1988-03-25 DK DK164088A patent/DK164088A/da not_active Application Discontinuation
- 1988-03-25 NZ NZ224046A patent/NZ224046A/xx unknown
- 1988-03-25 AU AU13807/88A patent/AU606928B2/en not_active Ceased
- 1988-03-25 CA CA000562531A patent/CA1336473C/en not_active Expired - Fee Related
- 1988-03-25 ES ES8800920A patent/ES2013328A6/es not_active Expired - Fee Related
- 1988-03-28 EP EP19880850105 patent/EP0284587A3/en not_active Withdrawn
Non-Patent Citations (1)
| Title |
|---|
| Schorr et al, N. Engl.J. Med 1985 313; 385. . Popovlc et a,, Science, 1984, 224; 497- 500. Kuhni et at., Lancet I, 1985, 1222-1223. Gallo et al., Science, 1984, 224; 503. Allan et al., Science, 1985-228; 1091- 1094. Wang et.al. Proc. Nate. Acad. Scl 1986,83. 6159-6163. Патент US N° 4629783, кл. 530-324. 1986. 2 * |
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| FI881418A0 (fi) | 1988-03-24 |
| FI881418A (fi) | 1988-09-28 |
| DK164088A (da) | 1988-09-28 |
| NO881151L (no) | 1988-09-28 |
| CA1336473C (en) | 1995-07-25 |
| EP0284587A2 (en) | 1988-09-28 |
| AU606928B2 (en) | 1991-02-21 |
| ES2013328A6 (es) | 1990-05-01 |
| NO881151D0 (no) | 1988-03-16 |
| EP0284587A3 (en) | 1990-11-22 |
| AU1380788A (en) | 1988-09-29 |
| NZ224046A (en) | 1990-07-26 |
| DK164088D0 (da) | 1988-03-25 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| RU1802871C (ru) | Способ определени антител к Н @ V - 1 | |
| US4812556A (en) | Synthetic peptide antigen for the detection of HIV-2 infection | |
| JP2818797B2 (ja) | 新ペプチド、人工抗原およびイムノアッセイキット | |
| US5017687A (en) | Peptides for the detection of HTLV-1 infection | |
| EP0278148B1 (en) | Peptide composition and method for the detection of antibodies to HTLV-III | |
| KR910002374B1 (ko) | Aids 관련질병의 검출을 위한 합성항원 | |
| JPS62277400A (ja) | Ｈｔｌｖ−３エンベロ−プ蛋白質 | |
| EP0247557B1 (en) | HTLV-III(LAV) Envelope peptides | |
| EP0317804B1 (en) | HIV peptides and methods for detection of HIV | |
| JP2650217B2 (ja) | Ｈｔｌｖ―１感染の診断、治療及び予防接種のためのペプチド | |
| EP0326490B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| EP0538283B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting hiv antibodies | |
| RU1825424C (ru) | Способ обнаружени антител к ВИЧ-2 | |
| AU627701B2 (en) | Hiv peptides, artificial hiv antigens and immunoassay kits | |
| CA1338028C (en) | Synthetic peptide antigens for the detection of hiv-1 infection | |
| JPH0215098A (ja) | Ｈｉｖ−１感染検出用合成ペプチド杭原、その組成物およびその使用方法 | |
| US6218102B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| CA1338001C (en) | Synthetic peptide antigens for the detection of htlv-1 infection | |
| US6214537B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| US6210874B1 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting HIV antibodies | |
| JPH01163198A (ja) | Ｈｉｖ−２感染検出用合成ペプチド抗原、その組成物およびその使用方法 | |
| Virovahl | Vahlne et al. |