DK174533B1 - Fremgangsmåde til påvisning af antistof mod HIV-virus - Google Patents
Fremgangsmåde til påvisning af antistof mod HIV-virus Download PDFInfo
- Publication number
- DK174533B1 DK174533B1 DK198705977A DK597787A DK174533B1 DK 174533 B1 DK174533 B1 DK 174533B1 DK 198705977 A DK198705977 A DK 198705977A DK 597787 A DK597787 A DK 597787A DK 174533 B1 DK174533 B1 DK 174533B1
- Authority
- DK
- Denmark
- Prior art keywords
- lys
- gly
- ala
- ile
- arg
- Prior art date
Links
- 241000725303 Human immunodeficiency virus Species 0.000 title claims description 30
- 238000000034 method Methods 0.000 title claims description 28
- 238000001514 detection method Methods 0.000 title description 3
- 108090000765 processed proteins & peptides Proteins 0.000 claims abstract description 133
- 102000004196 processed proteins & peptides Human genes 0.000 claims abstract description 76
- 239000003153 chemical reaction reagent Substances 0.000 claims abstract description 10
- 150000001413 amino acids Chemical class 0.000 claims description 28
- 108090000623 proteins and genes Proteins 0.000 claims description 24
- 102000004169 proteins and genes Human genes 0.000 claims description 22
- 239000003550 marker Substances 0.000 claims description 15
- 102000004190 Enzymes Human genes 0.000 claims description 11
- 108090000790 Enzymes Proteins 0.000 claims description 11
- 230000027455 binding Effects 0.000 claims description 8
- 229920002521 macromolecule Polymers 0.000 claims description 7
- 230000009870 specific binding Effects 0.000 claims description 6
- 239000000203 mixture Substances 0.000 claims description 5
- 238000002360 preparation method Methods 0.000 claims description 5
- 230000015572 biosynthetic process Effects 0.000 claims description 4
- 230000009918 complex formation Effects 0.000 claims description 4
- 239000012911 assay medium Substances 0.000 claims description 3
- 108091008324 binding proteins Proteins 0.000 claims description 3
- 239000007787 solid Substances 0.000 claims description 3
- 239000003795 chemical substances by application Substances 0.000 claims description 2
- 239000012530 fluid Substances 0.000 claims 4
- 102000014914 Carrier Proteins Human genes 0.000 claims 2
- 101100228200 Caenorhabditis elegans gly-5 gene Proteins 0.000 claims 1
- FIJMQLGQLBLBOL-HJGDQZAQSA-N Leu-Asn-Thr Chemical compound [H]N[C@@H](CC(C)C)C(=O)N[C@@H](CC(N)=O)C(=O)N[C@@H]([C@@H](C)O)C(O)=O FIJMQLGQLBLBOL-HJGDQZAQSA-N 0.000 claims 1
- IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N Valylglycine Chemical compound CC(C)C(N)C(=O)NCC(O)=O IOUPEELXVYPCPG-UHFFFAOYSA-N 0.000 claims 1
- 230000001939 inductive effect Effects 0.000 claims 1
- CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N methyl (2s)-2-[[(2s)-2-[[2-[(2-aminoacetyl)amino]acetyl]amino]-3-phenylpropanoyl]amino]-4-methylpentanoate Chemical compound NCC(=O)NCC(=O)N[C@H](C(=O)N[C@@H](CC(C)C)C(=O)OC)CC1=CC=CC=C1 CSHFHJNMIMPJST-HOTGVXAUSA-N 0.000 claims 1
- 241000700605 Viruses Species 0.000 abstract description 27
- 229920001184 polypeptide Polymers 0.000 abstract description 20
- 208000030507 AIDS Diseases 0.000 abstract description 7
- 239000012634 fragment Substances 0.000 abstract description 3
- 238000012216 screening Methods 0.000 abstract description 3
- 239000010836 blood and blood product Substances 0.000 abstract description 2
- 229940125691 blood product Drugs 0.000 abstract 1
- 235000001014 amino acid Nutrition 0.000 description 27
- 235000018102 proteins Nutrition 0.000 description 20
- 239000000523 sample Substances 0.000 description 17
- 108010038807 Oligopeptides Proteins 0.000 description 13
- 102000015636 Oligopeptides Human genes 0.000 description 13
- 125000000151 cysteine group Chemical group N[C@@H](CS)C(=O)* 0.000 description 13
- 210000002966 serum Anatomy 0.000 description 10
- 241001430294 unidentified retrovirus Species 0.000 description 10
- 238000002965 ELISA Methods 0.000 description 7
- FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M Sodium chloride Chemical compound [Na+].[Cl-] FAPWRFPIFSIZLT-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 7
- 238000004458 analytical method Methods 0.000 description 7
- 238000005859 coupling reaction Methods 0.000 description 7
- 239000000243 solution Substances 0.000 description 7
- QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N Acetic acid Chemical compound CC(O)=O QTBSBXVTEAMEQO-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 6
- 150000001875 compounds Chemical class 0.000 description 6
- 230000008878 coupling Effects 0.000 description 6
- 238000010168 coupling process Methods 0.000 description 6
- 235000006109 methionine Nutrition 0.000 description 6
- 238000006467 substitution reaction Methods 0.000 description 6
- 125000003275 alpha amino acid group Chemical group 0.000 description 5
- 239000000427 antigen Substances 0.000 description 5
- 102000036639 antigens Human genes 0.000 description 5
- 108091007433 antigens Proteins 0.000 description 5
- 238000003556 assay Methods 0.000 description 5
- 239000000562 conjugate Substances 0.000 description 5
- -1 spacer amino acids Chemical class 0.000 description 5
- KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N (4s)-5-[[(2s)-6-amino-1-[[(2s,3s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2s)-1-[[(2r)-1-[[2-[[2-[[(1s)-3-amino-1-carboxy-3-oxopropyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-2-oxoethyl]amino]-1-oxo-3-sulfanylpropan-2-yl]amino]-4-methyl-1-oxopentan-2-yl]amino]-1-oxopropan-2-yl]a Chemical compound NC(=O)C[C@@H](C(O)=O)NC(=O)CNC(=O)CNC(=O)[C@H](CS)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H](C)NC(=O)[C@H](C(C)C)NC(=O)[C@H](CC(C)C)NC(=O)[C@H]([C@@H](C)CC)NC(=O)[C@H](CCCCN)NC(=O)[C@H](CCC(O)=O)NC(=O)[C@@H](NC(=O)[C@H](CC(O)=O)NC(=O)CNC(=O)[C@@H](N)CCCCN)CC1=CC=C(O)C=C1 KPYXMALABCDPGN-HYOZMBHHSA-N 0.000 description 4
- 108091026890 Coding region Proteins 0.000 description 4
- 108020004414 DNA Proteins 0.000 description 4
- DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N Glycine Chemical compound NCC(O)=O DHMQDGOQFOQNFH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 4
- 108060003951 Immunoglobulin Proteins 0.000 description 4
- FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N L-methionine Chemical compound CSCC[C@H](N)C(O)=O FFEARJCKVFRZRR-BYPYZUCNSA-N 0.000 description 4
- 230000033228 biological regulation Effects 0.000 description 4
- 235000018417 cysteine Nutrition 0.000 description 4
- 201000010099 disease Diseases 0.000 description 4
- 208000037265 diseases, disorders, signs and symptoms Diseases 0.000 description 4
- 102000018358 immunoglobulin Human genes 0.000 description 4
- 239000002609 medium Substances 0.000 description 4
- 229930182817 methionine Natural products 0.000 description 4
- 239000011780 sodium chloride Substances 0.000 description 4
- 108010092799 RNA-directed DNA polymerase Proteins 0.000 description 3
- 239000002518 antifoaming agent Substances 0.000 description 3
- 210000004369 blood Anatomy 0.000 description 3
- 239000008280 blood Substances 0.000 description 3
- 125000004432 carbon atom Chemical group C* 0.000 description 3
- 125000003178 carboxy group Chemical group [H]OC(*)=O 0.000 description 3
- 210000004027 cell Anatomy 0.000 description 3
- XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N cysteine Natural products SCC(N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 3
- 239000003085 diluting agent Substances 0.000 description 3
- 235000013861 fat-free Nutrition 0.000 description 3
- 238000002875 fluorescence polarization Methods 0.000 description 3
- 125000003630 glycyl group Chemical group [H]N([H])C([H])([H])C(*)=O 0.000 description 3
- 239000000411 inducer Substances 0.000 description 3
- 235000013336 milk Nutrition 0.000 description 3
- 239000008267 milk Substances 0.000 description 3
- 210000004080 milk Anatomy 0.000 description 3
- 239000002773 nucleotide Substances 0.000 description 3
- 125000003729 nucleotide group Chemical group 0.000 description 3
- 230000003647 oxidation Effects 0.000 description 3
- 238000007254 oxidation reaction Methods 0.000 description 3
- 239000011347 resin Substances 0.000 description 3
- 229920005989 resin Polymers 0.000 description 3
- 230000001177 retroviral effect Effects 0.000 description 3
- 239000008279 sol Substances 0.000 description 3
- 239000000758 substrate Substances 0.000 description 3
- 238000012360 testing method Methods 0.000 description 3
- YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N (+)-Biotin Chemical compound N1C(=O)N[C@@H]2[C@H](CCCCC(=O)O)SC[C@@H]21 YBJHBAHKTGYVGT-ZKWXMUAHSA-N 0.000 description 2
- 206010001513 AIDS related complex Diseases 0.000 description 2
- QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N Ammonia Chemical compound N QGZKDVFQNNGYKY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 241000283707 Capra Species 0.000 description 2
- 108020004705 Codon Proteins 0.000 description 2
- WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N Glutamic acid Chemical group OC(=O)C(N)CCC(O)=O WHUUTDBJXJRKMK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000004471 Glycine Substances 0.000 description 2
- MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N Hydrogen peroxide Chemical compound OO MHAJPDPJQMAIIY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 102100034343 Integrase Human genes 0.000 description 2
- CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N L-aspartic acid Chemical group OC(=O)[C@@H](N)CC(O)=O CKLJMWTZIZZHCS-REOHCLBHSA-N 0.000 description 2
- ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N L-leucine Chemical group CC(C)C[C@H](N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 2
- BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N Methylamine Chemical compound NC BAVYZALUXZFZLV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 101800001386 Peptide II Proteins 0.000 description 2
- 108010013377 Retroviridae Proteins Proteins 0.000 description 2
- 210000001744 T-lymphocyte Anatomy 0.000 description 2
- 108010067390 Viral Proteins Proteins 0.000 description 2
- 239000002253 acid Substances 0.000 description 2
- 230000004075 alteration Effects 0.000 description 2
- 230000009435 amidation Effects 0.000 description 2
- 238000007112 amidation reaction Methods 0.000 description 2
- 230000000890 antigenic effect Effects 0.000 description 2
- 239000000872 buffer Substances 0.000 description 2
- 239000011545 carbonate/bicarbonate buffer Substances 0.000 description 2
- 230000008859 change Effects 0.000 description 2
- 238000006243 chemical reaction Methods 0.000 description 2
- 239000007979 citrate buffer Substances 0.000 description 2
- 238000003776 cleavage reaction Methods 0.000 description 2
- ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N cyanogen bromide Chemical compound BrC#N ATDGTVJJHBUTRL-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 239000013604 expression vector Substances 0.000 description 2
- 230000001900 immune effect Effects 0.000 description 2
- 229940072221 immunoglobulins Drugs 0.000 description 2
- 208000015181 infectious disease Diseases 0.000 description 2
- 230000002458 infectious effect Effects 0.000 description 2
- 239000006166 lysate Substances 0.000 description 2
- KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N lysine Chemical compound NCCCCC(N)C(O)=O KDXKERNSBIXSRK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- 150000002742 methionines Chemical class 0.000 description 2
- 230000003278 mimic effect Effects 0.000 description 2
- 238000006116 polymerization reaction Methods 0.000 description 2
- 125000002924 primary amino group Chemical group [H]N([H])* 0.000 description 2
- 230000007017 scission Effects 0.000 description 2
- 230000035945 sensitivity Effects 0.000 description 2
- 239000001488 sodium phosphate Substances 0.000 description 2
- 229910000162 sodium phosphate Inorganic materials 0.000 description 2
- 229920001187 thermosetting polymer Polymers 0.000 description 2
- CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N thioglycolic acid Chemical compound OC(=O)CS CWERGRDVMFNCDR-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 2
- RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K trisodium phosphate Chemical compound [Na+].[Na+].[Na+].[O-]P([O-])([O-])=O RYFMWSXOAZQYPI-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 2
- 239000013598 vector Substances 0.000 description 2
- ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N (n-propan-2-yloxycarbonylanilino) acetate Chemical compound CC(C)OC(=O)N(OC(C)=O)C1=CC=CC=C1 ODIGIKRIUKFKHP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108091032973 (ribonucleotides)n+m Proteins 0.000 description 1
- FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 2-(chloromethyl)pyridine-3-carbonitrile Chemical compound ClCC1=NC=CC=C1C#N FALRKNHUBBKYCC-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 2-aminopentanedioic acid;hydrate Chemical compound O.OC(=O)C(N)CCC(O)=O OZDAOHVKBFBBMZ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 4-[4-(dimethylamino)phenyl]-n,n-dimethylaniline Chemical compound C1=CC(N(C)C)=CC=C1C1=CC=C(N(C)C)C=C1 YRNWIFYIFSBPAU-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 7-hydroxycoumarin Natural products O1C(=O)C=CC2=CC(O)=CC=C21 CJIJXIFQYOPWTF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 239000004475 Arginine Substances 0.000 description 1
- 108090001008 Avidin Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M Bicarbonate Chemical compound OC([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 241000283690 Bos taurus Species 0.000 description 1
- 108091003079 Bovine Serum Albumin Proteins 0.000 description 1
- 101100258233 Caenorhabditis elegans sun-1 gene Proteins 0.000 description 1
- BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L Carbonate Chemical compound [O-]C([O-])=O BVKZGUZCCUSVTD-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K Citrate Chemical compound [O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O KRKNYBCHXYNGOX-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 102000004860 Dipeptidases Human genes 0.000 description 1
- 108090001081 Dipeptidases Proteins 0.000 description 1
- 238000012286 ELISA Assay Methods 0.000 description 1
- 101000906736 Escherichia phage Mu DNA circularization protein N Proteins 0.000 description 1
- 108700039691 Genetic Promoter Regions Proteins 0.000 description 1
- 108700007698 Genetic Terminator Regions Proteins 0.000 description 1
- SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N Glutaraldehyde Chemical compound O=CCCCC=O SXRSQZLOMIGNAQ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108010001336 Horseradish Peroxidase Proteins 0.000 description 1
- 206010020460 Human T-cell lymphotropic virus type I infection Diseases 0.000 description 1
- 241000714260 Human T-lymphotropic virus 1 Species 0.000 description 1
- 241000714259 Human T-lymphotropic virus 2 Species 0.000 description 1
- 206010061598 Immunodeficiency Diseases 0.000 description 1
- 208000029462 Immunodeficiency disease Diseases 0.000 description 1
- XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N L-Cysteine Chemical compound SC[C@H](N)C(O)=O XUJNEKJLAYXESH-REOHCLBHSA-N 0.000 description 1
- LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N L-norleucine Chemical compound CCCC[C@H]([NH3+])C([O-])=O LRQKBLKVPFOOQJ-YFKPBYRVSA-N 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N L-tryptophane Chemical compound C1=CC=C2C(C[C@H](N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-VIFPVBQESA-N 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N L-tyrosine Chemical compound OC(=O)[C@@H](N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-QMMMGPOBSA-N 0.000 description 1
- ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N Leucine Natural products CC(C)CC(N)C(O)=O ROHFNLRQFUQHCH-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 208000008771 Lymphadenopathy Diseases 0.000 description 1
- 239000004472 Lysine Substances 0.000 description 1
- LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N Methanethiol Chemical group SC LSDPWZHWYPCBBB-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 206010028980 Neoplasm Diseases 0.000 description 1
- 108091028043 Nucleic acid sequence Proteins 0.000 description 1
- 229910019142 PO4 Inorganic materials 0.000 description 1
- 102000035195 Peptidases Human genes 0.000 description 1
- 108091005804 Peptidases Proteins 0.000 description 1
- 108010033276 Peptide Fragments Proteins 0.000 description 1
- 102000007079 Peptide Fragments Human genes 0.000 description 1
- 108010039918 Polylysine Proteins 0.000 description 1
- 229920001213 Polysorbate 20 Polymers 0.000 description 1
- 239000004365 Protease Substances 0.000 description 1
- 108020004511 Recombinant DNA Proteins 0.000 description 1
- 240000004808 Saccharomyces cerevisiae Species 0.000 description 1
- VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N Silicium dioxide Chemical compound O=[Si]=O VYPSYNLAJGMNEJ-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 101000764570 Streptomyces phage phiC31 Probable tape measure protein Proteins 0.000 description 1
- 229930006000 Sucrose Natural products 0.000 description 1
- CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N Sucrose Chemical compound O[C@H]1[C@H](O)[C@@H](CO)O[C@@]1(CO)O[C@@H]1[C@H](O)[C@@H](O)[C@H](O)[C@@H](CO)O1 CZMRCDWAGMRECN-UGDNZRGBSA-N 0.000 description 1
- QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N Sulfuric acid Chemical compound OS(O)(=O)=O QAOWNCQODCNURD-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 108700005078 Synthetic Genes Proteins 0.000 description 1
- 239000007983 Tris buffer Substances 0.000 description 1
- QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N Tryptophan Natural products C1=CC=C2C(CC(N)C(O)=O)=CNC2=C1 QIVBCDIJIAJPQS-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- ZYPGADGCNXOUJP-CXVPHVKISA-N Variotin Chemical compound CCCC[C@@H](O)\C=C(/C)\C=C\C=C\C(=O)N1CCCC1=O ZYPGADGCNXOUJP-CXVPHVKISA-N 0.000 description 1
- 101710123661 Venom allergen 5 Proteins 0.000 description 1
- 230000021736 acetylation Effects 0.000 description 1
- 238000006640 acetylation reaction Methods 0.000 description 1
- 150000007513 acids Chemical class 0.000 description 1
- 230000010933 acylation Effects 0.000 description 1
- 238000005917 acylation reaction Methods 0.000 description 1
- 239000002671 adjuvant Substances 0.000 description 1
- PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N aluminium oxide Inorganic materials [O-2].[O-2].[O-2].[Al+3].[Al+3] PNEYBMLMFCGWSK-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 150000001408 amides Chemical class 0.000 description 1
- 150000001412 amines Chemical class 0.000 description 1
- 125000003277 amino group Chemical group 0.000 description 1
- 229910021529 ammonia Inorganic materials 0.000 description 1
- 150000008064 anhydrides Chemical class 0.000 description 1
- ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N arginine Natural products OC(=O)C(N)CCCNC(N)=N ODKSFYDXXFIFQN-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000003704 aspartic acid Nutrition 0.000 description 1
- 238000012209 assay specification Methods 0.000 description 1
- 230000001580 bacterial effect Effects 0.000 description 1
- 239000011324 bead Substances 0.000 description 1
- 125000001797 benzyl group Chemical group [H]C1=C([H])C([H])=C(C([H])=C1[H])C([H])([H])* 0.000 description 1
- OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N beta-carboxyaspartic acid Natural products OC(=O)C(N)C(C(O)=O)C(O)=O OQFSQFPPLPISGP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 102000023732 binding proteins Human genes 0.000 description 1
- 229960002685 biotin Drugs 0.000 description 1
- 235000020958 biotin Nutrition 0.000 description 1
- 239000011616 biotin Substances 0.000 description 1
- 229940098773 bovine serum albumin Drugs 0.000 description 1
- 244000309464 bull Species 0.000 description 1
- 210000004899 c-terminal region Anatomy 0.000 description 1
- 201000011510 cancer Diseases 0.000 description 1
- 229910052799 carbon Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000000969 carrier Substances 0.000 description 1
- 239000001913 cellulose Substances 0.000 description 1
- 229920002678 cellulose Polymers 0.000 description 1
- 239000011248 coating agent Substances 0.000 description 1
- 238000000576 coating method Methods 0.000 description 1
- 230000002860 competitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000000295 complement effect Effects 0.000 description 1
- 230000000536 complexating effect Effects 0.000 description 1
- 238000002809 confirmatory assay Methods 0.000 description 1
- 238000007796 conventional method Methods 0.000 description 1
- 230000000120 cytopathologic effect Effects 0.000 description 1
- 238000012217 deletion Methods 0.000 description 1
- 230000037430 deletion Effects 0.000 description 1
- 230000001419 dependent effect Effects 0.000 description 1
- 238000010790 dilution Methods 0.000 description 1
- 239000012895 dilution Substances 0.000 description 1
- 239000013024 dilution buffer Substances 0.000 description 1
- LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I dipotassium trisodium dihydrogen phosphate hydrogen phosphate dichloride Chemical compound P(=O)(O)(O)[O-].[K+].P(=O)(O)([O-])[O-].[Na+].[Na+].[Cl-].[K+].[Cl-].[Na+] LOKCTEFSRHRXRJ-UHFFFAOYSA-I 0.000 description 1
- 230000000694 effects Effects 0.000 description 1
- 238000005516 engineering process Methods 0.000 description 1
- GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N fluorescein Chemical compound O1C(=O)C2=CC=CC=C2C21C1=CC=C(O)C=C1OC1=CC(O)=CC=C21 GNBHRKFJIUUOQI-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 125000002485 formyl group Chemical group [H]C(*)=O 0.000 description 1
- 230000004927 fusion Effects 0.000 description 1
- 108010074605 gamma-Globulins Proteins 0.000 description 1
- 239000000499 gel Substances 0.000 description 1
- 238000001641 gel filtration chromatography Methods 0.000 description 1
- 230000002068 genetic effect Effects 0.000 description 1
- 239000011521 glass Substances 0.000 description 1
- 235000013922 glutamic acid Nutrition 0.000 description 1
- 229960004198 guanidine Drugs 0.000 description 1
- PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N guanidinium chloride Chemical compound [Cl-].NC(N)=[NH2+] PJJJBBJSCAKJQF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000002443 helper t lymphocyte Anatomy 0.000 description 1
- 238000009396 hybridization Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M hydroxide Chemical compound [OH-] XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-M 0.000 description 1
- 230000007813 immunodeficiency Effects 0.000 description 1
- 238000011534 incubation Methods 0.000 description 1
- 239000003112 inhibitor Substances 0.000 description 1
- 238000002347 injection Methods 0.000 description 1
- 239000007924 injection Substances 0.000 description 1
- 238000003780 insertion Methods 0.000 description 1
- 230000037431 insertion Effects 0.000 description 1
- 238000007918 intramuscular administration Methods 0.000 description 1
- 238000001990 intravenous administration Methods 0.000 description 1
- 108010045069 keyhole-limpet hemocyanin Proteins 0.000 description 1
- 208000032839 leukemia Diseases 0.000 description 1
- 239000003446 ligand Substances 0.000 description 1
- 125000005647 linker group Chemical group 0.000 description 1
- 208000018555 lymphatic system disease Diseases 0.000 description 1
- 235000018977 lysine Nutrition 0.000 description 1
- 239000006249 magnetic particle Substances 0.000 description 1
- FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N maleic anhydride Chemical compound O=C1OC(=O)C=C1 FPYJFEHAWHCUMM-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 230000004048 modification Effects 0.000 description 1
- 238000012986 modification Methods 0.000 description 1
- 238000010369 molecular cloning Methods 0.000 description 1
- 230000036963 noncompetitive effect Effects 0.000 description 1
- 230000009871 nonspecific binding Effects 0.000 description 1
- 238000010606 normalization Methods 0.000 description 1
- 230000003287 optical effect Effects 0.000 description 1
- 230000001590 oxidative effect Effects 0.000 description 1
- 239000000123 paper Substances 0.000 description 1
- 239000002245 particle Substances 0.000 description 1
- 239000000863 peptide conjugate Substances 0.000 description 1
- 238000010647 peptide synthesis reaction Methods 0.000 description 1
- NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K phosphate Chemical compound [O-]P([O-])([O-])=O NBIIXXVUZAFLBC-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000010452 phosphate Substances 0.000 description 1
- 239000008363 phosphate buffer Substances 0.000 description 1
- 239000002953 phosphate buffered saline Substances 0.000 description 1
- 210000002381 plasma Anatomy 0.000 description 1
- 238000007747 plating Methods 0.000 description 1
- 229920000729 poly(L-lysine) polymer Polymers 0.000 description 1
- 229920000656 polylysine Polymers 0.000 description 1
- 229920000642 polymer Polymers 0.000 description 1
- 239000000256 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Substances 0.000 description 1
- 235000010486 polyoxyethylene sorbitan monolaurate Nutrition 0.000 description 1
- 239000000047 product Substances 0.000 description 1
- 125000006239 protecting group Chemical group 0.000 description 1
- 238000000159 protein binding assay Methods 0.000 description 1
- 230000006337 proteolytic cleavage Effects 0.000 description 1
- 239000011541 reaction mixture Substances 0.000 description 1
- 230000010076 replication Effects 0.000 description 1
- 238000010839 reverse transcription Methods 0.000 description 1
- PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N rhodamine B Chemical compound [Cl-].C=12C=CC(=[N+](CC)CC)C=C2OC2=CC(N(CC)CC)=CC=C2C=1C1=CC=CC=C1C(O)=O PYWVYCXTNDRMGF-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 210000003296 saliva Anatomy 0.000 description 1
- 238000007423 screening assay Methods 0.000 description 1
- 239000000741 silica gel Substances 0.000 description 1
- 229910002027 silica gel Inorganic materials 0.000 description 1
- 239000001509 sodium citrate Substances 0.000 description 1
- NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K sodium citrate Chemical compound O.O.[Na+].[Na+].[Na+].[O-]C(=O)CC(O)(CC([O-])=O)C([O-])=O NLJMYIDDQXHKNR-UHFFFAOYSA-K 0.000 description 1
- 239000007790 solid phase Substances 0.000 description 1
- 239000008223 sterile water Substances 0.000 description 1
- 238000003756 stirring Methods 0.000 description 1
- 239000011550 stock solution Substances 0.000 description 1
- 238000007920 subcutaneous administration Methods 0.000 description 1
- 239000000126 substance Substances 0.000 description 1
- 229940014800 succinic anhydride Drugs 0.000 description 1
- 239000005720 sucrose Substances 0.000 description 1
- 150000003462 sulfoxides Chemical class 0.000 description 1
- 235000011149 sulphuric acid Nutrition 0.000 description 1
- 239000006228 supernatant Substances 0.000 description 1
- RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L thimerosal Chemical compound [Na+].CC[Hg]SC1=CC=CC=C1C([O-])=O RTKIYNMVFMVABJ-UHFFFAOYSA-L 0.000 description 1
- 125000004149 thio group Chemical group *S* 0.000 description 1
- 125000003396 thiol group Chemical group [H]S* 0.000 description 1
- OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N tyrosine Natural products OC(=O)C(N)CC1=CC=C(O)C=C1 OUYCCCASQSFEME-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 235000002374 tyrosine Nutrition 0.000 description 1
- ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Chemical compound C1=CC(=O)OC2=CC(O)=CC=C21 ORHBXUUXSCNDEV-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N umbelliferone Natural products Cc1cc2C=CC(=O)Oc2cc1OCC=CC(C)(C)O HFTAFOQKODTIJY-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
- 229940045145 uridine Drugs 0.000 description 1
- 229960005486 vaccine Drugs 0.000 description 1
- 230000003612 virological effect Effects 0.000 description 1
- 239000011534 wash buffer Substances 0.000 description 1
- 238000005406 washing Methods 0.000 description 1
- XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N water Chemical compound O XLYOFNOQVPJJNP-UHFFFAOYSA-N 0.000 description 1
Classifications
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C07—ORGANIC CHEMISTRY
- C07K—PEPTIDES
- C07K14/00—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof
- C07K14/005—Peptides having more than 20 amino acids; Gastrins; Somatostatins; Melanotropins; Derivatives thereof from viruses
-
- G—PHYSICS
- G01—MEASURING; TESTING
- G01N—INVESTIGATING OR ANALYSING MATERIALS BY DETERMINING THEIR CHEMICAL OR PHYSICAL PROPERTIES
- G01N33/00—Investigating or analysing materials by specific methods not covered by groups G01N1/00 - G01N31/00
- G01N33/48—Biological material, e.g. blood, urine; Haemocytometers
- G01N33/50—Chemical analysis of biological material, e.g. blood, urine; Testing involving biospecific ligand binding methods; Immunological testing
- G01N33/53—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor
- G01N33/569—Immunoassay; Biospecific binding assay; Materials therefor for microorganisms, e.g. protozoa, bacteria, viruses
- G01N33/56983—Viruses
- G01N33/56988—HIV or HTLV
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K38/00—Medicinal preparations containing peptides
-
- A—HUMAN NECESSITIES
- A61—MEDICAL OR VETERINARY SCIENCE; HYGIENE
- A61K—PREPARATIONS FOR MEDICAL, DENTAL OR TOILETRY PURPOSES
- A61K39/00—Medicinal preparations containing antigens or antibodies
-
- C—CHEMISTRY; METALLURGY
- C12—BIOCHEMISTRY; BEER; SPIRITS; WINE; VINEGAR; MICROBIOLOGY; ENZYMOLOGY; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING
- C12N—MICROORGANISMS OR ENZYMES; COMPOSITIONS THEREOF; PROPAGATING, PRESERVING, OR MAINTAINING MICROORGANISMS; MUTATION OR GENETIC ENGINEERING; CULTURE MEDIA
- C12N2740/00—Reverse transcribing RNA viruses
- C12N2740/00011—Details
- C12N2740/10011—Retroviridae
- C12N2740/16011—Human Immunodeficiency Virus, HIV
- C12N2740/16211—Human Immunodeficiency Virus, HIV concerning HIV gagpol
- C12N2740/16222—New viral proteins or individual genes, new structural or functional aspects of known viral proteins or genes
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S435/00—Chemistry: molecular biology and microbiology
- Y10S435/974—Aids related test
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S530/00—Chemistry: natural resins or derivatives; peptides or proteins; lignins or reaction products thereof
- Y10S530/82—Proteins from microorganisms
- Y10S530/826—Viruses
-
- Y—GENERAL TAGGING OF NEW TECHNOLOGICAL DEVELOPMENTS; GENERAL TAGGING OF CROSS-SECTIONAL TECHNOLOGIES SPANNING OVER SEVERAL SECTIONS OF THE IPC; TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC
- Y10S—TECHNICAL SUBJECTS COVERED BY FORMER USPC CROSS-REFERENCE ART COLLECTIONS [XRACs] AND DIGESTS
- Y10S930/00—Peptide or protein sequence
- Y10S930/01—Peptide or protein sequence
- Y10S930/22—Viral peptide or viral protein
- Y10S930/221—Retrovirus related, or human immunodeficiency virus related, or simian immunodeficiency virus related
Landscapes
- Health & Medical Sciences (AREA)
- Life Sciences & Earth Sciences (AREA)
- Chemical & Material Sciences (AREA)
- Engineering & Computer Science (AREA)
- Immunology (AREA)
- Virology (AREA)
- Molecular Biology (AREA)
- General Health & Medical Sciences (AREA)
- Biomedical Technology (AREA)
- Organic Chemistry (AREA)
- Biochemistry (AREA)
- Hematology (AREA)
- Medicinal Chemistry (AREA)
- Urology & Nephrology (AREA)
- Biotechnology (AREA)
- Gastroenterology & Hepatology (AREA)
- Microbiology (AREA)
- Physics & Mathematics (AREA)
- Analytical Chemistry (AREA)
- Cell Biology (AREA)
- Tropical Medicine & Parasitology (AREA)
- General Physics & Mathematics (AREA)
- Pathology (AREA)
- Food Science & Technology (AREA)
- Biophysics (AREA)
- Genetics & Genomics (AREA)
- Proteomics, Peptides & Aminoacids (AREA)
- AIDS & HIV (AREA)
- Peptides Or Proteins (AREA)
- Measuring Or Testing Involving Enzymes Or Micro-Organisms (AREA)
- Medicines Containing Antibodies Or Antigens For Use As Internal Diagnostic Agents (AREA)
- Pharmaceuticals Containing Other Organic And Inorganic Compounds (AREA)
- Preparation Of Compounds By Using Micro-Organisms (AREA)
- Medicines That Contain Protein Lipid Enzymes And Other Medicines (AREA)
Description
DK 174533 B1
Foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til påvisning af tilstedeværelse af antistof mod HIV-virus.
Med opdagelsen af at sygdommene kaldet lymphadenopatisyndrom og akvisit immundekfektsyndrom (AIDS) forårsages af et infektiøst retro-5 virus betegnet lymfadenopativirus (LAV), human T-celle lymfotropt virus-III (HTLV-III), AIDS-relateret virus (ARV) eller immundefektassocieret virus (IDAV), er der opstået et øjeblikkeligt behov for at være i stand til at påvise potentielle vektorer af sygdommen såsom blod fra sygdoms-angrebne individer, som kan anvendes til transfusioner, eller fra 10 hvilket specifikke blokfaktorer kan isoleres.
For at påvise potentielle vektorer af sygdommen er det nødvendigt at have virusproteiner og/eller antistoffer mod sådanne proteiner. På grund af de risici, der er forbundet med dyrkning af LAV/HTLV-III retro-viruset, er der en betydelig interesse i at etablere metoder til op-15 nåelse af virusproteinerne eller deres immunologiske ækvivalenter uden behov for at håndtere store volumener levende, potentielt Infektiøst virus. Ved valg af alternativer må man være opmærksom på, at viruserne er blevet rapporteret at være stærkt polymorfe, idet de hyppigt ændres, når retroviruset overføres.
20 De forskellige antigener for retroviruset beskrives af Saxinger gt al., Science (1985) 222-1036-1038. Se også Gallo et al-, ibid. (1984) 224^500, Sarangadharn till·, ibid. 224:506, Barre-Sinoussi et al., ibid. (1983) 220:868, Montagnier gt al., in Human T-Cell Leukemia/Lvmphoma Virus. Gallo, Essex, Gross, eds. (Cold Spring Harbor 25 Laboratory, Cold Spring Harbor, New York), 1984, side 363. Disse kan indbefatte men er ikke begrænset til pl3, pl8, p25, p36, gp43, p55, gp65, gpllO, etc., hvor tallene kan afvige fra referent til referent.
Hopp og Woods, Proc. Natl. Acad. Sci. USA (1981) 78:3824 beskriver kriterier til udvælgelse af peptider som potentielle epitoper af poly-30 peptider på basis af deres relative hydrofilicitet. Ved en undersøgelse, hvor disse kriterier anvendtes, syntetiseredes et 12-aminosyrepeptid, som binder 9% af antistoffer fremkaldt af det native protein (Hopp,
Molec. Immunol. (1981) 15:869). I almindelighed er Hopp/Woods kriteriet blevet vist ikke at have en høj forudsigelsesværdi. Ydermere er der på-35 vist epitoper, som ikke er hydrofile (Kazim et gi., Biochem. J. (1982) 202:201). Andre undersøgelser af polypeptidantigenlcitet indbefatter Green gi gi-, Cel! (1982) 28:477, hvor der anvendtes peptider, som frem- 2 DK 174533 B1 kaldte antistoffer, som var i stand til at binde til det native protein, mens der på den anden side antistoffer, som fremkaldtes af det native protein, ikke bandt til peptiderne, og Trainer gt il., Nature (1984) 112:127, hvis resultater med myohæmerythrin var parallelle med de af 5 Green gt il. opnåede.
Den fuldstændige nukleotidsekvens af LAV rapporteres af Wain-Hobson gi al., Cel! (1985) 4£:9. Den fuldstændige sekvens for HTLV-III rapporteres af Muesing gi il-, Nature (1985) 311:450, mens den fuldstændige sekvens for ARV rapporteres af Sanchez-Pescador gi gi., Science (1985) 10 22Z:484. Alle tre viruser udviser betydelig nukleotidhomologi og ligner hinanden med hensyn til morfologi, cytopatologi, krav til optimal revers transkriptaseaktivitet og i det mindste nogle antigeniske egenskaber (Levy gi al., Science (1984) 121:840, Shupbach gi gi·, Science (1984) 124:503) og bør derfor betragtes som i sol ater af samme virus. Se også 15 Chang gt gi., Science (1985) HS:93. På basis af disse og andre data har Human Retrovirus Subcommittee under International Committee on the Taxonomy of Viruses foreslået navnet Human Immuno-deficiency Virus eller humant immundefektvirus (HIV) for denne gruppe nært beslægtede viruser (Science (1986) 231:697). Denne betegnelse vil blive anvendt i nærværen-20 de ansøgning.
DK-patentansøgning nr. PA 1997 06264 - W0 offentliggørelsesskrift 8606414 beskriver syntetiske HIV antigener og deres anvendelse til detektering af antistof mod HIV, men ikke fremgangsmåder til påvisning af tilstedeværelsen af antistof mod HIV-virus, ved hvilken man som reagens 25 anvender et præparat indeholdende mindst et peptid med fra 12 til 50 aminosyrer og med mindst tolv på hinanden følgende aminosyrer i en se-kevns, der forekommer i sekvensen af mindst en af de heri beskrevne peptidsekvenser.
EP-offenti iggørelsesskrift nr. 1 181 150 beskriver rekombinante 30 proteiner, som kan anvendes til detektering af antistoffer mod AIDS.
Peptidsekvenser, som er i stand til immunologisk at efterligne proteiner, for hvilket der kodes i HIV retrovirusets gsl og gag områder, leveres som reagenser til brug ved screening af blod og blodprodukter for tidligere eksponering for retroviruset. Peptiderne er mindst 5 35 aminosyrer lange og kan anvendes ved forskellige specifikke bindingsanalyser til påvisning af antistoffer mod HIV virus, til påvisning af HIV antigener eller som immunogener.
3 DK 174533 B1 I denne beskrivelse skal et virus anses for at være det samme som eller ækvivalent med HIV, hvis det i det væsentlige opfylder følgende kriterier: (a) viruset er tropisk for T-lymfocytter, navnlig T-hjælpercel ler 5 (CD4+, i henhold til den i Bernard et il·» eds. Leucocyte Tvoino. New
York, Springer Verlag, 1984 definerede internationale nomenklatur), (b) viruset er cytopatisk for inficerede CD4+ celler (og ikke transformerende som HTLV-I og -II), (c) viruset koder for en RNA-afhængig DNA polymerase (revers 10 transkriptase), som er Mg -afhængig (optimal koncentration 5mM), har et pH optimum på 7,8, inhiberes ikke af actinomydn D og kan anvende oli-go(dT)1218 som primer for revers transkription fra dets 3' LTR, (d) viruset danner bånd i en saccharosegradient ved en densitet på ca. 1,16, 15 (e) viruset kan mærkes med [ H]-uridin, (f) viruset er 1 det væsentlige immunologisk krydsreaktivt med de proteiner, der kodes af g&g, env og pal områderne af HIV, og (g) viruset har betydelig nukleotidhomologi (ca. 75-100%) og aminosyresekvenshomologi (ca. 75-100%) med LAV eller HTLV-III.
20 Foreliggende opfindelse angår en fremgangsmåde til påvisning af tilstedeværelse af antistof mod HIV-virus, ved hvilken en prøve kombineres med et præparat med epitope positioner, som immunologisk konkurrerer med HIV-epitope positioner, hvorved antistoffer bindes til et sådant proteinpræparat under dannelse af mindst ét specifikt 25 bindingsparkompleks, og hvor omfanget af kompleksdannelse bestemmes, hvilken fremgangsmåde er kendetegnet ved, at der som reagens i analysemediet anvendes et præparat indeholdende mindst ét peptid med fra 12 til 50 aminosyrer, og med mindst tolv på hinanden følgende aminosyrer i en sekvens som forekommer i sekvensen af mindst én af følgende 30 peptidsekvenser, hvori angivne peptid hovedsagelig har samme immunreaktivitet over for antistoffer mod HIV som angivne sekvens: 1 (126)
Gin-Val-Arg-Asp-Gln-Ala-Glu-His-Leu-Lys-Thr-Ala-Val-Gln-Met-Ala-Val-Phe-35 Ile-His-Asn-Phe-Lys-Arg-Lys-Gly-Gly-Ile-Gly-Gly-Tyr-Ser-Ala-Gly-Glu-Arg-IIe-Val-Asp-Ile-Ile-Ala-Thr-Asp-Ile; 4 DK 174533 B1 II (123)
Ile-Ala-Thr-Asp-Ile-Gln-Thr-Lys-Glu-Leu-Gln-Lys-Gln-Ile-Thr-Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-Gly-Glu-Gly-Ala; eller 5
Ila (124)
Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-Gly-Glu-Gly-Ala, 10 og hvor peptidet er frit for andre peptider eller er konjugeret til et makromolekyle, mod hvilket antistof i det væsentlige er fraværende i humane sera.
Der tilvejebringes hidtil ukendte peptider, som immunologisk efterligner proteiner kodet af HIV retrovlruset, navnlig proteiner kodet af 15 virusgenomets fifil område. For at give plads for variationer fra stamme til stamme blandt forskellige isolater kan justeringer for konservative substitutioner og udvælgelse blandt alternativerne, hvor ikke-konservative substitutioner er på tale, foretages. Disse peptider kan anvendes Individuelt eller sammen til påvisning af viruset eller antistoffer mod 20 viruset i en fysiologisk prøve. Afhængigt af arten af testforskriften kan peptiderne være mærkede eller umærkede, bundet til en fast overflade, konjugeret til en bærer eller andre forbindelser eller lignende.
De interessante peptider vil være afledt af de af fifil og 213 om-25 råderne kodede peptider. Disse peptider vil primært være afledt af p31 fra fiol området og p25 fra gag området. Disse peptider vil i nærværende ansøgning blive forsynet med romertal og vil også blive forsynet med nummeriske betegnelser, som arbitrært er knyttet til den måde, hvorpå de fremstilledes. Af særlig interesse er det kodningsområde, der strækker 30 sig ca. fra basepar (bp) 4265 til bp 4519, navnlig ca. fra bp 4265 til bp 4399 og fra bp 4385 til bp 4519 indbefattende et kortere segment fra bp 4430 til bp 4519. Også det kodningsområde, der strækker sig ca. fra bp 897 til bp 986, er af særlig interesse. (Nummerering i henhold til Wain-Hobson et fil., supra).
35 De interessante peptider vil indbefatte mindst 12, sædvanligvis færre end ca. 50, mere almindeligt færre end ca. 35 og fortrinsvis færre end ca. 25 aminosyrer inkluderet i en sekvens, som HIV retroviruset 5 DK 174533 B1 koder for. I hvert tilfalde er det ønskeligt at oligopeptidet er så lille som muligt, samtidig med at det i det væsentlige bibeholder hele det større peptids sensitivitet. I nogle tilfælde kan det være ønskeligt at sammenføje to eller flere oligopeptider, som ikke er overlappende, 5 til dannelse af en enkelt peptidstruktur eller anvende dem på samme tid som individuelle peptider, som separat eller sammen giver ækvivalent sensitivitet med ophavet.
Peptiderne kan modificeres ved indføring af konservative eller ikke-konservative substitutioner i peptiderne, idet sædvanligvis mindre 10 end 20 antalsprocent, mere almindeligt mindre end 10 antalsprocent af aminosyrerne udskiftes. I de situationer, hvor områder findes at være polymorfe, kan det være ønskeligt at variere en eller flere specielle aminosyrer for mere effektivt at efterligne de forskellige retrovirus-stammers afvigende epitoper.
15 Det må forstås, at de i forbindelse med opfindelsen anvendte poly- peptider ikke behøver at være identiske med nogen speciel HIV polypep-tidsekvens, så længe de omhandlede forbindelser er i stand til at give immunologisk konkurrence med proteiner fra i det mindste en af HIV re-trovirusstammerne. De omhandlede polypeptider kan derfor være genstand 20 for forskellige ændringer såsom indskud, deleteringer og substitutioner, enten konservative eller ikke-konservative, hvor sådanne ændringer kan give visse fordele under deres brug. Med konservative substitutioner tænkes der på substitutioner i grupper såsom gly, ala; val, ile, leu; asp, glu; asn, gin; ser, thr; lys, arg; phe, tyr og norleu, met. Sædvan-25 ligvis vil sekvensen ikke afvige mere end 20% fra sekvensen for mindst en HIV retrovirusstamme med mindre yderligere aminosyrer kan være tilføjet ved den ene terminal eller begge med det formål at tilvejebringe en "arm" hvormed peptiderne ifølge opfindelsen bekvemt kan immobilise- res. Armene vil sædvanligvis være mindst 1 aminosyre lange og kan være 30 50 eller flere aminosyrer, oftere 1 til 10 aminosyrer lange.
Desuden kan en eller to aminosyrer føjes til terminalerne på et oligopeptid eller peptid for at lette sammenkobling af peptider med hinanden, af hensyn til kobling til en bærer eller et større peptid, af årsager, som vil blive omtalt senere, for at modificere de fysiske eller 35 kemiske egenskaber af peptidet eller oligopeptidet eller lignende.
Aminosyrer såsom tyrosin, cystein, lysin, glutamin- eller aspara-ginsyre eller lignende kan indføres ved peptidets eller oligopeptidets 6 DK 174533 B1 C- eller N-terminal for at tilvejebringe en værdifuld funktionalitet til sammenkædning. Cystein foretrækkes specielt for at lette kovalent kobling til andre peptider eller til dannelse af polymerer ved oxidation. Kombinationer af cystein med mellemliggende aminosyreafstandsstykker er 5 også værdifulde. For eksempel kan to cysteinrester adskilles af en eller flere cr-aminosyrerester med en enkelt sidekæde med højst fire carbon-atomer (idet lille størrelse ønskes for at undgå forstyrrelse af koblingsreaktioner). Glyclnrester foretrækkes af denne årsag, navnlig en til tre glycinrester mellem aminosyrer tilføjet for at lette kobling.
10 Cysteinrester er specielt værdifulde ved dannelse af netværkspolymerer ved oxidation. I sådanne tilfælde foretrækkes det at have mindst tre cysteinrester i molekylerne, som sammenkædes, fortrinsvis ved anvendelse af cysteinrester føjet til peptidernes terminalafsnit.
Desuden kan peptid- eller oligopeptidsekvenserne afvige fra den na-15 turlige sekvens, ved at sekvensen er modificeret ved NH2-terminalacyle-ring, for eksempel acetylering eller thioglykolsyreamidering, carboxy-terminal amidering, for eksempel med ammoniak eller methylamin til frembringelse af positioner for sammenkædning med en bærer eller et andet molekyle.
20 De omhandlede peptider og oligopeptider vil nu blive betragtet.
Peptid I (126), der kodes i området bp 4265 til bp 4399, vil have følgende aminosyresekvens, hvor oligopeptider Indbefattet i den følgende sekvens vil indbefatte lineære epitoper inden for denne sekvens: 25 (I) (126) Y-Gln-Val-Arg-Asp-Gln-Ala-Glu-His-Leu-Lys-Thr-Ala-Val-Gln-Met-Ala-Val-Phe-Ile-His-Asn-Phe-Lys-Arg-Lys-Gly-Gly-Ile-Gly-Gly-Tyr-Ser-Ala-Gly-Glu-Arg-Ile-Val-Asp-Ile- Il e-Ala-Thr- Asp- 11 e-X-Z 30 hvori X og Y eventuelt forefindes, og når de forefindes repræsenterer aminosyrer, som letter kovalent kobling af peptidet til en proteinbærer eller et andet peptid eller polymerisation via en tilføjet cysteinrest ved oxidation. Z indikerer, at carboxyterminal aminosyren enten forefin-35 des som fri carboxy eller som amid. Når X og Y forefindes, er det en foretrukket udførelsesform, når X og Y hver især betegner en eller flere cysteinenheder eller en kombination af en eller flere cysteinenheder 7 DK 174533 B1 eller en kombination af en eller flere cysteinenheder og afstandsamino-syrer. foretrukne afstandsamlnosyrer er a-am1nosyrerester med en enkelt sidekæde med højst fire carbonatomer. Glycin er en specielt foretrukket afstandsaminosyre. Til brug ved oxidativ polymerisation foretrækkes de 5 peptider, hvori X og Y tilsammen repræsenterer mindst tre cysteinrester.
Når to cysteinrester forefindes ved samme ende af peptidet, er det en foretrukket udførelsesform, når cysteinresterne er adskilt med fra en til tre afstandsaminosyrerester, fortrinsvis glycin.
Dette peptid vil fortrinsvis højst have ca. 45 aminosyrer kodet af 10 HIV genomet.
Det næste peptid II (123) vil være kodet af det område, der strækker sig ca. fra bp 4385 til bp 4519 og vil have den følgende sekvens, hvor oligopeptider indbefattet i den følgende sekvens vil indbefatte lineære epitoper inden for denne sekvens: 15 (II) (123)
YIle-Ala-Thr-Asp-Ile-Gln-Thr-Lys-Glu-Leu-Gln-Lys-Gln-Ile-Thr-Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-20 Trp-Lys-Gly-Glu-Gly-Ala-X-Z
hvori Y ved aminotermi nalen og X-Z ved carboxy terminal en har den tidligere anførte betydning.
Af Interesse er også oligopeptidet Ila: 25 (Ha) (124) Y-Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-
Asp-Pro-Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-
Gly-Glu-Gly-Ala-X-Z
30 hvori X, Y og Z har den tidligere anførte betydning.
oaa områdepeptidet III (158) vil være kodet af det område, der strækker sig ca. fra bp 897 til 986 og vil have den følgende sekvens, hvor oligopeptider indbefattet i den følgende sekvens vil indbefatte 35 lineære epitoper med denne sekvens: 8 DK 174533 B1 (ΠΙ) (158) Y-Leu-Asn-Thr-Val-Gly-Gly-His-Gln-Ala-Ala-Met-Gln-Met-
Leu-Lys-Glu-Thr-Ile-Asn-Glu-Glu-Ala-Ala-Glu-Trp-Asp-
Arg-Val-His-Pro-X-Z
5 hvori X, Y og Z har den tidligere anførte betydning.
Af sirlig interesse er anvendelsen af mercaptangruppen i cysteiner eller thioglykolsyrer anvendt til acylering af terminalaminogrupper eller lignende til sammenkædning af to af peptiderne eller oligopep-10 tiderne eller kombinationer deraf med en disulfidbinding eller en længere binding. Til opnåelse af dette kan der anvendes forbindelser med feis-halogenacetylgrupper, nitroarylhalogenider eller lignende, hvor reagenserne er specifikke for thiogrupper. Sammenkædningen mellem de to mercaptogrupper i de forskellige peptider eller oligopeptider kan være 15 en enkeltbinding eller en sammenkædningsgruppe på mindst 2, sædvanligvis mindst 4 og højst ca. 16, sædvanligvis højst ca. 14 carbonatomer.
De omhandlede peptider kan anvendes sammenkædet med en opløselig makromolekylær (for eksemæel >5kDal) bærer. Bæreren kan hensigtsmæssigt være en enten naturligt forekommende eller syntetisk polyaminosyre, mod 20 hvilken det er usandsynligt, at man vil støde på antistoffer i humant serum. Blandt illustrerende polypeptider er poly-L-lysin, bovinserumal-bumin, keyhole limpet hæmocyanin, bovingammaglobul in, etc. Valget er primært et spørgsmål om bekvemmelighed og tilgængelighed.
Ved sådanne konjugater vil der være mindst et molekyle af mindst et 25 omhandlet peptid pr. makromolekyle og højst ca. 1 pr. 0,5kDal, sædvanligvis højst ca. 1 pr. 2kDal af makromolekylet. Et eller flere forskellige peptider kan kædes til samme molekyle.
Sammenkædningsmåden er konventionel, idet der anvendes sådanne reagenser som j>-maleimidobenzoesyre, g-methyldithiobenzoesyre, maleinsyre-30 anhydrid, ravsyreanhydrid, glutaraldehyd, etc. Bindingen kan forekomme ved N-terminalen, C-terminalen eller i en position mellem molekylets ender. Det omhandlede peptid kan derivatiseres ved sammenkædning, kan sammenkædes mens det er bundet til en bærer eller lignende.
Forbindelserne kan anvendes som mærkede eller umærkede forbindelser 35 i afhængighed af deres anvendelse. (Med markør tænkes der på et molekyle, som direkte eller indirekte giver et påviseligt signal). Forskellige markører kan anvendes såsom radionuklider, enzymer, fluorescens- 9 DK 174533 B1 fremkaldende midler, chemiluminescensfremkaldende midler, enzymsubstrater, kofaktorer eller inhibitorer, partikler, for eksempel magnetiske partikler, kombinationer af ligander og receptorer, for eksempel biotin og avidin eller lignende. Desuden kan polypeptiderne modificeres på 5 forskellige måder med henblik på binding til en overflade, for eksempel mikrotiterplader, glasperler, kromatografiske overflader, for eksempel papir, cellulose, silicagel eller lignende. Den særlige måde, hvorpå polypeptiderne sammenføjes med en anden forbindelse eller overflade, er konventionel og er righoldigt belyst i litteraturen. Se for eksempel US 10 patentskrifterne nr. 4.371.515, 4.487.715 og deri citerede patentskrifter.
Forskellige analyseforskrifter kan anvendes til påvisning af tilstedeværelsen af enten antistoffer mod retrovirusproteiner eller selve retrovirusproteinerne. Af særlig interesse er anvendelse af pepti det som 15 det mærkede reagens, hvor markøren muliggør et påviseligt signal eller binding af peptidet enten direkte eller indirekte til en overflade, hvor antistof mod peptidet i prøven vil blive bundet til peptidet på overfladen. Tilstedeværelsen af humant antistof bundet til peptidet kan derefter påvises ved anvendelse af et xenogent antistof, som er speci-20 fikt for humant immunoglobulin, normalt både humant IgM og IgG eller et mærket protein, som er specifikt for immunkomplekser, for eksempel Rf faktor eller S· aureus protein A.
Forskellige heterogene forskrifter kan anvendes såvel kompetitive som ikke-kompetitive. Peptid kan bindes til en overflade eller bærer 25 ("bærer"), og mærket antistof gives anledning til at konkurrere med antistof i prøven om den begrænsede mængde bundet peptid. Mængden af markør bundet til bæreren vil stå i relation til mængden af konkurrerende antistof i prøven.
Antistof vil kunne bindes til bæreren og prøven kombineres med mær-30 ket peptid. Efter kontakt af reaktionsblandingen med det bundne antistof vil mængden af markør bundet til bæreren stå i relation til mængden af beslægtet antistof i prøven.
Xenogent antihumant antistof for eksempel antistoffer mod F af IgG og IgM (immunoglobuliner) vil kunne bindes til en bærer. Prøven bringes 35 i kontakt med immunoglobuli nerne og det mærkede peptid, hvorved mængden af mærket peptid bundet til bæreren vil være indikativ for tilstedeværelsen af de beslægtede antistoffer.
10 DK 174533 B1
Som alternativ kan der anvendes homogene analyser, hvor peptidet bindes til et enzym, et fluorescensfremkaldende middel eller en anden markør, hvor bindingen af antistof til peptidet resulterer i, at man er i stand til at skelne mellem markør involveret i et specifikt bindings-5 parkompleks og markør, som ikke er involveret i komplekset. For analyser omfattende sådanne teknikker henvises der for eksempel til US patentskrifterne nr, 3.817.837, 3.850.752, 3.901.654, 3.935.074, 3.984.533, 3.996.345, 4.034.074 og 4.098.876, hvis indhold inkorporeres heri ved henvisning.
10 Som illustration af den omhandlede opfindelse kan de omhandlede peptider konjugeres til et fluorescerende molekyle såsom fluorescein, rhodamin eller umbelliferon. Forskellige teknikker kan anvendes til påvisning af kompleksdannelse med antistoffer, for eksempel fluorescenspolarisation. Ved denne analyse er der en forskel i fluorescenspol arisati-15 on mellem kompleksbundet og ikke-kompleksbundet peptidkonjugat. Der findes apparater til måling af ændringer i fluorescenspolarisation, for eksempel TDx, der leveres af Abbott Laboratories, Chicago, Illinois.
Et eksempel på en analyseteknik er anvendelsen af en prøvebeholder, for eksempel mikrotiterpladebrønde, hvor de omhandlede peptider eller 20 konjugater deraf adhæreres til beholderens bund og/eller vægge, enten kovalent eller ikke-kovalent. Prøven, normalt humant blod eller serum fortyndet i et passende forpufret medium, sættes til beholderen, og tilstrækkelig tid hengår til kompleksdannelse mellem polypeptidet eller polypeptiderne og eventuelle beslægtede antistoffer i prøven. Superna-25 tanten fjernes, og beholderen vaskes for at fjerne ikke-specifikt bundne proteiner.
Et mærket specifikt bindingsprotein, som specifikt bindes til komplekset, anvendes til påvisning. Til beholderen kan sættes xenogene antisera til humant immunoglobulin, navnlig anti-humant IgM og IgG i et 30 passende forpufret medium. De xenogene antisera vil normalt blive mærket med en påviselig markør, for eksempel et radionuklid eller enzym. I stedet for antisera kan proteiner, som er specifikke for immunkomplekset, anvendes, for eksempel S. aureus protein A. Markøren kan derefter påvises. For eksempel tilsættes der ved et enzym en fremkalderopløsning 35 efter fjernelse af ikke-specifikt bundet enzymmarkør. Fremkalderopløsningen vil indeholde et enzymsubstrat og eventuelt enzymkofaktorer, kro-mogener, etc., som efter reaktion giver et farvet eller fluorescerende 11 DK 174533 B1 produkt, som henholdsvis kan påvises colorimetrisk eller fluorlmetrisk.
Peptiderne kan fremstilles på mange forskellige måder. Da peptiderne er forholdsvis korte, kan de syntetiseres i opløsning eller på en fast bærer i henhold til konventionelle teknikker. Forskellige automa-5 tiske syntetisatorer kan fås i handelen idag og kan anvendes i henhold til kendte forskrifter. Se for eksempel Stewart og Young, Solid Phase Peptide Synthesis, 2. udgave, Pierce Chemical Co., 1984 og Tam e£al., J. Am. Chem. Soc. (1983) 105:6442.
Som alternativ kan hybrid DNA teknologi anvendes, hvorved et synte-10 tisk gen kan fremstilles ved anvendelse af enkelte strenge, som koder for polypeptidet eller i det væsentlige komplementære strenge dertil, hvor de enkelte strenge overlapper og kan bringes sammen i et normaliseringsmedium for at hybridisere. De hybridiserede strenge kan derefter ligeres til dannelse af det komplette gen, og ved valg af passende ter-15 minaler kan genet indføres i ekspressionsvektorer, som er let tilgængelige idag. Se for eksempel Maniatis st il·» Molecular Cloning, A Laboratory Manual, CSH, Cold Spring Harbor Laboratory, 1982. Eller det område af vlrusgenomet, som koder for peptidet, kan klones ved konventionelle rekombinant DNA teknikker og bringes til udtryk (se Maniatis, 20 supral.
Blandt DNA kodningssekvenser, som kan anvendes til at udtrykke peptiderne er følgende:
I (TGT GGA GGA TGT) CAG GTA AGA GAT CAG GCT GAA CAT 25 CTT AAG ACA GCA GTA CAA ATG GCA GTA TTC ATC CAC
AAT TTT AAA AGA AAA GGG GGG ATT GGG GGG TAC AGT
GCA GGG GAA AGA ATA GTA GAC ΑΤΑ ATA GCA ACA GAC
ATA (TGT);
30 II (TGT GGA GGA TGT) ATA GCA ACA GAC ATA CAA ACT AAA GAA TTA CAA AAA CAA ATT ACA AAA ATT CAA AAT TTT
CGG GTT TAT TAC AGG GAC AGC AGA GAT CCA CTT TGG
AAA GGA CCA GCA AAG CTC CTC TGG AAA GGT GAA GGG
GCA (TGT).
III CTA AAC ACA GTG GGG GGA CAT CAA GCA GCC ATG CAA
ATG TTA AAA GAG ACC ATC AAT GAG GAA GCT GCA GAA
35 12 DK 174533 B1 TGG GAT GAG GTG CAT CCA (TGT)
Fragmenter af disse sekvenser kan anvendes til ekspression af peptidfragmenter, konservative baseændringer, hvorved det eller de modifi-5 cerede codoner koder for samme aminosyre(r), kan foretages, eller ikke-konservative ændringer, hvorved den resulterende aminosyre kan være en konservativ eller ikke-konservativ ændring i aminosyresekvensen som tidligere omtalt, kan foretages.
Kodningssekvensen kan udvides enten ved 5'- eller 3'-terminalen 10 eller begge for at forlænge peptidet under bibeholdelse af dets epitop-position. Udvidelsen eller forlængelsen kan give en arm til sammenkædning, for eksempel med en markør såsom et enzym til sammenføjning af to af eller alle peptiderne i samme kæde, til tilvejebringelse af anti-genisk aktivitet eller lignende.
15 Med henblik på ekspression vil kodningssekvensen blive forsynet med start- og stopcodoner, promotor- og terminatorområder og sædvanligvis et replikationssystem til frembringelse af en ekspressionsvektor for ekspression i en cellevært, for eksempel en prokaryotisk eller eukaryotisk, bakterie-, gær-, pattedyrs-, etc. cellevært.
20 Selve sekvenserne, fragmenter deraf eller større sekvenser sædvan ligvis på mindst 15 baser, fortrinsvis mindst 18 baser kan anvendes som prober til påvisning af retrovirus RNA eller provirus DNA. Talrige teknikker findes beskrevet såsom Grunstein-Hogness teknikken, Southern teknikken, Northern teknikken, dot-blot teknikken, forbedringer deraf samt 25 andre metoder. Se for eksempel WO 83/02277 og Berent il., Bio-technioues (1985) 3:208.
Polypeptiderne kan bekvemt fremstilles som fusionerede proteiner, hvor polypeptidet kan være det fusionerede polypeptids N- eller C-termi-nal. Det resulterende fusionerede protein vil 1 sig selv kunne anvendes 30 direkte som reagens, eller det omhandlede polypeptid kan spaltes fra hele den resterende sekvens af det fusionerede protein eller en del deraf. Med et polypeptid, hvor det ikke er nogen indre methioniner, kan polypeptidet spaltes ved hjælp af cyanogenbromid ved indføring af en methionin ved fusionsstedet. Når der er en indre methionin, vil det være 35 nødvendigt at sørge for et proteolytisk spaltningssted, for eksempel polylysin og/eller -arginin eller kombinationer deraf, eller den indre methionin vil kunne erstattes med en aminosyre såsom leucin og en N-ter- 13 DK 174533 B1 minalmethlonin tilføjes for cyanogenbromidspaltning. En lang række forskellige proteaser herunder dipeptidaser er velkendte, og det passende behandlingssignal vil kunne indføres på rette sted. Behandlingssignalet kan have tandemgentagelser for at sikre spaltning, da tilstedeværelsen 5 af en eller flere fremmede aminosyrer ikke vil interfere med anvendeligheden af de omhandlede polypeptider.
Afhængigt af analysens art kan den fysiologiske prøve, for eksempel saliva, blod, plasma eller serum forbehandles ved fortynding i et analysemedium, der sædvanligvis vil være et vandigt forpufret medium med en 10 puffer udvalgt blandt forskellige puffere såsom phosphat, tris eller lignende. Et foretrukket fortyndingsmiddel er blotto (2,5 vægt/vol% fedtfri tørmælk, 0,01% thimerosol, 0,05% Antifoam A i 0,01 M natrium-phosphat, pH 7,2 og 0,15 M NaCl). Sædvanligvis vil pH-værdien ligge i intervallet fra ca. 6 til 9. Prøven kombineres derefter med reagenset i 15 henhold til den valgte forskrift og tilstrækkelig tid til at binding kan finde sted hengår. Når et heterogent system anvendes, vil bindingstrinnene sædvanligvis blive efterfulgt af vaskninger for at minimere ikke-specifik binding. Ved procedurens afslutning påvises markøren på konventionel måde.
20 Udover anvendelse af de omhandlede peptider og analoger deraf til analyser kan de omhandlede peptider også i sig selv eller i kombination finde anvendelse i vacciner. Peptiderne kan formuleres på hensigtsmæssig måde, i almindelighed til koncentrationer i intervallet fra 1 μg til 20 mg/kg vært. Fysiologisk acceptable medier kan anvendes som bærere såsom 25 sterilt vand, saline, phosphatforpufret saline og lignende. Adjuvanser såsom aluminlumhydroxidgel eller lignende kan anvendes. Administreringen kan ske ved injektion, for eksempel intramuskulært, peritonealt, subkutant, Intravenøst, etc. Administreringen kan ske en eller flere gange, sædvanligvis med en til fire ugers mellemrum.
30 Opfindelsen belyses nærmere i de følgende eksempler.
Forsøg
Peptider anbragtes på en t-butyloxycarbonyl(B0C)-methyl benzylcyste-i nphenylacetami domethyl(PAM)polys tyren/di v i nylbenzenharpi ks (Appli ed 35 Biosystems, Inc., Foster City, California).
Symmetriske anhydridkobl i nger udførtes i en syntetisator af typen Applied Biosystems 430A. Benzylbaseret sidekædebeskyttelse og BOC-alpha- DK 174533 B1 14 aminbeskyttelse anvendtes. Tryptophan beskyttedes ved formylgruppen og methionin ved dets sulfoxld, idet begge beskyttelsesgrupper fjernes ved konventionelle procedurer.
Peptiderne radiomærkedes ved indføjelse af en H-glyclnrest i sek-5 vensen. Peptiderne afbeskyttedes og spaltedes fra harpiksen efter Tam "lav-høj" HF forskriften (Tam et ål·> supra). Peptider ekstraheredes fra harpiksen i 5% eddikesyre og underkastedes gel fil treringskromatografi i 5% eddikesyre.
De ovenfor syntetiserede peptider oxideredes af og til via cyste-10 inresterne til dannelse af netværkspolymerer. Dette udførtes ved opløsning af det lyofiliserede peptid i 0,1 M carbonat/bicarbonat, 6 M guani-din-HCl, pH 9,0, til en koncentration på 5-10 mg/ml. Den resulterende opløsnings pH kontrolleres og indstilles efter behov til 9,0, og opløsningen henstilles til omrøring ved stuetemperatur natten over. Resulter-15 ende opløsninger anvendes som et belægningsantigen ved de nedenfor beskrevne ELISA analyser.
Analyse ved ELISA
20 Peptid 123, 124 og 126 opbevaredes som forrådsopløsninger på 4 mg/ml i 6 M Gu-HCl eller som de ovenfor beskrevne oxiderede peptidforråd. Peptid 158 og 158E opbevaredes ved 4 mg/ml i 0,05 M carbonat/bicar-bonatpuffer (pH 9,6). Peptiderne fortyndedes i 0,05 M carbonat/bicarbo-natpuffer (pH 9,6) til en slutkoncentration på 5-800 μg/ml. Portioner på 25 100 μΐ sattes til hver mikrotiterbrønd og inkuberedes ved 4*C natten
over. Derefter blokeredes pladerne med blotto (5 vægt/vol% fedtfri tørmælk, 0,01% thimerasol, 0,01% Antifoam A i 0,01 M natriumphosphat, pH
7,2, 0,15 M natriumchlorid) ved 37*C i en time. Serum- eller plasmaprøver fortyndedes 1:101 eller 1:21 med fortyndingsmiddel (2,5 30 vægt/vol% fedtfri tørmælk, 0,01% thimerasol, 0,005% Antifoam A i 20 mM natriumcitrat) og 100 μΐ fortyndet serum eller plasma tilsattes pr. brønd i en time ved 37*C. Serumet eller plasmaet opsugedes, og pladerne vaskedes tre gange i vaskepuffer (0,15 M NaCl, 0,05% vægt/vol% Tween-20) før tilsætning af 100 μ af gedeanti-humant Ig/peberrodsperoxidasekonju-35 gatet (fortyndet 1:10.000 i fortyndingsmiddel Indeholdende 1% normalt gedeserum i citratpuffer, pH 7,0) ved 37*C 1 en time. Konjugatet fjernedes, og pladerne vaskedes igen tre gange som ovenfor beskrevet. ELISA
15 DK 174533 B1 analysen fremkaldtes ved tilsætning af 100 μΐ/brønd substratopløsning (80 pg/ml tetramethylbenzidin, 0,0015% hydrogenperoxid i citrat/phos-phatpuffer, pH 6,0) ved stuetemperatur i tredive minutter. Reaktioner standsedes ved tilsætning af 100 μΐ 3N H2SO4 pr. brønd, og forholdet 5 mellem den optiske densitet ved 450 nm og 630 nm bestemtes med en automatiseret ELISA aflæser.
Peptider fra Efil området testedes i ELISA systemet ved erstatning af helt viruslysat i Genetic Systems Corp. LAV EIA analysen. Sera fortyndedes 1:101, og peptiderne anvendtes i både oxideret og ikke-oxideret 10 form. Peptid I (123) genkendte 30 af 34 positive testsera som positive og 11 af 11 negative sera som negative (tabel I). Peptid II genkendte 32 af 34 positive sera som positive og 11 af 11 negative sera som negative. Fjernelsen af 12 aminosyrer fra peptid 117s aminoterminal reducerede ikke sekvensens evne til at skelne HIV positive sera.
15 Anvendelse af peptiderne i oxideret form, hvilket ikke er nødven digt for at disse specielle peptider kan fungere ved analysen, øgede den samlede signalstørrelse fra hver prøve. Dette kan skyldes en forøgelse i mængden af peptid adsorberet til mi krotiterpladen.
Peptid III (158) fra sag området af det i ELISA systemet testede 20 HIV genom anvendtes, idet der pletteredes med 80 ^g/brønd til screening af både plasma- og serumprøver. De i tabel II summerede data viser, at peptid 158 genkender 13 af 17 p25 positive plasma og sera.
Ved en alternativ analyse af peptid 158E, en modifikation af peptid 158, hvor methioninerne var erstattet med norleucin, fortyndedes sera 25 eller plasma 1:21 i fortyndingspuffer, inkubationstiderne med prøven og konjugatet reduceredes til 30 minutter, og antallet af vaskninger mellem trinnene øgedes til seks. Disse ændringer resulterede i, at 17 ud af 17 positive prøver blev genkendt.
Resultaterne af serumscreeningen vises i tabel I og summeres som 30 følger: 16 DK 174533 B1 -cg*-——------—
SI
χΌ J3I ί'ΜιΛί”' — iO~— ?? <-mpjcoe>e)0>'0 0 3Ό N o — 'vi 03 ?ί οη-ιΛΟ®03ο53 Ϊ1ί*1?-\,Λ1ΛΝ- ΟΟβΚΜΟ vo·*·» aol β·«ο ftjio - o ί^;Λο o (Ί οσ'σ'^'ΛίΜ'βίΊΛ CJ O. —I <-.·*»*·>·..-" - . * · HOOl — O — O — — — O — — © — — 00---00------o o- Ί
II
»I
O n| 0<0<ίο3 — ?-->ιηι/>(?ΝνθΠ>ιΛιΛΟΟΐΛ ιΓιί«ΓΟβΟ <n— "I Α- ΡΛβΟ \0 (O vO Ό — O' (\| © ΠΟ ιΛ <M 1Λ ιΛ m O iTk ITV <M — O
nj*> Cq Ο'ί'Ρ'Μ^-ΛΜΛΡοΟΟΌ^ϊ vO ·— C"— OJ i\J -— — CTn f— ro — O. 3-1 " - ' ' " ' ' - - - - - - - ' ~---- - - - - Φ O ©OOOOOOOOOOO— 00—000— — ooo
O. V
Ό c g fuo'e-iovoooctir cm — o <-o©> o -W-ire-ooO'n g— ·*} o^eo ό o ί- ·ίν "'o if\ vo <m oa o — to γλ*λ e— ot<o — — ir« JJ. ·*> iO (Μ N JT O ιΛί--tOC^m — f^CMC\l~ — C·—— — OCM—COlTi
OvjQ- 3· ......... " ' -------- - - - - - -
—< 4) cn — O O CM --OOIMOO-WOOfJO-O-ON-O
& C\| Θ c -&
. M
TO X5 e~- =r ιΓν -7\ ιΛΟ σ' c—1 f— Ln ~ ΓΛ — O <3s σ' tn © -d- — O t— S- —. —i ^ -M10('Ji0-t'Ma"0<'JOOvflNO30lfi-n0M- /5^60 νίΧΛΟΛΓΌ-βΙ^ίη-ΟΜΙΜιΛ COCO ιΓι — if\ m <\j o f~
Xj=L 3 --------------- --- - -
ΤΓ ®ΙΛ — ΟΟίΊ- PJOOOMOOOJCMOOCMO — O — ONNO
£ a-tv a> *·
Se
- C
o ’Θ- o ^ ΌΛ «^t-O'^-OC'^OO— ΙίΌΟ·:»· najeMOej ΟΜΛΛ ΙΛ μ- ί; —· \ r- no σ' --Λ α — αο in tn ομ γλ-ο<ο~ιλο - mr-o'c·
<0 gijj ao oo — o — ="<Mmc3Cdoo'-iln<T''iM~P-t'n<3\<7'CM(MCM
_ OJ CL — ' ' v ' * ' * ---- -------v-..----.
— rnO ΙΛ — O — W OJ CM O — CMOONWOOOl - — O — © CM PJ — - .2 °- X- c ft r- <U ^ α> φ £ Λ *_ <5·
ca υ M
y— to το η σν cm .» — σ'© eo cm — t—ο ρ-ο © ό © cm p-» in cm-x — :>- E= _ —i >* (oiofoo - σΓ-^-ΌΛΐ^οΟΛ· ιηηΐΛίΟο (M ^ J e-ro 3 xj'D tc sr^jnajoooM-f'f-N'OO'a· no Ns’W'oat^wo' *- . I- -V »»VVV» .» ,* ^ , V > ^
£ φ LO — O — — —— O — — OO — — OO — — — O—O — — O
^ O- , u , ° <2 w n 3
rd (LI S-I
4-> c σ' in rn — aO r— to SfOO (ΛΟΟΟ CM — p- «0 C~-CO Ό — ιΛΟ'J
«a M v. p- σ' O P- iT» — me· m p- — t— σ' ρ- ifiao in ¢- CM cm — cm p-« ό ^ _ρ ο σ'«j p-— cm o — <>> m — σ'm σ'p-.= cm p-— o in — — so S pT— —*—CM CM — CM CM — © — CM — -^iTlM — O CM CM*CM CM —
^ rH W
j Q> > ED “ί ·~·
V
a) a) XI (Λ d w-t ..........................
s_i X Ί) iMinrinnniinAunnAnnflnunnMiii m >t4-> oooooo ooooeooooooooooooo ±j i-iu-i a.n.Lft.e.a.cLa.a.ft.za.a.a.a.ii.&.Lza.t.e.e.a.
WX> ft)
Q)M4 U
S Λ <u n ’cJoyirtinarrtoroOMMQMMC'ireitooM») c:e:c;x<<e:3:<—— <0
•H
Q
3 . ’ — <M ΓΟ— iTVt— Ϊ— CO Ϊ'-(\ΙΠ^Κ"ΟΙ“®ΡΟ“<Μ(ΟΓ^
t_ o , * ——————— — — PiiMtM^PjtM
a . M
M- C| 17 DK 174533 B1 —«&-:---r; c •θι i m : — o . Οί-Ν-'·'.ΛΝ^^!'"ϊ0 3\0(ηβΟΓ3η> ?$-·>.: Ιν.'Λσν'ρ-ΠΝίΙΙ'-ΟΝ^-ΟΟ'Ό-ΟΟΟΟ “ J-> s« OcOCN^cOlOCsitM-a· OO m ~ O — <\l CNI <\) CM (NI — <M .—\ ijeoj o—~cT—'o—oo<mooo"ooooooooo — tf
c I
S·'
M I
OjQ Γ-σίΜοοΛί'^Μ'ΊΜδ'ηο'σΌΛΟΛί- co
V ^«ΰΡιιΛ^-βΝΝΙΜΟ'ώΟΜΜί'-Οί'Ο'- rO
~JJS0 ιΛ (ΜΌ ΛΙ - σ> — ^ (Jv (\J (M ^ ΓΟ — O — - O- NQO' ^asl ·, v - - -.....- *z - ®O 0—0—0000—00000000000 o o. ' •Ό c M - Ολ σΌ' m cm o ό 'O οοο^νονη-ot—mo'va X—Ή. O >NO'vO - ' -ιΛΝΤΌηΜΟΠΐΝ-
Oj so) ri(\jinmM3-QaaOONlT'(M^(\J(MWN(MNtO
JJa. a; - - - - - - z z z z----- - -......
fr® mi <M O O CM O <\l ooooooooooo — o! i
Ol £ SI c -O·] >5 M I (/> *- <r —iΉ! m — tr»ro — - - vo - oo O'ifl - — -^ — n <\i t n *“ ·=γ _x <1) 'J (J al s- mt-j 3 =· -- — — s- ΙΠ - O CM — — — — — — — o O) Ό ^ α S -»»»V »vsv\v - '·· - <4-
TT ® in CNIOOCMOCMOOCM.OOO — OOOOOOOOCM CU
+r o. cm Ό u V El
So 3 -P
. ° τί ε e £ _ c e o « o &
«Λ O M +o OJ
•P ΧόΛ ό — — — mvo co c— o\ c— — o- s- — ar c— Mt-<m — mea _o
Jr **- 0_Vv ΙΛΟΜΟΟ=· NOt-OCMMt-NOOiOf ΟΠνΰΟΝ tsi O « al r ηΜ(ΛΟί/ηοήσ<νΔί>-5·ΙΛ^'ΝΜΜ(ΛΜΜ(Ί(Μ ·— O) zz o £2°· - > -χ ii o m <m — — «Monjoo — ooo — οσοοσοοο<ν -x -x -r- ®- r- ni -- -S Ί « " -S 2! £ s
Ό O P Ξ Q
J— «Λ Ό X! ιΛΌΛΙνο -ΙΛνΟιύιΛ^ϊσ'ΦΠιΛΟίΌΟ'^ — <C Z
E ΟΌΌΝποο-ΟΌΐηϊΐοοο'ύοοσ'Οκν o p <vii» oo [-οοθ'Ν-ιθ(τνο(-βη-ϊΝη(ΜΝηΝθο —· α = --------- - - - z .
S o in — — — — OCMOO — OOO — OOOOOOO <M
O. - ·(! in O Ό °
£ Q) I -P
ε ··-* nj m > i/j +-» fg v — tnvoeo - m — t— o fo^æo-ovo® - r-ino >0 (Si I \ I Ο!ΛΟΝ<\ΙΌΛΙΟ^'*Ο'0ΜΛ·*ΝΝΟ Κβ f-CO ΙΛ ® ί-4—ιΪλ — O — eneo on — — o\ t— o — moi o — — O — O O =r ~r Jill-ή -----
M r2 N(V«(M"NOO--N--OOOOOOOON
. . W "PP GO *D
_j| -X C
LU] QJ OWE
« ω Έ- ° 0)Ή E Ο -σ Λ ail ο — c G in -PI -χ m a; p s> «
ω>ι« Ο X H
-PM μ nnanRaeouoflnflnnueoutotoiOtiii) si £ m m-P Λί οοοοοοφβοοοοοοαβφοοοφο a> <-o o.
a)ip a3 a-a.a.o.Q.OL.zza.ouO.ft.a.ii.azzxizza. o o * i s 0 xz o
S- fO
1 at x: oo -x o.
Q m E
d Cw L. C, L. P C, " f ^ (U <2 oooooQO-· ^:s_r- m eoeococoocoxxcoeoxcjo ccccceco „ „ „ Ϊ <<<-< — -<x=!x-r=a;c:c-- o o o oo o o O 11 " " g -3 j _j -j < _i 3: x -i _J =: « o o o O O o o a. <_> s: m g, ce x < £ <c x *r-{
Q
·—( csi ro cc S
3 · cO Γ— OD C7(0 — L.O · (M (N) ni tvi <-o ro roro roro roro roj- — ry^rroro-xiLO — o · M c: co — C Ϊ-
________ _________ I
18 DK 174533 B1
Tabel 2 ELISA resultater for plasma- oa serumprøver med oeotid 158 oa 158 E som antigen 5
Prøve Western ELISA med I.D. aftryksbe- helt virus- Peptid Peptid nr. kræftel sø 1 vsat_ 158 (1:1011 158E (1:211 10 A Pos. 2,088 0,784 2,034 B Neg. 0,108 0,151 0,110 C Pos. 0,271 0,095 0,725 D Pos. ND ND 1,448 E Neg. 0,107 0,072 0,182 15 F Neg. 0,102 0,146 0,366 G Pos. 1,998 1,905 2,563 H Pos. 2,074 1,441 2,393 I Pos. 1,944 1,980 2,536 J Pos. 1,245 0,845 1,907 20 K Pos. 2,046 2,235 2,460 L Pos. 0,948 0,374 2,121 M Pos. 2,092 1,395 2,368 N Pos. 2,153 2,043 1,757 0 Pos. 2,068 1,387 2,479 25 P Pos. 0,702 0,120 1,617 Q Pos. 1,267 0,099 1,824 R Pos. 2,147 1,908 2,219 S Pos. 1,393 0,267 2,306 T Pos. 1,189 0,724 2,245
30 N32 Neg. 0,334 0,100 ND
N31 Neg. 0,107 0,090 ND
10806 ND 0,051 ND 0,257 10807 ND 0,065 ND 0,275 35 19 DK 174533 B1
Det fremgår klart af de foregående resultater, at der ved anvendelse af et af peptiderne ifølge opfindelsen eller en kombination deraf tilvejebringes en følsom, nøjagtig test for tilstedeværelsen af antistoffer mod AIDS. De omhandlede peptider kan anvendes i sig selv eller i 5 kombination ved en screeningsanalyse eller en bekræftelsesanalyse, mens det komplette lysat eller komplette antigener kan anvendes som en uafhængig procedure. Endvidere ville man på grund af peptidernes specificitet forvente, at de DNA sekvenser, der koder for peptiderne, også vil finde en lignende specificitet ved en DNA hybridiseringsanalyse. Den om-10 handlede opfindelse muliggør således påvisning af patienter, som har været udsat for det retrovirale etiologiske middel for lymphadenopati-syndrom og/eller AIDS.
Alle i beskrivelsen nævnte publikationer og patentansøgninger er indi kati ve for den fagmæssige kunnen hos fagmanden inden for det område, 15 som opfindelsen angår. Alle publikationer og patentansøgninger inkorporeres heri ved henvisning i samme udstrækning, som hvis hver enkelt publikation eller patentansøgning specifikt og individuelt var angivet at være inkorporeret ved henvisning.
20
Claims (10)
1. Fremgangsmåde til påvisning af tilstedevsrelsen af antistof mod HIV-virus, ved hvilken en prøve kombineres med et prsparat med 5 epitoppositioner, der immunologisk konkurrerer med HIV-epitoppositioner, hvorved antistoffer bindes til et sådant proteinpræparat til dannelse af et specifikt bindingsparkompleks, og omfanget af kompleksdannelse bestemmes, KENDETEGNET ved, at man som reagens i analysemediet anvender et prsparat indeholdende mindst et peptid med fra 12 til 50 aminosyrer 10 og med mindst tolv på hinanden følgende aminosyrer i en sekvens, der forekommer i sekvensen af mindst en af følgende peptidsekvenser, hvori det anførte peptid i det vssentlige har samme immunoreaktivitet over for antistoffer mod HIV som den anførte sekvens: 15 (I) (126) Gin-Val-Arg-Asp-Gln-Ala-Glu-His-Leu-Lys-Thr-Ala-Val-Gln-Met-Ala-Val-Phe-Ile-His-Asn-Phe-Lys-Arg-Lys-Gly-Gly-Ile-Gly-Gly-Tyr-Ser-Ala-Gly-Glu-Arg-Ile-Val-Asp-Ile-Ile-Ala-Thr-Asp-Ile; (II) (123) Ile-Ala-Thr-Asp-Ile-Gln-Thr-Lys-Giu-Leu-Gln-Lys-Gln-Πe-Thr-Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-Gly-Glu-Gly-Ala; 25 eller (Ha) (124) Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-Gly-Glu-Gly-Ala, 30 og hvor peptidet er frit for andre peptider eller er konjugeret til et makromolekyle, mod hvilket antistoffet i det vssentlige er fravsrende i humane sera.
2. Fremgangsmåde ifølge krav 1, KENDETEGNET ved, at et af pep tiderne har en af følgende sekvenser: DK 174533 B1 (I) (126) Gin-Val-Arg-Asp-Gln-Ala-Glu-His-Leu-Lys-Thr-Ala-Val-Gln-Met- Ala-Val-Phe-Ile-His-Asn-Phe-Lys-Arg-Lys-Gly-Gly-Ile-Gly-Gly-5 Tyr-Ser-Ala-Gly-Glu-Arg-Ile-Val-Asp-Ile-Ile-Ala-Thr-Asp-Ile; (II) (123) Ile-Ala-Thr-Asp-Ile-Gln-Thr-Lys-Glu-Leu-Gln-Lys-Gln-Ile-Thr- Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-10 Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-Gly-Glu-Gly-Ala; eller (Ha) (124) Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-15 Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-Gly-Glu-Gly-Ala,
2. AUG. 2002 PATENTKRAV PVS
3. Fremgangsmåde ifølge krav 2, KENDETEGNET ved, at præparatet er bundet til en fast overflade.
4. Fremgangsmåde ifølge krav 3, KENDETEGNET ved, at peptidet er konjugeret til et vandopløseligt protein med en molekylvægt på mindst 5 kDal, som således udgør det nævnte makromolekyle.
5. Fremgangsmåde ifølge krav 3, KENDETEGNET ved, at to af pep- 25 tiderne er kovalent sammenkædet via en binding eller brobyggende gruppe.
6. Fremgangsmåde til bestemmelse af tilstedeværelsen af antistoffer mod HIV i et fysiologisk fluidum, KENDETEGNET ved, at man kombinerer en human fysiologisk fluidumprøve med mindst et peptid, 30 som har fra 12 til 50 aminosyrer og med mindst tolv på hinanden følgende aminosyrer i en sekvens, som forekommer i sekvensen af mindst en af følgende peptidsekvenser, hvori det anførte peptid i det væsentlige har samme immunoreaktivitet over for antistoffer mod HIV som den anførte sekvens: 35 DK 174533 B1 (I) (126) Gin-Val-Arg-Asp-Gln-Ala-Glu-His-Leu-Lys-Thr-Ala-Val-Gln-Met- Ala-Val-Phe-Ile-His-Asn-Phe-Lys-Arg-Lys-Gly-Gly-Ile-Gly-Gly-5 Tyr-Ser-Ala-Gly-Glu-Arg-Ile-Val-Asp-Ile-Ile-Ala-Thr-Asp-Ile; (II) (123) Ile-Ala-Thr-Asp-Ile-Gln-Thr-Lys-Glu-leu-Gln-Lys-Gln-Ile-Thr- Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-10 Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-Gly-Glu-Gly*Ala; eller (Ila) (124) Lys-Ile-Gln-Asn-Phe-Arg-Val-Tyr-Tyr-Arg-Asp-Ser-Arg-Asp-Pro-15 Leu-Trp-Lys-Gly-Pro-Ala-Lys-Leu-Leu-Trp-Lys-Gly-Glu-Gly-Ala, hvori peptidet er frit for andre peptider eller er konjugeret til et makromolekyle, mod hvilket antistoffer i det væsentlige er fraværende i humane sera, eller blandingen inkuberes i tilstrækkelig tid til at 20 kompleksdannelse kan finde sted, og dannelsen af kompleks bestemmes ved anvendelse af et specifikt bindingsprotein, der er mærket med en markør, og som binder til komplekset og tilvejebringer et påviseligt signal.
7. Fremgangsmåde ifølge krav 6, KENDETEGNET ved, at markøren er 25 et fluorescensfremkaldende middel.
8. Fremgangsmåde ifølge krav 6, KENDETEGNET ved, at markøren er et enzym.
9. Fremgangsmåde til bestemmelse af tilstedeværelsen af antistoffer mod HIV i et fysiologisk fluidum, KENDETEGNET ved, at man kombinerer en human fysiologisk fluidumprøve med mindst et peptid med følgende sekvens: 35 (III) (158) Leu-Asn-Thr*Val-Gly-Gly-H1s-Gln-Ala-Ala-Met-Gln-Met-Leu-Lys- Glu-Thr-Ile-Asn-Glu-Glu-Ala-Ala-Glu-Trp-Asp-Arg-Val-Hi s-Pro, DK 174533 B1 Z3 hvor peptidet et frit for andre peptider eller er konjugeret til et makromolekyle, mod hvilket antistoffer i det væsentlige er fraværende i humane sera, 5 blandingen inkuberes i tilstrækkelig tid til at kompleksdannelse kan finde sted, og dannelsen af kompleks bestemmes under anvendelse af et specifikt bindingsprotein, der er mærket med en markør, og som binder til komplekset og tilvejebringer et påviseligt signal.
10 Bio-Rad Laboratories, Inc. v/BUDDE, SCHOU & OSTENFELD A/S 15 ^1***---- Anders Kassow 20. august 2002
Applications Claiming Priority (2)
| Application Number | Priority Date | Filing Date | Title |
|---|---|---|---|
| US06/930,785 US5075211A (en) | 1986-03-26 | 1986-11-14 | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| US93078586 | 1986-11-14 |
Publications (3)
| Publication Number | Publication Date |
|---|---|
| DK597787D0 DK597787D0 (da) | 1987-11-13 |
| DK597787A DK597787A (da) | 1988-05-15 |
| DK174533B1 true DK174533B1 (da) | 2003-05-12 |
Family
ID=25459766
Family Applications (1)
| Application Number | Title | Priority Date | Filing Date |
|---|---|---|---|
| DK198705977A DK174533B1 (da) | 1986-11-14 | 1987-11-13 | Fremgangsmåde til påvisning af antistof mod HIV-virus |
Country Status (11)
| Country | Link |
|---|---|
| US (1) | US5075211A (da) |
| EP (1) | EP0267802B1 (da) |
| JP (1) | JP2886861B2 (da) |
| AT (1) | ATE163766T1 (da) |
| AU (1) | AU616383B2 (da) |
| CA (1) | CA1340097C (da) |
| DE (1) | DE3752170T2 (da) |
| DK (1) | DK174533B1 (da) |
| ES (1) | ES2115584T3 (da) |
| IE (1) | IE81132B1 (da) |
| NO (1) | NO173958C (da) |
Families Citing this family (24)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| US7273695B1 (en) * | 1984-10-31 | 2007-09-25 | Novartis Vaccines And Diagnostics, Inc. | HIV immunoassays using synthetic envelope polypeptides |
| US6210873B1 (en) | 1987-08-28 | 2001-04-03 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Methods and compositions for the priming of specific cytotoxic T-lymphocyte response |
| US5128319A (en) | 1987-08-28 | 1992-07-07 | Board Of Regents, The University Of Texas System | Prophylaxis and therapy of acquired immunodeficiency syndrome |
| FR2632310B1 (fr) * | 1988-06-06 | 1992-04-10 | Pasteur Institut | Peptides ayant des proprietes protectrices d'un virus pathogene du type hiv dans des cellules sensibles |
| ZA896768B (en) * | 1988-09-09 | 1990-06-27 | Akzo Nv | Synthetic polypeptides immunochemically reactive with hiv-antibodies |
| US5439792A (en) * | 1989-06-02 | 1995-08-08 | Genetic Systems Corporation | Cysteine thiol-protected peptides for use in immunoassays |
| EP0731174B1 (en) * | 1989-07-11 | 2004-11-17 | Gen-Probe Incorporated | Nucleic acid sequence amplification methods |
| US6589734B1 (en) | 1989-07-11 | 2003-07-08 | Gen-Probe Incorporated | Detection of HIV |
| US5627035A (en) * | 1990-08-22 | 1997-05-06 | Syntello Vaccine Development Ab | Peptides that block human immunodeficiency virus and methods of use thereof |
| SE9101863D0 (sv) * | 1991-06-13 | 1991-06-13 | Replico Medical Ab | Peptider, diagnostiskt antigen, vaccinkomposition och foerfarande foer selektering av hiv-stammar |
| JPH06503843A (ja) * | 1991-11-04 | 1994-04-28 | デイド、インターナショナル、インコーポレイテッド | Ｈｉｖ−２ウイルスの一部分に対応する合成ペプチドおよび改良されたイムノアッセイにおけるその使用方法 |
| US6667387B1 (en) | 1996-09-30 | 2003-12-23 | N.V. Innogenetics S.A. | HCV core peptides |
| US6709828B1 (en) | 1992-03-06 | 2004-03-23 | N.V. Innogenetics S.A. | Process for the determination of peptides corresponding to immunologically important epitopes and their use in a process for determination of antibodies or biotinylated peptides corresponding to immunologically important epitopes, a process for preparing them and compositions containing them |
| KR20030096423A (ko) * | 1992-03-06 | 2003-12-31 | 엔. 브이. 이노제네틱스 소시에떼아노님 | 면역학적으로 중요한 에피토프에 상응하는 펩티드의 측정방법 및 면역학적으로 중요한 에피토프에 상응하는 항체또는 비오티닐화된 펩티드의 측정 방법에 상기 펩티드를사용하는 방법, 상기 펩티드의 제조방법 및 상기 펩티드를함유하는 조성물 |
| US6632613B1 (en) * | 1993-06-02 | 2003-10-14 | University Of Utah Research Foundation | Compositions and kits for fluorescence polarization assay of large molecules |
| US6479055B1 (en) * | 1993-06-07 | 2002-11-12 | Trimeris, Inc. | Methods for inhibition of membrane fusion-associated events, including respiratory syncytial virus transmission |
| US5603933A (en) * | 1993-08-31 | 1997-02-18 | Board Of Regents, The University Of Texas | CD4 peptides for binding to viral envelope proteins |
| ATE256702T1 (de) * | 1993-12-09 | 2004-01-15 | Univ Utah Res Found | Zusammensetzungen und kits zur fluoreszenzpolarisierungsdosierung von grossen molekülen |
| EP1000177B1 (en) * | 1997-08-01 | 2007-04-25 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigens for the detection of antibodies having immunoreactivity against hiv virus |
| GB9717652D0 (en) * | 1997-08-20 | 1997-10-22 | Nycomed Imaging As | Method |
| EP1131633A2 (en) | 1998-11-16 | 2001-09-12 | Board of Regents, The University of Texas System | Hiv-specific t-cell induction |
| ATE456677T1 (de) * | 1999-07-09 | 2010-02-15 | Gen Probe Inc | Hiv-1 detektion mittels nukleinsäureamplifizierung |
| US6582920B2 (en) * | 2000-09-01 | 2003-06-24 | Gen-Probe Incorporated | Amplification of HIV-1 RT sequences for detection of sequences associated with drug-resistance mutations |
| KR101933685B1 (ko) * | 2018-06-29 | 2018-12-28 | 주식회사 에스알바이오텍 | 약물이 코팅된 마이크로 니들 및 이의 제조방법 |
Family Cites Families (16)
| Publication number | Priority date | Publication date | Assignee | Title |
|---|---|---|---|---|
| NZ207394A (en) * | 1983-03-08 | 1987-03-06 | Commw Serum Lab Commission | Detecting or determining sequence of amino acids |
| GB8324800D0 (en) * | 1983-09-15 | 1983-10-19 | Pasteur Institut | Antigens |
| US4716102A (en) * | 1984-08-15 | 1987-12-29 | Regents Of The University Of California | Purified AIDS-associated virus ARV-2 |
| US9328391B1 (en) * | 1984-08-22 | 2016-05-03 | The United States Of America As Represented By The Secretary, Department Of Health And Human Services | Cloning and expression of HIV-1 DNA |
| DE3587181T2 (de) * | 1984-10-18 | 1993-06-24 | Centre Nat Rech Scient | F antigene vom menschlichen immunodefizienz-virus und deren verwendungen. |
| CA1341482C (en) * | 1984-10-31 | 2005-05-10 | Paul A. Luciw | Process for preparing fragments of aids-associated retroviruses |
| JPS61233700A (ja) * | 1984-12-24 | 1986-10-17 | ジエネンテク，インコ−ポレイテツド | 分子クロ−ンされたエイズ関連ポリペプチド |
| ATE109512T1 (de) * | 1985-04-08 | 1994-08-15 | Genetic Systems Corp | Expression und diagnose mit gag-kodierten peptiden, die mit antikörpern gegen lav immunologisch reaktiv sind. |
| US4629783A (en) * | 1985-04-29 | 1986-12-16 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease |
| WO1986006414A1 (en) * | 1985-04-29 | 1986-11-06 | Genetic Systems Corporation | Synthetic antigens for the detection of aids-related disease |
| US4661445A (en) * | 1985-05-24 | 1987-04-28 | Saxinger W Carl | Competitive ELISA for the detection of HTLV-III antibodies |
| US4704357A (en) * | 1985-09-30 | 1987-11-03 | United States Of America As Represented By The Department Of Health And Human Services | Immortalized T-lymphocyte cell line for testing HTLV-III inactivation |
| CS256960B1 (en) * | 1985-11-16 | 1988-04-15 | Viktor Krchnak | Peptides with properties of antigenic determinants and method of their production |
| EP0230222A1 (en) * | 1986-01-06 | 1987-07-29 | F. Hoffmann-La Roche Ag | Expression of HTLV-III gag-Gene |
| US4734362A (en) * | 1986-02-03 | 1988-03-29 | Cambridge Bioscience Corporation | Process for purifying recombinant proteins, and products thereof |
| AU7512287A (en) * | 1986-05-20 | 1987-12-22 | Dana-Farber Cancer Institute | Expression of human t-cell lymphotropic virus (htlv-iii)reve rse transcriptase and uses thereof |
-
1986
- 1986-11-14 US US06/930,785 patent/US5075211A/en not_active Expired - Lifetime
-
1987
- 1987-11-13 AU AU81211/87A patent/AU616383B2/en not_active Expired
- 1987-11-13 CA CA000551770A patent/CA1340097C/en not_active Expired - Lifetime
- 1987-11-13 DK DK198705977A patent/DK174533B1/da not_active IP Right Cessation
- 1987-11-13 AT AT87310047T patent/ATE163766T1/de not_active IP Right Cessation
- 1987-11-13 JP JP62287207A patent/JP2886861B2/ja not_active Expired - Lifetime
- 1987-11-13 ES ES87310047T patent/ES2115584T3/es not_active Expired - Lifetime
- 1987-11-13 IE IE307387A patent/IE81132B1/en not_active IP Right Cessation
- 1987-11-13 NO NO874740A patent/NO173958C/no not_active IP Right Cessation
- 1987-11-13 DE DE3752170T patent/DE3752170T2/de not_active Expired - Lifetime
- 1987-11-13 EP EP87310047A patent/EP0267802B1/en not_active Expired - Lifetime
Also Published As
| Publication number | Publication date |
|---|---|
| NO173958B (no) | 1993-11-15 |
| DK597787D0 (da) | 1987-11-13 |
| JP2886861B2 (ja) | 1999-04-26 |
| JPS63221247A (ja) | 1988-09-14 |
| NO173958C (no) | 1994-02-23 |
| IE873073L (en) | 1988-05-14 |
| DK597787A (da) | 1988-05-15 |
| US5075211A (en) | 1991-12-24 |
| EP0267802A3 (en) | 1991-03-06 |
| AU616383B2 (en) | 1991-10-31 |
| NO874740L (no) | 1988-05-16 |
| EP0267802A2 (en) | 1988-05-18 |
| AU8121187A (en) | 1988-05-19 |
| NO874740D0 (no) | 1987-11-13 |
| CA1340097C (en) | 1998-10-20 |
| DE3752170T2 (de) | 1998-10-08 |
| ATE163766T1 (de) | 1998-03-15 |
| IE81132B1 (en) | 2000-03-22 |
| EP0267802B1 (en) | 1998-03-04 |
| DE3752170D1 (de) | 1998-04-09 |
| ES2115584T3 (es) | 1998-07-01 |
Similar Documents
| Publication | Publication Date | Title |
|---|---|---|
| DK174533B1 (da) | Fremgangsmåde til påvisning af antistof mod HIV-virus | |
| US6485900B1 (en) | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease | |
| US4629783A (en) | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease | |
| JP2777115B2 (ja) | 生物学的流体中の抗ｌａｖウイルス抗体の検出法 | |
| NO175482B (no) | Peptidblanding for in vitro påvisning av antistoffer mot HTLV-III, anvendelse derav og prövesett for denne | |
| EP0247557B1 (en) | HTLV-III(LAV) Envelope peptides | |
| EP0538283B2 (en) | Synthetic peptides and mixtures thereof for detecting hiv antibodies | |
| US6322964B1 (en) | Synthetic HIV-2 gag and env oligopeptides reactive with HIV-2 specific antibodies | |
| EP0284383B2 (en) | Synthetic antigens for the detection of aids-related disease caused by LAV-2 | |
| IL88963A (en) | Circular synthetic peptides and their mixtures for the detection of VIH antibodies and for the formation of vaccines | |
| HUT61323A (en) | And treating htlv-1 peptides and antibodies against them for diagnosting htlv-1 infection and for vaccination against it | |
| US7144697B1 (en) | Synthetic antigen for the detection of antibodies immunoreactive with HIV virus | |
| AU627738B2 (en) | Htlv-i / hiv-1 fusion proteins | |
| US6130314A (en) | Synthetic antigen for the detection of AIDS-related disease | |
| AU597884C (en) | Synthetic antigens for the detection of AIDS-related disease | |
| JP2705791B2 (ja) | Ａｉｄｓ関連病の検出のための合成抗原 | |
| NO173034B (no) | Fremgangsmaate og peptider for paavisning av aids-relatert sykdom | |
| US20060216699A1 (en) | Peptides for the detection of HIV-1 group O | |
| JPH1094394A (ja) | レトロウイルス |
Legal Events
| Date | Code | Title | Description |
|---|---|---|---|
| PUP | Patent expired |